[go: up one dir, main page]

CN113564089A - 一株产γ-氨基丁酸的植物乳杆菌LHP710及其应用 - Google Patents

一株产γ-氨基丁酸的植物乳杆菌LHP710及其应用 Download PDF

Info

Publication number
CN113564089A
CN113564089A CN202111126098.1A CN202111126098A CN113564089A CN 113564089 A CN113564089 A CN 113564089A CN 202111126098 A CN202111126098 A CN 202111126098A CN 113564089 A CN113564089 A CN 113564089A
Authority
CN
China
Prior art keywords
lhp710
lactobacillus plantarum
fermentation
gaba
powder
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN202111126098.1A
Other languages
English (en)
Other versions
CN113564089B (zh
Inventor
彭健
孟令辉
方素云
胡晓珂
闵军
张海坤
刘卫
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Zhongke Marine Microbial Industry Technology Research Institute Shandong Co ltd
Yantai Institute of Coastal Zone Research of CAS
Original Assignee
Zhongke Marine Microbial Industry Technology Research Institute Shandong Co ltd
Yantai Institute of Coastal Zone Research of CAS
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Zhongke Marine Microbial Industry Technology Research Institute Shandong Co ltd, Yantai Institute of Coastal Zone Research of CAS filed Critical Zhongke Marine Microbial Industry Technology Research Institute Shandong Co ltd
Priority to CN202111126098.1A priority Critical patent/CN113564089B/zh
Publication of CN113564089A publication Critical patent/CN113564089A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN113564089B publication Critical patent/CN113564089B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; PREPARATION OR TREATMENT THEREOF
    • A23L19/00—Products from fruits or vegetables; Preparation or treatment thereof
    • A23L19/09—Mashed or comminuted products, e.g. pulp, purée, sauce, or products made therefrom, e.g. snacks
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; PREPARATION OR TREATMENT THEREOF
    • A23L29/00—Foods or foodstuffs containing additives; Preparation or treatment thereof
    • A23L29/06—Enzymes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; PREPARATION OR TREATMENT THEREOF
    • A23L29/00—Foods or foodstuffs containing additives; Preparation or treatment thereof
    • A23L29/065—Microorganisms
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; PREPARATION OR TREATMENT THEREOF
    • A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
    • A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; PREPARATION OR TREATMENT THEREOF
    • A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
    • A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
    • A23L33/105—Plant extracts, their artificial duplicates or their derivatives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; PREPARATION OR TREATMENT THEREOF
    • A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
    • A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
    • A23L33/115—Fatty acids or derivatives thereof; Fats or oils
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; PREPARATION OR TREATMENT THEREOF
    • A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
    • A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
    • A23L33/135—Bacteria or derivatives thereof, e.g. probiotics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; PREPARATION OR TREATMENT THEREOF
    • A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
    • A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
    • A23L33/17—Amino acids, peptides or proteins
    • A23L33/18—Peptides; Protein hydrolysates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23P—SHAPING OR WORKING OF FOODSTUFFS, NOT FULLY COVERED BY A SINGLE OTHER SUBCLASS
    • A23P10/00—Shaping or working of foodstuffs characterised by the products
    • A23P10/30—Encapsulation of particles, e.g. foodstuff additives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/30—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds
    • A61K8/40—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds containing nitrogen
    • A61K8/44—Aminocarboxylic acids or derivatives thereof, e.g. aminocarboxylic acids containing sulfur; Salts; Esters or N-acylated derivatives thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/96—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution
    • A61K8/99—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution from microorganisms other than algae or fungi, e.g. protozoa or bacteria
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
    • A61Q19/00—Preparations for care of the skin
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/04—Preserving or maintaining viable microorganisms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P13/00—Preparation of nitrogen-containing organic compounds
    • C12P13/005—Amino acids other than alpha- or beta amino acids, e.g. gamma amino acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2002/00—Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2400/00—Lactic or propionic acid bacteria
    • A23V2400/11—Lactobacillus
    • A23V2400/169—Plantarum
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2800/00—Properties of cosmetic compositions or active ingredients thereof or formulation aids used therein and process related aspects
    • A61K2800/80—Process related aspects concerning the preparation of the cosmetic composition or the storage or application thereof
    • A61K2800/85—Products or compounds obtained by fermentation, e.g. yoghurt, beer, wine

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Nutrition Science (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Birds (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Coloring Foods And Improving Nutritive Qualities (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

本发明公开了一株产γ‑氨基丁酸的植物乳杆菌LHP710及其应用，该菌株通过优化发酵条件和生物催化的方式可高产γ‑氨基丁酸，具体的，通过发酵罐优化发酵条件可将γ‑氨基丁酸的产量提升至4.36g/L，且发酵性能相对稳定；以L‑谷氨酸为底物催化制备γ‑氨基丁酸的产量可达44.3g/1L生物催化反应体系，且纯度不低于98%；该植物乳杆菌LHP710可应用至营养果蔬粉等功能性食品、安神助眠等保健品以及护肤品、生物饲料等不同领域，具有广泛的应用前景。

Description

一株产γ-氨基丁酸的植物乳杆菌LHP710及其应用
技术领域
本发明涉及一株菌株及其应用，具体涉及一株产γ-氨基丁酸的植物乳杆菌LHP710及其应用，属于微生物技术领域。
背景技术
γ-氨基丁酸（γ-aminobutyric acid，简称GABA）被公认为21世纪健康营养补充剂，具有调节血压、调节激素分泌、保护肾脏功能、改善大脑机能和增强机体免疫力等多种生理功能，是21世纪倡导的绿色食品和有机食品的理想配料，也是十分理想的老年疾病防治保健食品及药品。人体每天摄入30～50mg纯天然GABA能起到十分理想的保健作用。
目前，GABA的提取、分离和纯化方法很多，但由于工艺复杂、成本高且提取得率低，故实施难度相对较大。为进一步推进GABA在医药卫生和食品工业等方面的开发与应用，亟待寻找新的提取、分离和纯化GABA的方法。
发明内容
为解决现有技术的不足，本发明的目的在于提供一株产γ-氨基丁酸的植物乳杆菌LHP710及其应用。
为了实现上述目标，本发明采用如下的技术方案：
一株产γ-氨基丁酸的植物乳杆菌LHP710，其特征在于，前述植物乳杆菌LHP710是从野生蓝莓果渣发酵物样品中分离、纯化得到的，能代谢产生γ-氨基丁酸，分类命名为植物乳杆菌LHP710 Lactobacillus plantarum LHP710，保藏编号为CCTCC NO：M 2021675，保藏日期为2021 年06月04日，保藏单位为中国典型培养物保藏中心，保藏地点为中国武汉。
前述的植物乳杆菌LHP710在生产GABA中的应用，其特征在于，采用微生物转化法生产GABA，具体包括以下步骤：
（1）菌体制备：将植物乳杆菌LHP710接种至MRSG基础发酵培养基中，保鲜膜封口，于37℃静置培养36h，培养结束后离心收集湿菌体；
（2）催化反应：用湿菌体、磷酸吡哆醛和谷氨酸构建GABA生物催化反应体系，然后于30℃搅拌催化48h，得到GABA转化液；
（3）脱色纯化：用活性炭对GABA转化液进行脱色，过滤、离心，将上清液蒸发浓缩，在持续搅拌条件下将浓缩液于流动水槽内缓慢降温至20℃，析晶、固液分离，使用95％乙醇洗涤固体，真空干燥得最终GABA制品。
优选的，在GABA生物催化反应体系中，湿菌体、磷酸吡哆醛和谷氨酸的浓度分别为50g/L、1mM和100g/L。
优选的，上清液蒸发浓缩的温度为75℃。
前述的植物乳杆菌LHP710在制备发酵型果蔬粉中的应用，其特征在于，制备发酵型果蔬粉的方法包括以下步骤：
（1）原料处理：将新鲜果蔬清洗干净并打碎得到混合果蔬浆，加水调至物料质量浓度为40～50%，搅拌混匀，记为混合液A；
（2）复合酶解：向混合液A中添加由纤维素酶、葡聚糖酶、果胶酶和风味蛋白酶按照质量比2:1:2:1混合组成的复合生物酶，于55℃酶解4h，85℃灭酶10min，冷却到室温后压榨过滤得到混合液B；
（3）菌种活化：将植物乳杆菌LHP710接种至MRS 液体培养基中，于37℃静置培养24h获得种子液；
（4）配制果蔬发酵培养基：向混合液B中添加蛋白胨10g/L、牛肉膏粉5.0g/L、酵母浸粉4.0g/L、磷酸氢二钾2.0g/L、乙酸钠5.0g/L、硫酸镁0.2g/L、氯化钙1g/L、谷氨酸钠10g/L，调节pH值至6.2±0.1，煮沸灭菌，冷却至室温备用，记为混合液C；
（5）深层发酵：按10～20%接种量将种子液接种至混合液C中，保鲜膜封口，室温下连续发酵培养72h；
（6）成型处理：结束发酵后，将发酵液减压浓缩至固形物含量为40%，喷雾干燥获得植物乳杆菌LHP710复合果蔬粉剂。
优选的，复合生物酶的添加量为混合液A质量的0.3%。
优选的，在成型处理过程中，以140℃进口温度、55℃出口温度、0.3MPa进风气压进行喷雾干燥。
前述的植物乳杆菌LHP710在制备功能性组合物中的应用，其特征在于，前述功能性组合物具有调节肠道、改善睡眠和提高免疫的功效，制备前述功能性组合物的方法包括以下步骤：
（1）备料：按质量百分比计，称取功能组分植物乳杆菌LHP710菌粉25～35%、γ-氨基丁酸3～5%、海参低聚肽粉15～20%、酸枣仁提取物12～18%、磷酯酰丝氨酸3～5%，称取包埋组分椰子油提取物3～8%、β-环状糊精7～12%、变性淀粉3～8%，称取调味组分异麦芽酮糖醇10～20%、低聚果糖3～5%、赤藓糖醇3～5%，低温干燥备用；
（2）配制壁材：将称量好的包埋组分加适量温水搅拌溶解，高压均质1次，备用，记为混合物A；
（3）配制芯材：将称量好的功能组分逐一混匀，加适量温水溶解，搅拌均匀备用，记为混合物B；
（4）配制调味剂：将称量好的调味组分加适量温水溶解，搅拌均匀备用，记为混合物C；
（5）交联包埋：分别将混合物B、混合物C在持续搅拌下缓慢流加至混合物A当中，充分搅拌，高压均质2次，记为混合物D；
（6）冷冻干燥：将混合物D于-45℃冷冻干燥2h，得到最终前述组合物。
优选的，前述植物乳杆菌LHP710菌粉是由植物乳杆菌LHP710制备而成的，制备方法具体如下：
植物乳杆菌LHP710发酵结束后，用200Da纳滤膜浓缩发酵液，得到浓缩液，将浓缩液于-45℃～-35℃冷冻干燥3h，得到植物乳杆菌LHP710菌粉。
本发明的有益之处在于：
（1）本发明筛选得到的植物乳杆菌LHP710筛选自野生蓝莓果渣发酵物，该菌株能够发酵代谢生产γ-氨基丁酸，另外，该菌株易培养、繁殖速度快，在菌种混合培养时属于优势菌种；
（2）本发明筛选得到的植物乳杆菌LHP710通过优化发酵条件和生物催化的方式可高产γ-氨基丁酸，其中，通过发酵罐优化发酵条件可将γ-氨基丁酸的产量提升至4.36g/L，并且其发酵性能相对稳定；以L-谷氨酸为底物催化制备γ-氨基丁酸的产量可达44.3g/1L生物催化反应体系，并且纯度不低于98%；
（3）γ-氨基丁酸具有抗焦虑惊厥、调节血压、改善大脑机能及神经营养等生理功能，由本发明筛选得到的植物乳杆菌LHP710及其发酵和催化制备的γ-氨基丁酸，可应用至营养果蔬粉等功能性食品、安神助眠等保健品以及护肤品、生物饲料等不同领域，具有广泛应用前景。
附图说明
图1是基于16S rDNA基因序列建立的乳杆菌属系统发育树；
图2是植物乳杆菌LHP710的菌落形态图；
图3是植物乳杆菌LHP710的菌体显微镜图；
图4是植物乳杆菌LHP710发酵液的薄层层析图；
图5是植物乳杆菌LHP710发酵液高效液相色谱图，其中，A是GABA标准品谱图，B是植物乳杆菌LHP710发酵液谱图；
图6是植物乳杆菌LHP710的GAD基因的PCR扩增电泳分析图；
图7是植物乳杆菌LHP710的生长情况与GABA产量的关联图；
图8是植物乳杆菌LHP710催化制备GABA的工艺流程图；
图9是植物乳杆菌LHP710催化制备得到的GABA晶体图；
图10是植物乳杆菌LHP710发酵果蔬粉中GABA和总糖含量图。
具体实施方式
以下结合附图和具体实施例对本发明作具体的介绍。
一、植物乳杆菌LHP710的分离、纯化及鉴定
1、植物乳杆菌LHP710的分离、纯化
本发明筛选得到的植物乳杆菌LHP710是从野生蓝莓果渣发酵物样品中分离、纯化得到的，分离、纯化的过程具体如下：
（1）取10g野生蓝莓果渣发酵物样品，然后将该样品加入到100mL 质量浓度为0.85%的NaCl无菌溶液中，制成浑浊液。
（2）将制备得到的浑浊液进行梯度稀释，然后取100ul稀释10000倍的浑浊液，以平板涂布的方式涂布至MRS固体培养基上，共涂3个平板，之后将3个涂布了浑浊液的平板置于37℃培养箱中倒置培养24h，此时每个平板上长出了大约60～100个单菌落。
（3）从每个平板上随机挑取3个单菌落至新的MRS固体培养基上，采用平板划线的方式纯化单菌落，划线完毕后将该9个平板置于37℃培养箱中倒置培养24h，此时每个平板上长出了大约40个单菌落，最后随机保存一个菌落呈圆形，大小中等，中间凸起，边缘整齐，白色微黄，表面湿润，不透明的单菌落，该单菌落即为本发明最终筛选所得单菌落，相应的，该单菌落中的菌株即为本发明最终筛选所得菌株。
MRS固体培养基的配方如下：
蛋白胨10g/L、牛肉膏粉5.0g/L、酵母浸粉4.0g/L、葡萄糖20.0g/L、磷酸氢二钾2.0g/L、乙酸钠5.0g/L、柠檬酸三铵2.0g/L、硫酸镁0.2g/L、硫酸锰0.05g/L、琼脂15g/L，pH=6.2±0.1。
2、植物乳杆菌LHP710的鉴定
（1）观察菌落形态和菌体形状
将本发明最终筛选所得菌株以平板涂布的方式涂布至MRS固体培养基上，37℃培养箱中倒置培养24h，如图2所示，此时该平板上长出了大约150个单菌落，这些菌落呈圆形，大小中等，中间凸起，边缘整齐，白色微黄，表面湿润，不透明。
取一环本发明最终筛选所得菌株，将其分散到MRS液体培养基中，然后放置于显微镜下，观察菌体的形状，如图3所示，菌体呈直的短杆状。
MRS液体培养基的配方如下：
蛋白胨10g/L、牛肉膏粉5.0g/L、酵母浸粉4.0g/L、葡萄糖20.0g/L、磷酸氢二钾2.0g/L、乙酸钠5.0g/L、柠檬酸三铵2.0g/L、硫酸镁0.2g/L、硫酸锰0.05g/L，pH=6.2±0.1。
（2）凝胶电泳检测
将本发明最终筛选所得菌株接种至MRS液体培养基中，37℃、 180rpm培养12h，得到菌液。
用细菌基因组DNA提取试剂盒提取上述菌液中的细菌的DNA，然后以所提DNA为模板、以27F（序列为AGA GTT TGA TCC TGG CTCAG）为上游引物、以ITS1（序列为TCCGTAGGTGAACCTGCGG）为下游引物进行序列扩增。PCR反应程序为：95℃预变性5min；94℃变性1min，56℃退火1min，72℃延伸1min，31个循环；72℃保持5min。
扩增结束后，用1%（w/v）琼脂糖凝胶电泳对扩增产物进行检测。检测结果表明：通用引物PCR扩增成功。
（3）16S rDNA鉴定
将本发明最终筛选所得菌株送至青岛睿博兴科生物技术有限公司进行16S rDNA序列测定，并将测得的该菌株的16S rDNA序列（SEQ NO.1）在Gen Bank中进行同源序列比对检索，比对检索的结果显示：该菌株与植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum）相似度达到100%。
基于16S rDNA基因序列建立的乳杆菌属系统发育树见图1。
最终，鉴定本发明最终筛选所得菌株为植物乳杆菌，记为植物乳杆菌LHP710。
该植物乳杆菌LHP710，分类命名为植物乳杆菌LHP710 Lactobacillus plantarumLHP710，保藏编号为CCTCC NO：M 2021675，保藏日期为2021 年06月04日，保藏单位为中国典型培养物保藏中心，保藏地点为中国武汉。
二、植物乳杆菌LHP710的培养与发酵
1、植物乳杆菌LHP710的培养
（1）植物乳杆菌LHP710斜面培养
配制MRS固体培养基，调节pH至6.2±0.1，121℃高压灭菌20min，冷却至45℃于超净台中倒注至无菌平板，凝固备用。
将纯化得到的植物乳杆菌LHP710接到MRS平板上，于37℃培养48h。
（2）植物乳杆菌LHP710种子液培养
配制100mL MRS液体培养基，调节pH至6.2±0.1，121℃高压灭菌20min，灭菌结束后冷却至室温备用。
从MRS平板中挑取1环独立菌苔接入MRS液体培养基中，保鲜膜封口，于37℃静置培养24h。
2、植物乳杆菌LHP710的发酵
（1）植物乳杆菌LHP710的深层发酵
配制200mL MRSG基础发酵培养基，调节pH至6.2±0.1，121℃高压灭菌20min，灭菌结束后冷却至室温备用。
取培养16h的种子液按5%接种量接入MRSG基础发酵培养基中，保鲜膜封口，于37℃静置培养24h。
MRSG基础发酵培养基的配方如下：
蛋白胨10g/L、牛肉膏粉5.0g/L、酵母浸粉4.0g/L、葡萄糖20.0g/L、磷酸氢二钾2.0g/L、乙酸钠5.0g/L、柠檬酸三铵2.0g/L、硫酸镁0.2g/L、硫酸锰0.05g/L、L-谷氨酸0.02g/L，pH=6.2±0.1。
（2）植物乳杆菌LHP710的深层发酵优化
先在3L发酵罐中配制1.8L MRSG-s优化发酵培养基，调节pH值至6.2±0.1，121℃高压灭菌20min，灭菌结束后冷却至室温待用。第2d，在30L发酵罐中配制20L MRSG-s优化发酵培养基，调节pH值至6.2±0.1，121℃高压灭菌20min，灭菌结束后冷却至室温待用。
3L发酵罐中的MRSG-s优化发酵培养基灭菌结束并冷却至室温后，取培养16h的种子液按5%接种量接入装有MRSG-s优化发酵培养基的3L发酵罐中培养24h，随后按5%接种量将3L发酵罐中的发酵液接入30L发酵罐中，连续发酵72h。
MRSG-s优化发酵培养基的配方如下：
蛋白胨10g/L、牛肉膏粉5.0g/L、酵母浸粉4.0g/L、葡萄糖20.0g/L、磷酸氢二钾2.0g/L、乙酸钠5.0g/L、柠檬酸三铵2.0g/L、硫酸镁0.2g/L、硫酸锰0.05g/L、维生素C0.01g/L、氯化钙1g/L、L-谷氨酸5g/L，pH=6.2±0.1。
三、发酵产物中GABA的检测
1、GABA定性检测
采用纸层析法定性检测GABA，其中，展开剂为正丁醇、冰醋酸和水按照体积比4:1:3混合得到的混合物，显色剂为质量浓度为0.4%的茚三酮，分别取1ul样品点样于层析板，凉风吹干，将层析板置于展开剂中层析，层析完成后，将层析板自然晾干，置于烘箱90℃显色10min。
以GABA标准品作参比，分别以MRSG-s优化发酵培养基和MRSG基础发酵培养基培养的植物乳杆菌LHP710发酵液为检测对象，观察各发酵液与GABA标准品斑点所对应位置的颜色状态。如果在该位置出现斑点，则代表发酵液中产生了GABA，斑点颜色越深，代表产生的GABA的浓度越高。
层析结果见图4，其中，A为GABA标准品，C为MRSG基础发酵培养基发酵样品, D为MRSG-s优化发酵培养基发酵样品，B和E分别为两种培养基的空白组（不接菌）。
植物乳杆菌LHP710分别以MRSG-s优化发酵培养基和MRSG基础发酵培养基发酵，发酵产物（发酵液）与 GABA 标准品在同一平板的同一水平位置上均出现相应斑点，其中，以MRSG-s优化发酵培养基发酵的样品（D组）斑点的颜色较以MRSG基础发酵培养基发酵的样品（C组）斑点的颜色深。表明植物乳杆菌LHP710具有代谢产生GABA 的能力，优化培养基后该菌株产 GABA 的能力有所提升。
2、GABA定量检测
采用HPLC法定量检测GABA。色谱条件：流动相由流动相A 与流动相B按体积比2:1组成。其中，流动相A 的pH =6，内含10mL/L 冰醋酸和18g/L 醋酸钠；流动相B 为乙腈；流速为1.0mL/min；柱温为室温；检测柱为C18 柱，检测器为紫外检测器，检测波长为338nm。
HPLC检测结果见图5。由图5可知：通过与GABA标准品比对发现，植物乳杆菌LHP710以MRSG-s优化发酵培养基发酵，发酵产物（发酵液）中含有GABA，并且GABA含量为0.18g/100g。
GABA一般是由谷氨酸脱羧酶催化谷氨酸脱羧生成的非蛋白氨基酸。通过对植物乳杆菌LHP710发酵液中GABA定性及定量的检测初步表明，植物乳杆菌LHP710具有合成控制GABA生成的关键酶谷氨酸脱羧酶（GAD）的能力，对植物乳杆菌LHP710的GAD的基因进行克隆并分析作进一步鉴定，基因克隆结果见图6，从图6可知：扩增条带清晰且条带片段大小在1500bp左右，片段大小与目标一致，进一步证明植物乳杆菌LHP710具有合成GABA的能力。
四、植物乳杆菌LHP710的发酵性能（产GABA）分析
对植物乳杆菌LHP710发酵产GABA进行液体发酵（罐）验证，具体如下：
（1）将植物乳杆菌LHP710活化后按5%接种量接入灭菌的3L种子罐中，3L种子罐内的培养基为MRSG基础发酵培养基，于37℃、280r/min条件下培养24h，得到种子液；
（2）将种子液按5％接种量接入30L发酵罐中，30L发酵罐内的培养基为MRSG-s优化发酵培养基，于35℃，350r/min，设置通风量0.75vvm，设置DO值为25%并与转速偶联，控制发酵液pH值在6～7范围内，手动添加消泡剂，每6h取样50mL冷冻保存，连续发酵72h；
（3）检测各时期植物乳杆菌LHP710的生长情况和GABA的产生情况，并将二者进行关联，得到植物乳杆菌LHP710的生长情况与GABA产量的关联图。
植物乳杆菌LHP710的生长情况与GABA产量的关联结果见图7。由图7可知：植物乳杆菌LHP710以优化发酵培养基在发酵罐中6～36h进入对数生长期，48h后逐渐进入衰亡期，发酵液中的GABA含量逐渐积累，结束发酵时发酵液中GABA终浓度为435.9mg/100ml，植物乳杆菌LHP710不仅能产GABA，而且其发酵性能以及其所产GABA的能力具有一定的稳定性。
五、GABA的生物催化制备
生产GABA的方法主要有：微生物发酵法和微生物转化法，其中：
（1）微生物发酵法：过程温和可控，但生产GABA过程中易污染、可重复性差、周期长；
（2）微生物转化法：是指以L-谷氨酸或L-谷氨酸盐为底物，利用乳酸菌脱羧酶的作用，将L-谷氨酸或L-谷氨酸盐转化为GABA，得到GABA转化液，该GABA转化液经过进一步的后处理即可得到GABA 制品。
目前，主要采用微生物转化法生产GABA。
参照图8，本发明采用微生物转化法生产GABA的过程具体如下：
（1）菌体制备：配制 MRSG基础发酵培养基，并调节pH值至6.2±0.1，121℃高压灭菌20min，灭菌结束后冷却至室温，将植物乳杆菌LHP710接种至MRSG基础发酵培养基中，保鲜膜封口，于37℃静置培养36h（诱导发酵），培养结束后离心收集湿菌体（泥），4℃保存备用；
（2）催化反应：构建如下的GABA生物催化反应体系：50g/L湿菌体、1mM磷酸吡哆醛、100g/L谷氨酸，于30℃、200r/min 搅拌催化48h，得到GABA转化液；
（3）脱色纯化：GABA转化液降温至65℃时使用5%的活性炭进行脱色，过滤、离心，上清液即为活性炭脱色后的GABA转化液，将活性炭脱色后的GABA转化液于75℃蒸发浓缩得浓缩液，在100r/min持续搅拌条件下将浓缩液于流动水槽内缓慢降温至20℃，析晶、固液分离，使用95％乙醇洗涤固体，真空干燥得最终GABA制品（γ-氨基丁酸），为晶体，见图9。
经检测，通过植物乳杆菌LHP710生物催化L-谷氨酸制备的GABA晶体产量为44.3g/1L生物催化反应体系，纯度在98%以上。
六、植物乳杆菌LHP710的应用
由于GABA具有营养神经等重要的生理功能，所以产GABA植物乳杆菌在开发功能性食品、饮料及保健品等方面有很高的应用潜力，对此，本发明基于植物乳杆菌LHP710开发了一种酶酵耦合的发酵型果蔬粉。
该发酵型果蔬粉的制备过程具体如下：
1、原料处理：将新鲜果蔬（蓝莓、苹果、番茄、菠菜、紫薯、火龙果和南瓜等质量混合）清洗干净，切块并打碎至3～5mm大小得到混合果蔬浆，加水调至物料质量浓度为40～50%，搅拌混匀，记为混合液A。
2、复合酶解：向混合液A中添加混合液A质量0.3%的复合生物酶（纤维素酶、葡聚糖酶、果胶酶和风味蛋白酶按照质量比2:1:2:1混合），于55℃酶解4h，每30min搅拌一次，85℃灭酶10min，冷却到室温后压榨过滤得到混合液B。
3、菌种活化：将植物乳杆菌LHP710接种至MRS 液体培养基中，于37℃静置培养24h获得种子液。
4、配制果蔬发酵培养基：向混合液B中添加蛋白胨、牛肉膏粉、酵母浸粉、磷酸氢二钾、乙酸钠、硫酸镁、氯化钙和谷氨酸钠，并使添加的物质的浓度达到如下要求：蛋白胨10g/L、牛肉膏粉5.0g/L、酵母浸粉4.0g/L、磷酸氢二钾2.0g/L、乙酸钠5.0g/L、硫酸镁0.2g/L、氯化钙1g/L、谷氨酸钠10g/L，得到果蔬发酵培养基，调节果蔬发酵培养基的pH值至6.2±0.1，煮沸灭菌，冷却至室温备用，记为混合液C。
5、深层发酵：按10～20%接种量将种子液接种至混合液C中，保鲜膜封口，室温下连续发酵培养72h。
6、成型处理：结束发酵后，将发酵液减压浓缩至固形物含量为40%，-45℃～-35℃条件下冷冻干燥2h，获得植物乳杆菌LHP710复合果蔬粉剂，记为果蔬粉D。
通过植物乳杆菌LHP710酶酵耦合获得的果蔬粉D，其当中不仅含有GABA，而且还含有丰富的益生菌，同时还降低了果蔬的糖含量，并使果蔬风味更为突出。
经检测，深层发酵结束后，体系中的GABA含量不小于174mg/100mL，总糖含量不高于117mg/mL（见图10）；成型处理结束后，果蔬粉D中的活菌数不小于1×109cfu/g。
由此可见，通过植物乳杆菌LHP710酶酵耦合处理新鲜果蔬显著提升了果蔬的附加值与果蔬粉的营养。
将果蔬粉D与市场上随机购买的普通果蔬粉进行感官评价对比，评价指标主要包括：外观、甜度、酸度、风味、粘性，评分标准具体如下：
Figure DEST_PATH_IMAGE001
感官评价结果具体如下：
外观 甜度 酸度 风味 粘性
果蔬粉D 10分 9分 8分 10分 10分
对照组 10分 8分 8分 6分 8分
可见，果蔬粉D在外观、甜度、酸度、风味、粘性等感官指标上均优于市场普通果蔬粉。
七、植物乳杆菌LHP710及其产物γ-氨基丁酸（GABA）的应用
GABA作为一种抑制性神经递质，具有多种生理活性，对身心健康的保持有着极其重要的作用，受到越来越多人的关注，其在食品、医药、调味品等领域应用前景广阔。
睡眠是人体最基本的生理过程，充足和优质的睡眠与身心健康、安全、生活质量等息息相关。市面上用于舒缓压力、改善睡眠的组合产品种类繁多，西医治疗睡眠障碍主要是合理使用镇静催眠药物，催眠速度较快，但存在嗜睡、乏力等不良反应。
对此，本发明提供一种基于植物乳杆菌LHP710及其产物GABA的可有效调节肠道菌群、改善睡眠质量并能在一定程度上提高免疫力的组合物。
该组合物由功能组分、包埋组分和调味组分组成，其中：
（1）功能组分：由益生菌和益生元共同组成，为合生元组分，益生菌即植物乳杆菌LHP710菌粉，益生元由γ-氨基丁酸、海参低聚肽粉、酸枣仁提取物和磷酯酰丝氨酸组成；
（2）包埋组分：由变性淀粉、β-环状糊精和椰子油提取物组成，为生物型壁材；
（3）调味组分：由异麦芽酮糖醇、赤藓糖醇和低聚果糖组成。
在上述原料中：
（1）植物乳杆菌LHP710菌粉是由植物乳杆菌LHP710制备而成的，制备方法具体如下：植物乳杆菌LHP710发酵结束后，用200Da纳滤膜浓缩发酵液，得到浓缩液，将浓缩液于-45℃～-35℃冷冻干燥3h，得到植物乳杆菌LHP710菌粉；
（2）γ-氨基丁酸是通过植物乳杆菌LHP710生物催化L-谷氨酸制备而来的，制备过程见“五、GABA的生物催化制备”。
由于功能组分在加工、储存与摄取过程中会受到各种不利因素的影响，导致生物活性降低，故本发明将功能组分作为芯材，用生物型壁材（包埋组分）对芯材进行包埋，可有效降低功能组分的挥发性、吸湿性和反应性等，增加组合物在不利环境条件下的稳定性和功能组分在不利环境条件下的生物活性的有效性。
按质量百分比计，用来制备该组合物的原料及其含量如下：
植物乳杆菌LHP710菌粉 25～35%
γ-氨基丁酸 3～5%
海参低聚肽粉 15～20%
酸枣仁提取物 12～18%
磷酯酰丝氨酸 3～5%
椰子油提取物 3～8%
β-环状糊精 7～12%
变性淀粉 3～8%
异麦芽酮糖醇 10～20%
低聚果糖 3～5%
赤藓糖醇 3～5%。
制备该组合物的方法具体包括如下步骤：
（1）备料：按配方分别称取功能组分、包埋组分和调味组分，低温干燥备用。
（2）配制壁材：将称量好的包埋组分变性淀粉、β-环状糊精和椰子油提取物加适量温水搅拌溶解，高压均质机30MPa均质1次，备用，记为混合物A。
（3）配制芯材：将称量好的功能组分植物乳杆菌LHP710菌粉、γ-氨基丁酸、海参低聚肽粉、酸枣仁提取物和磷酯酰丝氨酸逐一混匀，加适量温水溶解，搅拌均匀备用，记为混合物B。
（4）配制调味剂：将称量好的调味组分异麦芽酮糖醇、赤藓糖醇和低聚果糖加适量温水溶解，搅拌均匀备用，记为混合物C。
（5）交联包埋：分别将混合物B、混合物C在持续搅拌下缓慢流加至混合物A当中，充分搅拌，高压均质机30MPa均质2次，记为混合物D。
（6）冷冻干燥：将混合物D于-45℃冷冻干燥2h，得到最终组合物。
该组合物所用原料均为天然发酵和生物萃取来源，安全性高。该组合物的功能组分是由益生元和益生菌共同组成的合生元组分，各成分之间协同增效，可以有效调节胃肠道菌群，促进活性物质（γ-氨基丁酸、海参低聚肽粉、酸枣仁提取物和磷酯酰丝氨酸）的吸收和生物利用，在外源性补充γ-氨基丁酸（GABA）和海参低聚肽等助眠物质的同时可提升机体免疫力。
功能组分通过交联包埋后获得有效保护，受到各种不利因素的影响降低，并有效解决了各功能组分在该组合物中的口感风味问题。
调味组分作为该组合物的辅助成分，不仅能提升组合物的营养价值，而且能辅助肠道对各功能组分进行吸收，同时还能有效提升肠道益生菌的代谢与发酵效果。
将该组合物与市售同类商品进行风味、稳定性对比，对比方法具体如下：
（1）风味对比方法：将产品置于温度30℃、湿度65％的环境下，对比产品0个月、6个月、12个月后的风味，以0～10分作为评价风味的等级，等级越高风味越好，等级＜6说明为不可接受产品；
（2）稳定性对比方法：将产品置于温度30℃、湿度65％的环境下，考察3个月、6个月后产品中的磷酯酰丝氨酸的含量变化以及6个月后产品中的磷酯酰丝氨酸的降解程度。
风味对比结果如下：
Figure 846234DEST_PATH_IMAGE002
稳定性对比结果如下：
Figure DEST_PATH_IMAGE003
由以上统计结果可知：
（1）该组合物放置在常温（温度30℃）下储存12个月后，风味变化不大，评分从9.1分变化至8.3分，仍可满足消费者对口感的需求。但对比的市售同类商品放置在常温（温度30℃）下储存12个月后，风味评分仅为5分，未能达到消费者对口感的要求。
（2）该组合物放置在常温（温度30℃）下储存6个月后，磷酯酰丝氨酸的降解率为11.3％，磷酯酰丝氨酸的含量稳定。但对比的市售同类商品放置在常温（温度30℃）下储存6个月后，磷酯酰丝氨酸的降解率为26.6％，磷酯酰丝氨酸降解严重。
综上，该组合物由于具有显著的稳定性与功效性，故可应用到功能食品、保健品、特医食品以及护肤品当中作为各产品的功能组分，或加入溶剂直接制成可食用型片剂或颗粒剂。
需要说明的是，上述实施例不以任何形式限制本发明，凡采用等同替换或等效变换的方式所获得的技术方案，均落在本发明的保护范围内。
序列表
<110> 中国科学院烟台海岸带研究所
<120> 一株产γ-氨基丁酸的植物乳杆菌LHP710及其应用
<141> 2021-09-08
<160> 1
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 886
<212> DNA
<213> 植物乳杆菌LHP710(植物乳杆菌LHP710)
<400> 1
ttaggcggct ggttcctaaa ggttacccca ccgactttgg gtgttacaaa ctctcatggt 60
gtgacgggcg gtgtgtacaa ggcccgggaa cgtattcacc gcggcatgct gatccgcgat 120
tactagcgat tccgacttca tgtaggcgag ttgcagccta caatccgaac tgagaatggc 180
tttaagagat tagcttactc tcgcgagttc gcaactcgtt gtaccatcca ttgtagcacg 240
tgtgtagccc aggtcataag gggcatgatg atttgacgtc atccccacct tcctccggtt 300
tgtcaccggc agtctcacca gagtgcccaa cttaatgctg gcaactgata ataagggttg 360
cgctcgttgc gggacttaac ccaacatctc acgacacgag ctgacgacaa ccatgcacca 420
cctgtatcca tgtccccgaa gggaacgtct aatctcttag atttgcatag tatgtcaaga 480
cctggtaagg ttcttcgcgt agcttcgaat taaaccacat gctccaccgc ttgtgcgggc 540
ccccgtcaat tcctttgagt ttcagccttg cggccgtact ccccaggcgg aatgcttaat 600
gcgttagctg cagcactgaa gggcggaaac cctccaacac ttagcattca tcgtttacgg 660
tatggactac cagggtatct aatcctgttt gctacccata ctttcgagcc tcagcgtcag 720
ttacagacca gacagccgcc ttcgccactg gtgttcttcc atatatctac gcatttcacc 780
gctacacatg gagttccact gtcctcttct gcactcaagt ttcccagttt ccgatgcact 840
tcttcggttg agccgaaggc tttcacatca gacttaaaaa accgcc 886

Claims (10)

1.一株产γ-氨基丁酸的植物乳杆菌LHP710，其特征在于，所述植物乳杆菌LHP710是从野生蓝莓果渣发酵物样品中分离、纯化得到的，能代谢产生γ-氨基丁酸，分类命名为植物乳杆菌LHP710 Lactobacillus plantarum LHP710，保藏编号为CCTCC NO：M 2021675，保藏日期为2021 年06月04日，保藏单位为中国典型培养物保藏中心，保藏地点为中国武汉。
2.权利要求1所述的植物乳杆菌LHP710在生产GABA中的应用，其特征在于，采用微生物转化法生产GABA，具体包括以下步骤：
（1）菌体制备：将植物乳杆菌LHP710接种至MRSG基础发酵培养基中，保鲜膜封口，于37℃静置培养36h，培养结束后离心收集湿菌体；
（2）催化反应：用湿菌体、磷酸吡哆醛和谷氨酸构建GABA生物催化反应体系，然后于30℃搅拌催化48h，得到GABA转化液；
（3）脱色纯化：用活性炭对GABA转化液进行脱色，过滤、离心，将上清液蒸发浓缩，在持续搅拌条件下将浓缩液于流动水槽内缓慢降温至20℃，析晶、固液分离，使用95％乙醇洗涤固体，真空干燥得最终GABA制品。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，在GABA生物催化反应体系中，湿菌体、磷酸吡哆醛和谷氨酸的浓度分别为50g/L、1mM和100g/L。
4.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，上清液蒸发浓缩的温度为75℃。
5.权利要求1所述的植物乳杆菌LHP710在制备发酵型果蔬粉中的应用，其特征在于，制备发酵型果蔬粉的方法包括以下步骤：
（1）原料处理：将新鲜果蔬清洗干净并打碎得到混合果蔬浆，加水调至物料质量浓度为40～50%，搅拌混匀，记为混合液A；
（2）复合酶解：向混合液A中添加由纤维素酶、葡聚糖酶、果胶酶和风味蛋白酶按照质量比2:1:2:1混合组成的复合生物酶，于55℃酶解4h，85℃灭酶10min，冷却到室温后压榨过滤得到混合液B；
（3）菌种活化：将植物乳杆菌LHP710接种至MRS 液体培养基中，于37℃静置培养24h获得种子液；
（4）配制果蔬发酵培养基：向混合液B中添加蛋白胨10g/L、牛肉膏粉5.0g/L、酵母浸粉4.0g/L、磷酸氢二钾2.0g/L、乙酸钠5.0g/L、硫酸镁0.2g/L、氯化钙1g/L、谷氨酸钠10g/L，调节pH值至6.2±0.1，煮沸灭菌，冷却至室温备用，记为混合液C；
（5）深层发酵：按10～20%接种量将种子液接种至混合液C中，保鲜膜封口，室温下连续发酵培养72h；
（6）成型处理：结束发酵后，将发酵液减压浓缩至固形物含量为40%，喷雾干燥获得植物乳杆菌LHP710复合果蔬粉剂。
6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，复合生物酶的添加量为混合液A质量的0.3%。
7.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，在成型处理过程中，以140℃进口温度、55℃出口温度、0.3MPa进风气压进行喷雾干燥。
8.权利要求1所述的植物乳杆菌LHP710在制备功能性组合物中的应用，其特征在于，所述功能性组合物具有调节肠道、改善睡眠和提高免疫的功效，制备所述功能性组合物的方法包括以下步骤：
（1）备料：按质量百分比计，称取功能组分植物乳杆菌LHP710菌粉25～35%、γ-氨基丁酸3～5%、海参低聚肽粉15～20%、酸枣仁提取物12～18%、磷酯酰丝氨酸3～5%，称取包埋组分椰子油提取物3～8%、β-环状糊精7～12%、变性淀粉3～8%，称取调味组分异麦芽酮糖醇10～20%、低聚果糖3～5%、赤藓糖醇3～5%，低温干燥备用；
（2）配制壁材：将称量好的包埋组分加适量温水搅拌溶解，高压均质1次，备用，记为混合物A；
（3）配制芯材：将称量好的功能组分逐一混匀，加适量温水溶解，搅拌均匀备用，记为混合物B；
（4）配制调味剂：将称量好的调味组分加适量温水溶解，搅拌均匀备用，记为混合物C；
（5）交联包埋：分别将混合物B、混合物C在持续搅拌下缓慢流加至混合物A当中，充分搅拌，高压均质2次，记为混合物D；
（6）冷冻干燥：将混合物D于-45℃冷冻干燥2h，得到最终所述组合物。
9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述植物乳杆菌LHP710菌粉是由植物乳杆菌LHP710制备而成的，制备方法具体如下：
植物乳杆菌LHP710发酵结束后，用200Da纳滤膜浓缩发酵液，得到浓缩液，将浓缩液于-45℃～-35℃冷冻干燥3h，得到植物乳杆菌LHP710菌粉。
10.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述γ-氨基丁酸采用的是权利要求2至4任意一项所述方法制备而成的。
CN202111126098.1A 2021-09-26 2021-09-26 一株产γ-氨基丁酸的植物乳杆菌LHP710及其应用 Active CN113564089B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202111126098.1A CN113564089B (zh) 2021-09-26 2021-09-26 一株产γ-氨基丁酸的植物乳杆菌LHP710及其应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202111126098.1A CN113564089B (zh) 2021-09-26 2021-09-26 一株产γ-氨基丁酸的植物乳杆菌LHP710及其应用

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN113564089A true CN113564089A (zh) 2021-10-29
CN113564089B CN113564089B (zh) 2022-01-04

Family

ID=78174579

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202111126098.1A Active CN113564089B (zh) 2021-09-26 2021-09-26 一株产γ-氨基丁酸的植物乳杆菌LHP710及其应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN113564089B (zh)

Cited By (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN115161250A (zh) * 2022-09-06 2022-10-11 广东益可维生物技术有限公司 一株具有安眠和健脑益智功能的植物乳杆菌及其应用
CN115181708A (zh) * 2022-08-23 2022-10-14 东北农业大学 高产γ-氨基丁酸的耐酸型植物乳杆菌及其应用
CN115990212A (zh) * 2022-12-15 2023-04-21 山东康祐生物科技有限公司 一种用于调节gaba-a受体的组合物及其制备方法
CN117256865A (zh) * 2023-10-12 2023-12-22 上海诺德生物实业有限公司 一种具有改善睡眠作用的茶叶茶氨酸组合物及其制备方法与应用
CN119081929A (zh) * 2024-08-29 2024-12-06 艾地盟(上海)管理有限公司 植物乳植杆菌jn9、制剂、益生菌组合物及其用途

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102754782A (zh) * 2012-06-26 2012-10-31 浙江工业大学 富含γ-氨基丁酸和植物乳杆菌的发酵型果蔬粉的制备方法
CN105002118A (zh) * 2015-08-13 2015-10-28 黑龙江省乳品工业技术开发中心 一种高产γ-氨基丁酸植物乳杆菌的培养方法及应用

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102754782A (zh) * 2012-06-26 2012-10-31 浙江工业大学 富含γ-氨基丁酸和植物乳杆菌的发酵型果蔬粉的制备方法
CN105002118A (zh) * 2015-08-13 2015-10-28 黑龙江省乳品工业技术开发中心 一种高产γ-氨基丁酸植物乳杆菌的培养方法及应用

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
P. FILANNINO ET AL.: "Metabolic Responses of Lactobacillus plantarum Strains during Fermentation and Storage of Vegetable and Fruit Juices", 《APPLIED AND ENVIRONMENTAL MICROBIOLOGY》 *
周青: "产γ-氨基丁酸乳酸菌的筛选及发酵过程研究", 《食品与发酵工业》 *

Cited By (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN115181708A (zh) * 2022-08-23 2022-10-14 东北农业大学 高产γ-氨基丁酸的耐酸型植物乳杆菌及其应用
CN115161250A (zh) * 2022-09-06 2022-10-11 广东益可维生物技术有限公司 一株具有安眠和健脑益智功能的植物乳杆菌及其应用
CN115161250B (zh) * 2022-09-06 2022-12-13 广东益可维生物技术有限公司 一株具有安眠和健脑益智功能的植物乳杆菌及其应用
CN115990212A (zh) * 2022-12-15 2023-04-21 山东康祐生物科技有限公司 一种用于调节gaba-a受体的组合物及其制备方法
CN117256865A (zh) * 2023-10-12 2023-12-22 上海诺德生物实业有限公司 一种具有改善睡眠作用的茶叶茶氨酸组合物及其制备方法与应用
CN117256865B (zh) * 2023-10-12 2024-03-15 上海诺德生物实业有限公司 一种具有改善睡眠作用的茶叶茶氨酸组合物及其制备方法与应用
CN119081929A (zh) * 2024-08-29 2024-12-06 艾地盟(上海)管理有限公司 植物乳植杆菌jn9、制剂、益生菌组合物及其用途

Also Published As

Publication number Publication date
CN113564089B (zh) 2022-01-04

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN113564089B (zh) 一株产γ-氨基丁酸的植物乳杆菌LHP710及其应用
KR101402031B1 (ko) 락토바실러스 플랜타룸 ｋ154를 이용한 ｇａｂａ 증진 발효 식물 추출물 제조방법
CN115521889B (zh) 一株产γ-氨基丁酸的植物乳杆菌WL02及其用途
CN104388514A (zh) 利用复合菌种发酵制备γ-氨基丁酸的方法
KR101904164B1 (ko) 베리류 와인 제조를 위한 바이오제닉 아민 비생성 사카로마이세스 세레비지애 srcm100936 균주 및 이의 용도
CN110923171B (zh) 一株去除黑木耳土腥味的乳酸菌及其酵素制备方法
TW201946544A (zh) 低糖蔬果酵素液之製作方法
CN101974440A (zh) 一种近平滑假丝酵母真菌及其在普洱茶生产中的应用
JP5011543B2 (ja) Ｇａｂａ含有発酵物の製造方法
CN112980646A (zh) 一种开菲尔源复合益生菌发酵梨汁燕麦活菌醋饮及其制备方法
CN103224894A (zh) 桑肠杆菌及其生物转化发酵型烟用麸皮浸膏的方法和应用
CN106387917A (zh) 一种解酒产品的制备方法
CN113403233A (zh) 多功能凝结芽孢杆菌在益生菌坚果制作中的应用
CN112586596A (zh) 一种提高茶渣营养价值的固态发酵方法
CN107118885A (zh) 一种利用耐乙醇片球菌生产含gaba发酵酒的方法
CN111345417A (zh) 一种无花果酵素饮料的制备方法
CN113817632B (zh) 一种嗜热链球菌、富含gaba的助睡眠发酵乳基料、乳酸菌饮料及制备方法
JP2012205539A (ja) フェルラ酸含有画分の製造方法
CN113854457A (zh) 一种助睡眠促消化樱桃酵素固体饮品及其制备方法
CN112391297B (zh) 一种降解展青霉素的产朊假丝酵母、生物制剂及其应用
CN113854545A (zh) 一种银耳多糖发酵液及其制备方法和应用
KR102088696B1 (ko) 베리류 와인 제조를 위한 바이오제닉 아민 비생성 사카로마이세스 세레비지애 ba34 균주 및 이의 용도
CN116814468B (zh) 一株希氏乳杆菌GZ2及其在高效合成γ-氨基丁酸上的应用
CN115873743B (zh) 一株高产尿囊素的发酵粘液乳杆菌及其应用
CN117547572B (zh) 一种组合物的复合乳酸菌发酵品的制备方法、产品及应用

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant
EE01 Entry into force of recordation of patent licensing contract
EE01 Entry into force of recordation of patent licensing contract

Application publication date: 20211029

Assignee: Qingdao Kangxiaolu Biotechnology Co.,Ltd.

Assignor: YANTAI INSTITUTE OF COASTAL ZONE RESEARCH, CHINESE ACADEMY OF SCIENCES|Zhongke marine microbial industry technology research institute (Shandong) Co.,Ltd.

Contract record no.: X2023210000157

Denomination of invention: One plant produces g- Lactobacillus plantarum LHP710 with aminobutyric acid and its application

Granted publication date: 20220104

License type: Common License

Record date: 20231009