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CN115135307A - 细胞递送用载体 - Google Patents

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CN115135307A CN202080096688.1A CN202080096688A CN115135307A CN 115135307 A CN115135307 A CN 115135307A CN 202080096688 A CN202080096688 A CN 202080096688A CN 115135307 A CN115135307 A CN 115135307A
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Ito Co ltd
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Abstract

[问题]提供一种细胞递送用载体，其兼具抗氧化活性、细胞内吸收性、细胞内崩解性、稳定性和安全性，并且有效成分向细胞和生物组织的递送性较高。[解决方案]提供一种细胞递送用载体，其中包含有效成分，该细胞递送用载体由具有同时激活自噬相关基因和组织蛋白酶合成基因的能力的维生素衍生物、含有刺激响应聚合物的分子、乳化稳定剂、有效成分以及脂质构成，从而有效成分向细胞和生物组织的递送性较高。

Description

细胞递送用载体
技术领域
本发明涉及一种稳定且安全的用于药物递送系统(DDS)的细胞递送用载体，其包含刺激响应聚合物以及促进细胞摄取和细胞内降解机制的物质。
背景技术
药物递送系统(DDS)用于以下目的：1)药物作用的分离：仅提取或抑制特定作用。2)效果的增强和表现：效果更准确，且重现性提高。可以期待减少投入量、扩大应用(新功效的发现等)。3)副作用的减少：通过扩大安全边际，改善生活质量(QOL)，减轻患者负担。此外，还可以使药物因副作用而失效的化合物作为药物复活。4)可用性的改善：减轻患者和医疗工作者的负担，并解决了违规用药的问题。5)经济性：实现产品生命周期的延长和差别化。此外，可以减少医疗费用、相关费用。可以期望提高研究开发的效率。
用于DDS的组合物一般是细胞递送用载体，本发明公开了一种新型的细胞递送用载体。一般的药品和化妆品中使用的细胞递送用载体的粒子大小的单位在亚微米至微米的范围内，但当用于细胞递送用载体时，粒径要小得多。例如，在直径为300nm以下时，能够使其从皮肤的毛囊间隙渗透到皮肤组织，特别是，从毛囊通过表皮、真皮到达脂肪层，进一步地，毛囊皮肤角质层较薄，脂溶性成分可以从皮脂腺扩散到真皮中，几乎不经由皮肤屏障。当皮下给药150nm或更小的较小粒子时，其不能通过毛细血管壁，但能够侵入毛细淋巴管，因此能够使有效成分停留在特别是皮肤组织等组织中。进一步地，在直径为50nm或更小的粒子时，药物也会通过一般的健康的血管壁并向体内扩散。因此，为了使药物停留在靶器官中，直径为50nm至300nm的粒径是适合的。
在现有的细胞递送用载体中，存在制剂中和靶细胞之间氧化分解被加速，有效成分不能充分到达目标组织的问题。进一步地，在目标组织中，细胞递送用载体的细胞吸收能力低，有效成分不能被细胞充分吸收。除此之外，还存在，即使细胞递送用载体被吸收，也不能在细胞吸收中分解，由此有效成分不能充分释放的问题。因此，本发明所要解决的课题在于，在细胞递送用载体中同时解决以下三个课题：1)更有效地抑制载体在制剂中和靶细胞之间的氧化分解，并提高其到达目标组织的到达率；2)进一步提高目标组织的细胞吸收能力；3)载体在细胞吸收内被更有效地分解。换言之，在细胞递送用载体中需要同时增强以下三个要素：1)抗氧化活性；2)细胞内吸收能力；以及3)细胞内崩解性。进一步地，4)确保稳定性和安全性对于产品的流通是必需的。在本发明中，将其称为细胞递送用载体的四个必要元素。
刺激响应聚合物是指包含刺激响应分子的聚合物，该刺激响应分子的微观结构根据周围的外部刺激、即、温度、pH、离子强度、磁场、电场、光、声波、压力、溶剂、加速度和化学物种而发生可逆或非化学变化，刺激响应聚合物用于高效的药物递送。
专利文献1至6公开了一种含有温度敏感聚合物、pH响应聚合物、液晶聚合物和聚合物凝胶的纳米粒子系统。然而，这些刺激响应聚合物单独或其组合在破坏细胞中的脂质体方面是有效的，但不足以达到提高细胞吸收能力的目的。此外，当在细胞外对刺激响应聚合物施加刺激而破坏时，包含物向细胞外扩散，难以有效地输送到目标细胞内，制作脂质体胶囊的意义减弱。即，使用这些刺激响应聚合物可以增强细胞递送用载体的3)细胞内崩解性，但不能提高1)抗氧化活性和2)细胞内吸收能力。因此，需要一种载体，该载体在使用了刺激响应聚合物的细胞递送用载体上添加了使其他细胞递送更有效的系统。
维生素是人体必需的营养物质，各器官、组织的细胞具有根据需要捕捉血液中的维生素，并主动将其带入细胞内的系统，已知血液转运蛋白、细胞膜上的受体和转运体等转运通道。
抗坏血酸在皮肤细胞中的滞留率高于肝脏，是仅次于抗坏血酸浓度较高的大脑的浓度。在皮肤组织中，由于以血浆浓度的20倍以上的浓度浓缩，因此暗示了存在抗坏血酸转运体，实际上，在皮肤细胞等中，SVCT1和SVCT2(Na依赖性维生素C转运体)的表达已被证实。非专利文献1、非专利文献2。已知，SVCT1主要存在于角化细胞中，SVCT2存在于角化细胞、成纤维细胞和内皮细胞中。
然而，以前报道了，抗坏血酸甘油酯、APPS(抗坏血酸-2-磷酸-6-棕榈酸)等不具有脂质的水溶性衍生物以高于一般抗坏血酸高的浓度被皮肤细胞吸收。在非专利文献3中，示出了由于APPS为两亲性的，因此直接通过细胞膜即磷脂膜的可能性，但该理论不能说明水溶性的抗坏血酸甘油酯、抗坏血酸磷酸酯在细胞内的高浓度化。
α-生育酚在肝脏中以高浓度存在。关于生育酚结合蛋白，主要已知其转运蛋白(非专利文献4)，进一步地，筛选α-生育酚转移蛋白基因并对其详细进行了报道(非专利文献5)。
关于视黄醇，已知视黄醇结合蛋白(转运蛋白)，其为在肝脏中合成的分子量为21kDa的蛋白质，并且具有结合并分泌堆积于肝脏的维生素A(视黄醇)并将其转运到靶器官(细胞)的作用。
维生素D结合蛋白作为维生素D转运蛋白以高浓度在血清中循环，主要在肝细胞产生，并通过通过巨蛋白受体介导的内吞作用将维生素D带入细胞内。
叶酸以高浓度存在于肝脏内，堆积有体内大约一半的叶酸。血浆中三分之二的叶酸与蛋白质结合并被转运。
核黄素向肝脏等组织的带入在生理浓度下由特殊蛋白质细胞递送用载体介导，除此以外则通过内吞作用带入。
钴胺素(维生素B12)与转钴胺素结合并在血液中运输。视黄醇结合蛋白(Retinol-binding protein:RBP)为在肝脏中合成的分子量为21kDa的蛋白质，并且具有结合并分泌堆积于肝脏中的维生素A(视黄醇)并将其转运到靶器官(细胞)的作用1。
已知，上述所示的特定维生素与转运蛋白结合并在血液中循环，并且与目标组织的细胞膜上的特异性受体结合，以通过特异性吸收通道蛋白或内吞作用以高浓度被带入到目标细胞内。因此，认为，上述所示的特定维生素的人工合成衍生物，如果能够维持足够的血液中稳定性，则以衍生物的形式与细胞膜上的特异性受体结合的可能性很高。但是，特异性吸收通道能够准确识别每种维生素的分子结构，因此无法吸收这些人工合成的维生素衍生物，但在内吞作用中，由于周围大量的水分也被带入，因此，认为与这些受体结合的细胞表面的维生素衍生物也一起被带入。
本发明的目的在于，找到能够增强内吞作用的特殊物质，并将其应用于使用了刺激响应聚合物的细胞递送用载体，以提高细胞递送用载体的细胞摄取率。认为，根据上述维生素的特性，通过将筛选对象缩小到维生素衍生物，能够实现在更短的时间内具有高吸收率的细胞递送用载体的可能性较高。维生素本身由于物理特性、稳定性的问题，很难存在于载体表面。进一步地，为了使刺激响应聚合物和特殊的维生素衍生物稳定地存在于同一细胞递送用载体内，特定的脂质、稳定剂的筛选是不可或缺的。特别是，认为若不使维生素衍生物存在于载体表面，则不能提高内吞作用，因此很难进行实现其的特定的脂质、稳定剂的筛选。
因此，如果可以通过某种方法在各维生素衍生物存在的情况下测量内吞作用，则可以弄清哪些维生素衍生物易于提高内吞作用，如果能够对细胞递送用载体表面进行修饰，则能够激活基于细胞递送用载体的内吞作用的胞内转运。即，本发明的目的之一在于，寻找维生素衍生物中最能激活内吞作用的物质。
此外，近年来报道了，抗坏血酸甘油酯衍生物以高浓度被摄入色素细胞内，增强自噬活性。在本发明人的研究中，不仅在色素细胞中，而且在一般的正常的皮肤细胞中观察到了抗坏血酸甘油酯衍生物的自噬活性的增强。由于自噬为摄入细胞内的物质的再利用系统，因此自噬的增强能够说明加速色素细胞中由于转运抑制而堆积的黑色素的分解，但不能说明不具有黑色素的一般细胞中自噬活性的增强。
显而易见地，不能仅通过维生素提高细胞对磷脂的透过性这一事实来说明细胞内递送用载体的细胞内的高浓度化。这是因为，细胞递送用载体的尺寸远大于修饰后的抗坏血酸衍生物分子的尺寸，除非有特殊的系统起作用，否则巨大的细胞递送用载体难以胞内转运。
能够通过将具有抗氧化作用的两亲性的维生素衍生物加入到细胞递送用载体的表面的膜中来解决上述1)中的问题。在以前的发明中，本发明人成功地使用两亲性的抗坏血酸衍生物作为表面活性剂，从而以两亲性的抗坏血酸衍生物构成细胞递送用载体的膜的一部分或全部。然而，仅通过这一点，细胞递送用载体不能高效地被吸收到细胞内。
本发明人为了提高DDS的细胞内摄取的效果，对各种物质的细胞内摄取机制进行了研究，其结果是，想到了利用内吞作用，对诱导内吞作用的物质进行修饰，会提高细胞递送用载体的摄取率。
进一步地，已发现，如果利用内吞作用，则能够解决最后一个问题，即，能够在细胞内有效地分解载体、维生素衍生物的问题。即，如果利用内吞作用，则能够通过其胞饮作用，与细胞外液一起摄取细胞膜周围的物质，从而形成充满细胞外液的囊泡(内体)。这是一种常见的摄取机制，发生在所有细胞中，摄入的内体被溶酶体分解。即，在细胞吸收内有效地分解。
我们已经清楚了，如果能够在两亲性的维生素衍生物中筛选出具有内吞功能的物质，并将其应用于细胞递送用载体，则也能够同时解决DDS粒子在细胞吸收内的有效分解的问题。
首先，细胞通过内吞作用不断摄取来自细胞外的物质等，但即使在具有标准内吞活性的成纤维细胞中，每分钟大约有1％的细胞膜通过内吞作用被摄取到细胞内。在每个标准的哺乳动物细胞中，存在200个左右的内体，其总体积约为细胞总体积的1％。若以表面积换算，则细胞膜的3％左右的界限膜包围内体。即，在一小时内，60％的细胞膜依次流入只有3％左右的表面积的内体。本发明的目的在于，特定通过利用内体来提高细胞内的吸收的物质，并将其修饰到使用了刺激响应聚合物的细胞递送用载体的表面，来提高细胞递送用载体的细胞内摄取率。进一步地，要求该载体在细胞外稳定，而在细胞内易于分解。高安全性也是条件之一。以往，想要通过修饰各种物质来激活DDS的内体利用，但在现有技术中，在细胞外稳定性差，此外，无法获得足够高的内体活性，其结果是，无法实现高的细胞内摄取率。进一步地，产生在细胞外稳定性较高，但在细胞内不分解，不能充分释放有效成分的问题。
在细胞内，内体与溶酶体融合。溶酶体(lysosome：溶小体)是被真核生物的生物膜包围的结构，且在内部具有水解酶，摄取到膜内的生物高分子通过这些酶水解。与含有待分解的物体的内体融合后的物质称为次级溶酶体(secondary lysosome)或吞噬溶酶体(phagolysosome)。次级溶酶体之一来源于这种内吞作用。由摄取了细菌等巨大的异物的吞噬体、被称为吸液小体、含有细胞膜附近的更微观的分子的一层生物膜构成的结构与初级溶酶体融合成为吞噬溶酶体(phagolysosome)，分解摄取的物质。溶酶体中所含的水解酶基团具有在酸性条件下高效工作的特性，溶酶体内部的氢离子指数通过质子泵的作用酸性保持在pH5左右。也就是说，使内吞作用活化的细胞递送用载体的摄取方法，也可以加速载体在细胞内的分解，并且提高有效成分在细胞内的活性。
摄取到内体的细胞递送用载体分子被溶酶体分解，一部分堆积于细胞内，但此时，细胞内还含有堆积的未消化的大量的细胞递送用载体的构成物质。因此，认为自噬被激活。也就是说，当内体通过内吞作用激活时，不仅内体系统被激活，而且自噬也被激活，自噬体系统的相关蛋白质的生物合成也被激活。也就是说，本发明的目的之一在于，检测负责内体和自噬体的活性的标记，使用这些标记寻找激活内体和自噬体的物质，最后将其修饰到细胞递送用载体的表面。
也意味着，在作为本发明所要解决的四个课题即、细胞递送用载体的四个必要元素：1)抗氧化活性、2)细胞内吸收能力、3)细胞内崩解性、以及4)稳定性和安全性中，与内体相关的内吞作用与2)细胞内吸收能力有关，自噬体负责的自噬与3)细胞内崩解性相关。
溶酶体内部含有消化酶，进行细胞中的蛋白质等的分解。自噬与内吞作用相匹敌，是细胞质中蛋白质等的分解机制。脂质膜伸长并包围部分含有分解物质的细胞质。接着，脂质膜分离成内膜和外膜，由此，形成由脂质双层膜构成的自噬体。含有消化酶的溶酶体与自噬体的外膜融合，溶酶体的消化酶流入外膜与内膜之间，然后只分解内膜，分解物质与消化酶混合，开始分解工序。
自噬体的形成所需的因子有许多，但可以大致分类为下述五个功能蛋白质组。1)泛素样因子Atg8的结合反应体系(Atg8体系)：Atg8、Atg4、Atg7、Atg3。2)泛素样因子Atg12的结合反应体系(Atg12体系)：Atg12、Atg7、Atg10、Atg5、Atg16。3)Atg1蛋白激酶复合物：Atg1、Atg13、Atg17、Atg29。4)Vps34 PI3激酶复合物：Vps34、Vps15、Atg14、Atg6。5)Atg9与Atg2-Atg18复合物：Atg2、Atg18、Atg9。
本发明人着眼于Atg5作为此类内体和自噬体的激活标记。这是因为已经明确了，Atg5不仅是自噬体形成所需的，而且是内体和溶酶体的生物合成所需的(非专利文献6)。
即，在本发明中，从维生素衍生物中筛选出具有加速自噬体、内体和溶酶体的生物合成所需的蛋白质中的任一种或多种蛋白质的合成的作用的物质。选择维生素衍生物的理由有如下三点：1)其稳定性比维生素良好，而且可以使其物理性质具有两亲性；2)安全性非常高；3)维生素衍生物在细胞内分解并转化为维生素，能够在细胞内发挥有效的生理作用。
Atg蛋白中，特别是Atg5与内体、溶酶体和自噬体的产生有关，因此，本发明人通过微阵列检测负责合成该ATG5蛋白的m-RNA，并且通过与无添加对照进行比较，研究了修饰于乳化组合物的维生素衍生物的种类与细胞摄取之间的关系。
其结果是，当将特定的维生素衍生物与乳化组合物混合时，细胞递送用载体的细胞摄取增加，同时与对照相比，ATG5的值显着增加。进一步地，明确了，除此ATG5以外，ATG2、3、4、7、10、101、12、13、14和15的mRNA水平也同时增加。
因此，报告了，作为内吞作用和自噬活性的指标，也与内体相关，但主要与自噬体形成相关，本发明人将ATG2、3、4、5、7、10、101、12、13、14和15设定为标记，在胞递送用载体上修饰各种维生素衍生物，并且通过微阵列检测m-RNA定量该蛋白的合成活性，完成了本发明的细胞递送用载体。进一步地，发现了，通过将这些物质修饰于细胞递送用载体，能够提供细胞吸收能力良好的细胞递送用载体。
抗坏血酸甘油辛酯等水溶性的衍生物显示出较高的ATG活性，这一点无法仅通过细胞磷脂膜的透过性解释，因此内吞作用激活，其结果是，能够说明具有较高的细胞内转运能力。进一步地，已知，内吞物质增强自噬活性，因此在非黑色素生成细胞中，也能够说明抗坏血酸甘油辛酯增强自噬活性。
例如，自噬体前体膜吞噬体的扩增需要ATG2(非专利文献7)。Atg2蛋白质在自噬体的形成，以及溶酶体等的脂滴的形态和分散的调节中起作用(非专利文献8)。
自噬通过形成双层膜自噬体开始，通过自噬体与溶酶体融合而结束。自噬体上的寡聚体ATG14与特殊复合物结合，加速自噬体和内溶酶体的融合(非专利文献9)。
其结果是，发现以下本发明的细胞递送用载体能够解决四个必要元素的所有问题，并完成了本发明。
当本发明的细胞递送用载体中的内吞加速物质为两亲性的抗氧化维生素衍生物时，能够稳定细胞递送用载体内对氧化不稳定的物质，并且实现较高的细胞吸收能力，进一步地，增强与细胞的维生素结合蛋白的亲和性，因此容易摄取到细胞内，更优选。
进一步地，当内吞加速物质为具有两亲性的抗氧化维生素衍生物时，由于其表面活性，容易固定于乳化膜表面，因此更优选。
该两亲性的抗氧化维生素衍生物的存在部位位于乳化膜本身或乳化膜之间，才会形成抗氧化屏障，由此有效地阻止外部的活性氧侵入到有效成分所在的中心部分。因此，与如一般的DDS胶囊那样抗氧化剂存在于有效成分所在的中心部分、DDS粒子悬浮的溶剂中的情况明显不同。
本发明人已在2007年发现并发表了如下：通过在本发明中选择特定的两亲性抗氧化维生素衍生物，并且通过单独或组合使用，可以形成具有有用的层结构的细胞递送用载体；以及，由这些抗氧化膜包含的物质可以与活性氧隔绝，即使是容易氧化的有效成分也可以维持其稳定性。然而，仅通过这一点无法实现足够的细胞递送率。
两亲性抗氧化剂是指，通过在具有抗氧化性的抗坏血酸、生育酚等的活性中心用具有相反极性的修饰基团进行保护，使水溶性的抗坏血酸接近脂溶性，并使脂溶性的生育酚接近水溶性，而使其具备两亲性的衍生物。由于对活性中心进行修饰，抗氧化活性也会降低。反而使与活性氧的反应速度降低。已知，两亲性的抗氧化维生素衍生物与活性氧的反应速度的降低也会减少促氧化剂的产生。
仅通过以常规方法添加两亲性抗氧化维生素并不能发挥对易氧化的有效成分的有效的保护作用，两亲性抗氧化维生素存在于乳化膜自身或细胞递送用载体的乳化膜之间后，才能有效地发挥本发明的效果。这是因为，与抗氧化维生素衍生物存在于有效成分所在的中心部分相比，在中心部分的周围存在膜状的抗氧化维生素衍生物的屏障能够更有效地除去来自外部的活性氧，进一步地，如果膜通过形成层结构而多层化，则抗氧化屏障也会遍布多层，由此进一步加强保护有效成分所在的中心部分的结构。因此，在乳化膜中，单层脂质双层膜或更多层膜的多层层结构更有效，在本发明中，三层膜以上的层结构最适合发挥本发明的有效性。
进一步地，本发明的两亲性抗氧化维生素衍生物优选在本发明的层结构的乳化膜与乳化膜之间存在10％以上。这种定量方法能够通过HPLC分析凝胶过滤时的脂质体部分和非脂质体部分的水分和非水分中的两亲性抗氧化维生素的浓度来容易地测量。
为了防止包含于细胞递送用载体的有效成分的氧化，并且与活性氧隔绝，以往，进行的是将以往的丁基羟基苯甲醚(BHA)等强抗氧化剂、抗坏血酸、生育酚等抗氧化维生素等与有效成分、细胞递送用载体一起添加的方法，但仅添加这些非两亲性的抗氧化剂并不能发挥足够的抗氧化能力，而且要长期保持所包含的有效成分而不使其失活是非常困难的。这是因为，抗坏血酸、生育酚等不具有两亲性的抗氧化剂与活性氧的反应性高，很快就会被氧化，成为BHA自由基、生育酚自由基、抗坏血酸自由基等促氧化剂，抗氧化能力不会长期保持。此外，期待这些有效成分的效果，将抗氧化剂保留在细胞递送用载体的中心部分内以便其与有效成分共存，因此，不仅不能通过这些抗氧化剂来保护围绕中心部分的包含膜自身免受活性氧的影响，甚至连该设想都不可能。
作为人工合成的强抗氧化剂的BHA，被证实具有致癌性，而且在安全性方面，在添加到食品、化妆品等中的情况下，存在产品价值降低的问题。(1998年7月7日食品卫生调查毒性部门会议/添加物部门会议合同部会议记录)。BHA的致癌机制是，在体内氧化代谢产生半醌自由基等而致癌。文献中已经明确了，许多抗氧化剂，不限于BHA，由于其促氧化作用而显示出毒性，例如致癌性(非专利文献10)。
进一步地，指出了，类胡萝卜素、生育酚或抗坏血酸等，也根据各个分子的氧化还原电位和细胞的无机化学性质显示出作为氧化促进剂的特性，这些抗氧化维生素成为促氧化剂，这些活性氧代谢物可能会损坏DNA、细胞膜(非专利文献11)。
进一步地，为了提高细胞的渗透性减少了细胞递送用载体的尺寸，但如果细胞递送用载体的尺寸变小，则与其成比例地，细胞递送用载体的细胞膜与单位有效成分的活性氧的结合概率增加，因此，产生促氧化剂的概率升高，容易分解。
此外，一般的细胞递送用载体的平均直径为30μm或更小，但若将其减小到近年来要求的300nm或更小以提高皮肤渗透性，则其表面积增加到30倍，因此变得容易受到30倍的活性氧的攻击。也就是说，形成的细胞递送用载体越小，有效成分就越容易分解，不仅失去效果，而且产生抗氧化剂的促氧化剂毒性增加的大问题。
即，本发明的目的在于，提供一种稳定且安全的具有抗氧化剂涂层的纳米微胶囊，同时提高乳化膜和中心部分的有效成分的氧化稳定性。发现了，为了实现该目的而添加以往的抗氧化剂时，由于促氧化剂的作用而起到完全相反的作用。发现了，使用与以往的抗氧化剂相比抗氧化活性低的两亲性的抗氧化剂后，才能够将纳米微胶囊中的乳化涂层和中心部分的有效成分两者同时长期稳定地保护免受活性氧的影响。进一步地，通过将乳化涂层形成为层结构，即，多层胶囊，可以提高两亲性抗氧化剂的配合比，并且更有效地阻止活性氧的通过。
现有技术文献
专利文献
专利文献1:日本特表2011-522616
专利文献2:日本特开2015-107986
专利文献3:表2016/199895
专利文献4:日本再表2015/170506
专利文献5:日本特表2017-506681
专利文献6:日本特表2017-502997
专利文献7:日本再表2016/199895
非专利文献
非专利文献1:SaviniI,et al.，Amino Acids 34，347-355(2008)
非专利文献2:石神昭人等，Vitarnin(日本)88(ll)，555-559(2014)
非专利文献3:Shibuya,S.,et al.,Nutrients 2017,9,645；doi:10.3390/nu9070645
非专利文献4：HeubleinS,et al.,J Cancer Res Clin Oncol.2017/5；143(5):773-781.
非专利文献5：Qu YH,et al.，Int J Mol Sci 2016Jun 27；17(7):1016.
非专利文献6：Peng J,et al.，Sci China Life Sci.2014Jan；57(1):59-68.
非专利文献7：Chowdhury S，et al.，Proc Natl Acad Sci USA，2018，16；115(42):E9792-E9801.
非专利文献8：Velikkakath AK,et al.，Mol Biol Cell，2012Mar；23(5):896-909.
非专利文献9：Diao J,et al.，Nature.2015Apr 23；520(7548):563-6.
非专利文献10：Ito N,Hirose M.Adv Cancer Res.1989；53:247-302.
非专利文献11：Schwartz JL.JNutr.1996Apr；126(4Suppl):1221S-7S
非专利文献12：J.E.Chung M.et al.,Volume9,Issues1-2,1997，37-48
非专利文献13：Galovie Renge lR，et al.，Eur J Pharm Sci.2002Jun；15(5):441-8.
非专利文献14：Filipovie-Grcie J，et al.，J Microencapsul.2001Jan-Feb；18(1):3-12.
非专利文献15：Takeuchi H,et al.,Pharm Res.1996Jun；13(6):896-901.
发明内容
本发明所要解决的课题
概括本发明所要解决的课题在于，提供一种在细胞递送用载体中同时增强四个必要元素，即：1)抗氧化活性，2)细胞内吸收性，3)细胞内崩解性，以及4)稳定性和安全性。
用于解决课题的手段
概括用于解决上述课题的手段，则为提供如下的细胞递送用载体：1)能够通过在细胞递送用载体表面上配置优异的抗氧化维生素衍生物来解决细胞递送用载体所需的抗氧化性，能够通过将诱导内吞的维生素衍生物与乳化成分混合来提高2)细胞内吸收能力，进一步地，能够通过在细胞递送用载体表面上配置刺激响应聚合物来使细胞递送用载体在目标细胞内或目标细胞附近崩解，进一步地，通过将混合的维生素衍生物限制在能增强细胞内的自噬活性和溶酶体活性的维生素衍生物来诱导3)细胞内崩解性，分解在细胞递送用载体内部稳定的两亲性维生素衍生物成分，并转化可被细胞利用的维生素。
本发明的权利要求如下。
(1)一种细胞递送用载体，其由一种或多种物质分别选自以下三组的混合物构成：同时激活自噬相关基因和组织蛋白酶合成基因的物质、含有刺激响应聚合物的分子、以及脂质。
(2)根据权利要求1所述的细胞递送用载体，其由一种或多种物质分别选自以下四组的混合物构成：同时激活自噬相关基因和组织蛋白酶合成基因的物质、含有刺激响应聚合物的分子，乳化稳定剂、以及脂质。
(3)根据权利要求1所述的细胞递送用载体，其由一种或多种物质分别选自以下五组的混合物构成：同时激活自噬相关基因和组织蛋白酶合成基因的物质、含有刺激响应聚合物的分子、乳化稳定剂、有效成分以及脂质，其中有效成分封装在细胞递送用载体内。
(4)根据权利要求1所述的细胞递送用载体，其中，部分或全部的脂质是具有8个以上连续烃链的脂质。
(5)根据权利要求1所述的细胞递送用载体，其中，部分或全部的脂质是表面活性剂。
(6)根据权利要求1所述的细胞递送用载体，其中，部分或全部的脂质是层形成表面活性剂。
(7)根据权利要求1所述的细胞递送用载体，其中，细胞递送用载体具有单层结构和多层结构中的任一种结构。
(8)根据权利要求1所述的细胞递送用载体，其中，部分或全部脂质选自阳离子脂质或阴离子脂质中的任意一方。
(9)根据权利要求1所述的细胞递送用载体，其以分散在水性溶剂中的微粒子存在。
(10)根据权利要求1所述的细胞递送用载体，其中，分散在水性溶剂中的粒子是平均粒径在1nm至300nm范围内的纳米粒子。
(11)根据权利要求1所述的细胞递送用载体，其中，细胞递送用载体是用于药物递送系统的细胞递送用载体。
(12)根据权利要求1所述的细胞递送用载体，其中，自噬相关基因和组织蛋白酶合成基因是选择下述表1，且在人类基因组组织的人类基因组命名委员会中登记的基因。
[表1]
(自噬相关基因)
ULK1、ULK2、ATG2A、ATG2B、ATG3、ATG4A、ATG4B、ATG4C、ATG4D、ATG5、BECN1、ATG7、GABARAP、GABARAPL1、GABARAPL2、MAP1LC3A、MAP1LC3B、MAP1LC3B2、MAP1LC3C、ATG9A、ATG9B、ATG10、ATG12、ATG13、ATG14、ATG16L1、ATG16L2、RB1CC1、WIPI1、WIPI2、SNX30、SNX4、ATG101、AMBRA1
(组织蛋白酶合成基因)
CTSA、CTSB、CTSC、CTSD、CTSD、CTSE、CTSF、CTSG、CTSH、CTSK、CTSL、CTSLP6、CTSO、CTSS、CTSV、CTSW、CTSZ
(13)根据权利要求1所述的细胞递送用载体，其中，同时激活自噬相关基因和组织蛋白酶合成基因的物质和含有刺激响应聚合物的分子中的任意一种或多种物质构成主要由脂质构成的膜分子的一部分。
(14)根据权利要求1所述的细胞递送用载体，其中，含有刺激响应聚合物的分子与脂质离子键合。
(15)根据权利要求1所述的细胞递送用载体，其中，含有刺激响应聚合物的分子包括以下三种刺激响应分子中的任一种或多种：温度、pH值和光。
(16)根据权利要求1所述的细胞递送用载体，其中，同时激活自噬相关基因和组织蛋白酶合成基因的物质选自维生素衍生物。
(17)根据权利要求1所述的细胞递送用载体，其中，同时激活自噬相关基因和组织蛋白酶合成基因的物质由选自以下表2的维生素衍生物组中的一种或多种物质构成。
[表2]
(抗坏血酸/胆甾醇酯)磷酸钠、磷酸抗坏血酸酯生育酚酯钾、生育酚亚油酸酯/油酸酯、2,4-二乙氧羰基泛酸乙酯、3-O-乙基抗坏血酸、3-O-十六烷基抗坏血酸、3-抗坏血酸羰基二肽-17、乙基抗坏血酸、抗坏血酸甲基硅烷醇果胶、抗坏血酸甘油二酯生育酚、抗坏血酸葡糖苷、抗坏血酸二酯生育酚、四己基癸醇基抗坏血酸酯、抗坏血酸多肽、甲基硅烷醇抗坏血酸、辛酰基2-甘油基抗坏血酸、辛酰基3-甘油基抗坏血酸、生育酚琥珀酸酯、二乙基抗坏血酸、二油基生育酚甲基硅烷醇、吡哆素二辛酸酯、二乙氧羰基泛酸乙酯、吡哆醇二棕榈酸酯、抗坏血酸硬脂酸酯、硫辛酸硬脂酸酯、硫辛酸棕榈酸酯、硫辛酸十七酸酯、四己基癸醇抗坏血酸酯、核黄素四丁酸酯、生育酚氧丙基三硅氧烷、生育酚葡糖苷、生育酚磷酸酯钠、托可索仑、吡哆素三己基癸酸酯、生育酚烟酸酯、视黄醇棕榈酸酯、维生素C丙二醇透明质酸、羟癸基泛醌、视黄醇丙酸酯、抗坏血酸生育酚马来酸酯、月桂亚氨基二丙酸生育酚磷酸酯盐二钠、生育酚亚油酸酯、视黄醇亚油酸酯、生育酚磷酸二钠、生育酚视黄酸酯、视黄醇视黄酸酯、生育酚乙酸酯、视黄醇乙酸酯
(18)根据权利要求1所述的细胞递送用载体，其中，脂质是选自以下表3的物质组的一种或多种物质。
[表3]
烷磺酸、十二-十五烷基硫酸三乙醇胺、烷基葡糖苷、异硬脂酸铝、异硬脂酸甘油酯、异硬脂酸山梨糖醇酐、异硬脂酸聚乙二醇、聚氧乙烯(20)失水山梨醇异硬脂酸酯、异硬脂酰乳酸、异棕榈酸二甘油酯、十一烷基-N-羧甲基咪唑甜菜碱、十一烷基羟乙基咪唑甜菜碱、十一烯酸锌、乙二醇脂肪酸酯、甘油芥酸酯、油基二甲基氧化胺、油基硫酸、油基硫酸三乙醇胺、油酸、油酸甘油酯、油酰肌氨酸、甲基油酰基牛磺酸、神经节苷脂、胆酸、表面活性蛋白及其盐类、红花油脂肪酸甘油酯、皂苷、甘油二花生酸酯、甘油二异硬脂酸酯、聚甘油二异硬脂酸酯-2-10、十四烷基聚氧丙烯聚氧乙烯醚、乙二醇二辛酸酯、二辛胺、乙二醇二油酸酯、聚乙二醇二油酸酯、乙二醇二硬脂酸酯、二硬脂酸甘油酯、乙二醇二硬脂酸、失水山梨醇二硬脂酸酯、聚(6-10)甘油二硬脂酸酯、聚乙二醇二硬脂酸酯、聚乙二醇二棕榈酸酯-150、十二烷基二甲基氧化胺、二肉豆蔻酸铝、二甲基硬脂胺、蔗糖脂肪酸酯、二甘醇二月桂酸酯、聚乙二醇二月桂酸酯、聚乙二醇二蓖麻油酸酯、硬脂基二羟乙基甜菜碱、甜菜碱硬脂酰二甲基氨基乙酸酯、硬脂二甲基氧化胺、硬脂基二甲基甜菜碱、硬脂基三甲基糖精铵、硬脂酸硫酸酯、硬脂酸、硬脂酰胺乙基二乙胺、硬脂酸二甘醇、硬脂酸三乙醇胺、硬脂酰基酰基谷氨酸、硬脂酰甲基牛磺酸、硬脂酰乳酸、棘孢青霉酸、鞘磷脂、鞘氨磷脂、磺基琥珀酸二辛酯、二月桂基磺基琥珀酸酯、山梨糖醇倍半异硬脂酸酯、倍半油酸甘油酯、倍半油酸二甘油酯、倍半油酸、山梨聚糖倍半硬脂酸酯、十六烷基三甲基糖精铵、十六烷基磷酸、十六烷基磷酸二乙醇胺、十六烷基硫酸、槐糖脂、脱氧胆酸、聚(10)甘油十油酸酯、十硬脂酸十甘油酯、聚(2)甘油四异硬脂酸酯、十四烷磺酸、三异硬脂酸二甘油酯、山梨糖醇三油酸酯、聚(10)甘油三油酸酯、聚氧乙烯(20)山梨醇三油酸酯、山梨醇三硬脂酸酯、聚(10)甘油三硬脂酸酯、聚氧乙烯(150)山梨醇三硬脂酸酯、聚氧乙烯(20)山梨醇三硬脂酸酯、聚氧乙烯脱水山梨糖醇三硬脂酸酯、三月桂胺、海藻糖脂、棕榈油脂肪酸酰-N-羧基乙酯-N-羟乙基二胺、棕榈油脂肪酸酰胺丙基甜菜碱、棕榈酸、异丙醇胺棕榈酸酯、聚乙二醇棕榈酸酯、棕榈酰甲基牛磺酸、蓖麻油脂肪酸、聚(10)甘油庚二酸酯、甘油山萮酸酯、聚(6-10)甘油五油酸酯、聚(6-10)甘油五油酸酯、五硬脂酸十甘油酯、多氧剂、聚氧乙烯(1)烷基(11,13,15)醚硫酸酯、聚氧乙烯(1)烷基(11,13,15)醚硫酸酯三乙醇胺、聚氧乙烯(1)聚氧丙烯(1,2,4,8)十六烷基醚、聚氧乙烯(10)烷基(12,13)醚、聚氧乙烯(10)烷基(12,13)醚磷酸酯、聚氧乙烯(10)聚氧丙烯(1,2,4,8)十六烷基醚、聚氧乙烯(10)氢化蓖麻油、聚氧乙烯(2)烷基(12,13)醚硫酸酯、聚氧乙烯(2)月桂基醚硫酸酯、聚氧乙烯(2,10,20)异硬脂醚、聚氧乙烯(20)芳基醚、聚氧乙烯(20)聚氧丙烯(1,2,4,8)十六烷基醚、聚氧乙烯(20)椰子脂肪酸脱水山梨糖醇、聚氧乙烯(20)氢化蓖麻油、聚氧乙烯(3)烷基(11-15)醚硫酸酯、聚氧乙烯(3)聚氧丙烯(34)硬脂醚、聚氧乙烯(3)肉豆蔻醚硫酸酯、聚氧乙烯(3,7,12)烷基(12-14)醚、聚氧乙烯(34)聚氧丙烯(23)硬脂醚、聚氧乙烯(4)聚氧丙烯(30)硬脂醚、聚氧乙烯(40)氢化蓖麻油、聚氧乙烯(5)聚氧丙烯(1,2,4,8)十六烷基醚、聚氧乙烯(50)氢化蓖麻油、聚氧乙烯(60)氢化蓖麻油、聚氧乙烯仲烷基醚、聚氧乙烯烷基醚磷酸酯、聚氧乙烯烷基苯基醚磷酸酯、聚氧乙烯烷基苯基醚磷酸酯三乙醇胺、聚氧乙烯异十六烷基醚、聚氧乙烯辛醚磷酸酯、聚氧乙烯辛基十二烷基醚、聚氧乙烯辛基苯基醚、聚氧乙烯油醚、聚氧乙烯油醚磷酸酯、聚氧乙烯油醚二乙醇胺磷酸酯等、聚氧乙烯油基十六烷基醚、聚氧乙烯二壬基苯基醚、聚氧乙烯硬脂酸醚、聚氧乙烯硬脂醚磷酸酯、聚氧乙烯十六烷基醚、聚氧乙烯十六烷基醚磷酸酯、聚氧乙烯鲸蜡硬脂醚、聚氧乙烯十三烷基醚、聚氧乙烯十三烷基醚乙酸酯、聚氧乙烯壬基苯基醚、聚氧乙烯蓖麻油、聚氧乙烯二十二烷基醚、聚氧乙烯聚氧丙烯十六烷基醚、聚氧乙烯聚氧丙烯月桂醚、聚氧乙烯肉豆蔻醚、聚氧乙烯椰子油烷基二甲胺氧化物等、聚氧乙烯月桂基醚磷酸酯、聚氧乙烯月桂基醚磷酸酯三乙醇胺、聚氧乙烯月桂基醚乙酸酯、聚氧乙烯月桂基醚硫酸酯、聚氧乙烯月桂基醚硫酸盐三乙醇胺、甘露糖基赤藓糖醇脂质、硫酸肉豆蔻酯、肉豆蔻酸、肉豆蔻酸异丙醇胺、肉豆蔻酸甘油酯、聚乙二醇肉豆蔻酸酯、肉豆蔻酰基谷氨酸、肉豆蔻酰肌氨酸、肉豆蔻酰甲基丙氨酸、山梨糖醇单异硬脂酸酯、聚甘油单异硬脂酸酯、单肉豆蔻酸甘油酯单异硬脂酸酯、山梨糖醇单油酸酯、聚甘油单油酸酯、聚乙二醇单油酸酯、乙二醇单硬脂酸酯、山梨糖醇单硬脂酸酯、聚甘油单硬脂酸酯、聚乙二醇单硬脂酸酯、聚氧乙烯脱水山梨糖醇单硬脂酸酯、山梨糖醇单棕榈酸酯、聚氧乙烯脱水山梨糖醇单棕榈酸酯、甘油单羟基硬脂酸酯、聚甘油单肉豆蔻酸酯、山梨糖醇单月桂酸酯、聚乙二醇单月桂酸酯、聚氧乙烯脱水山梨糖醇单月桂酸酯、单羊毛脂脂肪酸甘油酯、单牛脂肪酸甘油酯、椰子油烷基二甲基氨基乙酸甜菜碱、椰子油烷基二甲胺氧化物、椰子油烷基硫酸镁/三乙醇胺、椰油脂肪酸、椰子油脂肪酸/氢化牛油脂肪酸酰基谷氨酸、椰子油脂肪酸酰-N-羧基乙基-N-羟乙基乙二胺、椰子油脂肪酸酰基-N-羧基乙氧基乙基-N-羧乙基乙二胺、椰子油酰羟乙磺酸酯、椰子油脂肪酸肌氨酸三乙醇胺、椰子油脂肪酸蔗糖酯、椰子油脂肪酸脱水山梨糖醇、椰子油脂肪酸三乙醇胺、月桂亚氨基二丙酸、月桂亚氨基丙酸、月桂亚氨基三乙醇胺、月桂基二甲基氧化胺、月桂基羟基磺基甜菜碱、月桂醇磷酸酯、十二烷基硫酸酯、十二烷基硫酸铵、二乙醇胺月桂基硫酸酯、三乙醇胺月桂基硫酸酯、十二烷基硫酸镁、单乙醇胺月桂基硫酸酯、月桂酸、月桂酰胺丙基甜菜碱乙酸酯、月桂酸甘油酯、二甘醇月桂酸酯、月桂酸三乙醇胺、月桂酰基谷氨酸、月桂酰基谷氨酸三乙醇、月桂酰甲基丙氨酸三乙醇胺、鼠李糖脂、蓖麻醇酸酰胺丙基甜菜碱、蓖麻油酸甘油酯、亚油酸甘油酯、烷基(16，18)三甲基氯化铵、烷基(20-22)三甲基氯化铵、烷基(28)三甲基氯化铵、异硬脂基月桂基二甲基氯化铵、二(聚氧乙烯)油基甲基氯化铵(2EO)、烷基(12-15)二甲基氯化铵、二烷基(12-18)二甲基氯化铵、烷基(14-18)二甲基氯化铵、二椰油基二甲基氯化铵、双十八烷基二甲基氯化铵、氯化铵十六烷基二甲基铵、二聚氧乙烯硬脂甲基氯化铵、硬脂基二甲基苄基氯化铵、硬脂酰三甲基氯化铵、硬脂酰胆氨基甲酰基甲基氯化吡啶鎓、十六烷基三甲基氯化铵、氯化十六烷基吡啶、三(聚氧乙烯)硬脂基酸氯化铵(5EO)、苯扎氯铵、苄索氯铵、聚氧乙烯氯(1)聚氧丙烯(25)二乙基甲基铵、肉豆蔻基二甲基苄基氯化铵、甲基苄索氯铵、月桂基二甲基(乙基苄基)氯化铵、月桂基三甲基氯化铵、月桂基氯化吡啶鎓、N-(月桂酰氨基甲酰基甲基)-氯化吡啶鎓、烷基二氨基乙基甘氨酸盐酸盐、氢化牛油脂肪酸酰基谷氨酸、自乳化乙二醇单硬脂酸酯、自乳化单硬脂酸甘油酯、自乳化聚乙二醇单硬脂酸酯(2)、烷基异喹啉溴化物、硬脂基三甲基溴、十六烷基三甲基溴化铵、月桂基三甲基溴化铵、聚(6)甘油缩合蓖麻油酸酯、小麦胚芽油脂肪酸甘油酯、亲脂性单油酸甘油酯、亲脂性单硬脂酸甘油酯、氢化大豆溶血磷脂、氢化大豆磷脂、氢化大豆脂肪酸甘油酯、氢化蛋黄溶血磷脂酰胆碱、大豆溶血磷脂、大豆磷脂、饱和脂肪酸甘油酯、棉籽脂肪酸甘油酯、蛋黄卵磷脂及其钠、镁、钾、铝、锌、钙和三乙醇胺的盐类
(19)根据权利要求1所述的细胞递送用载体，其中，脂质是具有表面活性的脂质。
(20)根据权利要求1所述的细胞递送用载体，其中，具有表面活性的脂质是选自表4的一种或多种物质，并且在水溶液中形成层状结构。
[表4]
2-烷基-N-羧甲基-N-羟乙基咪唑啉甜菜碱、1，2-二油酰-sn-甘油-3-磷酰乙醇胺、14)天冬氨酸三乙醇胺、2-烷基-N-羧甲基-N-羟乙基咪唑啉甜菜碱、N-酰基天冬氨酸、N-酰基谷氨酸、N-酰基肌氨酸、N-酰基甲基丙氨酸、N-酰基甲基牛磺酸、N-硬脂酰二氢鞘氨醇、N-硬脂酰植物鞘氨醇、PEG-20植物甾醇、PEG-植物甾醇、酰基C12-酰基-N-甲基氨基酸、酰基氨基酸、酰基乳酸、乙酰乙基羧基甲基噻唑烷甲酸、氨基乙酸甜菜碱型两性表面活性剂、烷基(烯基)低聚糖苷、烷基酚聚乙二醇醚、烷氧基化甘油三酯、植物甾醇异硬脂酸酯、EmulgadeNLB、Emulgade PL68/50、Emulgade SEPF、Emulgade Sucro、Eumulgin B1、Eumulgin B2、Eumulgin B3、Eumulgin S21,己酰脯氨酸、甘油磷酸酯、甘油磷脂、葡萄糖醛酸、CremophorA25、Cremophor GS32、椰油酰胺MEA椰油酰丙氨酸三乙醇胺、椰油酰谷氨酸、椰油酰谷氨酸三乙醇胺、椰油酰甲基牛磺酸、琥珀酸酯、表面活性蛋白、赖氨酸二硬脂酰谷氨酸、双磷脂酰甘油(心磷脂)、赖氨酸二肉豆蔻酰谷氨酸、赖氨酸二月桂酰谷氨酸、二亚油酰谷氨酸赖氨酸、硬脂酰谷氨酸、二辛基十二烷基硬脂酰谷氨酸、鞘氨醇、神经酰胺、神经酰胺1-膦酸、神经酰胺1-磷酸、神经酰胺氨基乙基膦酸、脑苷脂、山梨糖醇酯、大豆甾醇、三乙醇胺盐、棕榈仁油脂肪酸酰胺丙基甜菜碱液、棕榈脂肪酸谷氨酸、棕榈酰天冬氨酸二三乙醇胺、双(Nε-月桂酰-L-赖氨酸)癸二酰胺、羟基硬脂基植物鞘氨醇、聚氧乙烯甘油基焦谷氨酸异硬脂酸酯、聚氧乙烯氢化蓖麻油单焦谷氨酸单异硬脂酸酯、甘油单焦谷氨酸单油酸酯、植物甾醇、植物鞘氨醇、六甘油单硬脂酸酯、磷脂酰肌醇、磷脂酰肌醇多磷酸盐、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰甘油、磷脂酰胆碱、磷脂酰胆碱(卵磷脂)、磷脂酰丝氨酸、磷脂酸、多元醇脂肪酸酯、聚氧乙烯烷基醚乙酸、聚氧乙烯二硬脂酸酯、聚氧乙烯脱水山梨糖醇三硬脂酸酯、聚氧乙烯脱水山梨糖醇脂肪酸酯、聚氧乙烯甲基葡萄糖二硬脂酸甲酯、聚氧乙烯单硬脂酸酯、聚氧乙烯月桂基醚、聚氧乙烯氢化蓖麻油、聚氧乙烯脂肪酸胺硫酸酯、聚季铵盐-10、聚季铵盐-51、聚季铵盐-61、聚季铵盐-64、聚季铵盐-65、聚季铵盐-7、肉豆蔻酰谷氨酸、肉豆蔻酰谷氨酸钠、肉豆蔻酰基甲基氨基丙酸己基癸酯、肉豆蔻酰甲基牛磺酸、聚氧乙烯山梨糖醇单油酸酯、椰子油烷基甜菜碱液、椰子油脂肪酸N-甲基乙醇酰胺、椰子脂肪酸酰基甘氨酸、椰子油脂肪酸酰基谷氨酸、椰子脂肪酸酰基谷氨酸三乙醇胺、椰子油脂肪酸酰胺丙基甜菜碱、椰子油脂肪酸甘油酯、椰子油脂肪酸谷氨酸、椰子油脂肪酸肌氨酸、椰子脂肪酸二乙醇酰胺(椰油酰胺DEA)、椰子油脂肪酸甲基丙氨酸、椰子脂肪酸甲基乙醇酰胺(椰油酰胺甲基MEA)、椰子油脂肪酸甲基牛磺酸、子油脂肪酸单乙醇酰胺(椰油酰胺MEA)、月桂酰胺丙基甜菜碱月桂氨基二乙酸液、月桂基二氨基乙基甘氨酸、月桂基二甲氨基乙酸甜菜碱、月桂酰胺丙基甜菜碱、醋酸月桂基醚、硫酸月桂基醚、月桂酰天冬氨酸、月桂酰谷氨酸、月桂酰谷氨酸POE(2)辛基十二烷基醚二酯、月桂酰谷氨酸POE(2)硬脂醚二酯、二(辛基十二烷基/植物甾醇/山嵛基)月桂酰谷氨酸、植物甾醇/辛基十二烷基月桂酰谷氨酸、二己基癸基月桂酰谷氨酸盐、月桂酰谷氨酸三乙醇胺、月桂酰谷氨酸聚氧乙烯辛基十二烷基醚二酯、月桂酰谷氨酸聚氧乙烯硬脂醚二酯、甲基丙氨酸月桂酰谷氨酸、月桂酰肌氨酸、月桂酰肌氨酸三乙醇胺、月桂酰甲基丙氨酸、月桂酰甲基甘氨酸、月桂酰甲基牛磺酸、月桂酰单乙醇酰胺琥珀酸、Lanette WAXAO、溶血磷脂酰肌醇、溶血磷脂酰乙醇胺、溶血磷脂酰甘油、溶血磷脂酰胆碱、溶血磷脂酰丝氨酸、溶血磷脂酸、磷脂磷酸甘油、卵磷脂、开环刺孢青霉酸、氢化椰子脂肪酸甘油硫酸、脂肪胺聚乙二醇醚、脂肪醇聚乙二醇醚、脂肪酸N-烷基葡糖酰胺、脂肪酸酰胺聚乙二醇醚、脂肪酸链烷醇酰胺、脂肪酸链烷醇酰胺醚羧酸、脂肪酸链烷醇酰胺硫酸盐、脂肪酸甘油酯硫酸盐、脂肪酸聚乙二醇酯、氢化环状溶血磷脂酸、氢化大豆磷脂、氢化蛋黄磷脂、支链脂肪酸(C12-31)胆固醇、以及其钠、镁、钾、铝、锌、钙、三乙醇胺的盐
(21)根据权利要求1所述的细胞递送用载体，其中，含有刺激响应聚合物的分子具有包含选自表5中的温度刺激响应物质、pH刺激响应物质和光刺激响应物质中的一种或多种单体的直链或者支链的聚合物结构的结构。
[表5]
(温度刺激响应物质)
(聚氧乙烯辛基苯基醚)丙烯酸酯、(聚氧乙烯辛基苯基醚)甲基丙烯酸酯、(聚氧乙烯壬基苯基醚)丙烯酸酯、(聚氧乙烯壬基苯基醚)甲基丙烯酸酯、(聚氧乙烯月桂基醚)丙烯酸酯、(聚氧乙烯月桂基醚)甲基丙烯酸酯、1,2,4,5-四(N,N-二硫代氨基甲基)苯、1,3,5-三(溴甲基)苯、2-正丙基-2-噁唑啉、2-N,N-二甲基氨基乙基丙烯酸酯、2-N,N-二甲基氨基乙基甲基丙烯酸酯DMAEMA、2-氨基-2-羟甲基-1,3-丙二醇、2-氨基-2-羟甲基-1,3-丙二醇(Tris)、2-氨基-2-羟甲基-1,3-丙二醇盐酸盐、丙烯酸2-羟基-3-苯氧基丙酯、丙烯酸2-羟丁酯、甲基丙烯酸2-羟丁酯、丙烯酸2-羟丙酯、甲基丙烯酸2-羟丙酯、3,5-三(N,N-二硫代氨基甲酰基甲基)苯、3-N,N-二甲基氨基丙基丙烯酰胺、N-丙烯酰天冬酰胺、N-丙烯酰甘氨酰胺、N-丙烯酰谷氨酰胺、N-甲基丙烯酰基天冬酰胺、N,N-二甲基甲基丙烯酰胺、N,N-二甲基丙烯酰胺、N,N-亚甲基双丙烯酰胺、N-乙基甲基丙烯酰胺、N,N-乙基甲基酰胺、N,N-乙基甲基丙烯酰胺、N,N-二烷基-二硫代氨基甲酰基甲基、N,N-二烷基取代的丙烯酰胺衍生物、N,N-二烷基取代的甲基丙烯酰胺衍生物、N,N-二乙基丙烯酰胺、N,N-二乙基酰胺、N,N-二乙基甲基丙烯酰胺、N,N-二硫代氨基甲酸铵(钠N,N-二硫代氨基甲酸)、N,N-二甲基丙烯酰胺、N,N-二甲基甲基丙烯酰胺、N,N-丙基丙烯酰胺、N,N-丙基丙烯酰胺、N,N-丙基甲基丙烯酰胺、N-丙烯酰基哌啶、N-丙烯酰基吗啉、N-烷基丙烯酰胺、N-烷基甲基丙烯酰胺、N-烷基取代的丙烯酰胺、N-烷基取代的甲基丙烯酰胺、N-丙二烯基邻苯二甲酰亚胺、N-异丙基甲基丙烯酰胺、N-乙基丙烯酰胺、N-乙基甲基丙烯酰胺、N-乙氧基乙基丙烯酰胺、N-乙氧基乙基酰胺、N-乙氧基乙基甲基丙烯酰胺、N-环丙基丙烯酰胺、N-环丙基酰胺、N-环丙基甲基丙烯酰胺、N-四氢糠基丙烯酰胺、N-四氢糠基甲基丙烯酰胺、N-生物素-N′-甲基丙烯酰三亚甲基酰胺、N-乙烯基丙烯酰胺、N-乙烯基烷基丙烯酰胺、N-乙烯基甲基丙烯酰胺、N-丙基丙烯酰胺、N-甲基丙烯酰基哌啶、N-或N,N-二烷基取代的甲基丙烯酰胺衍生物、s-丁基丙烯酰胺、t-丁基丙烯酰胺、丙烯酰基甘氨酰胺、丙烯酰基肌氨酸酰胺、丙烯酰基哌啶甲酰胺、丙烯酰基甲基尿嘧啶、乙酰基丙烯酰胺、乙基异丙基丙烯酰胺、乙二醇/丙二醇共聚物、乙二醇烯丙二烯基甲基醚、氧乙烯丙烯酸酯衍生物、氧乙烯脱水山梨糖醇月桂酸酯、氧乙烯甲基丙烯酸酯衍生物、氧乙烯月桂胺、侧链中具有低聚乙二醇的丙烯酸酯、二异丙基丙烯酰胺、二乙基丙烯酰胺、二乙基氨基丙烯酸酯、二乙基氨基甲基丙烯酸酯、二乙二醇丙二烯基甲基醚、二丁基丙烯酰胺、二丙基丙烯酰胺、二甲基丙烯酰胺、二甲基氨基丙烯酰胺、二甲基氨基丙烯酸酯、二甲胺基丙基丙烯酰胺、二甲基氨基丙基甲基丙烯酰胺、二甲基氨基甲基丙烯酰胺、二甲基氨基甲基丙烯酸酯、钠N,N-二硫代氨基甲酸、六(N,N-二硫代氨基甲酰基甲基)苯、六(溴甲基)苯、甲基丙烯酰胺/N-乙酰基丙烯酰胺共聚物、以及其钠、镁、钾、铝、锌、钙、三乙醇胺的盐及其衍生物
(pH刺激响应物质)
葡糖胺、壳聚糖、2-乙氧基乙基乙烯基醚、N-烷基丙烯酰胺/聚丙烯酸、N-乙烯基烷基丙烯酰胺、4-(2-乙烯基氧基乙氧基)苯甲酸、6-(2-乙烯基氧基乙氧基)己酸、6-(乙烯氧基)己酸、异丁基乙烯基醚及其碱金属盐及其衍生物、以及钠、镁、钾、铝、锌、钙、三乙醇胺的盐及其衍生物
(光刺激响应物质)
N-烷基丙烯酰胺、n-(4-苯基偶氮苯基)丙烯酰胺、6-[4-(4-吡啶偶氮)苯氧基]六甲基丙烯酸酯、N-乙烯基烷基丙烯酰胺、4-[2-(乙烯氧基)乙氧基]偶氮苯、2-(2-乙氧基)乙氧基乙基乙烯基醚、以及钠、镁、钾、铝、锌、钙、三乙醇胺的盐及其衍生物
(22)根据权利要求1所述的细胞递送用载体，其中，乳化稳定剂为选自表6中的多元醇、合成抗氧化剂、紫外线吸收剂、防腐剂中的一种或多种的成分。
[表6]
(多元醇)
乙二醇、二甘醇、聚乙二醇、丙二醇、聚丙二醇、丙三醇、二甘油、聚丙三醇、1,3-丁二醇、三乙甘醇、二丙二醇、3-甲基-1,3-丁二醇、1,2-戊二醇、1,4-戊二醇、1,5-戊二醇、2,4-戊二醇、2-甲基-2,4-戊二醇、3-甲基-1,5-戊二醇、1,2-己二醇、1,6-己二醇、丙三醇、二甘油、三甘油、聚丙三醇、甲基丁二醇、丁二醇、异戊二醇、聚乙二醇、戊二醇、己二醇、丙二醇、二丙二醇、聚丙二醇、乙二醇、二甘醇、新戊二醇、聚乙二醇、山梨醇、木糖醇、吡咯烷酮羧酸钠、透明质酸、卡拉胶、海藻酸、琼脂、褐藻素、果胶、刺槐豆胶、黄原胶、黄蓍胶、瓜尔胶、羧甲基纤维素、羟乙基纤维素、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、羧基乙烯聚合物、丙烯酸/甲基丙烯酸共聚物、聚谷氨酸、海藻酸钠、卡拉胶、琼脂、红藻胶、瓜尔胶、榅桲籽、魔芋甘露聚糖、罗望子胶、塔拉胶、糊精、淀粉、刺槐豆胶、阿拉伯胶、印度树胶、刺梧桐胶、黄蓍胶、阿拉伯半乳聚糖、果胶、桲果胶、壳聚糖、淀粉、凝胶多糖、黄原胶、结冷胶、环糊精、葡聚糖、普鲁兰多糖、微晶纤维素、甲基纤维素、乙基纤维素、羟乙基纤维素、羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、羧甲基纤维素、羧基淀粉、阳离子纤维素、淀粉磷酸酯、阳离子瓜尔胶、羧甲基/羟丙基瓜尔胶、羟丙基瓜尔胶、白蛋白、酪蛋白、明胶、聚丙烯酸钠、聚丙烯酸酰胺、羧基乙烯聚合物、聚乙烯亚胺、高聚合聚乙二醇、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙烯基醚、聚丙烯酰胺、丙烯酸共聚物、甲基丙烯酸共聚物、马来酸共聚物、乙烯基吡啶共聚物、乙烯/丙烯酸共聚物、乙烯基吡咯烷酮系聚合物、乙烯醇/乙烯基吡咯烷酮共聚物、氮取代的丙烯酰胺系聚合物、氨基改性的有机硅、阳离子聚合物、二甲基丙烯酰铵系聚合物、丙烯酸系阴离子聚合物、甲基丙烯酸系阴离子聚合物、改性有机硅、丙烯酸甲基丙烯酸烷基酯(C10-30)共聚物、聚氧乙烯/聚氧丙烯共聚物
(合成抗氧化剂)
丁基羟基苯甲醚、丁基羟基甲苯、没食子酸丙酯、异抗坏血酸、异抗坏血酸钠、对羟基苯甲醚、没食子酸辛酯
(紫外线吸收剂)
对氨基苯甲酸、对氨基苯甲酸乙酯、对氨基苯甲酸甘油酯、对二甲基氨基苯甲酸戊酯、对二甲基氨基苯甲酸2-乙基己酯等对氨基苯甲酸衍生物、肉桂酸苄酯、二对甲氧基肉桂酸-2-乙基己酸甘油酯、2，4-二异丙基肉桂酸甲酯、2,4-二异丙基肉桂酸酯、对甲氧基肉桂酸钾、对甲氧基肉桂酸钠、对甲氧基肉桂酸异丙酯、对甲氧基肉桂酸2-乙基乙酯、对甲氧基肉桂酸2-乙氧基乙酯、对乙氧基肉桂酸乙酯等肉桂酸衍生物，尿刊酸、尿刊酸乙酯等尿刊酸衍生物、2,4-二羟基二苯甲酮、2,2',4,4'-四羟基二苯甲酮、2-羟基-4-甲氧基-5-磺酸二苯甲酮、2-羟基-4-甲氧基二苯甲酮-5-磺酸、2-羟基-4-甲氧基二苯甲酮、2,2'-二羟基-4,4'-二甲氧基二苯甲酮、2,2'-二羟基-4,4'-二甲氧基-5-磺酸二苯甲酮钠等二苯甲酮衍生物、水杨酸乙二醇、水杨酸-2-乙基己酯、水杨酸苯酯、水杨酸苄酯、水杨酸对叔丁基苯酯、胡莫柳酯、水杨酸-3,3,5-三甲基环己酯等水杨酸衍生物、2-(2'-羟基-5'-甲氧基苯基)苯并三氮唑、4-叔丁基-4'-甲氧基苯甲酰甲烷
(防腐剂)
防腐剂：苯甲酸、苯甲酸钠、十一碳烯酸、水杨酸、山梨酸、山梨酸钾、脱氢乙酸、脱氢乙酸钠、对羟基苯甲酸异丁酯、对羟基苯甲酸异丙酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丁酯、对羟基苯甲酸丙酯、对羟基苯甲酸苄酯、对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸甲酯钠、苯氧乙醇、光敏剂101、光敏剂201、光敏剂401、萝卜提取物、葡萄籽提取物
(23)根据权利要求1所述的细胞递送用载体，其中，包含选自表7的物质组中的一种或多种化学物质被共价键化学修饰的刺激响应聚合物。
[表7]
丙烯酰胺、丙烯酸类树脂、丙烯酸、丙烯酸的金属盐、氨基、精氨酸、烷基丙烯酸酯、尿嘧啶丙烯酸酯、乙二醇、乙基丙烯酰胺、乙醇、乙基丁基丙烯酰胺、环氧乙烷、乙二醇、乙二醇衍生物、氧化烯、氧乙烯、氧四亚甲基、氧丁烯、氧丙烯、氧己烯、鸟氨酸、凝胶多糖、侧链上具有阳离子性基团的聚氨基酸、丙三醇、苯乙烯、纤维素、硫酸葡聚糖、四亚甲基二醇、色氨酸、透明质酸、生物素丙烯酸酯、组氨酸、丙烯酸羟乙酯、甲基丙烯酸羟乙酯、羟丙基纤维素、羟基、乙烯基烷基醚、乙烯基醇、乙烯基醇部分乙酰化物、乙烯基醚衍生物、乙烯基吡咯烷酮、乙烯基甲醚、丁基丙烯酰胺、丁二醇、丙醇、丙基丁基丙烯酰胺、丙二醇、己基丙烯酰胺、己二醇、肝素、戊基丙烯酰胺、聚丙烯酸、聚精氨酸、聚海藻酸、聚乙烯亚胺、聚氧乙烯、聚氧基亚丙基、聚鸟氨酸、聚苯乙烯磺酸、聚色氨酸、聚组氨酸、聚甲基丙烯酸、聚赖氨酸、聚磷酸、甲基丙烯酰胺、甲基丙烯酰胺化合物、甲基丙烯酸肌氨酸酰胺、甲基丙烯酸、甲基丙烯酸酯、甲基丙烯酸的金属盐、甲基二元醇基、甲基、甲基丙烯酰胺、甲醇基、甲基异丙基丙烯酰胺、甲基乙基丙烯酰胺、甲基丙基丙烯酰胺、甲氧基丙烯酸乙酯、甲氧基丙烯酸乙酯、甲氧基丙烯酸甲基丙烯酸酯、赖氨酸、核糖腺苷酸、核酸、硫酸化多糖类
(24)根据权利要求1所述的细胞递送用载体，其中，有效成分包含选自表8一种或多种物质。
[表8]
吖啶、抗坏血酸、抗坏血酸钙、抗坏血酸钠、抗坏血酸葡糖苷、抗坏血酸二硬脂酸、抗坏血酸二棕榈酸、抗坏血酸硬脂酸、抗坏血酸棕榈酸、抗坏血酸磷酸镁、抗坏血酸磷酸镁锌、抗坏血酸磷酸钠、抗坏血酸磷酸钠棕榈酸酯、虾青素、乙酰半胱氨酸、氨基烷基苯酮、氨基乙酰丙酸、花药黄质、花色苷、异黄酮、铱、内含肽、尿卟啉原、尿卟啉、曙红Y、鞣花酸、异抗坏血酸、异抗坏血酸、儿茶素、类胡萝卜素、胡萝卜素、角黄素、叶黄素、香豆素、姜黄素、谷胱甘肽、谷氨酰半胱氨酸、绿原酸、叶绿素、粪卟啉、粪卟啉原、矢车菊色素、氰钴胺、半胱氨酸、细胞色素C、二氢硫辛酸、芪、玉米黄质、半醌、硫醇蛋白、硫壳聚糖、四环素、四苯基卟啉、脱氢抗坏血酸、花翠素、生育三烯酚、生育酚、红紫素、氢醌、紫黄质、维生素A、羟甲基胆色烷、高铁血红素、岩藻黄质、酞菁、富勒烯、原花青素、原矢车菊色素、原卟啉原、原卟啉、维生素原A、芍药色素、矮牵牛素、血红素、血红素、血红素、血红蛋白、血色素、天竺葵色素、维替泊芬、苯醌、二苯甲酮、卟啉、胆色素原、胆色素原、原卟啉、卟啉、镁、锦葵色素、金属硫蛋白、金属蛋白酶、亚甲基蓝、泛素、泛醇、泛醌、泛半醌、木脂素、番茄红素、核黄素、芦丁、叶黄素、红荧烯、视黄醛、视黄酸、视黄醇、玫瑰红、锌、铁、铜、α-羟基苯乙酮、α-硫辛酸、α-胡萝卜素、α-生育三烯酚、α-生育酚、β-硫辛酸、β-胡萝卜素、β-生育三烯酚、β-生育酚、γ-胡萝卜素、γ-生育三烯酚、γ-生育酚、δ-生育三烯酚、δ-生育酚盐、δ-胡萝卜素、及其钠、镁、钾、铝、锌、钙、三乙醇胺的盐及其衍生物(25)根据权利要求1所述的细胞递送用载体，其中，细胞递送用载体的用途是选自药品、准药品、化妆品、补充剂、兽药和杂货中的一种。
(26)根据权利要求1所述的细胞递送用载体，其中，细胞递送用载体的制型的剂型为选自以下的一种或多种：外用剂、口腔剂、栓剂、口服剂、健康饮料、泥敷剂、面膜剂、喷雾剂、注射剂、调味剂、液剂、软膏剂、气雾剂、粉末、压制剂、膏剂、外用喷洒剂、散剂、颗粒剂、片剂、软胶囊剂、丸剂、板状剂型、含片剂、糊剂、固体剂、湿润剂、胶粘剂。
(27)根据权利要求1所述的细胞递送用载体，其中，细胞递送用载体的功效或效果是选自表9的一种或多种。
[表9]
清洁皮肤、抑制痱子、冻伤、皲裂、痤疮、皮疹，以及防止皮肤粗糙。具有对抗尿布(尿不湿)、皮疹、疮和胯部疮的效果。具有对干性皮肤、跌打损伤、肩膀僵硬、皱纹、神经痛、湿疹、冻疮、痔疮、手脚冰凉、腰痛、风湿、疲劳恢复、皮肤开裂、皲裂、产前产后的手脚冰凉、粉刺的改善效果。防止瘙痒。防止狐臭(腋臭)、抑制汗臭、止汗。具有生发，防止头发稀疏、脱发、促进头发生长、抑制头皮屑、病后或产后脱发，护发的效果。抑制口臭、改善情绪焦虑。美白牙齿、净化口腔、清新口气、预防牙周炎(牙槽脓肿)、预防牙龈炎、预防牙石沉积、预防龋齿,预防龋齿的发生和发展、防止口臭、去除烟焦油。脱毛效果。染发、脱色、脱染的效果。对晒伤/雪花斑、瑕疵、皱纹、细纹、法令纹、雀斑、皮肤粗糙、干燥的改善。紧致肌肤。清洁皮肤。调理皮肤。皮肤的清洁、杀菌、消毒。防止体臭、汗臭和粉刺。保持皮肤健康。滋润肌肤。清洁皮肤。改善油性肤质。保护皮肤、防止干燥。防止头发和头皮汗臭、清洁头发和头皮、保持健康、软化皮肤、防止头发分裂、断发和分叉。补充并保持头发的水分和油脂含量
(28)根据权利要求15所述的细胞递送用载体，其为效果发挥温度为45℃至70℃的温度刺激响应聚合物。
本发明为一种细胞递送用载体，其由一种或多种物质分别选自以下三组的混合物构成：含有刺激响应聚合物的分子；同时激活自噬相关基因和组织蛋白酶合成基因的物质；以及除所述两种物质以外，含有8个以上碳连续结合而成的烃链的脂质，通过该结构，提高了细胞递送用载体的抗氧化活性、细胞内吸收能力和细胞内崩解性，细胞递送用载体内物质的细胞内递送效率优异，并且确保了稳定性和安全性。
本发明的细胞递送用载体具有上述性能的原因如下。即，在本发明的实施例中明确可知，具有ATG-CTS活性的物质，特别是维生素衍生物的稳定性、表面活性力不一定与细胞递送率相关；以及细胞吸收率和ATG-CTS与洁净相关。
维生素类是人体细胞的重要营养物质，且细胞内浓度高于血液浓度，因此，其在第一阶段粘附于某些细胞表面的维生素特异性受体，在第二阶段通过特异性通道蛋白等主动转运。在稳定的维生素衍生物中，虽然粘附于维生素受体，但无法进行第二阶段的通过特异性通道蛋白等的主动转运。即，细胞表面的维生素受体识别维生素分子的一部分，仅粘附该部分维生素分子，但在第二阶段的特异性通道蛋白中，用于识别所有维生素分子，将其摄取到蛋白内使其通过门来进行主动转运的大部分维生素衍生物以不主动转运的状态粘附并停留于细胞表面。当暂时维持该状态时，通过频繁进行的摄取细胞外液的内吞即、胞饮作用(细胞胞饮)，在与受体结合的状态下被摄取到细胞内，形成充满细胞外液的囊泡(内体)。在细胞中与维生素衍生物结合的维生素受体回收、分解、并用于再生新的维生素受体。因此，内体激活CTS形成溶酶体，与之融合来消化囊泡内的维生素衍生物，但一部分衍生物直接分解并释放到细胞内。该异物通过某些系统被自噬系统识别，ATG基因激活形成溶酶体，激活CTS并形成溶酶体，与之融合分解囊泡内的维生素衍生物。这样，摄取到细胞内的维生素衍生物最终成为细胞可利用的维生素。因此，通过向本发明的细胞递送用载体中添加具有该ATG-CTS活性的维生素衍生物，能够提高细胞向细胞递送用载体的粘附力，并且促进细胞内摄取。
发明效果
即，本发明的细胞递送用载体能够提高细胞向细胞递送用载体的粘附力，促进有用成分在细胞内的摄取，并且以高效率将内含物递送至目标组织。进一步地，在表面修饰含有刺激响应聚合物的分子，具体地，在温度刺激响应聚合物、光刺激响应聚合物修饰中，通过升温、光照射使聚合物成为疏水性，从而形成的水合层减少，由此细胞递送用载体膜破坏，细胞递送用载体包含物质释放到细胞内，能够进一步提高递送率。由此，能够实现对生物组织的非常高的药物递送效率，并且提高药品、化妆品、营养补充产品等的递送效率，因此，能够实现大幅度的成本降低，成为产业上极其有用的技术。
具体实施方式
本发明的细胞递送用载体的作用机理示于图1。
图1说明了本发明的细胞输送载体的效果。在图1中，O代表细胞膜，O的上侧是细胞外，O的下侧是细胞内。A是与本发明的细胞递送载体结合的含有刺激性反应的聚合物分子。活性成分用a表示，并结合在细胞传递载体中。在a中，有一个长的尾巴状结构，代表刺激反应性聚合物，它通过表面活性脂质(灰色椭圆)附着在细胞传递载体的膜上。C是自噬相关基因和蛋白酶合成基因的同时激活剂，如维生素衍生物，由于其两亲性，它也与细胞输送载体的膜相连。A是细胞输送的载体。这样，维生素衍生物C与细胞膜表面的维生素受体E结合，但由于分子形状与原来的维生素不同，它不能通过维生素运输通道运输，而是通过内吞作用从细胞膜表面B)被吸收到细胞内，在那里被压抑并形成一个小袋C)由于温度和光线等外部刺激使细胞表面的刺激反应性聚合物收缩，内体载体变得疏水，膜的平行性容易被打破，活性成分被释放到内体。另一方面，带有消化酶的溶酶体(黑色菱形)在F)中显示。d)溶酶体与内体融合，并将消化酶转移到内体，在那里降解(消化)E)中内体的分子。F)最后，内体被破坏，活性成分(黑色▲)、维生素(黑色椭圆)和未消化的维生素衍生物(黄色)被释放到细胞中。未消化的维生素衍生物进一步激活自噬系统，被自噬体消化，最后转化为维生素供细胞使用。这样一来，自噬相关基因和参与溶酶体合成的蛋白酶合成基因同时被激活。如上所述，有专家指出，一些自噬相关基因和蛋白酶合成基因也参与溶酶体的形成，这进一步补充了发明人的上述解释。
在pH刺激响应聚合物中，认为是由于摄取到细胞内后的内体、溶酶体等囊泡中质子海绵效应的参与而发挥的作用。质子海绵效应是指，在弱酸性环境下质子化的化合物被摄取到囊泡内时，质子化抑制囊泡内的pH的降低，大量质子、氯离子流入囊泡内，由此囊泡内部的渗透压升高，引起囊泡肿胀、破裂的现象。即，随着pH的降低而吸收大量质子的效应，例如，具有大量氨基的阳离子高分子如聚葡糖胺结构的壳聚糖显示出该效应。这种假设是由Behr等人作为一种帮助在特别是核酸递送药物系统中的内体释放的方法而提出的。在由内吞作用产生的内体膜中存在称为V-ATPase的质子泵，向内体转运质子直到内体中的pH达到约5至6。具有这种质子海绵效应的阳离子高分子的缓冲范围为pH5至7，随着内体中的pH的降低，吸收大量的质子。由此，抑制内体的pH的降低，需要更多的质子流入来降低pH。此外，阴离子也流入以维持内体内外的电荷平衡，且盐浓度和渗透压升高。为了消除这种高渗透压，进一步地，大量的水流入内体内，膜无法承受体积而塌陷，从而促进细胞递送用载体的包含物的内体释放。可用于本发明的、在细胞表面中由维生素受体识别并结合的维生素衍生物可选自从上述第0057段的表2所示的维生素衍生物组中选择的一种或多种物质，通过我们的筛选已经证实，这些衍生物与常规的维生素及其衍生物不同，不通过维生素转运通道转运，而是与维生素转运通道结合，残留在细胞膜表面上并被内吞。
使用结构上具有抗坏血酸-2-磷酸酯的三种不同维生素衍生物，即、抗坏血酸磷酸三钠(APS)、抗坏血酸棕榈酸酯磷酸酯三钠(APPS)和磷酸抗坏血酸酯生育酚钾(EPC)的混合物在人表皮成纤维细胞中培养后进行使用DNA芯片的综合分析，并与无添加对照中的RNA量进行比较，发现该混合物激活许多自噬相关基因(ATG)和溶酶体定位蛋白酶即组织蛋白酶(CTS)的基因。于是，对84种不同的维生素衍生物进行了研究，并进行与上述相同的评价，发现有的衍生物活性高，有的衍生物活性低，本发明人想出将高活性维生素衍生物应用于本发明的细胞递送用载体。本发明人进行了ATG-CTS活性不同的维生素衍生物的细胞递送用载体对细胞摄取的作用、临床试验，发现ATG-CTS活性与细胞递送率存在相关性。进一步地，对载体的构成要素即刺激响应物质、脂质、表面活性剂、稳定剂的组合进行了研究，进一步地，进行了稳定性试验、载体的稳定所必需的表面活性试验等，缩小了可应用于实现本发明的高细胞递送率的细胞递送用载体的物质的范围。
已知聚乙烯亚胺(PEI)、聚酰胺胺树枝状聚合物具有质子海绵效应，广泛用于提高基因转移的效率。需要高缓冲能力来表现出质子海绵效应，但近年来报道了，在内体内的pH范围(4.5至7)中，壳聚糖的缓冲能力优于PEI。本发明的细胞递送用载体必须由至少一种或多种物质分别选自以下三组的混合物构成：1)同时激活自噬相关基因和组织蛋白酶合成基因的物质、2)含有刺激响应聚合物的分子、以及3)含有8个以上连续键合的烃链的脂质。可以直接使用，但进一步地，除了上述以外，为了提高细胞递送用载体的稳定性，优选选自现有的乳化稳定剂。
作为可用于本发明的乳化稳定剂，可以选择选自上述表6的多元醇、合成抗氧化剂、紫外线吸收剂和防腐剂中的一种或多种组分，优选地，一种或多种物质分别选自多元醇、合成抗氧化剂、紫外线吸收剂和防腐剂。这些稳定剂可以以相对于本发明的细胞递送用载体全体0.01至10重量％的范围添加。当以高于此的比例添加时，毒性增加，而当以低于此比例时，难以发挥稳定性的效果。
本发明的同时激活自噬相关基因和组织蛋白酶合成基因的物质中的自噬相关基因和组织蛋白酶合成基因是登记于国际人类基因组组织的人类基因组命名委员会(HGNC)的基因，详情示于表10和表11。以下，在本发明中，仅使用了HGNC的批准号，但由于存在多个以前的符号、同义词，因此将它们整理在下表中。已经证实，以前的符号、同义词中名称、符号不同的基因也与HGNC的批准号的基因相同。
本发明的细胞递送用载体必须使用同时激活下表10中的自噬相关基因和下表11中的组织蛋白酶合成基因的物质，其最优选的例子为限定的维生素衍生物。
自噬相关基因(ATG)
[表10]
Figure BDA0003798536610000131
组织蛋白酶合成基因(组织蛋白酶)
[表11]
Figure BDA0003798536610000141
在本发明的同时激活物质中，在上述表10和11所记载的自噬相关基因和组织蛋白酶合成基因的所有基因中，仅可以使用能够激活来自表10和11各表中的一种或多种基因的物质，特别是，同时激活所述表所记载的自噬相关基因和组织蛋白酶合成基因中的各一种基因的物质是合适的。作为本发明的基因激活的评价方法，可以使用所有常用的DNA和相应的RNA基因表达分析方法，可以使用但不限于：实时PCR、数字PCR、下一代测序、微阵列分析、桑格测序、基因定量RNA测定、激光捕获显微切割等。第0057段的表1仅记载了上述表10和表11所记载的自噬相关基因的HGNC的批准符号，但也可以使用人类基因组组织的人类基因组命名委员会(HGNC)的ID、HGNC的批准名、以前的符号、同义词。
作为本发明可以使用的、含有8个以上连续键合的烃链的脂质是最理想的，进一步地，可以使用任何一种具有表面活性作用的表面活性物质。含有8个以上碳连续键合的烃链的脂质进一步提高了细胞递送用载体的稳定性。当碳为7个以下时，会降低细胞递送用载体的稳定性，并且当碳为30以上时，也同样会降低细胞递送用载体的稳定性。进一步地，为了提高细胞递送用载体的稳定性，优选脂质和具有表面活性作用的物质两者同时存在。即，本发明的细胞递送用载体的主要部分由脂质和具有表面活性作用的物质构成，进一步地，最理想的是，在该乳化膜中，脂质、具有表面活性作用的物质以及含有刺激响应聚合物的分子排列为如图2或图3所示，与膜的构成单位或表面离子结合。权利要求13所示的本发明的细胞递送用载体可以是，同时激活自噬相关基因和组织蛋白酶合基因的物质和含有刺激响应聚合物的分子中的任一种或多种物质构成主要由脂质构成的膜分子的一部分的权利要求1所述的细胞递送用载体，作为典型的结构可以使用图2中的结构，但不限于此。
图2为本发明的细胞递送用载体的脂质双层膜的典型的结构例1。
图3示出了本发明的细胞递送用载体的典型的结构例2。在该图中，示出了本发明的细胞递送用载体的脂质双层膜的典型结构。本发明的细胞递送用载体也可以是脂质单层膜，在这种情况下，可以使用该图中最上部(最外层)的膜结构。构成最外层的膜的分子的脂质与内侧的膜分子的脂质接触，形成双层膜结构。
构成本发明的细胞递送用载体的脂质可以为含有8个以上碳连续键合的烃链的脂质，优选地，为脂质或具有表面活性的脂质。进一步地，若为具有膜融合性，且具有阳离子或阴离子或两性的离子脂质作为膜构成成分的物质，则更加优选。
可用于本发明的载体的脂质若为在35℃下为液体，且与上述表2中的维生素衍生物组合使用时，在40℃、80％湿度、6个月的加速试验中将维生素衍生物的衰减率抑制在20％以下，并保持维生素衍生物稳定的物质，则可使用，在满足这些条件的脂质中，特别是能够将维生素衍生物的衰减率抑制在10％以下的脂质如第0057段的表3中所示。进一步地，可用于本发明的脂质中的具有表面活性的脂质，若为在35℃下为液体，且与上述表2中的维生素衍生物组合使用时，在40℃、80％湿度、6个月的加速试验中将维生素衍生物的衰减率抑制在20％以下，并保持稳定的物质，则可使用，在满足这些条件的脂质中，特别是适合本发明的具有表面活性的脂质在光学显微镜下含有包含物，能够确认存在层结构，因此，进一步地，只要为将维生素衍生物的衰减率抑制在10％以下，并保持维生素衍生物稳定的物质即可，层结构的存在可以通过作为已知的方法的基于染色电子显微镜的多层膜的直接观察或偏光显微镜下的麦芽糖酶正交偏光来确认。其中，第0057段的表4中所示的具有表面活性作用的脂质，稳定性高，且本发明人确认其能够确认大量的层结构的良好的层形成作用，非常适合本发明。
例如，可用于本发明的脂质可以是由具有细胞递送用载体的膜融合性能的脂质和高分子等形成的脂质，阳离子脂质或阴离子脂质本身也可以是具有膜融合性能的脂质。在本发明的细胞递送用载体中，作为膜构成成分而含有的脂质、具有表面活性的脂质可以是一种，也可以是两种以上的组合。另外，本发明中的膜融合性能是指内体、自噬体、溶酶体膜或细胞膜的融合性能。
作为阳离子脂质的例子，例如，可以列举非磷脂脂质：1,2-二油酰基-3-三甲基丙烷铵(DOTAP)、N-[1-(2,3-二油酰基丙基)]-N,N-二甲胺(DODAP)、N,N-二油酰基-N,N-二甲基氯化铵(DODAC)、N,N-二硬脂基-N,N-二甲基溴化铵(DDAB)、N-(1-(2,3-二油烯氧基)丙基)-N,N,N-三甲基氯化铵(DOTMA)、N,N-二甲基-2,3-二油烯氧基丙胺(DODMA)、2,3-二油烯氧基-N-[2-(精胺甲酰胺)乙基]-N,N-二甲基-1-三氟乙酸丙铵(DOSPA),N-[1-(2,3-二十四烷氧基丙基)]-N,N-二甲基-N-羟乙基溴化铵(DMRIE)、N-[1-(2,3-二油烯氧基丙基)]-N,N-二甲基-N-羟乙基溴化铵(DORIE)等。或者，可以列举磷脂质等。这些可以单独使用，也可以两种以上组合使用。
作为可用于本发明的磷脂质等，例如，可以列举：磷脂酰乙醇胺、磷脂酰胆碱、溶血磷脂酰胆碱、磷脂酰甘油、磷脂酸、磷脂酰丝氨酸、磷脂酰肌醇、心磷脂、鞘磷脂、大豆卵磷脂、蛋黄卵磷脂、和溶血卵磷脂等天然磷脂质，具有膜融合能力的高分子琥珀酰化聚缩水甘油(SucPG)。作为磷脂酰乙醇胺，可以列举：1,2-二油酰-sn-甘油-3-磷酰乙醇胺(DOPE)、1,2-二亚油酰-sn-甘油-3-磷酰乙醇胺(DLoPE)、1,2-二芥酰-sn-甘油-3-磷酰乙醇胺(DEPE)、1,2-二肉豆蔻酰-sn-甘油-3-磷酰乙醇胺(DMPE)、1,2-二棕榈酰-sn-甘油-3-磷酰乙醇胺(DPPE)、1,2-二硬酯酰-sn-甘油-3-磷酰乙醇胺(DSPE)等。此外，能够进一步抑制细胞死亡，因此，本发明中的脂质优选含有磷脂质作为膜构成成分。
作为可用于本发明的阴离子脂质的例子包括磷脂酰丝氨酸、磷脂酰甘油、磷脂酸、磷脂酰肌醇或磷酸磷脂酰肌醇，或其溶血脂、过氧化脂质、氧化物、缩醛磷脂或二醚脂质。
当离子键合含有离子性刺激响应聚合物的分子时，本发明的脂质优选使用具有与刺激响应聚合物相反的离子性的脂质，例如，用于将聚葡糖胺、壳聚糖等具有大量阳离子胺的聚合物离子键合于本发明的细胞递送用载体表面的脂质适合以总脂质的大比例或全部使用阴离子、非阳离子或两性脂质。其中，更优选使用阴离子脂质。
抑制细胞递送后的细胞死亡的效果更优异，并且向细胞内的递送的效率优异的观点出发，对于向细胞内的递送效率优异的摩尔比，本发明中的细胞递送用载体优选以3：0.5至3：20的摩尔比含有非磷脂质的脂质和膜融合性脂质作为膜构成成分，更优选以3：2至3：15的摩尔比含有非磷脂质的脂质和膜融合性脂质作为膜构成成分，进一步优选以3：5至3：10的摩尔比含有非磷脂质的脂质和膜融合性脂质作为膜构成成分。此外，优选含有1,2-二油酰基-3-三甲基丙烷铵(DOTAP)作为脂质，含有1,2-二油酰-sn-甘油-3-磷酰乙醇胺(DOPE)作为膜融合性脂质，且以所述摩尔比含作为细胞递送用载体的膜构成成分。
本发明中的含有刺激响应聚合物的分子可以是刺激响应聚合物本身或根据不同目的由其他物质在刺激响应聚合物进行化学修饰后的衍生物，这里根据不同目的进行化学修饰的其他物质为刺激响应聚合物与作为细胞递送用载体的膜的主要构成成分的脂质或其类似的结构的分子化学键合的物质的情况下，刺激响应聚合物能够与膜稳定地结合，因此，特别优选使其与脂质结合。在实施例中，将其称为刺激响应聚合物结合脂质，其为含有刺激响应聚合物的分子的优选例。
进一步优选地，细胞递送用载体膜主要由具有表面活性的脂质构成，刺激响应聚合物是与作为细胞递送用载体的膜的主要的构成成分的、具有表面活性的脂质或其类似结构的分子化学键合的物质。可用于本发明的载体的刺激响应物质可以是具有包含选自温度刺激响应物质、pH刺激响应物质和光刺激响应物质中的一种或多种单体的直链或者支链的聚合物结构的结构，进一步地，在本发明中，更有效的刺激响应物质的特性是，与上述表2的维生素衍生物组合使用时，在40℃、80％湿度、6个月的加速试验中将维生素衍生物的衰减率抑制在20％以下，并保持稳定，本发明人发现，若为选自第0057段的表5的物质组的一种或多种的刺激响应物质，则能够制造出可以恢复这些条件下的稳定性的细胞递送用载体。进一步地，含有这些刺激响应聚合物的本发明的细胞递送用载体在40℃、80％湿度下保存6个月后，用普通的光学显微镜和偏光显微镜观察载体的状态时，载体未被破坏，与试验开始时一样，在显微镜下能够观察到在载体内包含荧光染料，并且能够在偏光显微镜下确认存在麦芽糖酶正交偏光，因此，将维生素衍生物的衰减率抑制在10％以下，并保持维生素衍生物稳定的物质为能够特别有效地用于本发明的刺激响应物质。作为这些刺激响应物质的例子，本发明人已确认，选自所述表7的物质组的一种或多种化学物质被共价键化学修饰的刺激响应聚合物。
与刺激响应聚合物结合的脂质部分与表现出细胞递送用载体的膜成分的表面活性的脂质的烃类或脂质的烃类部分融合，刺激响应聚合物分散于细胞递送用载体外侧的水溶剂部分，因此，其具有如刺激响应聚合物从细胞递送用载体膜向外侧的溶剂侧突出一样的结构。这种状态也可以通过刺激响应聚合物结合脂质表示为用刺激响应聚合物对细胞递送用载体膜进行修饰。在这种情况下，抑制细胞内崩坏后的细胞死亡的效果更优异，并且向细胞内的递送效率优异的观点出发，在由该脂质修饰的含有刺激响应聚合物的分子中，作为膜构成成分的所有脂质中的含有刺激响应聚合物的分子优选为0.05至40mol％，更优选为1.0至20mol％，进一步优选为2.0至8.mol％。此外，本发明中的含有温度、pH和光刺激响应聚合物的分子优选与膜融合性脂质结合，也可以与1,2-二油酰-sn-甘油-3-磷酰乙醇胺(DOPE)结合。
在温度响应聚合物的水中的下临界溶解温度(Lower Critical SolutionTemperature:LCST)以下的温度时，使细胞递送用载体表面形成水合层，降低细胞递送用载体与细胞膜之间的亲和力，但在下临界溶解温度以上时，聚集并疏水化，提高细胞递送用载体和细胞膜之间的亲和力。进一步地，随着疏水化，膜平衡被破坏，并且膜被破坏。这样，当水中的下临界溶解温度较低时，本发明的温度响应聚合物能够降低细胞递送用载体和细胞膜之间的亲和力以在组织内自由移动。估计到达目标细胞的时间并身高温度，从而增强细胞膜粘附力，并且内吞并摄取到细胞内的细胞递送用载体解体，帮助细胞递送用载体内的物质扩散到细胞内。在pH和光的刺激响应聚合物的情况下，类似的现象可以不通过温度升高而是通过膜内外的pH变化、设备的光刺激发生。
本发明中含有温度刺激响应聚合物分子的水中的下临界溶解温度优选为接近体温的温度和产品流通时夏季在车辆运输过程中的最高温度即70℃之间(例如，35.0到70.0℃)的温度。另一方面，即使本发明的温度响应聚合物的下临界溶解温度接近体温，但尽可能升高温度，则易于抑制向细胞递送后的细胞死亡。这样，温度响应聚合物的水中的下临界溶解温度优选为37.0至42.0℃，更优选为37.5至41.0℃，进一步优选为38.0至40.5℃，因为在该温度下向细胞内的递送优异，且易于抑制向核酸的细胞内递送后的细胞死亡。另外，在本发明中，温度响应聚合物的水中的下临界溶解温度通过差示扫描量热法(DSC)测量。
作为本发明中的细胞递送用载体所包含的温度、pH和光的含有刺激响应聚合物的分子的构成单元的单体的具体例子，如本发明的权利要求书中所述。
例如，可以为由这些单体均聚而构成的聚合物、这些单体中的两种以上的单体的共聚合物。此外，可以使用通过进行与这些单体以外的单体的共聚，聚合物之间的接枝聚合或共聚而得的物质，或者也可以使用这些单体的均聚物与共聚物的混合物。此外，温度响应聚合物也可以在不损害聚合物原有的性质的范围内进行交联。
根据构成上述温度响应聚合物的单体各自的性质来选择单体，由此能够调节温度响应聚合物的水中的下临界溶解温度。
特别是，可以使用各种刺激响应单体与其他单体如二甲胺基丙基丙烯酰胺(DMAPAA)的共聚物作为含有温度、pH和光的刺激响应聚合物的分子，因为其向细胞内的递送优异，且易于抑制向细胞内递送后的细胞死亡。关于聚合物中的各种刺激响应单体和其他单体的摩尔数，各种刺激响应单体更优选为90-99，其他单体更优选为1-10。
例如，可以使用N-异丙基(甲基)丙烯酰胺(NIPAA)与二甲胺基丙基丙烯酰胺(DMAPAA)的共聚物作为温度响应聚合物，因为其向细胞内的递送优异，且易于抑制向细胞内递送后的细胞死亡。关于聚合物中的NIPAA和DMAPAA的摩尔数，NIPAA更优选为90-99，DMAPAA更优选为1-10。
本发明中的含有温度、pH和光的刺激响应聚合物的分子的分子量没有特别限制，例如，重均分子量可以是1000至100000，但重均分子量更优选是2000至70000，因为在该情况下向细胞内的递送优异，且易于抑制向细胞内递送后的细胞死亡。另外，重均分子量可以通过凝胶过滤色谱法(GPC)测量。
为了用温度响应聚合物修饰细胞递送用载体的表面，例如，当用阳离子脂质或阴离子脂质与膜融合脂质制备细胞递送用载体时，事先通过膜融合脂质或阳离子脂质或阴离子脂质中的任一者对温度响应聚合物进行化学修饰，在制备时将该由脂质修饰的温度响应聚合物与细胞递送用载体混合，由此，在制备细胞递送用载体后，成为表面由温度响应聚合物修饰的结构。
本发明的制备细胞递送用载体的方法可以采用常规已知的方法。例如，当本发明的细胞递送用载体由阳离子脂质或阴离子脂质与膜融合脂质制备时，将阳离子脂质或阴离子脂质与膜融合脂质溶解在溶剂(例如，氯仿等)中，除去溶剂后，用磷酸缓冲生理盐水等对形成的脂质薄膜进行水合，然后进行超声处理和挤压机处理来调整细胞递送用载体的粒径，由此来制备。
细胞递送用载体的粒径没有特别限制，例如，可以使用平均粒径为0.05至1μm的载体。此外，细胞递送用载体的平均粒径通过动态光散射法(DLS)测量。
本发明的细胞递送用载体可以是维生素衍生物和含有刺激响应聚合物的分子中的任一种或多种构成细胞递送用载体的乳化膜的结构。或者，本发明的细胞递送用载体也可以是维生素衍生物和含有刺激响应聚合物的分子种的一种或多种与细胞递送用载体的表面离子键合的结构。
本发明的细胞递送用载体所递送的细胞没有特别限制，例如，可以列举：角化细胞、刺细胞、粒细胞、角质细胞、成纤维细胞、色素细胞、树状细胞、朗格汉斯细胞、梅克尔细胞、血管内皮细胞、皮脂腺细胞、外分泌腺细胞、顶泌腺细胞、脂肪细胞、梅克尔盘细胞、马氏菌小体细胞、鲁菲尼终末细胞、帕西尼氏小体细胞、毛囊细胞、毛乳头细胞、毛母细胞、毛母体、毛发纤维细胞、内根鞘细胞、外根鞘细胞、立方上皮细胞、鞘小皮细胞、竖毛肌细胞、皮肤干细胞、毛囊干细胞、色素干细胞、汗腺细胞、皮脂腺细胞、毛囊漏斗部细胞、肺细胞、结肠细胞、直肠细胞、肛门细胞、胆管细胞、小肠细胞、胃细胞、食道细胞、胆囊细胞、肝细胞、胰腺细胞、阑尾细胞、乳腺细胞、卵巢细胞、宫颈细胞、前列腺细胞、肾细胞、胶质母细胞瘤细胞、皮肤细胞、淋巴细胞、绒毛肿瘤细胞、头颈部细胞、成骨肉瘤细胞、血细胞等，或其癌细胞(宫颈癌细胞、肺癌细胞、结肠癌细胞、直肠癌细胞、肛门癌细胞、胆管癌细胞、小肠癌细胞、胃癌细胞、食道癌细胞、胆囊癌细胞、肝癌细胞、胰腺癌细胞、阑尾癌细胞、乳腺癌细胞、卵巢癌细胞、前列腺癌细胞、肾癌细胞、中枢神经系统的癌细胞、胶质母细胞瘤细胞、皮肤癌细胞、色素癌细胞、淋巴瘤细胞、绒毛癌肿瘤细胞、头颈部癌细胞、成骨肉瘤细胞、血癌细胞等)。本发明的细胞递送用载体所递送的细胞，因其细胞内递送效率、抗氧化作用、组织流动性、皮肤屏障渗透性以及易于抑制递送后的细胞死亡，因此特别适合递送至存在于皮肤的细胞。
除了维生素衍生物之外，本发明的细胞递送用载体还可以包含选自第0057段的表8中的一种或多种物质作为有效成分。进一步地，可以混合作为可以包含在本发明的细胞递送用载体中的有效成分已知的有效成分，这些有效成分可以是已知的标准、文献所记载的有效成分，例如，代表性的标准、文献包括但不限于以下。例如，日本药典第17版ISBN 978-4840748315，美国药典国家处方集2018，USP41-NF36，ISBN 978-3-7692-7022-8，国际化妆品原料字典和手册(2016)第16版(美国华盛顿个人护理产品协会)ISBN 1-882621-55-7，准药品添加剂目录修订版，药事日报社，2017，ISBN：978-4-8408-1492-8C3047，日本厚生劳动省医药食品局审查管理课长发布的药食审查发第1225001号通知中所记载的所谓药用化妆品中的有效成分目录，准药品成分标准：综合版2006，药事日报社，2013ISBN：978-4-8408-1227-6C3047，准药品成分标准：综合版2006增补2，药事日报社，2018ISBN：978-4-8408-1464-5C3047。在将这些有效成分包含在本细胞递送用载体中的情况下，有效成分的浓度没有特别限制，可以根据有效成分的效果发挥浓度、目的适当改变，例如，可以从1ppm到50重量％的范围内选择。
在本发明的细胞递送用载体中使用了维生素衍生物的情况下，可以发挥该维生素衍生物的效果，因此其他的包合有效成分不一定要存在。或者，其有效成分浓度没有特别限制，可以根据有效成分的效果发挥浓度、目的适当改变，例如，可以从1ppm至50重量％的范围内选择。
本发明的细胞递送用载体的用量没有特别限制，可以根据有效成分的效果发挥浓度、目的适当改变，但当添加至外用剂中施用于皮肤时，可以将向制剂中添加0.001％至50重量％的本发明细胞递送用载体制成的制剂以相对于皮肤表面积1μg至10g/1cm2/天的量每天分一至十次施用。
本发明的细胞递送用载体的给药方法没有特别限制，可以根据靶细胞的类型适当选择。例如，可以采用外用给药、口服给药、注射(静脉注射、皮下注射或肌肉注射等)。
进一步地，在给药时还可以使用离子电渗、电穿孔、声波、超声波、低频、高频、加热器、各种激光器、各种光能设备等各种设备，纱布，无纺布，纸，薄膜，毛巾，面膜片，碳酸发生器，蒸汽发生器以及氧气发生器等器具。进一步地，还可以使用微针、中胚层疗法设备等。
本发明的细胞递送用载体可以用于所有可以发挥效果的用途，但优选用于选自药品、准药品、化妆品、补充剂、兽药和杂货中的用途。
进一步地，在用于这些用途时的本发明的细胞递送用载体的制剂的剂型没有特别限制，但优选可以选自外用剂、口腔剂、栓剂、口服制剂、泥敷剂、面膜剂、喷雾剂、注射剂、调味剂、液剂、软膏剂、气雾剂、粉末、压制剂、膏剂、外用喷洒剂、散剂、颗粒剂、片剂、软胶囊剂、丸剂、板状剂型、含片剂、糊剂、固体剂、湿润剂、胶粘剂。或者，在这些细胞递送用载体应用于化妆品、准药品的情况下，其功效或作用可选自前述表9，并不限于此。
本发明的细胞递送用载体的目标动物没有特别限制，可以应用于包括人类在内的任何生物。例如，可以列举：小鼠、大鼠、狗、猫、猴子、猪、牛、羊、兔、鱼、可食用水生动物、有用的植物、有用的真菌。
除了已知的有效成分之外，本发明的细胞递送用载体的包含成分还可以包含核酸、真菌、病毒、细胞等。
本发明的细胞递送用载体的目标维生素衍生物必须促进自噬相关基因和组织蛋白酶合成基因两种基因的活性。
将可用于本发明的细胞递送用载体的作为同时激活自噬相关基因和组织蛋白酶合成基因的维生素衍生物示于表2。如实施例所示，其促进了自噬相关基因和组织蛋白酶合成基因的活性。在本发明中，在细胞递送用载体中需要至少包括一种或多种这些维生素衍生物。更优选地，当从表2中选择不同种类的维生素衍生物并混合两种以上的维生素衍生物使用时，细胞的粘附性增强，可以提高载体内物质的递送率。
可用于本发明的含有刺激响应聚合物的分子是应用于药物递送(DDS)、生物共轭(bio-conjugation)、组织工程、生物传感器和生物分离等化学和生物学的聚合物，因其随外部刺激而变化的特性，也称为“智能”聚合物或环境响应聚合物。
可用于本发明的含有刺激响应聚合物的分子是指微观结构包含根据周围的外部刺激(例如，温度、pH、离子强度、磁场、电场、光、声波、压力、溶剂、加速度、化学物种)而发生可逆或非化学变化的刺激响应分子的聚合物，所有这些都可用于本发明。
含有刺激响应聚合物的分子根据其物理形状分为：(a)溶液中自由的直链状聚合物、(b)共价交联的可逆凝胶、(c)通过离子键、氢键等可逆结合的表面吸附聚合物或表面接枝聚合物，上述任何一种都可用于本发明，但优选地，含有刺激响应聚合物的分子与两亲性抗氧化维生素衍生物或脂质之一结合，进一步地，该键优选为共价键、离子键、氢键中的任一种。其原因在于，响应于外部刺激的分子变化的影响可以更迅速、直接地施加到结合的细胞递送用载体上。
作为用于本发明的含有刺激响应聚合物的分子，在包含随着温度、pH、光三种外部刺激而变化的分子的聚合物中，包含响应于任何一种或多种刺激的分子的聚合物是合适的。
在本发明中，含有刺激响应聚合物的分子可以存在于乳化物组合物内，但优选地，结合、包含或贯通于细胞递送用载体的最外侧的膜，优选部分或全部含有刺激响应聚合物的分子存在于细胞递送用载体的最外侧。这是因为当响应状态的变化是光响应或pH响应时，刺激往往是从外侧传递到内侧的，因此重要的是具有传感器部分的响应的分子与细胞递送用载体的外侧接触。进一步地，最容易向外部环境传递刺激响应后分子形状变化引起的性质变化，因此这一点很重要。
本发明的含有刺激响应聚合物的分子与两亲性抗氧化维生素衍生物或除所述两亲性抗氧化维生素衍生物之外的8个或更多碳原子连续结合的脂质中的任一者结合的形式可以是，含有刺激响应聚合物的分子与两亲性抗氧化维生素衍生物结合的形式，和含有刺激响应聚合物的分子与脂质结合的形式中的任一种形式，进一步地，该结合形式可以是离子键、共价键或氢键中的任一种。
作为本发明的含有刺激响应聚合物的分子与脂质结合的形式的例子，包括含有刺激响应聚合物的分子分别与脂质、脂肪酸和层形成表面活性剂结合的情况，任一种都可用于本发明，但含有刺激响应聚合物的分子与脂肪酸共价键合的形式和含有刺激响应聚合物的分子与层形成表面活性剂共价键合的形式是最合适的，因为其稳定性极高，合成简单，成本低，并且可以以高产量合成。
作为含有刺激响应聚合物的分子与脂肪酸共价键合的情况的具体例子，已知烷基-聚异丙基丙烯酰胺(非专利文献12)，在为含有刺激响应聚合物的分子与脂质体共价键合的形式的情况下，已知二油酰基磷酸乙醇胺、巯基丙酰基(异丙基丙烯酰胺/二甲胺基丙基丙烯酰胺)共聚物(专利文献7)等，这些聚合物中的任何一种都可以在本发明中使用。
在上述记载的公知例中，当单独使用聚合物时，都不能有效保护有效成分免受活性氧等的攻击，特别是，对于易氧化的有效成分，存在在制剂中被氧化而失活的问题。
本发明的含有温度刺激响应聚合物的分子在低于水中的下临界溶解温度时形成水合层并溶解在水中，但在高于下临界溶解温度时，疏水化，且脂质体的细胞膜渗透性增加。
因此，以往的含有温度刺激响应聚合物的分子的下临界溶解温度优选为接近体温即37至42℃。然而，应用包括本发明的产品，包括药品、食品和化妆品在内的大多数产品的流通温度的上限，在夏季可能是45℃，因此，当将下临界溶解温度设定为体温的36至42℃时，产生如下问题：细胞递送用载体与其他疏水成分结合并分离，或者当容器由塑料制成时，有效成分因粘附而残留在容器中。因此，本发明的下临界溶解温度适合为35℃以上。进一步地，当下临界溶解温度设定为45℃以上时，需要将人体。本发明的较低临自适应部位的温度设定为45℃以上，但已经发现了，通过蒸汽毛巾的局部使用、局部摩擦产生的摩擦热、加热气体的使用以及发热装置等的使用，局部地进行短时间加热，由此即使在70℃下也能够将热损伤抑制在最小限度而不残留副作用。由于在70℃以上经常发生不可逆热损伤，因此本发明的下临界溶解温度优选为35℃至70℃以下。进一步优选地，将该温度设定为45℃至60℃。另外，在本发明中，温度响应聚合物的水中的下临界溶解温度是通过差示扫描量热法(Differentialscanningcalorimetry:DSC)测量的。
作为可用于本发明的pH刺激响应聚合物的合适例子，可以列举以葡糖胺为单体的聚葡糖胺，但也可以使用以葡糖胺为构成单元的壳聚糖。进一步地，可以使用以壳聚糖为原料聚合得到的聚合物，也可以使用利用酶等将壳聚糖切断而成的低分子量壳聚糖或碱处理得到的中性壳聚糖。
在作为已知文献的非专利文献13、非专利文献14、非专利文献15中，存在将壳聚糖处理成脂质体而得到的壳聚糖包覆脂质体的例子，这些文献中所记载的壳聚糖也可用于本发明。
当含有本发明的含有pH刺激响应聚合物的分子的细胞递送用载体是含有壳聚糖的细胞递送用载体时，作为其制造工序，可以采用使不含本发明的壳聚糖的细胞递送用载体与壳聚糖水溶液反应，以使壳聚糖电子键合到细胞递送用载体表面的制造工序。制备壳聚糖溶液时，通常需要在酸中溶解，因此，pH值必须在5以下。因此，当其应用于人体时，由于其酸性，会使皮肤发炎。进一步地，在这种酸性条件下，存在细胞递送用载体被破坏，并出现分离、沉淀等问题。用碱中和会诱发溶液浑浊、分离，在氯化钠等中和盐形成时，存在皮肤刺激的问题。因此，本发明中使用的壳聚糖本身优选为pH为6至8的中性壳聚糖。将中性壳聚糖溶解在乳酸、柠檬酸、抗坏血酸等酸中后，优选使其与阴离子交换树脂接触，或与来自天然物的壳聚糖混合，由此吸附去除酸，将pH调整到6至8。
关于可用于本发明的载体的刺激响应聚合物，若为在15℃至70℃的范围内为液体，且与上述第0057段的表2的维生素衍生物组合使用时，在40℃、80％湿度、6个月的加速试验中将维生素衍生物的衰变率抑制在20％以下，并保持维生素衍生物稳定的物质，则可使用。在满足这些条件的刺激响应聚合物中，发现选自特定物质组的一种或多种化学物质被共价键化学修饰的刺激响应聚合物是适合的，可以指定该物质的组。即，本发明人发现，若为选自第0057段的表7的物质组的一种或多种化学物质被共价键化学修饰的刺激响应聚合物，则可以制成能够恢复这些条件的稳定性的细胞递送用载体。进一步地，本发明人使各种有效成分包含在本发明的细胞递送用载体中来研究载体的稳定性。这是因为发现了，本发明的细胞递送用载体的稳定性不仅随着载体的构成成分而变化，而且还随着包含在载体中的包含成分的种类而变化。特别是，即使在上述条件的加速试验后也能够稳定地维持层结构的物质作为包含于本发明的载体的物质是最佳的，试验结果发现，若为选自第0057段的表8中的物质，即使在所述条件的加速试验后也能稳定地包含。
通过将这些包含了选自表8的有效成分的本发明的细胞递送用载体应用于人，发明人能够确认第0057段的表9的效果得到表达。
此外，对于这些效果发现了，使细胞递送用载体的效果表达温度为45至70℃的温度刺激响应聚合物包含在细胞递送用载体中，同时人为地升高该聚合物的施用部位的组织温度，从而提高其细胞递送率，并表达出更高的效果。
进一步地，在本发明中，可以使用作为普通的乳化制剂的稳定剂而使用的多元醇、合成抗氧化剂、紫外线吸收剂和防腐剂，这些物质在制作载体时是必要的。在这些物质中，特别是，若为在15℃至70℃的范围内为液体，且与上述表2的维生素衍生物、表3的脂类、表4的具有表面活性作用的脂质以及表5的刺激响应聚合物组合使用时，在40℃、80％湿度、6个月的加速试验中将维生素衍生物的衰减率抑制在20％以下，并保持层结构稳定的物质，则是最适合本发明的，对这些物质进行筛选确认了，选自表6所示的乳化稳定剂的一种或多种成分与此相对应。
用于实施本发明的最佳方式，如所述图2所示，是细胞递送用载体，其由同时激活自噬相关基因和组织蛋白酶合成基因的物质，以及含有刺激响应聚合物的分子中的一种或多种物质构成主要由脂质构成的膜分子的一部分。进一步地，作为用于实施本发明的另一最佳方式，可以列举细胞递送载体，其中，如前述图3所示的含有刺激响应聚合物的分子与脂质离子键合。
作为本发明的细胞递送用载体的具体用途，可以列举：药品、准药品、化妆品、补充剂、兽药和杂货。可用于本发明的细胞递送用载体的制剂特别限制，若为剂型为选自以下的细胞递送用载体，则更适合作为流通剂型：外用剂、口腔剂、栓剂、口服剂、健康饮料、泥敷剂、面膜剂、喷雾剂、注射剂、调味剂、液剂、软膏剂、气雾剂、粉末、压制剂、膏剂、外用喷洒剂、散剂、颗粒剂、片剂、软胶囊剂、丸剂、板状剂型、含片剂、糊剂、固体剂、湿润剂、胶粘剂。
(维生素衍生物的ATG-CTS活性)
使用结构上具有抗坏血酸-2-磷酸酯的三种不同维生素衍生物，即、抗坏血酸磷酸三钠(APS)、抗坏血酸棕榈酸酯磷酸酯三钠(APPS)和磷酸抗坏血酸酯生育酚钾(EPC)的混合物进行以下实验。使用含有5％FBS的DMEM(低葡萄糖)将正常人表皮成纤维细胞以5×105细胞/孔的密度在37℃下培养24小时，然后替换为含有混合测试样品的培养基(添加100μM的APS、100μM的APPS、100μM的EPC，以使最终总浓度为300μMn)的培养基并在37℃下培养24小时。接下来，回收每个细胞，用RNA protect cell Reagent(QIAGEN)保护RNA，并保存在-80℃直到分析。在对总RNA进行质量检查后，进行使用3D-Gene全基因型DNA芯片的综合分析。其结果是，按照来自自噬相关基因(ATG)和溶酶体定位蛋白酶即组织蛋白酶(CTS)的每个因子，与无添加对照中的RNA量进行比较，对于测试样本添加组的平均值，ATG中RNA生物合成增加1.2倍或以上的标为◎，CTS中增加1.2倍以上的标为◇，除此之外标为X，并将其结果示于下表12。
维生素衍生物的ATG-CTS活性的结果
[表12]
Figure BDA0003798536610000201
(试验2)
对下述84种维生素衍生物进行与上述相同的实验，并进行与上述相同的评价，对◎和◇分别存在1个以上且总数在10个以上的标为○，对◎和◇分别存在1个以上且总数在5个以上的标为△，除此之外标为X。另外，X包括样本量未达到进行本试验的规定量的情况。结果，如第0131段所示，可用于本发明的对应于○和△的维生素衍生物样品有53个，包括未知样本，X样品有32个。另外，当对用于本发明的比较实验的、结构上具有抗坏血酸-2-磷酸酯的三种衍生物进行比较时，抗坏血酸(AA)和抗坏血酸磷酸三钠(APS)是X，抗坏血酸棕榈酸酯磷酸酯三钠(APPS)是△，磷酸抗坏血酸酯生育酚钾(EPC)是○。因此，关于ATG-CTS的活性，活性从高到低，成为EPC>APPS>APS、AA。
(84种维生素衍生物的ATG-CTS活性的结果)
磷酸抗坏血酸酯生育酚钾：○，(抗坏血酸/PCA)镁：X，生育酚亚油酸酯/油酸酯：X，2，4-二乙氧羰基泛酸乙酯：○，3-O-乙基抗坏血酸：○，3-O-十六烷基抗坏血酸：○，3-抗坏血酸羰基二肽-17：△，乙基抗坏血酸：○，抗坏血酸甲基硅烷醇果胶：○，抗坏血酸(橙/柠檬/酸橙)多肽：X，尿囊素抗坏血酸盐：X，抗坏血酸甘油二酯生育酚：○，抗坏血酸二酯生育酚：○，四己基癸醇抗坏血酸酯：○，抗坏血酸多肽：△，甲基硅烷醇抗坏血酸酯：△，乙酰泛酸乙基：X，尿囊素泛醇：X，异硬脂醇抗坏血酸磷酸酯二钠：○，抗坏血酸异硬脂酸酯：○，抗坏血酸棕榈酸酯磷酸酯三钠：△，辛酰基2-甘油基抗坏血酸：○，辛酰基3-甘油基抗坏血酸：○，甘草次酸吡哆醇：X，生育酚琥珀酸酯：○，琥珀酰三肽-34抗坏血酸磷酸铜：X，琥珀酰五肽-12抗坏血酸磷酸酯：X，二乙基抗坏血酸：○，二油基生育酚甲基硅烷醇：○，吡哆素二辛酸酯：○，二乙氧羰基泛酸乙酯：○，吡哆醇二棕榈酸酯：○，抗坏血酸硬脂酸酯：△，二乙酰白藜芦醇硫辛酸：X，硫辛酸硬脂酸酯：○，硫辛酸棕榈酸酯：○，硫辛酸十七酸酯：○，甲氧基PEG-45硫辛酸：X，四己基癸醇抗坏血酸酯：○，核黄素四丁酸酯：○，生育酚乙基琥珀酸乙基二铵乙基硫酸盐：X，生育酚氧丙基三硅氧烷：○，生育酚葡糖苷：○，生育酚二甲基甘氨酸：○，生育酚二甲基甘氨酸盐酸盐：○，生育酚磷酸酯钠：○，托可索仑：○，氨甲环酸生育酚盐酸：X，吡哆素三己基癸酸酯：○，吡哆醇三棕榈酸酯：X，生育酚烟酸酯：○，抗坏血酸棕榈酸酯：X，抗坏血酸透明质酸酯：X，抗坏血酸丙基透明质酸酯：○，双(羟乙基生育酚琥珀酰酰胺)羟基丙烷：X，硫胺素二月桂基硫酸盐:X，羟癸基泛醌：△，羟丙基三甲基抗坏血酸：X，视黄醇丙酸酯：O，抗坏血酸生育酚马来酸酯：○，马来酸二辛酯氨基乙基二甲胺：X，泛醇：X，泛醌：X，泛醌二钠：X，月桂亚氨基二丙酸生育酚磷酸酯盐二钠：△，生育酚亚油酸酯：○，视黄醇亚油酸酯：○，抗坏血酸磷酸酯三钠：X，抗坏血酸磷酸镁：X，抗坏血酸氨丙基磷酸酯：X，氨丙基生育酚磷酸酯：X，生育酚磷酸二钠盐：○，生育酚视黄酸酯：○，羟基频哪酮视黄酸酯：X，视黄醇视黄酸酯：○，视黄醇：X，视黄氧基三甲基硅烷：X，泛苯甲酸乙酯：X，醋酸生育酚：○，视黄醇醋酸酯：○，视黄醇棕榈酸酯：△，抗坏血酸/胆甾醇磷酸酯钠：○，生育酚亚油酸酯/油酸酯：○，抗坏血酸：X，抗坏血酸葡糖苷：△，无添加对照：X。
(稳定性试验)
将APS、APPS、EPC的各抗坏血酸衍生物溶解在纯水中使其浓度为0.02mol/L，并将其在50℃下保存一个月，通过高效液相色谱仪测定各自的效价，将各物质的起始时的效价设定为100％，一个月后的效价以％重量测定，其结果在下表13中示出，残存95％以上的用○表示，残存少于95％且80％以上的用△表示，残存少于80％的用X表示。用作比较例的已存的维生素衍生物组的物质名和其缩写如下。抗坏血酸-2-磷酸钠：APS，抗坏血酸-2-磷酸-6-棕榈酸三钠：APPS，生育酚抗坏血酸-2-磷酸钾：EPC，抗坏血酸：AA。
稳定性试验结果
[表13]
测试物质名称 残存率 评价结果
EPC 96％ ○
APS 91％ △
APPS 78％ X
AA 56％ X
由上述结果可知，物理稳定性从高到低为EPC>APS>APPS>AA。ATG-CTS活性从高到低EPC>APPS>APS、AA，因此可知，ATG-CTS活性与物理稳定性不相关。
(表面活性力试验)
将APS、APPS、EPC、AA的各抗坏血酸衍生物溶解在纯水中使其浓度分别为0.5％(重量)，在相同条件下用海绵发泡，并测量直至消泡的时间(消泡时间)，将该时间设定为用于比较各样品的表面活性力的参数。结果示于表14，将消泡时间最长的APPS的消泡时间设定为100％，并将各消泡时间以％计算，90％以上标为○(最佳)，80％以上至小于90％标为△(良好)，80％以下标为X(差)。缩写的说明：抗坏血酸-2-磷酸钠：APS，抗坏血酸-2-磷酸-6-棕榈酸三钠：APPS，生育酚抗坏血酸-2-磷酸钾：EPC，抗坏血酸：AA。
表面活性力试验
[表14]
测试物质名称 残存率 评价结果
APPS 100％ ○
EPC 85％ △
APS 3％ X
AA 1％ X
由上述结果可知，根据水溶液中的消泡时间求得的表面活性力，从高到低为APPS>EPC>＝APS>AA。关于ATG-CTS活性，活性从高到低为EPC>APPS>APS、AA，因此可知ATG-CTS活性与表面活性不相关。
以下实验表明，ATG-CTS的活性与细胞递送率相关。
(与本发明的比较实验)
脂质总量为20mg，按摩尔比为(作为脂质的1,2-二油酰基-3-三甲基丙烷铵)：(作为层形成表面活性剂的二油酰磷脂酰乙醇胺和DOPEMP(NIPAA/DMAPAA 5％)Cop的总重量)＝3：7的比例分别溶解在氯仿中。进一步地，加入1mg荧光染料即罗丹明(羧罗丹明110-PEG4-炔烃)并溶解。另外，本实验中使用的DOPEMP(NIPAA/DMAPAA 5％)Cop.在水中的下临界溶解温度为40℃。以总重量计，添加的作为层形成表面活性剂的二油酰磷脂酰乙醇胺和DOPEMP(NIPAA/DMAPAA 5％)Cop的摩尔比为6.5：0.5。
将溶液转移到茄形烧瓶中，用蒸发器除去溶剂，制备成脂质膜。向该脂质膜中加入将ATG-CTS活性不同的三种维生素衍生物即，EPC，APPS，APS、AA各5mg，溶解于1ml的PBS而得的溶液中，使脂质膜水合，然后通过涡旋分散。之后，在超声波浴中超声处理30分钟，减小脂质体的尺寸，然后用挤压机将脂质体通过200nm的过滤器，以调整脂质体的尺寸。实施例和比较例的平均粒径为111nm±10nm。之后，通过凝胶过滤对脂质体进行分离和纯化，制备了含有ATG-CTS激活物质、温度响应聚合物以及烃的本发明的细胞递送用载体。当使用透射电子显微镜用染色法观察该细胞递送用载体时，确认了多层囊泡结构(层液晶结构)，并确认了这些细胞递送用载体具有层状液晶结构。
接着，在6孔板中，使用含有5％FBS的DMEM(低葡萄糖)将正常人表皮成纤维细胞以5×105细胞/孔的密度在37℃下培养24小时，然后分别替换为含有上述制备的实施例和比较例的四种细胞递送用载体的培养基(添加罗丹明使其最终浓度为1μM)，在35℃下培养1小时。之后，在40℃下处理20分钟，进一步地，在35℃下培养1小时。之后，用PBS洗涤五次，用4％多聚甲醛磷酸盐缓冲液固定20分钟，再用PBS洗涤两次，用荧光酶标仪测量荧光强度，求出摄取到细胞内的荧光物质的相对浓度。对于无添加对照，以同样的方法培养维生素衍生物的细胞递送用载体的细胞，并且测量荧光强度。
结果，当EPC添加组的荧光强度设定为100％时，APPS为78％，APS为49％，AA为52％。因此，细胞吸收率从高到低为EPC>APPS>APS、AA，关于ATG-CTS活性，活性从高到低为EPC>APPS>APS、AA，因此可知细胞吸收率和ATG-CTS活性是相关的。
本发明人等发现，维生素衍生物能增强ATG-CTS活性的原因与维生素衍生物的稳定性、表面活性力完全无关，推测其原因如下。即，在第一阶段，维生素是人体细胞的重要营养物质，且细胞内浓度高于血液浓度，因此，认为在第一阶段维生素粘附在某些细胞表面的维生素受体上，并在第二阶段由特异性通道蛋白等主动转运。稳定的维生素衍生物粘附在维生素受体上，但在第二阶段不能通过特异性通道蛋白等主动运输。
即，细胞表面的维生素受体识别维生素分子的一部分，只粘附在这一部分上，但在第二阶段的特异性通道蛋白中，识别整个维生素分子并将其摄取到蛋白质内使其通过门来主动转运，因此大部分的维生素衍生物在未被主动转运的状态下粘附并停留在细胞表面上。当维持该状态一段时间时，通过频繁进行的摄取细胞外液的内吞即胞饮作用(细胞胞饮)，以结合到受体上的状态摄取到细胞内，形成充满细胞外液的囊泡(内体)。
在细胞中与维生素衍生物结合的维生素受体需要回收，分解，再生新的维生素受体。内体激活CTS，形成溶酶体，并与其融合来消化囊泡中的维生素衍生物，但一部分衍生物直接被分解并释放到细胞内。该异物被一些系统的自噬系统识别，激活ATG基因形成自噬体，激活CTS形成溶酶体，并与其融合分解囊泡内的维生素衍生物。这样，摄取到细胞内的维生素衍生物最终成为细胞可利用的维生素。因此，通过向本发明的用于递送细胞的细胞递送用载体添加具有ATG-CTS活性的维生素衍生物，可以增强向细胞递送用载体的粘附力，并且促进细胞内摄取。
通过以下所示实验，研究了通过将ATG-CTS活性不同的维生素衍生物添加到细胞递送用载体中，细胞内的摄取是否会变化。即，根据所述实验可知，关于ATG-CTS活性，抗坏血酸棕榈酸酯(PA)为X，抗坏血酸异棕榈酸酯磷酸酯三钠(APPS)为△，磷酸抗坏血酸酯生育酚钾(EPC)为○，因此使用这三种抗坏血酸衍生物研究了细胞内的摄取率是否发生变化。
(制备比较实验的细胞递送用载体)
为了研究ATG-CTS活性不同的维生素衍生物对细胞递送用载体的细胞摄取的作用，制备除去了刺激响应聚合物的细胞递送用载体，并进行了以下实验。将6g甘油、1g椰油酰谷氨酸钠和ATG-CTS活性不同三种维生素衍生物(PA、APPS和EPC)各1g用电动手动搅拌器混合，并添加向20g霍霍巴油中混合0.1g荧光染料即罗丹明B而成的混合物，搅拌20分钟。向其中加入PBS至100g，用电动手动搅拌器搅拌10分钟以防止起泡，使其完全分散，得到了本发明的三种细胞递送用载体。作为无添加对照，使用同样的方法还制备了一种未添加维生素衍生物的细胞递送用载体。
在6孔板中，使用含有5％FBS的DMEM(低葡萄糖)将正常人表皮成纤维细胞以5×105细胞/孔的密度在37℃下培养24小时，然后分别替换为含有上述制备的三种本发明的细胞递送用载体的培养基(分别添加PA、APPS、EPC直至最终浓度为200μM)，在37℃下培养1小时。之后，用PBS洗涤五次，用4％多聚甲醛磷酸盐缓冲液固定20分钟，再用PBS洗涤两次，用荧光酶标仪在激发波长为555(nm)、荧光波长为580(nm)的情况下测量荧光强度，求出摄取到细胞内的荧光物质的相对浓度。对于无添加对照，以同样的方法培养未添加维生素衍生物的细胞递送用载体的细胞，并且测量荧光强度。
结果，当EPC的荧光强度设定为100％时，APPS的荧光强度为76％，PA的荧光强度为58％，而未添加维生素衍生物的细胞递送用载体的荧光强度为45％。三种维生素衍生物的ATG-CTS活性从高到低为EPC>APPS>PA，包含于细胞递送用载体的荧光物质的细胞摄取率从高到低为EPC>APPS>PA，维生素衍生物的本发明的细胞递送用载体的细胞的摄取率与ATG-CTS活性的大小成正比。
(刺激响应聚合物的合成第一工序-01)
将(温度)刺激响应的第一单体即N-异丙基丙烯酰胺和(温度)刺激响应的第二单体即甲氨基丙基丙烯酰胺甲氨基丙基丙烯酰胺以摩尔比为95％：5％地溶解在二甲基甲酰胺。单体的总量设定为10g。溶解后，加入N-异丙基丙烯酰胺的0.03mol倍的3-巯基丙酸，并加入60mg的偶氮二异丁腈。之后，在溶剂中进行氮气置换和超声波脱气后，在70℃下进行自由基聚合6小时。反应后液体的温度恢复到室温，然后滴入预冷的二乙醚中进行再沉淀精制。之后，通过过滤回收沉淀物。再进行两次再沉淀精制，回收聚合物。将该聚合物用水透析，然后冷冻干燥，得到(温度)刺激响应聚合物，即巯基丙酸(异丙基丙烯酰胺/二甲胺基丙基丙烯酰胺5％)共聚物。另外，该温度刺激响应聚合物的分子量为5500，在水中的下临界溶解温度为40℃。
(刺激响应聚合物结合脂质的合成)
按摩尔比为上述制备的刺激响应聚合物即巯基丙酸(异丙基丙烯酰胺/二甲胺基丙基丙烯酰胺5％)共聚物：N,N'-二环己基碳二亚胺：N-羟基丁二酰亚胺＝1：2.5：2.5的比例溶解在氯甲烷中，在室温下反应24小时。反应后通过抽滤除去作为副产品的二环己基脲，用二乙醚进行再沉淀精制，回收N-琥珀酰亚胺基巯基丙酸(异丙基丙烯酰胺/二甲胺基丙基丙烯酰胺5％)共聚物(MPA刺激响应聚合物)作为沉淀物。
将N-琥珀酰亚胺基巯基丙酸(异丙基丙烯酰胺/二甲胺基丙基丙烯酰胺5％)共聚物和作为层形成表面活性剂且具有乙醇胺基的脂质的1,2-二油酰-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺以1：1的摩尔比溶解在二恶烷中，并在室温下反应24小时。通过用蒸发器将反应后的溶液抽真空除去溶剂，制备了下述化学式1所示的温度刺激响应聚合物结合脂质即二油酰磷脂酰乙醇胺巯基丙酰(异丙基丙烯酰胺/二甲胺基丙基丙烯酰胺5％)共聚物。本发明人将该温度刺激响应聚合物结合脂质缩写为DOPEMP(NIPAA/DMAPAA 5％)Cop。或者，在以下写为DOPEMP(NIPAA/DMAPAA)Cop的情况下，是指DOPEMP(NIPAA/DMAPAA 5％)Cop。二油酰磷脂酰乙醇胺巯基丙酰(异丙基丙烯酰胺/二甲胺基丙基丙烯酰胺)共聚物的缩写为DOPEMP(NIPAA/DMAPAA)Cop。
【化学式1】
Figure BDA0003798536610000241
化学式1是可用于本发明的二油酰磷脂酰乙醇胺巯基丙酰(异丙基丙烯酰胺/二甲胺基丙基丙烯酰胺)共聚物的化学式。缩写在以下表示为DOPEMP(NIPAA/DMAPAA)Cop。
将上述实施例的第一单体即N-异丙基丙烯酰胺替换为下述表15所记载的另一种第一单体，从而能够以与上述相同的方法制备脂质结合的温度刺激响应聚合物。此外，虽然在上述方法中描述了第二单体的使用，但该第二单体可以是与所使用的第一单体不同的、同样选自第一单体组的物质。进一步地，可以不添加该第二单体，对于这种情况下的配合比，增加与减少的第二单体的量对应量的第一单体即可。根据在上述制备工序和40℃、80％湿度下进行的6个月的稳定性试验的结果可知，可以在本发明中使用表15所示的单体作为分解率为10％以下的温度刺激响应第一单体。
[表15]
(聚氧乙烯辛基苯基醚)丙烯酸酯、(聚氧乙烯辛基苯基醚)甲基丙烯酸酯、(聚氧乙烯壬基苯基醚)丙烯酸酯、(聚氧乙烯壬基苯基醚)甲基丙烯酸酯、(聚氧乙烯月桂基醚)丙烯酸酯、(聚氧乙烯月桂基醚)甲基丙烯酸酯、1,2,4,5-四(N,N-二硫代氨基甲酰基甲基)苯、1,3,5-三(溴甲基)苯、2-正丙基-2-噁唑啉、2-N,N-二甲基氨基乙基丙烯酸酯、2-N,N-二甲基氨基乙基甲基丙烯酸酯DMAEMA、2-氨基-2-羟甲基-1,3-丙二醇、2-氨基-2-羟甲基-1,3-丙二醇(Tris)、丙烯酸2-羟基-3-苯氧基丙酯、丙烯酸2-羟丁基、甲基丙烯酸2-羟丁酯、丙烯酸2-羟丙酯、甲基丙烯酸2-羟丙酯、3,5-三(N,N-二硫代氨基甲酰基甲基)苯、3-N,N-二甲基氨基丙基丙烯酰胺、N-丙烯酰天冬酰胺、N-丙烯酰甘氨酰胺、N-丙烯酰谷氨酰胺、N-乙酰基丙烯酰胺、N-甲基丙烯酰基天冬酰胺、N,N-二甲基甲基丙烯酰胺、N,N-二甲基丙烯酰胺、N,N-亚甲基双丙烯酰胺、N,N-乙基甲基丙烯酰胺、N,N-乙基甲基酰胺、N,N-乙基甲基酰胺、N,N-乙基甲基丙烯酰胺、N,N-二烷基-二硫代氨基甲酰基甲基、N,N-二烷基丙烯酰胺、N,N-二乙基丙烯酰胺、N,N-二乙基酰胺、N,N-二乙基甲基丙烯酰胺、N,N-二硫代氨基甲酸、N,N-二硫代氨基甲酸、N,N-二甲基丙烯酰胺、N,N-二甲基甲基丙烯酰胺、N,N-丙基丙烯酰胺、N,N-丙基甲基丙烯酰胺、N-丙烯酰基哌啶、N-丙烯酰基吗啉、N-烷基丙烯酰胺、N-烷基甲基丙烯酰胺、N-烷基取代的丙烯酰胺、N-烷基取代的甲基丙烯酰胺、N-丙二烯基邻苯二甲酰亚胺、N-异丙基丙烯酰胺、N-异丙基酰胺、N-异丙基丁-2,3-二烯酰胺、N-异丙基甲基丙烯酰胺、N-乙基丙烯酰胺、N-乙基甲基丙烯酰胺、N-乙氧基乙基丙烯酰胺、N-乙氧基乙基酰胺、N-乙氧基乙基甲基丙烯酰胺、N-环丙基丙烯酰胺、N-环丙基酰胺、N-环丙基甲基丙烯酰胺、N-四氢糠基丙烯酰胺、N-四氢糠基甲基丙烯酰胺、N-生物素-N'-甲基丙烯酰三亚甲基酰胺、N-乙烯基丙烯酰胺、N-乙烯基烷基丙烯酰胺、N-乙烯基甲基丙烯酰胺、N-丙基丙烯酰胺、N-甲基丙烯酰基哌啶、N-或N,N-二烷基取代的甲基丙烯酰胺、S-丁基丙烯酰胺、t-丁基丙烯酰胺、丙烯酰基甘氨酰胺、丙烯酰基肌氨酸酰胺、丙烯酰基哌啶甲酰胺、丙烯酰基甲基尿嘧啶、乙酰基丙烯酰胺、异丙基丙烯酰胺、乙基异丙基丙烯酰胺、乙二醇、乙二醇烯丙二烯基甲基醚、氧乙烯丙烯酸酯、氧乙烯脱水山梨糖醇月桂酸酯、氧乙烯甲基丙烯酸酯、氧乙烯月桂胺、低聚乙二醇丙烯酸酯、二异丙基丙烯酰胺、二乙基丙烯酰胺、二乙基氨基丙烯酸酯、二乙基氨基甲基丙烯酸酯、二乙二醇丙二烯基甲基醚、二丁基丙烯酰胺、二丙基丙烯酰胺、二甲基丙烯酰胺、二甲基氨基丙烯酰胺、二甲基氨基丙烯酰胺、二甲基氨基丙烯酸酯、二甲胺基丙基丙烯酰胺、二甲基氨基丙基甲基丙烯酰胺、二甲基氨基甲基丙烯酰胺、二甲基氨基甲基丙烯酸酯、钠N,N-二硫代氨基甲酸、丙二醇、六(N,N-二硫代氨基甲酰基甲基)苯、六(溴甲基)苯、甲基丙烯酰胺
以下，将巯基丙酸简称为MPA。根据上述实施例制备且在所述制备工序和40℃、80％湿度下进行的6个月的稳定性试验的结果，将分解率为10％以下的可用于本发明的(温度)刺激响应MPA聚合物示于表16。
[表16]
MPA(((聚氧乙烯辛基苯基醚)丙烯酸酯/二甲胺基丙基丙烯酰胺)共聚物、MPA(((聚氧乙烯辛基苯基醚)甲基丙烯酸酯/二甲胺基丙基丙烯酰胺)共聚物、MPA(((聚氧乙烯壬基苯基醚)丙烯酸酯/二甲胺基丙基丙烯酰胺)共聚物、MPA((聚氧乙烯壬基苯基醚)甲基丙烯酸酯/二甲胺基丙基丙烯酰胺)共聚物、MPA(((聚氧乙烯月桂基醚)丙烯酸酯/二甲胺基丙基丙烯酰胺)共聚物、MPA(((聚氧乙烯月桂基醚)甲基丙烯酸酯/二甲胺基丙基丙烯酰胺)共聚物、MPA(1,2,4,5-四(N,N-二硫代氨基甲酰基甲基)苯/二甲基胺基丙基丙烯酰胺)共聚物、MPA(1,3,5-三(溴甲基)苯/二甲胺基丙基丙烯酰胺)共聚物、MPA(2-n-丙基-2-噁唑啉/二甲胺基丙基丙烯酰胺)共聚物、MPA(2-N,N-二甲基氨基乙基丙烯酸酯/二甲胺基丙基丙烯酰胺)共聚物、MPA(2-N,N-二甲基氨基乙基甲基丙烯酸酯DMAEMA/二甲胺基丙基丙烯酰胺)共聚物、MPA(2-氨基-2-羟甲基-1,3-丙二醇/二甲胺基丙基丙烯酰胺)共聚物、MPA(2-氨基-2-羟甲基-1-3-丙二醇(Tris)/二甲胺基丙基丙烯酰胺)共聚物、MPA(2-氨基-2-羟甲基-1,3-丙二醇/二甲胺基丙基丙烯酰胺)共聚物、MPA(2-羟基-3-苯氧基丙基丙烯酸酯/二甲胺基丙基丙烯酰胺)共聚物、MPA(丙烯酸-2-羟基丁酯/二甲胺基丙基丙烯酰胺)共聚物、MPA(甲基丙烯酸-2-羟基丁酯/二甲胺基丙基丙烯酰胺)共聚物、MPA(丙烯酸2-羟基丙酯/二甲胺基丙基丙烯酰胺)共聚物、MPA(甲基丙烯酸2-羟丙酯/二甲胺基丙基丙烯酰胺)共聚物、MPA(3,5-三(N,N-二硫代氨基甲酰基甲基)苯/二甲胺基丙基丙烯酰胺)共聚物、MPA(3-N,N-二甲胺基丙基丙烯酰胺/二甲胺基丙基丙烯酰胺)共聚物、MPA(N-丙烯酰基天冬酰胺/二甲胺基丙基丙烯酰胺)共聚物、MPA(N-丙烯酰基甘氨酰胺/二甲胺基丙基丙烯酰胺)共聚物、MPA(N-丙烯酰基谷氨酸/二甲胺基丙基丙烯酰胺)共聚物、MPA(N-乙酰基丙烯酰胺/二甲胺基丙基丙烯酰胺)共聚物、MPA(N-甲基丙烯酰基天冬酰胺/二甲胺基丙基丙烯酰胺)共聚物、MPA(N,N-二甲基甲基丙烯酰胺/二甲胺基丙基丙烯酰胺)共聚物、MPA(N,N-二甲基丙烯酰胺/二甲胺基丙基丙烯酰胺)共聚物、MPA(N,N-亚甲基双丙烯酰胺/二甲胺基丙基丙烯酰胺)共聚物、MPA(N,N-乙基甲基丙烯酰胺/二甲胺基丙基丙烯酰胺)共聚物、MPA(N,N-乙基甲基酰胺)/二甲胺基丙基丙烯酰胺)共聚物、MPA(N,N-乙基甲基甲基丙烯酰胺/二甲胺基丙基丙烯酰胺)共聚物、MPA(N,N-二烷基-二硫代氨基甲酰基甲基)苯/二甲胺基丙基丙烯酰胺)共聚物、MPA(N,N-二烷基丙烯酰胺/二甲胺基丙基丙烯酰胺)共聚物、MPA(N,N-二乙基丙烯酰胺/二甲胺基丙基丙烯酰胺)共聚物、MPA(N,N-二乙基酰胺)/二甲胺基丙基丙烯酰胺)共聚物、MPA(N,N-二乙基甲基丙烯酰胺/二甲胺基丙基丙烯酰胺)共聚物、MPA(N,N-二硫代氨基甲酸/二甲胺基丙基丙烯酰胺)共聚物、MPA(N,N-二硫代氨基甲酸盐/二甲胺基丙基丙烯酰胺)共聚物、MPA(N,N-二甲基丙烯酰胺/二甲胺基丙基丙烯酰胺)共聚物、MPA(N,N-二甲基甲基丙烯酰胺/二甲胺基丙基丙烯酰胺)共聚物、MPA(N,N-丙基丙烯酰胺/二甲胺基丙基丙烯酰胺)共聚物、MPA(N,N-异丙基甲基丙烯酰胺/二甲胺基丙基丙烯酰胺)共聚物、MPA(N-丙烯酰基哌啶/二甲胺基丙基丙烯酰胺)共聚物、MPA(N-丙烯酰吗啉/二甲胺基丙基丙烯酰胺)共聚物、MPA(N-烷基丙烯酰胺/二甲胺基丙基丙烯酰胺)共聚物、MPA(N-二烷基甲基丙烯酰胺/二甲胺基丙基丙烯酰胺)共聚物、MPA(N-烷基取代的丙烯酰胺/二甲胺基丙基丙烯酰胺)共聚物、MPA(N-烷基取代的甲基丙烯酰胺/二甲胺基丙基丙烯酰胺)共聚物、MPA(N-丙二烯基邻苯二甲酰亚胺/二甲胺基丙基丙烯酰胺)共聚物、MPA(N-异丙基丙烯酰胺)/二甲胺基丙基丙烯酰胺)共聚物、MPA(N-异丙基酰胺/二甲胺基丙基丙烯酰胺)共聚物、MPA(N-异丙基丁-2，3-二烯酰胺/二甲胺基丙基丙烯酰胺)共聚物、MPA(N-异丙基甲基丙烯酰胺/二甲胺基丙基丙烯酰胺)共聚物、MPA(N-乙基丙烯酰胺/二甲胺基丙基丙烯酰胺)共聚物、MPA(N-乙基甲基丙烯酰胺/二甲胺基丙基丙烯酰胺)共聚物、MPA(N-乙氧基乙基丙烯酰胺/二甲胺基丙基丙烯酰胺)共聚物、MPA(N-乙氧基乙基酰胺/二甲胺基丙基丙烯酰胺)共聚物、MPA(N-乙氧基乙基甲基丙烯酰胺/二甲胺基丙基丙烯酰胺)共聚物、MPA(N-环丙基丙烯酰胺/二甲胺基丙基丙烯酰胺)共聚物、MPA(N-环丙基酰胺/二甲胺基丙基丙烯酰胺)共聚物、MPA(N-环丙基甲基丙烯酰胺/二甲胺基丙基丙烯酰胺)共聚物、MPA(N-四氢糠基丙烯酰胺/二甲胺基丙基丙烯酰胺)共聚物、MPA(N-四氢糠基甲基丙烯酰胺/二甲胺基丙基丙烯酰胺)共聚物、MPA(N-生物素-N'-甲基丙烯酰基三亚甲基酰胺/二甲胺基丙基丙烯酰胺)共聚物、MPA(N-乙烯基丙烯酰胺/二甲胺基丙基丙烯酰胺)共聚物、MPA(N-乙烯基烷基丙烯酰胺/二甲胺基丙基丙烯酰胺)共聚物、MPA(N-乙烯基甲基丙烯酰胺/二甲胺基丙基丙烯酰胺)共聚物、MPA(N-丙基丙烯酰胺/二甲胺基丙基丙烯酰胺)共聚物、MPA(N-甲基丙烯酰基哌啶/二甲胺基丙基丙烯酰胺)共聚物、MPA(N-二烷基甲基丙烯酰胺/二甲胺基丙基丙烯酰胺)共聚物、MPA(s-丁基丙烯酰胺/二甲胺基丙基丙烯酰胺)共聚物、MPA(t-丁基丙烯酰胺/二甲胺基丙基丙烯酰胺)共聚物、MPA(丙烯酰基甘氨酰胺/二甲胺基丙基丙烯酰胺)共聚物、MPA(丙烯酰基肌氨酸酰胺/二甲胺基丙基丙烯酰胺)共聚物、MPA(丙烯酰基哌啶甲酰胺/二甲胺基丙基丙烯酰胺)共聚物、MPA(丙烯酰基甲基尿嘧啶/二甲胺基丙基丙烯酰胺)共聚物、MPA(乙酰基丙烯酰胺/二甲胺基丙基丙烯酰胺)共聚物、MPA(异丙基丙烯酰胺/二甲胺基丙基丙烯酰胺)共聚物、MPA(乙基异丙基丙烯酰胺/二甲胺基丙基丙烯酰胺)共聚物、MPA(乙二醇/二甲胺基丙基丙烯酰胺)共聚物、MPA(乙二醇丙二烯基甲基醚/二甲胺基丙基丙烯酰胺)共聚物、MPA(氧乙烯丙烯酸酯/二甲胺基丙基丙烯酰胺)共聚物、MPA(氧乙烯脱水山梨糖醇月桂酸酯/二甲胺基丙基丙烯酰胺)共聚物、MPA(氧乙烯甲基丙烯酸酯/二甲胺基丙基丙烯酰胺)共聚物、MPA(氧乙烯月桂胺/二甲胺基丙基丙烯酰胺)共聚物、MPA(低聚乙二醇丙烯酸酯/二甲胺基丙基丙烯酰胺)共聚物、MPA(二异丙基丙烯酰胺/二甲胺基丙基丙烯酰胺)共聚物、MPA(二乙基丙烯酰胺/二甲胺基丙基丙烯酰胺)共聚物、MPA(二乙基氨基丙烯酸酯/二甲胺基丙基丙烯酰胺)共聚物、MPA(二乙基氨基甲基丙烯酸酯/二甲胺基丙基丙烯酰胺)共聚物、MPA(二甘醇丙二烯基甲基醚/二甲胺基丙基丙烯酰胺)共聚物、MPA(二丁基丙烯酰胺/二甲胺基丙基丙烯酰胺)共聚物、MPA(二丙基丙烯酰胺/二甲胺基丙基丙烯酰胺)共聚物、MPA(二甲基丙烯酰胺/二甲胺基丙基丙烯酰胺)共聚物、MPA(二甲基氨基丙烯酰胺/二甲胺基丙基丙烯酰胺)共聚物、MPA(二甲基氨基丙烯酸酯/二甲胺基丙基丙烯酰胺)共聚物、MPA(二甲胺基丙基丙烯酰胺/二甲胺基丙基丙烯酰胺)共聚物、MPA(二甲胺基丙基甲基丙烯酰胺/二甲胺基丙基丙烯酰胺)共聚物、MPA(二甲基氨基甲基丙烯酰胺/二甲胺基丙基丙烯酰胺)共聚物、MPA(二甲基氨基丙烯酸甲酯/二甲胺基丙基丙烯酰胺)共聚物)、MPA(钠N,N-二硫代氨基甲酸盐/二甲胺基丙基丙烯酰胺)共聚物、MPA(丙二醇/二甲胺基丙基丙烯酰胺)共聚物、MPA(六(N,N-二硫代氨基甲酰基甲基)苯/二甲胺基丙基丙烯酰胺)共聚物、MPA(六(溴甲基)苯/二甲胺基丙基丙烯酰胺)共聚物、MPA(甲基丙烯酰胺/二甲胺基丙基丙烯酰胺)共聚物
进一步地，根据在所述制备工序和40℃、80％湿度下进行的6个月的稳定性试验的结果，将分解率为10％以下的可用于本发明的刺激响应聚合物结合脂质示于表17。以下，将二油酰磷脂酰乙醇胺巯基丙酰简称为“DOPEAMP”。进一步地，将二甲胺基丙基丙烯酰胺也被简称为“DMAPAA”。
[表17]
DOPEAMP(聚氧乙烯辛基苯基醚)丙烯酸酯/二甲胺基丙基丙烯酰胺)共聚物、DOPEAMP(聚氧乙烯辛基苯基醚)甲基丙烯酸酯/二甲胺基丙基丙烯酰胺)共聚物、DOPEAMP(聚氧乙烯壬基苯基醚)丙烯酸酯/二甲胺基丙基丙烯酰胺)共聚物、DOPEAMP(聚氧乙烯壬基苯基醚)甲基丙烯酸酯/二甲胺基丙基丙烯酰胺)共聚物、DOPEAMP((聚氧乙烯月桂基醚)丙烯酸酯/二甲胺基丙基丙烯酰胺)共聚物、DOPEAMP((聚氧乙烯月桂基醚)甲基丙烯酸酯/二甲胺基丙基丙烯酰胺)共聚物、DOPEAMP((聚氧乙烯月桂基醚)甲基丙烯酸酯/二甲胺基丙基丙烯酰胺)、DOPEAMP(1,2,4,5-四(N,N-二硫代氨基甲酰基甲基)苯/二甲胺基丙基丙烯酰胺)共聚物、DOPEAMP(1,3,5-三(溴甲基)苯/二甲胺基丙基丙烯酰胺)共聚物、DOPEAMP(2-n-丙基-2-恶唑啉/二甲胺基丙基丙烯酰胺)共聚物、DOPEAMP(2-N,N-二甲基氨基乙基丙烯酸酯/二甲胺基丙基丙烯酰胺)共聚物、DOPEAMP(2-N,N-二甲基氨基乙基甲基丙烯酸酯DMAEMA/二甲胺基丙基丙烯酰胺)共聚物、DOPEAMP(2-氨基-2-羟甲基-1,3丙二醇/二甲胺基丙基丙烯酰胺)共聚物、DOPEAMP(2-氨基-2-羟甲基-1,3-丙二醇/二甲胺基丙基丙烯酰胺)共聚物、DOPEAMP(2-氨基-2-羟甲基-1,3-丙二醇(Tris)/二甲胺基丙基丙烯酰胺)共聚物、DOPEAMP(2-氨基-2-羟甲基-1,3-丙二醇/二甲胺基丙基丙烯酰胺)共聚物、DOPEAMP(2-羟基-3-苯氧基丙基丙烯酰胺/二甲胺基丙基丙烯酰胺)共聚物、DOPEAMP(丙烯酸2-羟基丁酯/二甲胺基丙基丙烯酰胺)共聚物、DOPEAMP(甲基丙烯酸-2-羟基丁基/二甲胺基丙基丙烯酰胺)共聚物、DOPEAMP(丙烯酸2-羟基丙酯/二甲胺基丙基丙烯酰胺)共聚物、DOPEAMP(甲基丙烯酸2-羟丙酯/二甲胺基丙基丙烯酰胺)共聚物、DOPEAMP(3,5-三(N,N-二硫代氨基甲酰基甲基)苯/二甲胺基丙基丙烯酰胺)共聚物、DOPEAMP(3-N,N-二甲胺基丙基丙烯酰胺/二甲胺基丙基丙烯酰胺)共聚物、DOPEAMP(N-丙烯酰基天冬酰胺/二甲胺基丙基丙烯酰胺)共聚物、DOPEAMP(N-丙烯酰基甘氨酰胺/二甲胺基丙基丙烯酰胺)共聚物、DOPEAMP(N-丙烯酰基谷氨酸/二甲胺基丙基丙烯酰胺)共聚物、DOPEAMP(N-乙酰基丙烯酰胺/二甲胺基丙基丙烯酰胺)共聚物、DOPEAMP(N-甲基丙烯酰基天冬酰胺/二甲胺基丙基丙烯酰胺)共聚物、DOPEAMP(N,N-二甲基甲基丙烯酰胺/二甲胺基丙基丙烯酰胺)共聚物、DOPEAMP(N,N-二甲基丙烯酰胺/二甲胺基丙基丙烯酰胺)共聚物、DOPEAMP(N,N-亚甲基双丙烯酰胺/二甲胺基丙基丙烯酰胺)共聚物、DOPEAMP(N,N-乙基甲基丙烯酰胺/二甲胺基丙基丙烯酰胺)共聚物、DOPEAMP(N,N-乙基甲基酰胺/二甲胺基丙基丙烯酰胺)共聚物、DOPEAMP(N,N-乙基甲基甲基丙烯酰胺/二甲胺基丙基丙烯酰胺)共聚物、DOPEAMP(N,N-二烷基-二硫代氨基甲酰基甲基)苯/二甲胺基丙基丙烯酰胺)共聚物、DOPEAMP(N,N-二烷基丙烯酰胺/二甲胺基丙基丙烯酰胺)共聚物、DOPEAMP(N,N-二乙基丙烯酰胺/二甲胺基丙基丙烯酰胺)共聚物、DOPEAMP(N,N-二乙基酰胺/二甲胺基丙基丙烯酰胺)共聚物、DOPEAMP(N,N-二乙基甲基丙烯酰胺/二甲胺基丙基丙烯酰胺)共聚物、DOPEAMP(N,N-二硫代氨基甲酸/二甲胺基丙基丙烯酰胺)共聚物、DOPEAMP(N,N-二硫代氨基甲酸盐/二甲胺基丙基丙烯酰胺)共聚物、DOPEAMP(N,N-二甲基丙烯酰胺/二甲胺基丙基丙烯酰胺)共聚物、DOPEAMP(N,N-二甲基甲基丙烯酰胺/二甲胺基丙基丙烯酰胺)共聚物、DOPEAMP(N,N-丙基丙烯酰胺/二甲胺基丙基丙烯酰胺)共聚物、DOPEAMP(N,N-异丙基甲基丙烯酰胺/二甲胺基丙基丙烯酰胺)共聚物、DOPEAMP(N-丙烯酰基哌啶/二甲胺基丙基丙烯酰胺)共聚物、DOPEAMP(N-丙烯酰吗啉/二甲胺基丙基丙烯酰胺)共聚物、DOPEAMP(N-烷基丙烯酰胺/二甲胺基丙基丙烯酰胺)共聚物、DOPEAMP(N-二烷基甲基丙烯酰胺/二甲胺基丙基丙烯酰胺)共聚物、DOPEAMP(N-烷基取代的丙烯酰胺/二甲胺基丙基丙烯酰胺)共聚物、DOPEAMP(N-烷基取代的丙烯酰胺/二甲胺基丙基丙烯酰胺)共聚物、DOPEAMP(N-烷基取代的甲基丙烯酰胺/二甲胺基丙基丙烯酰胺)共聚物、DOPEAMP(N-丙二烯基邻苯二甲酰亚胺/二甲胺基丙基丙烯酰胺)共聚物、DOPEAMP(N-异丙基丙烯酰胺/二甲胺基丙基丙烯酰胺)共聚物、DOPEAMP(N-异丙基酰胺/二甲胺基丙基丙烯酰胺)共聚物、DOPEAMP(N-异丙基丁-2,3-二烯酰胺/二甲胺基丙基丙烯酰胺)共聚物、DOPEAMP(N-异丙基甲基丙烯酰胺/二甲胺丙基丙烯酰胺)共聚物、DOPEAMP(N-乙基丙烯酰胺/二甲胺基丙基丙烯酰胺)共聚物、DOPEAMP(N-乙基甲基丙烯酰胺/二甲胺基丙基丙烯酰胺)共聚物、DOPEAMP(N-乙氧基乙基丙烯酰胺/二甲胺基丙基丙烯酰胺)共聚物、DOPEAMP(N-乙氧基乙基酰胺/二甲胺基丙基丙烯酰胺)共聚物、DOPEAMP(N-乙氧基乙基甲基丙烯酰胺/二甲胺基丙基丙烯酰胺)共聚物、DOPEAMP(N-环丙基丙烯酰胺/二甲胺丙基丙烯酰胺)共聚物、DOPEAMP(N-环丙基酰胺/二甲胺丙基丙烯酰胺)共聚物、DOPEAMP(N-环丙基甲基丙烯酰胺/二甲胺基丙基丙烯酰胺)共聚物、DOPEAMP(N-四氢糠基丙烯酰胺/二甲胺基丙基丙烯酰胺)共聚物、DOPEAMP(N-四氢糠基甲基丙烯酰胺/二甲胺基丙基丙烯酰胺)共聚物、DOPEAMP(N-生物素-N′-甲基丙烯酰基三亚甲基酰胺/二甲胺基丙基丙烯酰胺)共聚物、DOPEAMP(N-乙烯基丙烯酰胺/二甲胺基丙基丙烯酰胺)共聚物、DOPEAMP(N-乙烯基烷基丙烯酰胺/二甲胺基丙基丙烯酰胺)共聚物、DOPEAMP(N-乙烯基甲基丙烯酰胺/二甲胺基丙基丙烯酰胺)共聚物、DOPEAMP(N-丙基丙烯酰胺/二甲胺基丙基丙烯酰胺)共聚物、DOPEAMP(N-甲基丙烯酰基哌啶/二甲胺基丙基丙烯酰胺)共聚物、DOPEAMP(N-二烷基甲基丙烯酰胺/二甲胺基丙基丙烯酰胺)共聚物、DOPEAMP(s-丁基丙烯酰胺/二甲胺基丙基丙烯酰胺)共聚物、DOPEAMP(t-丁基丙烯酰胺/二甲胺基丙基丙烯酰胺)共聚物、DOPEAMP(丙烯酰基甘氨酰胺/二甲胺基丙基丙烯酰胺)共聚物、DOPEAMP(丙烯酰基肌氨酸酰胺/二甲胺基丙基丙烯酰胺)共聚物、DOPEAMP(丙烯酰基甲基尿嘧啶/二甲胺基丙基丙烯酰胺)共聚物、DOPEAMP(乙酰基丙烯酰胺/二甲胺基丙基丙烯酰胺)共聚物、DOPEAMP(异丙基丙烯酰胺/二甲胺基丙基丙烯酰胺)共聚物、DOPEAMP(乙基异丙基丙烯酰胺/二甲胺基丙基丙烯酰胺)共聚物、DOPEAMP(乙二醇/二甲胺基丙基丙烯酰胺)共聚物、DOPEAMP(乙二醇丙二烯基甲基醚/二甲胺基丙基丙烯酰胺)共聚物、DOPEAMP(氧乙烯丙烯酸酯/二甲胺基丙基丙烯酰胺)共聚物、DOPEAMP(氧乙烯脱水山梨糖醇月桂酸酯/二甲胺基丙基丙烯酰胺)共聚物、DOPEAMP(氧乙烯甲基丙烯酸酯/二甲胺基丙基丙烯酰胺)共聚物、DOPEAMP(氧乙烯月桂胺/二甲胺基丙基丙烯酰胺)共聚物、DOPEAMP(低聚乙二醇丙烯酸酯/二甲胺基丙基丙烯酰胺)共聚物、DOPEAMP(二异丙基丙烯酰胺/二甲胺基丙基丙烯酰胺)共聚物、DOPEAMP(二乙基丙烯酰胺/二甲胺基丙基丙烯酰胺)共聚物、DOPEAMP(二乙基氨基丙烯酸酯/二甲胺基丙基丙烯酸酯)共聚物、DOPEAMP(二乙基氨基甲基丙烯酸酯/二甲胺基丙基丙烯酸酯)共聚物、DOPEAMP(二甘醇烯丙二烯基甲基醚/二甲胺基丙基丙烯酰胺)共聚物、DOPEAMP(二丁基丙烯酰胺/二甲胺基丙基丙烯酰胺)共聚物、DOPEAMP(二丙基丙烯酰胺/二甲胺基丙基丙烯酰胺)共聚物、DOPEAMP(二甲基丙烯酰胺/二甲胺基丙基丙烯酰胺)共聚物、DOPEAMP(二甲基氨基丙烯酰胺/二甲胺基丙基丙烯酰胺)共聚物、DOPEAMP(二甲基氨基丙烯酸酯/二甲胺基丙基丙烯酰胺)共聚物、DOPEAMP(二甲胺基丙基丙烯酰胺/二甲胺基丙基丙烯酰胺)共聚物、DOPEAMP(二甲胺基丙基甲基丙烯酰胺/二甲胺基丙基丙烯酰胺)共聚物、DOPEAMP(二甲基氨基甲基丙烯酰胺/二甲胺基丙基丙烯酰胺)共聚物、DOPEAMP(二甲基氨基丙烯酸甲酯/二甲胺基丙基丙烯酰胺)共聚物、DOPEAMP(钠N,N-二硫代氨基甲酸盐/二甲胺基丙基丙烯酰胺)共聚物、DOPEAMP(丙二醇/二甲胺基丙基丙烯酰胺)共聚物、DOPEAMP(六(N，N-二硫代氨基甲酰基甲基)苯/二甲胺基丙基丙烯酰胺)共聚物、DOPEAMP(六(溴甲基)苯/二甲胺基丙基丙烯酰胺)共聚物、DOPEAMP(甲基丙烯酰胺/二甲胺基丙基丙烯酰胺)共聚物
根据使用以下所示的具有乙醇胺基的脂质来代替上述所示的二油酰磷脂酰乙醇胺，在40℃、80％湿度下进行的6个月的稳定性试验的结果，将分解率在10％以下的可用于本发明的刺激响应聚合物结合脂质的、具有乙醇胺基的脂质示于表18。
[表18]
2-烷基-N-羧甲基-N-羟乙基咪唑鎓甜菜碱乙醇胺、N-酰基天冬氨酸乙醇胺、N-酰基谷氨酸乙醇胺、N-酰基肌氨酸乙醇胺、N-酰基甲基丙氨酸乙醇胺、N-酰基甲基牛磺酸乙醇胺、N-硬脂酰基二氢鞘氨醇乙醇胺、N-硬脂酰植物鞘氨醇乙醇胺、酰基(C12，14)天冬氨酸乙醇胺、酰基N-甲基氨基酸乙醇胺、酰基氨基酸乙醇胺、酰基乳酸乙醇胺、乙酰乙基羧基甲基噻唑烷甲酸乙醇胺、氨基乙酸甜菜碱乙醇胺、烷基(烯基)寡聚二醇乙醇胺、烷基苯酚聚乙二醇乙醇胺、烷氧基化三甘油醚乙醇胺、植物甾醇异硬脂酸酯乙醇胺、己酰脯氨酸乙醇胺、甘油磷酸乙醇胺、葡萄糖醛酸乙醇胺、椰油酰丙氨酸乙醇胺、椰油酰谷氨酸乙醇胺、椰油酰基甲基牛磺酸乙醇胺、丁二酸乙醇胺、表面活性蛋白乙醇胺、赖氨酸二硬脂酰谷氨酸乙醇胺、二磷脂酰甘油乙醇胺、赖氨酸二肉豆蔻酰谷氨酸乙醇胺、赖氨酸二月桂酰谷氨酸乙醇胺、二亚油酰谷氨酸赖氨酸乙醇胺、二辛基十二烷基硬脂酰谷氨酸乙醇胺、硬脂酰谷氨酸乙醇胺、刺孢青霉酸乙醇胺、鞘磷脂乙醇胺、神经酰胺磷酸乙醇胺、神经酰胺氨基乙基膦酸乙醇胺、脑苷脂乙醇胺、棕榈仁油脂肪酸酰胺丙基甜菜碱乙醇胺、棕榈脂肪酸谷氨酸乙醇胺、棕榈酰天冬氨酸乙醇胺、双(Nε-月桂酰-L-赖氨酸)癸二酰乙醇胺、羟基硬脂基植物鞘氨醇乙醇胺、聚氧乙烯甘油基焦谷氨酸异硬脂酸酯乙醇胺、甘油单焦谷氨酸单油酸酯乙醇胺、磷脂酰乙醇胺、聚氧乙烯硬脂基乙醇胺、聚氧乙烯脱水山梨醇硬脂基乙醇胺、聚氧乙烯脱水山梨糖醇脂肪酸酯、聚氧乙烯甲基葡萄糖硬脂基乙醇胺、聚氧乙烯硬脂基乙醇胺、聚氧乙烯月桂基乙醇胺、肉豆蔻酰谷氨酸乙醇胺、肉豆蔻酰基甲基氨基丙酸己基癸酯乙醇胺、肉豆蔻酰甲基牛磺酸乙醇胺、聚氧乙烯山梨糖醇单油酸酯乙醇胺、椰子油烷基甜菜碱乙醇胺、椰油脂肪酸N-甲基乙醇胺、椰子脂肪酸酰基甘氨酸乙醇胺、椰子脂肪酸酰基谷氨酸乙醇胺、椰子油脂肪酸酰胺丙基甜菜碱乙醇胺、椰子油脂肪酸甘油酯乙醇胺、椰子油脂肪酸谷氨酸乙醇胺、椰子油脂肪酸肌氨酸乙醇胺、椰子油脂肪酸甲基丙氨酸乙醇胺、椰子油脂肪酸甲基牛磺酸乙醇胺、月桂酰胺丙基甜菜碱乙醇胺、月桂基氨基二乙酸乙醇胺、月桂基二乙二氨基甘氨酸乙醇胺、月桂基二甲基氨基乙酸甜菜碱乙醇胺、月桂酰胺丙基甜菜碱、醋酸月桂基醚乙醇胺、硫酸月桂基醚乙醇胺、月桂酰天冬氨酸乙醇胺、二己基癸基月桂酰谷氨酸乙醇胺、月桂酰谷氨酸三乙醇胺、甲基丙氨酸月桂酰谷氨酸乙醇胺、月桂酰谷氨酸三乙醇胺、月桂酰肌氨酸三乙醇胺、月桂酰甲基丙氨酸乙醇胺、月桂酰甲基甘氨酸乙醇胺、月桂酰甲基牛磺酸乙醇胺、月桂酰单乙醇酰胺琥珀酸乙醇胺、溶血磷脂酰乙醇胺
(pH、光刺激响应聚合物的制备)
在pH、光刺激响应聚合物的情况下，含有N原子的聚合物可以通过离子键将聚合物与细胞递送用载体例子结合，因此可以仅与第一单体聚合而不添加3-巯基丙酸。在这种情况下，可以制备以下第0158段所记载的聚合物。根据在40℃、80％湿度下进行的6个月的稳定性试验的结果可知，这些聚合物的分解率为10％以下。
聚葡萄糖胺、(烷基丙烯酰胺/聚丙烯酸)共聚物、聚乙烯烷基丙烯酰胺、聚烷基丙烯酰胺、聚(苯基偶氮苯基)丙烯酰胺、聚[(4-吡啶偶氮)苯氧基]六甲基丙烯酸酯、N-乙烯基烷基丙烯酰胺、聚[(乙烯基氧基)乙氧基]偶氮苯
(pH、光刺激响应MPA聚合物的制备)
与第一个制备例相同地，可以使用pH和光刺激响应单体来制备以下的pH和光刺激响应聚合物。在pH和光刺激响应聚合物的情况下，由于不需要精细的温度设置，因此可以仅与第一单体聚合而不进行与第二单体的聚合反应就可以制备以下第0159段所记载的刺激响应聚合物。对于这种情况下的配合比，可以通过增加与减少的第二单体量对应量的第一单体来改变，可以制备以下聚合物。以下，将巯基丙酸简称为“MPA”。根据在40℃、80％湿度下进行的6个月的稳定性试验的结果可知，这些聚合物的分解率为10％以下。pH刺激响应聚合物：MPA(聚葡糖胺)、MPA(聚(乙氧基乙烯基乙醚))、MPA(烷基丙烯酰胺/聚丙烯酸)共聚物、MPA(聚(乙烯基烷基丙烯酰胺))、MPA(聚(乙烯氧基乙氧基)苯甲酸)、MPA(聚(乙烯氧基乙氧基)己酸)、MPA(聚(乙烯氧基)己酸)、MPA(聚(异丁基乙烯基醚))，光刺激响应聚合物：MPA(聚(烷基丙烯酰胺))、MPA(聚((4-苯基偶氮苯基)丙烯酰胺))、MPA(聚([(吡啶偶氮)苯氧基]六甲基丙烯酸酯))、MPA(聚(乙烯基烷基丙烯酰胺))、MPA(聚((乙烯基氧基)乙氧基)偶氮苯))、MPA(聚((乙氧基)乙氧基乙烯基乙醚))
(pH、光刺激响应聚合物结合脂质的制备)
使用上述MPA衍生物对层结构形成脂质即二油酰磷脂酰乙醇胺进行修饰，同样制备以下第0160段所记载的刺激响应聚合物结合脂质。以下，将二油酰磷脂酰乙醇胺巯基丙酰简称为“DOPEAMP”。根据在40℃、80％湿度下进行的6个月的稳定性试验的结果可知，这些聚合物的分解率为10％以下。
pH刺激响应聚合物：DOPEAMP(聚葡糖胺)、DOPEAMP(聚(乙氧基乙烯基乙醚)、DOPEAMP(烷基丙烯酰胺/聚丙烯酸)共聚物、DOPEAMP(聚(乙烯基烷基丙烯酰胺))、DOPEAMP(聚(乙烯氧基乙氧基)苯甲酸)、DOPEAMP(聚(乙烯氧基乙氧基)己酸)、DOPEAMP(聚(乙烯氧基)己酸)、DOPEAMP(聚(异丁基乙烯基醚))，光刺激响应聚合物：DOPEAMP(聚(烷基丙烯酰胺))、DOPEAMP(聚((4-苯基偶氮苯基)丙烯酰胺))、DOPEAMP(聚([吡啶偶氮)苯氧基]六甲基丙烯酸酯))、DOPEAMP(聚(乙烯基烷基丙烯酰胺))、DOPEAMP(聚(((乙烯基氧基)乙氧基)偶氮苯))、DOPEAMP(聚((乙氧基)乙氧基乙烯基乙醚))
(由刺激响应聚合物结合脂质、具有ATG-CTS活性的维生素衍生物以及由烃构成的层形成表面活性剂构成的三种混合细胞递送用载体的制备)
脂质总量为20mg，按摩尔比为ATG-CTS活性较高的维生素衍生物即VCIP(抗坏血酸四己基癸醇酸酯)：层形成表面活性剂即二油酰磷脂酰乙醇胺巯基丙酰(DOPE)：DOPEMP(NIPAA/DMAPAA)Cop)＝3:7的比例分别溶解在氯仿中。另外，将溶解在氯仿中的DOPE的层形成表面活性剂二油酰磷脂酰乙醇胺(DOPE)与温度刺激响应聚合物结合脂质DOPEMP(NIPAA/DMAPAA)Cop的摩尔比设定为6.5：0.5。将该溶液转移到茄形烧瓶中，用蒸发器除去溶剂，制备成脂质膜。向该脂质膜中加入1ml纯水，使脂质膜水合，然后通过涡旋分散。之后，在超声波浴中超声处理30分钟，减小脂质体的尺寸，然后用挤出机将脂质体通过200nm的过滤器，以调整脂质体的尺寸。平均粒径为152nm。之后，通过凝胶过滤对脂质体进行分离和纯化，制备了含有ATG-CTS激活物质、温度响应聚合物以及烃的本发明的细胞递送用载体。当使用透射电子显微镜用染色法观察该细胞递送用载体时，确认了多层囊泡结构(层液晶结构)，并确认了这些细胞递送用载体具有层状液晶结构。
(由刺激响应聚合物结合脂质、具有ATG-CTS活性的维生素衍生物、由烃构成的层形成表面活性剂以及脂质构成的细胞递送用载体的制备)
添加卵磷脂2％、甘油50％、山嵛醇8％、硬脂醇7％、PEG-20植物甾醇4％、鲸蜡醇3％、植物固醇1％、硬脂酸甘油酯1％、三(辛酸/癸酸)甘油酯2％、胆固醇0.3％、ATG-CTS活性较高的维生素衍生物即GOVC(甘油辛基抗坏血酸)1％和DOPEMP(NIPAA/DMAPAA)Cop0.2％以及角鲨烷10％，并用自转公转搅拌器进行搅拌。向其中加入纯水至100％，并通过涡旋分散。之后，在超声波浴中超声处理30分钟，减小乳化颗粒的尺寸，然后用挤出机将其通过200nm的过滤器，以调整脂质体的尺寸。平均粒径为122nm。之后，通过凝胶过滤对脂质体进行分离和纯化，制备了含有ATG-CTS激活物质、温度刺激响应聚合物以及烃的本发明的细胞递送用载体。当使用透射电子显微镜用染色法观察该细胞递送用载体时，确认了多层囊泡结构(液晶结构)，并确认了这些细胞递送用载体具有层状液晶结构。
(与本发明的比较实验)
脂质总量为20mg，按摩尔比为(ATG-CTS活性较高的维生素衍生物即抗坏血酸四己基癸醇酸酯，VCIP)：(作为脂质的1，2-二油酰基-3-三甲基丙烷铵)：(作为层形成表面活性剂的二油酰磷脂酰乙醇胺和DOPEMP(NIPAA/DMAPAA 5％)Cop的总重量)＝1：2：7的比例分别溶解在氯仿中。进一步地，加入1mg荧光染料即罗丹明(羧罗丹明110-PEG4-炔烃)并溶解。另外，本实验中使用的DOPEMP(NIPAA/DMAPAA 5％)Cop在水中的下临界溶解温度为40℃。以总重量计，作为层形成表面活性剂的二油酰磷脂酰乙醇胺和DOPEMP(NIPAA/DMAPAA 5％)Cop的摩尔比为6.5：0.5。将溶液转移到茄形烧瓶中，用蒸发器除去溶剂，制备成脂质膜。向该脂质膜中加入1ml的PBS，使脂质膜水合，然后通过涡旋分散。之后，在超声波浴中超声处理30分钟，减小脂质体的尺寸，然后用挤压机使其通过200nm的过滤器，以调整脂质体的尺寸。实施例和比较例的平均粒径为114nm±1nm。另外，仅在本发明的实施例中使用不同大尺寸的过滤器，制备了平均粒径为252nm、312nm、578nm和812nm的脂质体。之后，通过凝胶过滤对脂质体进行分离和纯化，制备了含有ATG-CTS激活物质、温度响应聚合物以及烃的本发明的细胞递送用载体。当使用透射电子显微镜用染色法观察该细胞递送用载体时，确认了多层囊泡结构(层液晶结构)，并确认了这些细胞递送用载体具有层液晶结构。
(比较例1)
使用Invitrogen公司制造的Lipofectamine(注册商标)RNAiMAX)作为比较例1的脂质体。使其以最终浓度与实施例相同地包含罗丹明。
(比较例2)
在制备脂质体时，除了不添加DOPEMP(NIPAA/DMAPAA)Cop之外，以与实施例1相同的方式制备脂质体。比较例2除了不存在温度刺激响应聚合物之外与实施例1相同。
(比较例3)
除了使用PEG(聚乙二醇，分子量：2000)代替DOPEMP(NIPAA/DMAPAA)Cop之外，以与实施例1相同的方式制备脂质体。
在6孔板中，使用含有5％FBS的DMEM(低葡萄糖)将正常人表皮成纤维细胞以5×105细胞/孔的密度在37℃下培养24小时，然后分别替换为含有上述制备的实施例和比较例的四种细胞递送用载体的培养基(添加罗丹明至最终浓度为1μM)，在35℃下培养1小时。之后，将仅有本发明实施例的组分为未改变培养温度而保持20分钟的组和在40℃下处理20分钟的组，进一步地，两组都在35℃培养1小时。之后，用PBS洗涤五次，用4％多聚甲醛磷酸盐缓冲液固定20分钟，再用PBS洗涤两次，用荧光酶标仪在激发波长为555(nm)、荧光波长为580(nm)的情况下测量荧光强度，求出摄取到细胞内的荧光物质的相对浓度。对于无添加对照，以同样的方法培养未添加维生素衍生物的细胞递送用载体的细胞，并测量荧光强度。
结果，当实施例的在40℃下处理20分钟的组中粒径为114nm的荧光强度设定为100％时，比较例1的荧光强度为82％，比较例2的荧光强度为35％，比较例3的荧光强度为22％。由该结果可知，本发明的细胞递送用载体具有非常高的细胞摄取性能。
当实施例的在40℃下处理20分钟的组中粒径为114纳米nm的荧光强度设定为100％时，实施例的在35℃下保持20分钟的组中粒径为114nm的荧光强度为80％，显然，在40℃下处理20分钟的组中细胞的吸收率增加。进一步地，不同尺寸的本发明的实施例的平均粒径的荧光强度在252nm处为94％，在382nm处为81％，在578nm处为72％，在812nm处为51％，确认了300nm的平均粒径表现出高细胞吸收性。
(层状和非层状的比较实验)A-10：具有层状液晶结构的细胞递送用载体。在70℃下向15g甘油、3.6g双甘油、2g椰油酰谷氨酸钠中添加1gGOVC(将2-甘油基-3-抗坏血酸辛酸酯、甘油：辛酸：由抗坏血酸酯构成的基质以0.223：0.35：0.427的重量比结合而成的两亲性维生素衍生物)、1gDOPEMP(NIPAA/DMAPAA)Cop、0.05g胆固醇，以及0.1gPEG-25植物甾烷醇(INCI名称：PEG-25Phytostanol)，用电动手动搅拌器自然冷却的同时搅拌10分钟，并加入5g含有5重量％视黄醇的角鲨烷，用电动手动搅拌器搅拌10分钟。这种添加脂质的搅拌操作总共重复四次，总共添加20g含有5重量％视黄醇的角鲨烷。向其中加入添加了8％苯氧乙醇的纯水至100g，用电动手动搅拌器搅拌10分钟以防止起泡，使其完全分散，得到了作为本发明的含有视黄醇的层状液晶乳化物的该组合物。使用微射流均质机处理该细胞递送用载体，进一步地，使用孔径为400nm的过滤器将其调整为纳米级胶囊。得到了平均粒径为253nm的细胞递送用载体。当使用透射电子显微镜用染色观察该细胞递送用载体时，能够确认多层囊泡结构(层液晶结构)，并确认了这些细胞递送用载体具有层液晶结构。
B-10：对照将上述A-10中更改为仅以GOVC为基质成分的物质作为对照。另外，对于该基质成分中甘油，从一开始添加的0.22g甘油增加，预先在角鲨烷中加入0.35g的辛酸，向抗坏血酸中加入0.6g稳定的抗坏血酸磷酸三钠(与抗坏血酸的摩尔质量相同)，最后添加纯水至使其与A-10的摩尔质相同。
样品C-10：含有两亲性抗氧化维生素的非层状细胞递送用载体(对照2)将15g甘油、3.6g双甘油、2g椰油酰谷氨酸钠、1gGOVC和1gDOPEMP(NIPAA/DMAPAA)Cop、0.05g胆固醇、0.1gPEG-25植物甾烷醇、25g含有5重量％视黄醇的角鲨烷以及52.25g含有8重量％的苯氧乙醇的纯化混合。不经过层结构的形成工序而使用高速搅拌器将其粉碎搅拌，然后进行超声处理，使用微射流均质机处理该细胞递送用载体，以获得平均粒径为300nm的细胞递送用载体。进一步地，使用孔径为400nm的过滤器将其调整为纳米级胶囊。
样品D-10：不含两亲性抗氧化维生素的非层状细胞递送用载体的对照将15.22g甘油、3.6g双甘油、2g椰油酰谷氨酸钠、1gGOVC和1gDOPEMP(NIPAA/DMAPAA)Cop、0.05g胆固醇、0.1gPEG-25植物甾烷醇、0.35g辛酸、25g含有5重量％视黄醇的角鲨烷、0.6g抗坏血酸磷酸三钠、以及52.25g添加了8重量％苯氧乙醇的纯水混合。不经过层结构的形成工序而使用高速搅拌器将其粉碎搅拌，然后进行超声处理，使用微射流均质机处理该细胞递送用载体，以获得平均粒径为300nm的细胞递送用载体。进一步地，使用孔径为400nm的过滤器将其调整为纳米级胶囊。
将A-10、B-10、C-10和D-10在40℃的遮光条件下保存3个月，用HPLC测量实验开始和结束时的视黄醇含量。分析条件如下。色谱柱：Shim-pack FC-ODS(75mmL×4.6mm)，溶剂：甲醇，流速：1.2mL/min，柱温：35℃，检测波长：350nm。
结果，当将实验开始时视黄醇含量设定为100％时，实验结束时本发明的A-10的视黄醇含量为95.67％，作为对照的B-10为73.2％，C-10为32.5％，D-10为22.7％，本发明的A-10中的视黄醇的稳定性非常高。进一步地，当添加到胶囊中的视黄醇等有效成分为易氧化成分时，为了防止有效成分的氧化使用了抗氧化剂，但存在抗氧化剂的有效期短，因此有效成分被氧化的问题，通过添加GOVC等两亲性物质来抑制有效成分的氧化。
将实施例A-10的本发明的细胞递送用载体，B-10、C-10、D-10、E-10的细胞递送用载体，以及不含任意细胞递送用载体的安慰剂乳膏用作阴性对照。根据以下配方制备乳膏，并评价其抗皱效果、抗痤疮效果、保湿效果、强化屏障功能效果、对紫外线引起的炎症的抑制效果、抗褥疮效果以及抑制自由基的效果。
试验乳膏的配方使用，将上述A-10、B-10、C-10和D-10各10重量％添加到ITO(西东京市，东京都)公司制造的乳膏基材中，并用自转公转搅拌器处理5分钟后得到的物质。
将100名健康受试者和患有皱纹、痤疮、色素沉积、皮肤干燥的受试者以每组20人并使各试验组的症状均匀地分为5组(A-10、B-10、C-10、D-10添加组和安慰剂组)，评价每组的效果。对于健康受试者向脸颊，而对于其他患者向患部每天早晚两次涂抹0.01ml的上述外用制剂，涂抹后，用热的蒸气毛巾盖住涂抹部位5分钟。在相同的照明条件下，用数码相机拍下涂抹试验开始前和涂抹开始10天后的病变部位的颜色，使用图像处理装置VISIA通过VISIA内置的软件对皱纹、痤疮和色素沉积进行量化。或者，对于健康受试者，通过用皮脂浸渍滤纸来测量脂质过氧化物的量，并使用过氧化物脂质测量试剂盒滤纸来测量皮脂中的过氧化物的量。通过测量角质层含水量和表皮水分蒸发量来比较干燥和屏障功能。根据压疮标准指南用肉眼比较褥疮的改善程度并进行了量化。其结果是，试验开始60天后，对于每组求得20名受试者的总分，以安慰剂药膏的总分为100％，计算试验组和对照组的百分比。
试验60天后的结果是，当将安慰剂组设定为100％时，实施例的A-1效果为：皱纹44％，痤疮27％，色素沉积35％，看到了明显的改善效果。进一步地，角质层含水量增加至141％，表皮水分蒸发量增加至132％，皮肤干燥得到了改善。抗皱效果、抗痤疮效果、美白效果、保湿效果、强化屏障功能效果等效果均得到了证实。其他试验组的结果如下。B-1的效果为：皱纹69％，痤疮64％，色素沉积72％，角质层含水量119％，表皮水分蒸发量116％；C-1的效果为：皱纹85％，痤疮81％，色素沉积91％，角质层含水量105％，表皮水分蒸发量104％；D-1的效果为：皱纹91％，痤疮89％，色素沉积95％，角质层含水量106％，表皮水分蒸发量109％。
进一步地，与阴性对照相比，从A-1组患者的脸颊皮肤取样的皮脂的脂质过氧化物的浓度降低了36％，自由基抑制作用得到了证实。根据这些结果确认了，本产品作为药品、准药品、未批准药品和化妆品是非常有效的。
(温度刺激响应细胞递送用载体的稳定性和摄取实验)样品A-1)含有两亲性抗氧化维生素的温度响应层状细胞递送用载体(本发明)将1g源自蛋黄的磷脂酰胆碱、0.8g二油酰磷脂酰乙醇胺、3gDOPEMP(NIPAA/DMAPAA)Cop、0.05g胆固醇、0.1gPEG-25植物甾烷醇(INCI名称：PEG-25Phytostanol)和0.1gGOVC(将2-甘油基-3-抗坏血酸辛酸酯、甘油：辛酸：由抗坏血酸酯构成的基质以0.223：0.35：0.427的重量比结合而成的两亲性维生素衍生物)溶解在200ml氯仿中，然后，用蒸发器除去溶剂，形成层状结构薄膜。
向其中混合1mL以0.2mg/mL的浓度溶解在PBS中的肽结合荧光物质溶液(卵清蛋白：异硫氰酸荧光素＝1：1(等摩尔)的混合水溶液)和1mL用PBS将在细胞内生物合成抑制荧光素酶活性的蛋白质作为核酸的mir-125a siRNA duplex稀释为200nM的浓度的溶液(以下，简称为siRNA溶液)。接着，用搅拌器对薄膜进行粉碎处理，然后进行超声处理，进一步地，用孔径为400nm的过滤器将其调整为纳米级胶囊。使用PD-10柱凝胶过滤对细胞递送用载体进行纯化。
样品B-1含有构成两亲性抗氧化维生素的基质的温度响应层状细胞递送用载体(对照1)将1g源自蛋黄的磷脂酰胆碱、0.8g二油酰磷脂酰乙醇胺、3gDOPEMP(NIPAA/DMAPAA)Cop、0.05g胆固醇、0.1gPEG-25植物甾烷醇和0.035g辛酸溶解在氯仿中，用蒸发器除去溶剂，以形成层状结构薄膜。向其中混合1ml的肽结合荧光物质溶液(与样品A-1相同)、0.043g抗坏血酸、0.022g甘油和1ml的siRNA溶液。接着，用高速搅拌器对薄膜进行粉碎处理，然后进行超声处理，进一步地，用孔径为400nm的过滤器将其调整为纳米级胶囊。使用PD-10柱凝胶过滤对细胞递送用载体进行纯化。
样品C-1)含有两亲性抗氧化维生素的非层状细胞递送用载体(对照2)。向1g源自蛋黄的磷脂酰胆碱、0.8g二油酰磷脂酰乙醇胺、3gDOPEMP(NIPAA/DMAPAA)Cop、0.05g胆固醇、0.1gPEG-25植物甾烷醇和0.1gGOVC中混合1ml肽结合荧光物质溶液(与样品A-1相同)和1ml的siRNA溶液。不经过层结构薄膜的形成工序而使用高速搅拌器将其粉碎搅拌，然后进行超声处理，进一步地，使其通过孔径为400nm的过滤器。
样品D-1)不含有两亲性抗氧化维生素的非层状细胞递送用载体的对照向1g源自蛋黄的磷脂酰胆碱、0.8g二油酰磷脂酰乙醇胺、3gDOPEMP(NIPAA/DMAPAA)Cop、0.05g胆固醇和0.1gPEG-25植物甾烷醇中混合1ml肽结合荧光物质溶液(与样品A-1相同)和1ml的siRNA溶液。不经过层结构薄膜的形成工序而使用高速搅拌器将其粉碎搅拌，然后进行超声处理，进一步地，使其通过孔径为400nm的过滤器。
(细胞递送用载体的粒径的测量)将各样品A-1、B-1、C-1、D-1，在室温下保存一周，并使用粒径测定装置(ZETASIZER Nano-ZS)测量了制备的细胞递送用载体的粒径，然后，A-1的平均粒径获得了314nm(范围120至450nm)的尖锐的单峰，以下，对照的B-1的平均粒径获得了252nm(范围155-342nm)的尖锐的单峰，C-1和D-1随着时间而分离，未获得稳定的细胞递送用载体。
(细胞摄取实验)使用6孔板，取上述制备的本发明的A-1、以下对照的B-1、C-1、D-1组合物溶液125μl，用FBS培养基定容至1ml。将以5.0×10000细胞/毫升的浓度培养的HeLa细胞(宫颈癌细胞)的培养基换成上述定容后的分散液，在37℃下孵育48小时。孵育后，从每个中除去培养基，用PBS稀释五倍，以250μl/well加入Picagene细胞溶解剂Lcβ(东洋油墨)并孵育30分钟，然后将得到的溶液在-80℃下冷冻，并将溶液在37℃的浴槽中融化，在12000rpm下离心5分钟，在10μl获得的上清液中加入50μl的Picagene溶液进行发光测量，并且测量细胞内萤光素酶活性，从而使用以下计算公式求得核酸(siRNA)的包含率。本实验中使用的siRNA mir-125a被细胞摄取后会抑制荧光素酶活性，因此这意味着荧光素酶发光量越小，siRNA越被细胞摄取，且促进蛋白质合成，抑制荧光素酶活性。
核酸(siRNA)包含率＝荧光素酶发光量：C(每秒计数)/蛋白质量：P(蛋白质丰度)。
另外，取10μl未将siRNA递送至细胞内的宫颈癌细胞的培养基，使用BCA(二辛可宁酸法)检测试剂盒，用BCA标准品制作校准曲线进行蛋白质定量，将上述C/P值设定为100％(control)，通过荧光素酶活性以百分比表示上述实施例的RNA包含率。其结果是，本发明的A-1为19％，以下对照的B-1为62％，C-1为85％，D-1为81％，本发明中的A-1表现出最高荧光素酶活性(包含率)的下降。
(水溶性荧光染料的包含率的测定)将上述制备的本发明的A-1和下面对照的B-1、C-1、D-1组合物溶液在40℃的温度压力下孵育1周，然后研究各组合物的荧光特性的稳定性。即，用PBS稀释20倍，用荧光光度计测量其荧光强度，以确定包含肽结合荧光物质时的荧光强度。此外，加入1％的Triton10X使细胞递送用载体完全崩解后，通过凝胶过滤仅分离肽结合荧光物质部分，并将该部分的荧光强度作为热应激后的荧光强度。然后，从加入Triton时的荧光强度值中减去包含时的荧光强度的值，由此计算差值。另外，为了进行相对比较，以A-1的计算值为100％来计算对照的包含率。其结果是，本发明的A-1的包含率为100％，以下对照的B-1包含率为25％，C-1包含率为2％，D-1包含率为3％，可以确认作为本发明的含有两亲性抗氧化维生素的层状细胞递送用载体的A-1的热应激后的包含率的优越性。
(使用弗朗兹细胞的皮肤透过性的比较)使用LabCyte EPI-MODEL作为表皮皮肤模型，将人工皮肤夹在Franz Cell之间，将1m在37℃下孵育制备的含有肽结合荧光物质的上述制备的本发明的A-1，以及以下对照的B-1、C-1、D-1组合物溶液投与至供体室，投与后，48小时后，向15μl取样口的取样样品和肽结合荧光物质包含乳化组合物中加入10μl的TritonX制备样品溶液。取100μl样品溶液使用荧光光度计infiniteM1000测量荧光强度，根据以下公式计算皮肤透过率。其结果是，本发明的A-1的皮肤透过率为42％，以下对照的B-1为19％，C-1为5％，D-1为4％，可以确认作为本发明的含有两亲性抗氧化维生素的层状细胞递送用载体的A-1的皮肤透过性的优越性。
PermeationRate(％)＝(Fr/Fd)x100。
(Fr：Fluourcenceofsamplefromreceptor，Fd：Fuluorescenceofdonor)
在利用了该层状液晶的制剂中，制剂中的GOVC的有效浓度为0.01％以上即可，在低浓度下就能发挥效果。这可能是由于皮肤吸收率提高所致。
此外，制备了将GOVC或OGVC的浓度增加至1％的制剂，没有表现出皮肤刺激。这可能是由于层状液晶减弱了GOVC或OGVC的皮肤刺激性。由这些结果可知，本发明的层状液晶乳化物作为药品、准药品、未批准药品和化妆品时，作为抗坏血酸(ASA)的来源，以及作为抑制ASA自由基生成的外用组合物是非常有效的。
(OECD TG-439中记载的体外皮肤刺激性试验)根据OECD指南对培养细胞进行了体外皮肤刺激性试验。OECD GUIDELINES FOR THE TESTING OF CHEMICALS,439.(2015)
使用LabCyte EPI-MODEL作为正常皮肤表皮模型，进行皮肤刺激性试验并进行评分，其结果(分数越低，毒性越大，安全性越低)是，5％SLS(阳性对照)为3分，水(阴性对照)为100分，本发明的A-1为125分，B-1为101分，C-1为89分，D-1为83分，所有制剂的活细胞率都在50％以上，否定了皮肤刺激性。其中，本发明的A-1分数最高，暗示了其安全性高。试验的结果，在正常皮肤模型中没有观察到测试物质的皮肤刺激性。
(pH响应细胞递送用载体的制备)样品A-2)含有两亲性抗氧化维生素的pH响应层状细胞递送用载体本发明)将3g源自蛋黄的磷脂酰胆碱、0.8g二油酰磷脂酰乙醇胺、0.15g胆固醇、0.3gPEG-25植物甾烷醇(INCI名称：PEG-25Phytostanol)、0.1gGOVC(将2-甘油基-3-抗坏血酸辛酸酯、甘油：辛酸：由抗坏血酸酯构成的基质以0.223：0.35：0.427的重量比结合而成的两亲性维生素衍生物)溶解在150ml氯仿中，然后，在减压下除去氯仿，制备成膜。向其中加入100ml的0.5mM钙黄绿素和9.0％(w/v)蔗糖的混合溶液，剥离脂质膜，使用超声波浴粉碎后，用孔径为100nm的过滤器进行调整。细胞递送用载体粒子的平均直径为87nm。通过电子显微镜观察确认了层状结构。接着，使用PD-10柱进行凝胶过滤，并将其作为壳聚糖前处理液。接着，将其滴加到由0.1(w/v)的壳聚糖溶液溶解在1％(v/v)的乙酸溶液中而制备的溶液中，在40℃下反应5小时，然后冷却。将其用作本发明的pH响应细胞递送用载体，并在以下简称为pH-GOVC-Chito。
样品B-2)：含有构成两亲性抗氧化维生素的基质的pH响应层状细胞递送用载体(对照1)将3g源自蛋黄的磷脂酰胆碱、0.8g二油酰磷脂酰乙醇胺、0.15g胆固醇、0.3gPEG-25植物甾烷醇和0.035g辛酸溶解在150ml的氯仿中，用蒸发器除去氯仿，制备成膜。向其中加入100ml的0.043g抗坏血酸、0.022g甘油，以及0.5mM钙黄绿素和9.0％(w/v)蔗糖的混合溶液，剥离脂质膜，使用超声波浴进行超声粉碎，然后使用孔径为100nm的过滤器进行调整。接着，使用PD-10柱进行凝胶过滤，并将其滴加到由0.1(w/v)的壳聚糖溶液溶解在1％(v/v)的乙酸溶液中而制备的溶液中，在40℃下反应5小时，然后冷却。
样品C-2)含有两亲性抗氧化维生素的非层状细胞递送用载体(对照2)加入3g源自蛋黄的磷脂酰胆碱、0.8g二油酰磷脂酰乙醇胺、0.15g胆固醇、0.3gPEG-25植物甾烷醇和0.1gGOCV以及100ml的0.5mM钙黄绿素和9.0％(w/v)蔗糖的混合溶液，用高速搅拌器粉碎，然后进行超声处理，并使其通过孔径为100nm的过滤器。将其滴加到由0.1(w/v)壳聚糖溶液溶解在1％(v/v)的乙酸溶液中而制备的溶液中，在40℃下反应5小时，然后冷却。
样品D-2不含有两亲性抗氧化维生素的非层状细胞递送用载体(对照3)加入3g源自蛋黄的磷脂酰胆碱、0.8g二油酰磷脂酰乙醇胺、0.15g胆固醇、0.3gPEG-25植物甾烷醇，以及100ml的0.5mM钙黄绿素和9.0％(w/v)蔗糖的混合溶液，用高速搅拌器粉碎，然后进行超声处理，并使其通过孔径为100nm的过滤器。将其滴加到由0.1(w/v)壳聚糖溶液溶解在1％(v/v)的乙酸溶液中而制备的溶液中，在40℃下反应5小时，然后冷却。
壳聚糖带正电，因此容易通过离子键与结合于磷脂的磷酸的氧原子结合，能够获得壳聚糖紧密地包覆的细胞递送用载体。将这里获得的细胞递送用载体分别称为0.1％壳聚糖结合细胞递送用载体和0.5％壳聚糖结合细胞递送用载体。
(粒径的测量)将由9.0％(w/v)的蔗糖溶液100倍以上稀释的细胞递送用载体置于微量比色皿中，使用DLS(动态光散射法)观察25℃下的粒径分布。制备的细胞递送用载体的粒径在A-2pH-GOVC-Chito的壳聚糖前处理液中为182nm，A-2pH-GOVC-Chito的壳聚糖结合细胞递送用载体的粒径为198nm，确认了壳聚糖处理增大了粒径。
(表面电位的测量)将制备的细胞递送用载体溶液稀释20倍，用ELS-Z2激光粒度仪通过电泳光散射(ELS)法测量37℃下的表面电位。制备的细胞递送用载体的Z电位测量结果是，A-2的壳聚糖处理前液为-15mV，A-2的壳聚糖结合细胞递送用载体为15mV，确认了表面电位也随着壳聚糖结合而增加。壳聚糖带正电，因此容易通过离子键与结合于磷脂的磷酸的氧原子结合，能够获得壳聚糖紧密地包覆的细胞递送用载体。
(pH响应细胞递送用载体的皮肤透过率)使用表皮皮肤模型(LabCyte EPI-MODEL12)和受体中充满PBS的Franz细胞，向上层供体部添加1ml本发明的A-2和以下对照的B-2、C-2和D-2的细胞递送用载体溶液，在37℃下培养24小时，然后从充满PBS的下层接收部和上层供体部中分别采集150μL样品，加入20μL的10倍稀释后的TritonX-100，使用InfiniteM1000测量其荧光强度(Ex495nm，Em515nm)。根据这些值，使用以下公式求出皮肤透过率。
Cumulative％doseapplied/平方厘米＝(Fuluorcenceofsamplefromreceptor/Fuluorcenceofdonor)×100％/0.64平方厘米
24小时后的结果是，本发明的A-2的壳聚糖结合细胞递送用载体的皮肤透过率最高为0.6，而对照的B-2为0.3，C-2和D-2为0.1。由该结果可知，本发明的A-2的含有两亲性抗氧化维生素的pH响应层状细胞递送用载体的皮肤透过性远高于用作比较的B-2的含有抗氧化维生素基质的pH响应层状细胞递送用载体(对照1)，C-2的含有两亲性抗氧化维生素的非层状细胞递送用载体(对照2)，以及D-2的不含有两亲性抗氧化维生素的非层状细胞递送用载体(对照3)。
(黑色素生成抑制试验)预处理使用A-2、B-2、C-2和D-2的pH响应细胞递送用载体(A-3、B-3、C-3和D-3)，进行以下黑色素生成抑制试验。在24孔盘中以1×10000细胞/毫升的浓度接种HMV-II细胞，孵育24小时，然后添加200μM作为黑色素生成刺激物质的IBMX，以及A-3、B-3、C-3和D-3的各pH响应细胞递送用载体至APS量为100μM。2小时后，用PBS洗涤，再次添加200μM的IBMX，并孵育70小时。然后用200μL的1mol/L的NaOH溶解，提取黑色素，测量405nm处的吸光度，从而对提取的黑色素进行定量。其结果是，由于添加了IBMX(pH响应细胞递送用载体为无添加组)后，黑色素生成量增加了约3倍。当将此时的黑色素量生成量设定为100％时，本发明的A-3添加组为48％，B-3为78％，C-3为85％，D-3为90％。
由该结果可知，本发明的A-2的含有两亲性抗氧化维生素的pH响应层状细胞递送用载体的黑色素生成抑制作用远高于用作比较的B-2的含有抗氧化维生素基质的pH响应层状细胞递送用载体(对照1)，C-2的含有两亲性抗氧化维生素的非层状细胞递送用载体(对照2)，以及D-2的不含有两亲性抗氧化维生素的非层状细胞递送用载体(对照3)。
(细胞毒性评价)在6孔板上以1×10000细胞/毫升的浓度、500μL/well接种HMV-II细胞，孵育24小时，然后添加200μM作为黑色素生成刺激物质的IBMX，以及A-3、B-3、C-3和D-3的各pH响应细胞递送用载体至APS的量为100μM。2小时后，用PBS洗涤，再次添加200μM的IBMX，并孵育70小时。向其中添加10μL的CCK-8试剂盒。孵育1小时后，测量450nm处的吸光度，从而比较由样品添加引起的细胞毒性。其结果是，添加IBMX(pH响应细胞递送用载体为无添加)，由此确认了细胞毒性，但在添加A-3、B-3、C-3和D-3的各pH响应细胞递送用载体的情况下，未观察到细胞毒性。
(细胞内分布试验)在玻璃底培养皿中以5×1000细胞/毫升的浓度每2ml地接种HMV-II细胞，孵育24小时(37℃)。添加本发明的A-2和D-4，培养2小时，然后用PBS洗涤两次，孵育70小时。用4％多聚甲醛磷酸盐缓冲液固定20分钟，再用PBS洗涤两次，并用共聚焦激光显微镜观察。结果发现，A-4中含有的荧光染料的钙黄绿素几乎未被摄取到细胞内。与之相对，在本发明的A-2中，发现钙黄绿素被摄取到细胞质和细胞核中，特别是，钙黄绿素以颗粒状集中在细胞核中。细胞核中的钙黄绿素的荧光强度低于细胞质。
上述试验结果暗示如下。水溶性荧光染料即钙黄绿素单独使用使用时在对照中未被摄取到细胞内，封入脂质体中，由此观察到被摄取到细胞内。然后，在未包覆脂质体中，观察到内封的荧光物质为颗粒状，因此，认为脂质体通过内吞摄取到细胞内，并保留在内体内。进一步地，当封入CS脂质体中时，确认了罗丹明和钙黄绿素的细胞内定位是不同的，观察到水溶性荧光物质即钙黄绿素聚集在细胞中心部。显示阳离子性的CS AsNa liposome与细胞表面的亲和力增加，因此促进内体在细胞内的摄取，然后从内体释放并聚集在细胞中心部。
因此，认为壳聚糖的质子海绵效应与从内体的释放有关。质子海绵效应是指，在弱酸性环境下质子化的化合物被摄取到内体内部时，质子化抑制内体内的pH的降低，大量质子、氯离子流入内体内，由此内体内部的渗透压升高，引起内体肿胀、破裂的现象。质子海绵效应是指，随着pH的降低而吸收大量质子的效应，例如，具有大量氨基的阳离子高分子显示该效应。这种假设是由Behr等人作为一种帮助在特别是核酸药物的递送中的内体释放的方法而提出的。在内体膜中存在称为V-ATPPase的质子泵，向内体转运质子直到内体中的pH达到约5至6。具有这种质子海绵效应的阳离子高分子的缓冲范围为pH5至7，随着内体内的pH的降低，吸收大量的质子。由此，抑制内体的pH的降低，需要更多的质子流入来降低pH。此外，阴离子也流入以维持内体内外的电荷平衡，且盐浓度和渗透压升高。为了消除这种高渗透压，进一步地，大量的水流入内体内，膜无法承受体积而塌陷，从而促进内体释放。kobunshi,Vol.58,P.137(2009)
已知，聚乙烯亚胺(PEI)、聚酰胺胺树枝状聚合物具有质子海绵效应，广泛用于提高基因转移的效率。
需要高缓冲能力来表现出质子海绵效应，但近年来报道了，在内体内的pH范围(4.5至7)中，壳聚糖的缓冲能力优于PEI。
此外，已知，抗坏血酸钠具有抑制黑色素合成酶即酪氨酸酶的作用，抑制黑色素合成的初始阶段。进一步地，有报道称，黑色素随着合成阶段的进行被运送到树突，这表明黑色素合成的初始阶段在细胞的中心部进行。综上所述，从内体释放的封入有抗坏血酸钠的壳聚糖修饰脂质体聚集在细胞中心部，由此抑制黑色素合成的初始阶段，确认了黑色素生成抑制效果显著。
(皮肤刺激性试验)进行了使用根据OECD指南的培养细胞的体外皮肤刺激性试验。使用OECD GUIDELINES FOR THE TESTING OF CHEMICALS,439.(2015)作为指南。使用LabCyte EPI-MODEL作为正常皮肤表皮模型，进行皮肤刺激性试验并进行评分，其结果(分数越低，毒性越大，安全性越低)是，5％SLS(阳性对照)为3分，水(阴性对照)为100分，本发明的A-1为134分，B-2为109分，C-2为95分，D-2为91分，所有制剂的活细胞率都在50％以上，否定了皮肤刺激性。其中，本发明的A-1分数最高，暗示了其安全性高。试验的结果，在正常皮肤模型中没有观察到测试物质的皮肤刺激性。
(光刺激响应聚合物的制备)进行了光响应含氟聚合物的合成。将2,2,3,3,4,4,4-七氟丁基甲基丙烯酸酯(FMA)和1'-[2-(甲基丙烯酰基氧基)乙基]-3',3'-二甲基-6-硝基螺[2H-1-苯并吡喃-2,2'-二氢吲哚](SpMA)以85:15的摩尔比溶解在DMF(二甲基甲酰胺)中。另外，FMA和SpMA的总量为10g。在溶解后的溶剂中加入MPA(3-巯基丙酸)，使其成为FMA的0.028摩尔倍，并且加入58mg的AIBN(偶氮二异丁腈)。之后，在溶剂中进行氮气置换和超声波脱气后，在70℃下进行自由基聚合5小时。反应后的液体温度恢复到室温，然后滴入预冷的二乙醚中进行再沉淀精制。之后，通过过滤回收沉淀物。再进行两次再沉淀精制，回收化学式2所示的聚合物。将该聚合物用水透析，然后冷冻干燥，以将其进一步纯化。
[化学式2]
Figure BDA0003798536610000351
(光刺激响应聚合物结合脂质的制备)为了活性酯化式(1)所示的聚合物，按摩尔比为式(1)所示温度响应聚合物：DCC(N,N'-二环己基碳二亚胺)：NHS(N-羟基丁二酰亚胺)＝1：2.5：2.5的比例溶解在氯甲烷中，在室温下反应24小时。反应后，通过抽滤除去作为副产品的二环己基脲，用二乙醚进行再沉淀精制，回收琥珀酰聚合物作为沉淀物。将琥珀酰聚合物和膜融合性脂质即DOPE(1,2-二油酰-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺)以1：1的摩尔比溶解在二恶烷中，并在室温下反应24小时。通过用蒸发器将反应后的溶液抽真空除去溶剂，制备了式(2)所示的光刺激响应聚合物结合脂质。将其缩写为DOPEMP(FMA/SpMA)Copo。
样品A-1)含有维生素衍生物的光响应层状细胞递送用载体(本发明)将1g源自蛋黄的磷脂酰胆碱、0.8g二油酰磷脂酰乙醇胺、1gDOPEMP(FMA/SpMA)Copo、0.05g胆固醇、0.1gPEG-25植物甾烷醇(INCI名称：PEG-25Phytostanol)和0.1gGOVC(将2-甘油基-3-抗坏血酸辛酸酯、甘油：辛酸：由抗坏血酸酯构成的基质以0.223：0.35：0.427的重量比结合而成的两亲性维生素衍生物)溶解在200mL氯仿中，用蒸发器去除溶剂，形成层状结构薄膜。将其用紫外线(352nm)照射3分钟并进行遮光。以下操作是在暗室红色光源下进行的。
向其中混合1ml以0.2mg/mL的浓度溶解在PBS中的肽结合荧光物质溶液(卵清蛋白：异硫氰酸荧光素＝1：1(等摩尔)的混合水溶液)与1mL用PBS将在细胞内生物合成抑制荧光素酶活性的蛋白质作为核酸的mir-125a siRNA duplex稀释为200nM的浓度的溶液(以下，简称为siRNA溶液)。接着，用搅拌器对薄膜进行粉碎处理，然后进行超声处理，进一步地，用孔径为400nm的过滤器将其调整为纳米级胶囊。使用PD-10柱凝胶过滤对细胞递送用载体进行纯化，并保存在遮光瓶中。
样品B-1)非维生素衍生物的含有维生素的温度响应层状细胞递送用载体(对照1)将1g源自蛋黄的磷脂酰胆碱、0.8g二油酰磷脂酰乙醇胺、1gDOPEMP(FMA/SpMA)Copo、0.05g胆固醇、0.1gPEG-25植物甾烷醇和0.035g辛酸溶解氯仿中，用蒸发器除去溶剂，以形成层状结构薄膜。将其用紫外线(352nm)照射3分钟并进行遮光。以下操作是在暗室红色光源下进行的。向其中混合1mL肽结合荧光物质溶液(与样品A-1相同)、0.043g抗坏血酸、0.022g甘油和1mL的siRNA溶液。接着，用高速搅拌器对薄膜进行粉碎处理，然后进行超声波处理，进一步地，用孔径为400nm的过滤器将其调整为纳米级胶囊。使用PD-10柱凝胶过滤对细胞递送用载体进行纯化，并保存在遮光瓶中。
样品C-1)含有维生素衍生物的非层状细胞递送用载体(对照2)将1mL肽结合荧光物质溶液(与样品A-1相同)和1mL的siRNA溶液与1g源自蛋黄的磷脂酰胆碱、0.8g二油酰磷脂酰乙醇胺、1gDOPEMP(FMA/SpMA)Copo、0.05g胆固醇、0.1gPEG-25植物甾烷醇以及0.1gGOVC混合。将其用紫外线(352nm)照射3分钟并进行遮光。以下操作是在暗室红色光源下进行的。不经过层结构薄膜的形成工序而使用高速搅拌器将其粉碎搅拌，然后进行超声处理，进一步地，使其通过孔径为400nm的过滤器，并保存在遮光瓶中。
样品D-1)不含有维生素衍生物的非层状细胞递送用载体的对照将1mL肽结合荧光物质溶液(与样品A-1相同)和1mL的siRNA溶液与1g源自蛋黄的磷脂酰胆碱、0.8g二油酰磷脂酰乙醇胺、1gDOPEMP(FMA/SpMA)Copo、0.05g胆固醇、0.1gPEG-25植物甾烷醇混合。将其用紫外线(352nm)照射3分钟并进行遮光。以下操作是在暗室红色光源下进行的。不经过层结构薄膜的形成工序而使用高速搅拌器将其粉碎搅拌，然后进行超声处理，进一步地，使其通过孔径为400nm的过滤器，并保存在遮光瓶中。
(细胞递送用载体的粒径的测量)将各样品A-3、B-3、C-3、D-3，在室温下保存一周，并使用粒径测定装置(ZETASIZER Nano-ZS)测量了制备的细胞递送用载体的粒径，然后，A-1的平均粒径获得了314nm(范围120至450nm)的尖锐的单峰，以下，对照的B-1的平均粒径获得了198nm(范围110至298nm)的尖锐的单峰，C-3和D-3随着时间而分离，未获得稳定的细胞递送用载体。用紫外线(352nm)或可见光(530nm)照射3分钟。
(细胞摄取实验)使用6孔板，取上述制备的本发明的A-3、以下对照的B-3、C-3、D-3组合物溶液125μl，用FBS培养基定容至1ml。将以5.0×10000细胞/毫升的浓度培养的HeLa细胞(宫颈癌细胞)的培养基换成上述定容后的分散液，遮光在37℃下孵育6小时，用可见光(530nm)照射30分钟，接着孵育42小时。孵育后，从每个中除去培养基，用PBS稀释五倍，以250μl/well加入Picagene细胞溶解剂Lcβ(东洋油墨)并孵育30分钟，然后将得到的溶液在-80℃下冷冻，并将溶液在37℃的浴槽中融化，在12000rpm下离心5分钟，在10μl获得的上清液中加入50μl的Picagene溶液进行发光测量，并且测量细胞内荧光素酶活性，从而使用以下计算公式求得核酸(siRNA)的包含率。本实验中使用的siRNA的mir-125a被细胞摄取后会抑制荧光素酶活性，因此这意味着荧光素酶发光量越小，siRNA越被细胞摄取，且促进蛋白质合成，抑制荧光素酶活性。
核酸(siRNA)包含率＝荧光素酶发光量：C(每秒计数)/蛋白质量：P(蛋白质丰度)。另外，取10μl未将siRNA递送至细胞内的宫颈癌细胞的培养基，使用BCA(二辛可宁酸法)检测试剂盒，用BCA标准品制作校准曲线进行蛋白质定量，将上述C/P值设定为100％(control)，通过荧光素酶活性以百分比表示上述实施例的RNA包含率。其结果是，本发明的A-1为36％，以下对照的B-1为72％，C-1为88％，D-1为85％，本发明中的A-1表现出最高荧光素酶活性(包含率)的下降。
(荧光染料的包含率的测定)将上述制备的本发明的A-1和下面对照的B-1、C-1、D-1组合物溶液在40℃的温度压力下，且在避光环境中保存两周，然后研究各组合物的荧光特性的稳定性。即，用PBS稀释20倍，用荧光光度计测量其荧光强度，以确定包含肽结合荧光物质时的荧光强度。此外，加入1％的Triton10X使细胞递送用载体完全崩解后，通过凝胶过滤仅分离肽结合荧光物质的部分，并将该部分的荧光强度作为热应激后的荧光强度。然后，从加入Triton时的荧光强度值中减去包含时的荧光强度的值，由此计算差值。另外，为了进行相对比较，以A-1的计算值为100％来计算对照的包含率。其结果是，本发明的A-1的包含率为100％，以下对照的B-1包含率为63％，C-1包含率为11％，D-1包含率为15％，可以确认作为本发明的含有两亲性抗氧化维生素的层状细胞递送用载体的A-1的热应激后的包含率的优越性。
(皮肤组织透过性的比较)使用LabCyte EPI-MODEL作为表皮皮肤模型，将人工皮肤夹在Franz Cell之间，在37℃下孵育，将1mL上述制备的含有制备的肽结合荧光物质的本发明的A-1，以及以下对照的B-1、C-1、D-1组合物溶液投与至供体室，进行遮光在37℃下孵育6小时，用可见光(530nm)照射30分钟，接着孵育42小时。然后，向150μL取样口的取样样品和肽结合荧光物质包含乳化组合物中加入10μL的10％TritonX制备样品溶液。取100μL样品溶液使用荧光光度计infiniteM1000测量荧光强度，根据以下公式计算皮肤透过率。其结果是，本发明的A-1的皮肤透过率为25％，以下对照的B-1为15％，C-1为3％，D-1为2％，可以确认作为本发明的含有两亲性抗氧化维生素的层状细胞递送用载体的A-1的皮肤透过性的优越性。
PermeationRate(％)＝(Fr/Fd)x100。
(Fr：Fluourcenceofsamplefromreceptor，Fd：Fuluorescenceofdonor)
(皮肤刺激性试验)根据OECD指南对培养细胞进行了体外皮肤刺激性试验。使用OECD GUIDELINES FOR THE TESTING OF CHEMICALS,439.(2015)作为指南。使用LabCyteEPI-MODEL作为正常皮肤表皮模型，进行皮肤刺激性试验并进行评分，其结果(分数越低，毒性越大，安全性越低)是，5％SLS(阳性对照)为3分，水(阴性对照)为100分，本发明的A-1为111分，B-1为98分，C-1为87分，D-1为79分，所有制剂的活细胞率都在50％以上，否定了皮肤刺激性。其中，本发明的A-1分数最高，暗示了其安全性高。试验的结果，在正常皮肤模型中没有观察到测试物质的皮肤刺激性。
本组合物为以下实施方式：化成品、工业品、土木工程绿化用品、肥料、涂料、清洁剂、农林用品、园艺材料用品、颗粒、粉末、杂货、服装、口服组合物、食品、培养组合物、兽药、感光材料、水处理剂、空气净化剂、药品、准药品、未批准药品和化妆品的外用组合物。进一步地，本组合物与以往的ASA、ASA磷酸镁，以往的A2AT、A3AT相比，作为如下制剂时也是有效的：化成品、工业品、土木工程绿化用品、肥料、涂料、清洁剂、农林用品、园艺材料用品、颗粒、粉末、杂货、服装、口服组合物、食品、培养组合物、兽药、感光材料、水处理剂、空气净化剂的抗氧化剂。
本组合物为以下实施例：化工品、工业品、土木工程绿化用品、肥料、涂料、清洁剂、农林用品、园艺材料用品、颗粒、粉末、杂货、服装、口服组合物、食品、培养组合物、兽药、感光材料、水处理剂和空气净化剂。进一步地，也可以为药品、准药品、未批准药品的外用组合物的实施例。
(制剂配方)根据以下配方制备了本发明的制剂。该水溶性制剂可用作液体化妆品、液体准药品、液体药品、液体食品、液体补充剂和液体饲料添加剂。更具体地，可以作为以下形式的外用剂的基剂使用。即，可以使用本配方的外用剂的形式如下：洗发水、护发素、护理剂、发膜、喷发剂、发用喷雾、乳液、爽肤水、精华液、生发剂、洗面奶、卸妆水、化妆水、润肤乳液、保湿乳液、乳液、滋养乳液、皮肤保湿乳液、保湿乳液、按摩乳液、洁面乳液、防晒剂、防晒霜、防晒乳、化妆乳液、角质膏、肘部乳液、手部乳液、身体乳液、液体肥皂、美容涂敷剂、面膜、保湿精华、美白精华、抗紫外线精华、基础护肤品、彩妆剂、皮肤香水、香氛、香水、淡香精、淡香水、古龙水、熏香水、祛臭洗液、祛臭粉、祛臭喷雾、祛臭化妆品、洗浴用剂、润肤剂。
(本发明的细胞递送用载体的制备)添加卵磷脂2％、甘油50％、山嵛醇8％、硬脂醇7％、PEG-20植物甾醇4％、鲸蜡醇3％、植物固醇1％、硬脂酸甘油酯1％、三(辛酸/癸酸)甘油酯2％、GOVC(2-甘油基-3-辛基抗坏血酸)1％、胆固醇0.3％、DOPEMP(NIPAA/DMAPAA)Cop0.2％以及角鲨烷10％，并用自转公转搅拌器进行搅拌。向其中加入纯水至100％，并通过涡旋分散。之后，在超声波浴中超声处理30分钟，减小乳化颗粒的尺寸，然后将其通过100nm的过滤器，以调整脂质体的尺寸。平均粒径为75nm，通过电子显微镜观察到了层状结构。之后，通过凝胶过滤对脂质体进行分离和纯化，以制备本发明的细胞递送用载体。制备了本发明的具有温度刺激响应性的细胞递送用载体。以下简称为S-GOVC-DDS。
脂质总量为20mg，按摩尔比为维生素衍生物即VCIP(抗坏血酸-2,3,5,6-四异棕榈酸酯)和DOTAP(1,2-二油酰基-3-三甲基丙烷铵)：层形成表面活性剂即DOPE：DOPEMP(NIPAA/DMAPAA)Cop＝1：2：7的比例分别溶解在氯仿中。另外，将溶解在氯仿中的DOPE的层形成表面活性剂DOPE与式(5)所示的温度响应聚合物所结合的层形成表面活性剂即DOPEMP(NIPAA/DMAPAA)Cop的摩尔比设定为6.5:0.5。将该溶液转移到茄形烧瓶中，用蒸发器除去溶剂，制备成脂质膜。向该脂质膜中加入1ml纯水，使脂质膜水合，然后通过旋涡分散。之后，在超声波浴中超声处理30分钟，减小脂质体的尺寸，然后用挤出机将脂质体通过100nm的过滤器，以调整脂质体的尺寸。平均粒径为75nm，通过电子显微镜观察到了层状结构。之后，通过凝胶过滤对脂质体进行分离和纯化，以制备本发明的细胞递送用载体。制备了本发明的具有温度刺激响应性的细胞递送用载体。以下简称为S-VCIP-DDS。
使用上述制备的，含有本发明的温度刺激响应聚合物的细胞递送用载体即S-GOVC、S-VCIP-OVC-DDS，含有所述实施例所示的pH刺激响应聚合物的本发明的pH-GOVC-Chito，以及含有所述实施例所示的光刺激响应聚合物的本发明的DOPEMP(FMA/SpMA))Copo，制备了以下配方。以下制剂配方的单位均以重量％表示。在以下制剂配方中，将以相同质量50％：50％混合S-GOVC-DDS和S-VCIP-DDS而得的混合物记作S-GOVC-DDS/S-VCIP-DDS。进一步地，将以相同质量25％：25％：25％：25％混合S-GOVC-DDS、S-VCIP-DDS、pH-GOVC-Chito和DOPEMP(FMA/SpMA)Copo而成的混合物记为S-GOVC-DDS/S-VCIP-DDS/pH-GOVC-Chito/DOPEMP(FMA/SpMA)Copo。
(液剂配方)
(1)S-GOVC-DDS/S-VCIP-DDS：0.5、(2)甘油：6.5、(3)1，3-丁二醇：1.0、(4)苯氧乙醇：0.5、(5)香料复合物：0.1、(6)精油复合物：0.1、(6)纯水：余量(用(7)柠檬酸1.0和(8)NaOH调节pH至7)。
(乳液配方)
(1)聚氧乙烯(10E.O.)山梨糖醇1.0单硬脂酸酯：0.5、(2)聚氧乙烯(60E.O.)山梨糖醇酯0.5四油酸酯：0.5、(3)单硬脂酸甘油酯：1.0、(4)F3：0.1、(5)山嵛醇：0.5、(6)角鲨烷：8.0、(7)山毛榉芽提取物1：2.0、(8)葡萄提取物2：2.0、(9)紫草叶提取物3：2.0、(10)甘草酸二钾4：0.02、(11)S-GOVC-DDS/S-VCIP-DDS：1.0、(12)羧基乙烯基聚合物：0.1、(13)氢氧化钠：0.05、(14)乙醇：5.0、(15)纯水：余量、(16)防腐剂：适量、(17)香料：适量(用1％柠檬酸和NaOH调节pH至7±1。上述乳液的过渡金属总量为100ppm以下)。
(软膏剂配方)
(1)硬脂酸：18.0、(2)鲸蜡醇：4.0、(3)三乙醇胺：2.0、(4)F5：1.0、(5)荨麻提取物1：0.05、(6)山楂提取物2：0.05、(7)菩提树提取物3：0.05、(8)N,N′-二乙酰基胱氨酸二甲酯4：0.01、(9)氨甲环酸5：0.2、(10)纯水：余量(用1％柠檬酸和NaOH调节pH至7±1。上述软膏剂的过渡金属总量为100ppm以下)。1丸善制药2丸善制药3丸善制药4默克5默克
(凝胶配方)
(1)羧基乙烯基聚合物1：1.0、(2)三乙醇胺：1.0、(3)1,3-丁二醇：10.0、(4)F6：0.5、(5)芦荟提取物2：0.5、(6)尿囊素3：1.0、(7)S-GOVC-DDS/S-VCIP-DDS：2.0、(8)2-羟基-4-甲氧基二苯甲酮-5-硫酸钠5：3.0、(9)纯水：余量(用1％柠檬酸和NaOH调节pH至7±1。上述凝胶软膏的过渡金属总量为100ppm以下)。
(膏剂配方)
(1)聚氧乙烯(40E.O.)单硬脂酸酯：2.0、(2)甘油单硬脂酸酯(自乳化型)1：5.0、(3)硬脂酸：5.0、(4)山嵛醇：0.5、(5)角鲨烷：15.0、(6)异辛酸鲸蜡酯：5.0、(7)1,3-丁二醇：5.0、(8)F7：1.0、(9)白桦提取物2：0.1、(10)虎耳草提取物3：0.2、(11)S-GOVC-DDS/S-VCIP-DDS：1.0、(12)对甲氧基肉桂酸2-乙基己酯5：5.0、(13)核黄素6：0.05、(14)半胱氨酸7：0.1、(15)纯水：余量、(16)防腐剂：适量、(17)香料：适量(用1％柠檬酸和NaOH调节pH至7±1。上述膏剂的过渡金属总量为100pp以下)。
(粉末配方)
(1)羊毛脂：7.0、(2)液体石蜡：5.0、(3)硬脂酸：2.0、(4)鲸蜡醇：1.0、(5)葵花油1：1.0、(6)甘油：5.0、(7)三乙醇胺：1.0、(8)羧甲基纤维素：0.7、(9)纯水：余量、(10)云母：15.0、(11)滑石粉：6.0、(12)氧化钛：3.0、(13)着色颜料：6.0、(14)F5：0.5、(15)洋委陵菜提取物3：0.5、(16)S-GOVC-DDS/S-VCIP-DDS：0.2、(17)甘草次酸十八烷基酯5：0.1、(18)防腐剂：0.5、(19)香料：适量(用1％柠檬酸和NaOH调节pH至7±1。过渡金属总量为100ppm以下)。
(紫外线护理剂配方)
(1)硬脂酸：2.0、(2)鲸蜡醇：1.0、(3)聚氧乙烯失水山梨糖醇单油酸酯(20EO)：0.5、(4)倍半油酸脱水山梨糖醇酯：0.5、(5)2-乙基己酸鲸蜡基酯：12.0、(6)乳木果油1：2.0、(7)芝麻油2：1.0、(8)黄芩提取物3：0.1、(9)F3：0.5、(10)麦角钙化醇5：0.1、(11)S-GOVC-DDS/S-VCIP-DDS：3.0、(12)对甲氧基肉桂酸2-乙基己酯7：8.0、(13)2-羟基-4-甲氧基二苯甲酮8：2.0、(14)1，3-丁二醇：10.0、(15)羧基乙烯基聚合物：0.2、(16)纯水：余量、(17)防腐剂：适量、(18)氧化钛：3.0、(19)三乙醇胺：0.5、(20)香料：适量(用1％的柠檬酸和NaOH调节pH至7±1。上述防晒乳液的过渡金属总量为100ppm以下)。
(美容涂敷剂配方)
(1)聚乙烯醇：20.0、(2)乙醇：20.0、(3)甘油：5.0、(4)高岭土：6.0、(5)S-GOVC-DDS/S-VCIP-DDS：0.5、(6)F2：0.5、(7)百合提取物3：0.05、(8)间苯二酚4：0.02、(9)核黄素5：0.1、(10)氨甲环酸6：0.5、(11)防腐剂：0.2、(12)香料：0.1、(13)纯水：余量(用1％的柠檬酸和NaOH调节pH至7±1。上述美容涂敷剂的过渡金属总量为100ppm以下)。
(洗涤剂配方)
(1)硬脂酸：10.0、(2)棕榈酸：8.0、(3)肉豆蔻酸：12.0、(4)月桂酸：4.0、(5)油醇：1.5、(6)精制羊毛脂：1.0、(7)虾青素1：0.005、(8)香料：0.1、(9)防腐剂：0.2、(10)甘油：18.0、(11)氢氧化钾：6.0、(12)S-GOVC-DDS/S-VCIP-DDS：0.5、(13)肥皂草提取物：0.5、(14)甘草酸二钾4：0.2、(15)L-抗坏血酸棕榈酸酯5：0.05、(16)纯水：余量(用1％柠檬酸和NaOH调节pH至7±1。上述洗涤剂中过渡金属总量为100ppm以下)。
(口服组合物)
将92.7质量％由50质量％的鸡油和50质量％的猪油构成的、熔点为28±3℃的动物性脂肪，0.9质量％的酶，1.0质量％的添加1％的S-GOVC-DDS/S-VCIP-DDS而成的维生素预混料，0.9质量％的粉末状益生菌剂和4.5质量％的香料，在明治机械株式会社制造的200L搅拌混合机中搅拌分散2小时，获得了富含本发明的维生素C源的本发明的口服组合物，该组合物由粒径分布中平均粒径为0.51mm的粉粒构成。本发明的口服组合物是以下实施例：饲料、饲料添加剂、兽药、食品、食品添加剂、功能性食品、口服兽药。
(片剂)
按照常规方法将下列成分按以下组成比均匀混合并压片，制成每片400mg的片剂。还原麦芽糖浆：17％、琼脂：12％、二氧化硅：1％、蔗糖脂肪酸酯：3％、S-GOVC-DDS/S-VCIP-DDS的冻干粉末：1％、粉状纤维素：余量。
(胶囊剂)
用常规方法将300mg由5％的S-GOVC-DDS/S-VCIP-DDS的冻干粉末和95％的中链脂肪酸甘油三酯)构成的组分混炼并填充在100mg软胶囊皮(70％明胶和25％甘油)中，得到每粒440mg的软胶囊。
(健康饮料)
混合以下成分，并按照常规方法加水至10L，来制备健康饮料。S-GOVC-DDS/S-VCIP-DDS：80g、蜂王浆：1g、液体糖：1000g、DL-酒石酸钠：1g、柠檬酸：10g、环糊精：25g、氯化钾：2g、硫酸镁：1g。
(液剂配方)
(1)S-GOVC-DDS/S-VCIP-DDS/PH-GOVC-CHITO/DOPEMP(FMA/SPMA)COPO：0.5、(2)甘油：6.5、(3)1，3-丁二醇：1.0、(4)苯氧乙醇：0.5、(5)香料复合物：0.1、(6)精油复合物：0.1、(6)纯水：余量(用(7)柠檬酸1.0和(8)NaOH调节pH至7)。
(乳液配方)
(1)聚氧乙烯(10E.O.)山梨醇1.0单硬脂酸酯：0.5、(2)聚氧乙烯(60E.O.)山梨糖醇酯0.5四油酸酯：0.5、(3)单硬脂酸甘油酯：1.0、(4)F3：0.1、(5)山嵛醇：0.5、(6)角鲨烷：8.0、(7)山毛榉芽提取物1：2.0、(8)葡萄提取物2：2.0、(9)紫草叶提取物3：2.0、(10)甘草酸二钾4：0.02、(11)S-GOVC-DDS/S-VCIP-DDS/PH-GOVC-CHITO/DOPEMP(FMA/SPMA)COPO：1.0、(12)羧基乙烯基聚合物：0.1、(13)氢氧化钠：0.05、(14)乙醇：5.0、(15)纯水：余量、(16)防腐剂：适量、(17)香料：适量(用1％柠檬酸和NaOH调节pH为7±1。上述乳液的过渡金属总量为100ppm以下)。
(软膏剂配方)
(1)硬脂酸：18.0、(2)鲸蜡醇：4.0、(3)三乙醇胺：2.0、(4)F5：1.0、(5)荨麻提取物1：0.05、(6)山楂提取物2：0.05、(7)菩提树提取物3：0.05、(8)N,N′-二乙酰基胱氨酸二甲酯4：0.01、(9)氨甲环酸5：0.2、(10)纯水：余量(用1％柠檬酸和NaOH调节pH至7±1。上述软膏剂的过渡金属总量为100ppm以下)。1丸善制药2丸善制药3丸善制药4默克5默克
(凝胶配方)
(1)羧基乙烯基聚合物1：1.0、(2)三乙醇胺：1.0、(3)1,3-丁二醇：10.0、(4)F6：0.5、(5)芦荟提取物2：0.5、(6)尿囊素3：1.0、(7)S-GOVC-DDS/S-VCIP-DDS/PH-GOVC-CHITO/DOPEMP(FMA/SPMA)COPO：2.0、(8)2-羟基-4-甲氧基二苯甲酮-5-硫酸钠5：3.0、(9)纯水：余量(用1％的柠檬酸和NaOH调节pH至7±1。上述凝胶软膏的过渡金属总量为100ppm以下)。
(膏剂配方)
(1)聚氧乙烯(40E.O.)单硬脂酸酯：2.0、(2)甘油单硬脂酸酯(自乳化型)1：5.0、(3)硬脂酸：5.0、(4)山嵛醇：0.5、(5)角鲨烷：15.0、(6)异辛酸鲸蜡酯：5.0、(7)1，3-丁二醇：5.0、(8)F7：1.0、(9)白桦提取物2：0.1、(10)虎耳草提取物3：0.2、(11)S-GOVC-DDS/S-VCIP-DDS/PH-GOVC-CHITO/DOPEMP(FMA/SPMA)COPO：1.0、(12)对甲氧基肉桂酸2-乙基己酯5：5.0、(13)核黄素6：0.05、(14)半胱氨酸7：0.1、(15)纯水：余量、(16)防腐剂：适量、(17)香料：适量(用1％柠檬酸和NaOH调节pH至7±1。上述膏剂的过渡金属总量为100pp以下)。
(湿粉配方)
(1)羊毛脂：7.0、(2)液体石蜡：5.0、(3)硬脂酸：2.0、(4)鲸蜡醇：1.0、(5)葵花油1：1.0、(6)甘油：5.0、(7)三乙醇胺：1.0、(8)羧甲基纤维素：0.7、(9)纯水：余量、(10)云母：15.0、(11)滑石粉：6.0、(12)氧化钛：3.0、(13)着色颜料：6.0、(14)F5：0.5、(15)洋委陵菜提取物3：0.5、(16)S-GOVC-DDS/S-VCIP-DDS/PH-GOVC-CHITO/DOPEMP(FMA/SPMA)COPO：0.2、(17)甘草次酸十八烷基酯5：0.1、(18)防腐剂：0.5、(19)香料：适量(用1％柠檬酸和NaOH调节pH至7±1。过渡金属总量为100ppm以下)。
(防晒配方)
(1)硬脂酸：2.0、(2)鲸蜡醇：1.0、(3)聚氧乙烯失水山梨糖醇单油酸酯(20EO)：0.5、(4)倍半油酸脱水山梨糖醇酯：0.5、(5)2-乙基己酸鲸蜡基酯：12.0、(6)乳木果油1：2.0、(7)芝麻油2：1.0、(8)黄芩提取物3：0.1、(9)F3：0.5、(10)黄芩提取物5：0.1、(11)S-GOVC-DDS/S-VCIP-DDS/PH-GOVC-CHITO/DOPEMP(FMA/SPMA)COPO：3.0、(12)对甲氧基肉桂酸2-乙基己酯7：8.0、(13)2-羟基-4-甲氧基二苯甲酮8：2.0、(14)1,3-丁二醇：10.0、(15)羧基乙烯基聚合物：0.2、(16)纯水：余量、(17)防腐剂：适量、(18)氧化钛：3.0、(19)三乙醇胺：0.5、(20)香料：适量(用1％柠檬酸和NaOH调节pH至7±1。上述防晒乳液的过渡金属总量为100ppm以下)。
(美容涂敷剂配方)
(1)聚乙烯醇：20.0、(2)乙醇：20.0、(3)甘油：5.0、(4)高岭土：6.0、(5)S-GOVC-DDS/S-VCIP-DDS/PH-GOVC-CHITO/DOPEMP(FMA/SPMA)COPO：0.5、(6)F2：0.5、(7)百合提取物3：0.05、(8)间苯二酚4：0.02、(9)核黄素5：0.1、(10)氨甲环酸6：0.5、(11)防腐剂：0.2、(12)香料：0.1、(13)纯水：余量(用1％的柠檬酸和NaOH调节pH至7±1。上述美容涂敷剂的过渡金属总量为100ppm以下)。
(洗涤剂配方)
(1)硬脂酸：10.0、(2)棕榈酸：8.0、(3)肉豆蔻酸：12.0、(4)月桂酸：4.0、(5)油醇：1.5、(6)精制羊毛脂：1.0、(7)虾青素1：0.005、(8)香料：0.1、(9)防腐剂：0.2、(10)甘油：18.0、(11)氢氧化钾：6.0、(12)S-GOVC-DDS/S-VCIP-DDS/PH-GOVC-CHITO/DOPEMP(FMA/SPMA)COPO：0.5、(13)肥皂草提取物3：0.5、(14)甘草酸二钾4：0.2、(15)L-抗坏血酸棕榈酸酯5：0.05、(16)纯水：余量(用1％柠檬酸和NaOH调节pH至7±1。上述洗涤剂中过渡金属总量为100ppm以下)。
(口服组合物)
将92.7％质量由50质量％的鸡油和50质量％的猪油构成的、熔点为28±3℃的动物性脂肪，0.9质量％的酶，1.0质量％的添加1％的S-GOVC-DDS/S-VCIP-DDS/PH-GOVC-CHITO/DOPEMP(FMA/SPMA)COPO而成的维生素预混料，0.9质量％的粉末状益生菌和4.5质量％的香料，在明治机械株式会社制造的200L搅拌混合机中搅拌分散2小时，获得了富含本发明的维生素C源的本发明的口服组合物，该口服组合物由粒径分布中平均粒径为0.51mm的粉粒构成。本发明的口服组合物是以下实施例：饲料、饲料添加剂、兽药、食品、食品添加剂、功能性食品和口服兽药。
(片剂)
按照常规方法将下列成分按以下组成比均匀混合并压片，制成每片400mg的片剂。还原麦芽糖浆：17％、琼脂：12％、二氧化硅：1％、蔗糖脂肪酸酯：3％、S-GOVC-DDS/S-VCIP-DDS/PH-GOVC-CHITO/DOPEMP(FMA/SPMA)COPO的冻干粉末：1％、粉状纤维素：余量
(胶囊剂)
用常规方法将300mg由5％的S-GOVC-DDS/S-VCIP-DDS/PH-GOVC-CHITO/DOPEMP(FMA/SPMA)COPO的冻干粉末和95％的中链脂肪酸甘油三酯构成的组分混炼并填充在100mg软胶囊皮(70％明胶和25％)中，得到每粒440mg的软胶囊。
(健康饮料)
混合以下成分，并按照常规方法加水至10L，来制备健康饮料。S-GOVC-DDS/S-VCIP-DDS/PH-GOVC-CHITO/DOPEMP(FMA/SPMA)COPO：80g、蜂王浆：1g、液体糖：1000g、DL-酒石酸钠：1g、柠檬酸：10g、环糊精：25g、氯化钾：2g、硫酸镁：1g。
(稳定性试验)
对于本发明的所有上述制剂在40℃下进行6个月的稳定性试验。在稳定性试验的评价中，通过以下分数对制剂的颜色的变化、沉淀的发生、气味的产生进行评价，求出其平均分并进行比较。对10名20至50岁的男性和女性进行单独评价，并求出其平均分。(分数)颜色的变化：没有变化：0分，观察到了变化：2分，观察到的了剧烈变化：3分。沉淀的发生：没有发生0分，观察到了沉淀：2分，观察到了严重沉淀：3分。气味的产生：没有产生0分，观察到了产生：2分，观察到了严重的气味产生：3分。其结果是，在本发明的上述配方中，在颜色的变化、沉淀的发生和气味的产生中均未观察到随时间的变化，得分是0分，该结果证明了本发明的配方是的优越的稳定性。
(本发明的细胞递送用载体的调整)
添加所述表4所记载的每种层形成脂质0.005g并添加卵磷脂使其最后为2g，分别添加表6中的多元醇、合成抗氧化剂、紫外线吸收剂、防腐剂以及表8的本发明的有效成分0.005g并添加甘油使其最后为50g，进一步地，分别添加8g山嵛醇、7g硬脂醇、4gPEG-20植物甾醇、3g鲸蜡醇、1g植物固醇、1g硬脂酸甘油酯、2g三(辛酸/癸酸)甘油酯、1gGOVC(2-甘油基-3-辛基抗坏血酸)、0.3g胆固醇、0.2gDOPEMP(NIPAA/DMAPAA)Cop和所述表3所记载的每种脂质0.005g，并添加角鲨烷使其最后为30g，并用自转公转搅拌器进行搅拌。向其中加入纯水至100g，并通过涡旋分散。之后，在超声波浴中超声处理30分钟，减小乳化颗粒的尺寸，然后将其通过100nm的过滤器，以调整脂质体的尺寸。平均粒径尺寸为79nm，通过电子显微镜观察到了层状结构。之后，通过凝胶过滤对脂质体进行分离和纯化，以制备本发明的细胞递送用载体。制备了本发明的具有温度刺激响应性的细胞递送用载体。接着，用该细胞递送用载体来制备液剂。其配方如下。即，(1)上述细胞递送用载体：0.5、(2)甘油：6.5、(3)1,3-丁二醇：1.0、(4)苯氧乙醇：0.5、(5)香料复合物：0.1、(6)精油复合物：0.1、(6)纯水：余量(用(7)柠檬酸1.0和(8)NaOH调节pH至7)。
上述多种配方例作为用途可用于药品、准药品、化妆品、补充剂、兽药和杂货，进一步地，作为剂型可用于外用剂、口腔剂、栓剂、口服剂、健康饮料、泥敷剂、面膜剂、喷雾剂、注射剂、调味剂、液剂、软膏剂、气雾剂、粉末、压制剂、膏剂、外用喷洒剂、散剂、颗粒剂、片剂、软胶囊剂、丸剂、板状剂型、含片剂、糊剂、固体剂、湿润剂、胶粘剂。进一步地，可以确认这些制剂具有所述表9效果作为化妆品和准药品的效果。
(不同温度响应细胞递送用载体)
使用下临界溶解温度为37至42℃的DOPEMP(NIPAA/DMAPAA)Cop的体温变化型温度响应细胞递送用载体(以下，简称为体温变化型)，和下临界溶解温度为45-60℃的DOPEMP(NIPAA/DMAPAA)Cop的高温变化型温度响应细胞递送用载体(以下，简称为高温变化型)比较了含有两亲性抗氧化维生素的温度响应层状细胞递送用载体的两种载体的效果。
载体的制备方法相同，即，将1g源自蛋黄的磷脂酰胆碱、0.8g二油酰磷脂酰乙醇胺、3gDOPEMP(NIPAA/DMAPAA)Cop、0.05g胆固醇、0.1gPEG-25植物甾烷醇(INCI名称：PEG-25Phytostanol)和0.1gGOVC(将2-甘油基-3-抗坏血酸辛酸酯、甘油：辛酸：由抗坏血酸酯构成的基质以0.223：0.35：0.427的重量比结合而成的两亲性维生素衍生物)溶解在200mL氯仿中，用蒸发器除去溶剂，形成层状结构薄膜。向其中混合1mL以0.2mg/mL的浓度溶解在PBS中的肽结合荧光物质溶液(卵清蛋白：异硫氰酸荧光素＝1：1(等摩尔)的混合水溶液)与1mL用PBS将在细胞内生物合成抑制荧光素酶活性的蛋白质作为核酸的mir-125a siRNAduplex稀释为200nM的浓度的溶液(以下，简称为siRNA溶液)。接着，用搅拌器对薄膜进行粉碎处理，然后进行超声处理，进一步地，用孔径为400nm的过滤器将其调整为纳米级胶囊。使用PD-10柱凝胶过滤对细胞递送用载体进行纯化。(皮肤组织透过性的比较)使用LabCyteEPI-MODEL作为表皮皮肤模型，将人工皮肤夹在Franz Cell之间，在37℃下孵育，将1mL上述制备的含有制备的荧光物质的本发明的体温变化型和高温变化型载体各1重量％的组合物溶液投与至供体室，进行遮光，并对于体温模型在37℃下，以及对于蒸气毛巾模型在45℃下分别孵育0.5小时，用可见光(530nm)照射30分钟，接着孵育42小时。然后，向150μL取样口的取样样品和肽结合荧光物质包含乳化组合物中加入10μL的10％的TritonX制备标准的样品溶液。取100μL样品溶液使用荧光光度计infiniteM1000测量荧光强度，根据以下公式计算皮肤透过率。其结果是，在37℃孵育的体温变化型的荧光强度为8％，高温变化型为4％，在37℃的体温模型温度下，体温变化型显示出高温变化型两倍的荧光强度。另一方面，在45℃孵育的体温变化型的荧光强度为3％，高温变化型为9％，在45℃的蒸气毛巾模型温度下，高温变化型显示出体温变化型三倍的荧光强度。其结果是，可以确认在使用蒸气毛巾、红外线、高频、低频等光线疗法设备等高温环境下，45℃以上的高温变化型载体比人体变化型载体表现出更高的药物转运能力。
(不同维生素衍生物的稳定性试验)
进行了本发明的细胞递送用载体在不同维生素衍生物中的稳定性试验。载体的制备方法如下：将1g源自蛋黄的磷脂酰胆碱、0.8g二油酰磷脂酰乙醇胺、3gDOPEMP(NIPAA/DMAPAA)Cop、0.05g胆固醇、0.1gPEG-25植物甾烷醇(INCI名称：PEG-25Phytostanol)和0.1g不同维生素衍生物溶解在200mL的氯仿中，然后用蒸发器除去溶剂，形成层状结构薄膜。向其中混合1mL以0.2mg/mL的浓度溶解在PBS中的肽结合荧光物质溶液(卵清蛋白：异硫氰酸荧光素＝1:1(等摩尔)的混合水溶液)与1mL由PBS稀释的溶液(以下，简称为荧光溶液)。接着，用搅拌器对薄膜进行粉碎处理，然后进行超声处理，进一步地，用孔径为100nm的过滤器将其调整为纳米级胶囊，用普通光学显微镜和偏光显微镜观察胶囊的状态，确认载体在显微镜下包含有荧光染料，而且在偏光显微镜下存在麦芽糖酶正交偏光。将其在40℃、80％湿度的环境下保存6个月后，用普通光学显微镜和偏光显微镜观察载体的状态。此时，作为可有效用于本发明的维生素衍生物，仅将能够确认为载体未被破坏，与试验开始时一样，在显微镜下能够观察到在载体内包含荧光染料，并且能够在偏光显微镜下确认存在麦芽糖酶正交偏光的维生素衍生物设定为○组。而将上述两者均无法确认的维生素衍生物设定为X组。
(○组的维生素衍生物)
表2所述的维生素衍生物。
(X组的维生素衍生物)
抗坏血酸硫酸二钠、抗坏血酸硫酸二钾、抗坏血酸-2-磷酸钠、抗坏血酸-2-磷酸镁、抗坏血酸-2-磷酸-6-棕榈酸钠、抗坏血酰硬脂酸酯、异硬脂醇抗坏血酸磷酸酯二钠、抗坏血酸异硬脂酸酯、抗坏血酸棕榈酸酯、抗坏血酸二棕榈酸酯、抗坏血酸异棕榈酸酯磷酸酯三钠、生育酚二甲基甘氨酸、生育酚二甲基甘氨酸盐酸盐
(脂质的稳定性试验)
进行了本发明的细胞递送用载体在不同的脂质中的稳定性试验。载体的制备方法如下：将1g源自蛋黄的磷脂酰胆碱、0.8g二油酰磷脂酰乙醇胺、3gDOPEMP(NIPAA/DMAPAA)Cop、0.05g胆固醇、0.1gPEG-25植物甾烷醇(INCI名称：PEG-25Phytostanol)、0.5g脂质和0.1gGOVC(维生素衍生物即2-甘油基-3-抗坏血酸辛酸酯)溶解在200mL的氯仿中，然后用蒸发器除去溶剂，形成层状结构薄膜。向其中混合1mL以0.2mg/mL的浓度溶解在PBS中的肽结合荧光物质溶液(卵清蛋白：异硫氰酸荧光素＝1:1(等摩尔)的混合水溶液)与1mL由PBS稀释的溶液(以下，简称为荧光溶液)。接着，用搅拌器对薄膜进行粉碎处理，然后进行超声处理，进一步地，用孔径为100nm的过滤器将其调整为纳米级胶囊，用普通光学显微镜和偏光显微镜观察胶囊的状态，确认载体在显微镜下包含有荧光染料，而且在偏光显微镜下存在麦芽糖酶正交偏光。将其在40℃、80％湿度的环境下保存6个月后，用普通光学显微镜和偏光显微镜观察载体的状态，此时，作为可有效用于本发明的脂质，仅将能够确认为载体未被破坏，与试验开始时一样，载体在显微镜下包含荧光染料，且在偏光显微镜下存在麦芽糖酶正交偏光，并且将维生素衍生物的衰减率抑制在10％以下，并能够保持维生素衍生物稳定的脂质记载于表3，而对于以上两种情况均无法确认的脂质，作为在安全性上存在问题的脂质而排除。
(具有表面活性作用的脂质的稳定性试验)
进行了本发明的细胞递送用载体在具有不同表面活性作用的脂质中的稳定性试验。载体的制备方法如下：将1g源自蛋黄的磷脂酰胆碱、0.8g二油酰磷脂酰乙醇胺、3gDOPEMP(NIPAA/DMAPAA)Cop、0.05g胆固醇、0.5g具有表面活性作用的脂质、0.1gGOVC(维生素衍生物即2-甘油基-3-抗坏血酸辛酸酯)溶解在200mL的氯仿中，然后用蒸发器除去溶剂，形成层状结构薄膜。向其中混合1mL以0.2mg/mL的浓度溶解在PBS中的肽结合荧光物质溶液(卵清蛋白：异硫氰酸荧光素＝1：1(等摩尔)的混合水溶液)与1mL由PBS稀释的溶液(以下，简称为荧光溶液)。接着，用搅拌器对薄膜进行粉碎处理，然后进行超声处理，进一步地，用孔径为100nm的过滤器将其调整为纳米级胶囊，用普通光学显微镜和偏光显微镜观察胶囊的状态，确认载体在显微镜下包含有荧光染料，而且在偏光显微镜下存在麦芽糖酶正交偏光。将其在40℃、80％湿度环境下保存6个月后，用普通光学显微镜和偏光显微镜观察载体的状态，此时，作为可有效用于本发明的具有表面活性的脂质，将能够确认为载体未被破坏，与试验开始时一样，载体在显微镜下包含荧光染料，且在偏光显微镜下存在麦芽糖酶正交偏光，并且将维生素衍生物的衰减率抑制在10以下，并能够保持维生素衍生物稳定的脂质记载于表4，而对于以上两种情况均无法确认的脂质，作为在安全性上存在问题的脂质而排除。
(刺激响应物质的稳定性试验)
进行了本发明的细胞递送用载体在不同刺激响应物质中的稳定性试验。载体的制备方法如下：将1g源自蛋黄的磷脂酰胆碱、0.8g二油酰磷脂酰乙醇胺、3g不同刺激响应物质、0.05g胆固醇和0.1gGOVC(维生素衍生物即2-甘油基-3-抗坏血酸辛酸酯)溶解在200mL的氯仿中，然后用蒸发器除去溶剂，形成层状结构薄膜。向其中混合1mL以0.2mg/mL的浓度溶解在PBS中的肽结合荧光物质溶液(卵清蛋白：异硫氰酸荧光素＝1：1(等摩尔)的混合水溶液)与1mL由PBS稀释的溶液(以下，简称为荧光溶液)。接着，用搅拌器对薄膜进行粉碎处理，然后进行超声处理，进一步地，用孔径为100nm的过滤器将其调整为纳米级胶囊，用普通光学显微镜和偏光显微镜观察胶囊的状态，确认载体在显微镜下包含有荧光染料，而且在偏光显微镜下存在麦芽糖酶正交偏光。将其在40℃、80％湿度的环境下保存6个月后，用普通光学显微镜和偏光显微镜观察载体的状态，此时，作为可有效用于本发明的刺激响应物质，将能够确认为载体未被破坏，与试验开始时一样，载体在显微镜下包含荧光染料，且在偏光显微镜下存在麦芽糖酶正交偏光，并且将维生素衍生物的衰减率抑制在20％以下，并能够保持维生素衍生物稳定的物质记载于表5，而对于以上两种情况均无法确认的物质，作为在安全性上存在问题的物质而排除。
(乳化稳定剂的稳定性试验)
进行了本发明的细胞递送用载体在选自多元醇、合成抗氧化剂、紫外线吸收剂、防腐剂中的乳化稳定剂中的稳定性试验。载体的制备方法如下：将1g源自蛋黄的磷脂酰胆碱、0.8g二油酰磷脂酰乙醇胺、3gDOPEMP(NIPAA/DMAPAA)Cop、0.05g胆固醇、0.1gGOVC(维生素衍生物即2-甘油基-3-抗坏血酸辛酸酯)溶解在200mL的氯仿中，然后用蒸发器除去溶剂，形成层状结构薄膜。向其中混合0.5g选自多元醇、合成抗氧化剂、紫外线吸收剂、防腐剂中的乳化稳定剂，以及1mL以0.2mg/mL的浓度溶解在PBS中的肽结合荧光物质溶液(卵清蛋白：异硫氰酸荧光素＝1：1(等摩尔)的混合水溶液)与1mL由PBS稀释的溶液(以下，简称为荧光溶液)。接着，用搅拌器对薄膜进行粉碎处理，然后进行超声处理，进一步地，用孔径为100nm的过滤器将其调整为纳米级胶囊，用普通光学显微镜和偏光显微镜观察胶囊的状态，确认载体在显微镜下包含有荧光染料，而且在偏光显微镜下存在麦芽糖酶正交偏光。将其在40℃、80％湿度的环境下保存6个月后，用普通光学显微镜和偏光显微镜观察载体的状态，此时，作为可有效用于本发明的乳化稳定剂，将能够确认为载体未被破坏，与试验开始时一样，载体在显微镜下包含有荧光染料，且在偏光显微镜下存在麦芽糖酶正交偏光，并且将维生素衍生物的衰减率抑制在10％以下，并能够保持维生素衍生物稳定的乳化稳定剂记载于表6，而对于以上两种情况均无法确认的乳化稳定剂，作为在安全性上存在问题的乳化稳定剂而排除。
(刺激响应聚合物内不同修饰链物质的稳定性试验)
进行了本发明的细胞递送用载体在刺激响应聚合物内不同修饰链物质中的稳定性试验。载体的制备方法如下：将1g源自蛋黄的磷脂酰胆碱、0.8g二油酰磷脂酰乙醇胺、3gDOPEMP(NIPAA/DMAPAA/修饰链物质)、0.05g胆固醇和0.1gGOVC(维生素衍生物即2-甘油基-3-抗坏血酸辛酸酯)溶解在200mL的氯仿中，然后用蒸发器除去溶剂，形成层状结构薄膜。向其中混合1mL以0.2mg/mL的浓度溶解在PBS中的肽结合荧光物质溶液(卵清蛋白：异硫氰酸荧光素＝1：1(等摩尔)的混合水溶液)与1mL由PBS稀释的溶液(以下，简称为荧光溶液)。接着，用搅拌器对薄膜进行粉碎，然后进行超声处理，进一步地，用孔径为100nm的过滤器将其调整为纳米级胶囊，用普通光学显微镜和偏光显微镜观察胶囊的状态，确认载体在显微镜下包含有荧光染料，而且在偏光显微镜下存在麦芽糖酶正交偏光。将其在40℃、80％湿度的环境下保存6个月后，用普通光学显微镜和偏光显微镜观察载体的状态，此时，作为可有效用于本发明的修饰链物质，将能够确认为载体未被破坏，与试验开始时一样，载体在显微镜下包含荧光染料，且在偏光显微镜下存在麦芽糖酶正交偏光，并且将维生素衍生物的衰减率抑制在10％以下，并能够保持维生素衍生物稳定的物质记载于表7，而对于以上两种情况均无法确认的物质，作为在安全性上存在问题的物质而排除。
(包含有效成分的稳定性试验)
进行了本发明的细胞递送用载体在不同的包含有效成分中的稳定性试验。载体的制备方法如下：将1g源自蛋黄的磷脂酰胆碱、0.8g二油酰磷脂酰乙醇胺、3gDOPEMP(NIPAA/DMAPAA)Cop、0.05g胆固醇、0.1gGOVC(维生素衍生物即2-甘油基-3-抗坏血酸辛酸酯)溶解在200mL的氯仿中，然后用蒸发器除去溶剂，形成层状结构薄膜。将0.5g不同有效成分，以及1mL以0.2mg/mL的浓度溶解在PBS中的肽结合荧光物质溶液(卵清蛋白：异硫氰酸荧光素＝1：1(等摩尔)的混合水溶液)混合于1mL由PBS稀释的溶液(以下，简称为荧光溶液)。接着，用搅拌器对薄膜进行粉碎处理，然后进行超声处理，进一步地，用孔径为100nm的过滤器将其调整为纳米级胶囊，用普通光学显微镜和偏光显微镜观察胶囊的状态，确认载体在显微镜下包含有荧光染料，而且在偏光显微镜下存在麦芽糖酶正交偏光。将其在40℃、80％湿度的环境下保存6个月后，用普通光学显微镜和偏光显微镜观察载体的状态，此时，作为可有效用于本发明的包含有效成分，将能够确认为载体未被破坏，与试验开始时一样，载体在显微镜下包含荧光染料，且在偏光显微镜下存在麦芽糖酶正交偏光，并且将维生素衍生物的衰减率抑制在10％以下，并能够保持维生素衍生物稳定的包含有效成分记载于表8，而对于以上两种情况均无法确认的包含有效成分，作为在安全性上存在问题的包含有效成分而排除。
(包含有效成分的稳定性试验)
请皮肤科医生和整形外科医生对上述制备的含有不同有效成分的本发明的细胞递送用载体进行了有效性试验，确认了多重有效性，具体效果示于表9。
工业适用性
本发明的细胞递送用载体的用途可应用于所有的生物细胞，如动物细胞、植物细胞、酵母、细菌、真菌、黏菌、支原菌、变形虫等，可用于选自药品、准药品、化妆品、补充剂、兽药、肥料、农药、培养液、杂货等，并且能够提高细胞递送效率的所有有用的产品。作为具体制剂，可应用于如下制剂：外用剂、口腔剂、栓剂、口服剂、健康饮料、泥敷剂、面膜剂、喷雾剂、注射剂、调味剂、液剂、软膏剂、气雾剂、粉末、压制剂、膏剂、外用喷洒剂、散剂、颗粒剂、片剂、软胶囊剂、丸剂、板状剂型、含片剂、糊剂。
附图说明
图1是示出了本发明的细胞递送用载体的效果的图。在图1中，(5)表示细胞膜，(5)的上侧是细胞外，(5)的下侧是细胞内。(1)是与本发明的细胞递送用载体结合的含有刺激响应聚合物的分子。有效成分用(2)表示，并包含在细胞递送用载体内。(1)中存在长尾状结构，其表示刺激响应聚合物，该聚合物通过与其结合的、具有表面活性的脂质(椭圆)接合在细胞递送用载体的膜内。(3)是同时激活自噬相关基因和蛋白酶合成基因的物质，例如，维生素衍生物，具有两亲性，因此也连接在细胞递送用载体的膜内。A是与穿过细胞膜即(5)的维生素受体(由方块和上部缺口的圆圈表示)结合的细胞递送用载体。这样，维生素衍生物(3)在细胞膜的表面与维生素受体结合，但其分子形状与原来的维生素不同，因此不能通过维生素转运通道转运，一部分细胞膜凹陷成为袋子B)，通过内吞从细胞膜表面摄取到细胞内C)。C)封闭在内体内的细胞递送用载体，由于温度、光等外部刺激4)，其细胞表面的刺激响应聚合物收缩，从而变成疏水性，由此，膜的平行度被打破，容易破坏细胞递送用载体的膜，有效成分释放到内体内。另一方面，6)为具有消化酶(小四角形)的溶酶体。D)溶酶体与内体融合，并使消化酶移动到内体，在E)中分解(消化)内体内的分子。由此，稳定的维生素衍生物能够转变为细胞可利用的维生素。F)最后，内体被破坏，有效成分(黑色▲)、维生素(椭圆)和未消化的维生素衍生物(7)被释放到细胞内。未消化的维生素衍生物进一步激活自噬系统，被自噬体消化，最后转化为维生素供细胞使用。
图2为本发明的细胞递送用载体的脂质双层膜的典型的结构例1。本发明的细胞递送用载体也可以是脂质单层膜，在这种情况下，可以使用该图中最上部(最外层)的膜结构。构成最外层的膜的分子的脂质与内侧的膜分子的脂质结合，形成双层膜结构。构成外侧的膜的分子由含有刺激响应聚合物的分子(1)、同时激活自噬相关基因和蛋白酶合成基因的物质(2)(如维生素衍生物)，和脂质(3)构成，这三个要素(1)、(2)和(3)构成本发明的细胞递送用载体的膜分子。(1)是刺激响应聚合物，由长尾状结构和与其结合的脂质(矩形)构成，脂质部分嵌入细胞递送用载体的膜分子中。(2)是两亲性物质，如维生素衍生物，其脂质(六边形)嵌入细胞递送用载体的膜分子中。(3)示出了两个典型的构成细胞递送用载体的膜的分子，由脂质(六边形)和构成乳化膜的两亲性物质(矩形和圆形结合而成)构成。该圆形部分代表水溶性分子，本发明的细胞递送用载体能够分散悬浮在水溶性溶剂、细胞外液中。内侧的膜分子主要由(2)和(3)构成。在本发明中，这些双层膜可以进一步在内侧连续，形成多层膜结构(层状结构)。
图3是本发明的细胞递送用载体的脂质双层膜的典型的结构例2。本发明的细胞递送用载体也可以是脂质单层膜，在这种情况下，可以使用该图中最上部(最外侧)的膜结构。构成最外侧的膜的分子的脂质可以与内侧的膜分子的脂质结合，形成双层膜结构。在构成最外侧的膜的分子中，含有刺激响应聚合物的分子(1)与脂质(2)的水溶性分子部分(圆形)离子结合(虚线)。(2)中的脂质具有水溶性分子部分(圆形)和脂溶性分子部分(六边形)结合的结构，但膜中也可以存在仅由脂溶性分子构成的分子(六边形)。(3)是同时激活自噬相关基因和蛋白酶合成基因的物质，如两亲性维生素衍生物。(3)也具有水溶性分子部分(水滴形部分)和脂溶性分子部分(六边形)结合的结构，脂溶性部分与膜的脂质融合。在本发明中，这些双层膜可以进一步在内侧连续，形成多层膜结构(层状结构)。

Claims (28)

1.一种细胞递送用载体，其由一种或多种物质分别选自以下三组的混合物构成：同时激活自噬相关基因和组织蛋白酶合成基因的物质、含有刺激响应聚合物的分子、以及脂质。
2.根据权利要求1所述的细胞递送用载体，其由一种或多种物质分别选自以下四组的混合物构成：同时激活自噬相关基因和组织蛋白酶合成基因的物质、含有刺激响应聚合物的分子、乳化稳定剂、以及脂质。
3.根据权利要求1所述的细胞递送用载体，其由一种或多种物质分别选自以下五组的混合物构成：同时激活自噬相关基因和组织蛋白酶合成基因的物质、含有刺激响应聚合物的分子、乳化稳定剂、有效成分以及脂质，其中有效成分封装在细胞递送用载体内。
4.根据权利要求1所述的细胞递送用载体，其中，部分或全部的脂质是具有8个以上连续烃链的脂质。
5.根据权利要求1所述的细胞递送用载体，其中，部分或全部的脂质是表面活性剂。
6.根据权利要求1所述的细胞递送用载体，其中，部分或全部的脂质是层状形成表面活性剂。
7.根据权利要求1所述的细胞递送用载体，其中，细胞递送用载体具有单层结构和多层结构中的任一种结构。
8.根据权利要求1所述的细胞递送用载体，其中，部分或全部的脂质选自阳离子脂质或阴离子脂质中的任意一方。
9.根据权利要求1所述的细胞递送用载体，其以分散在水性溶剂中的微粒子存在。
10.根据权利要求1所述的细胞递送用载体，其中，分散在水性溶剂中的粒子是平均粒径在1nm至300nm范围内的纳米粒子。
11.根据权利要求1所述的细胞递送用载体，其中，细胞递送用载体是用于药物递送系统的细胞递送用载体。
12.根据权利要求1所述的细胞递送用载体，其中，自噬相关基因和组织蛋白酶合成基因是选自下述表1，且在人类基因组组织的人类基因组命名委员会中登记的基因。
[表1]
(自噬相关基因)
ULK1、ULK2、ATG2A、ATG2B、ATG3、ATG4A、ATG4B、ATG4C、ATG4D、ATG5、BECN1、ATG7、GABARAP、GABARAPL1、GABARAPL2、MAP1LC3A、MAP1LC3B、MAP1LC3B2、MAP1LC3C、ATG9A、ATG9B、ATG10、ATG12、ATG13、ATG14、ATG16L1、ATG16L2、RB1CC1、WIPI1、WIPI2、SNX30、SNX4、ATG101、AMBRA1
(组织蛋白酶合成基因)
CTSA、CTSB、CTSC、CTSD、CTSD、CTSE、CTSF、CTSG、CTSH、CTSK、CTSL、CTSLP6、CTSO、CTSS、CTSV、CTSW、CTSZ
13.根据权利要求1所述的细胞递送用载体，其中，同时激活自噬相关基因和组织蛋白酶合成基因的物质和含有刺激响应聚合物的分子中的任意一种或多种物质构成主要由脂质构成的膜分子的一部分。
14.根据权利要求1所述的细胞递送用载体，其中，含有刺激响应聚合物的分子与脂质离子键合。
15.根据权利要求1所述的细胞递送用载体，其中，含有刺激响应聚合物的分子包括以下三种刺激响应分子中的任一种或多种：温度、pH和光。
16.根据权利要求1所述的细胞递送用载体，其中，同时激活自噬相关基因和组织蛋白酶合成基因的物质选自维生素衍生物。
17.根据权利要求1所述的细胞递送用载体，其中，同时激活自噬相关基因和组织蛋白酶合成基因的物质由选自以下表2的维生素衍生物组中的一种或多种物质构成。
[表2]
(抗坏血酸/胆甾醇酯)磷酸钠、磷酸抗坏血酸酯生育酚酯钾、生育酚亚油酸酯/油酸酯、2,4-二乙氧羰基泛酸乙酯、3-O-乙基抗坏血酸、3-O-十六烷基抗坏血酸、3-抗坏血酸羰基二肽-17、乙基抗坏血酸、抗坏血酸甲基硅烷醇果胶、抗坏血酸甘油二酯生育酚、抗坏血酸葡糖苷、抗坏血酸二酯生育酚、四己基癸醇抗坏血酸酯、抗坏血酸多肽、甲基硅烷醇抗坏血酸、辛酰基2-甘油基抗坏血酸、辛酰基3-甘油基抗坏血酸、生育酚琥珀酸酯、二乙基抗坏血酸、二油基生育酚甲基硅烷醇、吡哆素二辛酸酯、二乙氧羰基泛酸乙酯、吡哆醇二棕榈酸酯、抗坏血酸硬脂酸酯、硫辛酸硬脂酸酯、硫辛酸棕榈酸酯、硫辛酸十七酸酯、四己基癸醇抗坏血酸酯、核黄素四丁酸酯、生育酚氧丙基三硅氧烷、生育酚葡糖苷、生育酚磷酸酯钠、托可索仑、吡哆素三己基癸酸酯、生育酚烟酸酯、视黄醇棕榈酸酯、维生素C丙二醇透明质酸、羟癸基泛醌、视黄醇丙酸酯、抗坏血酸生育酚马来酸酯、月桂亚氨基二丙酸生育酚磷酸酯盐二钠、生育酚亚油酸酯、视黄醇亚油酸酯、生育酚磷酸二钠、生育酚视黄酸酯、视黄醇视黄酸酯、生育酚乙酸酯、视黄醇乙酸酯
18.根据权利要求1所述的细胞递送用载体，其中，脂质是选自以下表3的物质组中的一种或多种物质。
[表3]
烷磺酸、十二-十五烷基硫酸三乙醇胺、烷基葡糖苷、异硬脂酸铝、异硬脂酸甘油酯、异硬脂酸山梨糖醇酐、异硬脂酸聚乙二醇、聚氧乙烯(20)失水山梨醇异硬脂酸酯、异硬脂酰乳酸、异棕榈酸二甘油酯、十一烷基-N-羧甲基咪唑甜菜碱、十一烷基羟乙基咪唑甜菜碱、十一烯酸锌、乙二醇脂肪酸酯、甘油芥酸酯、油基二甲基氧化胺、油基硫酸、油基硫酸三乙醇胺、油酸、油酸甘油酯、油酰肌氨酸、甲基油酰基牛磺酸、神经节苷脂、胆酸、表面活性蛋白及其盐类、红花油脂肪酸甘油酯、皂苷、甘油二花生酸酯、甘油二异硬脂酸酯、聚甘油二异硬脂酸酯-2-10、十四烷基聚氧丙烯聚氧乙烯醚、乙二醇二辛酸酯、二辛胺、乙二醇二油酸酯、聚乙二醇二油酸酯、乙二醇二硬脂酸酯、二硬脂酸甘油酯、乙二醇二硬脂酸、失水山梨醇二硬脂酸酯、聚(6-10)甘油二硬脂酸酯、聚乙二醇二硬脂酸酯、聚乙二醇二棕榈酸酯-150、十二烷基二甲基氧化胺、二肉豆蔻酸铝、二甲基硬脂胺、蔗糖脂肪酸酯、二甘醇二月桂酸酯、聚乙二醇二月桂酸酯、聚乙二醇二蓖麻油酸酯、硬脂基二羟乙基甜菜碱、甜菜碱硬脂基二甲基氨基乙酸酯、硬脂二甲基氧化胺、硬脂基二甲基甜菜碱、硬脂基三甲基糖精铵、硬脂硫酸酯、硬脂酸、硬脂酰胺乙基二乙胺、硬脂酸二甘醇、硬脂酸三乙醇胺、硬脂酰基酰基谷氨酸、硬脂酰甲基牛磺酸、硬脂酰乳酸、棘孢青霉酸、鞘磷脂、鞘氨磷脂、磺基琥珀酸二辛酯、二月桂基磺基琥珀酸酯、山梨糖醇倍半异硬脂酸酯、倍半油酸甘油酯、倍半油酸二甘油酯、倍半油酸、山梨聚糖倍半硬脂酸酯、十六烷基三甲基糖精铵、十六烷基磷酸、十六烷基磷酸二乙醇胺、十六烷基硫酸、槐糖脂、脱氧胆酸、聚(10)甘油十油酸酯、十硬脂酸十甘油酯、聚(2)甘油四异硬脂酸酯、十四烷磺酸、三异硬脂酸二甘油酯、山梨糖醇三油酸酯、聚(10)甘油三油酸酯、聚氧乙烯(20)山梨醇三油酸酯、山梨醇三硬脂酸酯、聚(10)甘油三硬脂酸酯、聚氧乙烯(150)山梨醇三硬脂酸酯、聚氧乙烯(20)山梨醇三硬脂酸酯、聚氧乙烯脱水山梨糖醇三硬脂酸酯、三月桂胺、海藻糖脂、棕榈油脂肪酸酰-N-羧基乙酯-N-羟乙基二胺、棕榈油脂肪酸酰胺丙基甜菜碱、棕榈酸、异丙醇胺棕榈酸酯、聚乙二醇棕榈酸酯、棕榈酰甲基牛磺酸、蓖麻油脂肪酸、聚(10)甘油庚二酸酯、甘油山萮酸酯、聚(6-10)甘油五油酸酯、聚(6-10)甘油五油酸酯、五硬脂酸十甘油酯、多氧剂、聚氧乙烯(1)烷基(11,13,15)醚硫酸酯、聚氧乙烯(1)烷基(11,13,15)醚硫酸酯三乙醇胺、聚氧乙烯(1)聚氧丙烯(1,2,4,8)十六烷基醚、聚氧乙烯(10)烷基(12,13)醚、聚氧乙烯(10)烷基(12,13)醚磷酸酯、聚氧乙烯(10)聚氧丙烯(1,2,4,8)十六烷基醚、聚氧乙烯(10)氢化蓖麻油、聚氧乙烯(2)烷基(12,13)醚硫酸酯、聚氧乙烯(2)月桂基醚硫酸酯、聚氧乙烯(2,10,20)异硬脂醚、聚氧乙烯(20)芳基醚、聚氧乙烯(20)聚氧丙烯(1,2,4,8)十六烷基醚、聚氧乙烯(20)椰子脂肪酸脱水山梨糖醇、聚氧乙烯(20)氢化蓖麻油、聚氧乙烯(3)烷基(11-15)醚硫酸酯、聚氧乙烯(3)聚氧丙烯(34)硬脂醚、聚氧乙烯(3)肉豆蔻醚硫酸酯、聚氧乙烯(3,7,12)烷基(12-14)醚、聚氧乙烯(34)聚氧丙烯(23)硬脂醚、聚氧乙烯(4)聚氧丙烯(30)硬脂醚、聚氧乙烯(40)氢化蓖麻油、聚氧乙烯(5)聚氧丙烯(1,2,4,8)十六烷基醚、聚氧乙烯(50)氢化蓖麻油、聚氧乙烯(60)氢化蓖麻油、聚氧乙烯仲烷基醚、聚氧乙烯烷基醚磷酸酯、聚氧乙烯烷基苯基醚磷酸酯、聚氧乙烯烷基苯基醚磷酸三乙醇胺、聚氧乙烯异十六烷基醚、聚氧乙烯辛醚磷酸酯、聚氧乙烯辛基十二烷基醚、聚氧乙烯辛基苯基醚、聚氧乙烯油醚、聚氧乙烯油醚磷酸酯、聚氧乙烯油醚二乙醇胺磷酸酯等、聚氧乙烯油基十六烷基醚、聚氧乙烯二壬基苯基醚、聚氧乙烯硬脂醚、聚氧乙烯硬脂醚磷酸酯、聚氧乙烯十六烷基醚、聚氧乙烯十六烷基醚磷酸酯、聚氧乙烯鲸蜡硬脂醚、聚氧乙烯十三烷基醚、聚氧乙烯十三烷基醚乙酸酯、聚氧乙烯壬基苯基醚、聚氧乙烯蓖麻油、聚氧乙烯二十二烷基醚、聚氧乙烯聚氧丙烯十六烷基醚、聚氧乙烯聚氧丙烯月桂醚、聚氧乙烯肉豆蔻醚、聚氧乙烯椰子油烷基二甲胺氧化物等、聚氧乙烯月桂基醚磷酸酯、聚氧乙烯月桂基醚磷酸三乙醇胺、聚氧乙烯月桂基醚乙酸酯、聚氧乙烯月桂基醚硫酸酯、聚氧乙烯月桂基醚硫酸三乙醇胺、甘露糖基赤藓糖醇脂质、硫酸肉豆蔻酯、肉豆蔻酸、肉豆蔻酸异丙醇胺、肉豆蔻酸甘油酯、聚乙二醇肉豆蔻酸酯、肉豆蔻酰基谷氨酸、肉豆蔻酰肌氨酸、肉豆蔻酰甲基丙氨酸、山梨糖醇单异硬脂酸酯、聚甘油单异硬脂酸酯、单肉豆蔻酸甘油酯单异硬脂酸酯、山梨糖醇单油酸酯、聚甘油单油酸酯、聚乙二醇单油酸酯、乙二醇单硬脂酸酯、山梨糖醇单硬脂酸酯、聚甘油单硬脂酸酯、聚乙二醇单硬脂酸酯、聚氧乙烯脱水山梨糖醇单硬脂酸酯、山梨糖醇单棕榈酸酯、聚氧乙烯脱水山梨糖醇单棕榈酸酯、甘油单羟基硬脂酸酯、聚甘油单肉豆蔻酸酯、山梨糖醇单月桂酸酯、聚乙二醇单月桂酸酯、聚氧乙烯脱水山梨糖醇单月桂酸酯、单羊毛脂脂肪酸甘油酯、单牛脂肪酸甘油酯、椰子油烷基二甲基氨基乙酸甜菜碱、椰子油烷基二甲胺氧化物、椰子油烷基硫酸镁/三乙醇胺、椰油脂肪酸、椰子油脂肪酸/氢化牛油脂肪酸酰基谷氨酸、椰子油脂肪酸酰-N-羧基乙基-N-羟乙基二胺、椰子油脂肪酸酰基-N-羧基乙氧基乙基-N-羧乙基乙二胺、椰子油酰羟乙磺酸酯、椰子油脂肪酸肌氨酸三乙醇胺、椰子油脂肪酸蔗糖酯、椰子油脂肪酸脱水山梨糖醇、椰子脂肪酸三乙醇胺、月桂亚氨基二丙酸、月桂亚氨基丙酸、月桂亚氨基丙酸三乙醇胺、月桂基二甲基氧化胺、月桂基羟基磺基甜菜碱、月桂醇磷酸酯、十二烷基硫酸酯、十二烷基硫酸铵、二乙醇胺月桂基硫酸酯、三乙醇胺月桂基硫酸酯、十二烷基硫酸镁、单乙醇胺月桂基硫酸酯、月桂酸、月桂酰胺丙基甜菜碱乙酸酯、月桂酸甘油酯、二甘醇月桂酸酯、月桂酸三乙醇胺、月桂酰基谷氨酸、月桂酰基谷氨酸三乙醇、月桂酰甲基丙氨酸三乙醇胺、鼠李糖脂、蓖麻醇酸酰胺丙基甜菜碱、蓖麻油酸甘油酯、亚油酸甘油酯、烷基(16,18)三甲基氯化铵、烷基(20-22)三甲基氯化铵、烷基(28)三甲基氯化铵、异硬脂基月桂基二甲基氯化铵、二(聚氧乙烯)油基甲基氯化铵(2EO)、烷基(12-15)二甲基氯化铵、烷基(12-18)二甲基氯化铵、烷基(14-18)二甲基氯化铵、二椰油基二甲基氯化铵、双十八烷基二甲基氯化铵、氯化双十六烷基二甲基铵、二聚氧乙烯硬脂甲基氯化铵、硬脂基二甲基苄基氯化铵、硬脂酰三甲基氯化铵、硬脂酰胆氨基甲酰基甲基氯化吡啶鎓、十六烷基三甲基氯化铵、氯化十六烷基吡啶、三(聚氧乙烯)硬脂基酸氯化铵(5EO)、苯扎氯铵、苄索氯铵、聚氧乙烯氯(1)聚氧丙烯(25)二乙基甲基铵、肉豆蔻基二甲基苄基氯化铵、甲基苄索氯铵、月桂基二甲基(乙基苄基)氯化铵、月桂基三甲基氯化铵、月桂基氯化吡啶鎓、N-(月桂酰氨基甲酰基甲基)-氯化吡啶鎓、烷基二氨基乙基甘氨酸盐酸盐、氢化牛油脂肪酸酰基谷氨酸、自乳化乙二醇单硬脂酸酯、自乳化单硬脂酸甘油酯、自乳化聚乙二醇单硬脂酸酯(2)、烷基异喹啉溴化物、硬脂基三甲基溴、十六烷基三甲基溴化铵、月桂基三甲基溴化铵、聚(6)甘油缩合蓖麻油酸酯、小麦胚芽油脂肪酸甘油酯、亲脂性单油酸甘油酯、亲脂性单硬脂酸甘油酯、氢化大豆溶血磷脂、氢化大豆磷脂、氢化大豆脂肪酸甘油酯、氢化蛋黄溶血磷脂酰胆碱、大豆溶血磷脂、大豆磷脂、饱和脂肪酸甘油酯、棉籽脂肪酸甘油酯、蛋黄卵磷脂及其钠、镁、钾、铝、锌、钙和三乙醇胺的盐类
19.根据权利要求1所述的细胞递送用载体，其中，脂质是具有表面活性的脂质。
20.根据权利要求1所述的细胞递送用载体，其中，具有表面活性的脂质是选自表4的一种或多种物质，并且在水溶液中形成层状结构。
[表4]
2-烷基-N-羧甲基-N-羟乙基咪唑啉甜菜碱、1，2-二油酰-sn-甘油-3-磷酰乙醇胺、14)天冬氨酸三乙醇胺、2-烷基-N-羧甲基-N-羟乙基咪唑啉甜菜碱、N-酰基天冬氨酸、N-酰基谷氨酸、N-酰基肌氨酸、N-酰基甲基丙氨酸、N-酰基甲基牛磺酸、N-硬脂酰二氢鞘氨醇、N-硬脂酰植物鞘氨醇、PEG-20植物甾醇、PEG-植物甾醇、酰基C12-酰基-N-甲基氨基酸、酰基氨基酸、酰基乳酸、乙酰乙基羧基甲基噻唑烷甲酸、氨基乙酸甜菜碱型两性表面活性剂、烷基(烯基)低聚糖苷、烷基酚聚乙二醇醚、烷氧基化甘油三酯、植物甾醇异硬脂酸酯、EmulgadeNLB、Emulgade PL68/50、Emulgade SEPF、Emulgade Sucro、Eumulgin B1、Eumulgin B2、Eumulgin B3、Eumulgin S21,己酰脯氨酸、甘油磷酸酯、甘油磷脂、葡萄糖醛酸、CremophorA25、Cremophor GS32、椰油酰胺MEA椰油酰丙氨酸三乙醇胺、椰油酰谷氨酸、椰油酰谷氨酸三乙醇胺、椰油酰甲基牛磺酸、琥珀酸酯、表面活性蛋白、赖氨酸二硬脂酰谷氨酸、双磷脂酰甘油(心磷脂)、赖氨酸二肉豆蔻酰谷氨酸、赖氨酸二月桂酰谷氨酸、二亚油酰谷氨酸赖氨酸、硬脂酰谷氨酸、二辛基十二烷基硬脂酰谷氨酸、鞘氨醇、神经酰胺、神经酰胺1-膦酸、神经酰胺1-磷酸、神经酰胺氨基乙基膦酸、脑苷脂、山梨糖醇酯、大豆甾醇、三乙醇胺盐、棕榈仁油脂肪酸酰胺丙基甜菜碱液、棕榈脂肪酸谷氨酸、棕榈酰天冬氨酸二三乙醇胺、双(Nε-月桂酰-L-赖氨酸)癸二酰胺、羟基硬脂基植物鞘氨醇、聚氧乙烯甘油基焦谷氨酸异硬脂酸酯、聚氧乙烯氢化蓖麻油单焦谷氨酸单异硬脂酸酯、甘油单焦谷氨酸单油酸酯、植物甾醇、植物鞘氨醇、六甘油单硬脂酸酯、磷脂酰肌醇、磷脂酰肌醇多磷酸盐、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰甘油、磷脂酰胆碱、磷脂酰胆碱(卵磷脂)、磷脂酰丝氨酸、磷脂酸、多元醇脂肪酸酯、聚氧乙烯烷基醚乙酸、聚氧乙烯二硬脂酸酯、聚氧乙烯脱水山梨糖醇三硬脂酸酯、聚氧乙烯脱水山梨糖醇脂肪酸酯、聚氧乙烯甲基葡萄糖二硬脂酸酯、聚氧乙烯单硬脂酸酯、聚氧乙烯月桂基醚、聚氧乙烯氢化蓖麻油、聚氧乙烯脂肪酸胺硫酸酯、聚季铵盐-10、聚季铵盐-51、聚季铵盐-61、聚季铵盐-64、聚季铵盐-65、聚季铵盐-7、肉豆蔻酰谷氨酸、肉豆蔻酰谷氨酸钠、肉豆蔻酰基甲基氨基丙酸己基癸酯、肉豆蔻酰甲基牛磺酸、聚氧乙烯山梨糖醇单油酸酯、椰子油烷基甜菜碱液、椰子脂肪酸N-甲基乙醇酰胺、椰子脂肪酸酰基甘氨酸、椰子油脂肪酸酰基谷氨酸、椰子脂肪酸酰基谷氨酸三乙醇胺、椰子油脂肪酸酰胺丙基甜菜碱、椰子油脂肪酸甘油酯、椰子油脂肪酸谷氨酸、椰子油脂肪酸肌氨酸、椰子脂肪酸二乙醇酰胺(椰油酰胺DEA)、椰子油脂肪酸甲基丙氨酸、椰子脂肪酸甲基乙醇酰胺(椰油酰胺甲基MEA)、椰子油脂肪酸甲基牛磺酸、椰子脂肪酸单乙醇酰胺(椰油酰胺MEA)、月桂酰胺丙基甜菜碱月桂氨基二乙酸液、月桂基二氨基乙基甘氨酸、月桂基二甲氨基乙酸甜菜碱、月桂酰胺丙基甜菜碱、醋酸月桂基醚、硫酸月桂基醚、月桂酰天冬氨酸、月桂酰谷氨酸、月桂酰谷氨酸POE(2)辛基十二烷基醚二酯、月桂酰谷氨酸POE(2)硬脂醚二酯、二(辛基十二烷基/植物甾醇/山嵛基)月桂酰谷氨酸、植物甾醇/辛基十二烷基月桂酰谷氨酸、二己基癸基月桂酰谷氨酸盐、月桂酰谷氨酸三乙醇胺、月桂酰谷氨酸聚氧乙烯辛基十二烷基醚二酯、月桂酰谷氨酸聚氧乙烯硬脂醚二酯、甲基丙氨酸月桂酰谷氨酸、月桂酰肌氨酸、月桂酰肌氨酸三乙醇胺、月桂酰甲基丙氨酸、月桂酰甲基甘氨酸、月桂酰甲基牛磺酸、月桂酰单乙醇酰胺琥珀酸、Lanette WAXAO、溶血磷脂酰肌醇、溶血磷脂酰乙醇胺、溶血磷脂酰甘油、溶血磷脂酰胆碱、溶血磷脂酰丝氨酸、溶血磷脂酸、磷脂磷酸甘油、卵磷脂、开环刺孢青霉酸、氢化椰子脂肪酸甘油硫酸、脂肪胺聚乙二醇醚、脂肪醇聚乙二醇醚、脂肪酸N-烷基葡糖酰胺、脂肪酸酰胺聚乙二醇醚、脂肪酸链烷醇酰胺、脂肪酸链烷醇酰胺醚羧酸、脂肪酸链烷醇酰胺硫酸盐、脂肪酸甘油酯硫酸盐、脂肪酸聚乙二醇酯、氢化环状溶血磷脂酸、氢化大豆磷脂、氢化蛋黄磷脂、支链脂肪酸(C12-31)胆固醇、以及其钠、镁、钾、铝、锌、钙、三乙醇胺的盐
21.根据权利要求1所述的细胞递送用载体，其中，含有刺激响应聚合物的分子具有包含选自表5中的温度刺激响应物质、pH刺激响应物质和光刺激响应物质中的一种或多种单体的直链或者支链的聚合物结构的结构。
[表5]
(温度刺激响应物质)
(聚氧乙烯辛基苯基醚)丙烯酸酯、(聚氧乙烯辛基苯基醚)甲基丙烯酸酯、(聚氧乙烯壬基苯基醚)丙烯酸酯、(聚氧乙烯壬基苯基醚)甲基丙烯酸酯、(聚氧乙烯月桂基醚)丙烯酸酯、(聚氧乙烯月桂基醚)甲基丙烯酸酯、1,2,4,5-四(N,N-二硫代氨基甲基)苯、1,3,5-三(溴甲基)苯、2-正丙基-2-噁唑啉、2-N,N-二甲基氨基乙基丙烯酸酯、2-N,N-二甲基氨基乙基甲基丙烯酸酯DMAEMA、2-氨基-2-羟甲基-1,3-丙二醇、2-氨基-2-羟甲基-1,3-丙二醇(Tris)、2-氨基-2-羟甲基-1,3-丙二醇盐酸盐、丙烯酸2-羟基-3-苯氧基丙酯、丙烯酸2-羟丁酯、甲基丙烯酸2-羟丁酯、丙烯酸2-羟丙酯、甲基丙烯酸2-羟丙酯、3,5-三(N,N-二硫代氨基甲酰基甲基)苯、3-N,N-二甲基氨基丙基丙烯酰胺、N-丙烯酰天冬酰胺、N-丙烯酰甘氨酰胺、N-丙烯酰谷氨酰胺、N-甲基丙烯酰基天冬酰胺、N,N-二甲基甲基丙烯酰胺、N,N-二甲基丙烯酰胺、N,N-亚甲基双丙烯酰胺、N,N-乙基甲基丙烯酰胺、N,N-乙基甲基酰胺、N,N-乙基甲基丙烯酰胺、N,N-二烷基-二硫代氨基甲酰基甲基、N,N-二烷基取代的丙烯酰胺衍生物、N,N-二烷基取代的甲基丙烯酰胺衍生物、N,N-二乙基丙烯酰胺、N,N-二乙基酰胺、N,N-二乙基甲基丙烯酰胺、N,N-二硫代氨基甲酸铵(钠N,N-二硫代氨基甲酸)、N,N-二甲基丙烯酰胺、N,N-二甲基甲基丙烯酰胺、N,N-丙基丙烯酰胺、N,N-丙基丙烯酰胺、N,N-丙基甲基丙烯酰胺、N-丙烯酰基哌啶、N-丙烯酰基吗啉、N-烷基丙烯酰胺、N-烷基甲基丙烯酰胺、N-烷基取代的丙烯酰胺、N-烷基取代的甲基丙烯酰胺、N-丙二烯基邻苯二甲酰亚胺、N-异丙基丙烯酰胺、N-异丙基酰胺、N-异丙基丁-2，3-二烯酰胺、N-异丙基甲基丙烯酰胺、N-乙基丙烯酰胺、N-乙基甲基丙烯酰胺、N-乙氧基乙基丙烯酰胺、N-乙氧基乙基酰胺、N-乙氧基乙基甲基丙烯酰胺、N-环丙基丙烯酰胺、N-环丙基酰胺、N-环丙基甲基丙烯酰胺、N-四氢糠基丙烯酰胺、N-四氢糠基甲基丙烯酰胺、N-生物素-N′-甲基丙烯酰三亚甲基酰胺、N-乙烯基丙烯酰胺、N-乙烯基烷基丙烯酰胺、N-乙烯基甲基丙烯酰胺、N-丙基丙烯酰胺、N-甲基丙烯酰基哌啶、N-或N,N-二烷基取代的甲基丙烯酰胺衍生物、s-丁基丙烯酰胺、t-丁基丙烯酰胺、丙烯酰基甘氨酰胺、丙烯酰基肌氨酸酰胺、丙烯酰基哌啶甲酰胺、丙烯酰基甲基尿嘧啶、乙酰基丙烯酰胺、乙基异丙基丙烯酰胺、乙二醇/丙二醇共聚物、乙二醇烯丙二烯基甲基醚、氧乙烯丙烯酸酯衍生物、氧乙烯脱水山梨糖醇月桂酸酯、氧乙烯甲基丙烯酸酯衍生物、氧乙烯月桂胺、侧链中具有低聚乙二醇的丙烯酸酯、二异丙基丙烯酰胺、二乙基丙烯酰胺、二乙基氨基丙烯酸酯、二乙基氨基甲基丙烯酸酯、二乙二醇丙二烯基甲基醚、二丁基丙烯酰胺、二丙基丙烯酰胺、二甲基丙烯酰胺、二甲基氨基丙烯酰胺、二甲基氨基丙烯酸酯、二甲胺基丙基丙烯酰胺、二甲基氨基丙基甲基丙烯酰胺、二甲基氨基甲基丙烯酰胺、二甲基氨基甲基丙烯酸酯、钠N,N-二硫代氨基甲酸、六(N,N-二硫代氨基甲酰基甲基)苯、六(溴甲基)苯、甲基丙烯酰胺/N-乙酰基丙烯酰胺共聚物、以及其钠、镁、钾、铝、锌、钙、三乙醇胺的盐及其衍生物
(pH刺激响应物质)
葡糖胺、壳聚糖、2-乙氧基乙基乙烯基醚、N-烷基丙烯酰胺/聚丙烯酸、N-乙烯基烷基丙烯酰胺、4-(2-乙烯基氧基乙氧基)苯甲酸、6-(2-乙烯基氧基乙氧基)己酸、6-(乙烯氧基)己酸、异丁基乙烯基醚及其碱金属盐及其衍生物、以及钠、镁、钾、铝、锌、钙、三乙醇胺的盐及其衍生物
(光刺激响应物质)
N-烷基丙烯酰胺、n-(4-苯基偶氮苯基)丙烯酰胺、6-[4-(4-吡啶偶氮)苯氧基]六甲基丙烯酸酯、N-乙烯基烷基丙烯酰胺、4-[2-(乙烯氧基)乙氧基]偶氮苯、2-(2-乙氧基)乙氧基乙基乙烯基醚、以及钠、镁、钾、铝、锌、钙、三乙醇胺的盐及其衍生物
22.根据权利要求1所述的细胞递送用载体，其中，乳化稳定剂为选自表6中的多元醇、合成抗氧化剂、紫外线吸收剂、防腐剂中的一种或多种的成分。
[表6]
(多元醇)
乙二醇、二甘醇、聚乙二醇、丙二醇、聚丙二醇、丙三醇、二甘油、聚丙三醇、1,3-丁二醇、三乙二醇、二丙二醇、3-甲基-1,3-丁二醇、1,2-戊二醇、1,4-戊二醇1,5-戊二醇、2,4-戊二醇、2-甲基-2,4-戊二醇、3-甲基-1,5-戊二醇、1,2-己二醇、1,6-己二醇、丙三醇、二甘油、三甘油、聚丙三醇、甲基丁二醇、丁二醇、异戊二醇、聚乙二醇、戊二醇、己二醇、丙二醇、二丙二醇、聚丙二醇、乙二醇、二甘醇、新戊二醇、聚乙二醇、山梨醇、木糖醇、吡咯烷酮羧酸钠、透明质酸、卡拉胶、海藻酸、琼脂、褐藻素、果胶、刺槐豆胶、黄原胶、黄蓍胶、瓜尔胶、羧甲基纤维素、羟乙基纤维素、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、羧基乙烯聚合物、丙烯酸/甲基丙烯酸共聚物、聚谷氨酸、海藻酸钠、卡拉胶、琼脂、红藻胶、瓜尔胶、榅桲籽、魔芋甘露聚糖、罗望子胶、塔拉胶、糊精、淀粉、刺槐豆胶、阿拉伯胶、印度树胶、刺梧桐胶、黄蓍胶、阿拉伯半乳聚糖、果胶、桲果胶、壳聚糖、淀粉、凝胶多糖、黄原胶、结冷胶、环糊精、葡聚糖、普鲁兰多糖、微晶纤维素、甲基纤维素、乙基纤维素、羟乙基纤维素、羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、羧甲基纤维素、羧基淀粉、阳离子纤维素、淀粉磷酸酯、阳离子瓜尔胶、羧甲基/羟丙基瓜尔胶、羟丙基瓜尔胶、白蛋白、酪蛋白、明胶、聚丙烯酸钠、聚丙烯酸酰胺、羧基乙烯聚合物、聚乙烯亚胺、高聚合聚乙二醇、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙烯基醚、聚丙烯酰胺、丙烯酸共聚物、甲基丙烯酸共聚物、马来酸共聚物、乙烯基吡啶共聚物、乙烯/丙烯酸共聚物、乙烯基吡咯烷酮系聚合物、乙烯醇/乙烯基吡咯烷酮共聚物、氮取代的丙烯酰胺系聚合物、氨基改性的有机硅、阳离子聚合物、二甲基丙烯酰铵系聚合物、丙烯酸系阴离子聚合物、甲基丙烯酸系阴离子聚合物、改性有机硅、丙烯酸甲基丙烯酸烷基酯(C10-30)共聚物、聚氧乙烯/聚氧丙烯共聚物
(合成抗氧化剂)
丁基羟基苯甲醚、丁基羟基甲苯、没食子酸丙酯、异抗坏血酸、异抗坏血酸钠、对羟基苯甲醚、没食子酸辛酯
(紫外线吸收剂)
对氨基苯甲酸、对氨基苯甲酸乙酯、对氨基苯甲酸甘油酯、对二甲基氨基苯甲酸戊酯、对二甲基氨基苯甲酸2-乙基己酯等对氨基苯甲酸衍生物、肉桂酸苄酯、二对甲氧基肉桂酸-2-乙基己酸甘油酯、2，4-二异丙基肉桂酸甲酯、2,4-二异丙基肉桂酸酯、对甲氧基肉桂酸钾、对甲氧基肉桂酸钠、对甲氧基肉桂酸异丙酯、对甲氧基肉桂酸2-乙基己酯、对甲氧基肉桂酸2-乙氧基乙酯、对乙氧基肉桂酸乙酯等肉桂酸衍生物，尿刊酸、尿刊酸乙酯等尿刊酸衍生物、2,4-二羟基二苯甲酮、2,2',4,4'-四羟基二苯甲酮、2-羟基-4-甲氧基-5-磺酸二苯甲酮、2-羟基-4-甲氧基二苯甲酮-5-磺酸、2-羟基-4-甲氧基二苯甲酮、2,2'-二羟基-4,4'-二甲氧基二苯甲酮、2,2'-二羟基-4,4'-二甲氧基-5-磺酸二苯甲酮钠等二苯甲酮衍生物、水杨酸乙二醇、水杨酸-2-乙基己酯、水杨酸苯酯、水杨酸苄酯、水杨酸对叔丁基苯酯、胡莫柳酯、水杨酸-3,3,5-三甲基环己酯等水杨酸衍生物、2-(2'-羟基-5'-甲氧基苯基)苯并三氮唑、4-叔丁基-4'-甲氧基苯甲酰甲烷
(防腐剂)
防腐剂：苯甲酸、苯甲酸钠、十一碳烯酸、水杨酸、山梨酸、山梨酸钾、脱氢乙酸、脱氢乙酸钠、对羟基苯甲酸异丁酯、对羟基苯甲酸异丙酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丁酯、对羟基苯甲酸丙酯、对羟基苯甲酸苄酯、对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸甲酯钠、苯氧乙醇、光敏剂101、光敏剂201、光敏剂401、萝卜提取物、葡萄籽提取物
23.根据权利要求1所述的细胞递送用载体，其中，包含选自表7的物质组中的一种或多种化学物质被共价键化学修饰的刺激响应聚合物。
[表7]
丙烯酰胺、丙烯酸类树脂、丙烯酸、丙烯酸的金属盐、氨基、精氨酸、烷基丙烯酸酯、尿嘧啶丙烯酸酯、乙二醇、乙基丙烯酰胺、乙醇、乙基丁基丙烯酰胺、环氧乙烷、乙二醇、乙二醇衍生物、氧化烯、氧乙烯、氧四亚甲基、氧丁烯、氧丙烯、氧己烯、鸟氨酸、凝胶多糖、侧链上具有阳离子性基团的聚氨基酸、丙三醇、苯乙烯、纤维素、硫酸葡聚糖、四亚甲基二醇、色氨酸、透明质酸、生物素丙烯酸酯、组氨酸、丙烯酸羟乙酯、甲基丙烯酸羟乙酯、羟丙基纤维素、羟基、乙烯基烷基醚、乙烯基醇、乙烯基醇部分乙酰化物、乙烯基醚衍生物、乙烯基吡咯烷酮、乙烯基甲醚、丁基丙烯酰胺、丁二醇、丙醇、丙基丁基丙烯酰胺、丙二醇、己基丙烯酰胺、己二醇、肝素、戊基丙烯酰胺、聚丙烯酸、聚精氨酸、聚海藻酸、聚乙烯亚胺、聚氧乙烯、聚氧基亚丙基、聚鸟氨酸、聚苯乙烯磺酸、聚色氨酸、聚组氨酸、聚甲基丙烯酸、聚赖氨酸、聚磷酸、甲基丙烯酰胺、甲基丙烯酰胺化合物、甲基丙烯酸肌氨酸酰胺、甲基丙烯酸、甲基丙烯酸酯、甲基丙烯酸的金属盐、甲基二元醇基、甲基、甲基丙烯酰胺、甲醇基、甲基异丙基丙烯酰胺、甲基乙基丙烯酰胺、甲基丙基丙烯酰胺、甲氧基丙烯酸乙酯、甲氧基基丙烯酸乙酯、甲氧基丙烯酸甲基丙烯酸酯、赖氨酸、核糖腺苷酸、核酸、硫酸化多糖类
24.根据权利要求1所述的细胞递送用载体，其中，有效成分包含选自表8的一种或多种物质。
[表8]
吖啶、抗坏血酸、抗坏血酸钙、抗坏血酸钠、抗坏血酸葡糖苷、抗坏血酸二硬脂酸、抗坏血酸二棕榈酸、抗坏血酸硬脂酸、抗坏血酸棕榈酸、抗坏血酸磷酸镁、抗坏血酸磷酸镁锌、抗坏血酸磷酸钠、抗坏血酸磷酸钠棕榈酸酯、虾青素、乙酰半胱氨酸、氨基烷基苯酮、氨基乙酰丙酸、花药黄质、花色苷、异黄酮、铱、内含肽、尿卟啉原、尿卟啉、曙红Y、鞣花酸、异抗坏血酸、异抗坏血酸、儿茶素、类胡萝卜素、胡萝卜素、角黄素、叶黄素、香豆素、姜黄素、谷胱甘肽、谷氨酰半胱氨酸、绿原酸、叶绿素、粪卟啉、粪卟啉原、矢车菊色素、氰钴胺、半胱氨酸、细胞色素C、二氢硫辛酸、芪、玉米黄质、半醌、硫醇蛋白、硫壳聚糖、四环素、四苯基卟啉、脱氢抗坏血酸、花翠素、生育三烯酚、生育酚、红紫素、氢醌、紫黄质、维生素A、羟甲基胆色烷、高铁血红素、岩藻黄质、酞菁、富勒烯、原花青素、原矢车菊色素、原卟啉原、原卟啉、维生素原A、芍药色素、矮牵牛素、血红素、血红素、血红素、血红蛋白、血色素、天竺葵色素、维替泊芬、苯醌、二苯甲酮、卟啉、胆色素原、胆色素原、原卟啉、卟啉、镁、锦葵色素、金属硫蛋白、金属蛋白酶、亚甲基蓝、泛素、泛醇、泛醌、泛半醌、木脂素、番茄红素、核黄素、芦丁、叶黄素、红荧烯、视黄醛、视黄酸、视黄醇、玫瑰红、锌、铁、铜、α-羟基苯乙酮、α-硫辛酸、α-胡萝卜素、α-生育三烯酚、α-生育酚、β-硫辛酸、β-胡萝卜素、β-生育三烯酚、β-生育酚、γ-胡萝卜素、γ-生育三烯酚、γ-生育酚、δ-生育三烯酚、δ-生育酚盐、δ-胡萝卜素、及其钠、镁、钾、铝、锌、钙、三乙醇胺的盐及其衍生物
25.根据权利要求1所述的细胞递送用载体，其中，细胞递送用载体的用途是选自药品、准药品、化妆品、补充剂、兽药和杂货中的一种。
26.根据权利要求1所述的细胞递送用载体，其中，细胞递送用载体制剂的剂型是选自以下的一种或多种：外用剂、口腔剂、栓剂、口服剂、健康饮料、泥敷剂、面膜剂、喷雾剂、注射剂、调味剂、液剂、软膏剂、气雾剂、粉末、压制剂、膏剂、外用喷洒剂、散剂、颗粒剂、片剂、软胶囊剂、丸剂、板状剂型、含片剂、糊剂、固体剂、湿润剂、胶粘剂。
27.根据权利要求1所述的细胞递送用载体，其中，细胞递送用载体的功效或效果是选自表9的一种或多种。
[表9]
清洁皮肤、抑制痱子、冻伤、皲裂、痤疮、皮疹，以及防止皮肤粗糙。具有对抗尿布(尿不湿)、皮疹、疮和胯部疮的效果。具有对干性皮肤、跌打损伤、肩膀僵硬、皱纹、神经痛、湿疹、冻疮、痔疮、手脚冰凉、腰痛、风湿、疲劳恢复、皮肤开裂、皲裂、产前产后的手脚冰凉、粉刺的改善效果。防止瘙痒。防止狐臭(腋臭)、抑制汗臭、止汗。具有生发，防止头发稀疏、脱发、促进头发生长、抑制头皮屑、病后或产后脱发，护发的效果。抑制口臭、改善情绪焦虑。美白牙齿、净化口腔、清新口气、预防牙周炎(牙槽脓肿)、预防牙龈炎、预防牙石沉积、预防龋齿,预防龋齿的发生和发展、防止口臭、去除烟焦油。脱毛效果。染发、脱色、脱染的效果。对晒伤/雪花斑、瑕疵、皱纹、细纹、法令纹、雀斑、皮肤粗糙、干燥的改善。紧致肌肤。清洁皮肤。调理皮肤。皮肤的清洁、杀菌、消毒。防止体臭、汗臭和粉刺。保持皮肤健康。滋润肌肤。清洁皮肤。改善油性肤质。保护皮肤、防止干燥。防止头发和头皮汗臭、清洁头发和头皮、保持健康、软化皮肤、防止头发分裂、断发和分叉。补充并保持头发的水分和油脂含量
28.根据权利要求15所述的细胞递送用载体，其为效果发挥温度为45℃至70℃的温度刺激响应聚合物。
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