CN114980911A

CN114980911A - 含有两歧双歧杆菌的用于增强或改善免疫系统的组合物

Info

Publication number: CN114980911A
Application number: CN202080088488.1A
Authority: CN
Inventors: 朴汉洙; 孙珍英; 金栗何
Original assignee: South Korea Inno Bio Co ltd; Gwangju Institute of Science and Technology
Current assignee: South Korea Inno Bio Co ltd; Gwangju Institute of Science and Technology
Priority date: 2019-10-18
Filing date: 2020-10-16
Publication date: 2022-08-30
Also published as: WO2021075928A1; EP4046645A1; KR20210046498A; JP2022552721A; JP7408070B2; US20220387522A1; KR102485269B1

Abstract

本发明涉及一种用于增强或提高免疫力的组合物，该组合物含有两歧双歧杆菌。此外，该组合物可用于预防、治疗或改善由免疫缺陷、免疫抑制或免疫系统损伤引起的免疫疾病。该组合物可以作为食品组合物或药物组合物提供，并且食品组合物可以以多种形式提供，如益生菌产品、健康功能补充剂、动物饲料等。

Description

含有两歧双歧杆菌的用于增强或改善免疫系统的组合物

技术领域

本发明涉及一种增强或改善免疫系统的组合物，包括两歧双歧杆菌。根据本发明的组合物可以作为食品组合物或药物组合物提供。

背景技术

世界卫生组织(WHO)和联合国粮食及农业组织(FAO)将益生菌定义为“活性微生物，当施用足够的量时，会给宿主带来健康益处”，韩国食品和药物管理局(KFDA)将其定义为“对健康有益作用的活性微生物”。通常用作此类益生菌的例子包括乳酸杆菌、双歧杆菌等。

双歧杆菌属是一种革兰氏阳性厌氧菌，存在于包括人类在内的哺乳动物的胃肠道、阴道或口腔中，是构成哺乳动物胃肠道微生物群的主要细菌之一。属于双歧杆菌属的种类包括，例如，放线菌落双歧杆菌(B.actinocoloniiforme)、青春双歧杆菌(B.adolescentis)、角形双歧杆菌(B.angulatum)、动物双歧杆菌(B.animalis)、水开菲尔双歧杆菌(B.aquikefiri)、星状双歧杆菌(B.asteroides)、双乳双歧杆菌(B.biavatii)、两歧双歧杆菌(B.bifidum)、波希米亚双歧杆菌(B.bohemicum)、熊蜂双歧杆菌(B.bombi)、牛双歧杆菌(B.boum)、短双歧杆菌(B.breve)、狨双歧杆菌(B.callitrichos)、链状双歧杆菌(B.catenulatum)、豚双歧杆菌(B.choerinum)、普通双歧杆菌(B.commune)和棒状双歧杆菌(B.coryneforme)。此外，每个种类都存在大量多样亚种和菌株，并且仍在发现新的亚种和菌株。

这些细菌在不同种类之间具有非常不同的特征。此外，即使在同一种类中，每个亚种和菌株的效应及其水平也不同。

例如，韩国专利No.10-1970148公开了一种具有优异耐酸性和抗胆汁性的新型乳酸菌菌株，并且实验表明，属于乳酸杆菌的每个菌株的肠道黏附能力水平是不同的。作为另一示例，韩国专利No.10-1589465公开了一种用于促进生长的新型短双歧杆菌菌株，并且实验表明，对于属于短双歧杆菌物种的每个菌株，其肠道粘附能力等特征的水平是不同的。

此外，最近人们对免疫力的兴趣日益浓厚。特别是由于环境污染、缺乏运动、饮食改变等原因，人类对能表现出免疫调节作用的物质的需求持续不断。乳酸菌就是这样的物质之一，并且许多的研究已经在进行了。

发明内容

发明人对能表现出显著免疫增强或改善效果的新物质进行了多种研究。结果，通过实验证明，两歧双歧杆菌，特别是两歧双歧杆菌MG731，表现出了非常优异的免疫增强效果，并完成了本发明。

本发明一方面提供了一种用于增强或改善免疫力的组合物，包括两歧双歧杆菌。

优选地，所述两歧双歧杆菌是两歧双歧杆菌MG731。

在本发明中，“两歧双歧杆菌(Bifidobacterium bifidum)”可以与“两歧双歧杆菌(B.bifidum)”互换使用。

如本文所用，术语“两歧双歧杆菌MG731”是指两歧双歧杆菌MG731菌株。菌株被解释为包括菌株本身、菌株的培养物、菌株的裂解物、菌株的提取物以及通过裂解该菌株获得的细胞质部分。此外，该菌株被解释为包括活细胞和死细胞。

MG731是Mediogen于2018年1月4日保藏在韩国生物科学与生物技术研究所(KRIBB)的韩国典型菌种保藏中心(KCTC)的两歧双歧杆菌菌株，保藏号为KCTC13452BP，其16S rRNA基因的核苷酸序列表示为SEQ ID NO.1。

当根据本发明的组合物被施用于需要增强或提高免疫力的受试者时，可以增加IL-7、IL-15和INF-γ中的一种或多种的表达或活性，并且可以降低TGF-β的表达或活性。因此，根据本发明的组合物可以表现出优异的免疫增强作用，例如可用于需要预防、治疗或改善免疫疾病的受试者。

如本文所用，术语“免疫疾病”是指由免疫缺陷、免疫抑制或免疫系统损伤引起的疾病，例如可以是传染病或炎症性疾病，但不限于此。

如本文所用，术语“受试者”包括人类或任何非人类动物。非人类动物可以是，例如，脊椎动物，如灵长类动物、狗、牛、马、猪、鸡、鸭、鹅、如老鼠、大鼠、豚鼠的啮齿动物等。术语“受试者”在本文中可与“个体”或“患者”互换使用。

如本文所用，术语“免疫”可与“免疫系统”、“免疫功能”或“免疫活性”互换使用。

根据本发明的另一方面，本发明的组合物可以是食品组合物。

所述食品可以是保健功能食品或膳食补充剂。如本文所用，术语“保健功能食品”是指使用对人体有用的原料或成分，以片剂、胶囊、粉末、颗粒、液体、丸剂等形式制造和加工的食品。在本文中，“功能”或“功能性”是指获得对健康目的有用的效果，例如调节人体结构和功能的营养物或生理作用。

根据本发明的食品组合物中包含的两歧双歧杆菌MG731的有效量可以根据使用目的例如预防、改善或治疗性治疗(therapeutic treatment)而适当地确定。例如，两歧双歧杆菌MG731在食品组合物中的含量可以是0.001至20重量百分比(wt％)、0.001至15wt％或0.001至10wt％的。在保健饮品的情况下，例如，基于100毫升，可以包含0.01至2g或0.02至2g的量。然而，在为控制健康而长期摄入的情况下，有可能以低于上述范围的量摄取。在制备食品组合物的过程中，可以根据需要适当地增加或减少两歧双歧杆菌MG731。

食品组合物可以是任何一种制剂，例如药丸、片剂、颗粒剂、粉末、胶囊、液体和溶液，但不限于此。

食品的类型不受限制。例如，根据本发明的食品组合物可以商品化或配制成酸奶、乳制品、肉类、香肠、面包、巧克力、糖果、零食、甜食、比萨饼、面条、口香糖、冰淇淋、汤、饮料、茶、饮品、酒精饮料、复合维生素等，但不限于此。它可能包括所有食品。

本发明的食品组合物可以像常规食品一样含有各种甜味剂或天然碳水化合物作为附加成分，并且如果它不抑制或抵消根据本发明的活性成分的作用，则对类型没有限制。天然碳水化合物例如是单糖如葡萄糖和果糖，双糖如麦芽糖和蔗糖，多糖如糊精和环糊精，以及糖醇如木糖醇、山梨糖醇和赤藓糖醇。例如，甜味剂可以是，天然甜味剂如索马甜(thaumatin)或甜叶菊提取物，或合成甜味剂如糖精或阿斯巴甜。

当本发明的食品组合物是饮料组合物时，如果液体组分含有两歧双歧杆菌MG731作为活性成分，则对液体组分没有限制。像传统饮料一样，它可以含有各种调味剂或天然碳水化合物作为附加成分。

当本发明所述食品组合物是动物饲料组合物时，如果含有两歧双歧杆菌MG731作为活性成分，则对动物饲料没有限制。动物饲料可以以食品、零食或膳食补充剂的形式提供，以增强或改善动物的免疫力，或预防、治疗或改善由免疫缺陷、免疫抑制或免疫系统损伤引起的疾病。术语“动物”是指任何非人类动物。例如，非人类动物可以是脊椎动物，例如灵长类动物、狗、牛、马、猪、鸡、鸭、鹅、啮齿动物，如老鼠、大鼠、豚鼠等。

根据本发明的另一方面，本发明的组合物可以是药物组合物。

在根据本发明的药物组合物中，除非另有说明，否则每个术语与上述食品组合物中描述的含义相同。

所述药物组合物可以以有效量施用于需要它们的受试者，以增强或改善他/她的免疫力，或预防、治疗或改善由免疫缺陷、免疫抑制或免疫系统损伤引起的疾病或症状。

如本文所用，术语“治疗(treatment)”或“处理(treating)”是指通过施用根据本发明的组合物来增强或改善免疫系统、或改善或治愈免疫相关疾病的任何行为。此外，本文使用的术语“预防(prevention)”或“防止(preventing)”是指通过施用根据本发明的组合物来抑制或延迟免疫力下降、免疫相关疾病的发生或其症状发展的任何行为。此外，本文使用的术语“改善(improvement)”或“提高(improving)”是指通过施用根据本发明的组合物来增强或改善免疫系统、或维持免疫水平或防止免疫减弱，或至少减少，改善或有益于免疫相关疾病的症状的任何行为。

有效量可以是“治疗有效量”或“预防有效量”。如本文所用，术语“治疗有效量”是指，当药物或治疗剂单独使用或与其它治疗剂联合使用时，能够具有减弱免疫相关疾病严重程度、增加免疫相关疾病无症状期的频率和持续时间、或预防由于患有免疫相关疾病而造成的损害或受损的任何量。此外，如本文所用，术语“预防有效量”是指能够预防、抑制或延缓患免疫力下降的风险或免疫相关疾病发生或复发的任何量。有效量的水平可以由本领域技术人员如医生根据包括严重程度、年龄、性别、药物活性、药物敏感性、给药时间、给药途径和排泄速率、治疗期、并行药物以及医学领域公知的其它因素确定。

如本文所用，术语“给药(administration)”或“施用(administering)”是指使用本领域技术人员已知的任何各种方法和给药系统将组合物物理引入给受试者。例如，本发明药物组合物的给药途径包括，口服途径，或通过静脉、肌肉内、皮下、腹膜内、脊柱或其它非肠道途径给药的途径，例如注射或输注，但不限于此。

本发明的组合物的给药可以是，例如，一次、多次、或在一个或多个延长的时间段内进行。例如，它可以以0.1至100mg/kg的量每天给药一次至多次，或几天至几个月间隔给药。此外，给药频率可以根据给药途径、疾病严重程度、性别、体重、年龄、剂量等而增加或减少。

本发明的药物组合物还可以进一步包括在制备过程中常用的合适的载体、赋形剂或稀释剂。可包含在组合物中的载体、赋形剂或稀释剂包括，例如，乳糖、葡萄糖、蔗糖、山梨糖醇、甘露醇、木糖醇、赤藓糖醇、麦芽糖醇、淀粉、阿拉伯胶、藻酸盐、明胶、磷酸钙、硅酸钙、纤维素、甲基纤维素、微晶纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、水、羟基苯甲酸甲酯、羟基苯甲酸丙酯、滑石、硬脂酸镁和矿物油，但不限于此。

所述组合物如食品组合物或药物组合物可与其它物质或成分组合施用。在这种情况下，本发明的组合物和其它物质或成分可以依次、同时或单独给药。其他的物质或成分可以不受限制地包括在内，只要它们不抑制或抵消两歧双歧杆菌MG731的功效。

根据本发明，包含两歧双歧杆菌MG731的组合物可以与其他物质或组分同时、单独或依次给药。例如，两歧双歧杆菌MG731和免疫增强组分可以作为一种制剂同时给药，或者可以作为单独的制剂同时或依次给药。

对于同时、单独或依次给药，本发明的组合物含有的两歧双歧杆菌MG731和其它物质或组分可以在每个容器中单独配制，或者可以在同一容器中一起配制。此外，本发明的组合物含有的两歧双歧杆菌MG731和其他的物质或组分的有效量、给药时间、给药间隔、给药途径等可以彼此相同或不同。

根据本发明的另一方面，本发明提供了一种增强或改善受试者免疫力的方法，包括向有需要增强或改善免疫力的受试者施用两歧双歧杆菌。

根据本发明的另一方面，它提供了一种预防、治疗或改善由受试者免疫缺陷、免疫抑制或免疫系统受损引起的疾病的方法，包括向受试者施用两歧双歧杆菌。受试者可以是，例如，患有免疫疾病或具有免疫疾病的高风险。

在本发明所述的方法中，除非另有说明，否则每个术语与上述关于组合物中描述的含义相同。

优选地，所述两歧双歧杆菌是两歧双歧杆菌MG731。

在本发明所述的方法中，两歧双歧杆菌可以与其它免疫疗法或免疫增强剂同时、依次或单独地施用于受试者。“同时”给药是指两歧双歧杆菌MG731和另一种物质在一种制剂中同时施用，或者两歧双歧杆菌MG731和另一种物质在不同的制剂中同时施用，在这里其给药途径可以彼此不同。“依次”给药是指相对连续地施用两歧双歧杆菌MG731和其他物质，允许给药间隔最小化。“单独”给药是指以预定的时间间隔施用两歧双歧杆菌MG731和其他物质。两歧双歧杆菌MG731和其他物质的给药方法可由医生或本领域专家根据受试者的治疗效果或副作用进行适当选择。

根据本发明的组合物可以增加IL-7、IL-15和INF-γ中的一种或多种的表达或活性，并且降低TGF-β的表达或活性。因此，它可以表现出显著优异的免疫增强效果。

因此，本发明的组合物可以作为食品组合物或药物组合物提供，并且所述食品组合物可以以各种形式提供，例如益生菌产品、健康功能补充剂、动物饲料等。

此外，本发明的组合物可用于预防、治疗或改善由免疫缺陷、免疫抑制或免疫系统损伤引起的免疫疾病。

附图说明

图1是显示分别用两歧双歧杆菌MG731处理或未处理的THP-1细胞中IL-7、IL-15、IFN-γ和TGF-β的相对表达水平的图。

图2是显示分别用两歧双歧杆菌MG731处理或未处理的Jurkat细胞中IL-7、IL-15、IFN-γ和TGF-β的相对表达水平的图。

图3是显示分别用两歧双歧杆菌MG731处理或未处理的人类单核细胞中IL-7、IL-15、IFN-γ和TGF-β的相对表达水平的图。

具体实施方式

在下文中，将通过实施例对本发明进行更详细地描述。然而，这些实施例仅用于说明目的，本发明的范围并不局限于此。

实施例1两歧双歧杆菌的制备

在BL培养基中将MG731菌株(保藏号No.KCTC13452BP)进行两次传代培养。然后，在RPMI 90％BL 10％培养液中培养24小时。收集MG731菌株并测量O.D 600处的吸光度后，制备菌株稀释剂使其最终浓度为1×10⁷CFU/ml。

实施例2免疫调节效果的评估

MG731在BL培养基中于37℃厌氧条件下进行培养。将测试中使用的人类血液放入涂有EDTA(或肝素)的10mL试管中，并与PBS缓冲液以1：1的比例混合。然后，将淋巴细胞分离液(Ficoll-Paque PLUS)置于50mL的试管中，并加入血液样本。离心后，收获PBMCs(外周血单核细胞)。

使用人类单核细胞分离试剂盒从上一步收集的PBMCs中分离出人类单核细胞。Jurkat细胞系是人类T细胞，在37℃和5％CO₂条件下，使用含有10％胎牛血清(FBS)的RPMI1640培养基在75T烧瓶中培养。此外，THP-1细胞系(人类单核细胞)在37℃和5％CO₂条件下，使用含有10％FBS和0.1％2-巯基乙醇的RPMI 1640培养基在75T烧瓶中培养。

分别对THP-1细胞、Jurkat细胞和人类单核细胞进行计数，然后在不含抗生素的细胞培养液中稀释，并接种在transwell的下层孔中，使其为1×10⁶细胞/孔/0.8mL。MG731在相同的细胞培养液中稀释，并以1×10⁷CFU/孔/0.2mL接种在插入孔中。

在培养24小时后，取出含有两歧双歧杆菌MG731菌株的插入孔。然后，用Trizol提取每个孔中细胞的RNA，并合成cDNA。

之后，使用cDNA通过实时荧光定量PCR测量IL-7、IL-15、IFN-γ和TGF-β的表达水平。

IL-7和IL-15是已知的在早期免疫反应中诱导T细胞增殖、分化和存活的因子。此外，IFN-γ是由细胞毒性T细胞分泌的免疫因子，被认为是增强免疫功能的代表性细胞因子。另一方面，TGF-β被认为是具有免疫抑制功能的因子之一。因此，增强IL-7、IL-15和IFN-γ的表达和/或抑制TGF-β的表达表明存在免疫增强作用。

实时PCR的引物序列如下表1所示。

表1

如图1所示，显示了在用两歧双歧杆菌MG731处理和未经处理的THP-1细胞中的IL-7、IL-15、IFN-γ和TGF-β的相对表达水平，与对照组相比，IL-7、IL-15和INF-γ的表达水平分别增加了1.44倍、1.68倍和4.19倍。相反，TGF-β的表达水平降低了0.88倍。

此外，如图2所示，显示了在用两歧双歧杆菌MG731处理和未经处理的Jurkat细胞中的IL-7、IL-15、IFN-γ和TGF-β的相对表达水平，与对照组相比，IL-15和INF-γ的表达水平分别增加了9.61倍和2.01倍。相反，TGF-β的表达水平降低了0.7倍。

此外，如图3所示，显示了在用两歧双歧杆菌MG731处理和未经处理的人类单核细胞中的IL-7、IL-15、IFN-γ和TGF-β相对表达水平，与对照组相比，IL-7的表达水平增加了7.55倍，而TGF-β的表达水平几乎没有出现。

这说明在所有的THP-1、Jurkat和人类单核细胞这些人体免疫细胞中，两歧双歧杆菌MG731增加了IL-7和IL-15的表达，从而激活了T细胞的增殖和分化，IFN-γ的表达增加而TGF-β的表达降低，从而增强或改善了免疫功能。

序列表

<110> 韩国亿诺生物有限公司

光州科学技术院

<120> 含有两歧双歧杆菌的用于增强或改善免疫系统的组合物

<130> 26323KSR

<150> KR 10-2019-0130275

<151> 2019-10-18

<160> 1

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 1447

<212> RNA

<213> Bifidobacterium bifidum

<220>

<221> rRNA

<222> (1)..(1447)

<223> MG731 16S rRNA

<400> 1

agacgctggc ggcgtgctta acacatgcaa gtcgaacggg atccatcggg ctttgcttgg 60

tggtgagagt ggcgaacggg tgagtaatgc gtgaccgacc tgccccatgc tccggaatag 120

ctcctggaaa cgggtggtaa tgccggatgt tccacatgat cgcatgtgat tgtgggaaag 180

attctatcgg cgtgggatgg ggtcgcgtcc tatcagcttg ttggtgaggt aacggctcac 240

caaggcttcg acgggtagcc ggcctgagag ggcgaccggc cacattggga ctgagatacg 300

gcccagactc ctacgggagg cagcagtggg gaatattgca caatgggcgc aagcctgatg 360

cagcgacgcc gcgtgaggga tggaggcctt cgggttgtaa acctcttttg tttgggagca 420

agccttcggg tgagtgtacc tttcgaataa gcgccggcta actacgtgcc agcagccgcg 480

gtaatacgta gggcgcaagc gttatccgga tttattgggc gtaaagggct cgtaggcggc 540

tcgtcgcgtc cggtgtgaaa gtccatcgct taacggtgga tctgcgccgg gtacgggcgg 600

gctggagtgc ggtaggggag actggaattc ccggtgtaac ggtggaatgt gtagatatcg 660

ggaagaacac cgatggcgaa ggcaggtctc tgggccgtca ctgacgctga ggagcgaaag 720

cgtggggagc gaacaggatt agataccctg gtagtccacg ccgtaaacgg tggacgctgg 780

atgtggggca cgttccacgt gttccgtgtc ggagctaacg cgttaagcgt cccgcctggg 840

gagtacggcc gcaaggctaa aactcaaaga aattgacggg ggcccgcaca agcggcggag 900

catgcggatt aattcgatgc aacgcgaaga accttacctg ggcttgacat gttcccgacg 960

acgccagaga tggcgtttcc cttcggggcg ggttcacagg tggtgcatgg tcgtcgtcag 1020

ctcgtgtcgt gagatgttgg gttaagtccc gcaacgagcg caaccctcgc cccgtgttgc 1080

cagcacgtta tggtgggaac tcacggggga ccgccggggt taactcggag gaaggtgggg 1140

atgacgtcag atcatcatgc cccttacgtc cagggcttca cgcatgctac aatggccggt 1200

acagcgggat gcgacatggc gacatggagc ggatccctga aaaccggtct cagttcggat 1260

cggagcctgc aacccggctc cgtgaaggcg gagtcgctag taatcgcgga tcagcaacgc 1320

cgcggtgaat gcgttcccgg gccttgtaca caccgcccgt caagtcatga aagtgggcag 1380

cacccgaagc cggtggccta accccttgtg ggatggagcc gtctaaggtg aggctcgtga 1440

ttgggac 1447

PCT/RO/134表

Claims

1.一种用于增强或提高免疫力的组合物，其特征在于，所述组合物含有两歧双歧杆菌MG731。

2.根据权利要求1所述的用于增强或提高免疫力的组合物，其中，所述两歧双歧杆菌MG731是菌株、所述菌株的培养物、所述菌株的裂解物或所述菌株的提取物。

3.根据权利要求1所述的用于增强或提高免疫力的组合物，其中，所述组合物增强IL-7、IL-15和IFN-γ中一种或多种的表达或活性。

4.根据权利要求1所述的用于增强或提高免疫力的组合物，其中，所述组合物抑制TGF-β的表达或活性。

5.根据权利要求1所述的用于增强或提高免疫力的组合物，其中，所述组合物是食品组合物。

6.根据权利要求5所述的用于增强或提高免疫力的组合物，其中，所述组合物用于改善或预防免疫疾病。

7.根据权利要求1所述的用于增强或提高免疫力的组合物，其中，所述组合物是药物组合物。

8.根据权利要求7所述的用于增强或提高免疫力的组合物，其中，所述组合物用于治疗或预防免疫疾病。