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CN115175939A - 抗pd-l1抗体 - Google Patents

抗pd-l1抗体 Download PDF

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CN115175939A
CN115175939A CN202180016795.3A CN202180016795A CN115175939A CN 115175939 A CN115175939 A CN 115175939A CN 202180016795 A CN202180016795 A CN 202180016795A CN 115175939 A CN115175939 A CN 115175939A
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CN
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seq
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thr
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CN202180016795.3A
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迈克尔·N·阿隆索
大卫·多南
卡拉·海宁
贾斯廷·肯克尔
马辛·科瓦尼茨
海蒂·勒布朗
威廉·马莱特
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Bolt Biotherapeutics Inc
Original Assignee
Bolt Biotherapeutics Inc
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Abstract

本发明涉及程序性死亡‑配体‑1(PD‑L1)结合剂、包含本发明结合剂的核酸、包含本发明核酸的载体和细胞、及其组合物。本发明还涉及制备本发明的结合剂的方法，治疗哺乳动物中的疾病、病症或病况的方法，以及增强或降低或抑制哺乳动物中的免疫应答的方法。

Description

抗PD-L1抗体
相关申请的交叉引用
本专利申请要求2020年1月21日提交的美国临时专利申请号62/963,771的权益，其通过引用整体并入本文。
通过参考并入电子提交的材料
在此通过参考整体并入的是与本申请同时提交并确定为如下的计算机可读的核苷酸/氨基酸序列表：于2021年1月21日创建的名为“751375_ST25.txt”的一个110,747字节的ASCII(文本)文件。
发明背景
程序性死亡-配体1(PD-L1，分化簇274、CD274、B-同系物1或B7-H1)属于B7蛋白超家族，并且是程序性细胞死亡蛋白1(PD-1、PDCD1、分化簇279或CD279)的配体。PD-L1也可以与B7.1(CD80)相互作用，并且这种相互作用被认为抑制T细胞引发。PD-L1/PD-1轴在抑制适应性免疫应答中起重要作用。更具体地说，认为PD-L1与其受体PD-1的结合递送抑制T细胞活化和增殖的信号。与PD-L1结合并阻止配体与PD-1受体结合的药剂防止了这种免疫抑制，因此当需要时可以增强免疫应答，例如用于治疗癌症或感染。PD-L1/PD-1途径也有助于预防自身免疫，因此针对PD-L1的激动剂或递送免疫抑制有效载荷的药剂可有助于对自身免疫病症的治疗。
已经开发了几种靶向PD-L1的抗体用于治疗癌症，包括阿特珠单抗(TECENTRIQTM)、德瓦鲁单抗(IMFINZITM)和阿维单抗(BAVENCIOTM)。然而，仍然需要新的PD-L1结合剂，包括以高亲和力结合PD-L1并有效防止PD-L1/PD-1信号传导的药剂和可以将治疗有效载荷递送至表达PD-L1的细胞的药剂。此外，需要新的PD-L1结合剂来治疗自身免疫性疾病和感染。
发明的简要描述
本文提供了包含免疫球蛋白重链可变区多肽和免疫球蛋白轻链可变区多肽的PD-L1结合剂。在一些实施方案中，PD-L1结合剂包含SEQ ID NO：123-143、184-193或209-213中任一项的免疫球蛋白重链可变区，或至少其CDR；和SEQ ID NO：144-164或194-202中任一项的免疫球蛋白轻链可变区或至少其CDR。在其它实施方案中，PD-L1结合剂包含具有与SEQID NO：123-143、184-193或209-213中任一项至少90％相同的氨基酸序列的免疫球蛋白重链可变区多肽，和具有与SEQ ID NO：144-164或194-202中任一项至少90％相同的氨基酸序列的免疫球蛋白轻链可变区多肽。在其它实施方案中，PD-L1结合剂，免疫球蛋白重链可变区多肽包含含有SEQ ID NO：1-14或167中任一项的互补决定区1(HCDR1)、包含SEQ ID NO：15-31、168-173或203-206中任一项的互补决定区2(HCDR2)、和包含SEQ ID NO：32-52、174-177、207或208中任一项的互补决定区LCDR3(HCDR3)；和/或免疫球蛋白轻链可变区多肽包含含有SEQ ID NO：53-67或178-182中任一项的互补决定区1(LCDR1)，含有SEQ ID NO：68-79中任一项的互补决定区2(LCDR2)、和含有SEQ ID NO：80-91中任一项的互补决定区3(LCDR3)。还提供了编码PD-L1结合剂或其单个重链和轻链的核酸；包含所述核酸的载体和细胞；以及包含所述结合剂或核酸的组合物。
还提供了制备如本文所述的结合剂的方法，所述方法包括在细胞中表达一种或多种编码所述结合剂的重链和轻链可变区多肽的核酸。
还提供了将有效载荷递送至表达PD-L1的细胞的方法，所述方法包括向所述细胞或包含所述细胞的哺乳动物施用本文提供的缀合至所述有效载荷的PD-L1结合剂。
还提供了用于增强或抑制哺乳动物中的免疫应答的方法，以及用于治疗哺乳动物中对PD-L1抑制有应答的疾病、病症或病况的方法，所述方法包括向所述哺乳动物施用如本文所述的结合剂或其缀合物。
本发明的其它方面和实施方案在以下详细描述中提供。
附图的几个视图的简要说明
图1描绘了说明本发明的实施方案的结合剂对JIMT-1细胞表面上的人PD-L1的亲和力的实验数据。
图2描绘了使用JIMT-1细胞说明本发明的实施方案的结合剂对人PD-L1的亲和力的实验数据。
图3描绘了说明本发明发实施方案的结合剂的细胞内化水平的实验数据。
图4描绘了说明本发明的实施方案的结合剂对JIMT-1细胞表面上的人PD-L1的亲和力的实验数据。
发明的详细描述
本发明提供了包含免疫球蛋白重链可变区多肽和免疫球蛋白轻链可变区多肽的PD-L1结合剂。
PD-L1结合剂特异性结合PD-L1。所述药剂的结合特异性允许靶向表达PD-L1的细胞，例如，以将治疗性有效载荷递送至这些细胞。在一些实施方案中，PD-L1结合剂完全或部分阻断(抑制或阻止)PD-L1与其受体PD-1的结合，使得抗体可用于抑制PD-L1/PD-1信号传导(例如，用于治疗性目的)。
此外，在一些实施方案中，本文提供的PD-L1结合剂在与细胞表面上的PD-L1结合时不会引起PD-L1或PD-L1/PD-L1结合剂复合物的任何显著的细胞内化。PD-L1和结合的PD-L1结合剂的细胞内化可以通过任何合适的方法测定，例如针对细胞表面上的持久性的测定和/或检测内化的抗体。在一些实施方案中，PD-L1结合剂不会显著内化，使得结合细胞表面上的PD-L1的PD-L1结合剂的至少约75％或约80％(例如，至少约85％、至少约90％或至少约95％)保持在细胞表面上(例如，使用表面持久性测定，在测定开始时与细胞表面上的PD-L1结合的PD-L1结合剂分子的约75％或更多、约80％或更多、约85％或更多、约90％或更多或约95％或更多在测定结束时保持结合)。可以在足够长的合适时间长度内测试持久性以允许发生内化。在一些实施方案中，如上所述，PD-L1结合剂保持在细胞表面上约12小时或更长或约24小时或更长，例如约2天或更长或甚至3天或更长。
在一些实施方案中，PD-L1结合剂结合人PD-L1，例如，包含SEQ ID NO：165(MRIFAVFIFMTYWHLLNAFTVTVPKDLYVVEYGSNMTIECKFPVEKQLDLAALIVYWEMEDKNIIQFVHGEEDLKVQHSSYRQRARLLKDQLSLGNAALQITDVKLQDAGVYRCMISYGGADYKRITVKVNAPYNKINQRILVVDPVTSEHELTCQAEGYPKAEVIWTSSDHQVLSGKTTTTNSKREEKLFNVTSTLRINTTTNEIFYCTFRRLDPEENHTAELVIPELPLAHPPNERTHLVILGAILLCLGVALTFIFRLRKGRMMDVKKCGIQDTNSKKQSDTHLEET)的蛋白质。然而，也包括与任何PD-L1同系物或同源物结合的结合剂。在一些实施方案中，PD-L1蛋白包含与SEQID NO：165至少约70％、约75％、约80％、约85％、约90％、约91％、约92％、约93％、约94％、约95％、约96％、约97％、约98％、约99％或更高的序列同一性。在一些实施方案中，结合剂结合人PD-L1和猕猴PD-L1；或人、猕猴和小鼠PD-L1。
如本文所提及的核酸或氨基酸序列“同一性”可通过将目的核酸或氨基酸序列与参考核酸或氨基酸序列进行比较来确定。同一性百分比是最佳比对的目的序列和参考序列之间相同(即一样)的核苷酸或氨基酸残基的数目除以最长序列的长度(即目的序列或参考序列的长度，以较长者为准)。可使用可用的软件程序进行序列比对和同一性百分比的计算。此类程序的实例包括CLUSTAL-W、T-Coffee和ALIGN(用于核酸和氨基酸序列的比对)、BLAST程序(例如，BLAST2.1、BL2SEQ、BLASTp、BLASTn等)和FASTA程序(例如，FASTA3x、FASTM和SSEARCH)(用于序列比对和序列相似性搜索)。序列比对算法也公开于例如Altschul等人，J.Molecular Biol.，215(3)：403-410(1990)，Beigert等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，106(10)：3770-3775(2009)，Durbin等人，编辑，Biological Sequence Analysis：Probalistic Models of Proteins and Nucleic Acids，Cambridge University Press，Cambridge，UK(2009)，Soding，Bioinformatics，21(7)：951-960(2005)，Altschul等人，Nucleic Acids Res.，25(17)：3389-3402(1997)，以及Gusfield，Algorithms on Strings，Trees and Sequences，Cambridge University Press，Cambridge UK(1997))。序列的同一性百分比(％)也可以计算为，例如，100×(相同位置)/min(TGA、TGB)，其中TGA和TGB是在使TGA和TGB最小化的比对中，肽序列A和B中残基数目和内部间隔位置的总和。参见例如Russell等人，J.Mol Biol.，244：332-350(1994)。
结合剂包含Ig重链和轻链可变区多肽，它们一起形成抗原结合位点。重链和轻链可变区中的每一个是包含通过框架区连接的三个互补决定区(CDR1、CDR2和CDR3)的多肽。结合剂可以是本领域已知的包含Ig重链和轻链的各种类型的结合剂中的任一种。例如，结合剂可以是抗体，抗原结合抗体“片段”或T细胞受体。
在一些实施方案中，结合剂是完整(或完全的)抗体，其包含抗原结合结构域以及片段可结晶(Fc)结构域，所述抗原结合结构域包含Ig重和轻可变结构域。示例性抗体结构是由两对多肽链组成的四聚体，每对具有通常通过二硫键连接的一条“轻”链(较小的链，例如约25kDa)和一条“重”链(较大的链，例如约50-70kDa)。每条链由称为免疫球蛋白结构域的结构结构域组成。这些结构域根据大小和功能分为不同的类别，例如轻链和重链上的可变结构域或可变区(分别为VL和VH)以及轻链和重链上的恒定结构域或恒定区(分别为CL和CH)。每条链的N-末端限定了可变区，通常为约100至110个或更多个氨基酸(但不限于此)，称为互补区，主要负责抗原识别，即抗原结合结构域。轻链分类为κ或λ。重链分类为γ、μ、α、δ或ε，其进而分别定义免疫球蛋白类别IgG、IgM、IgA、IgD和IgE。类可以进一步分成亚类。例如，在人类中存在四种IgG亚类(IgG1、IgG2、IgG3和IgG4)，以它们在血清中的丰度的顺序命名(即，IgG1是最丰富的)。
在一些实施方案中，结合剂是抗原结合抗体“片段”，其是包含抗体的至少一个抗原结合区的构建体，单独或与一起构成抗原结合构建体的其它组分一起。许多不同类型的抗体“片段”是本领域已知的，包括例如(i)Fab片段，其是由VL、VH、CL和CH1结构域组成的单价片段，(ii)F(ab’)2片段，其是包含在铰链区通过二硫键连接的两个Fab片段的二价片段，(iii)由抗体单臂的VL和VH结构域组成的Fv片段，(iv)Fab’片段，其通过使用温和还原条件破坏F(ab’)2片段的二硫桥而产生，(v)二硫键稳定的Fv片段(dsFv)，和(vi)单链Fv(scFv)，其是由通过合成接头连接的Fv片段的两个结构域(即VL和VH)组成的单价分子，所述合成接头能够将两个结构域合成为单条多肽链。
抗体或抗体片段可以是较大构建体的一部分，例如抗体片段与其它区域的缀合物或融合构建体。例如，在一些实施方案中，抗体片段可与本文所述的Fc区融合。在其它实施方案中，抗体片段(例如，Fab或scFv)可以是嵌合抗原受体或嵌合T细胞受体的一部分，例如，通过融合至跨膜结构域(任选地与插入接头或“柄”(例如，铰链区)一起)和任选的细胞间信号传导结构域。例如，抗体片段可以与T细胞受体的γ和/或δ链融合，从而提供能结合PD-L1的T细胞受体样构建体。在另一个实施方案中，抗体片段是包含CD1或CD3结合结构域以及接头的双特异性T细胞接合体(BiTE)的一部分。
抗体或抗原结合抗体片段对于PD-L1可以是单特异性的，或者可以是双特异性的或多特异性的。例如，在二价或更多价抗体或抗体片段中，结合结构域可以不同地靶向相同抗原的不同表位或靶向不同的抗原。构建多价结合构建体的方法是本领域已知的。双特异性和多特异性抗体是本领域已知的。此外，可以提供双链抗体、三链抗体或四链抗体，其是多肽链的二聚体、三聚体或四聚体，所述多肽链各自包含通过肽接头连接至VL的VH，所述肽接头太短而不允许在同一条多肽链上的VH和VL之间的配对，从而驱动不同VH-VL多肽链上的互补结构域之间的配对，以产生具有两个、三个或四个功能性抗原结合位点的多聚体分子。此外，可以产生双scFv片段，其为具有两个不同可变结构域的小scFv片段，以产生能够结合两个不同表位的双特异性双scFv片段。可以使用基因工程方法产生Fab二聚体(Fab2)和Fab三聚体(Fab3)以产生基于Fab片段的多特异性构建体。
PD-L1结合剂也可以是抗体缀合物。在这方面，PD-L1结合剂可以是(1)抗体，替代支架或其片段和(2)蛋白质或非蛋白质部分的缀合物。例如，PD-L1结合剂可与肽，荧光分子，化疗或其它细胞毒性有效载荷，免疫激活剂或免疫抑制剂缀合。
PD-L1结合剂可以是人抗体、非人抗体、人源化抗体或嵌合抗体，或相应的抗体片段，或者可以从人抗体、非人抗体、人源化抗体或嵌合抗体或相应的抗体片段获得。“嵌合”抗体是通常包含人恒定区和非人可变区的抗体或其片段。“人源化”抗体是通常包含人抗体支架但在至少一个CDR(例如，1、2、3、4、5或全部6个CDR)中具有非人源氨基酸或序列的单克隆抗体。
产生这种抗体的方法是本领域已知的，并且描述于例如
Figure BDA0003814928910000071
和Milstein，Eur.J.Immunol.，5：511-519(1976)；Harlow和Lane(eds.)，Antibodies：A LaboratoryManual，CSH Press(1988)；和Janeway等人(编辑)，Immunobiology，第9版，GarlandPublishing，New York，NY(2017)。在某些实施方案中，可使用转基因动物(例如小鼠)产生人或嵌合抗体或抗体片段，其中一个或多个内源免疫球蛋白基因被一个或多个人免疫球蛋白基因替代。其中内源抗体基因被人抗体基因有效替代的转基因小鼠的实例包括但不限于
Figure BDA0003814928910000072
和Milstein，Eur.J.Immunol.，5：511-519(1976)；Harlow和Lane(编辑)，Antibodies：A Laboratory Manual，CSH Press(1988)；和Janeway等人(编辑)，Immunobiology，第9版，Garland Publishing，New York，NY(2017)。可以使用本领域已知的任何合适的方法产生人源化抗体(参见，例如，An，Z.(编辑)，Therapeutic MonoclonalAntibodies：From Bench to Clinic，John Wiley&Sons，Inc.，Hoboken，New Jersey(2009))，包括例如，非人CDR嫁接至人抗体支架(参见，例如Kashmiri等人，Methods，36(1)：25-34(2005)；和Hou等人，J.Biochem.，144(1)：115-120(2008)和使用噬菌体展示(参见，例如Fellouse等人，Journal of Molecular Biology，373(4)：924-940(2007)和Glanville等人，PNAS，106(48)：20216-20221(2009))。
在一个实施方案中，PD-L1结合剂包含SEQ ID NO：123-143、184-193或209-213中任一项的免疫球蛋白重链可变区，与SEQ ID NO：123-143、184-193或209-213或至少其CDR至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％相同的序列；和/或SEQ ID NO：144-164或194-202中任一项的免疫球蛋白轻链可变区，与SEQ ID NO：144-164或194-202或至少其CDR至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％相同的序列。
通过进一步说明，PD-L1结合剂可以包含：
(1)SEQ ID NO：123的免疫球蛋白重链可变区，或至少其CDR，和/或SEQ ID NO：144的免疫球蛋白轻链可变区，或至少其CDR；
(2)SEQ ID NO：124的免疫球蛋白重链可变区，或至少其CDR，和/或SEQ ID NO：145的免疫球蛋白轻链可变区，或至少其CDR；
(3)SEQ ID NO：125的免疫球蛋白重链可变区，或至少其CDR，和/或SEQ ID NO：146的免疫球蛋白轻链可变区，或至少其CDR；
(4)SEQ ID NO：126的免疫球蛋白重链可变区，或至少其CDR，和/或SEQ ID NO：147的免疫球蛋白轻链可变区，或至少其CDR；
(5)SEQ ID NO：127的免疫球蛋白重链可变区，或至少其CDR，和/或SEQ ID NO：148的免疫球蛋白轻链可变区，或至少其CDR；
(6)SEQ ID NO：128的免疫球蛋白重链可变区，或至少其CDR，和/或SEQ ID NO：149的免疫球蛋白轻链可变区，或至少其CDR；
(7)SEQ ID NO：129的免疫球蛋白重链可变区，或至少其CDR，和/或SEQ ID NO：150的免疫球蛋白轻链可变区，或至少其CDR；
(8)SEQ ID NO：130的免疫球蛋白重链可变区，或至少其CDR，和/或SEQ ID NO：151的免疫球蛋白轻链可变区，或至少其CDR；
(9)SEQ ID NO：131的免疫球蛋白重链可变区，或至少其CDR，和/或SEQ ID NO：152的免疫球蛋白轻链可变区，或至少其CDR；
(10)SEQ ID NO：132的免疫球蛋白重链可变区，或至少其CDR，和/或SEQ ID NO：153的免疫球蛋白轻链可变区，或至少其CDR；
(11)SEQ ID NO：133的免疫球蛋白重链可变区，或至少其CDR，和/或SEQ ID NO：154的免疫球蛋白轻链可变区，或至少其CDR；
(12)SEQ ID NO：134的免疫球蛋白重链可变区，或至少其CDR，和/或SEQ ID NO：155的免疫球蛋白轻链可变区，或至少其CDR；
(13)SEQ ID NO：135的免疫球蛋白重链可变区，或至少其CDR，和/或SEQ ID NO：156的免疫球蛋白轻链可变区，或至少其CDR；
(14)SEQ ID NO：136的免疫球蛋白重链可变区，或至少其CDR，和/或SEQ ID NO：157的免疫球蛋白轻链可变区，或至少其CDR；
(15)SEQ ID NO：137的免疫球蛋白重链可变区，或至少其CDR，和/或SEQ ID NO：158的免疫球蛋白轻链可变区，或至少其CDR；
(16)SEQ ID NO：138的免疫球蛋白重链可变区，或至少其CDR，和/或SEQ ID NO：159的免疫球蛋白轻链可变区，或至少其CDR；
(17)SEQ ID NO：139的免疫球蛋白重链可变区，或至少其CDR，和/或SEQ ID NO：160的免疫球蛋白轻链可变区，或至少其CDR；
(18)SEQ ID NO：140的免疫球蛋白重链可变区，或至少其CDR，和/或SEQ ID NO：261的免疫球蛋白轻链可变区，或至少其CDR；
(19)SEQ ID NO：141的免疫球蛋白重链可变区，或至少其CDR，和/或SEQ ID NO：162的免疫球蛋白轻链可变区，或至少其CDR；和/或
(20)SEQ ID NO：142的免疫球蛋白重链可变区，或至少其CDR，和/或SEQ ID NO：163的免疫球蛋白轻链可变区，或至少其CDR；
(21)SEQ ID NO：143的免疫球蛋白重链可变区，或至少其CDR，和/或SEQ ID NO：164的免疫球蛋白轻链可变区，或至少其CDR；
(22)SEQ ID NO：184的免疫球蛋白重链可变区，或至少其CDR，和/或SEQ ID NO：194的免疫球蛋白轻链可变区，或至少其CDR；
(23)SEQ ID NO：185(其中X可以是任何氨基酸)的免疫球蛋白重链可变区，或至少其CDR，和/或SEQ ID NO：194的免疫球蛋白轻链可变区，或至少其CDR；
(24)SEQ ID NO：186(其中X可以是任何氨基酸)的免疫球蛋白重链可变区，或至少其CDR，和/或SEQ ID NO：194的免疫球蛋白轻链可变区，或至少其CDR；
(25)SEQ ID NO：187的免疫球蛋白重链可变区，或至少其CDR，和/或SEQ ID NO：194的免疫球蛋白轻链可变区，或至少其CDR；
(26)SEQ ID NO：188的免疫球蛋白重链可变区，或至少其CDR，和/或SEQ ID NO：194的免疫球蛋白轻链可变区，或至少其CDR；
(27)SEQ ID NO：189的免疫球蛋白重链可变区，或至少其CDR，和/或SEQ ID NO：194的免疫球蛋白轻链可变区，或至少其CDR；
(28)SEQ ID NO：189的免疫球蛋白重链可变区，或至少其CDR，和/或SEQ ID NO：194的免疫球蛋白轻链可变区，或至少其CDR；
(29)SEQ ID NO：190的免疫球蛋白重链可变区，或至少其CDR，和/或SEQ ID NO：194的免疫球蛋白轻链可变区，或至少其CDR；
(30)SEQ ID NO：191的免疫球蛋白重链可变区，或至少其CDR，和/或SEQ ID NO：194的免疫球蛋白轻链可变区，或至少其CDR；
(31)SEQ ID NO：192的免疫球蛋白重链可变区，或至少其CDR，和/或SEQ ID NO：194的免疫球蛋白轻链可变区，或至少其CDR；
(32)SEQ ID NO：193的免疫球蛋白重链可变区，或至少其CDR，和/或SEQ ID NO：194的免疫球蛋白轻链可变区，或至少其CDR；
(33)SEQ ID NO：130的免疫球蛋白重链可变区，或至少其CDR，和/或SEQ ID NO：194的免疫球蛋白轻链可变区，或至少其CDR；
(34)SEQ ID NO：188的免疫球蛋白重链可变区，或至少其CDR，和/或SEQ ID NO：195的免疫球蛋白轻链可变区，或至少其CDR；
(35)SEQ ID NO：188的免疫球蛋白重链可变区，或至少其CDR，和/或SEQ ID NO：196的免疫球蛋白轻链可变区，或至少其CDR；
(36)SEQ ID NO：188的免疫球蛋白重链可变区，或至少其CDR，和/或SEQ ID NO：197的免疫球蛋白轻链可变区，或至少其CDR；
(37)SEQ ID NO：188的免疫球蛋白重链可变区，或至少其CDR，和/或SEQ ID NO：198的免疫球蛋白轻链可变区，或至少其CDR；
(38)SEQ ID NO：188的免疫球蛋白重链可变区，或至少其CDR，和/或SEQ ID NO：199的免疫球蛋白轻链可变区，或至少其CDR；
(39)SEQ ID NO：188的免疫球蛋白重链可变区，或至少其CDR，和/或SEQ ID NO：200的免疫球蛋白轻链可变区，或至少其CDR；
(40)SEQ ID NO：188的免疫球蛋白重链可变区，或至少其CDR，和/或SEQ ID NO：157的免疫球蛋白轻链可变区，或至少其CDR；
(41)SEQ ID NO：188的免疫球蛋白重链可变区，或至少其CDR，和/或SEQ ID NO：201的免疫球蛋白轻链可变区，或至少其CDR；
(42)SEQ ID NO：188的免疫球蛋白重链可变区，或至少其CDR，和/或SEQ ID NO：202的免疫球蛋白轻链可变区，或至少其CDR；
(43)SEQ ID NO：188的免疫球蛋白重链可变区，或至少其CDR，和/或SEQ ID NO：202的免疫球蛋白轻链可变区，或至少其CDR；
(44)SEQ ID NO：188的免疫球蛋白重链可变区，或至少其CDR，和/或SEQ ID NO：194的免疫球蛋白轻链可变区，或至少其CDR；
(45)SEQ ID NO：209的免疫球蛋白重链可变区，或至少其CDR，和/或SEQ ID NO：144的免疫球蛋白轻链可变区，或至少其CDR；
(46)SEQ ID NO：210的免疫球蛋白重链可变区，或至少其CDR，和/或SEQ ID NO：148的免疫球蛋白轻链可变区，或至少其CDR；
(47)SEQ ID NO：211的免疫球蛋白重链可变区，或至少其CDR，和/或SEQ ID NO：153的免疫球蛋白轻链可变区，或至少其CDR；
(48)SEQ ID NO：212的免疫球蛋白重链可变区，或至少其CDR，和/或SEQ ID NO：150的免疫球蛋白轻链可变区，或至少其CDR；
(49)SEQ ID NO：213的免疫球蛋白重链可变区，或至少其CDR，和/或SEQ ID NO：152的免疫球蛋白轻链可变区，或至少其CDR；和/或
(50)表4的免疫球蛋白重链可变区和/或表4的免疫球蛋白轻链可变区，或至少其CDR。
给定的重链或轻链Ig序列的CDR可以根据各种已知的Ig编号方案(例如，Kabat、Chothia、Martin(增强Chothia)、IGMT、AbM)中的任一种来确定。在某些实施方案中，PD-L1结合剂包含以下CDR中的一种或多种：、
HCDR1，其包含SEQ ID NO：1-14或167中的任一项或与SEQ ID NO：1-14或167中的任一项至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％相同的序列，或由SEQ ID NO：1-14或167中的任一项或与SEQ ID NO：1-14或167中的任一项至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％相同的序列组成；
HCDR2，其包含SEQ ID NO：15-31、168-173或203-206中的任一项或与SEQ ID NO：15-31、168-173或203-206中的任一项至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、或至少约99％相同的序列，或由SEQ ID NO：15-31、168-173或203-206中的任一项或与SEQ ID NO：15-31、168-173或203-206中的任一项至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、或至少约99％相同的序列组成；以及
HCDR3，其包含SEQ ID NO：32-52、174-177、207或208中的任一项或与SEQ ID NO：32-52、174-177、207或208中的任一项至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、或至少约99％相同的序列，或由SEQ ID NO：32-52、174-177、207或208中的任一项或与SEQ ID NO：32-52、174-177、207或208中的任一项至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、或至少约99％相同的序列组成；和/或所述免疫球蛋白轻链多肽包含
LCDR1，其包含SEQ ID NO：53-67或178-182中的任一项或与SEQ ID NO：53-67或178-182中的任一项至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、或至少约99％相同的序列，或由SEQ ID NO：53-67或178-182中的任一项或与SEQ ID NO：53-67或178-182中的任一项至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、或至少约99％相同的序列组成；
LCDR2，其包含SEQ ID NO：68-79中的任一项或与SEQ ID NO：68-79中的任一项至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、或至少约99％相同的序列，由SEQ ID NO：68-79中的任一项或与SEQID NO：68-79中的任一项至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、或至少约99％相同的序列组成；以及
LCDR3，其包含SEQ ID NO：80-91中的任一项或与SEQ ID NO：80-91中的任一项至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、或至少约99％相同的序列，或由SEQ ID NO：80-91中的任一项或与SEQ ID NO：80-91中的任一项至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、或至少约99％相同的序列组成。
在具体的实施方案中，所述结合剂包含免疫球蛋白重链多肽和免疫球蛋白轻链多肽，其中：
(1)免疫球蛋白重链多肽包含HCDR1、HCDR2和HCDR3，所述HCDR1包含SEQ ID NO：1或由SEQ ID NO：1组成，所述HCDR2包含SEQ ID NO：15或由SEQ ID NO：15组成，所述HCDR3包含SEQ ID NO：32或由SEQ ID NO：32组成；和/或免疫球蛋白轻链多肽包含LCDR1、LCDR2和LCDR3，所述LCDR1包含SEQ ID NO：53或由SEQ ID NO：53组成，所述LCDR2包含SEQ ID NO：68或由SEQ ID NO：68组成，所述LCDR3包含SEQ ID NO：80或由SEQ ID NO：80组成；
(2)免疫球蛋白重链多肽包含HCDR1、HCDR2和HCDR3，所述HCDR1包含SEQ ID NO：2或由SEQ ID NO：2组成，所述HCDR2包含SEQ ID NO：16或由SEQ ID NO：16组成，所述HCDR3包含SEQ ID NO：33或由SEQ ID NO：33组成；和/或免疫球蛋白轻链多肽包含LCDR1、LCDR2和LCDR3，所述LCDR1包含SEQ ID NO：54或由SEQ ID NO：54组成，所述LCDR2包含SEQ ID NO：69或由SEQ ID NO：69组成，所述LCDR3包含SEQ ID NO：81或由SEQ ID NO：81组成；
(3)免疫球蛋白重链多肽包含HCDR1、HCDR2和HCDR3，所述HCDR1包含SEQ ID NO：3或由SEQ ID NO：3组成，所述HCDR2包含SEQ ID NO：17或由SEQ ID NO：17组成，所述HCDR3包含SEQ ID NO：34或由SEQ ID NO：34组成；和/或免疫球蛋白轻链多肽包含LCDR1、LCDR2和LCDR3，所述LCDR1包含SEQ ID NO：53或由SEQ ID NO：53组成，所述LCDR2包含SEQ ID NO：68或由SEQ ID NO：68组成，所述LCDR3包含SEQ ID NO：80或由SEQ ID NO：80组成；
(4)免疫球蛋白重链多肽包含HCDR1、HCDR2和HCDR3，所述HCDR1包含SEQ ID NO：4或由SEQ ID NO：4组成，所述HCDR2包含SEQ ID NO：18或由SEQ ID NO：18组成，所述HCDR3包含SEQ ID NO：35或由SEQ ID NO：35组成；和/或免疫球蛋白轻链多肽包含LCDR1、LCDR2和LCDR3，所述LCDR1包含SEQ ID NO：55或由SEQ ID NO：55组成，所述LCDR2包含SEQ ID NO：70或由SEQ ID NO：70组成，所述LCDR3包含SEQ ID NO：82或由SEQ ID NO：82组成；
(5)免疫球蛋白重链多肽包含HCDR1、HCDR2和HCDR3，所述HCDR1包含SEQ ID NO：5或由SEQ ID NO：5组成，所述HCDR2包含SEQ ID NO：19或由SEQ ID NO：19组成，所述HCDR3包含SEQ ID NO：36或由SEQ ID NO：36组成；和/或免疫球蛋白轻链多肽包含LCDR1、LCDR2和LCDR3，所述LCDR1包含SEQ ID NO：53或由SEQ ID NO：53组成，所述LCDR2包含SEQ ID NO：71或由SEQ ID NO：71组成，所述LCDR3包含SEQ ID NO：80或由SEQ ID NO：80组成；
(6)免疫球蛋白重链多肽包含HCDR1、HCDR2和HCDR3，所述HCDR1包含SEQ ID NO：6或由SEQ ID NO：6组成，所述HCDR2包含SEQ ID NO：20或由SEQ ID NO：20组成，所述HCDR3包含SEQ ID NO：37或由SEQ ID NO：37组成；和/或免疫球蛋白轻链多肽包含LCDR1、LCDR2和LCDR3，所述LCDR1包含SEQ ID NO：56或由SEQ ID NO：56组成，所述LCDR2包含SEQ ID NO：72或由SEQ ID NO：72组成，所述LCDR3包含SEQ ID NO：83或由SEQ ID NO：83组成；
(7)免疫球蛋白重链多肽包含HCDR1、HCDR2和HCDR3，所述HCDR1包含SEQ ID NO：7或由SEQ ID NO：7组成，所述HCDR2包含SEQ ID NO：20或由SEQ ID NO：20组成，所述HCDR3包含SEQ ID NO：38或由SEQ ID NO：38组成；和/或免疫球蛋白轻链多肽包含LCDR1、LCDR2和LCDR3，所述LCDR1包含SEQ ID NO：57或由SEQ ID NO：57组成，所述LCDR2包含SEQ ID NO：73或由SEQ ID NO：73组成，所述LCDR3包含SEQ ID NO：84或由SEQ ID NO：84组成；
(8)免疫球蛋白重链多肽包含HCDR1、HCDR2和HCDR3，所述HCDR1包含SEQ ID NO：5或由SEQ ID NO：5组成，所述HCDR2包含SEQ ID NO：21或由SEQ ID NO：21组成，所述HCDR3包含SEQ ID NO：39或由SEQ ID NO：39组成；和/或免疫球蛋白轻链多肽包含LCDR1、LCDR2和LCDR3，所述LCDR1包含SEQ ID NO：58或由SEQ ID NO：58组成，所述LCDR2包含SEQ ID NO：68或由SEQ ID NO：68组成，所述LCDR3包含SEQ ID NO：80或由SEQ ID NO：80组成；
(9)免疫球蛋白重链多肽包含HCDR1、HCDR2和HCDR3，所述HCDR1包含SEQ ID NO：7或由SEQ ID NO：7组成，所述HCDR2包含SEQ ID NO：22或由SEQ ID NO：22组成，所述HCDR3包含SEQ ID NO：40或由SEQ ID NO：40组成；和/或免疫球蛋白轻链多肽包含LCDR1、LCDR2和LCDR3，所述LCDR1包含SEQ ID NO：59或由SEQ ID NO：59组成，所述LCDR2包含SEQ ID NO：68或由SEQ ID NO：68组成，所述LCDR3包含SEQ ID NO：82或由SEQ ID NO：82组成；
(10)免疫球蛋白重链多肽包含HCDR1、HCDR2和HCDR3，所述HCDR1包含SEQ ID NO：2或由SEQ ID NO：2组成，所述HCDR2包含SEQ ID NO：23或由SEQ ID NO：23组成，所述HCDR3包含SEQ ID NO：41或由SEQ ID NO：41组成；和/或免疫球蛋白轻链多肽包含LCDR1、LCDR2和LCDR3，所述LCDR1包含SEQ ID NO：53或由SEQ ID NO：53组成，所述LCDR2包含SEQ ID NO：74或由SEQ ID NO：74组成，所述LCDR3包含SEQ ID NO：85或由SEQ ID NO：85组成；
(11)免疫球蛋白重链多肽包含HCDR1、HCDR2和HCDR3，所述HCDR1包含SEQ ID NO：2或由SEQ ID NO：2组成，所述HCDR2包含SEQ ID NO：20或由SEQ ID NO：20组成，所述HCDR3包含SEQ ID NO：42或由SEQ ID NO：42组成；和/或免疫球蛋白轻链多肽包含LCDR1、LCDR2和LCDR3，所述LCDR1包含SEQ ID NO：60或由SEQ ID NO：60组成，所述LCDR2包含SEQ ID NO：75或由SEQ ID NO：75组成，所述LCDR3包含SEQ ID NO：82或由SEQ ID NO：82组成；
(12)免疫球蛋白重链多肽包含HCDR1、HCDR2和HCDR3，所述HCDR1包含SEQ ID NO：2或由SEQ ID NO：2组成，所述HCDR2包含SEQ ID NO：15或由SEQ ID NO：15组成，所述HCDR3包含SEQ ID NO：43或由SEQ ID NO：43组成；和/或免疫球蛋白轻链多肽包含LCDR1、LCDR2和LCDR3，所述LCDR1包含SEQ ID NO：53或由SEQ ID NO：53组成，所述LCDR2包含SEQ ID NO：76或由SEQ ID NO：76组成，所述LCDR3包含SEQ ID NO：80或由SEQ ID NO：80组成；
(13)免疫球蛋白重链多肽包含HCDR1、HCDR2和HCDR3，所述HCDR1包含SEQ ID NO：8或由SEQ ID NO：8组成，所述HCDR2包含SEQ ID NO：16或由SEQ ID NO：16组成，所述HCDR3包含SEQ ID NO：44或由SEQ ID NO：44组成；和/或免疫球蛋白轻链多肽包含LCDR1、LCDR2和LCDR3，所述LCDR1包含SEQ ID NO：61或由SEQ ID NO：61组成，所述LCDR2包含SEQ ID NO：68或由SEQ ID NO：68组成，所述LCDR3包含SEQ ID NO：86或由SEQ ID NO：86组成；
(14)免疫球蛋白重链多肽包含HCDR1、HCDR2和HCDR3，所述HCDR1包含SEQ ID NO：9或由SEQ ID NO：9组成，所述HCDR2包含SEQ ID NO：24或由SEQ ID NO：24组成，所述HCDR3包含SEQ ID NO：45或由SEQ ID NO：45组成；和/或免疫球蛋白轻链多肽包含LCDR1、LCDR2和LCDR3，所述LCDR1包含SEQ ID NO：58或由SEQ ID NO：58组成，所述LCDR2包含SEQ ID NO：68或由SEQ ID NO：68组成，所述LCDR3包含SEQ ID NO：82或由SEQ ID NO：82组成；
(15)免疫球蛋白重链多肽包含HCDR1、HCDR2和HCDR3，所述HCDR1包含SEQ ID NO：10或由SEQ ID NO：10组成，所述HCDR2包含SEQ ID NO：25或由SEQ ID NO：25组成，所述HCDR3包含SEQ ID NO：46或由SEQ ID NO：46组成；和/或免疫球蛋白轻链多肽包含LCDR1、LCDR2和LCDR3，所述LCDR1包含SEQ ID NO：62或由SEQ ID NO：62组成，所述LCDR2包含SEQID NO：77或由SEQ ID NO：77组成，所述LCDR3包含SEQ ID NO：87或由SEQ ID NO：87组成；
(16)免疫球蛋白重链多肽包含HCDR1、HCDR2和HCDR3，所述HCDR1包含SEQ ID NO：11或由SEQ ID NO：11组成，所述HCDR2包含SEQ ID NO：26或由SEQ ID NO：26组成，所述HCDR3包含SEQ ID NO：47或由SEQ ID NO：47组成；和/或免疫球蛋白轻链多肽包含LCDR1、LCDR2和LCDR3，所述LCDR1包含SEQ ID NO：63或由SEQ ID NO：63组成，所述LCDR2包含SEQID NO：72或由SEQ ID NO：72组成，所述LCDR3包含SEQ ID NO：88或由SEQ ID NO：88组成；
(17)免疫球蛋白重链多肽包含HCDR1、HCDR2和HCDR3，所述HCDR1包含SEQ ID NO：3或由SEQ ID NO：3组成，所述HCDR2包含SEQ ID NO：27或由SEQ ID NO：27组成，所述HCDR3包含SEQ ID NO：48或由SEQ ID NO：48组成；和/或免疫球蛋白轻链多肽包含LCDR1、LCDR2和LCDR3，所述LCDR1包含SEQ ID NO：64或由SEQ ID NO：64组成，所述LCDR2包含SEQ ID NO：68或由SEQ ID NO：68组成，所述LCDR3包含SEQ ID NO：80或由SEQ ID NO：80组成；
(18)免疫球蛋白重链多肽包含HCDR1、HCDR2和HCDR3，所述HCDR1包含SEQ ID NO：3或由SEQ ID NO：3组成，所述HCDR2包含SEQ ID NO：28或由SEQ ID NO：28组成，所述HCDR3包含SEQ ID NO：49或由SEQ ID NO：49组成；和/或免疫球蛋白轻链多肽包含LCDR1、LCDR2和LCDR3，所述LCDR1包含SEQ ID NO：53或由SEQ ID NO：53组成，所述LCDR2包含SEQ ID NO：78或由SEQ ID NO：78组成，所述LCDR3包含SEQ ID NO：89或由SEQ ID NO：89组成；
(19)免疫球蛋白重链多肽包含HCDR1、HCDR2和HCDR3，所述HCDR1包含SEQ ID NO：12或由SEQ ID NO：12组成，所述HCDR2包含SEQ ID NO：29或由SEQ ID NO：29组成，所述HCDR3包含SEQ ID NO：50或由SEQ ID NO：50组成；和/或免疫球蛋白轻链多肽包含LCDR1、LCDR2和LCDR3，所述LCDR1包含SEQ ID NO：65或由SEQ ID NO：65组成，所述LCDR2包含SEQID NO：79或由SEQ ID NO：79组成，所述LCDR3包含SEQ ID NO：90或由SEQ ID NO：90组成；
(20)免疫球蛋白重链多肽包含HCDR1、HCDR2和HCDR3，所述HCDR1包含SEQ ID NO：13或由SEQ ID NO：13组成，所述HCDR2包含SEQ ID NO：30或由SEQ ID NO：30组成，所述HCDR3包含SEQ ID NO：51或由SEQ ID NO：51组成；和/或免疫球蛋白轻链多肽包含LCDR1、LCDR2和LCDR3，所述LCDR1包含SEQ ID NO：66或由SEQ ID NO：66组成，所述LCDR2包含SEQID NO：72或由SEQ ID NO：72组成，所述LCDR3包含SEQ ID NO：91或由SEQ ID NO：91组成；
(21)免疫球蛋白重链多肽包含HCDR1、HCDR2和HCDR3，所述HCDR1包含SEQ ID NO：14或由SEQ ID NO：14组成，所述HCDR2包含SEQ ID NO：31或由SEQ ID NO：31组成，所述HCDR3包含SEQ ID NO：52或由SEQ ID NO：52组成；和/或免疫球蛋白轻链多肽包含LCDR1、LCDR2和LCDR3，所述LCDR1包含SEQ ID NO：67或由SEQ ID NO：67组成，所述LCDR2包含SEQID NO：72或由SEQ ID NO：72组成，所述LCDR3包含SEQ ID NO：82或由SEQ ID NO：82组成；
(22)免疫球蛋白重链多肽包含HCDR1、HCDR2和HCDR3，所述HCDR1包含SEQ ID NO：167或由SEQ ID NO：167组成，所述HCDR2包含SEQ ID NO：168或由SEQ ID NO：168组成，所述HCDR3包含SEQ ID NO：174或由SEQ ID NO：174组成；和/或免疫球蛋白轻链多肽包含LCDR1、LCDR2和LCDR3，所述LCDR1包含SEQ ID NO：63或由SEQ ID NO：63组成，所述LCDR2包含SEQID NO：68或由SEQ ID NO：68组成，所述LCDR3包含SEQ ID NO：82或由SEQ ID NO：82组成；
(23)免疫球蛋白重链多肽包含HCDR1、HCDR2和HCDR3，所述HCDR1包含SEQ ID NO：13或由SEQ ID NO：13组成，所述HCDR2包含SEQ ID NO：169或由SEQ ID NO：169组成，所述HCDR3包含SEQ ID NO：175(ERFLGGXMDV，其中X可以为任何氨基酸)或由SEQ ID NO：175组成；和/或免疫球蛋白轻链多肽包含LCDR1、LCDR2和LCDR3，所述LCDR1包含SEQ ID NO：63或由SEQ ID NO：63组成，所述LCDR2包含SEQ ID NO：68或由SEQ ID NO：68组成，所述LCDR3包含SEQ ID NO：82或由SEQ ID NO：82组成；
(24)免疫球蛋白重链多肽包含HCDR1、HCDR2和HCDR3，所述HCDR1包含SEQ ID NO：167或由SEQ ID NO：167组成，所述HCDR2包含SEQ ID NO：170或由SEQ ID NO：170组成，所述HCDR3包含SEQ ID NO：176(EAVAGPXMDV，其中X可以为任何氨基酸)或由SEQ ID NO：176组成；和/或免疫球蛋白轻链多肽包含LCDR1、LCDR2和LCDR3，所述LCDR1包含SEQ ID NO：63或由SEQ ID NO：63组成，所述LCDR2包含SEQ ID NO：68或由SEQ ID NO：68组成，所述LCDR3包含SEQ ID NO：82或由SEQ ID NO：82组成；
(25)免疫球蛋白重链多肽包含HCDR1、HCDR2和HCDR3，所述HCDR1包含SEQ ID NO：167或由SEQ ID NO：167组成，所述HCDR2包含SEQ ID NO：169或由SEQ ID NO：1 69组成，所述HCDR3包含SEQ ID NO：177或由SEQ ID NO：177组成；和/或免疫球蛋白轻链多肽包含LCDR1、LCDR2和LCDR3，所述LCDR1包含SEQ ID NO：63或由SEQ ID NO：63组成，所述LCDR2包含SEQ ID NO：68或由SEQ ID NO：68组成，所述LCDR3包含SEQ ID NO：82或由SEQ ID NO：82组成；
(26)免疫球蛋白重链多肽包含HCDR1、HCDR2和HCDR3，所述HCDR1包含SEQ ID NO：5或由SEQ ID NO：5组成，所述HCDR2包含SEQ ID NO：171或由SEQ ID NO：171组成，所述HCDR3包含SEQ ID NO：39或由SEQ ID NO：39组成；和/或免疫球蛋白轻链多肽包含LCDR1、LCDR2和LCDR3，所述LCDR1包含SEQ ID NO：63或由SEQ ID NO：63组成，所述LCDR2包含SEQ ID NO：68或由SEQ ID NO：68组成，所述LCDR3包含SEQ ID NO：82或由SEQ ID NO：82组成；
(27)免疫球蛋白重链多肽包含HCDR1、HCDR2和HCDR3，所述HCDR1包含SEQ ID NO：167或由SEQ ID NO：167组成，所述HCDR2包含SEQ ID NO：168或由SEQ ID NO：1 68组成，所述HCDR3包含SEQ ID NO：174或由SEQ ID NO：174组成；和/或免疫球蛋白轻链多肽包含LCDR1、LCDR2和LCDR3，所述LCDR1包含SEQ ID NO：63或由SEQ ID NO：63组成，所述LCDR2包含SEQ ID NO：68或由SEQ ID NO：68组成，所述LCDR3包含SEQ ID NO：82或由SEQ ID NO：82组成；
(28)免疫球蛋白重链多肽包含HCDR1、HCDR2和HCDR3，所述HCDR1包含SEQ ID NO：167或由SEQ ID NO：167组成，所述HCDR2包含SEQ ID NO：168或由SEQ ID NO：168组成，所述HCDR3包含SEQ ID NO：174或由SEQ ID NO：174组成；和/或免疫球蛋白轻链多肽包含LCDR1、LCDR2和LCDR3，所述LCDR1包含SEQ ID NO：63或由SEQ ID NO：63组成，所述LCDR2包含SEQID NO：68或由SEQ ID NO：68组成，所述LCDR3包含SEQ ID NO：82或由SEQ ID NO：82组成；
(29)免疫球蛋白重链多肽包含HCDR1、HCDR2和HCDR3，所述HCDR1包含SEQ ID NO：167或由SEQ ID NO：167组成，所述HCDR2包含SEQ ID NO：172或由SEQ ID NO：172组成，所述HCDR3包含SEQ ID NO：174或由SEQ ID NO：174组成；和/或免疫球蛋白轻链多肽包含LCDR1、LCDR2和LCDR3，所述LCDR1包含SEQ ID NO：63或由SEQ ID NO：63组成，所述LCDR2包含SEQID NO：68或由SEQ ID NO：68组成，所述LCDR3包含SEQ ID NO：82或由SEQ ID NO：82组成；
(30)免疫球蛋白重链多肽包含HCDR1、HCDR2和HCDR3，所述HCDR1包含SEQ ID NO：167或由SEQ ID NO：167组成，所述HCDR2包含SEQ ID NO：173或由SEQ ID NO：173组成，所述HCDR3包含SEQ ID NO：174或由SEQ ID NO：174组成；和/或免疫球蛋白轻链多肽包含LCDR1、LCDR2和LCDR3，所述LCDR1包含SEQ ID NO：63或由SEQ ID NO：63组成，所述LCDR2包含SEQID NO：68或由SEQ ID NO：68组成，所述LCDR3包含SEQ ID NO：82或由SEQ ID NO：82组成；
(31)免疫球蛋白重链多肽包含HCDR1、HCDR2和HCDR3，所述HCDR1包含SEQ ID NO：167或由SEQ ID NO：167组成，所述HCDR2包含SEQ ID NO：172或由SEQ ID NO：172组成，所述HCDR3包含SEQ ID NO：174或由SEQ ID NO：174组成；和/或免疫球蛋白轻链多肽包含LCDR1、LCDR2和LCDR3，所述LCDR1包含SEQ ID NO：63或由SEQ ID NO：63组成，所述LCDR2包含SEQID NO：68或由SEQ ID NO：68组成，所述LCDR3包含SEQ ID NO：82或由SEQ ID NO：82组成；
(32)免疫球蛋白重链多肽包含HCDR1、HCDR2和HCDR3，所述HCDR1包含SEQ ID NO：167或由SEQ ID NO：167组成，所述HCDR2包含SEQ ID NO：170或由SEQ ID NO：170组成，所述HCDR3包含SEQ ID NO：174或由SEQ ID NO：174组成；和/或免疫球蛋白轻链多肽包含LCDR1、LCDR2和LCDR3，所述LCDR1包含SEQ ID NO：63或由SEQ ID NO：63组成，所述LCDR2包含SEQID NO：68或由SEQ ID NO：68组成，所述LCDR3包含SEQ ID NO：82或由SEQ ID NO：82组成；
(33)免疫球蛋白重链多肽包含HCDR1、HCDR2和HCDR3，所述HCDR1包含SEQ ID NO：5或由SEQ ID NO：5组成，所述HCDR2包含SEQ ID NO：21或由SEQ ID NO：21组成，所述HCDR3包含SEQ ID NO：39或由SEQ ID NO：39组成；和/或免疫球蛋白轻链多肽包含LCDR1、LCDR2和LCDR3，所述LCDR1包含SEQ ID NO：63或由SEQ ID NO：63组成，所述LCDR2包含SEQ ID NO：68或由SEQ ID NO：68组成，所述LCDR3包含SEQ ID NO：82或由SEQ ID NO：82组成；
(34)免疫球蛋白重链多肽包含HCDR1、HCDR2和HCDR3，所述HCDR1包含SEQ ID NO：5或由SEQ ID NO：5组成，所述HCDR2包含SEQ ID NO：171或由SEQ ID NO：171组成，所述HCDR3包含SEQ ID NO：39或由SEQ ID NO：39组成；和/或免疫球蛋白轻链多肽包含LCDR1、LCDR2和LCDR3，所述LCDR1包含SEQ ID NO：178或由SEQ ID NO：178组成，所述LCDR2包含SEQ ID NO：68或由SEQ ID NO：68组成，所述LCDR3包含SEQ ID NO：82或由SEQ ID NO：82组成；
(35)免疫球蛋白重链多肽包含HCDR1、HCDR2和HCDR3，所述HCDR1包含SEQ ID NO：5或由SEQ ID NO：5组成，所述HCDR2包含SEQ ID NO：171或由SEQ ID NO：171组成，所述HCDR3包含SEQ ID NO：39或由SEQ ID NO：39组成；和/或免疫球蛋白轻链多肽包含LCDR1、LCDR2和LCDR3，所述LCDR1包含SEQ ID NO：179或由SEQ ID NO：179组成，所述LCDR2包含SEQ ID NO：68或由SEQ ID NO：68组成，所述LCDR3包含SEQ ID NO：82或由SEQ ID NO：82组成；
(36)免疫球蛋白重链多肽包含HCDR1、HCDR2和HCDR3，所述HCDR1包含SEQ ID NO：5或由SEQ ID NO：5组成，所述HCDR2包含SEQ ID NO：171或由SEQ ID NO：171组成，所述HCDR3包含SEQ ID NO：39或由SEQ ID NO：39组成；和/或免疫球蛋白轻链多肽包含LCDR1、LCDR2和LCDR3，所述LCDR1包含SEQ ID NO：180或由SEQ ID NO：180组成，所述LCDR2包含SEQ ID NO：68或由SEQ ID NO：68组成，所述LCDR3包含SEQ ID NO：82或由SEQ ID NO：82组成；
(37)免疫球蛋白重链多肽包含HCDR1、HCDR2和HCDR3，所述HCDR1包含SEQ ID NO：5或由SEQ ID NO：5组成，所述HCDR2包含SEQ ID NO：171或由SEQ ID NO：171组成，所述HCDR3包含SEQ ID NO：39或由SEQ ID NO：39组成；和/或免疫球蛋白轻链多肽包含LCDR1、LCDR2和LCDR3，所述LCDR1包含SEQ ID NO：181或由SEQ ID NO：181组成，所述LCDR2包含SEQ ID NO：68或由SEQ ID NO：68组成，所述LCDR3包含SEQ ID NO：82或由SEQ ID NO：82组成；
(38)免疫球蛋白重链多肽包含HCDR1、HCDR2和HCDR3，所述HCDR1包含SEQ ID NO：5或由SEQ ID NO：5组成，所述HCDR2包含SEQ ID NO：171或由SEQ ID NO：171组成，所述HCDR3包含SEQ ID NO：39或由SEQ ID NO：39组成；和/或免疫球蛋白轻链多肽包含LCDR1、LCDR2和LCDR3，所述LCDR1包含SEQ ID NO：182或由SEQ ID NO：182组成，所述LCDR2包含SEQ ID NO：68或由SEQ ID NO：68组成，所述LCDR3包含SEQ ID NO：82或由SEQ ID NO：82组成；
(39)免疫球蛋白重链多肽包含HCDR1、HCDR2和HCDR3，所述HCDR1包含SEQ ID NO：5或由SEQ ID NO：5组成，所述HCDR2包含SEQ ID NO：171或由SEQ ID NO：171组成，所述HCDR3包含SEQ ID NO：39或由SEQ ID NO：39组成；和/或免疫球蛋白轻链多肽包含LCDR1、LCDR2和LCDR3，所述LCDR1包含SEQ ID NO：53或由SEQ ID NO：53组成，所述LCDR2包含SEQ ID NO：68或由SEQ ID NO：68组成，所述LCDR1包含SEQ ID NO：82或由SEQ ID NO：82组成；
(40)免疫球蛋白重链多肽包含HCDR1、HCDR2和HCDR3，所述HCDR1包含SEQ ID NO：5或由SEQ ID NO：5组成，所述HCDR2包含SEQ ID NO：171或由SEQ ID NO：171组成，所述HCDR3包含SEQ ID NO：39或由SEQ ID NO：39组成；和/或免疫球蛋白轻链多肽包含LCDR1、LCDR2和LCDR3，所述LCDR1包含SEQ ID NO：58或由SEQ ID NO：58组成，所述LCDR2包含SEQ ID NO：68或由SEQ ID NO：68组成，所述LCDR3包含SEQ ID NO：82或由SEQ ID NO：82组成；
(41)免疫球蛋白重链多肽包含HCDR1、HCDR2和HCDR3，所述HCDR1包含SEQ ID NO：5或由SEQ ID NO：5组成，所述HCDR2包含SEQ ID NO：171或由SEQ ID NO：171组成，所述HCDR3包含SEQ ID NO：39或由SEQ ID NO：39组成；和/或免疫球蛋白轻链多肽包含LCDR1、LCDR2和LCDR3，所述LCDR1包含SEQ ID NO：63或由SEQ ID NO：63组成，所述LCDR2包含SEQ ID NO：68或由SEQ ID NO：68组成，所述LCDR3包含SEQ ID NO：82或由SEQ ID NO：82组成；
(42)免疫球蛋白重链多肽包含HCDR1、HCDR2和HCDR3，所述HCDR1包含SEQ ID NO：5或由SEQ ID NO：5组成，所述HCDR2包含SEQ ID NO：171或由SEQ ID NO：171组成，所述HCDR3包含SEQ ID NO：39或由SEQ ID NO：39组成；和/或免疫球蛋白轻链多肽包含LCDR1、LCDR2和LCDR3，所述LCDR1包含SEQ ID NO：63或由SEQ ID NO：63组成，所述LCDR2包含SEQ ID NO：68或由SEQ ID NO：68组成，所述LCDR3包含SEQ ID NO：80或由SEQ ID NO：80组成；
(43)免疫球蛋白重链多肽包含HCDR1、HCDR2和HCDR3，所述HCDR1包含SEQ ID NO：5或由SEQ ID NO：5组成，所述HCDR2包含SEQ ID NO：171或由SEQ ID NO：171组成，所述HCDR3包含SEQ ID NO：39或由SEQ ID NO：39组成；和/或免疫球蛋白轻链多肽包含LCDR1、LCDR2和LCDR3，所述LCDR1包含SEQ ID NO：63或由SEQ ID NO：63组成，所述LCDR2包含SEQ ID NO：68或由SEQ ID NO：68组成，所述LCDR3包含SEQ ID NO：80或由SEQ ID NO：80组成；
(44)免疫球蛋白重链多肽包含HCDR1、HCDR2和HCDR3，所述HCDR1包含SEQ ID NO：5或由SEQ ID NO：5组成、所述HCDR2包含SEQ ID NO：171或由SEQ ID NO：171组成，所述HCDR3包含SEQ ID NO：39或由SEQ ID NO：39组成；和/或免疫球蛋白轻链多肽包含LCDR1、LCDR2和LCDR3，所述LCDR1包含SEQ ID NO：63或由SEQ ID NO：63组成，所述LCDR2包含SEQ ID NO：68或由SEQ ID NO：68组成，所述LCDR3包含SEQ ID NO：82或由SEQ ID NO：82组成；
(45)免疫球蛋白重链多肽包含HCDR1、HCDR2和HCDR3，所述HCDR1包含SEQ ID NO：3或由SEQ ID NO：3组成、所述HCDR2包含SEQ ID NO：203或由SEQ ID NO：203组成，所述HCDR3包含SEQ ID NO：34或由SEQ ID NO：34组成；和/或免疫球蛋白轻链多肽包含LCDR1、LCDR2和LCDR3，所述LCDR1包含SEQ ID NO：53或由SEQ ID NO：53组成，所述LCDR2包含SEQ ID NO：68或由SEQ ID NO：68组成，所述LCDR3包含SEQ ID NO：80或由SEQ ID NO：80组成；
(46)免疫球蛋白重链多肽包含HCDR1、HCDR2和HCDR3，所述HCDR1包含SEQ ID NO：5或由SEQ ID NO：5组成，所述HCDR2包含SEQ ID NO：204或由SEQ ID NO：204组成，所述HCDR3包含SEQ ID NO：36或由SEQ ID NO：36组成；和/或免疫球蛋白轻链多肽包含LCDR1、LCDR2和LCDR3，所述LCDR1包含SEQ ID NO：53或由SEQ ID NO：53组成，所述LCDR2包含SEQ ID NO：71或由SEQ ID NO：71组成，所述LCDR3包含SEQ ID NO：80或由SEQ ID NO：80组成；
(47)免疫球蛋白重链多肽包含HCDR1、HCDR2和HCDR3，所述HCDR1包含SEQ ID NO：2或由SEQ ID NO：2组成，所述HCDR2包含SEQ ID NO：205或由SEQ ID NO：205组成，所述HCDR3包含SEQ ID NO：41或由SEQ ID NO：41组成；和/或免疫球蛋白轻链多肽包含LCDR1、LCDR2和LCDR3，所述LCDR1包含SEQ ID NO：53或由SEQ ID NO：53组成，所述LCDR2包含SEQ ID NO：74或由SEQ ID NO：74组成，所述LCDR3包含SEQ ID NO：85或由SEQ ID NO：85组成；
(48)免疫球蛋白重链多肽包含HCDR1、HCDR2和HCDR3，所述HCDR1包含SEQ ID NO：3或由SEQ ID NO：3组成，所述HCDR2包含SEQ ID NO：169或由SEQ ID NO：169组成，所述HCDR3包含SEQ ID NO：207或由SEQ ID NO：207组成；和/或免疫球蛋白轻链多肽包含LCDR1、LCDR2和LCDR3，所述LCDR1包含SEQ ID NO：57或由SEQ ID NO：57组成，所述LCDR2包含SEQ ID NO：73或由SEQ ID NO：73组成，所述LCDR3包含SEQ ID NO：84或由SEQ ID NO：84组成；
(49)免疫球蛋白重链多肽包含HCDR1、HCDR2和HCDR3，所述HCDR1包含SEQ ID NO：7或由SEQ ID NO：7组成，所述HCDR2包含SEQ ID NO：206或由SEQ ID NO：206组成，所述HCDR3包含SEQ ID NO：208或由SEQ ID NO：208组成；和/或免疫球蛋白轻链多肽包含LCDR1、LCDR2和LCDR3，所述LCDR1包含SEQ ID NO：59或由SEQ ID NO：59组成，所述LCDR2包含SEQ ID NO：68或由SEQ ID NO：68组成，所述LCDR3包含SEQ ID NO：82或由SEQ ID NO：82组成；和/或
(71)免疫球蛋白重链多肽和轻链多肽包含表1中列出的CDR的任何组合。
在具体的实施方案中，所述结合剂包含免疫球蛋白重链多肽和免疫球蛋白轻链多肽，其中所述免疫球蛋白重链多肽包含第一框架区、第二框架区、第三框架区和/或第四框架区；和/或所述免疫球蛋白轻链多肽包含第一框架区、第二框架区、第三框架区和/或第四框架区；和/或所述免疫球蛋白重链多肽和轻链多肽包含表2和/或3中列出的框架区的任何组合。
Figure BDA0003814928910000271
Figure BDA0003814928910000281
Figure BDA0003814928910000291
Figure BDA0003814928910000301
Figure BDA0003814928910000311
Figure BDA0003814928910000321
Figure BDA0003814928910000331
Figure BDA0003814928910000341
Figure BDA0003814928910000351
Figure BDA0003814928910000361
Figure BDA0003814928910000371
Figure BDA0003814928910000381
Figure BDA0003814928910000391
Figure BDA0003814928910000401
Figure BDA0003814928910000411
Figure BDA0003814928910000421
Figure BDA0003814928910000431
Figure BDA0003814928910000441
Figure BDA0003814928910000451
如上所提及的，所述结合剂可包含与本文提供的特定重链或轻链可变区序列具有至少约90％的同一性(例如至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％的同一性)的Ig重链和/或轻链可变区。类似地，Ig重链和/或轻链可变区的CDR可与本文提供的特定CDR序列具有至少约90％的同一性(例如至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％的同一性)。因此，与本文提供的特定序列相比，Ig重链和轻链可变区或CDR序列可包含至少一个(例如，1个或更多个、2个或更多个、3个或更多个、4个或更多个、5个或更多个、6个或更多个、7个或更多个、8个或更多个、9个或更多个、或10个或更多个等，视序列长度而定)氨基酸修饰(例如，取代、添加或缺失)，条件是结合剂维持特异性结合PD-L1的能力，任选地其中结合剂维持具有特定序列的结合剂结合PD-L1的亲和力和/或与具有特定序列的结合剂竞争结合PD-L1的能力。
所提供的序列的氨基酸可以被任何其它氨基酸取代。氨基酸包括天然存在的α-氨基酸及其立体异构体，以及非天然存在的氨基酸及其立体异构体。给定氨基酸的“立体异构体”是指具有相同分子式和分子内键但键和原子的三维排列不同的异构体(例如，L-氨基酸和相应的D-氨基酸)。氨基酸可以是糖基化的(例如，N-连接的聚糖、O-连接的聚糖、磷酸聚糖、C-连接的聚糖或糖基磷脂酰肌醇化(glypiation))或去糖基化的。
天然存在的氨基酸是由遗传密码编码的那些，以及后来被修饰的那些氨基酸，例如羟脯氨酸，γ-羧基谷氨酸和O-磷酸丝氨酸。天然存在的α-氨基酸包括但不限于丙氨酸(Ala)、半胱氨酸(Cys)、天冬氨酸(Asp)、谷氨酸(Glu)、苯丙氨酸(Phe)、甘氨酸(Gly)、组氨酸(His)、异亮氨酸(Ile)、精氨酸(Arg)、赖氨酸(Lys)、亮氨酸(Leu)、甲硫氨酸(Met)、天冬酰胺(Asn)、脯氨酸(Pro)、谷氨酰胺(Gln)、丝氨酸(Ser)、苏氨酸(Thr)、缬氨酸(Val)、色氨酸(Trp)、酪氨酸(Tyr)及其组合。天然存在的α-氨基酸的立体异构体包括但不限于D-丙氨酸(D-Ala)、D-半胱氨酸(D-Cys)、D-天冬氨酸(D-Asp)、D-谷氨酸(D-Glu)、D-苯丙氨酸(D-Phe)、D-组氨酸(D-His)、D-异亮氨酸(D-Ile)、D-精氨酸(D-Arg)、D-赖氨酸(D-Lys)、D-亮氨酸(D-Leu)、D-甲硫氨酸(D-Met)、D-天冬酰胺(D-Asn)、D-脯氨酸(D-Pro)、D-谷氨酰胺(D-Gln)、D-丝氨酸(D-Ser)、D-苏氨酸(D-Thr)、D-缬氨酸(D-Val)、D-色氨酸(D-Trp)、D-酪氨酸(D-Tyr)及其组合。
非天然存在的氨基酸包括但不限于氨基酸类似物、氨基酸模拟物、合成氨基酸、N-取代的甘氨酸和L-或D-构型的N-甲基氨基酸，其以类似于天然存在的氨基酸的方式起作用。例如，“氨基酸类似物”可以是具有与天然存在的氨基酸相同的基本化学结构(即，与氢、羧基、氨基键合的碳)，但具有修饰的侧链基团或修饰的肽骨架的非天然氨基酸，例如，高丝氨酸、正亮氨酸、甲硫氨酸亚砜和甲硫氨酸甲基锍。“氨基酸模拟物”是指具有不同于氨基酸的一般化学结构的结构，但以类似于天然存在的氨基酸的方式起作用的化合物。
氨基酸在本文中可以通过通常已知的三字母符号或者通过IUPAC-IUB生化命名委员会推荐的单字母符号来提及。
相对于原始氨基酸残基的基本性质，氨基酸取代可以是保守的，半保守的或非保守的。“保守”取代是指一个氨基酸被另一个具有共同性质的氨基酸取代。界定各氨基酸之间的共同性质的功能方式是分析同源生物体的相应蛋白质之间氨基酸变化的标准化频率(Schulz和Schirmer，Principles of Protein Structure，Springer-Verlag，New York(1979))。根据这些分析，可以界定氨基酸的组，其中组内的氨基酸彼此优先交换，因此它们对整个蛋白质结构的影响彼此最相似(Schulz和Schirmer，同上)。
氨基酸广泛地分为“芳香族”或“脂肪族”。芳香族氨基酸包括芳香环。“芳香族”氨基酸的实例包括组氨酸(H或His)、苯丙氨酸(F或Phe)、酪氨酸(Y或Tyr)和色氨酸(W或Trp)。非芳香族氨基酸广泛地归为“脂肪族”。“脂肪族”氨基酸的实例包括甘氨酸(G或Gly)、丙氨酸(A或Ala)、缬氨酸(V或Val)、亮氨酸(L或Leu)、异亮氨酸(I或Ile)、甲硫氨酸(M或Met)、丝氨酸(S或Ser)、苏氨酸(T或Thr)、半胱氨酸(C或Cys)、脯氨酸(P或Pro)、谷氨酸(E或Glu)、天冬氨酸(D或Asp)、天冬酰胺(N或Asn)、谷氨酰胺(Q或Gln)、赖氨酸(K或Lys)和精氨酸(R或Arg)。
脂肪族氨基酸可以细分为四个亚组。“大脂肪族非极性亚组”由缬氨酸、亮氨酸和异亮氨酸组成。“脂肪族弱极性亚组”由甲硫氨酸、丝氨酸、苏氨酸和半胱氨酸组成。“脂肪族极性/带电荷亚组”由谷氨酸、天冬氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、赖氨酸和精氨酸组成。“小残基亚组”由甘氨酸和丙氨酸组成。带电/极性氨基酸的组可细分为三个亚组：由赖氨酸和精氨酸组成的“带正电荷的亚组”，由谷氨酸和天冬氨酸组成的“带负电荷的亚组”，以及由天冬酰胺和谷氨酰胺组成的“极性亚组”。
芳香族氨基酸可细分为两个亚组：由组氨酸和色氨酸组成的“氮环亚组”以及由苯丙氨酸和酪氨酸组成的“苯基亚组”。
保守氨基酸取代的实例包括上述亚组内的氨基酸取代，例如赖氨酸取代精氨酸，反之亦然，使得可以保持正电荷，谷氨酸取代天冬氨酸，反之亦然，使得可以保持负电荷，丝氨酸取代苏氨酸，使得可以保持游离-OH，以及谷氨酰胺取代天冬酰胺，使得可以保持游离-NH2。
“半保守突变”包括在上面列出的相同组内但不在相同亚组内的氨基酸的氨基酸取代。例如，天冬氨酸取代天冬酰胺，或天冬酰胺取代赖氨酸，涉及相同组但不同亚组内的氨基酸。“非保守突变”涉及不同组之间的氨基酸取代，例如赖氨酸取代色氨酸，或苯丙氨酸取代丝氨酸等。
此外，可以将一个或多个氨基酸插入到上述免疫球蛋白重链或轻链可变区多肽中。可以将任何数量的任何合适的氨基酸插入免疫球蛋白重链或轻链可变区多肽的氨基酸序列中。在这方面，可以将至少一个氨基酸(例如2个或更多个、5个或更多个、或10个或更多个氨基酸)，但不超过20个氨基酸(例如18个或更少个、15个或更少个、或12个或更少个氨基酸)插入免疫球蛋白重链或轻链可变区多肽的氨基酸序列中。优选地，将1-10个氨基酸(例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸)插入免疫球蛋白重链或轻链可变区多肽的氨基酸序列中。在这方面，可以将氨基酸在任何合适的位置插入上述免疫球蛋白重链或轻链可变区多肽的任何一个中。在一些实施方案中，将氨基酸插入免疫球蛋白重链或轻链可变区多肽的CDR(例如CDR1、CDR2或CDR3)中；在其它实施方案中，将氨基酸插入框架区中。
还提供了与具有本文具体提供的免疫球蛋白重链和轻链可变区的PD-L1结合剂(例如，抗体或抗体片段)(例如，本文提供的结合剂1-21之一)竞争的PD-L1结合剂(例如，抗体或抗体片段)。
PD-L1结合剂的“生物活性”是指例如对PD-L1或特定的PD-L1表位的结合亲和力、对PD-L1蛋白与PD-1结合的中和或抑制、对PD-L1蛋白在体内活性(例如，IC50)的中和或抑制、药代动力学和交叉反应性(例如，与PD-L1蛋白的非人同源物或直向同源物，或与其它蛋白或组织)。本领域公认的抗原结合剂的其它生物学性质或特征包括例如亲合力、选择性、溶解性、折叠、免疫毒性、表达和剂型。上述性质或特征可以使用标准技术观察、测量和/或评估，所述标准技术包括但不限于ELISA、竞争性ELISA、表面等离子体共振分析(BIACORETM)或KINEXATM、体外或体内中和测定、受体-配体结合测定、细胞因子或生长因子产生和/或分泌测定以及信号转导和免疫组织化学测定。
如本文所用，关于PD-L1结合剂的活性的术语“抑制”或“中和”是指基本上拮抗、阻止、预防、抑制、减缓、破坏、改变、消除、终止或逆转例如PD-L1蛋白的生物学活性或与PD-L1蛋白相关的疾病或病况的进展或严重程度的能力。本发明的分离的PD-L1结合剂优选地将PD-L1蛋白的活性抑制或中和至少约5％、约10％、约15％、约20％、约30％、约40％、约50％、约60％、约70％、约80％、约90％、约95％、约100％、或由前述值中的任意两个限定的范围。
在一些实施方案中，PD-L1结合剂(例如，抗体或抗体片段)表现出抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)。ADCC是细胞介导的免疫防御的机制，其中免疫系统的效应细胞裂解其膜表面抗原已被特异性抗体结合的靶细胞。ADCC与免疫补体系统无关，免疫补体系统也裂解靶标但不需要任何其它细胞，并且是适应性免疫应答的一部分。
在一些实施方案中，PD-L1结合剂(例如，抗体或抗体片段)表现出抗体依赖性细胞介导的吞噬作用(ADCP)。ADCP是一种细胞过程，通过该过程，具有吞噬潜能的效应细胞(例如单核细胞和巨噬细胞)可以内化靶细胞。一旦被吞噬，靶细胞位于吞噬体中，所述吞噬体与溶酶体融合以通过氧依赖性或独立机制开始降解靶细胞。这种功能依赖于调理作用或结合剂对靶细胞的鉴定，所述结合剂也充当靶细胞和吞噬细胞之间的桥梁。在机理上，结合剂通过其抗原识别结构域结合靶细胞上的其同源抗原，然后利用其Fc区将吞噬细胞募集至靶标。一旦与吞噬细胞的Fc受体结合，就摄取并降解靶细胞。该过程还导致效应细胞产生可溶性因子，其有助于启动和驱动免疫应答。
在一些实施方案中，PD-L1结合剂(例如抗体或抗体片段)表现出补体依赖性细胞毒性。CDC是IgG和IgM抗体的效应子功能。当结合剂与表面抗原结合时，触发经典补体途径，导致膜攻击复合物(MAC)的形成和靶细胞裂解。
在一些实施方案中，包含Fc区的结合剂在Fc区中含有一个或多个修饰(例如，氨基酸插入、缺失和/或取代)，其导致与具有缺乏突变的天然Fc区的结合剂或抗体相比，与一种或多种Fc受体(例如，FcγRI(CD64)、FcγRIIA(CD32A)、FcγRIIB(CD32B)、FcγRIIIA(CD16a)和/或FcγRIIIB(CD16b))的调节的结合(例如，增加的结合或减少的结合)。在一些实施方案中，结合剂在Fc区中含有一个或多个修饰(例如，氨基酸插入、缺失和/或取代)，其降低Fc区与FcγRIIB的结合。在一些实施方案中，结合剂在抗体的Fc区中含有一个或多个修饰(例如，氨基酸插入、缺失和/或取代)，与具有缺乏突变的天然Fc区的结合剂或抗体相比，所述修饰减少与FcγRIIB的结合，同时维持与FcγRI(CD64)、FcγRIIA(CD32A)和/或FcγIIIA(CD16a)的相同结合或增加的结合。在一些实施方案中，结合剂在Fc区中含有一个或多个修饰，其增加Fc区与FcγRIIB的结合。在一些实施方案中，所述修饰基本上减少或消除了抗体效应子功能。
Fc区突变可以在CH2结构域，CH3结构域或其组合中。“天然Fc区”与“野生型Fc区”同义，并包含与自然界中发现的Fc区的氨基酸序列相同或与天然抗体中发现的Fc区的氨基酸序列相同的氨基酸序列。天然序列人Fc区包括天然序列人IgG1 Fc区，天然序列人IgG2Fc区，天然序列人IgG3 Fc区和天然序列人IgG4 Fc区，及其天然存在的变体。天然序列Fc包括Fc的各种同种型(参见，例如，Jefferis等人，mAbs，1(4)：332-338(2009))。
在一些实施方案中，导致与一种或多种Fc受体调节结合的Fc区中的突变可包括一个或多个以下突变：SD(S239D)、SDIE(S239D/I332E)、SE(S267E)、SELF(S267E/L328F)、SDIE(S239D/I332E)、SDIEAL(S239D/I332E/A330L)、GA(G236A)、ALIE(A330L/I332E)、GASDALIE(G236A/S239D/A330L/I332E)、V9(G237D/P238D/P271G/A330R)，和/或在以下氨基酸处的一个或多个突变：E345R、E233、G237、P238、H268、P271、L328和A330。用于调节Fc受体结合的另外的Fc区修饰描述在例如美国专利申请公开2016/0145350和美国专利7,416,726和5,624,821中，其通过引用全文并入本文。
在一些实施方案中，结合剂的Fc区被修饰成与天然未修饰的Fc区相比具有改变的Fc区糖基化模式。
人免疫球蛋白在每条重链的Cγ2结构域中的Asn297残基处糖基化。这种N-连接的寡糖由核心七糖N-乙酰葡糖胺4甘露糖3(GlcNAc4Man3)组成。已知用内切糖苷酶或PNGaseF去除七糖会导致Fc区中的构象变化，这可显著降低对活化FcγR的结合亲和力并导致效应子功能降低。核心七糖通常用半乳糖，等分GlcNAc，岩藻糖或唾液酸修饰，这不同地影响Fc与活化和抑制FcγR的结合。另外，已经证明α2，6-唾液酸化增强体内抗炎活性，而去岩藻糖基化导致改善的FcγRIIIa结合和抗体-依赖性细胞毒性和抗体-依赖性吞噬作用的10倍增加。因此，特异性糖基化模式可用于控制炎性效应子功能。
在一些实施方案中，改变糖基化模式的修饰是突变。例如，在Asn297处进行取代。在一些实施方案中，Asn297突变为谷氨酰胺(N297Q)。用于用调节FcγR调节的信号传导的抗体控制免疫应答的方法描述于例如美国专利7,416,726和美国专利申请公开2007/0014795和2008/0286819中，其在此通过引用全文并入本文中。
在一些实施方案中，结合剂被修饰以包含具有非天然存在的糖基化模式的工程化Fab区。例如，可以对杂交瘤进行基因工程改造，以分泌具有能够增强FcRγIIIa结合和效应子功能的特定突变的无岩藻糖基化的mAb，去唾液酸化的mAb或去糖基化的Fc。在一些实施方案中，结合剂被工程改造为无岩藻糖基化的。
在一些实施方案中，整个Fc区与不同的Fc区交换，使得Fab区与非天然Fc区缀合。例如，通常包含IgG1 Fc区的阿特珠单抗的Fab区可以与IgG2、IgG3、IgG4或IgA缀合，或者通常包含IgG4 Fc区的纳武单抗的Fab区可以与IgG1、IgG2、IgG3、IgA1或IgG2缀合。在一些实施方案中，具有非天然Fc结构域的Fc修饰的结合剂还包含一个或多个另外的氨基酸修饰，例如IgG4 Fc内的S228P突变，其调节所述Fc结构域的稳定性。在一些实施方案中，具有非天然Fc结构域的Fc修饰的结合剂还包含本文所述的一个或多个调节Fc与FcR结合的氨基酸修饰。
在一些实施方案中，与未修饰的Fab相比，调节Fc区与FcR结合的修饰不改变Fab区与其抗原的结合。在其它实施方案中，与未修饰的Fab相比，调节Fc区与FcR结合的修饰也增加了Fab区与其抗原的结合。
在一些实施方案中，Fc区通过附着或包含能够结合TGFβ1的转化生长因子β1(TGFβ1)受体或其片段而被修饰。例如，该受体可以是TGFβ受体II(TGFβRII)(参见美国专利9,676,863，其全文并入本文)。在一些实施方案中，TGFβ受体是人TGFβ受体。在一些实施方案中，Fc区(例如，IgG)具有与TGFβ受体(例如，TGFβRII)胞外结构域(ECD；例如，美国专利9,676,863的SEQ ID NO：9的氨基酸24-159)的C末端融合。“Fc接头”可用于将IgG连接到TGFβR胞外结构域，例如G4S4G Fc接头。Fc接头可以是短的、柔性肽，其允许分子的适当的三维折叠，同时维持与靶标的结合特异性。在一些实施方案中，TGFβ受体的N-末端融合至Fc区(具有或不具有Fc接头)。在一些实施方案中，免疫球蛋白重链的C-末端与TGFβ受体(具有或不具有Fc接头)融合。在一些实施方案中，抗体重链的C-末端赖氨酸残基突变为丙氨酸。在一些实施方案中，抗体包括SEQ ID NO：166。
PD-L1结合剂可对PD-L1蛋白或其表位具有任何合适的亲和力。术语“亲和力”是指两种试剂可逆结合的平衡常数，并且表示为解离常数(KD)。结合剂对配体的亲和力，例如抗体对表位的亲和力，可以是例如约1皮摩尔(pM)至约100微摩尔(μM)(例如约1皮摩尔(pM)至约1纳摩尔(nM)、约1nM至约1微摩尔(μM)或约1μM至约100μM)。在一个实施方案中，PD-L1结合剂可以以小于或等于1纳摩尔(例如，0.9nM、0.8nM、0.7nM、0.6nM、0.5nM、0.4nM、0.3nM、0.2nM、0.1nM、0.05nM、0.025nM、0.01nM、0.001nM或由前述值中的任意两个限定的范围)的KD与PD-L1蛋白结合。在另一个实施方案中，PD-L1结合剂可以以小于或等于200pM(例如190pM、175pM、150pM、125pM、110pM、100pM、90pM、80pM、75pM、60pM、50pM、40pM、30pM、25pM、20pM、15pM、10pM、5pM、1pM或由前述值中的任意两个限定的范围)的KD与PD-L1结合。可使用任何本领域公认的测定来测量对目的抗原或表位的免疫球蛋白亲和力。这样的方法包括例如荧光活化细胞分选(FACS)、可分离珠(例如磁珠)、表面等离子体共振(SPR)、溶液相竞争(KINEXATM)、抗原淘选和/或ELISA(参见Janeway等人，(编辑)，Immunobiology，第9版，Garland Publishing，New York，NY(2017))。
核酸
本发明还提供了编码PD-L1结合剂的免疫球蛋白重链多肽和/或免疫球蛋白轻链多肽的核酸。
术语“核酸序列”旨在包括DNA或RNA的聚合物，即多核苷酸，其可以是单链或双链的并且可以含有非天然的或改变的核苷酸。本文所用的术语“核酸”和“多核苷酸”是指任何长度的核苷酸的聚合形式，核糖核苷酸(RNA)或脱氧核糖核苷酸(DNA)。这些术语是指分子的一级结构，因此包括双链和单链DNA，以及双链和单链RNA。该术语包括，作为等同物的由核苷酸类似物制备的RNA或DNA的类似物以及修饰的多核苷酸，例如但不限于甲基化和/或加帽的多核苷酸。核酸通常通过磷酸键连接以形成核酸序列或多核苷酸，尽管本领域已知许多其它连接(例如硫代磷酸酯，硼烷磷酸酯(boranophosphate)等)。
核酸可以是载体的一部分。因此，还提供了包含一种或多种编码PD-L1结合剂的免疫球蛋白重链多肽，免疫球蛋白轻链多肽或两者的核酸序列的载体。可以使用任何类型的载体，特别是用于在细胞中表达多肽的表达载体。载体可以是例如质粒、附加体、粘粒、病毒载体(例如逆转录病毒或腺病毒)或噬菌体。合适的载体和载体制备方法是本领域熟知的(参见例如Sambrook等人，Molecular Cloning，a Laboratory Manual，第3版，Cold SpringHarbor Press，Cold Spring Harbor，N.Y.(2001)，以及Ausubel等人，Current Protocolsin Molecular Biology，Greene Publishing Associates and John Wiley&Sons，NewYork，N.Y.(1994))。
载体优选包含表达控制序列，例如启动子、增强子、聚腺苷酸化信号、转录终止子、内部核糖体进入位点(IRES)等，其提供编码序列在宿主细胞中的表达。示例性的表达控制序列是本领域已知的，并且描述于例如Goeddel，Gene Expression Technology：Methodsin Enzymology，Vol.185，Academic Press，San Diego，Calif.(1990)中。
来自各种不同来源的大量启动子，包括组成型启动子，诱导型启动子和阻抑型启动子在本领域中是众所周知的。启动子的代表性来源包括例如病毒、哺乳动物、昆虫、植物、酵母和细菌，并且来自这些来源的合适的启动子是容易获得的，或者可以基于例如从保藏中心如美国典型培养物保藏中心(ATCC)以及其它商业或单独来源可公开获得的序列合成制备。启动子可以是单向的(即，在一个方向上启动转录)或双向的(即，在3’或5’方向上启动转录)。启动子的非限制性实例包括例如T7细菌表达系统、pBAD(araA)细菌表达系统、巨细胞病毒(CMV)启动子、SV40启动子、RSV启动子。诱导型启动子包括，例如，Tet系统(美国专利5,464,758和5,814,618)、蜕皮激素诱导型系统(No等人，Proc.Natl.Acad.Sci.，93：3346-3351(1996))、T-REXTM系统(Invitrogen，Carlsbad，CA)、LACSWITCHTM系统(Stratagene，San Diego，CA)和Cre-ERT他莫昔芬诱导型重组酶系统(Indra等人，Nuc.Acid.Res.，27：4324-4327(1999)；Nuc.Acid.Res.，28：e99(2000)；美国专利7,112,715；以及Kramer&Fussenegger，Methods Mol.Biol.，308：123-144(2005))。
本文所用的术语“增强子”是指增加例如与其可操作连接的核酸序列的转录的DNA序列。增强子可以位于离核酸序列编码区许多个千碱基的位置处，并且可以介导调节因子的结合、DNA甲基化的模式或DNA结构的变化。来自各种不同来源的大量增强子是本领域熟知的，并且可作为克隆的多核苷酸或在克隆的多核苷酸内获得(来自例如保藏中心，如ATCC以及其它商业或单独来源)。包含启动子(例如常用的CMV启动子)的多种多核苷酸也包含增强子序列。增强子可以位于编码序列的上游、内部或下游。
载体还可以包含“选择标记基因”。本文所用的术语“选择标记基因”是指允许在相应的选择性试剂存在下特异性选择表达核酸序列的细胞的核酸序列。合适的选择标记基因是本领域已知的，并且描述于例如国际专利申请公开WO 1992/008796和WO 1994/028143；Wigler等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，77：3567-3570(1980)；O’Hare等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，78：1527-1531(1981)；Mulligan&Berg，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，78：2072-2076(1981)；Colberre-Garapin等人，J.Mol.Biol.，150：1-14(1981)；Santerre等人，Gene，30：147-156(1984)；Kent等人，Science，237：901-903(1987)；Wigler等人，Cell，11：223-232(1977)；Szybalska&Szybalski，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，48：2026-2034(1962)；Lowy等人，Cell，22：817-823(1980)；以及美国专利5,122,464和5,770,359中。
在一些实施方案中，载体是“附加型表达载体”或“附加体”，其能够在宿主细胞中复制，并且在适当的选择压力存在下作为DNA的染色体外区段持续存在于宿主细胞中(参见例如Conese等人，Gene Therapy，11：1735-1742(2004))。代表性的市售附加型表达载体包括但不限于利用EB病毒核抗原(EBNA1)和EB病毒复制起点(oriP)的附加型质粒。来自Invitrogen(Carlsbad，CA)的载体pREP4、pCEP4、pREP7和pcDNA3.1以及来自Stratagene(LaJolla，CA)的pBK-CMV代表了使用T-抗原和SV40复制起点来代替EBNA1和oriP的附加型载体的非限制性实例。
其它合适的载体包括整合型表达载体，其可以随机整合到宿主细胞的DNA中，或者可以包括重组位点以使得能够在表达载体和宿主细胞的染色体之间进行特异性重组。这种整合型表达载体可以利用宿主细胞染色体的内源表达控制序列来实现所需蛋白的表达。以位点特异性方式整合的载体的实例包括，例如，来自Invitrogen(Carlsbad，CA)的flp-in系统(例如，pcDNATM5/FRT)或cre-lox系统的组分，例如可以在来自Stratagene(La Jolla，CA)的pExchange-6核心载体中找到的。随机整合到宿主细胞染色体中的载体的实例包括，例如，来自Invitrogen(Carlsbad，CA)的pcDNA3.1(当在不存在T-抗原的情况下引入时)、来自Millipore(Billerica，MA)的UCOE和来自Promega(Madison，WI)的pCI或pFN10A(ACT)FLEXITM。
也可以使用病毒载体。代表性的市售病毒表达载体包括但不限于可得自Crucell，Inc.(Leiden，The Netherlands)的基于腺病毒的Per.C6系统、来自Invitrogen(Carlsbad，CA)的基于慢病毒的pLP1和来自Stratagene(La Jolla，CA)的逆转录病毒载体pFB-ERV加上pCFB-EGSH。
细胞
可以将编码重链和轻链免疫球蛋白序列的核酸序列在相同的载体上(即，顺式)提供给细胞。单向启动子可用于控制每种核酸序列的表达。在另一个实施方案中，双向和单向启动子的组合可用于控制多种核酸序列的表达。可替代地，编码本发明的氨基酸序列的核酸序列可以在分别的载体上(即，反式)提供给细胞群。每种分别的载体中的每种核酸序列可以包含相同或不同的表达控制序列。分别的载体可以同时或顺序提供给细胞。
可以将包含编码本发明氨基酸序列的核酸的载体引入能够表达由其编码的多肽的宿主细胞，包括任何合适的原核细胞或真核细胞。因此，本发明提供了包含表达免疫球蛋白重链和轻链多肽的本发明载体的体外(分离的)细胞或细胞系。优选的宿主细胞是那些可以容易且可靠地生长，具有合理的快速生长速率，具有良好表征的表达系统，并且可以容易且有效地转化或转染的宿主细胞。
合适的原核细胞的实例包括但不限于来自芽孢杆菌属(如枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)和短芽孢杆菌(Bacillus brevis))、埃希氏菌属(如大肠埃希氏菌)、假单胞菌属、链霉菌属、沙门氏菌属和欧文氏菌属的细胞。特别有用的原核细胞包括各种大肠埃希氏菌菌株(例如K12、HB101(ATCC编号33694)、DH5α、DH10、MC1061(ATCC编号53338)和CC102)。
优选地，将载体引入真核细胞。合适的真核细胞是本领域已知的，并且包括例如酵母细胞、昆虫细胞和哺乳动物细胞。合适的酵母细胞的实例包括来自克鲁维酵母属(Kluyveromyces)、毕赤酵母属(Pichia)、鼻孢子虫属(Rhino-sporidium)、酵母属(Saccharomyces)和裂殖酵母属(Schizosaccharomyces)的那些。优选的酵母细胞包括，例如，酿酒酵母(Saccharomyces cerivisae)和巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)。
合适的昆虫细胞描述于例如Kitts等人，Biotechniques，14：810-817(1993)；Lucklow，Curr.Opin.Biotechnol.，4：564-572(1993)；以及Lucklow等人，J.Virol.，67：4566-4579(1993)。优选的昆虫细胞包括Sf-9和HI5(Invitrogen，Carlsbad，CA)。
优选地，哺乳动物细胞用于本发明。许多合适的哺乳动物宿主细胞是本领域已知的，并且许多可从ATCC获得。合适的哺乳动物细胞的实例包括但不限于中国仓鼠卵巢细胞(CHO)，例如CHO-K1细胞(ATCC编号CCL61)、CHO DHFR-细胞(Urlaub等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，97：4216-4220(1980))、人胚肾细胞(HEK)293或293T细胞(ATCC编号CRL1573)、JIMT-1和3T3细胞(ATCC编号CCL92)。其它合适的哺乳动物细胞系是猴COS-1(ATCC编号CRL1650)和COS-7细胞系(ATCC编号CRL1651)以及CV-1细胞系(ATCC编号CCL70)。其它示例性哺乳动物宿主细胞包括灵长类动物细胞系和啮齿类动物细胞系，包括转化的细胞系。正常二倍体细胞，来源于原代组织的体外培养物的细胞株以及原代外植体也是合适的。其它合适的哺乳动物细胞系包括但不限于小鼠成神经细胞瘤N2A细胞、HeLa、小鼠L-929细胞以及BHK或HaK仓鼠细胞系，所有这些细胞系均可从ATCC获得。选择合适的哺乳动物宿主细胞的方法以及转化、培养、扩增、筛查和纯化细胞的方法是本领域已知的。
哺乳动物细胞可以是人细胞。例如，哺乳动物细胞可以是人淋巴样细胞或淋巴样细胞来源的细胞系，例如前B淋巴细胞来源的细胞系。人淋巴样细胞系的实例包括但不限于RAMOS(CRL-1596)、Daudi(CCL-213)、EB-3(CCL-85)、DT40(CRL-2111)、18-81(Jack等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，85：1581-1585(1988))、Raji细胞(CCL-86)及以上的衍生物。
可通过“转染”、“转化”或“转导”将编码本发明氨基酸序列的核酸序列引入细胞中。如本文所用，“转染”、“转化”或“转导”是指通过使用物理或化学方法将一种或多种外源多核苷酸引入宿主细胞中。多种转染技术是本领域已知的并且包括例如磷酸钙DNA共沉淀(参见例如MurrayE.J.(编辑)，Methods in Molecular Biology，Vol.7，Gene Transferand Expression Protocols，Humana Press(1991))；DEAE-葡聚糖；电穿孔；阳离子脂质体介导的转染；钨颗粒促进的微粒轰击(Johnston，Nature，346：776-777(1990))；和磷酸锶DNA共沉淀(Brash等人，Mol.Cell Biol.，7：2031-2034(1987))。可以在感染性颗粒在合适的包装细胞(其中的多种是可商购的)中生长后，将噬菌体或病毒载体引入宿主细胞。
组合物
本发明提供了包含PD-L1结合剂或编码PD-L1结合剂的核酸(其任选地在载体中)的组合物。优选地，组合物是药学上可接受的(例如生理学上可接受的)组合物，其包含载体，优选药学上可接受的(例如生理学上可接受的)载体，以及PD-L1结合剂或编码PD-L1结合剂的核酸。在本发明的上下文中可以使用任何合适的载体，并且这种载体在本领域中是公知的。载体的选择将部分地由可施用组合物的特定部位和用于施用组合物的特定方法决定。所述组合物任选地可以是无菌的。所述组合物可以冷冻或冻干储存，并在使用前在合适的无菌载体中重构。所述组合物可根据例如Remington：The Science and Practice ofPharmacy，第21版，Lippincott Williams&Wilkins，Philadelphia，PA(2001)中描述的常规技术来产生。
所述组合物可以配制用于肠胃外施用，例如IV施用或施用到体腔或器官的内腔中。或者，组合物可以肿瘤内注射。用于注射的组合物通常包含溶解或悬浮在药学上可接受的载体中的活性成分。可以使用的可接受的媒介物和溶剂是水和一种或多种盐的等渗溶液，例如氯化钠，例如林格氏溶液。此外，无菌不挥发性油可以常规地用作溶剂或悬浮介质。为此目的，可以使用任何温和的不挥发性油，包括合成的甘油单酯或甘油二酯。此外，脂肪酸如油酸同样可用于注射剂的制备。期望的是，这些组合物是无菌的并且通常没有不希望的物质。这些组合物可以通过常规的，熟知的灭菌技术进行灭菌。组合物可以含有近似生理条件所需的药学上可接受的辅助物质，例如pH调节剂和缓冲剂，毒性调节剂，例如乙酸钠，氯化钠，氯化钾，氯化钙，乳酸钠等。
所述组合物可以含有任何合适浓度的PD-L1结合剂或编码PD-L1结合剂的核酸，其任选地在载体中，在一些实施方案中，含有有效引起治疗反应的浓度。浓度可以广泛变化，并且将主要基于流体体积，粘度，体重等，根据所选择的具体施用模式和患者的需要来选择。在某些实施方案中，注射用溶液制剂中的本发明的免疫球蛋白重链多肽，本发明的免疫球蛋白轻链多肽，本发明的PD-L1结合剂，本发明的编码上述任一种的核酸序列，或包含本发明的核酸序列的本发明载体的浓度范围为约0.1％(w/w)至约10％(w/w)。
方法
本文提供的PD-L1结合剂可用于任何合适的目的。例如，PD-L1结合剂可靶向表达PD-L1的细胞，并用于向这些细胞递送有效载荷。有效载荷可以是期望递送至细胞的任何试剂(例如，治疗剂、诊断/成像剂等)。因此，本公开的一个方面提供了将有效载荷递送至表达PD-L1的细胞的方法，所述方法包括向所述细胞或包含所述细胞的哺乳动物施用缀合至所述有效载荷的本文提供的PD-L1结合剂。
本文提供了增强哺乳动物中的免疫应答的方法，其包括向哺乳动物施用单独的或缀合至适合增加免疫应答的适当药物或其它试剂的PD-L1结合剂，或包含它们的组合物，如本文所述。免疫应答可以是对任何类型的抗原的免疫应答，用于其中期望增强对抗原的免疫应答的任何应用。在一些实施方案中，抗原可以是传染原或病原体(例如，病毒或细菌)或癌症抗原(例如，细胞中的内源性癌症抗原和肽疫苗或新抗原)。
在另一个实施方案中，提供了降低(例如，抑制)哺乳动物中的免疫应答的方法，其包括向哺乳动物施用单独的或缀合至适合降低免疫应答的适当药物或其它试剂的PD-L1结合剂，或包含它们的组合物，如本文所述。免疫应答可以是例如自身免疫应答。
在这方面，本发明还提供了通过向哺乳动物施用如本文所述的PD-L1结合剂或包含PD-L1结合剂的组合物来治疗哺乳动物中对PD-L1抑制有响应的疾病、病况或病症的方法。在一些实施方案中，所述疾病或病症的特征在于PD-L1蛋白的不适当的表达(例如，过表达)或增加的活性，其引起或促成所述疾病的病理作用，使得PD-L1蛋白水平或活性的降低在哺乳动物优选人类中具有治疗益处。
如本文所用，术语“治疗(treat)”、“治疗(treatment)”和“治疗(treating)”是指成功治疗或改善损伤、病理、病况(例如癌症、感染或自身免疫性病症)或症状(例如，认知损害)的任何标记，包括任何客观或主观参数，如消除、缓解、减轻症状或者使症状、损伤、病理或病况对患者更耐受；降低症状进展率；降低症状或病况的频率或持续时间；或者，在一些情况下，预防症状的发作。症状的治疗或改善可以基于任何客观或主观参数，包括例如身体检查的结果。
术语“癌症”、“赘生物”和“肿瘤”在本文用于指表现出自主的不受调节的生长的细胞，使得所述细胞表现出特征在于对细胞增殖的控制显著丧失的异常生长表型。在本发明的上下文中，用于检测、分析和/或治疗的目的细胞包括癌细胞(例如，来自患有癌症的个体的癌细胞)、恶性癌细胞、转移前癌细胞、转移性癌细胞和非转移性癌细胞。几乎每种组织的癌症都是已知的。短语“癌症负担”是指对象中癌细胞的量或癌症体积。因此，减少癌症负担是指减少对象中的癌细胞数目或癌细胞体积。本文使用的术语“癌细胞”是指任何细胞，其是癌细胞(例如，来自可以被治疗的个体的任何癌症，例如，分离自患有癌症的个体)或来源于癌细胞(例如，癌细胞的克隆)。例如，癌细胞可以来自已建立的癌细胞系，可以是分离自患有癌症的个体的原代细胞，可以是分离自患有癌症的个体的原代细胞的后代细胞等。在一些实施方案中，该术语还可以指癌细胞的一部分，如癌细胞的亚细胞部分、细胞膜部分或细胞裂解物。许多类型的癌症是本领域技术人员已知的，包括实体瘤，如癌、肉瘤、成胶质细胞瘤、黑色素瘤、淋巴瘤和骨髓瘤，以及循环癌症如白血病。
如本文所用，术语“癌症”包括任何形式的癌症，包括但不限于实体瘤癌症(例如，皮肤癌、肺癌、前列腺癌、乳腺癌、胃癌、膀胱癌、结肠癌、卵巢癌、胰腺癌、肾癌、肝癌、成胶质细胞瘤、成神经管细胞瘤、平滑肌肉瘤、头颈鳞状细胞癌、黑色素瘤和神经内分泌癌)和液体癌症(例如，血液癌症)；癌；软组织肿瘤；肉瘤；畸胎瘤；黑色素瘤；白血病；淋巴瘤；以及脑癌，包括微小残留病，并且包括原发性和转移性肿瘤。
任何表达或过表达PD-L1的癌症是通过本发明的方法和组合物治疗的合适的癌症。如本文所用，“PD-L1表达”是指在细胞表面上具有PD-L1受体的细胞。如本文所用，“PD-L1过表达”是指与相同类型的相应非癌细胞相比具有更多PD-L1受体的细胞。
癌是源自上皮组织的恶性肿瘤。上皮细胞覆盖身体的外表面，排列在内腔，并形成腺组织的内衬。癌的实例包括但不限于腺癌(在腺(分泌)细胞中开始的癌症，如乳腺癌、胰腺癌、肺癌、前列腺癌、胃癌、胃食管结合部癌和结肠癌)；肾上腺皮质癌；肝细胞癌；肾细胞癌；卵巢癌；原位癌；导管癌；乳腺癌；基底细胞癌；鳞状细胞癌(例如，头颈鳞状细胞癌)；移行细胞癌；结肠癌；鼻咽癌；多房囊性肾细胞癌；燕麦细胞癌；大细胞肺癌；小细胞肺癌；非小细胞肺癌；等等。癌可以在前列腺、胰腺、结肠、脑(通常作为继发性转移)、肺、乳房和皮肤中发现。
软组织肿瘤是高度多样化群组的来源于结缔组织的罕见肿瘤。软组织肿瘤的实例包括但不限于腺泡状软组织肉瘤；血管瘤样纤维组织细胞瘤；软骨粘液样纤维瘤；骨骼软骨肉瘤；骨外粘液样软骨肉瘤；透明细胞肉瘤；促结缔组织增生性小圆细胞肿瘤；隆突性皮肤纤维肉瘤；子宫内膜间质肿瘤；尤因氏肉瘤(Ewing’s sarcoma)；纤维瘤病(硬纤维瘤)；婴儿纤维肉瘤；胃肠道间质瘤；骨巨细胞瘤；腱鞘巨细胞瘤；炎性肌纤维母细胞瘤；子宫平滑肌瘤；平滑肌肉瘤；成脂细胞瘤；典型的脂肪瘤；梭形细胞或多形性脂肪瘤；非典型脂肪瘤；软骨样脂肪瘤；分化良好的脂肪肉瘤；粘液样/圆细胞脂肪肉瘤；多形性脂肪肉瘤；粘液样恶性纤维组织细胞瘤；高级恶性纤维组织细胞瘤；粘液纤维肉瘤；恶性外周神经鞘膜瘤；间皮瘤；神经母细胞瘤；骨软骨瘤；骨肉瘤；原始神经外胚层肿瘤；腺泡状横纹肌肉瘤；胚胎性横纹肌肉瘤；良性或恶性神经鞘瘤；滑膜肉瘤；埃文氏肿瘤(Evan’s tumor)；结节性筋膜炎；韧带样型纤维瘤病；孤立性纤维瘤；隆突性皮肤纤维肉瘤(DFSP)；血管肉瘤；上皮样血管内皮瘤；腱鞘巨细胞瘤(TGCT)；色素沉着绒毛结节性滑膜炎(PVNS)；纤维性发育不良；粘液纤维肉瘤；纤维肉瘤；滑膜肉瘤；恶性外周神经鞘膜瘤；神经纤维瘤；软组织的多形性腺瘤；和来源于成纤维细胞、肌成纤维细胞、组织细胞、血管细胞/内皮细胞和神经鞘细胞的瘤形成。
肉瘤是一种罕见类型的癌症，其在间充质来源的细胞中，例如在骨骼或身体的软组织(包括软骨、脂肪、肌肉、血管、纤维组织或者其它结缔组织或支持组织)中出现。不同类型的肉瘤基于癌症形成的位置。例如，骨肉瘤在骨中形成，脂肪肉瘤在脂肪中形成，以及横纹肌肉瘤在肌肉中形成。肉瘤的实例包括但不限于askin肿瘤；葡萄状肉瘤；软骨肉瘤；尤因氏肉瘤；恶性血管内皮瘤；恶性神经鞘瘤；骨肉瘤；和软组织肉瘤(例如腺泡状软组织肉瘤；血管肉瘤；隆突性皮肤纤维肉瘤(DFSP)；韧带样瘤；促纤维增生性小圆细胞肿瘤；上皮样肉瘤；骨外软骨肉瘤；骨外骨肉瘤；纤维肉瘤；胃肠道间质瘤(GIST)；血管外皮细胞瘤；血管肉瘤(更通常地称为“血管肉瘤”)；卡波西肉瘤；平滑肌肉瘤；脂肪肉瘤；淋巴管肉瘤；恶性周围神经鞘膜瘤(MPNST)；神经纤维肉瘤；滑膜肉瘤；以及未分化的多形性肉瘤)。
畸胎瘤是一种类型的生殖细胞肿瘤，其可以含有几种不同类型的组织(例如，可以包括来源于三个胚层(内胚层、中胚层和外胚层)中的任一个和/或全部的组织，包括例如毛发、肌肉和骨骼。畸胎瘤最常发生在女性的卵巢、男性的睾丸和儿童的尾椎骨中。
黑色素瘤是一种始于黑色素细胞(产生色素黑色素的细胞)的癌症形式。黑色素瘤可能始于痣(皮肤黑色素瘤)，但也可能始于其它有着色组织，如眼睛或肠。
Merkel细胞癌是一种罕见类型的皮肤癌，其通常表现为肉色或蓝红色结节。它经常出现在面部、头部或颈部。Merkel细胞癌也称为皮肤神经内分泌癌。在一些实施方案中，当施用发生时，Merkel细胞癌已经转移。
白血病是在诸如骨髓的造血组织中开始，导致大量异常血细胞产生并进入血流的癌症。例如，白血病可以起源于在血流中正常成熟的骨髓来源的细胞。白血病以疾病发展和进展的速度(例如，急性对比慢性)以及受影响的白细胞类型(例如，骨髓的对比淋巴的)而命名。骨髓性白血病也称为髓系或成髓细胞性白血病。淋巴白血病也称为淋巴母细胞或淋巴细胞性白血病。淋巴白血病细胞可以聚集在淋巴结中，其可变得肿胀。白血病的实例包括但不限于急性骨髓性白血病(AML)、急性淋巴细胞白血病(ALL)、慢性骨髓性白血病(CML)和慢性淋巴细胞白血病(CLL)。
淋巴瘤是始于免疫系统的细胞的癌症。例如，淋巴瘤可以起源于在淋巴系统中正常成熟的骨髓来源的细胞。有两种基本类别的淋巴瘤。一种类别的淋巴瘤是霍奇金淋巴瘤(HL)，其特征是存在一类称为Reed-Steinberg细胞的细胞。目前有6种公认的HL类型。霍奇金淋巴瘤的实例包括结节硬化型经典霍奇金淋巴瘤(CHL)、混合细胞型CHL、淋巴细胞减少型(lymphocyte-depletion)CHL、富含淋巴细胞的CHL和结节性淋巴细胞占优势的HL。
另一种类别的淋巴瘤是非霍奇金淋巴瘤(NHL)，其包括免疫系统细胞的大的不同群组的癌症。非霍奇金淋巴瘤可以被进一步分成具有惰性(缓慢生长)过程的癌症和具有侵略性(快速生长)过程的癌症。目前有61种公认的NHL类型。非霍奇金淋巴瘤的实例包括但不限于AIDS相关淋巴瘤、间变性大细胞淋巴瘤、血管免疫母细胞淋巴瘤、母细胞NK细胞淋巴瘤、伯基特淋巴瘤、伯基特样淋巴瘤(小无裂细胞淋巴瘤)、慢性淋巴细胞白血病/小淋巴细胞淋巴瘤、皮肤T细胞淋巴瘤、弥漫性大B细胞淋巴瘤、肠病型T细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、肝脾γ-δT细胞淋巴瘤、T细胞白血病、淋巴母细胞淋巴瘤、套细胞淋巴瘤、边缘区淋巴瘤、鼻T细胞淋巴瘤、儿科淋巴瘤、外周T细胞淋巴瘤、原发性中枢神经系统淋巴瘤、转化型淋巴瘤、治疗相关的T细胞淋巴瘤和瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症。
脑癌包括脑组织的任何癌症。脑癌的实例包括但不限于胶质瘤(例如，成胶质细胞瘤、星形细胞瘤、少突神经胶质瘤、室管膜瘤等)、脑膜瘤、垂体腺瘤和前庭神经鞘瘤、原始神经外胚层肿瘤(髓母细胞瘤)。
癌症的“病理学”包括损害患者健康的所有现象。这包括但不限于异常或不可控制的细胞生长、转移，干扰邻近细胞的正常功能，释放异常水平的细胞因子或其它分泌产物，抑制或加重炎症反应或免疫应答，瘤形成，初癌，恶性肿瘤，以及周围或远处组织或器官(如淋巴结)的侵袭。
如本文所用，短语“癌症复发”和“肿瘤复发”及其语法变体是指在癌症诊断之后赘生性细胞或癌细胞的进一步生长。特别地，当癌组织中发生进一步的癌细胞生长时，可能发生复发。类似地，当肿瘤细胞散布到局部或远处的组织和器官中时，发生“肿瘤扩散”，因此，肿瘤扩散涵盖肿瘤转移。在肿瘤生长局部扩散以通过压缩、破坏或预防正常器官功能而损害所涉及组织的功能时，发生“肿瘤侵袭”。
如本文所用，术语“转移”是指癌性肿瘤在不与原始癌性肿瘤的器官直接连接的器官或身体部分中的生长。转移应理解为包括微转移，其是在不与原始癌性肿瘤的器官直接连接的器官或身体部分中存在不可检测的量的癌细胞。转移也可以被定义为过程的几个步骤，如癌细胞离开原始肿瘤部位，以及癌细胞迁移和/或侵入身体的其它部分。
如本文所用，短语“自身免疫病症”是指由身体针对其自身组织或器官产生的反应引起的疾病或病症，或这些病症的共分离或表现或与它们相关的病况。自身免疫疾病或病症的实例包括但不限于关节炎(类风湿性关节炎，例如急性关节炎、慢性类风湿性关节炎、痛风性关节炎、急性痛风性关节炎、慢性炎性关节炎、退行性关节炎、感染性关节炎、莱姆关节炎、增殖性关节炎、银屑病性关节炎、脊椎关节炎和幼年型类风湿性关节炎、骨关节炎、进行性慢性关节炎、变形性关节炎、原发性慢性关节炎、反应性关节炎和强直性脊柱炎)、炎性过度增生性皮肤病、银屑病如斑块状银屑病、点滴状银屑病、脓疱状银屑病和指甲银屑病；皮炎包括接触性皮炎、慢性接触性皮炎、过敏性皮炎、过敏性接触性皮炎、疱疹样皮炎和特应性皮炎；与X连锁高IgM综合征偶联的荨麻疹，诸如慢性过敏性荨麻疹和慢性特发性荨麻疹，包括慢性自身免疫性荨麻疹、多发性肌炎/皮肌炎、幼年型皮肌炎、中毒性表皮坏死松解症、硬皮病(包括系统性硬皮病)、硬化诸如系统性硬化、多发性硬化(MS)，例如MS，伴随脊髓和视觉器官的破裂、原发性进行性MS(APP)和复发-缓解性MS(RRMS)、进行性系统性硬化、动脉粥样硬化(atherosclerosis)、动脉硬化(arteriosclerosis)、多发性硬化和共济失调硬化；炎性肠病(IBD)(例如，克罗恩氏病、自身免疫性胃肠道病症、结肠炎如溃疡性结肠炎、溃疡性结肠炎、显微镜结肠炎、胶原性结肠炎、息肉样结肠炎、nekroziruyuschy小肠结肠炎和透壁性结肠炎，以及自身免疫性炎性肠病)；坏疽性脓皮病、结节性红斑、原发性硬化性胆管炎、巩膜外层炎)、呼吸窘迫综合征，包括成人呼吸窘迫综合征(ARDS)或急性呼吸窘迫综合征、脑膜炎、葡萄膜的全部或部分的炎症、虹膜炎、脉络膜炎、自身免疫性血液病症、类风湿性脊椎炎、突发性听力损失、IgE介导的疾病如过敏反应以及过敏性和特应性鼻炎、脑炎如拉斯穆森脑炎和伴有损伤肢体和/或脑干的脑炎、葡萄膜炎如前葡萄膜炎、急性前葡萄膜炎、肉芽肿性葡萄膜炎、新肉芽肿性葡萄膜炎(negranulomatozny uveitis)、法科抗原性葡萄膜炎(fakoantigenny uveitis)、后葡萄膜炎或自身免疫性葡萄膜炎、伴有肾病综合征或不伴有肾病综合征的肾小球肾炎(GN)，例如慢性或急性肾小球肾炎，例如原发性GN、免疫介导的GN、膜性GN(膜性肾病)、特发性膜性GN或特发性膜性肾病、膜性增生性或膜增生性GN(MPGN)，包括I型和II型glumerulonefrit、以及快速进行性GN、过敏性病况、过敏反应、湿疹，包括过敏性湿疹或特应性湿疹；哮喘，例如支气管哮喘和自身免疫性哮喘；由T细胞浸润和慢性炎症反应引起的病况；慢性炎性肺病、自身免疫性心肌炎，白细胞粘附不足；系统性红斑狼疮(SLE)，例如皮肤SLE或亚急性皮肤SLE、新生儿狼疮综合征(HRV)、播散性红斑狼疮、狼疮(包括肾炎、脑炎、儿童狼疮、非肾性狼疮、肾外狼疮、盘状狼疮、脱发)；幼年型糖尿病(I型)，包括儿童胰岛素依赖型糖尿病(IDDM)、成人糖尿病(II型糖尿病)、自身免疫性糖尿病、特发性尿崩症、与由细胞因子和T淋巴细胞介导的急性超敏反应和迟发型超敏反应相关的免疫应答；结核病、结节病、肉芽肿病，包括淋巴瘤样肉芽肿病、韦格纳肉芽肿病、粒细胞缺乏症；血管炎症包括血管炎(包括血管炎、大血管(包括风湿性多肌痛和巨细胞动脉炎(Takayasu′s))、继发性血管炎(包括川崎病(Kawasaki disease)和结节性多动脉炎)、多动脉炎毛细血管炎、CNS nekroziruyuschy血管炎、皮肤血管炎或与血管炎相关的过敏性nekrozimyuschy全身性血管炎和ANCA相关的血管炎，例如血管炎或Cherga-Strauss综合征(SCHSH)、颞动脉炎、再生障碍性贫血、自身免疫性再生障碍性贫血、阳性贫血、库姆斯病(Coombs)、贫血、Diamond-Blekfana、溶血性贫血或免疫性溶血性贫血，包括自身免疫性溶血性贫血(AIHA)、恶性贫血、阿狄森氏病、纯红细胞贫血或发育不全(PRCA)、因子VIII缺乏、血友病A、自身免疫性中性白细胞减少、全血细胞减少症、白细胞减少症、导致白细胞渗出的疾病、CNS炎性病症、多器官损伤综合征例如继发性综合征、脓毒症的分离(ass ofdissociated with sepsis)、创伤或出血；由复合物形成“抗原-抗体”疾病肾小球基底膜介导的疾病、抗体-抗原的催化反应、抗磷脂综合征、过敏性神经突疾病/贝切特综合征、卡斯尔曼综合征、古德帕斯丘综合征、雷诺综合征、斯耶格伦综合征、史蒂文斯-约翰逊综合征、类天疱疮如类天疱疮大疱和皮肤类天疱疮/天疱疮(包括寻常天疱疮、叶天疱疮、类天疱疮、粘膜类天疱疮、膜性天疱疮和红斑性天疱疮)、utoimmunnaya poliendokrinopatiya病或莱特尔综合征、与免疫复合物相关的肾炎、抗体介导的肾炎、视神经脊髓炎、多发性神经病、慢性神经病如IgM-多发性神经病或IgM介导的神经病、血小板减少症(例如，在患有心肌梗死的患者中出现)，包括血栓性血小板减少性紫癜(TTP)和自身免疫或免疫介导的血小板减少症如特发性血小板减少性紫癜(ITP)，包括色素性或急性ITP；自身免疫性疾病睾丸和卵巢，包括自身免疫性睾丸炎和卵巢炎、原发性甲状腺功能减退症、gipoparatireoidit、自身免疫性内分泌疾病，包括甲状腺炎如自身免疫性甲状腺炎、桥本氏病、慢性甲状腺炎(桥本氏甲状腺炎)或亚急性甲状腺炎、自身免疫性甲状腺疾病、特发性甲状腺功能减退症、格雷夫斯病、多腺综合征如自身免疫性多腺综合征(或多腺内分泌病综合征)、副肿瘤性综合征，包括神经系统副肿瘤性综合征如肌无力综合征、兰伯特-伊顿综合征或伊顿-兰伯特综合征“刚硬人”、“脑脊髓炎，例如过敏性脑脊髓炎(allergic encephalomyelitis)(或过敏性脑脊髓炎(encephalomyelitis allergica))和实验性过敏性脑脊髓炎(EAE)、重症肌无力，例如与胸腺瘤相关的重症肌无力、小脑变性、nevromiotoniya、斜视眼阵挛或综合征(LNG)以及感觉神经病、多灶性运动神经病、system We、希汉综合征、自身免疫性肝炎、慢性肝炎、狼疮性肝炎、巨细胞肝炎、慢性活动性肝炎或自身免疫性慢性活动性肝炎、淋巴间质性肺炎、闭塞性细支气管炎(不可传播的，不同于NSIP)；Guillain-Barre综合征、伯格病(IgA-肾病)、特发性IgA-肾病、线性IgA-皮肤病、原发性胆汁性肝硬化、pnevmonotsirroz、自身免疫性肠病综合征、肠病或乳糜泻、肠道性腹泻(麸质肠病变)、不能治疗的口炎性腹泻、特发性脂肪泻、冷球蛋白血症、肌萎缩性侧索硬化症(ALS；路易斯伽雷氏病)、冠心病；自身免疫性耳病，例如自身免疫性内耳病(AZVU)；自身免疫性听力损失；“舞蹈眼”综合征(LNG)、多软骨炎如难治性多软骨炎或复发性多软骨炎；肺泡蛋白沉积症、淀粉样变性、巩膜炎、非癌性淋巴细胞增多症、原发性淋巴细胞增多症，包括单克隆B细胞淋巴细胞增多症(例如，良性单克隆丙种球蛋白病和未知病因的单克隆丙种球蛋白病，MGUS)；周围神经病、副肿瘤综合征；“通道病”，例如癫痫、偏头痛、心律失常，肌肉病症、耳聋、失明、周期性麻痹和“通道病”CNS、孤独症、炎性肌病、局灶性和节段性肾小球硬化症(OSGS)、内分泌眼病、葡萄膜视网膜炎、脉络膜视网膜炎、自身免疫性肝病、纤维肌痛、多发性内分泌衰竭、Schmidt综合征、adrenalit、胃萎缩、早老性痴呆、脱髓鞘性疾病如自身免疫性脱髓鞘性疾病、糖尿病性肾病、Dressler综合征、斑秃、CREST综合征(钙沉着症、Raynau现象、食管蠕动受损、指硬化症和毛细血管扩张)、男性和女性自身免疫性不育、混合性结缔组织病、查加斯病、风湿热、复发性流产、肺病农民、多形性红斑、心脏切开术综合征、库欣综合征、肺部疾病、鸟类爱好者、变应性肉芽肿性脉管炎、良性淋巴细胞性脉管炎、阿尔波特综合征、牙槽炎，例如过敏性牙槽炎和纤维化牙槽炎、间质性肺病、输血疾病、麻风病、疟疾、利什曼病、kipanosomoz、血吸虫病、askarioz、曲霉病、Semptera综合征、卡普兰综合征、登革热、心内膜炎、心内膜心肌纤维化、弥漫性间质性肺纤维化、间质性肺纤维化、特发性肺纤维化、囊性纤维化、眼内炎、抗红斑升高、胎儿成红细胞增多、嗜酸性筋膜炎、舒尔曼综合征、Felty氏综合征、flyarioz、睫状体炎，例如软骨onichesky周期、geterohronichesky周期或iridotsyklit Fuchs周期、Henoch-Schonlein紫癜、由艾柯病毒引起的，由人免疫缺陷病毒(HIV)感染引起的感染；心肌病、阿尔茨海默病、由细小病毒引起的感染；由风疹病毒引起的感染；接种后发生的综合征；由风疹病毒引起的遗传性感染；由EB病毒引起的感染；腮腺炎、Evans综合征、自身免疫性性腺衰竭、西登哈姆氏舞蹈病、链球菌感染后肾炎、血栓闭塞性脉管炎、甲状腺毒症、脊髓痨、脉络膜炎、巨细胞多肌痛、内分泌性眼病、与慢性超敏反应相关的肺炎、干燥性角结膜炎、流行性角结膜炎、特发性肾炎综合征、肾病、特征在于肾组织的微小改变的肾病、由缺血和rap rfuzionnye损伤引起的良性遗传、视网膜的自身免疫疾病、关节炎症、支气管炎、慢性阻塞性气道疾病、矽肺、口疮、口疮性口炎、动脉硬化病症、aspermiogenez、自身免疫性溶血、贝克病、冷球蛋白血症、杜普特伦挛缩症、fakoanafilakticheskaya眼内炎、过敏性肠炎、结节性瘤性红斑、特发性面瘫、慢性乏力综合征、风湿热、Hamman Rich综合征；感觉神经性听力损失、阵发性血红蛋白尿、性腺机能减退、局限性回肠炎、白细胞减少症、传染性单核细胞增多症、横贯性脊髓炎、原发性特发性miksidema、肾病、交感性眼炎、肉芽肿性睾丸炎、胰腺炎、急性多神经根炎、坏疽性脓皮病、甲状腺炎、Quervain获得性脊髓萎缩、由抗精子引起的不育症、非恶性胸腺瘤、白癜风、严重联合免疫缺陷(SCID)和由病毒EB引起的疾病；获得性免疫缺陷综合征(AIDS)、寄生虫疾病如利什曼病、中毒性休克综合征、食物中毒、由T细胞浸润引起的病况、白细胞粘附缺乏、与细胞因子和T-淋巴细胞介导的急性超敏反应和迟发型超敏反应相关的免疫应答、与白细胞渗出相关的疾病、多器官损伤综合征、由复合物抗原-抗体形成介导的疾病、肾小球基底膜病、变应性神经炎、自身免疫性poliendokrinopatiya、卵巢炎、原发性粘液水肿、自身免疫性萎缩性胃炎、交感性眼炎、风湿性疾病、混合性结缔组织病、肾病综合征、胰岛炎、多内分泌衰竭、外周器官神经病、自身免疫性多腺综合征I型、特发性gipoparatireoidit成人型(IIV)、总脱发、充血性心肌病、获得性大疱性表皮松解症(PBE)、血色素沉着症、心肌炎、肾病综合征、原发性硬化性胆管炎、化脓性或非化脓性鼻窦炎、急性或慢性鼻窦炎；网格窦炎、额窦炎、上颌窦炎或蝶窦炎；eozonofilnye病症，例如嗜酸性粒细胞增多症、肺部浸润性嗜酸性粒细胞增多、嗜酸性粒细胞增多-肌痛综合征、Leffler综合征、慢性嗜酸性粒细胞性肺炎、热带肺部嗜酸性粒细胞增多症、变应性肺曲霉病、曲霉肿或含有嗜酸性粒细胞的肉芽肿；过敏反应、血清阴性脊椎炎、多发性内分泌自身免疫病、硬化性胆管炎、巩膜炎、巩膜外层炎、慢性粘膜皮肤念珠菌病、布鲁顿综合征、Wiskott-Aldrich综合征儿童短暂性低丙种球蛋白血症、共济失调-毛细血管扩张综合征、与胶原疾病相关的自身免疫病症、风湿病、神经疾病、缺血再灌注损伤、血压下降反应、血管功能障碍、血管发育不良、组织损伤、血管缺血、痛觉过敏、脑缺血和伴随血管形成的疾病、与超敏反应有关的变应性病症、肾小球肾炎、再灌注损伤、心肌或其它组织的再灌注损伤、具有急性炎症组分的皮肤病、急性化脓性脑膜炎或中枢神经系统的其它炎性病症、眼睛和眼眶的炎性疾病；与粒细胞输血相关的综合征；由细胞因子引起的毒性、急性浆液性炎症、慢性顽固性炎症、肾盂炎、糖尿病性视网膜病、大动脉糖尿病性损害、外周动脉增生、消化性溃疡和子宫内膜异位。
如本文所用，短语“感染”是指由感染性病原体例如病毒、细菌、真菌或寄生虫引起的病况。
如本文所用，短语“有效量”和“治疗有效量”是指产生其施用的治疗效果的物质如结合剂的剂量。确切剂量将取决于治疗的目的，并且将由本领域技术人员使用已知技术可确定(参见，例如，Lieberman，Pharmaceutical Dosage Forms(第1-3卷，1992)；Lloyd，TheArt，Science and Technology of Pharmaceutical Compounding(1999)；Pickar，DosageCalculations(1999)；Goodman&Gilman’s The Pharmacological Basis ofTherapeutics，第11版(McGraw-Hill，2006)；以及Remington：The Science and Practiceof Pharmacy，第22版，(Pharmaceutical Press，London，2012))。
如本文所用，术语“受体”、“个体”、“对象”、“宿主”和“患者”可互换使用，并且是指需要诊断、治疗或疗法的任何哺乳动物对象(例如人类)。用于治疗目的的“哺乳动物”是指分类为哺乳动物的任何动物，包括人类、家畜和农场动物，以及动物园、运动或宠物动物，如狗、马、猫、牛、绵羊、山羊、猪、骆驼等。在某些实施方案中，哺乳动物是人类。
如本文所用，术语“施用”是指肠胃外施用、静脉内施用、腹腔内施用、肌内施用、瘤内施用、病灶内施用、鼻内施用或皮下施用、口服施用、作为栓剂施用、局部接触、鞘内施用、或向对象植入缓释装置，例如微渗透泵。
本发明的方法还可用于治疗任何类型的感染性疾病(即，由细菌、病毒、真菌或寄生虫引起的疾病或病症)。可通过本发明方法治疗的感染性疾病的实例包括但不限于由人免疫缺陷病毒(HIV)、呼吸道合胞病毒(RSV)、流感病毒、登革热病毒、乙型肝炎病毒(HBV或丙型肝炎病毒(HCV))引起的疾病。施用包含本发明的免疫球蛋白重链多肽，本发明的免疫球蛋白轻链多肽，本发明的PD-L1结合剂，编码上述任一种的本发明的核酸序列，或包含本发明的核酸序列的本发明的载体的组合物在哺乳动物中诱导针对癌症或感染性疾病的免疫应答。“免疫应答”可需要例如抗体产生和/或免疫效应细胞(例如T细胞)的活化。
本发明的方法包括施用“治疗有效量”的结合剂。“治疗有效量”是指在必要的剂量和时间内有效达到期望的治疗结果的量。治疗有效量可根据诸如个体的疾病状态，年龄，性别和体重等因素以及结合剂在个体中引起所需反应的能力而变化。例如，本发明的结合剂的治疗有效量是降低人的PD-L1蛋白生物学活性和/或增强针对癌症或感染性疾病的免疫应答的量。
可选地，药理学和/或生理学效果可以是预防性的，即，该效果完全或部分地预防疾病或其症状。在这方面，本发明的方法包括施用“预防有效量”的结合剂。“预防有效量”是指在必要的剂量和时间内有效达到期望的预防结果(例如，预防疾病发作)的量。
典型的剂量可以是例如1pg/kg至20mg/kg动物或人体重的范围内；然而，低于或高于该示例性范围的剂量在本发明的范围内。日肠胃外剂量可以是约0.00001μg/kg至约20mg/kg总体重(例如，约0.001μg/kg、约0.1μg/kg、约1μg/kg、约5μg/kg、约10μg/kg、约100μg/kg、约500μg/kg、约1mg/kg、约5mg/kg、约10mg/kg或由前述值中的任意两个限定的范围)，优选约0.1μg/kg至约10mg/kg总体重(例如，约0.5μg/kg、约1μg/kg、约50μg/kg、约150μg/kg、约300μg/kg、约750μg/kg、约1.5mg/kg、约5mg/kg或由前述值中的任意两个限定的范围)，更优选约1μg/kg至5mg/kg总体重(例如，约3μg/kg、约15μg/kg、约75μg/kg、约300μg/kg、约900μg/kg、约2mg/kg、约4mg/kg或由前述值中的任意两个限定的范围)，并且甚至更优选约0.5至15mg/kg体重/天(例如，约1mg/kg、约2.5mg/kg、约3mg/kg、约6mg/kg、约9mg/kg、约11mg/kg、约13mg/kg或由前述值中的任意两个限定的范围)。治疗或预防功效可通过定期评估所治疗的患者来监测。对于几天或更长时间内的重复施用，取决于病况，可以重复治疗直至出现期望的对疾病症状的抑制。然而，其它剂量方案可能是有用的并且在本发明的范围内。期望的剂量可通过组合物的单次团注施用，组合物的多次团注施用或组合物的连续输注施用来递送。
包含有效量的本发明的免疫球蛋白重链多肽，本发明的免疫球蛋白轻链多肽，本发明的结合剂，编码上述任何一种的本发明的核酸序列，或包含本发明的核酸序列的本发明的载体的组合物可以使用标准施用技术施用于哺乳动物，包括口服、静脉内、腹腔内、皮下、经肺、透皮、肌内、鼻内、口腔、舌下或栓剂施用。所述组合物优选适于肠胃外施用。本文所用的术语“肠胃外”包括静脉内、肌内、皮下、直肠、阴道和腹腔内施用。更优选地，通过静脉内、腹腔内或皮下注射，使用外周全身递送将所述组合物施用于哺乳动物。
一旦施用于哺乳动物(例如，人)，本发明的结合剂的生物学活性可以通过本领域已知的任何合适的方法测量。例如，生物学活性可通过测定特定结合剂的稳定性来评估。在本发明的一个实施方案中，结合剂(例如抗体)的体内半衰期为约30分钟至45天(例如约30分钟、约45分钟、约1小时、约2小时、约4小时、约6小时、约10小时、约12小时、约1天、约5天、约10天、约15天、约25天、约35天、约40天、约45天或由前述值中的任意两个限定的范围)。在另一个实施方案中，PD-L1结合剂的体内半衰期为约2小时至20天(例如，约5小时、约10小时、约15小时、约20小时、约2天、约3天、约7天、约12天、约14天、约17天、约19天或由前述值中的任意两个限定的范围)。在另一个实施方案中，结合剂的体内半衰期为约10天至约40天(例如，约10天、约13天、约16天、约18天、约20天、约23天、约26天、约29天、约30天、约33天、约37天、约38天、约39天、约40天或由前述值中的任意两个限定的范围)。
本发明的PD-L1结合剂可单独施用或与其它药物组合施用，所述其它药物作为单独的部分或作为与PD-L1结合剂的缀合物。例如，结合剂可与用于治疗或预防本文公开的疾病的其它药剂组合施用。在这方面，结合剂可与至少一种其它抗癌剂组合使用，所述其它抗癌剂包括例如本领域已知的任何化学治疗剂、电离辐射、小分子抗癌剂、癌症疫苗、生物学疗法(例如其它单克隆抗体、杀癌病毒、基因疗法和过继性T细胞转移、免疫缀合物或细胞毒性抗体药物缀合物)和/或手术。当本发明的方法治疗感染性疾病时，结合剂可以与至少一种抗细菌剂或至少一种抗病毒剂组合施用。在这方面，抗细菌剂可以是本领域已知的任何合适的抗生素。抗病毒剂可以是特异性靶向特定病毒的任何合适类型的任何疫苗(例如，减毒活疫苗、亚单位疫苗、重组载体疫苗和小分子抗病毒疗法(例如，病毒复制抑制剂和核苷类似物))。
在另一个实施方案中，本发明的结合剂可以与抑制先天和适应性免疫检查点途径的其它药剂组合施用。例如，本发明的结合剂可以与抑制或拮抗CTLA-4、TIM-3、LAG-3、CD47、CD24和SIRPA途径的药剂组合施用。
除了治疗性用途之外，本文所述的结合剂还可用于诊断或研究应用。在这方面，结合剂可用于诊断癌症或感染性疾病的方法中。以类似的方式，结合剂可用于监测针对与异常的PD-L1表达相关的疾病或病症而测试的对象中的PD-L1蛋白水平。研究应用包括，例如，利用结合剂和标记物检测样品(例如，人体液或细胞或组织提取物)中的PD-L1蛋白的方法。结合剂可以在有或没有修饰的情况下使用，例如用可检测部分共价或非共价标记。例如，可检测部分可以是放射性同位素(例如，3H、14C、32P、35S或125I)、荧光或化学发光化合物(例如，异硫氰酸荧光素、罗丹明或萤光素)、酶(例如，碱性磷酸酶、β-半乳糖苷酶或辣根过氧化物酶)或辅基。本领域已知的用于将抗原结合剂(例如抗体)单独缀合至可检测部分的任何方法均可用于本发明的上下文中(参见例如Hunter等人，Nature，194：495-496(1962)；David等人，Biochemistry，13：1014-1021(1974)；Pain等人，J.Immunol.Meth.，40：219-230(1981)；以及Nygren，J.Histochem.and Cytochem.，30：407-412(1982))。
可以通过本领域已知的任何合适的方法使用本发明的结合剂来测量PD-L1蛋白水平。这些方法包括，例如，免疫组织化学、免疫荧光、放射免疫测定(RIA)和FACS。PD-L1蛋白的正常或标准表达值可以使用任何合适的技术测定，例如，通过在适于形成抗原-抗体复合物的条件下将包含或怀疑包含PD-L1多肽的样品与PD-L1特异性抗体组合。抗体用可检测物质直接或间接标记以促进结合或未结合抗体的检测。合适的可检测物质包括各种酶、辅基、荧光材料、发光材料和放射性材料(参见例如Zola，Monoclonal Antibodies：A Manual ofTechniques，CRC Press，Inc.(1987))。然后将样品中表达的PD-L1多肽的量与标准值进行比较。
试剂盒
结合剂可以提供在试剂盒中，即预定量的试剂与用于进行诊断测定的说明书的包装组合。如果结合剂用酶标记，则试剂盒合意地包括酶所需的底物和辅因子(例如，提供可检测的发色团或荧光团的底物前体)。另外，试剂盒中可包括其它添加剂，例如稳定剂、缓冲剂(例如封闭缓冲剂或裂解缓冲剂)等。可以改变各种试剂的相对量，以提供基本上优化测定灵敏度的试剂在溶液中的浓度。试剂可以以干燥粉末(通常为冻干的)提供，包括在溶解时将提供具有适当浓度的试剂溶液的赋形剂。
本公开的非限制性方面的实例
本文所述的本发明的方面(包括实施方案)可以是单独有益的或与一个或多个其它方面或实施方案组合是有益的。在不限制前述描述的情况下，下文提供编号为(1)-(32)的本公开的某些非限制性方面。如本领域技术人员在阅读本公开后将显而易见的是，每个单独编号的方面可以使用或与前面或后面的单独编号的方面中的任何一个组合。这旨在为所有这些方面的组合提供支持，并且不限于下文明确提供的方面的组合：
(1)程序性死亡配体L1(PD-L1)结合剂，其包含免疫球蛋白重链可变区多肽和免疫球蛋白轻链可变区多肽，其中：
所述免疫球蛋白重链可变区多肽包含含有SEQ ID NO：1-14或167中任一项的互补决定区1(HCDR1)，含有SEQ ID NO：15-31、168-173或203-206中任一项的互补决定区2(HCDR2)和含有SEQ ID NO：32-52、174-177、207或208中任一项的互补决定区3(HCDR3)；或
所述免疫球蛋白轻链可变区多肽包含含有SEQ ID NO：53-67或178-182中任一项的互补决定区1(LCDR1)，含有SEQ ID NO：68-79中任一项的互补决定区2(LCDR2)和含有SEQID NO：80-91中任一项的互补决定区3(LCDR3)。
(2)PD-L1结合剂，其包含SEQ ID NO：123-143、184-193或209-213中任一项的免疫球蛋白重链可变区或至少其CDR；和SEQ ID NO：144-164或194-202中任一项的免疫球蛋白轻链可变区或至少其CDR。
(3)PD-L1结合剂，其包含免疫球蛋白重链可变区多肽和免疫球蛋白轻链可变区多肽，所述免疫球蛋白重链可变区多肽具有与SEQ ID NO：123-143、184-193或209-213中任一项至少90％相同的氨基酸序列，所述免疫球蛋白轻链可变区多肽具有与SEQ ID NO：144-164或194-202中任一项至少90％相同的氨基酸序列。
(4)如方面1-3中任一项所述的PD-L1结合剂，其包含表1的PD-L1结合剂的重链和轻链免疫球蛋白多肽，或至少其CDR。
(5)如方面1-4中任一项所述的PD-L1结合剂，其中所述结合剂是抗体、抗体缀合物或其抗原结合片段。。
(6)如方面5所述的PD-L1结合剂，其中所述结合剂是选自F(ab’)2、Fab’、Fab、Fv、scFv、dsFv、dAb和单链结合多肽的抗体片段。
(7)如方面5所述的PD-L1结合剂，其中所述结合剂是抗体。
(8)如方面1-7中任一项所述的PD-L1结合剂，其还包含免疫球蛋白Fc区。
(9)如方面8所述的PD-L1结合剂，其还包含连接于所述Fc区的转化生长因子β1(TGFβ1)受体或其结合TGFβ1的片段。
(10)如方面7-9中任一项所述的PD-L1结合剂，其中所述抗体是IgG、IgM、IgA、IgD或IgE抗体。
(11)如方面7-9中任一项所述的PD-L1结合剂，其中所述抗体是IgG抗体。
(12)如方面7-11中任一项所述的PD-L1结合剂，其中所述抗体表现出抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)、抗体依赖性细胞介导的吞噬作用(ADCP)或补体依赖性细胞毒性(CDC)。
(13)如方面1-12中任一项所述的PD-L1结合剂，其中所述结合剂是双特异性抗体，嵌合抗原受体，嵌合T细胞受体或双特异性T细胞衔接体的一部分。
(14)核酸，其编码方面1-13中任一项所述的抗PD-L1结合剂的重链免疫球蛋白多肽。
(15)核酸，其编码方面1-14中任一项所述的抗PD-L1结合剂的轻链免疫球蛋白多肽。
(16)核酸，其编码方面1-15中任一项所述的PD-L1结合剂的重链免疫球蛋白多肽和轻链免疫球蛋白多肽。
(17)载体，其包含方面14-16中任一项所述的核酸序列。
(18)分离的细胞，其包含方面14-16中任一项所述的核酸，所述核酸任选地在载体中。
(19)提供方面1-13中任一项所述的PD-L1结合剂的方法，所述方法包括在体外细胞中表达一种或多种编码其免疫球蛋白重链和轻链多肽的核酸。
(20)组合物，其包含方面1-13中任一项所述的PD-L1结合剂或方面14-16中任一项所述的核酸以及药学上可接受的载体，所述核酸任选地在载体中。
(21)如方面1-13中任一项所述的PD-L1结合剂或包含所述PD-L1结合剂的缀合物，或如方面20所述的组合物，其用作治疗哺乳动物中对PD-L1抑制或结合有响应的疾病、病症或病况的药物的用途。
(22)如方面21所述的PD-L1结合剂或组合物，其中所述疾病、病症或病况是癌症。
(23)如方面1-13中任一项所述的PD-L1结合剂或如方面19所述的组合物，其用作调节哺乳动物中免疫应答的药物的用途。
(24)如方面23所述用途的PD-L1结合剂，其中所述免疫应答是抗癌免疫应答。
(25)治疗哺乳动物中对PD-L1抑制或结合有响应的疾病、病症或病况的方法，所述方法包括向所述哺乳动物施用方面1-13中任一项所述的PD-L1结合剂或包含所述PD-L1结合剂的缀合物，或方面20所述的组合物。
(26)如方面25所述的方法，其中所述疾病、病症或病况是癌症。
(27)如方面25所述的方法，其中所述疾病、病症或病况是自身免疫病症。
(28)如方面25所述的方法，其中所述疾病、病症或病况是感染。
(29)增强或抑制哺乳动物中免疫应答的方法，其包括向所述哺乳动物施用方面1-13中任一项所述的PD-L1结合剂或包含所述PD-L1结合剂的缀合物，或方面20所述的组合物。
(30)如方面29所述的方法，其中所述免疫应答是抗癌免疫应答。
(31)制备方面1-13中任一项所述的PD-L1结合剂的方法，所述方法包括在细胞中表达包含编码所述免疫球蛋白重链可变区多肽的序列的核酸，和包含编码所述免疫球蛋白轻链可变区多肽的序列的核酸，其中编码所述重链可变区多肽的序列和编码所述轻链可变区多肽的序列可以是单一核酸或分开的核酸的一部分。
(32)向表达PD-L1的细胞递送有效载荷的方法，所述方法包括向所述细胞或包含所述细胞的哺乳动物施用缀合物，所述缀合物包含(1)方面1-13中任一项所述的PD-L1结合剂和(2)所述哺乳动物的有效载荷。
(33)杂交瘤或细胞系，其表达方面1-13中任一项所述的PD-L1结合剂。
以下实施例进一步说明本发明，但当然不应解释为以任何方式限制其范围。
实施例
实施例1
本实施例证实了根据本发明实施方案的结合剂在结合细胞表面上的人PD-L1(hPD-L1)方面是有效的。
通过将结合剂与表达内源性hPD-L1的JIMT1细胞一起孵育来评估本发明实施方案的结合剂与细胞表面上的人hPD-L1(hPD-L1)的结合。简言之，将结合剂在4℃下在FACS缓冲剂(PBS+1％FBS+5mM EDTA，pH 7.4)中连续稀释。将稀释后的结合剂施加至JIMT1细胞(约1x105-2x105个/孔)并在4℃下孵育。随后将细胞洗涤两次以去除未结合的结合剂并随后在4℃下与荧光抗-人IgG Fc抗体一起孵育以检测细胞结合的抗-PD-L1结合剂。洗去未结合的第二抗体后，将细胞重悬于FACS缓冲剂加2％甲醛中，并通过流式细胞术分析。荧光强度(表示为几何平均荧光强度)用于确定与细胞表面上的hPD-L1结合的抗PDL1结合剂。
如图1、2和4中呈现的数据所示，根据本发明实施方案的结合剂在结合人PD-L1方面是成功的。沿着x轴的数字与根据本发明实施方案的结合剂的数目相关。附图中的“RefAb”是指不是本发明实施方案的参考结合剂。结合剂浓度列于图例中。
实施例2
本实施例证实了当暴露于细胞表面具有PD-L1的细胞时，根据本发明实施方案的结合剂未被内化。
抗-PDL1结合剂内化通过在细胞与预结合的抗体在37℃下孵育延长的时间过程后评估它们的细胞表面持久性的程度来测量。简言之，为了测量抗PDL1抗体表面持久性，以约2x105至4x105个细胞/孔接种JIMT-1细胞。在第1天，通过在4℃下将JIMT-1细胞与10μg/ml的抗PDL1抗体在细胞培养基中孵育60分钟来产生一组样品(“追踪”组)。孵育后，通过用培养基连续洗涤去除未结合的结合剂，然后将细胞在37℃下在新鲜培养基中孵育24小时。在第2天，通过与PBS+10mM EDTA短暂孵育从微量滴定板回收细胞。在第2天，通过将JIMT-1细胞与如上所述的抗PDL1结合剂一起孵育，去除未结合的抗体，然后立即使用PBS+10mM EDTA回收细胞来产生第二组样品(“无追踪”组)。
将回收的JIMT-1细胞转移至96-孔微量滴定板，沉淀，并与荧光抗-人IgG Fc抗体在FACS缓冲剂(PBS+1％FBS+5mM EDTA，pH 7.4)中在4℃下孵育至少45分钟，以检测细胞结合的抗-PDL1抗体。通过洗涤细胞两次去除未结合的结合剂，并将细胞重悬于FACS缓冲剂+2％甲醛中，并通过流式细胞术分析。
第二抗Fc通道中的荧光强度(表示为几何平均荧光强度)用于确定抗PDL1结合。与给定的抗PDL1结合剂一起孵育，随后进行24小时追踪与不进行追踪的细胞的荧光强度的比率是该结合剂的表面持久性的量度。例如，1.0的比率表示在24小时追踪过程中没有表面结合的结合剂的损失，而＜1的比率表示结合剂的一部分被内化。
如图3中呈现的数据所示，根据本发明实施方案的结合剂没有被细胞内化。沿着x轴的数字与根据本发明实施方案的结合剂的数目相关。附图中的“RefAb”是指不是本发明实施方案的参考结合剂。
实施例3
本实施例证实了根据本发明实施方案的结合剂抑制PD-L1/PD-1结合。
所述结合剂和两种市售抗体阿维单抗和阿特珠单抗对PD-L1/PD-1相互作用的影响使用报道分子测定法(Promega)来测定。根据制造商的说明书进行测定。简言之，将在表面表达PD-L1和活化αAPC的T细胞受体(TCR)的细胞与表达表面重组TCR和PD-1并带有荧光素酶基因的细胞一起孵育，所述荧光素酶基因在NFAT(活化T细胞核因子)应答元件的控制下。
反式PD-L1/PD-1相互作用阻止了通过反式αAPC-TCR结合，TCR信号传导和NFAT应答元件活化而发生的对萤光素酶表达的诱导。阻断与PD-1相互作用的抗PDL1抗体因此允许TCR信号传导和萤光素酶表达。使用生物发光底物和以发光检测模式设置的酶标仪测量荧光素酶表达。
将刺激物CHO-K1/PD-L1/αAPC细胞悬浮于补充有10％胎牛血清的Ham′s F-12培养基中，并铺板于六个96孔透明底白壁板的孔中。将板置于37℃孵育器中在5％CO2气氛下14小时。去除培养基，并将在补充有1％FBS的RPMI-1640培养基中稀释至2X最终浓度的测试物加入孔中。然后向每个孔中加入等体积的悬浮在RPMI-1640+1％FBS中的报道分子Jurkat/PD-1/荧光素酶细胞。终浓度范围为4.12至27000ng/ml，增量为3倍。包括阿维单抗作为参考。在37℃孵育器中在5％CO2气氛下8小时后，取出板并使其平衡至室温10分钟。然后孔在温和搅拌下接受BIOGLOW细胞透化荧光素酶底物(Promega)10分钟。
使用Molecular Devices M3酶标仪测量发光。用GraphPad PRISM v8分析发光数据以进行四参数S形剂量-响应曲线拟合和EC50值的确定。将浓度转化为log10值用于EC50确定和作图；将“无测试物”浓度转化为(测试的最低浓度)/3以允许log10转化。使用IgG分子量数据将EC50值从ng/ml转化为nM。
PD-L1/PD-1阻断通过增加抗-PDL1抗体的浓度诱导的发光的增加来证明(RLU＝相对发光单位)。使用四参数S形模型紧密拟合剂量-响应曲线，与饱和抗体结合一致。
表5.抗PDL1结合剂的PD-L1/PD-1阻断EC50值(ng/ml，nM)的实例
结合剂 板 EC50(ng/ml) MW(Da) EC50(nM)
1 1 106.5 144705 0.74
4 1 123.6 144840 0.85
9 1 97.3 144886 0.67
阿维单抗 2 67.5 143540 0.47
7 2 106.3 145265 0.73
16 2 180.6 144205 1.25
Ref Ab 3 290.8 144209 2.02
6 3 105.8 144977 0.73
10 3 67.4 144797 0.47
5 4 54.3 144808 0.37
阿维单抗 4 73.1 143540 0.51
14 4 166.0 144329 1.15
3 5 47.3 144447 0.33
RefAb 5 129.4 144437 0.9
阿特珠单抗 5 57.1 144355 0.4
11 6 53.6 144813 0.37
15 6 163.9 145130 1.13
阿维单抗 6 55.2 143540 0.38
总之，根据本发明实施方案的结合剂抑制蛋白质结合，EC50值的范围为47.3至180.6ng/ml(0.33至2.02nM)。
本文用于修饰数值的术语“约”和“大约”表示数值周围的近范围。因此，如果“X”是该值，则“约X”或“大约X”表示从0.9X至1.1X，例如从0.95X至1.05X或从0.99X至1.01X的值。提及“约X”或“大约X”特别表示至少为值X、0.95X、0.96X、0.97X、0.98X、0.99X、1.01X、1.02X、1.03X、1.04X和1.05X。因此，“约X”和“大约X”旨在教导和提供对例如“0.98X”的要求限制的书面描述支持。
本文引用的所有参考文献，包括出版物、专利申请和专利，在此通过引用并入，其程度如同每份参考文献单独地和具体地表示为通过引用并入并且在本文以其整体示出。
在描述本发明的上下文中(尤其是在以下权利要求的上下文中)使用的术语“一个/一种(a)”、“一个/一种(an)”、“所述”、至少一种/一个以及类似的引用应被解释为涵盖单数和复数，除非本文另外指明或与上下文明显矛盾。术语“至少一种/一个”之后一项或多项列举(例如，“A和B中的至少一种/一个”)的使用应被解释为意指选自列出的项中的一项(A或B)或者两个或更多个列出的项的组合(A和B)，除非本文另外指出或与上下文明显矛盾。术语“包含”、“具有”、“包括”和“含有”应被解释为开放式的术语(即意指“包括，但不限于”)，除非另外指明。本文叙述的值的范围仅旨在作为分别提及落入该范围内的每个单独值的速记法，除非本文另外指明，并且将每一单独的值并入本说明书，如同本文对其单独叙述。本文所述的所有方法可以任何合适的顺序进行，除非本文另外指出或与上下文明显矛盾。使用的本文提供的任何以及全部实例或示例性语言(例如“诸如”)仅旨在更好地说明本发明，并不对本发明的范围进行限制，除非另有声明。不应将本说明书中的语言解释为表明任何未要求保护的元素对实施本发明是必要的。
本文描述了本发明的优选实施方案，包括发明人已知的实施本发明最佳方式。通过阅读前面的描述，这些优选实施方案的变化对本领域普通技术人员是显而易见的。发明人期望技术人员适当地使用此类变型，并且发明人意欲以不同于本文具体描述的方式实施本发明。因此，如适用法律所允许的，本发明包括所附权利要求中叙述的主题的所有修饰和等同主题。此外，本发明涵盖上述元素以其所有可能的变体形式的任何组合，除非本文另外指明或者与上下文明显矛盾。
序列表
<110> 博尔特生物治疗药物有限公司(Bolt Biotherapeutics, Inc.)
<120> 抗PD-L1抗体
<130> 751375
<150> 62/963,782
<151> 2020-01-21
<160> 213
<170> PatentIn version 3.5
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Gly
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Gly
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Gly
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Gly
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Gly
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<400> 92
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<223> 合成的
<400> 93
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<400> 94
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<220>
<223> 合成的
<400> 95
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<223> 合成的
<400> 96
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<400> 97
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<400> 98
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<220>
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<400> 99
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<400> 101
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<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成的
<400> 102
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<220>
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<400> 103
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<223> 合成的
<400> 139
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<223> 合成的
<400> 140
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成的
<400> 141
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
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<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成的
<400> 142
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成的
<400> 143
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成的
<400> 144
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
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50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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<223> 合成的
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Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Gly Thr Trp
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Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Thr Leu Glu Asn Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Phe Ser Thr Pro Tyr
85 90 95
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Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
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Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Leu Ser Ser Ser
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
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<400> 160
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
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Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Arg Trp
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100 105
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<220>
<223> 合成的
<400> 161
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Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成的
<400> 162
Asp Ile Gln Ile Thr His Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Tyr Arg Leu Thr Ile Thr Cys Arg Asp Ser His Ser Ile Thr Thr Trp
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Leu Ala Trp Tyr His Gln Lys Pro Trp Asn Ala Pro Lys Leu Met Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Asn Leu Glu Ser
50 55
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<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成的
<400> 163
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Val Ile Arg Asn Asp
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Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
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<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成的
<400> 164
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Arg Tyr
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Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
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Tyr Ala Ala Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
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Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成的
<400> 165
Met Arg Ile Phe Ala Val Phe Ile Phe Met Thr Tyr Trp His Leu Leu
1 5 10 15
Asn Ala Phe Thr Val Thr Val Pro Lys Asp Leu Tyr Val Val Glu Tyr
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Tyr Arg Gln Arg Ala Arg Leu Leu Lys Asp Gln Leu Ser Leu Gly Asn
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100 105 110
Arg Cys Met Ile Ser Tyr Gly Gly Ala Asp Tyr Lys Arg Ile Thr Val
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Asp Pro Val Thr Ser Glu His Glu Leu Thr Cys Gln Ala Glu Gly Tyr
145 150 155 160
Pro Lys Ala Glu Val Ile Trp Thr Ser Ser Asp His Gln Val Leu Ser
165 170 175
Gly Lys Thr Thr Thr Thr Asn Ser Lys Arg Glu Glu Lys Leu Phe Asn
180 185 190
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195 200 205
Cys Thr Phe Arg Arg Leu Asp Pro Glu Glu Asn His Thr Ala Glu Leu
210 215 220
Val Ile Pro Glu Leu Pro Leu Ala His Pro Pro Asn Glu Arg Thr His
225 230 235 240
Leu Val Ile Leu Gly Ala Ile Leu Leu Cys Leu Gly Val Ala Leu Thr
245 250 255
Phe Ile Phe Arg Leu Arg Lys Gly Arg Met Met Asp Val Lys Lys Cys
260 265 270
Gly Ile Gln Asp Thr Asn Ser Lys Lys Gln Ser Asp Thr His Leu Glu
275 280 285
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290
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<211> 607
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成的
<400> 166
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ile Met Met Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ser Ile Tyr Pro Ser Gly Gly Ile Thr Phe Tyr Ala Asp Thr Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ile Lys Leu Gly Thr Val Thr Thr Val Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val
115 120 125
Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala
130 135 140
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
145 150 155 160
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val
165 170 175
Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro
180 185 190
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys
195 200 205
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp
210 215 220
Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly
225 230 235 240
Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile
245 250 255
Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu
260 265 270
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275 280 285
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg
290 295 300
Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys
305 310 315 320
Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu
325 330 335
Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr
340 345 350
Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu
355 360 365
Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp
370 375 380
Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val
385 390 395 400
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp
405 410 415
Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His
420 425 430
Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
435 440 445
Gly Ala Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly
450 455 460
Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Ile Pro Pro His Val Gln Lys Ser Val
465 470 475 480
Asn Asn Asp Met Ile Val Thr Asp Asn Asn Gly Ala Val Lys Phe Pro
485 490 495
Gln Leu Cys Lys Phe Cys Asp Val Arg Phe Ser Thr Cys Asp Asn Gln
500 505 510
Lys Ser Cys Met Ser Asn Cys Ser Ile Thr Ser Ile Cys Glu Lys Pro
515 520 525
Gln Glu Val Cys Val Ala Val Trp Arg Lys Asn Asp Glu Asn Ile Thr
530 535 540
Leu Glu Thr Val Cys His Asp Pro Lys Leu Pro Tyr His Asp Phe Ile
545 550 555 560
Leu Glu Asp Ala Ala Ser Pro Lys Cys Ile Met Lys Glu Lys Lys Lys
565 570 575
Pro Gly Glu Thr Phe Phe Met Cys Ser Cys Ser Ser Asp Glu Cys Asn
580 585 590
Asp Asn Ile Ile Phe Ser Glu Glu Tyr Asn Thr Ser Asn Pro Asp
595 600 605
<210> 167
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成的
<400> 167
Asn His Tyr Met His
1 5
<210> 168
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成的
<400> 168
Trp Met Asn Pro Asn Ser Gly His Thr Gly Tyr Ala Gln Arg Phe Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 169
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成的
<400> 169
Trp Ile Asn Pro Asn Ser Gly Asn Thr Gly Tyr Ala Gln Lys Phe Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 170
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成的
<400> 170
Trp Ile Asn Pro Asn Ser Gly His Thr Gly Tyr Ala Gln Lys Phe Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 171
<211> 17
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成的
<400> 171
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1 5 10 15
Gly
<210> 172
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成的
<400> 172
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Gly
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Trp Ile Asn Pro Asn Ser Gly His Thr Gly Tyr Ala Gln Arg Phe Gln
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Gly
<210> 174
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成的
<400> 174
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1 5
<210> 175
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成的
<220>
<221> misc_feature
<222> (7)..(7)
<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸
<400> 175
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<210> 176
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成的
<220>
<221> misc_feature
<222> (7)..(7)
<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸
<400> 176
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<400> 177
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<220>
<223> 合成的
<400> 178
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<220>
<223> 合成的
<400> 179
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<220>
<223> 合成的
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<223> 合成的
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<400> 183
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成的
<400> 184
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1 5 10 15
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<220>
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<220>
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<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸
<400> 185
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<220>
<223> 合成的
<220>
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<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸
<400> 186
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<400> 187
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<400> 188
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<400> 189
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<223> 合成的
<400> 191
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
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<223> 合成的
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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<400> 195
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<223> 合成的
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<220>
<223> 合成的
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成的
<400> 199
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成的
<400> 200
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成的
<400> 201
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
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<400> 202
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成的
<400> 203
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Gly
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<211> 17
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成的
<400> 204
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Gly
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<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成的
<400> 205
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1 5 10 15
Gly
<210> 206
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成的
<400> 206
Trp Ile Asn Pro Asn Ile Gly Asn Thr Gly Tyr Ala Gln Lys Phe Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 207
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成的
<400> 207
Asp Asp Trp Gly Gly Asp Trp Phe Asp Tyr
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<210> 208
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成的
<400> 208
Glu Pro Leu Gln Leu Gly Gly Phe Asp Tyr
1 5 10
<210> 209
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成的
<400> 209
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<210> 210
<211> 119
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成的
<400> 210
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
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Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
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<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成的
<400> 211
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
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<220>
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<400> 212
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
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50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Asp Trp Gly Gly Asp Trp Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 213
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成的
<400> 213
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp His
20 25 30
Tyr Leu His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Asn Pro Asn Ile Gly Asn Thr Gly Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Glu Pro Leu Gln Leu Gly Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115

Claims (32)

1.程序性死亡配体L1(PD-L1)结合剂，其包含免疫球蛋白重链可变区多肽和免疫球蛋白轻链可变区多肽，其中：
所述免疫球蛋白重链可变区多肽包含含有SEQ ID NO:1-14或167中任一项的互补决定区1(HCDR1)，含有SEQ ID NO:15-31、168-173或203-206中任一项的互补决定区2(HCDR2)和含有SEQ ID NO:32-52、174-177、207或208中任一项的互补决定区3(HCDR3)；或
所述免疫球蛋白轻链可变区多肽包含含有SEQ ID NO:53-67或178-182中任一项的互补决定区1(LCDR1)，含有SEQ ID NO:68-79中任一项的互补决定区2(LCDR2)和含有SEQ IDNO:80-91中任一项的互补决定区3(LCDR3)。
2.PD-L1结合剂，其包含SEQ ID NO:123-143、184-193或209-213中任一项的免疫球蛋白重链可变区或至少其CDR；和SEQ ID NO:144-164或194-202中任一项的免疫球蛋白轻链可变区或至少其CDR。
3.PD-L1结合剂，其包含免疫球蛋白重链可变区多肽和免疫球蛋白轻链可变区多肽，所述免疫球蛋白重链可变区多肽具有与SEQ ID NO:123-143、184-193或209-213中任一项至少90％相同的氨基酸序列，所述免疫球蛋白轻链可变区多肽具有与SEQ ID NO:144-164或194-202中任一项至少90％相同的氨基酸序列。
4.如权利要求1-3中任一项所述的PD-L1结合剂，其包含表1的PD-L1结合剂的重链和轻链免疫球蛋白多肽，或至少其CDR。
5.如权利要求1-4中任一项所述的PD-L1结合剂，其中所述结合剂是抗体、抗体缀合物或其抗原结合片段。
6.如权利要求5所述的PD-L1结合剂，其中所述结合剂是选自F(ab’)2、Fab’、Fab、Fv、scFv、dsFv、dAb和单链结合多肽的抗体片段。
7.如权利要求5所述的PD-L1结合剂，其中所述结合剂是抗体。
8.如权利要求1-7中任一项所述的PD-L1结合剂，其还包含免疫球蛋白Fc区。
9.如权利要求8所述的PD-L1结合剂，其还包含连接于所述Fc区的转化生长因子β1(TGFβ1)受体或其结合TGFβ1的片段。
10.如权利要求7-9中任一项所述的PD-L1结合剂，其中所述抗体是IgG、IgM、IgA、IgD或IgE抗体。
11.如权利要求7-9中任一项所述的PD-L1结合剂，其中所述抗体是IgG抗体。
12.如权利要求7-11中任一项所述的PD-L1结合剂，其中所述抗体表现出抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)、抗体依赖性细胞介导的吞噬作用(ADCP)或补体依赖性细胞毒性(CDC)。
13.如权利要求1-12中任一项所述的PD-L1结合剂，其中所述结合剂是双特异性抗体，嵌合抗原受体，嵌合T细胞受体或双特异性T细胞衔接体的一部分。
14.核酸，其编码权利要求1-13中任一项所述的抗PD-L1结合剂的重链免疫球蛋白多肽。
15.核酸，其编码权利要求1-14中任一项所述的抗PD-L1结合剂的轻链免疫球蛋白多肽。
16.核酸，其编码权利要求1-15中任一项所述的PD-L1结合剂的重链免疫球蛋白多肽和轻链免疫球蛋白多肽。
17.载体，其包含权利要求14-16中任一项所述的核酸序列。
18.分离的细胞，其包含权利要求14-16中任一项所述的核酸，所述核酸任选地在载体中。
19.提供权利要求1-13中任一项所述的PD-L1结合剂的方法，所述方法包括在体外细胞中表达一种或多种编码其免疫球蛋白重链和轻链多肽的核酸。
20.组合物，其包含权利要求1-13中任一项所述的PD-L1结合剂或权利要求14-16中任一项所述的核酸以及药学上可接受的载体，所述核酸任选地在载体中。
21.如权利要求1-13中任一项所述的PD-L1结合剂或包含所述PD-L1结合剂的缀合物，或如权利要求20所述的组合物，其用作治疗哺乳动物中对PD-L1抑制或结合有响应的疾病、病症或病况的药物的用途。
22.如权利要求21所述的PD-L1结合剂或组合物，其中所述疾病、病症或病况是癌症。
23.如权利要求1-13中任一项所述的PD-L1结合剂或如权利要求19所述的组合物，其用作增强或抑制哺乳动物中免疫应答的药物的用途。
24.如权利要求23所述用途的PD-L1结合剂，其中所述免疫应答是抗癌免疫应答。
25.治疗哺乳动物中对PD-L1抑制或结合有响应的疾病、病症或病况的方法，所述方法包括向所述哺乳动物施用权利要求1-13中任一项所述的PD-L1结合剂或包含所述PD-L1结合剂的缀合物，或权利要求20所述的组合物。
26.如权利要求25所述的方法，其中所述疾病、病症或病况是癌症。
27.如权利要求25所述的方法，其中所述疾病、病症或病况是自身免疫病症。
28.如权利要求25所述的方法，其中所述疾病、病症或病况是感染。
29.增强或抑制哺乳动物中免疫应答的方法，其包括向所述哺乳动物施用权利要求1-13中任一项所述的PD-L1结合剂或包含所述PD-L1结合剂的缀合物，或权利要求20所述的组合物。
30.如权利要求29所述的方法，其中所述免疫应答是抗癌免疫应答。
31.向表达PD-L1的细胞递送有效载荷的方法，所述方法包括向所述细胞或包含所述细胞的哺乳动物施用缀合物，所述缀合物包含(1)权利要求1-13中任一项所述的PD-L1结合剂和(2)所述哺乳动物的有效载荷。
32.杂交瘤或细胞系，其表达权利要求1-13中任一项所述的PD-L1结合剂。
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