CN115475325A - 治疗黄褐斑的新型氨甲环酸透明质酸微针及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种关于治疗黄褐斑的新型氨甲环酸透明质酸微针的制备方法。该微针是利用透明质酸的可溶解性，通过浇注法制备的。最终形成具有一定机械强度及生物相容性的由多个微米级的细小针尖以阵列的方式连接在基座上的微针贴片。本发明形成的微针能够穿透皮肤表层，通过简单的一次性操作便将氨甲环酸传递到皮肤基底层，之后氨甲环酸竞争性地与酪氨酸酶结合，抑制络氨酸酶的活性，从而减少黑色素的形成，发挥治疗黄褐斑的作用。

Description

治疗黄褐斑的新型氨甲环酸透明质酸微针及其制备方法

技术领域

本发明涉及微针给药开发技术领域，具体地，涉及一种负载氨甲环酸的透明质酸的制备方法。

背景技术

氨甲环酸是一种蛋白酶抑制剂，一方面，通过抑制纤溶酶原-纤溶系统干扰黑色素细胞和角化形成细胞的相互作用，降低酪氨酸酶活性，从而抑制黑色素形成；另一方面，氨甲环酸与酪氨酸具有相似的化学结构，能够竞争性地与酪氨酸酶结合，抑制络氨酸酶的活性，从而减少黑色素的形成，最终发挥治疗黄褐斑的作用。微针是一种新兴透皮技术，被广泛应用在医疗领域中，如药物递送、促进伤口愈合、疫苗接种、组织间液提取和生物标志物检测、美容等。透明质酸是皮肤的主要成分之一，具有优异的生物相容性和体内可降解性，是制备可溶性微针的天然高分子材料之一。利用透明质酸制备的微针力学强度高，可以穿透皮肤表层。目前临床上常采用微针技术联合外敷氨甲环酸治疗黄褐斑，但操作步骤较为繁琐，故而设计并制备了一种用于治疗黄褐斑的新型氨甲环酸透明质酸微针，其操作简便，具有很强的实用价值。

发明内容

本发明的目的在于针对临床上采用微针技术联合外敷氨甲环酸治疗黄褐斑操作复杂的问题，基于透明质酸良好的生物安全性、较强的机械性能，以及氨甲环酸具有减少黑色素形成的作用，设计制备一种负载氨甲环酸的透明质酸微针。

根据本发明的一个方面，提供一种用于治疗黄褐斑的透明质酸微针，所述透明质酸微针包括氨甲环酸。

在本发明提供的透明质酸微针中，所述氨甲环酸、透明质酸和超纯水的质量比为1:6:20。

根据本发明的另一方面，还提供一种负载氨甲环酸的透明质酸微针的制备方法，所述制备方法包括如下步骤：

S1、分别将单独的透明质酸粉末、混有氨甲环酸和透明质酸的粉末溶解在超纯水中，通过涡旋振荡器、超声使混合液充分溶解；

S2、将步骤S1所得混有氨甲环酸和透明质酸的溶液加入PDMS模具，充分离心，去除多余的溶液，之后在PDMS模具基底层加入只含有透明质酸的溶液，再次离心；

S3、将二次离心后被溶液填充的PDMS模具置于室温下过夜干燥，最终脱模，得到具有一定机械强度的透明质酸微针。

在本发明提供的制备方法中，在步骤S1中，所述单独的透明质酸溶液的浓度为300mg/ml，混有氨甲环酸和透明质酸的溶液中，透明质酸浓度为300mg/ml，氨甲环酸浓度为50mg/ml。

在本发明提供的制备方法中，在步骤S2中，两次离心的转速为4200rpm/min，时间为20分钟。

根据本发明的再一方面，还验证了如上所述的负载氨甲环酸的透明质酸微针的生物安全性。

本发明的负载氨甲环酸的透明质酸微针的制备方法，具有以下有益效果：与传统的局部注射氨甲环酸的给药方法相比，透明质酸微针操作更为简单，不需要专业人员进行操作；与微针技术联合外敷氨甲环酸需要两步操作的方法相比，氨甲环酸可随透明质酸微针直接到达皮肤基底层，简化了操作步骤，并且能够快速扩散、发挥作用。因此，与局部注射氨甲环酸或微针技术联合外用氨甲环酸的治疗方法相比，负载氨甲环酸的透明质酸微针不仅节省外用药物的给药时间，提高药物浓度，更能简化操作步骤、降低操作难度，提高患者的依从性，能够很好的用于黄褐斑的治疗中。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据提供的附图获得其他的附图：

图1为本发明的负载氨甲环酸的透明质酸微针的制备过程；

图2为本发明的负载氨甲环酸的透明质酸微针的扫描电镜图片；

图3为本发明的透明质酸微针的力学性能检测结果；

图4为负载氨甲环酸微针的透明质酸微的体外刺入率检测图片；

图5为激光共聚焦观察负载罗丹明6G的透明质酸微针刺入猪皮后模拟氨甲环酸透皮吸收的情况；

图6为本发明制备的微针刺入猪皮后的HE染色图片；

图7为负载氨甲环酸的透明质酸微针与HDF细胞共培养后，对细胞活力的影响。

具体实施方式

为了便于理解本发明，下面将参照相关附图对本发明进行更全面的描述。附图中给出了本发明的典型实施例。但是，本发明可以以许多不同的形式来实现，并不限于本文所描述的实施例。相反地，提供这些实施例的目的是使对本发明的公开内容更加透彻全面。

除非另有定义，本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本发明的技术领域的技术人员通常理解的含义相同。本文中在本发明的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的，不是旨在于限制本发明。

下面结合附图和实施例，对本发明的负载氨甲环酸的透明质酸微针的制备方法作进一步说明：

一种负载氨甲环酸的透明质酸微针的制备方法，所述制备方法包括如下步骤：

S1、分别将单独的透明质酸粉末、混有氨甲环酸和透明质酸的粉末溶解在超纯水中，通过涡旋振荡器、超声使混合液充分溶解；

具体地，在步骤S1中，所述单独的透明质酸溶液的浓度为300mg/ml，混有氨甲环酸和透明质酸的溶液中，透明质酸浓度为300mg/ml，氨甲环酸浓度为50mg/ml。

S2、将步骤S1所得混有氨甲环酸和透明质酸的溶液加入PDMS模具，充分离心，去除多余的溶液，之后在PDMS模具基底层加入只含有透明质酸的溶液，再次离心；

具体地，在步骤S2中，两次离心的转速为4200rpm/min，时间为20分钟。

S3、将二次离心后被溶液填充的PDMS模具在室温下过夜干燥，最终脱模，得到具有一定机械强度的透明质酸微针。

下面分多个实施例对本发明实施例进行进一步的说明。其中，本发明实施例不限定于以下的具体实施例。在不变主权利的范围内，可以适当的进行变更实施。

实施例1

本实施例涉及一种负载氨甲环酸的透明质酸微针，其制备方法如下：将300mg单独的透明质酸粉末、混有50mg氨甲环酸和300mg透明质酸粉末分别溶解在1ml超纯水中，通过涡旋振荡器、超声使混合液充分溶解。按照图1的过程，取90ul含有氨甲环酸和透明质酸的混合溶液注入PDMS模具中,置于离心机中进行离心，转速为4200rpm/min，时间为20分钟。离心后，将去除多余的溶液，接着在PDMS模具基底层加入90ul只含有透明质酸的溶液，再次离心，转速为4200rpm/min，时间为20分钟。然后，将二次离心后被溶液填充的PDMS模具在室温下过夜干燥，最终脱模，得到10个负载氨甲环酸的透明质酸微针。

实施例2

本实施例涉及一种负载罗丹明6G的透明质酸微针，其制备方法如下：配制含有罗丹明6G和透明质酸混合溶液，其中罗丹明6G的浓度为4mg/ml，透明质酸的浓度为300mg/ml，溶剂为超纯水，通过涡旋振荡器、超声使混合液充分溶解。取180ul混合溶液注入PDMS模具中,置于离心机中进行离心，转速为4200rpm/min，时间为20分钟。离心后，将PDMS模具置于室温下过夜干燥，最终脱模，得到负载罗丹明6G的透明质酸微针。

实施例3

将从当地农贸市场购买的新鲜猪皮切割成约2cm×2cm大小，取其中一块平整铺在实验桌上，将负载罗丹明6G的透明质酸微针垂直刺入猪皮，3分钟后去除微针。计算猪皮上的红点数与微针针体数目的比值，最后得到浓度为300mg/ml的透明质酸微针的体外刺入率。结果表明300mg/ml的透明质酸微针在体外具有100％的刺入率。

实施例4

将从当地农贸市场购买的新鲜猪皮切割成约2cm×2cm大小，取其中一块平整铺在实验桌上，将负载罗丹明6G的透明质酸微针垂直刺入猪皮，3分钟后去除微针。用湿棉球擦去猪皮表面多余的红色罗丹明6G，之后将猪皮置于共聚焦显微镜下。在激发光为532nm的情况下，找到荧光强度最亮的点；接着，在同一Z轴上调节显微镜找到荧光强度变得最弱的临界点；然后，在两点之间每隔10um拍摄荧光图像，从而得到模拟药物罗丹明6G可以到达皮肤深度的系列图像。结果表明负载罗丹明6G的透明质酸微针至少可以达到皮肤210um的深度，足以穿透皮肤表层。

实施例5

将从当地农贸市场购买的新鲜猪皮切割成约2cm×2cm大小，取其中一块平整铺在实验桌上，将负载氨甲环酸的透明质酸微针垂直刺入猪皮，之后立刻拔出微针，并将其放入装满4％多聚甲醛的15ml离心管中固定。接着进行组织切片的HE染色，观察微针刺入后，猪皮表皮组织的变化情况。结果表明负载氨甲环酸的透明质酸微针可以穿入猪皮表层，具有良好机械强度。

实施例6

将人皮肤成纤维细胞HDF-a种于96孔板中，每孔105个细胞,待其贴壁后，用PBS清洗一次。设置5个组，分别加入新鲜培养基，溶解了单纯透明质酸微针1小时、16小时的培养基，溶解了负载氨甲环酸的透明质酸微针1小时、16小时的培养基100ul。24小时后，向每个孔中加入10ul的CCK8溶液。孵育一个半小时后用酶标仪在450nm波长处测量细胞活力。其中1小时和16小时代表了与皮肤短期接触和长期接触。只加入培养基的孔为对照组，使用归一化方法，计算其余各种细胞活力。结果表明单纯透明质酸微针、负载氨甲环酸的透明质酸微针并不影响人皮肤成纤维细胞的细胞活力，证明了负载氨甲环酸的透明质酸微针的体外生物安全性。

上面结合附图对本发明的实施例进行了描述，但是本发明并不局限于上述的具体实施方式，上述的具体实施方式仅仅是示意性的，而不是限制性的，本领域的普通技术人员在本发明的启示下，在不脱离本发明宗旨和权利要求所保护的范围情况下，还可做出很多形式，这些均属于本发明的保护之内。

Claims (6)

1.一种用于治疗黄褐斑的微针，其特征在于，所述微针包括透明质酸、氨甲环酸。

2.根据权利要求1所述的透明质酸微针，其特征在于，所述氨甲环酸、透明质酸和超纯水的质量比为1:6:20。

3.一种新型氨甲环酸透明质酸微针的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括如下步骤：

S1、分别将单独的透明质酸粉末、混有氨甲环酸和透明质酸的粉末溶解在超纯水中，通过涡旋振荡器、超声使溶液充分溶解；

S2、将步骤S1所得混有氨甲环酸和透明质酸的溶液加入PDMS模具，充分离心，去除多余的溶液，之后在PDMS模具基底层加入只含有透明质酸的溶液，再次离心；

S3、将二次离心后被溶液填充的PDMS模具置于室温下过夜干燥，最终脱模，得到具有一定机械强度的透明质酸微针。

4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，在步骤S1中，所述单独的透明质酸溶液的浓度为300mg/ml，混有氨甲环酸和透明质酸的溶液中，透明质酸浓度为300mg/ml，氨甲环酸浓度为50mg/ml。

5.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，在步骤S2中，两次离心的转速为4200rpm/min，时间为20分钟。

6.一种如权利要求1或2所述的新型氨甲环酸透明质酸微针的生物安全性。

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