CN114609390A - 一种用于联合检测伤寒细菌IgG和IgM的试剂条 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种用于联合检测伤寒细菌IgG和IgM的试剂条，包括底板，底板上方从前往后顺次粘贴有样品垫、金标垫、NC膜和吸样垫，NC膜上从前往后依次设有IgM检测线、IgG检测线和质控线，金标垫含有伤寒H抗原‑胶体金复合物、伤寒O抗原‑胶体金复合物和兔IgG抗体‑胶体金复合物，IgM检测线上包被有鼠抗人u链单抗，IgG检测线上包被有鼠抗人IgG单抗，质控线上包被有羊抗兔IgG单抗。本发明的试纸条仅需一次加样就能实现伤寒细菌IgG和IgM的联合检测，操作简单，且大大缩短了检测时间，提高检测效率、灵敏度和特异性。
Description
技术领域
本发明涉及免疫学检测装置技术领域，特别涉及一种用于联合检测伤寒细菌IgG和IgM的试剂条。
背景技术
目前检测伤寒的方法主要是细菌培养法和肥达实验法。细菌培养法是检测伤寒细菌的金标准，但是细菌培养的周期长，检测时间需要5天以上，而且容易受到抗生素等因素的影响而导致漏检；肥达试验法中，肥达反应一般在伤寒病程第二周才出现阳性，且特异性较差、灵敏度不高，阳性率也较低。上述两种方法都存在检测时间较长、效率低下的缺陷。
发明内容
为解决上述问题，本发明提供了一种用于联合检测伤寒细菌IgG和IgM的试剂条。
本发明采用以下技术方案：
一种用于联合检测伤寒细菌IgG和IgM的试剂条，包括底板，所述底板上方从前往后顺次粘贴有样品垫、金标垫、NC膜和吸样垫，所述NC膜上从前往后依次设有IgM检测线、IgG检测线和质控线，所述金标垫含有伤寒H抗原-胶体金复合物、伤寒O抗原-胶体金复合物和兔IgG抗体-胶体金复合物，所述IgM检测线上包被有鼠抗人u链单抗，所述IgG检测线上包被有鼠抗人IgG单抗，所述质控线上包被有羊抗兔IgG单抗。
进一步地，所述底板采用聚酯板。
进一步地，所述金标垫的制备方法为：将所述伤寒H抗原-胶体金复合物、伤寒O抗原-胶体金复合物、兔IgG抗体-胶体金复合物按1:1:0.5混合后，均匀涂抹于所述NC膜上冻干3-5h。
进一步地，所述伤寒H抗原-胶体金复合物的制备方法为：按10-20μg/mL的比例往胶体金分散液中快速加入伤寒H抗原，并用搅拌器快速搅拌，反应15-30min后，按10-15μL/mL的比例快速加入封闭液，反应10-30min后，离心后弃上清液得沉淀，按100μL/mL的比例往该沉淀中加入复溶液，超声复溶，获得伤寒H抗原-胶体金复合物。
进一步地，所述伤寒O抗原-胶体金复合物的制备方法为：按10-20μg/mL的比例往胶体金分散液中快速加入伤寒O抗原单抗，并用搅拌器快速搅拌，反应15-30min后，按10-15μL/mL的比例快速加入封闭液，反应10-30min，离心后弃上清液得沉淀，用pH值7.4的20mmPB缓冲液复溶，按10-20μg/mL的比例加入伤寒O抗原，室温反应1小时，离心后弃上清液得沉淀，按100μL/mL的比例往该沉淀中加入复溶液，超声复溶，获得伤寒O抗原-胶体金复合物。
进一步地，所述兔IgG抗体-胶体金复合物的制备方法为：按5-15μg/mL的比例往胶体金分散液中快速加入兔IgG抗体，并用搅拌器快速搅拌，反应15-30min后，按10-15μL/mL的比例快速加入封闭液，反应10-30min，离心后弃上清液得沉淀，按100μL/mL的比例往该沉淀中加入复溶液，超声复溶，制成兔IgG抗体-胶体金复合物。
进一步地，所述胶体金分散液中的胶体金颗粒大小为40-60nm、浓度为0.01-0.03wt％；所述离心的条件为：转速8000-10000rpm，时间25-30min。
进一步地，所述IgM检测线的包被方法为：将鼠抗人u链单抗用包被缓冲液稀释到1-3mg/mL后进行混合包被，再于18-25℃干燥20-25h。
进一步地，所述IgG检测线的包被方法为：将鼠抗人IgG单抗用包被缓冲液稀释到1-3mg/mL后进行混合包被，再于18-25℃干燥20-25h。
进一步地，所述质控线的包被方法为：将羊抗兔IgG单抗用包被缓冲液稀释到1-3mg/mL后进行混合包被，再于18-25℃干燥20-25h。
采用上述技术方案后，本发明与背景技术相比，具有如下优点：
本发明的试纸条利用胶体金法同时检测伤寒细菌的IgG和IgM，提高检测的灵敏度和特异性；此外，本发明的试纸条仅需一次加样就能实现伤寒细菌IgG和IgM的联合检测，操作简单，且15min左右就能出现检测结果，大大缩短了检测时间，提高检测效率，节省检测费用。
附图说明
图1为本发明试纸条的结构示意图。
附图标记说明：
100、底板；200、样品垫；300、金标垫；400、NC膜；410、IgM检测线；420、IgG检测线；430、质控线；500、吸样垫。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合附图及实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
实施例
如图1所示，一种用于联合检测伤寒细菌IgG和IgM的试剂条，包括底板100，所述底板100上方从前往后顺次粘贴有样品垫200、金标垫300、NC膜400(即硝酸纤维素膜)和吸样垫500，所述NC膜400上从前往后依次设有IgM检测线410、IgG检测线420和质控线430，所述金标垫300含有伤寒H抗原-胶体金复合物、伤寒O抗原-胶体金复合物和兔IgG抗体-胶体金复合物，所述IgM检测线410上包被有鼠抗人u链单抗，所述IgG检测线420上包被有鼠抗人IgG单抗，所述质控线430上包被有羊抗兔IgG单抗。
所述样品垫200的后端搭设在所述金标垫300的前端上方，所述NC膜400的两端搭设在所述金标垫300和吸样垫500之间。
所述底板100采用聚酯板。
所述金标垫300的制备方法为：将所述伤寒H抗原-胶体金复合物、伤寒O抗原-胶体金复合物、兔IgG抗体-胶体金复合物按1:1:0.5混合后，均匀涂抹于所述NC膜400上冻干3-5h。
所述伤寒H抗原-胶体金复合物的制备方法为：按10-20μg/mL的比例往胶体金分散液中快速加入伤寒H抗原，并用搅拌器快速搅拌，反应15-30min后，按10-15μL/mL的比例快速加入封闭液，反应10-30min后，离心后弃上清液得沉淀，按100μL/mL的比例往该沉淀中加入复溶液，超声复溶，获得伤寒H抗原-胶体金复合物。
所述伤寒O抗原-胶体金复合物的制备方法为：按10-20μg/mL的比例往胶体金分散液中快速加入伤寒O抗原单抗，并用搅拌器快速搅拌，反应15-30min后，按10-15μL/mL的比例快速加入封闭液，反应10-30min，离心后弃上清液得沉淀，用pH值7.4的20mmPB缓冲液复溶，按10-20μg/mL的比例加入伤寒O抗原，室温反应1小时，离心后弃上清液得沉淀，按100μL/mL的比例往该沉淀中加入复溶液，超声复溶，获得伤寒O抗原-胶体金复合物。
所述兔IgG抗体-胶体金复合物的制备方法为：按5-15μg/mL的比例往胶体金分散液中快速加入兔IgG抗体，并用搅拌器快速搅拌，反应15-30min后，按10-15μL/mL的比例快速加入封闭液，反应10-30min，离心后弃上清液得沉淀，按100μL/mL的比例往该沉淀中加入复溶液，超声复溶，制成兔IgG抗体-胶体金复合物。
所述胶体金分散液中的胶体金颗粒大小为40-60nm、浓度为0.01-0.03wt％；所述离心的条件为：转速8000-10000rpm，时间25-30min。
所述IgM检测线410的包被方法为：将鼠抗人u链单抗用包被缓冲液稀释到1-3mg/mL后进行混合包被，再于18-25℃干燥20-25h。
所述IgG检测线420的包被方法为：将鼠抗人IgG单抗用包被缓冲液稀释到1-3mg/mL后进行混合包被，再于18-25℃干燥20-25h。
所述质控线430的包被方法为：将羊抗兔IgG单抗用包被缓冲液稀释到1-3mg/mL后进行混合包被，再于18-25℃干燥20-25h。
使用时，将待测样品液滴加到样品垫200上，在吸样垫500的引导下，待测样品液从样品垫200往吸样垫500的方向移动，途中依次经过金标垫300和NC膜400，等待约15min左右就能出现检测结果。其中，质控线430显色表示本次结果有效，否则无效；IgM检测线410或IgG检测线420显色表示该检测项目呈阳性，否则表示阴性。
以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，可轻易想到的变化或替换，都应涵盖在本发明的保护范围之内。因此，本发明的保护范围应该以权利要求的保护范围为准。
Claims (10)
1.一种用于联合检测伤寒细菌IgG和IgM的试剂条，其特征在于：包括底板，所述底板上方从前往后顺次粘贴有样品垫、金标垫、NC膜和吸样垫，所述NC膜上从前往后依次设有IgM检测线、IgG检测线和质控线，所述金标垫含有伤寒H抗原-胶体金复合物、伤寒O抗原-胶体金复合物和兔IgG抗体-胶体金复合物，所述IgM检测线上包被有鼠抗人u链单抗，所述IgG检测线上包被有鼠抗人IgG单抗，所述质控线上包被有羊抗兔IgG单抗。
2.如权利要求1所述的一种用于联合检测伤寒细菌IgG和IgM的试剂条，其特征在于：所述底板采用聚酯板。
3.如权利要求1所述的一种用于联合检测伤寒细菌IgG和IgM的试剂条，其特征在于：所述金标垫的制备方法为：将所述伤寒H抗原-胶体金复合物、伤寒O抗原-胶体金复合物、兔IgG抗体-胶体金复合物按1:1:0.5混合后，均匀涂抹于所述NC膜上冻干3-5h。
4.如权利要求3所述的一种用于联合检测伤寒细菌IgG和IgM的试剂条，其特征在于：所述伤寒H抗原-胶体金复合物的制备方法为：按10-20μg/mL的比例往胶体金分散液中快速加入伤寒H抗原，并用搅拌器快速搅拌，反应15-30min后，按10-15μL/mL的比例快速加入封闭液，反应10-30min后，离心后弃上清液得沉淀，按100μL/mL的比例往该沉淀中加入复溶液，超声复溶，获得伤寒H抗原-胶体金复合物。
5.如权利要求3所述的一种用于联合检测伤寒细菌IgG和IgM的试剂条，其特征在于：所述伤寒O抗原-胶体金复合物的制备方法为：按10-20μg/mL的比例往胶体金分散液中快速加入伤寒O抗原单抗，并用搅拌器快速搅拌，反应15-30min后，按10-15μL/mL的比例快速加入封闭液，反应10-30min，离心后弃上清液得沉淀，用pH值7.4的20mmPB缓冲液复溶，按10-20μg/mL的比例加入伤寒O抗原，室温反应1小时，离心后弃上清液得沉淀，按100μL/mL的比例往该沉淀中加入复溶液，超声复溶，获得伤寒O抗原-胶体金复合物。
6.如权利要求3所述的一种用于联合检测伤寒细菌IgG和IgM的试剂条，其特征在于：所述兔IgG抗体-胶体金复合物的制备方法为：按5-15μg/mL的比例往胶体金分散液中快速加入兔IgG抗体，并用搅拌器快速搅拌，反应15-30min后，按10-15μL/mL的比例快速加入封闭液，反应10-30min，离心后弃上清液得沉淀，按100μL/mL的比例往该沉淀中加入复溶液，超声复溶，制成兔IgG抗体-胶体金复合物。
7.如权利要求4-6任一项所述的一种用于联合检测伤寒细菌IgG和IgM的试剂条，其特征在于：所述胶体金分散液中的胶体金颗粒大小为40-60nm、浓度为0.01-0.03wt％；所述离心的条件为：转速8000-10000rpm，时间25-30min。
8.如权利要求1所述的一种用于联合检测伤寒细菌IgG和IgM的试剂条，其特征在于：所述IgM检测线的包被方法为：将鼠抗人u链单抗用包被缓冲液稀释到1-3mg/mL后进行混合包被，再于18-25℃干燥20-25h。
9.如权利要求1所述的一种用于联合检测伤寒细菌IgG和IgM的试剂条，其特征在于：所述IgG检测线的包被方法为：将鼠抗人IgG单抗用包被缓冲液稀释到1-3mg/mL后进行混合包被，再于18-25℃干燥20-25h。
10.如权利要求1所述的一种用于联合检测伤寒细菌IgG和IgM的试剂条，其特征在于：所述质控线的包被方法为：将羊抗兔IgG单抗用包被缓冲液稀释到1-3mg/mL后进行混合包被，再于18-25℃干燥20-25h。
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| CN102043050A (zh) * | 2009-10-23 | 2011-05-04 | 上海荣盛生物药业有限公司 | 乙肝病毒c抗体的体外检测方法 |
| CN112630421A (zh) * | 2021-03-05 | 2021-04-09 | 山东康华生物医疗科技股份有限公司 | 胶体金标记伤寒沙门菌重组抗原的方法、试剂条及试剂盒 |
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2022
- 2022-02-25 CN CN202210178908.6A patent/CN114609390A/zh active Pending
Patent Citations (2)
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