CN114869879B - 一种具备活性氧和炎症双重抑制作用的小分子水凝胶及其制备方法 - Google Patents
一种具备活性氧和炎症双重抑制作用的小分子水凝胶及其制备方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN114869879B CN114869879B CN202210497463.8A CN202210497463A CN114869879B CN 114869879 B CN114869879 B CN 114869879B CN 202210497463 A CN202210497463 A CN 202210497463A CN 114869879 B CN114869879 B CN 114869879B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- fmoc
- reaction
- solution
- rhein
- hydrogel
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 239000000017 hydrogel Substances 0.000 title claims abstract description 47
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 25
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 title claims abstract description 25
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 title claims abstract description 25
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 title claims abstract description 17
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 title claims abstract description 17
- 230000000694 effects Effects 0.000 title claims abstract description 15
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 13
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 title claims abstract description 12
- 230000009977 dual effect Effects 0.000 title claims abstract description 9
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims abstract description 45
- WMBWREPUVVBILR-WIYYLYMNSA-N (-)-Epigallocatechin-3-o-gallate Chemical compound O([C@@H]1CC2=C(O)C=C(C=C2O[C@@H]1C=1C=C(O)C(O)=C(O)C=1)O)C(=O)C1=CC(O)=C(O)C(O)=C1 WMBWREPUVVBILR-WIYYLYMNSA-N 0.000 claims abstract description 26
- WMBWREPUVVBILR-UHFFFAOYSA-N GCG Natural products C=1C(O)=C(O)C(O)=CC=1C1OC2=CC(O)=CC(O)=C2CC1OC(=O)C1=CC(O)=C(O)C(O)=C1 WMBWREPUVVBILR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 26
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims abstract description 24
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims abstract description 22
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims abstract description 20
- RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N glutathione Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(=O)N[C@@H](CS)C(=O)NCC(O)=O RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N 0.000 claims abstract description 10
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims abstract description 9
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims abstract description 8
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims abstract description 6
- 108010024636 Glutathione Proteins 0.000 claims abstract description 4
- 230000009471 action Effects 0.000 claims abstract description 3
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 99
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 45
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 42
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-dimethylformamide Substances CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 40
- JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N N,N-Diisopropylethylamine (DIPEA) Chemical compound CCN(C(C)C)C(C)C JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 31
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 30
- 238000005406 washing Methods 0.000 claims description 30
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M Sodium bicarbonate Chemical compound [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 24
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 22
- 239000012295 chemical reaction liquid Substances 0.000 claims description 20
- 238000001035 drying Methods 0.000 claims description 19
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 18
- NQRYJNQNLNOLGT-UHFFFAOYSA-N Piperidine Chemical compound C1CCNCC1 NQRYJNQNLNOLGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 16
- 239000011347 resin Substances 0.000 claims description 15
- 229920005989 resin Polymers 0.000 claims description 15
- 238000005303 weighing Methods 0.000 claims description 15
- NGDIAZZSCVVCEW-UHFFFAOYSA-M sodium;butyl sulfate Chemical compound [Na+].CCCCOS([O-])(=O)=O NGDIAZZSCVVCEW-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 14
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 claims description 14
- 125000003088 (fluoren-9-ylmethoxy)carbonyl group Chemical group 0.000 claims description 13
- 238000007789 sealing Methods 0.000 claims description 13
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 claims description 12
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 12
- 238000005520 cutting process Methods 0.000 claims description 12
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 12
- 229910000030 sodium bicarbonate Inorganic materials 0.000 claims description 12
- 235000017557 sodium bicarbonate Nutrition 0.000 claims description 12
- 125000003963 dichloro group Chemical group Cl* 0.000 claims description 11
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 claims description 10
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 claims description 10
- 238000003825 pressing Methods 0.000 claims description 10
- 230000007017 scission Effects 0.000 claims description 10
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 claims description 9
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 claims description 9
- RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 1,4-Dioxane Chemical compound C1COCCO1 RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 claims description 8
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims description 8
- 229940014800 succinic anhydride Drugs 0.000 claims description 8
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 claims description 7
- 239000013067 intermediate product Substances 0.000 claims description 7
- 239000011259 mixed solution Substances 0.000 claims description 7
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 claims description 6
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L Sodium Carbonate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C([O-])=O CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 6
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 claims description 6
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 239000012043 crude product Substances 0.000 claims description 6
- 230000001376 precipitating effect Effects 0.000 claims description 6
- 239000000047 product Substances 0.000 claims description 6
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims description 6
- 238000010532 solid phase synthesis reaction Methods 0.000 claims description 6
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims description 6
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 claims description 6
- WMSUFWLPZLCIHP-UHFFFAOYSA-N (2,5-dioxopyrrolidin-1-yl) 9h-fluoren-9-ylmethyl carbonate Chemical compound C12=CC=CC=C2C2=CC=CC=C2C1COC(=O)ON1C(=O)CCC1=O WMSUFWLPZLCIHP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- NDKDFTQNXLHCGO-UHFFFAOYSA-N 2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)acetic acid Chemical compound C1=CC=C2C(COC(=O)NCC(=O)O)C3=CC=CC=C3C2=C1 NDKDFTQNXLHCGO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 claims description 5
- FODJWPHPWBKDON-IBGZPJMESA-N (2s)-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)-4-[(2-methylpropan-2-yl)oxy]-4-oxobutanoic acid Chemical compound C1=CC=C2C(COC(=O)N[C@@H](CC(=O)OC(C)(C)C)C(O)=O)C3=CC=CC=C3C2=C1 FODJWPHPWBKDON-IBGZPJMESA-N 0.000 claims description 4
- OTKXCALUHMPIGM-FQEVSTJZSA-N (2s)-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)-5-[(2-methylpropan-2-yl)oxy]-5-oxopentanoic acid Chemical compound C1=CC=C2C(COC(=O)N[C@@H](CCC(=O)OC(C)(C)C)C(O)=O)C3=CC=CC=C3C2=C1 OTKXCALUHMPIGM-FQEVSTJZSA-N 0.000 claims description 4
- HNICLNKVURBTKV-NDEPHWFRSA-N (2s)-5-[[amino-[(2,2,4,6,7-pentamethyl-3h-1-benzofuran-5-yl)sulfonylamino]methylidene]amino]-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)pentanoic acid Chemical compound C12=CC=CC=C2C2=CC=CC=C2C1COC(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCN=C(N)NS(=O)(=O)C1=C(C)C(C)=C2OC(C)(C)CC2=C1C HNICLNKVURBTKV-NDEPHWFRSA-N 0.000 claims description 4
- 239000002173 cutting fluid Substances 0.000 claims description 4
- BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L disodium hydrogen phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].OP([O-])([O-])=O BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 4
- 239000000499 gel Substances 0.000 claims description 4
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 claims description 4
- 229910000403 monosodium phosphate Inorganic materials 0.000 claims description 4
- 235000019799 monosodium phosphate Nutrition 0.000 claims description 4
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 claims description 4
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 claims description 4
- AJPJDKMHJJGVTQ-UHFFFAOYSA-M sodium dihydrogen phosphate Chemical compound [Na+].OP(O)([O-])=O AJPJDKMHJJGVTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 4
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims description 4
- ZGYICYBLPGRURT-UHFFFAOYSA-N tri(propan-2-yl)silicon Chemical compound CC(C)[Si](C(C)C)C(C)C ZGYICYBLPGRURT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- YNJBWRMUSHSURL-UHFFFAOYSA-N trichloroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(Cl)(Cl)Cl YNJBWRMUSHSURL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- DEZRYPDIMOWBDS-UHFFFAOYSA-N dcm dichloromethane Chemical compound ClCCl.ClCCl DEZRYPDIMOWBDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 claims description 3
- 229960003180 glutathione Drugs 0.000 claims description 3
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 claims description 3
- 239000000376 reactant Substances 0.000 claims description 3
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 claims description 3
- 229910000029 sodium carbonate Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 3
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 claims description 3
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 claims description 2
- UIIMBOGNXHQVGW-DEQYMQKBSA-M Sodium bicarbonate-14C Chemical compound [Na+].O[14C]([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-DEQYMQKBSA-M 0.000 claims description 2
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 claims description 2
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 claims description 2
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 claims description 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 2
- 239000002994 raw material Substances 0.000 claims description 2
- 238000000034 method Methods 0.000 claims 4
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims 2
- UXGNZZKBCMGWAZ-UHFFFAOYSA-N dimethylformamide dmf Chemical compound CN(C)C=O.CN(C)C=O UXGNZZKBCMGWAZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 claims 1
- 229940030275 epigallocatechin gallate Drugs 0.000 abstract description 23
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 abstract description 7
- 208000028867 ischemia Diseases 0.000 abstract description 6
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 abstract description 4
- 230000006378 damage Effects 0.000 abstract description 4
- 208000014674 injury Diseases 0.000 abstract description 4
- 230000010412 perfusion Effects 0.000 abstract description 3
- 230000010410 reperfusion Effects 0.000 abstract description 3
- 230000002000 scavenging effect Effects 0.000 description 7
- HHEAADYXPMHMCT-UHFFFAOYSA-N dpph Chemical compound [O-][N+](=O)C1=CC([N+](=O)[O-])=CC([N+]([O-])=O)=C1[N]N(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 HHEAADYXPMHMCT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 4
- 206010021143 Hypoxia Diseases 0.000 description 3
- 238000011529 RT qPCR Methods 0.000 description 3
- 102000002689 Toll-like receptor Human genes 0.000 description 3
- 108020000411 Toll-like receptor Proteins 0.000 description 3
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 3
- 230000007954 hypoxia Effects 0.000 description 3
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 3
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 3
- -1 DPPH free radical Chemical class 0.000 description 2
- 238000010867 Hoechst staining Methods 0.000 description 2
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- 206010063837 Reperfusion injury Diseases 0.000 description 2
- OUUQCZGPVNCOIJ-UHFFFAOYSA-M Superoxide Chemical compound [O-][O] OUUQCZGPVNCOIJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 102100039360 Toll-like receptor 4 Human genes 0.000 description 2
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 2
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 2
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 2
- 238000004811 liquid chromatography Methods 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 2
- 239000012192 staining solution Substances 0.000 description 2
- 238000003828 vacuum filtration Methods 0.000 description 2
- 239000012224 working solution Substances 0.000 description 2
- MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N (3s)-4-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(1s)-1-carboxy-2-hydroxyethyl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-[[2-[[(2s)-2,6-diaminohexanoyl]amino]acetyl]amino]-4-oxobutanoic acid Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCCCN MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 101000669447 Homo sapiens Toll-like receptor 4 Proteins 0.000 description 1
- 102000003777 Interleukin-1 beta Human genes 0.000 description 1
- 108090000193 Interleukin-1 beta Proteins 0.000 description 1
- 108090001005 Interleukin-6 Proteins 0.000 description 1
- 102000004889 Interleukin-6 Human genes 0.000 description 1
- 108010060804 Toll-Like Receptor 4 Proteins 0.000 description 1
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 1
- 102000000852 Tumor Necrosis Factor-alpha Human genes 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 1
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 1
- 230000003078 antioxidant effect Effects 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 238000002073 fluorescence micrograph Methods 0.000 description 1
- 238000000799 fluorescence microscopy Methods 0.000 description 1
- ZZUFCTLCJUWOSV-UHFFFAOYSA-N furosemide Chemical compound C1=C(Cl)C(S(=O)(=O)N)=CC(C(O)=O)=C1NCC1=CC=CO1 ZZUFCTLCJUWOSV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 208000012947 ischemia reperfusion injury Diseases 0.000 description 1
- 208000031225 myocardial ischemia Diseases 0.000 description 1
- 238000012261 overproduction Methods 0.000 description 1
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 1
- 150000003254 radicals Chemical class 0.000 description 1
- 238000001338 self-assembly Methods 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 238000004627 transmission electron microscopy Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/335—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin
- A61K31/35—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin having six-membered rings with one oxygen as the only ring hetero atom
- A61K31/352—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin having six-membered rings with one oxygen as the only ring hetero atom condensed with carbocyclic rings, e.g. methantheline
- A61K31/353—3,4-Dihydrobenzopyrans, e.g. chroman, catechin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/185—Acids; Anhydrides, halides or salts thereof, e.g. sulfur acids, imidic, hydrazonic or hydroximic acids
- A61K31/19—Carboxylic acids, e.g. valproic acid
- A61K31/192—Carboxylic acids, e.g. valproic acid having aromatic groups, e.g. sulindac, 2-aryl-propionic acids, ethacrynic acid
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/30—Macromolecular organic or inorganic compounds, e.g. inorganic polyphosphates
- A61K47/42—Proteins; Polypeptides; Degradation products thereof; Derivatives thereof, e.g. albumin, gelatin or zein
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
- A61K47/64—Drug-peptide, drug-protein or drug-polyamino acid conjugates, i.e. the modifying agent being a peptide, protein or polyamino acid which is covalently bonded or complexed to a therapeutically active agent
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/06—Ointments; Bases therefor; Other semi-solid forms, e.g. creams, sticks, gels
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
- A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
- Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
- Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
- Y02P20/55—Design of synthesis routes, e.g. reducing the use of auxiliary or protecting groups
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Pain & Pain Management (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Vascular Medicine (AREA)
- Cardiology (AREA)
- Heart & Thoracic Surgery (AREA)
- Inorganic Chemistry (AREA)
- Rheumatology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
本发明公开了一种具备活性氧和炎症双重抑制作用的小分子水凝胶及其制备方法，具体步骤包括：步骤一、制备大黄酸‑多肽化合物和空载体‑多肽化合物，其多肽序列为Rhein‑DFDFG‑SS‑ERGD/Nap‑DFDFG‑SS‑ERGD；步骤二、将大黄酸‑多肽化合物的PBS溶液使用还原型谷胱甘肽处理；步骤三、将处理后的溶液和表没食子儿茶素没食子酸EGCG溶液共混，在还原型谷胱甘肽的作用下共组装形成小分子药物水凝胶。本发明制备的小分子药物水凝胶，可以对缺血再灌注所造成的活性氧与炎症微环境的持续性改善，从而实现对缺血在灌注损伤的治疗。
Description
技术领域
本发明属于生物医药领域，具体涉及一种具备活性氧和炎症双重抑制作用的小分子水凝胶及其制备方法。
背景技术
活性氧的过量产生以及炎症的爆发是缺血再灌注损伤的主要原因，通过仅清除活性氧或抑制炎症的单一的治疗策略，收效甚微，Toll样受体4(TLR4)作为TLR受体的一种，是贯通活性氧和炎症的重要纽带。既往的研究发现大黄酸(Rhein)对TLR4/NF-κB通路有强大的抑制作用，但大黄酸的水溶性很差，限制了它的应用。以双苯丙氨酸(FF)为基础的多肽自组装由于其良好的生物相容性，廉价以及易于设计和制备等优点，在生命科学领域广泛应用。该体系的引入为解决大黄酸自身的限制提供了可能。同时为增强该多肽的抗氧化能力，我们引入了表没食子儿茶素没食子酸(EGCG)，最终得到目的化合物EGCG@Rh-gel。期望通过ROS和TLR4的双重抑制作用，阻断活性氧-炎症循环，实现对心肌缺血再灌注损伤的治疗。
发明内容
基于以上现有技术，本发明的目的在于提供了一种具备活性氧和炎症双重抑制作用的小分子水凝胶及其制备方法，其制备的小分子药物水凝胶，可以对缺血再灌注所造成的活性氧与炎症微环境的持续性改善，从而实现对缺血在灌注损伤的治疗。
为了实现以上目的，本发明采用的技术方案为：
一种具备活性氧和炎症双重抑制作用的小分子水凝胶及其制备方法，包括以下步骤：
步骤一、制备大黄酸-多肽化合物(Rh-pep)和空载体-多肽化合物，其多肽序列为Rhein-DFDFG-SS-ERGD/Nap-DFDFG-SS-ERGD；
步骤二、将大黄酸-多肽化合物配制PBS溶液；
步骤三、将配制后的溶液和表没食子儿茶素没食子酸(EGCG)溶液共混，在还原型谷胱甘肽的作用下共组装形成小分子药物水凝胶。
为了更好的实现本发明，进一步的，步骤一中制备大黄酸-多肽化合物和空载体-多肽化合物步骤为：
1)以碳酸氢钠，胱胺二盐酸盐，1,4-丁二酸酐，二氧六环、9-芴甲基-N-琥珀酰亚胺碳酸酯(Fmoc-Osu)为原料合成Fmoc-SS；
2)以Fmoc固相合成方法合成Rhein-DFDFG-SS-ERGD和Nap-DFDFG-SS-ERGD。
为了更好的实现本发明，进一步的，步骤一中大黄酸-多肽化合物结构式为：
空载体-多肽化合物化合物结构式为：
为了更好的实现本发明，进一步的，Fmoc-SS的合成步骤为：
(1)合成中间反应物1：按比例称取胱胺二盐酸盐和碳酸氢钠，其摩尔比为1:2～3，加入到250ml烧瓶中，加入两种物质20倍质量的水，室温搅拌至澄清，再加入1/5烧瓶体积的二氧六环后搅拌均匀，称取胱胺二盐酸盐等摩尔的1,4-丁二酸酐加入上述反应瓶中，室温反应8～12h，即得中间产物1。
(2)合成Fmoc-SS：中间产物1反应完全后，称取上述第一步中胱胺二盐酸盐等摩尔的9-芴甲基-N-琥珀酰亚胺碳酸酯(Fmoc-Osu)和碳酸氢钠；碳酸氢钠直接加入中间产物1的反应瓶中，Fmoc-Osu先在与上述第一步中体积相等的二氧六环中混合均匀，混合液用恒压滴液漏斗滴至上述反应瓶中，室温反应过夜。反应完成后，减压过滤反应液，保留滤液。用旋转蒸发仪浓缩滤液，将浓缩滤液用1M盐酸调pH至1～2，静置室温，白色固体物完全析出后，减压抽滤保留固体，冷冻干燥，即得Fmoc-SS。
为了更好的实现本发明，进一步的，Fmoc固相合成步骤为
1)称取二氯树脂(载量：1.4mmol/g)倒入干燥的固相管中，加入适量二氯甲烷(DCM)，放摇床上30min，通氮气5min，使二氯树脂充分膨胀，压出二氯甲烷溶剂；
2)根据固相管中二氯树脂容量，称取天冬氨酸Asp(D)(Fmoc-Asp(tBu)-OH)，加入等摩尔的DIPEA，用二氯甲烷溶解，混合，加入到固相反应器中，再往反应溶液等量的DIPEA，反应1～2h；
3)反应结束后，压干反应液，使用二氯甲烷洗5遍，每次洗1min，然后加入封闭液反应15～30min以封闭树脂上的活性集团，压干反应液；其中封闭液为二氯甲烷、甲醇和DIPEA组成，配制体积比为DCM:MEOH:DIEA＝17～20:2:1。
4)挤出封闭液，并用二氯甲烷洗5次，每次1min，再用N,N-二甲基甲酰胺(DMF)洗5次，每次1min；
5)切掉Fmoc保护基团：用20％的哌啶(溶剂为DMF)，切割20～40min，脱除天冬氨酸上的保护基Fmoc，使之裸露出氨基，压干反应液，用DMF洗5遍每次1min；
6)称取下一个氨基酸甘氨酸Gly(G)(Fmoc-Gly-OH)和等摩尔的HBTU于干燥的小瓶中，加入等摩尔的DIEA，用DMF溶解，超声助溶后，加入固相管反应2h，之后挤出溶液，并用DMF洗5次，1min/次；用20％的哌啶(溶剂为DMF)，切割20～40min，脱除保护基Fmoc，使之裸露出氨基，压干反应液，用DMF洗5遍每次1min；
7)重复上述步骤6)，接着依次加入Fmoc-Arg(pbf)-OH，Fmoc-Glu(tBu)-OH，Fmoc-SS，Fmoc-Gly-OH，Fmoc-DPhe(tBu)-OH(D-构型)，Fmoc-DPhe(tBu)-OH(D-构型)，以及最后的大黄酸。随着肽链的延长，反应难度也逐渐增加，因此，反应后续的氨基酸用量逐渐增加到第一个氨基酸用量的3～6倍以提高目的多肽的产率；
8)反应完成后，用DMF洗5次，再用DCM洗5次，每次1min，配切割液适量，切割液为95％的是三氯乙酸TFA，配制成三异丙基硅烷TIS和水的混合溶液，其体积分数为95％TFA：2.5％TIS：2.5％H2O，切割1h后收集切割液。再用DCM洗3次，2min/次，并收集液体。
9)收集的液体在旋转蒸发仪上旋干，加入适量无水乙醚，静置3-5min，可见白色沉淀析出，之后用高速离心机离心后去上清，白色沉淀进行冻干得粗产物，产物经高效液相色谱仪提纯后使用。
为了更好的实现本发明，进一步的，步骤二中PBS溶液为磷酸二氢钠和磷酸氢二钠的混合磷酸盐溶液，配制为磷酸二氢钠38.0g，与磷酸氢二钠5.04g，加水定容至1000ml，溶液pH值为7.4。
为了更好的实现本发明，进一步的，步骤二中配制的大黄酸-多肽化合物溶液浓度为每1000ml PBS溶液溶解Rh-pep 10.0～15.0g。
为了更好的实现本发明，进一步的，步骤三中共混时EGCG和Rh-pep用量的质量比为1:20～25。
为了更好的实现本发明，进一步的，步骤三中水凝胶制备步骤为：
1)将Rh-pep，倒入成胶小瓶，并用PBS溶液溶解；
2)用1mol/l的碳酸钠调pH至中性并加入的EGCG；
3)加入4eq的pH＝7.4的GSH溶液；
4)混合均匀后倒置即可形成稳定的水凝胶。
有益效果
本发明的有益效果如下：
(1)通过本发明制备的小分子药物水凝胶，可以对缺血再灌注所造成的活性氧与炎症微环境的持续性改善，从而实现对缺血在灌注损伤的治疗。
(2)通过本发明制备的小分子药物水凝胶，是将EGCG和Rh-pep进行共组装而成的水凝胶分子，在使用时有缓释效果，同时比单一使用Rh-pep进行活性氧的清除和炎症微环境改善方面有很大的提升，从而增加机体损伤使用效果。
附图说明
图1：实施例4中大黄酸-多肽以及EGCG和大黄酸-多肽的成胶前后图片
图2：实施例4中EGCG和大黄酸-多肽的成胶透射电镜图
图3：实施例4得到的大黄酸多肽水凝胶和EGCG和大黄酸-多肽的共组装水凝胶对DPPH自由基的清除能力测试
图4：实施例4得到的大黄酸多肽水凝胶和EGCG和大黄酸-多肽的共组装水凝胶对H9C2细胞缺氧复氧后细胞内活性氧水平荧光图
图5：实施例4得到大黄酸多肽水凝胶和EGCG和大黄酸-多肽的共组装水凝胶对H9C2细胞缺氧复氧后细胞内炎症因子表达的qPCR检测
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步详细说明，但所述实施例仅用于本发明而不是限制本发明。
实施例1
Fmoc-SS的合成：
(1)合成中间反应物1：按比例称取胱胺二盐酸盐和碳酸氢钠，其摩尔比为1:2～3，加入到250ml烧瓶中，加入两种物质20倍质量的水，室温搅拌至澄清，再加入1/5烧瓶体积的二氧六环后搅拌均匀，称取胱胺二盐酸盐等摩尔的1,4-丁二酸酐加入上述反应瓶中，室温反应8～12h，即得中间产物1。
(2)合成Fmoc-SS：中间产物1反应完全后，称取上述第一步中胱胺二盐酸盐等摩尔的9-芴甲基-N-琥珀酰亚胺碳酸酯(Fmoc-Osu)和碳酸氢钠；碳酸氢钠直接加入中间产物1的反应瓶中，Fmoc-Osu先在与上述第一步中体积相等的二氧六环中混合均匀，混合液用恒压滴液漏斗滴至上述反应瓶中，室温反应过夜。反应完成后，减压过滤反应液，保留滤液。用旋转蒸发仪浓缩滤液，将浓缩滤液用1M盐酸调pH至1～2，静置室温，白色固体物完全析出后，减压抽滤保留固体，冷冻干燥，即得Fmoc-SS，称重为4.7g(10mmol)，终产率为70％。
实施例2
多肽化合物Rhein-DFDFG-SS-ERGD/Nap-DFDFG-SS-ERGD的固相法合成：
1)称取1g二氯树脂(载量：1.4mmol/g)倒入干燥的固相管中，加入适量二氯甲烷DCM，放摇床上30min，通氮气5min，使二氯树脂充分膨胀，压出DCM溶剂；
2)称取天冬氨酸Asp(D)(Fmoc-Asp(tBu)-OH)0.411g(1mmol)，加入165μl(1mmol)DIPEA，用DCM溶解，混合，加入到固相反应器中，再往反应溶液中加入165μl(1mmol)DIPEA，反应2h；
3)反应结束后，压干反应液，使用二氯甲烷洗5遍，每次洗1min，然后加入封闭液反应15min以封闭树脂上的活性集团，压干反应液；其中封闭液为二氯甲烷、甲醇和DIPEA组成，配制体积比为DCM:MEOH:DIEA＝17:2:1，配制封闭液10ml；
4)挤出封闭液，并用二氯甲烷洗5次，每次1min，再用N,N-二甲基甲酰胺(DMF)洗5次，每次1min；
5)切掉Fmoc保护基团：用20％的哌啶(溶剂为DMF)，切割30min，脱除天冬氨酸上的保护基Fmoc，使之裸露出氨基，压干反应液，用DMF洗5遍每次1min；
6)称取下一个氨基酸甘氨酸Gly(G)(Fmoc-Gly-OH)0.298g(1mmol)和0.38g(1mmol)的HBTU于干燥的小瓶中，加入330μl(1mmol)的DIEA，用DMF溶解，超声助溶后，加入固相管反应2h，之后挤出溶液，并用DMF洗5次，1min/次；用20％的哌啶(溶剂为DMF)，切割30min，脱除保护基Fmoc，使之裸露出氨基，压干反应液，用DMF洗5遍每次1min；
7)重复上述步骤6)，接着依次加入Fmoc-Arg(pbf)-OH，Fmoc-Glu(tBu)-OH，Fmoc-SS，Fmoc-Gly-OH，Fmoc-Phe(tBu)-OH(D-构型)，Fmoc-Phe(tBu)-OH(D-构型)，以及最后的大黄酸。随着肽链的延长，反应难度也逐渐增加，因此，反应后续的氨基酸用量逐渐增加，每次增加用量1.2倍；
8)反应完成后，用DMF洗5次，再用DCM洗5次，每次1min，配切割液10ml，切割液为95％的是三氯乙酸TFA，配制成三异丙基硅烷TIS和水的混合溶液，其体积分数为95％TFA：2.5％TIS：2.5％H2O，切割1h后收集切割液。再用DCM洗3次，2min/次，并收集液体。
9)收集的液体在旋转蒸发仪上旋干，加入20ml无水乙醚，静置5min，可见白色沉淀析出，之后用高速离心机离心后去上清，白色沉淀进行冻干得粗产物，产物经高效液相色谱仪提纯后使用。
得到的粗产物为3.16g，纯度为61.7％，经液相色谱提纯后，得到纯品1.62g，收率83.08％。
实施例3
多肽化合物Rhein-DFDFG-SS-ERGD/Nap-DFDFG-SS-ERGD的固相法合成：
1)称取2g二氯树脂(载量：1.4mmol/g)倒入干燥的固相管中，加入适量二氯甲烷DCM，放摇床上30min，通氮气5min，使二氯树脂充分膨胀，压出DCM溶剂；
2)称取天冬氨酸Asp(D)(Fmoc-Asp(tBu)-OH)0.411g(1mmol)，加入165μl(1mmol)DIPEA，用DCM溶解，混合，加入到固相反应器中，再往反应溶液中加入165μl(1mmol)DIPEA，反应1h；
3)反应结束后，压干反应液，使用二氯甲烷洗5遍，每次洗1min，然后加入封闭液反应15min以封闭树脂上的活性集团，压干反应液；其中封闭液为二氯甲烷、甲醇和DIPEA组成，配制体积比为DCM:MEOH:DIEA＝20:2:1，配制封闭液10ml；
4)挤出封闭液，并用二氯甲烷洗5次，每次1min，再用N,N-二甲基甲酰胺(DMF)洗5次，每次1min；
5)切掉Fmoc保护基团：用20％的哌啶(溶剂为DMF)，切割40min，脱除天冬氨酸上的保护基Fmoc，使之裸露出氨基，压干反应液，用DMF洗5遍每次1min；
6)称取下一个氨基酸甘氨酸Gly(G)(Fmoc-Gly-OH)0.298g(1mmol)和0.38g(1mmol)的HBTU于干燥的小瓶中，加入330μl(1mmol)的DIEA，用DMF溶解，超声助溶后，加入固相管反应2h，之后挤出溶液，并用DMF洗5次，1min/次；用20％的哌啶(溶剂为DMF)，切割40min，脱除保护基Fmoc，使之裸露出氨基，压干反应液，用DMF洗5遍每次1min；
7)重复上述步骤6)，接着依次加入Fmoc-Arg(pbf)-OH，Fmoc-Glu(tBu)-OH，Fmoc-SS，Fmoc-Gly-OH，Fmoc-DPhe(tBu)-OH(D-构型)，Fmoc-DPhe(tBu)-OH(D-构型)，以及最后的大黄酸。随着肽链的延长，反应难度也逐渐增加，因此，反应后续的氨基酸用量逐渐增加，每次增加用量1.1倍；
8)反应完成后，用DMF洗5次，再用DCM洗5次，每次1min，配切割液10ml，切割液为95％的是三氯乙酸TFA，配制成三异丙基硅烷TIS和水的混合溶液，其体积分数为95％TFA：2.5％TIS：2.5％H2O，切割1h后收集切割液。再用DCM洗3次，2min/次，并收集液体。
9)收集的液体在旋转蒸发仪上旋干，加入20ml无水乙醚，静置5min，可见白色沉淀析出，之后用高速离心机离心后去上清，白色沉淀进行冻干得粗产物，产物经高效液相色谱仪提纯后使用。
得到的粗产物为3.48g，纯度为56.1％，经液相色谱提纯后，得到纯品1.54g，收率78.97％。
实施例4
配制浓度为1wt％的EGCG和大黄酸多肽的共组装水凝胶，具体步骤如下：
1)称取5mg Rh-pep，倒入成胶小瓶，并用PBS溶解；
2)用1mol/l碳酸钠调PH至中性并加入0.2mg的EGCG；
3)加入4eq的GSH溶液(PH＝7.4)，最后用PBS定容到400μl；
4)之后通过小瓶倒置观察是否形成稳定的水凝胶，结果如图1所示。
对实施4得到的水凝胶进行自由基及炎症清除测试，测试内容方法和结果如下：
(一)DPPH清除实验
使用80％甲醇制备浓度为0.01mmol/L的DPPH溶液。然后将20μl水凝胶与380μlDPPH溶液共混，在黑暗中孵育60分钟。对照组为400μl DPPH溶液。通过酶标仪检测溶液在400～600nm波长处的吸光度。
水凝胶对DPPH自由基的清除作用，计算公式如下：
清除效果(％)＝(A515nm control–A515nm hydrogel)/A515nm control×100％
其结果如图3所示，相较于单纯的大黄酸多肽水凝胶，EGCG与大黄酸多肽的共组装水凝胶的DPHH的清除效率明显要高，达到了45％，而大黄酸多肽水凝胶只有7.6％，说明EGCG的添加有效地提升了水凝胶的活性氧清除能力。
(二)细胞的活性氧清除能力检测
1)将H9C2细胞以细胞密度为2×105/孔，铺在24孔板中，全培养72小时；
2)培养结束后复氧，并用PBS小心的吹洗3次。之后分别加入10μM的DHE和DCFH-DA染色工作液，1ml/孔，避光，于37℃培养箱中培养30分钟；
3)之后将工作液吸出，PBS洗3遍，之后再用Hoechst染色液染核，500μl/孔，避光于培养箱中培养半小时；
4)将Hoechst染色液吸出，并用PBS吹洗3次，之后与荧光显微镜下观察，DHE显红色荧光，并与和重叠，其红色荧光越强代表细胞内超氧阴离子水平越高，活性氧水平也就越高。DCFH-DA显绿色荧光，其荧光强度越强，表示总活性氧水平越高。
结果如图4所示，EGCG与大黄酸多肽的共组装水凝胶具有很强的超氧阴离子以及活性氧清除作用相较于大黄酸多肽的共组装水凝胶，这表明EGCG的加入是必不可少的一环。
(三)qPCR检测细胞内炎症因子表达水平的变化
H9C2细胞铺板于6孔板，细胞密度达80％后行缺氧复氧处理，之后加入80μM的大黄酸多肽的共组装水凝胶，空载体水凝胶以及EGCG与大黄酸多肽的共组装水凝胶处理48小时后，通过qPCR检测炎症因子的表达情况，其结果如图5所示，EGCG与大黄酸多肽的共组装水凝胶组的炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-6表达低于其他各组，表明共组装水凝胶具备优越的炎症抑制作用。
最后应说明的是：以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (5)
1.一种具备活性氧和炎症双重抑制作用的小分子水凝胶的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤一、制备大黄酸-多肽化合物Rh-pep和空载体-多肽化合物：
1)以碳酸氢钠，胱胺二盐酸盐，1,4-丁二酸酐，二氧六环、9-芴甲基-N-琥珀酰亚胺碳酸酯Fmoc-Osu为原料合成Fmoc-SS；
2)以Fmoc固相合成方法合成大黄酸-多肽化合物和空载体-多肽化合物；其中大黄酸-多肽化合物序列为Rhein-DFDFG-SS-ERGD，结构式为：
空载体-多肽化合物化合物序列为Nap-DFDFG-SS-ERGD，结构式为：
步骤二、将大黄酸-多肽化合物配制PBS溶液，其中PBS溶液为磷酸二氢钠和磷酸氢二钠的混合磷酸盐溶液，配制为磷酸二氢钠38.0g，与磷酸氢二钠5.04g，加水定容至1000ml，溶液pH值为7.4；配制的大黄酸-多肽化合物溶液浓度为每1000ml PBS溶液溶解Rh-pep10.0～15.0g；
步骤三、将配制后的溶液和表没食子儿茶素没食子酸EGCG溶液共混，共混时EGCG和Rh-pep用量的质量比为1:20～25，共混后，在还原型谷胱甘肽的作用下共组装形成小分子药物水凝胶。
2.根据权利要求1所述的一种具备活性氧和炎症双重抑制作用的小分子水凝胶的制备方法，其特征在于，步骤一中Fmoc-SS的合成步骤为：
(1)合成中间反应物1：按比例称取胱胺二盐酸盐和碳酸氢钠，其摩尔比为1:2～3，加入到250ml烧瓶中，加入两种物质20倍质量的水，室温搅拌至澄清，再加入1/5烧瓶体积的二氧六环后搅拌均匀，称取胱胺二盐酸盐等摩尔的1,4-丁二酸酐加入上述反应瓶中，室温反应8～12h，即得中间产物1；
(2)合成Fmoc-SS：中间产物1反应完全后，称取上述第一步中胱胺二盐酸盐等摩尔的9-芴甲基-N-琥珀酰亚胺碳酸酯Fmoc-Osu和碳酸氢钠；碳酸氢钠直接加入中间产物1的反应瓶中，Fmoc-Osu先在与上述第一步中体积相等的二氧六环中混合均匀，混合液用恒压滴液漏斗滴至上述反应瓶中，室温反应过夜，反应完成后，减压过滤反应液，保留滤液，用旋转蒸发仪浓缩滤液，将浓缩滤液用1M盐酸调pH至1～2，静置室温，白色固体物完全析出后，减压抽滤保留固体，冷冻干燥，即得Fmoc-SS。
3.根据权利要求1所述的一种具备活性氧和炎症双重抑制作用的小分子水凝胶的制备方法，其特征在于，步骤一中Fmoc固相合成步骤为
1)称取载量为1.4mmol/g的二氯树脂倒入干燥的固相管中，加入适量二氯甲烷DCM，放摇床上30min，通氮气5min，使二氯树脂充分膨胀，压出二氯甲烷溶剂；
2)根据固相管中二氯树脂容量，称取天冬氨酸Asp，即Fmoc-Asp(tBu)-OH，加入等摩尔的DIPEA，用二氯甲烷溶解，混合，加入到固相反应器中，再往反应溶液等量的DIPEA，反应1～2h；
3)反应结束后，压干反应液，使用二氯甲烷洗5遍，每次洗1min，然后加入封闭液反应15～30min以封闭树脂上的活性集团，压干反应液；其中封闭液为二氯甲烷、甲醇和DIPEA组成，配制体积比为DCM:MEOH:DIEA＝17～20:2:1；
4)挤出封闭液，并用二氯甲烷洗5次，每次1min，再用N,N-二甲基甲酰胺DMF洗5次，每次1min；
5)切掉Fmoc保护基团：用20％的哌啶，溶剂为DMF，切割20～40min，脱除天冬氨酸上的保护基Fmoc，使之裸露出氨基，压干反应液，用DMF洗5遍每次1min；
6)称取下一个氨基酸甘氨酸Gly，即Fmoc-Gly-OH和等摩尔的HBTU于干燥的小瓶中，加入等摩尔的DIEA，用DMF溶解，超声助溶后，加入固相管反应2h，之后挤出溶液，并用DMF洗5次，1min/次；用20％的哌啶，溶剂为DMF，切割20～40min，脱除保护基Fmoc，使之裸露出氨基，压干反应液，用DMF洗5遍每次1min；
7)重复上述步骤6)，接着依次加入Fmoc-Arg(pbf)-OH，Fmoc-Glu(tBu)-OH，Fmoc-SS，Fmoc-Gly-OH，D-构型的Fmoc-DPhe(tBu)-OH，D-构型的Fmoc-DPhe(tBu)-OH，以及最后的大黄酸，随着肽链的延长，反应难度也逐渐增加，因此，反应后续的氨基酸用量逐渐增加到第一个氨基酸用量的3～6倍以提高目的多肽的产率；
8)反应完成后，用DMF洗5次，再用DCM洗5次，每次1min，配切割液适量，切割液为95％的是三氯乙酸TFA，配制成三异丙基硅烷TIS和水的混合溶液，其体积分数为95％TFA：2.5％TIS：2.5％H2O，切割1h后收集切割液，再用DCM洗3次，2min/次，并收集液体；
9)收集的液体在旋转蒸发仪上旋干，加入适量无水乙醚，静置3-5min，可见白色沉淀析出，之后用高速离心机离心后去上清，白色沉淀进行冻干得粗产物，产物经高效液相色谱仪提纯后使用。
4.据权利要求1所述的一种具备活性氧和炎症双重抑制作用的小分子水凝胶的制备方法，其特征在于，步骤三中水凝胶制备步骤为：
1)将Rh-pep，倒入成胶小瓶，并用PBS溶液溶解；
2)用1mol/l的碳酸钠调pH至中性并加入的EGCG；
3)加入4eq的pH＝7.4的GSH溶液；
4)混合均匀后倒置即可形成稳定的水凝胶。
5.如权利要求1-4所述的任一项的制备方法制备得到的具备活性氧与炎症双重抑制作用的小分子水凝胶。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202210497463.8A CN114869879B (zh) | 2022-05-09 | 2022-05-09 | 一种具备活性氧和炎症双重抑制作用的小分子水凝胶及其制备方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202210497463.8A CN114869879B (zh) | 2022-05-09 | 2022-05-09 | 一种具备活性氧和炎症双重抑制作用的小分子水凝胶及其制备方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN114869879A CN114869879A (zh) | 2022-08-09 |
| CN114869879B true CN114869879B (zh) | 2024-06-25 |
Family
ID=82673592
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202210497463.8A Active CN114869879B (zh) | 2022-05-09 | 2022-05-09 | 一种具备活性氧和炎症双重抑制作用的小分子水凝胶及其制备方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN114869879B (zh) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN115531291B (zh) * | 2022-09-02 | 2025-02-14 | 南京医科大学 | 一种可载药的赖氨大黄酸自组装水凝胶及其制备方法与应用 |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB0304394D0 (en) * | 2003-02-26 | 2003-04-02 | Arakis Ltd | Novel amides as modulators of IL-10 production |
| CN101111268A (zh) * | 2005-02-01 | 2008-01-23 | 欧加农股份有限公司 | 多肽和五糖的偶联物 |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20150216806A1 (en) * | 2012-08-29 | 2015-08-06 | Salix Pharmaceuticals, Inc. | Laxative compositions and methods for treating constipation and related gastrointestinal diseases and conditions |
| CN103070810B (zh) * | 2013-02-06 | 2014-06-11 | 成都山信药业有限公司 | 一种抗皮肤衰老组合物 |
-
2022
- 2022-05-09 CN CN202210497463.8A patent/CN114869879B/zh active Active
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB0304394D0 (en) * | 2003-02-26 | 2003-04-02 | Arakis Ltd | Novel amides as modulators of IL-10 production |
| CN101111268A (zh) * | 2005-02-01 | 2008-01-23 | 欧加农股份有限公司 | 多肽和五糖的偶联物 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN114869879A (zh) | 2022-08-09 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN102702320B (zh) | 一种制备爱啡肽的方法 | |
| JPS62129297A (ja) | カルシトニン遺伝子関連ペプチド誘導体 | |
| DK162532B (da) | Aminogruppeholdige acrylcopolymere | |
| CN114869879B (zh) | 一种具备活性氧和炎症双重抑制作用的小分子水凝胶及其制备方法 | |
| WO2013117083A1 (zh) | 一种依非巴特的制备方法 | |
| CN110317188A (zh) | 化合物及其制备方法和应用 | |
| CN108440654A (zh) | 一种抗菌活性环六肽Thermoactinoamide A的合成方法 | |
| CN101870732B (zh) | 用固-液相结合法进行单聚乙二醇化胸腺五肽的合成方法 | |
| CN107540728A (zh) | 环（Phe‑Pro‑lle‑Phe‑Pro‑Pro‑Leu‑Val）肽的制备方法 | |
| CN103897029B (zh) | 一种罗米地辛的制备方法 | |
| CN103172704A (zh) | 一种抗肿瘤小肽FpAT的制备方法 | |
| CN117700490B (zh) | 一种四支链多肽及其制备方法 | |
| CN116284238A (zh) | 一种合成多肽类药物的方法 | |
| CN111393508B (zh) | 一种阿托西班的制备方法 | |
| CN113801190B (zh) | 寡肽-1盐酸盐的制备方法 | |
| CN108484735A (zh) | 一类广泛活性环七肽Reniochalistatin A-D的合成方法 | |
| CN111333697B (zh) | 一种罗米地辛的合成方法 | |
| CN114957388A (zh) | 一种短肽荧光探针及其制备方法和应用 | |
| CN102336813A (zh) | 一种固相多肽合成蛋白溶菌素的制备方法 | |
| CN1865282B (zh) | 固相多肽合成特利加压素的制备方法 | |
| CN113461800A (zh) | 一种利拉鲁肽的合成方法 | |
| CN112521482A (zh) | 一种固液结合合成奈西立肽的制备方法 | |
| CN117531021B (zh) | 一种刺五加苷e-靶向肽偶联物及其应用 | |
| CN119161446B (zh) | 胰淀素类似物的制备方法 | |
| CN104558159B (zh) | 比伐芦定中间体的固相合成方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |