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CN113710256A - 使用过继细胞疗法的治疗方法 - Google Patents

使用过继细胞疗法的治疗方法 Download PDF

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CN113710256A
CN113710256A CN201980090540.4A CN201980090540A CN113710256A CN 113710256 A CN113710256 A CN 113710256A CN 201980090540 A CN201980090540 A CN 201980090540A CN 113710256 A CN113710256 A CN 113710256A
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CN
China
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cells
subject
dose
cell
lymphoma
Prior art date
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Pending
Application number
CN201980090540.4A
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Inventor
T·艾伯森
J·R·加西亚
M·吉伯
李鹤
C·萨瑟兰
N·S·特雷德
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Juno Therapeutics Inc
Original Assignee
Juno Therapeutics Inc
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Publication date
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Abstract

本文提供过继细胞疗法，其涉及施用细胞的剂量，用于治疗患有如某些B细胞恶性肿瘤的疾病和病症的受试者，以及相关的方法、组合物、用途和制品。所述细胞通常表达重组受体，如嵌合抗原受体(CAR)。在一些实施方案中，所述疾病或病症是大B细胞淋巴瘤，如弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)。还提供评估发生与细胞疗法相关的毒性的风险的方法，以及鉴定受试者的方法和基于对风险的评估治疗受试者的方法。

Description

使用过继细胞疗法的治疗方法
相关申请的交叉引用
本申请要求2018年11月30日提交的标题为“使用过继细胞疗法的治疗方法(METHODS FOR TREATMENT USING ADOPTIVE CELL THERAPY)”的美国临时申请号62/774,164、2018年12月6日提交的标题为“使用过继细胞疗法的治疗方法(METHODS FORTREATMENT USING ADOPTIVE CELL THERAPY)”的美国临时申请号62/776,415、2019年5月14日提交的标题为“使用过继细胞疗法的治疗方法(METHODS FOR TREATMENT USINGADOPTIVE CELL THERAPY)”的美国临时申请号62/847,926、2019年5月30日提交的标题为“使用过继细胞疗法的治疗方法(METHODS FOR TREATMENT USING ADOPTIVE CELLTHERAPY)”的美国临时申请号62/854,945、2019年8月22日提交的标题为“使用过继细胞疗法的治疗方法(METHODS FOR TREATMENT USING ADOPTIVE CELL THERAPY)”的美国临时申请号62/890,600和2019年11月5日提交的标题为“使用过继细胞疗法的治疗方法(METHODSFOR TREATMENT USING ADOPTIVE CELL THERAPY)”的美国临时申请号62/931,204的优先权，所述申请的内容通过引用以其整体并入。
通过引用并入序列表
本申请是与电子格式的序列表一起提交申请的。序列表以2019年11月28日创建、大小为34.2千字节的名为735042019640SeqList.txt的文件提供。将在电子格式的序列表中的信息通过引用以其整体并入。
技术领域
本公开文本在一些方面涉及过继细胞疗法，所述过继细胞疗法涉及施用细胞剂量，用于治疗患有疾病和病症(如某些B细胞恶性肿瘤)的受试者；以及相关方法、组合物、用途和制品。所述细胞通常表达重组受体，如嵌合抗原受体(CAR)。在一些实施方案中，所述疾病或病症是大B细胞淋巴瘤，如弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)。还提供评估发生与细胞疗法相关的毒性的风险的方法，以及鉴定受试者的方法和基于对风险的评估治疗受试者的方法。
背景技术
多种免疫疗法和/或细胞疗法可用于治疗疾病和病症。例如，过继细胞疗法(包括涉及施用表达对目的疾病或障碍具有特异性的嵌合受体(如嵌合抗原受体(CAR))和/或其他重组抗原受体的细胞的那些过继细胞疗法，以及其他过继免疫细胞和过继T细胞疗法)在癌症或者其他疾病或障碍的治疗中可以是有益的。需要改进的方法。提供满足此类需求的方法、用途和制品。
发明内容
本文提供治疗患有或怀疑患有疾病或病症的受试者的方法，所述疾病或病症是复发性或难治性大B细胞淋巴瘤(r/r LBCL)。在一些任何所提供的实施方案中，所述方法涉及向所述受试者施用一定剂量的CD4+和CD8+ T细胞，其中每个剂量的T细胞包含与CD19特异性结合的嵌合抗原受体(CAR)，其中：T细胞的所述剂量包含为或约1x107个CAR表达T细胞与为或约2x108个CAR表达T细胞之间，包含端值；T细胞的所述剂量包含大约1:1比率的表达CAR的CD4+ T细胞与表达CAR的CD8+ T细胞；并且所述施用包括施用多种单独组合物，其中所述多种单独组合物包含含有CD8+ T细胞的第一组合物和含有CD4+ T细胞的第二组合物。
本文还提供治疗患有或怀疑患有疾病或病症的受试者的方法，所述方法包括向所述受试者施用一定剂量的CD4+和CD8+ T细胞，所述CD4+和所述CD8+ T细胞各自单独含有与所述疾病或病症或其细胞或组织表达的和/或与所述疾病或病症相关的抗原(例如靶抗原)特异性结合的受体，其中所述施用包括施用多种单独组合物，所述多种单独组合物含有包含CD8+ T细胞的第一组合物和包含CD4+ T细胞的第二组合物。
本文还提供治疗患有或怀疑患有疾病或病症的受试者的方法，所述疾病或病症是B细胞恶性肿瘤，所述方法包括向所述受试者施用一定剂量的CD4+和CD8+ T细胞，其中每个剂量的T细胞包含与所述疾病或病症或其细胞或组织表达的和/或与所述疾病或病症相关的抗原(例如靶抗原)特异性结合的重组受体，其中所述施用包括施用多种单独组合物，所述多种单独组合物包含含有CD8+ T细胞的第一组合物和含有CD4+ T细胞的第二组合物。
本文还提供治疗患有或怀疑患有疾病或病症的受试者的方法，所述疾病或病症是大B细胞淋巴瘤，所述方法包括向所述受试者施用一定剂量的CD4+和CD8+ T细胞，其中每个剂量的T细胞包含与所述疾病或病症或其细胞或组织表达的和/或与所述疾病或病症相关的抗原(例如靶抗原)特异性结合的重组受体，其中所述施用包括施用多种单独组合物，所述多种单独组合物包含含有CD8+ T细胞的第一组合物和含有CD4+ T细胞的第二组合物。
本文提供治疗患有或怀疑患有疾病或病症的受试者的方法，所述疾病或病症是非霍奇金淋巴瘤(NHL)或大B细胞淋巴瘤，所述方法包括向所述受试者施用一定剂量的T细胞，所述剂量含有表达与NHL或大B细胞淋巴瘤表达的抗原(例如，靶抗原)特异性结合的嵌合抗原受体(CAR)的T细胞，其中：T细胞的所述剂量含有为或约1x107个CAR表达T细胞与为或约2x108个CAR表达T细胞之间，包含端值；并且T细胞的所述剂量含有CD4+和CD8+ T细胞，所述CD4+和所述CD8+ T细胞各自单独含有与所述疾病或病症或其细胞或组织表达的和/或与所述疾病或病症相关的抗原(例如靶抗原)特异性结合的受体，其中所述施用包括施用多种单独组合物，所述多种单独组合物含有包含CD8+ T细胞的第一组合物和含有CD4+ T细胞的第二组合物。
在一些任何所提供的实施方案中，T细胞的所述剂量包含限定比率的表达CAR的CD4+细胞与表达CAR的CD8+细胞和/或CD4+细胞与CD8+细胞，所述比率为大约1:1或者在大约1:3与大约3:1之间。
本文提供治疗患有疾病或病症的受试者的方法，所述疾病或病症是非霍奇金淋巴瘤(NHL)或大B细胞淋巴瘤，所述方法包括向所述受试者施用一定剂量的T细胞，所述剂量包含表达与NHL或大B细胞淋巴瘤表达的抗原(例如，靶抗原)特异性结合的嵌合抗原受体(CAR)的T细胞，T细胞的所述剂量含有限定比率的表达CAR的CD4+细胞与表达CAR的CD8+细胞和/或CD4+细胞与CD8+细胞，所述比率为大约1:1或者为1:1，其中所述施用包括施用多种单独组合物，所述多种单独组合物含有包含CD8+ T细胞的第一组合物和含有CD4+ T细胞的第二组合物。
本文还提供治疗患有疾病或病症的受试者的方法，所述疾病或病症是非霍奇金淋巴瘤(NHL)或大B细胞淋巴瘤，所述方法包括向所述受试者施用一定剂量的T细胞，所述剂量包含表达与NHL或大B细胞淋巴瘤表达的抗原(例如，靶抗原)特异性结合的嵌合抗原受体(CAR)的T细胞，其中：T细胞的所述剂量含有为或约5x107个重组受体表达T细胞与为或约1.5x108个重组受体表达T细胞之间，包含端值，所述剂量含有限定比率的表达重组受体的CD4+细胞与表达重组受体的CD8+细胞和/或CD4+细胞与CD8+细胞，所述比率为大约1:1或者为1:1；并且所述方法(1)在至少35％、至少40％或至少50％的所治疗受试者中引起完全反应(CR)和/或在至少50％、至少60％或至少70％的所治疗受试者中引起客观反应(OR)，并且(2)导致不超过50％的受试者展现高于2级的细胞因子释放综合征(CRS)和/或高于2级的神经毒性，其中所述施用包括施用多种单独组合物，所述多种单独组合物含有包含CD8+ T细胞的第一组合物和包含CD4+ T细胞的第二含有。
在一些任何所提供的实施方案中，所述方法包括向患有疾病或病症的受试者施用一定剂量的T细胞，所述疾病或病症是淋巴瘤，所述剂量含有表达与所述淋巴瘤表达的抗原(例如，靶抗原)特异性结合的嵌合抗原受体(CAR)的T细胞，其中所述受试者的淋巴瘤与中枢神经系统(CNS)受累相关或涉及中枢神经系统(CNS)受累；并且T细胞的所述剂量含有CD4+和CD8+ T细胞，其中每个剂量的T细胞包含与所述疾病或病症或其细胞或组织表达的和/或与所述疾病或病症相关的抗原(例如靶抗原)特异性结合的受体，其中所述施用包括施用多种单独组合物，所述多种单独组合物含有包含CD8+ T细胞的第一组合物和包含CD4+ T细胞的第二组合物。在一些任何所提供的实施方案中，在施用细胞的所述剂量之时或之前，所述受试者包含脑病灶，如颞叶脑病灶。在一些任何此类实施方案中，所述淋巴瘤是B细胞恶性肿瘤。在一些任何此类实施方案中，所述淋巴瘤是非霍奇金淋巴瘤(NHL)或大B细胞淋巴瘤。
本文提供一种治疗方法，所述方法涉及(a)选择患有滤泡性淋巴瘤(FL)的受试者用于治疗；(b)向所述受试者施用一定剂量的T细胞，所述剂量包含表达与FL或其细胞或组织表达的和/或与FL相关的抗原(例如，靶抗原)特异性结合的重组受体的T细胞。
在一些任何所提供的实施方案中，大B细胞淋巴瘤选自侵袭性非霍奇金淋巴瘤(NHL)、弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)(任选地DLBCL NOS(从头的或从惰性转化的))、高级别B细胞淋巴瘤(HGBCL)、双/三打击淋巴瘤、原发性纵隔大B细胞淋巴瘤(PMBCL)、套细胞淋巴瘤(MCL)、转化的滤泡性淋巴瘤(tFL)和/或滤泡性淋巴瘤(FL)(任选地3B级滤泡性淋巴瘤(FL3B))。在一些任何实施方案中，大B细胞淋巴瘤是弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)。在一些任何实施方案中，DLBCL是DLBCL NOS、从头DLBCL或从惰性淋巴瘤转化的DLBCL。在一些任何实施方案中，DLBCL是从头DLBCL。在一些任何实施方案中，DLBCL是从除了FL以外的惰性淋巴瘤转化的DLBCL。在一些任何实施方案中，DLBCL是从边缘区淋巴瘤转化的DLBCL(tMZL)或从慢性淋巴细胞白血病转化的DLBCL(tCLL；里希特氏)。在一些任何实施方案中，大B细胞淋巴瘤是高级别B细胞淋巴瘤(HGBCL)。在一些任何实施方案中，HGBCL具有MYC和BCL2和/或BCL6重排。在一些任何实施方案中，HGBCL具有DLBCL组织学。在一些任何实施方案中，大B细胞淋巴瘤是双/三打击淋巴瘤。在一些任何实施方案中，大B细胞淋巴瘤是原发性纵隔B细胞淋巴瘤(PMBCL)。在一些任何实施方案中，大B细胞淋巴瘤是套细胞淋巴瘤(MCL)。在一些任何实施方案中，大B细胞淋巴瘤不是原发性中枢神经系统淋巴瘤(PCNSL)。在一些任何实施方案中，大B细胞淋巴瘤是转化的滤泡性淋巴瘤(tFL)。在一些任何实施方案中，大B细胞淋巴瘤是滤泡性淋巴瘤(FL)。在一些任何实施方案中，FL与滤泡内CD10、BCL6和BCL2的共表达和/或t(14；18)/(q32；q21)(IGH-BCL2)和/或BCL6重排相关。在一些任何实施方案中，大B细胞淋巴瘤是3B级滤泡性淋巴瘤(FL3B)。
在一些任何实施方案中，T细胞的剂量富集CD3+ T细胞、CD4+T细胞、CD8+ T细胞或者CD4+ T细胞和CD8+ T细胞。在一些任何实施方案中，T细胞的剂量中大于或大于约70％、75％、80％、85％、90％、95％或98％的细胞是CD3+ T细胞、CD4+ T细胞、CD8+ T细胞或者CD4+ T细胞和CD8+ T细胞。在一些任何实施方案中，T细胞的所述剂量包含限定比率的表达受体的CD4+细胞与表达受体的CD8+细胞和/或CD4+ T细胞与CD8+ T细胞，所述比率为大约1:1或者在大约1:3与大约3:1之间。在一些任何实施方案中，所述限定比率为或为大约1:1。在一些任何实施方案中，T细胞的所述剂量包含一定剂量的CD4+和CD8+ T细胞，其中每个剂量的T细胞包含与FL或其细胞或组织表达的和/或与FL相关的抗原(例如，靶抗原)特异性结合的重组受体，其中所述施用包括施用多种单独组合物，所述多种单独组合物包含含有CD8+T细胞的第一组合物和含有CD4+ T细胞的第二组合物。
在一些任何所提供的实施方案中，在开始施用第二组合物之前进行第一组合物的施用的开始。在一些任何所提供的实施方案中，第一组合物的施用和第二组合物的施用是相隔不超过48小时进行的。在一些任何所提供的实施方案中，第一组合物的施用和第二组合物的施用是相隔不超过36小时、相隔不超过24小时、相隔不超过12小时、相隔不超过6小时、相隔不超过4小时、相隔不超过2小时、相隔不超过1小时或相隔不超过30分钟进行的。在一些任何所提供的实施方案中，第一组合物的施用与第二组合物的施用的进行在为或约0与为或约48小时之间、在为或约0与为或约36小时之间、在为或约0与为或约24小时之间、在为或约0与为或约12小时之间、在为或约0与为或约6小时之间、在为或约0与为或约2小时之间、在为或约0与为或约1小时之间、在为或约0与为或约30分钟之间、在为或约30分钟与为或约48小时之间、在为或约30分钟与为或约36小时之间、在为或约30分钟与为或约24小时之间、在为或约30分钟与为或约12小时之间、在为或约30分钟与为或约6小时之间、在为或约30分钟与为或约4小时之间、在为或约30分钟与为或约2小时之间、在为或约30分钟与为或约1小时之间、在为或约1小时与为或约48小时之间、在为或约1小时与为或约36小时之间、在为或约1小时与为或约24小时之间、在为或约1小时与为或约12小时之间、在为或约1小时与为或约6小时之间、在为或约1小时与为或约4小时之间、在为或约1小时与为或约2小时之间、在为或约2小时与为或约48小时之间、在为或约2小时与为或约36小时之间、在为或约2小时与为或约24小时之间、在为或约2小时与为或约12小时之间、在为或约2小时与为或约6小时之间、在为或约2小时与为或约4小时之间、在为或约4小时与为或约48小时之间、在为或约4小时与为或约36小时之间、在为或约4小时与为或约24小时之间、在为或约4小时与为或约12小时之间、在为或约4小时与为或约6小时之间、在为或约6小时与为或约48小时之间、在为或约6小时与为或约36小时之间、在为或约6小时与为或约24小时之间、在为或约6小时与为或约12小时之间、在为或约12小时与为或约48小时之间、在为或约12小时与为或约36小时之间、在为或约12小时与为或约24小时之间、在为或约24小时与为或约48小时之间、在为或约24小时与为或约36小时之间或者在为或约36小时与为或约48小时之间。
在一些任何所提供的实施方案中，第一组合物的施用和第二组合物的施用在同一天进行的，是相隔约0与约12小时之间、相隔约0与约6小时之间或相隔约0至2小时之间进行的；或者开始施用第一组合物与开始施用第二组合物是相隔约1分钟与约1小时之间或者相隔约5分钟与约30分钟之间进行的。在一些任何所提供的实施方案中，将第一组合物和第二组合物相隔不超过2小时、不超过1小时、不超过30分钟、不超过15分钟、不超过10分钟或不超过5分钟施用。
在一些任何所提供的实施方案中，CD4+ T细胞所含的受体和/或CD8+ T细胞所含的受体包括相同的重组受体和/或其中所述CD4+ T细胞和/或所述CD8+ T细胞被基因工程化以表达相同的重组受体。
在一些任何所提供的实施方案中，CD4+和CD8+ T细胞的剂量含有限定比率的表达重组受体的CD4+细胞与表达重组受体的CD8+细胞和/或CD4+细胞与CD8+细胞，所述限定比率为或为大约1:1或者在大约1:3与大约3:1之间；和/或第一和第二组合物中的一种中含有所述受体的CD4+ T细胞与第一和第二组合物中的另一种中含有所述受体的CD8+ T细胞以限定比率存在，所述限定比率为或为大约1:1或者在大约1:3与大约3:1之间；和/或在第一和第二组合物中施用的含有所述受体的CD4+ T细胞与含有所述受体的CD8+ T细胞以限定比率存在，所述比率为或为大约1:1或者在大约1:3与大约3:1之间。在一些任何所提供的实施方案中，所述限定比率为或为大约1:1。
在一些任何所提供的实施方案中，CD4+和CD8+ T细胞的剂量含有：在为或约1x107个与为或约2x108个之间的总重组受体表达T细胞，包含端值；在为或约2.5x107个与为或约1.5x108个之间的总重组受体表达T细胞，包含端值；在为或约5x107个与为或约1x108个之间的总重组受体表达T细胞，包含端值；为或约5x107个总重组受体表达T细胞；为或约1x108个总重组受体表达T细胞；或者为或约1.5x108个总重组受体表达T细胞。在一些任何此类实施方案中，CD4+和CD8+ T细胞的剂量包含为或约5x107个总重组受体表达T细胞。在一些任何此类实施方案中，CD4+和CD8+ T细胞的剂量包含为或约1x108个总重组受体表达T细胞。在一些任何此类实施方案中，CD4+和CD8+ T细胞的剂量包含为或约1.5x108个总重组受体表达T细胞。
在一些任何所提供的实施方案中，CD4+和CD8+ T细胞的剂量含有：在为或约1x107个与为或约1x108个之间的重组受体表达CD8+ T细胞，包含端值；在为或约1.25x107个与为或约7.5x107个之间的重组受体表达CD8+ T细胞，包含端值；在为或约2.5x107个与为或约5x107个之间的重组受体表达CD8+ T细胞，包含端值；为或约2.5x107个重组受体表达CD8+ T细胞；为或约5x107个重组受体表达CD8+ T细胞；或者为或约7.5x107个重组受体表达CD8+ T细胞。在一些任何此类实施方案中，CD4+和CD8+ T细胞的剂量包含为或约2.5x107个重组受体表达CD8+ T细胞。在一些任何此类实施方案中，CD4+和CD8+ T细胞的剂量包含为或约5x107个重组受体表达CD8+ T细胞。在一些任何此类实施方案中，CD4+和CD8+ T细胞的剂量包含为或约7.5x107个重组受体表达CD8+ T细胞。
在一些任何所提供的实施方案中，重组受体特异性结合至与所述疾病或病症相关的或者在与所述疾病或病症相关的病灶环境的细胞中表达的抗原。
在一些任何所提供的实施方案中，疾病或病症是癌症。在一些任何此类实施方案中，疾病或病症是B细胞恶性肿瘤。在一些任何此类实施方案中，疾病或病症是骨髓瘤、白血病或淋巴瘤。在一些任何所提供的实施方案中，疾病或病症是B细胞恶性肿瘤和/或是急性成淋巴细胞性白血病(ALL)、成人ALL、慢性成淋巴细胞性白血病(CLL)、非霍奇金淋巴瘤(NHL)或大B细胞淋巴瘤。在一些任何所提供的实施方案中，疾病或病症是大B细胞淋巴瘤。在一些任何所提供的实施方案中，疾病或病症(如大B细胞淋巴瘤)是弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)。在一些任何所提供的实施方案中，DLBCL是DLBCL非特指型(NOS)、从头DLBCL或从惰性淋巴瘤转化的DLBCL。在一些任何所提供的实施方案中，DLBCL是从头DLBCL。在一些任何所提供的实施方案中，DLBCL是从滤泡性淋巴瘤转化的DLBCL(tFL)。在一些任何所提供的实施方案中，DLBCL是从边缘区淋巴瘤转化的DLBCL(tMZL)或从慢性淋巴细胞白血病转化的DLBCL(tCLL；里希特氏)。在一些任何所提供的实施方案中，疾病或病症是原发性纵隔B细胞淋巴瘤(PMBCL)或滤泡性淋巴瘤(FL)，如3B级滤泡性淋巴瘤(FL3B)。在一些任何实施方案中，疾病或病症是滤泡性淋巴瘤(FL)。在一些任何所提供的实施方案中，NHL或大B细胞淋巴瘤选自侵袭性NHL、弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)NOS型(从头的或从惰性转化的)、原发性纵隔大B细胞淋巴瘤(PMBCL)、套细胞淋巴瘤(MCL)和/或滤泡性淋巴瘤(FL)(如3B级滤泡性淋巴瘤(FL3B))。在一些任何实施方案中，疾病或病症是滤泡性淋巴瘤(FL)。在一些任何实施方案中，其中FL与滤泡内CD10、BCL6和BCL2的共表达和/或t(14；18)/(q32；q21)(IGH-BCL2)和/或BCL6重排相关。在一些任何实施方案中，疾病或病症是套细胞淋巴瘤(MCL)。
在一些任何此类实施方案中，靶抗原是B细胞抗原。在一些任何所提供的实施方案中，抗原是CD19。
在一些任何实施方案中，在施用细胞的剂量时或紧临施用细胞的剂量的时间之前，所述受试者在用除了另一剂量的表达CAR的细胞以外的用于疾病或病症的两种、三种、四种或更多种先前疗法治疗后于缓解后已经复发，或者变得用所述先前疗法难以治疗。
在一些任何实施方案中，先前疗法包括蒽环类药物和CD20靶向剂。在一些任何实施方案中，一种或多种CD20靶向剂包括利妥昔单抗。在一些任何实施方案中，一种或多种CD20靶向剂包括R-CHOP(利妥昔单抗、环磷酰胺、盐酸多柔比星(羟基柔红霉素)、硫酸长春新碱(oncovin)和泼尼松)。
在一些任何实施方案中，先前疗法包括同种异体或自体造血干细胞移植(HSCT)。在一些任何实施方案中，受试者在接受HSCT后1年或小于1年内复发。
在一些任何实施方案中，受试者尚未响应于先前疗法实现完全缓解(CR)。
在一些任何实施方案中，在施用细胞的剂量之时或之前，受试者已经被鉴定为患有侵袭性疾病或高风险疾病或者被鉴定为具有不良预后。
在一些任何实施方案中，在施用细胞的剂量之时或之前，受试者已经在化学疗法后被鉴定为患有化疗难治性疾病或者患有持续性或复发性疾病。在一些任何实施方案中，在施用细胞的剂量之时或之前，受试者已经被鉴定为患有化疗难治性淋巴瘤，任选地化疗难治性DLBCL。
在一些任何实施方案中，在施用细胞的剂量之时或之前，受试者已经被鉴定为患有与中枢神经系统(CNS)受累相关或涉及中枢神经系统(CNS)受累的淋巴瘤或继发性CNS淋巴瘤。在一些任何实施方案中：在施用细胞的剂量之时或之前，受试者被鉴定为或已经被鉴定为患有与中枢神经系统(CNS)受累相关或涉及中枢神经系统(CNS)受累的淋巴瘤或继发性CNS淋巴瘤；和/或至少70％、至少80％、至少90％或至少95％的根据所述方法治疗并在施用细胞的剂量之时或之前展现或被鉴定为展现具有CNS受累的淋巴瘤或继发性CNS淋巴瘤的受试者实现CNS疾病的消退。
在一些任何实施方案中，受试者的年龄是65岁或更老。在一些任何实施方案中，在所治疗的受试者中，大于或大于约35％、大于或大于约40％、大于或大于约45％或大于或大于约50％或任何前述值之间的任何值的受试者的年龄是65岁或更老。在一些任何实施方案中，受试者的年龄是70岁或更老。
在一些任何实施方案中，在施用细胞的剂量之时或之前，受试者被鉴定为或已经被鉴定为患有心脏功能受损，任选地左心室射血分数(LVEF)小于或小于约50％。在一些任何实施方案中，在施用细胞的剂量之时或之前，受试者被鉴定为或已经被鉴定为患有肾功能受损，任选地计算的肌酐清除率小于或小于约60mL/min。在一些任何实施方案中，在施用细胞的剂量之时或之前，受试者被鉴定为或已经被鉴定为患有肺功能受损，任选地肺一氧化碳弥散量(DLCO)是为或约60％或更低。在一些任何实施方案中，在施用细胞的剂量之时或之前，受试者被鉴定为或已经被鉴定为患有肝功能受损，任选地天冬氨酸转氨酶(AST)和丙氨酸转氨酶(ALT)超过正常值上限(ULN)的两倍或约两倍。
在一些任何实施方案中，在施用细胞的剂量之时或之前，受试者已经在进行白细胞单采术以产生CD4+和CD8+ T细胞的剂量的时间与CD4+和CD8+ T细胞的剂量的施用之间接受桥接化学疗法。在一些任何实施方案中，在施用细胞的剂量之时或之前，受试者已经在先前疗法后接受桥接化学疗法用于疾病控制。在一些任何实施方案中，桥接化学疗法选自以下中的一种或多种：利妥昔单抗-吉西他滨+奥沙利铂、地塞米松、放射疗法、利妥昔单抗、泼尼松、BR、来那度胺、吉西他滨+奥沙利铂、维汀-本妥昔单抗、依鲁替尼、苯达莫司汀和/或吉西他滨+利妥昔单抗。
在一些任何实施方案中，受试者被鉴定为或已经被鉴定为东部肿瘤协作组体能状态(ECOG PS)为0、1或2。在一些任何实施方案中，受试者被鉴定为或已经被鉴定为东部肿瘤协作组体能状态(ECOG PS)为0或1。在一些任何实施方案中，受试者被鉴定为或已经被鉴定为东部肿瘤协作组体能状态(ECOG PS)为2。
在一些任何实施方案中，在施用细胞的剂量之前，受试者被鉴定为或已经被鉴定为所述受试者的肿瘤的尺寸乘积之和(SPD)是为或约50cm2或更大。
在一些任何所提供的实施方案中，重组受体是嵌合抗原受体(CAR)。在一些任何所提供的实施方案中，CAR含有细胞外抗原识别结构域和细胞内信号传导结构域，所述细胞外抗原识别结构域与抗原特异性结合，所述细胞内信号传导结构域含有CD3-zeta(CD3ζ)链和作为CD28或4-1BB的信号传导结构域的共刺激信号传导区。
在一些任何所提供的实施方案中，T细胞是从受试者获得的原代T细胞。在一些任何所提供的实施方案中，T细胞对于受试者是自体的。
在一些任何所提供的实施方案中，至少40％、至少50％、至少60％、至少70％的在施用细胞的剂量之时或之前患有或被鉴定为患有双/三打击淋巴瘤或者在施用自体干细胞移植(ASCT)后复发的受试者实现OR或者持续等于或大于3个月或等于或大于6个月的OR。
在一些任何所提供的实施方案中，至少35％、至少40％或至少50％的根据所述方法治疗的受试者实现完全反应(CR)：至少60％、70％、80％、90％或95％的实现CR的受试者展现持续等于或大于3个月或等于或大于6个月的CR；和/或至少60％、70％、80％、90％或95％的截至一个月和/或截至3个月实现CR的受试者在实现CR后保持反应，保持CR，和/或存活或无进展存活，持续等于或大于3个月和/或等于或大于6个月和/或等于或大于9个月；和/或至少50％、至少60％或至少70％的根据所述方法治疗的受试者实现客观反应(OR)；至少60％、70％、80％、90％或95％的实现OR的受试者展现持续等于或大于3个月或等于或大于6个月的OR；和/或至少35％、至少40％或至少50％的实现OR的受试者在实现OR后保持反应或存活，持续等于或大于3个月和/或等于或大于6个月；和/或至少40％、至少50％、至少60％、至少70％的在施用细胞的剂量之时或之前患有或被鉴定为患有双/三打击淋巴瘤或者在施用自体干细胞移植(ASCT)后复发的受试者实现OR或持续等于或大于3个月或等于或大于6个月的OR。
在一些任何所提供的实施方案中，细胞对于受试者是自体的，并且对于疗法的产生，不要求和/或指定单采术的最小绝对淋巴细胞计数(ALC)；和/或细胞是通过如下过程来产生，所述过程对于至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的患有疾病或病症的受试者或所选受试者群体，能够生成用于根据所述方法施用的细胞产物。
在一些任何所提供的实施方案中，大于或大于约50％、约60％、约70％或约80％的根据所述方法治疗的受试者不展现3级或更高级的细胞因子释放综合征(CRS)，和/或不展现3级或更高级的神经毒性，和/或大于40％或50％或55％不展现任何神经毒性或CRS。
在一些任何所提供的实施方案中，CR或OR持续大于3个月或大于6个月；和/或至少20％、至少25％、至少35％、至少40％或至少50％的根据所述方法治疗的受试者实现持续大于3个月或大于6个月的CR；和/或至少60％、70％、80％、90％或95％的用所述方法治疗并实现CR的受试者保持CR或保持反应或保持存活，持续等于或大于3个月或等于或大于6个月或等于或大于9个月；和/或至少60％、70％、80％、90％或95％的用所述方法治疗并截至一个月和/或截至3个月实现CR的受试者保持反应，保持CR，和/或存活或无进展存活，持续等于或大于3个月和/或等于或大于6个月和/或等于或大于9个月；和/或至少50％、至少60％或至少70％的根据所述方法治疗的受试者实现客观反应(OR)；至少60％、70％、80％、90％或95％的受试者实现持续等于或大于3个月或等于或大于6个月的OR；和/或至少至少35％、至少40％或至少50％的用所述方法治疗并实现OR的受试者保持反应或存活，持续等于或大于3个月和/或等于或大于6个月。
在一些任何所提供的实施方案中，在施用细胞的剂量之时或之前，受试者被鉴定为或已经被鉴定为患有与中枢神经系统(CNS)受累相关或涉及中枢神经系统(CNS)受累的淋巴瘤；和/或至少70％、至少80％、至少90％或至少95％的根据所述方法治疗并在施用细胞的剂量之时或之前展现或被鉴定为展现具有CNS受累的淋巴瘤的受试者实现CNS疾病的消退。
在一些任何所提供的实施方案中，第一组合物的施用和第二组合物的施用是相隔不超过48小时进行的。在一些任何所提供的实施方案中，第一组合物的施用和第二组合物的施用是相隔不超过36小时、相隔不超过24小时、相隔不超过12小时、相隔不超过6小时、相隔不超过4小时、相隔不超过2小时、相隔不超过1小时或相隔不超过30分钟进行的。
在一些任何所提供的实施方案中，第一组合物的施用与第二组合物的施用的进行在为或约0与为或约48小时之间、在为或约0与为或约36小时之间、在为或约0与为或约24小时之间、在为或约0与为或约12小时之间、在为或约0与为或约6小时之间、在为或约0与为或约2小时之间、在为或约0与为或约1小时之间、在为或约0与为或约30分钟之间、在为或约30分钟与为或约48小时之间、在为或约30分钟与为或约36小时之间、在为或约30分钟与为或约24小时之间、在为或约30分钟与为或约12小时之间、在为或约30分钟与为或约6小时之间、在为或约30分钟与为或约4小时之间、在为或约30分钟与为或约2小时之间、在为或约30分钟与为或约1小时之间、在为或约1小时与为或约48小时之间、在为或约1小时与为或约36小时之间、在为或约1小时与为或约24小时之间、在为或约1小时与为或约12小时之间、在为或约1小时与为或约6小时之间、在为或约1小时与为或约4小时之间、在为或约1小时与为或约2小时之间、在为或约2小时与为或约48小时之间、在为或约2小时与为或约36小时之间、在为或约2小时与为或约24小时之间、在为或约2小时与为或约12小时之间、在为或约2小时与为或约6小时之间、在为或约2小时与为或约4小时之间、在为或约4小时与为或约48小时之间、在为或约4小时与为或约36小时之间、在为或约4小时与为或约24小时之间、在为或约4小时与为或约12小时之间、在为或约4小时与为或约6小时之间、在为或约6小时与为或约48小时之间、在为或约6小时与为或约36小时之间、在为或约6小时与为或约24小时之间、在为或约6小时与为或约12小时之间、在为或约12小时与为或约48小时之间、在为或约12小时与为或约36小时之间、在为或约12小时与为或约24小时之间、在为或约24小时与为或约48小时之间、在为或约24小时与为或约36小时之间或者在为或约36小时与为或约48小时之间。
在一些任何所提供的实施方案中，第一组合物的施用和第二组合物的施用在同一天进行的，是相隔约0与约12小时之间、相隔约0与约6小时之间或相隔约0至2小时之间进行的；或者开始施用第一组合物与开始施用第二组合物是相隔约1分钟与约1小时之间或者相隔约5分钟与约30分钟之间进行的。
在一些任何所提供的实施方案中，将第一组合物和第二组合物相隔不超过2小时、不超过1小时、不超过30分钟、不超过15分钟、不超过10分钟或不超过5分钟施用。
在一些任何所提供的实施方案中，CD4+ T细胞包含的受体和/或CD8+ T细胞包含的受体包含相同的重组受体和/或其中所述CD4+ T细胞和/或所述CD8+ T细胞被基因工程化以表达相同的重组受体。
在一些任何所提供的实施方案中，淋巴瘤是B细胞恶性肿瘤。在一些任何所提供的实施方案中，淋巴瘤是非霍奇金淋巴瘤(NHL)。
在一些任何所提供的实施方案中，至少35％、至少40％或至少50％的根据所述方法治疗的受试者实现CNS疾病的完全反应(CR)或缓解；至少60％、70％、80％、90％或95％的实现CR的受试者保持CR，持续等于或大于3个月或等于或大于6个月；和/或至少60％、70％、80％、90％或95％的截至一个月和/或截至3个月实现CNS疾病的CR或缓解的受试者保持反应，保持CR，和/或存活或无进展存活，持续等于或大于3个月和/或等于或大于6个月和/或等于或大于9个月；和/或至少50％、至少60％或至少70％的根据所述方法治疗的受试者实现CNS疾病的客观反应(OR)或缓解；至少60％、70％、80％、90％或95％的实现OR的受试者，持续等于或大于3个月或等于或大于6个月；和/或至少60％、70％、80％、90％或95％的实现CNS疾病的OR或缓解的受试者保持反应或存活，持续等于或大于3个月和/或等于或大于6个月；和/或脑病灶的大小或体积减小大于或大于约25％、50％、75％或更多；和/或在至少35％、至少40％或至少50％的根据所述方法治疗的受试者中实现CNS疾病的减少或缓解或清除。
在一些任何所提供的实施方案中，大于或大于约30％、35％、40％或50％的根据所述方法治疗的受试者不展现任何等级的细胞因子释放综合征(CRS)或神经毒性；和/或至少或至少约45％、50％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％或95％的根据所述方法治疗的受试者不展现开始施用后早于3天的CRS发作，和/或不展现开始施用后早于5天的神经毒性发作；和/或根据所述方法治疗的受试者中神经毒性的中值发作位于根据所述方法治疗的受试者的CRS的中值峰处或之后，或者所述CRS的消退的中值时间之时或之后，和/或根据所述方法治疗的受试者中神经毒性的中值发作大于或大于约8、9、10或11天。
在一些任何实施方案中，与治疗前或治疗后第1个月的得分相比，在施用后第6个月或第12个月，大于或大于约25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％或60％的根据所述方法治疗的受试者的总体健康状况在欧洲研究与治疗组织核心生活质量问卷3.0版(EORTCQLQ-C30)中展现10分或更大的改进。在一些任何实施方案中，与治疗前或治疗后第1个月的得分相比，在施用后第6个月或第12个月，大于或大于约25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％或60％的根据所述方法治疗的受试者的身体功能在EORTC QLQ-C30中展现10分或更大的改进。在一些任何实施方案中，与治疗前或治疗后第1个月的得分相比，在施用后第6个月或第12个月，大于或大于约25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％或60％的根据所述方法治疗的受试者的疲劳在EORTC QLQ-C30中展现10分或更大的改进。在一些任何实施方案中，与治疗前或治疗后第1个月的得分相比，在施用后第6个月或第12个月，大于或大于约25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％或60％的根据所述方法治疗的受试者的疼痛在EORTCQLQ-C30中展现10分或更大的改进。在一些任何实施方案中，与治疗前或治疗后第1个月的得分相比，在施用后第6个月或第12个月，大于或大于约25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％或60％的根据所述方法治疗的受试者的疼痛在EORTC QLQ-C30中展现10分或更大的改进。
在一些任何实施方案中，与治疗前或治疗后第1个月的得分相比，在施用后第6个月或第12个月，根据所述方法治疗的受试者中的平均5级EuroQol-5D(EQ-5D-5L)得分相同或更大。在一些任何实施方案中，与治疗前或治疗后第1个月的得分相比，在施用后第6个月或第12个月，根据所述方法治疗的受试者中的平均EuroQol整体视觉模拟量表(EQ-VAS)得分相同或更大。
在一些任何所提供的实施方案中，在开始施用细胞的剂量之前，尚未向受试者施用能够治疗、预防、延迟、降低或减弱施用细胞的剂量后毒性的发生或毒性发生风险的药剂或治疗。
在一些任何所提供的实施方案中，所述药剂是或包含抗IL-6抗体、抗IL-6受体抗体或类固醇。在一些任何所提供的实施方案中，所述药剂是或包含托珠单抗、司妥昔单抗、地塞米松或甲基泼尼松龙。
在一些任何所提供的实施方案中，在门诊基础上和/或在不需要住院或在医院过夜停留的情况下进行施用和任何随访；并且如果受试者展现持续发热或者在用解热药治疗后没有或尚未降低或降低超过1℃的发热，则让所述受试者住院或在医院过夜停留和/或向所述受试者施用用于治疗或预防或降低或减弱神经毒性和/或细胞因子释放综合征或其风险的药剂或治疗。
在一些任何所提供的实施方案中，NHL选自侵袭性NHL、弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)NOS型(从头的或从惰性转化的)、原发性纵隔大B细胞淋巴瘤(PMBCL)、套细胞淋巴瘤(MCL)和/或滤泡性淋巴瘤(FL)(如3B级滤泡性淋巴瘤(FL3B))。在一些任何实施方案中，受试者患有滤泡性淋巴瘤(FL)。在一些任何所提供的实施方案中，NHL是DLBCL。在一些任何所提供的实施方案中，DLBCL是DLBCL非特指型(NOS)、从头DLBCL或从惰性淋巴瘤转化的DLBCL。在一些任何所提供的实施方案中，DLBCL是从头DLBCL。在一些任何所提供的实施方案中，DLBCL是从滤泡性淋巴瘤转化的DLBCL(tFL)。在一些任何所提供的实施方案中，DLBCL是从边缘区淋巴瘤转化的DLBCL(tMZL)或从慢性淋巴细胞白血病转化的DLBCL(tCLL；里希特氏)。在一些任何所提供的实施方案中，NHL是原发性纵隔B细胞淋巴瘤(PMBCL)或滤泡性淋巴瘤(FL)，如3B级滤泡性淋巴瘤(FL3B)。在一些任何实施方案中，受试者患有滤泡性淋巴瘤(FL)。
在一些任何所提供的实施方案中，受试者被鉴定为或已经被鉴定为东部肿瘤协作组体能状态(ECOG)状态为0、1或2。在一些任何实施方案中，受试者被鉴定为或已经被鉴定为东部肿瘤协作组体能状态(ECOG PS)为0或1。
在一些任何所提供的实施方案中，在施用细胞的剂量时或紧临施用细胞的剂量的时间之前，受试者在用用于疾病或病症(如大B细胞淋巴瘤或NHL)的一种或多种先前疗法治疗后于缓解后已经复发，或者变得用所述先前疗法难以治疗。在一些实施方案中，一种、两种或三种先前疗法不是另一剂量的表达CAR的细胞。
在一些任何实施方案中，在施用细胞的剂量时或紧临施用细胞的剂量的时间之前，受试者在用除了另一剂量的表达CAR的细胞以外的用于疾病或病症的一种先前疗法治疗后于缓解后已经复发，或者变得用所述先前疗法难以治疗。在一些任何实施方案中，在施用细胞的剂量时或紧临施用细胞的剂量的时间之前，受试者在用除了另一剂量的表达CAR的细胞以外的用于疾病或病症的两种或更多种先前疗法治疗后于缓解后已经复发，或者变得用所述先前疗法难以治疗。在一些任何实施方案中，在施用细胞的剂量时或紧临施用细胞的剂量的时间之前，受试者无资格或已经被鉴定为无资格进行高剂量化学疗法。在一些任何实施方案中，在施用细胞的剂量时或紧临施用细胞的剂量的时间之前，受试者无资格或已经被鉴定为无资格进行造血干细胞移植(HSCT)。在一些任何实施方案中，在施用细胞的剂量时或紧临施用细胞的剂量的时间之前，受试者无资格或已经被鉴定为无资格进行高剂量化学疗法和造血干细胞移植(HSCT)二者。
在一些任何实施方案中，受试者患有复发性/难治性NHL，并且在施用细胞的剂量时或紧临施用细胞的剂量的时间之前，受试者无资格或已经被鉴定为无资格进行高剂量化学疗法和造血干细胞移植(HSCT)二者，并且受试者在用除了另一剂量的表达CAR的细胞以外的用于疾病或病症的一种先前疗法治疗后于缓解后已经复发，或者变得用所述先前疗法难以治疗。在一些任何实施方案中，在施用细胞的剂量之时或之前：受试者患有或已经被鉴定为患有复发性或难治性大B细胞淋巴瘤；和/或受试者用或已经用蒽环类药物和一种或多种CD20靶向剂进行治疗；和/或受试者在两个或更多个治疗线后或在自体HSCT后复发或患有难治性疾病；和/或受试者被鉴定为或已经被鉴定为ECOG体能状态为1或2；和/或如果受试者已经接受了先前CD19靶向疗法，则在先前CD19靶向疗法后从受试者获得的生物样品包含表达CD19的细胞；并且细胞剂量的施用通过门诊递送进行。
在一些任何所提供的实施方案中，在施用细胞的剂量之时或之前：受试者被鉴定为或已经被鉴定为患有双/三打击淋巴瘤；和/或受试者被鉴定为或已经被鉴定为患有化疗难治性淋巴瘤，如化疗难治性DLBCL；和/或受试者尚未响应于先前疗法实现完全缓解(CR)；和/或受试者已经在接受自体干细胞移植(ASCT)后1年或小于1年内复发。
在一些任何实施方案中，在施用细胞的剂量之时或之前，受试者患有正电子发射断层摄影术(PET)阳性疾病。
在一些任何实施方案中，在施用细胞的剂量之时或之前，受试者用或已经用蒽环类药物和一种或多种CD20靶向剂进行治疗。在一些任何实施方案中，一种或多种CD20靶向剂包括利妥昔单抗。在一些任何实施方案中，一种或多种CD20靶向剂包括R-CHOP(利妥昔单抗、环磷酰胺、盐酸多柔比星(羟基柔红霉素)、硫酸长春新碱(oncovin)和泼尼松)。
在一些任何所提供实施方案中，在施用细胞的剂量之前，鉴定或选择用于施用细胞的剂量的受试者，所述受试者患有：双/三打击淋巴瘤；化疗难治性淋巴瘤，如化疗难治性DLBCL；尚未响应于用于治疗疾病或障碍(如恶性肿瘤，如NHL或大B细胞淋巴瘤)的先前疗法实现完全缓解(CR)；和/或已经在接受自体干细胞移植(ASCT)后1年或小于1年内复发；和/或患有与中枢神经系统(CNS)受累相关或涉及中枢神经系统(CNS)受累的淋巴瘤。
在一些任何实施方案中，在施用细胞的剂量之前，所提供的实施方案涉及鉴定或选择用于施用细胞的剂量的受试者，所述受试者患有滤泡性淋巴瘤(FL)，如与滤泡内CD10、BCL6和BCL2的共表达和/或t(14；18)/(q32；q21)(IGH-BCL2)和/或BCL6重排相关的FL。
在一些任何实施方案中，在施用细胞的剂量之时或之前，如果受试者已经接受了先前CD19靶向疗法，则在先前CD19靶向疗法后从受试者获得的生物样品包含表达CD19的细胞。
在一些任何实施方案中，在施用细胞的剂量之时或之前：受试者患有或已经被鉴定为患有复发性或难治性大B细胞淋巴瘤；和/或受试者用或已经用蒽环类药物和一种或多种CD20靶向剂进行治疗；和/或受试者在两个或更多个治疗线后或在自体HSCT后复发或患有难治性疾病；和/或受试者被鉴定为或已经被鉴定为ECOG体能状态为1或2；和/或如果受试者已经接受了先前CD19靶向疗法，则在先前CD19靶向疗法后从受试者获得的生物样品包含表达CD19的细胞。
在一些任何实施方案中，细胞剂量的施用通过门诊递送进行。
在一些任何实施方案中，在施用细胞的剂量之时或之前：受试者患有或已经被鉴定为患有复发性或难治性大B细胞淋巴瘤；和/或受试者用或已经用蒽环类药物和一种或多种CD20靶向剂进行治疗；和/或受试者在两个或更多个治疗线后或在自体HSCT后复发或患有难治性疾病；和/或受试者被鉴定为或已经被鉴定为ECOG体能状态为1或2；和/或如果受试者已经接受了先前CD19靶向疗法，则在先前CD19靶向疗法后从受试者获得的生物样品包含表达CD19的细胞；并且细胞剂量的施用通过门诊递送进行。
在一些任何实施方案中，在施用细胞的剂量之前，鉴定或选择用于施用细胞的剂量的受试者，所述受试者患有复发性/难治性NHL；所述受试者被鉴定为或已经被鉴定为无资格进行高剂量化学疗法和造血干细胞移植(HSCT)二者；并且所述受试者已经在用除了另一剂量的表达CAR的细胞以外的用于疾病或病症的一种先前疗法治疗后于缓解后复发，或者变得用所述先前疗法难以治疗。
在一些任何实施方案中，在施用细胞的剂量之前，鉴定或选择用于施用细胞的剂量的受试者，所述受试者是或具有：年龄为70岁或更老；和/或ECOG体能状态为2；和/或肺功能受损，任选地肺一氧化碳弥散量(DLCO)是为或约60％或更低；和/或心脏功能受损，任选地左心室射血分数(LVEF)小于或小于约50％；和/或肾功能受损，任选地计算的肌酐清除率小于或小于约60mL/min；和/或肝功能受损，任选地天冬氨酸转氨酶(AST)和丙氨酸转氨酶(ALT)超过正常值上限(ULN)的两倍或约两倍。
在一些任何实施方案中，在通过门诊递送进行细胞的剂量的施用之前，鉴定或选择用于施用细胞的剂量的受试者，所述受试者是或具有：复发性或难治性大B细胞淋巴瘤；和/或蒽环类药物和一种或多种CD20靶向剂；和/或在两个或更多个治疗线后或在自体HSCT后的复发性或难治性疾病；和/或ECOG体能状态为1或2；和/或如果受试者已经接受了先前CD19靶向疗法，则在先前CD19靶向疗法后从受试者获得的生物样品包含表达CD19的细胞。
在一些任何实施方案中，在施用前，已经用包括施用氟达拉滨和/或环磷酰胺的淋巴细胞清除疗法对受试者进行预调理。在一些任何实施方案中，所述方法还涉及紧临施用细胞的剂量之前，向受试者施用包括施用氟达拉滨和/或环磷酰胺的淋巴细胞清除疗法。
在一些任何实施方案中，细胞剂量和/或淋巴细胞清除疗法的施用通过门诊递送进行。在一些任何实施方案中，细胞剂量和/或淋巴细胞清除疗法的施用在非三级护理中心进行。在一些任何实施方案中，在施用细胞的剂量之后，在门诊环境中监测受试者，任选地通过电话联络和/或医护专业人员访视来监测。
在一些任何所提供的实施方案中，所述方法还包括向受试者施用另外的治疗剂或疗法。在一些实施方案中，另外的药剂或疗法是是除了细胞疗法以外，如除了CAR+ T细胞疗法以外的疗法。
在一些任何所提供的实施方案中，CAR包含对抗原具有特异性的细胞外抗原结合结构域、跨膜结构域、源自共刺激分子(其在一些情况下是4-1BB)的胞质信号传导结构域和源自含有ITAM的初级信号传导分子(其在一些情况下是CD3ζ)的胞质信号传导结构域；CAR按顺序包含对抗原具有特异性的细胞外抗原结合结构域、跨膜结构域、源自共刺激分子的胞质信号传导结构域和源自含有ITAM的初级信号传导分子的胞质信号传导结构域；或者CAR包含细胞外抗原识别结构域和细胞内信号传导结构域，所述细胞外抗原识别结构域与抗原特异性结合，所述细胞内信号传导结构域包含CD3-zeta(CD3ζ)链和作为CD28或4-1BB的信号传导结构域的共刺激信号传导区。
在一些任何所提供的实施方案中，抗原结合结构域是scFv。在一些任何此类实施方案中，scFv包含RASQDISKYLN(SEQ ID NO:35)的氨基酸序列、SRLHSGV(SEQ ID NO:36)的氨基酸序列和/或GNTLPYTFG(SEQ ID NO:37)的氨基酸序列和/或DYGVS(SEQ ID NO:38)的氨基酸序列、VIWGSETTYYNSALKS(SEQ ID NO:39)的氨基酸序列和/或YAMDYWG(SEQ ID NO:40)的氨基酸序列，或者其中scFv包含FMC63的可变重链区和FMC63的可变轻链区和/或FMC63的CDRL1序列、FMC63的CDRL2序列、FMC63的CDRL3序列、FMC63的CDRH1序列、FMC63的CDRH2序列和FMC63的CDRH3序列，或者与前述任一项结合相同的表位或与前述任一项竞争结合，并且在一些情况下，其中scFv按顺序包含VH、接头(其在一些情况下包含SEQ ID NO:24)和VL，和/或scFv包含柔性接头和/或包含如SEQ ID NO:43所示的氨基酸序列。
在一些任何所提供的实施方案中，共刺激信号传导区是CD28或4-1BB的信号传导结构域。在一些任何此类实施方案中，共刺激信号传导区是4-1BB的信号传导结构域。在一些任何此类实施方案中，共刺激结构域包含SEQ ID NO:12或它的具有与其至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性的变体。
在一些任何所提供的实施方案中，初级信号传导结构域是CD3ζ信号传导结构域。在一些任何此类实施方案中，初级信号传导结构域包含具有与其至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性的SEQ ID NO:13、14或15。
在一些任何所提供的实施方案中，CAR还包含跨膜结构域与scFv之间的间隔子。在一些任何此类实施方案中，间隔子是多肽间隔子，其包含免疫球蛋白铰链或所述免疫球蛋白铰链的修饰形式(在一些情况下，IgG4铰链或所述IgG4铰链的修饰形式)的全部或一部分或由其组成。
在一些任何此类实施方案中，间隔子是约15个氨基酸或更小，并且不包含CD28细胞外区域或CD8细胞外区域。在一些任何此类实施方案中，间隔子的长度是为或约12个氨基酸。在一些任何此类实施方案中，间隔子具有以下各项或由其组成：SEQ ID NO:1的序列、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:30、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:32、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:34编码的序列，或具有与前述任一项至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性的前述任一项的变体；和/或间隔子包含式X1PPX2P或由其组成，其中X1是甘氨酸、半胱氨酸或精氨酸并且X2是半胱氨酸或苏氨酸。
在一些任何所提供的实施方案中，CAR含有对抗原具有特异性的scFv、跨膜结构域、源自共刺激分子(其在一些情况下是或含有4-1BB)的胞质信号传导结构域和源自含有ITAM的初级信号传导分子的胞质信号传导结构域(其在一些情况下是或含有CD3ζ信号传导结构域)，并且在一些情况下还含有跨膜结构域与scFv之间的间隔子；CAR按顺序含有对抗原具有特异性的scFv、跨膜结构域、源自共刺激分子的胞质信号传导结构域(其在一些情况下是或包含4-1BB信号传导结构域)和源自含有ITAM的初级信号传导分子的胞质信号传导结构域(其在一些情况下是CD3ζ信号传导结构域)；或者CAR按顺序含有对抗原具有特异性的scFv、间隔子、跨膜结构域、源自共刺激分子的胞质信号传导结构域(其在一些情况下是4-1BB信号传导结构域)和源自含有ITAM的初级信号传导分子的胞质信号传导结构域(其在一些情况下是或含有CD3ζ信号传导结构域)；并且其中：间隔子是多肽间隔子，所述多肽间隔子(a)含有免疫球蛋白铰链或所述免疫球蛋白铰链的修饰形式的全部或一部分或由其组成，或者含有约15个氨基酸或更少，并且不含CD28细胞外区域或CD8细胞外区域，(b)含有免疫球蛋白铰链(其在一些情况下是IgG4铰链)或其修饰形式的全部或一部分和/或含有约15个氨基酸或更少，并且不含CD28细胞外区域或CD8细胞外区域，或者(c)长度是为或约12个氨基酸和/或含有免疫球蛋白铰链(其在一些情况下是IgG4)或其修饰形式的全部或一部分或由其组成；或者(d)具有以下各项或由其组成：SEQ ID NO:1的序列、SEQ ID NO:2、SEQ IDNO:30、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:32、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:34编码的序列，或具有与前述任一项至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性的前述任一项的变体，或者(e)含有式X1PPX2P或由其组成，其中X1是甘氨酸、半胱氨酸或精氨酸并且X2是半胱氨酸或苏氨酸；和/或共刺激结构域含有SEQ ID NO:12或它的具有与其至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性的变体；和/或初级信号传导结构域包括具有与其至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性的SEQ ID NO:13、14或15；和/或scFv含有RASQDISKYLN(SEQ ID NO:35)的氨基酸序列、SRLHSGV(SEQ ID NO:36)的氨基酸序列和/或GNTLPYTFG(SEQ ID NO:37)的氨基酸序列和/或DYGVS(SEQ ID NO:38)的氨基酸序列、VIWGSETTYYNSALKS(SEQ ID NO:39)的氨基酸序列和/或YAMDYWG(SEQ ID NO:40)的氨基酸序列，或者其中scFv包含FMC63的可变重链区和FMC63的可变轻链区和/或FMC63的CDRL1序列、FMC63的CDRL2序列、FMC63的CDRL3序列、FMC63的CDRH1序列、FMC63的CDRH2序列和FMC63的CDRH3序列，或者与前述任一项结合相同的表位或与前述任一项竞争结合，并且在一些情况下，其中scFv按顺序含有VH、接头(其在一些情况下包括SEQ ID NO:24)和VL，和/或scFv含有柔性接头和/或含有如SEQ ID NO:24所示的氨基酸序列。
在一些任何所提供的实施方案中，抗原是B细胞抗原。在一些任何此类实施方案中，抗原是CD19。在一些任何所提供的实施方案中，在施用前，已经用包括施用氟达拉滨和/或环磷酰胺的淋巴细胞清除疗法对受试者进行预调理。在一些任何所提供的实施方案中，紧临施用前，向受试者施用包括施用氟达拉滨和/或环磷酰胺的淋巴细胞清除疗法。在一些任何所提供的实施方案中，细胞剂量和/或淋巴细胞清除疗法的施用通过门诊递送进行；并且如果受试者展现持续发热或者在用解热药治疗后没有或尚未降低或降低超过1℃的发热，则让所述受试者住院或在医院过夜停留和/或向所述受试者施用用于治疗或预防或降低或减弱神经毒性和/或细胞因子释放综合征或其风险的药剂或治疗。
在一些任何所提供的实施方案中，将细胞的剂量肠胃外施用。在一些任何此类实施方案中，细胞的剂量是静脉内施用的。在一些任何所提供的实施方案中，T细胞是从受试者获得的原代T细胞。在一些任何所提供的实施方案中，T细胞对于受试者是自体的。在一些任何所提供的实施方案中，受试者是人受试者。
本文还提供制品，所述制品含有组合物，所述组合物含有表达重组受体的基因工程化细胞。在一些任何此类实施方案中，所述制品还含有根据本文所提供的任何方法施用细胞的剂量的说明书。
本文提供评估在施用细胞疗法后发生毒性的风险的方法，所述方法含有：(a)评估受试者的一个或多个参数，其中所述一个或多个参数选自来自受试者的生物样品中LDH、铁蛋白或C反应蛋白(CRP)的水平、量或浓度，或者是受试者的肿瘤的尺寸乘积之和(SPD)；其中受试者是用细胞疗法治疗的候选者，所述细胞疗法含有一定剂量的表达重组受体的基因工程化细胞；并且其中在施用所述细胞疗法之前进行所述评估，和/或所述生物样品或肿瘤不含所述重组受体和/或所述工程化细胞；以及(b)鉴定受试者是否具有毒性风险，其中如果所述一个或多个参数高于阈值水平，则所述受试者具有毒性风险，并且如果所述一个或多个参数等于或低于阈值水平，则所述受试者没有毒性风险，其中：(i)所述参数是尺寸乘积之和(SPD)，并且阈值水平高于或高于约30cm2、40cm2、50cm2、60cm2或70cm2；(ii)所述参数是LDH，并且阈值水平高于或高于约300单位/升、400单位/升、500单位/升或600单位/升；(iii)所述参数是铁蛋白，并且阈值水平高于或高于约1000纳克/毫升、2000纳克/毫升、3000纳克/毫升、4000纳克/毫升、5000纳克/毫升、6000纳克/毫升、7000纳克/毫升或8000纳克/毫升；和/或(iv)所述参数是CRP，并且阈值水平高于或高于约5毫克/升、10毫克/升、15毫克/升、20毫克/升、25毫克/升、30毫克/升、40毫克/升或50毫克/升。
还提供鉴定受试者的方法，所述方法含有：(a)评估受试者的一个或多个参数，其中所述一个或多个参数选自来自受试者的生物样品中LDH、铁蛋白或C反应蛋白(CRP)的水平、量或浓度，或者是受试者的肿瘤的尺寸乘积之和(SPD)；其中受试者是用细胞疗法治疗的候选者，所述细胞疗法含有一定剂量的表达重组受体的基因工程化细胞；并且其中在施用所述细胞疗法之前进行所述评估，和/或所述生物样品或肿瘤不含所述重组受体和/或所述工程化细胞；以及(b)鉴定在施用细胞疗法后具有发生毒性的风险的受试者，其中如果所述一个或多个参数高于阈值水平，则所述受试者具有毒性风险，并且如果所述一个或多个参数等于或低于阈值水平，则所述受试者没有毒性风险，其中：(i)所述参数是尺寸乘积之和(SPD)，并且阈值水平高于或高于约30cm2、40cm2、50cm2、60cm2或70cm2；(ii)所述参数是LDH，并且阈值水平高于或高于约300单位/升、400单位/升、500单位/升或600单位/升；(iii)所述参数是铁蛋白，并且阈值水平高于或高于约1000纳克/毫升、2000纳克/毫升、3000纳克/毫升、4000纳克/毫升、5000纳克/毫升、6000纳克/毫升、7000纳克/毫升或8000纳克/毫升；和/或(iv)所述参数是CRP，并且阈值水平高于或高于约5毫克/升、10毫克/升、15毫克/升、20毫克/升、25毫克/升、30毫克/升、40毫克/升或50毫克/升。
本文还提供治疗方法，所述方法含有：(a)评估受试者的一个或多个参数，其中所述一个或多个参数选自来自受试者的生物样品中LDH、铁蛋白或C反应蛋白(CRP)的水平、量或浓度，或者是受试者的肿瘤的尺寸乘积之和(SPD)；其中受试者是用细胞疗法治疗的候选者，所述细胞疗法含有一定剂量的表达重组受体的基因工程化细胞；并且其中在施用所述细胞疗法之前进行所述评估，和/或所述生物样品或肿瘤不含所述重组受体和/或所述工程化细胞；以及(b)鉴定受试者是否具有毒性风险，其中如果所述一个或多个参数高于阈值水平，则所述受试者具有毒性风险，并且如果所述一个或多个参数等于或低于阈值水平，则所述受试者没有毒性风险，其中：(i)所述参数是尺寸乘积之和(SPD)，并且阈值水平高于或高于约30cm2、40cm2、50cm2、60cm2或70cm2；(ii)所述参数是LDH，并且阈值水平高于或高于约300单位/升、400单位/升、500单位/升或600单位/升；(iii)所述参数是铁蛋白，并且阈值水平高于或高于约1000纳克/毫升、2000纳克/毫升、3000纳克/毫升、4000纳克/毫升、5000纳克/毫升、6000纳克/毫升、7000纳克/毫升或8000纳克/毫升；和/或(iv)所述参数是CRP，并且阈值水平高于或高于约5毫克/升、10毫克/升、15毫克/升、20毫克/升、25毫克/升、30毫克/升、40毫克/升或50毫克/升；以及(c)根据或基于所述评估的结果，向所述受试者施用所述细胞疗法。在一些任何此类实施方案中，所述方法还涉及施用能够治疗、预防、延迟、降低或减弱毒性的发生或发生风险的药剂或其他治疗。
在一些任何所提供的实施方案中，所提供方法中的参数是SPD，并且阈值水平是50cm2。在一些任何所提供的实施方案中，所提供方法中的参数是LDH，并且阈值水平是500单位/升。在一些任何所提供的实施方案中，所提供方法中的一个或多个参数是SPD和LDH，并且SPD的阈值水平是50cm2并且LDH的阈值水平是500单位/升。在一些任何所提供的实施方案中，所提供方法中的参数是铁蛋白，并且阈值水平是5000纳克/毫升。在一些任何所提供的实施方案中，所提供方法中的参数是CRP，并且阈值水平是10毫克/升。在一些任何所提供的实施方案中，所述方法中的一个或多个参数是铁蛋白和CRP，并且铁蛋白的阈值水平是5000纳克/毫升并且CRP的阈值水平是10毫克/升。
在一些任何所提供的实施方案中，所提供方法中的生物样品是血液或血浆样品。在一些任何所提供的实施方案中，所提供方法中的SPD是基于身体的CT和/或MRI成像或其他成像来测量。在一些任何所提供的实施方案中，一种或多种分析物的水平、量或浓度和/或SPD是在治疗之前、在单采术之前或在细胞产物制造之前测量。
本文还提供评估在施用细胞疗法后发生毒性的风险的方法，所述方法含有：(a)评估来自先前已经被施用含有基因工程化细胞的细胞疗法的受试者的生物样品中表达重组受体的基因工程化细胞的峰浓度；以及(b)鉴定受试者是否具有毒性风险，其中如果一个或多个参数(如基因工程化细胞的峰浓度)高于阈值水平，则所述受试者具有毒性风险，并且如果基因工程化细胞的峰浓度等于或低于阈值水平，则所述受试者没有毒性风险，其中：所述阈值水平高于或高于约300个细胞/微升、400个细胞/微升、500个细胞/微升、600个细胞/微升、700个细胞/微升、800个细胞/微升、900个细胞/微升或1000个细胞/微升。
本文还提供鉴定受试者的方法，所述方法含有：(a)评估来自先前已经被施用含有基因工程化细胞的细胞疗法的受试者的生物样品中表达重组受体的基因工程化细胞的峰浓度；以及(b)鉴定在施用细胞疗法后具有发生毒性的风险的受试者，其中如果一个或多个参数(如基因工程化细胞的峰浓度)高于阈值水平，则所述受试者具有毒性风险，并且如果基因工程化细胞的峰浓度等于或低于阈值水平，则所述受试者没有毒性风险，其中：所述阈值水平高于或高于约300个细胞/微升、400个细胞/微升、500个细胞/微升、600个细胞/微升、700个细胞/微升、800个细胞/微升、900个细胞/微升或1000个细胞/微升。
本文还提供治疗方法，所述方法含有：(a)评估来自先前已经被施用含有基因工程化细胞的细胞疗法的受试者的生物样品中表达重组受体的基因工程化细胞的峰浓度；以及(b)鉴定受试者是否具有毒性风险，其中如果一个或多个参数(如基因工程化细胞的峰浓度)高于阈值水平，则所述受试者具有毒性风险，并且如果基因工程化细胞的峰浓度等于或低于阈值水平，则所述受试者没有毒性风险，其中：所述阈值水平高于或高于约300个细胞/微升、400个细胞/微升、500个细胞/微升、600个细胞/微升、700个细胞/微升、800个细胞/微升、900个细胞/微升或1000个细胞/微升；以及(c)根据或基于所述评估的结果，向所述受试者施用所述细胞疗法。在一些任何此类实施方案中，所述方法还涉及施用能够治疗、预防、延迟、降低或减弱毒性的发生或发生风险的药剂或其他治疗。在一些任何所提供的实施方案中，所提供方法中的阈值水平是500个细胞/微升。
本文还提供进一步含有以下的方法：如果受试者被施用细胞疗法并且被鉴定为具有发生毒性的风险，则监测所述受试者的毒性症状。
在一些任何所提供的实施方案中，毒性是神经毒性或CRS。在一些任何所提供的实施方案中，毒性是1级或更高级神经毒性或CRS。在一些任何所提供的实施方案中，毒性是严重神经毒性，或者是2级或更高级神经毒性、3级或更高级神经毒性或者4级或更高级神经毒性。在一些任何所提供的实施方案中，毒性是1级或更高级神经毒性。在一些任何所提供的实施方案中，毒性是严重神经毒性或3级或更高级神经毒性。在一些任何所提供的实施方案中，毒性是严重CRS或者是2级或更高级CRS、3级或更高级CRS或者4级或更高级CRS。在一些任何所提供的实施方案中，毒性是1级或更高级CRS。在一些任何所提供的实施方案中，毒性是严重CRS或3级或更高级CRS。
本文还提供治疗方法，其中如果将受试者鉴定为具有发生毒性的风险，则向所述受试者施用：(a)(1)能够治疗、预防、延迟、降低或减弱毒性的发生或发生风险的药剂或其他治疗和(2)细胞疗法，其中所述药剂的施用要在以下时间施用：(i)在开始将细胞疗法施用至受试者之前，(ii)在开始将细胞疗法施用至受试者的一天、两天或三天内，(iii)与开始将细胞疗法施用至受试者同时，和/或(iv)在开始将细胞疗法施用至受试者之后第一次发热时；和/或(b)降低的剂量或如下剂量的细胞疗法：与施用细胞疗法后发生毒性或严重毒性的风险无关，或者在大多数受试者和/或患有所述受试者患有或怀疑患有的疾病或病症的大多数受试者中与施用细胞疗法后发生毒性或严重毒性的风险无关；和/或(c)在住院环境中和/或在住院一天或多天的情况下向受试者施用细胞疗法。在一些任何此类实施方案中，在门诊基础上或者在没有住院一天或多天的情况下以其他方式将细胞疗法施用至受试者。
在一些任何所提供实施方案中，所述药剂或其他治疗是抗IL-6抗体或抗IL-6受体抗体。在一些任何所提供的实施方案中，所述药剂或其他治疗是或含有选自以下的药剂：托珠单抗、司妥昔单抗、克拉扎珠单抗、萨瑞鲁单抗、奥洛组单抗(CDP6038)、艾西莫单抗、ALD518/BMS-945429、西鲁库单抗(CNTO 136)、CPSI-2634、ARGX-109、FE301和FM101。在一些任何所提供的实施方案中，所述药剂或其他治疗是托珠单抗。在一些任何所提供的实施方案中，所述药剂或其他治疗是或含有一种或多种类固醇。在一些任何所提供的实施方案中，类固醇是地塞米松或甲基泼尼松龙。在一些任何所提供的实施方案中，类固醇是地塞米松。在一些任何所提供的实施方案中，所述药剂或其他治疗含有血管加压药的施用。在一些任何所提供的实施方案中，所述药剂或其他治疗包括插管。在一些任何所提供的实施方案中，所述药剂或其他治疗包括透析。
在一些任何所提供的实施方案中，重组受体特异性结合至与疾病或病症相关的或者在与疾病或病症相关的病灶环境的细胞中表达的抗原(例如，靶抗原)。在一些任何此类实施方案中，抗原是B细胞抗原。在一些任何此类实施方案中，抗原是CD19。在一些任何所提供的实施方案中，疾病或病症是癌症。在一些任何所提供的实施方案中，疾病或病症是骨髓瘤、白血病或淋巴瘤。在一些任何所提供的实施方案中，疾病或病症是B细胞恶性肿瘤和/或是急性成淋巴细胞性白血病(ALL)、成人ALL、慢性成淋巴细胞性白血病(CLL)、非霍奇金淋巴瘤(NHL)或大B细胞淋巴瘤。在一些任何此类实施方案中，疾病或病症是大B细胞淋巴瘤。在一些任何所提供的实施方案中，疾病或病症(如大B细胞淋巴瘤)是弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)。在一些任何所提供的实施方案中，DLBCL是DLBCL非特指型(NOS)、从头DLBCL或从惰性淋巴瘤转化的DLBCL。在一些任何所提供的实施方案中，DLBCL是从头DLBCL。在一些任何所提供的实施方案中，DLBCL是从滤泡性淋巴瘤转化的DLBCL(tFL)。在一些任何所提供的实施方案中，DLBCL是从边缘区淋巴瘤转化的DLBCL(tMZL)或从慢性淋巴细胞白血病转化的DLBCL(tCLL；里希特氏)。在一些任何所提供的实施方案中，疾病或病症是原发性纵隔B细胞淋巴瘤(PMBCL)或滤泡性淋巴瘤(FL)，如3B级滤泡性淋巴瘤(FL3B)。在一些任何实施方案中，疾病或病症是滤泡性淋巴瘤(FL)。在一些任何实施方案中，疾病或病症是滤泡性淋巴瘤(FL)。在一些任何实施方案中，FL与滤泡内CD10、BCL6和BCL2的共表达和/或t(14；18)/(q32；q21)(IGH-BCL2)和/或BCL6重排相关。在一些任何实施方案中，疾病或病症是套细胞淋巴瘤(MCL)。
在一些任何所提供的实施方案中，重组受体是嵌合抗原受体(CAR)。在一些任何所提供的实施方案中，工程化细胞包含T细胞，如CD4+T细胞和/或CD8+ T细胞。在一些任何所提供的实施方案中，细胞疗法包括向受试者施用一定剂量的CD4+和CD8+ T细胞，其中每个剂量的T细胞包含与所述疾病或病症或其细胞或组织表达的和/或与所述疾病或病症相关的抗原(例如靶抗原)特异性结合的受体，其中所述施用包括施用多种单独组合物，所述多种单独组合物含有包含CD8+ T细胞的第一组合物和包含CD4+ T细胞的第二组合物。
在一些任何所提供的实施方案中，在开始施用第二组合物之前进行第一组合物的施用的开始。在一些任何所提供的实施方案中，第一组合物的施用和第二组合物的施用是相隔不超过48小时进行的。在一些任何所提供的实施方案中，第一组合物的施用和第二组合物的施用是相隔不超过36小时、相隔不超过24小时、相隔不超过12小时、相隔不超过6小时、相隔不超过4小时、相隔不超过2小时、相隔不超过1小时或相隔不超过30分钟进行的。
在一些任何所提供的实施方案中，CD4+ T细胞所含的受体和/或CD8+ T细胞所含的受体包括相同的重组受体和/或其中所述CD4+ T细胞和/或所述CD8+ T细胞被基因工程化以表达相同的重组受体。
在一些任何所提供的实施方案中，CD4+和CD8+ T细胞的剂量含有限定比率的表达重组受体的CD4+细胞与表达重组受体的CD8+细胞和/或CD4+细胞与CD8+细胞，所述限定比率为或为大约1:1或者在大约1:3与大约3:1之间；和/或第一和第二组合物中的一种中含有所述受体的CD4+ T细胞与第一和第二组合物中的另一种中含有所述受体的CD8+ T细胞以限定比率存在，所述限定比率为或为大约1:1或者在大约1:3与大约3:1之间；和/或在第一和第二组合物中施用的含有所述受体的CD4+ T细胞与含有所述受体的CD8+ T细胞以限定比率存在，所述比率为或为大约1:1或者在大约1:3与大约3:1之间。在一些任何所提供的实施方案中，所述限定比率为或为大约1:1。
在一些任何所提供的实施方案中，CD4+和CD8+ T细胞的剂量含有：在为或约1x107个与为或约2x108个之间的总重组受体表达T细胞，包含端值；在为或约2.5x107个与为或约1.5x108个之间的总重组受体表达T细胞，包含端值；在为或约5x107个与为或约1x108个之间的总重组受体表达T细胞，包含端值；为或约5x107个总重组受体表达T细胞；为或约1x108个总重组受体表达T细胞；或者为或约1.5x108个总重组受体表达T细胞。在一些任何此类实施方案中，CD4+和CD8+ T细胞的剂量包含为或约5x107个总重组受体表达T细胞。在一些任何此类实施方案中，CD4+和CD8+ T细胞的剂量包含为或约1x108个总重组受体表达T细胞。在一些任何此类实施方案中，CD4+和CD8+ T细胞的剂量包含为或约1.5x108个总重组受体表达T细胞。
在一些任何所提供的实施方案中，CD4+和CD8+ T细胞的剂量含有：在为或约1x107个与为或约1x108个之间的重组受体表达CD8+ T细胞，包含端值；在为或约1.25x107个与为或约7.5x107个之间的重组受体表达CD8+ T细胞，包含端值；在为或约2.5x107个与为或约5x107个之间的重组受体表达CD8+ T细胞，包含端值；为或约2.5x107个重组受体表达CD8+ T细胞；为或约5x107个重组受体表达CD8+ T细胞；或者为或约7.5x107个重组受体表达CD8+ T细胞。在一些任何此类实施方案中，CD4+和CD8+ T细胞的剂量包含为或约2.5x107个重组受体表达CD8+ T细胞。在一些任何此类实施方案中，CD4+和CD8+ T细胞的剂量包含为或约5x107个重组受体表达CD8+ T细胞。在一些任何此类实施方案中，CD4+和CD8+ T细胞的剂量包含为或约7.5x107个重组受体表达CD8+ T细胞。
在一些任何所提供的实施方案中，T细胞是从受试者获得的原代T细胞，或者对于受试者是自体的。
本文提供制品，所述制品含有组合物，所述组合物包括表达重组受体的基因工程化细胞；以及用于根据本文所提供的任何方法评估发生毒性的风险、鉴定受试者或治疗受试者的说明书。在一些任何此类实施方案中，所述制品还含有能够治疗、预防、延迟、降低或减弱毒性的发生或发生风险的药剂或其他治疗。
附图说明
图1显示经历在≥20％的受试者中发生的实验室异常和治疗中出现的不良事件(TEAE)的受试者的百分比。*：一次多器官衰竭的5级AE，与研究治疗无关，并且是由于淋巴瘤进展所致；
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一次弥漫性肺泡损伤的5级AE，研究者评估为与氟达拉滨、环磷酰胺和CAR T细胞疗法有关，在第23天发生于如下受试者中，所述受试者拒绝针对进行性呼吸衰竭进行机械通气，同时患嗜中性粒细胞减少症，使用生长因子以及广谱抗生素和抗真菌药。
图2是描绘所观察到的至CRS和神经毒性发作的时间的Kaplan meier曲线。
图3A和图3B描绘所治疗受试者的亚组之间的3个月客观反应率(ORR)。
图4A和图4B显示受试者的完整和核心群组中的反应(CR/PR、CR或PR)的持续时间和总体存活。
图5A显示在不同剂量水平下，在治疗后的不同时间点，外周血中CAR+ T细胞的药代动力学。图5B显示在反应者与无反应者之间，在治疗后的不同时间点，外周血中CAR+ T细胞的药代动力学。图5C显示在发生或未发生任何神经毒性的受试者中，在治疗后的不同时间点，外周血中CAR+ T细胞的药代动力学。
图6A显示在某些时间点，患有化疗难治性转化的DLBCL的受试者的外周血中CD3+/CAR+、CD4+/CAR+、CD8+/CAR+ T细胞的数量。图6B描绘治疗前轴向PET-CT图像，其显示右中颅窝中的颅内异常和右耳后区中皮下组织中的广泛异常。图6C是治疗后PET-CT图像，其描绘在用抗CD19 CAR+T细胞治疗后，图2B中异常的消退。图6D是治疗前的脑MRI(使用造影剂的高分辨率T1加权图像；轴向图)，其显示右中颅窝中均匀增强的肿块。图6E是治疗后MRI图像，其显示增强的肿块几乎完全消退。图6F是复发时的轴向PET-CT图像，其显示与18F-氟脱氧葡萄糖的强烈吸收相关的右后耳肿瘤复发(箭头)。图6G是PET-CT成像，其显示在切开活检和CAR+ T细胞的再扩增后，耳后肿瘤的消退。
图7显示在施用CAR+ T细胞之前，在受试者血清中测量的分析物水平，以及与神经毒性发生的相关性。
图8显示如下图，其标绘无进展时间(月)并表明最佳总体反应和反应持久性，以及在用含有表达CAR-T的CD4+和CD8+ T细胞的抗CD19细胞疗法治疗的NHL受试者的完整群组和核心群组内于单独受试者中随时间观察的单独临床结果。a：患者在第1个月实现BOR，除非另有说明；b：在2名患者中观察到淋巴瘤的CNS受累完全消退；c：一名患者在疾病进展时在活检后再扩增。
图9A描绘通过流式细胞术使用对截短的受体具有特异性的抗体所评估，表达CAR的CD3+细胞/μL血液的中值(±四分位数)数(CD3，圆形；N＝87)；或在来自已经被施用抗CD19 CAR表达细胞的87名受试者的血液样品中，通过定量聚合酶链式反应(qPCR)使用对编码CAR的载体中存在的土拨鼠肝炎病毒转录后调节元件(WPRE)具有特异性的引物所评估，整合CAR转基因的拷贝/μg基因组DNA的中值(±四分位数)数(qPCR，正方形；N＝85)。将流式细胞术中CAR+细胞检测的截止值设为CAR+门中≥25个事件，并且qPCR的检测限为≥12.5个CAR转基因拷贝/μg基因组DNA。图9B描绘在第11±3天，在来自已经被施用抗CD19 CAR表达细胞的67名受试者的血液和骨髓样品中，CD4+和CD8+CAR表达细胞/μL的相对数量。线条表示统一线，不是回归线。
图10A和图10B描绘在已经以DL1接受CAR表达T细胞的患有从头的或从惰性淋巴瘤转化的弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL，NOS；N＝27)、转化的滤泡性淋巴瘤(tFL；N＝10)、从边缘区淋巴瘤或慢性淋巴细胞白血病转化的DLBCL(tMZL/tCLL；N＝4)或套细胞淋巴瘤(MCL；N-5)的受试者亚组中，CD4+和CD8+CAR+细胞在第0天与第28天之间的中值(±四分位数)曲线下面积(AUC0-28；图10A)和最大血清浓度(Cmax；CAR+细胞/μL血液；图10B)。
图11A和图11B描绘在已经以DL1或DL2接受CAR+细胞的受试者中，CD3+、CD4+和CD8+CAR+细胞在第0天与第28天之间的中值(±四分位数)曲线下面积(AUC0-28；图11A)和最大血清浓度(Cmax；CAR+细胞/μL血液；图11B)。
图12A-图12D描绘与尚未发生CRS的受试者(无CRS)相比，在发生细胞因子释放综合征的受试者(任何CRS)中(CD4+：图12A；CD8+：图12B)，或者与尚未发生NT的受试者(无NT)相比，在发生神经毒性的受试者中(任何NT)(CD4+：图12C；CD8+：图12D)，随时间变化的表达CAR的CD4+和CD8+CAR+细胞/μL血液的中值(±四分位数)数。
图13A和图13B描绘在依照具有CR、PR或PD的最佳总体反应(BOR)或CR、PR或PD的3个月(M3)持久反应的受试者分组的受试者中，峰值CD3+CAR+细胞/μL的数量(CD3+Cmax)。
图14A描绘在来自展现高CAR+细胞扩增的受试者(CD3+Cmax>500)和展现低CAR+细胞扩增的受试者(CD3+Cmax<500)的血清样品中的淋巴细胞清除前血液分析物水平。图14B描绘在来自展现高CAR+细胞扩增的受试者(CD3+Cmax>500)和展现低CAR+细胞扩增的受试者(CD3+Cmax<500)的血清样品中的峰值血液分析物水平。
图15描绘标绘图，其描绘对于施用DL1或DL2的CAR+细胞的单独受试者，针对CD3+CAR+细胞的AUC0-28(细胞*天/μL)的淋巴细胞清除前SPD(cm2)。
图16A和图16B描绘与未发生CRS的受试者(0级CRS)相比，在发生细胞因子释放综合征的受试者(1-4级CRS)中(图16A)，或者与未发生NT的受试者(1-4级NT)相比，在发生神经毒性的受试者(0级NT)中(图16B)，血清样品中的淋巴细胞清除前血液分析物水平。单位为：铁蛋白和D-二聚体(μg/L)；CRP(mg/L)和细胞因子(pg/mL)。
图17描绘与未发生CRS的受试者(无CRS)相比，在发生细胞因子释放综合征的受试者(任何CRS)中，或者与未发生NT的受试者(无NT)相比，在发生神经毒性的受试者(任何NT)中，对指示肿瘤负荷的淋巴细胞清除前患者参数尺寸乘积之和(SPD；cm2)以及乳酸脱氢酶(LDH；U/L)水平的评估。
图18A是标绘图，其描绘在已发生神经毒性的个体(1-4级NT)或未发生NT的受试者(0级NT)中(左图)，以及在已发生CRS的个体(1-4级CRS)或未发生CRS的受试者(0级CRS)中(右图)，针对淋巴细胞清除前LDH(U/L)水平的淋巴细胞清除前SPD(cm2)。虚线表示与CRS或NT的较高比率相关的SPD(50cm2或更高)或LDH(500U/L或更高)的水平。图18B描绘基于SPD(50cm2或更高)或LDH(500U/L或更高)的水平，发生CRS或NT的优势比估计值，置信区间(CI)为95％。图18C描绘基于SPD或LDH的水平，发生CRS或NT的优势比估计值，包括针对低于阈值的值的优势比估计值，置信区间(CI)为95％。
图19描绘对于在3个月时具有持久反应的受试者与在3个月时没有反应的受试者，淋巴细胞清除前肿瘤负荷参数(SPD)和血液分析物水平。单位为：铁蛋白和D-二聚体(μg/L)；CRP和SAA-1(mg/L)和细胞因子(pg/mL)。
图20A和图20B描绘与未发生CRS的受试者(无CRS)相比，在发生细胞因子释放综合征的受试者(任何CRS)中(图20A)，或与未发生NT的受试者(无NT)相比，在发生神经毒性的受试者(任何NT)中(图20B)，血清样品中的峰值血液分析物水平。单位为：CRP(mg/L)，SAA-1(mg/L)和细胞因子(pg/mL)。
图21A描绘与具有疾病稳定(SD)或疾病进展(PD)的受试者(N＝17)的水平相比，来自具有完全反应(CR)或部分反应(PR)的最佳总体反应(BOR)的受试者(N＝57)的血清样品中的峰值血液分析物水平。图21B描绘与具有3个月反应CR/PR的受试者(N＝35)相比，来自具有SD/PD的3个月反应的受试者(N＝31)的血清样品中的峰值血液分析物水平。单位为：CRP(mg/L)，SAA-1(mg/L)和细胞因子(pg/mL)。
图22描绘在所治疗受试者的亚组之间的第3个月的客观反应率(ORR)，置信区间为95％。
对于实现CR、PR的受试者、所有显示反应的受试者、无反应者和所有所治疗受试者，图23A和图23B描绘完整群组(图23A)和核心群组(图23B)的反应持续时间(DOR)，并且图23C和图23D描绘完整群组(图23C)和核心群组(图23D)的总体存活。对于反应持续时间，中值F/U是6.3个月。
图24显示完整DLBCL群组中经历在≥20％的患者中发生的治疗中出现的不良事件(TEAE)的受试者的百分比。不包括用合规产品以DL1治疗且随访至少28天的5名患有MCL的患者的数据。b：一次与CAR+ T细胞施用无关的脓毒症休克的5级AE。c：一次弥漫性肺泡损伤的5级AE，研究者评估为与氟达拉滨、环磷酰胺和CAR+ T细胞相关，在第23天发生于一名患者中，所述患者拒绝针对进行性呼吸衰竭进行机械通气，同时患嗜中性粒细胞减少症，使用生长因子及广谱抗生素和抗真菌药。d：实验室异常。
图25显示在完整群组中，随时间变化的发生CRS或神经毒性的受试者的百分比。
图26显示箱形图，其展示在实施例8中描述的用于产生含有CAR T细胞的工程化细胞组合物的过程的不同阶段，富集CD4+和CD8+细胞的T细胞组合物的T细胞纯度。显示所述组合物中CD4+和CD8+细胞的频率(总白细胞的％)。
图27A-图27C显示箱形图，其展示高或低配制体积的治疗性细胞组合物中CD4+和CD8+CAR+ T细胞的浓度(图27A)、活力(图27B)和半胱天冬酶3阴性细胞的频率(图27C)。
图28A显示用于以DL1和DL2施用的CAR T细胞组合物中存在的CD3+CAR+ T细胞的数量。图28B显示用于以DL1和DL2施用的CAR T细胞组合物中存在的CD4+CAR+和CD8+CAR+细胞以及CD4+CAR+TNF-α+细胞和CD8+CAR+TNF-α+细胞的数量。
图29显示在实施例6中描述的研究时间点，完整DLBCL群组中经历在≥20％的受试者中发生的治疗中出现的不良事件(TEAE)的受试者的百分比。不包括用合规产品以DL1治疗且随访至少28天的6名患有MCL的受试者的数据。b：一次与CAR+ T细胞施用无关的脓毒症休克的5级AE，发生于疾病进展的环境中。c：一次弥漫性肺泡损伤的5级AE，研究者评估为与氟达拉滨、环磷酰胺和CAR+ T细胞相关，在第23天发生于一名患者中，所述患者拒绝针对进行性呼吸衰竭进行机械通气，同时患嗜中性粒细胞减少症，使用生长因子及广谱抗生素和抗真菌药。d：实验室异常。
图30描绘在所治疗受试者的亚组之间的六(6)个月客观反应率(ORR)，置信区间为95％。a包括核心群组中以所有剂量水平治疗的所有DLBCL受试者。
对于实现CR、PR的受试者、所有显示反应的受试者、无反应者和所有所治疗受试者，图31A和图31B描绘完整群组(图31A)和核心群组(图31B)的反应持续时间(DOR)，并且图31C和图31D描绘完整群组(图31C)和核心群组(图31D)的总体存活。NE，无法估计。
图32A-图32F显示各种医疗资源参数(平均住院天数、在重症监护室(ICU)中的平均天数、托珠单抗使用％和血管加压药％、插管或透析使用、平均住院时长)在按照以下分组的受试者中的使用：Cmax为等于或低于500个细胞/μL或高于500个细胞/μL CAR+细胞/μL(图32A)；SPD等于或低于50cm2或高于50cm2(图32B)；LDH等于或低于500单位/L或高于500单位/L(图32C)；CRP等于或低于10mg/L并且铁蛋白等于或低于5000ng/mL，或者CRP高于10mg/L并且铁蛋白高于5000ng/mL(图32D)，以及住院环境或门诊环境(图32E-图32F)。
图33描绘从基线至输注CAR+ T细胞组合物后6个月，受试者的平均偏好加权的健康状况得分。
图34描绘从基线至输注CAR+ T细胞组合物后6个月，受试者相对于基线的平均变化。
图35描绘从基线至输注CAR+ T细胞组合物后6个月评价的健康状态效用得分具有临床上有意义的变化的受试者的比例。
图36A-图36E显示从基线至输注CAR+ T细胞组合物后6个月，关于运动性(图36A)、自理(图36B)、日常活动(图36C)、疼痛/不适(图36D)和焦虑/抑郁(图36E)维度报告中度、严重或极端困难的患者的百分比。
图37描绘从基线至输注CAR+ T细胞组合物后6个月，受试者的平均总体健康评定得分(EQ-VAS)。
图38显示从基线至输注CAR+ T细胞组合物后6个月，受试者的EQ-VAS得分相对于基线的平均变化。
图39显示对于剂量水平1(DL1)和剂量水平2(DL2)，按照剂量水平的CAR T细胞扩增。
图40显示鉴定在CRS和NE的发作和消退的日期内的医疗资源利用(HRU)的方法。
图41显示用于在施用抗CD19 CAR表达细胞后患有复发性和难治性非霍奇金淋巴瘤的受试者的设施、药物和诊断成本。
图42显示在治疗后3个月显示完全反应(CR)或疾病进展(PD)的受试者中，治疗前肿瘤活检中的差异性基因表达谱。
图43显示在治疗后3个月与PD相关的各种富集的基因集，包括与滤泡性淋巴瘤细胞系样品(FL；FL_DLBCL_DN)相比，在弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)细胞系样品中表达更高的基因。
图44显示在FL肿瘤活检与DLBCL肿瘤活检之间的差异性基因表达。
图45A-图45B显示在FL与DLBCL肿瘤之间，示例性基因EZH2(图45A)和CD3ε(图45B)的差异性基因表达。
图46A和图46B显示在被发现在DLBCL中升高的基因(命名为“DLBCL基因集”；图46A)与在FL中升高的基因(命名为“FL基因集”；图46B)之间以及继续展现CR的受试者或继续展现PD的受试者的单样品基因集富集分析(ssGSEA)得分，并且说明，如与在DLBCL中所见的那些肿瘤基因表达谱相比，肿瘤基因表达谱与在FL中所见的那些肿瘤基因表达谱更类似的受试者在治疗后3个月更有可能显示显示CR。
图47显示按照复发性/难治性大B细胞淋巴瘤(R/R LBCL)的治疗线、疾病亚型和亚群，研究的概览图。DLBCL，弥漫性大B细胞淋巴瘤；FL3B，3B级滤泡性淋巴瘤；PMBCL，原发性纵隔大B细胞淋巴瘤；RCT，随机化对照试验；R/R，复发性/难治性；SCNSL，继发性中枢神经系统淋巴瘤；a由于在一些出版物内报道多个亚组，图中列出的研究计数超过78的总数；b“混合移植群体”包括如下研究：其中招募有资格移植的患者和无资格移植的患者二者。“混合群体”包括如下研究：其中未指定所述群体。
图48描绘进行白细胞单采术并因此用CAR+ T细胞疗法治疗的受试者，以及用于评估所有剂量水平DL1、DL1D、DL2和DL3中的结果的治疗方案的概览图。
图49A-图49C描绘可评价反应的受试者中的功效和反应结果，包括中值DOR(图49A)、具有CR的受试者中的中值PFS(图49B)和实现CR的受试者中的中值OS(图49C)。
图50A-图50B描绘在所有可评价受试者和具有反应的受试者的亚组中观察到的反应，包括客观反应率(图50A)和完全反应率(图50B)。
图51A-图51F描绘相对于无进展存活期(图51A)，按照组织学亚组(图51B)，按照桥接疗法(图51C)，按照化疗敏感性与化疗难治性状态(图51D)，按照LDC前SPD状态(图51E)，按照年龄组(图51F)，亚组中的反应持续时间，以及在患有与未患共病的受试者中的反应持续时间(图51G)。
图52A-图52B描绘评价为总体健康状况(图52A)和身体功能(图52B)从基线的平均(SE)变化的反应。
图53A-图53B描绘评价为疲劳(图53A)和疼痛(图53B)从基线的平均(SE)变化的反应。
图54A-图54D描绘可评价EORTC QLQ-C30问卷的受试者的结果，所述受试者在包括总体健康状况(图54A)、身体功能(图54B；第1个月例外)、疲劳(图54C)和疼痛(图54D)的领域中经历临床上有意义的改进、无状态变化或恶化。
图55A-图55B描绘可评价EORTC QLQ-C30问卷的受试者的反应，所述反应评价为健康状态指标得分(图55A)和EQ-VAS(图55B)从基线的平均(SE)变化。
图56描绘针对功效和客观反应评价的作为住院患者或门诊患者监测的单独受试者的结果。
图57描绘已经接受托珠单抗、托珠单抗和类固醇、仅血管加压药或仅类固醇的具有CRS、NE或CRS和NE二者的受试者的百分比。
图58描绘对于完全反应者(CR)和部分反应者(PR)，可评价反应的受试者中持续反应的概率和反应持续时间，中值随访期(95％CI)为12个月(11.2-16.7范围)。
图59描绘具有变化的临床特征的受试者中的总体反应率(ORR)和完全反应(CR)(具有95％置信区间)，所述临床特征包括年龄、LBCL亚型、桥接疗法的使用、高疾病负荷的存在、先前HSCT和继发性CNS淋巴瘤。
图60描绘通过客观反应评价的受试者的无进展存活(PFS)的概率，所述受试者包括完全反应者(CR)、部分反应者(PR)、无反应者和总平均值。
图61描绘通过客观反应评价的受试者的总体存活(OS)的概率，所述受试者包括完全反应者(CR)、部分反应者(PR)、无反应者和总平均值。
图62描绘按照组织学亚型的无进展存活期(PFS)，所述组织学亚型包括HGL、tFL、PMBCL、tiNHL和DLBCL(NOS)。
图63描绘按照研究天数，对于261名受试者，相比于CD19+B细胞，通过qPCR和流式细胞术分析的CAR+ T细胞(CD19+B细胞、CD3+截短的受体和转基因)的细胞动力学参数。
图64描绘按照研究天数，通过流式细胞术分析的CAR+ T细胞(CD3+、CD4+和CD8+截短的受体+)的细胞动力学参数。
具体实施方式
I.使用基因工程化细胞的细胞疗法的方法和用途
提供工程化细胞(例如，T细胞)和/或其组合物用于治疗患有疾病或病症的受试者的方法和用途，所述疾病或病症通常是或包括癌症或肿瘤，如白血病或淋巴瘤，最特定地B细胞恶性肿瘤或非霍奇金淋巴瘤(NHL)。在任何所提供方法的特定实施方案中，将T细胞用针对CD19的嵌合抗原受体(CAR)工程化。在一些方面，疾病或病症是B细胞淋巴瘤。在一些方面，疾病或病症是大B细胞淋巴瘤。在一些方面，疾病或病症是弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)或其亚型。在一些方面，如与某些替代性方法相比，例如，在所治疗受试者的特定组中，所述方法和用途提供或实现改进的反应和/或更持久的反应或功效和/或降低的毒性或其他副作用的风险。在一些实施方案中，所述方法由于以下而是有利的：施用指定数量或相对数量的工程化细胞，施用限定比率的特定类型的细胞，治疗特定患者群体(如具有特定风险状况、分期和/或先前治疗史的那些)，和/或其组合。
还提供包括评估可能与毒性的发生相关联的特定参数(例如，特定生物标记或分析物的表达)的方法，以及用于治疗(例如，干预疗法)以预防和/或改善毒性的方法。还提供涉及评估可能与结果相关联的特定参数(例如，特定生物标记或分析物的表达)的方法，所述结果如治疗结果，包括反应，如完全反应(CR)或部分反应(PR)，其在一些情况下是持久反应，如持续至少3个月、6个月或更久的反应；或安全性结果，如在施用免疫疗法和/或细胞疗法后毒性(例如，神经毒性或CRS)的发生。还提供基于对所述参数(如生物标记或分析物的表达)的评估来评估反应的可能性和/或毒性风险的可能性的方法。还提供用于细胞疗法中的组合物。还提供例如用于本文所提供方法中的制品和试剂盒。在一些实施方案中，制品和试剂盒还含有根据本文所提供方法的使用说明书。
在一些实施方案中，所述方法和用途包括向受试者施用过继细胞疗法中表达基因工程化(重组)细胞表面受体的细胞，所述基因工程化(重组)细胞表面受体通常是嵌合受体，如嵌合抗原受体(CAR)，所述受体识别由白血病或淋巴瘤和/或衍生出所述白血病或淋巴瘤的细胞类型表达的、与白血病或淋巴瘤和/或衍生出所述白血病或淋巴瘤的细胞类型相关的和/或为白血病或淋巴瘤和/或衍生出所述白血病或淋巴瘤的细胞类型特有的抗原。所述细胞通常在配制用于施用的组合物中施用；所述方法通常涉及将一个或多个剂量的细胞施用至受试者，所述一个或多个剂量可以包括特定数量或相对数量的细胞或工程化细胞，和/或组合物内两种或更多种亚型(如CD4与CD8T细胞)的限定比率或组合物。
在一些实施方案中，将细胞、群体和组合物施用至患有要治疗的特定疾病或病症的受试者，例如通过过继细胞疗法，如过继T细胞疗法。在一些实施方案中，所述方法涉及用一定剂量的抗原受体表达细胞(例如CAR表达细胞)治疗患有淋巴瘤或白血病或B细胞恶性肿瘤(如大B细胞淋巴瘤或非霍奇金淋巴瘤(NHL))的受试者。
在一些实施方案中，所提供的方法涉及治疗受试者的特定组或子集，例如，被鉴定为患有高风险疾病(例如，高风险NHL或高风险大B细胞淋巴瘤)的受试者。在一些方面，所述方法治疗患有某种形式的侵袭性和/或不良预后B细胞非霍奇金淋巴瘤(NHL)(如对标准疗法是复发性或是难治性(R/R)和/或具有不良预后的NHL)的受试者。在一些方面，所述方法治疗患有对于标准疗法是复发性或是难治性(R/R)的大B细胞淋巴瘤的受试者。在一些情况下，对于疗法适用的疾病和/或患者群体，对可用疗法、对护理标准(SOC)或对参考疗法的总体反应率(ORR；在一些情况下也称为客观反应率)小于40％，和/或完全反应(CR；在一些情况下也称为完全缓解)小于20％。在一些实施方案中，在化疗难治性DLBCL中，使用参考或可用治疗或护理标准疗法的ORR为约26％，并且CR率为约8％(Crump等人Outcomes inrefractory aggressive diffuse large B-cell lymphoma(DLBCL):Results from theinternational SCHOLAR study.ASCO 2016[摘要7516])。在一些方面，所提供的方法、组合物、用途和制品实现改进的且优越的对可用疗法的反应。在一些实施方案中，改进的或优越的反应是针对当前护理标准(SOC)。在一些实施方案中，用于治疗B细胞恶性肿瘤(如B细胞NHL、非霍奇金淋巴瘤(NHL))的当前SOC包括在有反应的受试者中施用多达3个周期的利妥昔单抗、地塞米松、阿糖胞苷(AraC)和顺铂(R-DHAP)；利妥昔单抗、异环磷酰胺、卡铂和依托泊苷(R-ICE)；或者利妥昔单抗、吉西他滨、地塞米松和顺铂(R-GDP)，之后施用卡莫司汀、依托泊苷、阿糖胞苷和美法仑(BEAM)高剂量化学疗法和造血干细胞移植(HSCT)(参见例如，Crump等人,J Clin Oncol.2014；32(31):3490-6；Gisselbrecht,等人,J ClinOncol.2010；28(27):4184-90；van Imhoff等人,J Clin Oncol.2017；35(5):544-51)。
大B细胞淋巴瘤(LBCL)是非霍奇金淋巴瘤(NHL)的最常见亚型。一线治疗在大约60％的受试者中是治愈性的；然而，大约30％的受试者复发并且大约10％是一线治疗难治的。用于患有复发性/难治性(R/R)疾病的受试者的治疗选择，尤其作为三线或更多线(3L+)疗法，主要包括补救性化学疗法(CT)。已经批准两种嵌合抗原受体(CAR)T细胞产品和抗体-药物缀合物作为三线疗法。基于对LBCL受试者中临床结果的证据的系统性文献综述(SLR)(包括上文列出的新疗法)来鉴定在用于R/R LBCL的第二线和更多线(2L+)或3L+疗法内未满足的医疗需求。
基于筛选8683条数据库记录和另外的来源的根据Cochrane干预措施系统评价手册(Cochrane Handbook for Systematic Reviews of Interventions)和欧盟医疗技术评估(European Union Health Technology Assessment)要求进行的示例性SLR，鉴定了103个出版物，其覆盖78项独特研究。所述综述鉴定R/R LBCL内的随机化和非随机化/观察性研究，包括弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、3B级滤泡性淋巴瘤(FL3B)、原发性纵隔大B细胞淋巴瘤(PMBCL)、从惰性淋巴瘤转化的DLBCL和具有继发性中枢神经系统(SCNS)受累的R/RDLBCL。所综述的来源包括EMBASE、MEDLINE、Cochrane图书馆(The Cochrane Library)和临床讨论会(ASCO、ESMO、EHA、ASH、ICML、AACR和EORTC)。表示SLR的示例性示意图描绘于图47中。通过治疗线和R/R LBCL亚型来表征所鉴定的研究。描述了从所鉴定研究观察到的OS、PFS、DOR、OR和安全性。疾病亚型、受试者合格标准和随访长度在研究之间显著变化。
基于示例性SLR，在3L+群体中，11种补救性CT和2种CAR T细胞疗法研究报道存活结果。使用补救性CT，在研究中所报道的ORR的范围为0％至54％，而CR的范围为5.6％-31％。中值OS(mOS)的范围在3-9个月之间，一项离群研究报道mOS为20个月。在补救性CT研究内报道的中值PFS(mPFS)的范围为2-6个月。在CAR T细胞疗法中，用抗CD19 CAR T细胞疗法治疗的受试者(n＝101)报告在27.1个月的中值随访期后，CR率为58％且中值DOR(mDOR)为11.1个月。mPFS为5.9个月且未达到mOS。在19.3个月的中值随访期时，用另一种抗CD19CAR T细胞疗法治疗的受试者(n＝115)的CR为40％，但未达到mDOR。所有输注的患者的mOS为11.1个月。
在2L+有资格移植的群体(36项研究)中，接受高剂量CT+HSCT的受试者实现在9个月至5年之间的mOS。在无资格移植的群体中，16项研究报道mOS在3-20个月之间。涉及有资格和无资格混合移植的群体的研究(30项研究)报道mOS为1-17个月。
发现具有有限样本量的几项研究报道LBCL亚型(例如，PMBCL、SCNS淋巴瘤、从非FL惰性淋巴瘤转化的DLBCL、FL3B)中的结果。在3L+环境中，1项研究报道，在6.6个月的中值后，未达到mOS。在2L+环境中，4项研究报道范围分别在2-9个月之间和10-16个月之间的mPFS和mOS结果。
评估补救性化学疗法在R/R LBCL、嗜中性粒细胞减少症、白细胞减少症、血小板减少症和感染中的安全性的研究包括最常报道的不良事件(AE)，且嗜中性粒细胞减少症的报道最多。在报道CAR T细胞疗法的安全性结果的3项研究中，数据表明，血液学AE(可能与淋巴细胞清除CT有关)、细胞因子释放综合征和神经毒性的报道最多。
基于示例性研究，少于50％的患有复发性/难治性大B细胞淋巴瘤(LBCL)的患者实现对三线或后续治疗的反应(Van Den Neste等人Bo ne Marrow Transplant.2016；51:51-7；Gonzalez-Barca E等人Bone Marrow Transplant 2019)。在患有化疗敏感性疾病的有资格移植的患者中，使用自体造血干细胞移植(HSCT)的高剂量化学疗法在首次复发时保持标准治疗(National Comprehensive Cancer Network Clinical Practice Guidelines inOnc ology.2019年3月6日)，但是大多数患者不会被这种方法治愈(Van Den Ne ste等人Bone Marrow Transplant.2016；51:51-7；Gonzalez-Barca E等人Bon e MarrowTransplant 2019,National Comprehensive Cancer Network Clinic al PracticeGuidelines in Oncology.2019年3月6日,Gisselbrecht C等人J Clin Oncol.2010；28:4184-90)。在一些研究中，在患有化疗难治性疾病的受试者中结果更差，对常规治疗的完全反应(CR)率为7％并且总体存活期(OS)为6个月。(Crump等人Blood.2017；130:1800-8)。不良结果与年龄较大、中枢神经系统(CNS)受累(Thanarajasingam等人Br J Haematol.2018；183:149-52；Nabhan等人J Clin Oncol.2018；36:7545)和共病(Pfreundschu hBlood.2010；116:5103-10)相关。
某些针对CD19的CAR-T细胞疗法可用于治疗B细胞淋巴瘤，包括axicabtageneciloleucel(axi-cel)和tisagenlecleucel。在一项示例性研究中，axi-cel治疗的受试者实现54％的CR率(根据研究者)，且40％为持久缓解(中值随访期，15.4个月)(Neelapu等人NEngl Med.2017.377；2531-44)。大多数受试者发生CRS(93％)和NE(64％)，到发作的中值时间分别为2天和5天，并且≥3级的CRS(Lee分级标准(Lee等人Blood.2014；124:188-95))和NE分别发生在13％和28％受试者中，并且43％接受托珠单抗(27％接受皮质类固醇)。在另一项示例性研究中，大约三分之一的接受tisagenlecleucel的患者在1年时维持持久缓解(Schuster等人N Engl J Med.2019.380:45-56)。大多数受试者(58％)发生CRS，而21％具有NE。分别在22％和12％的患者中报道≥3级的CRS(Penn分级标准,Porter等人J HematolOncol.2018；11:35)和NE(Schuster等人N Engl J Med.2019.380:45-56)。此外，这些疗法不包括对某些高风险患者的治疗，所述高风险患者包括患有PMBCL、从除了FL以外的惰性淋巴瘤转化的DLBCL、FL3B的患者，以及具有某些高风险特征(如继发性CNS淋巴瘤、中度肾脏/心脏共病和对桥接疗法的需要)的患者。
SLR和当前证据的检查显示对另外的治疗选择的重要的且未满足的高需求，所述另外的治疗选择提供有利的收益/风险和持久反应，所述需求是用于患有2L+和3L+LBCL的受试者的可用疗法未满足的。另外，对于更罕见的LBCL亚型，可用的数据有限。这些发现揭示了必须解决的对R/RLBCL的重要治疗缺口，以及对改进现有治疗的需要。本文提供可以满足此类需要的实施方案。
在一些实施方案中，所述方法、用途和制品涉及或用于治疗受试者，所述方法、用途和制品涉及例如基于特定疾病类型、诊断标准、先前治疗和/或对先前治疗的反应来选择或鉴定受试者的特定组或子集。在一些实施方案中，所述方法涉及治疗在用一种或多种先前疗法治疗后于缓解后复发或变得用所述先前疗法难以治疗的受试者；或者对一种或多种先前疗法(例如，一个或多个标准治疗线)具有复发性或难治性(R/R)的受试者。
在一些实施方案中，受试者患有B细胞恶性肿瘤，如B细胞淋巴瘤和/或非霍奇金淋巴瘤(NHL)。在一些实施方案中，受试者患有B细胞恶性肿瘤，如大B细胞淋巴瘤，例如，复发性/难治性(R/R)大B细胞淋巴瘤。在一些实施方案中，受试者患有大B细胞淋巴瘤，如弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)(例如，DLBCL非特指型(NOS；从头的或从惰性转化的)或其他DLBCL)。在一些实施方案中，受试者患有原发性纵隔B细胞淋巴瘤(PMBCL)或滤泡性淋巴瘤，如3B级滤泡性淋巴瘤(FL3B)。在一些方面，B细胞淋巴瘤是或包括弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、滤泡性淋巴瘤或PBMCL。在一些方面，受试者患有DLBCL，其为DLBCL非特指型(NOS)。在一些实施方案中，淋巴瘤(如DLBCL)是从头的。在一些实施方案中，淋巴瘤(如DLBCL)是从另一种惰性淋巴瘤转化的。在一些实施方案中，淋巴瘤(如DLBCL)是从滤泡性淋巴瘤转化的(tFL)。在一些任何实施方案中，受试者患有滤泡性淋巴瘤(FL)。
在特定实施方案中，本文提供的方法是基于施用针对CD19的CAR T细胞疗法，其中CAR含有针对CD19的scFv抗原结合结构域(例如来自FMC63)。CAR还含有包含来自CD3ζ的信号传导结构域的细胞内信号传导结构域，并且还掺入4-1BB共刺激结构域，所述4-1BB共刺激结构域与相比于含有CD28的构建体，CRS和NE的较低发生率相关(Lu等人J ClinOncol.2018；36:3041)。在一些实施方案中，本文提供的方法包括CD8+和CD4+ T细胞子集，所述子集在体外单独转导并扩增，并且以相等(约1:1)目标剂量施用。在一些实施方案中，所施用的总T细胞剂量和CD8+CAR+ T细胞剂量中的变化性较低，所述两个参数在先前研究中与增加的毒性相关(Neelapu等人N Engl Med.2017.377；2531-44；Turtle等人SciTransl Med.2016；8:355ra116；Hay等人Blood.2017；130:2295-306)。
在特定实施方案中，所提供的方法可以用于治疗特定LBCL亚型或高风险组，如老年患者和患有共病或CNS受累的那些，其中可用的治疗选择仍然有限。例如，现有CAR T细胞疗法与严重的CAR T细胞有关毒性相关，所述毒性包括细胞因子释放综合征(CRS)和神经病学事件(NE)，这可能限制施用至专门化治疗中心(Yescarta Risk Evaluation andMitigation Strategy(REMS).Gilead Pharma 2019年9月10日；Kymriah Risk Evaluationand Mitigation Strategy(REMS)Novartis 2019年9月10日)并影响在难以治疗的患者中的使用。具有有利的收益/风险的CAR T细胞疗法(特别是具有高功效以及严重CRS和NE的低发生率的那些)可以允许更宽的纳入受试者亚组和门诊施用/监测。
在特定实施方案中，所提供的方法在患有LBCL的受试者中，包括在先前从使用其他疗法(包括其他抗CD19 CAR-T细胞疗法)的治疗排除的某些受试者中，得到有利的结果。在本文所示的受试者组中在患有LBCL的受试者中用针对CD19的CAR T细胞治疗导致持久反应，包括与增加的体内CAR T细胞扩增相关的反应，并且CAR T细胞在输注后长期持续存在。在一些实施方案中，所提供的方法在深度预治疗的患有侵袭性高风险疾病的患者(包括具有化疗难治性或需要用桥接疗法立即治疗用于疾病控制的患者)中显示有利的结果。本文中的观察支持根据所提供的方法用针对CD19的CAR T细胞疗法治疗患有侵袭性高风险疾病的受试者。例如，可以根据所提供的方法治疗患有PMBCL、从除了FL以外的惰性淋巴瘤转化的DLBCL、FL3B的受试者以及具有某些高风险特征(如继发性CNS淋巴瘤、中度肾脏/心脏共病和对桥接疗法的需要)的患者。在一些实施方案中，所提供的方法可以用于治疗已经被深度预治疗(例如用两种、三种或更多种先前疗法用于治疗疾病)的受试者。可以通过所提供的方法治疗的亚组还包括年龄大于或等于65岁的较老亚组，包括>75岁的那些。本文中的观察显示，在所有亚组中观察到ORR和CR(包括持久反应)，且严重CRS和NE的发生率低。
在一些实施方案中，通过本文提供的方法治疗的所有受试者中少于一半发生CRS或NE。在一些实施方案中，≥3级的CRS和NE的发生率较低(分别为2％和10％)，并且在如实施例中所述治疗的受试者组中未发生致死的CRS或NE。在一些实施方案中，CRS和NE的低总体发生率和严重程度以及它们的晚发作(中值分别为5天和9天)支持所选受试者的门诊施用/监测。在一些实施方案中，在门诊环境中接受CAR T细胞组合物的受试者的安全性和功效结果与整个治疗群体类似。在一些实施方案中，嵌合抗原受体(CAR)T细胞疗法通常限于在大学医疗中心进行住院治疗；然而，美国大多数患有复发性/难治性(R/R)弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)的患者在非大学医疗中心接受治疗，其中癌症疗法的门诊递送是常见的。在本文提供的任何方法的一些实施方案中，在门诊环境中输注和管理CAR T细胞疗法导致在社区/非大学中心的更广泛利用和改进的可及性。
在一些实施方案中，在此项研究中，用本文提供的任何方法治疗在患有高风险侵袭性复发性/难治性LBCL的受试者中导致高持久CR率以及严重CRS和NE的低发生率。在一些实施方案中，在具有未满足的医疗需求的受试者亚组(包括罕见的LBCL组织学亚型和具有不良预后特征的那些)中观察到临床上有意义的活性。在一些实施方案中，严重CRS和NE的低发生率和到发作的较晚时间允许门诊施用/监测。在一些实施方案中，本文提供的任何方法的独特风险/收益概况可以允许更多地纳入患者和潜在的护理地点。
在一些实施方案中，所述方法涉及治疗东部肿瘤协作组体能状态(ECOG)为0-1或0-2的受试者。在一些实施方案中，所述方法治疗DLBCL患者的不良预后群体或其通常对疗法或特定参考疗法反应较差的受试者，所述DLBCL患者如具有一个或多个(如两个或三个)染色体易位者(如所谓的“双打击”或“三打击”淋巴瘤；具有易位MYC/8q24基因座，通常与t(14；18)(q32；q21)bcl-2基因或/和BCL6/3q27染色体易位组合；参见例如，Xu等人(2013)Int J Clin Exp Pathol.6(4):788-794)，和/或在使用自体干细胞移植(ASCT)后复发(如在12个月内复发)者，和/或已经被认为化疗难治者。
在一些方面，所提供的实施方案是基于如下观察：与用于细胞疗法的某些可用方法相比，所提供的方法可以用于实现具有高持久性的高反应率，而不增加毒性风险。在一些实施方案中，所提供的方法允许延长用于细胞疗法的过继转移细胞的持久性，和/或在受试者中的低毒性发生率。在一些实施方案中，所述方法可以用于选择受试者用于用细胞疗法治疗，所述受试者可能或更可能对所述疗法反应，和/或用于确定适当剂量或给药方案以获得更高反应率和/或更持久反应，同时使毒性风险降至最低。在一些方面，所提供的实施方案是基于如下观察：展现改进的反应(如完全反应(CR))的受试者展现的基因表达模式与相比于弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)更类似于滤泡性淋巴瘤(FL)的那些的基因表达模式相关。所提供的实施方案和此类方法可以告知合理策略以促进过继细胞疗法(如CAR-T细胞疗法)的安全且有效的临床应用。
在一些方面，受试者患有无资格移植的(TNE)淋巴瘤，例如，受试者无资格进行高剂量化学疗法和造血干细胞移植(HSCT)。在一些实施方案中，受试者患有TNE复发性/难治性(R/R)侵袭性大B细胞NHL。在一些方面，使用免疫化学疗法的一线疗法已经失败并且无资格进行高剂量化学疗法和造血干细胞移植(HSCT)的患有R/R侵袭性大B细胞NHL的受试者具有不良预后。在一些方面，这些受试者的可用治疗选择包括基于铂/吉西他滨或基于苯达莫司汀的方案与利妥昔单抗的组合，进行或不进行放射疗法。然而，在一些方面，可用疗法的长期结果由于缺少治愈性选择而保持较差。所提供的方法提供对此类受试者的改进治疗。
在一些实施方案中，所提供的实施方案提供改进健康相关的生活质量(HRQoL)，如接受所提供的CAR表达T细胞疗法的受试者所报告。在一些方面，在治疗过程期间的早期，例如，在施用的1个月内，受试者仍然可以从细胞疗法的施用和与所述施用相关的不良事件(例如，毒性)恢复。已经观察到，所提供的细胞疗法的方法和用途导致患者报告的HRQoL的显著改进，特别在长期过程中(例如，在12个月或施用细胞疗法后)。对于各种受试者，所提供的方法提供改进的治疗结果，包括改进的HRQoL。
在一些实施方案中，抗原受体(例如CAR)特异性结合至与疾病或病症相关(如与B细胞恶性肿瘤(如大B细胞淋巴瘤或NHL)相关)的靶抗原。在一些实施方案中，与疾病或病症相关的抗原选自CD20、CD19、CD22、ROR1、CD45、CD21、CD5、CD33、Igκ、Igλ、CD79a、CD79b或CD30。在一些实施方案中，与疾病或障碍(如B细胞恶性肿瘤，如大B细胞淋巴瘤)相关的抗原是CD19。
在一些实施方案中，所述方法包括能够治疗、预防、延迟、降低或减弱毒性的发生或发生风险的药剂或其他治疗用于在施用细胞疗法后降低毒性的方法中，其中所述方法包括(a)评估受试者的一个或多个参数，其中所述一个或多个参数选自来自受试者的生物样品中铁蛋白或C反应蛋白(CRP)的水平、量或浓度；其中所述受试者是用细胞疗法治疗的候选者，所述细胞疗法包括一定剂量的表达重组受体的基因工程化细胞；并且其中在施用所述细胞疗法之前进行所述评估，和/或所述生物样品或肿瘤不包含所述重组受体和/或所述工程化细胞；(b)鉴定受试者是否具有毒性风险，其中如果所述一个或多个参数高于阈值水平，则所述受试者具有毒性风险，并且如果所述一个或多个参数等于或低于阈值水平，则所述受试者没有毒性风险，(c)根据或基于所述评估的结果，向所述受试者施用所述细胞疗法。
在一些实施方案中，所述方法包括用于治疗方法中的细胞疗法，其中所述方法包括向受试者施用所述细胞疗法，其中所述受试者已经被鉴定为具有发生毒性的风险，其中鉴定所述受试者包括：(a)评估受试者的一个或多个参数，其中所述一个或多个参数选自来自受试者的生物样品中、受试者的肿瘤中LDH、铁蛋白或C反应蛋白(CRP)的水平、量或浓度；其中所述受试者是用细胞疗法治疗的候选者，所述细胞疗法包括一定剂量的表达重组受体的基因工程化细胞；并且其中在施用所述细胞疗法之前进行所述评估，和/或所述生物样品或肿瘤不包含所述重组受体和/或所述工程化细胞；以及(b)鉴定受试者是否具有毒性风险，其中如果所述一个或多个参数高于阈值水平，则所述受试者具有毒性风险，并且如果所述一个或多个参数等于或低于阈值水平，则所述受试者没有毒性风险，其中：(i)所述参数是铁蛋白，并且阈值水平高于或高于约1000纳克/毫升、2000纳克/毫升、3000纳克/毫升、4000纳克/毫升、5000纳克/毫升、6000纳克/毫升、7000纳克/毫升或8000纳克/毫升；和/或(ii)所述参数是CRP，并且阈值水平高于或高于约5毫克/升、10毫克/升、15毫克/升、20毫克/升、25毫克/升、30毫克/升、40毫克/升或50毫克/升；并且其中(c)根据或基于所述评估的结果，向所述受试者施用所述细胞疗法以及任选地能够治疗、预防、延迟、降低或减弱毒性的发生或发生风险的药剂或其他治疗。
一种用于治疗方法中的能够治疗、预防、延迟、降低或减弱毒性的发生或发生风险的药剂或其他治疗，其中所述方法包括向受试者施用所述药剂或其他治疗，其中所述受试者已经被鉴定为具有发生毒性的风险，其中鉴定所述受试者包括：(a)评估受试者的一个或多个参数，其中所述一个或多个参数选自来自受试者的生物样品中铁蛋白或C反应蛋白(CRP)的水平、量或浓度；其中所述受试者是用细胞疗法治疗的候选者，所述细胞疗法包括一定剂量的表达重组受体的基因工程化细胞；并且其中在施用所述细胞疗法之前进行所述评估，和/或所述生物样品或肿瘤不包含所述重组受体和/或所述工程化细胞；以及(b)鉴定受试者是否具有毒性风险，其中如果所述一个或多个参数高于阈值水平，则所述受试者具有毒性风险，并且如果所述一个或多个参数等于或低于阈值水平，则所述受试者没有毒性风险，其中：(i)所述参数是铁蛋白，并且阈值水平高于或高于约1000纳克/毫升、2000纳克/毫升、3000纳克/毫升、4000纳克/毫升、5000纳克/毫升、6000纳克/毫升、7000纳克/毫升或8000纳克/毫升；和/或(ii)所述参数是CRP，并且阈值水平高于或高于约5毫克/升、10毫克/升、15毫克/升、20毫克/升、25毫克/升、30毫克/升、40毫克/升或50毫克/升；并且其中(c)根据或基于所述评估的结果，向所述受试者施用所述细胞疗法以及能够治疗、预防、延迟、降低或减弱毒性的发生或发生风险的所述药剂或其他治疗。
一种用于在施用细胞疗法后降低毒性的方法中的能够治疗、预防、延迟、降低或减弱毒性的发生或发生风险的药剂或其他治疗，其中所述方法包括：(a)评估受试者的一个或多个参数，其中所述一个或多个参数选自来自受试者的生物样品中铁蛋白或C反应蛋白(CRP)的水平、量或浓度；其中所述受试者是用细胞疗法治疗的候选者，所述细胞疗法包括一定剂量的表达重组受体的基因工程化细胞；并且其中在施用所述细胞疗法之前进行所述评估，和/或所述生物样品或肿瘤不包含所述重组受体和/或所述工程化细胞；以及(b)鉴定受试者是否具有毒性风险，其中如果所述一个或多个参数高于阈值水平，则所述受试者具有毒性风险，并且如果所述一个或多个参数等于或低于阈值水平，则所述受试者没有毒性风险，其中：(i)所述参数是铁蛋白，并且阈值水平高于或高于约1000纳克/毫升、2000纳克/毫升、3000纳克/毫升、4000纳克/毫升、5000纳克/毫升、6000纳克/毫升、7000纳克/毫升或8000纳克/毫升；和/或(ii)所述参数是CRP，并且阈值水平高于或高于约5毫克/升、10毫克/升、15毫克/升、20毫克/升、25毫克/升、30毫克/升、40毫克/升或50毫克/升；并且其中(c)根据或基于所述评估的结果，向所述受试者施用所述细胞疗法以及能够治疗、预防、延迟、降低或减弱毒性的发生或发生风险的所述药剂或其他治疗。
在一些实施方案中，所述方法包括将细胞或含有所述细胞的组合物施用至受试者、组织或细胞，如患有疾病、病症或障碍，具有疾病、病症或障碍的风险，或怀疑患有疾病、病症或障碍的受试者、组织或细胞。在一些实施方案中，受试者是成年受试者。在一些实施方案中，受试者年龄超过为或约30岁、40岁、50岁、60岁或70岁。
在一些实施方案中，所述方法包括将细胞施用至被选择或被鉴定为具有B细胞恶性肿瘤(如大B细胞淋巴瘤(例如，DLBCL))的某种预后或风险的受试者。在一些实施方案中，所述方法包括将细胞施用至被选择或被鉴定为患有非霍奇金淋巴瘤(NHL)的受试者。淋巴瘤(如非霍奇金淋巴瘤(NHL)或大B细胞淋巴瘤)可能是变异性疾病。一些患有NHL的受试者可以在不进行治疗的情况下存活，而其他受试者可能需要立即干预。在一些情况下，可以将患有NHL的受试者分类为可以告知疾病预后和/或推荐的治疗策略的组。在一些情况下，这些组可能是“低风险”、“中度风险”、“高风险”和/或“极高风险”，并且可以根据多种因素将患者如此分类，所述因素包括但不限于遗传异常和/或形态或身体特征。在一些实施方案中，基于NHL的风险对根据所述方法和/或用所述制品或组合物治疗的受试者进行分类或鉴定。在一些实施方案中，受试者是具有高风险NHL的受试者。
在一些实施方案中，在施用表达重组受体的细胞之前，受试者先前已经用靶向疾病或病症(例如，大B细胞淋巴瘤或NHL)的疗法或治疗剂治疗。在一些实施方案中，受试者先前已经用造血干细胞移植(HSCT)(例如，同种异体HSCT或自体HSCT)治疗。在一些实施方案中，受试者在用标准疗法治疗后具有不良预后和/或一个或多个先前治疗线已失败。在一些实施方案中，受试者已经进行治疗或者先前已经接受用于治疗疾病或障碍(如大B细胞淋巴瘤或NHL)的除了淋巴细胞清除疗法和/或表达抗原受体的细胞的剂量以外的至少或至少约或约1、2、3或4种其他疗法。在一些实施方案中，受试者已经进行治疗或者先前已经接受包括蒽环类药物、CD20靶向剂和/或依鲁替尼的疗法。
在一些实施方案中，受试者先前已经用化学疗法或放射疗法治疗。在一些方面，受试者对于其他疗法或治疗剂是难以治疗的或无反应的。在一些实施方案中，受试者例如在用另一种疗法或治疗性干预(包括化学疗法或放射)治疗后患有持续性或复发性疾病。
在一些实施方案中，受试者是有资格进行移植，如有资格进行造血干细胞移植(HSCT)(例如，同种异体HSCT)的受试者。在一些实施方案中，受试者是有资格进行移植，如有资格进行造血干细胞移植(HSCT)(例如，自体HSCT)的受试者。在一些此类实施方案中，在如本文所提供的将工程化细胞(例如，CAR-T细胞)或含有所述细胞的组合物施用至受试者之前，所述受试者虽然有资格进行移植，但先前没有接受移植。
在一些实施方案中，受试者是无资格进行移植(也称为无资格移植的，TNE)，如无资格进行造血干细胞移植(HSCT)(例如，同种异体HSCT)的受试者。在一些实施方案中，根据本文所提供的实施方案向这种受试者施用工程化细胞(例如，CAR-T细胞)或含有所述细胞的组合物。
在一些实施方案中，受试者是无资格进行造血干细胞移植的受试者，因为所述受试者符合以下标准中的至少一项：年龄≥70岁，ECOG PS为2，和/或肺功能受损(DLCO≤60％，但基于室内空气SaO2≥92％，并且CTCAE≤1呼吸困难)、心脏功能受损(LVEF≥40％且<50％)、肾功能受损(肌酐清除率>30且<60mL/min)或肝功能受损(AST/ALT>2且≤5xULN)。
在一些任何实施方案中，在施用细胞的剂量时或紧临施用细胞的剂量的时间之前，受试者无资格或已经被鉴定为无资格进行高剂量化学疗法。在一些任何实施方案中，在施用细胞的剂量时或紧临施用细胞的剂量的时间之前，受试者无资格或已经被鉴定为无资格进行造血干细胞移植(HSCT)。在一些任何实施方案中，在施用细胞的剂量时或紧临施用细胞的剂量的时间之前，受试者无资格或已经被鉴定为无资格进行高剂量化学疗法和造血干细胞移植(HSCT)二者。
在一些任何实施方案中，受试者患有复发性/难治性NHL，并且在施用细胞的剂量时或紧临施用细胞的剂量的时间之前，所述受试者无资格或已经被鉴定为无资格进行高剂量化学疗法和造血干细胞移植(HSCT)二者，并且所述受试者在用除了另一剂量的表达CAR的细胞以外的用于疾病或病症的一种先前疗法治疗后于缓解后已经复发，或者变得用所述先前疗法难以治疗。
在一些任何实施方案中，在施用细胞的剂量之时或之前，受试者被鉴定为或已经被鉴定为年龄为70岁或更老。在一些任何实施方案中，受试者被鉴定为或已经被鉴定为ECOG体能状态为2。在一些任何实施方案中，受试者被鉴定为或已经被鉴定为患有肺功能受损，任选地肺一氧化碳弥散量(DLCO)是为或约60％或更低。在一些任何实施方案中，受试者被鉴定为或已经被鉴定为患有心脏功能受损，任选地左心室射血分数(LVEF)小于或小于约50％。在一些任何实施方案中，受试者被鉴定为或已经被鉴定为患有肾功能受损，任选地计算的肌酐清除率小于或小于约60mL/min。在一些任何实施方案中，受试者被鉴定为或已经被鉴定为患有肝功能受损，任选地天冬氨酸转氨酶(AST)和丙氨酸转氨酶(ALT)超过正常值上限(ULN)的两倍或约两倍。
在一些实施方案中，受试者患有与中枢神经系统(CNS)受累相关或涉及中枢神经系统(CNS)受累的淋巴瘤，并且受试者先前已经用抗惊厥药(如左乙拉西坦)治疗。
在一些实施方案中，所述方法包括将细胞施用至被选择或被鉴定为患有高风险大B细胞淋巴瘤或高风险NHL的受试者。在一些实施方案中，受试者展现一种或多种细胞遗传异常，如与B细胞恶性肿瘤(如高风险B细胞淋巴瘤或高风险NHL)相关。在一些实施方案中，受试者是基于患有如下疾病或病症而被选择或鉴定，所述疾病或病症被表征或确定为侵袭性NHL、弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、原发性纵隔大B细胞淋巴瘤(PMBCL)、富含T细胞/组织细胞的大B细胞淋巴瘤(TCHRBCL)、伯基特淋巴瘤(BL)、套细胞淋巴瘤(MCL)和/或滤泡性淋巴瘤(FL)。在特定实施方案中，要使用本文提供的方法治疗的受试者包括患有侵袭性大B细胞淋巴瘤或侵袭性NHL，特别是患有弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、非特指型(NOS；从头的或从惰性转化的)、原发性纵隔B细胞淋巴瘤(PMBCL)或3B级滤泡性淋巴瘤(FL3B)的受试者。在一些任何实施方案中，受试者患有滤泡性淋巴瘤(FL)。在特定实施方案中，要使用本文提供的方法治疗的受试者包括患有从滤泡性淋巴瘤(FL)或另一种惰性淋巴瘤转化的DLBCL的受试者。在特定实施方案中，要使用本文提供的方法治疗的受试者包括患有从惰性组织学转化的DLBCL(tDLBCL)的受试者。在一些实施方案中，受试者患有从边缘区淋巴瘤(MZL)或慢性淋巴细胞白血病(CLL)(例如，里希特氏)转化的DLBCL。在一些实施方案中，患有CLL的转化的受试者可能展现里希特氏综合征(RS)，其定义为CLL转化为侵袭性淋巴瘤，最常见的是弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)(参见例如，Parikh等人Blood 2014 123:1647-1657)。
在一些实施方案中，受试者患有套细胞淋巴瘤(MCL)。在一些实施方案中，MCL的特征为染色体易位t(11:14)(q13；132)(Vose JM,等人Am J Hematol.2017.；92:806-813)。在一些实施方案中，受试者具有较差风险因子，包括TP53突变和/或高增殖指数(Ki67>30％)。在一些实施方案中，受试者具有较差风险因子，包括先前骨髓受累、先前胸腔积液和/或CNS疾病。在一些实施方案中，受试者具有较差风险因子，包括MCL变体。在一些实施方案中，受试者具有MCL的母细胞样变体。在一些实施方案中，受试者具有MCL的多形变体。在一些实施方案中，受试者患有已经在≥1个先前治疗线之后失败的套细胞淋巴瘤(MCL)(复发性/难治性，R/R)。在一些实施方案中，受试者患有已经在1、2、3、4、5、6或7个先前治疗线之后失败的套细胞淋巴瘤(MCL)(复发性/难治性，R/R)。在一些实施方案中，受试者已经接受先前依鲁替尼和/或维奈托克。在一些实施方案中，受试者患有在接受依鲁替尼和/或维奈托克后已经复发的MCL。在一些实施方案中，受试者已经接受含有蒽环类药物和CD20靶向剂(例如，R-CHOP)的免疫化学疗法的1个或多个先前治疗线。在一些实施方案中，受试者已经接受先前造血干细胞疗法(HSCT)(例如，同种异体HSCT或自体HSCT)。在一些实施方案中，受试者已经确认具有R/R疾病的表达细胞周期蛋白D1的MCL。
在一些任何实施方案中，在施用细胞的剂量之时或之前，受试者用或已经用蒽环类药物和一种或多种CD20靶向剂进行治疗。在一些任何实施方案中，一种或多种CD20靶向剂包括利妥昔单抗。在一些任何实施方案中，一种或多种CD20靶向剂包括R-CHOP(利妥昔单抗、环磷酰胺、盐酸多柔比星(羟基柔红霉素)、硫酸长春新碱(oncovin)和泼尼松)。
在一些实施方案中，受试者具有较差体能状态。在一些方面，要治疗的群体包括东部肿瘤协作组体能状态(ECOG)为0-2之间的任何值的受试者。在任何实施方案的其他方面，要治疗的受试者包括ECOG 0-1受试者或者不包括ECOG 2受试者。在任何实施方案的一些方面，要治疗的受试者是两种或更多种先前疗法已经失败的。在一些实施方案中，受试者未患有从边缘区淋巴瘤(MZL)或慢性淋巴细胞白血病(CLL)(例如，里希特氏)转化的DLBCL。在一些实施方案中，受试者具有与较差总体存活期相关联的特征。在一些实施方案中，受试者从未实现完全反应(CR)，从未接受自体干细胞移植(ASCT)，是1个或多个第二线疗法难治的，患有原发性难治性疾病，和/或ECOG体能得分为2或ECOG得分在0与1之间。在一些实施方案中，受试者被鉴定为或已经被鉴定为ECOG体能状态为0或1。
在一些实施方案中，要治疗的受试者包括如下受试者组：在2线疗法失败后患有从头的或从惰性淋巴瘤转化的(非特指型，NOS)弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、原发性纵隔大B细胞淋巴瘤(PMBCL)和3b级滤泡性淋巴瘤(FL3B)，并且ECOG得分为0-2，并且所述受试者可以任选地先前已经用同种异体干细胞移植(SCT)治疗。在一些任何实施方案中，要治疗的受试者患有滤泡性淋巴瘤(FL)。在一些实施方案中，可以将这个受试者组称为“完整群组”。在一些实施方案中，如果受试者符合所述标准，则选择所述受试者用于用过继细胞疗法治疗。在一些实施方案中，在所述组(“完整群组”)内，如果受试者具有较差体能状态(例如ECOG2)和/或患有从边缘区淋巴瘤(MZL)或慢性淋巴细胞白血病(CLL，里希特氏)转化的DLBCL，则不选择所述受试者用于治疗或将所述受试者从治疗排除。因此，在一些实施方案中，如果受试者具有在2个治疗线失败后患有从头的或从惰性淋巴瘤转化的(NOS)弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、原发性纵隔大B细胞淋巴瘤(PMBCL)和3b级滤泡性淋巴瘤(FL3B)且ECOG得分为0或1的受试者，则选择所述受试者用于治疗，并且所述受试者可以任选地先前已经用同种异体干细胞移植(SCT)治疗，但是未患从边缘区淋巴瘤(MZL)或慢性淋巴细胞白血病(CLL，里希特氏)转化的DLBCL。在一些实施方案中，如果受试者患有滤泡性淋巴瘤(FL)，则选择所述受试者用于治疗。
在一些任何实施方案中，在施用细胞的剂量之时或之前，受试者被鉴定为或已经被鉴定为患有双/三打击淋巴瘤。在一些任何实施方案中，受试者被鉴定为或已经被鉴定为患有化疗难治性淋巴瘤，任选地化疗难治性DLBCL。在一些任何实施方案中，受试者尚未响应于先前疗法实现完全缓解(CR)。在一些任何实施方案中，受试者已经在接受自体干细胞移植(ASCT)后1年或小于1年内复发。
在一些实施方案中，可以将这个受试者组称为“核心群组”。在一些实施方案中，要治疗的受试者是“核心群组”中的受试者。在一些方面，所提供的实施方案是基于如下观察：某些受试者群体(例如，已经被施用某个剂量的细胞疗法的“核心群组”受试者)显示总体反应率(ORR)超过80％，且完全反应(CR)率超过55％，且具有高持久性，例如，反应维持超过较长时间段，例如，超过3个月，且3个月ORR超过65％，并且3个月CR率为大约50％。特定地，所提供的观察表明，在具有两个或三个染色体易位(“双打击”或“三打击”淋巴瘤；具有易位MYC/8q24基因座，通常与t(14；18)(q32；q21)bcl-2基因或/和BCL6/3q27染色体易位组合；参见例如，Xu等人(2013)Int J Clin Exp Pathol.6(4):788-794)、原发性难治性淋巴瘤、化疗难治性DLBCL的受试者以及先前从未实现CR的受试者中，3个月ORR较高。
在一些方面，提供用于以特定剂量施用细胞疗法的限定组合物的组合物、方法和用途，所述特定剂量与高反应率和/或高反应持久性，以及低毒性水平和/或发生率相关。在一些实施方案中，所施用的组合物或剂量是平和/或固定剂量(如精确平剂量)的细胞和/或一种或多种具有特定表型的细胞，如特定数量的此类细胞或如与目标数量相比在特定的变化性或差异范围和/或程度内的数量。在一些实施方案中，所施用的组合物或剂量含有限定比率的CD4+和CD8+细胞(例如，1:1比率的CD4+:CD8+CAR+ T细胞)和/或含有在这个比率的某个变化性程度内的比率，所述变化性程度如不超过±10％，如不超过±8％，如变化性或差异程度不超过±10％，如不超过±8％。在一些实施方案中，CD4+和CD8+细胞是单独配制和施用的。在一些实施方案中，所施用的细胞展现一致的活性和/或功能，例如，细胞因子产生、细胞凋亡和/或扩增。在一些实施方案中，在组合物中或在制剂之间，所提供的组合物在细胞之间，例如在细胞数、细胞功能和/或细胞活性方面，展现高度一致和限定的活性以及低变化性。在一些实施方案中，组合物制剂之间的活性和/或功能的一致性，例如低变化性，允许改进的功效和/或安全性。在一些实施方案中，与施用具有高异质性的细胞组合物相比，施用限定组合物导致低产物变化性和低毒性(例如，CRS或神经毒性)。在一些实施方案中，限定的一致性组合物还展现一致的细胞扩增。这种一致性可以促进剂量、治疗窗的确定、对剂量反应的评价以及对受试者中可能与安全性或毒性结果相关联的因素的鉴定。
在一些实施方案中，在接受特定剂量水平的单一输注的某些受试者群组中，可以实现超过60％的6个月后的持久反应率。在一些实施方案中，一些群组中的受试者可以实现超过80％的总体反应率(ORR，在一些情况下也称为客观反应率)、超过60％的完全反应(CR)率和/或在6个月时的高持久CR率。在一些实施方案中，接受限定剂量的受试者显示改进的安全性结果，例如，大于三分之二的受试者不展现任何CRS或NT。在一些方面，严重CRS或严重NT的比率较低。在一些实施方案中，使用特别限定剂量时观察到的较高暴露(例如，Cmax和AUC0-28)与增加的毒性(例如，CRS或NT)无关。在一些实施方案中，受试者的特定因素(例如，某些生物标记)可以用于预测毒性风险。在一些实施方案中，所提供的实施方案可以用于实现具有低毒性风险的高反应率。
在一些实施方案中，在施用细胞疗法之前或之后向不超过25％、不超过20％、不超过15％、不超过10％或不超过5％的使用所提供组合物、制品、试剂盒、方法和用途治疗的受试者施用药剂(例如，托珠单抗和/或地塞米松)，以改善、治疗或预防毒性。在一些实施方案中，在接受工程化细胞(例如，CAR-T细胞)之前，不向受试者施用任何预防性治疗。
在一些实施方案中，所提供的实施方案提供优点，例如，允许在门诊基础上施用细胞疗法。CAR T细胞疗法通常在住院环境中，如在大学医疗中心施用。然而，患有R/R弥漫性大B细胞淋巴瘤的许多受试者在进行癌症疗法的门诊递送的医疗中心接受疗法。在一些方面，在门诊环境中输注和管理CAR T细胞疗法可以改进此类疗法的可及性，包括在社区/非大学中心中更广泛地利用门诊治疗。在一些实施方案中，细胞剂量和/或淋巴细胞清除疗法的施用在非三级护理中心进行。在一些实施方案中，施用细胞疗法(例如，根据所提供的实施方案的T细胞剂量)的施用可以在门诊基础上进行，或者不需要让受试者住院，如需要过夜停留的住院。在一些实施方案中，这种门诊施用可以允许增加可及性并降低成本，同时维持高的持久反应率和低毒性。在一些方面，对于已经因先前治疗而以其他方式免疫受损(例如，淋巴细胞清除后)并且在住院期或在住院环境中具有更高暴露风险的患者，门诊治疗可以是有利的。在一些方面，门诊治疗还增加了可能无法到达住院、医院环境或移植中心的受试者的治疗选择，从而扩展治疗的可及性。在一些实施方案中，在施用细胞的剂量之后，在门诊环境中监测受试者，任选地通过电话联络和/或医护专业人员访视来监测。
在一些实施方案中，在门诊基础上使用所提供的组合物、制品、试剂盒、方法和用途治疗的受试者留在门诊至少3天，或者某一百分比的如此治疗的受试者(例如，至少60％、至少70％、至少80％、至少85％、至少90％或至少95％的受试者)留在门诊至少3天。在一些方面，受试者留在门诊至少4天、5天、6天、7天、8天或更久。在一些实施方案中，与用其他组合物、制品、试剂盒、方法和用途治疗的受试者相比，使用所提供的组合物、制品、试剂盒、方法和用途治疗的受试者显示住院期持续时间的缩短，例如，缩短至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％或至少40％。
在一些实施方案中，所述方法、细胞和组合物可以向跨越患者特征和/或肿瘤负荷的范围的受试者提供高持久反应率。在一些实施方案中，所述方法、细胞和组合物可以向预后较差的高风险患者提供高持久反应率和降低的不良影响或毒性的风险。在一些实施方案中，所述方法和用途提供或实现较高反应率和/或更持久的反应或功效和/或降低的毒性或可能与细胞疗法相关的其他副作用(如神经毒性(NT)或细胞因子释放综合征(CRS))的风险。在一些方面，所提供的观察指示较低的严重NT(sNT)或严重CRS(sCRS)的比率，以及较高的不具有任何毒性(例如，NT或CRS)的患者的比率。
在一些实施方案中，至少35％、至少40％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％或至少75％或更多的根据所提供方法和/或用所提供制品或组合物治疗的受试者实现完全反应(CR)。在一些实施方案中，至少50％、至少60％、至少70％、至少80％或至少90％的根据所提供方法和/或用所提供制品或组合物治疗的受试者实现客观反应(OR)。在一些实施方案中，至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％或更多的根据所提供方法和/或用所提供制品或组合物治疗的受试者截至一个月、截至两个月或截至3个月时实现CR或OR。
在一些实施方案中，截至开始施用细胞疗法后3个月、四个月、五个月、六个月或更久时，至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％或更多的根据所提供方法和/或用所提供制品或组合物治疗的受试者保持反应，如保持CR或OR。在一些实施方案中，这种反应(如CR或OR)持续至少3个月、四个月、五个月、六个月、七个月、八个月或9个月，如在至少或至少约60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％或更多的根据所提供的方法治疗的受试者中或者在截至一个月或截至3个月实现CR的此类受试者中。在一些实施方案中，至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％或更多的根据所提供方法和/或用所提供制品或组合物治疗的受试者或截至一个月或截至3个月实现CR的此类受试者存活或无进展存活大于或大于约3个月、四个月、五个月、六个月、七个月、八个月或9个月。
在一些实施方案中，通过根据所提供方法和/或用所提供制品或组合物进行的治疗在此类受试者中观察到的所得反应在大多数所治疗受试者中与任何毒性的低风险或严重毒性的低风险相关或导致任何毒性的低风险或严重毒性的低风险。在一些实施方案中，大于或大于约30％、35％、40％、50％、55％、60％或更多的根据所提供方法和/或用所提供制品或组合物治疗的受试者不展现任何等级的CRS或任何等级的神经毒性(NT)。在一些实施方案中，大于或大于约50％、60％、70％、80％或更多的根据所提供方法和/或用所提供制品或组合物治疗的受试者不展现严重CRS或3级或更高级的CRS。在一些实施方案中，大于或大于约50％、60％、70％、80％或更多的根据所提供方法和/或用所提供制品或组合物治疗的受试者不展现严重神经毒性或3级或更高级的神经毒性，如4级或5级神经毒性。
在一些实施方案中，至少或至少约45％、50％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％或95％的根据所述方法和/或用所提供制品或组合物治疗的受试者不展现早发性CRS或神经毒性和/或不展现开始施用后早于1天、2天、3天或4天的CRS发作。在一些实施方案中，至少或至少约45％、50％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％或95％的根据所述方法和/或用所提供制品或组合物治疗的受试者不展现开始施用后早于3天、4天、5天、6天或7天的神经毒性发作。在一些方面，在根据所述方法和/或用所提供制品或组合物治疗的受试者中神经毒性的中值发作是在根据所述方法治疗的受试者的CRS的中值峰处或之后、或到消退的中值时间之时或之后。在一些情况下，在根据所述方法治疗的受试者中神经毒性的中值发作大于或大于约8、9、10或11天。
在一些实施方案中，在施用以下后观察到此类结果：从或从约5x107至或至约1.5x108，如从或从约5x107至或至约1x108个总重组受体表达T细胞(例如CAR+ T细胞)，如一定剂量的T细胞(包括CD4+和CD8+ T细胞)，其是按以下来施用：如本文所述的限定比率(例如为或约1:1比率)和/或精确或平或固定数量的CAR+ T细胞，或者精确或平或固定数量的特定类型的CAR+ T细胞(如CD4+CAR+ T细胞和/或CD8+CAR+ T细胞)，和/或一定数量的任何此类细胞，所述数量如与这个精确或平或固定数量相比在指定程度或差异内，如不超过+或-(加或减，在一些情况下指示为±)5％、6％、7％、8％、9％、10％、11％、12％、13％、14％或15％。在一些实施方案中，细胞的这个平或固定数量是为或约2.5x107、5×107、10x107、15x107或20x107个例如总CAR+ T细胞或CD8+和/或CD4+CAR+ T细胞。在一些实施方案中，所述剂量中的细胞数量包括5x107个CD4+CAR+ T细胞(在一些情况下2.5x107个CD4+CAR+ T细胞和2.5x107个CD8+CAR+ T细胞)或由其组成或基本上由其组成；在一些实施方案中，其包括10×107个CAR+ T细胞(在一些情况下5x107个CD4+CAR+ T细胞和5x107个CD8+CAR+ T细胞)或由其组成或基本上由其组成。在一些方面，如与细胞的一个或多个此类数量相比，所施用的细胞数量在前述实施方案中此类数量的某个差异程度内，如在加或减(±)5％、6％、7％、8％、9％或10％内，如在加或减8％内。在一些方面，所述剂量在如下范围内，其中在此类细胞(例如，总CAR+ T细胞或CD8+和/或CD4+CAR+ T细胞)的数量与一种或多种结果之间观察到相关(任选地线性关系)，所述结果指示治疗反应或其持续时间(例如，实现缓解、完全缓解和/或缓解的特定持续时间的可能性)和/或前述任一项的持续时间。在一些方面，发现施用更高细胞剂量可以在受试者中引起更大反应，而没有或基本上没有影响(impact)或影响(affect)毒性(例如，CRS或神经毒性)的发生率或风险或者毒性(例如，严重CRS或严重神经毒性)的发生率或风险的程度。
在一些方面，所提供方法可以实现高反应率或特定反应率(如群体中的反应率，如在施用后某一时间(如3个月或六个月)所评估)，例如，40％或更大、45％或更大、50％或更大、55％或更大、60％或更大、65％或更大、70％或更大、75％或80％或81％、82％、83％、84％或85％或更大的ORR(如6个月或3个月ORR)，以及30％或更大、35％或更大、40％或更大、45％或更大、50％或更大、55％或更大、60％或更大、65％或更大、70％或更大、71％、72％、73％或更大或约75％或更大的CR率(如6个月或3个月CR率)，其也可持续如特定时间段或至少特定时间段，例如，在疗法开始后持续超过1、3或6个月或更久或9个月或更久。在一些实施方案中，在这种疗法的仅单一施用或剂量后接受此类反应率和持久性。在一些实施方案中，通过所提供方法和/或用所提供制品或组合物对此类受试者的治疗还使所述受试者实现高反应率，但即使在较高细胞剂量下也不展现发生毒性(如神经毒性或CRS)的较高发生率。在一些实施方案中，约或大于50％、55％或60％的实现此类反应的受试者不发生任何等级的毒性，如任何等级的CRS和/或神经毒性。
因此，在一些实施方案中，所提供的方法、制品和/或组合物可以提供优于用于治疗(如用于过继细胞疗法)的其他可用方法或解决方案或方式的优点。特定地，所提供的实施方案尤其是通过以高比率实现持久反应和降低的毒性或副作用发生率而向患有高风险NHL的受试者提供优点的那些。
A.治疗方法
本文提供治疗方法，其涉及施用工程化细胞(如工程化T细胞)或含有工程化细胞的组合物。还提供工程化细胞(例如，T细胞)和/或其组合物的方法和用途，包括用于治疗患有疾病或病症(如白血病或淋巴瘤或B细胞恶性肿瘤，例如，弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)或其亚型、大B细胞淋巴瘤和/或非霍奇金淋巴瘤(NHL))的受试者的方法，所述方法涉及施用工程化细胞和/或其组合物。在一些实施方案中，如与某些替代性方法相比，所提供的方法和用途可以例如在所治疗受试者的特定组中实现改进的反应和/或更持久的反应或功效和/或降低的毒性或其他副作用的风险。在一些方面，还提供将工程化细胞(如工程化T细胞)或含有工程化细胞的组合物施用至受试者(如患有疾病或障碍的受试者)的方法。在一些方面，还提供工程化细胞(如工程化T细胞)或含有工程化细胞的组合物用于治疗疾病或障碍的用途。在一些方面，还提供工程化细胞(如工程化T细胞)或含有工程化细胞的组合物用于制造用于治疗疾病或障碍的药物的用途。在一些方面，还提供将用于治疗疾病或障碍或用于施用至患有疾病或障碍的受试者的施用工程化细胞(如工程化T细胞)或含有工程化细胞的组合物的方法。在一些方面，工程化细胞(如工程化T细胞)或含有工程化细胞的组合物的用途是根据本文所述的任何方法来进行。
还提供治疗方法，其涉及选择患有疾病或病症(如本文所述的任何疾病或病症)的受试者；以及向所述受试者施用一定剂量的T细胞，所述剂量包含表达重组受体的T细胞，所述重组受体与疾病或病症或其细胞或组织表达的和/或与疾病或病症相关的靶抗原特异性结合。
表达重组受体(如嵌合抗原受体(CAR))的工程化细胞或包含所述工程化细胞的组合物可用于多种治疗性、诊断性和预防性适应证。例如，工程化细胞或包含所述工程化细胞的组合物可用于治疗受试者的多种疾病和障碍。此类方法和用途包括治疗性方法和用途，例如，涉及将工程化细胞或含有所述工程化细胞的组合物施用至患有疾病、病症或障碍(如B细胞恶性肿瘤，例如，大B细胞淋巴瘤)的受试者。在一些实施方案中，工程化细胞或包含所述工程化细胞的组合物是以有效量来施用，以实现对疾病或障碍的治疗。用途包括工程化细胞或组合物在此类方法和治疗中以及在制备药物以进行此类治疗方法中的用途。在一些实施方案中，所述方法通过向患有或怀疑患有疾病或病症的受试者施用工程化细胞或包含所述工程化细胞的组合物来进行。在一些实施方案中，所述方法由此治疗受试者的疾病或病症或障碍。
用于施用用于过继细胞疗法的细胞的通用方法是已知的，并且可以与所提供的方法和组合物结合使用。例如，过继T细胞疗法方法描述于例如以下文献中：Gruenberg等人的美国专利申请公开号2003/0170238；Rosenberg的美国专利号4,690,915；Rosenberg(2011)Nat Rev Clin Oncol.8(10):577-85。参见例如，Themeli等人(2013)Nat Biotechnol.31(10):928-933；Tsukahara等人(2013)Biochem Biophys Res Commun 438(1):84-9；Davila等人(2013)PLoS ONE 8(4):e61338。
所治疗的疾病或病症可以是任何疾病或病症，其中抗原的表达与疾病、病症或障碍的病因相关和/或参与所述病因，例如引起、加重或以其他方式参与这种疾病、病症或障碍。示例性疾病和病症可以包括与恶性肿瘤或细胞转化(例如癌症)、自身免疫性疾病或炎性疾病或者例如由细菌、病毒或其他病原体引起的感染性疾病相关的疾病或病症。示例性抗原(其包括与可以治疗的各种疾病和病症相关的抗原)描述于上文中。在特定实施方案中，嵌合抗原受体(CAR)或转基因TCR特异性结合至与疾病或病症相关的抗原。
疾病、病症和障碍包括肿瘤，包括实体瘤、血液恶性肿瘤和黑色素瘤，并且包括局部和转移性肿瘤；感染性疾病，如病毒或其他病原体的感染，例如HIV、HCV、HBV、CMV、HPV和寄生虫病；以及自身免疫性和炎性疾病。
在一些实施方案中，要治疗的疾病、障碍或病症是肿瘤、癌症、恶性肿瘤、肿疡或其他增殖性疾病或障碍。此类疾病包括但不限于白血病、淋巴瘤，例如，急性髓样(或髓性)白血病(AML)、慢性髓样(或髓性)白血病(CML)、急性淋巴细胞(或成淋巴细胞)白血病(ALL)、慢性淋巴细胞白血病(CLL)、毛细胞白血病(HCL)、小淋巴细胞淋巴瘤(SLL)、套细胞淋巴瘤(MCL)、边缘区淋巴瘤(MZL)、伯基特淋巴瘤(BL)、霍奇金淋巴瘤(HL)、非霍奇金淋巴瘤(NHL)、间变性大细胞淋巴瘤(ALCL)、滤泡性淋巴瘤(FL)、难治性滤泡性淋巴瘤、弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)和多发性骨髓瘤(MM)。
在一些实施方案中，要治疗的疾病或病症是B细胞恶性肿瘤。
在一些实施方案中，疾病或病症是选自以下的B细胞恶性肿瘤：急性成淋巴细胞性白血病(ALL)、成人ALL、慢性成淋巴细胞性白血病(CLL)、非霍奇金淋巴瘤(NHL)和弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)。在一些实施方案中，疾病或病症是NHL。在一些实施方案中，疾病或病症是大B细胞淋巴瘤。在一些实施方案中，疾病或病症是DLBCL。在一些实施方案中，疾病或病症是DLBCL非特指型(DLBCL(NOS))。在一些实施方案中，疾病或病症是NHL，并且所述NHL选自侵袭性NHL、弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)NOS型(从头的或从惰性转化的)、原发性纵隔大B细胞淋巴瘤(PMBCL)、富含T细胞/组织细胞的大B细胞淋巴瘤(TCHRBCL)、伯基特淋巴瘤(BL)、套细胞淋巴瘤(MCL)和/或滤泡性淋巴瘤(FL)。在一些实施方案中，疾病或病症是滤泡性淋巴瘤(FL)。在一些实施方案中，滤泡性淋巴瘤是3B级滤泡性淋巴瘤(FL3B)。在一些实施方案中，疾病或病症是套细胞淋巴瘤(MCL)。
在一些实施方案中，要根据所提供的方法、用途或制品治疗的疾病或病症是DLBCL。在一些方面，DLBCL是DLBCL非特指型(NOS)，其在一些情况下的特征可以是从头的或从惰性疾病转化的。
在一些实施方案中，选择用于治疗的患有DLBCL(NOS)的受试者和/或根据所提供的任何方法治疗的受试者患有并非具有主要结节外位置的DLBCL的DLBCL、并非终末分化B细胞的大细胞淋巴瘤的DLBCL或者并非具有DLBCL与其他淋巴肿瘤之间的中间特征的B细胞肿疡的DLBCL。
在一些实施方案中，选择用于治疗的患有DLBCL(NOS)的受试者和/或根据所提供的任何方法治疗的受试者患有如下DLBCL：所述DLBCL并非富含T细胞/组织细胞的大B细胞淋巴瘤(TCHRBCL)，并非中枢神经系统(CNS)的原发性DLBCL，并非原发性皮肤DLBCL、腿型或EB病毒(EBV)阳性DLBCL(例如，老人的EBV阳性DLBCL)，并且在一些情况下并非与慢性炎症相关的DLBCL的DLBCL。
在一些实施方案中，选择用于治疗的患有DLBCL(NOS)的受试者和/或根据所提供的任何方法治疗的受试者患有并非B成淋巴细胞性白血病/淋巴瘤(B-LBL)的高级别B细胞淋巴瘤、并非伯基特淋巴瘤的高级别B细胞淋巴瘤或者并非具有MYC和BCL2和/或BCL6重排的高级别B细胞淋巴瘤的高级别B细胞淋巴瘤。在一些方面，DLBCL是DLBCL(NOS)，其在一些情况下的特征可以是并非B成淋巴细胞性白血病/淋巴瘤(B-LBL)的高级别B细胞淋巴瘤、并非伯基特淋巴瘤的高级别B细胞淋巴瘤或者并非具有MYC和BCL2和/或BCL6重排的高级别B细胞淋巴瘤的高级别B细胞淋巴瘤。
在一些实施方案中，选择用于治疗的患有DLBCL(NOS)的受试者和/或根据所提供的任何方法治疗的受试者患有如下DLBCL：所述DLBCL基于起源细胞的分子和/或细胞遗传特征是生发中心B细胞样(GCB)和激活的B细胞样(ABC)。
在一些实施方案中，DLBCL是从头或原发性DLBCL。在一些实施方案中，疾病或病症(如淋巴瘤，如DLBCL)是从疾病或病症的不同亚型转化的，如从惰性淋巴瘤(如滤泡性淋巴瘤(FL))转化。在一些实施方案中，此类其他惰性淋巴瘤可以包括例如边缘区B细胞淋巴瘤(MZL)和慢性淋巴细胞白血病/小细胞淋巴细胞淋巴瘤(CLL/SLL)。在一些实施方案中，疾病或病症是从滤泡性淋巴瘤转化的DLBCL(tFL)；在一些方面，它是从另一种惰性淋巴瘤转化的DLBCL。在一些实施方案中，受试者怀疑患有或特征为患有转化的滤泡性淋巴瘤(tFL)。在一些实施方案中，疾病或病症是从FL转化的DLBCL。在一些方面，疾病或病症是从除了FL以外的惰性淋巴瘤转化的DLBCL。
在一些实施方案中，要根据所提供的方法、用途或制品治疗的疾病或病症是从另一种惰性淋巴瘤转化的DLBCL，如从边缘区淋巴瘤转化的DLBCL(tMZL)或从慢性淋巴细胞白血病转化的DLBCL(tCLL；里希特氏)。在一些情况下，疾病或病症是DLBCL tMZL或DLBCLtCLL。在一些实施方案中，其为从除了FL以外的惰性淋巴瘤转化的疾病或病症。在一些实施方案中，其为DLBCL或大B细胞淋巴瘤，如从FL或其他惰性淋巴瘤转化的DLBCL或大B细胞淋巴瘤。在一些实施方案中，受试者的特征为患有从另一种惰性淋巴瘤转化的DLBCL，如DLBCLtMZL或DLBCL tCLL。
在一些实施方案中，疾病或病症是滤泡性淋巴瘤(FL)。在一些实施方案中，如果受试者患有滤泡性淋巴瘤(FL)，则选择所述受试者用于治疗。在一些实施方案中，FL展现肿瘤滤泡或与肿瘤滤泡相关，所述肿瘤滤泡显示减弱的套区、极化的损失和/或有形体巨噬细胞的不存在。在一些实施方案中，FL与中心细胞和中心母细胞的混合物相关。在一些实施方案中，FL与中心细胞无关。在一些实施方案中，FL是3级FL。在一些实施方案中，3级FL展现每个高倍视野(HPF)超过15个中心母细胞或与其相关。在一些实施方案中，FL与滤泡内CD10、BCL6和BCL2的共表达相关。在一些实施方案中，FL与t(14；18)/IGH-BCL2和/或BCL6重排相关或以其为特征。在一些实施方案中，FL与t(14；18)(q32；q21)易位相关。在一些方面，t(14；18)(q32；q21)易位将BCL2表达置于免疫球蛋白(Ig)重基因座(IGH)增强子的控制下。在一些方面，在大约90％的1级和2级FL、60％至70％的3A级以及15％至30％的3B级FL病例中检测到t(14；18)。在一些实施方案中，FL与BCL2易位t(2；18)和t(18；22)相关。在一些实施方案中，与易位t(2；18)和t(18；22)相关的FL还与BCL6重排相关。在一些任何实施方案中，FL与滤泡内CD10、BCL6和BCL2的共表达和/或t(14；18)/(q32；q21)(IGH-BCL2)和/或BCL6重排相关。
在一些实施方案中，FL涉及淋巴结和/或脾、骨髓、外周血和其他结节外部位。在一些实施方案中，FL涉及淋巴结。在一些方面，与FL相关的示例性特征包括以下文献中所述的那些：Choi等人(2018)Arch Pathol Lab Med 142:1330-1340；Luminari等人,(2012)Rev.Brad.Hematol.Hemoter.,34:54-59以及Salles(2007)ASH Education Book,2007:216-25。在一些方面，在FL的情况下，用于评估疾病负荷程度的示例性参数包括诸如以下等参数：血红蛋白水平(例如，<12g/dL或<10g/dL)、红细胞沉降率(ESR)、乳酸脱氢酶(LDH)水平、和β2微球蛋白(B2M)值、基因表达、单核苷酸多态性(SNP；例如在IL-8、IL-2、Il-12B和IL1RN中)、miRNA表达以及蛋白质表达(例如，CD68、STAT1、FOXP3、CD57)。(Salles(2007)ASHEducation Book,2007:216-25)。在FL的情况下，疾病的程度或负荷可以通过Ann Arbor分期系统、肿瘤负荷、巨块病、疾病的结节或结节外部位的数量和/或骨髓受累来评估。
在一些方面，受试者(如患有FL的受试者)的存活率是基于意大利淋巴瘤协作组(ILI)和/或国际滤泡性淋巴瘤预后因子项目(IFLPFP)开发的评分系统。(Luminari等人,(2012)Rev.Brad.Hematol.Hemoter.,34:54-59)。在一些方面，ILI得分是基于以下的独立预后作用：年龄、性别、B症状、结节外部位数量、红细胞沉降率(ESR)和乳酸脱氢酶(LDH)。在一些方面，IFLPFP得分是基于以下的风险因子：年龄、Ann Arbor分期、血红蛋白水平、结节部位区的数量和血清LDH水平。在一些情况下，IFLPFP得分可以用于表征或预测患有FL的受试者的总体存活率。
在一些实施方案中，所提供的方法涉及选择患有滤泡性淋巴瘤(FL)的受试者用于治疗；以及向所述受试者施用一定剂量的T细胞，所述剂量包含表达重组受体的T细胞，所述重组受体与FL或其细胞或组织表达的和/或与FL相关的靶抗原特异性结合。
在一些任何实施方案中，T细胞的所述剂量包含一定剂量的CD4+和CD8+ T细胞，其中每个剂量的T细胞包含与FL或其细胞或组织表达的和/或与FL相关的靶抗原特异性结合的重组受体，其中所述施用包括施用多种单独组合物，所述多种单独组合物包含含有CD8+T细胞的第一组合物和含有CD4+ T细胞的第二组合物。
在一些实施方案中，疾病或病症是结节外高级别非霍奇金B细胞淋巴瘤。在一些实施方案中，结节外高级别非霍奇金B细胞淋巴瘤是原发性CNS淋巴瘤(PCNSL)。在一些实施方案中，PCNSL涉及不具有系统性淋巴瘤存在的中枢神经系统(CNS)。在一些实施方案中，PCNSL限于脑、脊柱、脑脊液(CSF)和眼。在一些实施方案中，PCNSL是弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)。在一些实施方案中，PCNSL是伯基特、低级别或T细胞淋巴瘤。在一些实施方案中，PCNSL包括神经病学体征。在一些实施方案中，神经病学体征包括局灶性神经功能缺损、精神状态和行为变化、颅内压增加的症状和/或癫痫发作。在一些实施方案中，与疾病或病症相关的示例性特征包括Grommes等人(J.Clin Oncol 2017；35(21):2410-18)中所述的那些。
在一些实施方案中，用于根据本文提供的方法治疗的受试者未患原发性中枢神经系统淋巴瘤(PCNSL)。
在一些实施方案中，疾病或病症是继发性中枢神经系统淋巴瘤(SCNSL)。在一些实施方案中，SCNSL位于患有系统性淋巴瘤的患者中。在一些实施方案中，SCNSL被称为转移性淋巴瘤。在一些实施方案中，SCNSL是DLBCL。在一些实施方案中，SCNSL是侵袭性淋巴瘤，其可涉及脑、脑膜、脊髓和眼。在一些实施方案中，SCNSL包括柔脑膜扩散。在一些实施方案中，SCNSL包括脑实质疾病。在一些实施方案中，与疾病或病症相关的示例性特征包括Malikova等人(Neurophychiatric Disease and Treatment 2018；14:733-40.)中所述的那些。
在一些实施方案中，疾病或病症是具有MYC和BCL2和/或BCL6重排，任选地具有DLBCL组织学的高级别B细胞淋巴瘤。在一些实施方案中，疾病或病症是DLBCL NOS(从头的或从惰性转化的)。在一些实施方案中，疾病或病症是原发性纵隔B细胞淋巴瘤(PMBCL)或3B级滤泡性淋巴瘤(FL3B)。在一些实施方案中，疾病或病症是滤泡性淋巴瘤(FL)。在一些实施方案中，它是具有CNS受累的DLBCL。在一些实施方案中，受试者患有中枢神经系统中DLBCL的复发(继发性CNS淋巴瘤)。在一些实施方案中，继发性CNS淋巴瘤涉及脑实质和/或柔脑膜。在一些实施方案中，受试者已经进行治疗或者先前已经接受用于治疗疾病或障碍的至少或至少约或约1、2、3、4或5种其他疗法。在一些实施方案中，受试者已经接受先前甲氨蝶呤、塞替派和/或阿糖胞苷。在一些实施方案中，受试者患有在接受甲氨蝶呤、塞替派和/或阿糖胞苷后已经复发的MCL。在一些实施方案中，受试者已经接受先前造血干细胞疗法(HSCT)(例如，同种异体HSCT或自体HSCT)。
在一些实施方案中，受试者患有或已被鉴定为患有双/三打击淋巴瘤或双/三打击分子亚型的淋巴瘤。在一些实施方案中，淋巴瘤是双打击淋巴瘤，其特征为存在MYC(髓细胞瘤病致癌基因)、BCL2(B细胞淋巴瘤2)和/或BCL6(B细胞淋巴瘤6)基因重排(例如，易位)。在一些实施方案中，基因重排与另一基因重排组合地影响MYC/8q24基因座。例如，另一基因重排包括涉及BCL2的t(14；18)(q32；q21)。在一些实施方案中，基因重排与BCL6/3q27组合地影响MYC/8q24基因座。在一些实施方案中，淋巴瘤是三打击淋巴瘤，其特征为存在MYC、BCL2和BCL6基因重排；参见例如，Aukema等人,(2011)Blood 117:2319-2331。在此类实施方案的一些方面，受试者是ECOG 0-1或者未患或未被怀疑或表征为患有从MZL或CLL转化的DLBCL。在多个方面，所述疗法被指示用于此类受试者，和/或说明书指示施用至这个群体内的受试者。在一些实施方案中，基于2016WHO标准(Swerdlow等人,(2016)Blood 127(20):2375-2390)，可以将双/三打击淋巴瘤视为具有MYC和BCL2和/或BCL6重排与DLBCL组织学的高级别B细胞淋巴瘤(双/三打击)。
在一些实施方案中，NHL可以基于卢加诺分类进行分期(参见例如，Cheson等人,(2014)JCO 32(27):3059-3067；Cheson,B.D.(2015)Chin Clin Oncol 4(1):5)。在一些情况下，所述分期通过罗马数字I至IV(1-4)来描述，并且影响淋巴系统外器官(结节外器官)的局限期(I或II)淋巴瘤指示为E。I期表示在一个结节或一组相邻结节中受累，或者不具有结节受累的单一结节外病灶(IE)。2期表示在膈同侧的两个或更多个结节组中受累，或者依据结节程度具有有限的连续结节外受累的I期或II期(IIE)。III期表示在膈两侧的结节或膈上方的结节中受累和脾脏受累。IV期表示在另外的非连续淋巴外受累中受累。另外，“巨块病”可以用于描述胸腔中的大型肿瘤，特别是对于II期。疾病程度是通过用于亲嗜性(avid)淋巴瘤的正电子发射断层成像(PET)-计算机断层成像(CT)以及用于非亲嗜性组织学的CT来确定。在一些任何实施方案中，在施用细胞的剂量之时或之前，要根据所提供的实施方案治疗的受试者患有正电子发射断层摄影术(PET)阳性疾病。
在一些任何实施方案中，在施用细胞的剂量之时或之前，如果受试者已经接受了先前CD19靶向疗法，则在先前CD19靶向疗法后从受试者获得的生物样品包含表达CD19的细胞。
在一些实施方案中，东部肿瘤协作组(ECOG)体能状态指示物可以用于评估或选择用于治疗的受试者，例如，因先前疗法而具有较差体能的受试者(参见例如，Oken等人(1982)Am J Clin Oncol.5:649-655)。ECOG体能状态量表描述患者在其自理能力、日常活动和体能(例如，步行、工作等)方面的机能水平。在一些实施方案中，ECOG体能状态为0指示，受试者可以进行正常活动。在一些方面，ECOG体能状态为1的受试者展现体力活动中的一些限制，但是所述受试者能完全走动。在一些方面，ECOG体能状态为2的患者是大于50％能走动的。在一些情况下，ECOG体能状态为2的受试者也可能够自理；参见例如，
Figure BDA0003183097650000661
等人,(1993)Br J Cancer 67(4)773-775。反映ECOG体能状态的标准描述于下表1中：
Figure BDA0003183097650000662
在一些任何实施方案中，在施用细胞的剂量时或紧临施用细胞的剂量的时间之前，受试者在用除了另一剂量的表达CAR的细胞以外的用于疾病或病症的一种或多种先前疗法治疗后于缓解后已经复发，或者变得用所述先前疗法难以治疗。在一些实施方案中，受试者在用一种、两种或三种或更多种先前疗法(除了另一剂量的表达CAR的细胞以外)治疗后于缓解后已经复发，或者变得用所述先前疗法难以治疗。在一些实施方案中，受试者在用一种先前疗法(除了另一剂量的表达CAR的细胞以外)治疗后于缓解后已经复发，或者变得用所述先前疗法难以治疗，例如，使得细胞的所述剂量是二线疗法。在一些实施方案中，受试者在用两种或更多种先前疗法(除了另一剂量的表达CAR的细胞以外)治疗后于缓解后已经复发，或者变得用所述先前疗法难以治疗，例如，使得细胞的所述剂量是三线或更晚疗法，如四线疗法。
在一些方面，根据所提供的实施方案治疗的受试者包括患有复发性或难治性侵袭性大B细胞淋巴瘤(R/R LBCL)的成年受试者。合格的受试者在用2种或更多种先前疗法治疗后患有弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL，非特指型[NOS]；包括从惰性组织学转化的DLBCL[tDLBCL])、具有MYC和BCL2和/或BCL6重排和DLBCL组织学的高级别B细胞淋巴瘤、原发性纵隔B细胞淋巴瘤(PMBCL)或者3B级滤泡性淋巴瘤。在一些实施方案中，患有继发性CNS淋巴瘤的受试者可以根据所提供的实施方案来治疗。在一些方面，在输注抗CD19 CAR后实现完全反应但是复发的受试者可以根据所提供的实施方案来治疗。在一些实施方案中，先前已经施用CAR表达T细胞疗法(例如，表达相同CAR+ T细胞的工程化T细胞)并且在首次输注后已经实现疾病稳定(SD)作为其最佳反应的受试者可以根据所提供的实施方案(例如，作为CAR表达T细胞疗法的第二输注或周期)来治疗。
在一些实施方案中，在施用细胞的剂量之时或之前：受试者患有或已经被鉴定为患有复发性或难治性大B细胞淋巴瘤；和/或受试者用或已经用蒽环类药物和一种或多种CD20靶向剂进行治疗；和/或受试者在两个或更多个治疗线后或在自体HSCT后复发或患有难治性疾病；和/或受试者被鉴定为或已经被鉴定为ECOG体能状态为1或2；和/或如果受试者已经接受了先前CD19靶向疗法，则在先前CD19靶向疗法后从受试者获得的生物样品包含表达CD19的细胞。在一些实施方案中，细胞剂量的施用通过门诊递送进行。
在一些方面，如在门诊环境中(例如，在在非三级中心中)根据所提供的实施方案治疗的受试者包括患有复发性/难治性B细胞NHL的成年患者。在一些方面，例如在门诊环境中要根据所提供的实施方案治疗的受试者包括患有以下的受试者：弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、从滤泡性淋巴瘤产生的转化的DLBCL(tDLBCL)和具有MYC和BCL2和/或BCL6重排与DLBCL组织学的高级别B细胞淋巴瘤。在一些方面，例如在门诊环境中要根据所提供的实施方案治疗的受试者包括已经用蒽环类药物和利妥昔单抗治疗并且在用于DLBCL的2种或更多种系统治疗线之后或在自体HSCT之后患有复发性/难治性疾病的受试者。
在一些实施方案中，在通过门诊递送进行细胞的剂量的施用之前，所提供的实施方案涉及鉴定或选择用于施用细胞的剂量的受试者，所述受试者是或具有：复发性或难治性大B细胞淋巴瘤；和/或蒽环类药物和一种或多种CD20靶向剂；和/或在两个或更多个治疗线后或在自体HSCT后的复发性或难治性疾病；和/或ECOG体能状态为1或2；和/或如果受试者已经接受了先前CD19靶向疗法，则在先前CD19靶向疗法后从受试者获得的生物样品包含表达CD19的细胞。
在一些实施方案中，在施用细胞的剂量之前，所提供的实施方案涉及鉴定或选择用于施用细胞的剂量的受试者，所述受试者患有：双/三打击淋巴瘤；化疗难治性淋巴瘤，任选地化疗难治性DLBCL；尚未响应于用于治疗恶性肿瘤(任选地NHL)的先前疗法实现完全缓解(CR)；和/或已经在接受自体干细胞移植(ASCT)后1年或小于1年内复发；和/或患有与中枢神经系统(CNS)受累相关或涉及中枢神经系统(CNS)受累的淋巴瘤。
在一些方面，根据所提供的实施方案治疗的受试者包括如下成年受试者：其已经从用于侵袭性B细胞NHL的免疫化学疗法的单一治疗线复发，或者是所述单一治疗线难以治疗的，并且无资格进行HSCT。在一些方面，根据所提供的实施方案治疗的受试者包括在含有蒽环类药物和CD20靶向剂的免疫化学疗法的1种先前治疗线之后患有以下的受试者：弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)非特指型(NOS；从头或转化的滤泡性淋巴瘤[tFL])、具有MYC和BCL2和/或BCL6重排与DLBCL组织学的高级别B细胞淋巴瘤(双/三打击淋巴瘤[DHL/THL])和3B级滤泡性淋巴瘤。在一些方面，要根据所提供的实施方案治疗的受试者包括具有继发性CNS受累的受试者。在一些方面，要根据所提供的实施方案治疗的受试者包括被认为无资格进行高剂量化学疗法和HSCT二者并且无资格移植(TNE)，同时保持有资格进行CAR T细胞疗法的受试者。在一些方面，TNE的受试者包括符合以下TNE标准中的至少一项的受试者：(a)年龄≥70岁；(b)ECOG体能状态为2；和/或(c)肺功能受损(肺一氧化碳弥散量[DLCO]≤60％，但是基于室内空气SaO2≥92％，且CTCAE≤1呼吸困难)、心脏功能受损(左心室射血分数[LVEF]≥40％且<50％)、肾功能受损(肌酐清除率>30且,60mL/min)或肝功能受损(AST/ALT>2且≤5x ULN)。在一些方面，要根据所提供的实施方案治疗的受试者包括如下受试者：其先前已经施用CAR表达T细胞疗法(例如，表达相同CAR+ T细胞的工程化T细胞)并在首次输注后已经实现完全反应(CR)，但是例如随着CAR表达T细胞疗法的第二输注而复发。
在一些实施方案中，在施用细胞的剂量之前，所提供的实施方案涉及鉴定或选择用于施用细胞的剂量的受试者，所述受试者患有复发性/难治性NHL；所述受试者被鉴定为或已经被鉴定为无资格进行高剂量化学疗法和造血干细胞移植(HSCT)二者；并且所述受试者已经在用除了另一剂量的表达CAR的细胞以外的用于疾病或病症的一种先前疗法治疗后于缓解后复发，或者变得用所述先前疗法难以治疗。
在一些实施方案中，在施用细胞的剂量之前，所提供的实施方案涉及鉴定或选择用于施用细胞的剂量的受试者，所述受试者是或具有：年龄为70岁或更老；和/或ECOG体能状态为2；和/或肺功能受损，任选地肺一氧化碳弥散量(DLCO)是为或约60％或更低；和/或心脏功能受损，任选地左心室射血分数(LVEF)小于或小于约50％；和/或肾功能受损，任选地计算的肌酐清除率小于或小于约60mL/min；和/或肝功能受损，任选地天冬氨酸转氨酶(AST)和丙氨酸转氨酶(ALT)超过正常值上限(ULN)的两倍或约两倍。
在一些方面，用于根据所提供的实施方案治疗的受试者包括具有足够器官功能的受试者。在一些方面，用于确定足够器官功能的示例性标准包括：基于室内空气饱和O2浓度SaO2≥92％，并且不良事件的通用术语标准(CTCAE)≤1呼吸困难；LVEF≥40％；计算的肌酐清除率(Cockcroft-Gault)>30mL/min；AST/ALT≤5×ULN；足够骨髓功能以接受淋巴细胞清除化学疗法；和/或总胆红素<2.0mg/dL(或对于患有吉尔伯特综合征或肝脏淋巴瘤浸润的受试者，<3.0mg/dL)。
在一些实施方案中，疾病或病症是感染性疾病或病症或者与感染性疾病或病症相关，所述感染性疾病或病症例如但不限于病毒、逆转录病毒、细菌和原生动物感染、免疫缺陷、巨细胞病毒(CMV)、EB病毒(EBV)、腺病毒、BK多瘤病毒。在一些实施方案中，疾病或病症是自身免疫性或炎性疾病或病症，如关节炎(例如类风湿性关节炎(RA))、I型糖尿病、系统性红斑狼疮(SLE)、炎性肠病、银屑病、硬皮病、自身免疫性甲状腺疾病、格雷夫斯病、克罗恩病、多发性硬化症、哮喘和/或与移植相关的疾病或病症。
在一些实施方案中，与疾病或障碍相关的抗原选自αvβ6整合素(avb6整合素)、B细胞成熟抗原(BCMA)、B7-H3、B7-H6、碳酸酐酶9(CA9，也称为CAIX或G250)、癌症-睾丸抗原、癌症/睾丸抗原1B(CTAG，也称为NY-ESO-1和LAGE-2)、癌胚抗原(CEA)、细胞周期蛋白、细胞周期蛋白A2、C-C基序趋化因子配体1(CCL-1)、CD19、CD20、CD22、CD23、CD24、CD30、CD33、CD38、CD44、CD44v6、CD44v7/8、CD123、CD133、CD138、CD171、硫酸软骨素蛋白聚糖4(CSPG4)、表皮生长因子蛋白(EGFR)、表皮生长因子受体III型突变体(EGFR vIII)、上皮糖蛋白2(EPG-2)、上皮糖蛋白40(EPG-40)、肝配蛋白B2、肝配蛋白受体A2(EPHa2)、雌激素受体、Fc受体样蛋白5(FCRL5；也称为Fc受体同源物5或FCRH5)、胎儿乙酰胆碱受体(胎儿AchR)、叶酸结合蛋白(FBP)、叶酸受体α、神经节苷脂GD2、O-乙酰化GD2(OGD2)、神经节苷脂GD3、糖蛋白100(gp100)、磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3(GPC3)、G蛋白偶联受体5D(GPRC5D)、Her2/neu(受体酪氨酸激酶erb-B2)、Her3(erb-B3)、Her4(erb-B4)、erbB二聚体、人高分子量黑色素瘤相关抗原(HMW-MAA)、乙型肝炎表面抗原、人白细胞抗原A1(HLA-A1)、人白细胞抗原A2(HLA-A2)、IL-22受体α(IL-22Rα)、IL-13受体α2(IL-13Rα2)、激酶插入结构域受体(kdr)、κ轻链、L1细胞粘附分子(L1-CAM)、L1-CAM的CE7表位、含有富亮氨酸重复序列的蛋白8家族成员A(LRRC8A)、Lewis Y、黑色素瘤相关抗原(MAGE)-A1、MAGE-A3、MAGE-A6、MAGE-A10、间皮素(MSLN)、c-Met、鼠类巨细胞病毒(CMV)、粘蛋白1(MUC1)、MUC16、自然杀伤细胞2族成员D(NKG2D)配体、黑色素A(MART-1)、神经细胞粘附分子(NCAM)、癌胚胎抗原、黑色素瘤优先表达抗原(PRAME)、孕酮受体、前列腺特异性抗原、前列腺干细胞抗原(PSCA)、前列腺特异性膜抗原(PSMA)、受体酪氨酸激酶样孤儿受体1(ROR1)、存活蛋白、滋养层糖蛋白(TPBG，也称为5T4)、肿瘤相关糖蛋白72(TAG72)、酪氨酸酶相关蛋白1(TRP1，也称为TYRP1或gp75)、酪氨酸酶相关蛋白2(TRP2，也称为多巴色素互变异构酶、多巴色素δ异构酶或DCT)、血管内皮生长因子受体(VEGFR)、血管内皮生长因子受体2(VEGFR2)、肾母细胞瘤1(WT-1)、病原体特有的或病原体表达的抗原、或与通用标签相关的抗原、和/或生物素化分子、和/或由HIV、HCV、HBV或其他病原体表达的分子。在一些实施方案中，受体靶向的抗原包括与B细胞恶性肿瘤相关的抗原，如许多已知B细胞标记中的任何一种。在一些实施方案中，抗原是或包括CD20、CD19、CD22、ROR1、CD45、CD21、CD5、CD33、Igκ、Igλ、CD79a、CD79b或CD30。在一些实施方案中，疾病或病症是B细胞恶性肿瘤，如大B细胞淋巴瘤(例如，DLBCL)，并且抗原是CD19。
在一些实施方案中，抗原是或包括病原体特异性抗原或病原体表达的抗原。在一些实施方案中，抗原是病毒抗原(例如来自HIV、HCV、HBV等的病毒抗原)、细菌抗原和/或寄生虫抗原。在一些实施方案中，细胞疗法(例如，过继T细胞疗法)通过自体转移进行，其中从接受细胞疗法的受试者或从源自这个受试者的样品分离细胞和/或以其他方式制备细胞。因此，在一些方面，细胞源自需要治疗的受试者(例如，患者)，并且在分离和处理后将所述细胞施用至同一受试者。
在一些实施方案中，细胞疗法(例如，过继T细胞疗法)通过同种异体转移进行，其中从要接受或最终接受细胞疗法的受试者以外的受试者(例如，第一受试者)分离细胞和/或以其他方式制备细胞。在此类实施方案中，然后将细胞施用至相同物种的不同受试者，例如第二受试者。在一些实施方案中，所述第一和第二受试者在遗传上是相同的。在一些实施方案中，所述第一和第二受试者在遗传上是相似的。在一些实施方案中，所述第二受试者与所述第一受试者表达相同的HLA类别或超类型。
细胞可以通过任何合适的方式施用，例如通过推注输注，通过注射例如静脉内或皮下注射、眼内注射、眼周注射、视网膜下注射、玻璃体内注射、经中隔注射、巩膜下注射、脉络膜内注射、前房注射、结膜下(subconjectval)注射、结膜下(subconjuntival)注射、眼球筋膜囊下(sub-Tenon)注射、眼球后注射、眼球周注射或后近巩膜(posteriorjuxtascleral)递送。在一些实施方案中，它们通过肠胃外、肺内和鼻内以及(如果局部治疗需要)病灶内施用来施用。肠胃外输注包括肌肉内、静脉内、动脉内、腹膜内或皮下施用。在一些实施方案中，给定剂量是通过细胞的单次推注施用来施用。在一些实施方案中，给定剂量通过例如在不超过3天的时间段内细胞的多次推注施用，或通过细胞的连续输注施用来施用。在一些实施方案中，细胞剂量或任何其他疗法(例如，淋巴细胞清除疗法、干预疗法和/或组合疗法)的施用是通过门诊递送进行的。
在一些实施方案中，细胞剂量或任何另外的疗法(例如，淋巴细胞清除疗法、干预疗法和/或组合疗法)的施用是通过住院递送进行的。在一些方面，细胞剂量或任何另外的疗法(例如，淋巴细胞清除疗法、干预疗法和/或组合疗法)的施用是在住院环境中(例如，在大学医疗中心)进行的。在一些方面，在门诊环境中，例如，在非大学医疗中心接受疗法。在一些方面，在门诊环境中施用和管理细胞疗法或任何另外的疗法(例如，淋巴细胞清除疗法、干预疗法和/或组合疗法)可以导致在社区/非大学中心中的更广泛利用和改进的可及性。
对于疾病的预防或治疗，适当的剂量可取决于要治疗的疾病类型、细胞或重组受体的类型、疾病的严重程度和病程、是针对预防目的还是针对治疗目的而施用细胞、先前治疗、受试者的临床病史和对细胞的反应以及主治医师的决断。在一些实施方案中，将组合物和细胞以合适的方式一次或经一系列治疗施用至受试者。
在一些实施方案中，细胞是作为组合治疗的一部分来施用，如与另一种或另外的治疗性干预(如抗体或工程化细胞或受体或药剂(如细胞毒性剂或治疗剂))同时或以任何顺序依序施用。在一些实施方案中，所述细胞与一种或多种另外的治疗剂共施用或与另一种治疗性干预结合施用(同时或以任何顺序依序施用)。在一些实施方案中，所述另外的治疗剂是本文所述的任何干预或药剂，如可以改善本文(例如在章节II中)所述的毒性症状的任何所述干预或药剂。在一些情况下，将细胞与另一种疗法在时间上足够接近地共施用，使得细胞群增强一种或多种另外的治疗剂的效果，或反之亦然。在一些实施方案中，在一种或多种另外的治疗剂之前施用细胞。在一些实施方案中，在一种或多种另外的治疗剂之后施用细胞。在一些实施方案中，一种或多种另外的药剂包括细胞因子(例如IL-2)，例如以增强持久性。在一些实施方案中，所述方法包括施用化学治疗剂。
在一些实施方案中，所述方法包括在所述施用之前施用化学治疗剂(例如，调理性化学治疗剂)，例如以减小肿瘤负荷。
在一些方面，用免疫清除(例如，淋巴细胞清除)疗法预调理受试者可以改进过继细胞疗法(ACT)的效果。
因此，在一些实施方案中，所述方法包括在开始所述细胞疗法之前将预调理剂施用至受试者，所述预调理剂如淋巴细胞清除剂或化学治疗剂，如环磷酰胺、氟达拉滨或其组合。例如，可以在开始细胞疗法之前至少2天(如之前至少3、4、5、6或7天)，向受试者施用预调理剂。在一些实施方案中，在开始细胞疗法之前不超过7天(如之前不超过6、5、4、3或2天)，向受试者施用预调理剂。
在一些实施方案中，将受试者用环磷酰胺以在或在约20mg/kg与100mg/kg受试者体重之间，如在或在约40mg/kg与80mg/kg之间的剂量进行预调理。在一些方面，用或用约60mg/kg的环磷酰胺对受试者进行预调理或施用。在一些实施方案中，可以将环磷酰胺按单一剂量施用或者可以按多个剂量施用，如每天施用、每隔一天施用或每三天施用。在一些实施方案中，环磷酰胺每天施用一次，持续一天或两天。在一些实施方案中，在淋巴细胞清除剂包含环磷酰胺的情况下，以在或在约100mg/m2与500mg/m2受试者体表面积之间，如在或在约200mg/m2与400mg/m2之间，或250mg/m2与350mg/m2之间(包含端值)的剂量向受试者施用环磷酰胺。在一些情况下，向受试者施用约100mg/m2的环磷酰胺。在一些情况下，向受试者施用约150mg/m2的环磷酰胺。在一些情况下，向受试者施用约200mg/m2的环磷酰胺。在一些情况下，向受试者施用约250mg/m2的环磷酰胺。在一些情况下，向受试者施用约300mg/m2的环磷酰胺。在一些实施方案中，可以将环磷酰胺按单一剂量施用或者可以按多个剂量施用，如每天施用、每隔一天施用或每三天施用。在一些实施方案中，环磷酰胺每天施用，如持续1-5天，例如持续3至5天。在一些情况下，在开始细胞疗法之前，向受试者每天施用约300mg/m2受试者体表面积的环磷酰胺，持续3天。在一些实施方案中，在开始细胞疗法之前，向受试者施用总计为或约300mg/m2、400mg/m2、500mg/m2、600mg/m2、700mg/m2、800mg/m2、900mg/m2、1000mg/m2、1200mg/m2，1500mg/m2、1800mg/m2、2000mg/m2、2500mg/m2、2700mg/m2、3000mg/m2、3300mg/m2、3600mg/m2、4000mg/m2或5000mg/m2的环磷酰胺，或任何前述值限定的范围内的环磷酰胺。
在一些实施方案中，在淋巴细胞清除剂包含氟达拉滨的情况下，以在为或约1mg/m2与为或100mg/m2之间，如在为或约10mg/m2与为或约75mg/m2之间、为或约15mg/m2与为或约50mg/m2之间、为或约20mg/m2与为或约40mg/m2之间、为或约或24mg/m2与为或约35mg/m2之间(包含端值)的剂量向受试者施用氟达拉滨。在一些情况下，向受试者施用为或为或约10mg/m2的氟达拉滨。在一些情况下，向受试者施用为或约15mg/m2的氟达拉滨。在一些情况下，向受试者施用为或约20mg/m2的氟达拉滨。在一些情况下，向受试者施用为或约25mg/m2的氟达拉滨。在一些情况下，向受试者施用为或约30mg/m2的氟达拉滨。在一些实施方案中，可以将氟达拉滨按单一剂量施用或者可以按多个剂量施用，如每日给药、每隔一天给药或每三天给药。在一些实施方案中，每日施用氟达拉滨，如持续1-5天，例如持续3至5天。在一些情况下，在开始细胞疗法之前，向受试者每天施用为或约30mg/m2受试者体表面积的氟达拉滨，持续3天。在一些实施方案中，在开始细胞疗法之前，向受试者施用总计为或约10mg/m2、20mg/m2、25mg/m2、30mg/m2、40mg/m2、50mg/m2、60mg/m2、70mg/m2、80mg/m2，90mg/m2、100mg/m2、120mg/m2、150mg/m2、180mg/m2、200mg/m2、250mg/m2、270mg/m2、300mg/m2、330mg/m2、360mg/m2、400mg/m2或500mg/m2的环磷酰胺，或由任何前述值限定的范围内的环磷酰胺。
在一些实施方案中，淋巴细胞清除剂包含单一药剂，如环磷酰胺或氟达拉滨。在一些实施方案中，向受试者仅施用环磷酰胺，而不施用氟达拉滨或其他淋巴细胞清除剂。在一些实施方案中，在施用之前，受试者已经接受淋巴细胞清除疗法，包括每天施用为或约200-400mg/m2受试者体表面积、任选地为或约300mg/m2的环磷酰胺，持续2-4天。在一些实施方案中，向受试者仅施用氟达拉滨，例如不施用环磷酰胺或其他淋巴细胞清除剂。在一些实施方案中，在施用之前，受试者已经接受淋巴细胞清除疗法，包括每天施用为或约20-40mg/m2受试者体表面积、任选地为或约30mg/m2的氟达拉滨，持续2-4天。
在一些实施方案中，淋巴细胞清除剂包含药剂的组合，如环磷酰胺和氟达拉滨的组合。因此，药剂的组合可以包括按任何剂量或施用时间表(如上述那些)的环磷酰胺以及按任何剂量或施用时间表(如上述那些)的氟达拉滨。例如，在一些方面，在第一剂量或后续剂量之前，向受试者施用为或约60mg/kg(约2g/m2)的环磷酰胺和3至5个剂量的25mg/m2氟达拉滨。在一些中，在施用细胞之前，向受试者同时静脉内施用氟达拉滨(30mg/m2/天，持续3天)和环磷酰胺(300mg/m2/天，持续3天)(flu/cy)。在一些实施方案中，向受试者施用减少的、延迟的或消除的剂量的一个或多个剂量的一种或多种淋巴细胞清除剂。
在一些实施方案中，在从受试者收集细胞(例如通过白细胞单采术)以供如章节III.E中所述用重组受体(例如CAR)工程化细胞疗法的细胞之后以及在淋巴细胞清除疗法之前，受试者可以接受桥接疗法。在一些实施方案中，桥接疗法是化学疗法。桥接疗法可以是用于在接受工程化(例如CAR+)T细胞的剂量之前控制疾病的任何抗癌疗法。可以基于熟练开业医生对于治疗特定疾病或病症的判断，包括基于多种因素来施用多种疗法中的任一种作为桥接疗法，所述因素如患者年龄、疾病的严重程度或程度、副作用的可能性、在淋巴细胞清除疗法之前的施用的时间安排、先前疗法和其他因素。桥接疗法可以包括放射疗法或全身疗法。可以在淋巴细胞清除疗法之前作为桥接给予的示例性疗法包括但不限于利妥昔单抗、地塞米松、泼尼松、来那度胺、吉西他滨、奥沙利铂、维汀-本妥昔单抗、依鲁替尼或苯达莫司汀或前述任一种的任何组合。在一些情况下，桥接疗法是吉西他滨和奥沙利铂。在一些情况下，桥接疗法是吉西他滨和利妥昔单抗。在一些实施方案中，桥接疗法是利妥昔单抗和吉西他滨和奥沙利铂。在接受淋巴清除疗法之前，如通过正电子发射断层摄影术(PET)评估受试者的疾病状态。在一些实施方案中，仅向在桥接疗法后展现PET阳性疾病的受试者给予淋巴细胞清除疗法并施用工程化(例如CAR+)T细胞的剂量。在其他实施方案中，如果受试者在桥接疗法后实现CR，则不向所述受试者给予淋巴细胞清除疗法或工程化(例如CAR+)T细胞的剂量。
在一些实施方案中，在施用细胞后，例如通过许多已知方法中的任一种测量工程化细胞群的生物学活性。要评估的参数包括工程化或天然T细胞或其他免疫细胞与抗原的特异性结合，其在体内例如通过成像进行评估，或离体例如通过ELISA或流式细胞术进行评估。在某些实施方案中，工程化细胞破坏靶细胞的能力可以使用任何合适的已知方法来测量，所述方法例如描述于例如以下文献中的细胞毒性测定：Kochenderfer等人,J.Immunotherapy,32(7):689-702(2009)，以及Herman等人J.Immunological Methods,285(1):25-40(2004)。在某些实施方案中，通过测定一种或多种细胞因子(如CD107a、IFNγ、IL-2和TNF)的表达和/或分泌来测量细胞的生物学活性。在一些方面，通过评估临床结果(如肿瘤负荷或负担的减少)来测量生物活性。
在某些实施方案中，将工程化细胞以任何数量的方式进一步修饰，使得其治疗或预防功效增加。例如，可以将群体表达的工程化CAR或TCR直接或通过接头间接缀合至靶向部分。将化合物(例如，CAR或TCR)与靶向部分缀合的实践是已知的。参见例如，Wadwa等人,J.Drug Targeting 3:1 11(1995)和美国专利5,087,616。在一些实施方案中，将细胞作为组合治疗的一部分施用，如与另一种治疗性干预(如抗体或工程化细胞或受体或药剂(如细胞毒性剂或治疗剂))同时施用或以任何顺序依序施用。在一些实施方案中，所述细胞与一种或多种另外的治疗剂共施用或与另一种治疗性干预结合施用(同时或以任何顺序依序施用)。在一些情况下，将细胞与另一种疗法在时间上足够接近地共施用，使得细胞群增强一种或多种另外的治疗剂的效果，或反之亦然。在一些实施方案中，在一种或多种另外的治疗剂之前施用细胞。在一些实施方案中，在一种或多种另外的治疗剂之后施用细胞。在一些实施方案中，一种或多种另外的药剂包括细胞因子(如IL-2)，例如以增强持久性。
在一些实施方案中，对受试者进行前驱用药，例如以使输注反应的风险降至最低。在一些方面，前驱用药包括施用镇痛药和/或抗组胺药。在一些实施方案中，前驱用药包括施用对乙酰氨基酚和/或苯海拉明或另一种H1-抗组胺药。在一些实施方案中，在用细胞疗法治疗之前为或约30至60分钟，患者使用对乙酰氨基酚(例如，650mg口服)和苯海拉明(例如，25-50mg，IV或口服)或另一种H1-抗组胺药。
B.给药
在一些实施方案中，根据所提供的方法和/或用所提供的制品或组合物将细胞的剂量施用至受试者。在一些实施方案中，剂量的大小或时间安排是根据受试者的特定疾病或病症来确定。在一些情况下，考虑到所提供的描述，可以凭经验确定用于特定疾病的剂量的大小或时间安排。
在一些任何所提供的实施方案中，T细胞(如表达重组受体的工程化T细胞)的剂量包括、富集或包含富集CD3+ T细胞、CD4+ T细胞、CD8+ T细胞或者CD4+ T细胞和CD8+ T细胞的细胞组合物或细胞群。在一些任何此类实施方案中，T细胞的剂量中大于或大于约70％、75％、80％、85％、90％、95％或98％的细胞是CD3+ T细胞、CD4+ T细胞、CD8+ T细胞或者CD4+T细胞和CD8+ T细胞。在一些任何实施方案中，T细胞的所述剂量包含限定比率的表达受体的CD4+细胞与表达受体的CD8+细胞和/或CD4+ T细胞与CD8+ T细胞，所述比率为大约1:1或者在大约1:3与大约3:1之间。在一些任何实施方案中，所述限定比率为或为大约1:1。
在一些任何所提供的实施方案中，T细胞的所述剂量包含一定剂量的CD4+和CD8+ T细胞，其中每个剂量的T细胞包含重组受体，所述重组受体与疾病或障碍(如本文所述的任一种)或其细胞或组织表达的和/或与疾病或障碍相关的靶抗原特异性结合。在一些方面，施用包括施用多种单独组合物，所述多种单独组合物包含含有CD8+ T细胞的第一组合物和含有CD4+ T细胞的第二组合物。
在一些实施方案中，细胞的剂量包含在为或约2x105个细胞/kg与为或约2x106个细胞/kg之间，如在为或约4x105个细胞/kg与为或约1x106个细胞/kg之间或在为或约6x105个细胞/kg与为或约8x105个细胞/kg之间。在一些实施方案中，细胞的剂量包含不超过2x105个细胞(例如抗原表达细胞，如CAR表达细胞)/公斤受试者体重(细胞/kg)，如不超过或不超过约3x105个细胞/kg、不超过或不超过约4x105个细胞/kg、不超过或不超过约5x105个细胞/kg、不超过或不超过约6x105个细胞/kg、不超过或不超过约7x105个细胞/kg、不超过或不超过约8x105个细胞/kg、不超过或不超过约9x105个细胞/kg、不超过或不超过约1x106个细胞/kg、或者不超过或不超过约2x106个细胞/kg。在一些实施方案中，细胞的剂量包含至少或至少约或为或约2x105个细胞(例如抗原表达细胞，如CAR表达细胞)/公斤受试者体重(细胞/kg)，如至少或至少约或为或约3x105个细胞/kg、至少或至少约或为或约4x105个细胞/kg、至少或至少约或为或约5x105个细胞/kg、至少或至少约或为或约6x105个细胞/kg、至少或至少约或为或约7x105个细胞/kg、至少或至少约或为或约8x105个细胞/kg、至少或至少约或为或约9x105个细胞/kg、至少或至少约或为或约1x106个细胞/kg、或至少或至少约或为或约2x106个细胞/kg。在一些实施方案中，细胞的数量是作为活细胞(例如，活T细胞)的此类细胞的数量。
在某些实施方案中，将细胞或细胞亚型的单独群体按以下施用至受试者：在为或约10万至为或约1000亿个细胞的范围和/或每公斤受试者体重该量的细胞，如例如为或约10万至为或约500亿个细胞(例如，为或约500万个细胞、为或约2500万个细胞、为或约5亿个细胞、为或约10亿个细胞、为或约50亿个细胞、为或约200亿个细胞、为或约300亿个细胞、为或约400亿个细胞或由任两个前述值限定的范围)、为或约100万至为或约500亿个细胞(例如，为或约500万个细胞、为或约2500万个细胞、为或约5亿个细胞、为或约10亿个细胞、为或约50亿个细胞、为或约200亿个细胞、为或约300亿个细胞、为或约400亿个细胞或由任两个前述值限定的范围)，如为或约1000万至为或约1000亿个细胞(例如，为或约2000万个细胞、为或约3000万个细胞、为或约4000万个细胞、为或约6000万个细胞、为或约7000万个细胞、为或约8000万个细胞、为或约9000万个细胞、为或约100亿个细胞、为或约250亿个细胞、为或约500亿个细胞、为或约750亿个细胞、为或约900亿个细胞或由任两个前述值限定的范围)，并且在一些情况下，为或约1亿个细胞至为或约500亿个细胞(例如，为或约1.2亿个细胞、为或约2.5亿个细胞、为或约3.5亿个细胞、为或约6.5亿个细胞、为或约8亿个细胞、为或约9亿个细胞、为或约30亿个细胞、为或约300亿个细胞、为或约450亿个细胞)或在这些范围和/或每公斤受试者体重的这些范围之间的任何值。剂量可以根据疾病或障碍和/或患者和/或其他治疗特有的属性而变化。在一些实施方案中，此类值是指重组受体表达细胞的数量；在其他实施方案中，它们是指施用的T细胞或PBMC或总细胞的数量。在一些实施方案中，细胞的数量是作为活细胞的此类细胞的数量。
在一些实施方案中，细胞的剂量是细胞的平剂量或细胞的固定剂量，使得细胞的所述剂量无关于或不基于受试者的体表面积或体重。
在一些实施方案中，基因工程化细胞的剂量包含从为或约1x105至为或约5x108个总CAR表达T细胞、从为或约1x105至为或约2.5x108个总CAR表达T细胞、从为或约1x105至为或约1x108个总CAR表达T细胞、从为或约1x105至为或约5x107个总CAR表达T细胞、从为或约1x105至为或约2.5x107个总CAR表达T细胞、从为或约1x105至为或约1x107个总CAR表达T细胞、从为或约1x105至为或约5x106个总CAR表达T细胞、从为或约1x105至为或约2.5x106个总CAR表达T细胞、从为或约1x105至为或约1x106个总CAR表达T细胞、从为或约1x106至为或约5x108个总CAR表达T细胞、从为或约1x106至为或约2.5x108个总CAR表达T细胞、从为或约1x106至为或约1x108个总CAR表达T细胞、从为或约1x106至为或约5x107个总CAR表达T细胞、从为或约1x106至为或约2.5x107个总CAR表达T细胞、从为或约1x106至为或约1x107个总CAR表达T细胞、从为或约1x106至为或约5x106个总CAR表达T细胞、从为或约1x106至为或约2.5x106个总CAR表达T细胞、从为或约2.5x106至为或约5x108个总CAR表达T细胞、从为或约2.5x106至为或约2.5x108个总CAR表达T细胞、从为或约2.5x106至为或约1x108个总CAR表达T细胞、从为或约2.5x106至为或约5x107个总CAR表达T细胞、从为或约2.5x106至为或约2.5x107个总CAR表达T细胞、从为或约2.5x106至为或约1x107个总CAR表达T细胞、从为或约2.5x106至为或约5x106个总CAR表达T细胞、从为或约5x106至为或约5x108个总CAR表达T细胞、从为或约5x106至为或约2.5x108个总CAR表达T细胞、从为或约5x106至为或约1x108个总CAR表达T细胞、从为或约5x106至为或约5x107个总CAR表达T细胞、从为或约5x106至为或约2.5x107个总CAR表达T细胞、从为或约5x106至为或约1x107个总CAR表达T细胞、从为或约1x107至为或约5x108个总CAR表达T细胞、从为或约1x107至为或约2.5x108个总CAR表达T细胞、从为或约1x107至为或约1x108个总CAR表达T细胞、从为或约1x107至为或约5x107个总CAR表达T细胞、从为或约1x107至为或约2.5x107个总CAR表达T细胞、从为或约2.5x107至为或约5x108个总CAR表达T细胞、从为或约2.5x107至为或约2.5x108个总CAR表达T细胞、从为或约2.5x107至为或约1x108个总CAR表达T细胞、从为或约2.5x107至为或约5x107个总CAR表达T细胞、从为或约5x107至为或约5x108个总CAR表达T细胞、从为或约5x107至为或约2.5x108个总CAR表达T细胞、从为或约5x107至为或约1x108个总CAR表达T细胞、从为或约1x108至为或约5x108个总CAR表达T细胞、从为或约1x108至为或约2.5x108个总CAR表达T细胞、从为或约或2.5x108至为或约5x108个总CAR表达T细胞。在一些实施方案中，基因工程化细胞的剂量包含从或从约2.5x107至为或约1.5x108个总CAR表达T细胞，如从或从约5x107至或至约1x108个总CAR表达T细胞。在一些实施方案中，细胞的数量是作为活细胞(如活T细胞)的此类细胞的数量。
在一些实施方案中，基因工程化细胞的剂量包含至少或至少约1x105个CAR表达细胞、至少或至少约2.5x105个CAR表达细胞、至少或至少约5x105个CAR表达细胞、至少或至少约1x106个CAR表达细胞、至少或至少约2.5x106个CAR表达细胞、至少或至少约5x106个CAR表达细胞、至少或至少约1x107个CAR表达细胞、至少或至少约2.5x107个CAR表达细胞、至少或至少约5x107个CAR表达细胞、至少或至少约1x108个CAR表达细胞、至少或至少约1.5x108个CAR表达细胞、至少或至少约2.5x108个CAR表达细胞或者至少或至少约5x108个CAR表达细胞。在一些实施方案中，细胞的数量是作为活细胞(如活T细胞)的此类细胞的数量。
在一些实施方案中，细胞疗法包括施用一定剂量，所述剂量包含如下数量的细胞：从或从约1x105至或至约5x108个总重组受体表达细胞、总T细胞或总外周血单核细胞(PBMC)，从或从约5x105至或至约1x107个总重组受体表达细胞、总T细胞或总外周血单核细胞(PBMC)或者从或从约1x106至或至约1x107个总重组受体表达细胞、总T细胞或总外周血单核细胞(PBMC)，每个都包含端值。在一些实施方案中，细胞疗法包含施用一定剂量的细胞，所述剂量包含如下数量的细胞：至少或至少约1x105个总重组受体表达细胞、总T细胞或总外周血单核细胞(PBMC)，如至少或至少1x106、至少或至少约1x107、至少或至少约1x108个此类细胞。在一些实施方案中，细胞的数量是作为活细胞(如活T细胞)的此类细胞的数量。
在一些实施方案中，所述数量是关于CD3+、CD8+或CD4+和CD8+，在一些情况下以及重组受体表达(例如CAR+)细胞的总数量。在一些实施方案中，细胞的数量是作为活细胞的此类细胞的数量。
在一些实施方案中，细胞疗法包括施用一定剂量，所述剂量包含如下数量的细胞：从或从约1x105至或至约5x108个CD3+、CD8+或CD4+和CD8+总T细胞或者CD3+、CD8+或CD4+和CD8+重组受体(例如CAR)表达细胞、从或从约5x105至或至约1x107个CD3+、CD8+或CD4+和CD8+总T细胞或者CD3+、CD8+或CD4+和CD8+重组受体(例如CAR)表达细胞、或者从或从约1x106至或至约1x107个CD3+、CD8+或CD4+和CD8+总T细胞或者CD3+、CD8+或CD4+和CD8+重组受体(例如CAR)表达细胞，每个都包含端值。在一些实施方案中，细胞疗法包括施用一定剂量，所述剂量包含如下数量的细胞：从或从约1x105至或至约5x108个总CD3+/CAR+、CD8+/CAR+或CD4+/CD8+/CAR+细胞、从或从约5x105至或至约1x107个总CD3+/CAR+、CD8+/CAR+或CD4+/CD8+/CAR+细胞或者从或从约1x106至或至约1x107个总CD3+/CAR+、CD8+/CAR+或CD4+/CD8+/CAR+细胞，每个都包含端值。在一些实施方案中，细胞的数量是作为活细胞的此类细胞的数量。
在一些实施方案中，基因工程化细胞的剂量包含至少或至少约2.5x107个CD3+/CAR+、CD8+/CAR+或CD4+/CD8+/CAR+ T细胞、至少或至少约5x107个CD3+/CAR+、CD8+/CAR+或CD4+/CD8+/CAR+ T细胞或者至少或至少约1x108个CD3+/CAR+、CD8+/CAR+或CD4+/CD8+/CAR+ T细胞。在一些实施方案中，基因工程化细胞的剂量包含为或约2.5x107个CD3+/CAR+、CD8+/CAR+或CD4+/CD8+/CAR+ T细胞、为或约5x107个CD3+/CAR+、CD8+/CAR+或CD4+/CD8+/CAR+ T细胞或者为或约1x108个CD3+/CAR+、CD8+/CAR+或CD4+/CD8+/CAR+ T细胞。在一些实施方案中，细胞的数量是作为活细胞的此类细胞的数量。
在一些实施方案中，T细胞的剂量包含：为或约5x107个重组受体(例如CAR)表达T细胞或者为或约2.5x107个重组受体(例如CAR)表达CD8+ T细胞。在一些实施方案中，T细胞的剂量包含：为或约1x108个重组受体(例如CAR)表达T细胞或者为或约5x107个重组受体(例如CAR)表达CD8+ T细胞。在一些实施方案中，T细胞的剂量包含：为或约1.5x108个重组受体(例如CAR)表达T细胞或者为或约0.75x108个重组受体(例如CAR)表达CD8+ T细胞。在一些实施方案中，细胞的数量是作为活细胞的此类细胞的数量。
在一些实施方案中，所述剂量的T细胞包括CD4+ T细胞、CD8+T细胞或CD4+和CD8+ T细胞。
在一些实施方案中，例如，在受试者是人的情况下，所述剂量的CD8+ T细胞(包括在包括CD4+和CD8+ T细胞的剂量中)包括在为或约1x106个与为或约5x108个之间的总重组受体(例如CAR)表达CD8+细胞，例如，在以下范围内：从为或约5x106至为或约1x108个此类细胞，如1x107、2.5x107、5x107、7.5x107、1x108、1.5x108或5x108个总此类细胞，或任两个前述值之间的范围。在一些实施方案中，向患者施用多个剂量，并且每个剂量或总剂量可以在任何前述值内。在一些实施方案中，细胞的剂量包括施用从或从约1x107至或至约0.75x108个总重组受体表达CD8+ T细胞、从或从约1x107至或至约5x107个总重组受体表达CD8+ T细胞、从或从约1x107至或至约0.25x108个总重组受体表达CD8+ T细胞，每个都包含端值。在一些实施方案中，细胞的剂量包括施用为或约1x107、2.5x107、5x107、7.5x107、1x108、1.5x108、2.5x108或5x108个总重组受体表达CD8+ T细胞。在一些实施方案中，细胞的数量是作为活细胞的此类细胞的数量。
在一些实施方案中，例如，在受试者是人的情况下，所述剂量包括少于约5x108个总重组受体(例如，CAR)表达细胞、T细胞或外周血单核细胞(PBMC)，例如，在为或约1x106至为或约5x108个此类细胞的范围内，如为或约2x106、5x106、1x107、5x107、1x108、1.5x108或5x108个总此类细胞，或者在任两个前述值之间的范围。在一些实施方案中，细胞的数量是作为活细胞的此类细胞的数量。
在一些实施方案中，向患者施用多个剂量，并且每个剂量或总剂量可以在任何前述值内。在一些实施方案中，细胞的剂量包括施用从或从约1x105至或至约5x108个总重组受体(例如CAR)表达T细胞或总T细胞、从或从约1x105至或至约1.5x108个总重组受体(例如CAR)表达T细胞或总T细胞、从或从约1x105至或至约1x108个总重组受体(例如CAR)表达T细胞或总T细胞、从或从约5x105至或至约1x107个总重组受体(例如CAR)表达T细胞或总T细胞或者从或从约1x106至或至约1x107个总重组受体(例如CAR)表达T细胞或总T细胞，每个都包含端值。
在一些实施方案中，所述剂量的T细胞包括CD4+ T细胞、CD8+T细胞或CD4+和CD8+ T细胞。
在一些实施方案中，细胞(例如，重组受体表达T细胞)的剂量是作为单一剂量施用至受试者，或者在两周、一个月、3个月、六个月、1年或更长的时间段内仅施用一次。
在过继细胞疗法的情况下，施用给定“剂量”涵盖施用作为单一组合物和/或单次不间断施用(例如，作为单次注射或连续输注)的给定量或数量的细胞，并且还涵盖在指定时间段中(如在不超过3天中)施用在多种单独组合物或输注中提供的作为分割剂量或作为多种组合物的给定量或数量的细胞。因此，在一些情况下，剂量是在单一时间点给予或开始的指定数量的细胞的单一或连续施用。然而，在一些情况下，剂量在不超过三天的时间段内以多次注射或输注的方式施用，例如每天一次持续三天或两天或者通过在一天的时间内多次输注。
因此，在一些方面，所述剂量的细胞是在单一药物组合物中施用。在一些实施方案中，所述剂量的细胞是在共同含有所述剂量的细胞的多个组合物中施用。
在一些实施方案中，术语“分割剂量”是指被分割从而可在超过一天中施用的剂量。这种类型的给药包括在本方法中并且被认为是单一剂量。
因此，细胞的剂量可以作为分割剂量施用，例如随时间施用的分割剂量。例如，在一些实施方案中，可以在2天中或在3天中将所述剂量施用至受试者。用于分割给药的示例性方法包括在第一天施用25％的剂量并在第二天施用剩余的75％的剂量。在其他实施方案中，可以在第一天施用33％的剂量，并且在第二天施用剩余的67％。在一些方面，在第一天施用10％的剂量，在第二天施用30％的剂量，并且在第三天施用60％的剂量。在一些实施方案中，分割剂量不超过3天。
在一些实施方案中，所述剂量的细胞可以通过施用多种组合物或溶液(如第一和第二，任选地更多)来施用，每种组合物或溶液含有所述剂量的一些细胞。在一些方面，任选地在某一时间段内，分开地或独立地施用多个组合物，每个组合物含有细胞的不同群体和/或亚型。例如，细胞的群体或亚型可以分别包括CD8+和CD4+ T细胞，和/或分别富集CD8+和富集CD4+的群体，例如，各自单独地包括基因工程化以表达重组受体的细胞的CD4+和/或CD8+T细胞。在一些实施方案中，剂量的施用包括施用第一组合物，所述第一组合物包含CD8+ T细胞的剂量或CD4+ T细胞的剂量，以及施用第二组合物，所述第二组合物包含CD4+ T细胞和CD8+ T细胞的剂量中的另一者。
在一些实施方案中，组合物或剂量的施用(例如，多种细胞组合物的施用)涉及单独施用细胞组合物。在一些方面，单独施用是同时或以任何顺序依序进行。在特定实施方案中，单独施用是通过按任何顺序施用以下来依序进行：第一组合物，所述第一组合物包含CD8+ T细胞的剂量或CD4+T细胞的剂量，以及第二组合物，所述第二组合物包含CD4+ T细胞和CD8+ T细胞的剂量中的另一者。在一些实施方案中，所述剂量包括第一组合物和第二组合物，并且将第一组合物和第二组合物在彼此相隔48小时内施用，如彼此相隔不超过36小时或彼此相隔不超过24小时内施用。在一些实施方案中，将第一组合物和第二组合物相隔0至12小时、相隔0至6小时或相隔0至2小时施用。在一些实施方案中，开始施用第一组合物和开始施用第二组合物是相隔不超过2小时、不超过1小时或不超过30分钟，相隔不超过15分钟、不超过10分钟或不超过5分钟进行的。在一些实施方案中，第一组合物的施用的开始和/或完成以及第二组合物的施用的完成和/或开始是相隔不超过2小时、不超过1小时或不超过30分钟，相隔不超过15分钟、不超过10分钟或不超过5分钟进行的。
在一些组合物中，第一组合物(例如，所述剂量的第一组合物)包含CD4+ T细胞。在一些组合物中，第一组合物(例如，所述剂量的第一组合物)包含CD8+ T细胞。在一些实施方案中，第一组合物是在第二组合物之前施用。在特定实施方案中，CD8+ T细胞是在CD4+ T细胞之前施用。
在一些实施方案中，细胞的剂量或组合物包括限定或目标比率的表达重组受体(例如CAR)的CD4+细胞与表达重组受体(例如CAR)的CD8+细胞和/或CD4+细胞与CD8+细胞，所述比率任选地为大约1:1或者在大约1:3与大约3:1之间，如大约1:1。在一些方面，具有不同细胞群的目标或所需比率(如CD4+:CD8+比率或CAR+CD4+:CAR+CD8+比率，例如，1:1)的组合物或剂量的施用涉及施用含有所述群体中的一种的细胞组合物，然后施用包含所述群体中的另一种的单独细胞组合物，其中所述施用是以或大约以所述目标或所需比率进行。在一些方面，以限定比率施用细胞的剂量或组合物导致改进的T细胞疗法的扩增、持久性和/或抗肿瘤活性。
在一些实施方案中，基因工程化细胞的剂量为或为约5x107个CD3+CAR+活细胞，其包括为或约2.5x107个CD4+CAR+活细胞和为或约2.5x107个CD8+CAR+活细胞的单独剂量。在一些实施方案中，基因工程化细胞的剂量为或为约1x108个CD3+CAR+活细胞，其包括为或约5x107个CD4+CAR+活细胞和为或约5x107个CD8+CAR+活细胞的单独剂量。在一些实施方案中，基因工程化细胞的剂量为或为约1.5x108个CD3+CAR+活细胞，其包括为或约0.75x108个CD4+CAR+活细胞和为或约0.75x108个CD8+CAR+活细胞的单独剂量。
在一些实施方案中，受试者接受细胞的多个剂量，例如，两个或更多个剂量或多个连续剂量。在一些实施方案中，将两个剂量施用至受试者。在一些实施方案中，受试者接受连续剂量，例如，在第一剂量后大约4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20或21天施用第二剂量。在一些实施方案中，在第一剂量后施用多个连续剂量，使得在施用所述连续剂量后施用另外的一个或多个剂量。在一些方面，在另外的剂量中施用至受试者的细胞数量与第一剂量和/或连续剂量相同或相似。在一些实施方案中，另外的一个或多个剂量大于先前剂量。
在一些方面，第一和/或连续剂量的大小基于一个或多个标准来确定，如受试者对先前治疗(例如化学疗法)的反应、受试者的疾病负荷(如肿瘤负担、体积、大小或程度)、转移的范围或类型、分期和/或受试者发生毒性结果(例如CRS、巨噬细胞激活综合征、肿瘤溶解综合征、神经毒性和/或针对所施用的细胞和/或重组受体的宿主免疫应答)的可能性或发生率。
在一些方面，第一剂量的施用与连续剂量的施用之间的时间为约9至约35天、约14至约28天或15至27天。在一些实施方案中，连续剂量的施用是在施用第一剂量后大于约14天且小于约28天的时间点。在一些方面，第一剂量与连续剂量之间的时间为约21天。在一些实施方案中，在施用连续剂量后施用另外的一个或多个剂量(例如，连续剂量)。在一些方面，在施用先前剂量后至少约14天且小于约28天施用另外的一个或多个连续剂量。在一些实施方案中，在先前剂量后小于约14天(例如，在先前剂量后4、5、6、7、8、9、10、11、12或13天)施用另外的剂量。在一些实施方案中，在先前剂量后小于约14天不施用剂量，和/或在先前剂量后超过约28天不施用剂量。
在一些实施方案中，细胞(例如，重组受体表达细胞)的剂量包含两个剂量(例如，双剂量)，包含T细胞的第一剂量和T细胞的连续剂量，其中第一剂量和第二剂量中的一个或两个包括施用T细胞的分割剂量。
在一些实施方案中，细胞的剂量通常足够大以有效减轻疾病负荷。
在一些实施方案中，细胞以所需剂量施用，所述所需剂量在一些方面包括所需剂量或数量的细胞或一种或多种细胞类型和/或所需比率的细胞类型。因此，细胞的剂量在一些实施方案中是基于总细胞数(或每kg体重的数量)以及单独群体或亚型的所需比率，如CD4+与CD8+的比率。在一些实施方案中，细胞的剂量是基于单独群体中或单独细胞类型的的细胞的所需总数(或每kg体重的细胞数量)。在一些实施方案中，剂量是基于此类特征的组合，如总细胞的所需数量、所需比率和单独群体中细胞的所需总数。
在一些实施方案中，以总细胞的所需剂量(如T细胞的所需剂量)的容忍差异或在所述容忍差异内施用细胞的群体或亚型(如CD8+和CD4+T细胞)。在一些方面，所需剂量是细胞的所需数量或被施用细胞的受试者的每单位体重细胞的所需数量，例如，细胞/kg。在一些方面，所需剂量等于或高于细胞的最小数量或每单位体重细胞的最小数量。在一些方面，在以所需剂量施用的总细胞中，单独群体或亚型是以等于或接近所需输出比率(如CD4+与CD8+的比率)存在，例如，在这种比率的某一容忍差异或误差内。
在一些实施方案中，细胞是以细胞的一种或多种单独群体或亚型的所需剂量(如CD4+细胞的所需剂量和/或CD8+细胞的所需剂量)来施用，或在所述容忍差异内施用。在一些方面，所需剂量是亚型或群体的细胞的所需数量或被施用所述细胞的受试者的每单位体重此类细胞的所需数量，例如细胞/kg。在一些方面，所需剂量等于或高于群体或亚型的细胞的最小数量或每单位体重群体或亚型的细胞的最小数量。
因此，在一些实施方案中，剂量是基于总细胞的所需固定剂量和所需比率，和/或基于一种或多种(例如，每一种)单独亚型或亚群的所需固定剂量。因此，在一些实施方案中，剂量是基于T细胞的所需固定或最小剂量和CD4+与CD8+细胞的所需比率，和/或是基于CD4+和/或CD8+细胞的所需固定或最小剂量。
在一些实施方案中，细胞是以多种细胞群或亚型(如CD4+和CD8+细胞或亚型)的所需输出比率的容忍范围来施用，或在所述容忍范围内施用。在一些方面，所需比率可以是特定比率，或者可以是一系列比率。例如，在一些实施方案中，所需比率(例如，CD4+与CD8+细胞的比率)在为或约5:1与为或约5:1之间(或大于或大于约1:5且小于或小于约5:1)，或者在为或约1:3与为或约3:1之间(或大于或大于约1:3且小于或小于约3:1)，如在为或约2:1与为或约1:5之间(或大于或大于约1:5且小于或小于约2:1)，如为或约5:1、4.5:1、4:1、3.5:1、3:1、2.5:1、2:1、1.9:1、1.8:1、1.7:1、1.6:1、1.5:1、1.4:1、1.3:1、1.2:1、1.1:1、1:1、1:1.1、1:1.2、1:1.3、1:1.4、1:1.5、1:1.6、1:1.7、1:1.8、1:1.9、1:2、1:2.5、1:3、1:3.5、1:4、1:4.5或1:5。在一些方面，容忍差异在所需比率的约1％、约2％、约3％、约4％约5％、约10％、约15％、约20％、约25％、约30％、约35％、约40％、约45％、约50％内，包括这些范围之间的任何值。
在特定实施方案中，细胞的数量和/或浓度是指重组受体(例如，CAR)表达细胞的数量。在其他实施方案中，细胞的数量和/或浓度是指施用的所有细胞、T细胞或外周血单核细胞(PBMC)的数量或浓度。
在一些方面，剂量的大小是基于一个或多个标准来确定，如受试者对先前治疗(例如，化学疗法)的反应、受试者的疾病负荷(如肿瘤负担、体积、大小或程度)、转移的程度或类型、分期和/或受试者发生毒性结果(例如，CRS、巨噬细胞激活综合征、肿瘤溶解综合征、神经毒性和/或针对所施用的细胞和/或重组受体的宿主免疫应答)的可能性或发生率。
在一些实施方案中，所述方法还包括施用一个或多个另外的剂量的表达嵌合抗原受体(CAR)的细胞和/或淋巴细胞清除疗法，和/或所述方法的一个或多个步骤重复进行。在一些实施方案中，一个或多个另外的剂量与初始剂量相同。在一些实施方案中，一个或多个另外的剂量与初始剂量不同，例如，更高，如比初始剂量高为或约2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍或10倍或更多；或者更低，如例如更高，如比初始剂量低2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍或10倍或更多。在一些实施方案中，一个或多个另外的剂量的施用是基于以下来确定：受试者对初始治疗或任何先前治疗的反应、受试者的疾病负荷(如肿瘤负担、体积、大小或程度)、转移的程度或类型、分期和/或受试者发生毒性结果(例如，CRS、巨噬细胞激活综合征、肿瘤溶解综合征、神经毒性和/或针对所施用的细胞和/或重组受体的宿主免疫应答)的可能性或发生率。
C.反应、功效和存活
在一些实施方案中，尽管受试者已经对另一种疗法产生抗性，但所述施用有效治疗所述受试者。在一些实施方案中，至少30％、至少35％、至少40％或至少50％的根据所述方法治疗的受试者实现完全缓解(CR)；和/或至少约40％、至少约50％、至少约60％或至少约70％的根据所述方法治疗的受试者实现客观反应(OR)。在一些实施方案中，至少或至少约50％的根据所述方法治疗的受试者、至少或至少约60％的受试者、至少或至少约70％的受试者、至少或至少约80％的受试者或者至少或至少约90％的受试者实现CR和/或实现客观反应(OR)。在一些实施方案中，评估有效治疗的标准包括总体反应率(ORR；在一些情况下也称为客观反应率)、完全反应(CR；在一些情况下也称为完全缓解)、反应持续时间(DOR)、无进展存活期(PFS)和/或总体存活期(OS)。
在一些实施方案中，至少40％或至少50％的根据本文所提供的方法治疗的受试者实现完全缓解(CR；在一些情况下也称为完全反应)，展现大于或大于约3个月、6个月或12个月或大于13个月或大约14个月的无进展存活期(PFS)和/或总体存活期(OS)；平均而言，根据所述方法治疗的受试者展现大于或大于约6个月、12个月或18个月的中值PFS或OS；和/或所述受试者在疗法后展现至少或至少约6、12、18或更多个月或更久的PFS或OS。
在一些方面，受试者(如患有NHL的受试者)的反应率是基于卢加诺标准。(Cheson等人,(2014)JCO 32(27):3059-3067；Johnson等人,(2015)Radiology 2:323-338；Cheson,B.D.(2015)Chin Clin Oncol 4(1):5)。在一些方面，反应评估利用临床、血液学和/或分子方法中的任一种。在一些方面，施用卢加诺标准评估的反应涉及视情况使用正电子发射断层摄影术(PET)-计算机断层成像(CT)和/或CT。PET-CT评价还可以包括使用氟脱氧葡萄糖(FDG)用于嗜FDG淋巴瘤。在一些方面，如果将使用PET-CT来评估嗜FDG组织学中的反应，则可以使用5分量表。在一些方面，5分量表包含以下标准：1，没有高于背景的摄取；2，摄取≤纵隔；3，摄取>纵隔但≤肝脏；4，摄取中度>肝脏；5，摄取显著高于肝脏和/或新病灶；X，新的摄取区域不可能与淋巴瘤有关。
在一些方面，如使用卢加诺标准描述的完全反应涉及在不同可测量部位的完全代谢反应和完全放射学反应。在一些方面，这些部位包括淋巴结和淋巴外部位，其中当使用PET-CT时，在5分量表上CR被描述为得分为1、2或3，其具有或不具有残留肿块。在一些方面，在脾或骨髓内具有高生理摄取或激活的韦氏环(Waldeyer's ring)或结节外部位中(例如，对于化学疗法或骨髓集落刺激因子)，摄取可以大于正常纵隔和/或肝脏。在这种情况下，如果在初始受累部位的摄取不大于周围的正常组织，即使所述组织具有高生理摄取，也可以推断为完全代谢反应。在一些方面，使用CT在淋巴结中评估反应，其中CR被描述为没有患病的淋巴外部位，并且靶淋巴结/淋巴结肿块的病灶的最长横径(LDi)必须复原至≤1.5cm。其他评估部位包括骨髓，其中基于PET-CT的评估应指示在骨髓中缺乏嗜FDG疾病的证据，并且基于CT的评估应指示正常形态，如果不确定则应是IHC阴性。其他部位可以包括对器官肿大的评估，其应复原至正常。在一些方面，评估未测量的病灶和新病灶，它们在CR的情况下应不存在(Cheson等人,(2014)JCO32(27):3059-3067；Johnson等人,(2015)Radiology 2:323-338；Cheson,B.D.(2015)Chin Clin Oncol 4(1):5)。
在一些方面，如使用卢加诺标准描述的部分反应(PR；在一些情况下也称为部分缓解)涉及在不同可测量部位的部分代谢和/或放射学反应。在一些方面，这些部位包括淋巴结和淋巴外部位，其中在使用PET-CT时，PR被描述为得分为4分或5分，具有与基线相比降低的摄取和任何大小的一个或多个残留肿块。在中间时期，此类发现可以指示反应中的疾病。在治疗结束时，此类发现可以指示残留疾病。在一些方面，使用CT评估淋巴结中的反应，其中PR被描述为多达6个可测量的靶结节和结节外部位的SPD减小≥50％。如果病灶太小而无法在CT上测量，则将5mm×5mm指定为默认值；如果病灶不再可见，则所述值为0mm×0mm；对于>5mm×5mm但小于正常的结节，使用实际测量值进行计算。其他评估部位包括骨髓，其中基于PET-CT的评价应指示残留摄取，所述残留摄取高于正常骨髓中的摄取但与基线相比有所降低(弥漫性摄取与来自所允许化学疗法的反应性变化相容)。在一些方面，如果在结节反应的情况下在骨髓中存在持续的局灶性变化，则应考虑用MRI或活检或间隔扫描进一步评价。在一些方面，其他部位可以包括对器官肿大的评估，其中脾脏的超过正常的长度必须已经复原>50％。在一些方面，评估未测量病灶和新病灶，其在PR的情况下应不存在/正常，已复原但没有增加。也可以使用基于PET-CT和/或CT的评估来测量无反应/疾病稳定(SD)或疾病进展(PD)。(Cheson等人,(2014)JCO 32(27):3059-3067；Johnson等人,(2015)Radiology 2:323-338；Cheson,B.D.(2015)Chin Clin Oncol 4(1):5)。
所述研究是根据赫尔辛基宣言(Declaration of Helsinki)、国际药品临床试验管理规范协调会议(International Conference on Harmonisation Good ClinicalPractice)指南和适用的法规要求来进行。
在一些方面，无进展存活期(PFS)被描述为在疾病(如癌症)治疗期间和之后，受试者带病生存但所述疾病不恶化的时间长度。在一些方面，客观反应(OR)被描述为可测量的反应。在一些方面，客观反应率(ORR；在一些情况下也称为总体反应率)被描述为实现CR或PR的患者的比例。在一些方面，总体存活期(OS)被描述为从诊断日期或疾病(如癌症)治疗开始日期起，被诊断患有所述疾病的受试者仍然存活的时间长度。在一些方面，无事件存活期(EFS)被描述为在癌症治疗结束后，受试者保持没有所述治疗意图预防或延迟的某些并发症或事件的时间长度。这些事件可以包括癌症的复发或某些症状的发作，如已经扩散到骨骼的癌症引起的骨痛，或死亡。
在一些实施方案中，反应持续时间(DOR)的量度包括从记录到肿瘤反应至疾病进展的时间。在一些实施方案中，用于评估反应的参数可以包括持久反应，例如，从开始疗法起一段时间之后持续存在的反应。在一些实施方案中，持久反应是由在开始疗法后大约1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、18或24个月的反应率来指示。在一些实施方案中，反应持续超过3个月或超过6个月。
在一些方面，使用RECIST标准确定客观肿瘤反应；在一些方面，在实体瘤中确定。(Eisenhauer等人,European Journal of Cancer 45(2009)228-247。)在一些方面，使用RECIST标准确定靶病灶的客观肿瘤反应。在一些方面中，如使用RECIST标准确定的完全反应被描述为所有靶病灶的消失，并且任何病理性淋巴结(无论是靶标还是非靶标)必须在短轴上减少至<10mm。在其他方面中，如使用RECIST标准确定的部分反应被描述为以基线总直径为参考，靶病灶的直径总和减小至少30％。在其他方面中，疾病进展(PD)被描述为以研究中的最小总和(如果基线总和在研究中最小，则这个最小总和包括基线总和)作为参考，靶病灶直径总和增加至少20％。除了20％的相对增加外，总和还必须显示至少5mm的绝对增加(在一些方面，出现一个或多个新病灶也被视为进展)。在其他方面中，疾病稳定(SD)被描述为以研究时的最小总直径作为参考，既没有足够缩小以符合PR，也没有足够增加以符合PD。
在一些实施方案中，患有滤泡性淋巴瘤(FL)的受试者的存活率是基于意大利淋巴瘤协作组(ILI)和/或国际滤泡性淋巴瘤预后因子项目(IFLPFP)开发的评分系统，大体上如上文所述(Luminari等人,(2012)Rev.Brad.Hematol.Hemoter.,34:54-59)。在一些实施方案中，疾病(如FL)的程度可以通过Ann Arbor分期系统、肿瘤负荷、巨块病、疾病的结节或结节外部位的数量和/或骨髓受累来评估，大体上如上所述。
在一些方面，根据所提供方法和/或用所提供制品或组合物进行的施用通常降低或预防受试者中疾病或病症的扩大或负荷。例如，在疾病或病症是肿瘤的情况下，所述方法通常降低肿瘤大小、体积、转移、骨髓中原始细胞的百分比或可分子检测的癌症，和/或改善预后或存活或与肿瘤负荷相关的其他症状。
疾病负荷可以涵盖受试者体内或受试者的器官、组织或体液(如肿瘤的器官或组织或例如可指示转移的另一位置)中疾病细胞的总数。例如，可以在某些血液恶性肿瘤环境中在血液或骨髓中检测和/或定量肿瘤细胞。在一些实施方案中，疾病负荷可以包括肿瘤的质量、转移的数量或程度和/或骨髓中存在的原始细胞的百分比。
在一些实施方案中，受试者患有白血病。疾病负荷的程度可以通过评估血液或骨髓中的残留白血病来确定。
在一些方面，受试者(如患有CLL的受试者)的反应率是基于国际慢性淋巴细胞白血病研讨会(IWCLL)反应标准(Hallek等人,Blood 2008年6月15日；111(12):5446-5456)。在一些方面，这些标准描述如下：完全缓解(CR；在一些情况下也称为完全反应)，其在一些方面要求不存在通过免疫表型分析的外周血克隆淋巴细胞、不存在淋巴结病、不存在肝肿大或脾肿大、不存在全身症状且血细胞计数令人满意；完全缓解伴随不完全骨髓恢复(CRi)，其在一些方面被描述为上文的CR，但没有正常的血细胞计数；部分缓解(PR；在一些情况下也称为部分反应)，其在一些方面被描述为淋巴细胞计数下降≥50％、淋巴结病减少≥50％、或肝或脾减小≥50％，以及外周血细胞计数改善；进展性疾病(PD)，其在一些方面被描述为淋巴细胞计数增加≥50％至>5x109/L、淋巴结病增加≥50％、肝或脾大小增加≥50％、Richter转化或由于CLL所致的新的血细胞减少；和疾病稳定，其在一些方面被描述为不符合CR、CRi、PR或PD的标准。
在一些实施方案中，如果在施用细胞的剂量的1个月内，受试者的淋巴结大小小于或小于约20mm，大小小于或小于约10mm或者大小小于或小于约10mm，则所述受试者展现CR或OR。
在一些实施方案中，在受试者的骨髓中(或在大于50％、60％、70％、80％、90％或更多的根据所述方法治疗的受试者的骨髓中)没有检测到CLL的指标克隆。在一些实施方案中，通过IgH深度测序评估CLL的指标克隆。在一些实施方案中，在施用细胞之后为或约或者至少或至少约1、2、3、4、5、6、12、18或24个月的时间，未检测到指标克隆。
在一些实施方案中，如果例如如通过光学显微术检测，骨髓中存在大于或等于5％原始细胞，如骨髓中大于或等于10％原始细胞、骨髓中大于或等于20％原始细胞、骨髓中大于或等于30％原始细胞、骨髓中大于或等于40％原始细胞或骨髓中大于或等于50％原始细胞，则受试者展现形态学疾病。在一些实施方案中，如果骨髓中存在少于5％原始细胞，则受试者展现完全或临床缓解。
在一些实施方案中，受试者患有白血病。疾病负荷的程度可以通过评估血液或骨髓中的残留白血病来确定。
在一些实施方案中，如果例如如通过光学显微术检测，骨髓中存在大于或等于5％原始细胞，如骨髓中大于或等于10％原始细胞、骨髓中大于或等于20％原始细胞、骨髓中大于或等于30％原始细胞、骨髓中大于或等于40％原始细胞或骨髓中大于或等于50％原始细胞，则受试者展现形态学疾病。在一些实施方案中，如果骨髓中存在少于5％原始细胞，则受试者展现完全或临床缓解。
在一些实施方案中，受试者可以展现完全缓解，但存在小部分形态学上(通过光学显微术技术)不可检测的残留白血病细胞。如果受试者展现骨髓中小于5％原始细胞并且展现可分子检测的癌症，则称所述受试者展现微小残留病(MRD)。在一些实施方案中，可以使用允许灵敏检测少量细胞的各种分子技术中的任何一种来评估可分子检测的癌症。在一些方面，此类技术包括PCR测定，其可以确定由染色体易位产生的独特Ig/T细胞受体基因重排或融合转录物。在一些实施方案中，流式细胞术可以用于基于白血病特异性免疫表型鉴定癌细胞。在一些实施方案中，癌症的分子检测可以检测100,000个正常细胞中的少至1个白血病细胞。在一些实施方案中，如果如通过PCR或流式细胞术检测到100,000个细胞中的至少或大于1个白血病细胞，则受试者展现可分子检测的MRD。在一些实施方案中，受试者的疾病负荷是不可分子检测的或MRD-，使得在一些情况下使用PCR或流式细胞术技术不能检测到受试者体内的白血病细胞。
在一些实施方案中，在受试者的骨髓中(或在大于50％、60％、70％、80％、90％或更多的根据所述方法治疗的受试者的骨髓中)没有检测到白血病(例如CLL)的指标克隆。在一些实施方案中，通过IGH深度测序来评估白血病(例如CLL)的指标克隆。在一些实施方案中，在施用细胞之后为或约或者至少或至少约1、2、3、4、5、6、12、18或24个月的时间，未检测到指标克隆。
在一些方面，MRD是通过流式细胞术来检测。可以使用流式细胞术监测骨髓和外周血样品中的癌细胞。在特定方面，使用流式细胞术检测或监测骨髓中癌细胞的存在。在一些方面，使用通过流式细胞术进行的多参数免疫学检测来检测癌细胞(参见例如，Coustan-Smith等人,(1998)Lancet 351:550-554)。在一些方面，使用通过质谱流式细胞技术进行的多参数免疫学检测来检测癌细胞。在一些例子中，可以使用1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、20、25、30、35、40、45或50个参数来检测癌细胞。用于检测的抗原是基于所检测的癌症选择的(Foon和Todd(1986)Blood 68:1-31)。
在一些例子中，通过骨髓抽吸物或骨髓活检收获骨髓，并分离淋巴细胞用于分析。可以使用与荧光染料(例如，异硫氰酸荧光素(FITC)、藻红蛋白、多甲藻素叶绿素蛋白或生物素)缀合的单克隆和/或多克隆抗体检测分离的淋巴细胞上的表位，如末端脱氧核苷酸基转移酶(TdT)、CD3、CD10、CD11c、CD13、CD14、CD33、CD19、CD20、CD21、CD22、CD23、CD34、CD45、CD56、CD79b、IgM和/或KORSA3544。然后可以使用流式细胞术(如多参数流式细胞术或质谱流式细胞术)来检测标记的细胞，以检测多个表位。
可以基于光散射点图鉴定和门控淋巴细胞，然后进行二次门控以鉴定表达目的免疫表型特征的细胞群。示例性表位显示于下表2中。白血病和淋巴瘤的其他免疫学分类提供于Foon和Todd(Blood(1986)68(1):1-31)中。在一些方面，MRD的流式细胞术评估可以通过对带有一种或多种CLL免疫表型(例如，低前向/侧向散射；CD3-；CD5+；CD14-；CD19+；CD23+；CD45+；CD56-)的活淋巴细胞进行定量来实现。
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在一些方面，可以使用所收获的B细胞免疫球蛋白重链(IGH)基因座的深度测序来检测微小残留病(MRD)。特定IgG重排的克隆存在可以提供标记以检测B细胞恶性肿瘤(如CLL或NHL)的存在和/或其恶性细胞的残留存在。在一些方面，从血液收获并分离细胞，如含有或怀疑含有B细胞的群体。在一些方面，从骨髓(例如从骨髓抽吸物或骨髓活检)和/或从其他生物样品收获并分离细胞。在一些方面，使用针对基因座的V区和J区内的高度保守序列的引物实现互补决定区3(CDR3)的聚合酶链式反应(PCR)扩增，其可用于鉴定细胞的克隆群体，用于评估微小残留病的目的。可以使用用于检测克隆群体的其他方法，如单细胞测序法，包括提供关于特定谱系的和/或表达特定可变链(如可变重链或其结合位点)的细胞(如克隆群体)的数量信息的那些方法。在一些方面，使用简并引物或识别不同细胞克隆之间共有的可变链区的引物(如识别IGH序列的共有V区和简并共有J区的那些引物)扩增IGH DNA。V区的示例性序列是ACACGGCCTCGTGTATTACTGT(SEQ ID NO:57)。J区的示例性简并共有序列是ACCTGAGGAGACGGTGACC(SEQ ID NO:58)。
在一些方面，PCR产物或测序结果是重排的等位基因特有的，并且用作MRD检测的克隆标记。在CDR3区域的PCR扩增之后，可以对PCR产物进行测序以产生患者特异性寡核苷酸，所述患者特异性寡核苷酸被构建为等位基因特异性PCR的探针，用于灵敏地检测在用CAR-T细胞疗法(例如CD19 CAR-T细胞疗法)治疗B细胞恶性肿瘤后的MRD。在不使用共有引物产生PCR产物的例子中，可以替代地使用框架区1的V区家族特异性引物。
在一些方面，在治疗后可PCR检测的肿瘤细胞(如B细胞恶性肿瘤(如NHL或CLL)的细胞，如对应于恶性或克隆IGH序列的可检测IGH序列)的持久性与增加的复发风险相关。在一些方面，与具有持续恶性IGH序列的患者相比，治疗后恶性IGH序列呈阴性的患者(在一些方面，即使在其他标准指示疾病进展或仅部分反应(如淋巴结增大的持久性)的情况下或在一些情况下其他标准可能与疾病或缺乏完全反应相关)可能被认为具有增加的PFS可能性或进入CR或持久CR或延长的存活。在一些实施方案中，例如与其他临床症状(如淋巴结大小)或其他分期标准的消退相比，这种预后和分期确定与在施用所述疗法后的短时间段内观察到恶性细胞清除的治疗特别相关。例如，在一些此类方面，如与其他可用分期或预后方法相比，样品(如骨髓)中可检测IGH或微小残留病的不存在可以是反应或反应可能性或其持久性的优选读数。在一些方面，来自MRD的结果，例如IGH深度测序信息，可以告知进一步干预或其缺乏。例如，所述方法和其他所提供的实施方案在一些情况下提供，被认为恶性IGH呈阴性的受试者在一些方面可以不进行进一步治疗或不被进一步施用所提供疗法的剂量，或者向所述受试者施用较低的或减少的剂量。相反，可以提供或指定经由IGH深度测序展现MRD的受试者被进一步治疗，例如用最初以相似或更高剂量施用的疗法或用进一步治疗来治疗。在一些方面，疾病或病症在施用第一剂量后持续存在，和/或施用第一剂量不足以根除受试者的疾病或病症。
在一些实施方案中，如与通过可比较方法使用替代性给药方案(如其中受试者接受一种或多种替代性治疗剂的方法，和/或其中受试者不根据所提供方法和/或用所提供制品或组合物接受细胞的剂量和/或淋巴细胞清除剂的方法)会观察到的降低相比，所述方法以更大程度和/或更长时间段降低疾病或病症的负荷，例如，肿瘤细胞的数量、肿瘤大小、患者存活或无事件存活的持续时间。在一些实施方案中，检测、评估或测量受试者中疾病或病症的负荷。在一些方面，可以通过检测受试者中或受试者的器官、组织或体液(如血液或血清)中的疾病细胞或疾病相关细胞(例如肿瘤细胞)的总数来检测疾病负荷。在一些方面，评估受试者的存活、特定时间段内的存活、存活程度、无事件或无症状存活的存在或持续时间或无复发存活。在一些实施方案中，评估疾病或病症的任何症状。在一些实施方案中，指定疾病或病症负荷的量度。
在一些实施方案中，如与其他方法(例如，其中受试者接受一种或多种替代性治疗剂的方法，和/或其中受试者不根据所提供方法和/或用所提供制品或组合物接受细胞的剂量和/或淋巴细胞清除剂的方法)相比，所述方法改进所述受试者的无事件存活率或总体存活率。例如，在一些实施方案中，通过所述方法治疗的受试者在所述剂量后6个月时的无事件存活率或概率大于约40％、大于约50％、大于约60％、大于约70％、大于约80％、大于约90％或大于约95％。在一些方面，总体存活率大于约40％、大于约50％、大于约60％、大于约70％、大于约80％、大于约90％或大于约95％。在一些实施方案中，用所述方法治疗的受试者展现无事件存活、无复发存活或存活到至少6个月或至少1、2、3、4、5、6、7、8、9或10年。在一些实施方案中，至进展时间得以改进，如至进展时间大于或大于约6个月，或至少1年、2年、3年、4年、5年、6年、7年、8年、9或10年。
在一些实施方案中，如与其他方法(例如，其中受试者接受一种或多种替代性治疗剂的方法，和/或其中受试者不根据所提供方法和/或用所提供制品或组合物接受细胞的剂量和/或淋巴细胞清除剂的方法)相比，在通过所述方法治疗后，复发的概率降低。例如，在一些实施方案中，在第一剂量后6个月时复发的概率小于约80％、小于约70％、小于约60％、小于约50％、小于约40％、小于约30％、小于约20％或小于约10％。
在一些情况下，确定所施用细胞(例如，过继转移细胞)的药代动力学，以评估利用度，例如，所施用细胞的生物利用度。用于确定过继转移细胞的药代动力学的方法可以包括从已经被施用工程化细胞的受试者中抽取外周血，并确定所述外周血中所述工程化细胞的数量或比率。用于选择和/或分离细胞的方法可以包括使用嵌合抗原受体(CAR)特异性抗体(例如，Brentjens等人,Sci.Transl.Med.2013年3月；5(177):177ra38)、蛋白L(Zheng等人,J.Transl.Med.2012年2月；10:29)、表位标记(如Strep-Tag序列，将其直接引入CAR中的特定位点，借此使用Strep-Tag的结合试剂直接评估CAR)(Liu等人(2016)NatureBiotechnology,34:430；国际专利申请公开号WO 2015095895)和与CAR多肽特异性结合的单克隆抗体(参见国际专利申请公开号WO 2014190273)。在一些情况下，外在标记基因可以与工程化细胞疗法结合使用，以允许检测或选择细胞，并且在一些情况下也促进细胞自杀。在一些情况下，截短的表皮生长因子受体(EGFRt)可以与转导细胞中感兴趣的转基因(CAR或TCR)共表达(参见例如美国专利号8,802,374)。EGFRt可以含有抗体西妥昔单抗
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或其他治疗性抗EGFR抗体或结合分子识别的表位，其可以用于鉴定或选择已用EGFRt构建体和另一种重组受体(如嵌合抗原受体(CAR))工程化的细胞，和/或用于消除或分离表达所述受体的细胞。参见美国专利号8,802,374和Liu等人,Nature Biotech.2016年4月；34(4):430-434。
在一些实施方案中，可以在施用细胞疗法后的时间段确定从患者获得的生物样品(例如，血液)中CAR+ T细胞的数量，例如，以确定所述细胞的药代动力学。在一些实施方案中，在受试者的血液中或在通过所述方法如此治疗的大多数受试者中可检测的CAR+ T细胞(任选地CAR+CD8+ T细胞和/或CAR+CD4+ T细胞)的数量是大于1个细胞/μL、大于5个细胞/μL或大于10个细胞/μL。
D.毒性
在一些实施方案中，例如，与施用替代性细胞疗法(如替代性CAR+ T细胞组合物)和/或细胞的替代性给药(例如，不以限定比率施用的细胞给药)相比，所提供方法被设计为或包括多个特征，所述特征导致较低比率和/或较低程度的毒性、毒性结果或症状、促进毒性的概况、因子或特性，如与细胞因子释放综合征(CRS)或神经毒性(NT)相关或指示细胞因子释放综合征(CRS)或神经毒性(NT)的症状或结果。
在一些实施方案中，如与某些其他细胞疗法相比，所提供的方法不导致高比率或可能性的毒性或毒性结果，或者降低毒性或毒性结果(如神经毒性(NT)、细胞因子释放综合征(CRS))的比率或可能性。在一些实施方案中，所述方法不导致以下事件或不增加以下事件的风险：严重NT(sNT)、严重CRS(sCRS)、巨噬细胞激活综合征、肿瘤溶解综合征、至少或至少约38摄氏度发热三天或更多天、以及至少或至少约20mg/dL的CRP血浆水平。在一些实施方案中，大于或大于约30％、35％、40％、50％、55％、60％或更多的根据所提供方法治疗的受试者不展现任何等级的CRS或任何等级的神经毒性。在一些实施方案中，不超过50％的所治疗受试者(例如至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或更多的所治疗受试者)展现高于2级的细胞因子释放综合征(CRS)和/或高于2级的神经毒性。在一些实施方案中，至少50％的根据所述方法治疗的受试者(例如至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或更多的所治疗受试者)未展现严重毒性结果(例如严重CRS或严重神经毒性)，如未展现3级或更高级的神经毒性和/或未展现严重CRS，或者在治疗后某一时间段内(如在施用所述细胞的一周、两周或一个月内)未展现上述情况。在一些实施方案中，被评估以确定某些毒性的参数包括不良事件(AE)、剂量限制性毒性(DLT)、CRS和NT。
施用过继T细胞疗法(如用表达嵌合抗原受体的T细胞进行的治疗)可能诱导毒性作用或结果，如细胞因子释放综合征和神经毒性。在一些例子中，此类作用或结果与高水平的循环细胞因子并行，高水平的循环细胞因子可能是观察到的毒性的基础。
在一些方面，毒性结果是细胞因子释放综合征(CRS)或严重CRS(sCRS)，或者与细胞因子释放综合征(CRS)或严重CRS(sCRS)相关，或指示细胞因子释放综合征(CRS)或严重CRS(sCRS)。在一些情况下，在过继T细胞疗法和向受试者施用其他生物产品后，可能发生CRS，例如sCRS。参见Davila等人,Sci Transl Med 6,224ra25(2014)；Brentjens等人,Sci.Transl.Med.5,177ra38(2013)；Grupp等人,N.Engl.J.Med.368,1509-1518(2013)；以及Kochenderfer等人,Blood 119,2709-2720(2012)；Xu等人,Cancer Letters 343(2014)172-78。
通常，CRS由例如通过T细胞、B细胞、NK细胞、单核细胞和/或巨噬细胞介导的过度的全身免疫应答引起。此类细胞可以释放大量炎性介质，如细胞因子和趋化因子。细胞因子可能引发急性炎症应答和/或诱导内皮器官损伤，所述内皮器官损伤可能导致微血管渗漏、心力衰竭或死亡。严重的危及生命的CRS可能导致肺浸润和肺损伤、肾衰竭或弥散性血管内凝血。其他严重的危及生命的毒性可以包括心脏毒性、呼吸窘迫、神经病学毒性和/或肝衰竭。在一些方面，发热、特别是高热(≥38.5℃或≥101.3°F)与CRS或其风险相关。在一些情况下，CRS的特征或症状类似于感染。在一些实施方案中，在呈现CRS症状的受试者中也考虑感染，并且可以施用通过培养监测和经验性抗生素疗法。与CRS相关的其他症状可以包括心功能障碍、成人呼吸窘迫综合征、肾和/或肝衰竭、凝血障碍、弥散性血管内凝血和毛细血管渗漏综合征。
可以使用抗炎疗法(如抗IL-6疗法，例如，抗IL-6抗体，例如，托珠单抗)或抗生素或如所述的其他药剂治疗CRS。CRS的结果、体征和症状是已知的，并且包括本文所述的那些。在一些实施方案中，当特定剂量方案或给药影响或不影响给定的CRS相关的结果、体征或症状时，可指定特定结果、体征和症状和/或量或程度。
在施用CAR表达细胞的情况下，CRS通常在输注表达CAR的细胞后6-20天时发生。参见Xu等人,Cancer Letters 343(2014)172-78。在一些情况下，CRS在CAR T细胞输注后少于6天或超过20天时发生。CRS的发生率和时机可能与在输注时的基线细胞因子水平或肿瘤负荷有关。通常，CRS包括干扰素(IFN)-γ、肿瘤坏死因子(TNF)-α和/或白介素(IL)-2的血清水平升高。可在CRS中快速诱导的其他细胞因子是IL-1β、IL-6、IL-8和IL-10。
与CRS相关的示例性结果包括发热、寒颤、恶寒、低血压、呼吸困难、急性呼吸窘迫综合征(ARDS)、脑病、ALT/AST升高、肾衰竭、心脏病、缺氧、神经紊乱和死亡。神经系统并发症包括谵妄、癫痫样活动、意识错乱、找词困难、失语和/或变得迟钝。与CRS相关的其他结果包括疲劳、恶心、头痛、癫痫、心动过速、肌痛、皮疹、急性血管渗漏综合征、肝功能损害和肾衰竭。在一些方面，CRS与一种或多种因子(如血清铁蛋白、d-二聚体、转氨酶、乳酸脱氢酶和甘油三酯)的增加相关，或者与低纤维蛋白原血或肝脾肿大相关。与CRS相关的其他示例性体征或症状包括血流动力学不稳定、发热型嗜中性粒细胞减少症、血清C反应蛋白(CRP)增加、凝血参数(例如，国际标准化比率(INR)、凝血酶原时间(PTI)和/或纤维蛋白原)变化、心脏和其他器官功能的变化和/或绝对嗜中性粒细胞计数(ANC)。
在一些实施方案中，与CRS相关的结果包括以下中的一种或多种：持续发热，例如指定温度(例如高于或高于约38摄氏度)的发热持续两天或更多天，例如三天或更多天，例如四天或更多天或持续至少连续三天；高于或高于约38摄氏度的发热；细胞因子的升高，如至少两种细胞因子(例如，由以下组成的组中的至少两种：干扰素γ(IFNγ)、GM-CSF、IL-6、IL-10、Flt-3L、分形趋化因子和IL-5和/或肿瘤坏死因子α(TNFα))与治疗前水平相比的最大倍数变化(例如，至少或至少约75倍)，或此类细胞因子中至少一种的最大倍数变化(例如至少或至少约250倍)；和/或至少一种毒性临床体征，如低血压(例如，如通过至少一种静脉内血管作用加压药所测量)；缺氧(例如，血浆氧(PO2)水平低于或低于约90％)；和/或一种或多种神经病学障碍(包括精神状态变化、迟钝和癫痫发作)。在一些实施方案中，可以与CRS同时观察到神经毒性(NT)。
示例性CRS相关结果包括一种或多种因子(包括细胞因子和趋化因子和与CRS相关的其他因子)的增加的或高的血清水平。示例性结果还包括一种或多种此类因子的合成或分泌的增加。这种合成或分泌可以由T细胞或与T细胞相互作用的细胞(如先天免疫细胞或B细胞)进行。
在一些实施方案中，CRS相关的血清因子或CRS相关的结果包括炎性细胞因子和/或趋化因子，包括干扰素γ(IFN-γ)、TNF-a、IL-1β、IL-2、IL-6、IL-7、IL-8、IL-10、IL-12、sIL-2Ra、粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、巨噬细胞炎性蛋白(MIP)-1、肿瘤坏死因子α(TNFα)、IL-6和IL-10、IL-1β、IL-8、IL-2、MIP-1、Flt-3L、分形趋化因子和/或IL-5。在一些实施方案中，所述因子或结果包括C反应蛋白(CRP)。除了作为CRS的早期且易于测量的风险因子外，CRP也是细胞扩增的标记。在一些实施方案中，被测量为具有高CRP水平(如≥15mg/dL)的受试者患有CRS。在一些实施方案中，被测量为具有高CRP水平的受试者未患CRS。在一些实施方案中，CRS的量度包括CRP的量度和指示CRS的另一因子。
在一些实施方案中，在CAR治疗之前、期间或之后监测一种或多种炎性细胞因子或趋化因子。在一些方面中，一种或多种细胞因子或趋化因子包括IFN-γ、TNF-α、IL-2、IL-1β、IL-6、IL-7、IL-8、IL-10、IL-12、sIL-2Rα、粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)或巨噬细胞炎性蛋白(MIP)。在一些实施方案中，监测IFN-γ、TNF-α和IL-6。
已经开发出CRS标准，其似乎与CRS的发作相关联，以预测哪些患者更可能处于发生sCRS的风险(参见Davilla等人Science translational medicine.2014；6(224):224ra25)。因素包括发热、缺氧、低血压、神经系统改变、升高的炎性细胞因子的血清水平，所述炎性细胞因子如一组七种细胞因子(IFNγ、IL-5、IL-6、IL-10、Flt-3L、分形趋化因子和GM-CSF)，它们的治疗诱导的升高可能与治疗前肿瘤负荷和sCRS症状二者密切相关。关于CRS的诊断和管理的其他指南是已知的(参见例如，Lee等人,Blood.2014；124(2):188-95)。在一些实施方案中，反映CRS等级的标准是下表3中详述的那些。
Figure BDA0003183097650001011
Figure BDA0003183097650001021
在一些实施方案中，反映CRS等级的标准是下表4中详述的那些。
Figure BDA0003183097650001022
在一些实施方案中，高剂量血管加压药疗法包括下表5中所述的那些。
Figure BDA0003183097650001031
在一些实施方案中，毒性结果是严重CRS。在一些实施方案中，毒性结果是严重CRS的不存在(例如中度或轻度CRS)。在一些实施方案中，如果在施用后受试者展示以下各项，则认为所述受试者响应于或继发于细胞疗法或其细胞剂量的施用而发生“严重CRS”(“sCRS”)：(1)至少38摄氏度发热持续至少三天；(2)细胞因子升高，其包括(a)与刚刚施用后的水平相比，以下七种细胞因子的组中至少两种的至少75倍的最大倍数变化：干扰素γ(IFNγ)、GM-CSF、IL-6、IL-10、Flt-3L、分形趋化因子和IL-5，和/或(b)与刚刚施用后的水平相比，以下七种细胞因子的组中至少一种的至少250倍的最大倍数变化：干扰素γ(IFNγ)、GM-CSF、IL-6、IL-10、Flt-3L、分形趋化因子和IL-5；和(c)至少一种毒性临床体征，如低血压(需要至少一种静脉内血管作用加压药)或缺氧(PO2<90％)或一种或多种神经病学障碍(包括精神状态变化、迟钝和/或癫痫发作)。在一些实施方案中，严重CRS包括3级或更高级CRS，如表3和表4中所示。
在一些实施方案中，毒性结果(例如，CRS相关结果)的水平(例如CRS指示物的血清水平)是通过ELISA测量。在一些实施方案中，可以测量发热和/或C反应蛋白(CRP)的水平。在一些实施方案中，患有发热且CRP≥15mg/dL的受试者可以被认为具有发生严重CRS的高风险。在一些实施方案中，CRS相关血清因子或CRS相关结果包括炎性细胞因子和/或趋化因子的水平和/或浓度的增加，所述炎性细胞因子和/或趋化因子包括Flt-3L、分形趋化因子、粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、白介素-1β(IL-1β)、IL-2、IL-5、IL-6、IL-7、IL-8、IL-10、IL-12、干扰素γ(IFN-γ)、巨噬细胞炎性蛋白(MIP)-1、MIP-1、sIL-2Rα或肿瘤坏死因子α(TNFα)。在一些实施方案中，所述因子或结果包括C反应蛋白(CRP)。除了作为CRS的早期且易于测量的风险因子外，CRP也是细胞扩增的标记。在一些实施方案中，被测量为具有高CRP水平(如≥15mg/dL)的受试者患有CRS。在一些实施方案中，被测量为具有高CRP水平的受试者未患CRS。在一些实施方案中，CRS的量度包括CRP的量度和指示CRS的另一因子。
在一些实施方案中，与严重CRS或3级CRS或更高级CRS(如4级或更高级)相关的结果包括以下中的一种或多种：持续发热，例如指定温度(例如，高于或高于约38摄氏度)的发热持续两天或更多天，例如三天或更多天，例如四天或更多天或持续至少连续三天；高于或高于约38摄氏度的发热；细胞因子的升高，如至少两种细胞因子(例如，由以下组成的组中的至少两种：干扰素γ(IFNγ)、GM-CSF、IL-6、IL-10、Flt-3L、分形趋化因子和IL-5和/或肿瘤坏死因子α(TNFα))与治疗前水平相比的最大倍数变化(例如至少或至少约75倍)，或此类细胞因子中至少一种的最大倍数变化(例如至少或至少约250倍)；和/或至少一种毒性临床体征，如低血压(例如，如通过至少一种静脉内血管作用加压药所测量)；缺氧(例如，血浆氧(PO2)水平低于或低于约90％)；和/或一种或多种神经病学障碍(包括精神状态变化、迟钝和癫痫发作)。在一些实施方案中，严重CRS包括需要在重症监护病房(ICU)中进行管理或护理的CRS。
在一些实施方案中，CRS(如严重CRS)包括以下的组合：(1)持续发热(至少38摄氏度的发热持续至少三天)和(2)CRP的血清水平为至少或至少约20mg/dL。在一些实施方案中，CRS涵盖需要使用两种或更多种血管加压药的低血压或需要机械通气的呼吸衰竭。在一些实施方案中，在第二次或后续施用中增加血管加压药的剂量。
在一些实施方案中，严重CRS或3级CRS涵盖丙氨酸转氨酶的增加、天冬氨酸转氨酶的增加、恶寒、发热性嗜中性粒细胞减少症、头痛、左心室功能不全、脑病、脑积水和/或震颤。
可以指定测量或检测各种结果的方法。
在一些方面，毒性结果是神经毒性或与神经毒性相关。在一些实施方案中，与神经毒性的临床风险相关的症状包括意识错乱、谵妄、失语、表达性失语、迟钝、肌阵挛、嗜睡、精神状态改变、惊厥、癫痫样活动、癫痫发作(任选地如通过脑电图(EEG)证实)、升高的β淀粉样蛋白(Aβ)水平，升高的谷氨酸水平和升高的氧自由基水平。在一些实施方案中，基于严重程度对神经毒性进行分级(例如，使用1-5级量表(参见例如Guido Cavaletti&PaolaMarmiroli Nature Reviews Neurology 6,657-666(2010年12月)；美国国家癌症研究所—常见毒性标准第4.03版(NCI-CTCAE v4.03))。
在一些情形中，神经症状可能是sCRS的最早症状。在一些实施方案中，观察到神经病学症状在细胞疗法输注后5至7天开始。在一些实施方案中，神经病学变化的持续时间可能在3至19天的范围内。在一些情况下，神经病学变化的恢复是在sCRS的其他症状消退后发生。在一些实施方案中，用抗IL-6和/或一种或多种类固醇治疗不会加速神经病学变化消退的时间或程度。
在一些实施方案中，如果在施用后受试者展示以下各项中限制自理(例如洗澡、穿衣和脱衣、进食、如厕、服药)的症状，则认为所述受试者响应于或继发于细胞疗法或其细胞剂量的施用而发生“严重神经毒性”：1)外周运动神经病的症状，包括外周运动神经的炎症或退化；2)外周感觉神经病的症状，包括外周感觉神经的炎症或退化、感觉迟钝(如感官知觉失真，导致异常和不适感)、神经痛(如沿神经或神经组的剧烈疼痛感)，和/或感觉异常(如感觉神经元的功能紊乱，导致在没有刺激物的情况下刺痛、麻木、压迫、冷和温的异常皮肤感觉)。在一些实施方案中，严重神经毒性包括3级或更高级神经毒性，如表6所示。
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在一些实施方案中，与其他方法相比，所述方法减轻与CRS或神经毒性相关的症状。在一些方面，与其他方法相比，所提供的方法减轻与CRS相关的症状、结果或因素，包括与严重CRS或3级或更高级的CRS相关的症状、结果或因素。例如，根据本方法治疗的受试者可能缺少可检测的CRS(例如，严重CRS或3级或更高级的CRS)的症状、结果或因素和/或具有减少的所述症状、结果或因素，如所述的(例如表3和表4中所示的)任何症状、结果或因素。在一些实施方案中，与通过其他方法治疗的受试者相比，根据本方法治疗的受试者可能具有减轻的神经毒性症状，如四肢无力或麻木、记忆、视力和/或智力受损、无法控制的强迫性和/或强制性行为、妄想、头痛、认知和行为问题(包括丧失运动控制、认知退化和自主神经系统功能障碍)以及性功能障碍。在一些实施方案中，根据本方法治疗的受试者可具有减轻的与外周运动神经病、外周感觉神经病、感觉迟钝、神经痛或感觉异常相关的症状。
在一些实施方案中，所述方法减轻与神经毒性相关的结果，包括对神经系统和/或脑的损伤，如神经元的死亡。在一些方面，所述方法降低与神经毒性相关的因子(如β淀粉样蛋白(Aβ)、谷氨酸和氧自由基)的水平。
在一些实施方案中，毒性结果是剂量限制性毒性(DLT)。在一些实施方案中，毒性结果是剂量限制性毒性。在一些实施方案中，毒性结果是剂量限制性毒性的不存在。在一些实施方案中，剂量限制性毒性(DLT)被定义为任何3级或更高级的毒性，如通过任何已知或公开的用于评估特定毒性的指南所评估，如上述任何指南并且包括国家癌症研究所(NCI)的不良事件通用术语标准(CTCAE)4.0版。
在一些实施方案中，通过根据所提供方法和/或用所提供制品或组合物施用一定剂量的T细胞观察到的发生毒性(例如，CRS或神经毒性或严重CRS或神经毒性，例如，3级或更高级的CRS或神经毒性)的低比率、风险或可能性允许在门诊基础上施用所述细胞疗法。在一些实施方案中，根据所提供方法和/或用所提供制品或组合物施用细胞疗法(例如，T细胞(例如，CAR+ T细胞)的剂量)是在门诊基础上进行，或者不需要使受试者住院，如需要过夜停留的住院。
在一些方面，对于根据所提供方法和/或用所提供制品或组合物施用细胞疗法(例如T细胞(例如CAR+ T细胞)的剂量)的受试者(包括在门诊基础上治疗的受试者)，在施用所述细胞剂量之前或与其同时，不向所述受试者施用用于治疗任何毒性的干预，除非或直到所述受试者展现毒性(如神经毒性或CRS)的体征或症状。用于治疗、延迟、减弱或改善毒性的示例性药剂描述于章节II中。
在一些实施方案中，如果被施用细胞疗法(例如，T细胞(例如，CAR+ T细胞)的剂量)的受试者(包括在门诊基础上治疗的受试者)展现发热，则向所述受试者给予治疗或者指示所述受试者接受或施用治疗，以减轻发热。在一些实施方案中，将受试者的发热表征为受试者的体温(或被测量为)等于或高于某一阈值温度或水平。在一些方面，所述阈值温度是与至少低度发热、与至少中度发热和/或与至少高度发热相关的温度。在一些实施方案中，所述阈值温度是特定的温度或范围。例如，所述阈值温度可以是为或约或至少或至少约38、39、40、41或42摄氏度，和/或可以是为或约38摄氏度至为或约39摄氏度的范围、为或约39摄氏度至为或约40摄氏度的范围、为或约40摄氏度至为或约41度的范围、或者为或约41摄氏度至为或约42摄氏度的范围。
在一些实施方案中，被设计为减轻发热的治疗包括用退热药治疗。退热药可以包括减轻发热的任何药剂，例如，化合物、组合物或成分，如已知具有退热作用的任何数量的药剂中的一种，如NSAID(如布洛芬、萘普生、酮洛芬和尼美舒利)、水杨酸盐(如阿司匹林、水杨酸胆碱、水杨酸镁和水杨酸钠)、扑热息痛、对乙酰氨基酚、安替比林甲胺甲烷、萘丁美酮、非那宗(Phenaxone)、安替比林、退烧药。在一些实施方案中，退热药是对乙酰氨基酚。在一些实施方案中，可以长达每四小时以12.5mg/kg的剂量口服或静脉内施用对乙酰氨基酚。在一些实施方案中，退热药是或包含布洛芬或阿司匹林。
在一些实施方案中，如果发热是持续发热，则向受试者施用用于治疗毒性的替代性治疗，如下文章节II中所述的任何治疗。对于在门诊基础上治疗的受试者，如果所述受试者已经和/或被确定为患有或患有持续发热，则指示所述受试者返回医院。在一些实施方案中，如果受试者展现等于或高于相关阈值温度的发热，并且在指定治疗(如被设计为减轻发热的治疗，如使用退热药(例如，NSAID或水杨酸盐，例如，布洛芬、对乙酰氨基酚或阿司匹林)的治疗)后，受试者的发热或体温不下降，或者不下降指定量或超过指定量(例如，超过1℃，并且通常不会变动约或超过约0.5℃、0.4℃、0.3℃或0.2℃)的情况下，所述受试者已经和/或被确定为或认为患有持续发热。例如，如果受试者展现或被确定为展现至少或至少约38或39摄氏度的发热，即使在用退热药(如对乙酰氨基酚)治疗后，在6小时时段中、在8小时时段中、或在12小时时段中、或在24小时时段中，所述发热没有降低或没有降低超过或超过约0.5℃、0.4℃、0.3℃或0.2℃，或者降低为或约1％、2％、3％、4％或5％，则所述受试者被认为患有持续发热。在一些实施方案中，退热药的剂量是通常在这种受试者中有效减轻发热或特定类型的发热的剂量，所述特定类型的发热如与细菌或病毒感染(例如，局部或全身感染)相关的发热。
在一些实施方案中，如果受试者展现等于或高于相关阈值温度的发热，并且在受试者的发热或体温没有变动约或超过约1℃，并且通常没有变动约或超过约0.5℃、0.4℃、0.3℃或0.2℃的情况下，所述受试者已经患有和/或被确定为或认为患有持续发热。通常，高于或等于某一量的变动的这种不存在是在给定的时间段内测量(如，在24小时、12小时、8小时、6小时、3小时或1小时的时间段内，其可以从发烧的最初体征或最初高于所指示阈值的温度起测量)。例如，在一些实施方案中，如果受试者展现至少或至少约38或39摄氏度的发热，所述发热的温度在6小时时段内、8小时时段内、或12小时时段内、或24小时时段内没有变动超过或超约0.5℃、0.4℃、0.3℃或0.2℃，则所述受试者被认为或被确定为展现持续发热。
在一些实施方案中，发热是持续发热；在一些方面，在有可能诱导毒性的初始疗法(如细胞疗法，如T细胞(例如，CAR+ T细胞)的剂量)后，在已经确定受试者患有持续发热的时间，如在这种确定或首次这种确定的1、2、3、4、5、6小时或更短时间内，治疗所述受试者。
在一些实施方案中，在例如，如根据任何前述实施方案所测量，在确定或确认(如首次确定或确认)受试者展现持续发热时或此前不久的时间，施用用于治疗毒性的一种或多种干预或药剂(如靶向毒性的疗法)。在一些实施方案中，在这种确认或确定的某一时间段内，如在这种确认或确定的30分钟、1小时、2小时、3小时、4小时、6小时或8小时内，施用一种或多种毒性靶向疗法。
E.健康状况和健康相关的生活质量
在一些实施方案中，所提供的方法设计为或包括如下特征，所述特征导致在施用CAR+ T细胞的剂量之后，与所述施用之前相比，受试者报告的健康相关的生活质量(HQRL)的提高以及对症状影响的作用。在一些实施方案中，可以在施用CAR表达细胞的剂量之前(例如，在基线(BL)时)以及在施用CAR表达细胞后的一个或多个不同时间，例如每两周、每个月、每两个月、每3个月或更多地，通过施用欧洲研究与治疗组织核心生活质量问卷3.0版(EORTC QLQ-C30)来监测或评估此类特征。在一些实施方案中，评估可以包括用于与替代性健康状态相关的特定健康状态的个人偏好的强度的量度。在一些方面，EORTC QLQ-C30是生活质量量度，适用于具有任何癌症诊断的受试者。在一些方面，其包括30个项目，其解决一般身体症状、身体功能、疲劳和乏力以及社会和情绪功能。在一些方面，将分量表得分转化为0至100量表，且功能量表上的较高得分指示更好的功能，并且症状量表上的较高得分指示较差症状。在一些实施方案中，效用量表在量表上分配从0(死亡)至1(最佳或“完美”健康)的数值。在一些实施方案中，将不同健康状态中花费的时间合计为质量调整生命年。
在一些实施方案中，所提供的方法设计为或包括如下特征，所述特征导致受试者的幸福感和自感健康状况的增加，如通过EuroQol-5D(EQ-5D)所确定，EuroQol-5D是由EuroQoL组开发的健康状况的标准化量度，是简单的一般性健康量度，用于临床和经济评价。在一些实施方案中，所提供的方法设计为或包括如下特征，所述特征导致受试者的幸福感和自感健康状况的增加，如通过健康效用指标得分和视觉模拟量表[VAS](EQ-5D-5L)所确定。在一些实施方案中，EQ-5D-5L(一种一般性的基于偏好的量度)允许估计健康状态效用(Brooks R.Health Policy(1996)；37(1):53-72；The EuroQoL Group.Health Policy(1990)；16(3):199-208；Pickard AS等人health Qual Life Outcomes(2007)；5:70)。在一些实施方案中，EQ-5D-5L允许在宽范围的健康状况中估计健康状态效用。在一些实施方案中，EQ-5D-5L包括单一总和指标(即，健康状态指标得分)和整体视觉模拟量表(EQ-VAS)。在一些实施方案中，EQ-5D-5L健康状况评价由5个健康维度构成，包括运动性、自理、日常活动、疼痛/不适和焦虑/抑郁。在一些实施方案中，EQ-5D-5L是作为单一总和指标使用-0.109至1量表上的美国数值集进行评分，其中得分为0指示健康，1指示“完全健康”，并且负分反映感知到的非常糟糕的状态。在一些实施方案中，EQ-5D-5L单一总和指标得分的≥0.07的从基线的变化是临床上有意义的变化的指示物(Pickard等人Health Qual Life Outcomes(2007)；5:70)。
在一些实施方案中，将EQ-VAS在0-100量表上评定，其中0表示可想象最差的健康状态，并且100表示可想象最好的健康状态。在一些实施方案中，受试者在评估当天通过在编号0-100的量表上打X来评估他们的健康(EQ-5D-5L User Guide.https://euroqol.org/wp-content/uploads/2016/09/EQ-5D-5L_UserGuide_2015.pdf.2019年4月9日访问)。
在一些实施方案中，受试者确定他们的得分。在一些方面，描述系统包含多个维度(运动性、自理、日常活动、疼痛/不适、焦虑/抑郁)。在一些方面，每个维度具有5个等级(无困难、轻度困难、中度困难、严重困难、极端困难)。VAS评定量表是一种竖直的20cm视觉模拟量表，其终点标记为，顶部是可想象最好的健康状态，底部是可想象最差的健康状态，数值分别为100和0。在一些情况下，让参与者通过在5个维度的每一个中与最适当陈述相对的框中打勾(或打叉)来指明其健康状态。
在一些方面，患者报告的结果(PRO)可以用于测量患者的治疗经历。在一些方面，PRO可以由患者直接提供，无需医疗保健人员解释。在一些方面，用于检查接受CAR T细胞疗法的患者的HRQoL的范例工具包括PROMIS、SF-36和EQ-5D-5L。在一些任何实施方案中，使用EORTC QLQ-C30和EQ-5D-5L来评估健康相关的生活质量。在一些方面，检查治疗对患者的HRQoL的短期和长期作用二者。
在一些实施方案中，与治疗前或治疗后第1个月的得分相比，在施用后第6个月或第12个月，大于或大于约25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％或60％的根据所提供的实施方案治疗的受试者的总体健康状况在欧洲研究与治疗组织核心生活质量问卷3.0版(EORTC QLQ-C30)中展现10分或更大的改进。在一些实施方案中，与治疗前或治疗后第1个月的得分相比，在施用后第6个月或第12个月，大于或大于约25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％或60％的根据所提供的实施方案治疗的受试者的身体功能在EORTC QLQ-C30中展现10分或更大的改进。在一些实施方案中，与治疗前或治疗后第1个月的得分相比，在施用后第6个月或第12个月，大于或大于约25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％或60％的根据所提供的实施方案治疗的受试者的疲劳在EORTC QLQ-C30中展现10分或更大的改进。在一些实施方案中，与治疗前或治疗后第1个月的得分相比，在施用后第6个月或第12个月，大于或大于约25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％或60％的根据所提供的实施方案治疗的受试者的疼痛在EORTC QLQ-C30中展现10分或更大的改进。在一些实施方案中，与治疗前或治疗后第1个月的得分相比，在施用后第6个月或第12个月，大于或大于约25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％或60％的根据所提供的实施方案治疗的受试者的疼痛在EORTCQLQ-C30中展现10分或更大的改进。
在一些实施方案中，与治疗前或治疗后第1个月的得分相比，在施用后第6个月或第12个月，根据所提供的实施方案治疗的受试者中的平均5级EuroQol-5D(EQ-5D-5L)得分相同或更大。在一些实施方案中，与治疗前或治疗后第1个月的得分相比，在施用后第6个月或第12个月，根据所提供的实施方案治疗的受试者中的平均EuroQol整体视觉模拟量表(EQ-VAS)得分相同或更大。
F.生物标记、分析物或参数
所提供的方法包括评估在受试者中发生与细胞疗法相关的毒性的风险的方法，所述方法涉及评估或检测与毒性(例如，神经毒性，如严重神经毒性，和/或CRS，如严重CRS)相关的生物标记(例如，分析物)或参数。所提供的方法还包括评估受试者响应于细胞疗法的可能性的方法，所述方法涉及评估或检测与反应结果(如客观反应(OR)，包括完全反应(CR)和部分反应(PR))相关的生物标记(例如，分析物)或参数。在一些实施方案中，相关反应结果包括持久反应，如在初始反应后持续3个月、6个月、9个月、12个月或更久的反应。
在一些实施方案中，所述方法涉及评估或检测一个或一组生物标记(例如，分析物)的存在或不存在和/或与一个或一组生物标记(例如，分析物)相关的参数(例如，浓度、量、水平或活性)。在一些情况下，所述方法可以包括将一个或多个参数与特定参考值(如阈值水平，本文中也称为“阈值”)相比较，所述参数例如，与发生毒性的风险相关的那些或与特定反应(如OR、CR或PR，或持久反应，如在初始反应后持续3个月、6个月、9个月、12个月或更久的反应)相关的那些。在一些实施方案中，所述方法还涉及基于对生物标记的存在或不存在的评估和/或生物标记与所述生物标记的参考值或阈值水平的比较来选择受试者用于用细胞疗法治疗。在一些实施方案中，所述方法还涉及例如，基于对生物标记的存在或不存在的评估和/或生物标记与所述生物标记的参考值或阈值水平的比较，施用可以治疗、预防、延迟和/或减弱毒性的发生的药剂或疗法。
在一些实施方案中，所述方法涉及评估在施用细胞疗法后受试者反应的可能性或发生毒性的风险。在一些实施方案中，所述方法涉及评估生物样品中一种或多种分析物的水平、量或浓度，其中所述生物样品来自作为用细胞疗法治疗的候选者的受试者，所述细胞疗法任选地包括表达重组受体的基因工程化细胞的剂量或组合物；并且所述生物样品是在施用所述细胞疗法之前从所述受试者获得和/或所述生物样品不包含所述重组受体和/或所述工程化细胞。在一些方面，所述方法涉及将样品中分析物的水平、量或浓度与阈值水平单独比较，由此确定在施用细胞疗法之后发生毒性的风险。在一些方面，所述比较可以用于确定在施用细胞疗法后受试者反应的可能性或发生毒性的风险。
在一些实施方案中，所述方法还涉及基于对生物标记的存在或不存在的评估和/或生物标记与所述生物标记的参考值或阈值水平的比较来选择受试者用于用细胞疗法(如特定剂量的细胞疗法，包括施用特定剂量的细胞疗法，如本文(例如，章节I.A和I.B)中所述的那些)治疗。在一些实施方案中，所述方法还涉及基于对生物标记的存在或不存在的评估和/或生物标记与所述生物标记的参考值或阈值水平的比较来选择受试者用于用另一种药剂(如能够治疗、预防、延迟、降低或减弱毒性的发生或发生风险的药剂或其他治疗)治疗。
在一些实施方案中，所述参数是或包括患者和/或疾病或病症的属性、因素、特征。在一些实施方案中，所述参数是与肿瘤负荷相关的参数，例如，肿瘤负荷的测量值。在一些方面，所述方法还涉及基于通过评估生物标记的存在或不存在和/或将生物标记与所述生物标记的参考值或阈值水平相比较而确定的毒性风险，进一步监测所述受试者可能的毒性症状。在一些方面，可以获得来自受试者的生物样品(例如，血液样品或组织样品)用于检测生物标记(例如，分析物)的存在或不存在，如用于检测或测量生物标记的参数(例如浓度、量、水平或活性)和/或评估生物标记的存在，用于特定结果和/或毒性的分析、关联和/或检测。在一些实施方案中，可以从在施用细胞疗法之前或之后来自受试者的生物样品(例如，血液)评估某些与生物标记相关的生理学或生物学参数(包括生物标记的表达)和/或临床和实验室参数。在一些实施方案中，可以从在施用细胞疗法之前(治疗前)来自受试者的生物样品(例如，血液)评估生物标记或分析物的表达和/或临床和实验室参数。在一些实施方案中，可以从在施用细胞疗法之后(治疗后)来自受试者的生物样品(例如，血液)评估生物标记或分析物的表达和/或临床和实验室参数。在一些实施方案中，可以在施用细胞疗法之前或之后的一个或多个时间点评估生物标记(例如，分析物)的浓度、量、水平或活性和/或临床和实验室参数。在一些实施方案中，还可以确定在指定时间段期间生物标记(例如，分析物)的峰值浓度、量、水平或活性和/或临床和实验室参数。
在一些实施方案中，生物标记或分析物是由生物样品(包括细胞)或在所述生物样品中表达的可客观测量的特征或分子，可以指示特定状态或现象(如生物过程、治疗结果、细胞表型或疾病状态)或与所述特定状态或现象相关。在一些方面，可以测量或检测生物标记或分析物或与生物标记或分析物相关的参数。例如，可以检测生物标记或分析物的表达的存在或不存在。在一些方面，可以测量或检测生物标记或分析物的参数，如浓度、量、水平或活性。在一些实施方案中，生物标记的存在、不存在、表达、浓度、量、水平和/或活性可能与受试者的特定状态(如特定治疗结果或状态)相关，与所述特定状态相关联，指示所述特定状态和/或预测所述特定状态。在一些方面，生物标记或分析物(如本文所述的任一种)的存在、不存在、表达、浓度、量、水平和/或活性可以用于评估特定结果或状态(如特定治疗结果，包括反应结果或毒性结果)的可能性。在一些实施方案中，示例性生物标记包括细胞因子、细胞表面分子、趋化因子、受体、可溶受体、可溶血清蛋白和/或降解产物。在一些实施方案中，生物标记或分析物还可以包括患者和/或疾病或病症的特定属性、因素、特征，或指示患者的状态和/或患者的疾病或病症的因素(包括疾病负荷)和/或临床或实验室参数。
在一些实施方案中，生物标记可以单独使用或与其他生物标记组合使用，例如以生物标记组来使用。在一些实施方案中，可以将特定生物标记的表达与特定结果或毒性(例如，神经毒性的发生)相关联。在一些实施方案中，可以评估的生物标记(例如，分析物)(包括其参数)包括乳酸脱氢酶(LDH)、铁蛋白、C反应蛋白(CRP)、白介素-6(IL-6)、IL-7、IL-8、IL-10、IL-15、IL-16、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、干扰素α2(IFN-α2)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、巨噬细胞炎性蛋白1α(MIP-1α)、巨噬细胞炎性蛋白1β(MIP-1β)、嗜酸性粒细胞趋化因子、粒细胞集落刺激因子(G-CSF)、IL-1受体α(IL-1Rα)、IL-1β、IFN-γ诱导蛋白10(IP-10)、穿孔素和D-二聚体(纤维蛋白降解产物)。在一些实施方案中，生物标记(例如，分析物)(包括其参数)包括LDH、铁蛋白、CRP、IL-6、IL-8、IL-10、TNF-α、IFN-α2、MCP-1和MIP-1β。在一些实施方案中，生物标记(例如，分析物)(包括其参数)包括铁蛋白、CRP、D-二聚体、IL-6、IL-15、TNF-α和MIP-1α。在一些实施方案中，生物标记(例如，分析物)(包括其参数)包括铁蛋白、CRP、IL-10、IL-15、IL-16、TNF-α或MIP-1β。
在一些实施方案中，所述方法包括检测一种或多种生物标记的存在或不存在，如与一种或多种生物标记相关的参数(例如，浓度、量、水平或活性)，其中所述一种或多种生物标记选自乳酸脱氢酶(LDH)、铁蛋白、C反应蛋白(CRP)、白介素-6(IL-6)、IL-7、IL-8、IL-10、IL-15、IL-16、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、干扰素α2(IFN-α2)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、巨噬细胞炎性蛋白1α(MIP-1α)、巨噬细胞炎性蛋白1β(MIP-1β)、嗜酸性粒细胞趋化因子、粒细胞集落刺激因子(G-CSF)、IL-1受体α(IL-1Rα)、IL-1β、IFN-γ诱导蛋白10(IP-10)、穿孔素和D-二聚体(纤维蛋白降解产物)。
在一些实施方案中，所评估的参数是或包括患者和/或疾病或病症的属性、因素、特征，和/或生物标记的表达。在一些实施方案中，参数是或包括指示患者的状态和/或患者的疾病或病症的一个或多个因素。在一些实施方案中，参数指示肿瘤负荷。在一些实施方案中，指示肿瘤负荷的因素是一个或多个肿瘤的体积量度。在一些实施方案中，体积量度是一个或多个病灶的量度，例如肿瘤大小、肿瘤直径、肿瘤体积、肿瘤质量、肿瘤负担或体积、肿瘤相关水肿、肿瘤相关坏死和/或转移的数量或范围。在一些实施方案中，肿瘤的体积量度是二维量度。例如，在一些实施方案中，将一个或多个病灶的面积计算为所有可测量肿瘤的最长直径与最长垂直直径的乘积。在一些情况下，肿瘤的体积量度是一维量度。在一些情况下，将可测量病灶的大小评估为最长直径。在一些实施方案中，测量直径乘积之和(SPD)、最长肿瘤直径(LD)、最长肿瘤直径之和(SLD)、坏死、肿瘤体积、坏死体积、坏死-肿瘤比率(NTR)、瘤周水肿(PTE)和水肿-肿瘤比率(ETR)。
用于测量和评估肿瘤负荷的示例性方法包括描述于例如以下文献中的那些：Carceller等人,Pediatr Blood Cancer.(2016)63(8):1400-1406以及Eisenhauer等人,Eur J Cancer.(2009)45(2):228-247。在一些实施方案中，体积是通过确定所有可测量肿瘤的最大垂直直径的乘积之和来测量的直径乘积之和(SPD)。在一些方面，在一个维度上用最长直径(LD)和/或通过确定所有可测量病灶的最长肿瘤直径之和(SLD)来测量肿瘤或病灶。在一些实施方案中，肿瘤的体积量度是肿瘤坏死的体积定量，例如坏死体积和/或坏死-肿瘤比率(NTR)，参见Monsky等人，Anticancer Res.(2012)32(11):4951-4961。在一些方面，肿瘤的体积量度是肿瘤相关水肿的体积定量，如瘤周水肿(PTE)和/或水肿-肿瘤比(ETR)。在一些实施方案中，测量可以使用受试者的成像技术来进行，所述成像技术如计算断层成像(CT)、正电子发射断层成像(PET)和/或磁共振成像(MRI)。
在一些实施方案中，肿瘤的体积量度是在筛选期间(如常规评估或抽血)确定，以证实和/或鉴定受试者的病症或疾病。
在一些实施方案中，从生物样品评估一种或多种生物标记(例如，分析物)的存在或不存在和/或参数。在一些方面，生物样品是体液或组织。在一些此类实施方案中，生物样品(例如，体液)是或含有全血、血清或血浆。
在一些实施方案中，在施用细胞疗法之前(例如，输注前)评估一种或多种生物标记(例如，分析物)的存在或不存在和/或参数，例如，在开始施用工程化细胞之前多达2天、多达7天、多达14天、多达21天、多达28天、多达35天或多达40天获得。在一些实施方案中，生物样品是在施用细胞疗法之前(例如，输注前)从受试者获得，例如，在开始施用工程化细胞之前多达2天、多达7天、多达14天、多达21天、多达28天、多达35天或多达40天获得。
在一些实施方案中，生物样品是单采术或白细胞单采术样品。在一些实施方案中，评估一种或多种生物标记(例如，分析物)的或不存在和/或参数，或者生物样品是在施用细胞疗法之后获得。在一些实施方案中，试剂可以在施用细胞疗法之前或施用细胞疗法之后用于诊断目的，以鉴定受试者和/或评估治疗结果和/或毒性。
在一些实施方案中，测量一种或多种生物标记的值包括进行体外测定。在一些方面，体外测定是免疫测定、基于适体的测定、组织学或细胞学测定或mRNA表达水平测定。在一些实施方案中，通过以下方式测量一种或多种生物标记的值：酶联免疫吸附测定(ELISA)、免疫印迹、免疫沉淀、放射免疫测定(RIA)、免疫染色、流式细胞术测定、表面等离子体共振(SPR)、化学发光测定、侧流免疫测定、抑制测定或亲合力测定。在一些情况下，一种或多种生物标记中至少一种的值是使用与至少一种生物标记特异性结合的结合试剂来确定。在一些方面，所述结合试剂是抗体或其抗原结合片段、适体或核酸探针。
在一些实施方案中，测量一种或多种生物标记(例如，分析物)的值包括使能够直接或间接检测分析物的试剂与生物样品接触，以及确定所述生物样品中所述分析物的存在或不存在、水平、量或浓度。在一些实施方案中，一种或多种生物标记(例如，分析物)是乳酸脱氢酶(LDH)、铁蛋白、CRP、IL-6、IL-7、IL-8、IL-10、IL-15、IL-16、TNF-α、IFN-γ、MCP-1、MIP-1β、嗜酸性粒细胞趋化因子、G-CSF、IL-1Rα、IL-1Rβ、IP-10、穿孔素和D-二聚体(纤维蛋白降解产物)。在一些实施方案中，一种或多种生物标记(例如，分析物)是LDH、铁蛋白、CRP、IL-6、IL-8、IL-10、TNF-α、IFN-α2、MCP-1和MIP-1β。在一些实施方案中，一种或多种生物标记(例如，分析物)是或包括LDH。
在一些方面，所述试剂是与分析物特异性结合的结合分子。例如，在一些实施方案中，所述试剂是抗体或其抗原结合片段。在一些实施方案中，所述试剂是或包括分析物的底物或结合配偶体。
在一些实施方案中，在样品中检测或确定LDH的存在、不存在或参数(例如，水平、量、浓度和/或其他量度)。多种检测或确定LDH的方法是已知的。例如，测量乳酸盐通过NAD+还原为NADH而LDH转化为丙酮酸盐的测定可以用于检测样品中的LDH。在一些实施方案中，使样品在辅酶NAD的存在下与乳酸盐接触，所述辅酶NAD作为样品中LDH的量度产生NADH，然后NADH在电子转移剂的存在下发生氧化。在一些实施方案中，NADH与可以通过测量可见光范围内的吸收来检测的探针或染料前体相互作用。在一些例子中，心肌黄酶使用NADH将四唑盐(INT)还原为红色甲臜(formazan)产物，并测量所述产物。因此，在一些实施方案中，所形成的有色产物的量与样品中的LDH活性成正比。
在一些实施方案中，所述方法涉及将样品中分析物的水平、量或浓度与阈值水平单独比较，由此确定在施用细胞疗法之后发生毒性的风险，或者由此确定受试者将实现对细胞疗法的反应的可能性。在一些方面，可以基于在接受细胞疗法之前从受试者组获得的生物样品中分析物的水平、量或浓度的平均值或中值以及在所述平均值或中值的范围或标准差内的值来确定示例性阈值水平，其中所述组中的每名受试者继续展现特定结果，如特定治疗结果，包括展现反应或不展现反应；或者发生毒性或不发生毒性。在一些实施方案中，确定阈值的特定方面包括下文在章节I.E.1和I.E.2中描述的那些。
1.与反应结果相关的示例性生物标记、分析物或参数
在一些实施方案中，分析物或生物标记与特定结果相关，与所述特定结果相关联，指示所述特定结果和/或预测所述特定结果，所述特定结果如特定反应结果，如客观反应(OR)、完全反应(CR)或部分反应(PR)，或持久反应，如持续3、6、9个月或更久的OR或CR或PR。在一些实施方案中，如与参考值或阈值水平相比，一种或多种此类生物标记(例如，分析物)的较低或降低水平或增加的水平可以与反应相关，所述反应如OR、CR或PR或本文(例如，在章节I.C中)所述的任何反应结果，任选地持久反应，如持续至少3个月、6个月或更久的反应。
在一些实施方案中，分析物或生物标记与已经施用细胞疗法(如使用含有基因工程化细胞的组合物)的受试者中的特定结果相关，与所述特定结果相关联，指示所述特定结果和/或预测所述特定结果，所述特定结果如特定反应或持久反应结果。在一些实施方案中，在施用细胞疗法之前从受试者获得的生物样品中一种或多种分析物的存在、表达、水平、量或浓度可以与特定结果相关，与所述特定结果相关联，指示所述特定结果和/或预测所述特定结果，所述特定结果如特定反应或持久反应结果。在一些实施方案中，特定生物标记的存在、表达、水平、量或浓度可以与特定反应或持久反应结果相关联。在一些实施方案中，反应结果可以是本文(例如，在章节I.C中)所述的任何反应结果。
在一些实施方案中，所述方法包括将样品中分析物的水平、量或浓度与阈值水平单独比较，由此确定受试者将实现对细胞疗法的反应的可能性。在一些实施方案中，所述方法包括基于通过将样品中分析物的水平、量或浓度与阈值水平单独比较来确定受试者将实现对细胞疗法的反应的可能性的结果，选择可能对治疗有反应的受试者。在一些实施方案中，所述方法还包括将细胞疗法施用至被选择用于治疗的受试者。在一些实施方案中，如果受试者被确定为不太可能实现反应或持久反应，则进一步包括将另外的治疗剂施用至所述受试者。
在一些实施方案中，生物标记(例如，分析物)包括与反应结果和/或持久反应相关的那些。在一些实施方案中，生物标记(例如，分析物)(包括其参数)包括LDH、铁蛋白、CRP、D-二聚体、血清淀粉样蛋白A1(SAA-1)、IL-6、IL-10、IL-15、IL-16、TNF-α、IFN-γ、MIP-1α和C-X-C基序趋化因子10(CXCL10)。
在一些方面，可以关于施用细胞疗法后的反应可能性的评估进行评估或分析的示例性分析物或生物标记包括选自铁蛋白、LDH、CXCL10、G-CSF和IL-10的一种或多种分析物。在一些实施方案中，对于前述分析物或生物标记中的任一种，如果一种或多种分析物的水平、量或浓度低于阈值水平，则受试者可能实现反应，并且如果一种或多种分析物的水平、量或浓度高于阈值水平，则受试者不可能实现反应。在一些实施方案中，所述反应是或包含客观反应。在一些实施方案中，客观反应是或包含完全反应(CR)或部分反应(PR)。在一些方面，在使用细胞疗法之前(治疗前)从受试者获得的生物样品中，铁蛋白、LDH、CXCL10、G-CSF和IL-10的降低的水平可以与实现客观反应(包括完全反应(CR)或部分反应(PR))相关。
在一些实施方案中，阈值水平是在接受细胞疗法之前从受试者组获得的生物样品中铁蛋白、LDH、CXCL10、G-CSF或IL-10的中值或平均水平、量或浓度之下25％内、20％内、15％内、10％内或5％内，和/或一个标准差内，其中在施用用于治疗相同疾病或病症的表达重组受体的治疗性细胞组合物之后，所述组中的每名受试者继续实现反应。在一些实施方案中，阈值水平是在接受细胞疗法之前从受试者组获得的生物样品中铁蛋白、LDH、CXCL10、G-CSF或IL-10的中值或平均水平、量或浓度之上25％内、20％内、15％内、10％内或5％内，和/或一个标准差内，其中在施用用于治疗相同疾病或病症的表达重组受体的治疗性细胞组合物之后，所述组中的每名受试者继续展现疾病稳定(SD)和/或疾病进展(PD)。
在一些方面，可以关于施用细胞疗法之后持久反应的可能性的评估进行评估或分析的示例性分析物或生物标记包括选自LDH、铁蛋白、CRP、D-二聚体、SAA-1、IL-6、IL-10、IL-15、IL-16、TNF-α、IFN-γ、MIP-1α、CXCL-10、IL-8、MCP-1和MIP-1β的一种或多种分析物。在一些实施方案中，对于前述分析物或生物标记中的任一种，如果一种或多种分析物的水平、量或浓度低于阈值水平，则受试者可能实现持久反应，并且如果一种或多种分析物的水平、量或浓度高于阈值水平，则受试者不可能实现持久反应。在一些实施方案中，持久反应是或包含持续等于或大于3个月、4个月、5个月或6个月的完全反应(CR)或部分反应(PR)。在一些实施方案中，持久反应是或包含持续至少3个月的CR或PR。在一些方面中，在使用细胞疗法之前(治疗前)从受试者获得的生物样品中，LDH、铁蛋白、CRP、D-二聚体、SAA-1、IL-6、IL-10、IL-15、IL-16、TNF-α、IFN-γ、MIP-1α、CXCL-10、IL-8、MCP-1和MIP-1β的降低的水平可以与实现持久反应(如持续至少3个月的CR或PR)相关。
在一些实施方案中，阈值水平是在接受细胞疗法之前从受试者组获得的生物样品中LDH、铁蛋白、CRP、D-二聚体、SAA-1、IL-6、IL-10、IL-15、IL-16、TNF-α、IFN-γ、MIP-1α、CXCL-10、IL-8、MCP-1或MIP-1β的中值或平均水平、量或浓度之下25％内、20％内、15％内、10％内或5％内，和/或一个标准差内，其中在施用用于治疗相同疾病或病症的表达重组受体的治疗性细胞组合物之后，所述组中的每名受试者继续实现持久反应。
在一些实施方案中，阈值水平是在接受细胞疗法之前从受试者组获得的生物样品中LDH、铁蛋白、CRP、D-二聚体、SAA-1、IL-6、IL-10、IL-15、IL-16、TNF-α、IFN-γ、MIP-1α、CXCL-10、IL-8、MCP-1或MIP-1β的中值或平均水平、量或浓度之上25％内、20％内、15％内、10％内或5％内，和/或一个标准差内，其中在施用用于治疗相同疾病或病症的表达重组受体的治疗性细胞组合物之后，所述组中的每名受试者未实现持久反应。
在一些实施方案中，反应是持久反应，如持续至少3个月的CR或PR。
在一些实施方案中，LDH的阈值水平为或为约或低于或低于约600U/L、500U/L、400U/L、300U/L或200U/L。
在一些实施方案中，铁蛋白的示例性阈值水平是为或为约或低于或低于约1000μg/L、900μg/L、800μg/L、700μg/L、600μg/L、500μg/L、400μg/L、300μg/L或200μg/L。
在一些实施方案中，CRP的示例性阈值水平是为或为约或低于或低于约20mg/L、19mg/L、18mg/L、17mg/L、16mg/L、15mg/L、14mg/L、13mg/L、12mg/L、11mg/L、10mg/L、9mg/L、8mg/L、7mg/L、6mg/L或5mg/L。
在一些实施方案中，D-二聚体的示例性阈值水平是为或为约或低于或低于约1000μg/L、900μg/L、800μg/L、700μg/L、600μg/L、500μg/L、400μg/L、300μg/L或200μg/L。
在一些实施方案中，SAA-1的示例性阈值水平是为或为约或低于或低于约100mg/L、90mg/L、80mg/L、70mg/L、60mg/L、50mg/L、40mg/L、30mg/L或20mg/L。
在一些实施方案中，IL-6的示例性阈值水平是为或为约或低于或低于约6pg/mL、5pg/mL、4pg/mL、3pg/mL或2pg/mL。
在一些实施方案中，IL-10的示例性阈值水平是为或为约或低于或低于约2pg/mL、1pg/mL、0.9pg/mL、0.8pg/mL、0.7pg/mL、0.6pg/mL或0.5pg/mL。
在一些实施方案中，IL-15的示例性阈值水平是为或为约或低于或低于约7pg/mL、6pg/mL、5pg/mL、4pg/mL或3pg/mL。
在一些实施方案中，IL-16的示例性阈值水平是为或为约或低于或低于约1000pg/mL、900pg/mL、800pg/mL、700pg/mL或600pg/mL。
在一些实施方案中，TNF-α的示例性阈值水平是为或为约或低于或低于约10pg/mL、9pg/mL、8pg/mL、7pg/mL或6pg/mL。
在一些实施方案中，IFN-γ的示例性阈值水平是为或为约或低于或低于约30pg/mL、20pg/mL、10pg/mL、9pg/mL、8pg/mL或7pg/mL；
在一些实施方案中，MIP-1α的示例性阈值水平是为或为约或低于或低于约40pg/mL、30pg/mL或20pg/mL；和/或
在一些实施方案中，CXCL-10的示例性阈值水平是为或为约或低于或低于约1500pg/mL、1000pg/mL、900pg/mL、800pg/mL、700pg/mL、600pg/mL或500pg/mL。
在一些方面，可以关于施用细胞疗法之后的持久反应可能性的评估进行评估或分析的示例性分析物或生物标记包括选自铁蛋白、CRP、LDH、CXCL10、IL-8、IL-10、IL-15、MCP-1、MIP-1β和TNF-α的一种或多种分析物。在一些实施方案中，对于前述分析物或生物标记中的任一种，如果一种或多种分析物的水平、量或浓度低于阈值水平，则受试者可能实现持久反应，并且如果一种或多种分析物的水平、量或浓度高于阈值水平，则受试者不可能实现持久反应。在一些实施方案中，持久反应是或包含持续等于或大于3个月、4个月、5个月或6个月的完全反应(CR)或部分反应(PR)。在一些实施方案中，持久反应是或包含持续至少3个月的CR或PR。在一些方面中，在施用细胞疗法之前(治疗前)从受试者获得的生物样品中，铁蛋白、CRP、LDH、CXCL10、IL-8、IL-10、IL-15、MCP-1、MIP-1β和TNF-α的降低的水平可以与实现持久反应(如持续至少3个月的CR或PR)相关。
在一些实施方案中，阈值水平是在接受细胞疗法之前从受试者组获得的生物样品中铁蛋白、CRP、LDH、CXCL10、IL-8、IL-10、IL-15、MCP-1、MIP-1β或TNF-α的中值或平均水平、量或浓度之下25％内、20％内、15％内、10％内或5％内，和/或一个标准差内，其中在施用用于治疗相同疾病或病症的表达重组受体的治疗性细胞组合物之后，所述组中的每名受试者继续实现持久反应。
在一些实施方案中，阈值水平是在接受细胞疗法之前从受试者组获得的生物样品中铁蛋白、CRP、LDH、CXCL10、IL-8、IL-10、IL-15、MCP-1、MIP-1β或TNF-α的中值或平均水平、量或浓度之上25％内、20％内、15％内、10％内或5％内，和/或一个标准差内，其中在施用用于治疗相同疾病或病症的表达重组受体的治疗性细胞组合物之后，所述组中的每名受试者未实现持久反应。
在一些方面，可以关于施用细胞疗法之后的持久反应可能性的评估进行评估或分析的示例性分析物或生物标记包括选自血红蛋白和白蛋白的一种或多种分析物。在一些实施方案中，对于前述分析物或生物标记中的任一种，如果一种或多种分析物的水平、量或浓度高于阈值水平，则受试者可能实现持久反应，并且如果一种或多种分析物的水平、量或浓度低于阈值水平，则受试者不可能实现持久反应。在一些实施方案中，持久反应是或包含持续等于或大于3个月、4个月、5个月或6个月的完全反应(CR)或部分反应(PR)。在一些实施方案中，持久反应是或包含持续至少3个月的CR或PR。在一些方面，在施用细胞疗法之前(治疗前)从受试者获得的生物样品中，血红蛋白和白蛋白的升高的水平可以与实现持久反应(如持续至少3个月的CR或PR)相关。
在一些实施方案中，阈值水平是在接受细胞疗法之前从受试者组获得的生物样品中血红蛋白或白蛋白的中值或平均水平、量或浓度之上25％内、20％内、15％内、10％内或5％内，和/或一个标准差内，其中在施用用于治疗相同疾病或病症的表达重组受体的治疗性细胞组合物之后，所述组中的每名受试者继续实现持久反应。
在一些实施方案中，阈值水平是在接受细胞疗法之前从受试者组获得的生物样品中血红蛋白或白蛋白的中值或平均水平、量或浓度之下25％内、20％内、15％内、10％内或5％内，和/或一个标准差内，其中在施用用于治疗相同疾病或病症的表达重组受体的治疗性细胞组合物之后，所述组中的每名受试者未实现持久反应。
2.与毒性结果相关的示例性生物标记、分析物或参数
在一些实施方案中，分析物或生物标记与已经施用细胞疗法(如使用含有基因工程化细胞的组合物)的受试者中的特定结果相关，与所述特定结果相关联，指示所述特定结果和/或预测所述特定结果，所述特定结果如毒性的发生。在一些实施方案中，在施用细胞疗法之前从受试者获得的生物样品中的一种或多种分析物的存在、表达、水平、量或浓度可以与特定结果相关，与所述特定结果相关联，指示所述特定结果和/或预测所述特定结果，所述特定结果如毒性的发生，如本文(例如，章节I.D)中所述的任何毒性结果。在一些实施方案中，特定生物标记的存在、表达、水平、量或浓度可以与特定结果或毒性(例如，NT或CRS的发生)相关联。在一些实施方案中，毒性是可能与细胞疗法相关的毒性，如本文(例如，章节I.D)中所述的任一种。在一些实施方案中，毒性是神经毒性(NT)或细胞因子释放综合征(CRS)。在一些实施方案中，毒性是严重NT或严重CRS。在一些实施方案中，毒性是2级或更高级NT或者2级或更高级CRS。在一些实施方案中，毒性是3级或更高级NT或者3级或更高级CRS。
在一些实施方案中，所述方法包括将样品中分析物的水平、量或浓度与阈值水平单独比较，由此确定在施用细胞疗法之后发生毒性的风险。在一些实施方案中，所述方法包括通过将样品中分析物的水平、量或浓度与阈值水平单独比较，来鉴定具有在施用细胞疗法之后发生毒性的风险的受试者。在一些实施方案中，所述方法还包括在评估后或基于评估的结果，向受试者施用细胞疗法以及任选地能够治疗、预防、延迟、降低或减弱毒性的发生或发生风险的药剂或其他治疗。在一些实施方案中，所述方法还涉及如果受试者被施用细胞疗法并且被鉴定为具有发生毒性的风险，则监测所述受试者的毒性症状。
在一些实施方案中，如果将受试者鉴定为具有发生毒性的风险，则可以进行一个或多个以下步骤，可以将其施用至所述受试者：(a)(1)能够治疗、预防、延迟、降低或减弱毒性的发生或发生风险的药剂或其他治疗，以及(2)细胞疗法，其中所述药剂的施用要在以下时间施用：(i)在开始将细胞疗法施用至受试者之前，(ii)在开始将细胞疗法施用至受试者的一天、两天或三天内，(iii)与开始将细胞疗法施用至受试者同时，和/或(iv)在开始将细胞疗法施用至受试者之后第一次发热时；和/或(b)以降低的剂量或如下剂量向受试者施用细胞疗法：与施用细胞疗法后发生毒性或严重毒性的风险无关，或者在大多数受试者和/或患有所述受试者患有或怀疑患有的疾病或病症的大多数受试者中与施用细胞疗法后发生毒性或严重毒性的风险无关；和/或(c)在住院环境中和/或在住院一天或多天的情况下向受试者施用细胞疗法，任选地其中在门诊基础上或者在没有住院一天或多天的情况下将细胞疗法以其他方式施用至受试者。
在一些实施方案中，可以评估的生物标记或分析物(包括其参数)包括乳酸脱氢酶(LDH)、铁蛋白、C反应蛋白(CRP)、白介素-6(IL-6)、IL-7、IL-8、IL-10、IL-15、IL-16、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、干扰素α2(IFN-α2)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、巨噬细胞炎性蛋白1α(MIP-1α)、巨噬细胞炎性蛋白1β(MIP-1β)、嗜酸性粒细胞趋化因子、粒细胞集落刺激因子(G-CSF)、IL-1受体α(IL-1Rα)、IL-1β、IFN-γ诱导蛋白10(IP-10)、穿孔素和D-二聚体(纤维蛋白降解产物)。在一些实施方案中，生物标记(例如，分析物)(包括其参数)包括LDH、铁蛋白、CRP、IL-6、IL-8、IL-10、TNF-α、IFN-α2、MCP-1和MIP-1β。在一些实施方案中，生物标记(例如，分析物)(包括其参数)包括铁蛋白、CRP、D-二聚体、IL-6、IL-15、TNF-α和MIP-1α。在一些实施方案中，生物标记(例如，分析物)(包括其参数)包括铁蛋白、CRP、IL-10、IL-15、IL-16、TNF-α或MIP-1β。在一些实施方案中，如与参考值或阈值水平相比，一种或多种此类生物标记(例如，生物标记)的升高的水平或增加的水平可以与神经毒性(例如，严重神经毒性或3级或更高级或4级或5级神经毒性)的发生相关。在一些实施方案中，如与参考值或阈值水平相比，一种或多种此类生物标记(例如，分析物)的升高的水平或增加的水平可以与神经毒性(例如，严重神经毒性或3级或更高级或4级或5级神经毒性)的发生相关。
在一些方面，可以关于施用细胞疗法之后发生毒性的风险的评估进行评估或分析的示例性分析物或生物标记包括选自LDH、铁蛋白、C反应蛋白(CRP)、IL-6、IL-8、IL-10、TNF-α、IFN-α2、MCP-1和MIP-1β的一种或多种分析物。在一些实施方案中，对于前述分析物或生物标记中的任一种，如果一种或多种分析物的水平、量或浓度高于阈值水平，则受试者具有发生毒性的风险，并且如果一种或多种分析物的水平、量或浓度低于阈值水平，则受试者具有发生毒性的低风险。在一些实施方案中，毒性是神经毒性。在一些方面，在施用细胞疗法之前(治疗前)从受试者获得的生物样品中，LDH、铁蛋白、C反应蛋白(CRP)、IL-6、IL-8、IL-10、TNF-α、IFN-α2、MCP-1和MIP-1β的升高水平可以与发生神经毒性的较高风险相关。
在一些实施方案中，阈值水平是在接受细胞疗法之前从受试者的组获得的生物样品中LDH、铁蛋白、C反应蛋白(CRP)、IL-6、IL-8、IL-10、TNF-α、IFN-α2、MCP-1或MIP-1β的中值或平均水平、量或浓度之上25％内、20％内、15％内、30％内或5％内，和/或一个标准差内，其中在接受用于治疗相同疾病或病症的表达重组受体的治疗性细胞组合物之后，所述组中的每名受试者仍不发生任何毒性。
在一些实施方案中，阈值水平是在接受细胞疗法之前从受试者的组获得的生物样品中LDH、铁蛋白、C反应蛋白(CRP)、IL-6、IL-8、IL-10、TNF-α、IFN-α2、MCP-1或MIP-1β的中值或平均水平、量或浓度之下25％内、20％内、15％内、30％内或5％内，和/或一个标准差内，其中在接受用于治疗相同疾病或病症的表达重组受体的治疗性细胞组合物之后，所述组中的每名受试者继续发生毒性。
在一些实施方案中，毒性是NT。在一些实施方案中，毒性是2级或更高级NT。在一些实施方案中，毒性是3级或更高级NT。在一些实施方案中，毒性是严重NT。在一些实施方案中，毒性是CRS。在一些实施方案中，毒性是2级或更高级CRS。在一些实施方案中，毒性是3级或更高级CRS。在一些实施方案中，毒性是严重CRS。
在一些实施方案中，LDH的示例性阈值水平是为或为约或高于或高于约300U/L、400U/L、500U/L、600U/L或700U/L。
在一些实施方案中，铁蛋白的示例性阈值水平是为或为约或高于或高于约500ng/mL、600ng/mL、700ng/mL、800ng/mL、900ng/mL、1000ng/mL或1500ng/mL。
在一些实施方案中，CRP的示例性阈值水平是为或为约或高于或高于约20mg/L、30mg/L、40mg/L、50mg/L、60mg/L、70mg/L或80mg/L。
在一些实施方案中，IL-6的示例性阈值水平是为或为约或高于或高于约5pg/mL、6pg/mL、7pg/mL、8pg/mL、9pg/mL、10pg/mL、20pg/mL或30pg/mL。
在一些实施方案中，IL-8的示例性阈值水平是为或为约或高于或高于约8pg/mL、9pg/mL、10pg/mL、20pg/mL或30pg/mL。
在一些实施方案中，IL-10的示例性阈值水平是为或为约或高于或高于约20pg/mL、30pg/mL、40pg/mL、50pg/mL、60pg/mL或70pg/mL。
在一些实施方案中，TNF-α的示例性阈值水平是为或为约或高于或高于约20pg/mL或30pg/mL。
在一些实施方案中，IFN-α2的示例性阈值水平是为或为约或高于或高于约40pg/mL、50pg/mL、60pg/mL、70pg/mL或80pg/mL。
在一些实施方案中，MCP-1；和/或的示例性阈值水平是为或为约或高于或高于约200pg/mL或300pg/mL。
在一些实施方案中，MIP-1β的示例性阈值水平是为或为约或高于或高于约40pg/mL、50pg/mL、60pg/mL、70pg/mL或80pg/mL。
在一些实施方案中，SPD的示例性阈值水平是为或约或者高于或高于约30cm2、40cm2、50cm2、60cm2或70cm2。
在一些实施方案中，LDH的示例性阈值水平是为或约或者高于或高于约300单位/升、400单位/升、500单位/升或600单位/升。
在一些实施方案中，铁蛋白的示例性阈值水平是为或约或者高于或高于约1000ng/mL、2000ng/mL、3000ng/mL、4000ng/mL、5000ng/mL、6000ng/mL、7000ng/mL或8000ng/mL。
在一些实施方案中，CRP的示例性阈值水平是为或约或者高于或高于约5mg/L、10mg/L、15mg/L、20mg/L、25mg/L、30mg/L、40mg/L或50mg/L。
在一些实施方案中，参数是SPD，并且阈值水平是50cm2。在一些实施方案中，参数是LDH，并且阈值水平是500单位/升。在一些实施方案中，一个或多个参数是SPD和LDH，并且SPD的阈值水平是50cm2并且LDH的阈值水平是500单位/升。
在一些实施方案中，参数是铁蛋白，并且阈值水平是5000ng/mL。在一些实施方案中，参数是CRP，并且阈值水平是10mg/L。在一些实施方案中，一个或多个参数是铁蛋白和CRP，并且铁蛋白的阈值水平是5000ng/mL并且CRP的阈值水平是10mg/L。
在一些方面，可以关于施用细胞疗法之后发生毒性的风险的评估进行评估或分析的示例性分析物或生物标记包括选自IL-8、IL-10和CXCL10的一种或多种分析物。在一些实施方案中，对于前述分析物或生物标记中的任一种，如果一种或多种分析物的水平、量或浓度高于阈值水平，则受试者具有发生毒性的风险，并且如果一种或多种分析物的水平、量或浓度低于阈值水平，则受试者具有发生毒性的低风险。在一些实施方案中，毒性是NT。在一些实施方案中，毒性是严重NT或者3级或更高级NT。在一些方面中，在施用细胞疗法之前(治疗前)从受试者获得的生物样品中，IL-8、IL-10和CXCL10的升高的水平可以与发生NT或严重NT或3级或更高级NT的较高风险相关。
在一些实施方案中，阈值水平是在接受细胞疗法之前从受试者组获得的生物样品中IL-8、IL-10或CXCL10的中值或平均水平、量或浓度之上25％内、20％内、15％内、30％内或5％内，和/或一个标准差内，其中在接受用于治疗相同疾病或病症的表达重组受体的治疗性细胞组合物之后，所述组中的每名受试者仍不发生任何毒性。
在一些实施方案中，阈值水平是在接受细胞疗法之前从受试者组获得的生物样品中IL-8、IL-10或CXCL10的中值或平均水平、量或浓度之下25％内、20％内、15％内、30％内或5％内，和/或一个标准差内，其中在接受用于治疗相同疾病或病症的表达重组受体的治疗性细胞组合物之后，所述组中的每名受试者继续发生毒性。
在一些方面，可以关于施用细胞疗法之后发生毒性的风险的评估进行评估或分析的示例性分析物或生物标记或肿瘤负荷的体积量度包括选自以下的一种或多种分析物或肿瘤负荷的体积量度：直径乘积之和(SPD)、LDH、铁蛋白、C反应蛋白(CRP)、D-二聚体(纤维蛋白降解产物)、IL-6、IL-10、IL-15、IL-16、TNF-α、MIP-1α和MIP-1β。在一些实施方案中，对于前述分析物或生物标记或肿瘤负荷的体积量度中的任一种，如果一种或多种所述分析物的水平、量或浓度或肿瘤负荷的体积量度高于阈值水平，则受试者具有发生毒性的风险，并且如果一种或多种所述分析物的水平、量或浓度或肿瘤负荷的体积量度低于阈值水平，则受试者具有发生毒性的低风险。在一些实施方案中，毒性是NT。在一些方面，在施用细胞疗法之前(治疗前)从受试者获得的生物样品中，直径乘积之和(SPD)、LDH、铁蛋白、C反应蛋白(CRP)、D-二聚体(纤维蛋白降解产物)、IL-6、IL-10、IL-15、IL-16、TNF-α、MIP-1α和MIP-1β的升高的水平或量度可以与发生NT(NT)或细胞因子释放综合征(CRS)的较高风险相关。
在一些实施方案中，一种或多种分析物或肿瘤负荷的体积量度选自LDH、SPD、IL-10、IL-15、IL-16、TNF-α和MIP-1β，并且毒性是NT。在一些实施方案中，一种或多种分析物或肿瘤负荷的体积量度选自LDH、SPD、CRP、d-二聚体、IL-6、IL-15、TNF-α和MIP-1α，并且毒性是CRS。在一些方面中，在施用细胞疗法之前(治疗前)从受试者获得的生物样品中，LDH、SPD、IL-10、IL-15、IL-16、TNF-α和MIP-1β的升高的水平或量度可以与发生NT(NT)的较高风险相关。在一些方面，在施用细胞疗法之前(治疗前)从受试者获得的生物样品中，LDH、SPD、CRP、d-二聚体、IL-6、IL-15、TNF-α和MIP-1α的升高的水平或量度可以与发生细胞因子释放综合征(CRS)的较高风险相关。
在一些实施方案中，阈值水平是在接受细胞疗法之前从受试者组获得的生物样品中LDH、铁蛋白、C反应蛋白(CRP)、D-二聚体(纤维蛋白降解产物)、IL-6、IL-10、IL-15、IL-16、TNF-α、MIP-1α或MIP-1β的中值或平均水平、量或浓度或直径乘积之和(SPD)的肿瘤负荷的中值或平均体积量度之上25％内、20％内、15％内、32％内或5％内，和/或一个标准差内，其中在接受用于治疗相同疾病或病症的表达重组受体的治疗性细胞组合物之后，所述组中的每名受试者仍不发生任何毒性。
在一些实施方案中，阈值水平是在接受细胞疗法之前从受试者组获得的生物样品中LDH、铁蛋白、C反应蛋白(CRP)、D-二聚体(纤维蛋白降解产物)、IL-6、IL-10、IL-15、IL-16、TNF-α、MIP-1α或MIP-1β的中值或平均水平、量或浓度或直径乘积之和(SPD)的肿瘤负荷的中值或平均体积量度之下25％内、20％内、15％内、32％内或5％内，和/或一个标准差内，其中在接受用于治疗相同疾病或病症的表达重组受体的治疗性细胞组合物之后，所述组中的每名受试者继续发生毒性。
在一些实施方案中，毒性是NT，并且LDH的示例性阈值水平是为或为约或高于或高于约300U/L、400U/L、500U/L或600U/L。
在一些实施方案中，毒性是NT，并且SPD的示例性阈值水平是为或为约或高于或高于约30cm2、40cm2、50cm2、60cm2、70cm2、80cm2或90cm2。
在一些实施方案中，毒性是NT，并且IL-10的示例性阈值水平是为或为约或高于或高于约0.8pg/mL、0.9pg/mL、1pg/mL、2pg/mL、3pg/mL或4pg/mL。
在一些实施方案中，毒性是NT，并且IL-15的示例性阈值水平是为或为约或高于或高于约3pg/mL、4pg/mL、5pg/mL、6pg/mL或7pg/mL。
在一些实施方案中，毒性是NT，并且IL-16的示例性阈值水平是为或为约或高于或高于约600pg/mL、700pg/mL、800pg/mL、900pg/mL或1000pg/mL。
在一些实施方案中，毒性是NT，并且TNF-α的示例性阈值水平是为或为约或高于或高于约6pg/mL、7pg/mL、8pg/mL、9pg/mL或10pg/mL。
在一些实施方案中，毒性是NT，并且MIP-1β的示例性阈值水平是为或为约或高于或高于约70pg/mL、80pg/mL、90pg/mL或100pg/mL。
在一些实施方案中，毒性是CRS，并且LDH的示例性阈值水平是为或为约或高于或高于约300U/L、400U/L、500U/L或600U/L。
在一些实施方案中，毒性是CRS，并且SPD的阈值水平是为或为约或高于或高于约20cm2、30cm2、40cm2或50cm2。
在一些实施方案中，毒性是CRS，并且铁蛋白的示例性阈值水平是为或为约或高于或高于约300ng/mL、400ng/mL、500ng/mL、600ng/mL、700ng/mL、800ng/mL、900ng/mL或1000ng/mL。
在一些实施方案中，毒性是CRS，并且CRP的示例性阈值水平是为或为约或高于或高于约20mg/L、30mg/L或40mg/L。
在一些实施方案中，毒性是CRS，并且d-二聚体的示例性阈值水平是为或为约或高于或高于约300pg/mL、400pg/mL、500pg/mL、600pg/mL、700pg/mL、800pg/mL、900pg/mL或1000pg/mL。
在一些实施方案中，毒性是CRS，并且IL-6的示例性阈值水平是为或为约或高于或高于约2pg/mL、3pg/mL、4pg/mL、5pg/mL、6pg/mL、7pg/mL、8pg/mL或9pg/mL。
在一些实施方案中，毒性是CRS，并且IL-15的示例性阈值水平是为或为约或高于或高于约3pg/mL、4pg/mL、5pg/mL、6pg/mL、7pg/mL、8pg/mL、9pg/mL或10pg/mL。
在一些实施方案中，毒性是CRS，并且TNF-α的示例性阈值水平是为或为约或高于或高于约7pg/mL、8pg/mL、9pg/mL、10pg/mL或15pg/mL。
在一些实施方案中，毒性是CRS，并且MIP-1α的示例性阈值水平是为或为约或高于或高于约20pg/mL、30pg/mL或40pg/mL。
在一些实施方案中，生物标记是LDH，并且在一些情况下，毒性(例如，CRS或NT)的发生与高于阈值的LDH值相关联。在一些实施方案中，炎性标记是LDH，并且阈值为或为约300单位/升，为或为约400单位/升，为或为约500单位/升，或者为或为约600单位/升。
在一些实施方案中，毒性是NT或CRS，并且SPD的示例性阈值水平是为或约或者高于或高于约30cm2、40cm2、50cm2、60cm2或70cm2。
在一些实施方案中，毒性是NT或CRS，并且LDH的示例性阈值水平是为或约或者高于或高于约300单位/升、400单位/升、500单位/升或600单位/升。
在一些实施方案中，毒性是NT或CRS，并且铁蛋白的示例性阈值水平是为或约或者高于或高于约1000ng/mL、2000ng/mL、3000ng/mL、4000ng/mL、5000ng/mL、6000ng/mL、7000ng/mL或8000ng/mL。
在一些实施方案中，毒性是NT或CRS，并且CRP的示例性阈值水平是为或约或者高于或高于约5mg/L、10mg/L、15mg/L、20mg/L、25mg/L、30mg/L、40mg/L或50mg/L。
在一些实施方案中，参数是SPD，并且阈值水平是50cm2。在一些实施方案中，参数是LDH，并且阈值水平是500单位/升。在一些实施方案中，一个或多个参数是SPD和LDH，并且SPD的阈值水平是50cm2并且LDH的阈值水平是500单位/升。
在一些实施方案中，如果样品中生物标记(例如，分析物)的水平、量或浓度等于或高于分析物的阈值水平，则在开始将细胞疗法施用至受试者之前、在开始将细胞疗法施用至受试者的1、2或3天内、与开始将细胞疗法施用至受试者同时和/或在开始将细胞疗法施用至受试者后第一次发热时，将能够治疗、预防、延迟、降低或减弱毒性的发生或发生风险的药剂或其他治疗施用至受试者。与所提供方法结合用于治疗、预防、延迟、降低或减弱发生毒性的风险的示例性药剂或干预描述于章节II中。
在一些情况下，如果样品中生物标记的水平、量或浓度等于或高于阈值水平，则将细胞疗法以降低的剂量或如下剂量施用至受试者：与施用细胞疗法后发生毒性或严重毒性的风险无关，或在大多数受试者和/或患有所述受试者患有或怀疑患有的疾病或病症的大多数受试者中与施用细胞疗法后发生毒性或严重毒性的风险无关。在一些情况下，如果样品中生物标记的水平、量或浓度等于或高于阈值水平，则在住院环境中和/或在住院一天或多天的情况下将细胞疗法施用至受试者，任选地其中要在门诊基础上或在没有住院一天或多天的情况下将细胞疗法以其他方式施用至受试者。
在一些实施方案中，如果生物标记(例如，分析物)的水平、量或浓度低于分析物的阈值水平，则任选地以未降低的剂量将细胞疗法施用至受试者。在一些情况下，任选地在门诊基础上或在没有住院一天或多天的情况下施用细胞疗法。在一些实施方案中，如果分析物的水平、量或浓度低于阈值水平，则细胞疗法的施用不包括在施用细胞疗法之前或伴随施用细胞疗法和/或在发生除了发热以外的毒性的体征或症状之前施用能够治疗、预防、延迟或减弱毒性的发生的药剂或治疗；和/或要将或可以将细胞疗法的施用在门诊环境中和/或在不使受试者住院过夜或连续住院一或多天的情况下和/或在不使受试者住院一或多天的情况下施用至受试者。
在所提供方法的一些方面，通过将生物标记(例如，分析物)或单独地每种生物标记(例如，分析物)的参数(例如，浓度、量、水平或活性)与生物标记或每种生物标记的相应参数的参考值(如阈值水平)比较，确定受试者具有发生毒性(例如，神经毒性，如严重NT或3级或更高级的神经毒性，例如4级或5级NT和/或CRS，如严重CRS或3级或更高级的CRS)的风险。在一些实施方案中，所述比较表明受试者是否具有发生毒性(例如，NT，如严重NT或3级或更高级的神经毒性，例如，4级或5级NT，和/或CRS，如严重CRS或3级或更高级的CRS)的风险，和/或表明发生所述毒性的风险的程度。在一些实施方案中，所述参考值是阈值水平或截止值，在所述阈值水平或截止值下，存在预测这种毒性将发生或者可能单独或与组中的一种或多种生物标记组合发生的良好预测价值(例如，准确度、灵敏度和/或特异性)。在一些情况下，这个参考值(例如，阈值水平)可以是或者是在进行所述方法之前预定或已知的，如从先前用细胞疗法治疗并针对生物标记或单独地组中每种生物标记的参数与毒性结果的存在(例如，NT(如严重NT或3级或更高级的神经毒性，例如，4级或5级NT)和/或CRS(如严重CRS或3级或更高级的CRS)的存在)的相关进行评估的多个受试者来预定或已知。
在一些实施方案中，生物标记(例如，LDH、铁蛋白、CRP、IL-6、IL-8、IL-10、TNF-α、IFN-α2、MCP-1和MIP-1β)的高于或大于相应参数的参考值(例如，阈值水平)的参数与毒性风险的阳性预测相关(单独或结合对组中其他生物标记的评估)。在一些实施方案中，生物标记的等于或低于相应参数的参考值(例如，阈值水平)的参数与毒性风险的阴性预测相关(单独或结合对组中其他生物标记的评估)。
在一些实施方案中，阈值水平是基于对生物标记呈阳性的样品中生物标记(例如，分析物)的水平、量、浓度或其他量度来确定。在一些方面，阈值水平是在接受表达重组受体的治疗性细胞组合物之前从一组受试者获得的生物样品中分析物或参数的平均水平、量或浓度或量度的25％内、20％内、15％内、10％内或5％内，和/或是在所述平均水平、量或浓度或量度的一个标准差内，其中所述组中的每名受试者在接受用于治疗相同疾病或病症的表达重组受体的治疗性细胞组合物后继续发生毒性(例如，NT，如严重NT或3级或更高级的神经毒性，例如，4级或5级NT，和/或CRS，如严重CRS或3级或更高级的CRS)。
在任何所提供方法的一些实施方案中，生物标记(例如，分析物)与发生严重NT(如严重NT或3级或更高级的神经毒性，例如，4级或5级NT，和/或严重CRS或3级或更高级的CRS)的风险相关，和/或预测所述风险。在一些实施方案中，阈值水平是在接受表达重组受体的治疗性细胞组合物之前从一组受试者获得的生物样品中分析物或参数的平均水平、量或浓度或量度的25％内、20％内、15％内、10％内或5％内，和/或是在所述平均水平、量或浓度或量度的标准差内，其中在接受用于治疗相同疾病或病症的表达重组受体的治疗性细胞组合物后，所述组中的每名受试者继续发生严重NT或3级或更高级的神经毒性，例如，4级或5级NT，和/或严重CRS或3级或更高级的CRS。
在一些实施方案中，体积量度是SPD，并且在一些情况下，毒性(例如CRS或NT)的发生与高于阈值的SPD值相关联。在一些实施方案中，体积量度是SPD，并且阈值为或为约30cm2，为或为约40cm2，为或为约50cm2，为或为约60cm2，或者为或为约70cm2。在一些实施方案中，体积量度是SPD，并且阈值为或为约30cm2，为或为约40cm2，为或为约50cm2，为或为约60cm2，或者为或为约70cm2。
在一些实施方案中，包括体积肿瘤测量值的参数与对细胞疗法的反应和/或发生毒性(例如，CRS或NT(NT))的风险相关。
在一些实施方案中，体积量度是SPD，并且阈值水平为或为约30cm2，为或为约40cm2，为或为约50cm2，为或为约60cm2，或者为或为约70cm2。在一些实施方案中，体积量度是SPD并且阈值水平为或为约50cm2。
在一些实施方案中，分析物是LDH，并且阈值水平为或为约300单位/升(U/L)，为或为约400U/L，为或为约500U/L，或者为或为约600U/L。在一些实施方案中，分析物是LDH，并且阈值水平为或为约500U/L。
在一些实施方案中，参数或生物标记是LDH。在一些实施方案中，生物标记是LDH，并且阈值为或为约500U/L或更高。在一些实施方案中，参数或生物标记是SPD。在一些实施方案中，参数是SPD，并且阈值为或为约50cm2或更高。在一些实施方案中，生物标记或参数是SPD和LDH，并且阈值是为或约50cm2或更高的SPD和为或约500U/L或更高的LDH。在一些实施方案中，生物标记或参数与增加的发生CRS或NT的风险相关。
在一些实施方案中，高于阈值(例如，为或约50cm2或更高的SPD和为或约500U/L或更高的LDH)的参数或标记的测量值与增加大约2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍或更多倍的发生CRS或NT(如任何等级的CRS或NT)的风险相关。在一些实施方案中，低于阈值(例如，低于或低于约500cm2的SPD和低于或低于约500U/L的LDH)的参数或标记的测量值与减小大约2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍或更多倍的发生CRS或NT(如任何等级的CRS或NT)的风险相关。
在一些实施方案中，生物标记(例如，分析物)包括与增加的细胞药代动力学(PK)参数(例如，增加的细胞最大血清浓度(Cmax)或增加的暴露(例如，曲线下面积(AUC)))相关的那些。在一些实施方案中，生物标记(例如，分析物)(包括其参数)包括IL-7、IL-15、MIP-1α和TNF-α。
在一些实施方案中，所述参数是与肿瘤负荷相关的参数，例如，肿瘤负荷的测量值。在一些方面，所述方法还涉及基于通过评估生物标记的存在或不存在和/或将生物标记与所述生物标记的参考值或阈值水平相比较而确定的毒性风险，进一步监测受试者可能的毒性症状。\
在一些实施方案中，在开始淋巴细胞清除之前具有治疗前高肿瘤负荷(通过垂直直径的乘积之和(SPD；≥500cm2)测量)或高血清乳酸脱氢酶(LDH；≥500U/L)的患有NHL的受试者也可能具有发生CRS和/或NT的较高风险。在一些实施方案中，炎性标记(如铁蛋白和C反应蛋白(CRP))的施用前高水平也可能与CRS相关。在一些实施方案中，IL-6、IFN-γ、铁蛋白和CRP的峰值水平可能与任何等级或3级或更高的NT相关。在一些实施方案中，患有B细胞急性成淋巴细胞性白血病(ALL)和高疾病负荷的受试者可能具有发生CRS的升高的风险。在一些实施方案中，严重NT可能与过继细胞疗法时较高的疾病负荷相关。在一些实施方案中，与基线测量值相比，具有NT的患者中的脑脊液(CSF)中的蛋白质水平可能升高。在一些方面，其他器官功能障碍(肝和肾)以及低氧血症和感染也可能促成脑病。在一些方面，细胞因子介导的内皮激活可能与凝血病、毛细血管渗漏和血脑屏障破坏相关，从而允许高浓度的全身性细胞因子转移到CSF中。
3.用于测量的试剂
在一些实施方案中，使用一种或多种能够检测参数或对所述参数具有特异性的试剂检测参数，例如患者因素、生物标记、炎性标记和/或细胞因子。在一些实施方案中，还提供了试剂盒和制品，用于检测或评估参数和/或用于调节疗法(例如细胞疗法)。
在一些实施方案中，还提供了使用所述试剂测定来自受试者的生物样品的说明书，所述受试者是任选地用细胞疗法治疗的候选者，所述细胞疗法任选地包括表达重组受体的基因工程化细胞的剂量或组合物。在使用制品的一些实施方案中，检测并评估C-C基序趋化因子配体13(CCL13)、C反应蛋白(CRP)、C-X-C基序趋化因子10(CXCL10)、D-二聚体(纤维蛋白降解产物)、铁蛋白、IFN-α2、白介素-2(IL-2)、IL-10、IL-15、IL-16、IL-6、IL-7、IL-8、干扰素γ(IFN-γ)、乳酸脱氢酶(LDH)、巨噬细胞炎性蛋白(MIP-1α)、MIP-1β、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、SAA-1、血清淀粉样蛋白A1(SAA-1)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)的水平或存在。在使用制品的一些实施方案中，检测并评估C反应蛋白(CRP)、红细胞沉降率(ESR)、白蛋白、铁蛋白、β2微球蛋白(β2-M)或乳酸脱氢酶(LDH)的水平或存在。还提供了检测和评估指示肿瘤负荷的一种或多种患者属性、因素和/或生物标记的方法。
在一些实施方案中，测量一个或多个参数(例如，生物标记)的值包括使能够直接或间接检测分析物的试剂与生物样品接触并确定所述分析物在所述生物样品中的存在或不存在、水平、量或浓度。在一些实施方案中，检测并评估一种或多种参数，例如生物标记、C-C基序趋化因子配体13(CCL13)、C反应蛋白(CRP)、C-X-C基序趋化因子10(CXCL10)、D-二聚体(纤维蛋白降解产物)、铁蛋白、IFN-α2、白介素-2(IL-2)、IL-10、IL-15、IL-16、IL-6、IL-7、IL-8、干扰素γ(IFN-γ)、乳酸脱氢酶(LDH)、巨噬细胞炎性蛋白(MIP-1α)、MIP-1β、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、SAA-1、血清淀粉样蛋白A1(SAA-1)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)。在使用制品的一些实施方案中，C反应蛋白(CRP)、红细胞沉降率(ESR)、白蛋白、铁蛋白、β2微球蛋白(β2-M)或乳酸脱氢酶(LDH)的水平或存在。在一些实施方案中，一种或多种参数(例如生物标记)是或包括LDH。
在一些方面，所述试剂是特异性结合至生物标记的结合分子。例如，在一些实施方案中，所述试剂是抗体或其抗原结合片段。在一些实施方案中，所述试剂是或包括生物标记的底物或结合配偶体。
在一些实施方案中，在样品中检测或确定LDH的存在、不存在或水平、量、浓度和/或其他量度。多种检测或确定LDH的方法是已知的。例如，测量乳酸盐通过NAD+还原为NADH而LDH转化为丙酮酸盐的测定可以用于检测样品中的LDH。在一些实施方案中，使样品在辅酶NAD的存在下与乳酸盐接触，所述辅酶NAD作为样品中LDH的量度产生NADH，然后NADH在电子转移剂的存在下发生氧化。在一些实施方案中，NADH与可以通过测量可见光范围内的吸收来检测的探针或染料前体相互作用。在一些例子中，心肌黄酶使用NADH将四唑盐(INT)还原为红色甲臜(formazan)产物，并测量所述产物。因此，在一些实施方案中，所形成的有色产物的量与样品中的LDH活性成正比。
在一些实施方案中，使用免疫测定评估患者属性、因素和/或生物标记。例如，可以使用酶联免疫吸附测定(ELISA)、酶免疫测定(EIA)、放射免疫测定(RIA)、表面等离子体共振(SPR)、蛋白质印迹、侧向流测定、免疫组织化学、蛋白质阵列或免疫PCR(iPCR)来检测患者属性、因素和/或生物标记。在一些实施方案中，使用制品包括检测指示肿瘤负荷的患者属性、因素和/或生物标记。在一些情况下，使用流式细胞术测定或评估患者属性、因素和/或生物标记。在一些情况下，所述试剂是可溶性蛋白质，其结合患者属性、因素和/或生物标记。在一些例子中，所述试剂是结合C反应蛋白(CRP)、红细胞沉降率(ESR)、白蛋白、铁蛋白、β2微球蛋白(β2-M)或乳酸脱氢酶(LDH)的蛋白质。
在一些实施方案中，使用体外酶联免疫吸附测定来评估C反应蛋白(CRP)，以从样品(例如血清、血浆或血液)获得人CRP的定量测量值。在一些例子中，使用人酶联免疫吸附测定(ELISA)检测CRP。在一些实施方案中，通过测量红细胞在竖直移液管或导管中从血浆中分离后已经下降的距离(以毫米/小时为单位)来评估红细胞沉降率(ESR)。在一些方面，使用比色测试或体外酶联免疫吸附测定来评估白蛋白。在一些例子中，使用人酶联免疫吸附测定(ELISA)检测白蛋白。在一些实施方案中，铁蛋白或β2微球蛋白是使用免疫测定来评估，或使用ELISA来检测。在一些方面，使用比色测试或体外酶联免疫吸附测定来评估乳酸脱氢酶(LDH)。
所提供的抗体包括单克隆抗体，包括单克隆抗体片段。如本文所用的术语“单克隆抗体”是指从基本上同质抗体的群体(即，构成所述群体的单独抗体是相同的，但含有天然存在的突变或在单克隆抗体制剂的产生期间产生的可能变体除外，此类变体通常以少量存在)获得或在所述群体内的抗体。与通常包括针对不同表位的不同抗体的多克隆抗体制剂相反，单克隆抗体制剂的每种单克隆抗体针对抗原上的单一表位。所述术语不应解释为需要通过任何特定方法产生抗体。单克隆抗体可以通过多种技术制备，包括但不限于从杂交瘤产生、重组DNA方法、噬菌体展示和其他抗体展示方法。
还提供了抗体免疫缀合物，其包含针对附着于标记的生物标记的抗体，所述标记可以间接或直接产生可检测的信号。这些抗体免疫缀合物可以用于研究或诊断应用。所述标记优选能够直接或间接地产生可检测信号。例如，所述标记可以是不透射线的或放射性同位素，例如3H、14C、32P、35S、123I、125I、131I；荧光(荧光团)或化学发光(发色团)化合物，如荧光素异硫氰酸盐、罗丹明或萤光素；酶，如碱性磷酸酶、β-半乳糖苷酶或辣根过氧化物酶；成像剂；或金属离子。在一些实施方案中，所述标记是用于闪烁扫描研究的放射性原子，例如99Tc或123I，或用于核磁共振(NMR)成像(也称为磁共振成像，MRI)的旋转标记，如锆-89、碘-123、碘-131、铟-111、氟-19、碳-13、氮-15、氧-17、钆、锰或铁。锆-89可以与多种金属螯合剂络合并与抗体缀合，例如用于PET成像(WO 2011/056983)。
在一些实施方案中，抗体免疫缀合物是间接可检测的。例如，对针对在骨髓细胞群免疫缀合物上表达的标记的抗体具有特异性并含有可检测标签的二抗可以用于检测所述抗体免疫缀合物。
在一些实施方案中，可以通过多种已知测定来鉴定能够检测本文所提供的患者属性、因素和/或生物标记或对所述患者属性、因素和/或生物标记具有特异性的抗体，或针对所述抗体的物理/化学特性和/或生物学活性对所述抗体进行筛选或表征。在一个方面，例如通过已知方法测试抗体的抗原结合活性，所述方法例如免疫测定、ELISA、蛋白质印迹和/或流式细胞术测定，包括基于细胞的结合测定。
II.治疗或改善毒性症状的干预或药剂
在一些实施方案中，所提供的方法和制品可以与用于治疗、预防、延迟或减弱毒性发生的一种或多种药剂或治疗结合使用，或者涉及或包括所述一种或多种药剂或治疗。在一些例子中，能够治疗、预防、延迟或减弱毒性发生的药剂或其他治疗是在包含基因工程化细胞的治疗性细胞组合物的施用之前和/或同时施用。
在一些实施方案中，能够治疗、预防、延迟或减弱毒性发生的药剂(例如，毒性靶向剂)或治疗是类固醇，是细胞因子受体(如IL-6受体、CD122受体(IL-2Rβ受体)或CCR2)的拮抗剂或抑制剂，或者是细胞因子(如IL-6、MCP-1、IL-10、IFN-γ、IL-8或IL-18)的抑制剂。在一些实施方案中，所述药剂是细胞因子受体和/或细胞因子(如TGF-β)的激动剂。在一些实施方案中，所述药剂(例如，激动剂、拮抗剂或抑制剂)是抗体或抗原结合片段、小分子、蛋白质或肽或核酸。
在一些实施方案中，可以将流体推注用作干预，如用于治疗与CRS相关的低血压。在一些实施方案中，目标血球容积水平>24％。在一些实施方案中，所述干预包括使用具有血液或血浆过滤的吸收性树脂技术。在一些情况下，所述干预包括透析、血浆置换或类似技术。在一些实施方案中，可以使用血管加压药或对乙酰氨基酚。
在一些实施方案中，所述药剂可以与所述疗法(如用于过继细胞疗法的细胞)依次、间歇或同时或在相同组合物中施用。例如，可以在施用免疫疗法和/或细胞疗法之前、期间、同时或之后施用所述药剂。
在一些实施方案中，所述药剂是在如本文所述的时间并且根据所提供方法和/或用所提供制品或组合物来施用。在一些实施方案中，毒性靶向剂是在开始免疫疗法和/或细胞疗法后(如少于或不超过)3、4、5、6、7、8、9或10天内的时间施用。在一些实施方案中，毒性靶向剂是在开始施用免疫疗法和/或细胞疗法后1天、2天或3天或约1天、2天或3天内施用。
在一些实施方案中，在开始施用免疫疗法和/或细胞疗法后，在受试者不表现出2级或更高的CRS或者2级或更高的神经毒性时向受试者施用所述药剂(例如，毒性靶向剂)。在一些方面，在开始施用免疫疗法和/或细胞疗法后，在受试者不表现出严重CRS或严重神经毒性时，施用毒性靶向剂。因此，在开始施用免疫疗法和/或细胞疗法与毒性靶向剂之间，受试者是不表现出2级或更高的CRS(如严重CRS)和/或不表现出2级或更高的神经毒性(如严重神经毒性)的受试者。
在一些实施方案中，所述药剂可以基于或根据某些程序、指南、干预或方案来施用，例如，基于对结果(如毒性和/或反应结果)的评估和监测和/或对参数或生物标记(例如，药代动力学参数、患者属性或因素和/或生物标记的表达)的监测来施用。在一些实施方案中，示例性程序、指南、干预或方案包括但不限于WO 2019/109035中所述的干预或方案。
用于治疗或改善毒性(如严重CRS(sCRS)或严重神经毒性)的干预的非限制性例子描述于表7中。在一些实施方案中，所述干预包括托珠单抗或所描述的其他毒性靶向剂，其可以在受试者有高于或约38℃或者高于或高于约39℃的持续或持久发热时进行。在一些实施方案中，在干预之前，受试者发热持续超过10小时、超过12小时、超过16小时或超过24小时。
Figure BDA0003183097650001381
施用所述药剂或疗法或干预的其他非限制性例子描述于下文表8(CRS)和表9(NT)中。在一些方面，细胞因子释放综合征(CRS)是基于临床表现来鉴定。在一些方面，针对发热、缺氧和低血压的其他病因评价并治疗受试者。在一些实施方案中，如果怀疑受试者患有CRS，则根据表8中的指南管理CRS。在一些实施方案中，如果怀疑受试者在CRS期间患有并发的神经病学毒性，则根据表9中的指南管理神经病学毒性。
表8.CRS分级和管理指南
Figure BDA0003183097650001391
Figure BDA0003183097650001401
如果开始施用类固醇，连续施用类固醇至少3剂或直至症状完全消退，并且考虑类固醇渐减。
a用于将CRS分级的Lee标准(Lee等人,2014)。
在一些方面，对于神经病学事件(NE)或神经毒性(NT)，监测受试者的神经病学毒性的体征和症状，例如，如表9中所述。在一些方面，排除神经病学症状的其他病因。在一些方面，提供用于严重或危及生命的神经病学毒性的重症监护支持疗法。在一些实施方案中，如果怀疑NT，则根据表9中的指南管理NT。在一些方面，如果怀疑受试者在神经病学毒性事件期间患有并发的CRS，则根据表8中的建议管理CRS。
表9.神经病学毒性(NT)分级和管理指南
Figure BDA0003183097650001402
Figure BDA0003183097650001411
a用于将神经病学毒性分级的NCI CTCAE标准。
在一些情况下，所述药剂或疗法或干预(例如，毒性靶向剂)是单独施用或者是作为如本文所述的组合物或配制品(如药物组合物或配制品)的一部分施用。因此，单独的或作为药物组合物的一部分的所述药剂可以静脉内或口服施用，或者通过任何其他可接受的已知施用途径或如本文所述来施用。
在一些实施方案中，与在已经产生或已经诊断出2级或更高的CRS或神经毒性之后(如在严重(例如，3级或更高的)CRS之后或在严重(例如，3级或更高的)神经毒性之后)(例如在已经出现3级或更高的CRS或神经毒性的体征或症状之后)用所述药剂治疗受试者的方法中所述药剂的剂量或其频率相比，在剂量方案中药剂的剂量或所述药剂的剂量频率有所降低。在一些实施方案中，与在施用免疫疗法和/或细胞疗法之后大于3天、4天、5天、6天、1周、2周、三周或更长时间治疗受试者的CRS或神经毒性的方法中所述药剂的剂量或其频率相比，在剂量方案中药剂的剂量或所述药剂的剂量频率有所降低。在一些实施方案中，剂量降低大于或大于约1.2倍、1.5倍、2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍或更多倍。在一些实施方案中，剂量降低大于或约10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或更多。在一些实施方案中，给药频率降低，如每日剂量的数量减少或者给药的天数减少。
A.类固醇
在一些实施方案中，治疗和/或预防、延迟或减弱对免疫疗法和/或细胞疗法的毒性的产生或产生对免疫疗法和/或细胞疗法的毒性的风险的药剂(例如，毒性靶向剂)是类固醇(例如，皮质类固醇)。皮质类固醇通常包括糖皮质激素和盐皮质激素。
任何皮质类固醇(例如，糖皮质激素)可以用于本文提供的方法中。在一些实施方案中，糖皮质激素包括合成和非合成的糖皮质激素。示例性糖皮质激素包括但不限于：阿氯米松(alclomethasone)、阿尔孕酮(algestone)、倍氯米松(beclomethasone)(例如二丙酸倍氯米松)、倍他米松(betamethasone)(例如倍他米松17-戊酸酯、倍他米松醋酸钠、倍他米松磷酸钠、倍他米松戊酸酯)、布地奈德(budesonide)、氯倍他索(clobetasol)(例如丙酸氯倍他索)、氯倍他松(clobetasone)、氯可托龙(clocortolone)(例如氯可托龙新戊酸酯)、氯泼尼醇(cloprednol)、皮质酮、可的松(cortisone)和氢化可的松(hydrocortisone)(例如醋酸氢化可的松)、可的伐唑(cortivazol)、地夫可特(deflazacort)、地奈德(desonide)、去羟米松(desoximethasone)、地塞米松(dexamethasone)(例如地塞米松21-磷酸酯、醋酸地塞米松、地塞米松磷酸钠)、二氟拉松(diflorasone)(例如二氟拉松二醋酸酯)、二氟可龙(diflucortolone)、二氟泼尼酯(difluprednate)、甘草次酸(enoxolone)、氟扎可特(fluazacort)、氟氯奈德(flucloronide)、氟氢可的松(fludrocortisone)(例如醋酸氟氢可的松)、氟米松(flumethasone)(例如特戊酸氟米松)、氟尼缩松(flunisolide)、氟轻松(fluocinolone)(例如丙酮化氟轻松)、醋酸氟轻松(fluocinonide)、氟可丁(fluocortin)、氟可龙(fluocortolone)、氟米龙(fluorometholone)(例如醋酸氟米龙)、氟培龙(fluperolone)(例如醋酸氟培龙)、氟泼尼定(fluprednidene)、氟泼尼龙(fluprednisolone)、丙酮缩氟氢羟龙(flurandrenolide)、氟替卡松(fluticasone)(例如丙酸氟替卡松)、福莫可他(formocortal)、氯氟舒松(halcinonide)、卤倍他索(halobetasol)、卤米松(halometasone)、卤泼尼松(halopredone)、氢可他酯(hydrocortamate)、氢化可的松(例如氢化可的松21-丁酸酯、氢化可的松醋丙酯、醋酸氢化可的松、氢化可的松丁丙酸酯、丁酸氢化可的松、氢化可的松环戊丙酸酯、氢化可的松半琥珀酸酯、氢化可的松丙丁酸酯、磷酸氢化可的松钠、氢化可的松琥珀酸钠、戊酸氢化可的松)、依碳酸氯替泼诺(loteprednol etabonate)、马泼尼酮(mazipredone)、甲羟松(medrysone)、甲泼尼松(meprednisone)、甲基泼尼松龙(乙丙酸甲基泼尼松龙、醋酸甲基泼尼松龙、半琥珀酸甲基泼尼松龙、甲基泼尼松龙琥珀酸钠)、莫米松(mometasone)(如糠酸莫米松)、帕拉米松(如醋酸帕拉米松)、泼尼卡酯(prednicarbate)、泼尼松龙(prednisolone)(例如泼尼松龙25-二乙氨基乙酸酯、泼尼松龙磷酸钠、泼尼松龙21-半琥珀酸盐、醋酸泼尼松龙；泼尼松龙法尼酯、泼尼松龙半琥珀酸盐、泼尼松龙-21(β-D-葡萄糖醛酸苷)、间磺苯甲酸泼尼松龙、泼尼松龙司替酸酯、泼尼松龙叔丁乙酸酯、四氢邻苯二甲酸泼尼松龙)、泼尼松(prednisone)、泼尼松龙戊酸酯(prednival)、泼尼立定(prednylidene)、利美索龙(rimexolone)、替可的松(tixocortol)、曲安西龙(triamcinolone)(例如曲安奈德(triamcinolone acetonide)、苯曲安奈德(triamcinolone benetonide)、己曲安奈德(triamcinolone hexacetonide)、曲安奈德21-棕榈酸酯、醋酸曲安西龙)。这些糖皮质激素及其盐详细论述于例如以下文献中：Remington's Pharmaceutical Sciences,A.Osol编辑,Mack Pub.Co.,宾夕法尼亚州伊斯顿市(第16版，1980)。
在一些例子中，糖皮质激素选自可的松、地塞米松、氢化可的松、甲基泼尼松龙、泼尼松龙和泼尼松。在特定例子中，糖皮质激素是地塞米松。
在一些实施方案中，所述药剂是皮质类固醇并且是以对治疗、改善或减轻针对免疫疗法和/或细胞疗法的毒性(如CRS或神经毒性)的一种或多种症状治疗有效的量来施用。在一些实施方案中，改进或成功治疗的指示物包括确定未能在毒性分级量表(例如CRS或神经毒性分级量表)上显示相关得分(如小于3的得分)，或在如本文所讨论的分级量表上的分级或严重性的变化(如从4分到3分的变化或者从4分到2、1或0分的变化)。
在一些方面，皮质类固醇是以治疗有效剂量提供。治疗有效浓度可以通过在已知的体外或体内(例如动物模型)系统中进行测试，凭经验确定。例如，可以通过标准临床技术来确定被施用以改善对免疫疗法和/或细胞疗法的毒性(如CRS或神经毒性)的症状或副作用的所选择的皮质类固醇的量。此外，可以采用动物模型来帮助确定最佳剂量范围。可以凭经验确定的精确剂量可以取决于具体的治疗制剂、方案和给药时间表、施用途径和疾病的严重性。
可以按有效改善与毒性(如与CRS或神经毒性)相关的一种或多种症状的任何量施用皮质类固醇。可以将皮质类固醇(例如，糖皮质激素)例如以如下量施用至70kg成人受试者：每剂量在为或约0.1与为或约100mg之间、为或约0.1与为或约80mg之间、为或约0.1与为或约60mg之间、为或约0.1与为或约40mg之间、为或约0.1与为或约30mg之间、为或约0.1与为或约20mg之间、为或约0.1与为或约15mg之间、为或约0.1与为或约10mg之间、为或约0.1与为或约5mg之间、为或约0.2与为或约40mg之间、为或约0.2与为或约30mg之间、为或约0.2与为或约20mg之间、为或约0.2与为或约15mg之间、为或约0.2与为或约10mg之间、为或约0.2与为或约5mg之间、为或约0.4与为或约40mg之间、为或约0.4与为或约30mg之间、为或约0.4与为或约20mg之间、为或约0.4与为或约15mg之间、为或约0.4与为或约10mg之间、为或约0.4与为或约5mg之间、为或约0.4与为或约4mg之间、为或约1与为或约20mg之间、为或约1与为或约15mg之间或者1与为或约10mg之间。通常，将皮质类固醇(如糖皮质激素)以如下量施用至普通成人受试者：每剂量在为或约0.4与为或约20mg之间，例如，为或约0.4mg、0.5mg、0.6mg、0.7mg、0.75mg、0.8mg、0.9mg、1mg、2mg、3mg、4mg、5mg、6mg、7mg、8mg、9mg、10mg、11mg、12mg、13mg、14mg、15mg、16mg、17mg、18mg、19mg或20mg。
在一些实施方案中，可以将皮质类固醇例如以如下剂量施用至通常体重为约70kg至75kg的普通成人受试者：为或约0.001mg/kg(受试者的体重)、0.002mg/kg、0.003mg/kg、0.004mg/kg、0.005mg/kg、0.006mg/kg、0.007mg/kg、0.008mg/kg、0.009mg/kg、0.01mg/kg、0.015mg/kg、0.02mg/kg、0.025mg/kg、0.03mg/kg、0.035mg/kg、0.04mg/kg、0.045mg/kg、0.05mg/kg、0.055mg/kg、0.06mg/kg、0.065mg/kg、0.07mg/kg、0.075mg/kg、0.08mg/kg、0.085mg/kg、0.09mg/kg、0.095mg/kg、0.1mg/kg、0.15mg/kg、0.2mg/kg、0.25mg/kg、0.30mg/kg、0.35mg/kg、0.40mg/kg、0.45mg/kg、0.50mg/kg、0.55mg/kg、0.60mg/kg、0.65mg/kg、0.70mg/kg、0.75mg/kg、0.80mg/kg、0.85mg/kg、0.90mg/kg、0.95mg/kg、1mg/kg、1.05mg/kg、1.1mg/kg、1.15mg/kg、1.20mg/kg、1.25mg/kg、1.3mg/kg、1.35mg/kg或1.4mg/kg。
可以将皮质类固醇或糖皮质激素(例如地塞米松)按以下途径施用：口服(片剂、液体或液体浓缩物)(PO)、静脉内(IV)、肌肉内或通过任何其他已知途径或本文所述的途径(例如，关于药物配制品)。在一些方面，将皮质类固醇作为推注施用，并且在其他方面，可以将其在一定时间段内施用。
在一些方面，可以将糖皮质激素在超过一天的时间段内施用，如在两天内、在3天内或者在4天或更多天内。在一些实施方案中，可以将皮质类固醇每天一次、每天两次或者每天三次或更多次施用。例如，在一些例子中，可以将皮质类固醇(例如，地塞米松)每天两次以10mg(或等效量)IV施用，持续三天。
在一些实施方案中，将皮质类固醇(例如，糖皮质激素)的剂量以每次治疗连续降低的剂量施用。因此，在一些此类治疗方案中，皮质类固醇的剂量是渐减的。例如，可以将皮质类固醇以4mg的初始剂量(或等效剂量，如关于地塞米松)施用，并且在每次连续施用时可以降低剂量，使得下一次施用的剂量为3mg，下一次施用为2mg，并且下一次施用为1mg。
通常，所施用的皮质类固醇的剂量取决于特定皮质类固醇，因为不同皮质类固醇的效力之间存在差异。通常应理解，药物的效力不同，剂量可以因此而变化，以获得相同的效果。表8显示对于各种糖皮质激素和施用途径，在效力方面的等效性。临床给药中的等效效力是熟知的。有关等效类固醇给药(以非时间治疗方式)的信息可以参见1999年3月的British National Formulary(BNF)37。
Figure BDA0003183097650001451
因此，在一些实施方案中，类固醇是以以下等效剂量来施用：从或从约1.0mg至或至约20mg地塞米松/天，如从或从约1.0mg至或至约15mg地塞米松/天、从或从约1.0mg至或至约10mg地塞米松/天、从或从约2.0mg至或至约8mg地塞米松/天或者从或从约2.0mg至或至约6.0mg地塞米松/天，每个都包含端值。在一些情况下，类固醇是以为或约4mg或者为或约8mg地塞米松/天的等效剂量来施用。
在一些实施方案中，如果在用托珠单抗治疗后持续发热，则施用类固醇。例如，在一些实施方案中，在继续发热的情况下，以最多每6-12小时5-10mg的剂量口服或静脉内施用地塞米松。在一些实施方案中，托珠单抗与补氧同时施用或在补氧后施用。
B.小神经胶质细胞抑制剂
在一些实施方案中，组合疗法中的抑制剂是小神经胶质细胞活性的抑制剂。在一些实施方案中，抑制剂的施用调节小神经胶质细胞的活性。在一些实施方案中，抑制剂是抑制小神经胶质细胞中的信号传导通路的活性的拮抗剂。在一些实施方案中，小神经胶质细胞抑制剂影响小神经胶质细胞的稳态、存活和/或增殖。在一些实施方案中，抑制剂靶向CSF1R信号传导通路。在一些实施方案中，抑制剂是CSF1R的抑制剂。在一些实施方案中，抑制剂是小分子。在一些情况下，抑制剂是抗体。
在一些方面，施用抑制剂产生选自以下的一种或多种作用：小神经胶质细胞体内平衡和生存力的改变、小神经胶质细胞增殖的减少或阻断、小神经胶质细胞的减少或消除、小神经胶质细胞激活的降低、来自小神经胶质细胞的一氧化氮产生的减少、小神经胶质细胞中一氧化氮合酶活性的降低、或受小神经胶质细胞激活影响的对运动神经元的保护。在一些实施方案中，与即将开始施用抑制剂之前相比，所述药剂改变CSF1R抑制的血清或血液生物标记的水平，或者降低尿液胶原蛋白1型交联N-端肽(NTX)的水平。在一些实施方案中，施用所述药剂短暂抑制小神经胶质细胞活性的活性，和/或其中对小神经胶质细胞活性的抑制不是永久性的。在一些实施方案中，施用所述药剂短暂抑制CSF1R的活性，和/或其中对CSF1R活性的抑制不是永久性的。
在一些实施方案中，降低小神经胶质细胞活性的药剂是小分子、肽、蛋白质、抗体或其抗原结合片段、抗体模拟物、适体或核酸分子。在一些实施方案中，所述方法涉及施用小神经胶质细胞活性的抑制剂。在一些实施方案中，所述药剂是抑制小神经胶质细胞中信号传导通路的活性的拮抗剂。在一些实施方案中，降低小神经胶质细胞活性的药剂影响小神经胶质细胞的体内平衡、存活和/或增殖。
在一些实施方案中，降低小神经胶质细胞激活的药剂选自抗炎剂、NADPH氧化酶(NOX2)的抑制剂、钙通道阻断剂、钠通道阻断剂，抑制GM-CSF，抑制CSF1R，特异性地结合CSF-1，特异性地结合IL-34，抑制核因子κB(NF-κB)的激活，激活CB2受体和/或是CB2激动剂、磷酸二酯酶抑制剂，抑制微小RNA-155(miR-155)，上调微小RNA-124(miR-124)，抑制小神经胶质细胞中的一氧化氮产生，抑制一氧化氮合酶，或激活转录因子NRF2(也称为核因子(源自红系细胞的2)样2或NFE2L2)。
在一些实施方案中，降低小神经胶质细胞活性的药剂靶向CSF1(也称为巨噬细胞集落刺激因子MCSF)。在一些实施方案中，降低小神经胶质细胞活性的药剂影响MCSF刺激的M-CSF受体的磷酸化(Pryer等人Proc Am Assoc Cancer Res,AACR Abstract nr DDT02-2(2009))。在一些情况下，降低小神经胶质细胞活性的药剂是MCS110(国际专利申请公开号WO 2014001802；临床试验研究记录号：A1 NCT00757757；NCT02807844；NCT02435680；NCT01643850)。
在一些实施方案中，降低小神经胶质细胞活性的药剂是靶向CSF1通路的小分子。在一些实施方案中，所述药剂是结合CSF1R的小分子。在一些实施方案中，所述药剂是通过与ATP竞争结合CSF1R激酶而抑制CSF1R激酶活性的小分子。在一些实施方案中，所述药剂是抑制CFS1R受体激活的小分子。在一些情况下，CSF-1配体与CSF1R的结合被抑制。在一些实施方案中，降低小神经胶质细胞活性的药剂是美国专利申请公开号US20160032248中所述的任何抑制剂。
在一些实施方案中，所述药剂是选自PLX-3397、PLX7486、JNJ-40346527、JNJ28312141、ARRY-382、PLX73086(AC-708)、DCC-3014、AZD6495、GW2580、Ki20227、BLZ945、PLX647、PLX5622的小分子抑制剂。在一些实施方案中，所述药剂是以下文献中所述的任何抑制剂：Conway等人,Proc Natl Acad Sci U S A,102(44):16078-83(2005)；Dagher等人,Journal of Neuroinflammation,12:139(2015)；Ohno等人,Mol Cancer Ther.5(11):2634-43(2006)；von Tresckow等人,.Clin Cancer Res.,21(8)(2015)；Manthey等人MolCancer Ther.(8(11):3151-61(2009)；Pyonteck等人,Nat Med.19(10):1264-1272(2013)；Haegel等人,Cancer Res AACR Abstract nr 288(2015)；Smith等人,Cancer Res AACRAbstract nr 4889(2016)；临床试验研究记录号：NCT01525602；NCT02734433；NCT02777710；NCT01804530；NCT01597739；NCT01572519；NCT01054014；NCT01316822；NCT02880371；NCT02673736；国际专利申请公开号WO 2008063888A2、WO 2006009755A2、美国专利申请公开号US20110044998、US 2014/0065141和US 2015/0119267。
在一些实施方案中，降低小神经胶质细胞活性的药剂是4-((2-(((1R,2R)-2-羟基环己基)氨基)苯并[d]噻唑-6-基)氧基)-N-甲基吡啶甲酰胺(BLZ945)或其药学上可接受的盐或其衍生物。在一些实施方案中，所述药剂是以下化合物：
Figure BDA0003183097650001481
其中R1是烷基吡唑或烷基甲酰胺，并且R2是羟基环烷基
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，降低小神经胶质细胞活性的药剂是5-((5-氯-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)甲基)-N-((6-(三氟甲基)吡啶-3-基)甲基)吡啶-2-胺,N-[5-[(5-氯-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)甲基]-2-吡啶基]-6-(三氟甲基)-3-吡啶甲胺)(PLX 3397)或其药学上可接受的盐或其衍生物。在一些实施方案中，所述药剂是5-(1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基甲基)-N-[[4-(三氟甲基)苯基]甲基]-2-氨基吡啶二盐酸盐(PLX647)或其药学上可接受的盐或其衍生物。在一些实施方案中，降低小神经胶质细胞活性的药剂是以下化合物：
Figure BDA0003183097650001482
或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，降低小神经胶质细胞活性的药剂是以下化合物：
Figure BDA0003183097650001483
或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，所述药剂是美国专利号US7893075中所述的任何抑制剂。
在一些实施方案中，降低小神经胶质细胞活性的药剂是4-氰基-N-[2-(1-环己烯-1-基)-4-[1-[(二甲基氨基)乙酰基]-4-哌啶基]苯基]-1H-咪唑-2-甲酰胺单盐酸盐(JNJ28312141)或其药学上可接受的盐或其衍生物。在一些实施方案中，所述药剂是以下化合物：
Figure BDA0003183097650001491
或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，所述药剂是美国专利号US 7645755中描述的任何抑制剂。
在一些实施方案中，降低小神经胶质细胞活性的药剂是1H-咪唑-2-甲酰胺,5-氰基-N-(2-(4,4-二甲基-1-环己烯-1-基)-6-(四氢-2,2,6,6-四甲基-2H-吡喃-4-基)-3-吡啶基)-,4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸N-(2-(4,4-二甲基环己-1-烯基)-6-(2,2,6,6-四甲基四氢吡喃-4-基)吡啶-3-基)酰胺,4-氰基-N-(2-(4,4-二甲基环己-1-烯-1-基)-6-(2,2,6,6-四甲基-四氢-2H-吡喃-4-基)吡啶-3-基)-1H-咪唑-2-甲酰胺(JNJ-40346527)或其药学上可接受的盐或其衍生物。在一些实施方案中，所述药剂是以下化合物：
Figure BDA0003183097650001492
或其药学上可接受的盐。
在另一个实施方案中，降低小神经胶质细胞活性的药剂是5-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)嘧啶-2,4-二胺(GW2580)或其药学上可接受的盐或其衍生物。在一些实施方案中，所述药剂是以下化合物：
Figure BDA0003183097650001493
或其药学上可接受的盐(国际专利申请公开号WO 2009099553)。
在一些实施方案中，降低小神经胶质细胞活性的药剂是4-(2,4-二氟苯胺基)-7-乙氧基-6-(4-甲基哌嗪-1-基)喹啉-3-甲酰胺(AZD6495)或其药学上可接受的盐或其衍生物。在一些实施方案中，所述药剂是以下化合物：
Figure BDA0003183097650001501
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，降低小神经胶质细胞活性的药剂是N-{4-[(6,7-二甲氧基-4-喹啉基)氧基]-2-甲氧基苯基}-N0-[1-(1,3-噻唑-2-基)乙基]脲(Ki20227)或其药学上可接受的盐或其衍生物。在一些实施方案中，所述药剂是以下化合物：
Figure BDA0003183097650001502
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，降低小神经胶质细胞激活的药剂是靶向CSF1通路的抗体。在一些实施方案中，所述药剂是结合CSF1R的抗体。在一些实施方案中，抗CSF1R抗体阻断CSF1R二聚化。在一些实施方案中，抗CSF1R抗体阻断由结构域D4和D5形成的CSF1R二聚化界面(Ries等人Cancer Cell 25(6):846-59(2014))。在一些情况下，所述药剂选自艾马珠单抗(RG7155；RO5509554)、卡比拉珠单抗(Cabiralizumab)(FPA-008)、LY-3022855(IMC-CS4)、AMG-820、TG-3003、MCS110、H27K15、12-2D6、2-4A5(Rovida和Sbarba,J Clin CellImmunol.6:6(2015)；临床试验研究记录号：NCT02760797；NCT01494688；NCT02323191；NCT01962337；NCT02471716；NCT02526017；NCT01346358；NCT02265536；NCT01444404；NCT02713529；NCT00757757；NCT02807844；NCT02435680；NCT01643850)。
在一些实施方案中，降低小神经胶质细胞激活的药剂是四环素抗生素。例如，所述药剂影响小神经角质细胞中的IL-1b、IL-6、TNF-α或iNOS浓度(
Figure BDA0003183097650001511
等人PNAS 95(26):15769-15774(1998)；临床试验研究记录号：NCT01120899)。在一些实施方案中，所述药剂是阿片样物质拮抗剂(Younger等人Pain Med.10(4):663-672(2009))。在一些实施方案中，所述药剂降低谷氨酸能神经传递(美国专利号5,527,814)。在一些实施方案中，所述药剂调节NFkB信号传导(Valera等人J.Neuroinflammation 12:93(2015)；临床试验研究记录号：NCT00231140)。在一些实施方案中，所述药剂靶向大麻素受体(Ramírez等人J.Neurosci 25(8):1904-13(2005))。在一些实施方案中，所述药剂选自米诺环素、纳洛酮、利鲁唑、来那度胺和大麻素(任选地WIN55或212-2)。
据信在一些情况下，来自小神经胶质细胞的一氧化氮产生导致或增加神经毒性。在一些实施方案中，所述药剂调节或抑制来自小神经胶质细胞的一氧化氮产生。在一些实施方案中，所述药剂抑制一氧化氮合酶(NOS)。在一些实施方案中，NOS抑制剂是罗诺蝶呤(Ronopterin)(VAS-203)，也称为4-氨基-四氢生物蝶呤(4-ABH4)。在一些实施方案中，NOS抑制剂是辛尼司他(cindunistat)、A-84643、ONO-1714、L-NOARG、NCX-456、VAS-2381、GW-273629、NXN-462、CKD-712、KD-7040或胍基乙基二硫化物。在一些实施方案中，所述药剂是
Figure BDA0003183097650001512
等人,Cell Stem Cell.2012年11月2日；11(5):620-32中所述的任何抑制剂。
在一些实施方案中，所述药剂阻断T细胞运输，如向中枢神经系统的运输。在一些实施方案中，阻断T细胞运输可以减少或阻止免疫细胞穿过血管壁进入中枢神经系统，包括穿过血脑屏障。在一些情况下，激活的抗原特异性T细胞在CNS中重新激活后产生促炎性细胞因子，包括IFN-γ和TNF，从而导致常驻细胞(如小神经胶质细胞和星形胶质细胞)激活。参见
Figure BDA0003183097650001514
等人,Neurology.2009年6月2日；72(22):1922-1930。因此，在一些实施方案中，例如通过阻断运输和/或抑制此类细胞穿过血脑屏障的能力将激活的T细胞与小神经胶质细胞隔离可以减少或消除小神经胶质细胞激活。在一些实施方案中，所述药剂抑制免疫细胞(包括T细胞)上的粘附分子。在一些实施方案中，所述药剂抑制整合素。在一些实施方案中，所述整合素是α-4整合素。在一些实施方案中，所述药剂是那他珠单抗
Figure BDA0003183097650001513
在一些实施方案中，所述药剂调节细胞表面受体。在一些实施方案中，所述药剂调节鞘氨醇-1-磷酸(S1P)受体，如S1PR1或S1PR5。在一些实施方案中，所述药剂导致细胞受体(如鞘氨醇-1-磷酸(S1P)受体，如S1PR1或S1PR5)的内化。在一些实施方案中，所述药剂是芬戈莫德
Figure BDA0003183097650001521
或奥扎莫德(ozanimod)(RPC-1063)。
据信转录因子NRF2例如通过打开在其启动子区中含有顺式作用元件的基因来调节抗氧化反应。这种元件的例子包括抗氧化反应元件(ARE)。在一些实施方案中，所述药剂激活NRF2。在一些实施方案中，激活小神经胶质细胞中的NRF2降低小神经胶质细胞对IFN和LPS的反应性。在一些实施方案中，激活NRF2抑制、减缓或减少脱髓鞘、轴突丢失、神经元死亡和/或少突胶质细胞死亡。在一些实施方案中，所述药剂上调NRF2调节的细胞的细胞保护通路。在一些实施方案中，激活NRF2的药剂是富马酸二甲酯
Figure BDA0003183097650001522
在一些实施方案中，所述药剂是美国专利号8,399,514中描述的任何抑制剂。在一些实施方案中，所述药剂是
Figure BDA0003183097650001523
等人,Cell Stem Cell.2012年11月2日；11(5):620-32中所述的任何抑制剂。
在一些实施方案中，降低小神经胶质细胞激活的药剂是(4S,4aS,5aR,12aS)-4,7-双(二甲基氨基)-3,10,12,12a-四羟基-1,11-二氧代-1,4,4a,5,5a,6,11,12a-八氢并四苯-2-甲酰胺(米诺环素)或其药学上可接受的盐或其衍生物。在一些实施方案中，所述药剂是美国专利申请公开号US20100190755中描述的任何化合物。在一些实施方案中，所述药剂是以下化合物：
Figure BDA0003183097650001524
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，降低小神经胶质细胞激活的药剂是3-(7-氨基-3-氧代-1H-异吲哚-2-基)哌啶-2,6-二酮(来那度胺)或其药学上可接受的盐或其衍生物。在一些实施方案中，所述药剂是以下化合物：
Figure BDA0003183097650001525
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，降低小神经胶质细胞激活的药剂是(4R,4aS,7aR,12bS)-4a,9-二羟基-3-丙-2-烯基-2,4,5,6,7a,13-六氢-1H-4,12-亚甲基苯并呋喃并[3,2-e]异喹啉-7-酮(纳洛酮)或其药学上可接受的盐或其衍生物。在一些实施方案中，所述药剂是美国专利号US8247425中描述的任何化合物。在一些实施方案中，所述药剂是以下化合物：
Figure BDA0003183097650001531
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，降低小神经胶质细胞激活的药剂是2-氨基-6-(三氟甲氧基)苯并噻唑、6-(三氟甲氧基)苯并[d]噻唑-2-胺或6-(三氟甲氧基)-1,3-苯并噻唑-2-胺(利鲁唑)或其药学上可接受的盐或其衍生物，如美国专利号US5527814中所述。在一些实施方案中，所述药剂是以下化合物：
Figure BDA0003183097650001532
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，降低小神经胶质细胞激活的药剂是小神经胶质细胞中信号传导通路的调节剂。在一些情况下，所述药剂降低小神经胶质细胞信号传导。在一些实施方案中，所述药剂是GM-CSF(CSF2)抑制剂。在其他实施方案中，降低小神经胶质细胞激活的药剂是离子通道阻断剂。在一些特定实施方案中，所述药剂是钙通道阻断剂。例如，在一些特定例子中，所述药剂是二氢吡啶钙通道阻断剂。在一些实施方案中，所述药剂是微小RNA抑制剂。例如，所述药剂靶向miR-155。在一些实施方案中，降低小神经胶质细胞激活的药剂选自MOR103、尼莫地平、IVIg和LNA-抗miR-155(Butoxsky等人Ann Neurol.,77(1):75-99(2015)；和Sanz等人,Br J Pharmacol.167(8):1702–1711(2012)；Winter等人,Ann Clinand Transl Neurol.2328-9503(2016)；临床试验研究记录号：NCT01517282、NCT00750867)。
在一些实施方案中，降低小神经胶质细胞激活的药剂是3-(2-甲氧基乙基)5-丙-2-基2,6-二甲基-4-(3-硝基苯基)-1,4-二氢吡啶-3,5-二甲酸酯(尼莫地平)或其药学上可接受的盐或其衍生物。在一些实施方案中，所述药剂是美国专利号US3799934中描述的任何抑制剂。在一些实施方案中，所述药剂是以下化合物：
Figure BDA0003183097650001541
或其药学上可接受的盐。
在一些情况下，将降低小神经胶质细胞激活的药剂以仅影响中枢神经系统和/或不影响肿瘤相关巨噬细胞的形式施用。在一些实施方案中，所述药剂促进小神经胶质细胞休眠，但不消除或减少小神经胶质细胞的数量。在一些实施方案中，所述方法涉及抑制特别是脑中的小神经胶质细胞活性，如Ponomarev等人,Nature Medicine,(1):64–70(2011)中所述。
降低小神经胶质细胞激活的示例性药剂和用于施用此类药剂的示例性给药方案陈述于下表9中。
Figure BDA0003183097650001542
Figure BDA0003183097650001551
C.其他药剂(例如，细胞因子靶向剂)
在一些实施方案中，治疗或改善免疫疗法和/或细胞疗法的毒性(如CRS或神经毒性)症状的药剂(例如，毒性靶向剂)是靶向细胞因子的药剂，例如，是细胞因子的拮抗剂或抑制剂，所述细胞因子如转化生长因子β(TGF-β)、白介素6(IL-6)、白介素10(IL-10)、IL-2、MIP1β(CCL4)、TNFα、IL-1、干扰素γ(IFN-γ)或单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)。在一些实施方案中，治疗或改善免疫疗法和/或细胞疗法的毒性(如CRS或神经毒性)症状的药剂是靶向细胞因子受体(例如，抑制细胞因子受体或者是细胞因子受体的拮抗剂)，所述细胞因子受体如IL-6受体(IL-6R)、IL-2受体(IL-2R/CD25)、MCP-1(CCL2)受体(CCR2或CCR4)、TGF-β受体(TGF-βI、II或III)、IFN-γ受体(IFNGR)、MIP1β受体(例如，CCR5)、TNFα受体(例如，TNFR1)、IL-1受体(IL1-Rα/IL-1Rβ)或IL-10受体(IL-10R)。
可以通过标准临床技术来确定治疗或改善免疫疗法和/或细胞疗法的毒性(如CRS或神经毒性)症状的所选择的药剂被施用以改善对免疫疗法和/或细胞疗法的毒性(如CRS或神经毒性)的症状或副作用的量。示例性不良事件包括但不限于丙氨酸氨基转移酶的增加、天冬氨酸氨基转移酶的增加、寒战、发热型嗜中性粒细胞减少症、头痛、低血压、左心室功能障碍、脑病、脑积水、癫痫和/或震颤。
在一些实施方案中，所述药剂以如下剂量来施用：从或从约30mg至或至约5000mg，如从或从约50mg至或至约1000mg、从或从约50mg至或至约500mg、从或从约50mg至或至约200mg、从或从约50mg至或至约100mg、从或从约100mg至或至约1000mg、从或从约100mg至或至约500mg、从或从约100mg至或至约200mg、从或从约200mg至或至约1000mg、从或从约200mg至或至约500mg或者500mg至或至约1000mg。
在一些实施方案中，所述药剂以如下量来施用：从或从约0.5mg/kg至或至约100mg/kg，如从或从约1mg/kg至或至约50mg/kg、从或从约1mg/kg至或至约25mg/kg、从或从约1mg/kg至或至约10mg/kg、从或从约1mg/kg至或至约5mg/kg、从或从约5mg/kg至或至约100mg/kg、从或从约5mg/kg至或至约50mg/kg、从或从约5mg/kg至或至约25mg/kg、从或从约5mg/kg至或至约10mg/kg、从或从约10mg/kg至或至约100mg/kg、从或从约10mg/kg至或至约50mg/kg、从或从约10mg/kg至或至约25mg/kg、从或从约25mg/kg至或至约100mg/kg、从或从约25mg/kg至或至约50mg/kg或者从或从约50mg/kg至或至约100mg/kg。在一些实施方案中，所述药剂以如下量来施用：从或从约1mg/kg至或至约10mg/kg、从或从约2mg/kg至或至约8mg/kg、从或从约2mg/kg至或至约6mg/kg、从或从约2mg/kg至或至约4mg/kg或6mg/kg至或至约8mg/kg，每个都包含端值。在一些方面，所述药剂以如下量来施用：至少或至少约或约1mg/kg、2mg/kg、4mg/kg、6mg/kg、8mg/kg、10mg/kg或更多。在一些实施方案中，所述药剂以4mg/kg或8mg/kg的剂量来施用。
在一些实施方案中，所述药剂是通过注射来施用，例如静脉内或皮下注射、眼内注射、眼周注射、视网膜下注射、玻璃体内注射、经中隔注射、巩膜下注射、脉络膜内注射、前房注射、结膜下注射(subconjectval injection)、结膜下注射(subconjuntivalinjection)、眼球筋膜囊下(sub-Tenon)注射、眼球后注射、眼球周注射或后近巩膜(posterior juxtascleral)递送。在一些实施方案中，它们通过肠胃外、肺内和鼻内以及(如果局部治疗需要)病灶内施用来施用。肠胃外输注包括肌肉内、静脉内、动脉内、腹膜内或皮下施用。
在一些实施方案中，所述药剂的量以约或大约每天两次、每天、每隔一天、每周三次、每周、每隔一周或每个月一次来施用。
在一些实施方案中，所述药剂是作为组合物或配制品(例如如下文所述的药物组合物或配制品)的一部分施用。因此，在一些情况下，如下所述施用包含所述药剂的组合物。在其他方面，所述药剂是单独施用，并且例如关于组合物和配制品，可以通过任何已知的可接受的施用途径或通过本文所述的途径来施用。
在一些实施方案中，治疗或改善免疫疗法和/或细胞疗法的毒性(如CRS或神经毒性)的症状的药剂是抗体或抗原结合片段。在一些实施方案中，所述药剂是托珠单抗、司妥昔单抗、萨瑞鲁单抗、奥洛珠单抗(CDP6038)、艾西莫单抗、ALD518/BMS-945429、司鲁库单抗(CNTO 136)、CPSI-2634、ARGX-109、FE301或FM101。
在一些实施方案中，所述药剂是IL-6或IL-6受体(IL-6R)的拮抗剂或抑制剂。在一些方面，所述药剂是中和IL-6活性的抗体，例如结合至IL-6或IL-6R的抗体或抗原结合片段。例如，在一些实施方案中，所述药剂是或包含托西利珠单抗(阿特利珠单抗(atlizumab))或赛利珠单抗、抗IL-6R抗体。在一些实施方案中，所述药剂是美国专利号8,562,991中描述的抗IL-6R抗体。在一些情况下，靶向IL-6的药剂是抗IL-6抗体，例如司妥昔单抗、艾西莫单抗、ALD518/BMS-945429、司鲁库单抗(CNTO 136)、CPSI-2634、ARGX-109、FE301、FM101或奥洛珠单抗(CDP6038)。在一些方面，所述药剂可以通过抑制配体-受体相互作用来中和IL-6活性。这种通用型方法的可行性已经用针对白介素-1的天然存在的受体拮抗剂来证明。参见Harmurn,C.H.等人,Nature(1990)343:336-340。在一些方面，IL-6/IL-6R拮抗剂或抑制剂是IL-6突变蛋白，如美国专利号5591827中描述的IL-6突变蛋白。在一些实施方案中，作为IL-6/IL-6R的拮抗剂或抑制剂的药剂是小分子、蛋白质或肽或核酸。
在一些实施方案中，所述药剂是托珠单抗。在一些实施方案中，托珠单抗是根据所提供的方法作为早期干预来施用，和/或与所提供的制品或组合物一起施用，剂量是从或从约1mg/kg至12mg/kg，如为或约4mg/kg、8mg/kg或10mg/kg。在一些实施方案中，托珠单抗是通过静脉内输注来施用。在一些实施方案中，施用托珠单抗用于持续10小时的高于39℃的持续发热，所述发热对于对乙酰氨基酚无反应。在一些实施方案中，如果在初始剂量48小时后症状复发，则提供托珠单抗的第二次施用。
在一些实施方案中，所述药剂是TGF-β或TGF-β受体(例如，TGF-β受体I、II或III)的激动剂或刺激剂。在一些方面，所述药剂是增加TGF-β活性的抗体，如与TGF-β或其一种受体结合的抗体或抗原结合片段。在一些实施方案中，作为TGF-β和/或其受体的激动剂或刺激剂的药剂是小分子、蛋白质或肽或核酸。
在一些实施方案中，所述药剂是MCP-1(CCL2)或MCP-1受体(例如，MCP-1受体CCR2或CCR4)的拮抗剂或抑制剂。在一些方面，所述药剂是中和MCP-1活性的抗体，如结合MCP-1或其一种受体(CCR2或CCR4)的抗体或抗原结合片段。在一些实施方案中，MCP-1拮抗剂或抑制剂是以下文献中所述的任一种：Gong等人J Exp Med.1997年7月7日；186(1):131-137；或Shahrara等人J Immunol 2008；180:3447-3456。在一些实施方案中，作为MCP-1和/或其受体(CCR2或CCR4)的拮抗剂或抑制剂的药剂是小分子、蛋白质或肽、或核酸。
在一些实施方案中，所述药剂是IFN-γ或IFN-γ受体(IFNGR)的拮抗剂或抑制剂。在一些方面，所述药剂是中和IFN-γ活性的抗体，如结合至IFN-γ或其受体(IFNGR)的抗体或抗原结合片段。在一些方面，IFN-γ中和抗体是以下文献中所述的任一种：Dobber等人Cell Immunol.1995年2月；160(2):185-92；或Ozmen等人J Immunol.1993年4月1日；150(7):2698-705。在一些实施方案中，作为IFN-γ/IFNGR的拮抗剂或抑制剂的药剂是小分子、蛋白质或肽或核酸。
在一些实施方案中，所述药剂是IL-10或IL-10受体(IL-10R)的拮抗剂或抑制剂。在一些方面，所述药剂是中和IL-10活性的抗体，例如结合至IL-10或IL-10R的抗体或抗原结合片段。在一些方面，IL-10中和抗体是描述于以下文献中的任一种：Dobber等人CellImmunol.1995年2月；160(2):185-92；或Hunter等人J Immunol.2005年6月1日；174(11):7368-75。在一些实施方案中，作为IL-10/IL-10R的拮抗剂或抑制剂的药剂是小分子、蛋白质或肽或核酸。
在一些实施方案中，所述药剂是IL-1或IL-1受体(IL-1R)的拮抗剂或抑制剂。在一些方面，所述药剂是IL-1受体拮抗剂，其是IL-1R的修饰形式，如阿那白滞素(参见例如，Fleischmann等人,(2006)Annals of the rheumatic diseases.65(8):1006–12)。在一些方面，所述药剂是中和IL-1活性的抗体，如与IL-1或IL-1R结合的抗体或抗原结合片段，如卡那单抗(canakinumab)(还参见EP 2277543)。在一些实施方案中，作为IL-1/IL-1R的拮抗剂或抑制剂的药剂是小分子、蛋白质或肽或核酸。
在一些实施方案中，所述药剂是肿瘤坏死因子(TNF)或肿瘤坏死因子受体(TNFR)的拮抗剂或抑制剂。在一些方面，所述药剂是阻断TNF活性的抗体，如结合至TNF(如TNFα)或其受体(TNFR，例如TNFRp55或TNFRp75)的抗体或抗原结合片段。在一些方面，所述药剂选自英利昔单抗、阿达木单抗、培赛利珠单抗(certolizumab pegol)、戈利木单抗和依那西普。在一些实施方案中，作为TNF/TNFR的拮抗剂或抑制剂的药剂是小分子、蛋白质或肽或核酸。在一些实施方案中，所述药剂是影响TNF的小分子，如来那度胺(参见例如，Muller等人(1999)Bioorganic&Medicinal Chemistry Letters.9(11):1625)。
在一些实施方案中，所述药剂是通过Janus激酶(JAK)和两个信号转导子和转录激活子(STAT)信号传导级联进行的信号传导的拮抗剂或抑制剂。JAK/STAT蛋白是细胞因子和细胞因子受体信号传导的常见组分。在一些实施方案中，作为JAK/STAT的拮抗剂或抑制剂的药剂如鲁索替尼(ruxolitinib)(参见例如，Mesa等人(2012)Nature Reviews DrugDiscovery.11(2):103-104)、托法替尼(tofacitinib)(也称为Xeljanz、Jakvinustasocitinib和CP-690550)、巴瑞替尼(Baricitinib)(也称为LY-3009104、INCB-28050)、非戈替尼(Filgotinib)(G-146034、GLPG-0634)、甘多替尼(Gandotinib)(LY-2784544)、来他替尼(Lestaurtinib)(CEP-701)、莫美罗替尼(Momelotinib)(GS-0387、CYT-387)、帕克替尼(Pacritinib)(SB1518)和乌帕替尼(Upadacitinib)(ABT-494)。在一些实施方案中，所述药剂是小分子、蛋白质或肽或核酸。
在一些实施方案中，所述药剂是激酶抑制剂。在一些实施方案中，所述药剂是布鲁顿酪氨酸激酶(BTK)的抑制剂。在一些实施方案中，所述抑制剂是或包含依鲁替尼或阿卡卢替尼(参见例如，Barrett等人,ASH 58th Annual Meeting San Diego,CA 2016年12月3-6日,摘要654；Ruella等人,ASH 58th Annual Meeting San Diego,CA 2016年12月3-6日,摘要2159)。在一些实施方案中，所述药剂是如美国专利号7,514,444；8,008,309；8,476,284；8,497,277；8,697,711；8,703,780；8,735,403；8,754,090；8,754,091；8.957,079；8,999,999；9,125,889；9,181,257；或9,296,753中所述的抑制剂。
在一些实施方案中，可以使用装置(如使用血液或血浆过滤的吸收性树脂技术)降低细胞因子的水平。在一些实施方案中，用于降低细胞因子水平的所述装置是物理细胞因子吸收器，如体外细胞因子吸收器。在一些实施方案中，物理细胞因子吸收器可以用于以离体的体外方式从血流消除细胞因子。在一些实施方案中，所述药剂是多孔聚合物。在一些实施方案中，所述药剂是CytoSorb(参见例如，Basu等人Indian J Crit Care Med.(2014)18(12):822-824)。
III.由细胞表达的重组抗原受体
在一些实施方案中，用于所提供的方法中或与所提供的方法结合施用的细胞含有或被工程化以含有工程化受体，例如工程化抗原受体(如嵌合抗原受体(CAR))或T细胞受体(TCR)。还提供了此类细胞的群体、含有此类细胞和/或富集此类细胞的组合物，如其中富集或选择某种类型的细胞，如T细胞或CD8+或CD4+细胞。所述组合物包括用于施用(如用于过继细胞疗法)的药物组合物和配制品。还提供用于根据所提供方法和/或用所提供制品或组合物将所述细胞和组合物施用至受试者(例如，患者)的治疗方法。
在一些实施方案中，所述细胞包括经由基因工程引入的一种或多种核酸，从而表达此类核酸的重组或基因工程化产物。在一些实施方案中，通过以下方式完成基因转移：首先刺激细胞，如通过将所述细胞与诱导应答(如增殖、存活和/或激活，例如如通过细胞因子或激活标记的表达所测量的)的刺激物组合，然后转导被激活的细胞，并且在培养中扩增至足以用于临床应用的数量。
所述细胞通常表达重组受体，如抗原受体(包括功能性非TCR抗原受体，例如嵌合抗原受体(CAR))和其他抗原结合受体(如转基因T细胞受体(TCR))。受体还包括其他嵌合受体。
A.嵌合抗原受体(CAR)
在所提供的方法和用途的一些实施方案中，嵌合受体(如嵌合抗原受体)含有一个或多个结构域，所述一个或多个结构域将提供针对所期望抗原(例如肿瘤抗原)的特异性的配体结合结构域(例如抗体或抗体片段)与细胞内信号传导结构域组合。在一些实施方案中，所述细胞内信号传导结构域是刺激或激活细胞内结构域部分，如T细胞刺激或激活结构域，从而提供初级激活信号或初级信号。在一些实施方案中，所述细胞内信号传导结构域含有或另外含有共刺激信号传导结构域以促进效应子功能。在一些实施方案中，嵌合受体在被基因工程化至免疫细胞中时，可以调节T细胞活性，并且在一些情况下可以调节T细胞分化或稳态，由此产生在体内具有改善的寿命、存活和/或持久性的基因工程化细胞，如用于过继细胞治疗方法。
示例性抗原受体(包括CAR)以及将此类受体工程化并引入细胞中的方法包括例如以下文献中所述的那些：国际专利申请公开号WO 200014257、WO 2013126726、WO 2012/129514、WO 2014031687、WO 2013/166321、WO 2013/071154、WO 2013/123061；美国专利申请公开号US 2002131960、US 2013287748、US 20130149337；美国专利号：6,451,995、7,446,190、8,252,592、8,339,645、8,398,282、7,446,179、6,410,319、7,070,995、7,265,209、7,354,762、7,446,191、8,324,353和8,479,118；以及欧洲专利申请号EP2537416；和/或以下文献中所述的那些：Sadelain等人,Cancer Discov.2013年4月；3(4):388-398；Davila等人(2013)PLoS ONE 8(4):e61338；Turtle等人,Curr.Opin.Immunol.,2012年10月；24(5):633-39；Wu等人,Cancer,2012年3月18日(2):160-75。在一些方面，抗原受体包括如美国专利号7,446,190中描述的CAR，以及国际专利申请公开号WO/2014055668A1中描述的那些。CAR的例子包括如前述出版物中任一项中披露的CAR，所述出版物如WO2014031687、US 8,339,645、US 7,446,179、US 2013/0149337、美国专利号7,446,190、美国专利号8,389,282；Kochenderfer等人,2013,Nature Reviews Clinical Oncology,10,267-276(2013)；Wang等人(2012)J.Immunother.35(9):689-701；和Brentjens等人,SciTransl Med.2013 5(177)。还参见WO 2014031687、US 8,339,645、US 7,446,179、US 2013/0149337、美国专利号7,446,190和美国专利号8,389,282。
嵌合受体(如CAR)通常包括细胞外抗原结合结构域，如抗体分子的一部分，通常是抗体的可变重(VH)链区和/或可变轻(VL)链区，例如，scFv抗体片段。
在一些实施方案中，受体所靶向的抗原是多肽。在一些实施方案中，其是碳水化合物或其他分子。在一些实施方案中，与正常或非靶标细胞或组织相比，抗原在疾病或病症的细胞(例如，肿瘤或病原细胞)上选择性表达或过表达。在其他实施方案中，抗原在正常细胞上表达和/或在工程化细胞上表达。
在一些实施方案中，CAR被构建为具有对特定抗原(或标记或配体)的特异性，所述特定抗原例如为在过继疗法靶向的特定细胞类型中表达的抗原(例如癌症标记)和/或旨在诱导衰减应答的抗原(例如在正常或未患病细胞类型上表达的抗原)。因此，CAR通常在其细胞外部分中包括一种或多种抗原结合分子，例如一种或多种抗原结合片段、结构域或部分，或一种或多种抗体可变结构域，和/或抗体分子。在一些实施方案中，CAR包括抗体分子的一个或多个抗原结合部分，如源自单克隆抗体(mAb)的可变重链(VH)和可变轻链(VL)的单链抗体片段(scFv)。
在一些实施方案中，抗体或其抗原结合部分作为重组受体(如抗原受体)的一部分在细胞上表达。抗原受体包括功能性非TCR抗原受体，如嵌合抗原受体(CAR)。通常，含有针对肽-MHC复合物表现出TCR样特异性的抗体或抗原结合片段的CAR也可以称为TCR样CAR。在一些实施方案中，在一些方面，对TCR样CAR的MHC-肽复合物具有特异性的细胞外抗原结合结构域通过接头和/或一个或多个跨膜结构域与一个或多个细胞内信号传导组分连接。在一些实施方案中，此类分子通常可以模拟或接近通过天然抗原受体(如TCR)的信号，并且任选地模拟或接近通过这种受体与共刺激受体的组合的信号。
在一些实施方案中，重组受体(如嵌合受体(例如CAR))包括与抗原(或配体)结合(如特异性结合)的配体结合结构域。嵌合受体靶向的抗原包括在经由过继细胞疗法靶向的疾病、病症或细胞类型的背景中表达的那些抗原。疾病和病症包括增殖性、肿瘤性和恶性疾病和障碍，包括癌症和肿瘤，包括血液癌、免疫系统癌症，如淋巴瘤、白血病和/或骨髓瘤，如B型白血病、T型白血病和髓系白血病、淋巴瘤和多发性骨髓瘤。
在一些实施方案中，抗原(或配体)是多肽。在一些实施方案中，其是碳水化合物或其他分子。在一些实施方案中，与正常或非靶向细胞或组织相比，抗原(或配体)在疾病或病症的细胞(例如，肿瘤或致病细胞)上选择性地表达或过表达。
在一些实施方案中，CAR含有特异性识别在细胞表面上表达的抗原(如完整抗原)的抗体或抗原结合片段(例如scFv)。
在一些实施方案中，受体靶向的抗原是或包含选自αvβ6整合素(avb6整合素)、B细胞成熟抗原(BCMA)、B7-H3、B7-H6、碳酸酐酶9(CA9，也称为CAIX或G250)、癌症-睾丸抗原、癌症/睾丸抗原1B(CTAG，也称为NY-ESO-1和LAGE-2)、癌胚抗原(CEA)、细胞周期蛋白、细胞周期蛋白A2、C-C基序趋化因子配体1(CCL-1)、CD19、CD20、CD22、CD23、CD24、CD30、CD33、CD38、CD44、CD44v6、CD44v7/8、CD123、CD133、CD138、CD171、硫酸软骨素蛋白聚糖4(CSPG4)、表皮生长因子蛋白(EGFR)、表皮生长因子受体III型突变体(EGFR vIII)、上皮糖蛋白2(EPG-2)、上皮糖蛋白40(EPG-40)、肝配蛋白B2、肝配蛋白受体A2(EPHa2)、雌激素受体、Fc受体样蛋白5(FCRL5；也称为Fc受体同源物5或FCRH5)、胎儿乙酰胆碱受体(胎儿AchR)、叶酸结合蛋白(FBP)、叶酸受体α、神经节苷脂GD2、O-乙酰化GD2(OGD2)、神经节苷脂GD3、糖蛋白100(gp100)、磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3(GPC3)、G蛋白偶联受体5D(GPRC5D)、Her2/neu(受体酪氨酸激酶erb-B2)、Her3(erb-B3)、Her4(erb-B4)、erbB二聚体、人高分子量黑色素瘤相关抗原(HMW-MAA)、乙型肝炎表面抗原、人白细胞抗原A1(HLA-A1)、人白细胞抗原A2(HLA-A2)、IL-22受体α(IL-22Rα)、IL-13受体α2(IL-13Rα2)、激酶插入结构域受体(kdr)、κ轻链、L1细胞粘附分子(L1-CAM)、L1-CAM的CE7表位、含有富亮氨酸重复序列的蛋白8家族成员A(LRRC8A)、Lewis Y、黑色素瘤相关抗原(MAGE)-A1、MAGE-A3、MAGE-A6、MAGE-A10、间皮素(MSLN)、c-Met、鼠类巨细胞病毒(CMV)、粘蛋白1(MUC1)、MUC16、自然杀伤细胞2族成员D(NKG2D)配体、黑色素A(MART-1)、神经细胞粘附分子(NCAM)、癌胚胎抗原、黑色素瘤优先表达抗原(PRAME)、孕酮受体、前列腺特异性抗原、前列腺干细胞抗原(PSCA)、前列腺特异性膜抗原(PSMA)、受体酪氨酸激酶样孤儿受体1(ROR1)、存活蛋白、滋养层糖蛋白(TPBG，也称为5T4)、肿瘤相关糖蛋白72(TAG72)、酪氨酸酶相关蛋白1(TRP1，也称为TYRP1或gp75)、酪氨酸酶相关蛋白2(TRP2，也称为多巴色素互变异构酶、多巴色素δ异构酶或DCT)、血管内皮生长因子受体(VEGFR)、血管内皮生长因子受体2(VEGFR2)、肾母细胞瘤1(WT-1)、病原体特有的或病原体表达的抗原、或与通用标签相关的抗原、和/或生物素化分子、和/或由HIV、HCV、HBV或其他病原体表达的分子。在一些实施方案中，受体靶向的抗原包括与B细胞恶性肿瘤相关的抗原，如许多已知B细胞标记中的任何一种。在一些实施方案中，受体靶向的抗原是或包括CD20、CD19、CD22、ROR1、CD45、CD21、CD5、CD33、Igκ、Igλ、CD79a、CD79b或CD30。在一些实施方案中，疾病或病症是B细胞恶性肿瘤，如大B细胞淋巴瘤(例如，DLBCL)，并且抗原是CD19。
在一些实施方案中，抗原是或包括病原体特异性抗原或病原体表达的抗原。在一些实施方案中，抗原是病毒抗原(例如来自HIV、HCV、HBV等的病毒抗原)、细菌抗原和/或寄生虫抗原。
提及“主要组织相容性复合物”(MHC)是指含有多态性肽结合位点或结合沟的蛋白质，通常是糖蛋白，在一些情况下，所述蛋白质可以与多肽的肽抗原(包括由细胞机器加工的肽抗原)复合。在一些情况下，MHC分子可以在细胞表面上展示或表达，包括作为与肽的复合物，即MHC-肽复合物，用于呈递具有T细胞上的抗原受体(如TCR或TCR样抗体)可识别的构象的抗原。通常，MHC I类分子是具有跨膜α链(在一些情况下具有三个α结构域)和非共价缔合的β2微球蛋白的异二聚体。通常，MHC II类分子由两种跨膜糖蛋白α和β组成，两者通常都跨越膜。MHC分子可以包括MHC的有效部分，其含有抗原结合位点或用于结合肽的位点以及由适当抗原受体识别所必需的序列。在一些实施方案中，MHC I类分子将源自胞质溶胶的肽递送至细胞表面，其中MHC-肽复合物由T细胞(如通常是CD8+ T细胞，但是在一些情况下是CD4+ T细胞)识别。在一些实施方案中，MHC II类分子将源自囊泡系统的肽递送至细胞表面，其中所述肽通常被CD4+ T细胞识别。通常，MHC分子由一组连锁基因座编码，它们在小鼠中统称为H-2，并且在人中统称为人白细胞抗原(HLA)。因此，通常人MHC也可以称为人白细胞抗原(HLA)。
术语“MHC-肽复合物”或“肽-MHC复合物”或其变体是指肽抗原与MHC分子的复合物或缔合物，例如通常通过所述肽在MHC分子的结合沟或裂缝中的非共价相互作用来形成。在一些实施方案中，MHC-肽复合物在细胞表面上存在或展示。在一些实施方案中，MHC-肽复合物可以由抗原受体(如TCR、TCR样CAR或其抗原结合部分)特异性识别。
在一些实施方案中，多肽的肽(如肽抗原或表位)可以与MHC分子缔合，例如用于由抗原受体识别。通常，所述肽源自或基于更长生物分子(如多肽或蛋白质)的片段。在一些实施方案中，所述肽的长度通常为约8至约24个氨基酸。在一些实施方案中，对于MHC II类复合物中的识别，肽的长度为从或从约9至22个氨基酸。在一些实施方案中，对于MHC I类复合物中的识别，肽的长度为从或从约8至13个氨基酸。在一些实施方案中，在识别MHC分子(如MHC-肽复合物)的背景中的肽后，抗原受体(如TCR或TCR样CAR)产生或触发激活信号至T细胞，从而诱导T细胞应答，如T细胞增殖、细胞因子产生、细胞毒性T细胞应答或其他应答。
在一些实施方案中，TCR样抗体或抗原结合部分是已知的或可通过已知方法产生(参见例如，美国公开申请号US 2002/0150914；US 2003/0223994；US 2004/0191260；US2006/0034850；US 2007/00992530；US 20090226474；US 20090304679；和国际PCT公开号WO03/068201)。
在一些实施方案中，与MHC-肽复合物特异性结合的抗体或其抗原结合部分可以通过用有效量的含有特定MHC-肽复合物的免疫原对宿主进行免疫来产生。在一些情况下，MHC-肽复合物的肽是能够与MHC结合的抗原的表位，所述抗原是例如肿瘤抗原，例如通用肿瘤抗原、骨髓瘤抗原或如下文所述的其他抗原。在一些实施方案中，然后向宿主施用有效量的免疫原以用于引发免疫应答，其中免疫原保持其三维形式，持续足以引发针对所述肽在MHC分子的结合沟中的三维呈递的免疫应答的时间段。然后测定从宿主中收集的血清以确定是否产生了识别MHC分子结合沟中的肽的三维呈递的所需抗体。在一些实施方案中，可以评估所产生的抗体以确认所述抗体可以区分MHC-肽复合物与单独的MHC分子、单独的目的肽以及MHC与无关肽的复合物。然后可以分离所需抗体。
在一些实施方案中，与MHC-肽复合物特异性结合的抗体或其抗原结合部分可以通过采用抗体文库展示方法(如噬菌体抗体文库)来产生。在一些实施方案中，可以产生突变体Fab、scFv或其他抗体形式的噬菌体展示文库，例如，其中所述文库的成员在一个或多个CDR的一个或多个残基处发生突变。参见例如，美国公开申请号US 20020150914、US 2014/0294841；以及Cohen CJ.等人(2003)J Mol.Recogn.16:324-332。
本文中的术语“抗体”在最广泛的意义上使用，并且包括多克隆和单克隆抗体，包括完整抗体和功能性(抗原结合)抗体片段，包括片段抗原结合(Fab)片段、F(ab')2片段、Fab'片段、Fv片段、重组IgG(rIgG)片段、能够特异性结合抗原的可变重链(VH)区、单链抗体片段(包括单链可变片段(scFv))以及单结构域抗体(例如，sdAb、sdFv、纳米抗体)片段。所述术语涵盖免疫球蛋白的基因工程化的和/或以其他方式修饰的形式，如胞内抗体、肽体、嵌合抗体、全人抗体、人源化抗体和异缀合抗体、多特异性(例如，双特异性)抗体、双抗体、三抗体和四抗体、串联二-scFv、串联三-scFv。除非另有说明，否则术语“抗体”应当理解为涵盖其功能性抗体片段。所述术语还涵盖完整或全长抗体，包括任何类别或亚类(包括IgG及其亚类、IgM、IgE、IgA和IgD)的抗体。
在一些实施方案中，抗原结合蛋白、抗体及其抗原结合片段特异性识别全长抗体的抗原。在一些实施方案中，抗体的重链和轻链可以是全长的或者可以是抗原结合部分(Fab、F(ab')2、Fv或单链Fv片段(scFv))。在其他实施方案中，抗体重链恒定区选自例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgM、IgA1、IgA2、IgD和IgE，特别是选自例如IgG1、IgG2、IgG3和IgG4，更特别是IgG1(例如，人IgG1)。在另一个实施方案中，抗体轻链恒定区选自例如κ或λ，特别是κ。
所提供的抗体包括抗体片段。“抗体片段”是指不同于完整抗体的分子，其包含完整抗体的结合完整抗体所结合的抗原的一部分。抗体片段的例子包括但不限于Fv、Fab、Fab'、Fab'-SH、F(ab')2；双抗体；线性抗体；可变重链(VH)区、单链抗体分子(如scFv)和单结构域VH单个抗体；和由抗体片段形成的多特异性抗体。在特定实施方案中，抗体是包含可变重链区和/或可变轻链区的单链抗体片段，如scFv。
术语“互补决定区”和“CDR”与“高变区”或“HVR”同义，在一些情况下是已知的，是指抗体可变区内的非连续氨基酸序列，其赋予抗原特异性和/或结合亲和力。通常，在每个重链可变区中有三个CDR(CDR-H1、CDR-H2、CDR-H3)，并且在每个轻链可变区中有三个CDR(CDR-L1、CDR-L2、CDR-L3)。“框架区”和“FR”是已知的，在一些情况下是指重链和轻链的可变区的非CDR部分。通常，在每个全长重链可变区中有四个FR(FR-H1、FR-H2、FR-H3和FR-H4)，并且在每个全长轻链可变区中有四个FR(FR-L1、FR-L2、FR-L3和FR-L4)。
给定CDR或FR的精确氨基酸序列边界可以使用多种熟知方案中的任一种容易地确定，所述方案包括以下文献中所述的那些：Kabat等人(1991),“Sequences of Proteins ofImmunological Interest,”第5版Public Health Service,National Institutes ofHealth,贝塞斯达,马里兰州(“Kabat”编号方案)；Al-Lazikani等人,(1997)JMB 273,927-948(“Chothia”编号方案)；MacCallum等人,J.Mol.Biol.262:732-745(1996),“Antibody-antigen interactions:Contact analysis and binding site topography,”J.Mol.Biol.262,732-745.(“Contact”编号方案)；Lefranc MP等人,“IMGT uniquenumbering for immunoglobulin and T cell receptor variable domains and Igsuperfamily V-like domains,”Dev Comp Immunol,2003Jan；27(1):55-77(“IMGT”编号方案)；Honegger A和Plückthun A,“Yet another numbering scheme for immunoglobulinvariable domains:an automatic modeling and analysis tool,”JMol Biol,2001Jun8；309(3):657-70,(“Aho”编号方案)；和Martin等人,“Modeling antibody hypervariableloops:a combined algorithm,”PNAS,1989,86(23):9268-9272,(“AbM”编号方案)。
给定CDR或FR的边界可能根据用于鉴定的方案而变化。例如，Kabat方案是基于结构比对，而Chothia方案是基于结构信息。Kabat和Chothia方案的编号都是基于最常见的抗体区域序列长度，其中通过插入字母(例如“30a”)提供插入，并且在一些抗体中出现缺失。这两种方案将某些插入和缺失(“插入缺失(indel)”)放置在不同的位置，从而产生不同的编号。Contact方案是基于对复杂晶体结构的分析，并且在许多方面与Chothia编号方案类似。AbM方案是Kabat与Chothia定义之间的折衷，是基于Oxford Molecular's AbM抗体建模软件使用的方案。
下表10列出了分别通过Kabat、Chothia、AbM和Contact方案鉴定的CDR-L1、CDR-L2、CDR-L3以及CDR-H1、CDR-H2、CDR-H3的示例性位置边界。对于CDR-H1，使用Kabat和Chothia两种编号方案列出残基编号。FR位于CDR之间，例如，FR-L1位于CDR-L1之前，FR-L2位于CDR-L1与CDR-L2之间，FR-L3位于CDR-L2与CDR-L3之间，等等。应注意，因为所示的Kabat编号方案在H35A和H35B处放置插入，所以当使用所示的Kabat编号惯例进行编号时，Chothia CDR-H1环的末端根据环的长度在H32与H34之间变化。
Figure BDA0003183097650001681
1-Kabat等人(1991),“Sequences of Proteins of Immunological Interest,”第5版Public Health Service,National Institutes of Health,贝塞斯达,马里兰州
2-Al-Lazikani等人,(1997)JMB 273,927-948
因此，除非另有规定，否则应当理解给定抗体或其区域(如其可变区)的“CDR”或“互补决定区”或单独指定的CDR(例如，CDR-H1、CDR-H2、CDR-H3)涵盖如由任何前述方案或其他已知方案所定义的一个(或特定的)互补决定区。例如，在声明特定的CDR(例如，CDR-H3)含有给定VH或VL区氨基酸序列中的相应CDR的氨基酸序列的情况下，应理解，这种CDR具有在可变区内的相应CDR(例如，CDR-H3)的序列，如由任何前述方案或其他已知方案所定义的。在一些实施方案中，指定了特定的CDR序列。使用各种编号方案描述所提供抗体的示例性CDR序列，但应当理解，所提供抗体可以包括如根据任何其他上述编号方案或熟练技术人员已知的其他编号方案所描述的CDR。
同样，除非另有规定，否则给定抗体或其区域如其可变区的FR或单独指定的一个或多个FR(例如，FR-H1、FR-H2、FR-H3、FR-H4)应理解为涵盖如任何已知方案所定义的一个(或特定)框架区。在一些情形中，指定用于鉴定特定CDR、FR或多个特定FR或CDR的鉴定方案，如通过Kabat、Chothia、AbM或Contact方法或其他已知方案定义的CDR。在其他情况下，给出了CDR或FR的具体氨基酸序列。
术语“可变区”或“可变结构域”是指抗体重链或轻链中参与抗体与抗原的结合的结构域。天然抗体的重链和轻链的可变结构域(分别为VH和VL)通常具有相似的结构，每个结构域包含四个保守的框架区(FR)和三个CDR。(参见例如，Kindt等人Kuby Immunology,第6版,W.H.Freeman and Co.,第91页(2007)。)单一VH或VL结构域可能足以赋予抗原结合特异性。此外，可以使用来自结合特定抗原的抗体的VH或VL结构域分离结合特定抗原的抗体，以分别筛选互补的VL或VH结构域的文库。参见例如，Portolano等人,J.Immunol.150:880-887(1993)；Clarkson等人,Nature 352:624-628(1991)。
单结构域抗体是包含抗体的全部或部分重链可变结构域或者全部或部分轻链可变结构域的抗体片段。在某些实施方案中，单结构域抗体是人单结构域抗体。在一些实施方案中，CAR包含特异性地结合抗原的抗体重链结构域，所述抗原例如癌症标记或要靶向的细胞或疾病(例如肿瘤细胞或癌细胞)的细胞表面抗原，例如本文所述或已知的任何靶抗原。
抗体片段可以通过各种技术制备，包括但不限于完整抗体的蛋白水解消化以及通过重组宿主细胞产生。在一些实施方案中，所述抗体是重组产生的片段，如包含天然不存在的排列的片段(如具有通过合成接头(例如，肽接头)连接的两个或更多个抗体区或链的那些)，和/或可不通过酶消化天然存在的完整抗体产生的片段。在一些实施方案中，所述抗体片段是scFv。
“人源化”抗体是如下抗体，其中所有或基本上所有CDR氨基酸残基源自非人CDR，并且所有或基本上所有FR氨基酸残基源自人FR。人源化抗体任选地可以包括源自人抗体的抗体恒定区的至少一部分。非人抗体的“人源化形式”是指非人抗体的变体，其已经经历人源化以通常降低对人的免疫原性，同时保留亲代非人抗体的特异性和亲和力。在一些实施方案中，人源化抗体中的一些FR残基被来自非人抗体(例如，CDR残基所来源的抗体)的相应残基取代，例如以恢复或改善抗体特异性或亲和力。
在一些实施方案中，抗原或抗原结合结构域是CD19。在一些实施方案中，scFv含有源自对CD19具有特异性的抗体或抗体片段的VH和VL。在一些实施方案中，结合CD19的抗体或抗体片段是小鼠来源的抗体，如FMC63和SJ25C1。在一些实施方案中，抗体或抗体片段是人抗体，例如如美国专利公开号US 2016/0152723中所述。
在一些实施方案中，scFv源自FMC63。FMC63通常是指针对表达人源CD19的Nalm-1和-16细胞产生的小鼠单克隆IgG1抗体(Ling,N.R.,等人(1987).Leucocyte typingIII.302)。在一些实施方案中，FMC63抗体包含分别在SEQ ID NO:38和39中所示的CDR-H1和CDR-H2，和SEQ ID NO:40或54中所示的CDR-H3；以及SEQ ID NO:35所示的CDR-L1和SEQ IDNO:36或55所示的CDR-L2和SEQ ID NO:37或34所示的CDR-L3。在一些实施方案中，FMC63抗体包含含有SEQ ID NO:41的氨基酸序列的重链可变区(VH)和含有SEQ ID NO:42的氨基酸序列的轻链可变区(VL)。
在一些实施方案中，scFv包含含有SEQ ID NO:35的CDR-L1序列、SEQ ID NO:36的CDR-L2序列和SEQ ID NO:37的CDR-L3序列的可变轻链和/或含有SEQ ID NO:38的CDR-H1序列、SEQ ID NO:39的CDR-H2序列和SEQ ID NO:40的CDR-H3序列的可变重链。在一些实施方案中，scFv包含如SEQ ID NO:41所示的可变重链区和如SEQ ID NO:42所示的可变轻链区。在一些实施方案中，可变重链和可变轻链通过接头连接。在一些实施方案中，接头如SEQ IDNO:56所示。在一些实施方案中，scFv按顺序包含VH、接头和VL。在一些实施方案中，scFv按顺序包含VL、接头和VH。在一些实施方案中，scFv由SEQ ID NO:57所示的核苷酸序列或展现与SEQ ID NO:57至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的序列编码。在一些实施方案中，scFv包含SEQ ID NO:43中所示的氨基酸序列或展现与SEQ ID NO:43至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的序列。
在一些实施方案中，scFv源自SJ25C1。SJ25C1是针对人来源的表达CD19的Nalm-1和Nalm-16细胞产生的小鼠单克隆IgG1抗体(Ling,N.R.等人(1987).Leucocyte typingIII.302)。在一些实施方案中，SJ25C1抗体包含分别在SEQ ID NO:47-49中所示的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3，以及分别在SEQ ID NO:44-46中所示的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3。在一些实施方案中，SJ25C1抗体包含含有SEQ ID NO:50的氨基酸序列的重链可变区(VH)和含有SEQ ID NO:51的氨基酸序列的轻链可变区(VL)。
在一些实施方案中，scFv包含含有SEQ ID NO:44的CDR-L1序列、SEQ ID NO:45的CDR-L2序列和SEQ ID NO:46的CDR-L3序列的可变轻链和/或含有SEQ ID NO:47的CDR-H1序列、SEQ ID NO:48的CDR-H2序列和SEQ ID NO:49的CDR-H3序列的可变重链。在一些实施方案中，scFv包含SEQ ID NO:50中所示的可变重链区和SEQ ID NO:51中所示的可变轻链区。在一些实施方案中，可变重链和可变轻链通过接头连接。在一些实施方案中，接头如SEQ IDNO:52中所示。在一些实施方案中，scFv按顺序包含VH、接头和VL。在一些实施方案中，scFv按顺序包含VL、接头和VH。在一些实施方案中，scFv包含SEQ ID NO:53中所示的氨基酸序列或展现与SEQ ID NO:53至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的序列。
在一些实施方案中，抗原是CD20。在一些实施方案中，scFv含有源自对CD20具有特异性的抗体或抗体片段的VH和VL。在一些实施方案中，结合CD20的抗体或抗体片段是抗体，所述抗体是或源自利妥昔单抗，例如是利妥昔单抗scFv。
在一些实施方案中，抗原是CD22。在一些实施方案中，scFv含有源自对CD22具有特异性的抗体或抗体片段的VH和VL。在一些实施方案中，结合CD22的抗体或抗体片段是抗体，所述抗体是或源自m971，例如是m971 scFv。
在一些实施方案中，抗原或抗原结合结构域是BCMA。在一些实施方案中，scFv含有源自对BCMA具有特异性的抗体或抗体片段的VH和VL。在一些实施方案中，结合BCMA的抗体或抗体片段是或含有来自国际专利申请公开号WO 2016/090327和WO 2016/090320中所述的抗体或抗体片段的VH和VL。
在一些实施方案中，抗原或抗原结合结构域是GPRC5D。在一些实施方案中，scFv含有源自对GPRC5D具有特异性的抗体或抗体片段的VH和VL。在一些实施方案中，结合GPRC5D的抗体或抗体片段是或含有来自国际专利申请公开号WO 2016/090329和WO 2016/090312中所述的抗体或抗体片段的VH和VL。
在一些实施方案中，嵌合抗原受体包括含有抗体或抗体片段的细胞外部分。在一些方面，嵌合抗原受体包括含有抗体或片段的细胞外部分和细胞内信号传导结构域。在一些实施方案中，抗体或片段包括scFv。在一些方面，嵌合抗原受体包括含有抗体或片段的细胞外部分和细胞内信号传导区。在一些实施方案中，细胞内信号传导区包含细胞内信号传导结构域。在一些实施方案中，细胞内信号传导结构域是或包含初级信号传导结构域、能够在T细胞中诱导初级激活信号的信号传导结构域、T细胞受体(TCR)组分的信号传导结构域和/或包含免疫受体酪氨酸激活基序(ITAM)的信号传导结构域。
在一些实施方案中，重组受体(例如，CAR)的抗体部分进一步包括免疫球蛋白恒定区的至少一部分，如铰链区，例如，IgG4铰链区和/或CH1/CL和/或Fc区。在一些实施方案中，恒定区或部分是人IgG如IgG4或IgG1的。在一些方面，恒定区的所述部分用作抗原识别组分(例如，scFv)与跨膜结构域之间的间隔子区。与不存在间隔子的情况下相比，间隔子的长度可以提供抗原结合后增强的细胞反应性。示例性间隔子包括但不限于以下文献中所述的那些：Hudecek等人(2013)Clin.Cancer Res.,19:3153；国际专利申请公开号WO 2014031687、美国专利号8,822,647或公开的申请号US 2014/0271635。
在一些实施方案中，恒定区或部分是人IgG如IgG4或IgG1的。在一些实施方案中，间隔子具有序列ESKYGPPCPPCP(SEQ ID NO:1中所示)，并且由SEQ ID NO:2中所示的序列编码。在一些实施方案中，间隔子具有SEQ ID NO:3中所示的序列。在一些实施方案中，间隔子具有SEQ ID NO:4中所示的序列。在一些实施方案中，恒定区或部分属于IgD。在一些实施方案中，间隔子具有SEQ ID NO:5中所示的序列。在一些实施方案中，间隔子具有展现与SEQID NO:1、3、4或5中的任一项至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，间隔子具有SEQ ID NO:26-34中所示的序列。在一些实施方案中，间隔子具有展现与SEQ IDNO:26-34中任一项至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性的氨基酸序列。
在一些实施方案中，抗原受体包含与细胞外结构域直接或间接连接的细胞内结构域。在一些实施方案中，嵌合抗原受体包括连接细胞外结构域和细胞内信号传导结构域的跨膜结构域。在一些实施方案中，细胞内信号传导结构域包含ITAM。例如，在一些方面，抗原识别结构域(例如细胞外结构域)通常与一种或多种细胞内信号传导组分(如模拟在CAR的情况下通过抗原受体复合物(如TCR复合物)进行激活和/或通过另一种细胞表面受体传导信号的信号传导组分)连接。在一些实施方案中，嵌合受体包含在细胞外结构域(例如scFv)与细胞内信号传导结构域之间连接或融合的跨膜结构域。因此，在一些实施方案中，抗原结合组分(例如，抗体)与一种或多种跨膜结构域和细胞内信号传导结构域连接。
在一个实施方案中，使用与受体(例如，CAR)中的一个结构域天然地缔合的跨膜结构域。在一些情形中，通过氨基酸取代选择或修饰跨膜结构域以避免此类结构域与相同或不同表面膜蛋白的跨膜结构域结合，以最小化与受体复合物的其他成员的相互作用。
在一些实施方案中，跨膜结构域源自天然或合成来源。当来源是天然的时，在一些方面，所述结构域可以源自任何膜结合蛋白或跨膜蛋白。跨膜区包括源自以下(即包含其至少一个或多个跨膜区)的那些：T细胞受体的α、β或ζ链、CD28、CD3ε、CD45、CD4、CD5、CD8、CD9、CD16、CD22、CD33、CD37、CD64、CD80、CD86、CD134、CD137、CD154。可替代地，在一些实施方案中，跨膜结构域是合成的。在一些方面，合成跨膜结构域主要包含疏水性残基，例如亮氨酸和缬氨酸。在一些方面，将在合成跨膜结构域的每个末端发现苯丙氨酸、色氨酸和缬氨酸的三联体。在一些实施方案中，所述连接是通过接头、间隔子和/或一个或多个跨膜结构域来实现。在一些方面，跨膜结构域含有CD28的跨膜部分。
在一些实施方案中，细胞外结构域和跨膜结构域可以直接或间接连接。在一些实施方案中，细胞外结构域和跨膜通过间隔子(如本文描述的任何间隔子)连接。在一些实施方案中，受体含有衍生出跨膜结构域的分子的细胞外部分，如CD28细胞外部分。
细胞内信号传导结构域包括模拟或接近以下的那些：通过天然抗原受体的信号、通过这种受体与共刺激受体的组合的信号、和/或仅通过共刺激受体的信号。在一些实施方案中，存在短的寡肽或多肽接头，例如长度在2与10个氨基酸之间的接头(如含有甘氨酸和丝氨酸的接头，例如甘氨酸-丝氨酸双联体)，并且在CAR的跨膜结构域与胞质信号传导结构域之间形成连接。
在一些方面，将T细胞激活描述为由两个类别的胞质信号传导序列来介导：通过TCR启动抗原依赖性初级激活的那些(初级胞质信号传导序列)，以及以非抗原依赖性方式作用以提供次级或共刺激信号的那些(次级胞质信号传导序列)。在一些方面，CAR包括此类信号传导组分中的一种或两种。
受体(例如，CAR)通常包括至少一种或多种细胞内信号传导组分。在一些方面，CAR包括调节TCR复合物的初级激活的初级胞质信号传导序列。以刺激方式起作用的初级胞质信号传导序列可以含有信号传导基序(其被称为免疫受体酪氨酸激活基序或ITAM)。含有ITAM的初级胞质信号传导序列的例子包括源自CD3ζ链、FcRγ、CD3γ、CD3δ和CD3ε的那些。在一些实施方案中，CAR中的一种或多种胞质信号传导分子含有源自CD3ζ的胞质信号传导结构域、其部分或序列。
在一些实施方案中，受体包括TCR复合物的细胞内组分，如介导T细胞激活和细胞毒性的TCR CD3链，例如CD3ζ链。因此，在一些方面，抗原结合部分与一种或多种细胞信号传导模块连接。在一些实施方案中，细胞信号传导模块包括CD3跨膜结构域、CD3细胞内信号传导结构域和/或其他CD跨膜结构域。在一些实施方案中，受体(例如，CAR)还包括一种或多种另外的分子(如Fc受体γ、CD8、CD4、CD25或CD16)的一部分。例如，在一些方面，CAR或其他嵌合受体包括CD3-zeta(CD3-ζ)或Fc受体γ与CD8、CD4、CD25或CD16之间的嵌合分子。
在一些实施方案中，在连接CAR或其他嵌合受体后，受体的胞质结构域或细胞内信号传导结构域激活免疫细胞(例如，工程化以表达CAR的T细胞)的正常效应子功能或应答中的至少一种。例如，在一些情境下，CAR诱导T细胞的功能，如细胞裂解活性或T辅助活性，如细胞因子或其他因子的分泌。在一些实施方案中，使用抗原受体组分或共刺激分子的细胞内信号传导结构域的截短部分(例如，如果其转导效应子功能信号的话)代替完整的免疫刺激链。在一些实施方案中，一种或多种细胞内信号传导结构域包括T细胞受体(TCR)的胞质序列，在一些方面还包括共受体的那些胞质序列，所述共受体在天然情况下与此类受体协同作用以在抗原受体接合后启动信号转导。
在天然TCR的情况下，完全激活通常不仅需要通过TCR进行信号传导，还需要共刺激信号。因此，在一些实施方案中，为了促进完全激活，用于生成次级或共刺激信号的组分也被包括在CAR中。在其他实施方案中，CAR不包括用于生成共刺激信号的组分。在一些方面，另外的CAR在同一细胞中表达，并且提供用于生成次级或共刺激信号的组分。
在一些实施方案中，嵌合抗原受体含有T细胞共刺激分子的细胞内结构域。在一些实施方案中，CAR包括共刺激受体(如CD28、4-1BB、OX40、DAP10和ICOS)的信号传导结构域和/或跨膜部分。在一些方面，相同的CAR包括激活和共刺激组分二者。在一些实施方案中，嵌合抗原受体含有源自T细胞共刺激分子的细胞内结构域或其功能变体，如位于跨膜结构域与细胞内信号传导结构域之间。在一些方面，T细胞共刺激分子是CD28或41BB。
在一些实施方案中，激活结构域被包括在一个CAR内，而共刺激组分由识别另一抗原的另一CAR提供。在一些实施方案中，CAR包括均在同一细胞上表达的激活或刺激CAR、共刺激CAR(参见WO 2014/055668)。在一些方面，细胞包括一种或多种刺激或激活CAR和/或共刺激CAR。在一些实施方案中，细胞还包括抑制性CAR(iCAR，参见Fedorov等人,Sci.Transl.Medicine,5(215)(2013年12月))，如识别除了与疾病或病症相关和/或为所述疾病或病症特有的抗原以外的抗原的CAR，借此通过抑制性CAR与其配体的结合来减小或抑制通过靶向疾病的CAR递送的激活信号，例如，以减小脱靶效应。
在一些实施方案中，这两种受体分别将激活和抑制信号诱导至细胞，使得一种受体与其抗原的连接激活细胞或诱导应答，但是第二抑制性受体与其抗原的连接诱导抑制或减弱该应答的信号。例子是激活CAR与抑制性CAR(iCAR)的组合。例如，这种策略可以用于例如降低在如下背景下的脱靶效应的可能性，在所述背景中激活CAR结合在疾病或病症中表达但也在正常细胞上表达的抗原，并且抑制性受体结合在正常细胞上表达但不在所述疾病或病症的细胞上表达的单独抗原。
在一些方面，嵌合受体是或包括抑制性CAR(例如，iCAR)，并且包括减弱或抑制免疫应答(例如细胞中ITAM和/或共同刺激促进的应答)的细胞内组分。此类细胞内信号传导组分的示例是在免疫检查点分子(包括PD-1、CTLA4、LAG3、BTLA、OX2R、TIM-3、TIGIT、LAIR-1、PGE2受体、EP2/4腺苷受体(包括A2AR))上发现的那些组分。在一些方面，工程化细胞包括抑制性CAR，所述抑制性CAR包括这种抑制性分子的信号传导结构域或源自这种抑制性分子的信号传导结构域，使得其起到减弱细胞的应答(例如，由激活和/或共刺激性CAR诱导)的作用。
在某些实施方案中，细胞内信号传导结构域包含与CD3(例如，CD3-ζ)细胞内结构域连接的CD28跨膜和信号传导结构域。在一些实施方案中，细胞内信号传导结构域包含连接至CD3ζ细胞内结构域的嵌合CD28和CD137(4-1BB，TNFRSF9)共刺激结构域。
在一些实施方案中，CAR在胞质部分中包含一个或多个(例如，两个或更多个)共刺激结构域和激活结构域(例如，初级激活结构域)。示例性CAR包括CD3-ζ、CD28和4-1BB的细胞内组分。
在一些实施方案中，抗原受体还包括标记，和/或表达CAR或其他抗原受体的细胞还包括替代标记(如细胞表面标记)，所述替代标记可以用于确认细胞的转导或工程化以表达受体。在一些方面，标记包括CD34、NGFR或表皮生长因子受体的全部或部分(例如截短形式)，如这种细胞表面受体的截短形式(例如，tEGFR)。在一些实施方案中，编码标记的核酸可操作地连接至编码接头序列(如可切割接头序列，例如T2A)的多核苷酸。例如，标记和任选接头序列可以是如公开的专利申请号WO 2014031687中所披露的任何一种。例如，标记可以是截短的EGFR(tEGFR)，其任选地连接至接头序列，如T2A可切割接头序列。
截短的EGFR(例如tEGFR)的示例性多肽包含SEQ ID NO:7或16中所示的氨基酸序列或展现与SEQ ID NO:7或16至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性的氨基酸序列。示例性T2A接头序列包含SEQ ID NO:6或17中所示的氨基酸序列或展现与SEQ ID NO:6或17至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性的氨基酸序列。
在一些实施方案中，标记是并非在T细胞上天然发现的或并非在T细胞表面上天然发现的分子(例如，细胞表面蛋白)或其部分。在一些实施方案中，分子是非自身分子，例如非自身蛋白，即不被将过继转移细胞的宿主的免疫系统识别为“自身”的分子。
在一些实施方案中，标记不提供任何治疗功能和/或不产生除了用作基因工程化标记(例如，用于选择成功工程化的细胞)以外的作用。在其他实施方案中，标记可以是治疗性分子或以其他方式发挥一些所需作用的分子，如在体内会遇到的细胞的配体，如用于在过继转移和遇到配体时增强和/或减弱细胞应答的共刺激或免疫检查点分子。
在一些情况下，CAR被称为第一代、第二代和/或第三代CAR。在一些方面，第一代CAR是在抗原结合时仅提供CD3链诱导的信号的CAR；在一些方面，第二代CAR是提供这种信号和共刺激信号的CAR，如包括来自共刺激受体如CD28或CD137的细胞内信号传导结构域的信号；在一些方面，第三代CAR是包括不同共刺激受体的多个共刺激结构域的CAR。
例如，在一些实施方案中，CAR含有抗体例如抗体片段、跨膜结构域(其是或含有CD28的跨膜部分或其功能变体)以及细胞内信号传导结构域(含有CD28的信号传导部分或其功能变体和CD3ζ的信号传导部分或其功能变体)。在一些实施方案中，CAR含有抗体(例如，抗体片段)、跨膜结构域(其是或含有CD28的跨膜部分或其功能变体)以及细胞内信号传导结构域(含有4-1BB的信号传导部分或其功能变体和CD3ζ的信号传导部分或其功能变体)。在一些此类实施方案中，受体还包括含有Ig分子(如人Ig分子)的一部分(如Ig铰链，例如IgG4铰链)的间隔子，如仅铰链间隔子。
在一些实施方案中，重组受体(例如，CAR)的跨膜结构域是或包括人CD28(例如登录号P01747.1)的跨膜结构域或其变体，如包含SEQ ID NO:8中所示的氨基酸序列或展现与SEQ ID NO:8至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性的氨基酸序列的跨膜结构域；在一些实施方案中，重组受体的含有跨膜结构域的部分包含SEQ ID NO:9中所示的氨基酸序列或具有与SEQ ID NO:9至少或至少约85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性的氨基酸序列。
在一些实施方案中，重组受体(例如，CAR)的一个或多个细胞内信号传导组分含有人CD28的细胞内共刺激信号传导结构域或其功能变体或部分，如在天然CD28蛋白的位置186-187处具有LL至GG取代的结构域。例如，细胞内信号传导结构域可以包含SEQ ID NO:10或11中所示的氨基酸序列或展现与SEQ ID NO:10或11至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，细胞内结构域包含4-1BB(例如登录号Q07011.1)的细胞内共刺激信号传导结构域或其功能变体或部分，如SEQ ID NO:12中所示的氨基酸序列或展现与SEQ IDNO:12至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性的氨基酸序列。
在一些实施方案中，重组受体(例如，CAR)的细胞内信号传导结构域包含人CD3ζ刺激信号传导结构域或其功能变体，如人CD3ζ(登录号：P20963.2)的同种型3的112个AA的胞质结构域，或如美国专利号7,446,190或美国专利号8,911,993中所述的CD3ζ信号传导结构域。例如，在一些实施方案中，细胞内信号传导结构域包含SEQ ID NO:13、14或15中所示的氨基酸序列或展现与SEQ ID NO:13、14或15至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性的氨基酸序列。
在一些方面，间隔子仅含有IgG的铰链区，如仅IgG4或IgG1的铰链，如SEQ ID NO:1中所示的仅铰链间隔子。在其他实施方案中，间隔子是或含有Ig铰链，例如，IgG4源铰链，其任选地连接至CH2和/或CH3结构域。在一些实施方案中，间隔子是与CH2和CH3结构域连接的Ig铰链，例如IgG4铰链，如SEQ ID NO:4中所示。在一些实施方案中，间隔子是仅与CH3结构域连接的Ig铰链，例如IgG4铰链，如SEQ ID NO:3中所示。在一些实施方案中，间隔子是或包含富含甘氨酸-丝氨酸的序列或其他柔性接头，如已知的柔性接头。
例如，在一些实施方案中，CAR包括抗体(如抗体片段，包括scFv)、间隔子(如含有免疫球蛋白分子的一部分(如铰链区和/或重链分子的一个或多个恒定区)的间隔子，如含有Ig铰链的间隔子)、含有CD28衍生的跨膜结构域的全部或部分的跨膜结构域、CD28衍生的的细胞内信号传导结构域和CD3ζ信号传导结构域。在一些实施方案中，CAR包括抗体或片段(如scFv)、间隔子(如任何含Ig铰链的间隔子)、CD28衍生的跨膜结构域、4-1BB衍生的细胞内信号传导结构域和CD3ζ衍生的信号传导结构域。
在特定实施方案中，CAR是针对CD19的CAR，其含有来自FMC63的scFv抗原结合结构域；免疫球蛋白铰链间隔子、跨膜结构域以及含有共刺激信号传导区的细胞内信号传导结构域，所述共刺激信号传导区是4-1BB的信号传导结构域和CD3-zeta(CD3ζ)链的信号传导结构域。在一些实施方案中，scFv含有SEQ ID NO:43中所示的序列。在一些实施方案中，scFv具有VL，所述VL具有CDR，所述CDR具有氨基酸序列RASQDISKYLN(SEQ ID NO:35)、SRLHSGV(SEQ ID NO:36)的氨基酸序列和GNTLPYTFG(SEQ ID NO:37)的氨基酸序列；以及VH，所述VH具有CDR，所述CDR具有DYGVS(SEQ ID NO:38)的氨基酸序列、VIWGSETTYYNSALKS(SEQ ID NO:39)的氨基酸序列和YAMDYWG(SEQ ID NO:40)。在一些实施方案中，跨膜结构域具有SQ ID NO:8中所示的序列。在一些实施方案中，跨膜结构域具有的序列具有与SEQ IDNO:8至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性。
在一些实施方案中，4-1BB共刺激信号传导结构域具有SEQ ID NO:12中所示的序列。在一些实施方案中，4-1BB共刺激信号传导结构域具有与SEQ ID NO:12至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性。在一些实施方案中，CD3-ζ结构域具有SEQ ID NO:13中所示的序列。在一些实施方案中，CD3ζ信号传导结构域具有的序列具有与其至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性。在一些实施方案中，针对CD19的CAR与CD19结合，并且当在T细胞中表达且经由CAR刺激(如通过与CD19结合)时，介导细胞因子产生和/或针对CD19+靶细胞的细胞毒性活性。
在一些实施方案中，编码此类CAR构建体的核酸分子例如在编码CAR的序列的下游还包括编码T2A核糖体跳跃元件的序列和/或tEGFR序列。在一些实施方案中，所述序列编码SEQ ID NO:6或17中所示的T2A核糖体跳跃元件或展现与SEQ ID NO:6或17至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，还可以生成表达抗原受体(例如CAR)的T细胞以将截短的EGFR(EGFRt)表达为非免疫原性选择表位(例如通过引入编码被T2A核糖体开关分隔开的CAR和EGFRt的构建体，以表达来自相同构建体的两种蛋白质)，然后所述非免疫原性选择表位可用作检测此类细胞的标记(参见例如美国专利号8,802,374)。在一些实施方案中，所述序列编码SEQ ID NO:7或16中所示的tEGFR序列或展现与SEQ ID NO:7或16至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性的氨基酸序列。在一些情况下，肽(如T2A)可导致核糖体跳过2A元件C末端处肽键的合成(核糖体跳跃)，导致2A序列末端与下游的下一个肽之间分离(参见例如，deFelipe.Genetic Vaccines and Ther.2:13(2004)和deFelipe等人Traffic 5:616-626(2004))。许多2A元件是已知的。可以用于本文公开的方法和核酸中的2A序列的例子包括但不限于来自以下的2A序列：口蹄疫病毒(F2A，例如，SEQ ID NO:21)、马鼻炎A病毒(E2A，例如，SEQ ID NO:20)、明脉扁刺蛾β四体病毒(Thosea asigna virus)(T2A，例如，SEQ ID NO:6或17)和猪捷申病毒(porcine teschovirus)-1(P2A，例如，SEQ ID NO:18或19)，如美国专利公开号20070116690中所述。
由施用至受试者的细胞表达的重组受体(如CAR)通常识别或特异性结合至在所治疗的疾病或病症或其细胞中表达、与所治疗的疾病或病症或其细胞相关和/或为所治疗的疾病或病症或其细胞所特有的分子。在与分子(例如抗原)特异性结合后，受体通常将免疫刺激信号(如ITAM转导的信号)递送到细胞中，从而促进靶向疾病或病症的免疫应答。例如，在一些实施方案中，细胞表达CAR，其特异性结合由疾病或病症的细胞或组织表达的或与疾病或病症相关的抗原。
B.T细胞受体(TCR)
在一些实施方案中，与所提供的方法、用途、制品或组合物结合使用的工程化细胞(如T细胞)是表达T细胞受体(TCR)或其抗原结合部分的细胞，所述抗体或其抗原结合部分识别靶多肽(如肿瘤、病毒或自身免疫蛋白的抗原)的肽表位或T细胞表位。
在一些实施方案中，“T细胞受体”或“TCR”是含有可变α和β链(也分别称为TCRα和TCRβ)或可变γ和δ链(也分别称为TCRα和TCRβ)的分子或其抗原结合部分，并且其能够特异性结合至与MHC分子结合的肽。在一些实施方案中，所述TCR呈αβ形式。通常，以αβ和γδ形式存在的TCR一般在结构上相似，但是表达它们的T细胞可以具有不同的解剖位置或功能。TCR可以在细胞的表面上发现或以可溶形式发现。通常，发现TCR在T细胞(或T淋巴细胞)的表面上，在此处它通常负责识别与主要组织相容性复合物(MHC)分子结合的抗原。
除非另有说明，否则术语“TCR”应理解为涵盖完整的TCR以及其抗原结合部分或其抗原结合片段。在一些实施方案中，TCR是完整或全长TCR，包括呈αβ形式或γδ形式的TCR。在一些实施方案中，TCR是如下抗原结合部分，其小于全长TCR但与在MHC分子中结合的特定肽结合(如与MHC-肽复合物结合)。在一些情况下，TCR的抗原结合部分或片段可以仅含有全长或完整TCR的结构性结构域的一部分，但是仍能够结合与完整TCR结合的肽表位(如MHC-肽复合物)。在一些情况下，抗原结合部分含有TCR的可变结构域(如TCR的可变α链和可变β链)，足以形成用于与特定MHC-肽复合物结合的结合位点。通常，TCR的可变链含有参与肽、MHC和/或MHC-肽复合物的识别的互补决定区。
在一些实施方案中，TCR的可变结构域含有超变环或互补决定区(CDR)，其通常是抗原识别和结合能力和特异性的主要贡献者。在一些实施方案中，TCR的CDR或其组合形成给定TCR分子的全部或基本上全部的抗原结合位点。TCR链的可变区内的各个CDR通常由框架区(FR)隔开，与CDR相比，所述框架区通常在TCR分子之间展示较低可变性(参见例如，Jores等人,Proc.Nat'l Acad.Sci.U.S.A.87:9138,1990；Chothia等人,EMBO J.7:3745,1988；还参见Lefranc等人,Dev.Comp.Immunol.27:55,2003)。在一些实施方案中，CDR3是负责抗原结合或特异性的主要CDR，或者是在给定TCR可变区的用于肽-MHC复合物的加工肽部分的抗原识别和/或用于与其相互作用的三个CDR中最重要的CDR。在一些情境下，α链的CDR1可以与某些抗原肽的N末端部分相互作用。在一些情境下，β链的CDR1可以与肽的C末端部分相互作用。在一些情境下，CDR2对与MHC-肽复合物的MHC部分的相互作用或识别具有最强的作用或者是主要的负责CDR。在一些实施方案中，β链的可变区可以含有其他高变区(CDR4或HVR4)，所述高变区通常参与超抗原结合而非抗原识别(Kotb(1995)ClinicalMicrobiology Reviews,8:411-426)。
在一些实施方案中，TCR还可以含有恒定结构域、跨膜结构域和/或短胞质尾(参见例如，Janeway等人,Immunobiology:The Immune System in Health and Disease,第3版,Current Biology Publications,第4:33页,1997)。在一些方面，TCR的每条链可以具有一个N末端免疫球蛋白可变结构域、一个免疫球蛋白恒定结构域、跨膜区和位于C末端的短胞质尾。在一些实施方案中，TCR与参与介导信号转导的CD3复合物的不变蛋白质缔合。
在一些实施方案中，TCR链含有一个或多个恒定结构域。例如，给定TCR链(例如，α链或β链)的细胞外部分可以含有与细胞膜相邻的两个免疫球蛋白样结构域，如可变结构域(例如，Vα或Vβ；通常为基于Kabat编号的氨基酸1至116，Kabat等人,“Sequences ofProteins of Immunological Interest”,US Dept.Health and Human Services,PublicHealth Service National Institutes of Health,1991,第5版)和恒定结构域(例如，α链恒定结构域或Cα，通常为基于Kabat编号的链的位置117至259；或β链恒定结构域或Cβ，通常为基于Kabat的链的位置117至295)。例如，在一些情况下，由两条链形成的TCR的细胞外部分含有两个膜近端恒定结构域和两个膜远端可变结构域，其中可变结构域各自含有CDR。TCR的恒定结构域可以含有短连接序列，其中半胱氨酸残基形成二硫键，由此连接TCR的两条链。在一些实施方案中，TCR可在每条α和β链中具有另外的半胱氨酸残基，使得TCR在恒定结构域中含有两个二硫键。
在一些实施方案中，TCR链含有跨膜结构域。在一些实施方案中，跨膜结构域带正电荷。在一些情况下，TCR链含有胞质尾。在一些情况下，结构允许TCR与其他分子(如CD3和其亚基)缔合。例如，含有恒定结构域与跨膜区的TCR可以将蛋白质锚定在细胞膜中并与CD3信号传导装置或复合物的不变亚基缔合。CD3信号传导亚基(例如，CD3γ、CD3δ、CD3ε和CD3ζ链)的细胞内尾含有TCR复合物的信号传导能力中所涉及的一个或多个免疫受体酪氨酸激活基序或ITAM。
在一些实施方案中，TCR可以是两条链α和β(或者任选地γ和δ)的异二聚体，或者其可以是单链TCR构建体。在一些实施方案中，TCR是含有两条单独链(α和β链或γ和δ链)的异二聚体，所述链是通过例如一个或多个二硫键连接。
在一些实施方案中，TCR可以从一个或多个已知的TCR序列(如Vα,β链的序列)产生，所述一个或多个已知的TCR序列的基本上全长的编码序列是易于获得的。用于从细胞来源获得全长TCR序列(包括V链序列)的方法是熟知的。在一些实施方案中，编码TCR的核酸可以从多种来源获得，如通过一种或多种给定细胞内的或从所述一种或多种给定细胞分离的编码TCR的核酸的聚合酶链式反应(PCR)扩增获得，或者通过公众可获得的TCR DNA序列的合成获得。
在一些实施方案中，TCR是从生物来源获得，如来自细胞(如来自T细胞，例如细胞毒性T细胞)、T细胞杂交瘤或其他公众可获得的来源。在一些实施方案中，T细胞可以从体内分离的细胞获得。在一些实施方案中，TCR是胸腺选择的TCR。在一些实施方案中，TCR是新表位限制性TCR。在一些实施方案中，T细胞可以是培养的T细胞杂交瘤或克隆。在一些实施方案中，TCR或其抗原结合部分或其抗原结合片段可以根据对所述TCR序列的知识以合成方式产生。
在一些实施方案中，TCR是从通过针对靶多肽抗原或其靶T细胞表位筛选候选TCR文库而鉴定或选择的TCR产生的。TCR文库可以通过扩增来自T细胞的Vα和Vβ库来产生，所述T细胞是从受试者分离，包括存在于PBMC、脾或其他淋巴器官中的细胞。在一些情况下，T细胞可以从肿瘤浸润性淋巴细胞(TIL)扩增。在一些实施方案中，TCR文库可以从CD4+或CD8+细胞产生。在一些实施方案中，TCR可以从正常或健康受试者的T细胞来源扩增，即正常TCR文库。在一些实施方案中，TCR可以从患病受试者的T细胞来源扩增，即患病TCR文库。在一些实施方案中，使用简并引物扩增Vα和Vβ的基因库，如通过在从人获得的样品(如T细胞)中进行RT-PCR。在一些实施方案中，scTv文库可以从天然Vα和Vβ文库组装，其中扩增的产物被克隆或组装以通过接头分开。取决于受试者和细胞的来源，所述文库可以是HLA等位基因特异性的。可替代地，在一些实施方案中，TCR文库可以通过亲本或支架TCR分子的诱变或多样化产生。在一些方面，使TCR经历例如α或β链的定向进化，如通过诱变来进行。在一些方面，TCR的CDR内的特定残基被改变。在一些实施方案中，可以通过亲和力成熟来修饰选择的TCR。在一些实施方案中，可以选择抗原特异性T细胞，如通过筛选以评估针对所述肽的CTL活性。在一些方面，可以选择例如存在于抗原特异性T细胞上的TCR，如通过对抗原的结合活性(例如特定亲和力或亲合力)来选择。
在一些实施方案中，TCR或其抗原结合部分是已经修饰或工程化的。在一些实施方案中，使用定向进化方法来产生具有改变的特性如具有较高的对特定MHC-肽复合物的亲和力的TCR。在一些实施方案中，通过展示方法实现定向进化，所述展示方法包括但不限于酵母展示(Holler等人(2003)Nat Immunol,4,55-62；Holler等人(2000)Proc Natl Acad SciU S A,97,5387-92)；噬菌体展示(Li等人(2005)Nat Biotechnol,23,349-54)或T细胞展示(Chervin等人(2008)J Immunol Methods,339,175-84)。在一些实施方案中，展示方法涉及工程化或修饰已知的亲本或参考TCR。例如，在一些情况下，野生型TCR可以用作模板以用于产生诱变的TCR，其中CDR的一个或多个残基被突变，并且选择具有所需改变的特性(如对所需靶抗原具有更高的亲和力)的突变体。
在一些实施方案中，用于产生或产生目的TCR的靶多肽的肽是已知的或者可以容易地鉴定。在一些实施方案中，适用于产生TCR或抗原结合部分的肽可以基于目标靶多肽(如下文所述的靶多肽)中HLA限制性基序的存在来确定。在一些实施方案中，使用可用的计算机预测模型来鉴定肽。在一些实施方案中，对于预测MHC I类结合位点，此类模型包括但不限于ProPred1(Singh和Raghava(2001)Bioinformatics 17(12):1236-1237)和SYFPEITHI(参见Schuler等人(2007)Immunoinformatics Methods in MolecularBiology,409(1):75-93 2007)。在一些实施方案中，MHC限制性表位是HLA-A0201，其在所有高加索人的约39％-46％中表达，并因此代表用于制备TCR或其他MHC-肽结合分子的MHC抗原的合适选择。
已知使用计算机预测模型的HLA-A0201结合基序和蛋白酶体和免疫蛋白酶体的切割位点。对于预测MHC I类结合位点，此类模型包括但不限于ProPred1(更详细地描述于以下文献中：Singh和Raghava,ProPred:prediction of HLA-DR bindingsites.BIOINFORMATICS 17(12):1236-12372001)和SYFPEITHI(参见Schuler等人SYFPEITHI,Database for Searching and T-Cell Epitope Prediction.，Immunoinformatics Methods in Molecular Biology,第409卷(1):75-93 2007)。
在一些实施方案中，TCR或其抗原结合部分可以是重组产生的天然蛋白质或其突变形式(其中一种或多种特性(如结合特征)已经被改变)。在一些实施方案中，TCR可以来源于各种动物物种之一，如人、小鼠、大鼠或其他哺乳动物。TCR可以是细胞结合的或呈可溶形式。在一些实施方案中，出于所提供的方法的目的，TCR呈在细胞的表面上表达的细胞结合形式。
在一些实施方案中，TCR是全长TCR。在一些实施方案中，TCR是抗原结合部分。在一些实施方案中，TCR是二聚TCR(dTCR)。在一些实施方案中，TCR是单链TCR(sc-TCR)。在一些实施方案中，dTCR或scTCR具有如WO 03/020763、WO 04/033685、WO 2011/044186中所述的结构。
在一些实施方案中，TCR含有对应于跨膜序列的序列。在一些实施方案中，TCR确实含有对应于胞质序列的序列。在一些实施方案中，TCR能够与CD3形成TCR复合物。在一些实施方案中，任何TCR(包括dTCR或scTCR)可以与在T细胞的表面上产生活性TCR的信号传导结构域连接。在一些实施方案中，TCR在细胞的表面上表达。
在一些实施方案中，dTCR含有第一多肽(其中对应于TCRα链可变区序列的序列与对应于TCRα链恒定区细胞外序列的序列的N末端融合)和第二多肽(其中对应于TCRβ链可变区序列的序列与对应于TCRβ链恒定区细胞外序列的序列的N末端融合)，所述第一和第二多肽通过二硫键连接。在一些实施方案中，所述键可以对应于天然二聚αβTCR中存在的天然链间二硫键。在一些实施方案中，所述链间二硫键不存在于天然TCR中。例如，在一些实施方案中，可以将一个或多个半胱氨酸掺入dTCR多肽对的恒定区细胞外序列中。在一些情况下，可能需要天然和非天然二硫键。在一些实施方案中，TCR含有跨膜序列以锚定至膜。
在一些实施方案中，dTCR含有TCRα链(含有可变α结构域、恒定α结构域和附接至恒定α结构域C末端的第一二聚化基序)和TCRβ链(包含可变β结构域、恒定β结构域和附接至恒定β结构域C末端的第一二聚化基序)，其中所述第一和第二二聚化基序易于相互作用以在第一二聚化基序的氨基酸与第二二聚化基序的氨基酸之间形成共价键，从而将TCRα链与TCRβ链连接在一起。
在一些实施方案中，TCR是scTCR。通常，可以使用已知的方法产生scTCR，参见例如，Soo Hoo,W.F.等人PNAS(USA)89,4759(1992)；Wülfing,C.和Plückthun,A.,J.Mol.Biol.242,655(1994)；Kurucz,I.等人PNAS(USA)90 3830(1993)；国际公开的PCT号WO 96/13593、WO 96/18105、WO 99/60120、WO 99/18129、WO 03/020763、WO 2011/044186；和Schlueter,C.J.等人J.Mol.Biol.256,859(1996)。在一些实施方案中，scTCR含有引入的非天然链间二硫键以促进TCR链的缔合(参见例如，国际公开PCT号WO 03/020763)。在一些实施方案中，scTCR是非二硫键连接的截短的TCR，其中与其C末端融合的异源亮氨酸拉链促进链缔合(参见例如国际公开PCT号WO 99/60120)。在一些实施方案中，scTCR含有经由肽接头与TCRβ可变结构域共价连接的TCRα可变结构域(参见例如，国际公开PCT号WO 99/18129)。
在一些实施方案中，scTCR含有由对应于TCRα链可变区的氨基酸序列构成的第一区段、由对应于TCRβ链可变区序列的氨基酸序列构成的第二区段(融合至对应于TCRβ链恒定结构域细胞外序列的氨基酸序列的N末端)和将第一区段的C末端连接至第二区段的N末端的接头序列。
在一些实施方案中，scTCR含有第一区段(其由与α链细胞外恒定结构域序列的N末端融合的α链可变区序列构成)和第二区段(其由与序列β链细胞外恒定和跨膜序列的N末端融合的β链可变区序列构成)以及任选地接头序列(其将第一区段的C末端连接至第二区段的N末端)。
在一些实施方案中，scTCR含有第一区段(其由与β链细胞外恒定结构域序列的N末端融合的TCRβ链可变区序列构成)和第二区段(其由与序列α链细胞外恒定和跨膜序列的N末端融合的α链可变区序列构成)以及任选地接头序列(其将第一区段的C末端连接至第二区段的N末端)。
在一些实施方案中，scTCR的连接第一和第二TCR区段的接头可以是能够形成单多肽链同时保留TCR结合特异性的任何接头。在一些实施方案中，接头序列可例如具有式-P-AA-P-，其中P是脯氨酸并且AA代表氨基酸序列，其中所述氨基酸是甘氨酸和丝氨酸。在一些实施方案中，第一和第二区段配对，使得其可变区序列被定向用于这种结合。因此，在一些情况下，接头具有足够的长度以跨越第一区段的C末端与第二区段的N末端之间的距离，或反之亦然，但是不能太长以阻断或减少scTCR与所述靶配体的结合。在一些实施方案中，接头可以含有为或为约10至45个氨基酸，如10至30个氨基酸或26至41个氨基酸残基，例如29、30、31或32个氨基酸。在一些实施方案中，接头具有式-PGGG-(SGGGG)5-P-，其中P是脯氨酸，G是甘氨酸，并且S是丝氨酸(SEQ ID NO:28)。在一些实施方案中，接头具有序列GSADDAKKDAAKKDGKS(SEQ ID NO:29)
在一些实施方案中，scTCR含有共价二硫键，其将α链的恒定结构域的免疫球蛋白区域的残基连接至β链的恒定结构域的免疫球蛋白区域的残基。在一些实施方案中，天然TCR中不存在链间二硫键。例如，在一些实施方案中，可以将一个或多个半胱氨酸掺入scTCR多肽的第一和第二区段的恒定区细胞外序列中。在一些情况下，可能需要天然和非天然二硫键。
在含有引入的链间二硫键的dTCR或scTCR的一些实施方案中，不存在天然二硫键。在一些实施方案中，用形成天然链间二硫键的一个或多个天然半胱氨酸取代另一残基，如取代丝氨酸或丙氨酸。在一些实施方案中，可以通过使第一和第二区段上的非半胱氨酸残基突变为半胱氨酸来形成引入的二硫键。TCR的示例性非天然二硫键描述于已公开的国际PCT号WO 2006/000830中。
在一些实施方案中，TCR或其抗原结合片段展现的对靶抗原的亲和力具有如下平衡结合常数：在或在约10-5与10-12M之间以及其中的所有单独值和范围。在一些实施方案中，靶抗原是MHC-肽复合物或配体。
在一些实施方案中，编码TCR(如α和β链)的一种或多种核酸可以通过PCR、克隆或其他合适的方法扩增，并且克隆到一种或多种合适的表达载体中。表达载体可以是任何合适的重组表达载体，并且可以用于转化或转染任何合适的宿主。合适的载体包括设计用于繁殖和扩增或用于表达或用于两者的那些，如质粒和病毒。
在一些实施方案中，载体可以是以下系列的载体：pUC系列(Fermentas LifeSciences)、pBluescript系列(Stratagene，加利福尼亚州拉霍亚)、pET系列(Novagen，威斯康星州麦迪逊)、pGEX系列(Pharmacia Biotech，瑞典乌普萨拉)或pEX系列(Clontech，加利福尼亚州帕洛阿尔托)。在一些情况下，也可以使用噬菌体载体，如λG10、λGT11、λZapII(Stratagene)、λEMBL4和λNM1149。在一些实施方案中，可以使用植物表达载体，并且包括pBI01、pBI101.2、pBI101.3、pBI121和pBIN19(Clontech)。在一些实施方案中，动物表达载体包括pEUK-Cl、pMAM和pMAMneo(Clontech)。在一些实施方案中，使用病毒载体，如逆转录病毒载体。
在一些实施方案中，可以使用标准重组DNA技术来制备所述重组表达载体。在一些实施方案中，载体可以含有调节序列，如转录和翻译起始和终止密码子，其对引入载体的宿主(例如，细菌、真菌，植物或动物)的类型具有特异性，酌情并考虑所述载体是基于DNA还是基于RNA。在一些实施方案中，载体可以含有非天然启动子，其可操作地连接至编码TCR或抗原结合部分(或其他MHC-肽结合分子)的核苷酸序列。在一些实施方案中，启动子可以是非病毒启动子或病毒启动子，如巨细胞病毒(CMV)启动子、SV40启动子、RSV启动子和在鼠干细胞病毒的长末端重复序列中发现的启动子。还设想其他已知的启动子。
在一些实施方案中，为了产生编码TCR的载体，将α和β链从表达目标TCR的T细胞克隆分离的总cDNA进行PCR扩增，并将其克隆到表达载体中。在一些实施方案中，将α和β链克隆到同一载体中。在一些实施方案中，将α和β链克隆到不同的载体中。在一些实施方案中，将所产生的α和β链掺入逆转录病毒(例如慢病毒)载体中。基因工程化细胞和产生细胞的方法
在一些实施方案中，所提供的方法涉及向患有疾病或病症的受试者施用表达重组抗原受体的细胞。用于引入基因工程化组分例如重组受体(例如CAR或TCR)的各种方法是熟知的，并且可以与所提供的方法和组合物一起使用。示例性方法包括用于转移编码受体的核酸的那些，包括通过病毒(例如，逆转录病毒或慢病毒)、转导、转座子和电穿孔。
表达受体并通过所提供的方法施用的细胞包括工程化细胞。基因工程通常涉及将编码重组或工程化组分的核酸引入含有细胞的组合物中，如通过逆转录病毒转导、转染或转化。
C.嵌合自身抗体受体(CAAR)
在一些实施方案中，由与所提供的方法、用途、制品和组合物结合使用的工程化细胞表达的重组受体是嵌合自身抗体受体(CAAR)。在一些实施方案中，CAAR对自身抗体具有特异性。在一些实施方案中，表达CAAR的细胞(如工程化以表达CAAR的T细胞)可以用于特异性地结合并杀伤表达自身抗体的细胞，但不杀伤表达正常抗体的细胞。在一些实施方案中，表达CAAR的细胞可以用于治疗与自身抗原的表达相关的自身免疫性疾病，例如自身免疫性疾病。在一些实施方案中，表达CAAR的细胞可以靶向最终产生自身抗体并在其细胞表面上展示自身抗体的B细胞，将这些B细胞标记为用于治疗性干预的疾病特异性靶标。在一些实施方案中，CAAR表达细胞可以用于通过使用抗原特异性嵌合自身抗体受体靶向引起疾病的B细胞，有效靶向和杀伤自身免疫性疾病中的致病性B细胞。在一些实施方案中，重组受体是CAAR，如美国专利申请公开号US 2017/0051035中所述的任一种。
在一些实施方案中，CAAR包含自身抗体结合结构域、跨膜结构域和细胞内信号传导区。在一些实施方案中，细胞内信号传导区包含细胞内信号传导结构域。在一些实施方案中，细胞内信号传导结构域是或包含初级信号传导结构域、能够在T细胞中诱导初级激活信号的信号传导结构域、T细胞受体(TCR)组分的信号传导结构域和/或包含免疫受体酪氨酸激活基序(ITAM)的信号传导结构域。在一些实施方案中，细胞内信号传导区包含次级或共刺激信号传导区(次级细胞内信号传导区)。
在一些实施方案中，自身抗体结合结构域包含自身抗原或其片段。自身抗原的选择可以取决于所靶向的自身抗体的类型。例如，自身抗原的选择可能是由于其识别与特定疾病状态(例如自身免疫性疾病，例如自身抗体介导的自身免疫性疾病)相关的靶细胞(例如B细胞)上的自身抗体。在一些实施方案中，自身免疫性疾病包括寻常型天疱疮(PV)。示例性自身抗原包括桥粒芯糖蛋白1(Dsg1)和Dsg3。
D.多靶向
在一些实施方案中，与所提供的方法、用途、制品和组合物结合使用的细胞包括采用多靶向策略的细胞，所述多靶向策略如在所述细胞上表达两种或更多种基因工程化受体，每种基因工程化受体识别相同或不同的抗原，并且通常各自包括不同的细胞内信号传导组分。此类多靶向策略描述于例如以下文献中：国际专利申请公开号WO 2014055668 A1(描述激活和共刺激CAR的组合，例如，靶向在脱靶(例如，正常细胞)上单独存在，但仅在要治疗的疾病或病症的细胞上一起存在的两种不同抗原)和Fedorov等人,Sci.Transl.Medicine,5(215)(2013)(描述表达激活和抑制性CAR的细胞，如其中激活CAR结合至在正常或未患病细胞和要治疗的疾病或病症的细胞二者都上表达的一种抗原，并且抑制性CAR结合至仅在正常细胞或不需要治疗的细胞上表达的另一种抗原的那些)。
例如，在一些实施方案中，细胞包括表达第一基因工程化抗原受体(例如，CAR或TCR)的受体，其通常在与由第一受体识别的抗原(例如，第一抗原)特异性地结合后能够诱导激活或刺激信号至所述细胞。在一些实施方案中，所述细胞还包括第二基因工程化抗原受体(例如，CAR或TCR)，例如嵌合共刺激受体，所述受体通常在特异性结合至由第二受体识别的第二抗原后，能够将共刺激信号诱导至免疫细胞。在一些实施方案中，第一抗原与第二抗原是相同的。在一些实施方案中，第一抗原与第二抗原是不同的。
在一些实施方案中，第一和/或第二基因工程化抗原受体(例如CAR或TCR)能够诱导激活信号至所述细胞。在一些实施方案中，受体包括含有ITAM或ITAM样基序的细胞内信号传导组分。在一些实施方案中，由第一受体诱导的激活涉及信号转导或细胞中蛋白质表达的变化，导致启动免疫应答(例如ITAM磷酸化)和/或启动ITAM介导的信号转导级联、形成免疫突触和/或所结合受体(例如CD4或CD8等)附近的分子的聚簇、激活一种或多种转录因子(例如NF-κB和/或AP-1)、和/或诱导因子(例如细胞因子)的基因表达、增殖和/或存活。
在一些实施方案中，第一和/或第二受体包括共刺激受体的细胞内信号传导结构域或区域，所述共刺激受体例如CD28、CD137(4-1BB)、OX40和/或ICOS。在一些实施方案中，第一受体和第二受体包括不同的共刺激受体的细胞内信号传导结构域。在一个实施方案中，第一受体含有CD28共刺激信号传导区，并且第二受体含有4-1BB共刺激信号传导区，或反之亦然。
在一些实施方案中，第一和/或第二受体包括含有ITAM或ITAM样基序的细胞内信号传导结构域和共刺激受体的细胞内信号传导结构域。
在一些实施方案中，第一受体含有包含ITAM或ITAM样基序的细胞内信号传导结构域，并且第二受体含有共刺激受体的细胞内信号传导结构域。与在相同细胞中诱导的激活信号组合的共刺激信号是导致免疫应答的共刺激信号，所述免疫应答例如为稳健且持续的免疫应答，例如增加的基因表达，细胞因子和其他因子的分泌，以及T细胞介导的效应子功能(如细胞杀伤)。
在一些实施方案中，单独的第一受体的连接和单独的第二受体的连接都不会诱导稳健的免疫应答。在一些方面，如果仅连接一个受体，则细胞变得耐受抗原或对抗原无应答，或被抑制，和/或不被诱导增殖或分泌因子或实现效应子功能。然而，在一些此类实施方案中，在连接多个受体时，如在遇到表达第一和第二抗原的细胞时，实现所需应答，如完全免疫激活或刺激，例如如通过一种或多种细胞因子的分泌、增殖、持久性和/或执行免疫效应子功能(如靶细胞的细胞毒性杀伤)所指示的。
在一些实施方案中，两种受体分别将激活和抑制信号诱导至细胞，使得一种受体与其抗原的结合激活细胞或诱导反应，但是第二抑制性受体与其抗原的结合诱导了抑制或减弱所述反应的信号。例子是激活CAR与抑制性CAR或iCAR的组合。例如，可以使用这种策略，其中激活CAR结合在疾病或病症中表达但也在正常细胞上表达的抗原，并且抑制性受体结合在正常细胞上表达但不在疾病或病症的细胞上表达的单独抗原。
在一些实施方案中，多靶向策略用于以下情况：其中与特定疾病或病症相关的抗原在未患病细胞上表达和/或在工程化细胞本身上表达，所述表达为瞬时表达(例如，在与基因工程化相关的刺激后)或永久表达。在此类情况下，通过需要连接两个分开的和单独特异性抗原受体，可以改善特异性、选择性和/或功效。
在一些实施方案中，多种抗原(例如，第一和第二抗原)在所靶向的细胞、组织或者疾病或病症上(如在癌细胞上)表达。在一些方面，细胞、组织、疾病或病症是多发性骨髓瘤或多发性骨髓瘤细胞。在一些实施方案中，多种抗原中的一种或多种通常也在不需要用细胞疗法靶向的细胞(例如正常或未患病细胞或组织，和/或工程化细胞本身)上表达。在此类实施方案中，通过需要连接多个受体以实现细胞的应答，实现特异性和/或功效。
E.工程化细胞的方法
在特定的实施方案中，工程化细胞通过如下过程来产生，所述过程从一种或多种输入组合物和/或从单个生物样品产生富集的T细胞的输出组合物。在某些实施方案中，输出组合物含有表达重组受体(例如，CAR，如抗CD19 CAR)的细胞。在特定实施方案中，输出组合物的细胞适合于作为疗法(例如自体细胞疗法)施用至受试者。在一些实施方案中，输出组合物是富集的CD4+和CD8+ T细胞的组合物。
在一些实施方案中，用于生成或产生工程化细胞的过程是通过如下过程来进行的，所述过程包括以下中的一些或全部步骤：收集或获得生物样品；从生物样品中分离、选择或富集输入细胞；冷冻保存和储存输入细胞；解冻和/或在刺激条件下孵育输入细胞；将所刺激的细胞进行工程化以表达或含有重组多核苷酸，例如编码重组受体如CAR的多核苷酸；将工程化细胞培育至例如阈值量、密度或扩增；将培育的细胞配制在输出组合物中；和/或冷冻保存和储存配制的输出细胞，直到细胞被释放用于输注和/或适合于被施用至受试者。在某些实施方案中，所述过程是用富集的T细胞的两种或更多种输入组合物来进行，如单独CD4+组合物和单独CD8+组合物，所述组合物是从相同的起始或初始生物样品单独处理和工程化，并且以CD4+与CD8+ T细胞限定比率(例如，1:1比率)再输注回受试者体内。在一些实施方案中，富集的T细胞是或包括工程化T细胞，例如，被转导以表达重组受体的T细胞。
在特定实施方案中，表达重组受体(例如抗CD19 CAR)的工程化细胞的输出组合物是从细胞的初始和/或输入组合物产生。在一些实施方案中，输出组合物是富集的T细胞、富集的CD4+ T细胞和/或富集的CD8+ T细胞的组合物(在下文也分别称为富集的T细胞的组合物、富集的CD4+ T细胞的组合物和富集的CD8+ T细胞的组合物)。在一些实施方案中，富集CD4+ T细胞的组合物含有至少60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、98％、99％或99.9％CD4+ T细胞。在特定实施方案中，富集的CD4+ T细胞的组合物含有100％CD4+ T细胞，含有约100％CD4+ T细胞。在某些实施方案中，富集的T细胞的组合物包括或含有小于20％、小于10％、小于5％、小于1％、小于0.1％或小于0.01％CD8+ T细胞，和/或不含CD8+ T细胞，和/或不含或基本上不含CD8+ T细胞。在一些实施方案中，细胞群基本上由CD4+ T细胞组成。在一些实施方案中，富集CD8+ T细胞的组合物含有至少75％、80％、85％、90％、95％、98％、99％或99.9％CD8+ T细胞，或者含有或含有约100％CD8+ T细胞。在某些实施方案中，富集的CD8+ T细胞的组合物包括或含有小于20％、小于10％、小于5％、小于1％、小于0.1％或小于0.01％CD4+T细胞，和/或不含CD4+ T细胞，和/或不含或基本上不含CD4+ T细胞。在一些实施方案中，细胞群基本上由CD8+ T细胞组成。
在某些实施方案中，用于产生工程化细胞的过程还可以包括以下中的一种或多种：激活和/或刺激细胞，例如输入组合物的细胞；和/或将激活和/或刺激的细胞进行基因工程化，例如以通过转导或转染引入编码重组蛋白的多核苷酸；和/或例如在促进增殖和/或扩增的条件下，培育工程化细胞。在特定实施方案中，所提供的方法可以与收获、收集和/或配制在细胞已经被孵育、激活、刺激、工程化、转导、转染和/或培育之后产生的输出组合物结合使用。
在一些实施方案中，通过用于选择、分离、激活、刺激、扩增、培育和/或配制细胞的过程产生或生成根据所提供的方法和用途使用的工程化细胞，如表达如所描述的抗CD19CAR的那些。在一些实施方案中，此类方法包括如所描述的任何一种。
在一些实施方案中，通过如例如WO 2019/089855和WO 2015/164675中所述的示例性过程产生或生成根据所提供的方法和用途使用的工程化细胞，如表达如所述的抗CD19CAR的那些。
在一些任何实施方案中，用于生成、产生或制造工程化细胞(如表达如所述的抗CD19 CAR的那些)或包含此类细胞的组合物(如包含各自表达相同抗CD19嵌合抗原受体(CAR)的工程化CD4+ T细胞和工程化CD8+T细胞的组合物)的示例性过程涉及使富集的CD4+和富集的CD8+细胞群单独经历过程步骤。在用于生成或制造工程化细胞的示例性过程的一些方面，CD4+和CD8+细胞单独选自人外周血单核细胞(PBMC)，例如，通过白细胞单采术获得者，从而生成单独的富集的CD4+和富集的CD8+细胞组合物。在一些方面，可以冷冻保存此类细胞。在一些方面，随后可以将CD4+和CD8+组合物解冻，并使其单独经历用于刺激、转导和扩增的步骤。
在用于生成或制造工程化细胞的示例性过程的一些方面，例如，在与抗CD3和抗CD28抗体偶联的聚苯乙烯包被的顺磁珠的存在下(如珠与细胞的比率为1:1)，对解冻的CD4+和CD8+细胞进行单独刺激。在一些方面，在含有人重组IL-2、人重组IL-15和N-乙酰半胱氨酸(NAC)的培养基中进行刺激。在一些方面，CD4+细胞的细胞培养基还可以包括人重组IL-7。
在用于生成或制造工程化细胞的示例性过程的一些方面，在引入珠后，将CD4+和CD8+细胞用编码相同CAR(如相同抗CD19 CAR)的慢病毒载体单独转导。在一些方面，CAR可以含有源自鼠抗体的抗CD19 scFv、免疫球蛋白间隔子、源自CD28的跨膜结构域、源自4-1BB的共刺激区域和CD3-ζ细胞内信号传导结构域。在一些方面，所述载体可以编码截短的受体，所述截短的受体用作CAR表达的替代标记并通过T2A序列至CAR构建体。在示例性过程的一些方面，在10μg/ml硫酸鱼精蛋白的存在下转导细胞。
在用于生成或制造工程化细胞的示例性过程的一些方面，在转导后，通过暴露于磁场从细胞组合物去除珠。在一些方面，通过生物反应器(例如，Xuri W25生物反应器)在连续混合和氧转移的情况下将CD4+和CD8+细胞组合物单独培育以供扩增。在一些情况下，将泊洛沙姆添加至培养基。在一些方面，在IL-2和IL-15的存在下培育CD4+和CD8+细胞组合物二者。在一些方面，CD4+细胞培养基还包括IL-7。在一些情况下，在收获前，将CD4+和CD8+细胞各自培育至4倍扩增。在一些方面，在达到阈值后一天，可以将来自每种组合物的细胞单独收获、配制并冷冻保存。在一些方面，用于生成、产生或制造工程化细胞(如表达如所述的抗CD19 CAR的那些)或包含此类细胞的组合物(如包含各自表达相同抗CD19嵌合抗原受体(CAR)的工程化CD4+ T细胞和工程化CD8+ T细胞的组合物)的示例性过程包括下表11中所述的那些。
表11：用于生成CD4+和CD8+CAR-T细胞的示例性过程
Figure BDA0003183097650001941
Figure BDA0003183097650001951
*大约
在其他方面，用于生成、产生或制造工程化细胞或包含此类细胞的组合物的不同示例性过程包括如下过程，其与上文示例性过程的不同之处在于：在刺激期间不向培养基中添加NAC；CD4+细胞培养基不含IL-2；以3:1的珠与细胞的比率刺激细胞；用更高浓度的硫酸鱼精蛋白转导细胞；在约第7天进行珠去除；并且在静态设定下，即在不进行连续混合或灌注(例如，半连续和/或逐步灌注)且没有泊洛沙姆的情况下进行扩增。
在一些实施方案中，富集的CD4+ T细胞的至少一种单独组合物和富集的CD8+ T细胞的至少一种单独组合物是从单一生物样品(例如，来自同一供体(如患者或健康个体)的PBMC或其他白细胞样品)中分离、选择、富集或获得的。在一些实施方案中，富集的CD4+ T细胞的单独组合物和富集的CD8+ T细胞的单独组合物来源于(例如，最初分离、选择和/或富集自)同一生物样品，如从单一受试者获得、收集和/或获取的单一生物样品。在一些实施方案中，首先使生物样品经历CD4+ T细胞的选择，其中保留阴性和阳性级分，并且使阴性级分进一步经历CD8+ T细胞的选择。在其他实施方案中，首先使生物样品经历CD8+ T细胞的选择，其中保留阴性和阳性级分，并且使阴性级分进一步经历CD4+ T细胞的选择。在一些实施方案中，选择方法如国际PCT公开号WO 2015/164675中所述来进行。在一些实施方案中，选择方法如国际PCT公开号WO 2019/089855中所述来进行。在一些方面，首先针对CD8+ T细胞对生物样品进行阳性选择，以生成富集的CD8+ T细胞的至少一种组合物，然后针对CD4+ T细胞对阴性级分进行阳性选择，以生成富集的CD4+ T细胞的至少一种组合物，使得富集的CD8+ T细胞的至少一种组合物和富集的CD4+ T细胞的至少一种组合物是来自同一生物样品(例如，来自同一供体患者或健康个体)的单独组合物。在一些方面，将富集的T细胞的两种或更多种单独组合物(例如，至少一种是富集的CD4+ T细胞的组合物，并且至少一种是来自同一供体的富集的CD8+ T细胞的单独组合物)在冷冻保存介质中单独冷冻，例如，冷冻保护或冷冻保存。
在一些方面，通过与刺激试剂接触(例如，通过与用于T细胞激活的CD3/CD28缀合的磁珠一起孵育)，激活和/或刺激富集的T细胞的两种或更多种单独组合物(例如，至少一种是富集的CD4+ T细胞的组合物，并且至少一种是来自同一生物样品的富集的CD8+ T细胞的单独组合物)。在一些方面，例如，使用编码重组蛋白(例如CAR)的病毒载体对每种激活/刺激细胞组合物进行工程化、转导和/或转染，以在每种细胞组合物的CD4+ T细胞和CD8+ T细胞中表达相同的重组蛋白。在一些方面，所述方法包括从细胞组合物去除刺激试剂，例如磁珠。在一些方面，将含有工程化CD4+ T细胞的细胞组合物和含有工程化CD8+ T细胞的细胞组合物单独培育，例如，用于单独扩增其中的CD4+ T细胞和CD8+ T细胞群体。在某些实施方案中，例如通过在配制缓冲液中洗涤细胞组合物来收获和/或收集和/或配制来自培育的细胞组合物。在某些实施方案中，将包含CD4+ T细胞的配制的细胞组合物和包含CD8+ T细胞的配制的细胞组合物在冷冻保存介质中冷冻，例如，冷冻保护或冷冻保存。在一些方面，每种配制品中的工程化CD4+ T细胞和CD8+ T细胞来源于同一供体或生物样品，并且表达相同的重组蛋白(例如，CAR，如抗CD19 CAR)。在一些方面，将单独工程化CD4+配制品和单独工程化CD8+配制品以限定比率(例如，1:1)施用至有需要的受试者，如相同供体。
1.用于基因工程化的细胞和细胞制剂
在一些实施方案中，与所提供的方法、用途、制品或组合物结合使用的细胞(如T细胞)是已经进行基因工程化以表达本文所述的重组受体(例如，CAR或TCR)的细胞。在一些实施方案中，工程化细胞是在细胞疗法(例如，过继细胞疗法)的情况下使用。在一些实施方案中，工程化细胞是免疫细胞。在一些实施方案中，工程化细胞是T细胞，如CD4+或CD8+ T细胞。
在一些实施方案中，核酸(如编码重组受体的核酸)是异源的，即通常在细胞或从所述细胞获得的样品中不存在，如从另一种生物体或细胞获得的核酸，所述核酸通常在被工程化的细胞和/或衍生出这种细胞的生物体中没有发现。在一些实施方案中，核酸不是天然存在的如自然界中未发现的核酸，包括包含编码来自多种不同细胞类型的各种结构域的核酸的嵌合组合的核酸。
细胞通常是真核细胞，例如哺乳动物细胞，并且通常是人细胞。在一些实施方案中，所述细胞源自血液、骨髓、淋巴或淋巴器官，是免疫系统的细胞，如先天或适应性免疫的细胞，例如骨髓或淋巴细胞，包括淋巴细胞，通常为T细胞和/或NK细胞。其他示例性细胞包括干细胞，如多潜能干细胞和多能干细胞，包括诱导多能干细胞(iPSC)。细胞通常是原代细胞，如直接从受试者分离和/或从受试者分离并冷冻的那些原代细胞。在一些实施方案中，细胞包括T细胞或其他细胞类型的一个或多个子集，如整个T细胞群、CD4+细胞、CD8+细胞及其亚群，如由以下各项所定义的那些亚群：功能、激活状态、成熟度、分化的可能性、扩增、再循环、定位和/或持久能力、抗原特异性、抗原受体类型、在特定器官或区室中的存在、标记或细胞因子分泌特征和/或分化程度。关于要治疗的受试者，细胞可以是同种异体的和/或自体的。所述方法包括现成的方法。在一些方面，如对于现有技术，所述细胞是多能的和/或多潜能的，如干细胞，如诱导多能干细胞(iPSC)。在一些实施方案中，所述方法包括从受试者分离细胞、制备、处理、培养和/或将它们工程化，并在冷冻保存之前或之后将它们重新引入同一受试者中。
T细胞和/或CD4+和/或CD8+ T细胞的亚型和亚群包括幼稚T(TN)细胞、效应T细胞(TEFF)、记忆T细胞及其亚型(如干细胞记忆T(TSCM)、中枢记忆T(TCM)，效应记忆T(TEM)或终末分化效应记忆T细胞)、肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)、未成熟T细胞、成熟T细胞、辅助T细胞、细胞毒性T细胞、粘膜相关不变T(MAIT)细胞、天然存在和适应性调节T(Treg)细胞、辅助T细胞(如TH1细胞、TH2细胞、TH3细胞、TH17细胞、TH9细胞、TH22细胞、滤泡辅助细胞T细胞)、α/βT细胞和δ/γT细胞。
在一些实施方案中，所述细胞是天然杀伤(NK)细胞。在一些实施方案中，所述细胞是单核细胞或粒细胞，例如，骨髓细胞、巨噬细胞、嗜中性粒细胞、树突细胞、肥大细胞、嗜酸性粒细胞和/或嗜碱性粒细胞。
在一些实施方案中，所述细胞包括经由基因工程引入的一种或多种核酸，从而表达此类核酸的重组或基因工程化产物。在一些实施方案中，核酸是异源的，即通常不存在于细胞或从细胞获得的样品中，如从另一种生物或细胞获得的核酸，例如，所述核酸通常不在被工程化的细胞和/或衍生这种细胞的生物中发现。在一些实施方案中，核酸不是天然存在的如自然界中未发现的核酸，包括包含编码来自多种不同细胞类型的各种结构域的核酸的嵌合组合的核酸。
在一些实施方案中，工程化细胞的制备包括一个或多个培养和/或制备步骤。用于引入编码转基因受体如CAR的核酸的细胞可以从样品(如生物样品，例如从受试者获得或来源于受试者的生物样品)分离。在一些实施方案中，分离出细胞的受试者是患有疾病或病症或需要细胞疗法或将对其施用细胞疗法的受试者。在一些实施方案中，所述受试者是需要特定治疗性干预(如过继细胞疗法，其中细胞被分离、处理和/或工程化)的人。
因此，在一些实施方案中，细胞是原代细胞，例如原代人细胞。样品包括直接取自受试者的组织、流体和其他样品，以及从一个或多个处理步骤得到的样品，所述处理步骤如分离、离心、基因工程化(例如，用病毒载体转导)、洗涤和/或孵育。生物样品可以是直接从生物来源获得的样品或经过处理的样品。生物样品包括但不限于体液(如血液、血浆、血清、脑脊液、滑液、尿液和汗液)、组织和器官样品，包括源自它们的处理样品。
在一些方面，衍生出或分离细胞的样品是血液或源自血液的样品，或者是或源自单采术或白细胞单采术产物。示例性样品包括全血、外周血单核细胞(PBMC)、白细胞、骨髓、胸腺、组织活检、肿瘤、白血病、淋巴瘤、淋巴结、肠相关淋巴组织、粘膜相关淋巴组织、脾、其他淋巴组织、肝、肺、胃、肠、结肠、肾、胰腺、乳房、骨、前列腺、子宫颈、睾丸、卵巢、扁桃体或其他器官和/或源自它们的细胞。在细胞疗法(例如，过继细胞疗法)的情况下，样品包括来自自体和同种异体来源的样品。
在一些实施方案中，细胞源自细胞系，例如T细胞系。在一些实施方案中，细胞获得自异种来源，例如获得自小鼠、大鼠、非人灵长类动物和猪。
在一些实施方案中，细胞的分离包括一个或多个制备和/或基于非亲和力的细胞分离步骤。在一些例子中，将细胞在一种或多种试剂的存在下洗涤、离心和/或孵育，例如以去除不需要的组分、针对所需组分进行富集、裂解或去除对特定试剂敏感的细胞。在一些例子中，细胞基于一种或多种特性来分离，所述特性如密度、粘附特性、大小、对特定组分的敏感性和/或抗性。
在一些例子中，例如通过单采术或白细胞单采术获得来自受试者的循环血液的细胞。在一些方面，样品含有淋巴细胞(包括T细胞、单核细胞、粒细胞、B细胞)、其他有核白细胞、红细胞和/或血小板，并且在一些方面含有除了红细胞和血小板以外的细胞。
在一些实施方案中，洗涤从受试者收集的血细胞，例如以去除血浆级分并将细胞置于适当的缓冲液或介质中以用于后续处理步骤。在一些实施方案中，用磷酸盐缓冲盐水(PBS)洗涤细胞。在一些实施方案中，洗涤溶液缺乏钙和/或镁和/或许多或所有二价阳离子。在一些方面，根据制造商的说明书，通过半自动“流通”离心机(例如，Cobe 2991细胞处理器，Baxter)完成洗涤步骤。在一些方面，根据制造商的说明书，通过切向流过滤(TFF)完成洗涤步骤。在一些实施方案中，在洗涤后将细胞重悬于多种生物相容的缓冲液中，所述缓冲液，如例如不含Ca++/Mg++的PBS。在某些实施方案中，去除血细胞样品的组分并将细胞直接重悬于培养基中。
在一些实施方案中，所述方法包括基于密度的细胞分离方法，如通过裂解红细胞并通过Percoll或Ficoll梯度离心而从外周血制备白细胞。
在一些实施方案中，至少一部分选择步骤包括将细胞与选择试剂一起孵育。与一种或多种选择试剂一起孵育，例如作为选择方法的一部分可以使用一种或多种选择试剂来进行，以用于基于一种或多种特定分子(如表面标记(例如表面蛋白)、细胞内标记或核酸)在细胞中或细胞上的表达或存在来选择一种或多种不同的细胞类型。在一些实施方案中，可以使用任何已知的利用一种或多种选择试剂基于此类标记进行分离的方法。在一些实施方案中，一种或多种选择试剂导致分离，所述分离是基于亲和力或免疫亲和力的分离。例如，在一些方面，选择包括与一种或多种试剂一起孵育，用于基于一种或多种标记(通常是细胞表面标记)的细胞表达或表达水平来分离细胞和细胞群，例如通过与特异性地结合至此类标记的抗体或结合配偶体一起孵育，之后通常进行洗涤步骤并分离已结合抗体或结合配偶体的细胞与未结合至抗体或结合配偶体的那些细胞。
在此类过程的一些方面，将一定体积的细胞与一定量的基于亲和力的所需选择试剂混合。基于免疫亲和力的选择可以使用任何系统或方法进行，所述系统或方法使得在分离的细胞与特异性结合至细胞上的标记的分子(例如，固体表面(例如颗粒)上的抗体或其他结合配偶体)之间产生有利的能量相互作用。在一些实施方案中，方法是使用颗粒(如珠，例如磁珠)进行，所述颗粒包被有对细胞的标记具有特异性的选择剂(例如抗体)。可以将颗粒(例如珠)与细胞在容器(如管或袋)中一起孵育或混合，同时振荡或混合，其中细胞密度与颗粒(例如，珠)的比率是恒定的，以帮助促进能量上有利的相互作用。在其他情况下，所述方法包括选择细胞，其中所述选择的全部或一部分是在离心室的内部空腔中进行，例如在离心旋转下进行。在一些实施方案中，将细胞与选择试剂(如基于免疫亲和力的选择试剂)一起孵育是在离心室中进行。在某些实施方案中，使用在国际专利申请公开号WO 2009/072003或US 20110003380 A1中所述的系统、装置或设备进行分离或分开。在一个例子中，所述系统是如国际公开号WO 2016/073602中所述的系统。
在一些实施方案中，通过在离心室的空腔中进行此类选择步骤或其部分(例如，与抗体包被的颗粒(例如磁珠)一起孵育)，用户能够控制某些参数，如各种溶液的体积、在加工期间溶液的添加及其时间安排，从而可以提供与其他可用方法相比的多种优势。例如，在孵育期间减少空腔中液体体积的能力可以增加选择中使用的颗粒(例如珠试剂)的浓度，并由此增加溶液的化学势，而不影响空腔中的细胞总数量。这又可以增强正在处理的细胞与用于选择的颗粒之间的成对相互作用。在一些实施方案中，例如，在与如本文所述的系统、线路和控制相关联时，在室中进行孵育步骤，允许用户在孵育期间的一个或多个所需时间实现对溶液的搅动，这也可以改进相互作用。
在一些实施方案中，至少一部分选择步骤是在离心室中进行，所述部分包括将细胞与选择试剂一起孵育。在此类过程的一些方面，将一定体积的细胞与一定量所需的基于亲和力的选择试剂混合，所述量远少于根据制造商的说明书在管或容器中进行类似选择用于选择相同细胞数量和/或细胞体积时通常所用的量。在一些实施方案中，所采用的一种或多种选择试剂的量是根据制造商的说明书在基于管或容器的孵育中针对相同细胞数量和/或相同细胞体积进行细胞选择所采用的一种或多种相同选择试剂的量的不超过5％、不超过10％、不超过15％、不超过20％、不超过25％、不超过50％、不超过60％、不超过70％或不超过80％。
在一些实施方案中，对于细胞的选择，例如基于免疫亲和力的选择，将细胞在室空腔中在组合物中孵育，所述组合物还含有选择缓冲液，所述选择缓冲液含有选择试剂，所述选择试剂例如特异性结合至希望富集和/或耗尽的细胞上而不是组合物中其他细胞上的表面标记的分子，例如抗体，所述分子任选地偶联到支架，例如聚合物或表面，例如珠，例如磁珠，例如与对CD4和CD8具有特异性的单克隆抗体偶联的磁珠。在一些实施方案中，如所描述的，将选择试剂添加至室空腔中的细胞，所添加的量与在振荡或旋转的管中进行选择时，对相同数量的细胞或相同体积的细胞实现大致相同或类似的选择效率通常使用或将需要的选择试剂的量相比显著较小(例如不大于所述量的5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％或80％)。在一些实施方案中，在向细胞添加选择缓冲液和选择试剂的情况下进行孵育，以实现例如10mL至200mL试剂的孵育的目标体积，所述体积如至少或至少约10mL、20mL、30mL、40mL、50mL、60mL、70mL、80mL、90mL、100mL、150mL或200mL。在一些实施方案中，将选择缓冲液和选择试剂在添加至细胞前预混合。在一些实施方案中，将选择缓冲液和选择试剂单独添加至细胞。在一些实施方案中，选择孵育是在周期性温和混合条件下进行的，这可有助于促进能量上有利的相互作用，从而允许使用较少的总选择试剂来实现高选择效率。
在一些实施方案中，与选择试剂一起孵育的总持续时间是从或从约5分钟至6小时，如30分钟至3小时，例如，至少或至少约30分钟、60分钟、120分钟或180分钟。
在一些实施方案中，孵育通常在混合条件下进行，如在旋转的存在下，通常以相对低的力或速度旋转，如速度低于用于使细胞沉淀的速度，如从或从约600rpm至1700rpm(例如，为或约或至少600rpm、1000rpm或1500rpm或1700rpm)，如在室或其他容器的样品或壁处的一定RCF下，所述RCF为从或从约80g至100g(例如，为或约或至少80g、85g、90g、95g或100g)。在一些实施方案中，旋转是使用如下重复间隔来进行：以这种低速旋转，之后是休息时间段，例如旋转和/或休息1、2、3、4、5、6、7、8、9或10秒，如旋转大约1或2秒，然后休息大约5、6、7或8秒。
在一些实施方案中，这个过程是在与室为整体的完全封闭的系统内进行的。在一些实施方案中，这个过程(在一些方面，以及一个或多个另外的步骤，如洗涤含有细胞的样品(如单采术样品)的预先洗涤步骤)是以自动化方式进行，使得将细胞、试剂和其他组分在适当时间吸入和推出室并进行离心，以使用自动化程序在单一封闭系统中完成洗涤和结合步骤。
在一些实施方案中，在孵育和/或混合细胞和一种和/或多种选择试剂后，使所孵育的细胞经历分离，以基于一种或多种特定试剂的存在或不存在来选择细胞。在一些实施方案中，在同一封闭系统中进行分离，其中将细胞与选择试剂一起进行孵育。在一些实施方案中，在与选择试剂一起孵育后，将所孵育的细胞(包括其中已经结合选择试剂的细胞)转移到系统中用于基于免疫亲和力来分离细胞。在一些实施方案中，用于基于免疫亲和力的分离的系统是或含有磁分离柱。
在一些实施方案中，分离方法包括基于一种或多种特定分子(如表面标记(例如，表面蛋白)、细胞内标记或核酸)在细胞中的表达或存在分离不同细胞类型。在一些实施方案中，可以使用任何已知的基于此类标记的用于分离的方法。在一些实施方案中，分开是基于亲和力或基于免疫亲和力的分开。例如，在一些方面，分离包括基于所述细胞的一种或多种标记(通常为细胞表面标记)的表达或表达水平来分离细胞和细胞群，例如通过和与此类标记特异性结合的抗体或结合配偶体一起孵育，然后通常是洗涤步骤和从那些未与所述抗体或结合配偶体结合的细胞中分离已结合所述抗体或结合配偶体的细胞。
此类分离步骤可以基于阳性选择(其中保留已经结合所述试剂的细胞以供进一步使用)和/或阴性选择(其中保留未与所述抗体或结合配偶体结合的细胞)。在一些例子中，保留两种级分以供进一步使用。在一些方面，在没有可用于特异性鉴定异质群体中的细胞类型的抗体的情况下，阴性选择可能特别有用，使得最好基于由除所需群体之外的细胞表达的标记进行分离。
分离不需要导致100％富集或去除特定细胞群或表达特定标记的细胞。例如，对特定类型的细胞(如表达标记的那些)的阳性选择或富集是指增加此类细胞的数量或百分比，但不需要使不表达所述标记的细胞完全不存在。同样地，特定类型的细胞(如表达标记的那些)的阴性选择、去除或耗尽是指减少此类细胞的数量或百分比，但不需要导致所有此类细胞的完全去除。
在一些例子中，进行多轮分离步骤，其中来自一个步骤的阳性或阴性选择的级分经历另一个分离步骤，如随后的阳性或阴性选择。在一些例子中，单个分离步骤可以同时耗尽表达多种标记的细胞，如通过将细胞与多种抗体或结合配偶体(每种抗体或结合配偶体对被靶向用于阴性选择的标记具有特异性)一起孵育。同样地，通过将细胞与在各种细胞类型上表达的多种抗体或结合配偶体一起孵育，可以同时阳性选择多种细胞类型。
例如，在一些方面，T细胞的特定亚群(如对一种或多种表面标记呈阳性或高水平表达的细胞(例如，CD28+、CD62L+、CCR7+、CD27+、CD127+、CD4+、CD8+、CD45RA+和/或CD45RO+ T细胞))通过阳性或阴性选择技术来分离。
例如，可以使用抗CD3/抗CD28缀合的磁珠(例如，
Figure BDA0003183097650002031
M-450 CD3/CD28 T细胞扩增器)对CD3+、CD28+ T细胞进行阳性选择。
在一些实施方案中，通过经由阳性选择富集特定细胞群，或经由阴性选择耗尽特定细胞群来进行分离。在一些实施方案中，通过以下方式完成阳性或阴性选择：将细胞与特异性结合至一种或多种表面标记的一种或多种抗体或其他结合剂一起孵育，所述一种或多种表面标记分别在阳性或阴性选择的细胞上表达(标记+)或以相对较高的水平表达(标记高)。
在特定实施方案中，使生物样品(例如PBMC或其他白细胞的样品)经历CD4+ T细胞的选择，其中同时保留阴性和阳性级分。在某些实施方案中，CD8+ T细胞选自阴性级分。在一些实施方案中，使生物样品经历CD8+ T细胞的选择，其中同时保留阴性和阳性级分。在某些实施方案中，CD4+ T细胞选自阴性级分。
在一些实施方案中，通过在非T细胞(如B细胞、单核细胞或其他白细胞，如CD14)上表达的标记的阴性选择，将T细胞与PBMC样品分离。在一些方面，CD4+或CD8+选择步骤用于分离CD4+辅助T细胞和CD8+细胞毒性T细胞。通过对在一种或多种幼稚、记忆和/或效应T细胞亚群上表达或以相对较高程度表达的标记的阳性或阴性选择，可以将此类CD4+和CD8+群体进一步分选为亚群。
在一些实施方案中，如通过基于与相应子群体相关的表面抗原进行阳性或阴性选择，将CD8+细胞针对幼稚、中枢记忆、效应子记忆和/或中枢记忆干细胞进一步富集或耗尽。在一些实施方案中，针对中枢记忆T(TCM)细胞进行富集以增加功效，如以改善施用后的长期存活、扩增和/或植入，这在一些方面在此类亚群中特别稳健。参见Terakura等人(2012)Blood.1:72-82；Wang等人(2012)J Immunother.35(9):689-701。在一些实施方案中，组合富集TCM的CD8+ T细胞与CD4+ T细胞进一步增强功效。
在实施方案中，记忆T细胞存在于CD8+外周血淋巴细胞的CD62L+和CD62L-两个子集中。可以例如使用抗CD8和抗CD62L抗体将PBMC针对CD62L-CD8+和/或CD62L+CD8+级分进行富集或耗尽。
在一些实施方案中，对中枢记忆T(TCM)细胞的富集是基于CD45RO、CD62L、CCR7、CD28、CD3和/或CD127的阳性或高表面表达；在一些方面，它是基于表达或高度表达CD45RA和/或颗粒酶B的细胞的阴性选择。在一些方面，富集TCM细胞的CD8+群体的分离是通过耗尽表达CD4、CD14、CD45RA的细胞以及对表达CD62L的细胞的阳性选择或富集来进行的。在一个方面，中枢记忆T(TCM)细胞的富集从基于CD4表达所选择的阴性细胞级分开始进行，所述阴性细胞级分基于CD14和CD45RA的表达进行阴性选择且基于CD62L进行阳性选择。在一些方面这种选择是同时进行的，而在其他方面以任何顺序依次进行。在一些方面，用于制备CD8+细胞群或亚群的相同的基于CD4表达的选择步骤也用于生成CD4+细胞群或亚群，使得来自基于CD4的分离的阳性和阴性级分被保留并用于所述方法的后续步骤中，任选地在一个或多个其他阳性或阴性选择步骤之后。
在特定例子中，PBMC样品或其他白细胞样品进行CD4+细胞的选择，其中保留了阴性和阳性级分。然后使阴性级分经历基于CD14和CD45RA或CD19的表达的阴性选择，以及基于中枢记忆T细胞(如CD62L或CCR7)的标记特征的阳性选择，其中以任何顺序进行所述阳性和阴性选择。
通过鉴定具有细胞表面抗原的细胞群，将CD4+ T辅助细胞分类为幼稚、中枢记忆和效应细胞。CD4+淋巴细胞可以通过标准方法获得。在一些实施方案中，幼稚CD4+ T淋巴细胞是CD45RO-、CD45RA+、CD62L+、CD4+T细胞。在一些实施方案中，中枢记忆CD4+细胞是CD62L+且CD45RO+。在一些实施方案中，效应CD4+细胞是CD62L-且CD45RO-。
在一个例子中，为了通过阴性选择富集CD4+细胞，单克隆抗体混合剂通常包括针对CD14、CD20、CD11b、CD16、HLA-DR和CD8的抗体。在一些实施方案中，抗体或结合配偶体结合至固体支持物或基质(如磁珠或顺磁珠)，以允许分离细胞用于阳性和/或阴性选择。例如，在一些实施方案中，使用免疫磁性(或亲和磁性)分离技术来分开或分离细胞和细胞群(综述于以下文献中：Methods in Molecular Medicine,第58卷:Metastasis ResearchProtocols,第2卷:Cell Behavior In Vitro and In Vivo,第17-25页S.A.Brooks和U.Schumacher编辑
Figure BDA0003183097650002051
Humana Press Inc.,新泽西州托托瓦)。
在一些方面，将要分离的细胞的样品或组合物与小的可磁化或磁响应材料(如磁响应颗粒或微粒，如顺磁珠(例如像Dynalbeads或MACS珠))一起孵育。磁响应材料(例如，颗粒)通常直接或间接地附着于结合配偶体(例如，抗体)，所述结合配偶体与希望分离(例如，希望阴性地或阳性地选择)的一个细胞、多个细胞或细胞群上存在的分子(例如，表面标记)特异性结合。
在一些实施方案中，所述磁性颗粒或珠包含与特异性结合成员(如抗体或其他结合配偶体)结合的磁响应材料。有许多在磁分离方法中使用的熟知的磁响应材料。合适的磁性颗粒包括在Molday的美国专利号4,452,773和欧洲专利说明书EP 452342B中所述的那些，所述专利通过引用特此并入。胶体大小的颗粒(如在Owen美国专利号4,795,698；和Liberti等人的美国专利号5,200,084中所述的那些)是其他的例子。
孵育通常在如下条件下进行：由此抗体或结合配偶体或者与附着于磁性颗粒或珠的此类抗体或结合配偶体特异性结合的分子(如二抗或其他试剂)与细胞表面分子(如果存在于所述样品内的细胞上的话)特异性结合。
在一些方面，将样品置于磁场中，并且具有附着于其上的磁响应或可磁化颗粒的那些细胞将被吸引到磁体并与未标记的细胞分离。对于阳性选择，保留被磁铁吸引的细胞；对于阴性选择，保留未被吸引的细胞(未标记的细胞)。在一些方面，在同一选择步骤期间进行阳性和阴性选择的组合，其中保留阳性和阴性级分并进一步处理或使其经历进一步分离步骤。
在某些实施方案中，磁响应颗粒被包被在一抗或其他结合伴侣、二抗、凝集素、酶或链霉亲和素中。在某些实施方案中，磁性颗粒通过对一种或多种标记具有特异性的一抗的包被而附着于细胞。在某些实施方案中，用一抗或结合配偶体标记细胞而不是珠，然后添加细胞类型特异性二抗或其他结合配偶体(例如，链霉亲和素)包被的磁粒。在某些实施方案中，将链霉亲和素包被的磁性颗粒与生物素化的一抗或二抗结合使用。
在一些实施方案中，磁响应颗粒保持附着于细胞，所述细胞随后被孵育，培养和/或工程化；在一些方面，颗粒保持附着于细胞以用于施用至患者。在一些实施方案中，从细胞去除可磁化或磁响应颗粒。从细胞去除可磁化颗粒的方法是已知的，并且包括例如使用竞争性非标记抗体和与可切割接头缀合的可磁化颗粒或抗体。在一些实施方案中，可磁化颗粒是可生物降解的。
在一些实施方案中，基于亲和力的选择是经由磁激活细胞分选(MACS)(MiltenyiBiotec，加利福尼亚州奥本)。磁激活细胞分选(MACS)系统能够高纯度选择附着有磁化颗粒的细胞。在某些实施方案中，MACS以如下模式操作，其中在施加外部磁场之后依次洗脱非靶标和靶标种类。也就是说，附着于磁化颗粒的细胞保持在适当的位置，而未附着的种类被洗脱。然后，在完成第一次洗脱步骤之后，以某种方式释放被捕获在磁场中并被阻止洗脱的种类，使得它们可以被洗脱和回收。在某些实施方案中，非靶细胞被标记并从异质细胞群耗尽。
在某些实施方案中，使用如下系统、装置或设备进行分离或分开，所述系统、装置或设备进行所述方法的分离、细胞制备、分开、处理、孵育、培养和/或制备步骤中的一个或多个。在一些方面，所述系统用于在封闭或无菌环境中进行这些步骤中的每一个，例如以使错误、用户操作和/或污染降至最低。在一个例子中，所述系统是如国际专利申请公开号WO2009/072003或US 20110003380 A1中所述的系统。
在一些实施方案中，所述系统或设备在集成或独立系统中和/或以自动化或可编程方式进行分离、处理、工程化和配制步骤中的一个或多个(例如，全部)。在一些方面，所述系统或设备包括与所述系统或设备通信的计算机和/或计算机程序，其允许用户对处理、分离、工程化和配制步骤的各个方面进行编程、控制、结果评估和/或调整。
在一些方面，使用CliniMACS系统(Miltenyi Biotec)进行分离和/或其他步骤，例如以用于在封闭和无菌系统中在临床规模水平上自动分离细胞。部件可以包括集成微计算机、磁分离单元、蠕动泵和各种夹管阀。在一些方面，所述集成计算机控制所述仪器的所有部件并引导所述系统以标准化顺序执行重复程序。在一些方面，所述磁分离单元包括可移动的永磁体和用于选择柱的支架。蠕动泵控制整个管组的流速，并与夹管阀一起确保缓冲液通过所述系统的受控流动和细胞的连续悬浮。
在一些方面，CliniMACS系统使用在无菌、无热原溶液中供应的抗体偶联的可磁化颗粒。在一些实施方案中，在用磁性颗粒标记细胞后，洗涤细胞以去除过量的颗粒。然后将细胞制备袋连接到管组，所述管组又连接到含有缓冲液的袋和细胞收集袋。所述管组由预装配的无菌管(包括预柱和分离柱)组成，并且仅供一次性使用。在启动分离程序后，所述系统自动将细胞样品施加到分离柱。标记的细胞保留在柱内，而未标记的细胞通过一系列洗涤步骤去除。在一些实施方案中，用于与本文描述的方法一起使用的细胞群是未标记的并且不保留在柱中。在一些实施方案中，用于与本文描述的方法一起使用的细胞群被标记并保留在柱中。在一些实施方案中，用于与本文所述的方法一起使用的细胞群在去除磁场后从柱中洗脱，并且收集在细胞收集袋内。
在某些实施方案中，使用CliniMACS Prodigy系统(Miltenyi Biotec)进行分离和/或其他步骤。在一些方面，CliniMACS Prodigy系统配备有细胞处理联合体，其允许自动化洗涤和通过离心分级分离细胞。CliniMACS Prodigy系统还可以包括机载相机和图像识别软件，其通过辨别源细胞产物的宏观层来确定最佳的细胞分级分离终点。例如，外周血自动分离成红细胞、白细胞和血浆层。CliniMACS Prodigy系统还可以包括集成细胞培育室，所述集成细胞培育室完成细胞培养方案，如例如细胞分化和扩增、抗原加载和长期细胞培养。输入端口可以允许无菌移除和补充培养基，并且可以使用集成显微镜监测细胞。参见例如，Klebanoff等人(2012)J Immunother.35(9):651-660；Terakura等人(2012)Blood.1:72-82；以及Wang等人(2012)J Immunother.35(9):689-701。
在一些实施方案中，通过流式细胞术收集和富集(或耗尽)本文描述的细胞群，其中针对多种细胞表面标记染色的细胞在流体流中载携。在一些实施方案中，通过制备规模(FACS)分类收集和富集(或耗尽)本文描述的细胞群。在某些实施方案中，通过使用微机电系统(MEMS)芯片结合基于FACS的检测系统来收集和富集(或耗尽)本文所述的细胞群(参见例如，WO 2010/033140,Cho等人(2010)Lab Chip 10,1567-1573；和Godin等人(2008)JBiophoton.1(5):355–376。在两种情况下，细胞可以用多种标记来标记，从而允许以高纯度分离明确定义的T细胞子集。
在一些实施方案中，用一种或多种可检测标记来标记抗体或结合配偶体，以促进分离供阳性和/或阴性选择。例如，分离可以基于与荧光标记的抗体的结合。在一些例子中，基于对一种或多种细胞表面标记具有特异性的抗体或其他结合配偶体的结合来分离细胞是在流体流中进行，如通过荧光激活细胞分选(FACS)(包括制备规模(FACS))和/或微机电系统(MEMS)芯片，例如与流式细胞检测系统组合。此类方法允许基于多种标记同时进行阳性和阴性选择。
在一些实施方案中，制备方法包括在分离、孵育和/或工程化之前或之后冷冻(例如，冷冻保存)细胞的步骤。在一些实施方案中，冷冻和后续解冻步骤去除细胞群中的粒细胞，并且在一定程度上去除单核细胞。在一些实施方案中，例如在洗涤步骤之后将细胞悬浮在冷冻溶液中以去除血浆和血小板。在一些方面，可以使用多种已知的冷冻溶液和参数中的任何一种。一个例子涉及使用含有20％DMSO和8％人血清白蛋白(HSA)的PBS，或其他合适的细胞冷冻培养基。然后用培养基将其1:1稀释，使得DMSO和HSA的最终浓度分别为10％和4％。在一些实施方案中，将细胞组合物储存在含有为或约5％、6％、7％、7.5％、8％、9％或10％二甲亚砜或由任何前述值限定的范围(如为或约7.5％)的DMSO的配制品中。在一些方面，将组合物储存在含有为或约0.5％、1％、2％或2.5％(v/v)的25％人白蛋白或由任何前述值限定的范围(如为或约1％(v/v))的25％人白蛋白的配制品中。然后通常将细胞以1°/分钟的速率冷冻至-80℃并储存在液氮储罐的气相中。
在一些实施方案中，分离和/或选择产生富集的T细胞(例如CD3+ T细胞、CD4+ T细胞和/或CD8+ T细胞)的一种或多种输入组合物。在一些实施方案中，从单一生物样品中分离、选择、富集或获得两种或更多种单独的输入组合物。在一些实施方案中，从单独的生物样品中分离、选择、富集和/或获得单独的输入组合物，所述单独的生物样品从同一受试者收集、获取和/或获得。
在某些实施方案中，一种或多种输入组合物是或包括富集的T细胞的组合物，所述组合物包括至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％、至少99.5％、至少99.9％或者为或为约100％的CD3+ T细胞。在特定实施方案中，富集的T细胞的输入组合物基本上由CD3+ T细胞组成。
在某些实施方案中，一种或多种输入组合物是或包括富集的CD4+ T细胞的组合物，所述组合物包括至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％、至少99.5％、至少99.9％或者为或为约100％的CD4+T细胞。在某些实施方案中，CD4+ T细胞的输入组合物包括少于40％、少于35％、少于30％、少于25％、少于20％、少于15％、少于10％、少于5％、少于1％、少于0.1％或少于0.01％的CD8+ T细胞，和/或不含CD8+ T细胞，和/或不含或基本上不含CD8+ T细胞。在一些实施方案中，富集的T细胞的组合物基本上由CD4+ T细胞组成。
在某些实施方案中，一种或多种组合物是或包括CD8+ T细胞的组合物，所述组合物是或包括至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％、至少99.5％、至少99.9％或者为或为约100％的CD8+ T细胞。在某些实施方案中，CD8+ T细胞的组合物含有少于40％、少于35％、少于30％、少于25％、少于20％、少于15％、少于10％、少于5％、少于1％、少于0.1％或少于0.01％的CD4+ T细胞，和/或不含CD4+ T细胞，和/或不含或基本上不含CD4+ T细胞。在一些实施方案中，富集的T细胞的组合物基本上由CD8+ T细胞组成。
2.激活和刺激
在一些实施方案中，在基因工程化之前或与其结合地孵育和/或培养细胞。孵育步骤可以包括培养、培育、刺激、激活和/或繁殖。孵育和/或工程化可以在培养容器中进行，所述培养容器是如单元、室、孔、柱、管、管组、阀、小瓶、培养皿、袋子或者用于培养或培育细胞的其他容器。在一些实施方案中，在刺激条件或刺激剂的存在下孵育组合物或细胞。此类条件包括设计为诱导群体中细胞的增殖、扩增、激活和/或存活，模拟抗原暴露和/或引发细胞用于基因工程化(如用于引入重组抗原受体)的那些。
所述条件可以包括以下中的一种或多种：特定培养基、温度、氧含量、二氧化碳含量、时间、药剂(例如，营养素、氨基酸、抗生素、离子和/或刺激因子(如细胞因子、趋化因子、抗原、结合配偶体、融合蛋白、重组可溶受体和设计为激活细胞的任何其他药剂))。
在一些实施方案中，刺激条件或刺激剂包括能够刺激或激活TCR复合物的细胞内信号传导结构域的一种或多种药剂(例如，配体)。在一些方面，所述药剂在T细胞中开启或启动TCR/CD3细胞内信号传导级联。此类药剂可以包括抗体，如对TCR具有特异性的那些，例如抗CD3。在一些实施方案中，刺激条件包括一种或多种药剂，例如配体，其能够刺激共刺激受体，例如抗CD28。在一些实施方案中，此类药剂和/或配体可以结合至固体支撑物(如珠)和/或一种或多种细胞因子。任选地，扩增方法还可以包括将抗CD3和/或抗CD28抗体添加至培养基(例如，以至少约0.5ng/ml的浓度)的步骤。在一些实施方案中，刺激剂包括IL-2、IL-15和/或IL-7。在一些方面，IL-2浓度为至少约10单位/mL。
在一些方面，根据多种技术实施孵育，所述技术如以下文献中所述的那些：Riddell等人的美国专利号6,040,177；Klebanoff等人(2012)J Immunother.35(9):651-660；Terakura等人(2012)Blood.1:72-82；和/或Wang等人(2012)J Immunother.35(9):689-701。
在一些实施方案中，通过以下方式扩增T细胞：向培养起始组合物中添加饲养细胞(如非分裂外周血单核细胞(PBMC))(例如，使得对于要扩增的初始群体中的每个T淋巴细胞，所得细胞群含有至少约5、10、20或40个或更多个PBMC饲养细胞)；以及孵育培养物(例如，持续足以扩增所述T细胞数量的时间)。在一些方面，非分裂饲养细胞可以包含γ辐照的PBMC饲养细胞。在一些实施方案中，用约3000至3600拉德范围内的γ射线辐照PBMC以防止细胞分裂。在一些方面，在添加T细胞群之前将饲养细胞添加至培养基中。
在一些实施方案中，刺激条件包括适合于人T淋巴细胞生长的温度，例如至少约25摄氏度，通常为至少约30摄氏度，并且通常为或约37摄氏度。任选地，孵育还可以包括添加非分裂的EBV转化的类淋巴母细胞(LCL)作为饲养细胞。可以用约6000至10,000拉德范围内的γ射线辐照LCL。在一些方面，LCL饲养细胞是以任何合适的量来提供，如LCL饲养细胞与初始T淋巴细胞的比率为至少约10:1。
在实施方案中，抗原特异性T细胞(如抗原特异性CD4+和/或CD8+ T细胞)是通过用抗原刺激幼稚或抗原特异性T淋巴细胞来获得。例如，可以通过从被感染的受试者分离T细胞并在体外用相同抗原刺激所述细胞，针对巨细胞病毒抗原来生成抗原特异性T细胞系或克隆。
在一些实施方案中，在一种或多种刺激条件或刺激剂存在下进行的孵育的至少一部分是在离心室的内部空腔中进行，例如在离心旋转下进行，如国际公开号WO 2016/073602中所述的。在一些实施方案中，在离心室中进行的孵育的至少一部分包括与一种或多种试剂混合以诱导刺激和/或激活。在一些实施方案中，将细胞(如选择的细胞)与刺激条件或刺激剂在离心室中混合。在此类过程的一些方面，将一定体积的细胞与一定量的一种或多种刺激条件或刺激剂混合，所述刺激条件或刺激剂远小于在细胞培养板或其他系统中进行类似刺激时通常使用的刺激条件或刺激剂。
在一些实施方案中，将刺激剂添加至室空腔中的细胞，所添加的量与例如在周期性振荡或旋转的管或袋中进行选择而不在离心室中混合时，对相同数量的细胞或相同体积的细胞实现大致相同或类似的选择效率通常使用或将需要的刺激剂的量相比显著较小(例如不大于所述量的5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％或80％)。在一些实施方案中，在向细胞添加孵育缓冲液和刺激剂的情况下进行孵育，以实现例如10mL至200mL试剂的孵育的目标体积，所述体积如至少或至少约或约10mL、20mL、30mL、40mL、50mL、60mL、70mL、80mL、90mL、100mL、150mL或200mL。在一些实施方案中，孵育缓冲液和刺激剂在添加至细胞前预混合。在一些实施方案中，将孵育缓冲液和刺激剂单独添加至细胞。在一些实施方案中，在周期性温和混合条件下进行刺激孵育，这可能有助于促进能量上有利的相互作用，从而允许使用较少的总体刺激剂来实现细胞的刺激和激活。
在一些实施方案中，孵育通常在混合条件下进行，如在旋转的存在下，通常以相对低的力或速度旋转，如速度低于用于使细胞沉淀的速度，如从或从约600rpm至1700rpm(例如，为或约或至少600rpm、1000rpm或1500rpm或1700rpm)，如在室或其他容器的样品或壁处的一定RCF下，所述RCF为从或从约80g至100g(例如，为或约或至少80g、85g、90g、95g或100g)。在一些实施方案中，旋转是使用如下重复间隔来进行：以这种低速旋转，之后是休息时间段，例如旋转和/或休息1、2、3、4、5、6、7、8、9或10秒，如旋转大约1或2秒，然后休息大约5、6、7或8秒。
在一些实施方案中，例如与刺激剂一起孵育的总持续时间为在或在约1小时与96小时之间、1小时与72小时之间、1小时与48小时之间、4小时与36小时之间、8小时与30小时之间或12小时与24小时之间，如至少或至少约6小时、12小时、18小时、24小时、36小时或72小时。在一些实施方案中，进一步孵育持续如下时间：在或约在1小时与48小时之间、4小时与36小时之间、8小时与30小时之间或12小时与24小时之间，包含端值。
在特定实施方案中，刺激条件包括用一种或多种细胞因子和/或在一种或多种细胞因子存在下孵育、培养和/或培育富集的T细胞的组合物。在特定实施方案中，一种或多种细胞因子是重组细胞因子。在一些实施方案中，一种或多种细胞因子是人重组细胞因子。在某些实施方案中，一种或多种细胞因子结合和/或能够结合由T细胞表达的和/或对T细胞而言内源的受体。在特定实施方案中，一种或多种细胞因子是或包括细胞因子的4-α-螺旋束家族的成员。在一些实施方案中，细胞因子的4-α-螺旋束家族的成员包括但不限于白介素2(IL-2)、白介素4(IL-4)、白介素7(IL-7)、白介素9(IL-9)、白介素12(IL-12)、白介素15(IL-15)、粒细胞集落刺激因子(G-CSF)和粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)。
在一些实施方案中，例如，在转导前，刺激导致细胞的激活和/或增殖。
3.用于基因工程化的载体和方法
在一些实施方案中，与所提供的方法、用途、制品或组合物结合使用的工程化细胞(如T细胞)是已经基因工程化以表达本文所述的重组受体(例如，CAR或TCR)的细胞。在一些实施方案中，所述细胞是通过引入、递送或转移编码重组受体和/或其他分子的核酸序列来工程化。
在一些实施方案中，用于产生工程化细胞的方法包括将编码重组受体(例如抗CD19 CAR)的多核苷酸引入细胞(例如，如刺激或激活的细胞)中。在特定实施方案中，重组蛋白是重组受体，如所述的任一种。在细胞中引入编码重组蛋白(如重组受体)的核酸分子可以使用多种已知载体中的任一种来进行。此类载体包括病毒和非病毒系统，包括慢病毒和γ逆转录病毒系统，以及基于转座子的系统，如基于PiggyBac或Sleeping Beauty的基因转移系统。示例性方法包括用于转移编码受体的核酸的那些，包括通过病毒(例如，逆转录病毒或慢病毒)、转导、转座子和电穿孔。在一些实施方案中，工程化产生富集的T细胞的一种或多种工程化组合物。
在某些实施方案中，刺激的T细胞的一种或多种组合物是或包括富集的T细胞的两种单独刺激的组合物。在特定实施方案中，将富集的T细胞的两种单独组合物(例如，已经从同一生物样品选择、分离和/或富集的富集的T细胞的两种单独组合物)单独工程化。在某些实施方案中，两种单独组合物包括富集的CD4+ T细胞的组合物。在特定实施方案中，两种单独组合物包括富集的CD8+ T细胞的组合物。在一些实施方案中，将富集的CD4+ T细胞和富集的CD8+ T细胞的两种单独组合物单独基因工程化。
在一些实施方案中，通过如下方式完成基因转移：首先刺激细胞，如通过将所述细胞与诱导应答(如增殖、存活和/或激活，例如如通过细胞因子或激活标记的表达所测量的)的刺激物组合，然后转导被激活的细胞，并且在培养中扩增至足以用于临床应用的数量。在某些实施方案中，通过如下方式完成基因转移：首先将细胞在刺激条件下孵育，如通过所述的任何方法来进行。
在一些实施方案中，用于基因工程化的方法通过使组合物的一个或多个细胞与编码重组蛋白(例如，重组受体)的核酸分子接触来进行。在一些实施方案中，所述接触可以通过离心(如旋转接种，例如离心接种)来实现。此类方法包括如国际公开号WO 2016/073602中所述的那些方法中的任一种。示例性离心室包括由Biosafe SA生产和销售的那些，包括用于
Figure BDA0003183097650002131
和
Figure BDA0003183097650002132
2系统的那些，包括A-200/F和A-200离心室以及用于此类系统的各种试剂盒。示例性室、系统和处理仪器和机柜描述于例如以下文献中：美国专利号6,123,655、美国专利号6,733,433和公开的美国专利申请公开号US 2008/0171951，以及公开的国际专利申请公开号WO 00/38762，将其各自的内容通过引用以其全文并入本文。用于此类系统的示例性试剂盒包括但不限于由BioSafe SA以产品名CS-430.1、CS-490.1、CS-600.1或CS-900.2销售的一次性试剂盒。
在一些实施方案中，接触可以通过离心如旋转接种(例如，离心接种)来实现。在一些实施方案中，可以使含有细胞、载体(例如病毒颗粒)和试剂的组合物旋转，通常以相对较低的力或速度旋转，如速度低于用于沉淀细胞的速度，如从或从约600rpm至1700rpm(例如为或约或至少600rpm、1000rpm或1500rpm或1700rpm)。在一些实施方案中，旋转是以从或从约100g至3200g(例如，为或约或至少或至少约100g、200g、300g、400g、500g、1000g、1500g、2000g、2500g、3000g或3200g)的力(例如，相对离心力)来进行，如例如在室或空腔的内壁或外壁处所测量。术语“相对离心力”或RCF通常被理解为如与旋转轴相比在空间的特定点，相对于地球的重力，施加在物体或物质(如细胞、样品或团粒和/或所旋转的室或其他容器中的点)上的有效力。所述值可以使用熟知的公式来确定，所述公式考虑到重力、旋转速度和旋转半径(与旋转轴的距离以及测量RCF的物体、物质或颗粒)。
在一些实施方案中，将系统与其他仪器一起包括和/或置于与其他仪器相关联，所述其他仪器包括用于操作、自动化、控制和/或监测转导步骤以及在系统中执行的一个或多个各种其他处理步骤(例如，可以使用或结合如本文或在国际公开号WO 2016/073602中描述的离心室系统进行的一个或多个处理步骤)的方面的仪器。在一些实施方案中，这种仪器容纳于机柜中。在一些实施方案中，仪器包括机柜，所述机柜包括外壳，所述外壳含有控制电路、离心机、罩、电机、泵、传感器、显示器和用户界面。示例性设备描述于美国专利号6,123,655、美国专利号6,733,433和US 2008/0171951中。
在一些实施方案中，所述系统包含一系列容器，例如袋子、管路、旋塞、夹子、连接器和离心室。在一些实施方案中，容器(如袋子)包括一个或多个容器(例如袋子)，其在同一容器或单独容器(例如同一袋子或单独袋子)中含有要转导的细胞和病毒载体颗粒。在一些实施方案中，所述系统还包括一个或多个容器(例如袋子)，所述容器含有介质，例如稀释剂和/或洗涤溶液，在所述方法期间将所述介质抽入室和/或其他部件中以稀释、重悬和/或洗涤组分和/或组合物。所述容器可以连接在系统中的一个或多个位置，例如连接在对应于输入管线、稀释剂管线、洗涤管线、废液管线和/或输出管线的位置。
在一些实施方案中，所述室与离心机相关联，所述离心机能够实现所述室的旋转，例如围绕其旋转轴旋转。可以在与细胞转导结合的孵育之前、期间和/或之后和/或在一个或多个其他处理步骤中，进行旋转。因此，在一些实施方案中，多个处理步骤中的一个或多个在旋转下(例如在特定力下)进行。所述室通常能够竖直或大致竖直地旋转，使得所述室在离心期间竖直放置，并且侧壁和轴是竖直或大致竖直的，且一个或多个端壁是水平或大致水平的。
在一些实施方案中，在基因工程的至少一部分(例如转导)期间，和/或在基因工程之后，将细胞转移到生物反应器袋组件中，用于培养经基因工程化的细胞，例如用于培育或扩增细胞。
在一些实施方案中，使用重组感染性病毒颗粒(如例如源自猿猴病毒40(SV40)、腺病毒、腺相关病毒(AAV)的载体)将重组核酸转移至细胞中。在一些实施方案中，使用重组慢病毒载体或逆转录病毒载体(如γ-逆转录病毒载体)将重组核酸转移到T细胞中(参见例如，Koste等人(2014)Gene Therapy 2014年4月3日.doi:10.1038/gt.2014.25；Carlens等人(2000)Exp Hematol 28(10):1137-46；Alonso-Camino等人(2013)Mol Ther Nucl Acids2,e93；Park等人,Trends Biotechnol.2011年11月29日(11):550-557)。
在一些实施方案中，逆转录病毒载体具有长末端重复序列(LTR)，例如源自莫洛尼鼠白血病病毒(MoMLV)、骨髓增生性肉瘤病毒(MPSV)、鼠胚胎干细胞病毒(MESV)、鼠干细胞病毒(MSCV)或脾病灶形成病毒(SFFV)的逆转录病毒载体。大多数逆转录病毒载体源自鼠逆转录病毒。在一些实施方案中，逆转录病毒包括源自任何禽类或哺乳动物细胞来源的那些。逆转录病毒通常是双嗜性的，这意味着它们能够感染包括人在内的若干种物种的宿主细胞。在一个实施方案中，要表达的基因替代逆转录病毒gag、pol和/或env序列。已经描述了许多例示性逆转录病毒系统(例如，美国专利号5,219,740；6,207,453；5,219,740；Miller和Rosman(1989)BioTechniques 7:980-990；Miller,A.D.(1990)Human Gene Therapy 1:5-14；Scarpa等人(1991)Virology 180:849-852；Burns等人(1993)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 90:8033-8037；以及Boris-Lawrie和Temin(1993)Cur.Opin.Genet.Develop.3:102-109)。
慢病毒转导的方法是已知的。示例性方法描述于例如以下文献中：Wang等人(2012)J.Immunother.35(9):689-701；Cooper等人(2003)Blood.101:1637-1644；Verhoeyen等人(2009)Methods Mol Biol.506:97-114；以及Cavalieri等人(2003)Blood.102(2):497-505。
在一些实施方案中，病毒载体颗粒含有源自基于逆转录病毒基因组的载体(例如源自基于慢病毒基因组的载体)的基因组。在所提供的病毒载体的一些方面，编码重组受体(如抗原受体，如CAR)的异源核酸被包含在和/或位于载体基因组的5'LTR与3'LTR序列之间。
在一些实施方案中，病毒载体基因组是慢病毒基因组，如HIV-1基因组或SIV基因组。例如，已经通过多次减弱毒力基因生成慢病毒载体，例如，可以使基因env、vif、vpu和nef缺失，使得载体对于治疗目的更安全。慢病毒载体是已知的。参见Naldini等人,(1996和1998)；Zufferey等人,(1997)；Dull等人,1998,美国专利号6,013,516；以及5,994,136。在一些实施方案中，这些病毒载体是基于质粒的或基于病毒的，并且被配置为携带用于掺入外来核酸的基本序列，用于选择和用于将所述核酸转移到宿主细胞中。已知的慢病毒可以容易地从保管机构或保藏中心(如美国典型培养物保藏中心(“ATCC”；弗吉尼亚州马纳萨斯大学大道(University Blvd.)10801号20110-2209))获得，或者使用常用技术从已知来源分离。
慢病毒载体的非限制性例子包括源自慢病毒的那些，例如人免疫缺陷病毒1(HIV-1)、HIV-2、猿猴免疫缺陷病毒(SIV)、人嗜T淋巴细胞病毒1(HTLV-1)、HTLV-2或马感染贫血病毒(E1AV)。例如，已经通过多次减弱HIV毒力基因生成慢病毒载体，例如，使基因env、vif、vpr、vpu和nef缺失，使得载体对于治疗目的更安全。慢病毒载体是本领域已知的，参见Naldini等人,(1996和1998)；Zufferey等人,(1997)；Dull等人,1998，美国专利号6,013,516；以及5,994,136。在一些实施方案中，这些病毒载体是基于质粒的或基于病毒的，并且被配置为携带用于掺入外来核酸的基本序列，用于选择和用于将所述核酸转移到宿主细胞中。已知的慢病毒可以容易地从保管机构或保藏中心(如美国典型培养物保藏中心(“ATCC”；弗吉尼亚州马纳萨斯大学大道(University Blvd.)10801号20110-2209))获得，或者使用常用技术从已知来源分离。
在一些实施方案中，病毒基因组载体可以含有逆转录病毒(例如慢病毒)的5'和3'LTR的序列。在一些方面，病毒基因组构建体可以含有来自慢病毒的5'和3'LTR的序列，并且具体而言可以含有来自慢病毒的5'LTR的R和U5序列以及来自慢病毒的失活或自失活3'LTR。LTR序列可以是来自任何物种的任何慢病毒的LTR序列。例如，它们可以是来自HIV、SIV、FIV或BIV的LTR序列。通常，LTR序列是HIV LTR序列。
在一些实施方案中，病毒载体(例如HIV病毒载体)的核酸缺乏另外的转录单元。载体基因组可以含有失活的或自失活3'LTR(Zufferey等人J Virol 72：9873,1998；Miyoshi等人,J Virol 72:8150,1998)。例如，用于产生病毒载体RNA的核酸的3'LTR的U3区中的缺失可用于产生自失活(SIN)载体。然后可以在逆转录期间将此缺失转移到原病毒DNA的5'LTR。自失活载体通常具有自3'长末端重复序列(LTR)的增强子和启动子序列缺失，所述缺失在载体整合期间被拷贝到5'LTR中。在一些实施方案中，可以消除足够的序列，包括去除TATA盒，以消除LTR的转录活性。这可以防止在转导的细胞中产生全长载体RNA。在一些方面，3'LTR的U3元件含有其增强子序列、TATA盒、Sp1和NF-κB位点的缺失。由于自失活3'LTR，在进入和逆转录之后产生的原病毒含有失活的5'LTR。这可以通过降低动员载体基因组的风险和LTR对附近细胞启动子的影响来提高安全性。可以通过本领域已知的任何方法来构建自失活3'LTR。在一些实施方案中，这不会影响载体滴度或载体的体外或体内特性。
任选地，来自慢病毒5'LTR的U3序列可以在病毒构建体中用启动子序列(如异源启动子序列)替代。这可以增加从包装细胞系回收的病毒的滴度。还可以包括增强子序列。可以使用增加病毒RNA基因组在包装细胞系中的表达的任何增强子/启动子组合。在一个例子中，使用CMV增强子/启动子序列(美国专利号5,385,839和美国专利号5,168,062)。
在某些实施方案中，可以通过将逆转录病毒载体基因组(例如慢病毒载体基因组)构建为整合缺陷性来使插入诱变的风险降至最低。可以采用多种途径来产生非整合的载体基因组。在一些实施方案中，可以将一种或多种突变工程化至pol基因的整合酶组分中，使得其编码具有无活性整合酶的蛋白质。在一些实施方案中，可以修饰载体基因组本身以通过例如使一个或两个附接位点突变或缺失来防止整合，或者通过缺失或修饰使3'LTR近端多嘌呤束(PPT)没有功能。在一些实施方案中，可以使用非遗传途径；这些途径包括抑制整合酶的一种或多种功能的药理学药剂。这些方法并不相互排斥；也就是说，可以一次使用多于一种所述方法。例如，整合酶和附接位点两者可以都没有功能，或者整合酶和PPT位点可以没有功能，或者附接位点和PPT位点可以没有功能，或者它们全部都可以没有功能。此类方法和病毒载体基因组是已知的并且是可获得的(参见Philpott和Thrasher,Human GeneTherapy 18:483,2007；Engelman等人J Virol 69:2729,1995；Brown等人J Virol 73:9011(1999)；WO 2009/076524；McWilliams等人,J Virol 77:11150,2003；Powell和Levin JVirol 70:5288,1996)。
在一些实施方案中，载体含有用于在宿主细胞(例如原核宿主细胞)中繁殖的序列。在一些实施方案中，病毒载体的核酸含有用于在原核细胞(如细菌细胞)中繁殖的一个或多个复制起点。在一些实施方案中，包括原核复制起点的载体还可以含有如下基因，其表达赋予可检测或可选择标记，如抗药性。
病毒载体基因组通常以质粒形式构建，其可以被转染到包装细胞系或生产细胞系中。可以使用多种已知方法中的任何一种来产生逆转录病毒颗粒，其基因组含有病毒载体基因组的RNA拷贝。在一些实施方案中，至少两种组分参与制备基于病毒的基因传递系统：第一，包装质粒，包括结构蛋白以及产生病毒载体颗粒所必需的酶，第二，病毒载体本身，即，要转移的遗传物质。可以在设计这些组分之一或两者时引入生物安全保护措施。
在一些实施方案中，包装质粒可以含有除了包膜蛋白以外的所有逆转录病毒(如HIV-1)蛋白(Naldini等人,1998)。在其他实施方案中，病毒载体可能缺乏另外的病毒基因(例如与毒力有关的那些，例如vpr、vif、vpu和nef和/或Tat(HIV的主要反式激活因子))。在一些实施方案中，慢病毒载体(例如基于HIV的慢病毒载体)仅包含三种亲本病毒的基因：gag、pol和rev，这减少或消除了野生型病毒通过重组而重构的可能性。
在一些实施方案中，将病毒载体基因组引入包装细胞系中，所述细胞系含有将从病毒载体基因组转录的病毒基因组RNA包装至病毒颗粒中所需的所有组分。可替代地，除了一种或多种目的序列(例如重组核酸)以外，病毒载体基因组可以包含一种或多种编码病毒组分的基因。然而，在一些方面，为了防止基因组在靶标细胞中复制，去除复制所需的内源病毒基因，并在包装细胞系中单独提供。
在一些实施方案中，用含有产生颗粒所必需的组分的一种或多种质粒载体转染包装细胞系。在一些实施方案中，用含有病毒载体基因组(包括LTR、顺式作用包装序列和目标序列，即编码抗原受体(例如CAR)的核酸)的质粒；以及编码病毒酶和/或结构组分(例如Gag、pol和/或rev)的一种或多种辅助质粒转染包装细胞系。在一些实施方案中，利用多个载体分离产生逆转录病毒载体颗粒的各种遗传组分。在一些此类实施方案中，向包装细胞提供单独的载体减少了重组事件的可能性，否则可能产生有复制能力的病毒。在一些实施方案中，可以使用具有所有逆转录病毒组分的单个质粒载体。
在一些实施方案中，将逆转录病毒载体颗粒(例如慢病毒载体颗粒)假型化以增加宿主细胞的转导效率。例如，在一些实施方案中，将逆转录病毒载体颗粒(例如慢病毒载体颗粒)用VSV-G糖蛋白假型化，其提供宽细胞宿主范围，从而扩展可以转导的细胞类型。在一些实施方案中，用编码非天然包膜糖蛋白的质粒或多核苷酸转染包装细胞系，以例如包括嗜异性、多嗜性或双嗜性包膜，如辛德比斯病毒包膜、GALV或VSV-G。
在一些实施方案中，包装细胞系提供将病毒基因组RNA包装到慢病毒载体颗粒中反式作用所需的组分，包括病毒调节蛋白和结构蛋白。在一些实施方案中，包装细胞系可以是能够表达慢病毒蛋白并产生功能性慢病毒载体颗粒的任何细胞系。在一些方面，合适的包装细胞系包括293(ATCC CCL X)、293T、HeLA(ATCC CCL 2)、D17(ATCC CCL 183)、MDCK(ATCC CCL 34)、BHK(ATCC CCL-10)和Cf2Th(ATCC CRL 1430)细胞。
在一些实施方案中，包装细胞系稳定地表达一种或多种病毒蛋白。例如，在一些方面，可以构建含有gag、pol、rev和/或其他结构基因但没有LTR和包装组分的包装细胞系。在一些实施方案中，可以用编码一种或多种病毒蛋白的核酸分子以及含有编码异源蛋白的核酸分子的病毒载体基因组和/或编码包膜糖蛋白的核酸对包装细胞系进行瞬时转染。
在一些实施方案中，将病毒载体和包装质粒和/或辅助质粒经由转染或感染引入包装细胞系中。包装细胞系产生含有病毒载体基因组的病毒载体颗粒。用于转染或感染的方法是熟知的。非限制性例子包括磷酸钙、DEAE-葡聚糖和脂质转染方法、电穿孔和显微注射。
在将重组质粒和逆转录病毒LTR和包装序列引入特殊细胞系(例如，通过磷酸钙沉淀)中时，包装序列可以允许要包装至病毒颗粒中的重组质粒的RNA转录，然后病毒颗粒可能会被分泌到培养基中。在一些实施方案中，随后收集含有重组逆转录病毒的培养基，任选地将其浓缩，并用于基因转移。例如，在一些方面，在将包装质粒和转移载体共转染至包装细胞系后，从培养基回收病毒载体颗粒，并通过本领域技术人员使用的标准方法进行滴定。
在一些实施方案中，可以通过引入质粒以允许产生慢病毒颗粒，而在包装细胞系(例如示例性HEK 293T细胞系)中产生逆转录病毒载体，例如慢病毒载体。在一些实施方案中，包装细胞被转染和/或含有编码gag和pol的多核苷酸，以及编码重组受体(例如抗原受体，例如CAR)的多核苷酸。在一些实施方案中，包装细胞系被任选地和/或另外用编码rev蛋白的多核苷酸转染和/或含有所述多核苷酸。在一些实施方案中，包装细胞系被任选地和/或另外用编码非天然包膜糖蛋白(例如VSV-G)的多核苷酸转染和/或含有所述多核苷酸。在一些此类实施方案中，在转染细胞(例如，HEK 293T细胞)后大约两天，细胞上清液含有重组慢病毒载体，可以回收并滴定所述重组慢病毒载体。
所回收和/或产生的逆转录病毒载体颗粒可以用于使用如所述的方法转导靶细胞。一旦进入靶细胞中，病毒RNA就被逆转录，进入细胞核中并稳定整合到宿主基因组中。在病毒RNA整合后一天或两天，可以检测到重组蛋白(例如抗原受体，例如CAR)的表达。
在一些实施方案中，所提供的方法涉及通过使包含多个细胞的细胞组合物与病毒颗粒接触(例如孵育)来转导细胞的方法。在一些实施方案中，要转染或转导的细胞是或包含从受试者获得的原代细胞，例如从受试者富集和/或选择的细胞。
在一些实施方案中，组合物中要转导的细胞的浓度是从或从约1.0x105个细胞/mL至1.0x108个细胞/mL，如至少或至少约或约1.0x105个细胞/mL、5x105个细胞/mL、1x106个细胞/mL、5x106个细胞/mL、1x107个细胞/mL、5x107个细胞/mL或1x108个细胞/mL。
在一些实施方案中，病毒颗粒是以病毒载体颗粒拷贝或其感染单位(IU)与待转导的细胞总数的某一比率(IU/细胞)来提供。例如，在一些实施方案中，所述病毒颗粒在接触期间是以为或约或至少或至少约每个细胞0.5、1、2、3、4、5、10、15、20、30、40、50或60IU的病毒载体颗粒存在。
在一些实施方案中，病毒载体颗粒的滴度在或在约1x106IU/mL与1x108IU/mL之间，如在或在约5x106IU/mL与5x107IU/mL之间，如至少6x106IU/mL、7x106IU/mL、8x106IU/mL、9x106IU/mL、1x107IU/mL、2x107IU/mL、3x107IU/mL、4x107IU/mL或5x107IU/mL。
在一些实施方案中，可以按小于100(如通常小于60、50、40、30、20、10、5或更小)的感染复数(MOI)来实现转导。
在一些实施方案中，所述方法涉及将细胞与病毒颗粒接触或一起孵育。在一些实施方案中，接触进行30分钟至72小时，如30分钟至48小时、30分钟至24小时或1小时至24小时，如至少或至少约30分钟、1小时、2小时、6小时、12小时、24小时、36小时或更长时间。
在一些实施方案中，接触是在溶液中进行。在一些实施方案中，使细胞和病毒颗粒以从或从约0.5mL至500mL的体积接触，所述体积如从或从约0.5mL至200mL、0.5mL至100mL、0.5mL至50mL、0.5mL至10mL、0.5mL至5mL、5mL至500mL、5mL至200mL、5mL至100mL、5mL至50mL、5mL至10mL、10mL至500mL、10mL至200mL、10mL至100mL、10mL至50mL、50mL至500mL、50mL至200mL、50mL至100mL、100mL至500mL、100mL至200mL或200mL至500mL。
在某些实施方案中，用包含结合分子的颗粒对输入细胞进行处理、孵育或接触，所述结合分子结合至或识别由病毒DNA编码的重组受体。
在一些实施方案中，细胞与病毒载体颗粒的孵育导致或产生包含用病毒载体颗粒转导的细胞的输出组合物。
在一些实施方案中，通过电穿孔将重组核酸转移至T细胞中(参见例如，Chicaybam等人,(2013)PLoS ONE 8(3):e60298；和Van Tedeloo等人(2000)Gene Therapy 7(16):1431-1437)。在一些实施方案中，通过转座将重组核酸转移至T细胞中(参见例如，Manuri等人(2010)Hum Gene Ther 21(4):427-437；Sharma等人(2013)Molec Ther Nucl Acids 2,e74；和Huang等人(2009)Methods Mol Biol 506:115-126)。在免疫细胞中引入并表达遗传物质的其他方法包括磷酸钙转染(例如，如以下文献中所述：Current Protocols inMolecular Biology,John Wiley&Sons,纽约州纽约市)、原生质体融合、阳离子脂质体介导的转染；钨粒子促进的微粒轰击(Johnston,Nature,346:776-777(1990))；和磷酸锶DNA共沉淀(Brash等人,Mol.Cell Biol.,7:2031-2034(1987))。
用于转移编码重组产物的核酸的其他方法和载体是例如在国际专利申请公开号WO 2014055668和美国专利号7,446,190中所述的那些。
在一些实施方案中，细胞(例如，T细胞)可以在扩增期间或之后例如用T细胞受体(TCR)或嵌合抗原受体(CAR)进行转染。例如，这种用于引入所需受体的基因的转染可以用任何合适的逆转录病毒载体进行。然后可以使遗传修饰的细胞群摆脱初始刺激物(例如，抗CD3/抗CD28刺激物)，随后用第二类型的刺激物例如通过从头引入的受体进行刺激。这种第二类型的刺激物可以包括呈肽/MHC分子形式的抗原性刺激物、遗传引入的受体的同源(交联)配体(例如，CAR的天然配体)或在新受体的框架内直接结合(例如，通过识别受体内的恒定区)的任何配体(如抗体)。参见例如，Cheadle等人,“Chimeric antigen receptors forT-cell based therapy”Methods Mol Biol.2012；907:645-66；或Barrett等人,ChimericAntigen Receptor Therapy for Cancer Annual Review of Medicine第65卷:333-347(2014)。
在一些情况下，可以使用不需要激活细胞(例如，T细胞)的载体。在一些此类情形中，可以在激活之前选择和/或转导细胞。因此，可以在培养细胞之前或之后将细胞工程化，并且在一些情况下在培养的同一时间或至少一部分期间将细胞工程化。
另外的核酸(例如，用于引入的基因)包括：用于改进治疗功效的那些，如通过促进所转移细胞的活力和/或功能；用于提供用于选择和/或评价细胞(如用于评估体内存活或定位)的遗传标记的基因；用于改进安全性的基因，例如通过使细胞在体内对阴性选择敏感，如以下文献中所述：Lupton S.D.等人,Mol.and Cell Biol.,11:6(1991)；和Riddell等人,Human Gene Therapy 3:319-338(1992)；还参见Lupton等人的PCT/US91/08442和PCT/US94/05601的公开，所述文献描述了使用通过将显性阳性可选择标记与阴性可选择标记融合而衍生的双功能可选择融合基因。参见例如，Riddell等人,美国专利号6,040,177,第14-17栏。
4.工程化细胞的培育、扩增和配制
在一些实施方案中，用于根据任何所提供的方法、用途、制品或组合物生成例如用于细胞疗法的工程化细胞的方法包括用于培育细胞(例如，在促进增殖和/或扩增的条件下培育细胞)的一个或多个步骤。在一些实施方案中，在基因工程化的步骤(例如通过转导或转染将重组多肽引入细胞)之后，在促进增殖和/或扩增的条件下培育细胞。在特定实施方案中，在刺激条件下孵育细胞并用重组多核苷酸(例如编码重组受体的多核苷酸)转导或转染细胞之后培育细胞。因此，在一些实施方案中，在促进增殖和/或扩增的条件下培育已经通过用编码CAR的重组多核苷酸转导或转染进行工程化的CAR阳性T细胞的组合物。
在某些实施方案中，工程化T细胞的一种或多种组合物是或包括富集的T细胞的两种单独组合物，如已经用编码重组受体(例如CAR)的多核苷酸工程化的富集的T细胞的两种单独组合物。在特定实施方案中，如在基因工程化(例如，通过转导或转染将重组多肽引入细胞中)的步骤之后，将富集的T细胞的两种单独组合物(例如，从相同生物样品选择、分离和/或富集的富集的T细胞的两种单独组合物)在刺激条件下单独培育。在某些实施方案中，两种单独组合物包括富集的CD4+ T细胞的组合物，如已经用编码重组受体(例如CAR)的多核苷酸工程化的富集的CD4+ T细胞的组合物。在特定实施方案中，两种单独组合物包括富集的CD8+ T细胞的组合物，如已经用编码重组受体(例如CAR)的多核苷酸工程化的富集的CD4+ T细胞的组合物。在一些实施方案中，将富集的CD4+ T细胞和富集的CD8+ T细胞的两种单独组合物(如已经用编码重组受体(例如CAR)的多核苷酸单独工程化的富集的CD4+ T细胞的组合物和富集的CD8+ T细胞的组合物)例如在促进增殖和/或扩增的条件下单独培育。
在一些实施方案中，培育是在促进增殖和/或扩增的条件下进行的。在一些实施方案中，此类条件可以被设计成诱导群体中的细胞的增殖、扩增、激活和/或存活。在特定实施方案中，刺激条件可以包括以下中的一种或多种：特定培养基、温度、氧含量、二氧化碳含量、时间、药剂(例如，营养素、氨基酸、抗生素、离子和/或刺激因子(如细胞因子、趋化因子、抗原、结合配偶体、融合蛋白、重组可溶性受体和任何其他被设计成促进细胞的生长、分裂和/或扩增的药剂))。
在特定实施方案中，在一种或多种细胞因子存在下培育细胞。在特定实施方案中，一种或多种细胞因子是重组细胞因子。在一些实施方案中，一种或多种细胞因子是人重组细胞因子。在某些实施方案中，一种或多种细胞因子结合和/或能够结合由T细胞表达的和/或对T细胞而言内源的受体。在特定实施方案中，一种或多种细胞因子(例如重组细胞因子)是或包括细胞因子的4-α-螺旋束家族的成员。在一些实施方案中，细胞因子的4-α-螺旋束家族的成员包括但不限于白介素2(IL-2)、白介素4(IL-4)、白介素7(IL-7)、白介素9(IL-9)、白介素12(IL-12)、白介素15(IL-15)、粒细胞集落刺激因子(G-CSF)和粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)。在一些实施方案中，一种或多种重组细胞因子包括IL-2、IL-7和/或IL-15。在一些实施方案中，在存在如下浓度的细胞因子(例如，重组人细胞因子)的情况下培育细胞(例如，工程化细胞)：在1IU/mL与2,000IU/mL之间、在10IU/mL与100IU/mL之间、在50IU/mL与200IU/mL之间、在100IU/mL与500IU/mL之间、在100IU/mL与1,000IU/mL之间、在500IU/mL与2,000IU/mL之间或在100IU/mL与1,500IU/mL之间。
在一些实施方案中，在如下条件下进行培育，所述条件通常包括适合于原代免疫细胞(如人T淋巴细胞)生长的温度，例如至少约25摄氏度，通常至少约30摄氏度，并且通常为或约37摄氏度。在一些实施方案中，在25℃至38℃(如30℃至37℃，例如为或约37℃±2℃)的温度下孵育富集的T细胞的组合物。在一些实施方案中，将孵育进行一段时间直至培养(例如培育或扩增)产生细胞的所需或阈值密度、数量或剂量。在一些实施方案中，孵育进行大于或大于约24小时、48小时、72小时、96小时、5天、6天、7天、8天、9天或更长时间，或者持续约或为24小时、48小时、72小时、96小时、5天、6天、7天、8天、9天或更长时间。
在特定实施方案中，在封闭系统中进行培育。在某些实施方案中，在无菌条件下在封闭系统中进行培育。在特定实施方案中，在与所提供系统的一个或多个步骤相同的封闭系统中进行培育。在一些实施方案中，将富集的T细胞的组合物从封闭系统去除并且置于用于培育的生物反应器中和/或与其连接。合适的用于培育的生物反应器的例子包括但不限于GE Xuri W25、GE Xuri W5、Sartorius BioSTAT RM 20|50、Finesse SmartRocker生物反应器系统和Pall XRS生物反应器系统。在一些实施方案中，生物反应器用于在培育步骤的至少一部分期间灌注和/或混合细胞。
在一些实施方案中，混合是或包括摇摆和/或运动。在一些情况下，生物反应器可以经历运动或摇摆，其在一些方面可以增加氧气传递。使生物反应器运动可以包括但不限于沿着水平轴线旋转、沿着竖直轴线旋转、沿着生物反应器的倾斜(tilted或inclined)的水平轴线的摇摆运动、或其任何组合。在一些实施方案中，在摇摆的情况下进行孵育的至少一部分。可以调节摇摆速度和摇摆角度以实现所希望的搅动。在一些实施方案中，摇摆角度为20°、19°、18°、17°、16°、15°、14°、13°、12°、11°、10°、9°、8°、7°、6°、5°、4°、3°、2°或1°。在某些实施方案中，摇摆角度在6-16°之间。在其他实施方案中，摇摆角度在7-16°之间。在其他实施方案中，摇摆角度在8-12°之间。在一些实施方案中，摇摆速率为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40rpm。在一些实施方案中，摇摆速率在4rpm与12rpm之间，例如在4rpm与6rpm之间，包含端值。
在一些实施方案中，使生物反应器保持等于或接近37℃的温度和等于或接近5％的CO2水平，具有如下稳定空气流量：为、为约或至少0.01L/min、0.05L/min、0.1L/min、0.2L/min、0.3L/min、0.4L/min、0.5L/min、1.0L/min、1.5L/min、或2.0L/min或大于2.0L/min。在某些实施方案中，在灌注的情况下，如以290ml/天、580ml/天和/或1160ml/天的速率(例如，这取决于与培育起始相关的时间安排和/或经培育细胞的密度)进行培育的至少一部分。在一些实施方案中，在摇摆运动(例如以在5°与10°之间(如6°)的角度，以恒定摇摆速度(例如在5RPM与15RPM之间(如6RMP或10RPM)的速度))的情况下进行细胞培养物扩增的至少一部分。
在一些实施方案中，用于根据所提供的方法、用途或制品制造、生成或产生细胞疗法和/或工程化细胞的方法可以包括在孵育、工程化和培育和/或如所述的一个或多个其他处理步骤之前或之后配制细胞，如配制从处理步骤得到的基因工程化细胞。在一些实施方案中，一个或多个处理步骤(包括配制细胞)可以在封闭系统中进行。在一些情况下，将细胞在用于制造、生成或产生细胞疗法和/或工程化细胞的一个或多个步骤(例如在离心室和/或封闭系统中进行)中处理可以包括在培养(例如培育和扩增)和/或一个或多个如所述的其他处理步骤之前或之后配制细胞，如配制由转导处理步骤产生的基因工程化细胞。在一些实施方案中，将基因工程化细胞配制为单位剂型组合物，其包括用于以给定剂量或其分数施用的细胞数量。
在一些实施方案中，提供包含用重组抗原受体(例如，CAR或TCR)工程化的细胞的细胞剂量作为组合物或配制品，如药物组合物或配制品。此类组合物可以根据所提供的方法使用，如用于治疗疾病、病症和障碍，或者用于检测、诊断和预后方法以及用途和制品中。在一些情况下，可以以用于剂量施用(如用于单一单位剂量施用或多剂量施用)的量配制细胞。
在一些实施方案中，可以将细胞配制到容器(如袋子或小瓶)中。在一些实施方案中，小瓶可以是输注小瓶。在一些实施方案中，用单一单位剂量的工程化细胞配制小瓶，如所述单一单位剂量包括用于以给定剂量或其分数施用的细胞数量。
在一些实施方案中，将细胞配制在药学上可接受的缓冲液中，所述药学上可接受的缓冲液在一些方面可以包括药学上可接受的载体或赋形剂。在一些实施方案中，所述处理包括将介质交换为药学上可接受的或施用至受试者所需的介质或配制缓冲液。在一些实施方案中，所述处理步骤可以涉及洗涤转导的和/或扩增的细胞以替代药学上可接受的缓冲液中的细胞，所述药学上可接受的缓冲液可以包括一种或多种任选的药学上可接受的载体或赋形剂。包括药学上可接受的载体或赋形剂的此类药物形式的例子可以是下文与将细胞和组合物施用至受试者可接受的形式结合描述的任何形式。在一些实施方案中，药物组合物以有效治疗或预防疾病或病症的量(如治疗有效量或预防有效量)含有细胞。
在一些实施方案中，配制缓冲液含有冷冻保存剂。在一些实施方案中，用冷冻保存剂溶液配制细胞，所述冷冻保存剂溶液含有1.0％至30％的DMSO溶液，如5％至20％的DMSO溶液或5％至10％的DMSO溶液。在一些实施方案中，冷冻保存溶液是或含有例如含有20％DMSO和8％人血清白蛋白(HSA)的PBS，或其他合适的细胞冷冻介质。在一些实施方案中，冷冻保存剂溶液是或含有例如至少或约7.5％DMSO。在一些实施方案中，所述处理步骤可以涉及洗涤转导的和/或扩增的细胞以交换在冷冻保存剂溶液中的细胞。在一些实施方案中，将细胞在具有以下终浓度的介质和/或溶液中冷冻(例如，冷冻保护或冷冻保存)：为或约12.5％、12.0％、11.5％、11.0％、10.5％、10.0％、9.5％、9.0％、8.5％、8.0％、7.5％、7.0％、6.5％、6.0％、5.5％或5.0％DMSO，或者在1％与15％之间、在6％与12％之间、在5％与10％之间或在6％与8％之间的DMSO。在特定实施方案中，将细胞在具有以下终浓度的介质和/或溶液中冷冻(例如，冷冻保护或冷冻保存)：为或为约5.0％、4.5％、4.0％、3.5％、3.0％、2.5％、2.0％、1.5％、1.25％、1.0％、0.75％、0.5％或0.25％HSA，或者在0.1％与5％之间、在0.25％与4％之间、在0.5％与2％之间或在1％与2％之间的HSA。
在一些实施方案中，使用一个或多个处理步骤进行所述配制，所述步骤包括洗涤、稀释或浓缩细胞，如培养或扩增的细胞。在一些实施方案中，所述处理可以包括将细胞稀释或浓缩至所需浓度或数量，如包括用于以给定剂量或其分数用的细胞数量的单位剂型组合物。在一些实施方案中，所述处理步骤可以包括减小体积，从而根据需要增加细胞的浓度。在一些实施方案中，所述处理步骤可以包括增加体积，从而根据需要减小细胞的浓度。在一些实施方案中，所述处理包括向转导的和/或扩增的细胞添加一定体积的配制缓冲液。在一些实施方案中，配制缓冲液的体积是从或从约10mL至1000mL，如至少或至少约或约或为50mL、100mL、200mL、300mL、400mL、500mL、600mL、700mL、800mL、900mL或1000mL。
在一些实施方案中，用于配制细胞组合物的此类处理步骤在封闭系统中进行。此类处理步骤的例子可以使用结合与细胞处理系统相关联的一个或多个系统或试剂盒的离心室(如由Biosafe SA生产和出售的离心室，包括与
Figure BDA0003183097650002271
或Sepax
Figure BDA0003183097650002272
细胞处理系统一起使用的那些)来进行。示例性系统和过程描述于国际公开号WO 2016/073602中。在一些实施方案中，所述方法包括从离心室的内部空腔中输送配制的组合物，所述配制的组合物是在如所述的任何上述实施方案中在配制缓冲液(如药学上可接受的缓冲液)中配制的细胞的所得组合物。在一些实施方案中，将配制的组合物压出至作为封闭系统的一部分与离心室可操作地连接的容器(如本文所述的生物医学材料器皿的小瓶)。在一些实施方案中，生物医学材料器皿被配置用于整合至和或可操作连接至并且/或者被整合至或可操作地连接至进行一个或多个处理步骤的封闭系统或设备。在一些实施方案中，生物医学材料器皿在输出管线或输出位置处连接至系统。在一些情况下，封闭系统在入口管处连接至生物医学材料器皿的小瓶。与本文所述的生物医学材料器皿一起使用的示例性封闭系统包括
Figure BDA0003183097650002273
和
Figure BDA0003183097650002274
2系统。
在一些实施方案中，如与离心室或细胞处理系统相关联的封闭系统包括多端口输出试剂盒，所述试剂盒含有在管线的每个末端与端口相关联的多路歧管，所述端口可以连接至一个或多个容器以供输送配制的组合物。在一些方面，所需数量或多个小瓶可以无菌连接至多端口输出中的一个或多个，通常两个或更多个，如至少3、4、5、6、7、8个或更多个端口。例如，在一些实施方案中，一个或多个容器(例如生物医学材料器皿)可以附接至所述端口或少于全部的所述端口。因此，在一些实施方案中，所述系统可以实现将输出组合物压出至生物医学材料器皿的多个小瓶中。
在一些方面，细胞可以以用于剂量施用(如用于单一单位剂量施用或多剂量施用)的量压出至多个输出容器(例如，小瓶)中的一个或多个。例如，在一些实施方案中，小瓶可以各自含有以给定剂量或其分数施用的细胞数量。因此，在一些方面，每个小瓶可以含有用于施用的单一单位剂量，或者可以含有所需剂量的一部分，使得多个小瓶中的多于一个，如两个小瓶或3个小瓶一起构成用于施用的剂量。在一些实施方案中，4个小瓶一起构成用于施用的剂量。
因此，容器(例如袋子或小瓶)通常含有要施用的细胞，例如，其一个或多个单位剂量。单位剂量可以是要施用至受试者的细胞的量或数量，或者是要施用的细胞的数量的两倍(或更多数量)。它可以是要施用至受试者的细胞的最低剂量或最低可能剂量。在一些方面，所提供的制品包括多个输出容器中的一个或多个。
在一些实施方案中，每个容器(例如袋子或小瓶)单独地包含单位剂量的细胞。因此，在一些实施方案中，每个容器包含相同或大致或基本相同数量的细胞。在一些实施方案中，每个单位剂量含有为或约或至少或至少约1x106、2x106、5x106、1x107、5x107或1x108个工程化细胞、总细胞、T细胞或PBMC。在一些实施方案中，每个单位剂量含有为或约或至少或至少约1x106、2x106、5x106、1x107、5x107或1x108个CAR+ T细胞，所述CAR+ T细胞是CD3+，如CD4+或CD8+，或其活子集。
在一些实施方案中，每个容器(例如袋子或小瓶)中的配制的细胞组合物的体积在为或约10mL与为或约100mL之间，如为或约或至少或至少约20mL、30mL、40mL、50mL、60mL、70mL、80mL、90mL或100mL。在一些实施方案中，每个容器(例如袋子或小瓶)中配制的细胞组合物的体积在为或约1mL与为或约10mL之间，如为或约1mL与为或约5mL之间。在一些实施方案中，每个容器(例如袋子或小瓶)中配制的细胞组合物的体积在为或约4mL与为或约5mL之间。在一些实施方案中，每个容器(例如袋子或小瓶)中配制的细胞组合物的体积为或为约4.4mL。在一些实施方案中，每个容器(例如袋子或小瓶)中配制的细胞组合物的体积为或为约4.5mL。在一些实施方案中，每个容器(例如袋子或小瓶)中配制的细胞组合物的体积为或为约4.6mL。在一些实施方案中，每个容器(例如袋子或小瓶)中配制的细胞组合物的体积为或为约4.7mL。在一些实施方案中，每个容器(例如袋子或小瓶)中配制的细胞组合物的体积为或为约4.8mL。在一些实施方案中，每个容器(例如袋子或小瓶)中配制的细胞组合物的体积为或为约4.9mL。在一些实施方案中，每个容器(例如袋子或小瓶)中配制的细胞组合物的体积为或为约5.0mL。
在一些实施方案中，配制的细胞组合物具有如下浓度：大于或大于约0.5x106个重组受体表达(例如CAR+)/CD3+细胞或此类活细胞/mL、大于或大于约1.0x106个重组受体表达(例如CAR+)/CD3+细胞或此类活细胞/mL、大于或大于约1.5x106个重组受体表达(例如CAR+)/CD3+细胞或此类活细胞/mL、大于或大于约2.0x106个重组受体表达(例如CAR+)/CD3+细胞或此类活细胞/mL、大于或大于约2.5x106个重组受体表达(例如CAR+)/CD3+细胞或此类活细胞/mL、大于或大于约2.6x106个重组受体表达(例如CAR+)/CD3+细胞或此类活细胞/mL、大于或大于约2.7x106个重组受体表达(例如CAR+)/CD3+细胞或此类活细胞/mL、大于或大于约2.8x106个重组受体表达(例如CAR+)/CD3+细胞或此类活细胞/mL、大于或大于约2.9x106个重组受体表达(例如CAR+)/CD3+细胞或此类活细胞/mL、大于或大于约3.0x106个重组受体表达(例如CAR+)/CD3+细胞或此类活细胞/mL、大于或大于约3.5x106个重组受体表达(例如CAR+)/CD3+细胞或此类活细胞/mL、大于或大于约4.0x106个重组受体表达(例如CAR+)/CD3+细胞或此类活细胞/mL、大于或大于约4.5x106个重组受体表达(例如CAR+)/CD3+细胞或此类活细胞/mL或者大于或大于约5x106个重组受体表达(例如CAR+)/CD3+细胞或此类活细胞/mL。在一些实施方案中，CD3+细胞是CD4+T细胞。在一些实施方案中，CD3+细胞是CD8+ T细胞。在一些实施方案中，CD3+ T细胞是CD4+和CD8+ T细胞。
在一些实施方案中，容器(例如袋或小瓶)中的细胞可以是冷冻保存的。在一些实施方案中，容器(例如小瓶)可以储存在液氮中，直到进一步使用。
在一些实施方案中，例如，根据本文所述的方法、用途和制品，将通过所述方法产生的此类细胞或包含此类细胞的组合物施用至受试者，用于治疗疾病或病症。
IV.组合物和配制品
在一些实施方案中，提供包含用重组抗原受体(例如，CAR或TCR)工程化的细胞的细胞剂量作为组合物或配制品，如药物组合物或配制品。示例性组合物和配制品描述于上文中，包括与工程化细胞的方法结合产生的那些。此类组合物可以根据所提供的方法或用途和/或用所提供制品或组合物来使用，如用于预防或治疗疾病、病症和障碍，或用于检测、诊断和预后方法。
术语“药物配制品”是指如下制剂，其处于使得其中所含活性成分的生物活性有效的形式，并且不含对被施用配制品的受试者具有不可接受的毒性的另外的组分。
“药学上可接受的载体”是指药物配制品中除了活性成分之外对受试者无毒的成分。药学上可接受的载体包括但不限于缓冲液、赋形剂、稳定剂或防腐剂。
在一些方面，载体的选择部分地由特定细胞或药剂和/或通过给药方法确定。因此，存在多种合适的配制品。例如，药物组合物可以含有防腐剂。合适的防腐剂可以包括例如对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸丙酯、苯甲酸钠和苯扎氯铵。在一些方面，使用两种或更多种防腐剂的混合物。防腐剂或其混合物通常以总组合物重量的约0.0001％至约2％的量存在。载体描述于例如Remington's Pharmaceutical Sciences第16版,Osol,A.编辑(1980)中。药学上可接受的载体在所用剂量和浓度下通常对接受者无毒，并且包括但不限于：缓冲液，如磷酸盐、柠檬酸盐和其他有机酸；抗氧化剂，包括抗坏血酸和甲硫氨酸；防腐剂(如十八烷基二甲基苄基氯化铵；六甲氯铵；苯扎氯铵；苄索氯铵；苯酚、丁醇或苄醇；烷基对羟基苯甲酸酯，如对羟基苯甲酸甲酯或对羟基苯甲酸丙酯；儿茶酚；间苯二酚；环己醇；3-戊醇；和间甲酚)；低分子量(少于约10个残基)多肽；蛋白质，如血清白蛋白、明胶或免疫球蛋白；亲水性聚合物，如聚乙烯吡咯烷酮；氨基酸，如甘氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、组氨酸、精氨酸或赖氨酸；单糖、二糖和其他碳水化合物，包括葡萄糖、甘露糖或糊精；螯合剂，如EDTA；糖类，如蔗糖、甘露醇、海藻糖或山梨醇；成盐抗衡离子，如钠；金属络合物(例如锌-蛋白质络合物)；和/或非离子表面活性剂，如聚乙二醇(PEG)。
在一些方面，在组合物中包括缓冲剂。合适的缓冲剂包括例如柠檬酸、柠檬酸钠、磷酸、磷酸钾和各种其他酸和盐。在一些方面，使用两种或更多种缓冲剂的混合物。缓冲剂或其混合物通常以按总组合物的重量计约0.001％至约4％的量存在。用于制备可施用的药物组合物的方法是已知的。示例性方法更详细地描述于例如Remington:The Science andPractice of Pharmacy,Lippincott Williams&Wilkins；第21版(2005年5月1日)中。
配制品或组合物还可以含有超过一种活性成分，其可用于用细胞或药剂预防或治疗的特定适应症、疾病或病症，其中各自的活性不会相互产生不利影响。此类活性成分以有效用于既定目的的量以合适的方式组合存在。因此，在一些实施方案中，药物组合物进一步包含其他药物活性剂或药物，如化学治疗剂，例如天冬酰胺酶、白消安、卡铂、顺铂、柔红霉素、多柔比星、氟尿嘧啶、吉西他滨、羟基脲、甲氨蝶呤、紫杉醇、利妥昔单抗、长春碱、长春新碱等。在一些实施方案中，所述药剂或细胞以盐(例如药学上可接受的盐)的形式施用。合适的药学上可接受的酸加成盐包括源自无机酸(如盐酸、氢溴酸、磷酸、偏磷酸，硝酸和硫酸)和有机酸(如酒石酸、乙酸、柠檬酸、苹果酸、乳酸、富马酸、苯甲酸、乙醇酸、葡萄糖酸、琥珀酸和芳基磺酸，例如对甲苯磺酸)的那些盐。
在一些实施方案中，药物组合物以有效治疗或预防疾病或病症的量(如治疗有效量或预防有效量)含有药剂或细胞。在一些实施方案中，通过定期评估所治疗的受试者来监测治疗或预防功效。对于数天或更长时间的重复施用，根据病症，重复治疗直至出现对疾病症状的所需抑制。然而，其他剂量方案可能是有用的并且可以被确定。所需剂量可以通过单次推注施用组合物、通过多次推注施用组合物或通过连续输注施用组合物来递送。
药剂或细胞可以通过任何合适的方式施用，例如，通过推注输注，通过注射，例如，静脉内或皮下注射、眼内注射、眼周注射、视网膜下注射、玻璃体内注射、经中隔注射、巩膜下注射、脉络膜内注射、前房注射、结膜下(subconjectval)注射、结膜下(subconjuntival)注射、眼球筋膜囊下(sub-Tenon)注射、眼球后注射、眼球周注射或后近巩膜(posteriorjuxtascleral)递送。在一些实施方案中，它们通过肠胃外、肺内和鼻内以及(如果局部治疗需要)病灶内施用来施用。肠胃外输注包括肌肉内、静脉内、动脉内、腹膜内或皮下施用。在一些实施方案中，给定剂量通过细胞或药剂的单次推注给药来施用。在一些实施方案中，其是通过例如在不超过3天的时间段内对细胞或药剂的多次推注施用或通过细胞或药剂的连续输注施用来施用。
对于疾病的预防或治疗，适当的剂量可取决于要治疗的疾病类型、一种或多种药剂的类型、细胞或重组受体的类型、疾病的严重程度和病程、施用药剂或细胞用于预防性目的还是治疗性目的、先前疗法、受试者的临床病史和对药剂或细胞的反应、以及主治医师的决断。在一些实施方案中，将组合物一次性或在一系列治疗中合适地施用至受试者。
所述细胞或药剂可以使用标准施用技术、配制品和/或装置来施用。提供用于储存和施用组合物的配制品和装置，如注射器和小瓶。关于细胞，施用可以是自体的或异源的。例如，免疫应答细胞或祖细胞可以从一名受试者获得，并且将其施用至同一受试者或不同的相容受试者。源自外周血的免疫应答细胞或其后代(例如，体内、离体或体外衍生的)可以经由局部注射施用，包括导管施用、全身注射、局部注射、静脉内注射或肠胃外施用。当施用治疗性组合物(例如，含有基因修饰的免疫应答细胞或治疗或改善神经毒性症状的药剂的药物组合物)时，通常将其配制成单位剂量可注射形式(溶液、悬浮液、乳液)。
配制品包括用于口服、静脉内、腹膜内、皮下、经肺、透皮、肌内、鼻内、经颊、舌下或栓剂施用的那些。在一些实施方案中，肠胃外施用药剂或细胞群。如本文所用术语“肠胃外”包括静脉内、肌内、皮下、直肠、阴道和腹膜内施用。在一些实施方案中，使用通过静脉内、腹膜内或皮下注射的外周全身递送向受试者施用药剂或细胞群。
在一些实施方案中，组合物作为无菌液体制剂提供，例如等渗水溶液、悬浮液、乳液、分散体或粘性组合物，其在一些方面可以缓冲至选择的pH。液体制剂一般比凝胶、其他粘性组合物和固体组合物制备起来更容易。另外地，液体组合物稍微更方便施用，特别是通过注射。在另一方面，粘性组合物可以配制在适当的粘度范围内，以提供与特定组织的更长的接触时间。液体或粘性组合物可以包含载体，所述载体可以是溶剂或分散介质，所述溶剂或分散介质含有例如水、盐水、磷酸盐缓冲盐水、多元醇(例如，甘油、丙二醇、液体聚乙二醇)及其合适的混合物。
无菌可注射溶液可以通过以下方式来制备：将药剂或细胞掺入溶剂中，如掺入与合适的载体、稀释剂或赋形剂(如无菌水、生理盐水、葡萄糖、右旋糖等)的混合物中。
用于体内施用的配制品通常是无菌的。可以例如通过经无菌滤膜过滤容易地实现无菌。
在一些实施方案中，所施用细胞的剂量在冷冻保存的组合物中。在一些方面，在将冷冻保存的组合物解冻后施用组合物。在一些实施方案中，在解冻后为或约30分钟、45分钟、60分钟、90分钟、120分钟、150分钟或180分钟内施用组合物。在一些实施方案中，在解冻后为或约120分钟内施用组合物。
在一些实施方案中，用注射器施用细胞的剂量。在一些实施方案中，注射器的体积是为或约0.5、1、2、2.5、3、4、5、7.5、10、20或25mL或由任何前述值限定的范围。
V.组合疗法
在所述方法、制品、用途或组合物的一些实施方案中，将细胞疗法(例如，一定剂量的T细胞(例如，CAR+ T细胞))与通常除了所述细胞疗法或另一种细胞疗法以外(如除了CAR+T细胞疗法以外)的另外的治疗剂或疗法组合施用至受试者。在一些实施方案中，将细胞疗法(例如，一定剂量的基因工程化T细胞，如CAR+ T细胞)在所提供的方法或用途中和/或与所述制品或组合物一起作为组合治疗或组合疗法的一部分来施用，如与一种或多种另外的治疗性干预同时、以任何顺序依序或间歇地施用。在一些实施方案中，一种或多种另外的治疗干预包括用于治疗或预防疾病或病症(如弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)或其亚型或B细胞恶性肿瘤(例如NHL))的任何药剂或治疗，和/或用于增加工程化细胞疗法的功效、持久性和/或活性的任何药剂或治疗。
在一些实施方案中，将另外的治疗剂或疗法施用至受试者，所述受试者对于使用细胞疗法(例如，一定剂量的T细胞(例如，CAR+ T细胞))的治疗是或可能是或被预测为是较差反应者，和/或所述受试者不反应，可能不反应和/或被预测为不反应或在某一时间内和/或在某一程度上不反应。在一些实施方案中，将另外的治疗剂施用至受试者，所述受试者如在开始施用所述细胞疗法后1个月内、在两个月内或在三个月内不展现或不可能展现或被预测为不展现完全反应或总体反应。在一些实施方案中，将另外的治疗剂施用至受试者，所述受试者如在施用所述细胞疗法后1个月、两个月或3个月内展现或可能展现或被预测为展现疾病进展(PD)。在一些实施方案中，基于如此治疗或先前用细胞疗法治疗的多名类似情况的受试者，受试者可能或被预测为不展现反应或某一反应。
在一些实施方案中，观察到可能或更有可能展现对细胞疗法(例如，一定剂量的T细胞(例如，CAR+ T细胞))的较差反应的受试者包括患有NHL的受试者，所述受试者在用先前疗法(任选地使用化学治疗剂的先前疗法)治疗后被鉴定为或已被鉴定为患有疾病稳定或进展(SD/PD)，所述受试者被鉴定为或已被鉴定为东部肿瘤协作组体能状态(ECOG)状态为2，所述受试者被鉴定为或已被鉴定为患有转化的滤泡性淋巴瘤(tFL)，或者所述受试者被鉴定为或已被鉴定为患有从MZL和CLL转化的DLBCL。在一些实施方案中，所提供的方法包括选择在单独施用细胞疗法和与另外的药剂或疗法(如所述任一种)组合施用所述细胞疗法时，展现或可能展现对所述细胞疗法的较差反应的受试者。在一些实施方案中，用于在所提供的组合治疗方法中治疗的受试者是如下受试者：因患有B细胞恶性肿瘤(如NHL)而被选择，并且在用先前疗法(任选地使用化学治疗剂的先前疗法)治疗后患有疾病稳定或进展(SD/PD)，东部肿瘤协作组体能状态(ECOG)状态为2，患有转化的滤泡性淋巴瘤(tFL)，或者患有从MZL和CLL转化的DLBCL。在一些实施方案中，另外的药剂或疗法可以在开始施用细胞疗法(例如，一定剂量的T细胞(例如，CAR+ T细胞))之前、与开始施用细胞疗法相伴随、或与开始施用细胞疗法同时和/或在开始施用细胞疗法之后施用。
在某些实施方案中，发现在施用细胞疗法后，所述细胞疗法在受试者血液中的药代动力学(PK)在响应(例如，展现CR或OR)与不响应(例如，展现PD)所述细胞疗法的受试者之间是相似的或无显著不同。在一些实施方案中，此类观察指示，细胞疗法在受试者体内已经或正在扩增，但是可能不展现最佳功效。
在一些情况下，细胞疗法的最佳功效可能取决于所施用细胞的以下能力：识别并结合至靶标(例如，靶抗原)，运输、定位至和成功进入受试者、肿瘤及其环境内的适当位点。在一些情况下，最佳功效可能取决于所施用细胞的以下能力：被激活，扩增，发挥各种效应子功能(包括细胞毒性杀伤和分泌各种因子，如细胞因子)，持续(包括长期)，分化、转换或参与重编程为某些表型状态(如长期记忆、低分化和效应子状态)，避免或减少疾病局部微环境中的免疫抑制条件，在清除并重新暴露于靶配体或抗原后提供有效且稳健的回忆反应，以及避免或减少耗竭、无反应性、外周耐受、终末分化和/或分化为抑制状态。
在一些方面，免疫疗法(例如，T细胞疗法)的功效可能因疾病或障碍的局部微环境(例如TME)中存在的免疫抑制活性或因素而受限。在一些方面，TME含有或产生可抑制T细胞疗法所施用的T细胞的活性、功能、增殖、存活和/或持久性的因素或条件。
在一些实施方案中，在开始施用细胞疗法(例如，一定剂量的T细胞(例如，CAR+ T细胞))之前、与开始施用细胞疗法相伴随、或与开始施用细胞疗法同时和/或在开始施用细胞疗法之后施用另外的药剂或疗法可以导致改进的所述细胞疗法的活性、功效和/或持久性和/或改进所治疗受试者的反应。在一些实施方案中，用于组合治疗或组合疗法的另外的药剂增强、加强和/或促进细胞疗法(例如，工程化T细胞疗法，如CAR+ T细胞)的治疗效果的功效和/或安全性。在一些实施方案中，另外的药剂增强或改进所施用细胞(例如，表达重组受体(例如，CAR)的细胞)的功效、存活或持久性。
在一些实施方案中，另外的疗法的药剂是抗体或细胞毒性剂或治疗剂，例如，化学治疗剂。在一些实施方案中，用于治疗或疗法的一种或多种另外的药剂是免疫调节剂、免疫检查点抑制剂、腺苷途径或腺苷受体拮抗剂或激动剂和激酶抑制剂。在一些实施方案中，组合治疗或组合疗法包括另外的治疗，如手术治疗、移植和/或放射疗法。
在一些实施方案中，另外的药剂选自蛋白磷酸酶抑制剂、激酶抑制剂、细胞因子、免疫调节剂或降低调节性T(Treg)细胞的水平或活性的药剂。在一些实施方案中，另外的药剂借助减少或改善所施用细胞疗法的不良影响来增强安全性。在一些实施方案中，另外的药剂可以治疗相同疾病、病症或共病。在一些实施方案中，另外的药剂可以改善、降低或消除与所述细胞(例如，CAR表达细胞)的施用相关的一种或多种毒性、不良影响或副作用。
在一些实施方案中，另外的疗法、治疗或药剂包括化学疗法、放射疗法、手术、移植、过继细胞疗法、抗体、细胞毒性剂、化学治疗剂、细胞因子、生长抑制剂、抗激素剂、激酶抑制剂、抗血管生成剂、保心药、免疫刺激剂、免疫抑制剂、免疫检查点抑制剂、抗生素、血管发生抑制剂、代谢调节剂或其他治疗剂或其任何组合。在一些实施方案中，另外的药剂是蛋白质、肽、核酸、小分子药剂、细胞、毒素、脂质、碳水化合物或其组合，或任何其他类型的治疗剂，例如辐射。在一些实施方案中，另外的疗法、药剂或治疗包括手术、化学疗法、放射疗法、移植、施用表达重组受体(例如，CAR)的细胞、激酶抑制剂、免疫检查点抑制剂、mTOR途径抑制剂、免疫抑制剂、免疫调节剂、抗体、免疫清除剂、抗体和/或其抗原结合片段、抗体缀合物、其他抗体疗法、细胞毒素、类固醇、细胞因子、肽疫苗、激素疗法、抗代谢物、代谢调节剂、抑制钙依赖性磷酸酶钙调磷酸酶或p70S6激酶FK506或抑制p70S6激酶的药物、烷化剂、蒽环类、长春花生物碱、蛋白酶体抑制剂、GITR激动剂、蛋白质酪氨酸磷酸酶抑制剂、蛋白质激酶抑制剂、溶瘤病毒和/或其他类型的免疫疗法。在一些实施方案中，另外的药剂或治疗是骨髓移植、使用化疗剂(如氟达拉滨)的T细胞清除疗法、外线束放疗(XRT)、环磷酰胺和/或抗体疗法。
在一些实施方案中，另外的药剂是激酶抑制剂，例如，布鲁顿酪氨酸激酶(Btk)抑制剂，例如，依鲁替尼。在一些实施方案中，另外的药剂是腺苷途径或腺苷受体拮抗剂或激动剂。在一些实施方案中，另外的药剂是免疫调节剂，如沙利度胺或沙利度胺衍生物(例如，来那度胺)。在一些实施方案中，另外的疗法、药剂或治疗是细胞毒性剂或化学治疗剂、生物疗法(例如，抗体，例如，单克隆抗体，或细胞疗法)或抑制剂(例如，激酶抑制剂)。
在一些实施方案中，另外的药剂是化学治疗剂。示例性化学治疗剂包括蒽环类(例如，多柔比星，如脂质体多柔比星)；长春花生物碱(例如，长春碱、长春新碱、长春地辛、长春瑞滨)；烷化剂(例如，环磷酰胺、达卡巴嗪、美法仑、异环磷酰胺、替莫唑胺)；免疫细胞抗体(例如，阿仑单抗、吉妥珠单抗、利妥昔单抗、托西莫单抗)；抗代谢物(包括例如叶酸拮抗剂、嘧啶类似物、嘌呤类似物和腺苷脱氨酶抑制剂，如氟达拉滨)；TNFR糖皮质激素诱导的TNFR相关蛋白(GITR)激动剂；蛋白酶体抑制剂(例如，阿克拉霉素A、胶霉毒素或硼替佐米)；免疫调节剂，如沙利度胺或沙利度胺衍生物(例如，来那度胺)。
在一些实施方案中，另外的药剂是免疫调节剂。在一些实施方案中，组合疗法包括可以刺激、放大和/或以其他方式增强抗肿瘤免疫应答(例如，来自所施用工程化细胞的抗肿瘤免疫应答)的免疫调节剂，如通过抑制免疫抑制信号传导或增强免疫刺激信号传导。在一些实施方案中，免疫调节剂是肽、蛋白质或是小分子。在一些实施方案中，所述蛋白质可以是融合蛋白或重组蛋白。在一些实施方案中，免疫调节剂结合至免疫靶标，如在免疫细胞(如T细胞、B细胞或抗原呈递细胞)上表达的细胞表面受体。例如，在一些实施方案中，免疫调节剂是抗体或抗原结合抗体片段、融合蛋白、小分子或多肽。在一些实施方案中，结合分子、重组受体、细胞和/或组合物是与作为抗体或其抗原结合片段(如单克隆抗体)的另外的药剂组合施用。
在一些实施方案中，免疫调节剂阻断、抑制或抵消免疫检查点途径的组分。免疫系统具有参与维持自身耐受性和用于调节免疫应答的多个抑制途径。肿瘤可以使用某些免疫检查点途径作为免疫抗性的主要机制，特别是针对对肿瘤抗原具有特异性的T细胞(Pardoll(2012)Nature Reviews Cancer 12:252-264)，例如工程化细胞，如CAR表达细胞。因为许多此类免疫检查点是通过配体-受体相互作用开始的，所以它们可以容易地被针对配体和/或其受体的抗体阻断。与大多数抗癌剂相反，检查点抑制剂不一定直接靶向肿瘤细胞，而是靶向淋巴细胞受体或其配体，以增强免疫系统的内源性抗肿瘤活性。
在一些实施方案中，另外的药剂是免疫调节剂，所述免疫调节剂是能够抑制或阻断涉及免疫检查点分子的分子功能或信号传导通路的拮抗剂分子或者是免疫检查点抑制剂。在一些实施方案中，免疫检查点分子或途径是PD-1、PD-L1、PD-L2、CTLA-4、LAG-3、TIM3、VISTA、腺苷2A受体(A2AR)或腺苷或涉及前述任一种的途径。在某些实施方案中，阻断免疫检查点途径的拮抗性分子(如小分子、核酸抑制剂(例如，RNAi)或抗体分子)正在变成用于癌症和其他疾病的有前景的免疫疗法途径。
在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂是完全或部分降低、抑制、干扰或调节一种或多种检查点蛋白的分子。检查点蛋白调节T细胞激活或功能。这些蛋白质负责T细胞应答的共刺激或抑制性相互作用。免疫检查点蛋白调节和维持自身耐受性和生理免疫应答的持续时间和幅度。
免疫检查点抑制剂包括以统计学上显著的方式阻断或抑制免疫系统的抑制途径的任何药剂。此类抑制剂可以包括小分子抑制剂或者可以包括与免疫检查点受体、配体结合并阻断或抑制免疫检查点受体、配体和/或受体-配体相互作用的抗体或其抗原结合片段。在一些实施方案中，特定受体的调节、增强和/或刺激可以胜过免疫检查点途径组分。可以被靶向用于阻断、抑制、调节、增强和/或刺激的说明性免疫检查点分子包括但不限于PD-1(CD279)、PD-L1(CD274、B7-H1)、PDL2(CD273、B7-DC)、CTLA-4、LAG-3(CD223)、TIM-3、4-1BB(CD137)、4-1BBL(CD137L)、GITR(TNFRSF18、AITR)、CD40、OX40(CD134、TNFRSF4)、CXCR2、肿瘤相关抗原(TAA)、B7-H3、B7-H4、BTLA、HVEM、GAL9、B7H3、B7H4、VISTA、KIR、2B4(属于分子的CD2家族并且在所有NK、γδ和记忆CD8+(αβ)T细胞上表达)、CD160(也称为BY55)、CGEN-15049、CEACAM(例如，CEACAM-1、CEACAM-3和/或CEACAM-5)、TIGIT、LAIR1、CD160、2B4、CD80、CD86、B7-H3(CD276)、B7-H4(VTCN1)、HVEM(TNFRSF14或CD270)、KIR、A2aR、MHC I类、MHC II类、GAL9、腺苷和转化生长因子受体(TGFR；例如，TGFRβ)。免疫检查点抑制剂包括抗体或其抗原结合片段或其他结合蛋白，其结合至并阻断或抑制和/或增强或刺激一种或多种任何所述分子的活性。
示例性免疫检查点抑制剂包括曲美目单抗(CTLA-4阻断抗体，也称为替西木单抗、CP-675,206)、抗OX40、PD-L1单克隆抗体(抗B7-H1；MEDI4736)、MK-3475(PD-1阻断剂)、纳武单抗(抗PD-1抗体)、CT-011(抗PD-1抗体)、BY55单克隆抗体、AMP224(抗PD-L1抗体)、BMS-936559(抗PD-L1抗体)、MPLDL3280A(抗PD-L1抗体)、MSB0010718C(抗PD-L1抗体)和伊匹单抗(抗CTLA-4抗体，也称为
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MDX-010和MDX-101)。免疫调节抗体的示例包括但不限于达珠单抗(Daclizumab)(Zenapax)、贝伐单抗(Bevacizumab)
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巴利昔单抗(Basiliximab)、伊匹单抗(Ipilimumab)、纳武单抗、派姆单抗(pembrolizumab)、MPDL3280A、匹利珠单抗(Pidilizumab)(CT-011)、MK-3475、BMS-936559、MPDL3280A(阿替珠单抗(Atezolizumab))、曲美目单抗、IMP321、BMS-986016、LAG525、乌瑞鲁单抗(urelumab)、PF-05082566、TRX518、MK-4166、达西珠单抗(dacetuzumab)(SGN-40)、鲁卡木单抗(lucatumumab)(HCD122)、SEA-CD40、CP-870、CP-893、MEDI6469、MEDI6383、MOXR0916、AMP-224、MSB0010718C(阿维鲁单抗(Avelumab))、MEDI4736、PDR001、rHIgM12B7、乌鲁库单抗(Ulocuplumab)、BKT140、伐立鲁单抗(Varlilumab)(CDX-1127)、ARGX-110、MGA271、利瑞鲁单抗(lirilumab)(BMS-986015、IPH2101)、IPH2201、ARGX-115、艾马珠单抗(Emactuzumab)、CC-90002和MNRP1685A或其抗体结合片段。其他示例性免疫调节剂包括例如阿福图珠单抗(可从
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获得)；培非司亭
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来那度胺(CC-5013，
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)；沙利度胺
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actimid(CC4047)；和IRX-2(人细胞因子的混合物，包括白介素1、白介素2和干扰素γ，CAS 951209-71-5，可从IRX Therapeutics获得)。
在一些实施方案中，根据所提供方法和/或用所提供制品或组合物施用的另外的药剂是结合至和/或抑制程序性细胞死亡蛋白1(PD-1)的药剂。PD-1是在B细胞、NK细胞和T细胞中表达的免疫检查点蛋白(Shinohara等人,1995,Genomics 23:704-6；Blank等人,2007,Cancer Immunol Immunother 56:739-45；Finger等人,1997,Gene 197:177-87；Pardoll(2012)Nature Reviews Cancer 12:252-264)。PD-1的主要作用是在响应于感染的炎症过程中限制外周组织中T细胞的活性，以及限制自身免疫。在激活的T细胞中诱导PD-1表达，并且PD-1与其内源性配体之一的结合通过抑制刺激性激酶起到抑制T细胞激活的作用。PD-1还起到抑制TCR“停止信号”的作用。PD-1在Treg细胞上高度表达，并且可以在配体存在下增加所述Treg细胞的增殖(Pardoll(2012)Nature Reviews Cancer 12:252-264)。抗PD 1抗体已被用于治疗黑色素瘤、非小细胞肺癌、膀胱癌、前列腺癌、结直肠癌、头颈癌、三阴性乳腺癌、白血病、淋巴瘤和肾细胞癌(Topalian等人,2012,N Engl J Med 366:2443--54；Lipson等人,2013,Clin Cancer Res 19:462--8；Berger等人,2008,ClinCancer Res 14:3044-51；Gildener-Leapman等人,2013,Oral Oncol 49:1089-96；Menzies和Long,2013,Ther Adv Med Oncol 5:278-85)。示例性抗PD-1抗体包括纳武单抗(BMS的Opdivo)、派姆单抗(Merck的Keytruda)、匹利珠单抗(Cure Tech的CT-011)、兰姆利珠单抗(Merck的MK-3475)和AMP-224(Merck)，纳武单抗(也称为Opdivo，BMS-936558或MDX1106；Bristol-Myers Squibb)是特异性阻断PD-1的完全人IgG4单克隆抗体。纳武单抗(克隆5C4)和特异性地结合PD-1的其他人单克隆抗体描述于US 8,008,449和WO 2006/121168。匹利珠单抗(CT-011；Cure Tech)是与PD-1结合的人源化IgG1k单克隆抗体。匹地利珠单抗和其他人源化抗PD-1单克隆抗体描述于WO 2009/101611中。派姆单抗(先前称为兰姆利珠单抗，也称为Keytruda，MK03475；Merck)是与PD-1结合的人源化IgG4单克隆抗体。派姆单抗和其他人源化抗PD-1抗体描述于US 8,354,509和WO 2009/114335。其他抗PD-1抗体尤其包括AMP514(Amplimmune)，例如，US 8,609,089、US 2010028330、US 20120114649和/或US20150210769中描述的抗PD-1抗体。AMP-224(B7-DCIg；Amplimmune；例如，描述于WO 2010/027827和WO 2011/066342中)是阻断PD-1与B7-H1之间相互作用的PD-L2 Fc融合可溶性受体。
在一些实施方案中，根据所提供方法和/或用所提供制品或组合物施用的另外的药剂是结合至或抑制PD-L1(也称为CD274和B7-H1)和/或PD-L2(也称为CD273和B7-DC)的药剂。PD-L1和PD-L2是PD-1的配体，发现于激活的T细胞、B细胞、骨髓细胞、巨噬细胞和一些类型的肿瘤细胞上。抗肿瘤疗法已集中于抗PD-L1抗体。PD-1与PD-L1的复合物抑制CD8+ T细胞的增殖并降低免疫应答(Topalian等人,2012,N Engl J Med 366:2443-54；Brahmer等人,2012,N Eng J Med 366:2455-65)。抗PD-L1抗体已被用于治疗非小细胞肺癌、黑色素瘤、结直肠癌、肾细胞癌、胰腺癌、胃癌、卵巢癌、乳腺癌和血液恶性肿瘤(Brahmer等人,2012,N Eng J Med 366:2455-65；Ott等人,2013,Clin Cancer Res 19:5300-9；Radvanyi等人,2013,Clin Cancer Res 19:5541；Menzies&Long,2013,Ther Adv Med Oncol 5:278-85；Berger等人,2008,Clin Cancer Res 14:13044-51)。示例性抗PD-L1抗体包括MDX-1105(Medarex)、MEDI4736(Medimmune)、MPDL3280A(Genentech)、BMS-935559(Bristol-MyersSquibb)和MSB0010718C。MEDI4736(Medimmune)是结合至PD-L1并抑制所述配体与PD-1的相互作用的人单克隆抗体。MDPL3280A(Genentech/Roche)是结合至PD-L1的人Fc优化的IgG1单克隆抗体。MDPL3280A和针对PD-L1的其他人单克隆抗体描述于美国专利号7,943,743和美国公开号20120039906中。其他抗PD-L1结合剂包括YW243.55.S70(参见WO 2010/077634)和MDX-1105(也称为BMS-936559，以及例如描述于WO 2007/005874中的抗PD-L1结合剂)。
在一些实施方案中，根据所提供方法和/或用所提供制品或组合物施用的另外的药剂是作为细胞毒性T淋巴细胞相关抗原(CTLA-4，也称为CD152)的抑制剂或结合至CTLA-4的药剂。CTLA-4是用于调节T细胞激活的共抑制分子。CTLA-4是仅在T细胞上表达的免疫球蛋白超家族的成员。CTLA-4起到抑制T细胞激活的作用，并且据报道其抑制辅助T细胞活性并增强调节性T细胞免疫抑制活性。尽管CTLA-4的准确作用机制仍在研究之中，但已经提出其通过在与CD80和CD86结合中与CD28竞争而胜出以及将抑制剂信号主动递送至T细胞来抑制T细胞激活(Pardoll(2012)Nature Reviews Cancer 12:252-264)。抗CTLA-4抗体已在临床试验中用于治疗黑色素瘤、前列腺癌、小细胞肺癌、非小细胞肺癌(Robert&Ghiringhelli,2009,Oncologist 14:848-61；Ott等人,2013,Clin Cancer Res 19:5300；Weber,2007,Oncologist 12:864-72；Wada等人,2013,J Transl Med 11:89)。抗CTLA-4的重要特征是抗肿瘤作用的动力学，其中在生理反应所需的初始治疗后迟滞期长达6个月。在一些情况下，在治疗开始后，在观察到缩小之前，肿瘤的大小可能实际上增加(Pardoll(2012)Nature Reviews Cancer 12:252-264)。示例性抗CTLA-4抗体包括伊匹单抗(Bristol-Myers Squibb)和曲美目单抗(Pfizer)。伊匹单抗最近已经被FDA批准用于治疗转移性黑色素瘤(Wada等人,2013,J Transl Med 11:89)。
在一些实施方案中，根据所提供方法和/或用所提供制品或组合物施用的另外的药剂是结合至和/或抑制淋巴细胞激活基因-3(LAG-3，也称为CD223)的药剂。LAG-3是另一种免疫检查点蛋白。LAG-3与对淋巴细胞活性的抑制相关，并且在一些情况下与淋巴细胞无反应性的诱导相关。LAG-3在免疫系统中的各种细胞上表达，包括B细胞、NK细胞和树突细胞。LAG-3是MHC II类受体的天然配体，所述MHC II类受体在黑色素瘤浸润的T细胞(包括被赋予有效免疫抑制活性的那些T细胞)上大量表达。示例性抗LAG-3抗体包括BMS-986016(Bristol-Myers Squib)，其是靶向LAG-3的单克隆抗体。IMP701(Immutep)是拮抗剂LAG-3抗体，并且IMP731(Immutep和GlaxoSmithKline)是耗尽的LAG-3抗体。其他LAG-3抑制剂包括IMP321(Immutep)，其是LAG-3的可溶部分的重组融合蛋白；和结合MHC II类分子并激活抗原呈递细胞(APC)的Ig。其他抗体描述于例如WO 2010/019570和US 2015/0259420。
在一些实施方案中，根据所提供方法和/或用所提供制品或组合物施用的另外的药剂是结合至和/或抑制T细胞免疫球蛋白结构域和粘蛋白结构域-3(TIM-3)的药剂。TIM-3最初是在激活的Th1细胞上鉴定的，以显示其是免疫应答的负调节物。TIM-3的阻断促进T细胞介导的抗肿瘤免疫，并且在一系列小鼠肿瘤模型中具有抗肿瘤活性。TIM-3阻断与其他免疫治疗剂(如TSR-042、抗CD137抗体和其他)的组合在增加抗肿瘤作用方面可以是加和的或协同的。TIM-3表达与许多不同的肿瘤类型(包括黑色素瘤、NSCLC和肾癌)相关，另外，肿瘤内TIM-3的表达已经被证明与跨越一系列肿瘤类型(包括NSCLC、宫颈癌和胃癌)的不良预后相关。TIM-3的阻断也有利于提高对许多慢性病毒性疾病的免疫。TIM-3也已被证明与许多配体(包括半乳糖凝集素-9、磷脂酰丝氨酸和HMGB1)相互作用，尽管目前尚不清楚这些配体中有哪些(如果有的话)是与抗肿瘤反应的调节有关。在一些实施方案中，靶向TIM-3的抗体、抗体片段、小分子或肽抑制剂可以与TIM-3的IgV结构域结合以抑制与其配体的相互作用。抑制TIM-3的示例性抗体和肽描述于US 2015/0218274、WO 2013/006490和US 2010/0247521中。其他抗TIM-3抗体包括RMT3-23的人源化形式(Ngiow等人,2011,Cancer Res,71:3540-3551)和克隆8B.2C12(Monney等人,2002,Nature,415:536-541)。抑制TIM-3和PD-1的双特异性抗体描述于US 2013/0156774。
在一些实施方案中，根据所提供方法和/或用所提供制品或组合物施用的另外的药剂是作为CEACAM抑制剂(例如，CEACAM-1、CEACAM-3和/或CEACAM-5抑制剂)的药剂。在一些实施方案中，CEACAM抑制剂是抗CEACAM抗体分子。示例性抗CEACAM-1抗体描述于WO2010/125571、WO 2013/082366、WO 2014/059251和WO 2014/022332中，例如，单克隆抗体34B1、26H7和5F4；或其重组形式，如在例如US 2004/0047858、US 7,132,255和WO 99/052552中所述。在一些实施方案中，抗CEACAM抗体与CEACAM-5结合，如在例如Zheng等人PLoS One.(2011)6(6):e21146中所述；或与CEACAM-1和CEACAM-5交叉反应，如在例如WO2013/054331和US 2014/0271618中所述。
在一些实施方案中，根据所提供方法和/或用所提供制品或组合物施用的另外的药剂是结合至和/或抑制4-1BB(也称为CD137)的药剂。4-1BB是属于TNFR超家族的跨膜糖蛋白。4-1BB受体存在于激活的T细胞和B细胞和单核细胞上。示例性抗4-1BB抗体是乌瑞鲁单抗(BMS-663513)，其具有潜在的免疫刺激和抗肿瘤活性。
在一些实施方案中，根据所提供方法和/或用所提供制品或组合物施用的另外的药剂是结合至和/或抑制肿瘤坏死因子受体超家族成员4(TNFRSF4，也称为OX40和CD134)的药剂。TNFRSF4是TNFR超家族的另一个成员。OX40在静止幼稚T细胞上并非组成型表达，并且起次级共刺激免疫检查点分子的作用。示例性抗OX40抗体是MEDI6469和MOXR0916(RG7888，Genentech)。
在一些实施方案中，根据所提供方法和/或用所提供制品或组合物施用的另外的药剂是减少调节性T细胞(Treg)群体的药剂或分子。减少Treg细胞的数量(例如，耗尽)的方法是已知的，并且包括例如CD25耗尽、环磷酰胺施用和调节糖皮质激素诱导的TNFR家族相关基因(GITR)功能。GITR是TNFR超家族的成员，其在激活的T细胞上被上调，从而增强免疫系统。在单采术之前或在施用工程化细胞(例如，CAR表达细胞)之前减小受试者中Treg细胞的数量可以减小肿瘤微环境中不需要的免疫细胞(例如，Treg)的数量并降低所述受试者的复发风险。在一些实施方案中，另外的药剂包括靶向GITR和/或调节GITR功能的分子，如耗尽调节性T细胞(Treg)的GITR激动剂和/或GITR抗体。在一些实施方案中，另外的药剂包括环磷酰胺。在一些实施方案中，GITR结合分子和/或调节GITR功能的分子(例如GITR激动剂和/或耗尽Treg的GITR抗体)是在工程化细胞(例如CAR表达细胞)之前施用。例如，在一些实施方案中，GITR激动剂可以在细胞的单采术之前施用。在一些实施方案中，在施用(例如，输注或再输注)工程化细胞(例如，CAR表达细胞)之前或在细胞的单采术之前，将环磷酰胺施用至受试者。在一些实施方案中，在施用(例如，输注或再输注)工程化细胞(例如，CAR表达细胞)之前或在细胞的单采术之前，将环磷酰胺和抗GITR抗体施用至受试者。
在一些实施方案中，根据所提供方法和/或用所提供制品或组合物施用的另外的药剂是作为GITR激动剂的药剂。示例性GITR激动剂包括例如GITR融合蛋白和抗GITR抗体(例如，二价抗GITR抗体)，如例如美国专利号6,111,090、欧洲专利号090505B 1、美国专利号8,586,023、PCT公开号WO 2010/003118和2011/090754中描述的GITR融合蛋白；或例如美国专利号7,025,962、欧洲专利号1947183B 1、美国专利号7,812,135、美国专利号8,388,967、美国专利号8,591,886、欧洲专利号EP 1866339、PCT公开号WO 2011/028683、PCT公开号WO 2013/039954、PCT公开号WO 2005/007190、PCT公开号WO 2007/133822、PCT公开号WO2005/055808、PCT公开号WO 99/40196、PCT公开号WO 2001/03720、PCT公开号WO 99/20758、PCT公开号WO 2006/083289、PCT公开号WO 2005/115451、美国专利号7,618,632和PCT公开号WO 2011/051726中描述的抗GITR抗体。示例性抗GITR抗体是TRX518。
在一些实施方案中，根据所提供方法和/或用所提供制品或组合物施用的另外的药剂增强所施用细胞(例如，CAR表达细胞)的肿瘤浸润或迁移。例如，在一些实施方案中，另外的药剂刺激CD40，如CD40L，例如，重组人CD40L。分化簇40(CD40)也是TNFR超家族的成员。CD40是在抗原呈递细胞上发现的共刺激蛋白，并且介导众多种免疫应答和炎性应答。CD40还在一些恶性肿瘤上表达，其中CD40促进增殖。示例性抗CD40抗体是达西珠单抗(SGN-40)、鲁卡木单抗(Novartis，拮抗剂)、SEA-CD40(Seattle Genetics)和CP-870,893。在一些实施方案中，增强肿瘤浸润的另外的药剂包括酪氨酸激酶抑制剂舒尼替尼、乙酰肝素酶和/或趋化因子受体(如CCR2、CCR4和CCR7)。
在一些实施方案中，根据所提供方法和/或用所提供制品或组合物施用的另外的药剂是免疫调节剂，所述免疫调节剂作为沙利度胺的结构或功能类似物或衍生物和/或E3泛素连接酶的抑制剂。在一些实施方案中，免疫调节剂与赛拉隆蛋白(cereblon)(CRBN)结合。在一些实施方案中，免疫调节剂与CRBN E3泛素连接酶复合物结合。在一些实施方案中，免疫调节剂与CRBN和CRBN E3泛素连接酶复合物结合。在一些实施方案中，免疫调节剂上调CRBN的蛋白质或基因表达。在一些方面，CRBN是CRL4CRBN E3泛素连接酶的底物衔接子，并调节所述酶的特异性。在一些实施方案中，与CRB或CRBN E3泛素连接酶复合物的结合会抑制E3泛素连接酶的活性。在一些实施方案中，免疫调节剂诱导KZF1(Ikaros)和IKZF3(Aiolos)的泛素化和/或诱导IKZF1(Ikaros)和IKZF3(Aiolos)的降解。在一些实施方案中，免疫调节剂通过CRL4CRBN E3泛素连接酶诱导酪蛋白激酶1A1(CK1α)的泛素化。在一些实施方案中，CK1α的泛素化导致CK1α降解。
在一些实施方案中，免疫调节剂是Ikaros(IKZF1)转录因子的抑制剂。在一些实施方案中，免疫调节剂增强Ikaros的泛素化。在一些实施方案中，免疫调节剂增强Ikaros的降解。在一些实施方案中，免疫调节剂下调Ikaros的蛋白质或基因表达。在某些实施方案中，免疫调节剂的施用导致Ikaros蛋白水平的降低。
在一些实施方案中，免疫调节剂是Aiolos(IKZF3)转录因子的抑制剂。在一些实施方案中，免疫调节剂增强Aiolos的泛素化。在一些实施方案中，免疫调节剂增强Aiolos的降解。在一些实施方案中，免疫调节剂下调Aiolos的蛋白质或基因表达。在某些实施方案中，免疫调节剂的施用导致Aiolos蛋白水平的降低。
在一些实施方案中，免疫调节剂是Ikaros(IKZF1)和Aiolos(IKZF3)转录因子二者的抑制剂。在一些实施方案中，免疫调节剂增强Ikaros和Aiolos二者的泛素化。在某些实施方案中，免疫调节剂增强Ikaros和Aiolos二者的降解。在一些实施方案中，免疫调节剂增强Ikaros和Aiolos二者的泛素化和降解。在一些实施方案中，免疫调节剂的施用引起Aiolos蛋白水平和Ikaros蛋白水平同时下降。
在一些实施方案中，免疫调节剂是选择性细胞因子抑制药物(SelCID)。在一些实施方案中，免疫调节剂抑制磷酸二酯酶-4(PDE4)的活性。在一些实施方案中，免疫调节剂抑制CDC25磷酸酶的酶活性。在一些实施方案中，免疫调节剂改变CDC25磷酸酶的细胞内运输。
在一些实施方案中，所述免疫调节剂是沙立度胺(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-lH-异吲哚-l,3(2H)-二酮)或沙立度胺的类似物或衍生物。在某些实施方案中，沙利度胺衍生物包括具有相似生物学活性的沙利度胺的结构变体。示例性沙利度胺衍生物包括但不限于来那度胺(REVLIMMUNOMODULATORY COMPOUNDTM；Celgene Corporation)、泊马度胺(也称为ACTIMMUNOMODULATORY COMPOUNDTM或POMALYSTTM(Celgene Corporation))、CC-1088、CDC-501和CDC-801，以及在美国专利号5,712,291、7,320,991和8,716,315；美国申请号2016/0313300；以及PCT公开号WO 2002/068414和WO 2008/154252中所披露的化合物。
在一些实施方案中，免疫调节剂是用苯并环中的氨基取代的1-氧代-和1,3二氧代-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉，如美国专利号5,635,517中所述，所述专利是通过引用并入本文。
在一些实施方案中，免疫调节剂是下式的化合物：
Figure BDA0003183097650002451
其中X和Y中的一个是-C(O)-并且X和Y中的另一个是-C(O)-或-CH2-，并且R5是氢或低级烷基，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，X是-C(O)-并且Y是-CH2-。在一些实施方案中，X和Y二者都是-C(O)-。在一些实施方案中，R5是氢。在其他实施方案中，R5是甲基。
在一些实施方案中，免疫调节化合物是如下化合物，其属于一类被取代的2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)邻苯二甲酸免疫调节化合物和被取代的2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚，如美国专利号6,281,230；6,316,471；6,335,349；和6,476,052；以及国际专利申请号PCT/US 97/13375(国际公开号WO 98/03502)中所述的那些，所述文献各自通过引用并入本文。
在一些实施方案中，免疫调节剂是下式的化合物：
Figure BDA0003183097650002461
其中
X和Y中的一个是-C(O)-，并且X和Y中的另一个是-C(O)-或-CH2-；
(1)R1、R2、R3和R4中每一个独立地是卤素、1至4个碳原子的烷基或1至4个碳原子的烷氧基，或
(2)R1、R3、R4和R5中的一个是-NHRa，并且R1、R2、R3和R4中其余的是氢，其中Ra是氢或1至8个碳原子的烷基；
R5是氢或1至8个碳原子的烷基、苄基或卤素；
条件是如果X和Y是-C(O)-并且(i)R1、R2、R3和R4中每一个是氟；或(ii)R1、R2、R3和R4中每一个是氨基，则R5不是氢；
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，免疫调节剂是属于以下文献中披露的一类异吲哚免疫调节化合物的化合物：美国专利号7,091,353、美国专利公开号2003/0045552和国际申请号PCT/USOI/50401(国际公开号WO 02/059106)，所述文献各自通过引用并入本文。例如，在一些实施方案中，免疫调节剂是[2-(2,6-二氧代-哌啶-3-基)-1,3-二氧代-2,3-二氢-1H-异吲哚-4-基甲基]-酰胺；(2-(2,6-二氧代-哌啶-3-基)-1,3-二氧代-2,3-二氢-1H-异吲哚-4-基甲基)-氨基甲酸叔丁酯；4-(氨基甲基)-2-(2,6-二氧代(3-哌啶基))-异吲哚啉-1,3-二酮；N-(2-(2,6-二氧代-哌啶-3-基)-1,3-二氧代-2,3-二氢-1H-异吲哚-4-基甲基)-乙酰胺；N-{(2-(2,6-二氧代(3-哌啶基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)甲基}环丙基-甲酰胺；2-氯-N-{(2-(2,6-二氧代)(3-哌啶基))-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)甲基}乙酰胺；N-(2-(2,6-二氧代(3-哌啶基))-1,3-二氧代异吲哚-4-基)-3-吡啶基甲酰胺；3-{1-氧代-4-(苄基氨基)异吲哚啉-2-基}哌啶-2,6-二酮；2-(2,6-二氧代(3-哌啶基))-4-(苄氨基)异吲哚啉-1,3-二酮；N-{(2-(2,6-二氧代(3-哌啶基))-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)甲基}丙酰胺；N-{(2-(2,6-二氧代(3-哌啶基))-1,3-二氧代异吲哚-4-基)甲基}-3-吡啶基甲酰胺；N-{(2-(2,6-二氧代(3-哌啶基))-1,3-二异吲哚啉-4-基)甲基}庚酰胺；N-{(2-(2,6-二氧代(3-哌啶基))-1,3-二氧代异吲哚-4-基)甲基}-2-呋喃甲酰胺；{N-(2-(2,6-二氧代(3-哌啶基))-1,3-二氧代异吲哚-4-基)氨基甲酰基}乙酸甲酯；N-(2-(2,6-二氧代(3-哌啶基))-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)戊酰胺；N-(2-(2,6-二氧代(3-哌啶基))-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)-2-噻吩基甲酰胺；N-{[2-(2,6-二氧代(3-哌啶基))-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基]甲基}(丁基氨基)甲酰胺；N-{[2-(2,6-二氧代(3-哌啶基))-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基]甲基}(辛基氨基)甲酰胺；或N-{[2-(2,6-二氧代(3-哌啶基))-1,3-二氧代异吲哚-4-基]甲基}(苄氨基)甲酰胺。
在一些实施方案中，免疫调节剂是属于以下文献中披露的一类异吲哚-免疫调节化合物的化合物：美国专利申请公开号2002/0045643、国际公开号WO 98/54170和美国专利号6,395,754，所述文献各自通过引用并入本文。在一些实施方案中，免疫调节剂是通过引用并入本文的美国专利号5,798,368中所述的四取代的2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉。在一些实施方案中，免疫调节剂是通过引用并入本文的美国专利号6,403,613中披露的1-氧代和1,3-二氧代-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉。在一些实施方案中，免疫调节剂是在吲哚啉环的4-或5-位被取代的1-氧代或1,3-二氧代异吲哚啉，如美国专利号6,380,239和美国专利号7,244,759中所述，所述两篇文献均通过引用并入本文。
在一些实施方案中，免疫调节剂是2-(4-氨基-1-氧代-1,3-二氢-异吲哚-2-基)-4-氨基甲酰基-丁酸或4-(4-氨基-1-氧代-1,3-二氢-异吲哚-2-基)-4-氨基甲酰基-丁酸。在一些实施方案中，免疫调节化合物是4-氨基甲酰基-4-{4-[(呋喃-2-基-甲基)-氨基]-1,3-二氧代-1,3-二氢-异吲哚-2-基}-丁酸、4-氨基甲酰基-2-{4-[(呋喃-2-基-甲基)-氨基]-1,3-二氧代-1,3-二氢-异吲哚-2-基}-丁酸、2-{4-[(呋喃-2-基-甲基)-氨基]-1,3-二氧代-1,3-二氢-异吲哚-2-基}-4-苯基氨基甲酰基-丁酸或2-{4-[(呋喃-2-基-甲基)-氨基]-1,3-二氧代-1,3-二氢-异吲哚-2-基}-戊二酸。
在一些实施方案中，免疫调节剂是在2-位被2,6-二氧代-3-羟基哌啶-5-基取代的异吲哚啉-1-酮或异吲哚啉-1,3-二酮，如美国专利号6,458,810中所述，所述申请通过引用并入本文。在一些实施方案中，免疫调节化合物是3-(5-氨基-2-甲基-4-氧代-4H-喹唑啉-3-基)-哌啶-2,6-二酮，或其对映异构体或对映异构体的混合物；或它们的药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、共晶、包合物或多晶型物。在一些实施方案中，免疫调节化合物是3-[4-(4-吗啉-4-基甲基-苄氧基)-1-氧代-1,3-二氢-异吲哚-2-基]-哌啶-2,6-二酮。
在一些实施方案中，免疫调节剂是如以下文献中所述：Oshima,K.等人,NihonRinsho.,72(6):1130-5(2014)；Millrine,D.等人,Trends Mol Med.,23(4):348-364(2017)；和Collins等人,Biochem J.,474(7):1127-1147(2017)。
在一些实施方案中，免疫调节剂是来那度胺，泊马度胺，阿伐度胺，来那度胺、泊马度胺、阿伐度胺的立体异构体，或其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、共晶、包合物或多晶型物。在一些实施方案中，免疫调节化合物是来那度胺，来那度胺的立体异构体，或它们的药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、共晶、包合物或多晶型。在一些实施方案中，免疫调节化合物是来那度胺或((RS)-3-(4-氨基-1-氧代-1,3-二氢-2H-异吲哚-2-基)哌啶-2,6-二酮)。
在一些实施方案中，另外的药剂包括沙利度胺药物或其类似物和/或其衍生物，如来那度胺、泊马度胺或阿普斯特。参见例如，Bertilaccio等人,Blood(2013)122:4171；Otahal等人,Oncoimmunology(2016)5(4):e1115940；Fecteau等人,Blood(2014)124(10):1637-1644；和Kuramitsu等人,Cancer Gene Therapy(2015)22:487-495。来那度胺((RS)-3-(4-氨基-1-氧代-1,3-二氢-2H-异吲哚-2-基)哌啶-2,6-二酮；也称为Revlimid)是沙利度胺的合成衍生物，并且具有多种免疫调节作用，包括加强T细胞与抗原呈递细胞(APC)之间的免疫突触形成。例如，在一些情况下，来那度胺调节T细胞应答并导致增加CD4+和CD8+ T细胞中白介素(IL)-2的产生，诱导T辅助(Th)应答从Th2转变为Th1，抑制调节性T细胞子集(Treg)的扩增，以及改进滤泡性淋巴瘤和慢性淋巴细胞白血病(CLL)中免疫突触的功能(Otahal等人,Oncoimmunology(2016)5(4):e1115940)。来那度胺在患有多发性骨髓瘤(MM)的患者中也具有直接的肿瘤杀伤活性，并且通过影响支持细胞(如在淋巴组织的微环境中发现的呵护样(nurse-like)细胞)直接和间接地调节CLL肿瘤细胞的存活。来那度胺还可以响应于经由CD3连接激活T细胞或树突细胞介导的激活而增强T细胞增殖和干扰素-γ产生。来那度胺还可以诱导恶性B细胞表达更高水平的免疫刺激分子，如CD80、CD86、HLA-DR、CD95和CD40(Fecteau等人,Blood(2014)124(10):1637-1644)。在一些实施方案中，以每天约1mg至约20mg，例如每天约1mg至约10mg、约2.5mg至约7.5mg、约5mg至约15mg，如每天约5mg、10mg、15mg或20mg的剂量来施用来那度胺。在一些实施方案中，以约10μg/kg至5mg/kg，例如约100μg/kg至约2mg/kg、约200μg/kg至约1mg/kg、约400μg/kg至约600μg/kg，如约500μg/kg的剂量施用来那度胺。
在一些实施方案中，根据所提供方法和/或用所提供制品或组合物施用的另外的药剂是B细胞抑制剂。在一些实施方案中，另外的药剂是一种或多种B细胞抑制剂，所述一种或多种B细胞抑制剂选自CD10、CD19、CD20、CD22、CD34、CD123、CD79a、CD79b、CD179b、FLT-3或ROR1或其组合的抑制剂。在一些实施方案中，B细胞抑制剂是抗体(例如，单特异性或双特异性抗体)或其抗原结合片段。在一些实施方案中，另外的药剂是表达靶向B细胞靶标(例如，CD10、CD19、CD20、CD22、CD34、CD123、CD79a、CD79b、CD179b、FLT-3或ROR1)的重组受体的工程化细胞。
在一些实施方案中，根据所提供方法和/或用所提供制品或组合物施用的另外的药剂是CD20抑制剂，例如，抗CD20抗体(例如，抗CD20单特异性或双特异性抗体)或其片段。示例性抗CD20抗体包括但不限于利妥昔单抗、奥法木单抗、奥瑞珠单抗(也称为GA101或RO5072759)、维妥珠单抗、奥比妥珠单抗、TRU-015(Trubion Pharmaceuticals)、奥卡妥珠单抗(也称为AME-133v或奥卡妥珠单抗)和Pro131921(Genentech)。参见例如,Lim等人Haematologica.(2010)95(1):135-43。在一些实施方案中，抗CD20抗体包含利妥昔单抗。利妥昔单抗是嵌合小鼠/人单克隆抗体IgG1κ，其与CD20结合并引起CD20表达细胞的细胞裂解。在一些实施方案中，另外的药剂包括利妥昔单抗。在一些实施方案中，CD20抑制剂是小分子。
在一些实施方案中，根据所提供方法和/或用所提供制品或组合物施用的另外的药剂是CD22抑制剂，例如，抗CD22抗体(例如，抗CD22单特异性或双特异性抗体)或其片段。示例性抗CD22抗体包括依帕珠单抗和RFB4。在一些实施方案中，CD22抑制剂是小分子。在一些实施方案中，抗体是单特异性抗体，任选地与第二药剂(如化学治疗剂)缀合。例如，在一些实施方案中，抗体是抗CD22单克隆抗体-MMAE缀合物(例如，DCDT2980S)。在一些实施方案中，抗体是抗CD22抗体的scFv，例如，抗体RFB4的scFv。在一些实施方案中，scFv与假单胞菌属(Pseudomonas)外毒素-A(例如，BL22)的全部或片段融合。在一些实施方案中，scFv与假单胞菌属外毒素-A(例如，moxetumomab pasudotox)的全部或片段(例如，38kDa片段)融合。在一些实施方案中，抗CD22抗体是抗CD19/CD22双特异性抗体，任选地与毒素缀合。例如，在一些实施方案中，抗CD22抗体包含抗CD19/CD22双特异性部分(例如，两个scFv配体，识别人CD19和CD22)，其任选地连接至白喉毒素(DT)的全部或一部分，例如白喉毒素(DT)的前389个氨基酸(DT 390)，例如配体引导的毒素如DT2219ARL。在一些实施方案中，双特异性部分(例如抗CD19/抗CD22)连接至毒素如脱糖基化蓖麻毒素A链(例如，Combotox)。
在一些实施方案中，根据所提供方法和/或用所提供制品或组合物施用的另外的药剂是细胞因子或者是在肿瘤微环境中诱导增加的细胞因子表达的药剂。细胞因子具有与T细胞扩增、分化、存活和体内平衡相关的重要功能。可以施用接受所提供的方法或用途中的组合疗法、本文所提供的重组受体、细胞和/或组合物的受试者的细胞因子包括以下中的一种或多种：IL-2、IL-4、IL-7、IL-9、IL-15、IL-18和IL-21。在一些实施方案中，所施用的细胞因子是IL-7、IL-15或IL-21或其组合。在一些实施方案中，将细胞因子施用至对工程化细胞(例如，CAR表达细胞)的施用具有次最佳反应的受试者，改善所施用细胞(例如CAR表达细胞)的功效和/或抗肿瘤活性。
在一些实施方案中，根据所提供方法和/或用所提供制品或组合物施用的另外的药剂是细胞因子，如作为细胞内介质作用于另一种细胞的蛋白质。此类细胞因子的例子是淋巴因子、单核因子和传统的多肽激素。细胞因子包括生长激素，如人生长激素、N-甲硫氨酰基人生长激素和牛生长激素；甲状旁腺激素；甲状腺素；胰岛素；胰岛素原；松弛素；松弛素原；糖蛋白激素，如卵泡刺激素(FSH)、甲状腺刺激素(TSH)和黄体化激素(LH)；肝生长因子；成纤维细胞生长因子；泌乳素；胎盘催乳素；肿瘤坏死因子-α和-β；缪勒抑制物质；小鼠促性腺激素相关肽；抑制素；激活素；血管内皮生长因子；整合素；血小板生成素(TPO)；神经生长因子，如NGF-β；血小板生长因子；转化生长因子(TGF)，如TGF-α和TGF-β；胰岛素样生长因子-I和-II；促红细胞生成素(EPO)；骨诱导因子；干扰素，如干扰素-α、-β和-γ；集落刺激因子(CSF)，如巨噬细胞-CSF(M-CSF)；粒细胞-巨噬细胞-CSF(GM-CSF)；和粒细胞-CSF(G-CSF)；白介素(IL)，如IL-1、IL-1α、IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-8、IL-9、IL-10、IL-11、IL-12、IL-15；肿瘤坏死因子，如TNF-α或TNF-β；以及其他多肽因子，包括LIF和kit配体(KL)。如本文所用，术语细胞因子包括来自天然来源或来自重组细胞培养物的蛋白质，以及天然序列细胞因子的生物活性等同物。例如，免疫调节剂是细胞因子，并且细胞因子是IL-4、TNF-α、GM-CSF或IL-2。
在一些实施方案中，根据所提供方法和/或用所提供制品或组合物施用的另外的药剂包括白介素-15(IL-15)多肽、白介素-15受体α(IL-15Rα)多肽或其组合，例如，hetIL-15(Admune Therapeutics，LLC)。hetIL-15是IL-15与IL-15Rα的异二聚体非共价复合物。hetIL-15描述于例如以下文献中：U.S.8,124,084、U.S.2012/0177598、U.S.2009/0082299、U.S.2012/0141413和U.S.2011/0081311。在一些实施方案中，免疫调节剂可以含有一种或多种细胞因子。例如，白介素可以包括白细胞-白介素注射剂(Multikine)，其是天然细胞因子的组合。
在一些实施方案中，根据所提供方法和/或用所提供制品或组合物施用的另外的药剂是腺苷水平和/或腺苷途径组分的调节剂。腺苷可以在体内起免疫调节剂的功能。例如，腺苷和非选择性地激活腺苷受体亚型的一些腺苷类似物降低炎性氧化产物的嗜中性粒细胞产生(Cronstein等人,Ann.N.Y.Acad.Sci.451:291,1985；Roberts等人,Biochem.J.,227:669,1985；Schrier等人,J.Immunol.137:3284,1986；Cronstein等人,ClinicalImmunol.Immunopath.42:76,1987)。在一些情况下，细胞外腺苷或腺苷类似物的浓度可以在特定环境(例如肿瘤微环境(TME))中增加。在一些情况下，腺苷或腺苷类似物信号传导取决于缺氧或在缺氧或其调节中所涉及的因子，例如缺氧诱导因子(HIF)。在一些实施方案中，腺苷信号传导的增加可以增加细胞内cAMP和cAMP依赖性蛋白激酶，从而导致抑制促炎性细胞因子产生，并且可以导致免疫抑制分子的合成和Treg的发展(Sitkovsky等人,Cancer Immunol Res(2014)2(7):598-605)。在一些实施方案中，另外的药剂可以降低或逆转腺苷、腺苷类似物和/或腺苷信号传导的免疫抑制效应。在一些实施方案中，另外的药剂可以减少或逆转缺氧驱动的A2-腺苷酸能T细胞免疫抑制。在一些实施方案中，另外的药剂选自腺苷受体的拮抗剂、细胞外腺苷降解剂、CD39/CD73胞外酶产生腺苷的抑制剂和缺氧-HIF-1α信号传导的抑制剂。在一些实施方案中，另外的药剂是腺苷受体拮抗剂或激动剂。
在一些实施方案中，根据所提供方法和/或用所提供制品或组合物施用的另外的药剂是抑制腺苷受体的活性和/或量的药剂。特定实施方案考虑到，借助细胞外腺苷抑制剂(如阻止细胞外腺苷形成、降解细胞外腺苷、使细胞外腺苷失活和/或减少细胞外腺苷的药剂)和/或腺苷受体抑制剂(如腺苷受体拮抗剂)对细胞外腺苷或腺苷受体的抑制或减少可以增强免疫应答，如巨噬细胞、嗜中性粒细胞、粒细胞、树突细胞、T细胞和/或B细胞介导的应答。此外，Gs蛋白介导的cAMP依赖性细胞内途径的抑制剂和腺苷受体触发的Gi蛋白介导的细胞内途径的抑制剂也可以增加急性和慢性炎症。
在一些实施方案中，根据所提供方法和/或用所提供制品或组合物施用的另外的药剂是腺苷受体拮抗剂或激动剂，例如，腺苷受体A2a、A2b、A1和A3中的一种或多种的拮抗剂或激动剂。分别地，A1和A3抑制腺苷酸环化酶活性，并且A2a和A2b刺激腺苷酸环化酶活性。某些腺苷受体(如A2a、A2b和A3)可以在炎症期间抑制或降低免疫应答。因此，拮抗免疫抑制性腺苷受体可以扩大、加强或增强免疫应答，例如来自所施用细胞(例如表达CAR的T细胞)的免疫应答。在一些实施方案中，另外的药剂抑制细胞外腺苷的产生和腺苷通过腺苷受体触发的信号传导。例如，通过抑制或减少产生腺苷的局部组织缺氧；通过降解积累的细胞外腺苷(或使其失活)；通过阻止或减少免疫细胞上腺苷受体的表达；和/或通过抑制/拮抗腺苷配体通过腺苷受体进行的信号传导，可以增强免疫应答、局部组织炎症和所靶向组织破坏的增强。
在一些实施方案中，根据所提供方法和/或用所提供制品或组合物施用的另外的药剂是腺苷受体拮抗剂。在一些实施方案中，拮抗剂是腺苷受体(如A2a、A2b或A3受体)的小分子或化学化合物。在一些实施方案中，拮抗剂是结合腺苷受体但是不触发Gi蛋白依赖性细胞内途径的肽或拟肽。此类拮抗剂的例子描述于以下文献中：美国专利号5,565,566、5,545,627、5,981,524、5,861,405、6,066,642、6,326,390、5,670,501、6,117,998、6,232,297、5,786,360、5,424,297、6,313,131、5,504,090和6,322,771。
在一些实施方案中，另外的药剂是A2受体(A2R)拮抗剂，如A2a拮抗剂。示例性A2R拮抗剂包括但不限于KW6002(伊曲茶碱(istradefyline))、SCH58261、咖啡因、副黄嘌呤、3,7-二甲基-1-炔丙基黄嘌呤(DMPX)、8-(间氯苯乙烯基)咖啡因(CSC)、MSX-2、MSX-3、MSX-4、CGS-15943、ZM-241385、SCH-442416、瑞德南特(preladenant)、韦帕南特(vipadenant)(BII014)、V2006、ST-1535、SYN-115、PSB-1115、ZM241365、FSPTP、和靶向A2R表达的抑制性核酸(例如，siRNA或shRNA)、或靶向A2R的任何抗体或其抗原结合片段。在一些实施方案中，另外的药剂是描述于例如以下文献中的A2R拮抗剂：Ohta等人,Proc Natl Acad Sci U S A(2006)103:13132-13137；Jin等人,Cancer Res.(2010)70(6):2245-2255；Leone等人,Computational and Structural Biotechnology Journal(2015)13:265-272；Beavis等人,Proc Natl Acad Sci U S A(2013)110:14711-14716；和Pinna,A.,Expert OpinInvestig Drugs(2009)18:1619-1631；Sitkovsky等人,Cancer Immunol Res(2014)2(7):598-605；US 8,080,554；US 8,716,301；US 20140056922；WO2008/147482；US 8,883,500；US 20140377240；WO02/055083；US 7,141,575；US 7,405,219；US 8,883,500；US 8,450,329；和US 8,987,279。
在特定实施方案中，腺苷受体拮抗剂是特异性结合编码腺苷受体的mRNA的反义分子、抑制性核酸分子(例如，小抑制性RNA(siRNA))或催化核酸分子(例如，核酶)。在一些实施方案中，反义分子、抑制性核酸分子或催化性核酸分子结合编码A2a、A2b或A3的核酸。在一些实施方案中，反义分子、抑制核酸分子或催化核酸靶向腺苷受体下游的生化途径。例如，反义分子或催化核酸可以抑制Gs蛋白或Gi蛋白依赖性细胞内途径中涉及的酶。在一些实施方案中，另外的药剂包括腺苷受体(如A2a、A2b或A3)的显性阴性突变形式。
在一些实施方案中，根据所提供方法和/或用所提供制品或组合物施用的另外的药剂是抑制细胞外腺苷的药剂。抑制细胞外腺苷的药剂包括使细胞外腺苷无功能(或降低这种功能)的药剂，如修饰腺苷结构以抑制腺苷通过腺苷受体进行信号传导的能力的物质。在一些实施方案中，另外的药剂是细胞外产生腺苷或腺苷降解的酶，其修饰形式或其调节剂。例如，在一些实施方案中，另外的药剂是酶(例如，腺苷脱氨酶)或另一种催化分子，所述酶或另一种催化分子选择性地结合并破坏腺苷，从而消除或显著降低内源形成的腺苷通过腺苷受体进行信号传导并终止炎症的能力。
在一些实施方案中，另外的药剂是腺苷脱氨酶(ADA)或其修饰形式，例如，重组ADA和/或聚乙二醇修饰的ADA(ADA-PEG)，其可以抑制细胞外腺苷的局部组织积累。ADA-PEG已用于治疗患有ADA SCID的患者(Hershfield(1995)Hum Mutat.5:107)。在一些实施方案中，抑制细胞外腺苷的药剂包括阻止或减少细胞外腺苷形成，和/或阻止或减少细胞外腺苷积累，从而消除或显著降低腺苷的免疫抑制作用的药剂。在一些实施方案中，另外的药剂特异性地抑制参与对促炎性分子的合成和/或分泌进行调节的酶和蛋白质，所述另外的药剂包括核转录因子的调节剂。对腺苷受体表达、或Gs蛋白或Gi蛋白依赖性细胞内途径、或cAMP依赖性细胞内途径的抑制可以导致免疫应答的增加/增强。
在一些实施方案中，另外的药剂可以靶向生成或产生细胞外腺苷的胞外酶。在一些实施方案中，另外的药剂靶向共同作用于产生细胞外腺苷的CD39和CD73胞外酶。CD39(也称为外核苷三磷酸二磷酸水解酶)将细胞外ATP(或ADP)转化为5'AMP。随后，CD73(也称为5'核苷酸酶)将5'AMP转化为腺苷。CD39的活性可通过NDP激酶和腺苷酸激酶的作用逆转，而CD73的活性是不可逆的。CD39和CD73在肿瘤基质细胞(包括内皮细胞和Treg)上表达，并且也在许多癌细胞上表达。例如，在肿瘤微环境的低氧条件下，CD39和CD73在内皮细胞上的表达增加。肿瘤缺氧可能源于血液供应不足和肿瘤血管杂乱，从而影响氧气的输送(Carroll和Ashcroft(2005),Expert.Rev.Mol.Med.7(6):1-16)。缺氧也抑制将腺苷转化为AMP的腺苷酸激酶(AK)，从而导致非常高的细胞外腺苷浓度。因此，响应于缺氧以高浓度释放腺苷，缺氧是在实体瘤中或实体瘤周围的肿瘤微环境(TME)中频繁出现的条件。在一些实施方案中，另外的药剂是以下中的一种或多种：抗CD39抗体或其抗原结合片段、抗CD73抗体或其抗原结合片段(例如，MEDI9447或TY/23)、α-β-亚甲基-腺苷二磷酸(ADP)、ARL 67156、POM-3、IPH52(参见例如，Allard等人Clin Cancer Res(2013)19(20):5626-5635；Hausler等人,AmJ Transl Res(2014)6(2):129-139；Zhang,B.,Cancer Res.(2010)70(16):6407-6411)。
在一些实施方案中，根据所提供方法和/或用所提供制品或组合物施用的另外的药剂是化学治疗剂(有时称为细胞毒性剂)。在特定实施方案中，化学治疗剂是已知对于治疗、预防或改善过度增殖性障碍(如癌症)有效的任何药剂。化学治疗剂包括但不限于小分子、合成药物、肽、多肽、蛋白质、核酸(例如，DNA和RNA多核苷酸，其包括但不限于编码生物活性蛋白质、多肽或肽的反义核苷酸序列、三螺旋和核苷酸序列)、抗体、合成或天然无机分子、模拟剂和合成或天然有机分子。在特定实施方案中，化疗药物包括烷化剂、蒽环类、细胞骨架破坏剂(紫杉烷类)、埃博霉素、组蛋白脱乙酰酶抑制剂、拓扑异构酶抑制剂、拓扑异构酶II抑制剂、激酶抑制剂、核苷酸类似物和前体类似物、肽抗生素、基于铂的药剂以及长春花生物碱和衍生物。
化学治疗剂可以包括但不限于阿巴瑞克、阿地白介素、阿仑单抗、阿利维A酸、别嘌呤醇、六甲蜜胺、氨磷汀、阿那曲唑、三氧化二砷、天冬酰胺酶、活性BCG、贝伐单抗、贝沙罗汀、博来霉素、硼替佐米、白消安、卡鲁睾酮、喜树碱、卡培他滨、卡铂、卡莫司汀、塞来昔布、西妥昔单抗、苯丁酸氮芥、西那卡塞、顺铂、克拉屈滨、环磷酰胺、阿糖胞苷、达卡巴嗪、更生霉素、阿法达贝泊汀、道诺霉素、地尼白介素、右雷佐生、多西紫杉醇、多柔比星、屈他雄酮、Elliott's B溶液、表柔比星、阿法依泊汀、雌莫司汀、依托泊苷、依西美坦、非格司亭、氟尿嘧啶、氟达拉滨、氟尿嘧啶、氟维司群、吉西他滨、吉妥珠单抗奥佐米星、吉非替尼、戈舍瑞林、羟基脲、替伊莫单抗、伊达比星、异环磷酰胺、伊马替尼、干扰素α-2a、干扰素α-2b、伊立替康、来曲唑、甲酰四氢叶酸、左旋咪唑、洛莫司汀、meclorethamine、甲地孕酮、美法仑、巯嘌呤、美司钠、甲氨蝶呤、甲氧沙林、甲基泼尼松龙、丝裂霉素C、米托坦、米托蒽醌、诺龙、诺菲单抗、奥利美生、奥普瑞白介素、奥沙利铂、紫杉醇、帕米膦酸二钠、培加酶、培门冬酶、培非司亭、培美曲塞、喷司他丁、哌泊溴烷、普卡霉素、聚苯丙生、卟菲尔钠、丙卡巴肼、奎纳克林、拉布立酶、利妥昔单抗、沙格司亭、链脲佐菌素、滑石、他莫昔芬、特罗凯、替莫唑胺、替尼泊苷、睾内酯、硫鸟嘌呤、噻替哌、拓扑替康、托瑞米芬、托西莫单抗、曲妥珠单抗、维A酸、尿嘧啶氮芥、戊柔比星、长春碱、长春新碱、长春瑞滨和唑来膦酸盐。
在一些实施方案中，另外的药剂是缺氧诱导因子1α(HIF-1α)信号传导的抑制剂。示例性HIF-1α抑制剂包括地高辛、吖啶黄素、瑟土因-7(sirtuin-7)和加特司匹(ganetespib)。
在一些实施方案中，另外的药剂包括蛋白质酪氨酸磷酸酶抑制剂，例如，本文所述的蛋白质酪氨酸磷酸酶抑制剂。在一些实施方案中，蛋白质酪氨酸磷酸酶抑制剂是SHP-1抑制剂，例如本文所述的SHP-1抑制剂，例如，葡萄糖酸锑钠。在一些实施方案中，蛋白酪氨酸磷酸酶抑制剂是SHP-2抑制剂，例如本文所述的SHP-2抑制剂。
在一些实施方案中，另外的药剂是激酶抑制剂。激酶抑制剂(如CDK4激酶抑制剂、BTK激酶抑制剂、MNK激酶抑制剂或DGK激酶抑制剂)可以调节肿瘤细胞中存在的组成型活性的存活途径和/或调节免疫细胞的功能。在一些实施方案中，激酶抑制剂是布鲁顿酪氨酸激酶(BTK)抑制剂，例如依鲁替尼(依鲁替尼)。在一些实施方案中，激酶抑制剂是磷脂酰肌醇-4,5-二磷酸酯3-激酶(PI3K)抑制剂。在一些实施方案中，激酶抑制剂是CDK4抑制剂，例如，CDK4/6抑制剂。在一些实施方案中，激酶抑制剂是mTOR抑制剂，例如雷帕霉素(rapamycin)、雷帕霉素类似物、OSI-027。mTOR抑制剂可以是例如mTORC1抑制剂和/或mTORC2抑制剂，例如mTORC1抑制剂和/或mTORC2抑制剂。在一些实施方案中，激酶抑制剂是MNK抑制剂或双重PI3K/mTOR抑制剂。在一些实施方案中，其他示例性激酶抑制剂包括AKT抑制剂哌立福辛(perifosine)、mTOR抑制剂坦罗莫司(temsirolimus)、Src激酶抑制剂达沙替尼(dasatinib)和福他替尼(fostamatinib)、JAK2抑制剂帕克替尼和鲁索替尼、PKCβ抑制剂恩扎妥林(enzastaurin)和苔藓抑素，以及AAK抑制剂阿立塞替(alisertib)。
在一些实施方案中，激酶抑制剂是选自以下的BTK抑制剂：依鲁替尼(PCI-32765)；GDC-0834；RN-486；CGI-560；CGI-1764；HM-71224；CC-292；ONO-4059；CNX-774；和LFM-A13。在一些实施方案中，BTK抑制剂不会降低或抑制白介素-2诱导型激酶(ITK)的激酶活性，并且选自GDC-0834；RN-486；CGI-560；CGI-1764；HM-71224；CC-292；ONO-4059；CNX-774；和LFM-A13。
在一些实施方案中，激酶抑制剂是BTK抑制剂，例如，依鲁替尼(1-[(3R)-3-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]哌啶-1-基]丙-2-烯-1-酮；也称为PCI-32765)。在一些实施方案中，激酶抑制剂是BTK抑制剂，例如，依鲁替尼(PCI-32765)，并且依鲁替尼是按以下剂量来施用：每天约250mg、300mg、350mg、400mg、420mg、440mg、460mg、480mg、500mg、520mg、540mg、560mg、580mg、600mg(例如，250mg、420mg或560mg)持续一段时间，例如，每天施用持续21天周期，或每天施用持续28天周期。在一些实施方案中，施用1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12或更多个周期的依鲁替尼。在一些实施方案中，BTK抑制剂是国际申请WO 2015/079417中描述的BTK抑制剂。
在一些实施方案中，激酶抑制剂是PI3K抑制剂。PI3K是参与细胞周期调节和淋巴瘤存活的PI3K/Akt/mTOR途径的核心。示例性PI3K抑制剂包括艾代拉利司(idelalisib)(PI3Kδ抑制剂)。在一些实施方案中，另外的药剂是艾代拉利司和利妥昔单抗。
在一些实施方案中，另外的药剂是雷帕霉素的哺乳动物靶标(mTOR)的抑制剂。在一些实施方案中，激酶抑制剂是选自以下的mTOR抑制剂：坦罗莫司；利罗莫司(ridaforolimus)(也称为AP23573和MK8669)；依维莫司(RAD001)；雷帕霉素(AY22989)；simapimod；AZD8055；PF04691502；SF1126；和XL765。在一些实施方案中，另外的药剂是丝裂原激活蛋白激酶(MAPK)抑制剂，如威罗菲尼(vemurafenib)、达拉非尼(dabrafenib)和曲美替尼(trametinib)。
在一些实施方案中，另外的药剂是调节促细胞凋亡或抗细胞凋亡蛋白的药剂。在一些实施方案中，另外的药剂包括B细胞淋巴瘤2(BCL-2)抑制剂(例如，维奈托克(venetoclax)，也称为ABT-199或GDC-0199；或ABT-737)。维奈托克是抑制抗细胞凋亡蛋白BCL-2的小分子(4-(4-{[2-(4-氯苯基)-4,4-二甲基-1-环己烯-1-基]甲基}-1-哌嗪基)-N-({3-硝基-4-[(四氢-2H-吡喃-4-基甲基)氨基]苯基}磺酰基)-2-(1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基氧基)苯甲酰胺)。调节促细胞凋亡或抗细胞凋亡蛋白的其他药剂包括BCL-2抑制剂ABT-737、那维妥拉(navitoclax)(ABT-263)；用于最大功效的Mcl-1siRNA或Mcl-1抑制剂类视色素N-(4-羟苯基)维甲酰胺(4-HPR)。在一些实施方案中，另外的药剂提供促细胞凋亡刺激，如重组肿瘤坏死因子相关细胞凋亡诱导配体(TRAIL)，其可以通过与肿瘤细胞表面上的TRAIL死亡受体DR-4和DR-5结合激活细胞凋亡途径；或TRAIL-R2激动抗体。
在一些实施方案中，另外的药剂包括细胞毒性剂，例如，CPX-351(CelatorPharmaceuticals)、阿糖胞苷、道诺霉素、沃沙隆沙星(vosaroxin)(SunesisPharmaceuticals)、沙帕他滨(Cyclacel Pharmaceuticals)、伊达比星或米托蒽醌。在一些实施方案中，另外的药剂包括低甲基化剂，例如，DNA甲基转移酶抑制剂，例如，阿扎胞苷或地西他滨。
在另一个实施方案中，另外的疗法是移植，例如，同种异体干细胞移植。
在一些实施方案中，另外的疗法是淋巴细胞清除疗法。在一些实施方案中，在例如施用工程化细胞(例如，CAR表达细胞)之前对受试者进行淋巴细胞清除。在一些实施方案中，淋巴细胞清除包括施用以下中的一种或多种：美法仑、环磷酰胺(Cytoxan)、环磷酰胺(环磷酰胺)和氟达拉滨。在一些实施方案中，在工程化细胞(例如，CAR表达细胞)的施用(例如，输注)之前、与其并行或之后，向受试者施用淋巴细胞清除化学疗法。在一个例子中，在工程化细胞(例如，CAR表达细胞)的施用之前向受试者施用淋巴细胞清除化疗。
在一些实施方案中，另外的药剂是溶瘤病毒。在一些实施方案中，溶瘤病毒能够在癌细胞中选择性地复制并触发所述癌细胞的死亡或减慢所述癌细胞的生长。在一些情况下，溶瘤病毒对非癌细胞无影响或影响极小。溶瘤病毒包括但不限于溶瘤腺病毒、溶瘤单纯疱疹病毒、溶瘤逆转录病毒、溶瘤细小病毒、溶瘤痘苗病毒、溶瘤辛德毕斯病毒(oncolyticSinbis virus)、溶瘤流感病毒或溶瘤RNA病毒(例如，溶瘤呼吸弧病毒、溶瘤新城疫病毒(NDV)、溶瘤麻疹病毒或溶瘤水疱性口炎病毒(VSV))。
其他示例性组合疗法、治疗和/或药剂包括抗过敏剂、止吐药、镇痛药和辅助疗法。在一些实施方案中，另外的药剂包括细胞保护剂，如神经保护剂、自由基清除剂、心脏保护剂、蒽环类外渗中和剂和营养素。
在一些实施方案中，用作另外的药剂的抗体与本文所述的治疗剂缀合或以其他方式结合，所述治疗剂是例如化学治疗剂(例如，环磷酰胺、氟达拉滨、组蛋白脱乙酰化酶抑制剂、脱甲基剂、肽疫苗、抗肿瘤抗生素、酪氨酸激酶抑制剂、烷化剂、抗微管剂或抗有丝分裂剂)、抗过敏剂、止吐剂(anti-nausea agent)(或止吐药(anti-emetic))、止痛药或细胞保护剂。在一些实施方案中，另外的药剂是抗体-药物缀合物。
任何本文所述的另外的药剂可以作为所提供的方法、用途、制品或组合物中所述的组合疗法(如在包含所述组合疗法的一种或多种药剂和药学上可接受的载体的药物组合物中，如本文所述的任一种)制备和施用。在一些实施方案中，所提供的方法、用途、制品或组合物中的组合疗法可以与所述另外的药剂、疗法或治疗同时、伴随或以任何顺序依序施用，其中这种施用提供每种药剂在受试者体内的治疗有效水平。在一些实施方案中，另外的药剂可以与所提供的方法、用途、制品或组合物中的组合疗法共施用，例如，作为同一药物组合物的一部分或使用相同递送方法。在一些实施方案中，另外的药剂是与所述细胞疗法(例如，一定剂量的工程化T细胞(例如，CAR+ T细胞))同时施用，但是是在分开组合物中施用。在一些实施方案中，在施用细胞之前，将另外的药剂与工程化细胞(例如，CAR表达细胞)一起孵育。
在一些例子中，一种或多种另外的药剂是在施用细胞疗法(例如，一定剂量的工程化T细胞(例如，CAR+ T细胞))之后或之前施用，相隔所选时间段。在一些例子中，所述时间段是1天、2天、3天、4天、5天、6天、1周、2周、3周、1个月、2个月或3个月。在一些例子中，一种或多种另外的药剂是多次施用。在一些实施方案中，另外的药剂是在所提供的方法、用途、制品或组合物中的细胞疗法(例如，一定剂量的工程化T细胞(CAR+T细胞))之前施用，例如，在施用前2周、12天、10天、8天、1周、6天、5天、4天、3天、2天或1天。在一些实施方案中，另外的药剂是在所提供的方法、用途、制品或组合物中的细胞疗法(例如，一定剂量的工程化T细胞(例如，CAR+ T细胞))之后施用，例如，在施用后2周、12天、10天、8天、1周、6天、5天、4天、3天、2天或1天。
另外的药剂的剂量可以是任何治疗有效量，例如，本文所述的任何剂量量，并且另外的药剂的适当剂量可以取决于要治疗的疾病的类型、所施用的结合分子、重组受体、细胞和/或组合物的类型、剂量和/或频率、疾病的严重程度和病程、先前疗法、患者的临床病史和对细胞疗法(例如，一定剂量的工程化T细胞(CAR+ T细胞))的反应以及主治医师的决断。
VI.制品和试剂盒
还提供了制品和试剂盒，其含有表达重组受体的工程化细胞或其组合物，以及任选地使用说明书，例如根据所提供的方法进行施用的说明书。
在一些实施方案中，提供了制品和/或试剂盒，其包括包含治疗有效量的本文所述的任何工程化细胞的组合物，以及向受试者给药以治疗疾病或病症的说明书。在一些实施方案中，说明书可以指定本文所提供方法的一些或所有要素。在一些实施方案中，说明书指定施用用于细胞疗法的细胞的具体指导，例如，用于施用的剂量、时间安排、受试者的选择和/或鉴定以及用于施用的条件。在一些实施方案中，制品和/或试剂盒进一步包括用于疗法(例如，淋巴细胞清除疗法和/或组合疗法，如本文所述的任一种)的一种或多种另外的药剂，并且任选地进一步包括用于施用用于疗法的另外的药剂的说明书。在一些实施方案中，制品和/或试剂盒进一步包含用于淋巴细胞清除疗法的药剂，并且任选地进一步包括用于施用淋巴细胞清除疗法的说明书。在一些实施方案中，说明书可以作为伴随用于施用的组合物的标签或包装说明书而包含在内。
在一些实施方案中，说明书指定选择或鉴定用于疗法的受试者的标准。在一些实施方案中，此类标准包括患有B细胞恶性肿瘤(如大B细胞淋巴瘤)的受试者。在一些实施方案中，此类标准包括患有弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)或其亚型或者NHL或其亚型和/或高风险NHL的受试者。在一些实施方案中，说明书指定，要治疗的受试者包括患有特征为或被确定为以下的疾病或病症的受试者：侵袭性NHL、弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、原发性纵隔大B细胞淋巴瘤(PMBCL)、富含T细胞/组织细胞的大B细胞淋巴瘤(TCHRBCL)、伯基特淋巴瘤(BL)、套细胞淋巴瘤(MCL)和/或滤泡性淋巴瘤(FL)。在特定实施方案中，要治疗的受试者包括患有侵袭性NHL的受试者，特定是患有非特指型(NOS)并且在一些方面包括从头的和从惰性转化的弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)的受试者。在一些方面，要治疗的受试者或群体可以包括和/或进一步包括患有原发性纵隔B细胞淋巴瘤(PMBCL)或3B级滤泡性淋巴瘤(FL3B)的受试者。在一些方面，受试者患有滤泡性淋巴瘤(FL)。
在一些实施方案中，说明书指定，要治疗的受试者包括患有DLBCL(NOS)的受试者，其在一些情况下的特征可以是并非具有主要结节外位置的DLBCL的DLBCL、并非终末分化B细胞的大细胞淋巴瘤的DLBCL或者并非具有DLBCL与其他淋巴肿瘤之间的中间特征的B细胞肿疡的DLBCL。
在一些实施方案中，说明书指定，要治疗的受试者包括患有DLBCL非特指型(DLBCL(NOS))的受试者，其在一些情况下的特征可以是并非以下的DLBCL：富含T细胞/组织细胞的大B细胞淋巴瘤(TCHRBCL)、并非中枢神经系统(CNS)的原发性DLBCL、并非原发性皮肤DLBCL、腿型或EB病毒(EBV)阳性DLBCL(例如，老人的EBV阳性DLBCL)，并且任选地并非与慢性炎症相关的DLBCL的DLBCL。
在一些实施方案中，说明书指定，要治疗的受试者包括患有DLBCL(NOS)的受试者，其在一些情况下的特征可以是并非B成淋巴细胞性白血病/淋巴瘤(B-LBL)的高级别B细胞淋巴瘤、并非伯基特淋巴瘤的高级别B细胞淋巴瘤或者并非具有MYC和BCL2和/或BCL6重排的高级别B细胞淋巴瘤的高级别B细胞淋巴瘤。在一些方面，DLBCL是DLBCL(NOS)，其在一些情况下的特征可以是并非B成淋巴细胞性白血病/淋巴瘤(B-LBL)的高级别B细胞淋巴瘤、并非伯基特淋巴瘤的高级别B细胞淋巴瘤或者并非具有MYC和BCL2和/或BCL6重排的高级别B细胞淋巴瘤的高级别B细胞淋巴瘤。
在一些实施方案中，说明书指定，要治疗的受试者包括患有DLBCL(NOS)的受试者，其在一些情况下的特征可以是基于起源细胞的分子和/或细胞遗传特征，是生发中心B细胞样(GCB)和激活的B细胞样(ABC)。
在一些实施方案中，说明书指定，要治疗的受试者包括患有DLBCL的受试者。在一些方面，DLBCL是DLBCL非特指型(NOS)，其在一些情况下的特征可以是从头的或从惰性疾病转化的。在一些实施方案中，DLBCL是从头或原发性DLBCL。在一些实施方案中，要治疗的疾病或病症(如淋巴瘤，如DLBCL)是从疾病或病症的不同亚型转化的，如从惰性淋巴瘤(如滤泡性淋巴瘤(FL))转化的。在一些实施方案中，此类其他惰性淋巴瘤可以包括例如边缘区B细胞淋巴瘤(MZL)和慢性淋巴细胞白血病/小细胞淋巴细胞淋巴瘤(CLL/SLL)。在一些实施方案中，要治疗的疾病或病症是从滤泡性淋巴瘤转化的DLBCL(tFL)；在一些方面，它是从另一种惰性淋巴瘤转化的DLBCL。在一些实施方案中，要治疗的疾病或病症是从FL转化的DLBCL。在一些方面，要治疗的疾病或病症是从除了FL以外的惰性淋巴瘤转化的DLBCL。
在一些实施方案中，说明书指定，要治疗的受试者包括患有从另一种惰性淋巴瘤转化的DLBCL的受试者，所述DLBCL如从边缘区淋巴瘤转化的DLBCL(tMZL)或从慢性淋巴细胞白血病转化的DLBCL(tCLL；里希特氏)。在一些情况下，要治疗的疾病或病症是DLBCLtMZL或DLBCL tCLL。在一些实施方案中，它是从除了FL以外的惰性淋巴瘤转化的要治疗的疾病或病症。在一些实施方案中，其为DLBCL或大B细胞淋巴瘤，如从FL或其他惰性淋巴瘤转化的DLBCL或大B细胞淋巴瘤。
在一些实施方案中，说明书指定，要治疗的受试者包括患有具有MYC和BCL2和/或BCL6重排，任选地具有DLBCL组织学的高级别B细胞淋巴瘤的受试者。在一些实施方案中，要治疗的疾病或病症是DLBCL NOS(从头的或从惰性转化的)。在一些实施方案中，疾病或病症是原发性纵隔B细胞淋巴瘤(PMBCL)或3B级滤泡性淋巴瘤(FL3B)。在一些实施方案中，疾病或病症是滤泡性淋巴瘤(FL)。在一些实施方案中，它是具有CNS受累的DLBCL。
在一些实施方案中，说明书指定，要治疗的受试者包括患有或已经被鉴定为患有双/三打击淋巴瘤或双/三打击分子亚型的淋巴瘤的受试者。在一些实施方案中，淋巴瘤是双打击淋巴瘤，其特征为存在MYC(髓细胞瘤病致癌基因)、BCL2(B细胞淋巴瘤2)和/或BCL6(B细胞淋巴瘤6)基因重排(例如，易位)。在一些实施方案中，基因重排与另一基因重排组合地影响MYC/8q24基因座。例如，另一基因重排包括涉及BCL2的t(14；18)(q32；q21)。在一些实施方案中，基因重排与BCL6/3q27组合地影响MYC/8q24基因座。在一些实施方案中，淋巴瘤是三打击淋巴瘤，其特征为存在MYC、BCL2和BCL6基因重排；参见例如，Aukema等人,(2011)Blood 117:2319-2331。
在一些实施方案中，要治疗的受试者或群体包括具有较差体能状态的那些受试者。在一些方面中，要治疗的群体包括例如东部肿瘤协作组体能状态(ECOG)为0-2之间的任何值的受试者。在任何实施方案的其他方面，要治疗的受试者包括ECOG 0-1受试者或者不包括ECOG2受试者。在任何实施方案的一些实施方案中，要治疗的受试者已经历过两种或更多种先前疗法的失败。在一些实施方案中，受试者未患从边缘区淋巴瘤(MZL)和慢性淋巴细胞白血病(CLL；里希特氏)转化的DLBCL和/或患有特征为从头或从惰性疾病转化的DLBCL。在一些实施方案中，受试者患有套细胞淋巴瘤(MCL)。在一些任何实施方案中，受试者患有滤泡性淋巴瘤(FL)。在此类实施方案的一些方面，受试者是ECOG 0-1或者未患或未被怀疑或表征为患有从MZL或CLL转化的DLBCL。在一些实施方案中，说明书指定，细胞疗法的施用用于如下受试者：所述受试者被鉴定为或已被鉴定为患有双/三打击淋巴瘤(或高级别B细胞淋巴瘤，其具有MYC和BCL2和/或BCL6重排以及DLBCL组织学)，已被鉴定为患有化疗难治性淋巴瘤(例如，化疗难治性DLBCL)和/或没有响应于先前疗法实现完全缓解(CR)。
在一些实施方案中，说明书指定了要施用的细胞的剂量。例如，在一些实施方案中，说明书中指定的剂量包括如下量的总重组受体(例如，CAR)表达细胞：在为或约1x106个与为或约5x108个之间，例如，在从为或约1x107个至为或约2x108个范围内的此类细胞，如为或约1x107、5x107、1x108或1.5x108个总此类细胞，或者在任两个前述值之间的范围。在一些实施方案中，向患者施用多个剂量，并且每个剂量或总剂量可以在任何前述值内。
在一些实施方案中，制品或试剂盒包含含有表达重组受体(例如CAR)的多种CD4+T细胞的容器(任选地小瓶)，和含有表达重组受体(例如CAR)的多种CD8+ T细胞的容器(任选地小瓶)。在一些实施方案中，制品或试剂盒包含含有表达重组受体(例如CAR)的多种CD4+ T细胞的容器(任选地小瓶)，并且在同一容器中进一步包含表达重组受体(例如CAR)的多种CD8+ T细胞。在一些实施方案中，冷冻保护剂与细胞一起被包括。在一些方面，容器是袋子。在一些方面，容器是小瓶。
在一些实施方案中，容器(如小瓶)包含大于或大于或大于约10x106个T细胞或重组受体(例如CAR)表达T细胞、大于或大于或大于约15x106个T细胞或重组受体(例如CAR)表达T细胞、大于或大于或大于约25x106个T细胞或重组受体(例如CAR)表达T细胞。在一些方面，小瓶包含在为或约1000万个细胞/ml与为或约7000万个细胞/ml之间、在为或约1000万个细胞/ml与为或约5000万个细胞/ml之间、在为或约1000万个细胞/ml与为或约2500万个细胞/ml之间、在为或约1000万个细胞/ml与为或约1500万个细胞/ml、1500万个细胞/ml与为或约7000万个细胞/ml之间、在为或约1500万个细胞/ml与为或约5000万个细胞/ml之间、在为或约1500万个细胞/ml与为或约2500万个细胞/ml之间、在为或约2500万个细胞/ml与为或约7000万个细胞/ml之间、在为或约2500万个细胞/ml与为或约5000万个细胞/ml之间、和在为或约5000万个细胞/ml与为或约7000万个细胞/ml之间。在一些方面，容器中细胞的浓度是容器中活细胞的浓度。
在一些实施方案中，容器(如小瓶)包含大于或大于约0.5x106个重组受体表达(例如CAR+)/CD3+细胞或此类活细胞/mL、大于或大于约1.0x106个重组受体表达(例如CAR+)/CD3+细胞或此类活细胞/mL、大于或大于约1.5x106个重组受体表达(例如CAR+)/CD3+细胞或此类活细胞/mL、大于或大于约2.0x106个重组受体表达(例如CAR+)/CD3+细胞或此类活细胞/mL、大于或大于约2.5x106个重组受体表达(例如CAR+)/CD3+细胞或此类活细胞/mL、大于或大于约2.6x106个重组受体表达(例如CAR+)/CD3+细胞或此类活细胞/mL、大于或大于约2.7x106个重组受体表达(例如CAR+)/CD3+细胞或此类活细胞/mL、大于或大于约2.8x106个重组受体表达(例如CAR+)/CD3+细胞或此类活细胞/mL、大于或大于约2.9x106个重组受体表达(例如CAR+)/CD3+细胞或此类活细胞/mL、大于或大于约3.0x106个重组受体表达(例如CAR+)/CD3+细胞或此类活细胞/mL、大于或大于约3.5x106个重组受体表达(例如CAR+)/CD3+细胞或此类活细胞/mL、大于或大于约4.0x106个重组受体表达(例如CAR+)/CD3+细胞或此类活细胞/mL、大于或大于约4.5x106个重组受体表达(例如CAR+)/CD3+细胞或此类活细胞/mL或者大于或大于约5x106个重组受体表达(例如CAR+)/CD3+细胞或此类活细胞/mL。在一些实施方案中，CD3+细胞是CD4+ T细胞。在一些实施方案中，CD3+细胞是CD8+ T细胞。在一些实施方案中，CD3+ T细胞是CD4+和CD8+ T细胞。
在一些实施方案中，指定用于施用的多个小瓶或多个细胞或细胞的单位剂量共同包含一定剂量的细胞，所述剂量包含从或从约1x105至或至约5x108个总重组受体(例如CAR)表达T细胞或总T细胞、1x105至或至约1x108个总重组受体(例如CAR)表达T细胞或总T细胞、从或从约5x105至或至约1x107个总重组受体(例如CAR)表达T细胞或总T细胞或者从或从约1x106至或至约1x107个总重组受体(例如CAR)表达T细胞或总T细胞，每个都包含端值。在一些实施方案中，T细胞是CD3+细胞。在一些实施方案中，CD3+细胞是CD8+ T细胞。在一些实施方案中，CD3+ T细胞是CD4+和CD8+ T细胞。在一些实施方案中，指定用于施用的多个小瓶或多个细胞或细胞的单位剂量包括重组受体(例如CAR)表达CD3+CD4+ T细胞的一个或多个单位剂量以及重组受体(例如CAR)表达CD3+CD8+ T细胞的一个或多个单位剂量。在一些实施方案中，每个单位剂量的细胞数量是活细胞。
在一些方面，所述制品包含一个或多个单位剂量的CD4+和CD8+细胞或CD4+受体+(例如CAR+)细胞和CD8+受体+(例如CAR+)细胞，其中所述单位剂量包含在为或约1x107个与为或约2x108个之间的重组受体(例如CAR)表达T细胞、在为或约5x107个与为或约1.5x108个之间的重组受体(例如CAR)表达T细胞、为或约5x107个重组受体(例如CAR)表达T细胞、为或约1x108个重组受体(例如CAR)表达T细胞或者为或约1.5x108个重组受体(例如CAR)表达T细胞，任选地其中所述制品中的信息指定施用一个或多个单位剂量和/或对应于这一个或多个单位剂量的体积。在一些情况下，所述制品包含一个或多个单位剂量的CD8+细胞，其中所述剂量包含在为或约5x106个与为或约1x108个之间的重组受体(例如CAR)表达CD8+ T细胞，所述剂量包含在为或约1x107个与为或约0.75x108个之间的重组受体(例如CAR)表达CD8+ T细胞，所述剂量包含为或约2.5x107个重组受体(例如CAR)表达CD8+ T细胞，或者所述剂量包含为或约5x107个重组受体(例如CAR)表达CD8+ T细胞，或者所述剂量包含为或约0.75x108个重组受体(例如CAR)表达CD8+ T细胞，任选地其中所述制品中的信息指定施用一个或多个单位剂量和/或对应于这一个或多个单位剂量的体积。在一些情况下，所述制品包含一个或多个单位剂量的CD4+细胞，其中所述剂量包含在为或约5x106个与为或约1x108个之间的重组受体(例如CAR)表达CD4+ T细胞，所述剂量包含在为或约1x107个与为或约0.75x108个之间的重组受体(例如CAR)表达CD4+ T细胞，所述剂量包含为或约2.5x107个重组受体(例如CAR)表达CD4+ T细胞，或者所述剂量包含为或约5x107个重组受体(例如CAR)表达CD4+ T细胞，或者所述剂量包含为或约0.75x108个重组受体(例如CAR)表达CD4+ T细胞，任选地其中所述制品中的信息指定施用一个或多个单位剂量和/或对应于这一个或多个单位剂量的体积。在一些实施方案中，所述制品中的细胞共同包含一定剂量的细胞，所述剂量包含不超过或不超过约1x108个总重组受体(例如CAR)表达T细胞或总T细胞或CD3+细胞、不超过或不超过约1x107个总重组受体(例如CAR)表达T细胞或总T细胞或CD3+细胞、不超过或不超过约0.5x107个总重组受体(例如CAR)表达T细胞或总T细胞或CD3+细胞、不超过或不超过约1x106个总重组受体(例如CAR)表达T细胞或总T细胞或CD3+、不超过或不超过约0.5x106个总重组受体(例如CAR)表达T细胞或总T细胞或CD3+细胞。在一些实施方案中，每个单位剂量的细胞数量是活细胞。
在一些实施方案中，指定用于施用的每个小瓶或多个小瓶或多个细胞或细胞的单位剂量共同包含细胞的平剂量或细胞的固定剂量，使得细胞的所述剂量与受试者的体表面积或体重无关或不基于受试者的体表面积或体重。
在一些实施方案中，细胞的单位剂量是或包含可以按单一剂量施用至受试者或患者的数量或量的细胞(如工程化T细胞)。在一些实施方案中，单位剂量是用于以给定剂量施用的细胞数量的一部分。
在一些实施方案中，指定用于施用的每个小瓶或多个小瓶或多个细胞或细胞的单位剂量共同包含一定剂量，所述剂量包括少于约5x108个总重组受体(例如，CAR)表达细胞、T细胞或外周血单核细胞(PBMC)，例如，在为或约1x106至为或5x108个此类细胞的范围内，如为或约2x106、5x106、1x107、2.5x107、5x107、7.5x107、1x108、1.5x108或5x108个总此类细胞，或者在任两个前述值之间的范围。
在一些实施方案中，指定用于施用的每个小瓶或多个小瓶或多个细胞或细胞的单位剂量共同包含一定剂量的基因工程化细胞，所述剂量包含从为或约1x105至为或约5x108个总CAR表达T细胞、从为或约1x105至为或约2.5x108个总CAR表达T细胞、从为或约1x105至为或约1x108个总CAR表达T细胞、从为或约1x105至为或约5x107个总CAR表达T细胞、从为或约1x105至为或约2.5x107个总CAR表达T细胞、从为或约1x105至为或约1x107个总CAR表达T细胞、从为或约1x105至为或约5x106个总CAR表达T细胞、从为或约1x105至为或约2.5x106个总CAR表达T细胞、从为或约1x105至为或约1x106个总CAR表达T细胞、从为或约1x106至为或约5x108个总CAR表达T细胞、从为或约1x106至为或约2.5x108个总CAR表达T细胞、从为或约1x106至为或约1x108个总CAR表达T细胞、从为或约1x106至为或约5x107个总CAR表达T细胞、从为或约1x106至为或约2.5x107个总CAR表达T细胞、从为或约1x106至为或约1x107个总CAR表达T细胞、从为或约1x106至为或约5x106个总CAR表达T细胞、从为或约1x106至为或约2.5x106个总CAR表达T细胞、从为或约2.5x106至为或约5x108个总CAR表达T细胞、从为或约2.5x106至为或约2.5x108个总CAR表达T细胞、从为或约2.5x106至为或约1x108个总CAR表达T细胞、从为或约2.5x106至为或约5x107个总CAR表达T细胞、从为或约2.5x106至为或约2.5x107个总CAR表达T细胞、从为或约2.5x106至为或约1x107个总CAR表达T细胞、从为或约2.5x106至为或约5x106个总CAR表达T细胞、从为或约5x106至为或约5x108个总CAR表达T细胞、从为或约5x106至为或约2.5x108个总CAR表达T细胞、从为或约5x106至为或约1x108个总CAR表达T细胞、从为或约5x106至为或约5x107个总CAR表达T细胞、从为或约5x106至为或约2.5x107个总CAR表达T细胞、从为或约5x106至为或约1x107个总CAR表达T细胞、从为或约1x107至为或约5x108个总CAR表达T细胞、从为或约1x107至为或约2.5x108个总CAR表达T细胞、从为或约1x107至为或约1x108个总CAR表达T细胞、从为或约1x107至为或约5x107个总CAR表达T细胞、从为或约1x107至为或约2.5x107个总CAR表达T细胞、从为或约2.5x107至为或约5x108个总CAR表达T细胞、从为或约2.5x107至为或约2.5x108个总CAR表达T细胞、从为或约2.5x107至为或约1x108个总CAR表达T细胞、从为或约2.5x107至为或约5x107个总CAR表达T细胞、从为或约5x107至为或约5x108个总CAR表达T细胞、从为或约5x107至为或约2.5x108个总CAR表达T细胞、从为或约5x107至为或约1x108个总CAR表达T细胞、从为或约1x108至为或约5x108个总CAR表达T细胞、从为或约1x108至为或约2.5x108个总CAR表达T细胞、从为或约或2.5x108至为或约5x108个总CAR表达T细胞。
在一些实施方案中，指定用于施用的每个小瓶或所述多个小瓶或多个细胞或细胞的单位剂量共同包含一定剂量的基因工程化细胞，所述剂量包含至少或至少约1x105个CAR表达细胞、至少或至少约2.5x105个CAR表达细胞、至少或至少约5x105个CAR表达细胞、至少或至少约1x106个CAR表达细胞、至少或至少约2.5x106个CAR表达细胞、至少或至少约5x106个CAR表达细胞、至少或至少约1x107个CAR表达细胞、至少或至少约2.5x107个CAR表达细胞、至少或至少约5x107个CAR表达细胞、至少或至少约1x108个CAR表达细胞、至少或至少约2.5x108个CAR表达细胞或者至少或至少约5x108个CAR表达细胞。在一些实施方案中，细胞的数量是作为活细胞的此类细胞的数量。
在一些实施方案中，用于施用一定剂量的工程化细胞的说明书指定施用如下数量的细胞：从或从约1x105至或至约5x108个总重组受体表达细胞、总T细胞或总外周血单核细胞(PBMC)、从或从约5x105至或至约1x107个总重组受体表达细胞、总T细胞或总外周血单核细胞(PBMC)或者从或从约1x106至或至约1x107个总重组受体表达细胞、总T细胞或总外周血单核细胞(PBMC)，每个都包含端值。在一些实施方案中，细胞疗法包含施用一定剂量的细胞，所述剂量包含如下数量的细胞：至少或至少约1x105个总重组受体表达细胞、总T细胞或总外周血单核细胞(PBMC)，如至少或至少1x106、至少或至少约1x107、至少或至少约1x108个此类细胞。在一些实施方案中，所述数量是关于CD3+或CD8+或CD4+和CD8+(在一些情况下)以及重组受体表达(例如CAR+)细胞的总数量。在一些实施方案中，用于施用一定剂量的说明书指定施用如下数量的细胞：从或从约1x105至或至约5x108个CD3+或CD8+或CD4+和CD8+总T细胞或CD3+、CD8+或CD4+和CD8+重组受体(例如CAR)表达细胞、从或从约5x105至或至约1x107个CD3+、CD8+或CD4+和CD8+总T细胞或CD3+、CD8+或CD4+和CD8+重组受体(例如CAR)表达细胞、或者从或从约1x106至或至约1x107个CD3+、CD8+或CD4+和CD8+总T细胞或CD3+、CD8+或CD4+和CD8+重组受体(例如CAR)表达细胞，每个都包含端值。在一些实施方案中，用于施用一定剂量的说明书指定施用如下数量的细胞：从或从约1x105至或至约5x108个总CD3+/CAR+或CD8+/CAR+或CD4+/CD8+/CAR+细胞、从或从约5x105至或至约1x107个总CD3+/CAR+或CD8+/CAR+或CD4+/CD8+/CAR+细胞、或者从或从约1x106至或至约1x107个总CD3+/CAR+或CD8+/CAR+或CD4+/CD8+/CAR+细胞，每个都包含端值。在一些实施方案中，细胞的数量是作为活细胞的此类细胞的数量。
在一些实施方案中，用于施用一定剂量的说明书指定施用包含以下的数量的细胞：至少或至少约2.5x107个CD3+/CAR+、CD8+/CAR+或CD4+/CD8+/CAR+ T细胞、至少或至少约5x107个CD3+/CAR+、CD8+/CAR+或CD4+/CD8+/CAR+ T细胞、或者至少或至少约1x108个CD3+/CAR+、CD8+/CAR+或CD4+/CD8+/CAR+ T细胞。在一些实施方案中，用于施用一定剂量的说明书指定施用包含以下的数量的细胞：为或约2.5x107个CD3+/CAR+、CD8+/CAR+或CD4+/CD8+/CAR+ T细胞、为或约5x107个CD3+/CAR+、CD8+/CAR+或CD4+/CD8+/CAR+ T细胞、或者为或约1x108个CD3+/CAR+、CD8+/CAR+或CD4+/CD8+/CAR+ T细胞。在一些实施方案中，细胞的数量是作为活细胞的此类细胞的数量。
在一些实施方案中，用于施用一定剂量的说明书指定施用如下数量的细胞：为或为约5x107个CD3+CAR+活细胞，其包括为或约2.5x107个CD4+CAR+活细胞和为或约2.5x107个CD8+CAR+活细胞的单独剂量。在一些实施方案中，用于施用一定剂量的说明书指定施用如下数量的细胞：为或为约1x108个CD3+CAR+活细胞，其包括为或约5x107个CD4+CAR+活细胞和为或约5x107个CD8+CAR+活细胞的单独剂量。在一些实施方案中，用于施用一定剂量的说明书指定施用如下数量的细胞：为或为约1.5x108个CD3+CAR+活细胞，其包括为或约0.75x108个CD4+CAR+活细胞和为或约0.75x108个CD8+CAR+活细胞的单独剂量。
在一些实施方案中，说明书可以指定施用的剂量方案和时间安排。例如，在一些实施方案中，说明书可以指定向受试者施用细胞的多个剂量，例如，两个或更多个剂量。在一些实施方案中，说明书指定多个剂量的时间安排，例如，第二剂量是在第一剂量之后约4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20或21天时施用；和/或指定每个剂量中的剂量量。
在一些实施方案中，所述制品或试剂盒包含表达重组受体的多个CD4+ T细胞；和用于向患有疾病或病症的受试者施用所述多个CD4+ T细胞的全部或一部分以及进一步施用表达重组受体的CD8+ T细胞的说明书。在一些实施方案中，说明书指定在施用CD8+细胞之前施用CD4+ T细胞。在一些情况下，说明书指定在施用CD4+细胞之前施用CD8+ T细胞。在一些实施方案中，所述制品或试剂盒包含表达重组受体的多个CD8+ T细胞；和用于向患有疾病或病症的受试者施用所述多个CD8+ T细胞的全部或一部分以及表达重组受体的CD4+ T细胞的说明书。在一些实施方案中，说明书指定施用细胞的剂量方案和时间安排。
在一些方面，说明书指定相隔48小时，如相隔不超过36小时、相隔不超过24小时、相隔不超过12小时，如相隔0至12小时，相隔0至6小时或相隔0至2小时，施用CD4+ T细胞的全部或一部分以及CD8+ T细胞的全部或一部分。在一些情况下，说明书指定相隔不超过2小时、不超过1小时、不超过30分钟、不超过15分钟、不超过10分钟或不超过5分钟，施用CD4+ T细胞和CD8+ T细胞。
在一些实施方案中，说明书指定细胞或一种或多种细胞类型的剂量或数量和/或细胞类型(例如，单独群体或亚型)的比率，如CD4+与CD8+的比率。在一些实施方案中，细胞的群体或亚型，如CD8+和CD4+ T细胞。例如，在一些实施方案中，说明书指定，所述细胞是以多个细胞群体或亚型(如CD4+和CD8+细胞或亚型)的输出比率来施用，或在所述输出比率的容忍范围内施用，所述输出比率是在为或约5:1与为或约5:1之间(或者大于约1:5且小于约5:1)，或者在为或约1:3与为或约3:1之间(或者大于约1:3且小于约3:1)，如在为或约2:1与为或约1:5之间(或者大于约1:5且小于约2:1，如为或约5:1、4.5:1、4:1、3.5:1、3:1、2.5:1、2:1、1.9:1、1.8:1、1.7:1、1.6:1、1.5:1、1.4:1、1.3:1、1.2:1、1.1:1、1:1、1:1.1、1:1.2、1:1.3、1:1.4、1:1.5、1:1.6、1:1.7、1:1.8、1:1.9:1:2、1:2.5、1:3、1:3.5、1:4、1:4.5或1:5。在一些方面，容忍差异在所需比率的约1％、约2％、约3％、约4％约5％、约10％、约15％、约20％、约25％、约30％、约35％、约40％、约45％、约50％内，包括这些范围之间的任何值。
在一些实施方案中，所述制品和/或试剂盒进一步包括用于疗法(例如本文所述的淋巴细胞清除疗法和/或组合疗法)的一种或多种另外的药剂，以及任选的用于施用所述另外的药剂的说明书。在一些例子中，所述制品可以进一步含有一种或多种治疗剂。在一些实施方案中，治疗剂是免疫调节剂、细胞毒性剂、抗癌剂或放射性治疗剂。
在一些实施方案中，所述制品和/或试剂盒进一步包括用于治疗、预防、延迟、降低或减弱毒性的发生或发生风险的一种或多种药剂或治疗和/或用于在受试者中施用治疗、预防、延迟、降低或减弱毒性的发生或发生风险的一种或多种药剂或治疗的说明书。在一些实施方案中，所述药剂是或包含抗IL-6抗体或抗IL-6受体抗体。例如，在一些实施方案中，所述药剂或治疗是或包含选自以下的药剂：托珠单抗、司妥昔单抗、克拉吉珠单抗、萨瑞鲁单抗、奥洛吉珠单抗(CDP6038)、伊西莫单抗、ALD518/BMS-945429、司卢库单抗(CNTO 136)、CPSI-2634、ARGX-109、FE301和FM101。例如，在一些实施方案中，所述药剂或治疗是或包含以下中的一种或多种：类固醇；选自IL-10、IL-10R、IL-6、IL-6受体、IFNγ、IFNGR、IL-2、IL-2R/CD25、MCP-1、CCR2、CCR4、MIP1β、CCR5、TNFα、TNFR1、IL-1和IL-1Rα/IL-1β的细胞因子受体或细胞因子的拮抗剂或抑制剂；或能够预防、阻断或降低小神经胶质细胞活性或功能的药剂。
在一些实施方案中，能够阻止、阻断或降低小神经胶质细胞活性或功能的所述药剂选自抗炎剂、NADPH氧化酶(NOX2)抑制剂、钙通道阻断剂、钠通道阻断剂，抑制GM-CSF，抑制CSF1R，特异性地结合CSF-1，特异性地结合IL-34，抑制核因子κB(NF-κB)的激活，激活CB2受体，和/或是CB2激动剂、磷酸二酯酶抑制剂，抑制微小RNA-155(miR-155)，或者上调微小RNA-124(miR-124)。在一些情况下，所述药剂选自米诺环素、纳洛酮、尼莫地平、利鲁唑、MOR103、来那度胺、大麻素(任选地WIN55或212-2)、静脉内免疫球蛋白(IVIg)、异丁司特、抗miR-155锁核酸(LNA)、MCS110、PLX-3397、PLX647、PLX108-D1、PLX7486、JNJ-40346527、JNJ28312141、ARRY-382、AC-708、DCC-3014、5-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)嘧啶-2,4-二胺(GW2580)、AZD6495、Ki20227、BLZ945、艾马珠单抗、IMC-CS4、FPA008、LY-3022855、AMG-820和TG-3003。在一些实施方案中，所述药剂是集落刺激因子1受体(CSF1R)的抑制剂。例如，所述药剂是PLX-3397、PLX647、PLX108-D1、PLX7486、JNJ-40346527、JNJ28312141、ARRY-382、AC-708、DCC-3014、5-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)嘧啶-2,4-二胺(GW2580)、AZD6495、Ki20227、BLZ945或其药用盐或前药；艾马珠单抗、IMC-CS4、FPA008、LY-3022855、AMG-820和TG-3003，或是其抗原结合片段，或前述任何项的组合。
在一些实施方案中，所述制品和/或试剂盒进一步包括用于测定生物样品(例如，来自作为施用候选者或已施用所述疗法的受试者的生物样品)的一种或多种试剂，以及任选的所述试剂或测定的使用说明书。在一些实施方案中，生物样品是或者获得自血液、血浆或血清样品。在一些实施方案中，所述试剂可以在施用细胞疗法之前或在施用细胞疗法之后用于诊断目的，以鉴定受试者和/或评估治疗结果和/或毒性。例如，在一些实施方案中，所述制品和/或试剂盒进一步含有用于测量与毒性相关的特定生物标记(例如，细胞因子或分析物)的水平的试剂，以及测量说明书。在一些实施方案中，所述试剂包括用于进行体外测定以测量生物标记(例如，分析物)的组分，所述体外测定如免疫测定、基于适体的测定、组织学或细胞学测定或mRNA表达水平测定。在一些实施方案中，体外测定选自酶联免疫吸附测定(ELISA)、免疫印迹、免疫沉淀、放射免疫测定(RIA)、免疫染色、流式细胞术测定、表面等离子体共振(SPR)、化学发光测定、侧流免疫测定、抑制测定和亲合力测定。在一些方面，所述试剂是特异性结合生物标记(例如，分析物)的结合试剂。在一些情况下，结合试剂是抗体或其抗原结合片段、适体或核酸探针。
在一些实施方案中，所述制品和/或试剂盒包含能够检测一种或多种分析物的一种或多种试剂，以及用于使用所述试剂测定来自作为治疗候选者的受试者的生物样品的说明书，其中所述一种或多种分析物选自LDH、铁蛋白、CRP、IL-6、IL-7、IL-8、IL-10、IL-15、IL-16、TNF-α、IFN-γ、MCP-1、MIP-1β、嗜酸性粒细胞趋化因子、G-CSF、IL-1Rα、IL-1Rβ、IP-10、穿孔素和D-二聚体(纤维蛋白降解产物)。在一些实施方案中，一种或多种分析物包括LDH、铁蛋白和/或CRP。在一些实施方案中，还包括用于测定与分析物的阈值水平相比，受试者中所述分析物的存在或不存在、水平、量或浓度的说明书。在一些实施方案中，说明书指定用于根据任何所提供的方法进行对此类分析物(例如LDH、铁蛋白和/或CRP)的评估或监测的方法。
在一些实施方案中，包括说明书，其指定，如果样品中分析物的水平、量或浓度等于或高于所述分析物的阈值水平，则在以下时间向受试者施用能够治疗、预防、延迟、降低或减弱毒性的发生或发生风险的药剂或其他治疗：(i)在开始将细胞疗法施用至受试者之前，(ii)在开始将细胞疗法施用至受试者的1、2或3天内，(iii)与开始将细胞疗法施用至受试者相伴随，和/或(iv)在开始将细胞疗法施用至受试者之后第一次发热时。在一些情况下，说明书指定，如果样品中分析物的水平、量或浓度等于或高于所述分析物的阈值水平，则将细胞疗法以降低的剂量或如下剂量施用至受试者：与施用细胞疗法后发生毒性或严重毒性的风险无关，或在大多数受试者和/或患有所述受试者患有或怀疑患有的疾病或病症的大多数受试者中与施用细胞疗法后发生毒性或严重毒性的风险无关。在一些情况下，说明书指定，如果样品中分析物的水平、量或浓度等于或高于所述分析物的阈值水平，则在住院环境中和/或在住院一天或多天的情况下施用细胞疗法，任选地其中要在门诊基础上或在没有入院一天或多天的情况下将细胞疗法以其他方式施用至受试者。
在一些实施方案中，用于施用细胞疗法的说明书指定，如果样品中分析物的水平、量或浓度低于阈值水平，则任选地在门诊基础上或在没有住院一天或多天的情况下，任选地以未降低的剂量向受试者施用细胞疗法。在一些实施方案中，用于施用细胞疗法的说明书指定，如果样品中分析物的水平、量或浓度低于阈值水平，则在施用细胞疗法之前或伴随施用细胞疗法和/或在发生除了发热以外的毒性的体征或症状之前，不将能够治疗、预防、延迟或减弱毒性的发生的药剂或治疗施用至受试者。在一些方面，用于施用细胞疗法的说明书指定，如果样品中分析物的水平、量或浓度低于阈值水平，则要将或可以将细胞疗法的施用在门诊环境中和/或在不使受试者住院过夜或连续住院一或多天的情况下和/或在不使受试者住院一或多天的情况下施用至受试者。
所述制品和/或试剂盒可以进一步包括细胞疗法和/或进一步包括与使用细胞疗法的治疗一起使用、在使用细胞疗法的治疗之前使用和/或结合使用细胞疗法的治疗使用的说明书。在一些实施方案中，包括用于施用药剂的说明书，并且所述说明书指定如果样品中分析物的水平、量或浓度等于或高于阈值水平，则向受试者施用所述药剂。在一些方面，说明书进一步指定将细胞疗法施用至受试者，其中药剂的施用要在以下时间进行：(i)在开始将细胞疗法施用至受试者之前，(ii)在开始将细胞疗法施用至受试者的1、2或3天内，(iii)与开始将细胞疗法施用至受试者相伴随，和/或(iv)在开始将细胞疗法施用至受试者之后第一次发热时。
所述制品和/或试剂盒可以包括容器以及在所述容器上或与所述容器相关联的标签或包装说明书。合适的容器包括例如瓶子、小瓶、注射器、IV溶液袋等。容器可以由各种材料(例如玻璃或塑料)形成。在一些实施方案中，容器容纳组合物自身或组合物与有效治疗、预防和/或诊断病症的另一种组合物的组合。在一些实施方案中，容器具有无菌入口。示例性容器包括静脉内溶液袋、小瓶(包括具有可被注射针刺穿的塞子的那些溶液袋、小瓶)或用于口服给药剂的瓶子或小瓶。标签或包装说明书可以指示，将组合物用于治疗疾病或病症。所述制品可以包括(a)其中含有组合物的第一容器，其中所述组合物包括表达重组受体的工程化细胞；和(b)其中含有组合物的第二容器，其中所述组合物包括第二药剂。在一些实施方案中，所述制品可以包括(a)其中含有第一组合物的第一容器，其中所述组合物包括表达重组受体的工程化细胞的亚型；和(b)其中含有组合物的第二容器，其中所述组合物包括表达重组受体的工程化细胞的不同亚型。所述制品可以进一步包括包装插页，其表明组合物可以用于治疗特定病症。可替代地或另外，所述制品还可以包括另一种或相同的容器，所述容器包含药学上可接受的缓冲剂。它还可以包括其他材料，如其他缓冲剂、稀释剂、过滤器、针头和/或注射器。
VII.示例性实施方案
所提供的实施方案包括：
1.一种评估在施用细胞疗法后发生毒性的风险的方法，所述方法包括：
(a)评估受试者的一个或多个参数，其中所述一个或多个参数选自来自所述受试者的生物样品中的LDH、铁蛋白或C反应蛋白(CRP)的水平、量或浓度，或者是所述受试者的肿瘤的尺寸乘积之和(SPD)；
其中所述受试者是用所述细胞疗法治疗的候选者，所述细胞疗法包括一定剂量的表达重组受体的基因工程化细胞；并且
其中在施用所述细胞疗法之前进行所述评估，和/或所述生物样品或肿瘤不包含所述重组受体和/或所述工程化细胞；并且
(b)鉴定所述受试者是否具有毒性风险，其中如果所述一个或多个参数高于阈值水平，则所述受试者具有毒性风险，并且如果所述一个或多个参数等于或低于阈值水平，则所述受试者没有毒性风险，其中：
(i)所述参数是尺寸乘积之和(SPD)，并且阈值水平高于或高于约30cm2、40cm2、50cm2、60cm2或70cm2；
(ii)所述参数是LDH，并且阈值水平高于或高于约300单位/升、400单位/升、500单位/升或600单位/升；
(iii)所述参数是铁蛋白，并且阈值水平高于或高于约1000纳克/毫升、2000纳克/毫升、3000纳克/毫升、4000纳克/毫升、5000纳克/毫升、6000纳克/毫升、7000纳克/毫升或8000纳克/毫升；和/或
(iv)所述参数是CRP，并且阈值水平高于或高于约5毫克/升、10毫克/升、15毫克/升、20毫克/升、25毫克/升、30毫克/升、40毫克/升或50毫克/升。
2.一种鉴定受试者的方法，所述方法包括：
(a)评估受试者的一个或多个参数，其中所述一个或多个参数选自来自所述受试者的生物样品中的LDH、铁蛋白或C反应蛋白(CRP)的水平、量或浓度，或者是所述受试者的肿瘤的尺寸乘积之和(SPD)；
其中所述受试者是用所述细胞疗法治疗的候选者，所述细胞疗法包括一定剂量的表达重组受体的基因工程化细胞；并且
其中在施用所述细胞疗法之前进行所述评估，和/或所述生物样品或肿瘤不包含所述重组受体和/或所述工程化细胞；并且
(b)鉴定在施用细胞疗法后具有发生毒性的风险的受试者，其中如果所述一个或多个参数高于阈值水平，则所述受试者具有毒性风险，并且如果所述一个或多个参数等于或低于阈值水平，则所述受试者没有毒性风险，其中：
(i)所述参数是尺寸乘积之和(SPD)，并且阈值水平高于或高于约30cm2、40cm2、50cm2、60cm2或70cm2；
(ii)所述参数是LDH，并且阈值水平高于或高于约300单位/升、400单位/升、500单位/升或600单位/升；
(iii)所述参数是铁蛋白，并且阈值水平高于或高于约1000纳克/毫升、2000纳克/毫升、3000纳克/毫升、4000纳克/毫升、5000纳克/毫升、6000纳克/毫升、7000纳克/毫升或8000纳克/毫升；和/或
(iv)所述参数是CRP，并且阈值水平高于或高于约5毫克/升、10毫克/升、15毫克/升、20毫克/升、25毫克/升、30毫克/升、40毫克/升或50毫克/升。
3.一种治疗方法，其包括：
(a)评估受试者的一个或多个参数，其中所述一个或多个参数选自来自所述受试者的生物样品中的LDH、铁蛋白或C反应蛋白(CRP)的水平、量或浓度，或者是所述受试者的肿瘤的尺寸乘积之和(SPD)；
其中所述受试者是用所述细胞疗法治疗的候选者，所述细胞疗法包括一定剂量的表达重组受体的基因工程化细胞；并且
其中在施用所述细胞疗法之前进行所述评估，和/或所述生物样品或肿瘤不包含所述重组受体和/或所述工程化细胞；并且
(b)鉴定所述受试者是否具有毒性风险，其中如果所述一个或多个参数高于阈值水平，则所述受试者具有毒性风险，并且如果所述一个或多个参数等于或低于阈值水平，则所述受试者没有毒性风险，其中：
(i)所述参数是尺寸乘积之和(SPD)，并且阈值水平高于或高于约30cm2、40cm2、50cm2、60cm2或70cm2；
(ii)所述参数是LDH，并且阈值水平高于或高于约300单位/升、400单位/升、500单位/升或600单位/升；
(iii)所述参数是铁蛋白，并且阈值水平高于或高于约1000纳克/毫升、2000纳克/毫升、3000纳克/毫升、4000纳克/毫升、5000纳克/毫升、6000纳克/毫升、7000纳克/毫升或8000纳克/毫升；和/或
(iv)所述参数是CRP，并且阈值水平高于或高于约5毫克/升、10毫克/升、15毫克/升、20毫克/升、25毫克/升、30毫克/升、40毫克/升或50毫克/升；以及
(c)在所述评估后或基于所述评估的结果，向所述受试者施用所述细胞疗法以及任选地能够治疗、预防、延迟、降低或减弱毒性的发生或发生风险的药剂或其他治疗。
4.根据实施方案1-3中任一项所述的方法，其中所述参数是SPD，并且阈值水平是50cm2。
5.根据实施方案1-3中任一项所述的方法，所述参数是LDH，并且阈值水平是500单位/升。
6.根据实施方案1-5中任一项所述的方法，其中所述一个或多个参数是SPD和LDH，并且SPD的阈值水平是50cm2并且LDH的阈值水平是500单位/升。
7.根据实施方案1-3中任一项所述的方法，其中所述参数是铁蛋白，并且阈值水平是5000纳克/毫升。
8.根据实施方案1-3中任一项所述的方法，其中所述参数是CRP，并且阈值水平是10毫克/升。
9.根据实施方案1-3、7和8中任一项所述的方法，其中所述一个或多个参数是铁蛋白和CRP，并且铁蛋白的阈值水平是5000纳克/毫升并且CRP的阈值水平是10毫克/升。
10.根据实施方案1-9中任一项所述的方法，其中所述生物样品是血液或血浆样品。
11.根据实施方案1-10中任一项所述的方法，其中所述SPD是基于身体的CT和/或MRI成像或其他成像来测量。
12.根据实施方案1-11中任一项所述的方法，其中一种或多种分析物的水平、量或浓度和/或SPD是在治疗之前、在单采术之前或在细胞产物制造之前测量。
13.一种评估在施用细胞疗法后发生毒性的风险的方法，所述方法包括：
(a)评估来自受试者的生物样品中表达重组受体的基因工程化细胞的峰浓度，所述受试者先前已经被施用包含所述基因工程化细胞的细胞疗法；并且
(b)鉴定所述受试者是否具有毒性风险，其中如果一个或多个参数高于阈值水平，则所述受试者具有毒性风险，并且如果基因工程化细胞的峰浓度等于或低于阈值水平，则所述受试者没有毒性风险，其中：所述阈值水平高于或高于约300个细胞/微升、400个细胞/微升、500个细胞/微升、600个细胞/微升、700个细胞/微升、800个细胞/微升、900个细胞/微升或1000个细胞/微升。
14.一种鉴定受试者的方法，所述方法包括：
(a)评估来自受试者的生物样品中表达重组受体的基因工程化细胞的峰浓度，所述受试者先前已经被施用包含所述基因工程化细胞的细胞疗法；并且
(b)鉴定在施用细胞疗法后具有发生毒性的风险的受试者，其中如果一个或多个参数高于阈值水平，则所述受试者具有毒性风险，并且如果基因工程化细胞的峰浓度等于或低于阈值水平，则所述受试者没有毒性风险，其中：所述阈值水平高于或高于约300个细胞/微升、400个细胞/微升、500个细胞/微升、600个细胞/微升、700个细胞/微升、800个细胞/微升、900个细胞/微升或1000个细胞/微升。
15.一种治疗方法，其包括：
(a)评估来自受试者的生物样品中表达重组受体的基因工程化细胞的峰浓度，所述受试者先前已经被施用包含所述基因工程化细胞的细胞疗法；并且
(b)鉴定所述受试者是否具有毒性风险，其中如果一个或多个参数高于阈值水平，则所述受试者具有毒性风险，并且如果基因工程化细胞的峰浓度等于或低于阈值水平，则所述受试者没有毒性风险，其中：所述阈值水平高于或高于约300个细胞/微升、400个细胞/微升、500个细胞/微升、600个细胞/微升、700个细胞/微升、800个细胞/微升、900个细胞/微升或1000个细胞/微升；以及
(c)在所述评估后或基于所述评估的结果，向所述受试者施用所述细胞疗法以及任选地能够治疗、预防、延迟、降低或减弱毒性的发生或发生风险的药剂或其他治疗。
16.根据实施方案13-15中任一项所述的方法，其中阈值水平是500个细胞/微升。
17.根据实施方案1-16中任一项所述的方法，其还包括如果所述受试者被施用细胞疗法并且被鉴定为具有发生毒性的风险，则监测所述受试者的毒性症状。
18.根据实施方案1-17中任一项所述的方法，其中所述毒性是神经毒性或CRS。
19.根据实施方案1-18中任一项所述的方法，其中所述毒性是1级或更高级神经毒性或CRS。
20.根据实施方案1-19中任一项所述的方法，其中所述毒性是严重神经毒性，或者是2级或更高级神经毒性、3级或更高级神经毒性或者4级或更高级神经毒性。
21.根据实施方案1-20中任一项所述的方法，其中所述毒性是1级或更高级神经毒性。
22.根据实施方案1-20中任一项所述的方法，其中所述毒性是严重神经毒性或3级或更高级神经毒性。
23.根据实施方案1-19中任一项所述的方法，其中所述毒性是严重CRS或者是2级或更高级CRS、3级或更高级CRS或者4级或更高级CRS。
24.根据实施方案1-19和23中任一项所述的方法，其中所述毒性是1级或更高级CRS。
25.根据实施方案1-19和23中任一项所述的方法，其中所述毒性是严重CRS或3级或更高级CRS。
26.根据实施方案1-25中任一项所述的方法，其中如果将所述受试者鉴定为具有发生毒性的风险，则向所述受试者施用：
(a)(1)能够治疗、预防、延迟、降低或减弱毒性的发生或发生风险的药剂或其他治疗，和(2)所述细胞疗法，其中所述药剂的施用要在以下时间施用：(i)在开始将所述细胞疗法施用至所述受试者之前，(ii)在开始将所述细胞疗法施用至所述受试者的1、2或3天内，(iii)与开始将所述细胞疗法施用至所述受试者相伴随，和/或(iv)在开始将所述细胞疗法施用至所述受试者之后第一次发热时；和/或
(b)具有降低的剂量或如下剂量的细胞疗法：与施用所述细胞疗法后发生毒性或严重毒性的风险无关，或在大多数受试者和/或患有所述受试者患有或怀疑患有的疾病或病症的大多数受试者中与施用所述细胞疗法后发生毒性或严重毒性的风险无关；和/或
(c)在住院环境中和/或在住院一天或多天的情况下向所述受试者施用细胞疗法，任选地其中在门诊基础上或者在没有住院一天或多天的情况下将所述细胞疗法以其他方式施用至受试者。
27.根据实施方案26所述的方法，其中所述药剂或其他治疗是抗IL-6抗体或抗IL-6受体抗体。
28.根据实施方案27所述的方法，其中所述药剂或其他治疗是或包含选自以下的药剂：托珠单抗、司妥昔单抗、克拉吉珠单抗、萨瑞鲁单抗、奥洛吉珠单抗(CDP6038)、伊西莫单抗、ALD518/BMS-945429、司卢库单抗(CNTO 136)、CPSI-2634、ARGX-109、FE301和FM101。
29.根据实施方案27或实施方案28所述的方法，其中所述药剂或其他治疗是托珠单抗。
30.根据实施方案26所述的方法，其中所述药剂或其他治疗是或包含一种或多种类固醇。
31.根据实施方案30所述的方法，其中所述类固醇是地塞米松或甲基泼尼松龙。
32.根据实施方案30或实施方案31所述的方法，其中所述类固醇是地塞米松。
33.根据实施方案26所述的方法，其中所述药剂或其他治疗包括血管加压药的施用。
34.根据实施方案26所述的方法，其中所述药剂或其他治疗包括插管。
35.根据实施方案26所述的方法，其中所述药剂或其他治疗包括透析。
36.根据实施方案1-35中任一项所述的方法，其中所述重组受体特异性结合至与所述疾病或病症相关的或者在与所述疾病或病症相关的病灶环境的细胞中表达的抗原。
37.根据实施方案1-36中任一项所述的方法，其中所述疾病或病症是癌症。
38.根据实施方案1-37中任一项所述的方法，其中所述疾病或病症是骨髓瘤、白血病或淋巴瘤。
39.根据实施方案1-38a中任一项所述的方法，其中所述疾病或病症是B细胞恶性肿瘤和/或是急性成淋巴细胞性白血病(ALL)、成人ALL、慢性成淋巴细胞性白血病(CLL)、非霍奇金淋巴瘤(NHL)或大B细胞淋巴瘤。
40.根据实施方案1-39中任一项所述的方法，其中所述疾病或病症是大B细胞淋巴瘤。
41.根据实施方案40所述的方法，其中所述大B细胞淋巴瘤是弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)。
42.根据实施方案41所述的方法，其中所述DLBCL是DLBCL非特指型(NOS)、从头DLBCL或从惰性淋巴瘤转化的DLBCL。
43.根据实施方案41或实施方案42所述的方法，其中所述DLBCL是从头DLBCL。
44.根据实施方案41或实施方案42所述的方法，其中所述DLBCL是从滤泡性淋巴瘤转化的DLBCL(tFL)。
45.根据实施方案41或实施方案42所述的方法，其中所述DLBCL是从边缘区淋巴瘤转化的DLBCL(tMZL)或从慢性淋巴细胞白血病转化的DLBCL(tCLL；里希特氏)。
46.根据实施方案1-39中任一项所述的方法，其中所述疾病或病症是原发性纵隔B细胞淋巴瘤(PMBCL)或滤泡性淋巴瘤(FL)(任选地3B级滤泡性淋巴瘤(FL3B))。
47.根据实施方案1-46中任一项所述的方法，其中所述抗原是B细胞抗原，任选地CD19。
48.根据实施方案1-47中任一项所述的方法，其中所述重组受体是嵌合抗原受体(CAR)。
49.根据实施方案1-48中任一项所述的方法，其中所述工程化细胞包含T细胞，任选地CD4+ T细胞和/或CD8+ T细胞。
50.根据实施方案1-49中任一项所述的方法，其中所述细胞疗法包括将施用一定剂量的CD4+和CD8+ T细胞施用至受试者，所述CD4+和所述CD8+ T细胞各自单独包含特异性结合至所述疾病或病症或其细胞或组织表达的和/或与所述疾病或病症相关的靶抗原的受体，其中所述施用包括施用多种单独组合物，所述多种单独组合物包含含有CD8+ T细胞的第一组合物和含有CD4+ T细胞的第二组合物。
51.根据实施方案50所述的方法，其中在开始施用所述第二组合物之前进行所述第一组合物的施用的开始。
52.根据实施方案50或实施方案51所述的方法，其中所述第一组合物的施用和所述第二组合物的施用是相隔不超过48小时进行的。
53.根据实施方案50-52中任一项所述的方法，其中所述第一组合物的施用和所述第二组合物的施用是相隔不超过36小时、相隔不超过24小时、相隔不超过12小时、相隔不超过6小时、相隔不超过4小时、相隔不超过2小时、相隔不超过1小时或相隔不超过30分钟进行的。
54.根据实施方案50-53中任一项所述的方法，其中CD4+ T细胞包含的受体和/或CD8+ T细胞包含的受体包含相同的重组受体和/或其中所述CD4+ T细胞和/或所述CD8+ T细胞被基因工程化以表达相同的重组受体。
55.根据实施方案50-54中任一项所述的方法，其中：
CD4+和CD8+ T细胞的所述剂量包含限定比率的表达重组受体的CD4+细胞与表达重组受体的CD8+细胞和/或CD4+细胞与CD8+细胞，所述限定比率为或为大约1:1或者在大约1:3与大约3:1之间；和/或
所述第一和第二组合物中的一种中包含所述受体的所述CD4+ T细胞和所述第一和第二组合物中的另一种中包含所述受体的所述CD8+ T细胞是以限定比率存在，所述限定比率为或为大约1:1或者在大约1:3与大约3:1之间；和/或
所述第一和第二组合物中施用的包含所述受体的所述CD4+ T细胞和包含所述受体的所述CD8+ T细胞是以限定比率存在，所述比率为或为大约1:1或者在大约1:3与大约3:1之间。
56.根据实施方案55所述的方法，其中所述限定比率为或为大约1:1。
57.根据实施方案50-56中任一项所述的方法，其中CD4+和CD8+ T细胞的所述剂量包含：
在为或约1x107个与为或约2x108个之间的总重组受体表达T细胞，包含端值；
在为或约2.5x107个与为或约1.5x108个之间的总重组受体表达T细胞，包含端值；
在为或约5x107个与为或约1x108个之间的总重组受体表达T细胞，包含端值；
为或约5x107个总重组受体表达T细胞；
为或约1x108个总重组受体表达T细胞；或者
为或约1.5x108个总重组受体表达T细胞。
58.根据实施方案50-57中任一项所述的方法，其中CD4+和CD8+ T细胞的所述剂量包含为或约5x107个总重组受体表达T细胞。
59.根据实施方案50-57中任一项所述的方法，其中CD4+和CD8+ T细胞的所述剂量包含为或约1x108个总重组受体表达T细胞。
60.根据实施方案50-57中任一项所述的方法，其中CD4+和CD8+ T细胞的所述剂量包含为或约1.5x108个总重组受体表达T细胞。
61.根据实施方案50-60中任一项所述的方法，其中CD4+和CD8+ T细胞的所述剂量包含：
在为或约1x107个与为或约1x108个之间的重组受体表达CD8+ T细胞，包含端值；
在为或约1.25x107个与为或约7.5x107个之间的重组受体表达CD8+ T细胞，包含端值；
在为或约2.5x107个与为或约5x107个之间的重组受体表达CD8+ T细胞，包含端值；
为或约2.5x107个重组受体表达CD8+ T细胞；
为或约5x107个重组受体表达CD8+ T细胞；或者
为或约7.5x107个重组受体表达CD8+ T细胞。
62.根据实施方案50-61中任一项所述的方法，其中CD4+和CD8+ T细胞的所述剂量包含为或约2.5x107个重组受体表达CD8+ T细胞。
63.根据实施方案50-61中任一项所述的方法，其中CD4+和CD8+ T细胞的所述剂量包含为或约5x107个重组受体表达CD8+ T细胞。
64.根据实施方案50-61中任一项所述的方法，其中CD4+和CD8+ T细胞的所述剂量包含为或约7.5x107个重组受体表达CD8+ T细胞。
65.根据实施方案47-64中任一项所述的方法，其中所述T细胞是从受试者获得的原代T细胞，或者对于所述受试者是自体的。
66.根据实施方案1-65中任一项所述的方法，其中所述受试者是人受试者。
67.一种制品，其包含组合物，所述组合物包含表达重组受体的基因工程化细胞和任选地能够治疗、预防、延迟、降低或减弱毒性的发生或发生风险的药剂或其他治疗；以及用于根据实施方案1-66中任一项所述的方法评估发生毒性的风险、鉴定受试者或治疗受试者的说明书。
68.一种治疗患有或怀疑患有疾病或病症的受试者的方法，所述方法包括向所述受试者施用一定剂量的CD4+和CD8+ T细胞，所述CD4+和所述CD8+T细胞各自单独包含特异性结合至由所述疾病或病症或其细胞或组织表达的和/或与所述疾病或病症相关的靶抗原的重组受体，其中所述施用包括施用多种单独组合物，所述多种单独组合物包含含有CD8+ T细胞的第一组合物和含有CD4+ T细胞的第二组合物。
69.一种治疗患有或怀疑患有疾病或病症的受试者的方法，所述疾病或病症是B细胞恶性肿瘤，所述方法包括向所述受试者施用一定剂量的CD4+和CD8+ T细胞，所述CD4+和所述CD8+ T细胞各自单独包含特异性结合至由所述疾病或病症或其细胞或组织表达的和/或与所述疾病或病症相关的靶抗原的重组受体，其中所述施用包括施用多种单独组合物，所述多种单独组合物包含含有CD8+ T细胞的第一组合物和含有CD4+ T细胞的第二组合物。
70.一种治疗患有或怀疑患有疾病或病症的受试者的方法，所述疾病或病症是大B细胞淋巴瘤，所述方法包括向所述受试者施用一定剂量的CD4+和CD8+ T细胞，所述CD4+和所述CD8+ T细胞各自单独包含特异性结合至由所述疾病或病症或其细胞或组织表达的和/或与所述疾病或病症相关的靶抗原的重组受体，其中所述施用包括施用多种单独组合物，所述多种单独组合物包含含有CD8+ T细胞的第一组合物和含有CD4+ T细胞的第二组合物。
71.一种治疗患有或怀疑患有疾病或病症的受试者的方法，所述疾病或病症是非霍奇金淋巴瘤(NHL)或大B细胞淋巴瘤，所述方法包括向所述受试者施用一定剂量的T细胞，所述剂量包含表达与由所述NHL表达的靶抗原特异性表达的嵌合抗原受体(CAR)的T细胞，其中：
T细胞的所述剂量包含为或约1x107个CAR表达T细胞与为或约2x108个CAR表达T细胞之间，包含端值；并且
T细胞的所述剂量包含CD4+和CD8+ T细胞，所述CD4+和所述CD8+ T细胞各自单独包含特异性结合至所述疾病或病症或其细胞或组织表达的和/或与所述疾病或病症相关的靶抗原的受体，其中所述施用包括施用多种单独组合物，所述多种单独组合物包含含有CD8+T细胞的第一组合物和含有CD4+ T细胞的第二组合物。
72.根据实施方案71所述的方法，其中T细胞的所述剂量包含限定比率的表达CAR的CD4+细胞与表达CAR的CD8+细胞和/或CD4+细胞与CD8+细胞，所述比率为大约1:1或者在大约1:3与大约3:1之间。
73.一种治疗患有疾病或病症的受试者的方法，所述疾病或病症是非霍奇金淋巴瘤(NHL)或大B细胞淋巴瘤，所述方法包括向所述受试者施用一定剂量的T细胞，所述剂量包含表达与由所述NHL表达的靶抗原特异性表达的嵌合抗原受体(CAR)的T细胞，T细胞的所述剂量包含限定比率的表达CAR的CD4+细胞与表达CAR的CD8+细胞和/或CD4+细胞与CD8+细胞，所述比率为大约1:1或者为1:1，其中所述施用包括施用多种单独组合物，所述多种单独组合物包含含有CD8+ T细胞的第一组合物和含有CD4+ T细胞的第二组合物。
74.一种治疗患有疾病或病症的受试者的方法，所述疾病或病症是非霍奇金淋巴瘤(NHL)或大B细胞淋巴瘤，所述方法包括向所述受试者施用一定剂量的T细胞，所述剂量包含表达与由所述NHL表达的靶抗原特异性表达的嵌合抗原受体(CAR)的T细胞，其中：
T细胞的所述剂量包含为或约5x107个重组受体表达T细胞与为或约1.5x108个重组受体表达T细胞之间，包含端值，所述剂量包含限定比率的表达所述重组受体的CD4+细胞与表达所述重组受体的CD8+细胞和/或CD4+细胞与CD8+细胞，所述比率为大约1:1或者为1:1；并且
所述方法(1)在至少35％、至少40％或至少50％的所治疗受试者中引起完全反应(CR)和/或在至少50％、至少60％或至少70％的所治疗受试者中引起客观反应(OR)，并且(2)导致不超过50％的受试者展现高于2级的细胞因子释放综合征(CRS)和/或高于2级的神经毒性，其中所述施用包括施用多种单独组合物，所述多种单独组合物包含含有CD8+ T细胞的第一组合物和含有CD4+ T细胞的第二组合物。
75.一种治疗受试者的方法，所述方法包括向患有疾病或病症的受试者施用一定剂量的T细胞，所述疾病或病症是淋巴瘤，所述剂量包含表达与由所述淋巴瘤表达的靶抗原特异性结合的嵌合抗原受体(CAR)的T细胞，其中所述受试者的淋巴瘤与中枢神经系统(CNS)受累相关或涉及中枢神经系统(CNS)受累；并且T细胞的所述剂量包含CD4+和CD8+ T细胞，所述CD4+和所述CD8+ T细胞各自单独包含特异性结合至所述疾病或病症或其细胞或组织表达的和/或与所述疾病或病症相关的靶抗原的受体，其中所述施用包括施用多种单独组合物，所述多种单独组合物包含含有CD8+ T细胞的第一组合物和含有CD4+ T细胞的第二组合物。
76.根据实施方案75所述的方法，其中，在施用细胞的所述剂量之时或之前，所述受试者包含脑病灶，任选地颞叶脑病灶。
77.根据实施方案75或实施方案76所述的方法，其中所述淋巴瘤是B细胞恶性肿瘤。
78.根据实施方案75-77中任一项所述的方法，其中所述淋巴瘤是非霍奇金淋巴瘤(NHL)或大B细胞淋巴瘤。
79.根据实施方案68-78中任一项所述的方法，其中在开始施用所述第二组合物之前进行所述第一组合物的施用的开始。
80.根据实施方案68-79中任一项所述的方法，其中所述第一组合物的施用和所述第二组合物的施用是相隔不超过48小时进行的。
81.根据实施方案68-80中任一项所述的方法，其中所述第一组合物的施用和所述第二组合物的施用是相隔不超过36小时、相隔不超过24小时、相隔不超过12小时、相隔不超过6小时、相隔不超过4小时、相隔不超过2小时、相隔不超过1小时或相隔不超过30分钟进行的。
82.根据实施方案68-81中任一项所述的方法，其中所述第一组合物的施用与所述第二组合物的施用的进行在为或约0与为或约48小时之间、在为或约0与为或约36小时之间、在为或约0与为或约24小时之间、在为或约0与为或约12小时之间、在为或约0与为或约6小时之间、在为或约0与为或约2小时之间、在为或约0与为或约1小时之间、在为或约0与为或约30分钟之间、在为或约30分钟与为或约48小时之间、在为或约30分钟与为或约36小时之间、在为或约30分钟与为或约24小时之间、在为或约30分钟与为或约12小时之间、在为或约30分钟与为或约6小时之间、在为或约30分钟与为或约4小时之间、在为或约30分钟与为或约2小时之间、在为或约30分钟与为或约1小时之间、在为或约1小时与为或约48小时之间、在为或约1小时与为或约36小时之间、在为或约1小时与为或约24小时之间、在为或约1小时与为或约12小时之间、在为或约1小时与为或约6小时之间、在为或约1小时与为或约4小时之间、在为或约1小时与为或约2小时之间、在为或约2小时与为或约48小时之间、在为或约2小时与为或约36小时之间、在为或约2小时与为或约24小时之间、在为或约2小时与为或约12小时之间、在为或约2小时与为或约6小时之间、在为或约2小时与为或约4小时之间、在为或约4小时与为或约48小时之间、在为或约4小时与为或约36小时之间、在为或约4小时与为或约24小时之间、在为或约4小时与为或约12小时之间、在为或约4小时与为或约6小时之间、在为或约6小时与为或约48小时之间、在为或约6小时与为或约36小时之间、在为或约6小时与为或约24小时之间、在为或约6小时与为或约12小时之间、在为或约12小时与为或约48小时之间、在为或约12小时与为或约36小时之间、在为或约12小时与为或约24小时之间、在为或约24小时与为或约48小时之间、在为或约24小时与为或约36小时之间或者在为或约36小时与为或约48小时之间。
83.根据实施方案68-82中任一项所述的方法，其中：
所述第一组合物的施用和所述第二组合物的施用是在同一天进行的，是相隔约0与约12小时之间、相隔约0与约6小时之间或相隔约0至2小时之间进行的；或者
开始施用所述第一组合物和开始施用所述第二组合物是相隔约1分钟与约1小时之间或相隔约5分钟与约30分钟之间进行的。
84.根据实施方案68-83中任一项所述的方法，其中将所述第一组合物和所述第二组合物相隔不超过2小时、不超过1小时、不超过30分钟、不超过15分钟、不超过10分钟或不超过5分钟施用。
85.根据实施方案68-84中任一项所述的方法，其中所述CD4+ T细胞包含的所述受体和/或CD8+ T细胞包含的所述受体包含相同的重组受体，和/或其中所述CD4+ T细胞和/或所述CD8+ T细胞被基因工程化以表达相同的重组受体。
86.根据实施方案68-71和75-85中任一项所述的方法，其中：
CD4+和CD8+ T细胞的所述剂量包含限定比率的表达重组受体的CD4+细胞与表达重组受体的CD8+细胞和/或CD4+细胞与CD8+细胞，所述限定比率为或为大约1:1或者在大约1:3与大约3:1之间；和/或
所述第一和第二组合物中的一种中包含所述受体的所述CD4+ T细胞和所述第一和第二组合物中的另一种中包含所述受体的所述CD8+ T细胞是以限定比率存在，所述限定比率为或为大约1:1或者在大约1:3与大约3:1之间；和/或
所述第一和第二组合物中施用的包含所述受体的所述CD4+ T细胞和包含所述受体的所述CD8+ T细胞是以限定比率存在，所述比率为或为大约1:1或者在大约1:3与大约3:1之间。
87.根据实施方案86所述的方法，其中所述限定比率为或为大约1:1。
88.根据实施方案68-70、72、73和75-87中任一项所述的方法，其中CD4+和CD8+ T细胞的所述剂量包含：
在为或约1x107个与为或约2x108个之间的总重组受体表达T细胞，包含端值；
在为或约2.5x107个与为或约1.5x108个之间的总重组受体表达T细胞，包含端值；
在为或约5x107个与为或约1x108个之间的总重组受体表达T细胞，包含端值；
为或约5x107个总重组受体表达T细胞；
为或约1x108个总重组受体表达T细胞；或者
为或约1.5x108个总重组受体表达T细胞。
89.根据实施方案68-88中任一项所述的方法，其中CD4+和CD8+ T细胞的所述剂量包含为或约5x107个总重组受体表达T细胞。
90.根据实施方案68-88中任一项所述的方法，其中CD4+和CD8+ T细胞的所述剂量包含为或约1x108个总重组受体表达T细胞。
91.根据实施方案68-88中任一项所述的方法，其中CD4+和CD8+ T细胞的所述剂量包含为或约1.5x108个总重组受体表达T细胞。
92.根据实施方案68-89中任一项所述的方法，其中CD4+和CD8+ T细胞的所述剂量包含：
在为或约1x107个与为或约1x108个之间的重组受体表达CD8+ T细胞，包含端值；
在为或约1.25x107个与为或约7.5x107个之间的重组受体表达CD8+ T细胞，包含端值；
在为或约2.5x107与为或约5x107之间的重组受体表达CD8+ T细胞，包含端值；
为或约2.5x107个重组受体表达CD8+ T细胞；
为或约5x107个重组受体表达CD8+ T细胞；或者
为或约7.5x107个重组受体表达CD8+ T细胞。
93.根据实施方案68-92中任一项所述的方法，其中CD4+和CD8+ T细胞的所述剂量包含为或约2.5x107个重组受体表达CD8+ T细胞。
94.根据实施方案68-92中任一项所述的方法，其中CD4+和CD8+ T细胞的所述剂量包含为或约5x107个重组受体表达CD8+ T细胞。
95.根据实施方案68-92中任一项所述的方法，其中CD4+和CD8+ T细胞的所述剂量包含为或约7.5x107个重组受体表达CD8+ T细胞。
96.根据实施方案68-95中任一项所述的方法，其中所述重组受体特异性结合至与所述疾病或病症相关的或者在与所述疾病或病症相关的病灶环境的细胞中表达的抗原。
97.根据实施方案68和79-96中任一项所述的方法，其中所述疾病或病症是癌症。
98.根据实施方案68和79-95中任一项所述的方法，其中所述疾病或病症是骨髓瘤、白血病或淋巴瘤。
99.根据实施方案68和79-96中任一项所述的方法，其中所述疾病或病症是B细胞恶性肿瘤和/或是急性成淋巴细胞性白血病(ALL)、成人ALL、慢性成淋巴细胞性白血病(CLL)、非霍奇金淋巴瘤(NHL)或大B细胞淋巴瘤。
100.根据实施方案68和79-99中任一项所述的方法，其中所述疾病或病症是大B细胞淋巴瘤。
101.根据实施方案70-74和78-100中任一项所述的方法，其中所述大B细胞淋巴瘤是弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)。
102.根据实施方案101所述的方法，其中所述DLBCL是DLBCL非特指型(NOS)、从头DLBCL或从惰性淋巴瘤转化的DLBCL。
103.根据实施方案101或实施方案102所述的方法，其中所述DLBCL是从头DLBCL。
104.根据实施方案101或实施方案102所述的方法，其中所述DLBCL是从滤泡性淋巴瘤转化的DLBCL(tFL)。
105.根据实施方案101或实施方案102所述的方法，其中所述DLBCL是从边缘区淋巴瘤转化的DLBCL(tMZL)或从慢性淋巴细胞白血病转化的DLBCL(tCLL；里希特氏)。
106.根据实施方案71-74和99中任一项所述的方法，其中所述NHL或所述大B细胞淋巴瘤选自侵袭性NHL、弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)NOS型(从头的或从惰性转化的)、原发性纵隔大B细胞淋巴瘤(PMBCL)、套细胞淋巴瘤(MCL)和/或滤泡性淋巴瘤(FL)(任选地3B级滤泡性淋巴瘤(FL3B))。
107.根据实施方案68-99中任一项所述的方法，其中所述疾病或病症是原发性纵隔B细胞淋巴瘤(PMBCL)或滤泡性淋巴瘤(FL)(任选地3B级滤泡性淋巴瘤(FL3B))。
108.根据实施方案68-107中任一项所述的方法，其中所述抗原是B细胞抗原，任选地CD19。
109.根据实施方案68-70和79-108中任一项所述的方法，其中所述重组受体是嵌合抗原受体(CAR)。
110.根据实施方案68-109中任一项所述的方法，其中所述T细胞是从受试者获得的原代T细胞。
111.根据实施方案68-110中任一项所述的方法，其中所述T细胞对于所述受试者是自体的。
112.根据实施方案68-111中任一项所述的方法，其中至少40％、至少50％、至少60％、至少70％的在施用细胞的所述剂量之时或之前患有或被鉴定为患有双/三打击淋巴瘤或者在施用自体干细胞移植(ASCT)后复发的所述受试者实现OR或者持续等于或大于3个月或等于或大于6个月的OR。
113.根据实施方案68-112中任一项所述的方法，其中：
至少35％、至少40％或至少50％的根据所述方法治疗的受试者实现完全反应(CR)；
至少60％、70％、80％、90％或95％的实现CR的受试者展现持续等于或大于3个月或等于或大于6个月的CR；和/或
至少60％、70％、80％、90％或95％的截至一个月和/或截至3个月实现CR的受试者在实现所述CR后保持反应，保持CR，和/或存活或无进展存活，持续等于或大于3个月和/或等于或大于6个月和/或等于或大于9个月；和/或
至少50％、至少60％或至少70％的根据所述方法治疗的受试者实现客观反应(OR)；
至少60％、70％、80％、90％或95％的实现OR的受试者展现持续等于或大于3个月或等于或大于6个月的OR；和/或
至少35％、至少40％或至少50％的实现OR的受试者在实现所述OR后保持反应或存活，持续等于或大于3个月和/或等于或大于6个月；和/或
至少40％、至少50％、至少60％、至少70％的在施用细胞的所述剂量之时或之前患有或被鉴定为患有双/三打击淋巴瘤或者在施用自体干细胞移植(ASCT)后复发的受试者实现OR或持续等于或大于3个月或等于或大于6个月的OR。
114.根据实施方案68-113中任一项所述的方法，其中所述细胞对于所述受试者是自体的，并且
对于所述疗法的产生，不要求和/或指定单采术的最小绝对淋巴细胞计数(ALC)；和/或
所述细胞是通过如下过程产生，所述过程对于至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的患有所述疾病或病症的受试者或所选受试者群体，能够生成用于根据所述方法施用的细胞产物。
115.根据实施方案68-114中任一项所述的方法，其中：
大于或大于约50％、约60％、约70％或约80％的根据所述方法治疗的受试者不展现3级或更高级的细胞因子释放综合征(CRS)，和/或不展现3级或更高级的神经毒性，和/或大于40％或50％或55％不展现任何神经毒性或CRS。
116.根据实施方案74和79-115中任一项所述的方法，其中：
所述CR或所述OR持续超过3个月或超过6个月；和/或
至少20％、至少25％、至少35％、至少40％或至少50％的根据所述方法治疗的受试者实现持续大于3个月或大于6个月的CR；和/或
至少60％、70％、80％、90％或95％的用所述方法治疗并实现CR的受试者保持CR或保持反应或保持存活，持续等于或大于3个月或等于或大于6个月或等于或大于9个月；和/或
至少60％、70％、80％、90％或95％的用所述方法治疗并截至一个月和/或截至3个月实现CR的受试者保持反应，保持CR，和/或存活或无进展存活，持续等于或大于3个月和/或等于或大于6个月和/或等于或大于9个月；和/或
至少50％、至少60％或至少70％的根据所述方法治疗的受试者实现客观反应(OR)；
至少60％、70％、80％、90％或95％的受试者实现持续等于或大于3个月或等于或大于6个月的OR；和/或
至少至少35％、至少40％或至少50％的用所述方法治疗并实现OR的受试者保持反应或存活，持续等于或大于3个月和/或等于或大于6个月。
117.根据实施方案68-116中任一项所述的方法，其中：
在施用细胞的所述剂量之时或之前，所述受试者被鉴定为或已被鉴定为患有与中枢神经系统(CNS)受累相关或涉及中枢神经系统(CNS)受累的淋巴瘤；和/或
至少70％、至少80％、至少90％或至少95％的根据所述方法治疗并在施用细胞的所述剂量之时或之前展现或被鉴定为展现具有CNS受累的淋巴瘤的受试者实现所述CNS疾病的消退。
118.根据实施方案75-117中任一项所述的方法，其中：
至少35％、至少40％或至少50％的根据所述方法治疗的受试者实现CNS疾病的完全反应(CR)或缓解；
至少60％、70％、80％、90％或95％的实现CR的受试者保持CR，持续等于或大于3个月或等于或大于6个月；和/或
至少60％、70％、80％、90％或95％的截至一个月和/或截至3个月实现CNS疾病的CR或缓解的受试者保持反应，保持CR，和/或存活或无进展存活，持续等于或大于3个月和/或等于或大于6个月和/或等于或大于9个月；和/或
至少50％、至少60％或至少70％的根据所述方法治疗的受试者实现CNS疾病的客观反应(OR)或缓解；
至少60％、70％、80％、90％或95％的实现所述OR的受试者，持续等于或大于3个月或等于或大于6个月；和/或
至少60％、70％、80％、90％或95％的实现CNS疾病的OR或缓解的受试者保持反应或存活，持续等于或大于3个月和/或等于或大于6个月；和/或
所述脑病灶的大小或体积减小大于或大于约25％、50％、75％或更多；和/或
在至少35％、至少40％或至少50％的根据所述方法治疗的受试者中实现CNS疾病的减少或缓解或清除。
119.根据实施方案68-118中任一项所述的方法，其中：
大于或大于约30％、35％、40％或50％的根据所述方法治疗的受试者不展现任何等级的细胞因子释放综合征(CRS)或神经毒性；和/或
至少或至少约45％、50％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％或95％的根据所述方法治疗的受试者不展现开始施用后早于3天的CRS发作，和/或不展现开始施用后早于5天的神经毒性发作；和/或
在根据所述方法治疗的受试者中神经毒性的中值发作是在根据所述方法治疗的受试者的CRS的中值峰处或之后、或者到消退的中值时间之时或之后，和/或在根据所述方法治疗的受试者中神经毒性的中值发作大于或大于约8、9、10或11天。
120.根据实施方案68-119中任一项所述的方法，其中在开始施用细胞的所述剂量之前，尚未向所述受试者施用能够治疗、预防、延迟、降低或减弱施用细胞的所述剂量后毒性的发生或毒性发生风险的药剂或治疗。
121.根据实施方案120所述的方法，其中所述药剂是或包含抗IL-6抗体、抗IL-6受体抗体或类固醇。
122.根据实施方案120或实施方案121所述的方法，其中所述药剂是或包含托珠单抗、司妥昔单抗、地塞米松或甲基泼尼松龙。
123.根据实施方案68-122中任一项所述的方法，其中：
所述施用和任何随访是在门诊基础上和/或不需要住院或在医院过夜停留的情况下进行；并且
如果所述受试者展现持续的发热或在用退热药治疗后没有被或尚未被降低或降低超过1℃的发热，则使所述受试者住院或在医院停留过夜和/或向所述受试者施用用于治疗或预防或降低或减弱神经毒性和/或细胞因子释放综合征或其风险的药剂或治疗。
124.根据实施方案68-123中任一项所述的方法，其中所述受试者被鉴定为或已经被鉴定为东部肿瘤协作组体能状态(ECOG)状态为0、1或2。
125.根据实施方案68-124中任一项所述的方法，其中，在施用细胞的所述剂量时或紧邻施用细胞的所述剂量的时间之前，所述受试者在用除了另一剂量的表达CAR的细胞以外的用于所述疾病或病症的一种或多种先前疗法，任选地一种、两种或三种先前疗法治疗后于缓解后已经复发，或者变得用所述先前疗法难以治疗。
126.根据实施方案68-125中任一项所述的方法，其中，在施用细胞的所述剂量之时或之前：
所述受试者被鉴定为或已被鉴定为患有双/三打击淋巴瘤；和/或
所述受试者被鉴定为或已被鉴定为患有化疗难治性淋巴瘤、任选地化疗难治性DLBCL；和/或
所述受试者没有响应于先前疗法实现完全缓解(CR)；和/或
所述受试者在接受自体干细胞移植(ASCT)后1年或小于1年内复发。
127.根据实施方案68-126中任一项所述的方法，其包括在施用细胞的所述剂量之前，鉴定或选择用于施用细胞的所述剂量的受试者，所述受试者患有：
双/三打击淋巴瘤；
化疗难治性淋巴瘤，任选地化疗难治性DLBCL；
尚未响应于用于治疗所述恶性肿瘤、任选地NHL的先前疗法实现完全缓解(CR)；和/或
在接受自体干细胞移植(ASCT)后1年或小于1年内复发；和/或
患有与中枢神经系统(CNS)受累相关或涉及中枢神经系统(CNS)受累的淋巴瘤。
128.根据实施方案68-127中任一项所述的方法，其还包括向所述受试者施用另外的治疗剂或疗法，任选地除了细胞疗法以外，任选地除了CAR+ T细胞疗法以外。
129.根据实施方案48-66和71-128中任一项所述的方法，其中：
所述CAR包含对所述抗原具有特异性的细胞外抗原结合结构域、跨膜结构域、源自共刺激分子任选4-1BB的胞质信号传导结构域以及源自含有ITAM的初级信号传导分子任选CD3ζ的胞质信号传导结构域；
所述CAR按顺序包含对所述抗原具有特异性的细胞外抗原结合结构域、跨膜结构域、源自共刺激分子的胞质信号传导结构域和源自含有ITAM的初级信号传导分子的胞质信号传导结构域；或者
所述CAR包含细胞外抗原识别结构域和细胞内信号传导结构域，所述细胞外抗原识别结构域与所述抗原特异性结合，所述细胞内信号传导结构域包含CD3-zeta(CD3ζ)链和作为CD28或4-1BB的信号传导结构域的共刺激信号传导区。
130.根据实施方案129所述的方法，其中所述抗原结合结构域是scFv。
131.根据实施方案130所述的方法，其中所述scFv包含RASQDISKYLN(SEQ ID NO:35)的氨基酸序列、SRLHSGV(SEQ ID NO:36)的氨基酸序列和/或GNTLPYTFG(SEQ ID NO:37)的氨基酸序列和/或DYGVS(SEQ ID NO:38)的氨基酸序列、VIWGSETTYYNSALKS(SEQ ID NO:39)的氨基酸序列和/或YAMDYWG(SEQ ID NO:40)的氨基酸序列，或者其中所述scFv包含FMC63的可变重链区和FMC63的可变轻链区和/或FMC63的CDRL1序列、FMC63的CDRL2序列、FMC63的CDRL3序列、FMC63的CDRH1序列、FMC63的CDRH2序列和FMC63的CDRH3序列，或者与前述任一项结合相同的表位或与前述任一项竞争结合，并且任选地其中所述scFv按顺序包含VH、任选地包含SEQ ID NO:24的接头和VL，和/或所述scFv包含柔性接头和/或包含如SEQ IDNO:43所示的氨基酸序列。
132.根据实施方案129-131中任一项所述的方法，其中所述共刺激信号传导区是CD28或4-1BB的信号传导结构域。
133.根据实施方案129-132中任一项所述的方法，其中所述共刺激信号传导区是4-1BB的信号传导结构域。
134.根据实施方案129-133中任一项所述的方法，其中所述共刺激结构域包含SEQID NO:12或它的具有与其至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性的变体。
135.根据实施方案129-134中任一项所述的方法，其中所述初级信号传导结构域是CD3ζ信号传导结构域。
136.根据实施方案129-135中任一项所述的方法，其中所述初级信号传导结构域包含具有与其至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性的SEQ ID NO:13、14或15。
137.根据实施方案129-136中任一项所述的方法，其中所述CAR还包含所述跨膜结构域与所述scFv之间的间隔子。
138.根据实施方案137所述的方法，其中所述间隔子是多肽间隔子，所述多肽间隔子包含免疫球蛋白铰链或所述免疫球蛋白铰链的修饰形式、任选地IgG4铰链或所述IgG4铰链的修饰形式的全部或一部分，或由其组成。
139.根据实施方案137或实施方案138所述的方法，其中所述间隔子是约15个氨基酸或更小，并且不包含CD28细胞外区域或CD8细胞外区域。
140.根据实施方案137-139中任一项所述的方法，其中所述间隔子的长度是为或约12个氨基酸。
141.根据实施方案137-140中任一项所述的方法，其中：
所述间隔子具有以下各项或由其组成：SEQ ID NO:1的序列、SEQ ID NO:2、SEQ IDNO:30、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:32、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:34编码的序列，或具有与前述任一项至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性的前述任一项的变体；和/或
所述间隔子包含式X1PPX2P或由其组成，其中X1是甘氨酸、半胱氨酸或精氨酸，并且X2是半胱氨酸或苏氨酸。
142.根据实施方案48-66和71-141中任一项所述的方法，其中：
所述CAR包含对所述抗原具有特异性的scFv、跨膜结构域、源自任选地是或包含4-1BB的共刺激分子的胞质信号传导结构域以及任选地是或包含CD3ζ信号传导结构域的源自含有ITAM的初级信号传导分子的胞质信号传导结构域，并且任选地还包含在所述跨膜结构域与所述scFv之间的间隔子；
所述CAR按顺序包含对所述抗原具有特异性的scFv、跨膜结构域、任选地是或包含4-1BB信号传导结构域的源自共刺激分子的胞质信号传导结构域以及任选地是CD3ζ信号传导结构域的源自含有ITAM的初级信号传导分子的胞质信号传导结构域；或者
所述CAR按顺序包含对所述抗原具有特异性的scFv、间隔子、跨膜结构域、任选地是4-1BB信号传导结构域的源自共刺激分子的胞质信号传导结构域以及任选地是或包含CD3ζ信号传导结构域的源自含有ITAM的初级信号传导分子的胞质信号传导结构域；并且其中：
所述间隔子是多肽间隔子，所述多肽间隔子(a)包含免疫球蛋白铰链或所述免疫球蛋白铰链的修饰形式的全部或一部分或由其组成，或者包含约15个氨基酸或更少，并且不包含CD28细胞外区域或CD8细胞外区域，(b)包含免疫球蛋白铰链、任选地IgG4铰链或所述免疫球蛋白铰链的修饰形式的全部或一部分或由其组成，和/或包含约15个氨基酸或更少，并且不包含CD28细胞外区域或CD8细胞外区域，或者(c)长度是为或约12个氨基酸和/或包含免疫球蛋白铰链、任选地IgG4或所述免疫球蛋白铰链的修饰形式的全部或一部分或由其组成；或者(d)具有以下各项或由其组成：SEQ ID NO:1的序列、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:30、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:32、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:34编码的序列，或具有与前述任一项至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性的前述任一项的变体，或者(e)包含式X1PPX2P或由其组成，其中X1是甘氨酸、半胱氨酸或精氨酸，并且X2是半胱氨酸或苏氨酸；和/或
所述共刺激结构域包含SEQ ID NO:12或它的具有与其至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性的变体；和/或
所述初级信号传导结构域包含具有与其至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性的SEQ ID NO:13、14或15；和/或
所述scFv包含RASQDISKYLN(SEQ ID NO:35)的氨基酸序列、SRLHSGV(SEQ ID NO:36)的氨基酸序列和/或GNTLPYTFG(SEQ ID NO:37)的氨基酸序列和/或DYGVS(SEQ ID NO:38)的氨基酸序列、VIWGSETTYYNSALKS(SEQ ID NO:39)的氨基酸序列和/或YAMDYWG(SEQ IDNO:40)的氨基酸序列，或者其中所述scFv包含FMC63的可变重链区和FMC63的可变轻链区和/或FMC63的CDRL1序列、FMC63的CDRL2序列、FMC63的CDRL3序列、FMC63的CDRH1序列、FMC63的CDRH2序列和FMC63的CDRH3序列，或者与前述任一项结合相同的表位或与前述任一项竞争结合，并且任选地其中所述scFv按顺序包含VH、任选地包含SEQ ID NO:24的接头和VL，和/或所述scFv包含柔性接头和/或包含如SEQ ID NO:43所示的氨基酸序列。
143.根据实施方案1-66和68-142中任一项所述的方法，其中，在所述施用前，已经用包括施用氟达拉滨和/或环磷酰胺的淋巴细胞清除疗法对所述受试者进行预调理。
144.根据实施方案50-66和68-143中任一项所述的方法，其还包括紧临施用所述细胞的剂量之前，向所述受试者施用包括施用氟达拉滨和/或环磷酰胺的淋巴细胞清除疗法。
145.根据实施方案144所述的方法，其中：
所述细胞剂量和/或所述淋巴细胞清除疗法的施用通过门诊递送进行。
146.根据实施方案144或实施方案145所述的方法，其中，如果所述受试者展现持续发热或者在用解热药治疗后没有或尚未降低或降低超过1℃的发热，则让所述受试者住院或在医院过夜停留和/或向所述受试者施用用于治疗或预防或降低或减弱神经毒性和/或细胞因子释放综合征或其风险的药剂或治疗。
147.根据实施方案50-66和68-146中任一项所述的方法，其中将细胞的所述剂量肠胃外，任选地静脉内施用。
148.根据实施方案68-147中任一项所述的方法，其中所述受试者是人受试者。
149.一种制品，其包含组合物，所述组合物包含表达重组受体的基因工程化细胞；以及任选地用于根据实施方案68-148中任一项所述的方法施用所述细胞的剂量的说明书。
VIII.定义
术语“多肽”与“蛋白质”可互换使用以指代氨基酸残基的聚合物，并且不限于最小长度。多肽(包括所提供的受体和其他多肽，例如接头或肽)可以包括氨基酸残基，包括天然和/或非天然氨基酸残基。所述术语还包括多肽的表达后修饰，例如糖基化、唾液酸化、乙酰化和磷酸化。在一些方面，多肽可以含有关于自然或天然序列的修饰，只要蛋白质维持所需活性即可。这些修饰可能是故意的(例如通过定点诱变)，或者可能是偶然的(例如通过产生所述蛋白质的宿主的突变或由于PCR扩增引起的错误)。
如本文所用，“受试者”是哺乳动物，如人或其他动物，并且通常是人。在一些实施方案中，被施用一种或多种药剂、细胞、细胞群或组合物的受试者(例如，患者)是哺乳动物，通常是灵长类动物，如人。在一些实施方案中，灵长类动物是猴或猿。受试者可以是雄性或雌性，并且可以处于任何合适的年龄，包括婴儿、幼年、青春期、成年和老年受试者。在一些实施方案中，受试者是非灵长类哺乳动物，如啮齿动物。
如本文所用，“治疗(treatment)”(及其语法变体如“治疗”(“treat”或“treating”))是指疾病或病症或障碍、或者与之相关的症状、不良效果或结果或表型的完全或部分改善或减轻。所希望的治疗效果包括但不限于预防疾病的发生或复发、症状的缓和、疾病的任何直接或间接病理后果的减少、预防转移、降低疾病进展的速度、减轻或减缓疾病状态以及缓解或改善预后。所述术语并不意味着完全治愈疾病或完全消除任何症状或对所有症状或结果的一种或多种影响。
如本文所用，“延迟疾病的发生”意指推迟、阻碍、减缓、延缓、稳定、抑制和/或延期疾病(如癌症)的发生。此延迟可以具有不同的时间长度，这取决于病史和/或所治疗的个体。在一些实施方案中，足够或显著的延迟实际上可以涵盖预防，因为个体不会患上疾病。例如，可能延迟晚期癌症，如转移的发展。
如本文所用，“预防”包括提供关于受试者的疾病的发生或复发的预防，所述受试者可能易患所述疾病但尚未被诊断患有所述疾病。在一些实施方案中，所提供的细胞和组合物用于延迟疾病的发展或延缓疾病的进展。
如本文所用的，“抑制”功能或活性是当与除了目标条件或参数之外在其他方面相同的条件相比时，或者可替代地，与另一种情况相比时，减少功能或活性。例如，与不存在所述细胞的情况下的肿瘤生长速率相比，抑制肿瘤生长的细胞降低了肿瘤的生长速率。
在施用的情况下，药剂(例如药物配制品、细胞或组合物)的“有效量”是指在必要的剂量/量下和必要的时间段内有效实现所需结果(例如治疗或预防结果)的量。
药剂(例如，药物配制品或细胞)的“治疗有效量”是指在所需剂量下和所需时间段中，有效实现所需治疗结果(如对于疾病、病症或障碍的治疗)和/或治疗的药代动力学或药效学作用的量。治疗有效量可以根据多种因素而变化，所述因素如疾病状态、受试者的年龄、性别和体重以及施用的细胞群。在一些实施方案中，所提供的方法涉及以有效量(例如，治疗有效量)施用细胞和/或组合物。
“预防有效量”是指在必要的剂量和持续必要的时间段的情况下能有效实现所需预防结果的量。通常但不是必须的，因为预防剂量是在疾病之前或早期在受试者体内使用的，所以预防有效量将小于治疗有效量。在肿瘤负荷较低的情况下，在一些方面，预防有效量将高于治疗有效量。
如本文所用的术语“约”是指本技术领域的技术人员容易知道的相应值的常用误差范围。本文中提及“约”某一值或参数包括(并描述)针对所述值或参数本身的实施方案。
除非上下文另有明确规定，否则如本文所用，单数形式“一个/一种(a)”、“一个/一种(an)”和“所述(the)”包括复数指代物。例如，“一个/一种(a)”或“一个/一种(an)”意指“至少一个/至少一种”或“一个或多个/一种或多种”。
贯穿本公开文本，所要求保护的主题的各个方面以范围形式呈现。应理解的是，范围形式的描述仅仅是为了方便和简洁，并且不应该被解释为对所要求保护的主题的范围的不能转变的限制。因此，应该认为范围的描述具体公开了所有可能的子范围以及该范围内的单个数值。例如，在提供了值的范围的情况下，应理解，在该范围的上限和下限之间的每个中间值以及在所陈述范围内的任何其他所述或中间值涵盖在所要求保护的主题内。这些较小范围的上限和下限可以独立地被包括在该较小范围内，并且也涵盖在所要求保护的主题内，受制于在所陈述范围内任何确切排除的限制。在所陈述范围包括限制中的一者或两者的情况下，排除了那些包括的限制中的任一者或两者的范围也包括在所要求保护的主题内。无论范围的宽度如何，这都适用。
如本文所用，组合物是指两种或更多种产物、物质或化合物(包括细胞)的任何混合物。其可以是溶液、悬浮液、液体、粉末、糊剂、水性、非水性或其任何组合。
如本文所用，当提及一种或多种特定细胞类型或细胞群时，“富集”是指例如与所述组合物中的总细胞数或组合物体积相比，或者相对于其他细胞类型，如通过基于所述群体或细胞表达的标记的阳性选择，或通过基于在要耗尽的所述细胞群或细胞上不存在的标记的阴性选择，增加所述细胞类型或群体的数量或百分比。所述术语不需要从组合物完全去除其他细胞、细胞类型或群体，并且不需要如此富集的细胞在被富集组合物中以等于或甚至接近100％存在。
如本文所用，细胞或细胞群对特定标记呈“阳性”的陈述是指特定标记(通常为表面标记)在细胞上或细胞中的可检测的存在。当提及表面标记时，所述术语是指如通过流式细胞术(例如通过用特异性地结合至所述标记的抗体染色并检测所述抗体)所检测的表面表达的存在，其中所述染色可通过流式细胞术以如下水平检测到：显著高于在其他都相同的条件下用同种型匹配的对照或荧光减一(FMO)门控对照通过实施相同程序检测到的染色的水平，和/或与已知对所述标记呈阳性的细胞的水平基本上相似的水平，和/或显著高于已知对所述标记呈阴性的细胞的水平的水平。
如本文所用，细胞或细胞群对特定标记呈“阴性”的陈述是指特定标记(通常为表面标记)在细胞上或细胞中不存在实质上可检测的存在。当提及表面标记时，所述术语是指如通过流式细胞术(例如通过用特异性地结合至所述标记的抗体染色并检测所述抗体)所检测的表面表达的不存在，其中所述染色未通过流式细胞术以如下水平检测到：显著高于在其他都相同的条件下用同种型匹配的对照或荧光减一(FMO)门控对照通过实施相同程序检测到的染色的水平，和/或显著低于已知对所述标记呈阳性的细胞的水平的水平，和/或与已知对所述标记呈阴性的细胞的水平基本上相似的水平。
如本文所用，术语“载体”是指能传播其所连接的另一核酸分子的核酸分子。所述术语包括作为自我复制核酸结构的载体以及掺入已引入其的宿主细胞基因组中的载体。某些载体能够指导它们可操作地连接的核酸的表达。此类载体在本文中称为“表达载体”。
除非另外定义，否则本文使用的所有技术术语、符号和其他技术和科学术语或用辞旨在具有与所要求保护的主题所属领域通常理解的含义相同的含义。在一些情况下，为了清楚和/或为了便于引用而在本文中定义具有通常理解的含义的术语，并且本文中包含此类定义不一定应当被解释为代表与通常所理解的含义有实质性差异。
本申请中提及的所有出版物(包括专利文献、科学文章和数据库)出于所有目的通过引用以其整体并入，在程度上如同每个单独的出版物通过引用单独并入。如果本文所述的定义与通过引用并入本文的专利、申请、公开的申请和其他出版物中所述的定义相反或在其他方面不一致，则本文所述的定义优先于通过引用并入本文的定义。
本文使用的章节标题仅用于组织目的，而不应解释为限制所描述的主题。
IX.实施例
以下实施例仅出于说明性目的而被包括，并且不意图限制本发明的范围。
X.实施例
以下实施例仅出于说明性目的而被包括，并且不意图限制本发明的范围。
实施例1向患有复发性和难治性非霍奇金淋巴瘤(NHL)的受试者施用抗CD19 CAR 表达细胞
A.受试者和治疗
将含有表达对CD19具有特异性的嵌合抗原受体(CAR)的自体T细胞的治疗性CAR+T细胞组合物施用至患有B细胞恶性肿瘤的受试者。
实施例1.A.1
这个实施例1.A.1中描述了在将这种疗法施用至患有B细胞恶性肿瘤的患者的正在进行的临床研究中经特定时间点(1.A.1)进行评价的结果。具体地，一个群组(完整群组)的(在这一时间点，五十五名(55名))成年人受试者在2个治疗线失败后患有复发性或难治性(R/R)侵袭性非霍奇金淋巴瘤(NHL)，包括从头或从惰性淋巴瘤转化(NOS)的弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、具有MYC和BCL2和/或BCL6重排以及DLBCL组织学的高级别B细胞淋巴瘤(双/三打击)、从慢性淋巴细胞白血病(CLL)或边缘区淋巴瘤(MZL)转化的DLBCL、原发性纵隔大b细胞淋巴瘤(PMBCL)和3b级滤泡性淋巴瘤(FL3B)。所治疗的受试者包括东部肿瘤协作组(ECOG)得分在0与2之间(中值随访期为3.2个月)的那些。研究中还包括在1个治疗线后患有MCL的受试者(参见实施例2)，然而，完整群组不包括患有套细胞淋巴瘤(MCL)的受试者。基于先前的同种异体干细胞移植(SCT)、继发中枢神经系统(CNS)受累或ECOG得分为2，没有排除受试者，并且不需要单采术的最小绝对淋巴细胞计数(ALC)。
单独评估完整群组内核心子集(完整群组内的受试者，不包括具有较差体能状态(ECOG 2)的那些受试者、患有从边缘区淋巴瘤(MZL)和/或慢性淋巴细胞白血病(CLL，里希特氏)转化的DLBCL的那些受试者，以及患有原发性纵隔大b细胞淋巴瘤(PMBCL)和3b级滤泡性淋巴瘤(FL3B)的受试者(核心群组))的受试者的结果。核心群组包括如下受试者：患有DLBCL(NOS)和转化的滤泡性淋巴瘤(tFL)，或者高级别B细胞淋巴瘤(双/三打击)或具有MYC和BCL2和/或BCL6重排与DLBCL组织学的高级别B细胞淋巴瘤(双/三打击)，且东部肿瘤协作组体能状态(ECOG PS)为0或1。在实施例1.A.1中的时间点，评估此核心群组内44名受试者的结果。
在实施例1.A.1中的时间点，完整和核心群组的受试者的人口统计学和基线特征示于表E1中。
Figure BDA0003183097650003021
*到最后一次含化疗方案的SD或PD或在自体SCT后<12个月复发
所施用的治疗性T细胞组合物是通过包括基于免疫亲和力(例如，免疫磁性选择)从来自要治疗的单独受试者的白细胞单采术样品富集CD4+和CD8+细胞的过程来产生。将分离的CD4+和CD8+ T细胞单独激活并用编码抗CD19 CAR的病毒载体(例如，慢病毒载体)独立转导，之后以低体积对工程化细胞群进行单独扩增和冷冻保存。所述CAR含有源自鼠类抗体的抗CD19 scFv(源自FMC63的可变区，VL-接头-VH定向)、源自免疫球蛋白的间隔子、源自CD28的跨膜结构域、源自4-1BB的共刺激区和CD3-ζ细胞内信号传导结构域。所述病毒载体进一步含有编码截短的受体的序列，所述截短的受体用作CAR表达的替代标记；所述序列通过T2A核糖体跳跃序列与所述CAR序列隔开。
在静脉内施用之前解冻冷冻保存的细胞组合物。治疗性T细胞剂量是作为限定细胞组合物通过施用以大约1:1的目标比率施用的配制的CD4+CAR+细胞群和配制的CD8+CAR+群体来施用。向受试者施用如下单一剂量或双剂量的CAR表达T细胞(每个单一剂量分别通过CD4+CAR表达T细胞和CD8+CAR表达T细胞的单独输注来施用)：剂量水平1(DL-1)的单一剂量，其含有5x107个总CAR表达T细胞(对于在实施例1.A.1中评估的受试者，n＝30)；DL1的双剂量，其中每个剂量的施用相隔大约十四(14)天(对于在实施例1.A.1中评估的受试者，n＝6，在第1天和第14天施用，包括由于给药错误，通过二剂量时间表无意中接受两个DL2剂量的一名受试者)；或剂量水平2(DL-2)的单一剂量，其含有1x108个总CAR表达T细胞(对于在实施例1.A.1中评估的受试者，n＝18)。所施用组合物的T细胞子集的目标剂量水平和数量示于表E2中。
Figure BDA0003183097650003031
在CAR+ T细胞输注之前开始，受试者接受使用氟达拉滨(flu，30mg/m2)和环磷酰胺(Cy，300mg/m2)的淋巴细胞清除化学疗法，持续三(3)天。在淋巴细胞清除后2-7天，受试者接受CAR表达T细胞。
实施例1.A.2
对于实施例1.A.2，在上文此实施例1中描述的临床研究中的后续时间点，对结果进行分析。在实施例1.A.2中的这个分析时间点，已经治疗74名患者(51名男性，23名女性)。所述受试者包括完整DLBCL群组中的六十九(69)名受试者(包括67名DLBCL NOS(45名从头，14名从FL转化，8名从CLL或MZL转化)、1名3B级FL和1名PMBCL)和MCL群组中的5名受试者。在完整(DLBCL)群组的受试者中，中值年龄为61岁(范围26，82)，中值先前疗法为3(范围1，12)，46名(67％)为化疗难治性，32名(46％)具有任何先前移植，并且至少16名(23％)患者患有双/三打击淋巴瘤。在1.A.2中的这个时间点评估核心群组中的四十九(49)名受试者。
B.安全性
评估在施用CAR-T细胞疗法后，治疗中出现的不良事件(TEAE)的存在或不存在。还评估并监测受试者的神经毒性(神经系统并发症，包括以下症状：意识错乱、失语、脑病、肌阵挛发作、惊厥、嗜睡和/或精神状态改变)，根据美国国家癌症研究所—常见毒性标准(CTCAE)量表4.03版(NCI-CTCAE v4.03)，按1-5量表分级。常见毒性标准(CTCAE)量表4.03版(NCI-CTCAE v4.03)。参见美国卫生和公共服务部的不良事件通用术语(CTCAE)第4版，公开于：2009年5月28日(v4.03：2010年6月14日)；和Guido Cavaletti&Paola MarmiroliNature Reviews Neurology 6,657-666(2010年12月)。还确定并监测细胞因子释放综合征(CRS)，并且基于严重程度进行分级。参见Lee等人,Blood.2014；124(2):188-95。在一些情况下，在淋巴细胞清除时开始至CAR+ T细胞施用后90天，报告并收集不良事件数据。
实施例1.B.1
实施例1.B.1描述基于实施例1.A.1中的分析时间点的结果。
图1描绘被观察到已经历实验室异常和TEAE的此类受试者的百分比，所述实验室异常和TEAE发生在≥20％的受试者中。除了图1中显示的TEAE以外，在≥5％患者中观察到3-4级的以下事件项：白细胞计数下降(13.6％)、脑病(12％)、高血压(7％)。所观察到的毒性程度在剂量水平1与2之间一致。
在实施例1.B.1分析中，在84％的完整群组受试者中，没有观察到严重的(3级或更高级)细胞因子释放综合征(CRS)和严重神经毒性。另外，观察到60％的完整群组受试者未发生任何等级的CRS或神经毒性。在剂量水平之间没有观察到CRS、神经毒性(NT)、sCRS或严重神经毒性(sNT)的发生率的差异。表E3汇总了在接受至少一个剂量的CAR-T细胞后28天，患者中细胞因子释放综合征(CRS)和神经毒性不良事件的发生率。如表E3中所示，在接受单一剂量DL2或双剂量DL1的任何受试者中均未观察到sCRS(3-4级)。在16％(9/55)的完整群组受试者中和在18％(8/44)的核心子集受试者中观察到严重神经毒性或严重CRS(3-4级)。11％(n＝6)的受试者接受托珠单抗，24％(n＝13)的受试者接受地塞米松。在完整群组内的ECOG2受试者中，所观察到的CRS和神经毒性的比率分别为71％和29％。
Figure BDA0003183097650003051
Figure BDA0003183097650003052
包括由于给药错误而按DL2双剂量时间表治疗的一名患者
图2显示描绘所观察到的至CRS和/或神经毒性发作的时间的Kaplan meier曲线，用于在1.B.1中分析。如图所示，所观察到的到CRS发作和神经毒性发作的中值时间分别为5天和11天，其中在开始施用细胞疗法后小于72小时，仅11％的患者经历CRS发作。到CRS和神经毒性消退至1级或更佳的中值时间分别为5天和7天。到CRS和神经毒性完全消退的中值时间分别为5天和11天。结果与以下结论一致：受试者中任何CRS或神经毒性的早期发作率都较低。
实施例1.B.2
实施例1.B.2描述在实施例1.A.2中的时间点的评估。直至此时间点，从淋巴细胞清除(LD)至施用CAR表达T细胞后90天收集不良事件(AE)数据。在第二时间点，评价DLBCL群组(完整群组)中69名受试者的安全性，38名已经接受DL1单一剂量，25名已经接受DL2单一剂量，并且6名已经接受DL1双剂量时间表。除了CRS或NT以外最常见的TEAE包括嗜中性粒细胞减少症(41％，28/69)、疲劳(30％，21/69)、血小板减少症(30％，21/69)和贫血(26％，18/69)。观察到弥漫性肺泡损伤的一例5级TEAE。
没有观察到急性输注毒性，并且观察到完全群组中的大多数受试者(64％(44/69))没有CRS或NT，这表明可以进行CAR表达T细胞的门诊递送。CAR T细胞相关毒性(包括CRS和NT)的比率在剂量水平之间没有差异。观察到安全性概况在群组和剂量水平之间是相似的。在完整群组的经历任何等级CRS或NT的25名受试者(36％)中，21名(30％)具有CRS且14名(20％)具有NT。没有受试者具有3级CRS，并且只有1名(1％，1/69)具有4级CRS且需要ICU护理；另外29％(20/69)具有1-2级CRS。在20％的具有NT的受试者中，6％(4/69)具有1-2级且14％(10/69)具有3-4级；2名(3％)患有癫痫。没有观察到5级CRS或5级NT。没有观察到脑水肿的发生。所有CRS和NT事件都已消退，但一例1级震颤除外，它在分析时仍在继续。到首次CRS和NT发作的中值时间分别为5天(范围2，12)和10天(范围5，23)。在输注后的前72小时中，没有观察到受试者具有NT，并且观察到仅10％(7/69)具有CRS(均为1级)；在>70％的受试者中，在CRS后发生NT。总之，十三(13)名受试者(19％)需要使用抗细胞因子疗法(1名(1％)单独使用托珠单抗，6名(9％)单独使用地塞米松，或6名(9％)使用此二者)干预CRS或NT，且只有一名需要任何血管加压药支持。托西利珠单抗和地塞米松的中值剂量分别为1和6。中值CRS和NT持续时间分别为5天和11天。核心群组(n＝49)的分析也显示相似的CRS和NT率。
在这个评估中，在两种剂量水平下都观察到CRS和/或NT的低发生率和晚期发作，从而支持门诊输注的可行性，如在首次发热体征或发热持续超过某一时间段时住院。没有观察到5级CRS或5级NT，并且所有严重CRS和严重NT都已消退。此外，3名患者中的大约2名没有CRS或NT，从而支持可以在门诊基础上施用所述细胞。在1.B.2中评估时，四名受试者已经在门诊环境中接受治疗。此外，在接受DL1或DL2的受试者中没有观察到毒性的显著差异，表明在不增加毒性或安全性问题的风险的情况下实现了更高的反应率。
C.治疗后的反应结果
监测受试者的反应，包括通过在施用CAR+ T细胞后1、3、6、7、12、18和24个月时评估肿瘤负荷。
实施例1.C.1
实施例1.C.1描述了基于实施例1.A.1和1.B.1中的分析时间点的结果。
反应率列于表E4中。在受试者群组中观察到高持久反应率，所述群组包括深度预治疗或具有不良预后和/或具有复发性或难治性疾病的受试者。对于核心(n＝44)群组中所有剂量的受试者，所观察到的总体反应率(ORR)为86％，并且所观察到的完全反应(CR)率为59％。对于核心群组，在三个月时，总体反应率(ORR)为66％；在核心群组中三个月的CR率为50％。在核心群组中，3个月的ORR在剂量水平1下为58％(11/19)，在剂量水平2下为78％；剂量水平1的3个月CR率为42％(8/19)，并且剂量水平2为56％(5/9)，与所提出的对治疗结果的剂量反应效应一致。另外，所述结果符合剂量与反应持久性之间的关系。
Figure BDA0003183097650003071
DL1S：DL1单剂量时间表；DL2S：DL2单剂量时间表；DL1D：DL1双剂量时间表；
a包括具有PD、死亡或28天重分期扫描事件的患者。不包括在数据快照前28天治疗的患者。
b分母是在数据快照日期之前(第3个月的功效评估或者PD或死亡的先前评估)，在≥3个月前接受CAR T细胞疗法的患者数量。
c包括由于给药错误而按DL2双剂量时间表治疗的一名患者
完整和核心群组中各个受试者亚组之间的总体反应率分别显示于图3A和图3B中。在大风险(poor-risk)DLBCL亚组中，反应率总体上较高。在具有双/三打击分子亚型的患者中，在3个月时观察到大于50％的ORR，所述患者患有原发性难治性或化疗难治性DLBCL或者之前从未实现过CR。在2名患者中观察到淋巴瘤的CNS受累的完全消退。
在评价的特定时间点之前六个月或更长时间治疗的受试者中，在三个月时已经处于反应中的十(10)名患者中，9名(90％)在六个月时仍处于反应中。在评价时间点，核心子集中97％已经反应的受试者存活并且处于随访中，中值随访时间为3.2个月。
完整和核心群组的受试者的反应持续时间和总体存活的结果(依据最佳总体反应分组(无反应者、CR/PR、CR和/或PR))分别显示于图4A和图4B中。如图所示，在反应者中观察到延长的存活，并且在具有CR的受试者中观察到反应持久性增加。虽然5/6的具有较差体能状态(ECOG 2)的受试者已经死亡，但所有在三个月时处于反应中的患者在评价时都保持存活。
图8显示绘制完整和核心群组内的单独受试者的无进展时间(月)的图。每个条形表示单一患者。阴影指示最佳总体反应(在每种情况下，除非另有指示，否则是在1个月时实现)；纹理指示剂量(实心＝剂量水平1，单一剂量；交叉阴影线，剂量水平2，单一剂量；竖直阴影线＝剂量水平1，二剂量)。水平箭头指示正在进行中的反应。某些单独受试者最初(例如，在1个月时)被评估为展现疾病稳定(SD)或部分反应(PR)，并且随后被观察到已经实现PR(例如，SD转化为PR)或CR。在此类情况下，如图所示，单独患者条形的阴影指示最佳总体反应，并且沿着每个单独受试者条形的点(与阴影同样对应于所实现的反应)指示在所述受试者中观察到每例SD、PR和/或CR发生的时间。
在两名患者中观察到淋巴瘤的CNS受累完全消退。观察到一名受试者中的CAR+细胞在复发后在活检后扩增。在活检后展现扩增的受试者患有化疗难治性转化的DLBCL(生发中心亚型，具有BCL2重排以及多拷贝的MYC和BCL6)。已经以DL-1向受试者施用CAR+ T细胞，并且在某些时间点测量外周血中CD3+/CAR+、CD4+/CAR+、CD8+/CAR+ T细胞的数量，显示于图6A中。所述受试者先前已经用五个先前治疗线治疗并且是所述先前治疗线难治的，所述先前治疗线包括剂量调节的依托泊苷、多柔比星和环磷酰胺与长春新碱和泼尼松加利妥昔单抗(DA-EPOCH-R)以及来自8/8HLA匹配的无关供体的中等强度同种异体干细胞移植。在同种异体干细胞移植之后且在接受CAR+ T细胞之前，所述受试者在所有血液谱系中显示100％供体嵌合状态，已经停止进行免疫抑制疗法，并且未患移植物抗宿主病(GVHD)。在施用CAR+T细胞之前，通过正电子发射断层摄影术和计算机断层摄影术(PET-CT)(图6B)观察并通过磁共振成像(MRI)(图6D)确认，受试者患有耳周肿块和颞叶病灶。
在接受抗CD19 CAR-T细胞治疗后，如PET-CT(图6C)和脑MRI(图6E)所示，受试者在输注后28天实现CR，并且没有观察到神经毒性或CRS的体征。输注CAR-T细胞后三个月，在所述受试者中注意到耳周肿块的复发(图6F)，并进行切开活检。如图6A中所示，在活检后，在没有进行进一步治疗的情况下，可见肿瘤消退。药代动力学分析显示CAR+ T细胞在外周血中显著再扩增(达到高于所观察到的初始扩增的水平，在输注后约113天时观察到峰值水平)，这与肿瘤消退一致。然后受试者继续实现第二次CR，如通过活检后一个月再分期PET-CT所证实的(图6G)，并且在CAR-T细胞输注后6个月保持CR。对受试者的进一步评估显示CNS反应是持久的且受试者在12个月时保持CR。
已经接受活检且之后观察到CAR+ T细胞的再扩增的受试者的结果与以下结论一致：可以在功能性或活性CAR+ T细胞减少或损失和/或在针对CAR-T细胞疗法的抗肿瘤反应后的复发后，在体内启动CAR+ T细胞的再扩增和激活。此外，在初始CAR+ T细胞输注之后较晚的体内再扩增后，CAR+T细胞能够再次发挥抗肿瘤活性。该结果支持，可以在体内触发CAR+T细胞再扩增和激活，并且再激活CAR+ T细胞的方法可以进一步扩大其功效。
在两名具有CNS受累的DLBCL受试者中观察到完全反应且未发生任何等级的神经毒性。这些结果与以下观察一致：本文所提供的实施方案的CAR+ T细胞能容易地到达CNS并发挥效应子功能以减小或消除CNS肿瘤，而不增加或不显著增加毒性(如神经毒性)的风险。在其他研究中，在用抗CD19 CAR T细胞治疗的患有ALL的受试者中，在神经毒性的发生率与脑中CNS白血病(已经观察到其响应于这种CAR T细胞疗法)的存在之间没有观察到任何明确相关。因此，虽然在一些情况下可能在用CAR-T疗法治疗后发生神经毒性，但是这种神经毒性可能不一定是脑中的靶标表达或CNS中CAR T细胞活性的结果，并且可能并非是由于CAR+ T细胞的“中靶(on-target)”毒性引起的。
实施例1.C.2
实施例1.C.2描述了基于实施例1.A.2和1.B.2中的分析时间点的结果。
直到实施例1.C.2中的时间点，评价完整DLBCL群组中的68名受试者的反应。总体或客观反应(OR)率、3个月和6个月的客观反应率分别为75％(51/68)、49％(27/55)和40％(14/35)。完全反应(CR)率、3个月CR率和6个月CR率分别为56％(38/68)、40％(22/55)和37％(13/35)。与DL1相比，在以DL2治疗的受试者中观察到朝向改进的3个月反应率的趋势：对于ORR，63％(12/19；95％CI 38，84)相比于40％(12/30；95％CI 23，59)，p＝0.148；且对于CR，58％(11/19；95％CI 34，80)相比于27％(8/30；95％CI：12，46)，p＝0.0385。在16名双/三打击淋巴瘤受试者中，ORR为81％并且3个月CR率为60％。
在核心群组(对于实施例1.C.2中的时间点，n＝49)中，OR率、3个月OR率和6个月OR率分别为84％(41/49)、65％(26/40)和57％(13/23)。CR率、3个月CR率和6个月CR率分别为61％(30/49)、53％(21/40)和52％(12/23)。在较高剂量下在3个月时观察到持久ORR和CR改进的类似趋势。具体地，与施用DL1的核心群组受试者中52％(11/21；95％CI 30，74)和33％(7/21；95％CI 15，57)的3个月ORR率和CR率相比，对于施用DL2的核心群组中的患者，3个月ORR为80％(12/15；95％CI 52，96)并且3个月CR为73％(11/15；95％CI 45，92)，且分别地p＝0.159和p＝0.0409。在已经接受DL2且进行3个月随访的核心群组受试者(n＝15)中，3个月ORR为80％并且3个月CR为73％。
在1.C.2中的此时间点，完整群组和核心群组中的中值DOR分别为5.0个月和9.2个月；在完整群组中，CR的中值持续时间为9.2个月。在核心群组中尚未达到CR的中值持续时间。完整群组中的中值总体存活期(OS)为13.7个月，并且在核心群组中尚未达到所述中值总体存活期。完整群组中的6个月OS为75％，且中值随访期为5.8个月。核心群组中的6个月OS为88％，且中值随访期为5.6个月。
D.对血液中CAR+ T细胞的评估
基于来自实施例1.A.1、1.B.1和1.C.1中描述的时间点的数据，进行药代动力学分析以评估在治疗后的不同时间点，外周血中CAR+ T细胞的数量。分析来自在实施例1.A.1中的时间点评估的DLBCL群组中的五十五(55)名受试者和如下文实施例2中所述套细胞淋巴瘤(MCL)群组中的四(4)名受试者(在相同时间点评估)的结果。使用已验证的流式细胞术进行药代动力学(PK)测量，以检测在CAR构建体中表达的标记，并进行基于定量PCR的测定以检测CAR构建体的整合。使用抗CD19抗体通过流式细胞术评估B细胞发育不全。如图5A中所示，在两个所施用剂量水平下，在整个评估过程中检测CD4+和CD8+CAR表达细胞，如通过在对数标度上标绘的细胞数量/μL血液(中值±四分位数)所测量。对于外周血中的CD3+/CAR+、CD4+/CAR+和CD8+/CAR+ T细胞子集，接受DL2的受试者相对于DL1具有更高的中值Cmax和中值AUC0-28(对于CD3+、CD4+和CD8+，AUC0-28分别为：DL2与DL1是1836与461、350与182、以及1628与114；对于CD8+，p<0.05；Cmax分别为：DL2与DL1是99.8与27.9、15.1与5.2、以及73.1与5.5个细胞/μL)。到最大CD3+CAR+ T细胞扩增的中值时间为15天(范围8-29)，并且在剂量水平之间没有差异。CD4+和CD8+CAR表达T细胞以相对类似的水平定位至骨髓。
如与较低剂量水平相比，在施用较高剂量水平的受试者中观察到增加的中值曲线下面积(AUC)(血液中的CD8+CAR+ T细胞数量随时间变化)，且没有观察到毒性增加。在反应者(CR/PR)中观察到的峰值CD8+/CAR+ T细胞暴露高于非反应者(PD)；即使在疾病已经进展的受试者中，也观察到细胞在评估时间(包括至3个月和6个月)中持续存在(图5B)。CD8+CAR+T细胞的中值Cmax和中值AUC0-28在有反应的受试者中更高并且在第3个月时具有持久的反应(在第3个月的CR/PR与第3个月的PD中，CD8+Cmax中值＝20.8与5.5；CD8+AUC0-28中值＝235与55)。在针对CAR T细胞持久性进行评价的受试者中，在第3个月，29名受试者中分别有90％和93％具有可检测的CD8+和CD4+CAR+ T细胞；在第6个月，19名受试者中分别有63％和58％具有可检测的CD8+和CD4+CAR+ T细胞。在第3个月和第6个月，在具有持久反应或复发的受试者之间没有观察到CAR+ T细胞持久性的统计学显著差异。即使在第3个月时在几乎所有受试者(97％，34/35)中以及在第6个月时在100％受试者(24/24)中显示B细胞发育不良(<1个细胞/μl)，但在11名具有PK的受试者的89％中，在复发时CAR+ T细胞是可检测的。
没有观察到如与DL1相比在DL2下更高的Cmax和AUC0-28与增加的CRS或NT相关。对于任何NT或对于>2级CRS，CD4+/CAR+和CD8+/CAR+ T细胞的中值AUC分别比DL2的中值AUC高5至10倍和3至5倍。观察到较高的疾病负荷和炎性细胞因子的较高基线水平与较高的CAR+ T细胞峰值水平、较高的细胞因子峰值水平和较高的CRS和NT发生率相关。所述结果与以下结论一致：在DL2下，较高Cmax和中值AUC0-28未增加CRS或NT。
所述结果与以下结论一致：即使在反应较差的受试者中，治疗也导致工程化细胞的延长的暴露和持久性。在一些实施方案中，使用组合方法，如例如在复发或疾病进展后，在工程化细胞持续存在于受试者体内的时间(例如，如通过外周血中的细胞水平所测量)，施用免疫检查点调节剂或其他免疫调节剂。在一些方面，在施用其他药剂或治疗后，已经持续延长时间段的细胞再次扩增或被激活和/或展现抗肿瘤功能。在发生神经毒性的受试者的血液中，通常随时间观察到较高的中值CD4+和CD8+CAR+ T细胞数量(图5C)。结果表明，CAR+ T细胞展现的扩增和持久性、3个月时的反应持久性在较高剂量水平下增加，毒性没有增加。观察到结果与以下意见一致：血液中CAR+ T细胞和细胞因子的高峰值水平可能与NT和CRS相关，并且可能受基线受试者因素影响。观察到CAR+ T细胞在复发时存在，表明组合或复治方法可以提供某些优势。
E.血液分析物和神经毒性、CRS和反应
在施用CAR+ T细胞之前，在受试者(在实施例1.A.1中的时间点评估的那些)的血清中测量各种治疗前血液分析物(包括细胞因子)。使用多重细胞因子测定来测量细胞因子。使用基于单变量非参数检验的统计分析来评估与发展神经毒性的风险的潜在相关性。
图7显示在CAR+ T细胞疗法后未发生神经毒性的受试者与发生神经毒性的受试者中，以单位(LDH，U/L；铁蛋白，ng/mL；CRP，mg/L；细胞因子，pg/mL)表示的所评估分析物的中值水平。观察到某些血液分析物(包括LDH、铁蛋白、CRP、IL-6、IL-8、IL-10、TNF-α、IFN-α2、MCP-1和MIP-1β)的水平与发生神经毒性的风险的水平相关(Wilcoxon p值<0.05，不进行多重数调整)。具体而言，所述结果与以下结论一致：LDH(其在一些实施方案中是疾病负荷的替代物)的治疗前水平可能可用于潜在神经毒性风险评价和/或对某些受试者的治疗的风险适应性给药或调整。此外，在施用CAR-T细胞组合物之前测量的肿瘤负荷与发生神经毒性的风险相关联(Spearman p值<0.05)。在一些方面，LDH水平可以单独评估和/或与另一种治疗前参数组合评估，所述另一种治疗前参数如疾病负荷的另一种量度或指示物，如体积肿瘤测量值，如尺寸乘积之和(SPD)或疾病负荷的基于CT或基于MRI的其他体积测量值。在一些方面，评估指示疾病负荷的一个或多个参数，并且在一些情况下，所述一个或多个参数可以指示在T细胞疗法后产生神经毒性的风险的存在、不存在或程度。在一些方面，一个或多个参数包括LDH和/或体积肿瘤测量值。
在另一个分析中，在实施例1.A.1中的时间点的DLBCL群组中的五十五(55)名受试者，以及下文实施例2中所述的套细胞淋巴瘤(MCL)中的四(4)名受试者包括在关于与安全性评价的相关性的分析中。在针对安全性评价的59名受试者中，在32％中观察到CRS(30％是1-2级，0％是3级，2％是4级)；在20％中观察到NT(5％是1-2级，10％是3级，5％是4级)。剂量水平与CRS或NT无关(分别为p＝0.565和p＝1.00)。与任何等级的CRS和NT相关的受试者因素是较差体能状态(例如ECOG状态2)(p＝0.03)和较高疾病负荷(p<0.05)，如通过基于成像结果的直径乘积之和(SPD)所测量。被观察到与任何等级NT的发生相关的CAR+ T细胞输注前临床实验室参数和CAR+ T细胞输注前细胞因子测量值包括较高的血清LDH、铁蛋白和CRP，以及较高的血浆IL-6、IL-8、IL-10、TNF-α、IFN-α2、MCP-1和MIP-1β(各自的p<0.05)。IL-8、IL-10和CXCL10的较高的CAR+ T细胞输注前血浆水平也与3-4级NT相关(各自的p<0.05)。
在针对反应评价的DLBCL群组的54名受试者中，较高ECOG得分和从CLL或MZL转化的DLBCL与第3个月的较低持久反应相关联(二者的p＝0.02)。与最佳ORR相关的CAR+ T细胞输注前参数包括铁蛋白、LDH、CXCL10、G-CSF和IL-10的较低值，并且与3个月时的持久反应相关的那些CAR+ T细胞输注前参数包括较低的铁蛋白、CRP、LDH、CXCL10、IL-8、IL-10、IL-15、MCP-1、MIP-1β、TNF-α以及较高的CAR+ T输注前血红蛋白和白蛋白(各自的p<0.05)。
在一些情况下，评估单采术样品和用于施用的CAR+ T细胞组合物并将其与临床结果相关联。结果显示，T细胞记忆子集和T细胞功能可能与某些临床结果相关联。
结果显示，某些基线患者特征(包括治疗前的炎性状态和高肿瘤负荷)可以用于指示在施用CAR表达T细胞后具有毒性增加风险的患者。观察到低肿瘤负荷和低炎性状态与改进的毒性概况和更佳的反应持久性相关。所述结果支持，在治疗过程中较早地治疗受试者和/或评估一组临床和实验室生物标记以对受试者进行针对潜在早期干预的风险分层，所述结果可以降低毒性风险并改进反应持久性。
实施例2向患有套细胞淋巴瘤(MCL)的受试者施用抗CD19 CAR表达细胞
将如实施例1中所述生成的含有表达对CD19具有特异性的嵌合抗原受体(CAR)的自体CD4和CD8 T细胞的治疗性CAR+ T细胞组合物施用至患有在≥1个先前治疗线后已经失败的(复发性/难治性，R/R)套细胞淋巴瘤(MCL)的人受试者。合格的患者患有在至少1个先前治疗线后确认的具有R/R疾病的MCL(细胞周期蛋白D1表达或t[11；14]的证据)。基于先前同种异体干细胞移植(SCT)、继发性中枢神经系统(CNS)受累，没有排除受试者，并且不需要单采术的最小绝对淋巴细胞计数(ALC)。也不基于ECOG得分为2排除受试者，后来修正为也包括ECOG得分为0-1的受试者。在T细胞组合物的制造期间允许进行桥接化学疗法。
实施例2.A
将如实施例1中所述生成的含有表达对CD19具有特异性的嵌合抗原受体(CAR)的自体T细胞的治疗性CAR+ T细胞组合物施用至四(4)名患有至少1个治疗线已经失败的套细胞淋巴瘤(MCL)的人受试者。在静脉内施用之前解冻冷冻保存的细胞组合物。治疗性T细胞组合物是作为确定组成的细胞产物施用的，其具有以大约1:1的目标比率施用的源自相同受试者的CAR+工程化T细胞的配制的CD4+和CD8+群体。以含有5x107个CAR表达T细胞的剂量水平1(DL1)的单一剂量向受试者施用一定剂量的CAR表达T细胞(作为CD4+和CD8+CAR表达T细胞的分割或单独剂量)。在CAR+ T细胞输注前三(3)天开始，受试者接受使用氟达拉滨(flu，30mg/m2)和环磷酰胺(Cy，300mg/m2)的淋巴细胞清除化学疗法。
如实施例1中所述监测受试者的反应和毒性。在任何受试者中均没有观察到CRS或神经毒性。在所治疗的4名受试者中，两(2)名受试者实现PR(非持久)，并且两(2)名受试者具有疾病进展。
实施例2.B
在实施例2.A中所述临床研究中的后续时间点评估九(9)名患有至少1个先前治疗线已经失败的套细胞淋巴瘤(MCL)的人受试者的安全性和功效。中值年龄为66岁(范围58-78)，其中7名受试者是男性。组织学包括母细胞样(n＝3)和多形(n＝1)变体。八(8)名受试者已记录Ki67>30％(范围40％-80％)，并且1名受试者具有TP53突变。在此时间点的受试者已经接受中值为5(范围3-7)的先前疗法，包括已经接受先前造血干细胞移植的3名受试者。所有9名受试者先前已经用依鲁替尼治疗，其中4名对依鲁替尼具有疾病进展的最佳反应。九名受试者中的六名(67％)接受桥接化学疗法。
在接受如实施例2.A中所述的淋巴细胞清除化学疗法(LDC)后，以大体上如实施例1.A中所述的5x107个CAR表达T细胞(DL1，约2.5x107个CD4+CAR+ T细胞和2.5x107个CD8+CAR+ T细胞，6名受试者)的单一剂量，或者以1x108个CAR表达T细胞(DL2，约5x107个CD4+CAR+ T细胞和5x107个CD8+CAR+ T细胞，3名受试者)的单一剂量，向受试者施用一定剂量的CAR表达T细胞(通过单独施用CD4+和CD8+CAR表达T细胞的剂量)。
九名受试者中的四(4)名(44％)具有严重的治疗中出现的不良事件(TEAE)，九名受试者中的5名(56％)具有3/4级(G)TEAE，主要是贫血、嗜中性粒细胞减少症和低磷血症(各自22％)，并且九名受试者中的3名(33％)具有1级(G1)细胞因子释放综合征(CRS)。到CRS发作的中值时间是6天(范围2-7)，并且到消退的中值时间是6天(范围2-6)。一(1)名受试者接受托珠单抗和皮质类固醇。未发生神经病学事件。来自DL1群组的四(4)名受试者死亡(3名因疾病进展，并且1名在施用抗CD19 CAR表达T细胞的所述剂量后在接受新抗癌疗法后)。
总体反应率为78％(9名受试者中的7名，包括DL1群组中6名受试者中的4名(中值随访期为12.4个月[95％CI：9.2-12.4])，以及DL2群组中的所有3名受试者(中值随访期为1.4个月[95％CI：1.0-1.4])。DL1群组中的两(2)名受试者维持持久CR直至最后一次随访(分别是第281天和第378天)。
到峰值CAR+ T细胞扩增的中值时间对于DL1是9.5天(范围9-10)，并且对于DL2是17.5天(10-27)。
总而言之，这些数据证实，将抗CD19 CAR-T细胞治疗性T细胞组合物施用至患有R/R MCL的受试者导致可耐受的毒性和临床反应。
实施例2.C
在实施例2.A中所述临床研究中的后续时间点评估十七(17)名患有≥1个先前治疗线已经失败的R/R套细胞淋巴瘤(MCL)的人受试者的安全性和反应结果。如实施例1中所述监测受试者的反应和安全性，分别包括通过根据卢加诺标准评价功效，以及依据Lee等人(2014)和CTCAE的标准4.03版评价CRS和NE的等级。在抗CD19 CAR-T细胞治疗性T细胞组合物施用后，监测受试者的剂量限制性毒性(DLT)28天，并且监测治疗中出现的不良事件(TEAE)90天。使用Kaplan-Meier方法来确定反应持续时间(DOR)、总体存活期(OR)和无进展存活期(PFS)。
如实施例1中所述，通过基于免疫亲和力(例如，免疫磁性选择)从来自要治疗的单独受试者的白细胞单采术样品富集CD4+和CD8+细胞，从25名受试者制备治疗性T细胞组合物。将分离的CD4+和CD8+ T细胞单独激活并用编码抗CD19 CAR的病毒载体(例如，慢病毒载体)独立转导，之后将工程化细胞群以低体积单独扩增并冷冻保存。在施用治疗性T细胞组合物前，7名受试者的治疗由于疾病进展和死亡而中断(n＝3)，由于继发性恶性肿瘤而不再符合纳入标准(n＝1)，在中间化学疗法期间实现CR(n＝3)。
在接受如实施例2.A中所述的淋巴细胞清除化学疗法(LDC)后，以大体上如实施例1.A中所述的5x107个CAR表达T细胞(DL1，约2.5x107个CD4+CAR+ T细胞和2.5x107个CD8+CAR+ T细胞，6名受试者)的单一剂量，或者以1x108个CAR表达T细胞(DL2，约5x107个CD4+CAR+ T细胞和5x107个CD8+CAR+ T细胞，11名受试者)的单一剂量，向剩余受试者施用一定剂量的CAR表达T细胞(通过单独施用CD4+和CD8+CAR表达T细胞的剂量)。剂量水平1(DL1)中另外一名受试者接受CD8+CAR+细胞活力降低的不合规的CAR表达T细胞产品，并显示高肿瘤增殖指数(Ki67 90％)；安全性和功效分析中不包括该受试者。
在此时间点所治疗受试者的人口统计学和受试者特征示于表E4.1中。在基线时，大多数受试者已经接受多个先前疗法线，包括依鲁替尼，并且大多数受试者具有较差风险因子，包括母细胞样/多形变体、TP53突变或Ki67>30％。十七名受试者中的十名(59％)接受桥接抗癌疗法。
Figure BDA0003183097650003171
A.安全性
在此时间点该受试者群体中的不良事件示于表E4.2中。最常见的3级或4级的治疗中出现的不良事件(TEAE)是血细胞减少症。一名受试者在CAR表达T细胞施用后第31天接受新抗癌疗法(利妥昔单抗和来那度胺)后第38天，具有肺泡损伤的5级TEAE，并且被认为与CAR表达T细胞剂量无关。在以DL2接受CAR表达T细胞施用的受试者中，在第10天-第12天发生一个5级肿瘤溶解综合征的剂量限制性毒性(DLT)。该受试者具有高肿瘤负荷、210cm2的最长垂直尺寸的乘积之和、胸腔积液、骨髓浸润和胃部受累。所述受试者拒绝插管并且之后死亡。
Figure BDA0003183097650003181
如表E4.3中所示，在以DL2治疗的一名受试者中观察到严重CRS(4级)。NE(包括2名受试者中的严重NE)发生在以DL2治疗的受试者中。接受不合规产品的受试者未经历CRS或NE。
Figure BDA0003183097650003182
Figure BDA0003183097650003191
B.反应
在此时间点该群体中受试者的总体反应率示于表E4.4中。七名受试者在此研究中评估的最后一个时间点具有正在进行的CR：在DL1下，一名受试者至第365天且一名受试者至第545天，并且在DL2下，两名受试者至第180天且三名受试者至第90天。到完全反应(CR)的中值时间为1个月，并且在临床研究的这个时间点尚未达到中值反应持续时间(DOR)(观察到的范围1.0-16.2+)。在DL1下，受试者维持反应直至评价的最后一个时间点(第545天)，并且在DL2中，受试者维持反应直至第180天。在17名受试者中，5名对治疗没有反应：患有继发性中枢神经系统(CNS)受累的1名受试者没有反应(在第29天疾病稳定)。两名受试者在复发时患有中枢神经系统(CNS)疾病：1名受试者在第90天患有CNS和全身性疾病二者，且1名受试者在第180天患有孤立性CNS疾病。
Figure BDA0003183097650003192
依据剂量水平的CAR T细胞扩增显示于图39中。因为最后一次PK取样时间在第29天之前，所以未计算来自2名受试者的药代动力学(PK)参数。结果显示在DL2下增加的细胞扩增。不希望受限于理论，此在DL2下增加的扩增可能与在此剂量水平下观察到的增加的CRS和NE相关；然而，该观察是基于少量受试者。
总而言之，这些数据与如下观察一致：将抗CD19 CAR-T细胞治疗性T细胞组合物施用至患有R/R MCL的受试者导致可耐受毒性，包括低发生率的3级或4级CRS和NE。CRS和NE的发生率与在实施例6所述的研究中在患有侵袭性B细胞NHL的受试者(n＝102)中观察到的类似，所述受试者已经用类似的抗CD19 CAR T细胞组合物治疗，其中1％发生3/4级CRS并且13％发生3/4级NE(参见表E19)。所述结果还在患有R/R MCL的受试者中显示有利的反应率，包括在此研究中的时间点71％的最佳ORR和53％的CR率。在此时间点，7名受试者(41％)处于进行中的CR中，并且尚未达到CR的中值持续时间。
实施例3对施用抗CD19CAR表达细胞后，患有复发性和难治性非霍奇金淋巴瘤 (NHL)的受试者的反应、安全性、药代动力学、药效学和血液分析物的进一步评估
在上文实施例1中所述的临床研究中的后续时间点评估患者的反应结果、安全性结果、药代动力学和药效学参数以及血液分析物。
A.受试者和治疗
这个实施例中呈现的在此时间点的分析是基于对已经施用抗CD19 CAR表达细胞的完整DLBCL群组中总计91名受试者(88名(65名来自核心群组)针对反应进行评估，且91名(67名来自核心群组)针对安全性进行评估)的评估。完整群组包括DLBCL(NOS，从头和从任何惰性淋巴瘤转化)，ECOG 0-2；用于分析的核心群组包括患有DLBCL(NOS和从滤泡性淋巴瘤(tFL)转化)或高级别B细胞淋巴瘤且东部肿瘤协作组体能状态(ECOG PS)为0或1的受试者。核心群组中大约90％的所治疗患者具有预测3-6个月的短中值总体存活期(OS)的至少1种大风险疾病特征，如双/三打击表达子、原发性难治性疾病、2个或更多个治疗线的难治性、从未实现过CR、或从未接受过自体干细胞移植(ASCT)。研究中还包括在1个治疗线后患有MCL的受试者。在一些实施方案中，向患有弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)非特指型(NOS；从头的和从滤泡性淋巴瘤tFL转化的)或高级别B细胞淋巴瘤(具有MYC和BCL2和/或BCL6重排与DLBCL组织学)的受试者群组施用如本文所提供的CAR-T组合物，所述群组不包括ECOG得分为2的受试者或已经接受先前造血干细胞移植(HSCT)的受试者。在一些实施方案中，以DL2(1x108个总CAR表达T细胞)的单一剂量向核心群组的受试者施用抗CD19 CAR+ T细胞。
在此时间点，总计140名受试者已进行白细胞单采术，其中10名正在等待制造的组合物，2名在制造前已退出，并且2名无可用组合物。在另外18名产品可用的受试者中，4名正在等待治疗，4名已经退出，并且10名已经发生疾病进展或已经死亡。已经向总计108名受试者施用抗CD19 CAR表达细胞，其中6名无法评价并且11名接受不合规的抗CD19 CAR表达细胞(组合物不一定符合某些规范，但被认为可安全施用)。受试者已经接受DL1(n＝45)、DL1(n＝6)或DL2(n＝40)的双剂量。已经向患有套细胞淋巴瘤(MCL)的六(6)名受试者以DL1施用CAR+细胞(五名用合规产品治疗，一名用不合规产品治疗)，并且五(5)名已经完成28天的随访。一名MCL受试者已经发生CRS，并且没有受试者接受过托珠单抗或地塞米松。对于DLBCL群组中98％的进行单采术的受试者(126/128)，产品是可用的。
在此时间点的受试者包括已经在门诊环境中治疗的5名患者(包括四(4)名以DL1治疗的受试者、一(1)名以DL2治疗的受试者；其中四(4)名包括在核心群组中)。对于在门诊环境中治疗的受试者，中值年龄为57岁(范围26-61)，3名患有DLBCL NOS型，1名患有tFL，且1名患有PMBCL。所有五(5)名受试者的ECOG得分都为0或1。关于门诊结果的数据包括已经在门诊环境中治疗的三(3)名另外的受试者的结果(总计八(8)名受试者)，并且其数据在此实施例中用于分析的时间点之后变得可用。
在所述时间点完整和核心群组受试者的人口统计学和基线特征示于表E5中。
Figure BDA0003183097650003211
Figure BDA0003183097650003221
HSCT，造血干细胞移植；LD，淋巴细胞清除。
a在试验开始时，包括在DLBCL NOS型组织学中；基于最新的WHO标准(Swerdlow等人,(2016)Blood 127(20):2375-2390)，现在被视为“具有MYC和BCL2和/或BCL6重排与DLBCL组织学的高级别B细胞淋巴瘤(双/三打击)”。
b到最后一次含化疗方案的SD或PD或在自体SCT后<12个月复发。
B.治疗后的安全性和反应结果
如表E6中所示，客观反应率(ORR)为74％，包括52％的显示完全反应(CR)的受试者。任何等级的细胞因子释放综合征(CRS)的发生率为35％，有1％严重CRS；并且任何等级的神经毒性(NT)的发生率为19％，有1％严重NT。
Figure BDA0003183097650003222
Figure BDA0003183097650003231
a四名按DL1D(剂量水平1，双剂量时间表)治疗的患者具有类似结果。
b包括具有PD、死亡或28天重分期扫描事件的患者。一名患者未能进行重分期扫描。
c包括在数据快照日期前28天已经接受至少一个剂量的合规CAR表达细胞产物或者死亡的所有受试者。
如表E7中所示，在完整DLBCL群体中观察到高反应率和低严重毒性。
Figure BDA0003183097650003232
a包括具有PD、死亡或28天重分期扫描事件的患者。一名患者未能进行重分期扫描。
b包括在数据快照日期前28天已经接受至少一个剂量的合规CAR+表达细胞或者死亡的所有受试者。
如表E8中所示，在受试者的核心群组中观察到高反应率和剂量依赖性反应。
Figure BDA0003183097650003241
a四名按DL1D治疗的患者(核心)具有类似结果。
b包括具有PD、死亡或28天重分期扫描事件的患者。一名患者未能进行重分期扫描。
c分母是在数据快照日期之前(在第3个月进行功效评估或进行PD或死亡的在先评估)，在≥3个月前接受CAR+细胞的患者数量。
d分母是在数据快照日期之前(在第6个月进行功效评估或进行PD或死亡的在先评估)，在≥6个月前接受CAR+细胞的患者数量。
大风险DLBCL亚组(包括核心群组中以所有剂量水平治疗的所有DLBCL患者)中的不同受试者亚组之间的三个月客观反应率(ORR)显示于图22中。结果显示大风险DLBCL亚组中的高持久ORR。
完整群组和核心群组受试者的反应持续时间(DOR)和总体存活的结果(依据最佳总体反应分组(无反应者、CR/PR、CR和/或PR))显示于图23A-图23D中。结果还显示80％(16/20)的在3个月时具有CR的受试者在6个月时仍处于CR中，并且92％(11/12)的在6个月时具有反应(CR或PR)的受试者继续显示更长期的反应。
图24描绘在此时间点被观察到已经经历实验室异常和治疗中出现的不良事件(TEAE)的受试者的百分比(不包括5名以DL1用合规产品治疗且具有至少28天随访期的患有MCL的患者的数据)。除了图24中显示的TEAE以外，在≥5％的患者中观察到3-4级的以下事件项：脑病(8％)、全血细胞减少症(5％)和发热型嗜中性粒细胞减少症(7％)。八名患者(9％)具有输注毒性，所述输注毒性被定义为在施用当天与CAR+细胞施用相关的AE，包括潮红、头痛、发热、发烧、寒战、寒颤、呕吐、皮疹、荨麻疹、瘙痒、低血压、哮鸣、支气管痉挛、呼吸短促、恶心、呕吐、背痛、咳嗽和输注相关反应。事件包括寒战(2)、发烧(5)、潮红(1)、头痛(1)、低血压(1)、输注相关反应(1)、皮疹(1)、瘙痒(1)和呕吐(1)，其中有6个1级事件、1个2级(寒战)和1个3级(低血压)事件。核心群组中的TEAE与完整群组中的TEAE没有显著差异。在门诊环境组中治疗的受试者的最常见的相关TEAE是CRS、低血压、呕吐、贫血和呼吸困难。
表E9显示对于接受DL1S和DL2S的受试者，在完整或核心群组的25％或更多受试者中发生的TEAE和神经毒性。在DLBCL群体中没有观察到明显的剂量-毒性关系。
Figure BDA0003183097650003251
a包括4名以剂量水平1，双剂量时间表治疗的患者。
b实验室异常。
图25描绘在施用CAR+细胞后的不同时间点被观察到具有CRS和/或NT的受试者的数量和百分比。在这项评估中，观察到至第一个CRS或NT事件发作的中值时间分别为5天(范围1-14)或10天(范围3-23)。在CAR+细胞施用后的前72小时内，1名患者具有NT(1级)，并且仅14％(91名中的13名)具有CRS(7个1级，6个2级)。CRS或NT的中值持续时间(Q1，Q3)分别为5(4，8)或10.5(7，19)天。在17例中的12例(71％)中，在CRS后发生NT。除了一个1级震颤和2名患者因进行中的NT的疾病进展而死亡以外，所有可评价的NT事件都在分析时消退(基于所报告事件的安全性数据库，包括在此实施例中所述的分析时间点之后分析的其他受试者)。
在完整群组(n＝91)中，向具有CRS或NT发作的所选受试者施用使用托珠单抗和/或地塞米松的如下抗细胞因子疗法：仅托珠单抗，4％(n＝4)；仅地塞米松，9％(n＝8)；托珠单抗和地塞米松，8％(n＝7)。地塞米松剂量的中值数为6(范围，2-99)；并且托珠单抗剂量的中值数为1(范围，1-3)。
表E10显示以DL1或DL2接受单一剂量的核心群组中受试者的毒性结果。未发生因CRS或NT所致的死亡。到CRS发作的中值时间为5天(范围，2-14)，并且到NT发作的中值时间为11.5天(范围，5-23)。在核心群组中，13％(n＝9)接受托珠单抗，并且18％(n＝12)接受地塞米松，以改善毒性。百分之十八的受试者(67名中的12名)展现与脑病一致的神经毒性项，包括脑病(13％)，6％(67名中的4名)患有失语，并且3％(67名中的2名)患有癫痫。在表E10中，显示在所有剂量水平下或特定地在施用DL1或DL2的受试者中，展现所指示毒性结果的受试者的数量或占总受试者的％(括号)。括号中还显示95％置信区间的上限和下限。
Figure BDA0003183097650003261
a四名按DL1D治疗的患者具有类似结果。
b包括意识错乱状态、脑病、失语、共济失调、小脑综合征、谵妄、意识水平下降、头晕、淡漠情感、手眼协调能力受损、记忆缺陷、震颤、激越、注意力障碍、构音困难、精神状态变化、肌无力、癫痫、嗜睡和尿失禁。
在十二(12)名接受非合规产品的受试者中，10名以DL1施用，2名以DL2施用，都具有28天随访期。在33％的受试者(4/12)中观察到CRS，并且在任何受试者中都没有观察到NT。两名受试者接受托珠单抗并且3名受试者接受地塞米松。毒性率与在施用合规产品的受试者的较大群组中观察到的那些相当。在接受非合规产品的受试者中，药代动力学(PK)扩增在具有CRS/NT的受试者、具有高肿瘤负荷或LDH水平的受试者中较高。
C.对门诊施用的评估
在此时间点评价总计八(8)名已在多个临床地点在门诊环境中治疗的受试者的数据(中值年龄为58.5，ECOG为0或1)，包括3名数据在出于这个实施例的目的分析的时间点之后可用的受试者。对于在住院环境中治疗的受试者，平均住院长度为15.6天(SD 9.6，n＝86)，且对于在门诊环境中治疗的受试者，平均住院长度为9.3天(SD 11.9，n＝8)。在门诊环境中治疗的受试者中，观察到住院长度减少40％。在门诊CAR+ T细胞施用后在住院前的中值天数为5天(范围：4-22)。在门诊施用后，都不需要入住重症监护室(ICU)。
在8名于门诊环境中治疗的受试者中的施用后随访期超过28天的那些受试者中，1名在整个剂量限制性毒性阶段的持续期间都留在门诊。七(7)名患者因发热而住院(1名在研究第4天住院，其余在研究≥第5天住院)，6名患者因CRS而住院(4名1级，2名2级)，并且2名患者具有1级NT。没有患者经历严重CRS或NT。一(1)名患者是用托珠单抗而不用地塞米松针对CRS(2级)进行治疗，并且没有患者是用地塞米松针对CRS或NT进行治疗。一名患者在CAR+ T细胞施用后3天时住院。
在91名于住院和门诊环境中治疗的受试者中，11名受试者(12％)需要入住ICU以管理毒性；8名受试者(9％)需要入住ICU以管理CRS或NT；2名受试者(2％)需要入住ICU以管理急性呼吸事件(一名与CAR+ T细胞施用有关，一名无关)。六(6)名受试者(6％)进行插管(基于所报告事件的安全性数据库，包括在这个实施例中描述的分析时间点之后分析的其他受试者；n＝94)；7名受试者(7％)接受血管加压药(基于TEAE评估中所报告事件的安全性数据库，定义为在CAR+ T细胞施用后的前28天中展现低血压)；并且2名受试者(2％)经历血液滤过(基于所报告事件的安全性数据库)。结果显示，极少数患者需要ICU级护理和相关程序。结果支持门诊施用的可行性，其具有在门诊环境中对毒性的安全管理、适当教育和门诊监测。
对门诊施用的评估支持安全门诊施用的可行性。30％的受试者没有再次住院。
D.药代动力学评估
在DLBCL群组中具有可评估PK的87名受试者中，在施用前(治疗前或淋巴细胞清除化学疗法(LDC)前)的时间点和治疗后的各个时间点(以施用当天为第1天)的外周血和骨髓中的CAR+ T细胞数量，其是通过流式细胞术(使用对用作替代标记的截短受体具有特异性的抗体)以及定量聚合酶链式反应(qPCR)(使用对存在于编码嵌合抗原受体(CAR)的载体中的土拨鼠肝炎病毒转录后调节元件(WPRE)具有特异性的引物)来评估。评估标绘第0天与第28天之间所指示CAR+细胞群的每微升数量的曲线下面积(AUC0-28)，以及CAR+细胞的最大或峰值血液浓度(Cmax；CAR+细胞/μL血液)。通过流式细胞术，通过用CD19染色来评估外周血中的B细胞发育不良。使用多重细胞因子测定来测量细胞因子。对于安全性分析，汇集来自所有接受不同剂量水平的受试者的数据。对于反应分析，将数据按剂量水平分层。统计学分析是双侧的，不进行多重数调节。
图9A显示在不同所指示时间点所检测的每微升血液的CAR T细胞数量，如通过qPCR或流式细胞术所评估。图9B显示在第11+3天，每微升血液与每微升骨髓的CAR+细胞。如图9A中所示，通过基于流式细胞术的测定和基于qPCR的测定二者观察来自受试者的样品中CAR表达细胞的水平。如图9B中所示，PK结果被评估的所有受试者(对于流式细胞术和qPCR，分别地n＝86和85，不包括一名不具有可用流式细胞术结果的患者和2名不具有可用qPCR结果的患者)在血液和骨髓中显示可检测的CAR表达细胞数量。结果与如下观察一致：CAR+ T细胞被相似地输送至骨髓和血液。
在接受剂量水平1(DL1)的以下不同患者亚组中比较CD4+和CD8+CAR表达细胞随时间变化的水平(如通过AUC0-28和Cmax所评估)：从头(DLBCL，NOS)或从滤泡性淋巴瘤转化(tFL)的弥漫性大B细胞淋巴瘤(核心；N＝32)、从边缘区淋巴瘤或慢性淋巴细胞白血病转化的DLBCL(tMZL/tCLL；N＝4)或套细胞淋巴瘤(MCL；N＝5)，所述患者已经以DL1接受CAR表达T细胞。如图10A和图10B中所示，AUC0-28和Cmax在不同疾病亚组中的受试者之间变化，且CD4+和CD8+CAR表达细胞的扩增在非核心子集中趋于较低。由于患者数量有限，没有显示PMBCL(n＝2)和FL3B(n＝1)。接受DL2的受试者中的扩增与在接受DL1的受试者中类似。
E.依据剂量水平的药代动力学评估
还比较核心群组(受试者患有DLBCL，NOS或高级别B细胞淋巴瘤(双/三打击)；N＝59)中已接受剂量水平1(DL1；n＝32)的受试者和已接受剂量水平2(DL2；n＝27)的那些受试者的CD3+、CD4+和CD8+CAR表达细胞的AUC0-28和Cmax。如图11A和图11B中以及表E11中所示，与已接受DL1的受试者相比，在接受DL2的受试者中观察到CD3+、CD4+和CD8+CAR表达细胞的中值AUC0-28较高。类似地，在完整DLBCL群组中观察到，在已接受DL2的受试者中有较高的扩增趋势。如与已接受DL1的那些受试者相比，在已接受DL2的受试者中也观察到3个月时较高的反应持久性(DOR)，而毒性没有增加。CD4+和CD8+CAR+细胞的到Cmax(Tmax)的中值时间在接受DL1和DL2的受试者之间是类似的。
在DL2中观察到相比于DL1增加的CAR+ T细胞暴露，对应于DL2受试者中增加的反应持久性而没有增加的毒性。
Figure BDA0003183097650003291
Figure BDA0003183097650003301
F.持久性
分别基于可检测CD3+、CD4+或CD8+CAR表达细胞水平和在血液中检测到的CD19+B细胞水平，在已经施用CAR+ T细胞的患有DLBCL的可评价受试者中，在不同时间点评估CAR表达细胞和CD19+B细胞发育不良(CD19+B细胞的低数量或不存在)的持久性。结果示于表E12中。在进展时(不论BOR的进展时间；n＝37)评价的受试者中，在进展时观察到0.17个CD4+CAR+细胞/μL的中值(范围，0-65.5个细胞/μL)和0.15个CD8+CAR+细胞/μL的中值(范围，0-131.8个细胞/μL)。在复发时(在实现CR后的进展时)评价的受试者(n＝12)中，在复发时观察到CD4+CAR表达细胞的0.17/μL的中值(范围，0-35.1个细胞/μL)和CD8+CAR表达细胞的0.20个细胞/μL的中值(范围，0-131.8个细胞/μL)。在12个月时，在75％的患有DLBCL的可评价受试者中观察到CAR表达细胞的长期持久性。还在12个月时在75％的受试者中以及在不论何种复发状态的受试者中观察到B细胞发育不良的长期持久性。结果与如下结论一致：抗CD19 CAR表达细胞在大多数受试者中展现长期持久性，并且表明即使在复发患者中也有持续进行低水平疾病控制的潜力。
在复发的受试者中，91.7％(11/12)在复发时在血液中具有可检测的CAR表达细胞。这个结果与以下结论一致：在一些实施方案中，组合疗法或其他干预可以用于扩大和/或加强CAR表达细胞，如可被耗竭的那些。
Figure BDA0003183097650003311
G药代动力学评估和毒性
还比较具有任何等级(在这项评估中，1-4级中的任一级；没有观察到5级CRS或NT)的细胞因子释放综合征(CRS)或神经毒性(NT)的核心群组中的受试者与未被评估为展现任何等级的CRS或NT的受试者的CD4+和CD8+CAR表达细胞的AUC0-28和Cmax。中值CD4+CAR+AUC0-28(Q1，Q3)对于无CRS(0级；n＝43)为59(18，210)，并且对于任何CRS(1-4级；n＝20)为267(91，1510)(p＝0.001)；中值CD8+CAR+AUC0-28(Q1，Q3)对于无CRS(0级；n＝43)为310(36，900)，并且对于任何CRS(1-4级；n＝20)为605(174，5619)(p＝0.021)；中值CD4+CAR+AUC0-28(Q1，Q3)对于无NT(0级；n＝50)为71(23，244)，并且对于任何NT(1-4级；n＝13)为1269(184，3057)(p＝0.003)；中值CD8+CAR+AUC0-28(Q1，Q3)对于无NT(0级；n＝50)为304(43，799)，并且对于任何NT(1-4级；n＝13)为2463(607，7691)(p＝0.004)。如上文所述并且如图12A-图12D中所示，随时间变化的较高CD4+和CD8+CAR表达细胞水平与CRS和NT相关。
H.药代动力学评估和反应
在具有CR、PR或PD的最佳总体反应(BOR)的受试者中，随时间评估峰值CD3+CAR+细胞/μL的数量(CD3+Cmax)。如图13A和图13B中所示，在具有较高扩增的受试者中观察到朝向更佳BOR的趋势，在受试者之间具有变化性。
I.依据血液分析物和患者参数的药代动力学评估
如与展现CAR+CD3+血液Cmax<500个CAR+ T细胞/μL的受试者(N＝7)中相比，在展现CAR+CD3+血液Cmax>500个CAR+ T细胞/μL的受试者(N＝55)中评估CAR+ T细胞治疗前(淋巴细胞清除化学疗法前)血浆细胞因子水平，所述血浆细胞因子包括白介素-7(IL-7)、IL-15、巨噬细胞炎性蛋白(MIP-1α)。如图14A中所示，观察到升高的CAR+ T细胞治疗前细胞因子血浆水平与CAR+CD3+Cmax>500个CAR+ T细胞/μL相关(Wilcoxon P值<.05(不进行多重数调整)；除了IL-7，p＝0.07)。
如与展现CAR+CD3+血液Cmax<500个CAR+ T细胞/μL的受试者(N＝9)相比，还在展现CAR+CD3+血液Cmax>500个CAR+ T细胞/μL的受试者(N＝68)中评估各种血浆细胞因子(IL-6、IL-10、IL-16、干扰素γ(IFN-γ)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、MIP-1α、MIP-1β、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)和C-X-C基序趋化因子10(CXCL10))的峰值水平。如图14B中所示，观察到较高的峰值细胞因子水平与CAR+CD3+Cmax>500个CAR+ T细胞/μL相关(Wilcoxon P值<0.05；不进行多重数调整)。
评估在CAR+ T细胞治疗前(淋巴细胞清除化学疗法(LDC)前)体积肿瘤测量值尺寸乘积之和(SPD)(作为肿瘤负荷的指示物)与CD3+CAR+T细胞的AUC0-28(表示随时间变化的CAR+ T暴露)之间的关系。如图15中所示，在基线SPD与CD3+AUC0-28之间观察到正相关性，且Spearman相关系数为0.32且p＝0.019。
J.治疗前患者参数以及反应和毒性结果
比较具有任何等级(此处，1-4级)细胞因子释放综合征(CRS)或神经毒性(NT)的受试者与不具有任何CRS或NT(0级)的CAR+ T细胞治疗前(LDC前)分析物水平，所述分析物包括细胞因子和炎性标记，如铁蛋白、C反应蛋白(CRP)、D-二聚体(纤维蛋白降解产物)、IL-6、IL-10、IL-15、IL-16、TNF-α、MIP-1α和MIP-1β。在这个群组中，在具有1-4级CRS的受试者中，除了一个CRS事件之外的所有CRS事件都被确定为1级或2级。如图16A(CRS)和图16B(NT)中所示，基于单变量分析，观察到较高峰值血浆细胞因子水平和炎性标记水平与CRS和NT相关(除了对于CRS的铁蛋白(p＝0.14)和对于CRS的CRP(p＝0.09)外，所有分析物的Wilcoxon P值<0.05)。对于CRS，在多变量分析中调整肿瘤负荷后，MIP-1β、IL-10和TNF的p<0.05；对于NT，IL-15、IL-6、MIP-1α和TNF的p<0.05。
在未观察到发生CRS或神经毒性的受试者与观察到已发生CRS或NT的受试者之间比较治疗前(LDC前)患者参数，例如乳酸脱氢酶(LDH)水平和作为肿瘤负荷指示物的体积肿瘤测量值，如尺寸乘积之和(SPD)。如图17中所示，使用单变量统计学分析，具有CRS或NT的受试者展现较高水平的治疗前患者参数，如SPD(cm2)和LDH(U/L)水平；观察到此类水平与CRS或NT相关联。所观察到与CRS和NT相关的其他患者参数包括较短的诊断后时间(对于CRS和NT，分别为p＝0.05和p＝0.09)。所观察到与CRS或NT无关的患者参数包括年龄(分别为p＝0.19和p＝0.54)和先前治疗数量(分别为p＝0.67和p＝0.59)、疾病阶段0-2与3-4(p＝0.79，p＝0.51)和患者体重(分别为p＝0.35和p＝0.44)。
图18A显示单独患者之间的治疗前SPD和LDH水平(点；单独点的阴影表明所述单独患者是否展现任何等级的神经毒性(左侧图)或者是否展现任何等级的CRS(右侧图))。在图18A中，y轴和x轴上的虚线分别描绘SPD≥50cm2和LDH≥500U/L。如图18A中所示，观察到大约50cm2或更高的SPD和/或大约500U/L或更高的LDH与NT和CRS的风险相关。在高于或低于图18A中的虚线所指示的SPD和LDH水平的受试者中发生CRS或NT的计算的优势比估计值(置信区间(CI)为95％)描绘于图18B和图18C中。优势比超过1表明增加的发生CRS或NT的概率或可能性。如图所示，观察到50cm2或更高的SPD和500U/L或更高的LDH与增加的发生CRS或NT的风险相关。观察到50cm2或更高的SPD和500U/L或更高的LDH与增加大约8倍的发生任何等级CRS和NT的风险相关，并且低于50cm2的SPD和低于500U/L的LDH显示降低的任何等级CRS和NT的风险。结果与以下一致：基线患者参数(包括高肿瘤负荷和炎性生物标记)与CAR+T细胞扩增和增加的CRS和神经毒性的比率相关。
用单变量统计学分析比较在3个月时具有和不具有持久反应的受试者的各种治疗前(LDC前)患者参数，包括与肿瘤负荷相关的标记(SPD)、炎性细胞因子和其他血液分析物，包括LDH、铁蛋白、CRP、D-二聚体、SAA-1、IL-6、IL-10、IL-15、IL-16、TNF-α、IFN-γ、MIP-1α和CXCL10。如图19中所示，观察到肿瘤负荷的某些标记、炎症标记或炎性细胞因子在展现持久反应的受试者中较低(除了SPD以外(p＝0.1274)，所有参数的p值<0.05)。在单独分析时，在接受DL2的受试者中观察到类似结果。观察到基线患者参数(包括高肿瘤负荷和炎性生物标记)与持久反应的负相关性。在一些方面，这种负相关性可能是由于CAR+ T细胞的较高扩增和耗竭所致。
使用基于单变量非参数检验的统计学分析评估患者因素、临床关联和血液分析物与发生某些程度的CRS和NT之间的关系。表E13列出了单变量分析的结果。在这项评估中，年龄<40岁和无先前HSCT与CRS或NT的发生率相关。与更老患者相比，没有观察到年龄<40岁的受试者具有在统计学上不同的较高肿瘤负荷的比率。与ECOG得分为0-1的受试者相比，ECOG得分为2的受试者不具有在统计学上不同的较高肿瘤负荷的比率。不具有先前HSCT或双/三打击或双表达子的那些与CRS或NT无关。
Figure BDA0003183097650003341
K.峰值血液分析物、反应和毒性
比较具有1-4级细胞因子释放综合征(CRS)或神经毒性(NT)的受试者与没有观察到任何CRS或NT的受试者的血液分析物的峰值治疗后血浆水平，所述血液分析物包括细胞因子和炎性标记，如CRP、血清淀粉样蛋白A1(SAA-1)、IL-2、IL-6、IL-10、IL-15、TNF-α、MIP-1α、MIP-1β、MCP-1、CXCL10和C-C基序趋化因子配体13(CCL13)。如图20A(CRS；CRS 0级，n＝51；CRS 1-4级，n＝28)和图20B(NT；NT 0级，n＝63；NT 1-4级，n＝16)中所示，观察到较高峰值血浆细胞因子水平和炎性标记水平与CRS和NT相关(除了IL-15(分别为P＝0.05和0.006)，无CRS相比于任何CRS以及无NT相比于任何NT的Wilcoxon P值<0.001)。
与具有疾病稳定(SD)或疾病进展(PD)的受试者(N＝17)的水平相比，对于具有完全反应(CR)或部分反应(PR)的最佳总体反应(BOR)的受试者(N＝57)；或与在3个月时展现CR/PR的受试者(N＝35)相比，对于具有3个月SD或PD(SD/PD)的受试者(N＝31)，评估血液分析物的峰值血浆水平，所述血液分析物包括细胞因子和炎性标记，如CRP、SAA-1、IL-5、IL-6、IL-7、IL-8、IL-15、淋巴毒素-α(LT-α)、TNF-α、IFN-γ、MIP-1α、MIP-1β、MCP-1、CXCL10和转化生长因子β(TGF-β)。如图21A(最佳总体反应(BOR))和图21B(第3个月的反应)中所示，观察到较低峰值血浆细胞因子水平和炎性标记水平与较佳的BOR和第3个月的反应相关(Wilcoxon P值<0.05，不进行多重数调整)。
在这项研究中，将抗CD19 CAR+细胞组合物的施用施用至具有大风险疾病特征的患有复发性/难治性侵袭性非霍奇金淋巴瘤(NHL)的受试者。观察到反应(包括持久反应)，包括在DL2下的81％ORR、63％CR，且在所有剂量水平下80％的在3个月时处于CR中的患者在6个月时仍处于CR中，在所有剂量水平下治疗的受试者的中值DOR为9.2个月，且在此实施例中的分析时间点尚未达到CR的中值持续时间。结果也与可管理毒性水平以及有利的安全性概况一致，所述毒性水平和安全性概况在一些实施方案中可能与门诊施用一致。观察到严重CRS(1％)和严重神经毒性(12％)的低比率，在前72小时中事件极少。结果与门诊施用的可行性一致。
药代动力学评估显示，CAR+ T细胞的较高扩增通常与增加的CRS和NT的比率相关。与接受DL1的受试者相比，接受DL2的受试者显示较高CAR T暴露，这通常对应于增加的反应持久性而不增加毒性发生率。在一些方面，观察到治疗前(如LDC前)患者因素(包括稳态和炎性细胞因子和肿瘤负荷)与极高扩增和毒性相关和/或驱动极高扩增和毒性。显示所施用的CAR+ T细胞在所有患者的血液和骨髓中扩增，且在受试者之间和在疾病类型之间存在变化性。所施用的CAR+ T细胞还展现长期持久性，有75％(9/12)的可评价患者在12个月时具有可检测的CAR T细胞。观察到在复发时CAR T细胞和B细胞发育不良仍然存在(分别是11/12和12/12的患者)，从而支持肿瘤可以逃避CAR T细胞的作用，并且组合策略可以有效预防复发，或者扩大、加强或增强耗竭的CAR T细胞。通常，在较高扩增下观察到较高反应的趋势，且在受试者之间存在变化性，从而支持其他患者因素和/或疾病特征(例如，肿瘤负荷)可以有助于确定反应。
实施例4用于施用的治疗性T细胞组合物的属性以及用于生成组合物的过程
使用流式细胞术和体外测定，针对超过一百种表型、功能和细胞健康相关属性，评估上述实施例1和2中用于施用的、含有表达对CD19具有特异性的嵌合抗原受体(CAR)的自体T细胞的示例性治疗性T细胞组合物。检查针对临床研究中招募的受试者生成的治疗性细胞组合物，所述临床研究评价用于治疗复发性/难治性B细胞非霍奇金淋巴瘤的抗CD19CAR-T细胞疗法(N＝63；核心群组)。针对各种属性，在工程化之前和之后评估细胞。所评估的示例性属性示于表E14中。使用流式细胞术检查CAR T细胞的记忆和细胞健康表型。使用体外抗原特异性生物测定来评估T细胞功能性。对已经经历代表性次数的冻融循环的治疗性T细胞组合物进行表征和释放测试。
Figure BDA0003183097650003361
对于生成用于施用的细胞组合物，通过白细胞单采术从受试者分离自体细胞。使白细胞单采术样品经历用于生成CAR表达细胞的过程。所述过程涉及使用自动化洗涤来洗涤细胞以及用于纯化CD4+和CD8+ T细胞的基于免疫亲和力的选择，从而得到分别富集CD8+(其中中值为99％(四分位距(IQR)为98-100％)的细胞是CD8+)和CD4+(其中中值为99％(IQR为99-100％)的细胞是CD4+)细胞的两种组合物。
使富集的CD4+和CD8+组合物的细胞单独经历用编码具有41BB共刺激结构域的抗CD19 CAR的载体进行的慢病毒转导。然后在刺激试剂的存在下单独孵育转导的群体用于细胞扩增。将扩增的CD8+和CD4+细胞单独配制并冷冻保存，并且在施用前储存。为了最小化在源自不同患者的批次和/或细胞组合物(如具有不同患者属性的那些)之间的指示细胞健康的参数中的变异，在批次之间保持细胞的体积不变。细胞产物展现活细胞浓度的窄范围(基于对一组受试者的细胞组合物的评估，CD8+：中值为31x106个细胞/mL，IQR为28-40x106个细胞/mL，N＝38；CD4+：中值为35x106个细胞/mL，IQR为31-40x106，N＝36)。
如图26中所示且如表E15中所汇总，自动化T细胞纯化得到纯的CD8+和CD4+ T细胞群。这种策略降低转导非T细胞的概率并独立于扩增持续时间而在治疗性细胞组合物中得到高T细胞纯度。
Figure BDA0003183097650003371
在施用地点，将细胞组合物解冻并根据对应于适当剂量中CD8+CAR+和CD4+CAR+细胞数量的每种组合物的目标体积单独施用(如对于DL1，含有5x107个总CAR表达T细胞(表达CAR的CD4+细胞和表达CAR的CD8+细胞各自为2.5x107个)，或对于DL2，含有1x108个总CAR表达T细胞(表达CAR的CD4+细胞和表达CAR的CD8+细胞各自为5x107个))。
在临床试验期间，存在从高体积配制到低体积配制的过程变化。变化后的治疗性细胞组合物以恒定的低体积配制，并严格控制活细胞浓度的范围。在一些情况下，使用低体积配制代替高体积配制。评估指示用于施用的组合物中的CAR表达T细胞的健康的参数，如通过在以高体积和低体积配制的细胞组合物中测量解冻后的活力、细胞表面膜联蛋白V表达和活性细胞内半胱天冬酶3的水平。
从高体积配制到低体积配制的过程变化导致过程的稳健性增加和细胞健康属性的变化性降低。来自单独细胞组合物的CD4+和CD8+ T细胞之间的活细胞的浓度、百分比和活性半胱天冬酶3阴性细胞的百分比的值显示于图27A-图27C中并且汇总于表E16中。膜联蛋白V表达细胞的中值百分比为11％(IQR为9％-18％；N＝33)的CD8+CAR+ T细胞和10％(IQR为8％-17％；N＝31)的CD4+CAR+ T细胞。观察到半胱天冬酶3表达与膜联蛋白V表达相似。向低体积配制的转变导致过程的稳健性增加和细胞健康属性的变异减少。
Figure BDA0003183097650003381
精确控制用于施用的组合物中CAR+CD4+和CAR+CD8+ T细胞的量。观察到实际施用至示例性受试者组的细胞数量在给定剂量中细胞的目标数量的8％内或更少：
·2.4-2.7x107(目标±8％)个CD4+CAR+ T细胞和2.4-2.7x107(目标±8％)个CD8+CAR+ T细胞，用于以DL1施用细胞的受试者(n＝48)
·4.6-5.1x107(目标±8％)个CD4+CAR+ T细胞或4.6-5.1x107(目标±8％)个CD8+CAR+ T细胞，用于以DL2施用细胞的受试者(n＝20)。
发现所施用剂量的范围在不同示例性受试者组中具有低变化性：
·在DL1下48-52×106个CD3+CAR+ T细胞(n＝34)
·在DL2下96-101×106个CD3+CAR+ T细胞(n＝29)
·在DL1下24-27x106个CD4+CAR+或CD8+CAR+ T细胞(n＝34)
·在DL2下46-51x106个CD4+CAR+或CD8+CAR+ T细胞(n＝29)。
如图28A中所示，观察到施用至受试者的CAR表达T细胞组合物展现高T细胞纯度和批次之间的低变异。鉴于例如过程和产物控制，观察到含有CAR T细胞的治疗性细胞组合物的细胞特异性T细胞功能具有低批次间变化性。
体外抗原特异性细胞因子积累和细胞内细胞因子染色(ICS)显示，对于多种细胞因子(IL-2、TNF-α和IFN-γ)的细胞因子产生，批次之间具有相似的低变异。在示例性ICS实验中，将来自组合物的细胞用CD19刺激，针对细胞因子(包括TNF-α)和表面蛋白(包括作为记忆表型标记的7型C-C趋化因子受体(CCR7))染色，并通过流式细胞术进行分析。确定了在用于施用的组合物中呈细胞因子或表面蛋白阳性的细胞的数量。图28B显示用于以DL1和DL2施用的CAR T细胞组合物中存在的CD4+CAR+和CD8+CAR+细胞、CD4+CAR+TNF-α+和CD8+CAR+TNF-α+细胞、CD4+CAR+CCR7+和CD8+CAR+CCR7+细胞的数量。这些结果汇总于表E17中。结果显示CD4+CAR+和CD8+CAR+细胞、CD4+CAR+TNF-α+和CD8+CAR+TNF-α+细胞、CD4+CAR+CCR7+和CD8+CAR+CCR7+细胞的数量的低变化性。例如，观察到对TNF-α产生呈阳性的细胞数量的窄范围(n＝61)。
Figure BDA0003183097650003391
指示在用CD19刺激后CAR+细胞的肿瘤坏死因子α(TNFα)产生的参数在不同批次之间显示出窄范围，其中对于CD4+CAR+ T细胞(N＝59)相对标准差(RSD)为37％，且对于CD8+CAR+ T细胞(N＝61)相对标准差(RSD)为51％。
结果与以下观察一致：含有精确且一致剂量的CD4+和CD8+CAR T细胞的组合物、对CD4+和CD8+ T细胞培养条件的控制和优化、细胞因子产生的低变化性、和/或用于施用的组合物的恒定配制和体积，可以导致组合物中一致的细胞健康。在所提供的实施方案中，这种制造和控制过程的各方面有助于此类细胞组合物的属性的低变化性，所述细胞组合物使用来自多个不同受试者的细胞进行工程化，并且是针对施用至所述多个不同受试者而生成。在一些方面，此类方面包括在受试者之间使用精确、一致的平剂量的所施用的CD4+和CD8+细胞；控制和优化CD4+和CD8+ T细胞培养条件，如在不同受试者之间导致表型(例如，CCR7)和体外功能(例如，在抗原刺激后的IL-2、TNF-α和IFN-γ产生)的低药物产品批次间变化性的那些；以及使用药物产品的恒定配制和体积，这可以导致或促成通过所述方法生成的治疗性细胞组合物之间在指示细胞健康的属性方面的一致性。
实施例5针对抗CD19 CAR表达细胞的施用，来自患有复发性和难治性非霍奇金淋 巴瘤(NHL)的受试者的施用前后肿瘤活检中的生物标记评估
在施用CAR表达细胞之前和/或之后从受试者收集的肿瘤活检中评估几种生物标记的表达。
A.肿瘤活检样品
肿瘤活检是基于实施例1.A.2中的评估时间点从患有复发性或难治性(R/R)弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)或套细胞淋巴瘤(MCL)的所选受试者收集，所述受试者接受上文实施例1和2中所述的使用含有表达对CD19具有特异性的嵌合抗原受体(CAR)的自体T细胞的治疗性CAR+ T细胞组合物的治疗。肿瘤活检是在施用CAR+ T细胞之前(治疗前)和在施用之后7至20天(治疗后)获得。这个实施例中描述在进行中的研究中经实施例1.A.2中的时间点进行评价的结果。检查来自总计28名受试者(25名DLBCL和3名MCL)的43个活检(26个治疗前；17个治疗后和15个匹配对)的结果。
B.对生物标记、反应和安全性结果的评估
使用对编码抗CD19 CAR的mRNA具有特异性的原位杂交(ISH)探针对肿瘤活检中CAR+ T细胞的浸润进行定量。使用检测CAR表达细胞的细胞表面替代标记(CD4、CD8、CD19、CD20、CD73、FOXP3、CD163、IDO和PD-L1)的多重免疫荧光(IF)测定来计数CAR+ T细胞、非CART细胞和B细胞。将肿瘤活检切片用苏木精和伊红(H&E)染色，并评估组织质量和肿瘤鉴定。使用图像分析软件分析免疫荧光图像。使用基于单变量t检验的统计分析来评估与反应结果的潜在相关性，并且p值是双侧的，不进行多重数调整。
评估受试者的反应和安全性结果，包括通过在施用CAR+ T细胞后的不同时间点(包括施用后3个月)评估肿瘤负荷，并确定受试者是否具有疾病进展(PD)、疾病稳定(SD)、部分反应(PR)或完全反应(CR)。所评价的安全性结果包括神经毒性(神经系统并发症，包括以下症状：意识错乱、失语、脑病、肌阵挛发作、惊厥、嗜睡和/或精神状态改变)，根据美国国家癌症研究所—常见毒性标准(CTCAE)量表4.03版(NCI-CTCAE v4.03)，按1-5量表分级。
C.结果
在被评估活检的受试者中观察到的客观反应率(ORR；包括CR和PR)为71％(20/28)。在被评估活检的受试者的36％(10/28；1级、2级)中观察到1级、2级CRS，并且在被评估活检的受试者的18％(5/28)中观察到2-4级NT。
观察到治疗前肿瘤活检含有变化的细胞组成：肿瘤细胞(中值：77％；范围5-96％)、CD4+细胞(0.90％；0.02-15％)，和CD8+细胞(1.5％；0-23％)。结果显示，与具有PD的那些受试者相比，在CAR+ T细胞施用后3个月时具有CR或PR的受试者在治疗前肿瘤中具有较高内源CD4+细胞百分比(CR、PR中值：7.9％；PD中值：0.38％；p<0.0001)。治疗前肿瘤中CD8+细胞的百分比在3个月反应组之间没有差异(CR、PR中值：1.9％；PD中值：0.47％；p＝0.6496)。
在治疗后活检中，观察到CAR+ T细胞已经浸润肿瘤，并且构成活检样品中多达22％的细胞。观察到与继续实现SD或PD的最佳总体反应(BOR)的受试者(中值：0.51％)相比，在继续实现CR(中值：3.9％)或PR(中值：1.1％)的受试者中，治疗后样品(施用后7至20天)中的肿瘤浸润水平更高。虽然观察到CD4+和CD8+CAR T细胞二者在治疗后时间点(施用后7至20天)已浸润肿瘤区域，但观察到如与继续实现SD或PD的BOR的受试者相比，在此治疗后时间点继续实现CR的受试者具有较高的CD8+CAR+ T细胞与CD4+CAR+ T细胞的比率(CR中值：0.83；SD、PD中值：0.14；p＝0.0097)。
比较来自单独受试者的匹配的治疗前和治疗后活检，结果显示如下趋势：如与最终实现SD或PD的BOR(CR，PR中值变化：+5.3％；SD，PD中值变化：+0.06％；p＝0.1225)的受试者相比，最终实现CR或PR的BOR的受试者的肿瘤中的CD8+细胞(CAR+T和非CAR T)具有更大的治疗后增加。
免疫抑制因子(包括CD73、FOXP3、CD163、IDO和PD-L1)的表达在治疗前(CD73(中值：1.5％；范围0-42％)、FOXP3(0.10％；0-1.5％)、IDO(0.06％；0-11％)、CD163(1.2％；0-24％)和PD-L1(0.16％；0-56％))和治疗后(CD73(1.6％；0-53％)、FOXP3(0.09％；0-4.3％)、IDO(0.28％；0-15％)、CD163(3.6％；0-22％)和PD-L1(3.3％；0-65％))在受试者之间变化。观察到匹配的活检中CD8+细胞的治疗后增加与IDO(R2＝0.64)和PD-L1(R2＝0.61)表达的治疗后增加相关。这个结果与以下结论一致：在评估时间时CD8+CAR+细胞的浸润可以指示实现一定程度的反应或反应持续时间的潜在可能性，并且此类细胞的存在和/或活性可以导致TME因子的上调。
D.结论
观察到在CAR+ T细胞施用后第3个月的持久反应与治疗前肿瘤中的较高CD4+细胞水平相关。在治疗后肿瘤细胞中，观察到CAR+ T细胞(CD4+和CD8+二者)浸润肿瘤和相邻组织。ORR与肿瘤活检中的CAR+ T细胞增加相关。与治疗前肿瘤活检中的CD8+水平相比，治疗后肿瘤活检中CD8+水平的增加与增加的IDO和PD-L1表达相关。在一些实施方案中，靶向这些途径的疗法(如在施用CAR-T细胞时或在施用CAR-T细胞后施用的那些)可以在CAR+ T细胞施用后增强一种或多种治疗结果或其持续时间。
实施例6在施用抗CD19CAR表达细胞后，在患有复发性和难治性非霍奇金淋巴瘤 (NHL)的受试者中对反应和安全性结果的进一步评估
在上文实施例1和3中描述的临床研究中的后续时间点在患者中评估反应和安全性结果。
A.受试者和治疗
这个实施例中呈现的在此时间点进行的分析是基于对已经施用抗CD19 CAR表达细胞的完整群组中总计102名受试者(73名在核心群组中)的评估。完整群组包括如下受试者：在2个治疗线后患有DLBCL(DLBCL(NOS)，从头和从滤泡性淋巴瘤转化的)；高级别B细胞淋巴瘤(双/三打击)；从CLL或MZL转化的DLBCL；PMBCL；和FL3B，ECOG 0-2；用于分析的核心群组包括如下受试者：患有DLBCL(NOS和从滤泡性淋巴瘤转化(tFL))或高级别B细胞淋巴瘤(双/三打击)且东部肿瘤协作组体能状态(ECOG PS)为0或1。研究中还包括在1个治疗线后患有MCL的受试者。完整和核心群组中大约90％的所治疗患者具有预测3-6个月的短中值总体存活期(OS)的至少一种大风险疾病特征(参见Crump等人,Blood(2017)130:1800-1808；和Van de Neste等人,Bone Marrow Transplant.(2016)51(1):51-7)，如双/三打击表达子、原发性难治性疾病、对2个或更多个治疗线的难治性、从未实现过CR、从未接受过自体干细胞移植(ASCT)或ECOG PS为2。
在此时间点，总计134名受试者已进行白细胞单采术，其中2名受试者的组合物无法利用。对于DLBCL群组中99％的进行单采术的受试者(132/134)，产物是可利用的。在另外18名产物可利用的受试者中，5名已经退出，并且13名已经发生疾病进展或已经死亡。已经向总计114名受试者施用抗CD19 CAR表达细胞，其中12名接受非合规抗CD19 CAR表达细胞(组合物不一定符合某些规范，但被认为可安全施用)。受试者已经接受DL1(n＝45)、DL1(n＝6)或DL2(n＝51)的双剂量。已经向患有套细胞淋巴瘤(MCL)七(7)名受试者以DL1施用CAR+细胞。在此时间点，在门诊环境中治疗八(8)名受试者。
完整和核心群组受试者在所述时间点的人口统计学和基线特征示于表E18中。
Figure BDA0003183097650003431
Figure BDA0003183097650003441
HSCT，造血干细胞移植。IPI，国际预后指数；SD，疾病稳定；WHO，世界卫生组织。
a在试验开始时，包括在DLBCL NOS型组织学中；基于最新的WHO标准(Swerdlow等人,(2016)Blood 127(20):2375-2390)，现在被视为高级别B细胞淋巴瘤，其具有myc和bcl2和/或bcl6重排与DLBCL组织学(双/三打击)。
b到最后一次含化疗方案的SD或PD或在自体SCT后<12个月复发。
B.治疗后的安全性和反应结果
表E19显示完整和核心群组的安全性结果。如图所示，没有观察到因CRS或NT所致的死亡。在完整群组中，到CRS发作的中值时间为5天(范围，2-12天)，并且到NT发作的中值时间为10天(范围，3-23天)。在完整群组中，17％(n＝17)接受托珠单抗，并且21％(n＝21)接受皮质类固醇，作为毒性干预。在核心群组中，与DL1相比，在DL2下没有观察到CRS或NT增加。
Figure BDA0003183097650003442
Figure BDA0003183097650003451
a三名按DL1D(剂量水平1，双剂量时间表)治疗的患者具有类似结果。
图29描绘在此时间点完整群组(n＝102)中被观察到已经经历实验室异常和治疗中出现的不良事件(TEAE)的受试者的百分比(不包括用合规产品以DL1治疗且具有至少28天随访期的6名患有MCL的受试者的数据；显示在20％或更多受试者中发生的TEAE和实验室异常)。
如表E20中所示，在患有复发性或难治性(R/R)DLBCL的受试者中观察到高反应率。结果与核心群组中对治疗结果的剂量反应作用一致。肿瘤负荷高于阈值(如大于50cm2的尺寸乘积之和(SPD)的体积肿瘤测量值所指示)的受试者在接受DL1和DL2的受试者之间类似地分布(每组中受试者的约1/3)。
Figure BDA0003183097650003452
a三名按DL1D(剂量水平1，双剂量时间表)治疗的患者具有类似结果。
包括核心群组中以所有剂量水平治疗的所有DLBCL患者的大风险DLBCL亚组中不同受试者亚组之间的六个月客观反应率(ORR)显示于图30中。结果显示大风险DLBCL亚组对抗CD19 CAR+ T细胞施用的高持久ORR。
完整群组和核心群组受试者的反应持续时间(DOR，中值随访期为8个月)和总体存活(依据最佳总体反应分组(无反应者、CR/PR、CR和/或PR)，中值随访期为12个月)的结果显示于图31A-图31D中。结果显示，在核心群组中，88％的在3个月时具有CR的受试者在6个月时继续显示CR，并且93％的在6个月时展现CR的受试者继续显示更长期的反应。
结果与以下观察一致：施用含有精确一致剂量的CD4+和CD8+CAR+ T细胞的抗CD19CAR+细胞组合物在患有R/R侵袭性NHL且具有不良预后和/或深度预治疗的受试者中引起持久反应。结果在核心群组中显示有利的持久反应率，在6个月时具有49％ORR和46％CR率，且93％的在6个月时处于CR中的受试者(在所有剂量水平下)在此时间点仍处于反应中。结果也与可管理毒性和有利的安全性概况一致，包括低严重CRS(1％)和严重神经毒性(13％)比率，这在一些方面支持门诊施用。
实施例7在施用抗CD19 CAR表达细胞后对患有复发性和难治性非霍奇金淋巴瘤 (NHL)的受试者的资源利用和治疗前参数和扩增的评估
在已经接受抗CD19 CAR表达T细胞治疗组合物的患有复发性/难治性NHL的受试者中，在上文实施例中所述临床研究中所述的患者中评估各种医疗资源的利用和各种治疗前参数(如血液分析物和疾病负荷)和细胞扩增。
实施例7.I.A.受试者和治疗
在实施例1、3和6中所述临床研究中的特定时间点进行第一分析。此实施例中呈现的此时间点的分析是基于对完整群组中总计114名受试者的评估。在此时间点，96名受试者已经在住院环境中进行治疗，并且18名受试者已经在门诊环境中进行治疗。
在所述时间点于住院和门诊环境中治疗的受试者的人口统计学和基线特征示于表E21中。
Figure BDA0003183097650003471
实施例7.I.B.安全性结果
表E22显示已经通过在住院或门诊环境中施用来治疗的受试者的特定安全性相关结果(CRS和神经病学事件的发生率)。在CRS或神经病学事件期间入住ICU发生在接受住院治疗的9名受试者(9.4％)中和接受门诊治疗的1名患者(5.6％)中。
Figure BDA0003183097650003481
实施例7.I.C.对生物标记、扩增和资源利用的评估
在施用CAR表达细胞之前(治疗前)，在从受试者收集的肿瘤活检中评估生物标记LDH、CRP和铁蛋白的表达，并且通过尺寸乘积之和(SPD)的体积肿瘤测量值评估受试者的肿瘤负荷。还在施用后在受试者中确定最大血清浓度(Cmax；CD3+CAR+细胞/μL血液)。将受试者依据等于或低于或高于阈值的SPD、LDH、CRP和Cmax或者依据住院或门诊治疗进行分组，并且评估与指示以下各项的各种参数的相关性：医疗资源利用(住院天数、在重症监护室(ICU)中的天数)、托珠单抗使用(用于毒性干预的药剂，(％))和血管加压药、插管或透析使用(用于毒性干预的治疗(％))。
图32A-图32F显示在依据以下各项分组的受试者中各种医疗资源参数的使用：等于或低于500个细胞/μL或高于500个细胞/μL的CAR+细胞/μL的Cmax(图32A)；等于或低于50cm2或高于50cm2的SPD(图32B)；等于或低于500单位/L或高于500单位/L的LDH(图32C)；等于或低于10mg/L的CRP和等于或低于5000ng/mL的铁蛋白或者高于10mg/L的CRP和高于5000ng/mL的铁蛋白(图32D)，以及住院环境或门诊环境(图32E-图32F)。
所述结果与具有较低的治疗前肿瘤负荷、某些血液分析物(如LDH、CRP和/或铁蛋白)的表达和/或较低的治疗后峰值CAR+ T细胞数量的受试者中降低的医疗资源利用(例如，降低的毒性治疗或干预的使用)一致。如与在住院环境中治疗的那些受试者相比，在门诊环境中治疗的受试者中，住院时间减少42％。通常，毒性干预(例如，托珠单抗、插管、血管加压药和透析)的使用在住院和门诊治疗组二者中都较低，且观察到血管加压药的使用在门诊治疗组中更高。结果与门诊施用的可行性一致。
实施例7.II.
在上文实施例7.I中所述的相同临床研究中，在已经如实施例6中所述接受合规剂量的抗CD19 CAR表达CD4/CD8细胞组合物的102名受试者的子集中评估发生率、医疗资源利用(HRU)以及细胞因子释放综合征(CRS)和神经病学事件(NE)的成本。捕获关于患者特征、AE发生率、实验室报告、设施使用和处方信息的信息。使用如图40中所述的方法鉴定每名受试者在CRS和NE的发作和消退的日期内的医疗资源利用(HRU)。鉴定每名受试者的HRU。交叉检查试验管理指南以确定HRU是CRS相关的和/或NE相关的。使用关于国家平均成本的公众数据库和文献应用与CRS或NE的等级相关的成本(表E22.1)。
通过CRS和/或NE谱来评估基线受试者人口统计学和临床特征。如实施例1中所述来评价不良事件(AE)发生率，包括分别依据Lee等人(2014)和CTCAE 4.03版的标准按照CRS和NE的等级来评价。确定仅CRS、仅一种或多种NE、非并发的CRS和一种或多种NE(即开始日期与结束日期之间不重叠)以及并发的CRS和一种或多种NE的发生率。
确定HRU并估计与CRS和NE相关的成本，包括基于诊断、用药(例如托珠单抗和皮质类固醇利用)以及设施利用(例如按照CRS和/或NE的等级的中值住院时间(LOS)，和重症监护室(ICU)利用)。估计按照CRS和/或NE的等级的中值总成本，并根据CRS和/或NE谱加以分析。
Figure BDA0003183097650003491
Figure BDA0003183097650003501
按照AE谱的患者特征显示于表E22.2中。在所评估的102名受试者中，44名经历CRS和/或一种或多种NE，21名受试者(21％)具有仅CRS(无G≥3)，6名受试者(6％)具有仅NE(无G≥4)，6名受试者(6％)具有非并发CRS和NE，并且11名受试者(11％)具有并发CRS和NE(包括1个G4 CRS)。在38/102(37％)名经历CRS的受试者中，1名具有3/4级CRS。在23/102名经历NE的受试者(23％)中，10名(10％)是1/2级且13名(13％)是3/4级。在44名受试者的子集中，每个不良事件谱中的大多数患有DLBCL非特指型。在这44名受试者中，70％具有G≤2事件(44名受试者中的31名)。在具有CRS和NE二者的受试者中，94％首先具有CRS(17名受试者中的16名)。在具有非并发事件的受试者中，NE在CRS消退后2天的中值发生。在具有并发事件且CRS先于NE的11名受试者中的10名(91％)中，NE在CRS发作后3.5天的中值发生。
Figure BDA0003183097650003502
Figure BDA0003183097650003511
表E22.3按毒性等级显示HRU。在38名具有CRS的受试者中，11名(29％)接受托珠单抗(11/102，在此时间点评估的受试者的11％)，并且在具有CRS和/或NE的44名中，21名(48％)接受皮质类固醇(例如地塞米松)(21/102，在此时间点评估的受试者的21％)。如表E22.3中所示，随着AE的等级增加，皮质类固醇的利用率在所有CRS和/或AE谱中增加。
Figure BDA0003183097650003512
Figure BDA0003183097650003521
表E23汇总所治疗受试者中每种毒性发生率的HCRU和中值成本。G≤2与G≥3CRS和/或NE的总体中值成本为$16,533与$70,666。如表E23中所示，CRS和/或NE的中值总管理成本主要受住院驱动，并且对于G≤2仅CRS或NE在$177-24,945范围内，对于G≤2并发CRS和NE为$31,018，并且对于G≥3CRS和/或NE在$45,384-263,743范围内
Figure BDA0003183097650003522
如图41中所示，对于CRS和NE组，随着AE的严重程度增加，总LOS增加且ICU利用率增加。对于具有并发CRS和NE的受试者，在1个或更多个≥3级AE的情况下，所有类别的健康资源利用增加。
所述分析是基于临床研究中的时间点，其中在用一定剂量的CAR表达T细胞治疗的受试者中，70％的CRS和/或NE被分级为≤2级。医院和ICU LOS与CRS和/或NE管理成本相关。用药(包括托珠单抗)成本并非成本的主要组分，而设施成本、主要住院和ICU停留构成总管理成本的平均92.6％。在这项研究的受试者中以及在这个时间点估计的AE管理成本显著变化，对于这组受试者，范围为$177至$263,743。≥3级的事件导致总体中值成本相比于G≤2事件增加327％($70,666与$16,533)。53.8％的具有≥3级的事件的受试者(7/13)入住ICU用于AE管理，与之相比，9.7％的具有≤2级的事件的受试者(3/31)入住ICU。
这些结果与如下观察一致：与降低的AE发生率和较低CRS和NE等级相关的CAR T细胞疗法可以限制HRU和成本。
实施例8在施用抗CD19 CAR表达细胞后对患有复发性和难治性非霍奇金淋巴瘤 (NHL)的患者的健康状况的评估
在基本上如实施例1、3和6中所述的临床研究中，将含有表达对CD19具有特异性的嵌合抗原受体(CAR)的自体CD4+和CD8+ T细胞的治疗性CAR+ T细胞组合物施用至2个先前治疗线已经失败的患有复发性和难治性非霍奇金淋巴瘤的受试者。
A.健康相关的生活质量(HRQL)和症状(Sx)影响
在治疗后评估受试者的症状影响、功能量表和总体健康状况。在基线(BL)、第29天(1个月)以及第2个月和第3个月施用欧洲研究与治疗组织核心生活质量问卷3.0版(EORTCQLQ-C30)，以评估症状影响、功能量表和总体健康状况，其中分数范围为0-100，且较高得分表明改进的HRQL或较低的症状负荷。功能和生活质量(QL)得分从BL≥10的增加或Sx得分从BL≥10分的减小被视为临床上有意义的改进。在临床研究中的特定时间点，127名受试者中的87名已经在基线以及在一个或多个其他时间进行评价(BL+≥1次BL后评估)。可评价受试者的平均年龄范围是62岁(标准差是11岁)。
如表E24中所示，症状得分通常在输注后改进。从输注后第1个月-第3个月，平均总体健康状况以及情绪和认知功能得分相比于BL改进。身体、角色和社会功能得分在第1个月相比于BL下降，之后在第2个月-第3个月相比于BL改进。在输注后3个月于特定领域实现临床上有意义的改进的受试者比例为：疲劳，50％；疼痛，51％；身体机能，22％；以及总体健康状况，41％。
这些结果显示，在此受试者子集中，在输注后2-3个月，症状和HQRL在存活受试者中改进，且在预先指定的领域中具有临床上有意义的改进。
Figure BDA0003183097650003541
B.在治疗后偏好加权的健康状况
在基线、第29天(第1个月)和第2个月、第3个月、第6个月以及之后每3个月，在所治疗的受试者中分析健康效用指标得分和视觉模拟量表[VAS](EQ-5D-5L)，其测量患者的幸福感和自感健康状况。使用广泛采用的美国偏好权重来计算EQ-5D-5L指标得分。在临床研究中的特定时间点，90名受试者已经在基线以及在一个或多个其他时间进行评价(BL+≥1次BL后评估)。平均年龄范围是61.7岁(标准差(SD)为11.2岁)。
如表E25中所示，患者已经进行深度预治疗并且90％具有≥1种预测短总体存活期的大风险疾病特征。
Figure BDA0003183097650003542
Figure BDA0003183097650003551
EQ-5D健康状况评价由5个健康维度构成，包括运动性、自理、日常活动、疼痛/不适和焦虑/抑郁，并且作为单一总和指标使用-0.109至1量表上的美国数值集进行评分。得分为0指示健康，1指示“完全健康”，并且负分反映感知到的非常糟糕的状态。EQ-5D-5L单一总和指标得分从基线的变化≥0.07被指定为先验，作为临床上有意义的变化的指示物(参见例如，Pickard AS,等人Health Qual Life Outcomes.2007；5:70)。
对于EQ-VAS评价，请受试者在评估当天通过在编号0-100的量表上打X评估其健康，其中零表示可想象最差的健康，并且得分为100表示可想象最好的健康(即，较高得分指示改进的健康)。对观察到的得分的分析包括所观察得分的描述性统计(例如n、平均值、标准差、最小值、百分位数和最大值)以及在每个时间点相对于基线的变化，并且通过2侧威氏符号秩次检验(2-sided Wilcoxon signed rank test)进行评价以评估从基线的变化。
至第6个月评价患者报告的结果(PRO)，且坚持服药率>57％(表E26)。
Figure BDA0003183097650003561
如图33中所示，平均偏好加权的健康状况得分为0.83(在基线，SD为0.104)，其在输注后第1个月降低(-0.012[SD 0.144])，并且在输注后第2个月(0.010[SD 0.149])至第6个月(0.019[SD 0.133])从基线增加。在基线的平均基线EQ-5D健康状态效用得分低于美国的群体标准(平均EQ-5D指标得分＝0.867，参见例如Janssen B,等人第3章.Populationnorms for the EQ-5D.2013年9月26日.在Szende A,等人编辑的Self-ReportedPopulation Health:An International Perspective based on EQ-5D[Internet]中.多德雷赫特,荷兰:Springer；2014.)。相对于基线的平均变化显示在第1个月降低，之后在输注后第2个月-第6个月从基线增加(图34)。在第6个月，30％的患者经历≥0.07的改进，这被认为表示临床上有意义的改进(图35)。
在EQ-5D-5L的运动性、自理和日常活动维度中报告中度、严重或极端困难的患者的百分比在输注后第1个月增加(图36A-图36C)，并且报告无疼痛/不适且无焦虑/抑郁的患者的百分比从基线至输注后6个月增加(图36D-图36E)。
如图37中所示，平均总体健康评定得分(EQ-VAS)从基线时的70.2单调性增加至输注后6个月时的83.4，超过最小重要差异的基于锚和分布的估计值(分别是8-12和7-10)。平均基线EQ-VAS评定低于美国的群体标准(平均EQ-VAS＝80)(参见例如，Jansen B,等人)。EQ-VAS得分相对于基线的平均变化显示总体健康状况从输注后第1个月-第6个月的改进(图38)。
这些结果显示，在此受试者子集中，平均偏好加权的健康状况在输注后1个月降低，但是在第2个月-第6个月期间增加，在输注后6个月在30％的患者中具有超过>0.07阈值的临床上有意义的改进。总体健康评定得分从基线至输注后第6个月增加。
C.在12个月的治疗后，健康相关的生活质量(HQRL)和偏好加权的健康状况
在上文实施例8.A和8.B中所述相同的研究中，在随后的时间点，在受试者中评估生活质量、症状和健康效用影响。在临床研究中的这个时间点，在基线(BL；在CAR+ T细胞输注前)、CAR+ T细胞输注后第29天(第1个月)以及第2个月、第3个月、第6个月、第9个月、第12个月、第18个月和第24个月，在受试者中评估参数。量表得分从BL≥10分的变化(功能/健康状态的增加症状的降低)被视为临床上有意义的(即，患者会鉴定为重要的变化)。基于从BL至6和12个月的变化得分来计算在EORTC QLQ-C30的预先指定的领域中具有临床上有意义的变化(即，10分改进或恶化)的受试者的比例。另外，对于来自EQ-5D-5L的健康状态指标得分(EQ-5D)和EQ-VAS，计算从BL的平均变化。
在评估时，268名受试者中的181名(平均年龄，60岁)对于EORTC QLQ-C30问卷是可评价的，并且186名受试者(平均年龄，60岁)对于EQ-5D-5L问卷是可评价的。在某个时间点的人口统计学和基线特征显示于表E26.1中，在所述时间点，EORTC QLQ-C30和EQ-5D-5L可评价群体的中值研究中随访时间分别为8.7个月和8.8个月。患者报告结果的调查的参与率对于进行至少6个月随访的受试者是最小63％；75％的进行至少12个月随访的受试者完成所述调查。
Figure BDA0003183097650003571
Figure BDA0003183097650003581
在此时间点的结果汇总于表E26.2中。对于EORTC QLQ-C30中预先指定的目的领域，总体健康状况的平均得分显示与BL相比第1至12个月的改进，而身体功能在第1个月下降，之后与BL相比在第2至12个月改进。报告的疲劳症状负荷在第1个月保持类似，之后与BL相比在输注后第2至12个月改进。尽管与BL相比平均疼痛症状从第1至12个月始终较低，但平均症状负荷有变动。至第12个月从BL得分的平均变化的范围，对于总体健康状况在4.3至16.9之间，对于身体功能在-4.8至6.5之间，对于疲劳在-15.5至0.0之间，并且对于疼痛得分在-8.8至-1.8之间。与来自美国一般群体的结果相比，基于EORTC QLQ-C30参考值，研究中的受试者在BL时对于大多数领域具有可比较的平均EORTC QLQ-C30得分，其至第12个月得以维持或改进。一部分受试者在第6个月和第12个月分别在总体健康状况(52％和61％)、身体功能(30％和37％)、疲劳(53％和61％)和疼痛(35％和47％)方面显示临床上有意义的改进。基于US的平均EQ-5D-5L健康效用指标得分在CAR+ T细胞输注后1个月下降，之后得分在第2个月与第3个月之间变动，然后从第6个月至第12个月与BL相比改进。与BL相比，平均EQ-VAS得分从第1个月至第12个月显示改进。
Figure BDA0003183097650003591
Figure BDA0003183097650003601
对于EORTC QLQ-C30，≥10分的从基线的变化(MID)被视为临床上有意义的差异。总体健康状况在12个月中相对于基线的平均变化是4.3至16.9(图52A)，身体功能是-4.8至6.5(图52B)，疲劳是-15.5至0.0(图53A)并且疼痛是-8.8至-1.8(图53B)。在此研究中的所有时间点，在包括总体健康状况(图54A)、身体功能(图54B；第1个月例外)、疲劳(图54C)和疼痛(图54D)的领域中，与恶化相比，经历临床上有意义的改进的受试者的比例更高。
健康指标得分相对于基线的平均变化在第1个月下降，之后得分在第2个月与第3个月之间变动，并且在第6个月至第12个月改进(图55A)。EQ-VAS相对于基线的平均变化至第1个月及之后增加，在第6个月和第12个月范围分别为9.1至11.9(图55B)。
结果显示，显示用抗CD19 CAR表达T细胞治疗显著改进患者的经历，如通过患者报告的结果所测量。结果显示，在此研究中，DLBCL群组中的受试者至第12个月经历HRQL和健康效用的改进，即使一些受试者在第1个月报告有害。还观察到至CAR+ T细胞输注后第12个月降低的疲劳和疼痛症状负荷。HRQL和症状负荷(EORTC QLQ-C30)早在第1个月且至抗CD19CAR表达T细胞施用后12个月改进。HRQL和症状负荷具有临床上有意义的改进的患者的比例大于具有恶化的患者的比例。另外，具有临床反应的患者比没有临床反应的患者更有可能经历其HRQL的临床上有意义的改进。在施用抗CD19 CAR表达T细胞后，健康状况指标得分(EQ-5D-5L)和自评健康(EQ-VAS)早在第1个月改进，然后从第3个月至第12个月稳定改进。这些结果支持如下发现：显著比例的受试者在CAR+ T细胞输注后第6个月和第12个月显示临床上有意义的改进。
实施例9将抗CD19 CAR表达细胞施用至患有复发性和难治性非霍奇金淋巴瘤 (NHL)和继发性CNS淋巴瘤的受试者
在基本上如实施例1、3和6中所述的临床研究中，将含有表达对CD19具有特异性的嵌合抗原受体(CAR)的自体CD4+和CD8+ T细胞的治疗性CAR+ T细胞组合物施用至2个先前治疗线已经失败的患有复发性和难治性非霍奇金淋巴瘤的受试者。在研究中，用于治疗的合格受试者包括在研究开始时可能存在的患有继发性CNS淋巴瘤的受试者，或者如果在临床研究期间患上继发性CNS淋巴瘤，受试者可能继续接受抗CD19 CAR治疗性T细胞组合物。包括最初用CAR+ T细胞组合物的单一初始输注治疗的受试者和接受复治的那些受试者。如实施例1中所述监测受试者的反应和安全性，分别包括通过根据卢加诺标准评价功效，以及按照Lee等人(2014)和CTCAE 4.03版的标准评价CRS和NE的等级。
在研究中，已经通过单独施用以大约1:1的目标比率施用的配制的CD4+CAR+细胞群和配制的CD8+CAR+群体向受试者施用单一剂量的作为限定组合物的抗CD19 CAR表达细胞(每个单一剂量分别通过单独输注CD4+CAR表达T细胞和CD8+CAR表达T细胞来施用)，如下：剂量水平1(DL-1)的单一剂量含有5x107个总CAR表达T细胞，或者剂量水平2(DL-2)的单一剂量含有1x108个总CAR表达T细胞。在第一剂量后实现完全反应但之后进展的受试者可以接受第二剂量(复治)。
表E27呈现在此研究中分析的患有继发性CNS淋巴瘤的受试者的患者人口统计学，其在此分析时间包括3名DL1的患者和6名DL2的患者。患有继发性淋巴瘤的患者的中值年龄是60岁，并且他们已经接受中值为3的先前疗法。继发性CNS淋巴瘤的发作变化：在所治疗受试者中，在初始治疗时(n＝6)、在复治前(n＝2)或周期前(n＝1)，九(9)名受试者患有继发性CNS淋巴瘤。第十名患者在初始治疗时具有继发性CNS淋巴瘤的诊断，但随后被诊断为孤立性臂丛受累(无CNS受累)且不包括在所述分析中。
Figure BDA0003183097650003611
Figure BDA0003183097650003621
如表E28中所示，患有R/R DLBCL的受试者和患有继发性CNS淋巴瘤的受试者显示高度异质性，包括关于不同组织学和各种类型的CNS受累。不同组织学包括从滤泡性淋巴瘤转化的DLBCL、DLBCL非特指型以及具有MYC和BCL2和/或BCL6重排的高级别B细胞淋巴瘤。观察到各种类型的CNS受累，其包括柔脑膜疾病、局灶性实质病变、多发病灶、硬脑膜受累和神经受累。
Figure BDA0003183097650003622
Figure BDA0003183097650003631
到峰值CAR+ T细胞扩增的中值时间是12.5天(中值为7-112天)。表E29提供患有继发性CNS淋巴瘤的受试者组中的治疗中出现的不良事件的汇总和在此研究中评估的时间点。如表E29中所示，在患有继发性CNS淋巴瘤的受试者中，9名中的1名具有(G)2级细胞因子释放综合征(CRS)和G3 NE；CRS的发作发生在第1天(1级)，且在第2天进展至2级，并且3级NE的发作发生在第6天，其具有下降的意识水平(第6天-第13天)和吞咽困难(第17天-第18天)。另外的低级NE包括意识错乱、震颤、构音困难、嗜睡、激越、强直、内侧凝视、双侧眼震、左侧瞳孔扩大、痉挛状态、发声困难和吞咽困难。
已经经历复治的受试者都没有CRS或NE，然而所有3名复治受试者在初始治疗时都具有低级CRS。一名复治受试者在接受使用抗CD19 CAR+治疗性T细胞组合物的初始治疗时且在继发性CNS淋巴瘤的正规诊断前具有G2颞部水肿的NE。在所评估的患有继发性CNS淋巴瘤的受试者中，受试者接受预防性左乙拉西坦，并且1名受试者接受皮质类固醇和托珠单抗。
Figure BDA0003183097650003641
Figure BDA0003183097650003651
报告的其他毒性主要是血细胞减少症，并且不存在与AE有关的治疗相关死亡(表E30)。
Figure BDA0003183097650003652
使用卢加诺标准评价反应，并将其汇总于表E31和表E32中。四(4)名患有继发性CNS淋巴瘤的受试者对治疗有反应，并且这些受试者都具有完全反应的最佳反应，其中2名在治疗后270天和545天正在进行。所有4个反应都发生在使用治疗性T细胞组合物的初始治疗后。复治的受试者都没有反应。
Figure BDA0003183097650003653
Figure BDA0003183097650003661
Figure BDA0003183097650003662
Figure BDA0003183097650003671
这些结果与如下发现一致：所施用的抗CD19 CAR+ T细胞组合物能够被安全递送至患有继发性CNS淋巴瘤的受试者，所述受试者是由于治疗选择有限和不良预后而具有未满足的高医疗需求的群体。所施用的抗CD19 CAR+ T细胞在此受试者群体中显示可管理的毒性和临床活性。在此群体中未观察到过多NE，且仅1名受试者显示严重NE(3级)和CRS(2级)。对抗CD19 CAR表达T细胞的反应或抗性在所有受试者的全身性和CNS淋巴瘤的位点中是类似的。另外，在初始治疗时患有继发性CNS淋巴瘤的6名受试者中的4名有反应，其中2名分别在CAR-T细胞施用的第270天和第545天的最后一次分析时具有进行中的反应。
实施例10在高风险、有资格移植的患有复发性和难治性非霍奇金淋巴瘤(NHL)的 受试者中对抗CD19 CAR表达细胞与护理标准(SOC)疗法的比较
将上文实施例1、3和6中所述研究中采用的含有表达对CD19具有特异性的嵌合抗原受体(CAR)的自体CD4+和CD8+ T细胞的治疗性CAR+T细胞组合物施用至2个先前治疗线已经失败的患有复发性和难治性非霍奇金淋巴瘤的受试者。用于治疗的合格受试者包括患有侵袭性B细胞非霍奇金淋巴瘤(NHL)(弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)非特指型[从头或转化的惰性NHL]、双/三打击淋巴瘤、原发性纵隔大B细胞淋巴瘤、富含T细胞/组织细胞的大B细胞淋巴瘤或者3B级滤泡性淋巴瘤)的受试者，并且在使用CD20抗体和蒽环类药物的一线疗法后实现完全反应(CR)的12个月内具有复发性和难治性(R/R)。淘汰标准包括不适合于自体干细胞移植(ASCT)、计划的同种异体干细胞移植、先前基因或CD19靶向疗法或者活动性感染。
将受试者分配至两个不同组。第1组接受3个周期的护理标准(SOC)疗法。用于有资格移植的患有复发性/难治性DLBCL的受试者的SOC包括基于铂的方案(例如，在有反应的受试者中，利妥昔单抗、地塞米松、阿糖胞苷(AraC)和顺铂(R-DHAP)；利妥昔单抗、异环磷酰胺、卡铂和依托泊苷(R-ICE)；或利妥昔单抗、吉西他滨、地塞米松和顺铂(R-GDP))，之后施用卡莫司汀、依托泊苷、阿糖胞苷和美法仑(BEAM)高剂量化学疗法和造血干细胞移植(HSCT)。第2组经历使用氟达拉滨/环磷酰胺的淋巴细胞清除，之后以100×106个CD8+和CD4+CAR+ T细胞的靶剂量进行抗CD19 CAR+ T细胞输注。在CAR+ T细胞的制造期间，受试者可以接受SOC治疗方案。
实施例11对治疗前活检基因表达谱和临床反应的分析
针对治疗前肿瘤活检中的基因表达谱来评估大体上如上文实施例1、3和6中所述被施用含有抗CD19 CAR T细胞的治疗性工程化T细胞组合物的患有复发性或难治性(R/R)侵袭性非霍奇金淋巴瘤(NHL)的受试者。
在施用CAR T细胞组合物后，监测受试者的临床反应，包括在施用后3个月，并且通过评估受试者是否具有疾病进展(PD)或完全反应(CR)来确定对CAR T细胞组合物的反应。
在施用淋巴细胞清除化学疗法之前以及在CAR T细胞施用后第11天，从50名患有弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)的受试者收集肿瘤活检，并通过RNA测序(RNA-seq)来分析从分离自肿瘤活检的RNA制备的互补DNA(cDNA)样品上的基因表达。将使用RNA-seq从治疗前肿瘤活检确定的基因表达水平与施用自体治疗性CAR T细胞组合物后的反应事后相关联。
图42显示在治疗后3个月显示CR或PD的受试者中，治疗前肿瘤活检中的差异性基因表达谱。将Log2倍数变化截止值设定为大于0.6或小于-0.6，并将假发现率(FDR)设定为小于或等于10％，揭示在来自于治疗后3个月显示CR的受试者(n＝16)的治疗前活检中高表达的360种基因，以及在来自于治疗后3个月具有PD的受试者(n＝29)的治疗前活检中高表达的380种基因。在差异性表达的基因中，与T细胞相关的基因表达在来自于治疗后3个月展现CR的受试者的治疗前活检中更高。EZH2(一种编码zeste同源物2的组蛋白赖氨酸甲基转移酶增强子的基因)和作为EZH2的靶标的基因的表达在于治疗后3个月后显示PD的受试者的治疗前活检中更高。
如图43中所示，被鉴定为与FL相比在DLBCL中以更高水平表达的基因的基因集(命名为“FL_DLBCL_DN”基因集；来自对75个可用DLBCL细胞系样品和75个可用FL细胞系样品中的差异性基因表达的分析，如下文实施例4中所述)也被发现高度富集与来自在治疗后3个月展现PD的受试者的活检相关的基因。
这些结果支持，在与受试者中施用CAR-T细胞后3个月时的PD相关的基因之间，与FL相比在DLBCL中以更高水平表达的基因以及EZH2靶基因在治疗前活检样品中富集。
实施例12对弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)与滤泡性淋巴瘤(FL)的基因表达分析
对上文实施例11中所述的从分离自约75个滤泡性淋巴瘤(FL)和约75个弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)可用细胞系样品的RNA制备的互补DNA(cDNA)样品进行用于基因表达的RNA-Seq。所分析的细胞系包括DLBCL的生发中心B细胞样(GCB)和激活的B细胞(ABC)亚型二者。如图44中所示，在DLBCL和FL肿瘤样品中观察到差异性基因表达，其中不同基因集在DLBCL和FL细胞系中升高。在FL与DLBCL细胞系之间展现差异性表达的基因包括EZH2(图45A；编码zeste同源物2的组蛋白赖氨酸甲基转移酶增强子)和CD3E(图45B；编码CD3-TCR复合物中的CD3e分子-ε)。如图所示，与DLBCL细胞系相比，FL肿瘤显示EZH2的表达水平较低且CD3E的表达水平较高。
分析通过对治疗前肿瘤活检(来自实施例11中所述受试者，所述受试者然后被施用如所述的抗CD19治疗性T细胞组合物)进行RNA-Seq获得的基因表达谱中来自图44中所述研究的基因的表达，所述基因被发现在DLBCL中(命名为“DLBCL基因集”)与FL中(命名为“FL基因集”)升高。进行单样品基因集富集分析(ssGSEA)以计算每对样品与相应基因集的单独富集得分。如图46A中所示，与继续展现PD的受试者相比，在实施例11中所述研究中继续展现CR的受试者对于DLBCL基因集具有更低的ssGSEA得分。相反，如图46B中所示，与继续展现PD的受试者相比，在实施例11中所述研究中继续展现CR的受试者对于FL基因集具有更高的ssGSEA得分。
这些数据证实，患有DLBCL和FL的受试者的基因表达谱是不同的。这些数据与如下观察一致：患有FL的受试者或者具有被发现与DLBCL受试者相比在FL受试者中升高的基因的更高表达的受试者对T细胞浸润至肿瘤环境中的抗性可能低于患有DLBCL的受试者或者表达被发现与FL相比在DLBCL中升高的基因的受试者。
实施例13在施用抗CD19CAR表达细胞后，在患有复发性和难治性非霍奇金淋巴瘤 (NHL)的受试者中对安全性和功效的评估
在基本上如实施例1、3和6中所述的临床研究中将含有表达对CD19具有特异性的嵌合抗原受体(CAR)的自体CD4+和CD8+ T细胞的治疗性CAR+ T细胞组合物施用至患有复发性和难治性非霍奇金淋巴瘤的受试者，包括2个先前治疗线已经失败的患有复发性和难治性大B细胞淋巴瘤(LBCL)的受试者。
A.受试者和治疗
在此时间点呈现的数据表示来自接受治疗性CAR+ T细胞组合物的268名受试者的结果，除非另外指定为269名受试者。这组受试者包括结果描绘于实施例1、3和6中的受试者子集。
大B细胞淋巴瘤(LBCL群组；先前也称为DLBCL群组)中的受试者包括患有复发性/难治性(R/R)DLBCL非特指型(NOS；包括从任何惰性淋巴瘤转化的)、具有MYC和BCL2和/或BCL6重排的高级别B细胞淋巴瘤(HGBCL)(Swerdlow SH等人Blood.2016；127:2375-90)、原发性纵隔B细胞淋巴瘤(PMBCL)或3B级滤泡性淋巴瘤(FL3B)的18岁或更老的受试者。受试者在2个或更多个治疗线后患有R/R疾病和ECOG PS 0-2。患有3/4级血细胞减少症、轻度至中度器官功能障碍和继发性CNS淋巴瘤的受试者是合格的。允许桥接疗法，但是在使用氟达拉滨和环磷酰胺的淋巴细胞清除(LD)前，受试者必须患有PET阳性疾病。在本文所述的表达相同抗CD19 CAR的工程化T细胞的第一次输注后实现疾病稳定(SD)作为最佳反应的受试者有资格接受工程化细胞的第二次输注。受试者必须已经接受先前含有抗CD20的化学免疫疗法(例如蒽环类药物和利妥昔单抗(或其他CD20靶向剂))且随后复发，并且可能已经接受先前自体或同种异体HSCT。包括具有中度肾功能障碍(肌酐清除率<60mL/min)和心脏功能障碍(左心室射血分数<50％)、低绝对淋巴细胞计数(不需要最小计数)和继发性CNS受累的受试者。对于ALC、ANC、血小板或血红蛋白不存在更低的阈值。评估对DLBCL群组中受试者的结果的长期随访。
对于套细胞淋巴瘤(MCL)群组：在至少1个先前MCL治疗线之后，MCL(必须已经通过细胞遗传、荧光原位杂交[FISH]或聚合酶链式反应[PCR]用细胞周期蛋白D1表达或t(11；14)的证据确认诊断)及复发性或难治性疾病。
其他标准包括根据“Recommendations for Initial Evaluation,Staging,andResponse Assessment of Hodgkin and Non-Hodgkin Lymphoma:The LuganoClassification”(Cheson BD等人J Clin Oncol.2014.32:3059-68)的正电子发射断层摄影术(PET)阳性疾病；可从最后一次复发获得的存档的肿瘤活检组织以及可用的相应病理学报告，或者，如果在筛选时认为至少1个肿瘤受累位点是可及的，则愿意进行治疗前活检(在可能时切除)用于疾病确认。如果受试者从未具有完全反应(CR)，来自最新活检的样品是可接受的；东部肿瘤协作组(ECOG)体能状态为0或1(注意，也允许ECOG状态为2直至方案修正5)；足够器官功能，定义为：由研究者评估为已经具有足够骨髓功能以接受淋巴细胞清除化学疗法(LDC)；血清肌酸酐≤1.5×年龄调整的正常值上限(ULN)或计算的肌酐清除率(CrCl；Cockcroft-Gault)>30mL/min/1.73m2；丙氨酸转氨酶(ALT)≤5×ULN且总胆红素<2.0mg/dL(或对于患有吉尔伯特综合征或肝脏淋巴瘤浸润的患者，<3.0mg/dL)；足够肺功能，定义为国家癌症研究所(NCI)不良事件的通用术语标准(CTCAE)≤1级呼吸困难且氧饱和度(基于室内空气SaO2)≥92％；足够心脏功能，定义为左心室射血分数(LVEF)≥40％，如通过在确定合格性的1个月内进行的超声心动图或多重摄取门控采集(MUGA)扫描所评估；用于白细胞单采术程序的足够血管通路(外周管线或手术置管)。接受先前CD19靶向疗法的受试者必须自从完成先前CD19靶向疗法后已经患有在活检上确认的CD19阳性淋巴瘤。
如实施例1中所述用抗CD19治疗性CAR T细胞组合物治疗受试者。特定地，抗CD19CAR+ T细胞构建体掺入4-1BB共刺激结构域。对于所治疗的所有受试者，治疗性T细胞组合物是作为单独CD4+和CD8+组合物来制造，其中将来自每名患者的CD8+和CD4+ T细胞子集以CD8+和CD4+CAR T+细胞的单独目标数量单独地纯化并用抗CD19 CAR转导，扩增并冷冻保存。CD4和CD8 CAR+ T细胞组合物的单独制造(包括单独转导以表达抗CD19 CAR和在体外单独扩增)允许以大约相等的目标剂量(大约1:1)施用CD4+和CD8+CAR-工程化T细胞。因此，在所施用的总T细胞剂量和CD8+CAR+ T细胞剂量中观察到低变化性。
在用CAR T细胞治疗之前，用静脉内氟达拉滨(30mg/m2/天，持续3天)加环磷酰胺(300mg/m2/天，持续3天)治疗受试者。在CAR T细胞施用之前2天与7天之间完成淋巴细胞清除化学疗法。在整个研究中，氟达拉滨施用要基于氟达拉滨包装插页；根据氟达拉滨标签在患有肾功能不全的患者中调整氟达拉滨剂量。淋巴细胞清除化学疗法的剂量描述于表E32.1中。
Figure BDA0003183097650003721
允许进行桥接疗法以控制疾病，并且在白细胞单采术之后且在淋巴细胞清除化学疗法之前根据研究者的决定来施用。桥接疗法描述于表E32.2中。
Figure BDA0003183097650003722
Figure BDA0003183097650003731
B.基线特征
在分析的这个时间点，总计342名受试者已经进行白细胞单采术，其中268名接受CAR+ T细胞组合物(或者在一些情况下，如所指示的269名受试者)，24名接受不合规产品(即，CD8+或CD4+组分未符合放行标准)，在所有剂量水平中，2名的组合物不可用，并且48名主要因为输注前的死亡或淋巴瘤并发症而未接受CAR T细胞(33名已经死亡并且未接受CAR表达T细胞)。在用于生成CAR表达细胞的示例性制造过程中，从白细胞单采术至收获标准和产物可用的中值时间为24天。
患者特征显示于表E32.3(n＝268)和表E32.4(n＝269)中。中值年龄为63(范围，18-86)岁，包括更老亚群(41％是≥65岁，并且10％是≥75岁)；65％的受试者是男性。受试者患有中度共病(分别有19％和5％的患者患有肾功能和心脏功能受损)。受试者进行深度预治疗(先前治疗线的中值数量为3)并且患有侵袭性疾病：26％进行≥4个先前全身疗法线(中值为3；范围，1-8)；34％经历先前自体HSCT且3％经历先前同种异体HSCT；67％具有化疗难治性(最后治疗线的化疗难治性)；44％从未实现CR。在所有受试者中，255名的反应可评价。受试者的血清肌酸酐水平≤1.5x年龄调整的ULN或肌酐清除率(CrCl)>30ml/min/1.73m2。在筛选时，58％的受试者具有ECOG PS 1；59％需要桥接疗法；在淋巴细胞清除前，22％具有LDH≥500U/L且28％具有SPD≥50cm2。
Figure BDA0003183097650003741
Figure BDA0003183097650003751
Figure BDA0003183097650003752
Figure BDA0003183097650003761
C.对剂量和结果的评估受试者已经接受50x106的DL1(n＝51)、100x106的DL2(n＝176)或150x106的DL3(n＝41)。在门诊环境中治疗二十五名受试者(25)。从所有剂量水平汇集此实施例中的数据。
测试三个单一剂量时间表。作为在第1天给予的单一剂量和作为具有在第15天给予的CAR T细胞的第二剂量的双剂量时间表二者，测试剂量水平1(表E33.1)。扩展所有剂量水平，并且选择DL2作为用于剂量确认的目标DL。使用Bayesian方法分析剂量发现群组中的功效和安全性(Quintana M,等人Contemp Clin Trials 2016；48:153-65)以鉴定推荐的方案，在剂量确认中对其进行进一步评价。所述研究符合所有主要和次要反应终点。主要重点是治疗中出现的不良影响(TEAE)和总体反应率(ORR)。次要终点包括CR率、反应持续时间(DOR)、PFS、PFS比率和OS。使用CTCAE标准(例如v4.03.20)将TEAE(包括研究者鉴定的与CAR+ T细胞组合物有关的神经病学事件(NE))分级；根据Lee标准(2014)将CRS分级；并且如下文所述评估与细胞动力学、B细胞发育不全和免疫原性有关的参数。通过独立评审使用卢加诺标准评估ORR。在DL之间分析来自LBCL群组中所有CAR+ T细胞治疗的受试者的数据。治疗方案图显示于图48中。
Figure BDA0003183097650003762
Figure BDA0003183097650003771
剂量限制性毒性(DLT)和不良事件(AE)定义如下：与CAR+T细胞有关的任何治疗中出现的4或5级AE；与CAR+ T细胞有关的在7天内未消退至≤2级的任何治疗中出现的3级AE；在3天内未消退至≤2级的任何治疗中出现的3级癫痫发作；任何治疗中出现的≥3级自身免疫毒性，不管归因为何(不包括B-细胞发育不全)。在2-剂量时间表中，由于与CAR+ T细胞有关的毒性而不能接受第二CAR+ T细胞剂量。以下预期的事件不被视为DLT：不被研究者视为临床上显著的3或4级实验室值，即使它们符合AE报告标准；在8小时中可逆转至≤2级的4级输注毒性；3或4级发热或发热性嗜中性粒细胞减少症，持续≤2周；3级转氨酶，持续≤2周；由于骨髓室中的T-细胞扩增所致的3级骨痛，持续≤2周；3或4级肿瘤溶解综合征(TLS)，持续≤2周；3或4级低血压(没有其他细胞因子释放综合征[CRS]症状)需要单一血管加压药支持，在≤72小时中消退至<3级；3或4级CRS，仅具有低血压，需要单一血管加压药支持(不需要插管)，在≤72小时中消退至<3级；3或4级脑病，持续≤7天，并且在从≥3级事件开始≤28天中消退至基线；3级寒战；3或4级淋巴细胞减少症；3或4级白细胞减少症；3或4级B-细胞发育不全和低丙球蛋白血症。
治疗中出现的不良事件(TEAE)被定义为在从开始CAR+ T细胞施用至(且包括)最后施用CAR+ T细胞后90天的任何时间开始的不良事件。在开始另一抗癌治疗后或在CAR+ T细胞复治后发生的任何不良事件都不被视为CAR+ T细胞TEAE。使用国家癌症研究所不良事件的通用术语标准v4.03(国家癌症研究所不良事件的通用术语标准v4.03.2009.2019年10月23日)将TEAE、实验室异常和神经病学事件(定义为与CAR+ T细胞有关的研究者评估的神经病学事件)分级，根据Lee标准将CRS分级(Lee等人Blood.2014；188-95)。
反应持续时间被定义为从第一次完全反应或部分反应至疾病进展或死亡的时间。无进展存活期被定义为从第一次输注CAR T细胞至疾病进展或死亡的时间。总体存活期被定义为从第一次输注CAR T细胞至死亡日期的时间。
D.安全性结果
在剂量发现(n＝59)和剂量扩展(n＝80)中治疗的139名受试者中，9名(6％)经历DLT(表E33.2)。未鉴定最大耐受剂量。DL2(100×106个CAR+ T细胞)是在剂量确认中评价的剂量。在所有DL中的剂量相关毒性与功效之间未观察到明显关系，除了在DL3下1级和2级CRS的比率升高以外(表E33.2)。在DL1D(剂量水平1，双剂量)下没有发生DLT。所有3级脑病事件都消退。4级脑病事件在由于疾病进展而死亡时没有消退。4级血小板减少症的两个事件复原/消退。组合来自所有受试者的数据。
Figure BDA0003183097650003781
Figure BDA0003183097650003791
CRS，细胞因子释放综合征；DL1，剂量水平1(单一剂量)；DL2，剂量水平2(单一剂量)；DLT，剂量限制性毒性。
在所述时间点治疗的所有受试者的不良事件结果示于表E33.3中。
在筛选时，58％的受试者具有ECOG PS 1；59％需要桥接疗法；在LD前，22％具有LDH≥500U/L且28％具有SPD≥50cm2。在安全性分析中评估的已经接受CAR+ T细胞组合物的268名受试者中，最频繁的治疗中出现的不良事件(TEAE)是嗜中性粒细胞减少症(63％)、贫血(48％)、疲劳(44％)、CRS(42％)和恶心(33％)。安全性评估显示79％的受试者具有≥3级的TEAE，主要是血细胞减少症(嗜中性粒细胞减少症，60％；贫血，37％；血小板减少症，27％)。CRS或NE发生在47％的受试者中。任何等级的CRS发生在42％的受试者中，中值发作为5天；仅2％具有≥3级的CRS。NE发生在30％的受试者中(等级≥3，10％)，中值发作为9天。19％的受试者接受托珠单抗并且21％接受皮质类固醇用于CRS和/或NE。七名受试者(3％)具有5级TEAE，包括一个5级DLT，其中4个归因于CAR+ T细胞组合物和LDC，如表E33.3中所示。
七名受试者(3％)具有5级TEAE，包括一个5级DLT；所发生的四个5级TEAE与CAR+ T细胞组合物和淋巴细胞清除疗法(LD)有关(弥漫性肺泡损伤、肺出血、多器官功能障碍综合征、心肌病)。三个5级TEAE与CAR+ T细胞组合物无关：氟达拉滨脑白质病、脓毒症休克和进行性多病灶脑白质病。在37％的受试者中报告延长的≥3级的血细胞减少症(基于第29天的实验室评估)。安全性在年龄组、组织学和患有器官功能障碍的受试者之间类似。
表E33A-1显示268名受试者的组的治疗不良事件，并且表E33A-2显示在相同研究中的另一时间点在所有受试者亚组中的治疗中出现的不良事件(n＝269)。表E33B-1(n＝268)和表E33B-2(n＝269)显示特别关注的其他不良事件。基于实验室的低丙球蛋白血症(IgG<500mg/dL)在基线时存在于49％(258名中的127名)中，在研究第29天存在于58％(236名受试者的136名)中，并且在研究第365天存在于61％(112名受试者的8名)中。
表E33B-3显示NT或CRS和NE的发生率和管理。CRS和NE是可逆的，其中1名受试者在分析时间点具有未消退的NE(1级震颤)，且8名受试者在因其他原因死亡的时间具有正在进行的CRS/NE。用于CRS和NE的治疗描述于图57中，一名受试者接受用于CRS的阿那白滞素和司妥昔单抗，并且一名受试者接受用于NE的司妥昔单抗。表E33C显示细胞因子释放综合征(CRS)的治疗中出现的症状，其发生在≥2％的患者中。表E33D显示依据组的治疗中出现的神经病学事件，其发生在≥5名患者中。
表E33E-1和表E33E-2显示依据剂量水平对不良事件的比较。表E33F显示对患者亚组之间的安全性的比较。表E33G显示门诊患者、复治患者和接受不合规产品的那些患者的安全性结果。
所有患者中少于一半(47％)发生CRS和/或NE(表E33B-表E33D)，且中值发作分别为5天和9天。42％的患者具有任何等级的CRS。3或4级CRS是少见的，仅发生在2％的患者中。在20％的患者中用托珠单抗和/或皮质类固醇管理CRS；10％仅接受托珠单抗。在30％的患者中见到任何等级的NE，并且通常在CRS期间或之后发生(73％)；10％具有3或4级NE。没有患者具有5级CRS或NE。特别关注的其他TEAE包括延长的血细胞减少症(37％的患者)、低丙球蛋白血症(14％)和≥3级的感染(12％)。在CAR+ T细胞输注后，在初始住院时段期间，十八名患者(7％)入住重症监护室。
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E.功效和反应结果
在所述时间点治疗的受试者的功效和反应结果示于表E33H-1中。通过IRC评估获得的反应和持久性描述于表E33H-2中。持续反应的概率和反应持续时间描述于图58中。中值随访期(95％CI)是12个月(11.2-16.7范围)。
在反应可评价的受试者(n＝255)中，ORR是73％(95％CI，67-78)；CR率是53％(95％CI，47-59)。在所有受试者亚组(例如，包括基于疾病亚型、年龄(例如，65岁或更老的受试者)、具有高肿瘤负荷的受试者以及化疗敏感性和难治性状态)中，反应是类似的，如表E33H中所示。表E33I-1和E33I-2显示依据剂量水平对功效的比较。表E33J显示根据分析集对功效的比较。表E33K显示门诊患者、复治患者和接受不合规产品的那些患者的功效。功效在窄范围的DL中是类似的，且在单独DL之间对于ORR(P＝0.68)、PFS(P＝0.46)和DOR(P＝0.76)或在分析集之间没有统计学上显著的差异。对于PAS，符合ORR的预先指定的主要终点。用CAR+ T细胞组合物复治(n＝15)导致低ORR(20％)。接受不合规产品的患者(n＝24)之间的功效与接受CAR+ T细胞组合物的那些患者是类似的。
反应是快速且持久的，其到第一次反应的中值时间是1个月(范围，0.7-6.0)且中值DOR为13.3个月(95％CI，8.2-未达到[NR])，中值随访期为10.8个月。具有CR的患者中未达到中值DOR(95％CI，13.3-NR)(图49A)。中值PFS是6.8个月(95％CI，3.3-11.8)。在具有CR的患者中，未达到中值PFS(95％CI，14.1-NR)(图49B)。中值PFS比率为0.72。总体上，CAR+ T细胞输注后的PFS比来自最近的先前疗法的PFS显著更长。中值OS是19.1个月，且中值随访期是12.2个月，并且估计的12个月OS是55％(95％CI，48.4-61.9)。在实现CR的患者中，未达到估计的中值OS(95％CI，NR-NR)(图49C)。功效在窄范围的DL中是类似的(表E33I)，且在单独DL之间对于ORR(P＝0.68)、PFS(P＝0.46)和DOR(P＝0.76)或在分析集之间没有统计学上显著的差异(表E33J)。用CAR-T细胞组合物复治(n＝15)导致低ORR(20％)。接受不合规产品的患者(n＝24)之间的功效与接受CAR+ T细胞组合物的那些患者是类似的(表E33K)。
如图59中所示，ORR没有因年龄、LBCL亚型、先前HSCT或继发性CNS淋巴瘤而有所不同。需要桥接疗法的受试者和具有高疾病负荷的那些受试者具有朝向更低ORR的趋势。所述亚组的CR率的模式与ORR的模式是类似的。依据客观反应评价PFS(图60和表E33L)和OS(图61和表E33M)。在分析的此时间点，37％的受试者具有12个月的研究中随访期，并且68％具有6个月的研究中随访期。依据组织学亚型的PFS显示于图62中。
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在亚组(包括门诊输注/监测和高风险患者，如不常见的组织学亚型和HGBCL、年龄≥65岁、化疗难治性疾病和需要桥接疗法的那些)中观察到反应。在反应可评价的患有继发性CNS淋巴瘤的6名患者中，3名实现CR。类似地，年龄≥65岁、HGBCL、化疗难治性疾病和继发性CNS淋巴瘤的高风险亚组中，反应是持久的(图50A-图50B)。然而，对于具有高肿瘤负荷的患者，PFS和DOR更短。如表E33N中所示，PFS在需要桥接疗法的患者中更短。图51A显示反应持续时间和无进展存活。图51B显示依据组织学组的反应持续时间。图51C显示依据桥接疗法的反应持续时间。图51D显示依据化疗敏感性与化疗难治性状态的反应持续时间。图51E显示依据LDC前SPD状态的反应持续时间。图51F显示依据年龄组的反应持续时间。图51G显示患有与未患共病的受试者中的反应持续时间。
Figure BDA0003183097650003942
F.细胞动力学、B细胞发育不全和免疫原性
血液中CAR+ T细胞的细胞动力学是基于LBCL治疗的群组中接受作为单一输注的CAR+ T细胞以及至少在前28天中具有基线(在CAR+T细胞输注前)和基线后测量值的所有患者。使用验证的实时定量PCR测定来评估数据，用于检测CAR+ T细胞转基因。
B细胞发育不全被定义为CD19+B细胞占外周血淋巴细胞的<3％(Mueller KT等人Clin Cancer Res.2018.；24:6175-84)。
使用电化学发光免疫测定来检测抗CAR表达T细胞抗体。通过计算抗CAR表达T细胞抗体(在第一次CAR表达T细胞输注前测量的预先存在的与CAR表达T细胞结合的抗体)的流行率和抗CAR表达T细胞抗体(在CAR表达T细胞的第一次输注后的任何时间点与CAR表达T细胞结合的治疗诱导的或治疗加强的抗体)的发生率来评估免疫原性。
在238名可评价患者中，在所有DL中到CAR T细胞峰值扩增的中值时间为12天(四分位距，10-15)；中值最大扩增(Cmax)为23,963.7个拷贝/μg，并且在输注后前28天期间的中值曲线下面积(AUC0-28d)为214,283.0天*拷贝/μg。在所有DL之间的扩增是类似的(表E33O)。
CAR+ T细胞在1年时在59％(n＝22/37)中显示长期持久性。CD19+B细胞水平保持较低2-3个月，之后增加，并且CAR+CD4+和CD8+细胞扩增的动力学是类似的。相比于针对261名受试者分析的CD19+B细胞，通过qPCR和流式细胞术分析的CAR+ T细胞的结果显示于图63和表E33P中。通过流式细胞术分析的CAR+ T细胞(CD3+、CD8+和CD4+)的结果显示于图64中。
反应者(CR或PR；n＝175)的中值Cmax(4.06倍)和AUC0-28d(2.59倍)高于无反应者(n＝50)。更高的中值Cmax也与更高的基线肿瘤负荷(2.45倍)、任何等级的CRS(2.31倍)、任何等级的NE(3.46倍)和≥3级的NE(5.06倍)相关(表E33Q)。CAR+ T细胞在1年时在59％(n＝22/37)的患者中显示长期持久性；73％(n＝36/49)在1年时具有持续存在的B细胞发育不全。在第一次CAR+ T细胞组合物输注前在11％的患者(n＝28/261)中以及在输注后的任何时间在11％(n＝27/257)中检测到抗CAR+ T细胞抗体(大多数是治疗诱导的)。抗CAR+ T细胞抗体状态与功效、安全性或细胞动力学之间的关系没有确定的结论，因为具有阳性抗体测试的患者数量较小。
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G.结论
此实施例中报告的针对CD19的CAR T细胞疗法在患有复发性/难治性侵袭性LBCL的受试者中的结果显示，用抗CD19 CAR+ T细胞治疗导致持久反应，且增加体内的CAR T细胞扩增，并且CAR T细胞在抗CD19 CAR+ T细胞输注后长期持续存在。在深度预治疗的患有侵袭性高风险疾病的受试者群体中观察到这些结果，所述受试者中大多数具有化疗难治性并且需要用桥接疗法立即治疗用于疾病控制。所述研究还包括具有不良预后的特征的受试者亚组，所述特征如继发性CNS受累、从除了FL以外的惰性淋巴瘤转化的DLBCL、FL3B和中度共病。所述研究中治疗的受试者群体通常更老，包括年龄超过75岁的那些。观察到这些结果伴随严重CRS和NE的低发生率。本文所述研究中所有受试者的少于一半发生CRS或NE，并且3级或更高级CRS和NE的发生率较低(分别为2％和10％)，并且未发生致死的CRS或NE。CRS和NE的低总体发生率和严重程度以及它们的晚发作(中值分别为5天和9天)支持对所选受试者的门诊施用/监测。在本文所述各种研究中在门诊环境中接受抗CD19 CAR+ T细胞的25名受试者的安全性和功效结果与治疗的受试者的整个群体是类似的。
结果证实，在患有R/R大B细胞NHL的受试者中，施用抗CD19 CAR表达细胞显示持久反应和有利的安全性概况。CRS和NE的低发生率和晚发作允许门诊施用。这些结果显示，在组织学亚组中以及在具有不良预后的受试者(包括难治性、老年、共病和/或具有高肿瘤负荷的受试者)中观察到临床上有意义的反应。在此项研究中，在患有高风险侵袭性复发性/难治性LBCL的患者中，用如本文所述的CAR+ T细胞组合物治疗导致持久CR的快速高比率和严重CRS和NE的低发生率。在具有未满足的医疗需求的患者亚组(包括不常见的DLBCL组织学亚型和具有不良预后特征的那些)中观察到临床上有意义的活性。严重CRS和NE的低发生率和到发作的较晚时间允许门诊施用/监测。结果支持所述组合物和方法用于治疗更大受试者组的效用和潜在的护理地点。
实施例14施用抗CD19 CAR表达细胞用于治疗无资格进行二线移植(TNE)的患有复 发性和难治性非霍奇金淋巴瘤(NHL)的受试者
将上文实施例1、3和6中所述研究中采用的含有表达对CD19具有特异性的嵌合抗原受体(CAR)的自体CD4+和CD8+ T细胞的治疗性CAR+T细胞组合物作为二线疗法施用至一线疗法已经失败的患有无资格移植的(TNE)复发性和难治性(R/R)非霍奇金淋巴瘤(NHL)(如复发性和难治性(R/R)大B细胞淋巴瘤)的受试者。
用于治疗的合格受试者包括患有复发性/难治性大B细胞非霍奇金淋巴瘤(NHL)(弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)非特指型[从头或转化的惰性NHL、具有MYC和BCL2和/或BCL6的高级别淋巴瘤[双/三打击淋巴瘤]或3B级滤泡性淋巴瘤)的受试者，并且已经接受仅1个含有蒽环类药物和CD20靶向剂(例如，R-CHOP；利妥昔单抗、环磷酰胺、盐酸多柔比星(羟基柔红霉素)、硫酸长春新碱(oncovin)和泼尼松)的先前免疫化学疗法线。受试者包括被认为无资格进行高剂量化学疗法和之后的HSCT的那些(例如，基于年龄、体能状态和/或共病)，条件是他们符合以下TNE标准中的至少一项同时仍满足CAR T细胞疗法的标准：年龄≥70岁，东部肿瘤协作组(ECOG)体能状态为2，和/或肺功能受损(DLCO≤60％，但基于室内空气SaO2≥92％，并且CTCAE≤1呼吸困难)、心脏功能受损(LVEF≥40％且<50％)、肾功能受损(肌酐清除率>30且<60mL/min)或肝功能受损(AST/ALT>2且≤5x ULN)(参见表E34A)。用于治疗的合格受试者还包括具有以下的那些：正电子发射断层摄影术(PET)阳性疾病、在最后一次复发时对诊断的组织学确认(例如，具有足够肿瘤物质必须可用于诊断的中心确认，否则要求进行新的肿瘤活检)、ECOG PS为0或1或2和/或用于白细胞单采术程序的足够血管通路(外周管线或手术置管)。先前已经接受表达如上所述相同的抗CD19 CAR的T细胞的施用并实现完全反应并且已经复发的受试者有资格进行复治。
主要终点包括客观反应率(ORR)，并且次要终点包括不良事件(AE)、完全反应率(CRR)、反应持续时间(DR)、药代动力学概况、估计的无进展存活期、无事件存活期、总体存活期、实验室异常和健康相关的生活质量。根据2014卢加诺标准评价功效(Cheson BD,等人J Clin Oncol.2014；32:3059-3067)，并且使用Lee标准将CRS分级(Lee DW,等人Blood.2014；124:188-195)。NE是被认为与CAR+ T细胞组合物有关的不良事件(AE)。使用国家癌症研究所不良事件的通用术语标准4.03版将除了CRS以外的AE分级。在CAR+ T细胞组合物施用后，监测受试者的治疗中出现的AE(TEAE)，持续90天。在研究者的慎重考虑下，受试者可以作为门诊患者来治疗。如果患者离开诊所或出院或者在输注后观察期结束后离开诊所，则考虑将受试者作为门诊患者来监测。如果受试者在CAR+ T细胞组合物输注期间住院或在输注后观察期后立即住院，则考虑将受试者作为住院患者来监测。
通过流式细胞术来确定药代动力学(PK)参数。
Figure BDA0003183097650003991
实施例14.A
在分析的第一时间点，总计10名受试者已经进行白细胞单采术，其中9名接受CAR+T细胞组合物并且1名受试者正在等待治疗。对于这些受试者，成功制造用于所有受试者的CAR+ T细胞组合物。在用氟达拉滨/环磷酰胺进行3天淋巴细胞清除后的2天与7天之间，受试者接受目标剂量的DL2(100x106个CAR表达T细胞)，如实施例1中所述。五(5)名受试者作为门诊患者进行输注和监测。
中值年龄为71(范围，64-79)岁，并且5名受试者是男性。基于组织学分析，受试者患有DLBCL NOS(n＝7)和转化的滤泡性淋巴瘤(tFL，n＝2)；两名受试者具有三打击(其中一名具有tFL组织学)。五名受试者复发，并且4名受试者患有先前疗法难治的疾病。中值SPD和LDH分别为26.6cm2和201U/L。四名受试者具有高肿瘤负荷，SPD≥50cm2(n＝4)且LDH≥500U/L(n＝1)。中值造血细胞移植共病指数(HCT-CI)得分为3(范围，0-3)。
六名受试者具有一个或多个≥3级的治疗中出现的不良事件(TEAE)，它们主要是血细胞减少症。三名受试者在第29天患有≥3级的延长的血细胞减少症。两名受试者患有任何等级的感染，并且没有受试者发生≥3级的治疗中出现的感染。没有受试者具有CRS或NE，并且没有受试者接受托珠单抗、皮质类固醇或血管加压药。不存在巨噬细胞活化综合征、肿瘤溶解综合征、输注反应或5级TEAE的病例。在作为门诊患者治疗并监测的5名受试者中，在CAR表达T细胞输注后前29天内，没有受试者因不良事件而住院。
所有9名受试者都实现客观反应。四名受试者实现完全反应(CR)；并且在分析时，继续具有进行中的CR。五名受试者实现部分反应(PR)；其中在分析时，2名受试者继续展现进行中的PR。与门诊环境中的受试者相比，在住院环境中治疗的受试者中，结果是类似的。中值随访期是3.5个月。到峰值CAR T细胞扩增的中值(范围)时间是10(7-21)天。
这些结果与如下观察一致：在依据预先指定的标准无资格进行高剂量化学疗法和HSCT的患有R/R侵袭性B细胞NHL的受试者中，抗CD19CAR表达T细胞可以作为二线疗法成功施用，包括在门诊环境中。
实施例14.B
在分析的第二时间点，总计19名受试者已经进行白细胞单采术，其中13名接受CAR+ T细胞组合物。对于这些受试者，成功制造用于所有受试者的CAR+ T细胞组合物。六名受试者作为门诊患者进行治疗和监测。所有接受CAR+ T细胞组合物的受试者都包括在安全性分析中，并且12名包括在功效分析中。在分析时已经接受CAR+ T细胞组合物的13名受试者中，9名受试者具有3个月或更久的随访期。没有受试者接受不合规产品(例如，CD8或CD4细胞组分中的一种或两种未符合CAR+ T细胞组合物的放行规范的产品)，并且不存在制造失败。
中值年龄为72岁。在筛选时，8名受试者符合1项TNE标准，4名受试者符合2项TNE标准，并且1名受试者符合≥3项TNE标准。在作为门诊患者治疗和监测的6名受试者中，在CAR+T细胞组合物输注后的前29天内，没有受试者因AE而住院(表E34B)。八名受试者(61.5％)经历3或4级TEAE，大多数是血细胞减少症。在CAR+ T细胞组合物输注后，没有受试者死亡(表E34C)。
Figure BDA0003183097650004011
Figure BDA0003183097650004021
Figure BDA0003183097650004022
Figure BDA0003183097650004031
在此时间点评价的受试者中，没有发生3-4级CRS的事件，没有受试者经历NE，并且不存在巨噬细胞活化综合征、肿瘤溶解综合征或发生输注反应的病例(表E34D)。
Figure BDA0003183097650004032
在此时间点此研究中针对功效评价的所有受试者(12名受试者)实现客观反应(100％[12/12])，并且六名受试者(50％)实现CR(表E34E)。在此时间点此研究中每名受试者的单独结果汇总于表E34F中。所有12名受试者截至第30天都实现早期客观反应，并且12名受试者中的七名(58％)在CAR+ T细胞输注后3个月维持持久反应。一名受试者保持在CR中9个月(270天)，并且1名受试者保持在CR中6个月(180天)(图56)。此研究中CAR T细胞到最大浓度的时间(Tmax)(11[四分位距(IQR)：11-15]天)与用不同研究(例如，上文实施例1、3、6和13中所述)中观察的CAR T细胞组合物的12[IQR：10 15]天的Tmax观察到的类似。
Figure BDA0003183097650004033
Figure BDA0003183097650004041
Figure BDA0003183097650004042
Figure BDA0003183097650004051
结果显示，最常见的3或4级TEAE是血细胞减少症，没有受试者展现3-4级CRS，没有受试者展现神经病学事件，并且没有受试者具有5级TEAE。结果还显示，施用抗CD19 CAR表达T细胞组合物导致持久反应，包括CR。在此研究中，所有受试者(100％)截至第30天实现早期客观反应，六名患者(50％)实现CR，七名患者(58％)在CAR表达T细胞输注后3个月维持持久反应，两名患者的CR分别持续进行6个月和9个月。这些结果与如下观察一致：抗CD19 CAR表达T细胞作为二线疗法在无资格进行高剂量化学疗法和HSCT的患有R/R侵袭性B细胞非霍奇金淋巴瘤(NHL)的受试者中被成功耐受。
实施例15在门诊环境中施用抗CD19 CAR表达细胞用于治疗复发性和难治性(R/R) B细胞非霍奇金淋巴瘤(NHL)
上文实施例1、3和6中所述研究中采用的含有表达对CD19具有特异性的嵌合抗原受体(CAR)的自体CD4+和CD8+ T细胞的治疗性CAR+ T细胞组合物是在门诊环境中作为三线或更晚疗法来施用。
用于治疗的合格受试者包括患有复发性/难治性大B细胞非霍奇金淋巴瘤(NHL)(弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)非特指型(NOS)；包括活检确认的从惰性淋巴瘤转化的DLBCL、具有MYC和BCL2和/或BCL6的高级别淋巴瘤[双/三打击淋巴瘤]、原发性纵隔B细胞淋巴瘤(PMBCL)和3B级滤泡性淋巴瘤)的成年受试者。受试者先前已经用蒽环类药物和利妥昔单抗(或其他CD20靶向剂)治疗，并且在用于DLBCL的至少2个全身性治疗线后或在自体造血干细胞移植(HSCT)后已经患有复发性或难治性疾病。用于治疗的合格受试者还包括患有依据卢加诺分类的正电子发射断层摄影术(PET)阳性疾病、东部肿瘤协作组(ECOG)体能状态为0或1的那些受试者；具有足够骨髓、肾、肝、肺和心脏器官功能、用于白细胞单采术程序的足够血管通路的受试者；和/或已经接受先前CD19靶向疗法且自从完成先前CD19靶向疗法后患有基于活检确认的CD19阳性淋巴瘤的受试者。
受试者经历白细胞单采术以分离外周血单核细胞(PBMC)用于产生CD19靶向CAR。在表达CD19靶向CAR的细胞的产生期间，允许受试者接受低剂量化学疗法用于疾病控制。在成功制造抗CD19 CAR表达T细胞组合物后，受试者接受淋巴细胞清除化学疗法，之后接受通过静脉内(IV)注射施用的100x106个CAR表达T细胞的一个剂量。
实施例16 在施用抗CD19 CAR表达细胞后对患有复发性和难治性非霍奇金淋巴瘤 (NHL)的门诊受试者的安全性和反应结果的评估
在来自如上文实施例1、3、6、13、14和15中所述临床研究的在门诊环境中治疗的患有复发性和难治性(R/R)非霍奇金淋巴瘤(NHL)(如大B细胞淋巴瘤)的受试者组中评估反应和安全性结果。
如上文实施例1、3、6和13中所述，表达抗CD19 CAR的CD4+和CD8+细胞的限定组合物作为三线或更晚疗法在患有R/R大B细胞NHL的受试者中实现高反应率。在少于一半的受试者发生细胞因子释放综合征(CRS)和/或神经病学事件(NE)(例如，在47％的受试者中)，3级或更高级事件的发生率低(分别地，CRS为2％且NE为10％)的情况下且鉴于延迟的发作(中值分别为5天和10天)，允许门诊治疗，且在首次发热体征或神经病学症状时住院。
实施例16.A
在不同研究中，在分析的此时间点分析在门诊环境中被施用CAR+ T细胞的总计37名受试者。在所述研究中，在所治疗受试者的三个组中，门诊治疗是在非大学环境或在大学和非大学医疗中心二者处进行。所述组汇总于表E35中。
Figure BDA0003183097650004071
一个组(组A)包括大体上如实施例1、3、6和13中所述在门诊环境中治疗的患有R/R大B细胞NHL的25名受试者的子集。受试者已经以50x106个CAR+细胞的DL1、100x106个CAR+细胞的DL2或150x106个CAR+细胞的DL3接受CAR+ T细胞组合物作为三线或更晚疗法(受试者进行2个或更多个先前治疗线并且ECOG PS为1或更低)。用≥1个先前治疗线治疗套细胞淋巴瘤(MCL)群组中的受试者。
另一组(组B)包括来自如下研究的7名受试者，在所述研究中大体上如实施例15中所述施用CAR+ T细胞组合物作为三线或更晚疗法。受试者已经用蒽环类药物和利妥昔单抗(或其他CD20靶向剂)治疗并且在用于DLBCL的至少2个全身性治疗线后或在自体HSCT后患有复发性或难治性疾病。
另一组(组C)包括来自如下研究的5名受试者，在所述研究中施用CAR+ T细胞组合物作为用于无资格移植的(TNE)受试者的二线疗法。由于符合实施例14中所述的至少一项TNE标准，同时仍符合CAR T细胞疗法的标准(年龄≥70岁，ECOG PS为2，肺功能受损(肺一氧化碳弥散量(DLCO)≤60％，针对血红蛋白浓度加以调整(DLCO≤60％，但基于室内空气氧饱和度≥92％以及国家癌症研究所不良事件的通用术语标准[NCI CTCAE]≤1呼吸困难))、心脏功能受损(左心室射血分数≥40％至<50％)、肾功能受损(肌酐清除率>30且<60mL/min)和肝功能受损(天冬氨酸转氨酶和丙氨酸转氨酶>2且≤5×正常值上限)，受试者被认为无资格进行高剂量化学疗法和之后的HSCT。受试者已经接受仅1个含有蒽环类药物和CD20靶向剂(例如，R-CHOP)的先前免疫化学疗法线。
在所述研究中，合格的受试者具有R/R大B细胞NHL、足够器官功能和先前全身性化学免疫疗法(≥2个先前治疗线且ECOG PS≤1，或者1个先前治疗线且基于ECOG PS、器官功能和/或年龄认为对于自体造血干细胞移植是TNE的)。在如上文实施例中所述用氟达拉滨/环磷酰胺进行淋巴细胞清除后，将CAR+ T细胞组合物对于组A中的25名受试者以3个剂量水平(50x106个CAR+细胞的DL1、100x106个CAR+细胞的DL2或150x106个CAR+细胞的DL3)中的1个来施用，并且在上述组B和C中以DL2(100x106个CAR+T细胞)来施用。对于门诊治疗，受试者在CAR表达T细胞输注后30天中具有照护者，接受安全性监测教育(认识关键不良事件；例如，发热)，并且位于距护理地点1小时的行程内。用于门诊治疗的所有地点都有多学科CART细胞疗法团队以及用于门诊施用和不良事件监测的标准操作程序。在医院中管理细胞因子释放综合征(CRS；Lee等人(2014)标准)和神经病学事件(NE；定义为与CAR表达T细胞施用有关；CTCAE标准)。
在分析时，研究中的37名受试者已经作为门诊患者在研究第1天接受抗CD19 CAR+T细胞并进行监测，包括65岁或更老的受试者以及具有高肿瘤负荷的那些。患者特征、安全性和反应结果显示于下表E35.1中。最常见的≥3级的治疗中出现的AE是血细胞减少症(嗜中性粒细胞减少症43％、贫血30％、血小板减少症14％)。十六名受试者具有任何等级的CRS并且12名受试者具有任何等级的NE(19名受试者具有CRS和/或NE)。严重CRS和/或NE仅发生于2名受试者中并且是可逆的(参见表E35.1)。对于CRS和/或NE，三名受试者接受托珠单抗和皮质类固醇，并且4名受试者仅接受皮质类固醇。没有受试者仅接受托珠单抗。37名受试者中的二十二名(59％)在任何时间需要住院；需要住院的所有受试者都来自组A或组B。那些受试者中的三名(8％)在研究第3天或更早入院，都因为CRS；1名受试者需要ICU级护理(住院时间，3天)。治疗后到住院的中值(范围)时间时5(2-22)天，并且中值(范围)住院时间是6(2-23)天。在抗CD19 CAR表达细胞输注后的前29天，37名受试者中的十五名(41％)(包括来自组C的所有5名受试者)没有住院。
在所有3个组中，大多数受试者实现客观反应，包括CR(参见表E35.1)。每项研究中到峰值CAR+ T细胞扩增的中值时间为10天(范围：在组A中3-21；在组B中7-10；在组C中7-10)。
Figure BDA0003183097650004091
Figure BDA0003183097650004101
实施例16.B
在如上文在实施例16.A中所述的相同研究中的不同时间点，在分析的此时间点分析不同研究中在门诊环境中被施用CAR+ T细胞的总计44名受试者。在所述研究中，在所治疗受试者的三个组中，门诊治疗是在非大学环境或在大学和非大学医疗中心二者处进行。门诊组包括：组A，其具有来自研究中总计286名受试者的25名的子集(9％)；组B包括来自研究中总计27名受试者的13名的子集(48％)；并且组C包括来自研究中总计13名受试者的6名的子集(46％)。在CAR+ T细胞输注后1、3、6、9、12、18和24个月，基于研究者评估，根据2014卢加诺标准通过正电子发射断层摄影术/计算机断层成像扫描评价功效(Cheson BD等人JClin Oncol.2104；32:3059-3067)。使用NCI CTCAE 4.03版将AE分级，CRS除外，CRS是使用Lee等人的标准来分级(Lee DW等人Blood.2014:188-195)。NE是根据研究者定义的AE，其根据研究者评估被视为与CAR+ T细胞组合物有关。TEAE被定义为在CAR+ T细胞组合物施用后90天内发生的那些。通过流式细胞术确定药代动力学参数。具有≥30天随访期的所有受试者都包括在所述分析中。
门诊治疗要求包括安全性监测教育以认识寻求医疗关注的关键AE(发热、CRS和NE症状)，在CAR+ T细胞组合物输注后30天中照护者的存在，以及在CAR+ T细胞组合物输注后30天中停留在距护理地点1小时行程时间内。研究地点要求包括在门诊和住院环境中的多学科CAR T细胞疗法团队。在每周7天、每天24小时可用的地点准备计划中记载的在门诊与住院设施之间的CAR T细胞患者护理的后勤和通讯流程，在门诊与住院医疗团队之间的护理协调，用于门诊AE监测的标准操作程序，以及每周7天、每天24小时可用的按需医疗覆盖。住院需要管理CRS、NE和严重AE。
如果受试者在门诊环境中接受CAR+ T细胞输注，或者如果患者在输注当天于观察期结束时离开诊所或出院，则将所述受试者视为“门诊患者”。
基线人口统计学和受试者特征显示于表E35A中，并且安全性的汇总描述于表E35B中。特别关注的不良事件报告于表E35C中，并且在≥20％的受试者中报告的等级TEAE描述于表E35D中。对于组A，在研究期间添加门诊治疗的选择，并且对于组B和C，门诊治疗从研究开始起可用。总体上，9％的受试者(25/286)在实施例1、3、6和13中所述的研究中是作为门诊患者来治疗(组A)，48％(13/27)用于实施例15中的研究(组B)，并且46％(6/13)用于实施例14中的研究(组C)。
Figure BDA0003183097650004111
Figure BDA0003183097650004121
Figure BDA0003183097650004122
Figure BDA0003183097650004123
Figure BDA0003183097650004131
Figure BDA0003183097650004132
Figure BDA0003183097650004141
描述门诊患者(表E35E)和住院患者(表E35F)的住院的汇总。每名受试者的中值住院天数对于组A所有参与者中的住院患者为15.0天(范围，4-98；n＝244)，并且对于根据所有研究的门诊患者为6.0天(范围，2-23；n＝25)，且住院患者的住院时间减少60％。对于组A中的门诊患者，到住院的中值时间是研究第5天(范围3-22)，其中6名(24％)受试者在研究第4天或更早时间住院，并且1名(4％)需要入住ICU。在组A中治疗的所有269名受试者中，19名(7％)需要入住ICU用于毒性管理，其中12名(4％)用于管理CRS和/或NE，并且7名(3％)用于管理其他AE。在门诊环境中的所有亚组中评估功效(表E35G)和药代动力学(表E35H)。来自实施例1、3、6和13中所述研究(也描述于实施例2中)的MCL群组中的患者也已经在门诊环境中进行治疗。
Figure BDA0003183097650004142
Figure BDA0003183097650004151
Figure BDA0003183097650004152
Figure BDA0003183097650004153
Figure BDA0003183097650004161
Figure BDA0003183097650004162
结果证实，患有R/R大B细胞NHL的受试者的子集在门诊环境中成功地用抗CD19CAR+ T细胞治疗并且针对CAR T细胞相关毒性进行监测，包括老年受试者和具有高肿瘤负荷的受试者。所述结果(包括安全性概况，包括所有等级和严重CRS和NE的低比率及其延迟的发作)支持用于用含有抗CD19 CAR表达细胞的组合物治疗的患有R/R B细胞NHL的受试者的门诊施用。结果显示，门诊施用已经在多种临床地点(大学/非大学；双重/单一实体)的多个临床研究中成功执行，其中通过多学科CAR T细胞疗法团队以及适当的患者教育和门诊监测程序安全地管理不良事件，严重毒性(如严重CRS或NE)没有增加。结果还显示，在多样性患者群体(老年、共病、高肿瘤负荷)中，严重CRS和NE以低发生率发生并且是可逆的。结果显示，严重CRS和NE以低发生率发生。早期住院的数量较低，并且41％的受试者在抗CD19CAR+ T细胞输注后的第一个月中不需要住院，并且在极低百分比的受试者(5％)中需要ICU级护理。大多数受试者在此研究中评价的第一时间点(65％)和第二时间点(80％)实现客观反应。
实施例17在来自用于施用抗CD19 CAR表达细胞的受试者的施用前和施用后肿瘤 活检中，通过免疫荧光(IF)和基因表达分析对生物标记的进一步评估
在上文实施例5中所述类似评估的后续分析中，在施用CAR表达T细胞之前和/或之后，在从受试者收集的肿瘤活检中通过多重免疫荧光(IF)和使用RNA剖析的基因表达分析来评估各种生物标记的表达。
A.肿瘤活检样品
肿瘤活检是从来自上文实施例1、3、6和13中所述临床研究的患有复发性或难治性(R/R)弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)的所选受试者收集的，所述受试者接受用抗CD19靶向治疗性CAR+ T细胞组合物治疗，所述肿瘤活检是在治疗前的基线时以及在施用后大约11天(治疗后D11)获得。
B.对细胞标记的评估
使用多重化IF检查来自总计83名受试者的111个活检(n＝58个治疗前；n＝53个输注后D11；28个匹配对)。
使用用于检测的以下三个IF组来评估活检：(1)B细胞(CD19、CD20)和T细胞谱系(CD4、CD8)标记和对CAR+细胞表达的截短的受体(替代标记)具有特异性的抗体，(2)与免疫抑制相关的生物标记(CD163、FoxP3、CD73、IDO1、PD-L1)，以及(3)与免疫细胞功能相关的生物标记(CD3、Ki67、GZMB、PD-1)和对截短的受体具有特异性的抗体。大体上如上文实施例5.B中所述，使用荧光标记的对截短的受体具有特异性的抗体来鉴定肿瘤活检内的CAR表达T细胞。
评估受试者的反应和安全性结果，包括通过在施用CAR+ T细胞后的不同时间点(包括施用后3个月)评估肿瘤负荷，并确定受试者是否具有疾病进展(PD)、疾病稳定(SD)、部分反应(PR)或完全反应(CR)。检查具有完全反应(CR)的最佳总体反应(BOR)的受试者的标记密度差异与疾病进展(PD)之间的潜在相关性。将基线和D11生物标记表达与输注后大约1个月(M1)的早期反应(PD n＝16；CR n＝42)和输注后大约9个月(M9)的持久反应(PD n＝76；CR n＝32；在M1和M9两个时间评价55名受试者)相关联。评估基线和D11生物标记表达密度(在肿瘤和瘤周区域之间存在空间差异)与早期和持久反应之间的相关性。所有比较都是基于中值密度的差异，并且使用通过(未配对)Wilcoxon-Mann-Whitney非参数检验评估的未校正的P值来评价统计学显著性。
在50个基线活检和37个治疗后D11活检(11个匹配对)的重叠子集中进行肿瘤整体RNA剖析。
C.结果
基线活检中与早期反应相关联的生物标记表达信号不同于与9个月(M9)的持久完全反应相关联的那些。发现如与具有早期PD的受试者相比，在基线时高21％的PD-1+ T细胞的存在与实现早期CR(在M1)的受试者相关(P＝0.007)。与在M9具有PD的受试者相比，具有持久CR(在M9)的受试者具有在基线时低39％的肿瘤相关CD163+巨噬细胞的水平(P＝0.019)和高270％的CD73+细胞的水平(P＝0.028)。对治疗后D11活检肿瘤的评价显示，具有早期和持久CR二者的受试者具有高28％的截短的受体+CD8+ T细胞(指示CAR+ T细胞)的水平(P＝0.022)，以及高810％的截短的受体-CD4+(非CAR+ T细胞)的水平(P＝0.009)，但并非截短的受体-CD8+细胞(P＝0.28)。
还研究基线活检与治疗后D11活检之间的标记表达的变化。发现在D11，具有持久CR(在M9)的受试者具有降低的B细胞密度(P＝0.029)和CD8+GZMB+、Ki67+和/或PD1+CAR+细胞(P＝0.001)以及非CAR+ T细胞(P＝0.017)的密度的增加。还观察到相对于基线，在9个月时具有持久CR的受试者在输注后D11具有肿瘤相关CD163+巨噬细胞的29％增加(P＝0.033)。
从允许立体评估和多标记细胞的IF评估观察到的大体趋势与从肿瘤整体RNA测序观察到的那些趋势一致。在具有持久CR的受试者中观察到较低的CD163的基线表达(P＝0.021)和较高的CD73表达(P＝0.054)。另外，在D11具有持久CR的受试者中还观察到升高的CD3E、CD4和CAR序列的表达(P<0.001)，这与对治疗有反应的受试者中更大的内源T细胞和CAR+ T细胞肿瘤浸润一致。相对于基线时的CD163表达，在M9具有CR的受试者展现增加的在D11测量的CD163表达(P<0.001)。
D.结论
结果显示在用抗CD19 CAR表达细胞进行初始治疗后增加的肿瘤特异性CAR+ T细胞的浸润。这些结果与如下结论一致：在初始治疗后增加的肿瘤特异性CAR T+细胞的浸润有助于建立主动免疫应答。此外，另外的功能性内源T细胞(特别是CD4+ T细胞)的募集与持久反应相关。在基线时更高的刺激的和/或功能性T细胞的数量和更低的巨噬细胞数量也与对CAR T+细胞治疗的持久反应相关。这些结果也支持如下观察：反应者中的肿瘤可能具有基线肿瘤微环境(TME)，其中T细胞可以浸润并应答抗原，从而促进CAR T+进入肿瘤中以及内源淋巴细胞的后续募集和刺激，从而支持CAR+ T细胞功能的功能。
本发明并不旨在限于具体公开的实施方案的范围，所提供的实施例例如是为了说明本发明的各个方面。根据本文的描述和传授，对组合物和方法的各种修改将变得清楚。可以在不脱离本公开文本的真实范围和精神的情况下实践这些变化，并且这些变化旨在落入本公开文本的范围内。
序列
Figure BDA0003183097650004201
Figure BDA0003183097650004211
Figure BDA0003183097650004221
Figure BDA0003183097650004231
Figure BDA0003183097650004241
序列表
<110> 朱诺治疗学股份有限公司
<120> 使用过继细胞疗法的治疗方法
<130> 735042019640
<140> 尚未分配
<141> 同时随同提交
<150> 62/774,164
<151> 2018-11-30
<150> 62/776,415
<151> 2018-12-06
<150> 62/847,926
<151> 2019-05-14
<150> 62/854,945
<151> 2019-05-30
<150> 62/890,600
<151> 2019-08-22
<150> 62/931,204
<151> 2019-11-05
<160> 58
<170> 用于Windows的FastSEQ 4.0版
<210> 1
<211> 12
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<220>
<223> 间隔子 (IgG4铰链)
<400> 1
Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro
1 5 10
<210> 2
<211> 36
<212> DNA
<213> 智人（Homo sapiens）
<220>
<223> 间隔子 (IgG4铰链)
<400> 2
gaatctaagt acggaccgcc ctgcccccct tgccct 36
<210> 3
<211> 119
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<220>
<223> 铰链-CH3间隔子
<400> 3
Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Gly Gln Pro Arg
1 5 10 15
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys
20 25 30
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
35 40 45
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
50 55 60
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
65 70 75 80
Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser
85 90 95
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
100 105 110
Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys
115
<210> 4
<211> 229
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<220>
<223> 铰链-CH2-CH3间隔子
<400> 4
Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe
1 5 10 15
Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr
20 25 30
Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val
35 40 45
Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val
50 55 60
Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser
65 70 75 80
Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu
85 90 95
Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser
100 105 110
Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro
115 120 125
Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln
130 135 140
Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala
145 150 155 160
Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr
165 170 175
Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu
180 185 190
Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser
195 200 205
Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser
210 215 220
Leu Ser Leu Gly Lys
225
<210> 5
<211> 282
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<220>
<223> IgD-铰链-Fc
<400> 5
Arg Trp Pro Glu Ser Pro Lys Ala Gln Ala Ser Ser Val Pro Thr Ala
1 5 10 15
Gln Pro Gln Ala Glu Gly Ser Leu Ala Lys Ala Thr Thr Ala Pro Ala
20 25 30
Thr Thr Arg Asn Thr Gly Arg Gly Gly Glu Glu Lys Lys Lys Glu Lys
35 40 45
Glu Lys Glu Glu Gln Glu Glu Arg Glu Thr Lys Thr Pro Glu Cys Pro
50 55 60
Ser His Thr Gln Pro Leu Gly Val Tyr Leu Leu Thr Pro Ala Val Gln
65 70 75 80
Asp Leu Trp Leu Arg Asp Lys Ala Thr Phe Thr Cys Phe Val Val Gly
85 90 95
Ser Asp Leu Lys Asp Ala His Leu Thr Trp Glu Val Ala Gly Lys Val
100 105 110
Pro Thr Gly Gly Val Glu Glu Gly Leu Leu Glu Arg His Ser Asn Gly
115 120 125
Ser Gln Ser Gln His Ser Arg Leu Thr Leu Pro Arg Ser Leu Trp Asn
130 135 140
Ala Gly Thr Ser Val Thr Cys Thr Leu Asn His Pro Ser Leu Pro Pro
145 150 155 160
Gln Arg Leu Met Ala Leu Arg Glu Pro Ala Ala Gln Ala Pro Val Lys
165 170 175
Leu Ser Leu Asn Leu Leu Ala Ser Ser Asp Pro Pro Glu Ala Ala Ser
180 185 190
Trp Leu Leu Cys Glu Val Ser Gly Phe Ser Pro Pro Asn Ile Leu Leu
195 200 205
Met Trp Leu Glu Asp Gln Arg Glu Val Asn Thr Ser Gly Phe Ala Pro
210 215 220
Ala Arg Pro Pro Pro Gln Pro Gly Ser Thr Thr Phe Trp Ala Trp Ser
225 230 235 240
Val Leu Arg Val Pro Ala Pro Pro Ser Pro Gln Pro Ala Thr Tyr Thr
245 250 255
Cys Val Val Ser His Glu Asp Ser Arg Thr Leu Leu Asn Ala Ser Arg
260 265 270
Ser Leu Glu Val Ser Tyr Val Thr Asp His
275 280
<210> 6
<211> 24
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> T2A
<400> 6
Leu Glu Gly Gly Gly Glu Gly Arg Gly Ser Leu Leu Thr Cys Gly Asp
1 5 10 15
Val Glu Glu Asn Pro Gly Pro Arg
20
<210> 7
<211> 357
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> tEGFR
<400> 7
Met Leu Leu Leu Val Thr Ser Leu Leu Leu Cys Glu Leu Pro His Pro
1 5 10 15
Ala Phe Leu Leu Ile Pro Arg Lys Val Cys Asn Gly Ile Gly Ile Gly
20 25 30
Glu Phe Lys Asp Ser Leu Ser Ile Asn Ala Thr Asn Ile Lys His Phe
35 40 45
Lys Asn Cys Thr Ser Ile Ser Gly Asp Leu His Ile Leu Pro Val Ala
50 55 60
Phe Arg Gly Asp Ser Phe Thr His Thr Pro Pro Leu Asp Pro Gln Glu
65 70 75 80
Leu Asp Ile Leu Lys Thr Val Lys Glu Ile Thr Gly Phe Leu Leu Ile
85 90 95
Gln Ala Trp Pro Glu Asn Arg Thr Asp Leu His Ala Phe Glu Asn Leu
100 105 110
Glu Ile Ile Arg Gly Arg Thr Lys Gln His Gly Gln Phe Ser Leu Ala
115 120 125
Val Val Ser Leu Asn Ile Thr Ser Leu Gly Leu Arg Ser Leu Lys Glu
130 135 140
Ile Ser Asp Gly Asp Val Ile Ile Ser Gly Asn Lys Asn Leu Cys Tyr
145 150 155 160
Ala Asn Thr Ile Asn Trp Lys Lys Leu Phe Gly Thr Ser Gly Gln Lys
165 170 175
Thr Lys Ile Ile Ser Asn Arg Gly Glu Asn Ser Cys Lys Ala Thr Gly
180 185 190
Gln Val Cys His Ala Leu Cys Ser Pro Glu Gly Cys Trp Gly Pro Glu
195 200 205
Pro Arg Asp Cys Val Ser Cys Arg Asn Val Ser Arg Gly Arg Glu Cys
210 215 220
Val Asp Lys Cys Asn Leu Leu Glu Gly Glu Pro Arg Glu Phe Val Glu
225 230 235 240
Asn Ser Glu Cys Ile Gln Cys His Pro Glu Cys Leu Pro Gln Ala Met
245 250 255
Asn Ile Thr Cys Thr Gly Arg Gly Pro Asp Asn Cys Ile Gln Cys Ala
260 265 270
His Tyr Ile Asp Gly Pro His Cys Val Lys Thr Cys Pro Ala Gly Val
275 280 285
Met Gly Glu Asn Asn Thr Leu Val Trp Lys Tyr Ala Asp Ala Gly His
290 295 300
Val Cys His Leu Cys His Pro Asn Cys Thr Tyr Gly Cys Thr Gly Pro
305 310 315 320
Gly Leu Glu Gly Cys Pro Thr Asn Gly Pro Lys Ile Pro Ser Ile Ala
325 330 335
Thr Gly Met Val Gly Ala Leu Leu Leu Leu Leu Val Val Ala Leu Gly
340 345 350
Ile Gly Leu Phe Met
355
<210> 8
<211> 27
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<220>
<223> CD28
<300>
<308> UniProt P10747
<309> 1989-07-01
<400> 8
Phe Trp Val Leu Val Val Val Gly Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu
1 5 10 15
Leu Val Thr Val Ala Phe Ile Ile Phe Trp Val
20 25
<210> 9
<211> 66
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<220>
<223> CD28
<300>
<308> UniProt P10747
<309> 1989-07-01
<400> 9
Ile Glu Val Met Tyr Pro Pro Pro Tyr Leu Asp Asn Glu Lys Ser Asn
1 5 10 15
Gly Thr Ile Ile His Val Lys Gly Lys His Leu Cys Pro Ser Pro Leu
20 25 30
Phe Pro Gly Pro Ser Lys Pro Phe Trp Val Leu Val Val Val Gly Gly
35 40 45
Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu Leu Val Thr Val Ala Phe Ile Ile Phe
50 55 60
Trp Val
65
<210> 10
<211> 41
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<220>
<223> CD28
<300>
<308> UniProt P10747
<309> 1989-07-01
<400> 10
Arg Ser Lys Arg Ser Arg Leu Leu His Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr
1 5 10 15
Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro
20 25 30
Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser
35 40
<210> 11
<211> 41
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<220>
<223> CD28
<400> 11
Arg Ser Lys Arg Ser Arg Gly Gly His Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr
1 5 10 15
Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro
20 25 30
Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser
35 40
<210> 12
<211> 42
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<220>
<223> 4-1BB
<300>
<308> UniProt Q07011.1
<309> 1995-02-01
<400> 12
Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met
1 5 10 15
Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe
20 25 30
Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu
35 40
<210> 13
<211> 112
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<220>
<223> CD3ζ
<400> 13
Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly
1 5 10 15
Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr
20 25 30
Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys
35 40 45
Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys
50 55 60
Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg
65 70 75 80
Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala
85 90 95
Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg
100 105 110
<210> 14
<211> 112
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<220>
<223> CD3ζ
<400> 14
Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Glu Pro Pro Ala Tyr Gln Gln Gly
1 5 10 15
Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr
20 25 30
Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys
35 40 45
Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys
50 55 60
Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg
65 70 75 80
Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala
85 90 95
Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg
100 105 110
<210> 15
<211> 112
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<220>
<223> CD3ζ
<400> 15
Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Lys Gln Gly
1 5 10 15
Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr
20 25 30
Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys
35 40 45
Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys
50 55 60
Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg
65 70 75 80
Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala
85 90 95
Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg
100 105 110
<210> 16
<211> 335
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> tEGFR
<400> 16
Arg Lys Val Cys Asn Gly Ile Gly Ile Gly Glu Phe Lys Asp Ser Leu
1 5 10 15
Ser Ile Asn Ala Thr Asn Ile Lys His Phe Lys Asn Cys Thr Ser Ile
20 25 30
Ser Gly Asp Leu His Ile Leu Pro Val Ala Phe Arg Gly Asp Ser Phe
35 40 45
Thr His Thr Pro Pro Leu Asp Pro Gln Glu Leu Asp Ile Leu Lys Thr
50 55 60
Val Lys Glu Ile Thr Gly Phe Leu Leu Ile Gln Ala Trp Pro Glu Asn
65 70 75 80
Arg Thr Asp Leu His Ala Phe Glu Asn Leu Glu Ile Ile Arg Gly Arg
85 90 95
Thr Lys Gln His Gly Gln Phe Ser Leu Ala Val Val Ser Leu Asn Ile
100 105 110
Thr Ser Leu Gly Leu Arg Ser Leu Lys Glu Ile Ser Asp Gly Asp Val
115 120 125
Ile Ile Ser Gly Asn Lys Asn Leu Cys Tyr Ala Asn Thr Ile Asn Trp
130 135 140
Lys Lys Leu Phe Gly Thr Ser Gly Gln Lys Thr Lys Ile Ile Ser Asn
145 150 155 160
Arg Gly Glu Asn Ser Cys Lys Ala Thr Gly Gln Val Cys His Ala Leu
165 170 175
Cys Ser Pro Glu Gly Cys Trp Gly Pro Glu Pro Arg Asp Cys Val Ser
180 185 190
Cys Arg Asn Val Ser Arg Gly Arg Glu Cys Val Asp Lys Cys Asn Leu
195 200 205
Leu Glu Gly Glu Pro Arg Glu Phe Val Glu Asn Ser Glu Cys Ile Gln
210 215 220
Cys His Pro Glu Cys Leu Pro Gln Ala Met Asn Ile Thr Cys Thr Gly
225 230 235 240
Arg Gly Pro Asp Asn Cys Ile Gln Cys Ala His Tyr Ile Asp Gly Pro
245 250 255
His Cys Val Lys Thr Cys Pro Ala Gly Val Met Gly Glu Asn Asn Thr
260 265 270
Leu Val Trp Lys Tyr Ala Asp Ala Gly His Val Cys His Leu Cys His
275 280 285
Pro Asn Cys Thr Tyr Gly Cys Thr Gly Pro Gly Leu Glu Gly Cys Pro
290 295 300
Thr Asn Gly Pro Lys Ile Pro Ser Ile Ala Thr Gly Met Val Gly Ala
305 310 315 320
Leu Leu Leu Leu Leu Val Val Ala Leu Gly Ile Gly Leu Phe Met
325 330 335
<210> 17
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> T2A
<400> 17
Glu Gly Arg Gly Ser Leu Leu Thr Cys Gly Asp Val Glu Glu Asn Pro
1 5 10 15
Gly Pro
<210> 18
<211> 22
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> P2A
<400> 18
Gly Ser Gly Ala Thr Asn Phe Ser Leu Leu Lys Gln Ala Gly Asp Val
1 5 10 15
Glu Glu Asn Pro Gly Pro
20
<210> 19
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> P2A
<400> 19
Ala Thr Asn Phe Ser Leu Leu Lys Gln Ala Gly Asp Val Glu Glu Asn
1 5 10 15
Pro Gly Pro
<210> 20
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> E2A
<400> 20
Gln Cys Thr Asn Tyr Ala Leu Leu Lys Leu Ala Gly Asp Val Glu Ser
1 5 10 15
Asn Pro Gly Pro
20
<210> 21
<211> 22
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> F2A
<400> 21
Val Lys Gln Thr Leu Asn Phe Asp Leu Leu Lys Leu Ala Gly Asp Val
1 5 10 15
Glu Ser Asn Pro Gly Pro
20
<210> 22
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 接头
<220>
<221> 重复
<222> (5)...(9)
<223> SGGGG重复5次
<400> 22
Pro Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly
1 5
<210> 23
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 接头
<400> 23
Gly Ser Ala Asp Asp Ala Lys Lys Asp Ala Ala Lys Lys Asp Gly Lys
1 5 10 15
Ser
<210> 24
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 接头
<400> 24
Gly Ser Thr Ser Gly Ser Gly Lys Pro Gly Ser Gly Glu Gly Ser Thr
1 5 10 15
Lys Gly
<210> 25
<211> 735
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> scFv
<400> 25
gacatccaga tgacccagac cacctccagc ctgagcgcca gcctgggcga ccgggtgacc 60
atcagctgcc gggccagcca ggacatcagc aagtacctga actggtatca gcagaagccc 120
gacggcaccg tcaagctgct gatctaccac accagccggc tgcacagcgg cgtgcccagc 180
cggtttagcg gcagcggctc cggcaccgac tacagcctga ccatctccaa cctggaacag 240
gaagatatcg ccacctactt ttgccagcag ggcaacacac tgccctacac ctttggcggc 300
ggaacaaagc tggaaatcac cggcagcacc tccggcagcg gcaagcctgg cagcggcgag 360
ggcagcacca agggcgaggt gaagctgcag gaaagcggcc ctggcctggt ggcccccagc 420
cagagcctga gcgtgacctg caccgtgagc ggcgtgagcc tgcccgacta cggcgtgagc 480
tggatccggc agccccccag gaagggcctg gaatggctgg gcgtgatctg gggcagcgag 540
accacctact acaacagcgc cctgaagagc cggctgacca tcatcaagga caacagcaag 600
agccaggtgt tcctgaagat gaacagcctg cagaccgacg acaccgccat ctactactgc 660
gccaagcact actactacgg cggcagctac gccatggact actggggcca gggcaccagc 720
gtgaccgtga gcagc 735
<210> 26
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 铰链
<220>
<221> 变体
<222> (1)...(1)
<223> Xaa = 甘氨酸、半胱氨酸或精氨酸
<220>
<221> 变体
<222> (4)...(4)
<223> Xaa = 半胱氨酸或苏氨酸
<400> 26
Xaa Pro Pro Xaa Pro
1 5
<210> 27
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 铰链
<400> 27
Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro
1 5 10 15
<210> 28
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 铰链
<400> 28
Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro
1 5 10
<210> 29
<211> 61
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 铰链
<400> 29
Glu Leu Lys Thr Pro Leu Gly Asp Thr His Thr Cys Pro Arg Cys Pro
1 5 10 15
Glu Pro Lys Ser Cys Asp Thr Pro Pro Pro Cys Pro Arg Cys Pro Glu
20 25 30
Pro Lys Ser Cys Asp Thr Pro Pro Pro Cys Pro Arg Cys Pro Glu Pro
35 40 45
Lys Ser Cys Asp Thr Pro Pro Pro Cys Pro Arg Cys Pro
50 55 60
<210> 30
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 铰链
<400> 30
Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Ser Cys Pro
1 5 10
<210> 31
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 铰链
<400> 31
Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro
1 5 10
<210> 32
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 铰链
<400> 32
Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro
1 5
<210> 33
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 铰链
<400> 33
Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro
1 5 10
<210> 34
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 铰链
<400> 34
Glu Val Val Val Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro
1 5 10
<210> 35
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDR L1
<400> 35
Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Lys Tyr Leu Asn
1 5 10
<210> 36
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDR L2
<400> 36
Ser Arg Leu His Ser Gly Val
1 5
<210> 37
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDR L3
<400> 37
Gly Asn Thr Leu Pro Tyr Thr Phe Gly
1 5
<210> 38
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDR H1
<400> 38
Asp Tyr Gly Val Ser
1 5
<210> 39
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDR H2
<400> 39
Val Ile Trp Gly Ser Glu Thr Thr Tyr Tyr Asn Ser Ala Leu Lys Ser
1 5 10 15
<210> 40
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDR H3
<400> 40
Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly
1 5
<210> 41
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> VH
<400> 41
Glu Val Lys Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala Pro Ser Gln
1 5 10 15
Ser Leu Ser Val Thr Cys Thr Val Ser Gly Val Ser Leu Pro Asp Tyr
20 25 30
Gly Val Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Arg Lys Gly Leu Glu Trp Leu
35 40 45
Gly Val Ile Trp Gly Ser Glu Thr Thr Tyr Tyr Asn Ser Ala Leu Lys
50 55 60
Ser Arg Leu Thr Ile Ile Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln Val Phe Leu
65 70 75 80
Lys Met Asn Ser Leu Gln Thr Asp Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Lys His Tyr Tyr Tyr Gly Gly Ser Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 42
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> VL
<400> 42
Asp Ile Gln Met Thr Gln Thr Thr Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Lys Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gly Thr Val Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr His Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Asn Leu Glu Gln
65 70 75 80
Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Gly Asn Thr Leu Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Thr
100 105
<210> 43
<211> 245
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> scFv
<400> 43
Asp Ile Gln Met Thr Gln Thr Thr Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Lys Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gly Thr Val Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr His Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Asn Leu Glu Gln
65 70 75 80
Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Gly Asn Thr Leu Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Thr Gly Ser Thr Ser Gly
100 105 110
Ser Gly Lys Pro Gly Ser Gly Glu Gly Ser Thr Lys Gly Glu Val Lys
115 120 125
Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala Pro Ser Gln Ser Leu Ser
130 135 140
Val Thr Cys Thr Val Ser Gly Val Ser Leu Pro Asp Tyr Gly Val Ser
145 150 155 160
Trp Ile Arg Gln Pro Pro Arg Lys Gly Leu Glu Trp Leu Gly Val Ile
165 170 175
Trp Gly Ser Glu Thr Thr Tyr Tyr Asn Ser Ala Leu Lys Ser Arg Leu
180 185 190
Thr Ile Ile Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln Val Phe Leu Lys Met Asn
195 200 205
Ser Leu Gln Thr Asp Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys Ala Lys His Tyr
210 215 220
Tyr Tyr Gly Gly Ser Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser
225 230 235 240
Val Thr Val Ser Ser
245
<210> 44
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDR L1
<400> 44
Lys Ala Ser Gln Asn Val Gly Thr Asn Val Ala
1 5 10
<210> 45
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDR L2
<400> 45
Ser Ala Thr Tyr Arg Asn Ser
1 5
<210> 46
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDR L3
<400> 46
Gln Gln Tyr Asn Arg Tyr Pro Tyr Thr
1 5
<210> 47
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDR H1
<400> 47
Ser Tyr Trp Met Asn
1 5
<210> 48
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDR H2
<400> 48
Gln Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asn Tyr Asn Gly Lys Phe Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 49
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDR H3
<400> 49
Lys Thr Ile Ser Ser Val Val Asp Phe Tyr Phe Asp Tyr
1 5 10
<210> 50
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> VH
<400> 50
Glu Val Lys Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Trp Met Asn Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Gln Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asn Tyr Asn Gly Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Gln Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Ser Gly Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Lys Thr Ile Ser Ser Val Val Asp Phe Tyr Phe Asp Tyr Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 51
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> VL
<400> 51
Asp Ile Glu Leu Thr Gln Ser Pro Lys Phe Met Ser Thr Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Ser Val Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asn Val Gly Thr Asn
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Pro Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Ala Thr Tyr Arg Asn Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Thr Asn Val Gln Ser
65 70 75 80
Lys Asp Leu Ala Asp Tyr Phe Cys Gln Gln Tyr Asn Arg Tyr Pro Tyr
85 90 95
Thr Ser Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg
100 105
<210> 52
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 接头
<400> 52
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
1 5 10 15
<210> 53
<211> 245
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> scFv
<400> 53
Glu Val Lys Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Trp Met Asn Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Gln Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asn Tyr Asn Gly Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Gln Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Ser Gly Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Lys Thr Ile Ser Ser Val Val Asp Phe Tyr Phe Asp Tyr Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
115 120 125
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Glu Leu Thr Gln Ser
130 135 140
Pro Lys Phe Met Ser Thr Ser Val Gly Asp Arg Val Ser Val Thr Cys
145 150 155 160
Lys Ala Ser Gln Asn Val Gly Thr Asn Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys
165 170 175
Pro Gly Gln Ser Pro Lys Pro Leu Ile Tyr Ser Ala Thr Tyr Arg Asn
180 185 190
Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe
195 200 205
Thr Leu Thr Ile Thr Asn Val Gln Ser Lys Asp Leu Ala Asp Tyr Phe
210 215 220
Cys Gln Gln Tyr Asn Arg Tyr Pro Tyr Thr Ser Gly Gly Gly Thr Lys
225 230 235 240
Leu Glu Ile Lys Arg
245
<210> 54
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDR H3
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His Tyr Tyr Tyr Gly Gly Ser Tyr Ala Met Asp Tyr
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<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDR L2
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His Thr Ser Arg Leu His Ser
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<212> PRT
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<220>
<223> CDR L3
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Gln Gln Gly Asn Thr Leu Pro Tyr Thr
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<210> 57
<211> 22
<212> DNA
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<220>
<223> IGH引物
<400> 57
acacggcctc gtgtattact gt 22
<210> 58
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> IGH引物
<400> 58
acctgaggag acggtgacc 19

Claims (176)

1.一种治疗患有或怀疑患有疾病或病症的受试者的方法，所述疾病或病症是复发性或难治性大B细胞淋巴瘤(r/r LBCL)，所述方法包括向所述受试者施用一定剂量的CD4+和CD8+T细胞，其中每个剂量的T细胞包含与CD19特异性结合的嵌合抗原受体(CAR)，其中：
T细胞的所述剂量包含为或约1x107个CAR表达T细胞与为或约2x108个CAR表达T细胞之间，包含端值；
T细胞的所述剂量包含大约1:1比率的表达所述CAR的CD4+T细胞与表达所述CAR的CD8+T细胞；并且
所述施用包括施用多种单独组合物，其中所述多种单独组合物包含含有CD8+T细胞的第一组合物和含有CD4+T细胞的第二组合物。
2.根据权利要求1所述的方法，其中所述大B细胞淋巴瘤选自侵袭性非霍奇金淋巴瘤(NHL)、弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)(任选地DLBCL NOS(从头的或从惰性转化的))、高级别B细胞淋巴瘤(HGBCL)、双/三打击淋巴瘤、原发性纵隔大B细胞淋巴瘤(PMBCL)、套细胞淋巴瘤(MCL)、转化的滤泡性淋巴瘤(tFL)、和/或滤泡性淋巴瘤(FL)，任选地3B级滤泡性淋巴瘤(FL3B)。
3.根据权利要求1或权利要求2所述的方法，其中所述大B细胞淋巴瘤是弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)。
4.根据权利要求3所述的方法，其中所述DLBCL是DLBCL NOS、从头DLBCL或从惰性淋巴瘤转化的DLBCL。
5.根据权利要求3或权利要求4所述的方法，其中所述DLBCL是从头DLBCL。
6.根据权利要求3或权利要求4所述的方法，其中所述DLBCL是从除了FL以外的惰性淋巴瘤转化的DLBCL。
7.根据权利要求3或权利要求4所述的方法，其中所述DLBCL是从边缘区淋巴瘤转化的DLBCL(tMZL)或从慢性淋巴细胞白血病转化的DLBCL(tCLL；里希特氏)。
8.根据权利要求1或权利要求2所述的方法，其中所述大B细胞淋巴瘤是高级别B细胞淋巴瘤(HGBCL)。
9.根据权利要求1、2和8中任一项所述的方法，其中所述HGBCL具有MYC和BCL2和/或BCL6重排。
10.根据权利要求1、2、8和9中任一项所述的方法，其中所述HGBCL具有DLBCL组织学。
11.根据权利要求1或权利要求2所述的方法，其中所述大B细胞淋巴瘤是双/三打击淋巴瘤。
12.根据权利要求1或权利要求2所述的方法，其中所述大B细胞淋巴瘤是原发性纵隔B细胞淋巴瘤(PMBCL)。
13.根据权利要求1或权利要求2所述的方法，其中所述大B细胞淋巴瘤是套细胞淋巴瘤(MCL)。
14.根据权利要求1或权利要求2所述的方法，其中所述大B细胞淋巴瘤不是原发性中枢神经系统淋巴瘤(PCNSL)。
15.根据权利要求1或权利要求2所述的方法，其中所述大B细胞淋巴瘤是转化的滤泡性淋巴瘤(tFL)。
16.根据权利要求1或权利要求2所述的方法，其中所述大B细胞淋巴瘤是滤泡性淋巴瘤(FL)。
17.一种治疗方法，其中所述方法包括：
(a)选择患有滤泡性淋巴瘤(FL)的受试者用于治疗；
(b)向所述受试者施用一定剂量的T细胞，所述剂量包含表达与FL或其细胞或组织表达的和/或与FL相关的抗原特异性结合的重组受体的T细胞。
18.根据权利要求17所述的方法，其中T细胞的所述剂量包含一定剂量的CD4+和CD8+T细胞，其中每个剂量的T细胞包含与FL或其细胞或组织表达的和/或与FL相关的抗原特异性结合的重组受体，其中所述施用包括施用多种单独组合物，其中所述多种单独组合物包含含有CD8+T细胞的第一组合物和含有CD4+T细胞的第二组合物。
19.根据权利要求17或权利要求18所述的方法，其中所述重组受体是嵌合抗原受体(CAR)。
20.根据权利要求17-19中任一项所述的方法，其中所述抗原是CD19。
21.根据权利要求18-20中任一项所述的方法，其中所述方法包括，在施用细胞的所述剂量之前，鉴定或选择用于施用细胞的所述剂量的受试者，所述受试者患有滤泡性淋巴瘤(FL)。
22.根据权利要求16-21中任一项所述的方法，其中所述FL与滤泡内CD10、BCL6和BCL2的共表达和/或t(14；18)/(q32；q21)(IGH-BCL2)和/或BCL6重排相关。
23.根据权利要求16-22中任一项所述的方法，其中所述FL是3B级滤泡性淋巴瘤(FL3B)。
24.根据权利要求1-23中任一项所述的方法，其中，在施用细胞的所述剂量时或紧临施用细胞的所述剂量的时间之前，所述受试者在用除了另一剂量的表达CAR的细胞以外的用于所述疾病或病症的两种或更多种先前疗法治疗后于缓解后已经复发，或者变得用所述先前疗法难以治疗。
25.根据权利要求1-24中任一项所述的方法，其中，在施用细胞的所述剂量时或紧临施用细胞的所述剂量的时间之前，所述受试者在用除了另一剂量的表达CAR的细胞以外的用于所述疾病或病症的三种或更多种先前疗法治疗后于缓解后已经复发，或者变得用所述先前疗法难以治疗。
26.根据权利要求1-25中任一项所述的方法，其中，在施用细胞的所述剂量时或紧临施用细胞的所述剂量的时间之前，所述受试者在用除了另一剂量的表达CAR的细胞以外的用于所述疾病或病症的四种或更多种先前疗法治疗后于缓解后已经复发，或者变得用所述先前疗法难以治疗。
27.根据权利要求24-26中任一项所述的方法，其中所述先前疗法包括蒽环类药物和CD20靶向剂。
28.根据权利要求27所述的方法，其中所述一种或多种CD20靶向剂包括利妥昔单抗。
29.根据权利要求27或权利要求28所述的方法，其中所述一种或多种CD20靶向剂包括R-CHOP(利妥昔单抗、环磷酰胺、盐酸多柔比星(羟基柔红霉素)、硫酸长春新碱(oncovin)和泼尼松)。
30.根据权利要求24-29中任一项所述的方法，其中，如果所述先前疗法是先前CD19靶向疗法，则在所述先前CD19靶向疗法后从所述受试者获得的生物样品包含表达CD19的细胞。
31.根据权利要求24-30中任一项所述的方法，其中所述先前疗法包括同种异体或自体造血干细胞移植(HSCT)。
32.根据权利要求31所述的方法，其中所述受试者在接受所述HSCT后1年或小于1年内复发。
33.根据权利要求24-32中任一项所述的方法，其中所述受试者尚未响应于所述先前疗法实现完全缓解(CR)。
34.根据权利要求1-33中任一项所述的方法，其中，在施用细胞的所述剂量之时或之前，所述受试者已经被鉴定为患有侵袭性疾病或高风险疾病或者被鉴定为具有不良预后。
35.根据权利要求1-34中任一项所述的方法，其中，在施用细胞的所述剂量之时或之前，所述受试者已经在化学疗法后被鉴定为患有化疗难治性疾病或者患有持续性或复发性疾病。
36.根据权利要求1-35中任一项所述的方法，其中，在施用细胞的所述剂量之时或之前，所述受试者已经被鉴定为患有化疗难治性淋巴瘤，任选地化疗难治性DLBCL。
37.根据权利要求1-36中任一项所述的方法，其中，在施用细胞的所述剂量之时或之前，所述受试者已经被鉴定为患有与中枢神经系统(CNS)受累相关或涉及中枢神经系统(CNS)受累的淋巴瘤或继发性CNS淋巴瘤。
38.根据权利要求1-37中任一项所述的方法，其中：
在施用细胞的所述剂量之时或之前，所述受试者被鉴定为或已经被鉴定为患有与中枢神经系统(CNS)受累相关或涉及中枢神经系统(CNS)受累的淋巴瘤或继发性CNS淋巴瘤；和/或
至少70％、至少80％、至少90％或至少95％的根据所述方法治疗并在施用细胞的所述剂量之时或之前展现或被鉴定为展现具有CNS受累的淋巴瘤或继发性CNS淋巴瘤的受试者实现所述CNS疾病的消退。
39.根据权利要求1-38中任一项所述的方法，其中所述受试者的年龄是65岁或更老。
40.根据权利要求1-39中任一项所述的方法，其中在所治疗的受试者中，大于或大于约35％、大于或大于约40％、大于或大于约45％或大于或大于约50％或任何前述值之间的任何值的受试者的年龄是65岁或更老。
41.根据权利要求1-39中任一项所述的方法，其中所述受试者的年龄是70岁或更老。
42.根据权利要求1-41中任一项所述的方法，其中，在施用细胞的所述剂量之时或之前，所述受试者被鉴定为或已经被鉴定为患有心脏功能受损，任选地左心室射血分数(LVEF)小于或小于约50％。
43.根据权利要求1-42中任一项所述的方法，其中，在施用细胞的所述剂量之时或之前，所述受试者被鉴定为或已经被鉴定为患有肾功能受损，任选地计算的肌酐清除率小于或小于约60mL/min。
44.根据权利要求1-43中任一项所述的方法，其中，在施用细胞的所述剂量之时或之前，所述受试者被鉴定为或已经被鉴定为患有肺功能受损，任选地肺一氧化碳弥散量(DLCO)是为或约60％或更低。
45.根据权利要求1-44中任一项所述的方法，其中，在施用细胞的所述剂量之时或之前，所述受试者被鉴定为或已经被鉴定为患有肝功能受损，任选地天冬氨酸转氨酶(AST)和丙氨酸转氨酶(ALT)超过正常值上限(ULN)的两倍或约两倍。
46.根据权利要求1-45中任一项所述的方法，其中，在施用细胞的剂量之时或之前，所述受试者已经在进行白细胞单采术以产生CD4+和CD8+T细胞的所述剂量的时间与CD4+和CD8+T细胞的所述剂量的施用之间接受桥接化学疗法。
47.根据权利要求1-46中任一项所述的方法，其中，在施用细胞的所述剂量之时或之前，所述受试者已经在先前疗法后接受桥接化学疗法用于疾病控制。
48.根据权利要求46或权利要求47所述的方法，其中所述桥接化学疗法选自以下中的一种或多种：利妥昔单抗-吉西他滨+奥沙利铂、地塞米松、放射疗法、利妥昔单抗、泼尼松、BR、来那度胺、吉西他滨+奥沙利铂、维汀-本妥昔单抗、依鲁替尼、苯达莫司汀和/或吉西他滨+利妥昔单抗。
49.根据权利要求1-48中任一项所述的方法，其中，在施用细胞的所述剂量时或紧临施用细胞的所述剂量的时间之前，所述受试者无资格或已经被鉴定为无资格进行高剂量化学疗法。
50.根据权利要求1-49中任一项所述的方法，其中，在施用细胞的所述剂量时或紧临施用细胞的所述剂量的时间之前，所述受试者无资格或已经被鉴定为无资格进行造血干细胞移植(HSCT)。
51.根据权利要求49或权利要求50所述的方法，其中，在施用细胞的所述剂量时或紧临施用细胞的所述剂量的时间之前，所述受试者无资格或已经被鉴定为无资格进行高剂量化学疗法和造血干细胞移植(HSCT)二者。
52.根据权利要求1-51中任一项所述的方法，其中，在施用细胞的所述剂量时或紧临施用细胞的所述剂量的时间之前，所述受试者无资格或已经被鉴定为无资格进行高剂量化学疗法和造血干细胞移植(HSCT)二者，并且所述受试者在用除了另一剂量的表达CAR的细胞以外的用于所述疾病或病症的一种先前疗法治疗后于缓解后已经复发，或者变得用所述先前疗法难以治疗。
53.根据权利要求1-52中任一项所述的方法，其中所述受试者被鉴定为或已经被鉴定为东部肿瘤协作组体能状态(ECOGPS)为0、1或2。
54.根据权利要求1-53中任一项所述的方法，其中所述受试者被鉴定为或已经被鉴定为东部肿瘤协作组体能状态(ECOGPS)为0或1。
55.根据权利要求1-53中任一项所述的方法，其中所述受试者被鉴定为或已经被鉴定为东部肿瘤协作组体能状态(ECOGPS)为2。
56.根据权利要求1-55中任一项所述的方法，其中，在施用细胞的所述剂量之前，所述受试者被鉴定为或已经被鉴定为所述受试者的肿瘤的尺寸乘积之和(SPD)是为或约50cm2或更大。
57.根据权利要求1-55中任一项所述的方法，其中，在施用细胞的所述剂量之时或之前，所述受试者患有正电子发射断层摄影术(PET)阳性疾病。
58.根据权利要求1-56中任一项所述的方法，其中在施用细胞的所述剂量之前，鉴定或选择用于施用细胞的所述剂量的受试者。
59.根据权利要求1-57中任一项所述的方法，其中所述方法包括，在施用细胞的所述剂量之前，鉴定或选择用于施用细胞的所述剂量的受试者，所述受试者具有或者是：
复发性或难治性大B细胞淋巴瘤；和/或
蒽环类药物和一种或多种CD20靶向剂；和/或
在两个或更多个治疗线后或在自体HSCT后的复发性或难治性疾病；和/或
ECOG体能状态为0、1或2；和/或
如果所述受试者已经接受了先前CD19靶向疗法，则在所述先前CD19靶向疗法后从所述受试者获得的生物样品包含表达CD19的细胞。
60.根据权利要求1-57中任一项所述的方法，其中所述方法包括，在施用细胞的所述剂量之前，鉴定或选择用于施用细胞的所述剂量的受试者，所述受试者具有或者是：
年龄为70岁或更老；和/或
ECOG体能状态为2；和/或
肺功能受损，任选地肺一氧化碳弥散量(DLCO)是为或约60％或更低；和/或
心脏功能受损，任选地左心室射血分数(LVEF)小于或小于约50％；和/或
肾功能受损，任选地计算的肌酐清除率小于或小于约60mL/min；和/或
肝功能受损，任选地天冬氨酸转氨酶(AST)和丙氨酸转氨酶(ALT)超过正常值上限(ULN)的两倍或约两倍。
61.根据权利要求1-57中任一项所述的方法，其中所述方法包括，在施用细胞的所述剂量之前，鉴定或选择用于施用细胞的所述剂量的受试者，所述受试者患有：
双/三打击淋巴瘤；
化疗难治性淋巴瘤，任选地化疗难治性DLBCL；
尚未响应于用于治疗所述恶性肿瘤、任选地NHL的先前疗法实现完全缓解(CR)；和/或
在接受自体干细胞移植(ASCT)后1年或小于1年内复发；和/或
患有与中枢神经系统(CNS)受累相关或涉及中枢神经系统(CNS)受累的淋巴瘤。
62.根据权利要求1-61中任一项所述的方法，其中T细胞的所述剂量富集CD3+T细胞、CD4+T细胞、CD8+T细胞或者CD4+T细胞和CD8+T细胞，任选地其中T细胞的所述剂量中大于或大于约70％、75％、80％、85％、90％、95％或98％的细胞是CD3+T细胞、CD4+T细胞、CD8+T细胞或者CD4+T细胞和CD8+T细胞。
63.根据权利要求1-17和19-62中任一项所述的方法，其中开始施用所述第一组合物是在开始施用所述第二组合物之前进行。
64.根据权利要求1-17和19-63中任一项所述的方法，其中所述第一组合物的施用和所述第二组合物的施用是相隔不超过48小时进行的。
65.根据权利要求1-17和19-64中任一项所述的方法，其中所述第一组合物的施用和所述第二组合物的施用是相隔不超过36小时、相隔不超过24小时、相隔不超过12小时、相隔不超过6小时、相隔不超过4小时、相隔不超过2小时、相隔不超过1小时或相隔不超过30分钟进行的。
66.根据权利要求1-17和19-64中任一项所述的方法，其中：
所述第一组合物的施用和所述第二组合物的施用是在同一天进行的，是相隔约0与约12小时之间、相隔约0与约6小时之间或相隔约0至2小时之间进行的；或者
开始施用所述第一组合物和开始施用所述第二组合物是相隔约1分钟与约1小时之间或相隔约5分钟与约30分钟之间进行的。
67.根据权利要求1-17和19-64中任一项所述的方法，其中将所述第一组合物和所述第二组合物相隔不超过2小时、不超过1小时、不超过30分钟、不超过15分钟、不超过10分钟或不超过5分钟施用。
68.根据权利要求1-67中任一项所述的方法，其中所述CD4+T细胞包含的重组受体和/或所述CD8+T细胞包含的重组受体是相同的重组受体，和/或其中所述CD4+T细胞和/或所述CD8+T细胞被基因工程化以表达相同的重组受体。
69.根据权利要求1-68中任一项所述的方法，其中CD4+和CD8+T细胞的所述剂量包含：
在为或约2.5x107个与为或约1.5x108个之间的总重组受体表达T细胞，包含端值；
在为或约5x107个与为或约1x108个之间的总重组受体表达T细胞，包含端值；
为或约5x107个总重组受体表达T细胞；
为或约1x108个总重组受体表达T细胞；或者
为或约1.5x108个总重组受体表达T细胞。
70.根据权利要求1-69中任一项所述的方法，其中CD4+和CD8+T细胞的所述剂量包含为或约5x107个总重组受体表达T细胞。
71.根据权利要求1-69中任一项所述的方法，其中CD4+和CD8+T细胞的所述剂量包含为或约1x108个总重组受体表达T细胞。
72.根据权利要求1-69中任一项所述的方法，其中CD4+和CD8+T细胞的所述剂量包含为或约1.5x108个总重组受体表达T细胞。
73.根据权利要求1-69中任一项所述的方法，其中CD4+和CD8+T细胞的所述剂量包含：
在为或约1.25x107个与为或约7.5x107个之间的重组受体表达CD8+T细胞，包含端值；
在为或约2.5x107个与为或约5x107个之间的重组受体表达CD8+T细胞，包含端值；
为或约2.5x107个重组受体表达CD8+T细胞；
为或约5x107个重组受体表达CD8+T细胞；或者
为或约7.5x107个重组受体表达CD8+T细胞。
74.根据权利要求1-69、70和73中任一项所述的方法，其中CD4+和CD8+T细胞的所述剂量包含为或约2.5x107个重组受体表达CD8+T细胞。
75.根据权利要求1-69、71和73中任一项所述的方法，其中CD4+和CD8+T细胞的所述剂量包含为或约5x107个重组受体表达CD8+T细胞。
76.根据权利要求1-69、72和73中任一项所述的方法，其中CD4+和CD8+T细胞的所述剂量包含为或约7.5x107个重组受体表达CD8+T细胞。
77.根据权利要求1-76中任一项所述的方法，其中，在所述施用前，已经用包括施用氟达拉滨和/或环磷酰胺的淋巴细胞清除疗法对所述受试者进行了预调理。
78.根据权利要求1-77中任一项所述的方法，其中所述方法还包括，紧临施用所述细胞的剂量之前，向所述受试者施用包括施用氟达拉滨和/或环磷酰胺的淋巴细胞清除疗法。
79.根据权利要求77或权利要求78所述的方法，其中细胞的所述剂量和/或所述淋巴细胞清除疗法的施用是通过门诊递送来进行。
80.根据权利要求79所述的方法，其中细胞的所述剂量和/或所述淋巴细胞清除疗法的施用是在非三级护理中心中进行。
81.根据权利要求1-80中任一项所述的方法，其中：
所述施用和任何随访是在门诊基础上和/或不需要住院或在医院过夜停留的情况下进行；并且
如果所述受试者展现持续的发热或在用退热药治疗后没有被或尚未被降低或降低超过1℃的发热，则使所述受试者住院或在医院停留过夜和/或向所述受试者施用用于治疗或预防或降低或减弱神经毒性和/或细胞因子释放综合征或其风险的药剂或治疗。
82.根据权利要求1-81中任一项所述的方法，其中在开始施用细胞的所述剂量之前，尚未向所述受试者施用用于治疗或预防或降低或减弱神经毒性和/或细胞因子释放综合征或其风险的药剂或治疗。
83.根据权利要求1-82中任一项所述的方法，其还包括向所述受试者施用用于治疗或预防或降低或减弱神经毒性和/或细胞因子释放综合征或其风险的药剂或治疗。
84.根据权利要求81-83中任一项所述的方法，其中所述药剂是或包含抗IL-6抗体、抗IL-6受体抗体或类固醇。
85.根据权利要求81-84中任一项所述的方法，其中所述药剂是或包含托珠单抗、司妥昔单抗、地塞米松或甲基泼尼松龙。
86.根据权利要求81-85中任一项所述的方法，其中所述药剂是或包含托珠单抗。
87.根据权利要求81-85中任一项所述的方法，其中所述药剂是或包含地塞米松。
88.根据权利要求1-87中任一项所述的方法，其中，在施用细胞的所述剂量之时或之前：
所述受试者用或已经用蒽环类药物和一种或多种CD20靶向剂进行治疗；和/或
所述受试者在两个或更多个治疗线后或在自体HSCT后复发或患有难治性疾病；和/或
所述受试者被鉴定为或已经被鉴定为ECOG体能状态为0、1或2；和/或
如果所述受试者已经接受了先前CD19靶向疗法，则在所述先前CD19靶向疗法后从所述受试者获得的生物样品包含表达CD19的细胞；并且
细胞的所述剂量的施用是通过门诊递送来进行。
89.根据权利要求1-88中任一项所述的方法，其中所述T细胞是从受试者获得的原代T细胞。
90.根据权利要求1-89中任一项所述的方法，其中所述T细胞对于所述受试者是自体的。
91.根据权利要求1-90中任一项所述的方法，其中，至少40％、至少50％、至少60％、至少70％的在施用细胞的所述剂量之时或之前患有或被鉴定为患有双/三打击淋巴瘤或者在施用自体干细胞移植(ASCT)后复发的受试者实现OR或者持续等于或大于3个月或等于或大于6个月的OR。
92.根据权利要求1-91中任一项所述的方法，其中：
至少35％、至少40％或至少50％的根据所述方法治疗的受试者实现完全反应(CR)；
至少60％、70％、80％、90％或95％的实现CR的受试者展现持续等于或大于3个月或等于或大于6个月的CR；和/或
至少60％、70％、80％、90％或95％的截至一个月和/或截至3个月实现CR的受试者在实现所述CR后保持反应，保持CR，和/或存活或无进展存活，持续等于或大于3个月和/或等于或大于6个月和/或等于或大于9个月；和/或
至少50％、至少60％或至少70％的根据所述方法治疗的受试者实现客观反应(OR)；
至少60％、70％、80％、90％或95％的实现OR的受试者展现持续等于或大于3个月或等于或大于6个月的OR；和/或
至少35％、至少40％或至少50％的实现OR的受试者在实现所述OR后保持反应或存活，持续等于或大于3个月和/或等于或大于6个月；和/或
至少40％、至少50％、至少60％、至少70％的在施用细胞的所述剂量之时或之前患有或被鉴定为患有双/三打击淋巴瘤或者在施用自体干细胞移植(ASCT)后复发的受试者实现OR或持续等于或大于3个月或等于或大于6个月的OR。
93.根据权利要求1-92中任一项所述的方法，其中：
至少50％的根据所述方法治疗的受试者实现完全反应(CR)；
至少60％的实现CR的受试者展现持续等于或大于6个月的CR；和/或
至少60％的截至1个月和/或截至3个月实现CR的受试者在实现所述CR后保持反应，保持CR，和/或存活或无进展存活，持续等于或大于6个月；和/或
至少70％的根据所述方法治疗的受试者实现客观反应(OR)；
至少60％的实现OR的受试者展现持续等于或大于6个月的OR；和/或
至少50％的实现OR的受试者在实现所述OR后保持反应或存活，持续等于或大于6个月；和/或
至少40％的在施用细胞的所述剂量之时或之前患有或被鉴定为患有双/三打击淋巴瘤或者在施用自体干细胞移植(ASCT)后复发的受试者实现OR，或者持续等于或大于3个月的OR。
94.根据权利要求1-93中任一项所述的方法，其中所述细胞对于所述受试者是自体的，并且
对于所述疗法的产生，不要求和/或指定单采术的最小绝对淋巴细胞计数(ALC)；和/或
所述细胞是通过如下过程产生，所述过程对于至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的患有所述疾病或病症的受试者或所选受试者群体，能够生成用于根据所述方法施用的细胞产物。
95.根据权利要求92-94中任一项所述的方法，其中：
所述CR或所述OR持续超过3个月或超过6个月；和/或
至少20％、至少25％、至少35％、至少40％或至少50％的根据所述方法治疗的受试者实现持续大于3个月或大于6个月的CR；和/或
至少60％、70％、80％、90％或95％的用所述方法治疗并实现CR的受试者保持CR或保持反应或保持存活，持续等于或大于3个月或等于或大于6个月或等于或大于9个月；和/或
至少60％、70％、80％、90％或95％的用所述方法治疗并截至一个月和/或截至3个月实现CR的受试者保持反应，保持CR，和/或存活或无进展存活，持续等于或大于3个月和/或等于或大于6个月和/或等于或大于9个月；和/或
至少50％、至少60％或至少70％的根据所述方法治疗的受试者实现客观反应(OR)；
至少60％、70％、80％、90％或95％的受试者实现持续等于或大于3个月或等于或大于6个月的OR；和/或
至少至少35％、至少40％或至少50％的用所述方法治疗并实现OR的受试者保持反应或存活，持续等于或大于3个月和/或等于或大于6个月。
96.根据权利要求1-95中任一项所述的方法，其中：
至少35％、至少40％或至少50％的根据所述方法治疗的受试者实现CNS疾病的完全反应(CR)或缓解；
至少60％、70％、80％、90％或95％的实现CR的受试者保持CR，持续等于或大于3个月或等于或大于6个月；和/或
至少60％、70％、80％、90％或95％的截至一个月和/或截至3个月实现CNS疾病的CR或缓解的受试者保持反应，保持CR，和/或存活或无进展存活，持续等于或大于3个月和/或等于或大于6个月和/或等于或大于9个月；和/或
至少50％、至少60％或至少70％的根据所述方法治疗的受试者实现CNS疾病的客观反应(OR)或缓解；
至少60％、70％、80％、90％或95％的实现所述OR的受试者，持续等于或大于3个月或等于或大于6个月；和/或
至少60％、70％、80％、90％或95％的实现CNS疾病的OR或缓解的受试者保持反应或存活，持续等于或大于3个月和/或等于或大于6个月；和/或
所述脑病灶的大小或体积减小大于或大于约25％、50％、75％或更多；和/或
在至少35％、至少40％或至少50％的根据所述方法治疗的受试者中实现CNS疾病的减少或缓解或清除。
97.根据权利要求1-96中任一项所述的方法，其中：
大于或大于约50％、约60％、约70％或约80％的根据所述方法治疗的受试者不展现3级或更高级的细胞因子释放综合征(CRS)，和/或不展现3级或更高级的神经毒性，和/或大于40％或50％或55％不展现任何神经毒性或CRS。
98.根据权利要求1-97中任一项所述的方法，其中大于或大于约80％的根据所述方法治疗的受试者不展现3级或更高级的细胞因子释放综合征(CRS)，和/或不展现3级或更高级的神经毒性。
99.根据权利要求1-98中任一项所述的方法，其中大于95％的根据所述方法治疗的受试者不展现3级或更高级的CRS。
100.根据权利要求1-99中任一项所述的方法，其中大于85％的根据所述方法治疗的受试者不展现3级或更高级的神经毒性。
101.根据权利要求1-100中任一项所述的方法，其中：
大于或大于约30％、35％、40％或50％的根据所述方法治疗的受试者不展现任何等级的细胞因子释放综合征(CRS)或神经毒性；和/或
至少或至少约45％、50％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％或95％的根据所述方法治疗的受试者不展现开始施用后早于3天的CRS发作，和/或不展现开始施用后早于5天的神经毒性发作；和/或
在根据所述方法治疗的受试者中神经毒性的中值发作是在根据所述方法治疗的受试者的CRS的中值峰处或之后、或者到消退的中值时间之时或之后，和/或在根据所述方法治疗的受试者中神经毒性的中值发作大于或大于约8、9、10或11天。
102.根据权利要求1-101中任一项所述的方法，其中：
大于或大于约50％的根据所述方法治疗的受试者不展现任何等级的细胞因子释放综合征(CRS)或神经毒性；和/或
至少或至少约45％的根据所述方法治疗的受试者不展现开始所述施用后早于3天的CRS发作，和/或不展现开始所述施用后早于5天的神经毒性发作；和/或
根据所述方法治疗的受试者中神经毒性的中值发作是在根据所述方法治疗的受试者的CRS的中值峰处或之后、或者到消退的中值时间之时或之后，和/或根据所述方法治疗的受试者中神经毒性的中值发作是大于或大于约8天。
103.根据权利要求1-102中任一项所述的方法，其中：
至少50％的根据所述方法治疗的受试者实现完全反应(CR)；
至少70％的根据所述方法治疗的受试者实现客观反应(OR)；并且
大于或大于约50％的根据所述方法治疗的受试者不展现任何等级的细胞因子释放综合征(CRS)或神经毒性；并且
大于或大于约80％的根据所述方法治疗的受试者不展现3级或更高级的细胞因子释放综合征(CRS)，和/或不展现3级或更高级的神经毒性。
104.根据权利要求1-103中任一项所述的方法，其中：
与治疗前或治疗后第1个月的得分相比，在施用后第6个月或第12个月，大于或大于约25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％或60％的根据所述方法治疗的受试者的总体健康状况在欧洲研究与治疗组织核心生活质量问卷3.0版(EORTC QLQ-C30)中展现10分或更大的改进；和/或
与治疗前或治疗后第1个月的得分相比，在施用后第6个月或第12个月，大于或大于约25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％或60％的根据所述方法治疗的受试者的身体功能在EORTC QLQ-C30中展现10分或更大的改进；和/或
与治疗前或治疗后第1个月的得分相比，在施用后第6个月或第12个月，大于或大于约25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％或60％的根据所述方法治疗的受试者的疲劳在EORTC QLQ-C30中展现10分或更大的改进；和/或
与治疗前或治疗后第1个月的得分相比，在施用后第6个月或第12个月，大于或大于约25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％或60％的根据所述方法治疗的受试者的疼痛在EORTC QLQ-C30中展现10分或更大的改进；和/或
与治疗前或治疗后第1个月的得分相比，在施用后第6个月或第12个月，大于或大于约25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％或60％的根据所述方法治疗的受试者的疼痛在EORTC QLQ-C30中展现10分或更大的改进。
105.根据权利要求1-104中任一项所述的方法，其中：
与治疗前或治疗后第1个月的得分相比，在施用后第6个月或第12个月，根据所述方法治疗的受试者中的平均5级EuroQol-5D(EQ-5D-5L)得分相同或更大；和/或
与治疗前或治疗后第1个月的得分相比，在施用后第6个月或第12个月，根据所述方法治疗的受试者中的平均EuroQol整体视觉模拟量表(EQ-VAS)得分相同或更大。
106.根据权利要求1-105中任一项所述的方法，其中：
所述CAR包含对所述抗原具有特异性的细胞外抗原结合结构域、跨膜结构域、源自共刺激分子任选4-1BB的胞质信号传导结构域以及源自含有ITAM的初级信号传导分子任选CD3ζ的胞质信号传导结构域；
所述CAR按顺序包含对所述抗原具有特异性的细胞外抗原结合结构域、跨膜结构域、源自共刺激分子的胞质信号传导结构域和源自含有ITAM的初级信号传导分子的胞质信号传导结构域；或者
所述CAR包含细胞外抗原识别结构域和细胞内信号传导结构域，所述细胞外抗原识别结构域与抗原特异性结合，所述细胞内信号传导结构域包含CD3-zeta(CD3ζ)链和作为4-1BB的信号传导结构域的共刺激信号传导区。
107.根据权利要求1-106中任一项所述的方法，其中所述CAR包含对CD19具有特异性的细胞外抗原结合结构域、跨膜结构域、源自4-1BB的胞质信号传导结构域和源自CD3ζ的胞质信号传导结构域。
108.根据权利要求107所述的方法，其中所述抗原结合结构域是scFv。
109.根据权利要求108所述的方法，其中所述scFv包含RASQDISKYLN(SEQ ID NO:35)的氨基酸序列、SRLHSGV(SEQ ID NO:36)的氨基酸序列和/或GNTLPYTFG(SEQ ID NO:37)的氨基酸序列和/或DYGVS(SEQ ID NO:38)的氨基酸序列、VIWGSETTYYNSALKS(SEQ ID NO:39)的氨基酸序列和/或YAMDYWG(SEQ ID NO:40)的氨基酸序列，或者其中所述scFv包含FMC63的可变重链区和FMC63的可变轻链区和/或FMC63的CDRL1序列、FMC63的CDRL2序列、FMC63的CDRL3序列、FMC63的CDRH1序列、FMC63的CDRH2序列和FMC63的CDRH3序列，或者与前述任一项结合相同的表位或与前述任一项竞争结合，并且任选地其中所述scFv按顺序包含VH、任选地包含SEQ ID NO:24的接头和VL，和/或所述scFv包含柔性接头和/或包含如SEQ ID NO:43所示的氨基酸序列。
110.根据权利要求108或权利要求109所述的方法，其中所述scFv包含FMC63的可变重链区和FMC63的可变轻链区。
111.根据权利要求106-110中任一项所述的方法，其中所述共刺激信号传导区是4-1BB的信号传导结构域。
112.根据权利要求106-111中任一项所述的方法，其中所述共刺激结构域包含SEQ IDNO:12或它的具有与其至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性的变体。
113.根据权利要求106-112中任一项所述的方法，其中所述初级信号传导结构域是CD3ζ信号传导结构域。
114.根据权利要求106-113中任一项所述的方法，其中所述初级信号传导结构域包含具有与其至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性的SEQ ID NO:13、14或15。
115.根据权利要求106-114中任一项所述的方法，其中所述CAR还包含所述跨膜结构域与所述scFv之间的间隔子。
116.根据权利要求115所述的方法，其中所述间隔子是多肽间隔子，所述多肽间隔子包含免疫球蛋白铰链或所述免疫球蛋白铰链的修饰形式的全部或一部分，任选地IgG4铰链或所述IgG4铰链的修饰形式，或由其组成。
117.根据权利要求115或权利要求116所述的方法，其中所述间隔子的长度是为或约12个氨基酸。
118.根据权利要求115-117中任一项所述的方法，其中：
所述间隔子具有以下各项或由其组成：SEQ ID NO:1的序列、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:30、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:32、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:34编码的序列，或具有与前述任一项至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性的前述任一项的变体；和/或
所述间隔子包含式X1PPX2P或由其组成，其中X1是甘氨酸、半胱氨酸或精氨酸，并且X2是半胱氨酸或苏氨酸。
119.根据权利要求115-118中任一项所述的方法，其中：
所述间隔子是多肽间隔子，所述多肽间隔子(a)包含免疫球蛋白铰链或所述免疫球蛋白铰链的修饰形式的全部或一部分或由其组成，或者包含约15个氨基酸或更少，并且不包含CD28细胞外区域或CD8细胞外区域，(b)包含免疫球蛋白铰链、任选地IgG4铰链或所述免疫球蛋白铰链的修饰形式的全部或一部分或由其组成，和/或包含约15个氨基酸或更少，并且不包含CD28细胞外区域或CD8细胞外区域，或者(c)长度是为或约12个氨基酸和/或包含免疫球蛋白铰链、任选地IgG4或所述免疫球蛋白铰链的修饰形式的全部或一部分或由其组成；或者(d)具有以下各项或由其组成：SEQ ID NO:1的序列、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:30、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:32、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:34编码的序列，或具有与前述任一项至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性的前述任一项的变体，或者(e)包含式X1PPX2P或由其组成，其中X1是甘氨酸、半胱氨酸或精氨酸，并且X2是半胱氨酸或苏氨酸；和/或
所述共刺激结构域包含SEQ ID NO:12或它的具有与其至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性的变体；和/或
所述初级信号传导结构域包含具有与其至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性的SEQ ID NO:13、14或15；和/或
所述scFv包含RASQDISKYLN(SEQ ID NO:35)的氨基酸序列、SRLHSGV(SEQ ID NO:36)的氨基酸序列和/或GNTLPYTFG(SEQ ID NO:37)的氨基酸序列和/或DYGVS(SEQ ID NO:38)的氨基酸序列、VIWGSETTYYNSALKS(SEQ ID NO:39)的氨基酸序列和/或YAMDYWG(SEQ ID NO:40)的氨基酸序列，或者其中所述scFv包含FMC63的可变重链区和FMC63的可变轻链区和/或FMC63的CDRL1序列、FMC63的CDRL2序列、FMC63的CDRL3序列、FMC63的CDRH1序列、FMC63的CDRH2序列和FMC63的CDRH3序列，或者与前述任一项结合相同的表位或与前述任一项竞争结合，并且任选地其中所述scFv按顺序包含VH、任选地包含SEQ ID NO:24的接头和VL，和/或所述scFv包含柔性接头和/或包含如SEQ ID NO:43所示的氨基酸序列。
120.根据权利要求115-119中任一项所述的方法，其中：
所述间隔子是多肽间隔子，所述多肽间隔子包含SEQ ID NO:1的序列；
所述共刺激结构域包含SEQ ID NO:12；
所述初级信号传导结构域包含SEQ ID NO:13、14或15；
所述抗原结合结构域包含scFv，所述scFv包含FMC63的可变重链区和FMC63的可变轻链区。
121.根据权利要求1-120中任一项所述的方法，其中将细胞的所述剂量肠胃外，任选地静脉内施用。
122.根据权利要求1-121中任一项所述的方法，其中所述受试者是人受试者。
123.一种制品，其包含组合物，所述组合物包含表达重组受体的基因工程化细胞；以及任选地用于根据权利要求1-122中任一项所述的方法施用所述细胞的剂量的说明书。
124.一种评估在施用细胞疗法后发生毒性的风险的方法，所述方法包括：
(a)评估受试者的一个或多个参数，其中所述一个或多个参数选自来自所述受试者的生物样品中的LDH、铁蛋白或C反应蛋白(CRP)的水平、量或浓度，或者是所述受试者的肿瘤的尺寸乘积之和(SPD)；
其中所述受试者是用所述细胞疗法治疗的候选者，所述细胞疗法包括一定剂量的表达重组受体的基因工程化细胞；并且
其中在施用所述细胞疗法之前进行所述评估，和/或所述生物样品或肿瘤不包含所述重组受体和/或所述工程化细胞；并且
(b)鉴定所述受试者是否具有毒性风险，其中如果所述一个或多个参数高于阈值水平，则所述受试者具有毒性风险，并且如果所述一个或多个参数等于或低于阈值水平，则所述受试者没有毒性风险，其中：
(i)所述参数是铁蛋白，并且阈值水平高于或高于约1000纳克/毫升、2000纳克/毫升、3000纳克/毫升、4000纳克/毫升、5000纳克/毫升、6000纳克/毫升、7000纳克/毫升或8000纳克/毫升；和/或
(ii)所述参数是CRP，并且阈值水平高于或高于约5毫克/升、10毫克/升、15毫克/升、20毫克/升、25毫克/升、30毫克/升、40毫克/升或50毫克/升。
125.一种鉴定受试者的方法，所述方法包括：
(a)评估受试者的一个或多个参数，其中所述一个或多个参数选自来自所述受试者的生物样品中的LDH、铁蛋白或C反应蛋白(CRP)的水平、量或浓度，或者是所述受试者的肿瘤的尺寸乘积之和(SPD)；
其中所述受试者是用细胞疗法治疗的候选者，所述细胞疗法包括一定剂量的表达重组受体的基因工程化细胞；并且
其中在施用所述细胞疗法之前进行所述评估，和/或所述生物样品或肿瘤不包含所述重组受体和/或所述工程化细胞；并且
(b)鉴定在施用细胞疗法后具有发生毒性的风险的受试者，其中如果所述一个或多个参数高于阈值水平，则所述受试者具有毒性风险，并且如果所述一个或多个参数等于或低于阈值水平，则所述受试者没有毒性风险，其中：
(i)所述参数是铁蛋白，并且阈值水平高于或高于约1000纳克/毫升、2000纳克/毫升、3000纳克/毫升、4000纳克/毫升、5000纳克/毫升、6000纳克/毫升、7000纳克/毫升或8000纳克/毫升；和/或
(ii)所述参数是CRP，并且阈值水平高于或高于约5毫克/升、10毫克/升、15毫克/升、20毫克/升、25毫克/升、30毫克/升、40毫克/升或50毫克/升。
126.一种治疗方法，其包括：
(a)评估受试者的一个或多个参数，其中所述一个或多个参数选自来自所述受试者的生物样品中的LDH、铁蛋白或C反应蛋白(CRP)的水平、量或浓度，或者是所述受试者的肿瘤的尺寸乘积之和(SPD)；
其中所述受试者是用细胞疗法治疗的候选者，所述细胞疗法包括一定剂量的表达重组受体的基因工程化细胞；并且
其中在施用所述细胞疗法之前进行所述评估，和/或所述生物样品或肿瘤不包含所述重组受体和/或所述工程化细胞；并且
(b)鉴定所述受试者是否具有毒性风险，其中如果所述一个或多个参数高于阈值水平，则所述受试者具有毒性风险，并且如果所述一个或多个参数等于或低于阈值水平，则所述受试者没有毒性风险，其中：
(i)所述参数是铁蛋白，并且阈值水平高于或高于约1000纳克/毫升、2000纳克/毫升、3000纳克/毫升、4000纳克/毫升、5000纳克/毫升、6000纳克/毫升、7000纳克/毫升或8000纳克/毫升；和/或
(ii)所述参数是CRP，并且阈值水平高于或高于约5毫克/升、10毫克/升、15毫克/升、20毫克/升、25毫克/升、30毫克/升、40毫克/升或50毫克/升；并且
(c)在所述评估后或基于所述评估的结果，向所述受试者施用所述细胞疗法以及任选地能够治疗、预防、延迟、降低或减弱毒性的发生或发生风险的药剂或其他治疗。
127.根据权利要求124-126中任一项所述的方法，其中所述参数是铁蛋白，并且阈值水平是5000纳克/毫升。
128.根据权利要求124-127中任一项所述的方法，其中所述参数是CRP，并且阈值水平是10毫克/升。
129.根据权利要求124-128中任一项所述的方法，其中所述一个或多个参数是铁蛋白和CRP，并且铁蛋白的阈值水平是5000纳克/毫升并且CRP的阈值水平是10毫克/升。
130.根据权利要求124-129中任一项所述的方法，其中所述生物样品是血液或血浆样品。
131.根据权利要求124-130中任一项所述的方法，其中铁蛋白或CRP的水平、量或浓度是在治疗之前、在单采术之前或在细胞产物制造之前测量。
132.一种评估在施用细胞疗法后发生毒性的风险的方法，所述方法包括：
(a)评估来自受试者的生物样品中表达重组受体的基因工程化细胞的峰浓度，所述受试者先前已经被施用包含所述基因工程化细胞的细胞疗法；并且
(b)鉴定受试者是否具有毒性风险，其中如果基因工程化细胞的峰浓度高于阈值水平，则所述受试者具有毒性风险，并且如果基因工程化细胞的峰浓度等于或低于阈值水平，则所述受试者没有毒性风险，其中：所述阈值水平高于或高于约300个细胞/微升、400个细胞/微升、500个细胞/微升、600个细胞/微升、700个细胞/微升、800个细胞/微升、900个细胞/微升或1000个细胞/微升。
133.一种鉴定受试者的方法，所述方法包括：
(a)评估来自受试者的生物样品中表达重组受体的基因工程化细胞的峰浓度，所述受试者先前已经被施用包含所述基因工程化细胞的细胞疗法；并且
(b)鉴定在施用细胞疗法后具有发生毒性的风险的受试者，其中如果基因工程化细胞的峰浓度高于阈值水平，则所述受试者具有毒性风险，并且如果基因工程化细胞的峰浓度等于或低于阈值水平，则所述受试者没有毒性风险，其中：所述阈值水平高于或高于约300个细胞/微升、400个细胞/微升、500个细胞/微升、600个细胞/微升、700个细胞/微升、800个细胞/微升、900个细胞/微升或1000个细胞/微升。
134.一种治疗方法，其包括：
(a)评估来自受试者的生物样品中表达重组受体的基因工程化细胞的峰浓度，所述受试者先前已经被施用包含所述基因工程化细胞的细胞疗法；并且
(b)鉴定受试者是否具有毒性风险，其中如果基因工程化细胞的峰浓度高于阈值水平，则所述受试者具有毒性风险，并且如果基因工程化细胞的峰浓度等于或低于阈值水平，则所述受试者没有毒性风险，其中：所述阈值水平高于或高于约300个细胞/微升、400个细胞/微升、500个细胞/微升、600个细胞/微升、700个细胞/微升、800个细胞/微升、900个细胞/微升或1000个细胞/微升；并且
(c)在所述评估后或基于所述评估的结果，向所述受试者施用所述细胞疗法以及任选地能够治疗、预防、延迟、降低或减弱毒性的发生或发生风险的药剂或其他治疗。
135.根据权利要求132-134中任一项所述的方法，其中所述阈值水平是500个细胞/微升。
136.根据权利要求124-135中任一项所述的方法，其还包括如果所述受试者被施用细胞疗法并且被鉴定为具有发生毒性的风险，则监测所述受试者的毒性症状。
137.根据权利要求124-136中任一项所述的方法，其中所述毒性是神经毒性或细胞因子释放综合征(CRS)。
138.根据权利要求124-137中任一项所述的方法，其中所述毒性是1级或更高级神经毒性或CRS。
139.根据权利要求124-138中任一项所述的方法，其中所述毒性是1级或更高级神经毒性。
140.根据权利要求124-139中任一项所述的方法，其中所述毒性是严重神经毒性，或者是2级或更高级神经毒性、3级或更高级神经毒性或者4级或更高级神经毒性。
141.根据权利要求124-140中任一项所述的方法，其中所述毒性是严重神经毒性或3级或更高级神经毒性。
142.根据权利要求124-138中任一项所述的方法，其中所述毒性是1级或更高级CRS。
143.根据权利要求124-138和142中任一项所述的方法，其中所述毒性是严重CRS或者是2级或更高级CRS、3级或更高级CRS或者4级或更高级CRS。
144.根据权利要求124-138、142和143中任一项所述的方法，其中所述毒性是严重CRS或3级或更高级CRS。
145.根据权利要求124-144中任一项所述的方法，其中如果所述受试者被鉴定为具有发生毒性的风险，则向所述受试者施用：
(a)(1)能够治疗、预防、延迟、降低或减弱毒性的发生或发生风险的药剂或其他治疗，和(2)所述细胞疗法，其中所述药剂的施用要在以下时间施用：(i)在开始将所述细胞疗法施用至所述受试者之前，(ii)在开始将所述细胞疗法施用至所述受试者的1、2或3天内，(iii)与开始将所述细胞疗法施用至所述受试者相伴随，和/或(iv)在开始将所述细胞疗法施用至所述受试者之后第一次发热时；和/或
(b)具有降低的剂量或如下剂量的细胞疗法：与施用所述细胞疗法后发生毒性或严重毒性的风险无关，或在大多数受试者和/或患有所述受试者患有或怀疑患有的疾病或病症的大多数受试者中与施用所述细胞疗法后发生毒性或严重毒性的风险无关；和/或
(c)在住院环境中和/或在住院一天或多天的情况下向所述受试者施用细胞疗法，任选地其中在门诊基础上或者在没有住院一天或多天的情况下将所述细胞疗法以其他方式施用至受试者。
146.根据权利要求145所述的方法，其中所述药剂或其他治疗是抗IL-6抗体或抗IL-6受体抗体。
147.根据权利要求146所述的方法，其中所述药剂或其他治疗是或包含选自以下的药剂：托珠单抗、司妥昔单抗、克拉吉珠单抗、萨瑞鲁单抗、奥洛吉珠单抗(CDP6038)、伊西莫单抗、ALD518/BMS-945429、司卢库单抗(CNTO 136)、CPSI-2634、ARGX-109、FE301和FM101。
148.根据权利要求146或权利要求147所述的方法，其中所述药剂或其他治疗是托珠单抗。
149.根据权利要求148所述的方法，其中所述药剂或其他治疗是或包含一种或多种类固醇。
150.根据权利要求149所述的方法，其中所述类固醇是地塞米松或甲基泼尼松龙。
151.根据权利要求149或权利要求150所述的方法，其中所述类固醇是地塞米松。
152.根据权利要求124-151中任一项所述的方法，其中所述重组受体特异性结合至与所述疾病或病症相关的或者在与所述疾病或病症相关的病灶环境的细胞中表达的抗原。
153.根据权利要求124-152中任一项所述的方法，其中所述疾病或病症是癌症。
154.根据权利要求124-153中任一项所述的方法，其中所述疾病或病症是骨髓瘤、白血病或淋巴瘤。
155.根据权利要求124-54中任一项所述的方法，其中所述疾病或病症是B细胞恶性肿瘤和/或是急性成淋巴细胞性白血病(ALL)、成人ALL、慢性成淋巴细胞性白血病(CLL)、非霍奇金淋巴瘤(NHL)或大B细胞淋巴瘤。
156.根据权利要求124-155中任一项所述的方法，其中所述疾病或病症是大B细胞淋巴瘤。
157.根据权利要求156所述的方法，其中所述大B细胞淋巴瘤选自侵袭性非霍奇金淋巴瘤(NHL)、弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)(任选地DLBCLNOS(从头的或从惰性转化的))、高级别B细胞淋巴瘤(HGBCL)、双/三打击淋巴瘤、原发性纵隔大B细胞淋巴瘤(PMBCL)、套细胞淋巴瘤(MCL)、转化的滤泡性淋巴瘤(tFL)、和/或滤泡性淋巴瘤(FL)，任选地3B级滤泡性淋巴瘤(FL3B)。
158.根据权利要求156或权利要求157所述的方法，其中所述大B细胞淋巴瘤是弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)。
159.根据权利要求156或权利要求157所述的方法，其中所述大B细胞淋巴瘤是滤泡性淋巴瘤(FL)。
160.根据权利要求159所述的方法，其中所述FL与滤泡内CD10、BCL6和BCL2的共表达和/或t(14；18)/(q32；q21)(IGH-BCL2)和/或BCL6重排相关。
161.根据权利要求156或权利要求157所述的方法，其中所述大B细胞淋巴瘤是套细胞淋巴瘤(MCL)。
162.根据权利要求36-49中任一项所述的方法，其中所述重组受体与靶抗原结合，其中所述靶抗原是B细胞抗原，任选地CD19。
163.根据权利要求124-162中任一项所述的方法，其中所述重组受体是嵌合抗原受体(CAR)。
164.根据权利要求124-163中任一项所述的方法，其中所述基因工程化细胞包含T细胞，任选地CD4+T细胞和/或CD8+T细胞。
165.根据权利要求124-163中任一项所述的方法，其中施用所述细胞疗法包括向受试者施用一定剂量的CD4+和CD8+T细胞，其中每个剂量的T细胞包含特异性结合至所述疾病或病症或其细胞或组织表达的和/或与所述疾病或病症相关的抗原的重组受体，其中所述施用包括施用多种单独组合物，其中所述多种单独组合物包含含有CD8+T细胞的第一组合物和含有CD4+T细胞的第二组合物。
166.根据权利要求165所述的方法，其中开始施用所述第一组合物是在开始施用所述第二组合物之前进行。
167.根据权利要求165或权利要求166所述的方法，其中所述第一组合物的施用和所述第二组合物的施用是相隔不超过48小时进行的。
168.根据权利要求165-167中任一项所述的方法，其中所述第一组合物的施用和所述第二组合物的施用是相隔不超过36小时、相隔不超过24小时、相隔不超过12小时、相隔不超过6小时、相隔不超过4小时、相隔不超过2小时、相隔不超过1小时或相隔不超过30分钟进行的。
169.根据权利要求124-168中任一项所述的方法，其中所述CD4+T细胞包含的重组受体和/或所述CD8+T细胞包含的重组受体是或包含相同的重组受体，和/或其中所述CD4+T细胞和/或所述CD8+T细胞被基因工程化以表达相同的重组受体。
170.根据权利要求124-169中任一项所述的方法，其中：
CD4+和CD8+T细胞的所述剂量包含限定比率的表达所述受体的CD4+T细胞与表达所述重组受体的CD8+T细胞和/或CD4+T细胞与CD8+T细胞，所述限定比率为或为大约1:1或者在大约1:3与大约3:1之间；和/或
所述第一和第二组合物中的一种中包含所述重组受体的所述CD4+T细胞和所述第一和第二组合物中的另一种中包含所述重组受体的所述CD8+T细胞是以限定比率存在，所述限定比率为或为大约1:1或者在大约1:3与大约3:1之间；和/或
在所述第一和第二组合物中施用的包含所述受体的所述CD4+T细胞和包含所述重组受体的所述CD8+T细胞是以限定比率存在，所述比率为或为大约1:1或者在大约1:3与大约3:1之间。
171.根据权利要求124-170中任一项所述的方法，其中所述限定比率为或为大约1:1。
172.根据权利要求124-171中任一项所述的方法，其中CD4+和CD8+T细胞的所述剂量包含：
在为或约1x107个与为或约2x108个之间的总重组受体表达T细胞，包含端值；
在为或约2.5x107个与为或约1.5x108个之间的总重组受体表达T细胞，包含端值；
在为或约5x107个与为或约1x108个之间的总重组受体表达T细胞，包含端值；
为或约5x107个总重组受体表达T细胞；
为或约1x108个总重组受体表达T细胞；或者
为或约1.5x108个总重组受体表达T细胞。
173.根据权利要求124-172中任一项所述的方法，其中CD4+和CD8+T细胞的所述剂量包含：
在为或约1x107个与为或约1x108个之间的重组受体表达CD8+T细胞，包含端值；
在为或约1.25x107个与为或约7.5x107个之间的重组受体表达CD8+T细胞，包含端值；
在为或约2.5x107个与为或约5x107个之间的重组受体表达CD8+T细胞，包含端值；
为或约2.5x107个重组受体表达CD8+T细胞；
为或约5x107个重组受体表达CD8+T细胞；或者
为或约7.5x107个重组受体表达CD8+T细胞。
174.根据权利要求124-173中任一项所述的方法，其中所述T细胞是从受试者获得的原代T细胞，或者对于所述受试者是自体的。
175.根据权利要求124-174中任一项所述的方法，其中所述受试者是人受试者。
176.一种制品，其包含组合物，所述组合物包含表达重组受体的基因工程化细胞和任选地能够治疗、预防、延迟、降低或减弱毒性的发生或发生风险的药剂或其他治疗；以及用于根据权利要求124-175中任一项所述的方法评估发生毒性的风险、鉴定受试者或治疗受试者的说明书。
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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN117153252A (zh) * 2023-08-31 2023-12-01 山东第一医科大学附属省立医院(山东省立医院) 一种用于弥漫大b细胞淋巴瘤患者预后生物标志物及其系统和应用

Families Citing this family (13)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
MX2019010171A (es) 2017-02-27 2019-10-15 Juno Therapeutics Inc Composiciones, articulos de fabricacion y metodos relacionados con la dosificacion en la terapia celular.
CN118662614A (zh) 2017-06-02 2024-09-20 朱诺治疗学股份有限公司 使用过继细胞疗法治疗的制品和方法
EP3704230B1 (en) 2017-11-01 2024-10-23 Juno Therapeutics, Inc. Process for generating therapeutic compositions of engineered cells
EP3647413A1 (en) * 2018-10-31 2020-05-06 Centro de Investigaciones Energéticas, Medioambientales y Tecnológicas O.A., M.P. (CIEMAT) Improvements for performing and facilitating the recovery after hematopoietic stem cell transplantation
KR20230024283A (ko) 2020-05-13 2023-02-20 주노 쎄러퓨티크스 인코퍼레이티드 임상 반응과 관련된 특징을 식별하는 방법 및 이의 용도
US20230355753A1 (en) 2020-09-10 2023-11-09 Genmab A/S Bispecific antibody against cd3 and cd20 in combination therapy for treating diffuse large b-cell lymphoma
CA3190376A1 (en) 2020-09-10 2022-03-17 Brian Elliott Bispecific antibody against cd3 and cd20 in combination therapy for treating follicular lymphoma
WO2022053653A1 (en) 2020-09-10 2022-03-17 Genmab A/S Bispecific antibodies against cd3 and cd20 for treating chronic lymphocytic leukemia
CA3192251A1 (en) 2020-09-10 2022-03-17 Genmab A/S Bispecific antibody against cd3 and cd20 in combination therapy for treating diffuse large b-cell lymphoma
KR20230066391A (ko) 2020-09-10 2023-05-15 젠맵 에이/에스 여포성 림프종을 치료하기 위한 조합 요법에서의 cd3 및 cd20에 대한 이중특이적 항체
WO2023230548A1 (en) 2022-05-25 2023-11-30 Celgene Corporation Method for predicting response to a t cell therapy
CN119546638A (zh) * 2022-06-22 2025-02-28 朱诺治疗学股份有限公司 用于cd19靶向的car t细胞的二线疗法的治疗方法
KR20240122664A (ko) * 2023-02-03 2024-08-13 서울대학교산학협력단 혈액암 치료를 위한 키메라 항원 수용체(Chimeric Antigen Receptor) T 세포의 비임상 평가 방법

Family Cites Families (185)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE2117571C3 (de) 1971-04-10 1979-10-11 Bayer Ag, 5090 Leverkusen Unsymmetrische 1,4-Dihydropyridin-33-dicarbonsäureester, Verfahren zu ihrer Herstellung sowie ihre Verwendung als Arzneimittel
EP0090505B1 (en) 1982-03-03 1990-08-08 Genentech, Inc. Human antithrombin iii, dna sequences therefor, expression vehicles and cloning vectors containing such sequences and cell cultures transformed thereby, a process for expressing human antithrombin iii, and pharmaceutical compositions comprising it
US4452773A (en) 1982-04-05 1984-06-05 Canadian Patents And Development Limited Magnetic iron-dextran microspheres
US5168062A (en) 1985-01-30 1992-12-01 University Of Iowa Research Foundation Transfer vectors and microorganisms containing human cytomegalovirus immediate-early promoter-regulatory DNA sequence
US4690915A (en) 1985-08-08 1987-09-01 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Adoptive immunotherapy as a treatment modality in humans
US4795698A (en) 1985-10-04 1989-01-03 Immunicon Corporation Magnetic-polymer particles
IN165717B (zh) 1986-08-07 1989-12-23 Battelle Memorial Institute
US5219740A (en) 1987-02-13 1993-06-15 Fred Hutchinson Cancer Research Center Retroviral gene transfer into diploid fibroblasts for gene therapy
US5565566A (en) 1987-04-24 1996-10-15 Discovery Therapeutics, Inc. N6 -substituted 9-methyladenines: a new class of adenosine receptor antagonists
US5298508A (en) 1988-07-19 1994-03-29 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Irreversible inhibitors of adenosine receptors
AU4746590A (en) 1988-12-28 1990-08-01 Stefan Miltenyi Methods and materials for high gradient magnetic separation of biological materials
US5200084A (en) 1990-09-26 1993-04-06 Immunicon Corporation Apparatus and methods for magnetic separation
FR2688138B1 (fr) 1992-03-06 1995-05-05 Rhone Poulenc Rorer Sa Application de l'amino-2 trifluoromethoxy-6 benzothiazole pour obtenir un medicament destine au traitement de la sclerose laterale amyotrophique.
US5424297A (en) 1992-04-27 1995-06-13 University Of Virginia Alumni Patents Foundation Adenosine dextran conjugates
EP0672144A1 (en) 1992-10-20 1995-09-20 Chiron Corporation Interleukin-6 receptor antagonists
US5629327A (en) 1993-03-01 1997-05-13 Childrens Hospital Medical Center Corp. Methods and compositions for inhibition of angiogenesis
WO1994025462A1 (en) 1993-05-03 1994-11-10 The United States Of America, Represented By The 8-substituted 1,3,7-trialkyl-xanthine derivatives as a2-selective adenosine receptor antagonists
US5504090A (en) 1994-03-30 1996-04-02 Trustees Of The University Of Pennsylvania Compositions and methods for the prevention and treatment of ischemia-reperfusion organ injury
US5827642A (en) 1994-08-31 1998-10-27 Fred Hutchinson Cancer Research Center Rapid expansion method ("REM") for in vitro propagation of T lymphocytes
US5670501A (en) 1994-09-01 1997-09-23 Discovery Therapeutics, Inc. N-substituted 9-alkyladenines
WO1996013593A2 (en) 1994-10-26 1996-05-09 Procept, Inc. Soluble single chain t cell receptors
WO1996018105A1 (en) 1994-12-06 1996-06-13 The President And Fellows Of Harvard College Single chain t-cell receptor
US20020150914A1 (en) 1995-06-30 2002-10-17 Kobenhavns Universitet Recombinant antibodies from a phage display library, directed against a peptide-MHC complex
US6013516A (en) 1995-10-06 2000-01-11 The Salk Institute For Biological Studies Vector and method of use for nucleic acid delivery to non-dividing cells
JP4431638B2 (ja) 1996-01-29 2010-03-17 アメリカ合衆国 ジヒドロピリジン―、ピリジン―、ベンゾピラン―オン―およびトリアゾロキナゾリン誘導体、それらの製造およびそれらのアデノシン受容体アンタゴニストとしての用途
DE19608753C1 (de) 1996-03-06 1997-06-26 Medigene Gmbh Transduktionssystem und seine Verwendung
US6451995B1 (en) 1996-03-20 2002-09-17 Sloan-Kettering Institute For Cancer Research Single chain FV polynucleotide or peptide constructs of anti-ganglioside GD2 antibodies, cells expressing same and related methods
EP0912250B1 (en) 1996-04-24 1999-11-03 Claude Fell Cell separation system for biological fluids like blood
US6281230B1 (en) 1996-07-24 2001-08-28 Celgene Corporation Isoindolines, method of use, and pharmaceutical compositions
HU228769B1 (en) 1996-07-24 2013-05-28 Celgene Corp Substituted 2(2,6-dioxopiperidin-3-yl)phthalimides and -1-oxoisoindolines and their use for production of pharmaceutical compositions for mammals to reduce the level of tnf-alpha
PL191566B1 (pl) 1996-07-24 2006-06-30 Celgene Corp Podstawiona 1-oksoizoindolina, kompozycja farmaceutyczna ją zawierająca oraz jej zastosowanie
US5635517B1 (en) 1996-07-24 1999-06-29 Celgene Corp Method of reducing TNFalpha levels with amino substituted 2-(2,6-dioxopiperidin-3-YL)-1-oxo-and 1,3-dioxoisoindolines
US5798368A (en) 1996-08-22 1998-08-25 Celgene Corporation Tetrasubstituted 2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1-oxoisoindolines and method of reducing TNFα levels
US6111090A (en) 1996-08-16 2000-08-29 Schering Corporation Mammalian cell surface antigens; related reagents
DE69738749D1 (de) 1996-08-16 2008-07-17 Schering Corp Zelloberflächen-antigen aus säugetieren und verwandte reagenzien
US5786360A (en) 1996-11-19 1998-07-28 Link Technology Incorporated A1 adenosine receptor antagonists
ATE533784T1 (de) 1997-10-02 2011-12-15 Altor Bioscience Corp Lösliche, einzelkettige proteine des t- zellrezeptors
EP1025228A4 (en) 1997-10-21 2002-09-18 Human Genome Sciences Inc HUMAN PROTEIN TR11, TR11SV1 AND TR11SV2 SIMILAR TO THE TUMOR NECROSIS FACTOR RECEPTOR
US5994136A (en) 1997-12-12 1999-11-30 Cell Genesys, Inc. Method and means for producing high titer, safe, recombinant lentivirus vectors
IL137409A0 (en) 1998-02-09 2001-07-24 Genentech Inc Novel tumor necrosis factor receptor homolog and nucleic acids encoding the same
KR20060036124A (ko) 1998-03-16 2006-04-27 셀진 코포레이션 염증성 사이토카인 억제제용2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린 유도체, 그제조방법 및 그 용도
DE69925909T2 (de) 1998-04-15 2006-05-11 Brigham & Women's Hospital, Inc., Boston T-zell inhibierende rezeptorzusammensetzungen sowie deren verwendung
EE200000697A (et) 1998-05-19 2002-06-17 Avidex Limited Lahustuv T-raku retseptor
US6326390B1 (en) 1998-08-25 2001-12-04 King Pharmaceuticals Reseach And Development, Inc. Use of adenosine A3 receptor antagonists to inhibit tumor growth
EP1109921A4 (en) 1998-09-04 2002-08-28 Sloan Kettering Inst Cancer FUSION RECEPTORS SPECIFIC TO MEMBRANE SPECIFIC PROSTATIC ANTIGEN AND USES THEREOF
WO2000023573A2 (en) 1998-10-20 2000-04-27 City Of Hope Cd20-specific redirected t cells and their use in cellular immunotherapy of cd20+ malignancies
JP4514338B2 (ja) 1998-12-24 2010-07-28 ビオセフ エス・アー 造血幹細胞の濃縮に特化した血液分離装置
US6232297B1 (en) 1999-02-01 2001-05-15 University Of Virginia Patent Foundation Methods and compositions for treating inflammatory response
US6313131B1 (en) 1999-02-16 2001-11-06 Upsher-Smith Laboratories, Inc. Method of kidney treatment
CZ20013338A3 (cs) 1999-03-18 2002-03-13 Celgene Corporation Substituované 1-oxo-a l,3-dioxoisoindoliny a jejich pouľití ve farmaceutických prostředcích pro sníľení koncentrací zánětlivých cytokinů
US6322771B1 (en) 1999-06-18 2001-11-27 University Of Virginia Patent Foundation Induction of pharmacological stress with adenosine receptor agonists
AU6085700A (en) 1999-07-12 2001-01-30 Genentech Inc. Promotion or inhibition of angiogenesis and cardiovascularization by tumor necrosis factor ligand/receptor homologs
US20040191260A1 (en) 2003-03-26 2004-09-30 Technion Research & Development Foundation Ltd. Compositions capable of specifically binding particular human antigen presenting molecule/pathogen-derived antigen complexes and uses thereof
WO2001094944A2 (en) 2000-06-02 2001-12-13 Memorial Sloan-Kettering Cancer Center Artificial antigen presenting cells and methods of use thereof
JP5312721B2 (ja) 2000-11-07 2013-10-09 シティ・オブ・ホープ Ｃｄ１９特異的再指向免疫細胞
US6458810B1 (en) 2000-11-14 2002-10-01 George Muller Pharmaceutically active isoindoline derivatives
US7091353B2 (en) 2000-12-27 2006-08-15 Celgene Corporation Isoindole-imide compounds, compositions, and uses thereof
US20030045552A1 (en) 2000-12-27 2003-03-06 Robarge Michael J. Isoindole-imide compounds, compositions, and uses thereof
GB0100624D0 (en) 2001-01-10 2001-02-21 Vernalis Res Ltd Chemical compounds VII
ES2338534T3 (es) 2001-02-27 2010-05-10 The Governement Of The Usa, Represented By The Secretary Department Of Health And Human Services Analogos de talidomina como inhibidores de la angiogenesis.
US7070995B2 (en) 2001-04-11 2006-07-04 City Of Hope CE7-specific redirected immune cells
US20090257994A1 (en) 2001-04-30 2009-10-15 City Of Hope Chimeric immunoreceptor useful in treating human cancers
CA2457652C (en) 2001-08-31 2012-08-07 Avidex Limited Soluble t cell receptor
US7939059B2 (en) 2001-12-10 2011-05-10 California Institute Of Technology Method for the generation of antigen-specific lymphocytes
AU2002356962C1 (en) 2001-12-12 2008-05-01 The Government Of The United States Of America As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Methods for using extracellular adenosine inhibitors and adenosine receptor inhibitors to enhance immune response and inflammation
US6992176B2 (en) 2002-02-13 2006-01-31 Technion Research & Development Foundation Ltd. Antibody having a T-cell receptor-like specificity, yet higher affinity, and the use of same in the detection and treatment of cancer, viral infection and autoimmune disease
US20030223994A1 (en) 2002-02-20 2003-12-04 Hoogenboom Henricus Renerus Jacobus Mattheus MHC-peptide complex binding ligands
US20030170238A1 (en) 2002-03-07 2003-09-11 Gruenberg Micheal L. Re-activated T-cells for adoptive immunotherapy
US7446190B2 (en) 2002-05-28 2008-11-04 Sloan-Kettering Institute For Cancer Research Nucleic acids encoding chimeric T cell receptors
ES2449578T3 (es) 2002-09-06 2014-03-20 Amgen Inc. Anticuerpo monoclonal anti-IL-1R1 humano terapéutico
US20040047858A1 (en) 2002-09-11 2004-03-11 Blumberg Richard S. Therapeutic anti-BGP(C-CAM1) antibodies and uses thereof
WO2004033685A1 (en) 2002-10-09 2004-04-22 Avidex Ltd Single chain recombinant t cell receptors
EP1576014B1 (en) 2002-12-23 2011-06-29 Wyeth LLC Antibodies against pd-1 and uses thereof
US20050129671A1 (en) 2003-03-11 2005-06-16 City Of Hope Mammalian antigen-presenting T cells and bi-specific T cells
AU2004244626A1 (en) 2003-05-23 2004-12-09 The Government Of The United States Of America As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services GITR ligand and GITR ligand-related molecules and antibodies and uses thereof
US20050048054A1 (en) 2003-07-11 2005-03-03 Shino Hanabuchi Lymphocytes; methods
EP1692318A4 (en) 2003-12-02 2008-04-02 Genzyme Corp COMPOSITIONS AND METHODS FOR DIAGNOSIS AND TREATMENT OF LUNG CANCER
GB0409799D0 (en) 2004-04-30 2004-06-09 Isis Innovation Method of generating improved immune response
US20090304679A1 (en) 2004-05-27 2009-12-10 Weidanz Jon A Antibodies as T cell receptor mimics, methods of production and uses thereof
AU2005247950B2 (en) 2004-05-27 2012-02-02 Receptor Logic, Inc. Antibodies as T cell receptor mimics, methods of production and uses thereof
US20090226474A1 (en) 2004-05-27 2009-09-10 Weidanz Jon A Antibodies as T cell receptor mimics, methods of production and uses thereof
WO2006083289A2 (en) 2004-06-04 2006-08-10 Duke University Methods and compositions for enhancement of immunity by in vivo depletion of immunosuppressive cell activity
WO2006009755A2 (en) 2004-06-17 2006-01-26 Plexxikon, Inc. Azaindoles modulating c-kit activity and uses therefor
JP5563194B2 (ja) 2004-06-29 2014-07-30 イムノコア リミテッド 改変ｔ細胞レセプターを発現する細胞
US7244759B2 (en) 2004-07-28 2007-07-17 Celgene Corporation Isoindoline compounds and methods of making and using the same
US20100111856A1 (en) 2004-09-23 2010-05-06 Herman Gill Zirconium-radiolabeled, cysteine engineered antibody conjugates
US7645755B2 (en) 2004-10-22 2010-01-12 Janssen Pharmaceutical N.V. Inhibitors of c-fms kinase
DE602006014399D1 (de) 2005-03-23 2010-07-01 Biosafe Sa Integriertes system zum sammeln, bearbeiten und transplantieren von zell-subsets, einschliesslich adulter stammzellen, für die regenerative medizin
PT2343320T (pt) 2005-03-25 2018-01-23 Gitr Inc Anticorpos anti-gitr e as suas utilizações
CN103059138B (zh) 2005-05-09 2015-10-28 小野药品工业株式会社 程序性死亡-1(pd-1)的人单克隆抗体及使用抗pd-1抗体来治疗癌症的方法
EP3805245A1 (en) 2005-05-17 2021-04-14 University of Connecticut Compositions and methods for immunomodulation in an organism
ME02260B (me) 2005-07-01 2016-02-29 Medarex Inc Humana monoklonska antitela za ligand programirane smrti 1 (pd-l1)
US9303080B2 (en) 2006-01-13 2016-04-05 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services, National Institutes Of Health Codon optimized IL-15 and IL-15R-alpha genes for expression in mammalian cells
EP1981969A4 (en) 2006-01-19 2009-06-03 Genzyme Corp ANTI-GITRANT ANTIBODIES FOR THE TREATMENT OF CANCER
NZ575650A (en) 2006-09-22 2011-10-28 Pharmacyclics Inc Pyrimidinopyrazole derivatives as inhibitors of Bruton's tyrosine kinase
WO2008063888A2 (en) 2006-11-22 2008-05-29 Plexxikon, Inc. Compounds modulating c-fms and/or c-kit activity and uses therefor
HRP20130707T1 (en) 2007-02-08 2013-09-30 Biogen Idec Ma Inc. Compositions and uses for treating multiple sclerosis
CA2678180A1 (en) 2007-02-13 2008-12-04 Northeastern University Methods and compositions for improving immune responses
JP5840837B2 (ja) 2007-03-30 2016-01-06 メモリアル スローン−ケタリング キャンサー センター 養子移入ｔリンパ球における副刺激リガンドの構成性発現
US7615883B2 (en) 2007-06-06 2009-11-10 Meheen H Joe Wind driven venturi turbine
HRP20131167T1 (hr) 2007-06-18 2014-01-03 Merck Sharp & Dohme B.V. Antitijela za humani receptor programirane smrti pd-1
NZ599338A (en) 2007-06-27 2013-11-29 Marinepolymer Tech Inc Complexes of il-15 and il-15ralpha and uses thereof
CA2693677C (en) 2007-07-12 2018-02-13 Tolerx, Inc. Combination therapies employing gitr binding molecules
CA2703947C (en) 2007-10-26 2018-12-04 Governing Council Of The University Of Toronto Therapeutic and diagnostic methods using tim-3
US8727132B2 (en) 2007-12-07 2014-05-20 Miltenyi Biotec Gmbh Sample processing system and methods
US8479118B2 (en) 2007-12-10 2013-07-02 Microsoft Corporation Switching search providers within a browser search box
TR201802323T4 (tr) 2007-12-11 2018-03-21 Univ North Carolina Chapel Hill Polipürin yolu modifiye edilmiş retroviral vektörler.
AU2009209251B8 (en) 2008-01-28 2015-03-26 Medimmune Limited Stabilized Angiopoietin-2 antibodies and uses thereof
WO2009099553A2 (en) 2008-02-01 2009-08-13 The Regents Of The University Of California Use of kinase inhibitor in treatment of atherosclerosis
WO2009101611A1 (en) 2008-02-11 2009-08-20 Curetech Ltd. Monoclonal antibodies for tumor treatment
WO2009114335A2 (en) 2008-03-12 2009-09-17 Merck & Co., Inc. Pd-1 binding proteins
US20120164718A1 (en) 2008-05-06 2012-06-28 Innovative Micro Technology Removable/disposable apparatus for MEMS particle sorting device
JP5173594B2 (ja) 2008-05-27 2013-04-03 キヤノン株式会社 管理装置、画像形成装置及びそれらの処理方法
GB0906579D0 (en) 2009-04-16 2009-05-20 Vernalis R&D Ltd Pharmaceuticals, compositions and methods of making and using the same
CA2729810A1 (en) 2008-07-02 2010-01-07 Emergent Product Development Seattle, Llc Tgf-.beta. antagonist multi-target binding proteins
AR072999A1 (es) 2008-08-11 2010-10-06 Medarex Inc Anticuerpos humanos que se unen al gen 3 de activacion linfocitaria (lag-3) y los usos de estos
AU2009288730B2 (en) 2008-08-25 2013-06-20 Amplimmune, Inc. Compositions of PD-1 antagonists and methods of use
EP2328920A2 (en) 2008-08-25 2011-06-08 Amplimmune, Inc. Targeted costimulatory polypeptides and methods of use to treat cancer
PT3006459T (pt) 2008-08-26 2021-11-26 Hope City Método e composições para funcionamento melhorado de efetores antitumorais de células t
US8586023B2 (en) 2008-09-12 2013-11-19 Mie University Cell capable of expressing exogenous GITR ligand
BRPI0918050A2 (pt) 2008-09-19 2015-09-22 Paratek Pharm Innc compostos de tetraciclina para o tratamento de artrite reumatoide e metodos relacionados de tratamento
TWI440469B (zh) 2008-09-26 2014-06-11 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Improved antibody molecules
CA2676881C (en) 2008-09-30 2017-04-25 Wyeth Peripheral opioid receptor antagonists and uses thereof
US8883500B2 (en) 2008-12-05 2014-11-11 Northeastern University Method of preparing adenosine-resistant anti-tumor T lymphocytes for adoptive immunotherapy
MY188826A (en) 2008-12-09 2022-01-06 Genentech Inc Anti-pd-l1 antibodies and their use to enhance t-cell function
EP3192811A1 (en) 2009-02-09 2017-07-19 Université d'Aix-Marseille Pd-1 antibodies and pd-l1 antibodies and uses thereof
AU2010243211B2 (en) 2009-04-30 2014-01-30 Ramot At Tel Aviv University Ltd. Anti CEACAM1 antibodies and methods of using same
AU2010282280B2 (en) 2009-08-14 2016-06-09 The Government Of The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services Use of IL-15 to increase thymic output and to treat lymphopenia
EP3023438B1 (en) 2009-09-03 2020-03-11 Merck Sharp & Dohme Corp. Anti-gitr antibodies
EP2486049A1 (en) 2009-10-06 2012-08-15 The Board Of Trustees Of The UniversityOf Illinois Human single-chain t cell receptors
GB0919054D0 (en) 2009-10-30 2009-12-16 Isis Innovation Treatment of obesity
PT2496698T (pt) 2009-11-03 2019-04-18 Hope City Recetor de fator de crescimento epidermal truncado (egfrt) para seleção de células t transduzidas
JP2013512251A (ja) 2009-11-24 2013-04-11 アンプリミューン、インコーポレーテッド Ｐｄ−ｌ１／ｐｄ−ｌ２の同時阻害
CN105693861A (zh) 2009-12-29 2016-06-22 新兴产品开发西雅图有限公司 异二聚体结合蛋白及其应用
SG186077A1 (en) 2010-06-03 2013-01-30 Pharmacyclics Inc The use of inhibitors of bruton's tyrosine kinase (btk)
CA2802344C (en) 2010-06-18 2023-06-13 The Brigham And Women's Hospital, Inc. Bi-specific antibodies against tim-3 and pd-1 for immunotherapy in chronic immune conditions
PH12013501201A1 (en) 2010-12-09 2013-07-29 Univ Pennsylvania Use of chimeric antigen receptor-modified t cells to treat cancer
CN106074601A (zh) 2011-03-23 2016-11-09 弗雷德哈钦森癌症研究中心 用于细胞免疫治疗的方法和组合物
AU2012236068A1 (en) 2011-04-01 2013-10-17 Eureka Therapeutics, Inc. T cell receptor-like antibodies specific for a WT1 peptide presented by HLA-A2
MX347616B (es) 2011-05-05 2017-05-04 Sloan-Kettering Institute For Cancer Res Inhibidores de csf-1r para el tratamiento de tumores de cerebro.
US8398282B2 (en) 2011-05-12 2013-03-19 Delphi Technologies, Inc. Vehicle front lighting assembly and systems having a variable tint electrowetting element
US8841418B2 (en) 2011-07-01 2014-09-23 Cellerant Therapeutics, Inc. Antibodies that specifically bind to TIM3
WO2013039954A1 (en) 2011-09-14 2013-03-21 Sanofi Anti-gitr antibodies
WO2013054320A1 (en) 2011-10-11 2013-04-18 Tel Hashomer Medical Research Infrastructure And Services Ltd. Antibodies to carcinoembryonic antigen-related cell adhesion molecule (ceacam)
BR112014011417B1 (pt) 2011-11-11 2021-10-13 Fred Hutchinson Cancer Research Center Polipeptídeo isolado capaz de elicitar uma resposta de célula t antígeno-específica para ciclina a1 humana, composição imunogênica compreendendo o referido polipeptídeo, bem como método para preparar células apresentadoras de antígeno, antígeno-pulsadas,e uso destas para superexpressão de ccna1
CA2892371C (en) 2011-12-01 2021-01-19 The Brigham And Women's Hospital, Inc. Anti-ceacam1 recombinant antibodies for cancer therapy
EP2804625A4 (en) 2012-01-17 2015-10-28 Univ Northeastern METHODS AND COMPOSITIONS FOR IN VITRO DEVELOPMENT OF IMMUNOSUPPRESSANT REGULATORS AND USES THEREOF
AU2013221672B2 (en) 2012-02-13 2017-11-09 Seattle Children's Hospital D/B/A Seattle Children's Research Institute Bispecific chimeric antigen receptors and therapeutic uses thereof
WO2013126726A1 (en) 2012-02-22 2013-08-29 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Double transgenic t cells comprising a car and a tcr and their methods of use
US20150119267A1 (en) 2012-04-16 2015-04-30 Sloan-Kettering Institute For Cancer Research Inhibition of colony stimulating factor-1 receptor signaling for the treatment of brain cancer
RU2018130123A (ru) 2012-05-03 2018-11-07 Фред Хатчинсон Кансэр Рисёч Сентер Клетка, экспрессирующая t-клеточный рецептор (tcr), для применения в клеточной иммунотерапии
TWI662964B (zh) 2012-06-04 2019-06-21 美商製藥有限責任公司 布魯頓氏酪胺酸激酶抑制劑之結晶形式
GB201211310D0 (en) 2012-06-26 2012-08-08 Chroma Therapeutics Ltd CSF-1R kinase inhibitors
EP2879709B1 (en) 2012-07-31 2020-01-08 The Brigham and Women's Hospital, Inc. Modulation of the immune response
US10780118B2 (en) 2012-08-20 2020-09-22 Fred Hutchinson Cancer Research Center Method and compositions for cellular immunotherapy
EP2903637B1 (en) 2012-10-02 2019-06-12 Memorial Sloan-Kettering Cancer Center Compositions and methods for immunotherapy
CA3201072A1 (en) 2012-10-12 2014-04-17 The Brigham And Women's Hospital, Inc. Enhancement of the immune response
US9405601B2 (en) 2012-12-20 2016-08-02 Mitsubishi Electric Corporation In-vehicle apparatus and program
CN105026553A (zh) 2013-03-15 2015-11-04 干细胞技术公司 用于获得富集的间充质干细胞培养物的组合物和方法
TWI654206B (zh) 2013-03-16 2019-03-21 諾華公司 使用人類化抗－ｃｄ１９嵌合抗原受體治療癌症
EP3004168A4 (en) 2013-05-24 2017-03-01 Board of Regents, The University of Texas System Chimeric antigen receptor-targeting monoclonal antibodies
US9108442B2 (en) 2013-08-20 2015-08-18 Ricoh Company, Ltd. Image forming apparatus
US9512084B2 (en) 2013-11-29 2016-12-06 Novartis Ag Amino pyrimidine derivatives
US20160313300A1 (en) 2013-12-06 2016-10-27 Celgene Corporation Methods for determining drug efficacy for the treatment of diffuse large b-cell lymphoma, multiple myeloma, and myeloid cancers
WO2015095895A1 (en) 2013-12-20 2015-06-25 Fred Hutchinson Cancer Research Center Tagged chimeric effector molecules and receptors thereof
JOP20200094A1 (ar) 2014-01-24 2017-06-16 Dana Farber Cancer Inst Inc جزيئات جسم مضاد لـ pd-1 واستخداماتها
JOP20200096A1 (ar) 2014-01-31 2017-06-16 Children’S Medical Center Corp جزيئات جسم مضاد لـ tim-3 واستخداماتها
AU2015229103C9 (en) 2014-03-14 2020-11-26 Immutep S.A.S Antibody molecules to LAG-3 and uses thereof
KR102387243B1 (ko) * 2014-04-10 2022-04-14 시애틀 칠드런즈 호스피탈 디/비/에이 시애틀 칠드런즈 리서치 인스티튜트 트랜스진 유전자 태그 및 사용 방법
CN113046321A (zh) 2014-04-23 2021-06-29 朱诺治疗学股份有限公司 分离、培养和遗传工程改造用于过继治疗的免疫细胞群的方法
EP3166968B1 (en) 2014-05-02 2021-09-22 The Trustees of the University of Pennsylvania Compositions and methods of chimeric autoantibody receptor t cells
TWI751102B (zh) 2014-08-28 2022-01-01 美商奇諾治療有限公司 對ｃｄ１９具專一性之抗體及嵌合抗原受體
SG10202002324SA (en) 2014-11-05 2020-05-28 Juno Therapeutics Inc Methods for transduction and cell processing
AU2015357535B2 (en) 2014-12-05 2020-05-14 Eureka Therapeutics, Inc. Antibodies targeting G-protein coupled receptor and methods of use
AU2015357533B2 (en) 2014-12-05 2021-10-07 Eureka Therapeutics, Inc. Antibodies targeting B-cell maturation antigen and methods of use
FI3227432T3 (fi) 2014-12-05 2024-01-09 Memorial Sloan Kettering Cancer Center B-solujen kypsymisantigeeniin kohdistuvia kimeerisiä antigeenireseptoreita ja niiden käyttötarkoituksia
CA2969864A1 (en) 2014-12-05 2016-06-09 Memorial Sloan-Kettering Cancer Center Chimeric antigen receptors targeting g-protein coupled receptor and uses thereof
US9713375B1 (en) 2015-02-26 2017-07-25 Brett Einar Rahm Collapsible portable table
JP7054924B2 (ja) * 2015-09-23 2022-04-15 サイトイミューン セラピューティクス， インコーポレイテッド 免疫療法のためのｆｌｔ３指向ｃａｒ細胞
MA45341A (fr) * 2016-06-06 2019-04-10 Hutchinson Fred Cancer Res Procédés de traitement de malignités de lymphocytes b au moyen d'une thérapie cellulaire adoptive
MX2019010171A (es) * 2017-02-27 2019-10-15 Juno Therapeutics Inc Composiciones, articulos de fabricacion y metodos relacionados con la dosificacion en la terapia celular.
CN118662614A (zh) * 2017-06-02 2024-09-20 朱诺治疗学股份有限公司 使用过继细胞疗法治疗的制品和方法
EP3704230B1 (en) 2017-11-01 2024-10-23 Juno Therapeutics, Inc. Process for generating therapeutic compositions of engineered cells
GB2608517B (en) 2017-11-30 2023-03-29 Axalta Coating Systems Gmbh Coating compositions for application utilizing a high transfer efficiency applicator and methods and systems thereof
MA51210A (fr) * 2017-12-01 2020-10-07 Juno Therapeutics Inc Procédés de dosage et de modulation de cellules génétiquement modifiées

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN117153252A (zh) * 2023-08-31 2023-12-01 山东第一医科大学附属省立医院(山东省立医院) 一种用于弥漫大b细胞淋巴瘤患者预后生物标志物及其系统和应用

Also Published As

Publication number Publication date
PL3886875T3 (pl) 2024-09-09
US20220088070A1 (en) 2022-03-24
WO2020113194A2 (en) 2020-06-04
EP4427810A2 (en) 2024-09-11
ES2981569T3 (es) 2024-10-09
IL283325A (en) 2021-07-29
JP7695882B2 (ja) 2025-06-19
AU2019387497A1 (en) 2021-06-24
SG11202105502RA (en) 2021-06-29
FI3886875T3 (fi) 2024-07-23
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