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CN114831979B - 5-甲氧基黄酮在制备治疗肥胖、高胆固醇以及脂肪肝药物中的应用 - Google Patents

5-甲氧基黄酮在制备治疗肥胖、高胆固醇以及脂肪肝药物中的应用 Download PDF

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Abstract

本发明提供了一种5‑甲氧基黄酮在制备治疗肥胖、高胆固醇以及脂肪肝药物中的应用，属于医药技术领域。本发明实施例通过(1)建立高脂饮食诱导的小鼠非酒精性脂肪肝病模型；(2)高脂饮食期间，腹腔注射5‑甲氧基黄酮对诱导模型进行干预；(3)追踪小鼠各项生理指标，对小鼠肝脏进行脂质代谢相关研究。实验验证5‑甲氧基黄酮在制备治疗肥胖、高胆固醇以及脂肪肝药物中的应用。5‑甲氧基黄酮具有更好的天然生物活性，来源广泛，价格低廉，极易获取，具有更小的毒副作用和更低廉的成本。

Description

5-甲氧基黄酮在制备治疗肥胖、高胆固醇以及脂肪肝药物中 的应用
技术领域
本发明属于医药技术领域，尤其涉及一种5-甲氧基黄酮在制备治疗肥胖、高胆固醇以及脂肪肝药物中的应用。
背景技术
肥胖、高胆固醇与非酒精性脂肪肝在流行病学上相互关联。
肥胖(obesity)是体内脂肪组织(尤其是甘油三酯)积聚过多而导致的一种状态，常表现为一定程度上的超重和脂肪层过厚。肥胖与患II型糖尿病(T2DM)、高脂血症、高血压、冠心病(CHD)、非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)、中风、炎症性肠病(IBD)和癌症的风险增加相关。脂肪组织是肥胖和相关代谢性疾病的重要细胞因子汇。大量证据表明，扩张脂肪组织中的缺氧可能会引发炎症反应，以脂肪变性和炎症为特征的非酒精性脂肪性肝病也与肥胖有关，是代谢综合征的肝脏表现。市面上的减肥降脂药物种类繁多，但大多都会带来一定的毒副作用，如长期服用奥利司他会导致油性便，腹泻、腹痛和粪便斑点，以及一些严重的肝脏不良反应(胆石症、胆汁淤积性肝炎和亚急性肝功能衰竭)；比如长期服用他汀类药物，会引起糖尿病、白内障以及肌肉损伤；再比如贝特类药物会引起常见的不良反应包括消化不良，胆石症，肌病等。
胆固醇(Cholesterol)是人体中的重要分子，其过量和缺乏都会导致疾病，胆固醇本身不仅是一种调节分子，而且是所有类固醇激素和维生素D类似物的骨架，负责整个生命的生长和发育。由于人类分解代谢胆固醇的能力有限，因此当饮食过量或发生遗传异常时，它很容易在体内积聚，从而导致如动脉粥样硬化等疾病甚至死亡。
非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)是指除酒精和其他明确的损肝因素外，导致肝细胞内脂肪过度沉积为主要特征的临床病理综合征，在过去的20年里，随着生活方式的巨大变化，非酒精性脂肪肝(NAFLD)已经成为中国最普遍的肝脏疾病。非酒精性脂肪性肝病不仅可以直接导致肝硬化、肝细胞癌和移植肝复发，还可影响其他慢性肝病的进展，并参与2型糖尿病和动脉粥样硬化的发病。
非酒精性脂肪肝病、高胆固醇疾病和肥胖在流行病学上相互关联，非酒精性脂肪肝病的危害包括血浆高甘油三酯血症、低密度脂蛋白(LDL)颗粒增加和高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平降低为特征的动脉粥样硬化性血脂异常等。近期，内非酒精性脂肪性肝病对人类健康的危害仍将不断增加，因此非酒精性脂肪性肝病是当代医学领域的新挑战。对于非酒精脂肪肝病的患者来说，通过减轻体重去治疗该疾病是最要的方式之一。但实质上，减肥是相对困难的，并且减重到一定程度后会到达减肥瓶颈体重不再变化，且容易回弹。
所以，使用无毒副作用的天然活性小分子来改善肥胖、高胆固醇和非酒精性脂肪肝具有重要意义。
此外，5-甲氧基黄酮(5-methoxyflavone)是一种存在于姜科山柰属——小花山柰(Kaempferia parviflora)中的天然膳食黄酮类化合物，原产于泰国，21世纪以来在我国台湾、云南、广西地区也有引进种植。据早前报道，5-甲氧基黄酮对非甾体抗炎药引起的胃损伤具有胃保护作用和强烈的化学活性，对肺癌细胞系和宫颈癌细胞也有细胞毒性作用。近年来，5-甲氧基黄酮被认为是一种对DNApol-β聚合酶具有良好生物活性和选择性的候选分子，可开发用于对阿尔兹海默症(AD)的治疗。最新研究报道，5-甲氧基黄酮是一种中枢神经系统抑制剂，与GABA等多种抑制神经通路相互作用，是一种新的潜在的镇静催眠作用，可预测作为抗焦虑、抗惊厥的药物，也可作为全身麻醉剂。
目前没有5-甲氧基黄酮在肥胖、高胆固醇、非酒精性脂肪肝方面的研究和应用报道。
发明内容
本发明实施例提供一种5-甲氧基黄酮在制备治疗肥胖、高胆固醇以及脂肪肝药物中的应用，旨在解决现有治疗高脂饮食诱导肥胖、高胆固醇以及非酒精性脂肪肝药物存在较大副作用及价格高昂的问题。
本发明的目的通过如下技术方案实现：
本发明实施例通过(1)建立高脂饮食诱导的小鼠非酒精性脂肪肝病模型；(2)高脂饮食期间，腹腔注射5-甲氧基黄酮对诱导模型进行干预；(3)追踪小鼠各项生理指标，对小鼠肝脏进行脂质代谢相关研究。实验验证5-甲氧基黄酮在制备治疗肥胖、高胆固醇以及脂肪肝药物中的应用。
实验验证5-甲氧基黄酮可以降低高脂饮食引起的体重增加以及脂肪积累等高脂饮食诱导肥胖的显著形状，同时可以降低胆固醇含量和降低肝脏甘油三酯的积累等非酒精性脂肪肝显著性状，证实其在预防和治疗高脂饮食诱导肥胖、高胆固醇及非酒精性脂肪肝方面具有显著的疗效作用；从而支持了5-甲氧基黄酮在制备治疗肥胖、高胆固醇及非酒精性脂肪肝药物中的应用。
5-甲氧基黄酮在制备治疗肥胖、高胆固醇以及脂肪肝药物中的应用。
所述的治疗也包括了形成高脂饮食导致肥胖、高胆固醇、及非酒精性脂肪肝过程中的预防。
所述肥胖，优选为高脂饮食诱导的肥胖。
具体为：5-甲氧基黄酮在制备治疗高脂饮食诱导肥胖的药物中应用。
所述高胆固醇，优选为高脂饮食诱导的高胆固醇。
具体为：5-甲氧基黄酮在制备治疗高脂饮食诱导高胆固醇的药物中应用。
所述的脂肪肝，优选为高脂饮食诱导的非酒精性脂肪肝。
具体为5-甲氧基黄酮在制备治疗高脂饮食诱导非酒精性脂肪肝的药物中应用。
优选的实施方式为：5-甲氧基黄酮在制备治疗高脂饮食诱导肥胖、高胆固醇及非酒精性脂肪肝药物中的应用。
本发明的技术方案与现有技术相比具有以下有益效果：
本发明研究发现5-甲氧基黄酮可以治疗由高脂饮食诱导引起的肥胖、高胆固醇以及非酒精性脂肪肝，在制备治疗由高脂饮食诱导引起的肥胖、高胆固醇以及非酒精性脂肪肝的药物中应用。并且5-甲氧基黄酮自上市以来，目前未见有关于治疗肥胖、降低胆固醇、缓解非酒精性脂肪肝的报道。使用无毒副作用的天然植物活性小分子5-甲氧基黄酮来改善肥胖和非酒精性脂肪肝具有重要意义。相比于目前市场上已有的高成本减脂药物，5-甲氧基黄酮具有更好的天然生物活性，来源广泛，价格低廉，极易获取，具有更小的毒副作用和更低廉的成本。
附图说明
图1是本发明实施例1的体重监测结果图；
图2是本发明实施例1的体脂率监测结果图；
图3是本发明实施例1中肝脏甘油三脂水平的结果柱状图；
图4是本发明实施例1中血清总胆固醇含量的结果柱状图；
图5是本发明实施例1中组织重量的结果柱状图；其中：iWAT为皮下脂肪，eWAT为附睾脂肪，Liver为肝脏。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明的一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。另外，各个实施例之间的技术方案可以相互结合，但是必须是以本领域普通技术人员能够实现为基础，当技术方案的结合出现相互矛盾或无法实现时应当认为这种技术方案的结合不存在，也不在本发明要求的保护范围之内。
目前，现有治疗高脂饮食诱导肥胖、高胆固醇以及非酒精性脂肪肝药物存在较大副作用及价格高昂的问题。为了解决上述技术问题，本发明提出了一种5-甲氧基黄酮在制备治疗高脂饮食诱导肥胖、高胆固醇及非酒精性脂肪肝药物中的应用。
实施例1
本发明通过实施例1中的(1)建立高脂饮食诱导的小鼠非酒精性脂肪肝病模型；(2)高脂饮食期间，腹腔注射5-甲氧基黄酮对诱导模型进行干预；(3)追踪小鼠各项生理指标，对小鼠肝脏进行脂质代谢相关研究。实验验证5-甲氧基黄酮在制备治疗高脂饮食诱导肥胖以及非酒精性脂肪肝药物中的应用。具体实验方案如下：
1.实验动物饲养和药物处理：
实验用动物为五周龄C57BL/6雄性小鼠；实验环境温度为24℃±2℃，湿度40％-60％，12h光照/黑暗模拟昼夜交替，自由获取饮水和饲料。小鼠随机分为三组，分为对照组(10％Kcal脂肪，NC组)、高脂饮食组(60％Kcal脂肪，HFD组)和高脂饮食+5-甲氧基黄酮组(HFD+5-MF组)，饲料购于特罗菲公司；每组6-8只小鼠，前两周普通饲料饲喂(10％Kcal脂肪)以适应新环境，第三周开始高脂饮食(60％Kcal脂肪)诱导，并且高脂饮食+5-MF组开始按照50mg/kg注射5-甲氧基黄酮(5-MF)，一共注射九周，每周一和每周四下午两点进行注射。
在上述实验动物饲养过程中对小鼠(从开始高脂饮食诱导和注射5-甲氧基黄酮时记为统计的起点)的体重和体脂率进行持续监测，在注射九周后，对小鼠肝脏组织甘油三酯水平进行检测、对血清总胆固醇含量、脂肪和肝脏组织进行称重测量，具体实验方法如下：
(1)小鼠脂肪率监测：用小动物核磁(苏州纽迈分析仪器股份有限公司，QMR-23-060H-I)，称完体重后，保定小鼠进行检测。
(2)肝脏组织甘油三酯(TG)检测：裂解液配置(RIPA：PMSF＝100:1)完后，加1mL到2mL离心管中，每管加入6颗小钢珠，组织破碎仪破碎肝脏组织并放于4度匀浆仪上过夜，12h后12000转，离心5分钟，取上清，用时需稀释五倍体积，先置于干浴锅70℃10min，再次离心12000转，离心5分钟，取上清液根据TG试剂盒在酶标板中加入相应的样品和工作液，37℃静置10分钟，酶标仪检测510吸光值下的数值，根据公式换算肝脏组织的TG含量并用所测蛋白浓度进行标定。
(3)蛋白浓度检测：先用BCA蛋白浓度检测试剂盒(碧云天，货号：P0011)，按照A:B＝49:1的比例配置蛋白检测工作液，在96孔酶标板中，每孔加肝脏裂解液样品10μL，工作液190μL，置于37℃静置10分钟后，在562nm下检测吸光值，根据蛋白标准曲线计算相互相应的蛋白浓度。
实验结果：
如图1所示结果可以看出，高脂饮食组的体重在第一、第二周时就显著高于HFD+5-MF组的体重，说明注射5-甲氧基黄酮在一定程度上抵抗了高脂饮食诱导的体重增加；如图2所示，追踪小鼠的体脂率可以看出，注射5-甲氧基黄酮干预后的高脂饮食组的小鼠体脂率对比高脂饮食组有显著的下调趋势；综上可知，5-甲氧基黄酮可以在制备治疗高脂饮食诱导肥胖的药物中应用。
图3为检测肝脏甘油三酯积累的含量的结果柱状图，实验结果表明，5-甲氧基黄酮缓解了高脂饮食诱导过程中甘油三酯在肝脏中的积累，HFD+5-MF组与NC组的肝脏甘油三酯的含量基本一致；实验结果可知，5-甲氧基黄酮能够缓解脂肪肝症状，对于高脂饮食诱导的非酒精性脂肪肝的预防和治疗具有显著效果，5-甲氧基黄酮可以在制备治疗高脂饮食诱导非酒精性脂肪肝的药物中应用。
图4为血清总胆固醇含量的结果柱状图，结果表明，注射了5-甲氧基黄酮后，血清总胆固醇显著低于HFD组，说明5-甲氧基黄酮可以缓解血清总胆固醇的累积。
图5为皮下脂肪、附睾脂肪和肝脏的重量的检测结果图，结果表明，HFD+5-MF组的皮下脂肪、附睾脂肪和肝脏重量均比HFD组显著降低，说明5-甲氧基黄酮可以缓解脂肪的积聚，进一步验证，5-甲氧基黄酮可以在制备治疗高脂饮食诱导肥胖的药物中应用。
综上实验结果，验证5-甲氧基黄酮可以降低高脂饮食引起的体重增加以及脂肪积累等高脂饮食诱导肥胖的显著形状，同时可以降低胆固醇含量和降低肝脏甘油三酯的积累等非酒精性脂肪肝显著性状，证实其在预防和治疗高脂饮食诱导肥胖、高胆固醇及非酒精性脂肪肝方面具有显著的疗效作用；从而支持了5-甲氧基黄酮在制备治疗高脂饮食诱导肥胖、高胆固醇及非酒精性脂肪肝药物中的应用。
5-甲氧基黄酮在制备治疗肥胖、高胆固醇以及脂肪肝药物中的应用。
所述的治疗也包括了形成高脂饮食导致肥胖、高胆固醇、及非酒精性脂肪肝过程中的预防。
所述肥胖，优选为高脂饮食诱导的肥胖。
具体为：5-甲氧基黄酮在制备治疗高脂饮食诱导肥胖的药物中应用。
所述高胆固醇，优选为高脂饮食诱导的高胆固醇。
具体为：5-甲氧基黄酮在制备治疗高脂饮食诱导高胆固醇的药物中应用。
所述的脂肪肝，优选为高脂饮食诱导的非酒精性脂肪肝。
具体为5-甲氧基黄酮在制备治疗高脂饮食诱导非酒精性脂肪肝的药物中应用。
优选的实施方式为：5-甲氧基黄酮在制备治疗高脂饮食诱导肥胖、高胆固醇及非酒精性脂肪肝药物中的应用。
本发明的技术方案与现有技术相比具有以下有益效果：
本发明研究发现5-甲氧基黄酮可以治疗由高脂饮食诱导引起的肥胖、高胆固醇以及非酒精性脂肪肝，在制备治疗由高脂饮食诱导引起的肥胖、高胆固醇以及非酒精性脂肪肝的药物中应用。并且5-甲氧基黄酮自上市以来，目前未见有关于治疗肥胖、降低胆固醇、缓解非酒精性脂肪肝的报道。使用无毒副作用的天然植物活性小分子5-甲氧基黄酮来改善肥胖和非酒精性脂肪肝具有重要意义。相比于目前市场上已有的高成本减脂药物，5-甲氧基黄酮具有更好的天然生物活性，来源广泛，价格低廉，极易获取，具有更小的毒副作用和更低廉的成本。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (1)

1.5-甲氧基黄酮在制备治疗高胆固醇以及脂肪肝药物中的应用，其特征在于：所述高胆固醇为高脂饮食诱导的高胆固醇；
所述的脂肪肝为高脂饮食诱导的非酒精性脂肪肝。
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