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CN113330000B - 具有对cdk2的抑制活性的3-羰基氨基-5-环戊基-1fi-吡咯化合物 - Google Patents

具有对cdk2的抑制活性的3-羰基氨基-5-环戊基-1fi-吡咯化合物 Download PDF

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Abstract

本发明涉及式(I)的化合物及其对映异构体并涉及式(I)和所述对映异构体的药学上可接受的盐，其中R1、R2和R3如本文中定义。本发明进一步涉及包含这样的化合物和盐的药物组合物，并涉及这样的化合物、盐和组合物用于在有此需要的对象中治疗异常细胞生长（包括癌症）的方法和用途。

Description

具有对CDK2的抑制活性的3-羰基氨基-5-环戊基-1FI-吡咯化 合物
发明背景。
发明领域
本发明涉及式(I)的化合物及其药学上可接受的盐，涉及包含这样的化合物和盐的药物组合物，和涉及其用途。本发明的化合物、盐和组合物可用于治疗对象中的异常细胞生长，例如癌症。
有关技术的描述
细胞周期蛋白依赖性激酶(CDK)和有关的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶是在调节细胞分裂和增殖中执行基本功能的重要细胞酶。已经报道，CDK 1-4、6、10、11在细胞周期进展中起直接作用，而CDK 3、5和7-9可能起间接作用（例如，通过其它CDK的激活，转录或神经元功能的调节）。CDK催化单元通过与称为细胞周期蛋白的调节亚基结合而被激活，然后磷酸化。细胞周期蛋白可分为四大类（G1、G1/S、S和M细胞周期蛋白），它们的表达水平在细胞周期的不同点有所不同。细胞周期蛋白B/CDK1、细胞周期蛋白A/CDK2、细胞周期蛋白E/CDK2、细胞周期蛋白D/CDK4、细胞周期蛋白D/CDK6和可能的其它外差（heterodynes）是细胞周期进展的重要调节剂。
CDK2的过表达与细胞周期的异常调节有关。细胞周期蛋白E/CDK2复合物在G1/S转变、组蛋白生物合成和中心体复制的调节中起重要作用。细胞周期蛋白D/Cdk4/6和细胞周期蛋白E/Cdk2对视网膜母细胞瘤(Rb)的进行性磷酸化会释放G1转录因子E2F，并促进S期进入。在S期早期细胞周期蛋白A/CDK2的激活会促进内源性底物的磷酸化，从而允许DNA复制和E2F失活，从而完成S期(Asghar等人. The history and future of targeting cyclin- dependent kinases in cancer therapy, Nat. Rev. Drug. Discov. 2015；14(2): 130-146)。
细胞周期蛋白E，即CDK2的调节性细胞周期蛋白，经常在癌症中过表达。长期以来，细胞周期蛋白E扩增或过表达已经与乳腺癌的差结果有关(Keyomarsi等人, Cyclin E andsurvival in patients with breast cancer. N Engl J Med. (2002) 347:1566-75)。细胞周期蛋白E2 (CCNE2)过表达与乳腺癌细胞中的内分泌抗性相关，且据报道CDK2抑制会在他莫昔芬抗性的和过表达CCNE2的细胞中恢复对他莫昔芬或CDK4抑制剂的敏感性(Caldon等人, Cyclin E2 overexpression is associated with endocrine resistance butnot insensitivity to CDK2 inhibition in human breast cancer cells. Mol. Cancer Ther. (2012) 11:1488-99；Herrera-Abreu等人, Early Adaptation andAcquired Resistance to CDK4/6 Inhibition in Estrogen Receptor-Positive BreastCancer, Cancer Res. (2016) 76: 2301-2313)。还据报道，细胞周期蛋白E扩增也促进HER2+ 乳腺癌中的曲妥珠单抗抗性(Scaltriti等人. Cyclin E amplification/overexpression is a mechanism of trastuzumab resistance in HER2+ breastcancer patients, Proc Natl Acad Sci. (2011) 108: 3761-6)。还据报道，细胞周期蛋白E过表达在基底样和三重阴性的乳腺癌(TNBC)以及炎症性乳腺癌中发挥作用(Elsawaf和Sinn, Triple Negative Breast Cancer: Clinical and Histological Correlations,Breast Care (2011) 6:273-278；Alexander等人, Cyclin E overexpression as abiomarker for combination treatment strategies in inflammatory breast cancer,Oncotarget (2017) 8: 14897-14911)。
细胞周期蛋白E1 (CCNE1)的扩增或过表达也与卵巢癌、胃癌、子宫内膜癌和其它癌症的差结果有关(Nakayama等人, Gene amplification CCNE1 is related to poorsurvival and potential therapeutic target in ovarian cancer, Cancer (2010)116: 2621-34；Etemadmoghadam等人, Resistance to CDK2 Inhibitors Is Associatedwith Selection of Polyploid Cells in CCNE1-Amplified Ovarian Cancer, Clin Cancer Res (2013) 19: 5960-71；Au-Yeung等人, Selective Targeting of Cyclin E1-Amplified High-Grade Serous Ovarian Cancer by Cyclin-Dependent Kinase 2 andAKT Inhibition, Clin. Cancer Res. (2017) 23:1862-1874；Ayhan等人, CCNE1 copy-number gain and overexpression identify ovarian clear cell carcinoma with apoor prognosis, Modern Pathology (2017) 30: 297-303；Ooi等人, Geneamplification of CCNE1, CCND1, and CDK6 in gastric cancers detected bymultiplex ligation-dependent probe amplification and fluorescence in situhybridization, Hum Pathol. (2017) 61: 58-67；Noske等人, Detection of CCNE1/URI (19q12) amplification by in situ hybridisation is common in high grade andtype II endometrial cancer, Oncotarget (2017) 8: 14794-14805)。
小分子抑制剂dinaciclib (MK-7965)会抑制CDK1、CDK2、CDK5和CDK9，且目前正处于乳腺癌和血液癌的临床开发中。抑制CDK2、CDK7和CDK9的塞利西利(roscovitine或CYC202)在鼻咽癌和NSCLC中进行了研究，且目前正在与沙帕他滨联合在具有BRCA突变的患者中进行研究。抑制CDK2和CDK9的CYC065处于早期临床开发中。尽管付出了巨大努力，但迄今为止还没有获批的选择性靶向CDK2的药物。Cicenas等人. Highlights of the LatestAdvances in Research on CDK Inhibitors. Cancers, (2014) 6:2224-2242。
仍然需要发现具有新活性谱的CDK抑制剂，诸如选择性的CDK2抑制剂，其可用于治疗癌症或其它增殖性疾病或病症。具体地，CDK2抑制剂可用于治疗CCNE1或CCNE2扩增的肿瘤。
发明简述
本发明部分地提供了式(I)的化合物及其药学上可接受的盐。这样的化合物可以抑制CDK (包括CDK2)的活性，从而影响生物学功能。在某些实施方案中，本发明提供了对CDK2选择性的化合物。还提供了药物组合物和药物，其包含单独的或与额外抗癌治疗剂组合的本发明的化合物或盐。
本发明还部分地提供了制备本发明的化合物、药学上可接受的盐和组合物的方法，以及使用前述物质的方法。
在一个方面，本发明提供了式(I)的化合物：
或其药学上可接受的盐，其中：
R1是-L1-(5-10元杂芳基)或-L1-(C6-C12芳基)，其中所述5-10元杂芳基或C6-C12芳基任选地被一个或多个R4取代；
R2和R3独立地是H、C1-C6烷基、C1-C6氟代烷基、-L2-(C3-C7环烷基)或-L2-(4-7元杂环基)，其中每个所述C1-C6烷基和C1-C6氟代烷基任选地被一个或多个R5取代，且每个所述C3-C7环烷基和4-7元杂环基任选地被一个或多个R6取代；或者
R2和R3与它们所连接的N-原子一起形成4-6元杂环基，所述杂环基任选地含有选自O、N(R7)和S(O)q的额外杂原子作为环成员，其中所述4-6元杂环基任选地被一个或多个R8取代；
每个L1和L2独立地是键或任选地被一个或多个R9取代的C1-C2亚烷基；
每个R4独立地是F、Cl、OH、CN、NR10R11、C1-C4烷基、C1-C4氟代烷基、C1-C4烷氧基、C1-C4氟代烷氧基、C3-C8环烷基、C(O)NR10R11、SO2R12、SO(=NH)R12或SO2NR10R11，其中每个C1-C4烷基和C1-C4氟代烷基任选地被一个或多个R13取代；
每个R5独立地是OH、C1-C4烷氧基或NR10R11；
每个R6独立地是F、OH、C1-C4烷基、C1-C4氟代烷基、C1-C4烷氧基、C1-C4氟代烷氧基或NR10R11，其中每个C1-C4烷基和C1-C4氟代烷基任选地被一个或多个R13取代；
R7是H、C1-C4烷基或C(O)-C1-C4烷基；
每个R8独立地是F、OH、C1-C4烷基、C1-C4烷氧基或CN；
每个R9独立地是F、OH或C1-C2烷基；
每个R10和R11独立地是H或C1-C4烷基；
每个R12是C1-C4烷基或C3-C6环烷基；
每个R13独立地是OH、C1-C4烷氧基或NR14R15；
每个R14和R15独立地是H或C1-C4烷基；且
q是0、1或2。
在另一个方面，本发明提供了式(II)的化合物：
或其药学上可接受的盐，其中：
R1、R2和R3如关于式(I)所定义。
在另一个方面，本发明提供了式(III)的化合物：
或其药学上可接受的盐，其中：
R1、R2和R3如关于式(I)所定义。
在另一个方面，本发明提供了一种药物组合物，其包含根据本文描述的任何式的本发明的化合物或其药学上可接受的盐以及药学上可接受的载体或赋形剂。在某些实施方案中，所述药物组合物包含两种或更多种药学上可接受的载体和/或赋形剂。
本发明还提供了治疗方法和用途，其包括给对象施用本发明的化合物或其药学上可接受的盐。
在一个方面，本发明提供了在有此需要的对象中治疗异常细胞生长、特别是癌症的方法，所述方法包括给所述对象施用治疗有效量的本发明的化合物或其药学上可接受的盐。本发明的化合物可以作为单一药剂施用，或可以与其它抗癌治疗剂、特别是与适用于特定癌症的护理标准药剂联合施用。
在另一个方面，本发明提供了在有此需要的对象中治疗异常细胞生长、特别是癌症的方法，所述方法包括与一定量的额外抗癌治疗剂组合地给所述对象施用一定量的本发明的化合物或其药学上可接受的盐，所述量一起有效地治疗所述异常细胞生长。
在另一个方面，本发明提供了用于治疗需要这种治疗的对象的本发明的化合物或其药学上可接受的盐。在某些实施方案中，本发明提供了用于治疗对象中的异常细胞生长、特别是癌症的本发明的化合物或其药学上可接受的盐。
在另一个方面，本发明提供了本发明的化合物或其药学上可接受的盐用于治疗对象中的异常细胞生长、特别是癌症的用途。
在另一个方面，本发明提供了用于在有此需要的对象中治疗异常细胞生长、特别是癌症的药物组合物，所述药物组合物包含本发明的化合物或其药学上可接受的盐和药学上可接受的载体或赋形剂。
在另一个方面，本发明提供了用于用作药物、特别是用于治疗异常细胞生长诸如癌症的药物的本发明的化合物或其药学上可接受的盐。
在另一个方面，本发明提供了本发明的化合物或其药学上可接受的盐用于制备药物的用途，所述药物用于治疗对象中的异常细胞生长，诸如癌症。
在另一个方面，本发明提供了用于治疗对象中的由CDK2介导的障碍的方法，所述方法包括以有效地治疗所述障碍、特别是癌症的量给所述对象施用本发明的化合物或其药学上可接受的盐。
以下描述的本发明化合物的每个实施方案可以与本文描述的本发明化合物的一个或多个其它实施方案组合，所述其它实施方案与它所组合的实施方案不矛盾。
此外，以下描述本发明的每个实施方案在其范围内预见到本发明的化合物的药学上可接受的盐。因此，短语“或其药学上可接受的盐”隐含在本文描述的所有化合物的描述中，除非明确地做出相反指示。
附图简述
图1显示了丙烷-2-基氨基甲酸(1R,3S)-3-[3-({[3-(甲氧基甲基)-1-甲基-1H-吡唑-5-基]羰基}氨基)-1H-吡唑-5-基]环戊酯一水合物(形式1)的单晶X-射线结构。
图2显示了丙烷-2-基氨基甲酸(1R,3S)-3-[3-({[3-(甲氧基甲基)-1-甲基-1H-吡唑-5-基]羰基}氨基)-1H-吡唑-5-基]环戊酯一水合物(形式1)的PXRD谱。
发明详述
通过参考下列本发明的优选实施方案及本文包括的实施例的详细描述，可以更容易地理解本发明。应当理解，本文所用的术语仅仅用于描述具体实施方案的目的，且不意图进行限制。进一步应当理解，除非本文明确地定义，否则本文使用的术语应赋予其在相关领域已知的传统含义。
除非另外指出，否则本文中使用的单数形式“一个”、“一种”和“所述”包括复数形式。例如，“一个”取代基包括一个或多个取代基。
可以在没有本文未明确公开的任何要素存在下适当地实践本文描述的发明。因此，例如，在本文中的每种情况下，术语“包含”、“基本上由……组成”和”由……组成”中的任一个可以被其它两个术语中的任一个替换。
“烷基”表示饱和的单价脂族烃基，包括具有指定数目的碳原子的直链和支链基团。烷基取代基通常含有1-12个碳原子(“C1-C12烷基”)，经常1-8个碳原子(“C1-C8烷基”)，或更经常1-6个碳原子(“C1-C6烷基”)、1-5个碳原子(“C1-C5烷基”)、1-4个碳原子(“C1-C4烷基”)或1-2个碳原子(“C1-C2烷基”)。烷基的例子包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、异丁基、叔丁基、正戊基、异戊基、新戊基、正己基、正庚基、正辛基等。优选的C1-C4烷基包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、异丁基、叔丁基。优选的C1-C6烷基包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、异丁基、叔丁基、正戊基、异戊基、新戊基和正己基。
本文描述为任选地取代的烷基可以被一个或多个取代基取代，如由本文权利要求进一步定义的。除非另外指出，否则这样的任选的取代基独立地选择。在这样的取代具有化学意义的程度上，取代基的总数可以等于烷基基团上的氢原子的总数。任选地取代的烷基通常含有1-6个任选的取代基，有时1-5个任选的取代基、1-4个任选的取代基或优选1-3个任选的取代基。
在烷基上的示例性取代基包括卤素、-OH、C1-C4烷氧基或NRxRy，其中每个Rx和Ry独立地是H或C1-C4烷基。应该理解，NRxRy在本文中一般用于表示如在权利要求中定义的氨基取代基(例如，NR10R11作为任选取代基R5的部分，或NR14R15作为任选取代基R13的部分)。在某些情况下，被取代的烷基通过参考取代基来具体命名。例如，“卤代烷基”表示具有指定数目的碳原子的烷基，其被一个或多个卤素取代基取代，且通常含有1-6个碳原子、1-5个碳原子、1-4个碳原子或1-2个碳原子和1、2或3个卤素原子(即，“C1-C5卤代烷基”、C1-C4卤代烷基”或“C1-C2卤代烷基”)。
更具体地，氟代的烷基可以具体地被称作“氟代烷基”基团(例如，C1-C6、C1-C5、C1-C4或C1-C2氟代烷基)，其通常被1、2或3个氟原子取代。例如，C1-C4氟代烷基包括三氟甲基(-CF3)、二氟甲基(-CF2H)、氟甲基(-CFH2)、二氟乙基(-CH2CF2H)等。这样的基团可以被如在本文中进一步描述的任选取代基进一步取代。类似地，被-OH、C1-C4烷氧基或NRxRy取代的烷基可以被称作“羟基烷基”、“烷氧基烷基”或“氨基烷基”，在每种情况下具有指定数目的碳原子。
在本发明的某些实施方案中，烷基和氟代烷基任选地被一个或多个任选的取代基取代，且优选地被1-4、1-3或1-2个任选的取代基取代。
本文中使用的“亚烷基”表示具有指定数目的碳原子的二价烃基，其可以将两个其它基团连接在一起。这样的基团可以被称作，例如，C1-C6亚烷基、C1-C4亚烷基、C1-C2亚烷基等。在指定的情况下，亚烷基也可以被其它基团取代，并且可以包括一个或多个不饱和度(即，亚烯基或亚炔基基团)或环。亚烷基的开放价不必位于链的相对末端。支链亚烷基可以包括-CH(Me)-、-CH2CH(Me)-和-C(Me)2-，也被包括在术语亚烷基的范围内。当亚烷基被描述为任选地被取代时，取代基包括如本文中所述的那些。例如，C1-C2亚烷基可以是亚甲基或亚乙基。
“烷氧基”表示单价-O-烷基，其中所述烷基部分具有指定数目的碳原子。烷氧基通常含有1-8个碳原子(“C1-C8烷氧基”)，或1-6个碳原子(“C1-C6烷氧基”)，或1-4个碳原子(“C1-C4烷氧基”)。例如，C1-C4烷氧基包括甲氧基、乙氧基、异丙氧基、叔丁基氧基(即，-OCH3、-OCH2CH3、-OCH(CH3)2、-OC(CH3)3)等。烷氧基可以任选地被一个或多个卤素原子和特别是一个或多个氟原子取代，直到在烷基部分上存在的氢原子的总数。这样的基团可以被称作具有指定数目的碳原子且被一个或多个卤素取代基取代的“卤代烷氧基”(或者，在氟代的情况下，更具体地称作“氟代烷氧基”)基团，通常这样的基团含有1-6个碳原子、优选1-4个碳原子和有时1-2个碳原子和1、2或3个卤素原子(即，“C1-C6卤代烷氧基”、“C1-C4卤代烷氧基”或“C1-C2卤代烷氧基”)。更具体地，氟代的烷基可以具体地被称作“氟代烷氧基”基团，例如，C1-C6、C1-C4或C1-C2氟代烷氧基，其通常被1、2或3个氟原子取代。因而，C1-C4氟代烷氧基包括、但不限于三氟甲基氧基(-OCF3)、二氟甲基氧基(-OCF2H)、氟甲基氧基(-OCFH2)、二氟乙基氧基(-OCH2CF2H)等。
“环烷基”表示含有指定数目的碳原子的非芳族饱和碳环环系，其可以是通过环烷基环的碳原子连接至基础分子的单环、螺环、桥连或稠合二环或多环环系。通常，本发明的环烷基含有3-8个碳原子(“C3-C8环烷基”)，优选地3-7个碳原子(“C3-C7环烷基”)或3-6个碳原子(“C3-C6环烷基”)。环烷基环的代表性例子包括，例如，环丙烷、环丁烷、环戊烷、环己烷、环庚烷等。环烷基可以是任选地被取代的，未被取代的，或被本文描述的基团取代。
术语“杂环基”或“杂环的”可以互换地用于表示含有指定数目的环原子的非芳族饱和环系，其含有至少一个选自N、O和S的杂原子作为环成员，其中环S原子任选地被一个或两个氧代基团取代(即，S(O)q，其中q是0、1或2)且其中杂环通过环原子（其可以是C或N）连接至基础分子。在明确指出的情况下，这样的杂环可以是部分不饱和的。杂环包括与一个或多个其它杂环或碳环形成的螺环、桥连环或稠合环，其中在不饱和度或芳香性具有化学意义的程度上，这样的螺环、桥连环或稠合环本身可以是饱和的、部分不饱和的或芳族的，前提条件是，与基础分子的连接点是环系统的杂环部分的原子。优选地，杂环含有1-4个选自N、O和S(O)q的杂原子作为环成员，且更优选1-2个环杂原子，前提条件是，这样的杂环不含有两个邻近的氧原子。
杂环基是未被取代的或被如本文中所述的合适取代基取代。这样的取代基可以存在于与基础分子连接的杂环上，或与其连接的螺环、桥连环或稠合环上。另外，环N原子任选地被适用于胺的基团（例如，烷基、酰基、氨甲酰基、磺酰基等）取代。
根据本文中的定义，杂环通常包括3-8元杂环基，且更优选4-7或4-6元杂环基。
饱和杂环的示例性例子包括、但不限于：
。
在某些实施方案中，杂环基团含有3-8个环成员，包括碳和非碳杂原子，且经常4-7或4-6个环成员。在某些实施方案中，包含4-7元杂环的取代基选自氮杂环丁基、吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基、氮杂环庚烷基、二氮杂环庚烷基、氧杂环丁基、四氢呋喃基、四氢吡喃基、四氢噻喃基、吗啉基和硫代吗啉基环，在这样的取代具有化学意义的程度上，其各自如本文中所述任选地被取代。
在本发明的某些实施方案中，环烷基和杂环基任选地被一个或多个如本文中所述的任选取代基取代。
应当理解，除了氧代基团连接到S以形成磺酰基之外，或者在某些杂芳族环诸如三唑、四唑、噁二唑、噻二唑、三嗪等的情况下，通常依次连接不超过两个N、O或S原子。
“芳基”或“芳族的”表示具有公知的芳香性特征的任选地被取代的单环或稠合二环或多环环系，其中至少一个环含有完全共轭的π-电子系统。通常，芳基含有6-20个碳原子(“C6-C20芳基”)作为环成员，优选6-14个碳原子(“C6-C14芳基”)或更优选6-12个碳原子(“C6-C12芳基”)。稠合芳基可以包括与另一个芳基或杂芳基环稠合或与饱和的或部分不饱和的碳环或杂环稠合的芳基环(例如，苯基环)，前提条件是，在这样的稠合环系统上与基础分子的连接点是环系统的芳族部分的原子。芳基的例子包括、但不限于苯基、联苯、萘基、蒽基、菲基、茚满基、茚基和四氢萘基。芳基是未被取代的或如在本文中进一步描述的被取代。
类似地，“杂芳基”或“杂芳族的”表示具有公知的芳香性特征的单环或稠合二环或多环环系，其含有指定数目的如上面在“芳基”下定义的环原子，其包括至少一个选自N、O和S的杂原子作为芳环中的环成员。杂原子的包含允许5-元环以及6-元环的芳香性。通常，杂芳基含有5-12个环原子(“5-12元杂芳基”)，且更优选5-10个环原子(“5-10元杂芳基”)。杂芳基环通过杂芳环的环原子连接至基础分子，从而保持芳香性。因此，6-元杂芳基环可以通过环C原子连接至基础分子，而5-元杂芳基环可以通过环C或N原子连接至基础分子。杂芳基也可以与另一个芳基或杂芳基环稠合，或与饱和的或部分不饱和的碳环或杂环稠合，前提条件是，在这样的稠合环系统上与基础分子的连接点是环系统的杂芳族部分的原子。未被取代的杂芳基的例子包括、但不限于吡唑、三唑、异噁唑、噁唑、噻唑、噻二唑、咪唑、吡啶、吡嗪、吲唑和苯并咪唑。另外的杂芳基包括吡咯、呋喃、噻吩、噁二唑、四唑、哒嗪、嘧啶、苯并呋喃、苯并噻吩、吲哚、喹啉、异喹啉、嘌呤、三嗪、萘啶和咔唑。在常见实施方案中，5-或6-元杂芳基是吡唑、三唑、异噁唑、噁唑、噻唑、噻二唑、咪唑、吡啶或吡嗪环。杂芳基是未被取代的或如在本文中进一步描述的被取代。
本文描述为任选地被取代的芳基和杂芳基基团可以被一个或多个取代基取代，除非另外指出，否则所述取代基独立选择。在这样的取代具有化学意义的程度上且在芳基和杂芳基环的情况下保持芳香性的程度上，取代基的总数可以等于在芳基、杂芳基或杂环基基团上的氢原子的总数。任选地被取代的芳基或杂芳基通常含有1-5个任选的取代基，有时1-4个任选的取代基，优选1-3个任选的取代基，或更优选1-2个任选的取代基（如本文中所述的）。
单环杂芳基的例子包括、但不限于：
稠合杂芳基的示例性例子包括、但不限于：
“羟基”表示OH基团。
“氰基”表示-C≡N基团。
“未被取代的氨基”表示基团-NH2。在氨基被描述为被取代或任选地被取代的情况下，该术语包括-NRxRy形式的基团，其中Rx和Ry各自如在本文中进一步描述的定义。例如，“烷基氨基”表示基团-NRxRy，其中Rx和Ry中的一个是烷基基团且另一个是H，并且“二烷基氨基”表示-NRxRy，其中Rx和Ry都是烷基基团，其中烷基基团具有指定数目的碳原子(例如，-NH-C1-C4烷基或-N(C1-C4烷基)2)。应该理解，NRxRy通常用于表示如在权利要求中定义的氨基取代基(例如，NR10R11作为任选取代基R5的部分，或NR14R15作为任选取代基R13的部分)。
“卤素”或“卤代”表示氟、氯、溴和碘(F、Cl、Br、I)。优选地，卤素表示氟或氯(F或Cl)。
“任选的”或“任选地”意指随后所描述的事件或情况可以但不必须发生，且该描述包括事件或情况发生的例子以及事件或情况不发生的例子。
术语“任选地被取代的”和“被取代的或未被取代的”互换地用于指示，所描述的特定基团可能没有非氢取代基(即，未被取代的)，或该基团可能具有一个或多个非氢取代基(即，被取代的)。如果没有另外指出，可能存在的取代基的总数等于在所述基团的未取代形式上存在的H原子的数目。在任选的取代基通过双键连接的情况下（诸如氧代（=O）取代基），该基团占用两个可用的化合价，因此包括的其它取代基的总数减少2。在任选的取代基独立地选自备选列表的情况下，所选择的基团是相同的或不同的。在整个公开内容中，应该理解，任选的取代基的数目和性质将限于这样的取代具有化学意义的程度。
经常地，本文描述为任选地被“一个或多个”取代基取代的基团任选地被1-4个这样的取代基取代，优选地任选地被1-3个这样的取代基取代，且更优选地任选地被1-2个这样的取代基取代。本文中的阐述基团“任选地被任选取代基列表中的一个或多个取代”可以替换为“任选地被1-4个这样的任选取代基取代”、“任选地被1-3个这样的任选取代基取代”、“任选地被1-2个这样的任选取代基取代”、“任选地被1、2、3或4个这样的任选取代基取代”、任选地被1、2或3个这样的任选取代基取代”或“任选地被1或2个这样的任选取代基取代”。
在一个方面，本发明提供了式(I)的化合物：
或其药学上可接受的盐，其中：
R1是-L1-(5-10元杂芳基)或-L1-(C6-C12芳基)，其中所述5-10元杂芳基或C6-C12芳基任选地被一个或多个R4取代；
R2和R3独立地是H、C1-C6烷基、C1-C6氟代烷基、-L2-(C3-C7环烷基)或-L2-(4-7元杂环基)，其中每个所述C1-C6烷基和C1-C6氟代烷基任选地被一个或多个R5取代，且每个所述C3-C7环烷基和4-7元杂环基任选地被一个或多个R6取代；或
R2和R3与它们所连接的N-原子一起形成4-6元杂环基，所述杂环基任选地含有选自O、N(R7)和S(O)q的额外杂原子作为环成员，其中所述4-6元杂环基任选地被一个或多个R8取代；
每个L1和L2独立地是键或任选地被一个或多个R9取代的C1-C2亚烷基；
每个R4独立地是F、Cl、OH、CN、NR10R11、C1-C4烷基、C1-C4氟代烷基、C1-C4烷氧基、C1-C4氟代烷氧基、C3-C8环烷基、C(O)NR10R11、SO2R12、SO(=NH)R12或SO2NR10R11，其中每个C1-C4烷基和C1-C4氟代烷基任选地被一个或多个R13取代；
每个R5独立地是OH、C1-C4烷氧基或NR10R11；
每个R6独立地是F、OH、C1-C4烷基、C1-C4氟代烷基、C1-C4烷氧基、C1-C4氟代烷氧基或NR10R11，其中每个C1-C4烷基和C1-C4氟代烷基任选地被一个或多个R13取代；
R7是H、C1-C4烷基或C(O)-C1-C4烷基；
每个R8独立地是F、OH、C1-C4烷基、C1-C4烷氧基或CN；
每个R9独立地是F、OH或C1-C2烷基；
每个R10和R11独立地是H或C1-C4烷基；
每个R12是C1-C4烷基或C3-C6环烷基；
每个R13独立地是OH、C1-C4烷氧基或NR14R15；
每个R14和R15独立地是H或C1-C4烷基；且
q是0、1或2。
式(I)的化合物的特征在于在环戊基环的1-和3-位置处的取代基之间的顺式关系。式(I)的化合物可以呈现为在1-和3-位置处具有顺式相对构型(即，(1R,3S)或(1S,3R))的单一对映异构体，或呈现为顺式对映异构形式的混合物，例如(1R,3S)和(1S,3R)的外消旋混合物。
在式(I)的化合物中，R1是-L1-(5-10元杂芳基)或-L1-(C6-C12芳基)，其中所述5-10元杂芳基或C6-C12芳基任选地被一个或多个R4取代。
在某些实施方案中，R1是-L1-(5-10元杂芳基)，其中所述5-10元杂芳基任选地被一个或多个R4取代。在某些这样的实施方案中，所述5-10元杂芳基是吡唑基、三唑基、异噁唑基、噁唑基、噻唑基、噻二唑基、咪唑基、吡啶基、吡嗪基、吲唑基或苯并咪唑基，其中所述5-10元杂芳基任选地被一个或多个R4取代。在某些实施方案中，所述5-10元杂芳基是任选地被一个或多个R4取代的吡唑基或三唑基。在具体实施方案中，所述5-10元杂芳基是任选地被一个或多个R4取代的吡唑基。在其它实施方案中，所述5-10元杂芳基是任选地被一个或多个R4取代的三唑基。在其它实施方案中，所述5-10元杂芳基是异噁唑基、噁唑基、噻唑基、噻二唑基、咪唑基、吡啶基、吡嗪基、吲唑基或苯并咪唑基，其中所述5-10元杂芳基任选地被一个或多个R4取代。在某些实施方案中，所述5-10元杂芳基是任选地被一个或多个R4取代的异噁唑基或噁唑基。在具体实施方案中，所述5-10元杂芳基是任选地被一个或多个R4取代的异噁唑基。在其它实施方案中，所述5-10元杂芳基是噻唑基、噻二唑基或咪唑基，其中所述5-10元杂芳基任选地被一个或多个R4取代。在其它实施方案中，所述5-10元杂芳基是吡啶基、吡嗪基、吲唑基或苯并咪唑基，其中所述5-10元杂芳基任选地被一个或多个R4取代。在前述各个的某些实施方案中，所述5-10元杂芳基任选地被1、2、3或4个R4取代。在前述各个的某些实施方案中，所述5-10元杂芳基任选地被1或2个R4取代。
在其它实施方案中，R1是-L1-(C6-C12芳基)，其中所述C6-C12芳基任选地被一个或多个R4取代。在某些这样的实施方案中，所述C6-C12芳基是任选地被一个或多个R4取代的苯基。在前述各个的某些实施方案中，所述C6-C12芳基任选地被1、2、3或4个R4取代。在前述各个的某些实施方案中，所述C6-C12芳基任选地被1或2个R4取代。
在式(I)的化合物中，L1是键或任选地被一个或多个R9取代的C1-C2亚烷基。在某些这样的实施方案中，所述L1是键或任选地被1、2、3或4个R9取代的C1-C2亚烷基。在某些这样的实施方案中，L1是键或任选地被1或2个R9取代的C1-C2亚烷基。在某些这样的实施方案中，L1是键、亚甲基或亚乙基。在某些这样的实施方案中，L1是键或亚甲基。在前述各个的某些实施方案中，L1是键。在前述各个的其它实施方案中，L1是任选地被一个或多个R9取代的C1-C2亚烷基。在某些这样的实施方案中，所述L1是任选地被1、2、3或4个R9取代的C1-C2亚烷基。在某些这样的实施方案中，所述L1是任选地被1或2个R9取代的C1-C2亚烷基。在某些这样的实施方案中，L1是亚甲基或亚乙基(即，-CH2或-CH2CH2-)。在某些实施方案中，L1是亚甲基。
在式(I)的化合物中，R2和R3独立地是H、C1-C6烷基、C1-C6氟代烷基、-L2-(C3-C7环烷基)或-L2-(4-7元杂环基)，其中每个所述C1-C6烷基和C1-C6氟代烷基任选地被一个或多个R5取代，且每个所述C3-C7环烷基和4-7元杂环基任选地被一个或多个R6取代；或R2和R3与它们所连接的N-原子一起形成4-6元杂环基，所述杂环基任选地含有选自O、N(R7)和S(O)q的额外杂原子作为环成员，其中所述4-6元杂环基任选地被一个或多个R8取代。
在某些实施方案中，R2和R3独立地是H、C1-C6烷基、C1-C6氟代烷基、-L2-(C3-C7环烷基)或-L2-(4-7元杂环基)，其中每个所述C1-C6烷基和C1-C6氟代烷基任选地被一个或多个R5取代，且每个所述C3-C7环烷基和4-7元杂环基任选地被一个或多个R6取代。在某些这样的实施方案中，所述C1-C6烷基和C1-C6氟代烷基任选地被1、2、3或4个R5取代，且每个所述C3-C7环烷基和4-7元杂环基任选地被1、2、3或4个R6取代。在某些这样的实施方案中，所述C1-C6烷基和C1-C6氟代烷基任选地被1或2个R5取代，且每个所述C3-C7环烷基和4-7元杂环基任选地被1或2个R6取代。
在某些实施方案中，R2和R3独立地是H、C1-C6烷基或C1-C6氟代烷基，其中每个所述C1-C6烷基和C1-C6氟代烷基任选地被一个或多个R5取代。在某些这样的实施方案中，每个所述C1-C6烷基和C1-C6氟代烷基任选地被1、2、3或4个R5取代。在某些这样的实施方案中，每个所述C1-C6烷基和C1-C6氟代烷基任选地被1或2个R5取代。在特定实施方案中，R2和R3独立地是H、C1-C6烷基或C1-C6氟代烷基。在具体实施方案中，R2是H且R3是C1-C6烷基或C1-C6氟代烷基。在具体实施方案中，R2是H且R3是CH3、CH2CH3、CH2CH2CH3、CH(CH3)2、CH2CH2CH2CH3、CH(CH3)CH2CH3、CH2CH(CH3)2或C(CH3)3。
在其它实施方案中，R2和R3独立地是H、-L2-(C3-C7环烷基)或-L2-(4-7元杂环基)，其中每个所述C3-C7环烷基和4-7元杂环基任选地被一个或多个R6取代。在某些这样的实施方案中，R2是H且R3是-L2-(C3-C7环烷基)或-L2-(4-7元杂环基)，其中每个所述C3-C7环烷基和4-7元杂环基任选地被一个或多个R6取代。在特定实施方案中，R2是H且R3是-L2-(C3-C7环烷基)，其中所述C3-C7环烷基任选地被一个或多个R6取代。在前述各自的某些实施方案中，每个所述C3-C7环烷基和4-7元杂环基任选地被1、2、3或4个R6取代。在前述各自的某些实施方案中，每个所述C3-C7环烷基和4-7元杂环基任选地被1或2个R6取代。在某些这样的实施方案中，每个R6是CH3。
在式(I)的化合物中，L2是键或任选地被一个或多个R9取代的C1-C2亚烷基。在某些这样的实施方案中，所述L2是键或任选地被1、2、3或4个R9取代的C1-C2亚烷基。在某些这样的实施方案中，L2是键或任选地被1或2个R9取代的C1-C2亚烷基。在某些这样的实施方案中，L2是键、亚甲基或亚乙基。在某些这样的实施方案中，L2是键或亚甲基。在前述各个的某些实施方案中，L2是键。在前述各个的其它实施方案中，L2是任选地被一个或多个R9取代的C1-C2亚烷基。在某些这样的实施方案中，L2是任选地被1、2、3或4个R9取代的C1-C2亚烷基。在某些这样的实施方案中，L2是任选地被1或2个R9取代的C1-C2亚烷基。在某些这样的实施方案中，L2是亚甲基或亚乙基(即，-CH2或-CH2CH2-)。在某些实施方案中，L2是亚甲基。
在某些实施方案中，R2和R3与它们所连接的N-原子一起形成4-6元杂环基，所述杂环基任选地含有选自O、N(R7)和S(O)q的额外杂原子作为环成员，其中所述4-6元杂环基任选地被一个或多个R8取代，且其中q是0、1或2。在某些这样的实施方案中，所述4-6元杂环基任选地被1、2、3或4个R8取代。在某些这样的实施方案中，所述4-6元杂环基任选地被1或2个R8取代。
在某些这样的实施方案中，R2和R3与它们所连接的N-原子一起形成任选地被取代的4-6元杂环基，其任选地含有选自O、N(R7)和S(O)q的额外杂原子作为环成员，其中所述4-6元杂环基是氮杂环丁基、吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基、吗啉基或硫代吗啉基，每个任选地被一个或多个R8取代。在某些这样的实施方案中，R2和R3与它们所连接的N-原子一起形成氮杂环丁基或吡咯烷基，每个任选地被一个或多个R8取代。在具体实施方案中，R2和R3与它们所连接的N-原子一起形成任选地被一个或多个R8取代的氮杂环丁基。在前述各自的某些实施方案中，所述4-6元杂环基任选地被1、2、3或4个R8取代。在前述各自的某些实施方案中，所述4-6元杂环基任选地被1或2个R8取代。在某些这样的实施方案中，每个R8是CH3。
在式(I)的化合物中，每个R4独立地是F、Cl、OH、CN、NR10R11、C1-C4烷基、C1-C4氟代烷基、C1-C4烷氧基、C1-C4氟代烷氧基、C3-C8环烷基、C(O)NR10R11、SO2R12、SO(=NH)R12或SO2NR10R11，其中每个C1-C4烷基和C1-C4氟代烷基任选地被一个或多个R13取代。在某些实施方案中，每个R4独立地是C1-C4烷基或C1-C4烷氧基，其中每个C1-C4烷基任选地被一个或多个R13取代。在某些这样的实施方案中，每个R13是OCH3。在前述各个的某些实施方案中，每个C1-C4烷基和C1-C4氟代烷基任选地被1、2、3或4个R13取代。在前述各个的某些实施方案中，每个C1-C4烷基和C1-C4氟代烷基任选地被1或2个R13取代。在具体实施方案中，每个R4 (或被R13取代的R4)独立地是CH3、OCH3或CH2OCH3。
在式(I)的化合物中，每个R5独立地是OH、C1-C4烷氧基或NR10R11。在某些这样的实施方案中，每个R5独立地是OH、OCH3、NH2、NHCH3或N(CH3)2。
在式(I)的化合物中，每个R6独立地是F、OH、C1-C4烷基、C1-C4氟代烷基、C1-C4烷氧基、C1-C4氟代烷氧基或NR10R11，其中每个C1-C4烷基和C1-C4氟代烷基任选地被一个或多个R13取代。在某些实施方案中，每个R6独立地是C1-C4烷基或C1-C4烷氧基，其中每个C1-C4烷基任选地被一个或多个R13取代。在前述各个的某些实施方案中，每个C1-C4烷基任选地被1、2、3或4个R13取代。在前述各个的某些实施方案中，每个C1-C4烷基任选地被1或2个R13取代。在某些这样的实施方案中，R13是CH3或OCH3。在特定实施方案中，每个R6独立地是CH3、OCH3或CH2OCH3。在特定实施方案中，每个R6独立地是CH3。
在式(I)的化合物中，R7是H、C1-C4烷基或C(O)-C1-C4烷基。在某些实施方案中，R7是H、CH3或C(O)CH3。
在式(I)的化合物中，每个R8独立地是F、OH、C1-C4烷基、C1-C4烷氧基或CN。在特定实施方案中，每个R8独立地是F、OH、CH3、OCH3或CN。在具体实施方案中，每个R8是CH3。
在式(I)的化合物中，每个R9独立地是F、OH或C1-C2烷基。在某些实施方案中，R9是F、OH或CH3。在特定实施方案中，R9是F、OH或CH3。在某些实施方案中，L1和L2是键或未被取代的C1-C2亚烷基且R9不存在。
在式(I)的化合物中，每个R10和R11独立地是H或C1-C4烷基。在特定实施方案中，每个R10和R11独立地是H或CH3。
在式(I)的化合物中，每个R12是C1-C4烷基或C3-C6环烷基。在特定实施方案中，每个R12是CH3、CH2CH3、CH2CH2CH3、CH(CH3)2或环丙基。
在式(I)的化合物中，每个R13独立地是OH、C1-C4烷氧基或NR14R15。在特定实施方案中，每个R13独立地是OH、OCH3或NR14R15，其中R14和R15独立地是H或CH3。在具体实施方案中，每个R13独立地是OH、OCH3、NH2、NHCH3或N(CH3)2。
在式(I)的化合物中，每个R14和R15独立地是H或C1-C4烷基。在特定实施方案中，R14和R15独立地是H或CH3。
在某些实施方案中，式(I)的化合物具有如在式(II)中所示的绝对立体化学：
或其药学上可接受的盐，其中：
R1、R2和R3如关于式(I)所定义。
在某些实施方案中，式(I)的化合物具有如在式(III)中所示的绝对立体化学：
或其药学上可接受的盐，其中：
R1、R2和R3如关于式(I)所定义。
式(II)和(III)的化合物在环戊基环的1-和3-位置的取代基之间保持顺式关系，但呈现为以基本上对映异构纯的形式指示的对映异构体。
本文关于式(I)描述的每个方面和实施方案也适用于式(II)或(III)的化合物。
在某些实施方案中，本发明提供式(I)、(II)或(III)的化合物或其药学上可接受的盐，其中：
R1是任选地被1或2个R4取代的-L1-(5-10元杂芳基)；
R2和R3独立地是H、C1-C6烷基、-L2-(C3-C7环烷基)，其中所述C3-C7环烷基任选地被一个R6取代；
每个L1和L2独立地是键或亚甲基；
每个R4独立地是F、Cl、OH、CN、NR10R11、C1-C4烷基、C1-C4氟代烷基、C1-C4烷氧基、C1-C4氟代烷氧基、C3-C8环烷基、C(O)NR10R11、SO2R12、SO(=NH)R12或SO2NR10R11，其中每个C1-C4烷基和C1-C4氟代烷基任选地被一个R13取代；
每个R6独立地是F、OH、C1-C4烷基、C1-C4氟代烷基、C1-C4烷氧基C1-C4氟代烷氧基或NR10R11，其中每个C1-C4烷基和C1-C4氟代烷基任选地被一个R13取代；
每个R10和R11独立地是H或C1-C4烷基；
每个R12是C1-C4烷基或C3-C6环烷基；且
每个R13独立地是OH、C1-C4烷氧基或NR14R15。
在其它实施方案中，本发明提供了式(I)、(II)或(III)的化合物或其药学上可接受的盐，其中：
R1是任选地被1或2个R4取代的-L1-(5-10元杂芳基)；
R2和R3独立地是H、C1-C6烷基或任选地被一个C1-C4烷基取代的C3-C7环烷基；
L1独立地是键或亚甲基；且
每个R4独立地是任选地被OH或C1-C4烷氧基取代的C1-C4烷基。
在其它实施方案中，本发明提供了具有两个或更多个以下特征的式(I)、(II)或(III)的化合物或其药学上可接受的盐：
R1是-L1-(5-10元杂芳基)，其中所述5-10元杂芳基任选地被一个或多个R4取代；
R2和R3独立地是H或C1-C6烷基；
L1是键或C1-C2亚烷基；
每个R4独立地是C1-C4烷基，其中每个C1-C4烷基任选地被一个或多个R13取代；
每个R13独立地是OH、C1-C4烷氧基或NR14R15；且
每个R14和R15独立地是H或C1-C4烷基。
在某些这样的实施方案中，本发明提供了具有两个或更多个以下特征的式(I)、(II)或(III)的化合物或其药学上可接受的盐：
R1是任选地被一个或多个R4取代的-L1-(5-10元杂芳基)，其中所述5-10元杂芳基是吡唑基；
R2是H；
R3是C1-C6烷基，优选C1-C4烷基；
L1是键；
每个R4独立地是C1-C4烷基，其中每个C1-C4烷基任选地被一个或多个R13取代；
每个R13独立地是OH、OCH3或NR14R15；且
每个R14和R15独立地是H或CH3。
在其它实施方案中，本发明提供了具有两个或更多个以下特征的式(I)、(II)或(III)的化合物或其药学上可接受的盐：
R1是-L1-(5-10元杂芳基)，其中所述5-10元杂芳基任选地被一个或多个R4取代；
R2和R3独立地是H或-L2-(C3-C7环烷基)，其中所述C3-C7环烷基任选地被一个或多个R6取代；
L1是键或C1-C2亚烷基；
L2是键或C1-C2亚烷基；
每个R4独立地是C1-C4烷基，其中每个C1-C4烷基任选地被一个或多个R13取代；
每个R6独立地是F、OH或C1-C4烷基；
每个R13独立地是OH、C1-C4烷氧基或NR14R15；且
每个R14和R15独立地是H或C1-C4烷基。
在其它实施方案中，本发明提供了具有两个或更多个以下特征的式(I)、(II)或(III)的化合物或其药学上可接受的盐：
R1是任选地被一个或多个R4取代的-L1-(5-10元杂芳基)，其中所述5-10元杂芳基是异噁唑基；
L1是C1-C2亚烷基；
R2是H；
R3是任选地被一个或多个R6取代的-L2-(C3-C7环烷基)；
L2是键；
每个R4独立地是C1-C4烷基，其中每个C1-C4烷基任选地被一个或多个R13取代；
每个R6独立地是F、OH或C1-C4烷基；
每个R13独立地是OH、C1-C4烷氧基或NR14R15；且
每个R14和R15独立地是H或C1-C4烷基。
在另一个方面，本发明提供了选自在实施例1-649（包括它们）中举例说明的化合物的化合物或其药学上可接受的盐。
在另一个方面，本发明提供了化合物，其选自：
丙基氨基甲酸(1R,3S)-3-(3-{[(2-甲氧基吡啶-4-基)乙酰基]氨基}-1H-吡唑-5-基)环戊酯；
丙烷-2-基氨基甲酸(1R,3S)-3-(3-{[(2-甲基-1,3-噻唑-5-基)乙酰基]氨基}-1H-吡唑-5-基)环戊酯；
乙基氨基甲酸(1R,3S)-3-(3-{[(1-甲基-1H-吲唑-5-基)乙酰基]氨基}-1H-吡唑-5-基)环戊酯；
(2S)-丁-2-基氨基甲酸(1R,3S)-3-(3-{[(1-甲基-1H-1,2,3-三唑-5-基)羰基]氨基}-1H-吡唑-5-基)环戊酯；
(1-甲基环丙基)氨基甲酸(1R,3S)-3-(3-{[(5-甲基-1,3-噁唑-2-基)乙酰基]氨基}-1H-吡唑-5-基)环戊酯；
(1-甲基环丙基)氨基甲酸(1R,3S)-3-(3-{[(5-甲氧基吡嗪-2-基)乙酰基]氨基}-1H-吡唑-5-基)环戊酯；
(1-甲基环丙基)氨基甲酸(1R,3S)-3-(3-{[(5-甲基-1,2-噁唑-3-基)乙酰基]氨基}-1H-吡唑-5-基)环戊酯；
(1-甲基环丙基)氨基甲酸(1R,3S)-3-[3-({[3-(甲氧基甲基)-1-甲基-1H-吡唑-5-基]羰基}氨基)-1H-吡唑-5-基]环戊酯；
[(2ξ)-4,4,4-三氟丁-2-基]氨基甲酸(1R,3S)-3-[3-({[3-(甲氧基甲基)-1-甲基-1H-吡唑-5-基]羰基}氨基)-1H-吡唑-5-基]环戊酯(异构体A)；
[(2ξ)-4,4,4-三氟丁-2-基]氨基甲酸(1R,3S)-3-[3-({[3-(甲氧基甲基)-1-甲基-1H-吡唑-5-基]羰基}氨基)-1H-吡唑-5-基]环戊酯(异构体B)；
叔丁基氨基甲酸(1R,3S)-3-(3-{[(5-甲基-1,3-噁唑-2-基)乙酰基]氨基}-1H-吡唑-5-基)环戊酯；
2,2-二甲基氮杂环丁烷-1-甲酸(1R,3S)-3-(3-{[(3-甲基-1,2-噁唑-5-基)乙酰基]氨基}-1H-吡唑-5-基)环戊酯；
丙烷-2-基氨基甲酸(1R,3S)-3-[3-({[3-(甲氧基甲基)-1-甲基-1H-吡唑-5-基]羰基}氨基)-1H-吡唑-5-基]环戊酯；
(2S)-丁-2-基氨基甲酸(1R,3S)-3-[3-({[3-(甲氧基甲基)-1-甲基-1H-吡唑-5-基]羰基}氨基)-1H-吡唑-5-基]环戊酯；
(1-甲基环丙基)氨基甲酸(1R,3S)-3-(3-{[(3-甲基-1,2-噁唑-5-基)乙酰基]氨基}-1H-吡唑-5-基)环戊酯；
(2S)-丁-2-基氨基甲酸(1R,3S)-3-{3-[(1,2-噁唑-5-基乙酰基)氨基]-1H-吡唑-5-基}环戊酯；
叔丁基氨基甲酸(1R,3S)-3-{3-[(1,2-噁唑-3-基乙酰基)氨基]-1H-吡唑-5-基}环戊酯；和
(1-甲基环丁基)氨基甲酸(1R,3S)-3-(3-{[(5-甲基-1,3,4-噻二唑-2-基)乙酰基]氨基}-1H-吡唑-5-基)环戊酯；
或其药学上可接受的盐。
在另一个方面，本发明提供了化合物，其选自：
丙烷-2-基氨基甲酸(1R,3S)-3-[3-({[3-(甲氧基甲基)-1-甲基-1H-吡唑-5-基]羰基}氨基)-1H-吡唑-5-基]环戊酯；和
丙烷-2-基氨基甲酸(1R,3S)-3-[3-({[3-(甲氧基甲基)-1-甲基-1H-吡唑-5-基]羰基}氨基)-1H-吡唑-5-基]环戊酯；
或其药学上可接受的盐。
在另一个方面，本发明提供了丙烷-2-基氨基甲酸(1R,3S)-3-[3-({[3-(甲氧基甲基)-1-甲基-1H-吡唑-5-基]羰基}氨基)-1H-吡唑-5-基]环戊酯或其药学上可接受的盐。
在另一个方面，本发明提供了游离碱形式的丙烷-2-基氨基甲酸(1R,3S)-3-[3-({[3-(甲氧基甲基)-1-甲基-1H-吡唑-5-基]羰基}氨基)-1H-吡唑-5-基]环戊酯。
在另一个方面，本发明提供了药学上可接受的盐形式的丙烷-2-基氨基甲酸(1R,3S)-3-[3-({[3-(甲氧基甲基)-1-甲基-1H-吡唑-5-基]羰基}氨基)-1H-吡唑-5-基]环戊酯。
在某些实施方案中，本发明提供了丙烷-2-基氨基甲酸(1R,3S)-3-[3-({[3-(甲氧基甲基)-1-甲基-1H-吡唑-5-基]羰基}氨基)-1H-吡唑-5-基]环戊酯一水合物(形式1)。在某些这样的实施方案中，所述一水合物(形式1)的特征在于包含以下峰的粉末X-射线衍射(PXRD)图样(2θ)：
(a) 1、2、3、4、5或超过5个峰，其选自表1中的峰（按°2θ±0.2°2θ计）；(b) 1、2、3、4或5个选自10.4、11.7、12.9、18.2和24.2（按°2θ±0.2°2θ计）的峰；(c)选自10.4、11.7、12.9、18.2和24.2（按°2θ±0.2°2θ计）的任何两个峰；(d)选自10.4、11.7、12.9、18.2和24.2（按°2θ±0.2°2θ计）的任何三个峰；(e)选自10.4、11.7、12.9、18.2和24.2（按°2θ±0.2°2θ计）的任何四个峰；(f)在10.4、11.7、12.9、18.2和24.2（按°2θ±0.2°2θ计）的峰；(g) 1个在10.4的峰，和1、2、3或4个选自11.7、12.9、18.2和24.2（按°2θ±0.2°2θ计）的峰；(h) 1个在11.7的峰，和1、2、3或4个选自10.4、12.9、18.2和24.2（按°2θ±0.2°2θ计）的峰；(i) 1个在12.9的峰，和1、2、3或4个选自10.4、11.7、18.2和24.2（按°2θ±0.2°2θ计）的峰；(j) 1个在18.2的峰，和1、2、3或4个选自10.4、11.7、12.9和24.2（按°2θ±0.2°2θ计）的峰；(k) 1个在24.2的峰，和1、2、3或4个选自10.4、11.7、12.9和18.2（按°2θ±0.2°2θ计）的峰；或(l)基本上与在图2中所示相同的在2θ值的峰。
在另一个实施方案中，本发明提供了(1-甲基环丙基)氨基甲酸(1R,3S)-3-(3-{[(3-甲基-1,2-噁唑-5-基)乙酰基]氨基}-1H-吡唑-5-基)环戊酯或其药学上可接受的盐。
在另一个实施方案中，本发明提供了游离碱形式的(1-甲基环丙基)氨基甲酸(1R,3S)-3-(3-{[(3-甲基-1,2-噁唑-5-基)乙酰基]氨基}-1H-吡唑-5-基)环戊酯。
在另一个实施方案中，本发明提供了药学上可接受的盐形式的(1-甲基环丙基)氨基甲酸(1R,3S)-3-(3-{[(3-甲基-1,2-噁唑-5-基)乙酰基]氨基}-1H-吡唑-5-基)环戊酯。
在一个具体实施方案中，本发明提供了具有以下结构的化合物：
或其药学上可接受的盐。
在另一个具体实施方案中，本发明提供了具有以下结构的化合物：
或其药学上可接受的盐。
在优选的实施方案中，本发明的化合物是CDK2的选择性抑制剂，即它们相对于其它酶靶标对CDK2具有较低的抑制常数(例如，Ki或IC50)。新出现的数据提示，GSK3β抑制可能与胃肠道毒性有关，这已在一些CDK抑制剂中观察到。由于更高剂量的潜力、连续定量施用方案的应用和/或延长的整体治疗时间，相对于GSK3β作为CDK2的选择性抑制剂的化合物可以提供改进的安全性谱、改进的定量施用计划（例如，通过减少对剂量减少或施用假期的需要）和/或增强的总体效力。类似地，CDK2的选择性抑制剂可能具有某些血液学毒性的降低的风险，据报道所述毒性与CDK6的抑制有关。
在某些实施方案中，本发明的化合物相对于CDK1对CDK2具有选择性。在某些这样的实施方案中，化合物表现出相对于CDK1对CDK2的至少10倍选择性。在其它实施方案中，化合物表现出相对于CDK1对CDK2的至少20倍选择性。在具体实施方案中，化合物表现出相对于CDK1对CDK2的至少30倍选择性。
在某些实施方案中，本发明的化合物相对于CDK4和/或CDK6对CDK2具有选择性。在某些这样的实施方案中，化合物表现出相对于CDK4和/或CDK6对CDK2的至少10倍选择性。在其它实施方案中，化合物表现出相对于CDK4和/或CDK6对CDK2的至少20倍选择性。在具体实施方案中，化合物表现出相对于CDK4和/或CDK6对CDK2的至少30倍选择性。
在某些实施方案中，本发明的化合物相对于GSK3β对CDK2具有选择性。在某些这样的实施方案中，化合物表现出相对于GSK3β对CDK2的至少10倍选择性。在其它实施方案中，化合物表现出相对于GSK3β对CDK2的至少20倍选择性。在具体实施方案中，化合物表现出相对于GSK3β对CDK2的至少30倍选择性。
“药物组合物”表示一种或多种本发明的化合物或其药学上可接受的盐、溶剂合物、水合物或前药作为活性成分与至少一种药学上可接受的载体或赋形剂的混合物。在某些实施方案中，所述药物组合物包含两种或更多种药学上可接受的载体和/或赋形剂。在其它实施方案中，所述药物组合物进一步包含至少一种额外的抗癌治疗剂。
在一个方面，本发明提供了一种药物组合物，其包含本发明的化合物或其药学上可接受的盐和药学上可接受的载体或赋形剂。在某些实施方案中，所述药物组合物包含两种或更多种药学上可接受的载体和/或赋形剂。
在某些实施方案中，所述药物组合物进一步包含至少一种额外的抗癌治疗剂。在某些这样的实施方案中，所述组合提供累加的、大于累加的或协同的抗癌作用。
术语“累加的”用于指，两种化合物、组分或靶向剂的组合的结果不大于单独的每种化合物、组分或靶向剂的总和。
术语“协同作用”或“协同”用于指，两种化合物、组分或靶向剂的组合的结果大于单独的每种化合物、组分或靶向剂的总和。所治疗的疾病、病症或障碍的这种改善是“协同”效应。“协同量”是产生协同效应的两种化合物、组分或靶向剂的组合的量，“协同”如本文所定义。
确定一种或两种组分之间的协同相互作用，通过给需要治疗的患者施用在不同剂量范围和/或剂量比内的组分，可以最终测量所述效应的最佳范围和所述效应的每种组分的绝对剂量范围。但是，在体外模型或体内模型中对协同作用的观察可预测在人类和其它物种中的作用，并且如本文所述，存在体外模型或体内模型以测量协同效应。此类研究的结果还可用于预测有效剂量和血浆浓度比率范围以及在人类和其它物种中所需的绝对剂量和血浆浓度，例如通过应用药代动力学和/或药效动力学方法。
除非另外指出，否则本文对本发明化合物的所有提及包括提及其盐、溶剂合物、水合物和络合物，以及其盐的溶剂合物、水合物和络合物，包括它们的多晶型物、立体异构体和同位素标记的形式。
本发明的化合物可以以药学上可接受的盐的形式存在，例如本文提供的式之一的化合物的酸加成盐和碱加成盐。本文中使用的术语“药学上可接受的盐”表示那样的盐：其保留母体化合物的生物有效性和性质。除非另外指出，否则本文中使用的短语“药学上可接受的盐”包括可以存在于本文公开的式的化合物中的酸性或碱性基团的盐。
例如，碱性性质的本发明的化合物能够与各种无机和有机酸形成多种盐。虽然这样的盐对于向动物施用必须是药学上可接受的，但在实践中经常需要在最初将本发明的化合物从反应混合物中分离为药学上不可接受的盐，并然后将后者通过用碱性试剂处理简单地转化回游离碱化合物，并随后将后者游离碱转化为药学上可接受的酸加成盐。通过在水性溶剂介质中或在合适的有机溶剂如甲醇或乙醇中用基本当量的所选无机酸或有机酸处理碱化合物，可以制备本发明的碱化合物的酸加成盐。蒸发溶剂后，得到所需的固体盐。通过向溶液中加入适当的无机酸或有机酸，也可以从游离碱在有机溶剂中的溶液中沉淀出所需的酸盐。
可用于制备这样的碱性化合物的药学上可接受的酸加成盐的酸是形成无毒酸加成盐(即含有药理学上可接受的阴离子的盐)的那些，例如下述盐：盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、硝酸盐、硫酸盐、硫酸氢盐、磷酸盐、酸式磷酸盐、异烟酸盐、乙酸盐、乳酸盐、水杨酸盐、柠檬酸盐、酸式柠檬酸盐、酒石酸盐、泛酸盐、酒石酸氢盐、抗坏血酸盐、琥珀酸盐、马来酸盐、龙胆酸盐（gentisinate）、富马酸盐、葡萄糖酸盐、葡糖醛酸盐、蔗糖酸盐、甲酸盐、苯甲酸盐、谷氨酸盐、甲磺酸盐、乙磺酸盐、苯磺酸盐、对甲苯磺酸盐和1,1’-亚甲基-二-(2-羟基-3-萘甲酸盐)] (即扑酸盐)。
盐的例子包括、但不限于，乙酸盐、丙烯酸盐、苯磺酸盐、苯甲酸盐(诸如氯苯甲酸盐、甲基苯甲酸盐、二硝基苯甲酸盐、羟基苯甲酸盐和甲氧基苯甲酸盐)、碳酸氢盐、硫酸氢盐、亚硫酸氢盐、酒石酸氢盐、硼酸盐、溴化物、丁炔-1,4-二酸盐、依地酸钙、右旋樟脑磺酸盐、碳酸盐、氯化物、己酸盐、辛酸盐、克拉维酸盐、柠檬酸盐、癸酸盐、二盐酸盐、磷酸二氢盐、依地酸盐、edislyate、依托酸盐、乙磺酸盐、乙基琥珀酸盐、甲酸盐、富马酸盐、葡庚糖酸盐、葡萄糖酸盐、谷氨酸盐、乙醇酸盐、乙醇酰基对氨基苯胂酸盐、庚酸盐、己炔-1,6-二酸盐、己基间苯二酚盐、哈胺(hydrabamine)、氢溴酸盐、盐酸盐、γ-羟基丁酸盐、碘化物、异丁酸盐、异硫代硫酸盐、乳酸盐、乳糖酸盐、月桂酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、丙二酸盐、扁桃酸盐、甲磺酸盐、偏磷酸盐、甲烷-磺酸盐、甲基硫酸盐、磷酸单氢盐、粘酸盐、萘磺酸盐、萘-1-磺酸盐、萘-2-磺酸盐、硝酸盐、油酸盐、草酸盐、扑酸盐(双羟萘酸盐)、棕榈酸盐、泛酸盐、苯基乙酸盐、苯基丁酸盐、苯基丙酸盐、邻苯二甲酸盐、磷酸盐/二磷酸盐、聚半乳糖醛酸盐、丙烷磺酸盐、丙酸盐、丙炔酸盐、焦磷酸盐、焦硫酸盐、水杨酸盐、硬脂酸盐、次醋酸盐、辛二酸盐、琥珀酸盐、硫酸盐、磺酸盐、亚硫酸盐、鞣酸盐、酒石酸盐、8-氯茶碱盐、甲苯磺酸盐、triethiodode和戊酸盐。
合适的盐的示例性例子包括衍生自氨基酸诸如甘氨酸和精氨酸、氨、伯胺、仲胺和叔胺和环胺诸如哌啶、吗啉和哌嗪的有机盐，以及衍生自钠、钙、钾、镁、锰、铁、铜、锌、铝和锂的无机盐。
除了上述酸之外，包括碱性基团如氨基基团的本发明的化合物可以与各种氨基酸形成药学上可接受的盐。
可替换地，酸性性质的有用的化合物可以能够与各种药理学上可接受的阳离子形成碱盐。这样的盐的例子包括碱金属或碱土金属盐，且特别是钠盐和钾盐。这些盐都是通过常规技术制备。用作试剂以制备本发明的药学上可接受的碱盐的化学碱是与本文中的酸性化合物形成无毒碱盐的那些。这些盐可以通过任何合适的方法制备，例如，用无机或有机碱诸如胺(伯胺、仲胺或叔胺)、碱金属氢氧化物或碱土金属氢氧化物等处理游离酸。通过用含有期望的药理学上可接受的阳离子的水溶液处理对应的酸性化合物，且然后优选在减压下将所得溶液蒸发至干燥，也可以制备这些盐。可替换地，它们也可以如下制备：将酸性化合物的低级烷醇溶液和期望的碱金属烷醇盐混合在一起，且然后以与前面相同的方式将所得溶液蒸发至干燥。在任一种情况下，优选采用化学计量的量的试剂以确保反应的完全性和所需最终产物的最大产率。
可以用作试剂以制备酸性性质的本发明化合物的药学上可接受的碱盐的化学碱是与这样的化合物形成无毒碱盐的那些。这样的无毒碱盐包括、但不限于，衍生自这样的药理学上可接受的阳离子诸如碱金属阳离子（例如，钾和钠）和碱土金属阳离子（例如，钙和镁）的那些，铵或水溶性胺加成盐诸如N-甲基还原葡糖胺-(葡甲胺)，和低级烷醇铵和药学上可接受的有机胺的其它碱盐。
也可以形成酸和碱的半盐，例如半硫酸盐和半钙盐。
关于合适的盐的综述，参见Stahl和Wermuth的Handbook of PharmaceuticalSalts: Properties, Selection, and Use (Wiley-VCH, 2002)。用于制备本发明的化合物的药学上可接受的盐以及相互转化盐和游离碱形式的方法是本领域技术人员已知的。
根据本领域技术人员已知的方法可以制备本发明的盐。通过将化合物和视情况所需的酸或碱的溶液混合在一起，可以容易地制备本发明的化合物的药学上可接受的盐。盐可以从溶液中沉淀并可以通过过滤收集或可以通过溶剂的蒸发来回收。该盐中的离子化程度可以在完全离子化到几乎未离子化之间变化。
本领域技术人员将理解，通过用化学计量过量的适当酸处理，可以将具有碱性官能团的游离碱形式的本发明的化合物转化为酸加成盐。通过通常在水性溶剂存在下和在约0℃至100℃的温度用化学计量过量的合适碱(诸如碳酸钾或氢氧化钠)处理，可以将本发明的化合物的酸加成盐再转化成相应的游离碱。可以通过常规方式分离游离碱形式，例如用有机溶剂萃取。此外，通过利用盐的差别溶解度、酸的挥发性或酸性，或通过用适当负载的离子交换树脂处理，可以互换本发明的化合物的酸加成盐。例如，互换可能受以下因素影响：本发明的化合物的盐与略微化学计量过量的酸反应，所述酸的pK低于起始盐的酸组分。该转化通常在约0℃至用作该程序介质的溶剂的沸点之间的温度进行。用碱加成盐可能进行类似的交换，通常通过游离碱形式的居间中间性进行。
本发明的化合物可以以非溶剂化和溶剂化的形式存在。当溶剂或水紧密结合时，络合物将具有明确的化学计量学，与湿度无关。但是，当溶剂或水弱结合时（如在通道溶剂合物和吸湿性化合物中），水/溶剂含量将取决于湿度和干燥条件。在这样的情况下，非化学计量学将是常态。术语‘溶剂合物’在本文中用于描述包含本发明的化合物和一种或多种药学上可接受的溶剂分子（例如，乙醇）的分子络合物。当溶剂是水时，采用术语’水合物’。根据本发明的药学上可接受的溶剂合物包括水合物和溶剂合物，其中结晶的溶剂可以被同位素地取代，例如D2O、d6-丙酮、d6-DMSO。
在本发明范围内还包括络合物，诸如笼形包合物、药物-宿主包合络合物，其中，与上述溶剂合物相反，药物和宿主以化学计量的或非化学计量的量存在。还包括含有可为化学计量的或非化学计量的量的两种或更多种有机和/或无机组分的药物的络合物。所得络合物可以是离子化的、部分离子化的或非离子化的。关于这样的络合物的综述，参见Haleblian的J Pharm Sci, 64 (8), 1269-1288 (1975年8月)，其公开内容通过引用整体并入本文。
本发明还涉及本文提供的式的化合物的前药。因此，本身可以几乎没有或完全没有药理活性的本发明化合物的某些衍生物在向患者施用时可以转化成本发明的化合物，例如，通过水解裂解。这类衍生物称作为‘前药’。关于前药的应用的进一步信息，可以参见‘Pro-drugs as Novel Delivery Systems, 第14卷, ACS Symposium Series (T Higuchi和W Stella)和‘Bioreversible Carriers in Drug Design’, Pergamon Press, 1987 (EB Roche编, American Pharmaceutical Association)，其公开内容通过引用整体并入本文。
例如，可以如下生产根据本发明的前药：用本领域技术人员已知作为‘前基团(pro-moieties)’的某些基团替换在本发明的化合物中存在的适当官能团，如例如在HBundgaard的“Design of Prodrugs”(Elsevier，1985)中所述，其公开内容通过引用整体并入本文。
根据本发明的前药的一些非限制性例子包括：
(i)在化合物含有羧酸官能团(-COOH)、其酯的情况下，例如，用(C1-C8)烷基替换氢；
(ii)在化合物含有醇官能团(-OH)、其醚的情况下，例如，用(C1-C6)烷酰氧基甲基或用磷酸酯醚基替换氢；和
(iii)在化合物含有伯氨基或仲氨基官能团(-NH2或-NHR，其中R≠H)、其酰胺的情况下，例如，用适当代谢不稳定的基团诸如酰胺、氨基甲酸酯、脲、膦酸酯、磺酸酯等替换一个或两个氢。
可以在前述参考文献中找到根据前述实施例的替代基团的其它例子和其它前药类型的例子。最后，某些本发明的化合物本身可以充当其它本发明的化合物的前药。
在本发明范围内还包括本文描述的式的化合物的代谢物，即在施用药物后在体内形成的化合物。
除了式(I)、(II)和(III)中环戊基环的1-和3-位置的取代基之间的顺式关系外，本文提供的式的化合物可以具有额外的不对称碳原子作为定义为R1、R2和R3的取代基或连接到这些基团的任选取代基的部分。在这样的额外的不对称中心，实线用于指示包括在该碳原子处的所有可能的立体异构体，而实线或点状楔形指示仅所示的异构体意图被包括在这样的立构中心，除非另外指出。本文式的化合物可以包括含有本发明化合物的顺式和反式几何异构体、旋转异构体、阻转异构体、构象异构体和互变异构体的取代基，包括表现出超过一种类型的异构现象的化合物。
还包括酸加成盐或碱加成盐，其中抗衡离子是光学活性的，例如，d-乳酸盐或l-赖氨酸，或外消旋的，例如，dl-酒石酸盐或dl-精氨酸。
当任何外消旋体结晶时，两种不同类型的晶体是可能的。第一类是上文所述的外消旋化合物(真外消旋体)，其中产生一种均质形式的晶体，其含有等摩尔量的两种对映异构体。第二类是外消旋混合物或聚集物(conglomerate)，其中两种形式的晶体以等摩尔量产生，各自包含单一对映异构体。
本发明的化合物可以表现出互变异构现象和结构异构现象。例如，所述化合物可以以数种互变异构形式存在，包括烯醇和亚胺形式以及酮和烯胺形式，和几何异构体及其混合物。所有这样的互变异构形式都被包括在本发明的化合物的范围内。互变异构体作为在溶液中的互变异构集合的混合物存在。在固体形式中，通常一种互变异构体占优势。即使可以描述一种互变异构体，但本发明包括所提供的式的化合物的所有互变异构体。
此外，本发明的一些化合物可以形成阻转异构体(例如，取代的联芳)。阻转异构体是构象立体异构体，其在围绕分子中单个键的旋转被阻止或大大减慢（这是由于与分子的其它部分的空间相互作用和在单键的两端处的取代基是不对称的的结果）时发生。阻转异构体的互变是足够慢的以允许在预定条件下分开和分离。通过形成手性轴的一个或多个键的自由旋转的空间位阻，可以确定对热外消旋化的能垒。
在本发明的化合物含有烯基或亚烯基的情况下，几何顺式/反式(或Z/E)异构体是可能的。通过本领域技术人员众所周知的常规技术，例如，色谱法和分步结晶，可以分离顺式/反式异构体。
用于制备/分离各对映异构体的常规技术包括从合适的光学纯的前体手性合成，或使用例如手性高压液相色谱法(HPLC)或超临界流体色谱法(SFC)拆分外消旋体(或盐或衍生物的外消旋体)。
可替换地，外消旋体（或外消旋的前体）可以与合适的光学活性化合物例如醇反应，或在化合物含有酸性或碱性基团的情况下与酸或碱诸如酒石酸或1-苯基乙胺反应。得到的非对映异构体混合物可以通过色谱法和/或分步结晶分离，并且非对映异构体之一或两者通过本领域技术人员众所周知的方式转化成对应的纯的对映异构体。
本发明的手性化合物(及其手性前体)可以使用色谱法(通常HPLC)，在不对称树脂上使用由烃、通常庚烷或己烷组成的流动相以对映异构体富集形式获得，所述流动相含有0-50%、通常2-20%的异丙醇和0-5%的烷基胺，通常0.1%的二乙胺。浓缩洗脱液，得到富集的混合物。
通过本领域技术人员已知的常规技术可以分离立体异构体的聚集物；参见，例如，E L Eliel的"Stereochemistry of Organic Compounds"(Wiley, New York, 1994)，其公开内容通过引用整体并入本文。
本文所述化合物的对映异构体纯度可以以对映异构体过量(ee)的方式描述，其指示样品以比另一种对映异构体更大的量含有一种对映异构体的程度。外消旋混合物具有0％的ee，而单一的完全纯的对映异构体具有100％的ee。类似地，非对映异构体纯度可以以非对映异构体过量(de)的方式描述。本文中使用的“对映异构纯的”或“基本上对映异构纯的”是指这样的化合物：其包含该化合物的一种对映异构体且基本上不含有该化合物的相反对映异构体。一种典型的对映异构纯的化合物包含大于约95重量%的该化合物的一种对映异构体和小于约5重量%的该化合物的相反对映异构体，优选地大于约97重量%的该化合物的一种对映异构体和小于约3重量%的该化合物的相反对映异构体，更优选地大于约98重量%的该化合物的一种对映异构体和小于约2重量%的该化合物的相反对映异构体，且甚至更优选地大于约99重量%的该化合物的一种对映异构体和小于约1重量%的该化合物的相反对映异构体。
本发明还包括同位素标记的化合物，除了以下事实之外，其与提供的式之一中所述的那些相同：一个或多个原子被其原子质量或质量数与通常在自然界中发现的原子质量或质量数不同的原子替换。
通常可以如下制备同位素标记的本发明的化合物：通过本领域技术人员已知的常规技术，或通过类似于本文描述的那些的方法，使用适当的同位素标记的试剂代替否则会采用的未标记的试剂。
可掺入本发明的化合物中的同位素的例子包括氢、碳、氮、氧、磷、氟和氯的同位素，例如，但不限于，2H、3H、13C、14C、15N、18O、17O、31P、32P、35S、18F和36Cl。某些同位素标记的本发明的化合物，例如，其中掺入放射性同位素(诸如3H和14C)的那些，在药物和/或底物组织分布测定中是有用的。因为它们的容易制备和可检测性，氚化的（即，3H）和碳-14（即，14C）同位素是特别优选的。进一步地，用较重同位素(诸如氘，即，2H)替代可以获得由较大的代谢稳定性产生的某些治疗优点，例如增加的体内半衰期或减少的剂量需求，并且因此可以在某些情况下是优选的。通常可以如下制备同位素标记的本发明的化合物：执行下面方案和/或实施例和制备中公开的程序，通过用同位素标记的试剂替换非同位素标记的试剂。
意图用于药物用途的本发明的化合物可以作为结晶或无定形产物或其混合物施用。它们可以通过诸如沉淀、结晶、冷冻干燥、喷雾干燥或蒸发干燥的方法，以例如固体栓、粉末或薄膜的形式获得。微波或射频干燥可以用于该目的。
治疗方法和用途
本发明进一步提供了治疗方法和用途，其包括单独地或与其它治疗剂或姑息剂组合地施用本发明的化合物或其药学上可接受的盐。
在一个方面，本发明提供了一种用于在有此需要的对象中治疗异常细胞生长的方法，所述方法包括给所述对象施用治疗有效量的本发明的化合物或其药学上可接受的盐。
在另一个方面，本发明提供了一种用于在有此需要的对象中治疗异常细胞生长的方法，所述方法包括与一定量的额外治疗剂(例如，抗癌治疗剂)组合地给所述对象施用一定量的本发明的化合物或其药学上可接受的盐，所述量一起有效地治疗所述异常细胞生长。
在另一个方面，本发明提供了用于治疗对象中的异常细胞生长的本发明的化合物或其药学上可接受的盐。
在另一个方面，本发明提供了本发明的化合物或其药学上可接受的盐用于治疗对象中的异常细胞生长的用途。
在另一个方面，本发明提供了一种用于在有此需要的对象中治疗异常细胞生长的药物组合物，所述药物组合物包含本发明的化合物或其药学上可接受的盐和药学上可接受的载体或赋形剂。
在另一个方面，本发明提供了用于用作药物、特别是用于治疗异常细胞生长的药物的本发明的化合物或其药学上可接受的盐。
在另一个方面，本发明提供了本发明的化合物或其药学上可接受的盐用于制备药物的用途，所述药物用于治疗对象中的异常细胞生长。
在本文提供的方法的常见实施方案中，所述异常细胞生长是癌症。本发明的化合物可以作为单一药剂施用，或可以与其它抗癌治疗剂、特别是与适用于特定癌症的护理标准药剂联合施用。
在某些实施方案中，提供的方法产生下述效应中的一种或多种：(1)抑制癌细胞增殖；(2)抑制癌细胞侵袭力；(3)诱导癌细胞的细胞凋亡；(4)抑制癌细胞转移；或(5)抑制血管生成。
在另一个方面，本发明提供了用于治疗对象中的由CDK2介导的障碍的方法，所述方法包括以有效地治疗所述障碍、特别是癌症的量给所述对象施用本发明的化合物或其药学上可接受的盐。
在本文描述的化合物、组合物、方法和用途的某些方面和实施方案中，本发明的化合物对CDK2的选择性高于其它CDK，特别是CDK1。在某些实施方案中，本发明的化合物对CDK2的选择性高于CDK4和/或CDK6。在其它方面和实施方案中，本发明的化合物对CDK2的选择性高于糖原合酶激酶3β(GSK3β)。本发明的化合物包括本文描述的任何式的化合物或其药学上可接受的盐。
在另一个方面，本发明提供了一种抑制对象中的癌细胞增殖的方法，所述方法包括以有效地抑制细胞增殖的量给所述对象施用本发明的化合物或其药学上可接受的盐。
在另一个方面，本发明提供了一种抑制对象中的癌细胞侵袭力的方法，所述方法包括以有效地抑制细胞侵袭力的量给所述对象施用本发明的化合物或其药学上可接受的盐。
在另一个方面，本发明提供了一种在对象中诱导癌细胞的细胞凋亡的方法，所述方法包括以有效地诱导细胞凋亡的量给所述对象施用本发明的化合物或其药学上可接受的盐。
在另一个方面，本发明提供了一种抑制对象中的癌细胞转移的方法，所述方法包括以有效地抑制细胞转移的量给所述对象施用本发明的化合物或其药学上可接受的盐。
在另一个方面，本发明提供了一种抑制对象中的血管生成的方法，所述方法包括以有效地抑制血管生成的量给所述对象施用本发明的化合物或其药学上可接受的盐。
在本文提供的方法的常见实施方案中，所述异常细胞生长是癌症。在某些这样的实施方案中，所述癌症选自乳腺癌、卵巢癌、膀胱癌、子宫癌、前列腺癌、肺癌(包括NSCLC、SCLC、鳞状细胞癌或腺癌)、食管癌、头颈癌、结直肠癌、肾癌(包括RCC)、肝癌(包括HCC)、胰腺癌、胃(即，胃的)癌或甲状腺癌。在本文提供的方法的其它实施方案中，所述癌症是乳腺癌、卵巢癌、膀胱癌、子宫癌、前列腺癌、肺癌、食管癌、肝癌、胰腺癌或胃癌。
在其它实施方案中，所述癌症是乳腺癌，包括、例如，ER-阳性的/HR-阳性的、HER2-阴性的乳腺癌；ER-阳性的/HR-阳性的、HER2-阳性的乳腺癌；三重阴性的乳腺癌(TNBC)；或炎症性的乳腺癌。在某些实施方案中，所述乳腺癌是内分泌抗性的乳腺癌，曲妥珠单抗抗性的乳腺癌，或表现出对CDK4/CDK6抑制的原发性或获得性抗性的乳腺癌。在某些实施方案中，所述乳腺癌是晚期或转移性乳腺癌。在前述各个的某些实施方案中，所述乳腺癌的特征在于CCNE1和/或CCNE2的扩增或过表达。
在本文提供的方法的某些实施方案中，所述异常细胞生长是以CCNE1和/或CCNE2的扩增或过表达为特征的癌症。在本文提供的方法的某些实施方案中，将对象鉴定为具有以CCNE1和/或CCNE2的扩增或过表达为特征的癌症。
在某些实施方案中，所述癌症选自乳腺癌和卵巢癌。在某些这样的实施方案中，所述癌症是以CCNE1和/或CCNE2的扩增或过表达为特征的乳腺癌或卵巢癌。在某些这样的实施方案中，所述癌症是：(a)乳腺癌或卵巢癌；(b)以细胞周期蛋白E1 (CCNE1)或细胞周期蛋白E2 (CCNE2)的扩增或过表达为特征；或(c) (a)和(b)二者。在某些实施方案中，所述癌症是卵巢癌。
在某些实施方案中，本发明的化合物作为第一线疗法施用。在其它实施方案中，本发明的化合物作为第二(或之后的)线疗法施用。在某些实施方案中，本发明的化合物作为在用内分泌治疗剂和/或CDK4/CDK6抑制剂治疗后的第二(或之后的)线疗法施用。在某些实施方案中，本发明的化合物作为在用内分泌治疗剂（例如，芳香酶抑制剂、SERM或SERD）治疗后的第二(或之后的)线疗法施用。在某些实施方案中，本发明的化合物作为在用CDK4/CDK6抑制剂治疗后的第二(或之后的)线疗法施用。在某些实施方案中，本发明的化合物作为在用一种或多种化疗方案（例如包括紫杉烷或铂试剂）治疗后的第二(或之后的)线疗法施用。在某些实施方案中，本发明的化合物作为在用HER2靶向剂（例如，曲妥珠单抗）治疗后的第二(或之后的)线疗法施用。
本文中使用的药物、化合物或药物组合物的“有效剂量”或“有效量”是这样的量：其足以影响疾病、其并发症和在疾病发展过程中呈现的中间病理学表型的任何一种或多种有益的或期望的（包括生物化学、组织学和/或行为）症状。对于治疗用途，“治疗有效量”表示所施用的化合物的量，其在一定程度上减轻正在治疗的障碍的一种或多种症状。关于癌症的治疗，治疗有效量表示具有以下效果的量：（1）减小肿瘤的大小，（2）抑制（也就是说，在某种程度上减慢，优选停止）肿瘤转移，（3）在某种程度上抑制（也就是说，在某种程度上减慢，优选停止）肿瘤生长或肿瘤侵袭力，（4）在某种程度上缓解（或者，优选地，消除）与癌症有关的一种或多种征象或症状，（5）减小治疗所述疾病所需的其它药物的剂量，和/或（6）增强另一种药物的作用，和/或（7）延迟患者中疾病的进展。
可以在一次或多次施用中施用有效剂量。为了本发明的目的，药物、化合物或药物组合物的有效剂量是足以直接地或间接地完成预防性或治疗性治疗的量。如在临床上下文中所理解的，可以或可以不与另一种药物、化合物或药物组合物结合地达到药物、化合物或药物组合物的有效剂量。
当应用于诊断出具有或被怀疑患有癌症的对象时，“肿瘤”表示任何大小的恶性或潜在恶性的赘生物或组织块，并且包括原发性肿瘤和继发性赘生物。实体瘤是组织的异常生长或团块，通常不含有囊肿或液体区域。实体瘤的例子是肉瘤、癌和淋巴瘤。白血病（血液的癌症）通常不会形成实体瘤(National Cancer Institute, Dictionary of CancerTerms)。
“肿瘤负荷”或“肿瘤负载”表示分布在全身的肿瘤物质的总量。肿瘤负荷表示整个身体（包括淋巴结和骨髓）中癌细胞的总数或肿瘤的总大小。通过本领域已知的多种方法，例如，使用卡尺，或当在体内时使用成像技术，例如，超声、骨扫描、计算机体层摄影术(CT)或磁共振成像(MRI)扫描，可以确定肿瘤负荷。
术语“肿瘤大小”表示肿瘤的总大小，其可以测量为肿瘤的长度和宽度。通过本领域已知的多种方法，例如，通过在从对象取出后测量肿瘤的尺寸（例如，使用卡尺），或当在体内时使用成像技术（例如，骨扫描、超声、CR或MRI扫描），可以确定肿瘤大小。
本文中使用的“对象”表示人或动物对象。在某些优选的实施方案中，所述对象是人。
本文中使用的术语“治疗”癌症是指，向患有癌症或被诊断出患有癌症的对象施用本发明的化合物，以实现至少一种积极的治疗效果，例如减少的癌细胞数量，减小的肿瘤大小，癌细胞向周围器官的浸润速率降低，或肿瘤转移或肿瘤生长速率降低，逆转这样的术语所适用的障碍或病症或这样的障碍或病症的一种或多种症状，减轻这样的术语所适用的障碍或病症或这样的障碍或病症的一种或多种症状，抑制这样的术语所适用的障碍或病症或这样的障碍或病症的一种或多种症状的进展，或预防这样的术语所适用的障碍或病症或这样的障碍或病症的一种或多种症状。除非另有说明，否则本文所用的术语“治疗”表示刚在上文中定义为“治疗”的治疗行为。术语“治疗”还包括对象的辅助和新辅助治疗。
为了本发明的目的，有益的或期望的临床结果包括、但不限于以下的一种或多种：减少（或破坏）赘生性或癌性细胞的增殖；抑制转移性或赘生性细胞；收缩或缩小肿瘤的大小；癌症的减轻；减少由癌症引起的症状；提高患有癌症的那些的生活质量；减小治疗癌症所需的其它药物的剂量；延缓癌症的发展；治愈癌症；克服癌症的一种或多种抗性机制；和/或延长癌症患者的生存期。可以以许多方式测量癌症的积极治疗效果(参见，例如，W. A.Weber, Assessing tumor response to therapy, J. Nucl. Med. 50增刊1:1S-10S(2009)。例如，关于肿瘤生长抑制（T/C），根据美国国家癌症研究所（NCI）标准，小于或等于42%的T/C是抗肿瘤活性的最低水平。<10%的T/C被认为是高抗肿瘤活性水平，其中T/C (%)=治疗的中位肿瘤体积/对照的中位肿瘤体积x 100。
在某些实施方案中，通过参考以下任一项来定义由本发明的化合物实现的治疗：部分应答（PR），完全应答（CR），总体应答（OR），无进展存活（PFS），无疾病存活（DFS）和总体存活（OS）。PFS，也称为“达到肿瘤进展的时间”，指示在治疗期间和治疗后癌症不生长的时间长度，并且包括患者已经经历CR或PR的时间量以及患者已经经历稳定疾病(SD)的时间量。DFS表示在治疗期间和治疗后患者保持没有疾病的时间长度。OS表示与原初或未治疗的对象或患者相比预期寿命的延长。在某些实施方案中，对本发明的组合的应答是PR、CR、PFS、DFS、OR或OS中的任一种，其使用实体瘤中的应答评价标准(Response EvaluationCriteria in Solid Tumors，RECIST) 1.1应答标准进行评估。
有效治疗癌症患者的本发明化合物的治疗方案可以根据多种因素，诸如患者的疾病状态、年龄和重量，和所述疗法在对象中引起抗癌应答的能力而变化。尽管本发明的任何方面的一个实施方案可能不会有效地在每位对象中实现积极的治疗效果，但是它应当在统计上显著数目的对象中做到，如通过本领域已知的任何统计检验，诸如Student氏t-检验、chi2-检验、根据Mann和Whitney的U-检验、Kruskal-Wallis检验(H-检验)、Jonckheere-Terpstrat-检验和Wilcon on-检验所确定的。
术语“治疗方案”、“定量施用计划”和“定量施用方案”可互换使用以表示单独的或与另一种治疗剂组合的本发明的每种化合物的剂量和施用时机。
“改善”是指与不施用所述组合相比，在用本文所述的组合治疗后一种或多种症状的减轻或改善。“改善”还包括症状的持续时间的缩短或减少。
除非另有说明，否则本文中使用的“异常细胞生长”表示不依赖正常调节机制(例如，接触抑制的丧失)的细胞生长。异常细胞生长可以是良性的(非癌性的)或恶性的(癌性的)。
异常细胞生长包括以下的异常生长：(1)显示出增加的CDK2表达的肿瘤细胞(肿瘤)；(2)通过异常的CDK2活化而增殖的肿瘤；(3)以CCNE1和/或CCNE2的扩增或过表达为特征的肿瘤；和(4)对内分泌疗法、HER2拮抗剂或CDK4/6抑制具有抗性的肿瘤。
本文中使用的术语“额外的抗癌治疗剂”是指除了本发明的化合物之外的任何一种或多种治疗剂，其用于或可用于治疗癌症。在某些实施方案中，这样的额外抗癌治疗剂包括源自以下类别的化合物：有丝分裂抑制剂、烷化剂、抗代谢药、抗肿瘤抗生素、抗血管生成剂、拓扑异构酶I和II抑制剂、植物生物碱、激素剂和拮抗剂、生长因子抑制剂、辐射、信号转导抑制剂诸如蛋白酪氨酸激酶和/或丝氨酸/苏氨酸激酶的抑制剂、细胞周期抑制剂、生物应答修饰剂、酶抑制剂、反义寡核苷酸或寡核苷酸衍生物、细胞毒素、免疫肿瘤剂等。
在某些实施方案中，所述额外的抗癌剂是内分泌剂，诸如芳香酶抑制剂、SERD或SERM。
在其它实施方案中，可以与护理标准药剂联合施用本发明的化合物。在某些实施方案中，可以与内分泌疗法（例如试剂诸如来曲唑、氟维司群、他莫昔芬、依西美坦或阿那曲唑）联合施用本发明的化合物。在某些实施方案中，可以与化学治疗剂（例如，多西他赛、紫杉醇、顺铂、卡铂、卡培他滨、吉西他滨或长春瑞滨）联合施用本发明的化合物。在其它实施方案中，可以与抗-HER2剂（例如，曲妥珠单抗或培妥珠单抗）联合施用本发明的化合物。
在某些实施方案中，所述额外的抗癌剂是抗血管生成剂，包括例如VEGF抑制剂、VEGFR抑制剂、TIE-2抑制剂、PDGFR抑制剂、促血管生成素抑制剂、PKCβ抑制剂、COX-2 (环加氧酶II)抑制剂、整联蛋白(α-v/β-3)、MMP-2 (基质金属蛋白酶2)抑制剂和MMP-9 (基质金属蛋白酶9)抑制剂。优选的抗血管生成剂包括舒尼替尼(Sutent™)、贝伐珠单抗(阿瓦斯丁™)、阿昔替尼(AG 13736)、SU 14813 (Pfizer)和AG 13958 (Pfizer)。额外的抗血管生成剂包括伐拉尼布(CGP 79787)、索拉非尼(多吉美™)、培加尼布八钠(Macugen™)、凡他尼布(Zactima™)、PF-0337210 (Pfizer)、SU 14843 (Pfizer)、AZD 2171 (AstraZeneca)、雷珠单抗(Lucentis™)、新伐司他™(AE 941)、四硫钼酸盐(Coprexa™)、AMG 706 (Amgen)、VEGF Trap (AVE 0005)、CEP 7055 (Sanofi-Aventis)、XL 880 (Exelixis)、替拉替尼(BAY57-9352)和CP-868,596 (Pfizer)。其它抗血管生成剂包括恩扎妥林(LY 317615)、米哚妥林(CGP 41251)、哌立福新(KRX 0401)、替普瑞酮(Selbex™)和UCN 01 (Kyowa Hakko)。抗血管生成剂的其它例子包括塞来考昔(西乐葆™)、帕瑞考昔(Dynastat™)、地拉考昔(SC59046)、芦米考昔(Preige™)、伐地考昔(Bextra™)、罗非昔布(Vioxx™)、艾拉莫德(Careram™)、IP 751 (Invedus)、SC-58125 (Pharmacia)和依托考昔(Arcoxia™)。再其它抗血管生成剂包括依昔舒林(Aptosyn™)、双水杨酯(Amigesic™)、二氟尼柳(Dolobid™)、布洛芬(Motrin™)、酮洛芬(Orudis™)、萘丁美酮(Relafen™)、吡罗昔康(Feldene™)、萘普生(Aleve™、Naprosyn™)、双氯芬酸(Voltaren™)、吲哚美辛(Indocin™)、舒林酸(Clinoril™)、托美丁(托来汀™)、依托度酸(Lodine™)、酮咯酸(Toradol™)和奥沙普秦(Daypro™)。再其它抗血管生成剂包括ABT 510 (Abbott)、阿雷司他(TMI 005)、AZD 8955(AstraZeneca)、英环奈德(Metastat™)和PCK 3145 (Procyon)。再其它抗血管生成剂包括阿维A (Neotigason™)、普利肽新(aplidine™)、cilengtide (EMD 121974)、考布他汀A4(CA4P)、芬维A胺(4 HPR)、卤夫酮(Tempostatin™)、Panzem™(2-甲氧基雌二醇)、PF-03446962 (Pfizer)、瑞马司他(BMS 275291)、卡妥索单抗(Removab™)、来那度胺(Revlimid™)、角鲨胺(EVIZON™)、沙利度胺(Thalomid™)、Ukrain™(NSC 631570)、Vitaxin™(MEDI 522)和唑来膦酸(择泰™)。
在其它实施方案中，所述额外的抗癌剂是所谓的信号转导抑制剂(例如，抑制调节性分子借此在细胞内传达控制细胞生长、分化和存活的基本过程的方式)。信号转导抑制剂包括小分子、抗体和反义分子。信号转导抑制剂包括例如激酶抑制剂(例如，酪氨酸激酶抑制剂或丝氨酸/苏氨酸激酶抑制剂)和细胞周期抑制剂。更具体地，信号转导抑制剂包括，例如，法呢基蛋白转移酶抑制剂、EGF抑制剂、ErbB-1 (EGFR)、ErbB-2、pan erb、IGF1R抑制剂、MEK、c-Kit抑制剂、FLT-3抑制剂、K-Ras抑制剂、PI3激酶抑制剂、JAK抑制剂、STAT抑制剂、Raf激酶抑制剂、Akt抑制剂、mTOR抑制剂、P70S6激酶抑制剂、WNT途径的抑制剂和所谓的多靶向激酶抑制剂。可以与本发明的化合物和本文描述的药物组合物结合使用的信号转导抑制剂的其它例子包括BMS 214662 (Bristol-Myers Squibb)、氯那法尼(Sarasar™)、吡利曲索(AG 2037)、马妥珠单抗(EMD 7200)、尼妥珠单抗(TheraCIM h-R3™)、帕木单抗(Vectibix™)、凡他尼布(Zactima™)、帕唑帕尼(SB 786034)、ALT 110 (AlterisTherapeutics)、BIBW 2992 (Boehringer Ingelheim)和Cervene™(TP 38)。信号转导抑制剂的其它例子包括吉非替尼(易瑞沙™)、西妥昔单抗(爱必妥™)、厄洛替尼(特罗凯™)、曲妥珠单抗(赫赛汀™)、舒尼替尼(Sutent™)、伊马替尼(格列卫™)、克唑替尼(Pfizer)、lorlatinib (Pfizer)、dacomitinib (Pfizer)、波舒替尼(Pfizer)、gedatolisib(Pfizer)、卡纽替尼(CI 1033)、培妥珠单抗(Omnitarg™)、拉帕替尼(Tycerb™)、培利替尼(EKB 569)、米替福新(Miltefosin™)、BMS 599626 (Bristol-Myers Squibb)、Lapuleucel-T (Neuvenge™)、NeuVax™(E75癌症疫苗)、Osidem™(IDM 1)、莫立替尼(TAK-165)、CP-724,714 (Pfizer)、帕木单抗(Vectibix™)、ARRY 142886 (Array Biopharm)、依维莫司(Certican™)、唑罗莫司(Endeavor™)、坦罗莫司(Torisel™)、AP 23573 (ARIAD)和VX 680 (Vertex)、XL 647 (Exelixis)、索拉非尼(多吉美™)、LE-AON (GeorgetownUniversity)和GI-4000 (Globelmmune)。其它信号转导抑制剂包括ABT 751 (Abbott)、阿伏西地(flavopiridol)、BMS 387032 (Bristol Myers)、EM 1421 (Erimos)、吲地磺胺(E7070)、塞利西利(CYC 200)、BIO 112 (Onc Bio)、BMS 387032 (Bristol-Myers Squibb)、帕博西尼(Pfizer)和AG 024322 (Pfizer)。
在其它实施方案中，所述额外的抗癌剂是所谓的经典的抗肿瘤剂。经典的抗肿瘤剂包括、但不限于：激素调节剂诸如激素、抗-激素剂、雄激素激动剂、雄激素拮抗剂和抗雌激素治疗剂、组蛋白脱乙酰基酶(HDAC)抑制剂、DNA甲基转移酶抑制剂、沉默剂或基因活化剂、核糖核酸酶、蛋白体模仿物（proteosomics）、拓扑异构酶I抑制剂、喜树碱衍生物、拓扑异构酶II抑制剂、烷化剂、抗代谢药、聚(ADP-核糖)聚合酶-1 (PARP-1)抑制剂(例如，他拉唑帕尼、奥拉帕尼(olapariv)、芦卡帕尼、尼拉帕尼、依尼帕利布、维利帕尼)、微管蛋白抑制剂、抗生素、植物衍生的纺锤体抑制剂、铂-配位的化合物、基因治疗剂、反义寡核苷酸、血管靶向试剂(VTA)和他汀类药物。在与本发明的化合物、任选地与一种或多种其它药剂的联合疗法中使用的经典抗肿瘤剂的例子包括、但不限于：糖皮质激素诸如地塞米松、泼尼松、泼尼松龙、甲泼尼龙、氢化可的松和孕激素类诸如甲羟孕酮、乙酸甲地孕酮(梅格施)、米非司酮(RU-486)、选择性的雌激素受体调节剂(SERM；诸如他莫昔芬、雷洛昔芬、拉索昔芬、阿非昔芬、阿佐昔芬、巴多昔芬、非培米芬、奥美昔芬、奥培米芬、替米利芬、托瑞米芬、曲洛司坦和CHF 4227 (Cheisi)、选择性的雌激素-受体下调节剂(SERD’s；诸如氟维司群)、依西美坦(阿诺新)、阿那曲唑(瑞宁得)、阿他美坦、法倔唑、来曲唑(弗隆)、福美坦；促性腺素释放激素(GnRH；通常也被称作促黄体素释放素[LHRH])激动剂诸如布舍瑞林(Suprefact)、戈舍瑞林(诺雷德)、亮丙瑞林(Lupron)和曲普瑞林(Trelstar)、阿巴瑞克(Plenaxis)、环丙特龙、氟他胺(Eulexin)、甲地孕酮、尼鲁米特(Nilandron)和奥沙特隆、度他雄胺、依立雄胺、非那雄胺、Serenoa repens、PHL 00801、阿巴瑞克、戈舍瑞林、亮丙瑞林、曲普瑞林、比卡鲁胺；抗雄激素剂，诸如恩杂鲁胺、乙酸阿比特龙、比卡鲁胺(康士得)；和它们的组合。与本发明的化合物联合使用的经典抗肿瘤剂的其它例子包括、但不限于：环庚酰苯胺(suberolanilide)氧肟酸(SAHA，Merck Inc./Aton Pharmaceuticals)、缩酚酸肽(FR901228或FK228)、G2M-777、MS-275、丁酸新戊酰基氧基甲酯和PXD-101；Onconase (豹蛙酶)、PS-341 (MLN-341)、万珂(硼替佐米)、9-氨基喜树碱、贝洛替康、BN-80915 (Roche)、喜树碱、二氟替康、艾特咔林、依沙替康(Daiichi)、吉马替康、10-羟喜树碱、盐酸伊立替康(Camptosar)、勒托替康、Orathecin (卢比替康、Supergen)、SN-38、托泊替康、喜树碱、10-羟喜树碱、9-氨基喜树碱、伊立替康、SN-38、艾特咔林、托泊替康、阿柔比星、阿霉素、氨萘非特、氨柔比星、安那霉素、柔红霉素、多柔比星、依沙芦星、表柔比星、依托泊苷、伊达比星、加柔比星、羟基脲、奈莫柔比星、诺肖林(米托蒽醌)、吡柔比星、匹克生琼、丙卡巴肼、蝴蝶霉素、索布佐生、他氟泊苷、戊柔比星、右雷佐生(右丙亚胺)、氮芥N-氧化物、环磷酰胺、AMD-473、六甲蜜胺、AP-5280、阿帕齐醌、溴他利星、苯达莫司汀、白消安、卡波醌、卡莫司汀、苯丁酸氮芥、达卡巴嗪、雌莫司汀、福莫司汀、葡膦酰胺、异环磷酰胺、KW-2170、洛莫司汀、马磷酰胺、氮芥、美法仑、二溴甘露醇、二溴卫矛醇、丝裂霉素C、米托蒽醌、尼莫司汀、雷莫司汀、替莫唑胺、塞替派和铂配合的烷基化化合物诸如顺铂、伯尔定(卡铂)、依他铂、洛铂、奈达铂、Eloxatin (奥沙利铂、Sanofi)、链佐星、satrplatin和它们的组合。
在其它实施方案中，所述额外的抗癌剂是所谓的二氢叶酸还原酶抑制剂(诸如甲氨蝶呤和NeuTrexin (葡萄糖醛酸三甲曲沙))、嘌呤拮抗剂(诸如6-巯基嘌呤核苷、巯基嘌呤、6-硫鸟嘌呤、克拉屈滨、氯法拉滨(Clolar)、氟达拉滨、奈拉滨和雷替曲塞)、嘧啶拮抗剂(诸如5-氟尿嘧啶(5-FU)、力比泰(premetrexed disodium、LY231514、MTA)、卡培他滨(希罗达™)、胞嘧啶阿糖胞苷、健择™(吉西他滨、Eli Lilly)、替加氟(UFT Orzel或Uforal且包括替加氟、吉莫斯特和otostat的TS-1组合)、去氧氟尿苷、卡莫氟、阿糖胞苷(包括ocfosfate、磷酸盐硬脂酸盐、持续释放和脂质体形式)、依诺他滨、5-阿扎胞苷(Vidaza)、地西他滨和乙炔基胞苷)和其它抗代谢药诸如依氟鸟氨酸、羟基脲、亚叶酸、诺拉曲塞(Thymitaq)、triapine、三甲曲沙、N-(5-[N-(3,4-二氢-2-甲基-4-氧代喹唑啉-6-基甲基)-N-甲基氨基]-2-噻吩甲酰基)-L-谷氨酸、AG-014699 (Pfizer Inc.)、ABT-472 (AbbottLaboratories)、INO-1001 (Inotek Pharmaceuticals)、KU-0687 (KuDOSPharmaceuticals)和GPI 18180 (Guilford Pharm Inc)和它们的组合。
经典的抗肿瘤细胞毒性剂的其它例子包括、但不限于：Abraxane (AbraxisBioScience, Inc.)、巴他布林(Amgen)、EPO 906 (Novartis)、长春氟宁(Bristol- MyersSquibb Company)、放线菌素D、博来霉素、丝裂霉素C、新制癌菌素(净司他丁)、长春碱、长春新碱、长春地辛、长春瑞滨(诺维本)、多西他赛(泰索帝)、奥他赛、紫杉醇(包括Taxoprexin，一种DHA/紫杉醇缀合物)、顺铂、卡铂、奈达铂、奥沙利铂(Eloxatin)、沙铂、Camptosar、卡培他滨(希罗达)、奥沙利铂(Eloxatin)、泰索帝阿利维A酸、坎磷酰胺(Telcyta™)、DMXAA(Antisoma)、伊班膦酸、L-天门冬酰胺酶、培门冬酶(Oncaspar™)、乙法昔罗(Efaproxyn™-辐射疗法)、贝沙罗汀(Targretin™)、替米利芬(DPPE–增强细胞毒素的效力)、Theratope™(Biomira)、维A酸(Vesanoid™)、替拉扎明(Trizaone™)、莫特沙芬钆(Xcytrin™) Cotara™(mAb)和NBI-3001 (Protox Therapeutics)、聚谷氨酸盐-紫杉醇(Xyotax™)和它们的组合。经典的抗肿瘤剂的其它例子包括、但不限于：Advexin (ING 201)、TNFerade (GeneVec，响应于放射疗法而表达TNFα的化合物)、RB94 (Baylor College of Medicine)、Genasense(奥利美生、Genta)、考布他汀A4P (CA4P)、Oxi-4503、AVE-8062、ZD-6126、TZT-1027、阿托伐他汀(Lipitor，Pfizer Inc.)、普伐他汀(Pravachol、Bristol-Myers Squibb)、洛伐他汀(Mevacor，Merck Inc.)、辛伐他汀(Zocor，Merck Inc.)、氟伐他汀(Lescol，Novartis)、西立伐他汀(Baycol，Bayer)、罗舒伐他汀(Crestor，AstraZeneca)、洛伐他汀、烟碱酸(Advicor，Kos Pharmaceuticals)、Caduet、Lipitor、托塞曲匹和它们的组合。
在其它实施方案中，所述额外的抗癌剂是表现遗传的调节剂，例如EZH2、SMARCA4、PBRM1、ARID1A、ARID2、ARID1B、DNMT3A、TET2、MLL1/2/3、NSD1/2、SETD2、BRD4、DOT1L、HKMTsanti、PRMT1-9、LSD1、UTX、IDH1/2或BCL6的抑制剂。
在其它实施方案中，所述额外的抗癌剂是免疫调节剂，诸如CTLA-4、PD-1或PD-L1(例如，派姆单抗、纳武单抗或阿维鲁单抗)、LAG-3、TIM-3、TIGIT、4-1BB、OX40、GITR、CD40的抑制剂或CAR-T-细胞疗法。
本文中使用的“癌症”表示由异常细胞生长造成的任何恶性的和/或侵袭性的生长或肿瘤。癌症包括以形成它们的细胞的类型命名的实体瘤，血液、骨髓或淋巴系统的癌症。实体瘤的例子包括肉瘤和癌。血液癌症包括、但不限于白血病、淋巴瘤和骨髓瘤。癌症还包括起源于体内特定部位的原发性癌症、已经从其开始的地方扩散到身体的其它部位的转移性癌症、缓解后从原始的原发性癌症的复发、以及第二原发性癌症(这是在具有与新的原发性癌症不同类型的先前癌症病史的人中的新的原发性癌症)。
在本文提供的方法的某些实施方案中，所述癌症是乳腺癌、卵巢癌、膀胱癌、子宫癌、前列腺癌、肺癌(包括SCLC或NSCLC)、食管癌、肝癌、胰腺癌或胃癌。在某些这样的实施方案中，所述癌症以CCNE1和/或CCNE2的扩增或过表达为特征。
剂型和方案
通过能够将化合物递送至作用部位的任何方法，可以实现本发明的化合物的施用。这些方法包括口服途径、十二指肠内途径、胃肠外注射(包括静脉内、皮下、肌肉内、血管内或输注)、局部和直肠施用。
可以调节剂量方案以提供最适的期望应答。例如，可施用单次大剂量递送，可随时间施用几个分份剂量，或可根据治疗形势的急迫性所指示而按比例降低或提高所述剂量。为了易于施用和剂量一致，以剂量单位形式配制肠胃外组合物是特别有利的。本文中使用的剂量单位形式表示适合作为用于要治疗的哺乳动物对象的单位剂量的物理上离散的单元；每个单位含有与所需药用载体组合的经计算会产生所需治疗效果的预定量的活性化合物。本发明的剂量单位形式的规格决定于且直接取决于：(a)化学治疗剂的独特特征和要实现的特定治疗或预防效果，和(b)配制这样的活性化合物以治疗个体的敏感性的技术上的固有限制。
因而，基于本文中提供的公开内容，技术人员会明白，根据治疗领域中众所周知的方法调节剂量和定量施用方案。也就是说，可以容易地确立最大可耐受剂量，且也可以确定给患者提供可检测的治疗益处的有效量，正如同可以确定施用每种药剂以给患者提供可检测的治疗益处的临时要求。因此，尽管在本文中举例说明了某些剂量和施用方案，这些实施例决不限制在实践本发明中可以提供给患者的剂量和施用方案。
应当指出，剂量值可以随要减轻的病症的类型和严重程度而变化，且可以包括单剂量或多剂量。进一步应当理解，对于任何特定对象，应当根据个体需要以及管理或监督所述组合物的施用的人士的专业判断随时间调整具体剂量方案，并且本文所述的剂量范围仅仅是示例性的，且无意限制要求保护的组合物的范围或实践。例如，可以基于药代动力学或药效动力学参数来调节剂量，所述参数可以包括临床效应诸如毒性效应和/或实验室值。因而，本发明包括由技术人员确定的患者内剂量增加。确定化疗剂的施用的适当剂量和方案是在相关领域中公知的，并且一旦提供本文公开的教导，就会被技术人员理解为涵盖在内。
施用的本发明的化合物的量将取决于所治疗的对象、障碍或病症的严重程度、施用速率、化合物的处置和处方医师的判断。但是，有效剂量是在约0.001至约100 mg /千克体重/天的范围内，优选约1至约35 mg/kg/天，呈单剂量或分份剂量。对于70 kg的人，这相当于约0.05至约7 g/天，优选约0.1至约2.5 g/天。在某些情况下，在上述范围的下限之下的剂量水平可能是绰绰有余的，而在其它情况下，可能采用再更大的剂量而不引起任何有害的副作用，前提条件是，这样的更大的剂量首先分成数个用于在一天中施用的小剂量。
制剂和施用途径
本文中使用的“药学上可接受的载体”表示不会对生物体造成明显刺激并且不会消除所施用的化合物的生物活性和性质的载体或稀释剂。
药学上可接受的载体可以包含任何常规的药用载体或赋形剂。载体和/或赋形剂的选择在很大程度上取决于以下因素，例如特定施用模式、载体或赋形剂对溶解度和稳定性的影响、以及剂型的性质。
合适的药用载体包括惰性稀释剂或填充剂、水和各种有机溶剂(诸如水合物和溶剂合物)。如果需要的话，药物组合物可以含有另外的成分，诸如调味剂、粘合剂、赋形剂等。因此，对于口服施用，含有各种赋形剂（如柠檬酸）的片剂可以与各种崩解剂（如淀粉、海藻酸和某些复合硅酸盐）以及与粘合剂（如蔗糖、明胶和阿拉伯胶）一起使用。赋形剂的例子非限制性地包括碳酸钙、磷酸钙、各种糖和各种类型的淀粉、纤维素衍生物、明胶、植物油和聚乙二醇。另外，润滑剂诸如硬脂酸镁、月桂基硫酸钠和滑石经常可用于压片目的。也可以在软和硬填充的明胶胶囊中使用类似类型的固体组合物。因此，材料的非限制性例子包括乳糖或奶糖和高分子量聚乙二醇。当水性悬浮液或酏剂期望用于口服施用时，其中的活性化合物可以与以下物质组合：各种甜味剂或矫味剂、着色剂或染料，和如果需要的话，乳化剂或助悬剂，以及稀释剂诸如水、乙醇、丙二醇、甘油或它们的组合。
药物组合物可以例如呈适合口服施用的形式（作为片剂、胶囊、丸剂、粉剂、持续释放制剂、溶液、混悬液）、适合胃肠外注射的形式（作为无菌溶液、混悬液或乳剂）、适合局部施用的形式（作为软膏剂或乳膏剂）或适合直肠施用的形式（作为栓剂）。
示例性的胃肠外施用形式包括活性化合物在无菌水溶液（例如，丙二醇水溶液或右旋糖水溶液）中的溶液或混悬液。如果需要的话，可以适当地缓冲这样的剂型。
药物组合物可以是适用于精确剂量的单次施用的单位剂型。
适用于递送本发明的化合物的药物组合物及其制备方法对于本领域技术人员而言是容易明白的。这样的组合物及其制备方法可以参见例如‘Remington’sPharmaceutical Sciences’, 第19版(Mack Publishing Company, 1995)，其公开内容通过引用整体并入本文。
可以口服施用本发明的化合物。口服施用可以包括吞咽，从而化合物进入胃肠道；或可以采用含服或舌下施用，由此使化合物自嘴直接进入血流。
适用于口服施用的制剂包括固体制剂诸如片剂、含有微粒、液体或粉末的胶囊剂、锭剂(包括填充液体的锭剂)、咀嚼剂、多微粒和纳米微粒、凝胶、固溶体、脂质体、膜剂(包括粘膜粘着性膜剂)、ovules、喷雾剂和液体制剂。
液体制剂包括混悬液、溶液、糖浆剂和酏剂。这样的制剂可用作软或硬胶囊剂中的填充剂，并且通常包括载体，例如，水、乙醇、聚乙二醇、丙二醇、甲基纤维素或合适的油，以及一种或多种乳化剂和/或助悬剂。液体制剂还可以通过将固体（例如得自囊剂）重构来制备。
本发明的化合物也可以以快速溶解、快速崩解剂型使用，例如在Liang和Chen 的Expert Opinion in Therapeutic Patents，11(6)，981-986(2001)中描述的那些，其公开内容通过引用整体并入本文。
对于片剂剂型，取决于剂量，药物可以占所述剂型的1重量%至80重量%，更典型地占所述剂型的5重量%至60重量%。除药物外，片剂通常含有崩解剂。崩解剂的例子包括淀粉羟乙酸钠、羧甲基纤维素钠、羧甲基纤维素钙、交联羧甲纤维素钠、交聚维酮、聚乙烯吡咯烷酮、甲基纤维素、微晶纤维素、低级烷基-取代的羟丙基纤维素、淀粉、预胶化淀粉和海藻酸钠。通常，崩解剂占所述剂型的1重量%至25重量%，优选5重量%至20重量%。
通常使用粘合剂给片剂制剂赋予粘合性。合适的粘合剂包括微晶纤维素、明胶、糖、聚乙二醇、天然的和合成的树胶、聚乙烯吡咯烷酮、预胶化淀粉、羟丙基纤维素和羟丙基甲基纤维素。片剂还可以含有稀释剂，诸如乳糖(一水合物、喷雾干燥的一水合物、无水乳糖等)、甘露醇、木糖醇、右旋糖、蔗糖、山梨醇、微晶纤维素、淀粉和磷酸氢钙二水合物。
片剂还可任选地包括表面活性剂，诸如月桂基硫酸钠和聚山梨酯80，以及助流剂，例如二氧化硅和滑石。当存在时，表面活性剂的量通常为片剂的0.2重量%至5重量%，且助流剂的量通常为片剂的0.2重量%至1重量%。
片剂通常还含有润滑剂诸如硬脂酸镁、硬脂酸钙、硬脂酸锌、硬脂酰富马酸钠，以及硬脂酸镁与月桂基硫酸钠的混合物。润滑剂通常以片剂的0.25重量%至10重量%、优选0.5重量%至3重量%的量存在。
其它常规成分包括抗氧化剂、着色剂、矫味剂、防腐剂和掩味剂。
示例性片剂含有最多约80重量%的药物，约10重量%至约90重量%的粘合剂，约0重量%至约85重量%的稀释剂，约2重量%至约10重量%的崩解剂，和约0.25重量%至约10重量%的润滑剂。
片剂掺合物可以直接或通过辊压缩以形成片剂。可替换地，可以将片剂掺合物或掺合物的一部分湿法、干法或熔融造粒、熔融凝固或挤出，然后制片。最终制剂可以包括一个或多个层，并可包衣或不包衣；或包封。
H.Lieberman和L.Lachman在“Pharmaceutical Dosage Forms：Tablets，Vol.1”，Marcel Dekker, N.Y., N.Y., 1980 (ISBN 0-8247-6918-X)中详细讨论了片剂的配制，其公开内容通过引用整体并入本文。
用于口服施用的固体制剂可以配制成立即释放和/或调节释放。调释制剂包括延迟、持续、脉冲、受控、靶向及程序化的释放。
合适的调释制剂描述于美国专利号6,106,864中。其它合适的释放技术（例如高能量分散体和渗透性和包衣颗粒）的细节可以参见Verma等人，Pharmaceutical TechnologyOn-line，25(2), 1-14 (2001)。在WO 00/35298中描述了使用口香糖来实现控释。这些参考文献的公开内容通过引用整体并入本文。
本发明的化合物还可以直接施用进血流、肌肉或内脏器官。胃肠外施用的适宜手段包括静脉内、动脉内、腹膜内、鞘内、心室内、尿道内、胸骨内、颅内、肌肉内和皮下。胃肠外施用的合适装置包括针(包括显微针)注射器、无针注射器和输注技术。
胃肠外制剂通常是可以含有赋形剂诸如盐、碳水化合物和缓冲剂(优选调至3-9的pH)的水溶液，但是，对于一些应用，它们可以更适当地配制为无菌的非水性溶液或配制为要与合适的媒介物（诸如无菌的、无热原的水）结合使用的干燥形式。
使用本领域技术人员众所周知的标准制药技术，可以容易地完成胃肠外制剂在无菌条件下的制备，例如，通过冻干法。
通过使用适当的制剂技术，诸如增溶剂的掺入，可以增加用于制备胃肠外溶液的本发明的化合物的溶解度。
可以将用于胃肠外施用的制剂配制成立即释放和/或调节释放。调释制剂包括延迟、持续、脉冲、受控、靶向及程序化的释放。因此，本发明的化合物可以配制成固体、半固体或触变液体以用于作为植入的贮库施用，所述贮库提供活性化合物的调释。这样的制剂的例子包括药物涂覆的支架和PGLA微球。
本发明的化合物还可以局部施用于皮肤或粘膜，也就是说，真皮地或透皮地施用。用于此目的的典型制剂包括凝胶、水凝胶、洗剂、溶液、乳膏剂、软膏剂、扑粉剂、敷料、泡沫、薄膜、皮肤贴剂、糯米纸囊剂、植入物、海绵、纤维、绷带和微乳剂。也可以使用脂质体。典型的载体包括醇、水、矿物油、液体矿脂、白矿脂、甘油、聚乙二醇和丙二醇。可以掺入穿透促进剂；参见，例如，Finnin和Morgan的J Pharm Sci, 88 (10), 955-958(1999年10月)。其它局部施用方式包括通过电穿孔、离子透入法、超声透入疗法、超声促渗和显微针或无针(例如Powderject™，Bioject™等)注射进行的递送。这些参考文献的公开内容通过引用整体并入本文。
用于局部施用的制剂可配制成立即释放和/或调节释放。调释制剂包括延迟、持续、脉冲、受控、靶向及程序化的释放。
本发明的化合物还可以鼻内施用或通过吸入施用，通常以干粉形式(单独，作为混合物，例如，与乳糖的干掺合物，或作为混合组分颗粒，例如与磷脂诸如磷脂酰胆碱混合)从干粉吸入器施用，或者作为气雾剂喷雾从加压容器、泵、喷雾器、雾化器(优选用电流体动力学产生细雾的雾化器)或喷散器施用，其中用或不用合适的抛射剂，诸如1,1,1,2-四氟乙烷或1,1,1,2,3,3,3-七氟丙烷。对于鼻内使用，粉末可以包括生物粘附剂，例如壳聚糖或环糊精。
加压容器、泵、喷雾剂、雾化器或喷散器含有本发明的化合物的溶液或混悬液，其包含例如乙醇、含水乙醇或合适的替代试剂（用于活性物的分散、增溶或延长释放）、作为溶剂的抛射剂和任选的表面活性剂诸如脱水山梨糖醇三油酸酯、油酸或寡乳酸。
在用于干粉或混悬液制剂之前，将药物产品微粉化至适于通过吸入递送的尺寸(通常小于5微米)。这可以通过任何适当的粉碎方法实现，例如螺旋喷射研磨、流化床喷射研磨、超临界流体处理以形成纳米颗粒、高压匀浆化或喷雾干燥。
用于吸入器或吹入器的胶囊(例如由明胶或HPMC制成)、泡罩和药筒可配制成含有本发明的化合物、合适的粉末基质（诸如乳糖或淀粉）和性能修饰剂（诸如l-亮氨酸、甘露醇或硬脂酸镁）的粉末混合物。乳糖可以是无水的或乳糖一水合物形式，优选后者。其它合适的赋形剂包括葡聚糖、葡萄糖、麦芽糖、山梨醇、木糖醇、果糖、蔗糖和海藻糖。
用于使用电流体动力学产生细雾的雾化器的合适溶液制剂每次致动可含有1 μg至20 mg本发明的化合物，并且致动体积可在1 μL至100 μL之间变化。典型的制剂包括本发明的化合物、丙二醇、无菌水、乙醇和氯化钠。可用于代替丙二醇的替代溶剂包括甘油和聚乙二醇。
可以将合适的矫味剂（诸如薄荷醇和左薄荷脑）或甜味剂（诸如糖精或糖精钠）加入到意图用于吸入/鼻内施用的本发明的那些制剂中。
用于吸入/鼻内施用的制剂可以使用例如聚(DL-乳酸-乙醇酸共聚物)(PGLA)配制成立即释放和/或调节释放。调释制剂包括延迟、持续、脉冲、受控、靶向及程序化的释放。
在干粉吸入器和气雾剂的情况下，借助于递送计量的量的阀确定剂量单位。通常将根据本发明的单元设置成施用含有所需量的本发明的化合物的计量剂量或“喷气”。总日剂量可以以单剂量施用，或者更通常地，以在一天中的分份剂量施用。
本发明的化合物可以直肠或阴道施用，例如以栓剂、子宫托或灌肠剂的形式施用。可可脂是传统的栓剂基质，但可以在适当时使用各种替代物。
用于直肠/阴道施用的制剂可配制成立即释放和/或调节释放。调释制剂包括延迟、持续、脉冲、受控、靶向及程序化的释放。
本发明的化合物还可以直接施用于眼睛或耳朵，通常以在等渗的、调过pH的无菌盐水中的微粉化混悬液或溶液的滴的形式施用。适于眼和耳施用的其它制剂包括软膏剂、可生物降解的(例如可吸收的凝胶海绵、胶原)和不可生物降解的(例如硅酮)植入物、糯米纸囊剂、透镜和微粒或囊状系统，诸如类脂质体或脂质体。聚合物诸如交联的聚丙烯酸、聚乙烯醇、透明质酸、纤维质聚合物（例如，羟丙基甲基纤维素、羟乙基纤维素或甲基纤维素）或杂多糖聚合物（例如，结冷胶(gelan树胶)）可以与防腐剂诸如苯扎氯铵一起掺入。这样的制剂还可以通过离子透入法递送。
用于眼/耳施用的制剂可配制成立即释放和/或调节释放。调释制剂包括延迟、持续、脉冲、受控、靶向或程序化的释放。
其它技术
本发明的化合物可以与可溶性大分子实体（诸如环糊精及其合适的衍生物或含有聚乙二醇的聚合物）组合，以便改进其溶解度、溶出速率、味道掩蔽性、生物利用度和/或稳定性以用于用在前述施用模式中的任一种中。
例如，发现药物-环糊精络合物通常可用于大多数剂型和施用途径。可以使用包合和非包合络合物。作为与药物直接络合的替代方案，环糊精可以用作辅助添加剂，即作为载体、稀释剂或增溶剂。最常用于这些目的的是α-、β-和γ-环糊精，其例子可以在PCT公开号WO91/11172、WO 94/02518和WO 98/55148中找到，其公开内容通过引用整体并入本文。
剂量
所施用的活性化合物的量将取决于受治疗的对象、障碍或病症的严重程度、施用速率、化合物的处置和处方医师的判断。但是，有效剂量通常在约0.001至约100 mg /千克体重/天的范围内，优选约0.01至约35 mg/kg/天，呈单剂量或分份剂量。对于70 kg的人，这将达到约0.07至约7000 mg/天，优选约0.7至约2500 mg/天。在某些情况下，在上述范围的下限之下的剂量水平可能是绰绰有余的，而在其它情况下，可能使用再更大的剂量而不引起任何有害的副作用，其中这样的更大的剂量通常分成数个用于在一天中施用的更小剂量。
1) 部件构成的试剂盒
由于可能需要施用活性化合物的组合，例如，为了治疗特定疾病或病症的目的，在本发明的范围内包括：两种或更多种药物组合物(其中至少一种含有根据本发明的化合物)可以方便地以适合于组合物的共同施用的试剂盒形式组合。因此，本发明的试剂盒包括两种或更多种单独的药物组合物(其中至少一种含有本发明的化合物)，和用于分别保留所述组合物的装置，诸如容器、分开的瓶子或分开的箔包。这样的试剂盒的一个例子是用于包装片剂、胶囊剂等的熟悉的泡罩包。
本发明的试剂盒特别适用于施用不同的剂型，例如口服和胃肠外剂型，适用于以不同的剂量间隔施用单独的组合物，或适用于将单独的组合物相互滴定。为了有助于顺应性，该试剂盒通常包括施用指导并且可以提供有记忆辅助器。
联合疗法
本文中使用的术语“联合疗法”表示将本发明的化合物与至少一种额外的药物或药物成分(例如，抗癌剂)一起依次或同时施用。
如上面所指出的，可以与一种或多种额外的抗癌剂联合使用本发明的化合物。通过与其它获批准的或实验性的癌症疗法（例如，辐射、外科手术、化学治疗剂、靶向疗法、抑制肿瘤中失调的其它信号传递途径的药剂和其它免疫增强剂如PD-1拮抗剂等）组合，可以增强本发明的化合物在某些肿瘤中的效力。
当使用联合疗法时，可以与本发明的化合物依次或同时施用一种或多种额外的抗癌剂。在一个实施方案中，在施用本发明的化合物之前，将额外的抗癌剂施用于哺乳动物（例如，人）。在另一个实施方案中，在施用本发明的化合物之后，将额外的抗癌剂施用于哺乳动物。在另一个实施方案中，在施用本发明的化合物的同时将额外的抗癌剂施用于哺乳动物（例如，人）。
本发明还涉及用于治疗哺乳动物(包括人)中的异常细胞生长的药物组合物，其包含与一种或多种(优选一至三种)额外的抗癌治疗剂组合的一定量的如上定义的本发明的化合物（包括所述化合物或其药学上可接受的盐的水合物、溶剂合物和多晶型物）。
合成方法
根据本文提供的示例性程序以及本领域技术人员已知的其改进，制备本发明的化合物。
在所有实施例中使用以下缩写：“Ac”是指乙酰基，“AcO”或“OAc”是指乙酰氧基，“ACN”是指乙腈，“aq”是指水性的，“atm”是指大气压，“BOC”、“Boc”或“boc”是指N-叔丁氧基羰基，“Bn”是指苄基，“Bu”是指丁基，“nBu”是指正丁基，“tBu”是指叔丁基，“Cbz”是指苄氧基羰基，“DCM”(CH2Cl2)是指二氯甲烷/二氯甲烷，“de”是指非对映异构体过量，“DEA”是指二乙胺，“DIPEA”是指二异丙基乙基胺，“DMA”是指N,N-二甲基乙酰胺，“DMAP”是指4-二甲基氨基吡啶，“DMF”是指N,N-二甲基甲酰胺，“DMSO”是指二甲基亚砜，“ee”是指对映体过量，“Et”是指乙基，“EtOAc”是指乙酸乙酯，“EtOH”是指乙醇，“HATU”是指1-[双(二甲基氨基)亚甲基]-1H-1,2,3-三唑并[4,5-b]吡啶鎓3-氧化物六氟磷酸盐，“HOAc”或“AcOH”是指乙酸，“i-Pr”或“iPr”是指异丙基，“IPA”是指异丙醇，“Me”是指甲基，“MeOH”是指甲醇，“MS”是指质谱法，“MTBE”是指甲基叔丁基醚，“Ph”是指苯基，“sat.”是指饱和的，“SFC”是指超临界流体色谱法，“T3P”是指丙基膦酸酐，“TFA”是指三氟乙酸，“THF”是指四氢呋喃，“TLC”是指薄层色谱法，“Rf”是指保留级分，“~”是指大约，“rt”是指保留时间，“h”是指小时，“min”是指分钟。
实施例
合成的中间体的制备
中间体1: {1-叔丁基-3-[(1S,3R)-3-羟基环戊基]-1H-吡唑-5-基}氨基甲酸苄 酯；
中间体2: {1-叔丁基-3-[(1R,3S)-3-羟基环戊基]-1H-吡唑-5-基}氨基甲酸苄 酯.
将两个平行反应各自用原甲酸三甲酯(4.47 kg, 42.15 mol, 4.62 L)和4-甲苯磺酸一水合物(26.72 g, 140.5 mmol)处理，每个平行反应含有在13℃的(±)-3-氧代环戊烷甲酸(CAS#98-78-2, 900 g, 7.02 mol)在甲醇(5 L)中的溶液。将混合物在13℃搅拌25小时。将每批分别用饱和NaHCO3水溶液(1 L)淬灭，然后将两批合并和在真空下浓缩，以除去大部分甲醇。将残余物用乙酸乙酯(4 L)稀释，并分离各层。将水层用乙酸乙酯(2 x 1L)进一步萃取。将合并的有机层用饱和NaCl水溶液(3 x 1L)洗涤，经硫酸镁干燥，过滤，并在真空下浓缩以得到作为浅黄色油的(±)-3,3-二甲氧基环戊烷甲酸甲酯(1a, 2.5 kg,13.28 mol, 94%)。1H NMR (400MHz, 氯仿-d) δ = 3.67 (s, 3H), 3.20 (s, 3H), 3.19(s, 3H), 2.94-2.82 (m, 1H), 2.16-2.00 (m, 2H), 1.99-1.76 (m, 4H)。
将正丁基锂的溶液(3.44 L的在己烷类中的2.5 M溶液，8.6 mol)加入含有在-65℃的THF (3 L)的反应器中。逐滴加入无水乙腈(453 mL, 353 g, 8.61 mol)，这足够缓慢以维持内部温度低于-55℃。将混合物在-65℃搅拌另外1小时。然后逐滴加入(±)-3,3-二甲氧基环戊烷甲酸甲酯(1a, 810 g, 4.30 mol)在THF (1 L)中的溶液，这足够缓慢以维持内部温度低于-50℃。在-65℃搅拌另外1小时以后，将反应用水(4 L)淬灭，用HCl水溶液(1M)中和至pH 7，并用乙酸乙酯(3 x 3L)萃取。将合并的有机层用饱和NaCl水溶液(2 x 3L)洗涤，经硫酸镁干燥，过滤，并在真空下浓缩以得到作为红色油的粗制的(±)-3-(3,3-二甲氧基环戊基)-3-氧代丙烷腈(1b, 722 g, 3.66 mol, 85%)，将其不经进一步纯化地使用。
在16-25℃将固体氢氧化钠(共131.4 g, 3.29 mol)分份加入叔丁基肼盐酸盐(409.4 g, 3.29 mol)在乙醇(3 L)中的悬浮液中。在25℃继续搅拌1小时。在25℃加入粗制的(±)-3-(3,3-二甲氧基环戊基)-3-氧代丙烷腈(1b, 540 g, 2.74 mol)在乙醇中的溶液，然后将混合物加热至内部75℃并搅拌30小时。将反应物过滤，并将滤液在真空下浓缩以得到作为红色油的粗产物。将该产物与来自另外三个相同制备批(每个用540 g 1b开始；4批共计2.16 kg, 10.96 mol)的粗制物合并，并通过硅胶色谱法(用0-35%的乙酸乙酯在石油醚中的溶液洗脱)纯化，得到作为红色油的(±)-1-叔丁基-3-(3,3-二甲氧基环戊基)-1H-吡唑-5-胺(1c, 1.60 kg, 5.98 mol, 54%收率)。1H NMR (氯仿-d) δ = 5.41 (s,1H), 3.50 (br. s., 2H), 3.22 (s, 3H), 3.20 (s, 3H), 3.13 (tt, J=7.9, 9.6 Hz,1H), 2.25 (dd, J=8.0, 13.3 Hz, 1H), 2.09-2.00 (m, 1H), 1.99-1.91 (m, 1H),1.83 (dd, J=10.8, 12.8 Hz, 2H), 1.78-1.68 (m, 1H), 1.60 (s, 9H)。
将氯甲酸苄酯(563.6 mL, 676.3 g, 3.96 mol)加入冷却的(0-5℃) (±)-1-叔丁基-3-(3,3-二甲氧基环戊基)-1H-吡唑-5-胺(1c, 530 g, 1.98 mol)在乙腈(3.5 L)中的溶液中。将混合物在23℃搅拌2小时，并然后分份加入固体碳酸氢钠(532.9 g, 6.34mol)。继续在23℃搅拌26小时。将得到的悬浮液过滤，并将滤液在真空下浓缩以得到作为红色油的粗制的(±)-[1-叔丁基-3-(3,3-二甲氧基环戊基)-1H-吡唑-5-基]氨基甲酸苄酯(1d, 最多980 g, 1.98 mol)，其不经进一步纯化地用于下一步。
将在18℃的粗制的(±)-[1-叔丁基-3-(3,3-二甲氧基环戊基)-1H-吡唑-5-基]氨基甲酸苄酯(1d, 最多980 g, 1.98 mol)在丙酮(2 L)和水(2 L)中的溶液用4-甲苯磺酸一水合物(48.75 g, 256.3 mmol)处理。将混合物加热至内部60℃保持20小时。在真空下浓缩以除去大部分丙酮以后，将水性残余物用二氯甲烷(3 x 3 L)萃取。将合并的有机萃取物经硫酸钠干燥，过滤，并在真空下浓缩成粗制的红色油。将该粗产物与来自两个另外相同制备批(每个源自1.98 mol 1c, 3批共5.94 mol)的粗制物合并，并通过硅胶色谱法(用0-50%的乙酸乙酯在石油醚中的溶液洗脱)纯化以得到作为黄色固体的(±)-[1-叔丁基-3-(3-氧代环戊基)-1H-吡唑-5-基]氨基甲酸苄酯(1e, 1.6 kg)。将该固体在10:1石油醚/乙酸乙酯(1.5 L)中在20℃搅拌18小时。将得到的悬浮液过滤，将滤饼用石油醚(2 x 500 mL)洗涤，并将固体在真空下干燥以得到(±)-[1-叔丁基-3-(3-氧代环戊基)-1H-吡唑-5-基]氨基甲酸苄酯(1e, 1.4 kg, 3.9 mol, 三批合并66%)。1H NMR (DMSO--d 6) δ = 9.12 (br. s.,1H), 7.56-7.13 (m, 5H), 6.03 (s, 1H), 5.12 (s, 2H), 3.41-3.27 (m, 1H), 2.48-2.39 (m, 1H), 2.34-2.10 (m, 4H), 1.98-1.81 (m, 1H), 1.48 (s, 9H)。
将(±)-[1-叔丁基-3-(3-氧代环戊基)-1H-吡唑-5-基]氨基甲酸苄酯(1e, 320g, 0.900 mol)在THF (1.5 L)中的溶液在真空下脱气并用干燥氮气净化(3个循环)，然后冷却至内部-65℃。将三乙基硼氢化锂溶液(1.0 M的在THF中的溶液，1.80 L, 1.80 mol)以维持内部温度低于-55℃的速率逐滴加入，然后在-65℃继续搅拌1.5小时。将反应混合物用在-40至-30℃的饱和NaHCO3水溶液(1.5 L)淬灭。将过氧化氢(30%水溶液, 700 g)逐滴加入混合物，同时将内部温度维持在-10至0℃。将混合物在10℃搅拌1小时，然后用乙酸乙酯(3 x 2 L)萃取。将合并的有机层用饱和Na2SO3水溶液(2 x 1 L)和饱和NaCl水溶液(2 x 1L)洗涤。将有机物经硫酸镁干燥，过滤，并在真空下浓缩成粗制的黄色油。将来自该批的粗产物与来自三个其它相同制备批(每个从0.900 mol 1e开始，共3.60 mol)的粗制物合并用于纯化。色谱分离之前，合并的混合物通过NMR表现出~3.3:1顺/反比。将合并的粗产物通过硅胶色谱法纯化两次，用0-50%的乙酸乙酯在二氯甲烷中的溶液洗脱，得到作为浅黄色固体的(±)-反式-[1-叔丁基-3-(3-羟基环戊基)-1H-吡唑-5-基]氨基甲酸苄酯(1f, 960 g)，将其如下所述通过研磨进一步纯化。
前一批1f已经从小规模反应获得，从总共120 g 1e (0.34 mol)开始。将来自该批次的柱分离产物与来自上述批次的柱分离产物（其已经衍生自3.60 mol 1e，用于所有合并批次的共3.94 mol 1e）合并，悬浮于10:1二氯甲烷/甲醇(1.5 L)中，且在20℃搅拌16小时。过滤悬浮液，并将滤饼用石油醚(2 x 500 mL)洗涤。将固体在真空下干燥以得到作为白色固体的清洁的(±)-反式-[1-叔丁基-3-(3-羟基环戊基)-1H-吡唑-5-基]氨基甲酸苄酯(1f, 840 g, 2.35 mol, 所有合并批次为60%总产率)。1H NMR (400MHz, DMSO-d 6) δ =9.07 (br. s., 1H), 7.45-7.27 (m, 5H), 5.92 (s, 1H), 5.11 (s, 2H), 4.57 (d, J=4.5 Hz, 1H), 4.21-4.07 (m, 1H), 2.88 (quin, J=8.6 Hz, 1H), 2.24-2.13 (m, 1H),1.92-1.78 (m, 1H), 1.78-1.62 (m, 2H), 1.61-1.53 (m, 1H), 1.47 (s, 9H), 1.52-1.43 (m, 1H)。MS: 358 [M+H]+。
通过手性SFC分离(±)-反式-[1-叔丁基-3-(3-羟基环戊基)-1H-吡唑-5-基]氨基甲酸苄酯的对映异构体(1f, 700 g, 1.96 mol)。
将来自首先洗脱的对映异构体峰的产物(310 g固体)悬浮于甲醇/石油醚(1:10,1 L)中并在25℃搅拌1小时。将悬浮液过滤，将滤垫用石油醚(2 x 500 mL)洗涤，并将固体在真空下干燥以得到作为白色固体的{1-叔丁基-3-[(1S,3R)-3-羟基环戊基]-1H-吡唑-5-基}氨基甲酸苄酯(中间体1, 255 g, 713 mmol, 36%, >99%ee)。1H NMR (400MHz, DMSO-d 6) δ = 9.08 (br. s., 1H), 7.58-7.20 (m, 5H), 5.92 (s, 1H), 5.11 (s, 2H),4.57 (d, J=4.4 Hz, 1H), 4.19-4.09 (m, 1H), 2.88 (quin, J=8.6 Hz, 1H), 2.24-2.13 (m, 1H), 1.91-1.79 (m, 1H), 1.79-1.61 (m, 2H), 1.61-1.53 (m, 1H), 1.47(s, 9H), 1.52-1.44 (m, 1H)。MS: 358 [M+H]+。旋光度[α]D +3.76 (c 1.0, MeOH)。手性纯度：>99%ee，保留时间3.371 min。在加热至40℃的ChiralPak AD-3 150 x 4.6 mm ID、3µm柱上进行手性SFC分析，用CO2流动相和0-40%甲醇+0.05%DEA的梯度历时5.5 min洗脱，然后在40%保持3 min；以2.5 mL/min流动。
将来自第二洗脱的对映异构体峰的产物(300 g固体)悬浮于甲醇/石油醚(1:10,1 L)中并在25℃搅拌1小时。将悬浮液过滤，将滤垫用石油醚(2 x 500 mL)洗涤，并将固体在真空下干燥以得到作为白色固体的{1-叔丁基-3-[(1R,3S)-3-羟基环戊基]-1H-吡唑-5-基}氨基甲酸苄酯(中间体2, 255 g, 713 mmol, 36%, 94%ee)。1H NMR (400MHz, DMSO-d 6)δ = 9.08 (br. s., 1H), 7.55-7.19 (m, 5H), 5.92 (s, 1H), 5.11 (s, 2H), 4.57(d, J=4.4 Hz, 1H), 4.23-4.07 (m, 1H), 2.88 (quin, J=8.7 Hz, 1H), 2.23-2.14(m, 1H), 1.90-1.79 (m, 1H), 1.77-1.61 (m, 2H), 1.61-1.53 (m, 1H), 1.47 (s,9H), 1.52-1.44 (m, 1H)。MS: 358 [M+H]+。旋光度[α]D -2.43 (c 1.0, MeOH)。手性纯度：94%ee，保留时间3.608 min。在加热至40℃的ChiralPak AD-3 150 x 4.6 mm ID、3µm柱上进行手性SFC分析，用CO2流动相和0-40%甲醇+0.05%DEA的梯度历时5.5 min洗脱，然后在40%保持3 min；以2.5 mL/min流动。
将具有[α]D -3.1 (c 1.1, MeOH)和96%ee的来自前一批的第二洗脱的对映异构体的样品从二氯乙烷/戊烷中结晶。通过小分子X-射线晶体学得到晶体结构，其表现出(1R,3S)几何学。基于其在分析方法中的可比较的旋光度和洗脱顺序，因而将中间体2的绝对立体化学指定为(1R,3S)。将中间体1，即中间体2的对映异构体，因而指定为(1S,3R)立体化学。
中间体3: (5-甲基-1,3-噁唑-2-基)乙酸
将在15℃的丙-2-基-1-胺(25.0 g, 450 mmol)在二氯甲烷(500 mL)中的溶液用三乙胺(138 g, 1360 mmol)和DMAP (5.55 g, 45.4 mmol)处理。将混合物冷却至0℃并历时30分钟逐滴加入3-氯-3-氧代丙酸甲酯(74.4 g, 545 mmol)。将得到的溶液在15℃搅拌16小时，然后在该温度静置2天。将得到的悬浮液过滤，将滤液在真空下浓缩，并将残余物通过硅胶色谱法(用60%EtOAc/石油醚洗脱)纯化以得到作为浅黄色油的3-氧代-3-(丙-2-炔-1-基氨基)丙酸甲酯(3a, 47 g, 67%, 通过NMR90%纯度)。1H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ =7.43 (br s, 1H), 4.09 (dd, J=2.6, 5.3 Hz, 2H), 3.76 (s, 3H), 3.36 (s, 2H),2.25 (s, 1H)。
根据下述程序进行两个平行批次：将3-氧代-3-(丙-2-炔-1-基氨基)丙酸甲酯(3a, 23.5 g, 151 mmol)在乙腈(300 mL)中的溶液用三氯化金(2.50 g, 8.24 mmol)在室温(20℃)处理。将得到的混合物在暗处加热至70℃保持16小时。然后将两批合并，过滤以除去催化剂，并将滤液浓缩至干燥。将残余物通过硅胶色谱法(用40%EtOAc/石油醚洗脱)纯化以得到作为浅黄色油的(5-甲基-1,3-噁唑-2-基)乙酸甲酯(3b, 26.5 g, 合并批次为56.5%)。1H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ = 6.68 (d, J=1.0 Hz, 1H), 3.80 (s, 2H),3.75 (s, 3H), 2.30 (d, J=1.3 Hz, 3H)。
将(5-甲基-1,3-噁唑-2-基)乙酸甲酯(3b, 26.5 g, 170.8 mmol)在THF (80 mL)和水(20 mL)中的溶液用氢氧化锂一水合物(7.17 g, 171 mmol)处理并在室温(25℃)搅拌2小时。将混合物浓缩以除去大部分THF，然后将残余物用水(25 mL)稀释，并用二氯甲烷(2x 30 mL)萃取。将水层浓缩以得到粗产物(~26 g)，将其通过与EtOAc/MeOH (v/v 10/1)一起研磨进一步纯化以得到作为浅黄色固体的(5-甲基-1,3-噁唑-2-基)乙酸锂(中间体3,21.7 g, 90%)。1H NMR (400 MHz, 氧化氘) δ = 6.63 (d, J=1.0 Hz, 1H), 3.59 (s,2H), 2.22 (d, J=1.0 Hz, 3H)。
中间体4: (5-甲氧基吡嗪-2-基)乙酸锂.
将2,5-二溴吡嗪(30.0 g, 126 mmol)在THF (252 mL)中的溶液冷却至0℃。历时18分钟逐滴加入甲醇钠(25重量%的在甲醇中的溶液, 29.0 mL, 27.3 g, 126 mmol)。将溶液温热至室温并搅拌37小时。将悬浮液过滤，将烧瓶和滤饼用少量的THF冲洗，并将滤液在真空下浓缩以得到作为固体的2-溴-5-甲氧基吡嗪(4a, 23.80 g, 100%)。1H NMR (400MHz, 氯仿-d) δ = 8.20 (d, J=1.2 Hz, 1H), 8.03 (d, J=1.2 Hz, 1H), 3.97 (s,3H)。
给氮净化的烧瓶装入碘化亚铜(I) (2.82 g, 14.8 mmol)、2-吡啶甲酸(3.65 g,29.6 mmol)、碳酸铯(36.2 g, 111 mmol)和2-溴-5-甲氧基吡嗪(4a, 7.00 g, 37.03mmol)。将烧瓶再次用氮气净化，然后通过注射器引入干燥的二氧杂环己烷(250 mL)和丙二酸二甲酯(22 mL, 192 mmol)。用氮气在溶液中鼓泡10分钟。将混合物在100℃加热36小时。冷却至室温以后，将悬浮液过滤，并将滤液浓缩成油。将剩在滤饼中的固体悬浮于水(150mL)中，并将溶液用4M HCl (~17 mL)缓慢地酸化。将该溶液用乙酸乙酯(2 x 150 mL)萃取。将乙酸乙酯萃取物与从滤液得到的粗制油合并，并将全部用饱和NH4Cl水溶液(50 mL)洗涤，经硫酸钠干燥，过滤，并浓缩。将残余物通过硅胶色谱法(用0-50%的乙酸乙酯在庚烷中的溶液洗脱)纯化以得到作为油的(5-甲氧基吡嗪-2-基)丙烷二酸二甲酯(4b, 5.94 g,67%)，所述油在静置后固化。1H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ = 8.23 (d, J=1.3 Hz, 1H),8.18 (d, J=1.3 Hz, 1H), 4.90 (s, 1H), 3.97 (s, 3H), 3.79 (s, 6H)。
将(5-甲氧基吡嗪-2-基)丙烷二酸二甲酯(4b, 7.30 g, 30.4 mmol)在DMSO (51mL)和水(3.4 mL)中的溶液冷却至0℃。加入固体氯化锂(5.15 g, 122 mmol)并将混合物加热至100℃保持17小时。将暗红色溶液在乙酸乙酯(150 mL)和水(300 mL)之间分配。将水层用乙酸乙酯(3 x 50 mL)进一步萃取。将合并的有机层用半饱和的NaCl水溶液和饱和NaCl水溶液洗涤，经硫酸钠干燥，过滤，并浓缩。将粗产物通过硅胶色谱法(用0-60%的乙酸乙酯在庚烷中的溶液洗脱)纯化，得到作为油的(5-甲氧基吡嗪-2-基)乙酸甲酯(4c, 3.86 g,70%)。1H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ = 8.18 (d, J=1.3 Hz, 1H), 8.06 (d, J=1.2 Hz,1H), 3.96 (s, 3H), 3.79 (s, 2H), 3.73 (s, 3H)。
将(5-甲氧基吡嗪-2-基)乙酸甲酯(4c, 3.86g, 21.2 mmol)和氢氧化锂一水合物(889 mg, 21.2 mmol)在THF (42 mL)和水(42 mL)中的悬浮液在25℃搅拌14小时。通过LCMS确定未反应的酯仍然存在，所以加入额外的氢氧化锂一水合物(50 mg, 1.2 mmol)并在25℃继续搅拌6小时。转化仍未结束，所以加入甚至更多的氢氧化锂一水合物(110 mg,2.62 mmol；共1.049 g, 25 mmol)，并将混合物加热至30℃保持2小时。在真空下除去THF，并将水性残余物冻干至干燥，剩下(5-甲氧基吡嗪-2-基)乙酸锂(中间体4, 4.272 g，3.71g的理论质量的115%)，作为与氢氧化锂的混合物。1H NMR (400MHz, 氧化氘) δ = 8.14(d, J=1.3 Hz, 1H), 8.01 (d, J=1.2 Hz, 1H), 3.93 (s, 3H), 3.64 (s, 2H)。
中间体5: 3-(甲氧基甲基)-1-甲基-1H-吡唑-5-甲酸锂.
将甲磺酰氯(11.32 g, 98.8 mmol)在二氯甲烷(50 mL)中的溶液逐滴加入冷却的(0℃)3-(羟基甲基)-1-甲基-1H-吡唑-5-甲酸甲酯(CAS# 1208081-25-7, 15.0 g, 88.1mmol)和二异丙基乙基胺(14.8 g, 115 mmol)在二氯甲烷(250 mL)中的混合物中。在加入完成后，将混合物在0℃搅拌45分钟。将反应混合物用饱和NH4Cl水溶液洗涤，并将有机层经硫酸钠干燥，过滤，并浓缩以得到作为黄色油的1-甲基-3-{[(甲基磺酰基)氧基]甲基}-1H-吡唑-5-甲酸甲酯(5a, 22.6 g, >99%)，将其不经进一步纯化地使用。1H NMR (400 MHz,氯仿-d) δ = 6.98 (s, 1H), 5.26 (s, 2H), 4.20 (s, 3H), 3.91 (s, 3H), 3.03 (s,3H)。
将在室温的1-甲基-3-{[(甲基磺酰基)氧基]甲基}-1H-吡唑-5-甲酸甲酯(5a,22.6 g, 91.0 mmol)在甲醇(200 mL)中的溶液用分成小份的固体甲醇钠(9.84 g, 182mmol)处理。将反应物加热至70℃保持30分钟。TLC提示酯的部分水解，所以为了重新酯化，将混浊的混合物用在乙酸乙酯中的4M HCl (40 mL, 160 mmol)酸化，并在70℃继续加热5小时。将混合物浓缩至干燥，剩下白色固体。将该固体用乙酸乙酯/石油醚(1/3, 3 x 200mL)萃取。将合并的萃取物浓缩至干燥，然后将残余的固体用乙酸乙酯/石油醚(1/3, 100mL)重萃取，经硫酸钠干燥，过滤，并浓缩以得到作为浅黄色液体的3-(甲氧基甲基)-1-甲基-1H-吡唑-5-甲酸甲酯(5b, 14.5 g, 86%，通过NMR 80%纯度)，其在静置后固化。仅主要组分：1H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ = 6.83 (s, 1H), 4.45 (s, 2H), 4.16 (s, 3H),3.88 (s, 3H), 3.39 (s, 3H)。
将3-(甲氧基甲基)-1-甲基-1H-吡唑-5-甲酸甲酯(5b, 14.5 g, 78.7 mmol)和氢氧化锂一水合物(3.47 g, 82.7 mmol)在THF (150 mL)和水(50 mL)中的溶液在室温搅拌16小时。在真空下除去THF，并将残余物溶解在水(100 mL)中，并用二氯甲烷(3 x 30 mL)萃取。将有机层抛弃。将水层浓缩和在真空下干燥以得到作为黄色固体的3-(甲氧基甲基)-1-甲基-1H-吡唑-5-甲酸锂(中间体5, 12.85 g, 92%)。1H NMR (400MHz, DMSO-d 6) δ = 6.37(s, 1H), 4.24 (s, 2H), 4.01 (s, 3H), 3.20 (s, 3H)。MS: 171 [M+H]+。
一般方法和代表性实施例
方法A
实施例1: 丙基氨基甲酸(1R,3S)-3-(3-{[(2-甲氧基吡啶-4-基)乙酰基]氨基}- 1H-吡唑-5-基)环戊酯
将{1-叔丁基-3-[(1S,3R)-3-羟基环戊基]-1H-吡唑-5-基}氨基甲酸苄酯(中间体1, 5.00 g, 14.0 mmol)和氯甲酸4-硝基苯酯(4.23 g, 21.0 mmol)在无水二氯甲烷(50mL)中的室温溶液用吡啶(3.40 mL, 42.0 mmol)和4-(二甲基氨基)吡啶(170 mg, 1.4mmol)处理。在室温搅拌过夜以后，将溶液浓缩并通过硅胶色谱法(用0-100%的乙酸乙酯在正庚烷中的溶液洗脱)纯化以得到作为固体泡沫的碳酸(1R,3S)-3-(5-{[(苄氧基)羰基]氨基}-1-叔丁基-1H-吡唑-3-基)环戊基4-硝基苯基酯(1A, 7.30 g, 100%)。1H NMR (400MHz, 氯仿-d) δ = 8.24-8.14 (m, 2H), 7.36-7.22 (m, 7H), 6.21 (br. s., 1H),6.06 (br. s., 1H), 5.25 - 5.15 (m, 1H), 5.12 (s, 2H), 3.15-2.97 (m, 1H),2.58-2.47 (m, 1H), 2.09-1.78 (m, 5H), 1.51 (s, 9H)。MS: 523 [M+H]+。
将碳酸(1R,3S)-3-(5-{[(苄氧基)羰基]氨基}-1-叔丁基-1H-吡唑-3-基)环戊基4-硝基苯基酯(1A, 36 g, 69 mmol)在2-甲基四氢呋喃(300 mL)中的溶液冷却至10℃。加入二异丙基乙基胺(26.7 g, 36 mL, 207 mmol)和丙烷-1-胺(6.11 g, 8.52 mL, 103mmol)，并将溶液在10℃搅拌16小时。浓缩至干燥以后，将残余物用乙酸乙酯(600 mL)稀释，用1M NaOH (4 x 200 mL)洗涤，并然后用饱和NaCl水溶液(100 mL)洗涤。将有机层经硫酸钠干燥，过滤，并浓缩以得到粗制的(1-叔丁基-3-{(1S,3R)-3-[(丙基氨甲酰基)氧基]环戊基}-1H-吡唑-5-基)氨基甲酸苄酯(1B, 30 g, 98%)，将其不经进一步纯化地使用。
将Pd/C (50%H2O, 8 g)和粗制的(1-叔丁基-3-{(1S,3R)-3-[(丙基氨甲酰基)氧基]环戊基}-1H-吡唑-5-基)氨基甲酸苄酯(1B, 30 g, 68 mmol)在乙酸乙酯(300 mL)和THF (150 mL)中的室温(20-25℃)悬浮液用氢气脱气和净化(3个循环)，然后在氢气球下在室温搅拌16小时。将悬浮液过滤，将滤液在真空下浓缩，并将残余物从乙酸乙酯(50 mL)和石油醚(300 mL)中结晶，得到作为白色固体的丙基氨基甲酸(1R,3S)-3-(5-氨基-1-叔丁基-1H-吡唑-3-基)环戊酯(1C, 17.65 g, 84%)。1H NMR (400MHz, DMSO-d 6) δ = 7.00 (brt, J=5.6 Hz, 1H), 5.23 (s, 1H), 4.95 (br s, 1H), 4.82-4.58 (m, 2H), 2.91 (q,J=6.6 Hz, 2H), 2.85-2.73 (m, 1H), 2.37-2.21 (m, 1H), 1.92-1.76 (m, 2H), 1.72-1.52 (m, 3H), 1.48 (s, 9H), 1.44-1.32 (m, 2H), 0.82 (t, J=7.4 Hz, 3H)。MS: 309[M+H]+. ]+。旋光度[α]D -4.04 (c 0.89, MeOH)。手性纯度：通过手性分析SFC为98%ee。
将冷却的(10℃)丙基氨基甲酸(1R,3S)-3-(5-氨基-1-叔丁基-1H-吡唑-3-基)环戊酯(1C, 8.65 g, 28.05 mmol)、(2-甲氧基吡啶-4-基)乙酸(CAS# 464152-38-3, 5.86g, 33.7 mmol)、二异丙基乙基胺(14.7 mL, 84.1 mmol)和丙基膦酸酐(T3P®, 50重量%的在EtOAc中的溶液，53.5 g, 84.1 mmol)在二氯甲烷(250 mL)中的混合物搅拌16小时。将反应用饱和Na2CO3水溶液(20 mL)淬灭，并用二氯甲烷(100 mL)萃取。将有机层用更多的饱和Na2CO3水溶液(2 x 200 mL)和饱和NaCl水溶液(100 mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤，并浓缩至干燥。为了纯化，将该批与从1.0 g和8.0 g 1C衍生出的两个其它类似制备的批合并(三批的总SM = 17.65 g, 57.23 mmol 1C)。硅胶色谱法(用0-60%EtOAc/石油醚洗脱)产生丙基氨基甲酸(1R,3S)-3-(1-叔丁基-5-{[(2-甲氧基吡啶-4-基)乙酰基]氨基}-1H-吡唑-3-基)环戊酯(1D, 25 g, 合并批次95%收率)。MS: 458 [M+H]+。
将丙基氨基甲酸(1R,3S)-3-(1-叔丁基-5-{[(2-甲氧基吡啶-4-基)乙酰基]氨基}-1H-吡唑-3-基)环戊酯(1D, 20.5 g, 44.8 mmol)在甲酸(50 mL)中的溶液在75℃搅拌20小时。为了纯化，将该批与较小批(源自4.50 g, 9.84 mmol 1D，共25.0 g, 54.6 mmol)合并，浓缩至干燥，并通过制备型HPLC [Phenomenex Gemini C18 250 x 50mm x 10µm柱；用水(0.05%氢氧化铵v/v)在ACN中的梯度历时15分钟洗脱；以110 mL/min流动]纯化。得到作为淡黄色固体的纯的丙基氨基甲酸(1R,3S)-3-(3-{[(2-甲氧基吡啶-4-基)乙酰基]氨基}-1H-吡唑-5-基)环戊酯(实施例1, 16.61 g, 合并批次为76%收率)。1H NMR (400 MHz,氯仿-d) δ = 11.62-9.81 (m, 1H), 9.06 (br s, 1H), 8.06 (d, J=5.3 Hz, 1H), 6.79(d, J=5.3 Hz, 1H), 6.66 (s, 1H), 6.50 (s, 1H), 5.24-4.94 (m, 2H), 3.88 (s,3H), 3.58 (s, 2H), 3.19-2.83 (m, 3H), 2.54-2.28 (m, 1H), 2.04 (br s, 1H),1.97-1.70 (m, 4H), 1.54-1.34 (m, 2H), 0.85 (br t, J=7.0 Hz, 3H)。MS: 402 [M+H]+。旋光度[α]D +17.1 (c 1.06, MeOH)。手性纯度：通过手性分析SFC为96%ee。
实施例2: 丙烷-2-基氨基甲酸(1R,3S)-3-(3-{[(2-甲基-1,3-噻唑-5-基)乙酰 基]氨基}-1H-吡唑-5-基)环戊酯.
将碳酸(1R,3S)-3-(5-{[(苄氧基)羰基]氨基}-1-叔丁基-1H-吡唑-3-基)环戊基4-硝基苯基酯(1A, 2.00 g, 3.83 mmol)、异丙基胺(294 mg, 4.98 mmol)和二异丙基乙基胺(3.33 mL, 19.1 mmol)在THF (20 mL)中的溶液在10℃搅拌4小时。浓缩至干燥以后，将残余物用乙酸乙酯(100 mL)稀释，并将溶液用1M氢氧化钠(4 x 50 mL)和饱和NaCl水溶液(30 mL)洗涤。将有机层经硫酸钠干燥，过滤，并浓缩以得到粗制的(1-叔丁基-3-{(1S,3R)-3-[(丙烷-2-基氨甲酰基)氧基]环戊基}-1H-吡唑-5-基)氨基甲酸苄酯(2A, 1.8 g, 100%粗制物)。
将粗制的(1-叔丁基-3-{(1S,3R)-3-[(丙烷-2-基氨甲酰基)氧基]环戊基}-1H-吡唑-5-基)氨基甲酸苄酯(2A, 1.8 g, 3.83 mmol)和Pd/C (湿的，200 mg)在乙酸乙酯(10mL)和THF (5 mL)中的室温(10℃)悬浮液用氢气脱气和净化，然后在氢气球下在10℃搅拌16小时。将催化剂通过过滤除去，并将滤液浓缩至干燥。将残余物通过在PhenomenexGemini C18 250*50mm*10µm柱上的制备型HPLC纯化，用25-45%水(0.05%氢氧化铵v/v)在乙腈中的溶液洗脱。将含有产物的级分冻干，得到作为黄色油的丙烷-2-基氨基甲酸(1R,3S)-3-(5-氨基-1-叔丁基-1H-吡唑-3-基)环戊酯(2B, 1.0 g, 85%)。MS: 309 [M+H]+。
将丙基膦酸酐(T3P®, 50重量%的在EtOAc中的溶液，457,g. 0.718 mmol)加入冷却的(0℃)丙烷-2-基氨基甲酸(1R,3S)-3-(5-氨基-1-叔丁基-1H-吡唑-3-基)环戊酯(2B,80 mg, 0.26 mmol)、二异丙基乙基胺(92.7 mg, 0.718 mmol)和(2-甲基-1,3-噻唑-5-基)乙酸(CAS# 52454-65-6, 45.1 mg, 0.287 mmol)在二氯甲烷(3 mL)中的溶液中。将混合物在室温(10℃)搅拌16小时，然后在二氯甲烷(20 mL)和饱和Na2CO3水溶液(10 mL)之间分配。将有机层用饱和NaCl水溶液(10 mL)洗涤，经硫酸钠干燥，过滤，并浓缩以得到作为黄色树胶的粗制的丙烷-2-基氨基甲酸(1R,3S)-3-(1-叔丁基-5-{[(2-甲基-1,3-噻唑-5-基)乙酰基]氨基}-1H-吡唑-3-基)环戊酯(2C, 120 mg, 100%粗制物)。
将粗制的丙烷-2-基氨基甲酸(1R,3S)-3-(1-叔丁基-5-{[(2-甲基-1,3-噻唑-5-基)乙酰基]氨基}-1H-吡唑-3-基)环戊酯(2C, 120 mg, 0.26 mmol)溶解在甲酸(5 mL)中并在75℃搅拌20小时。在真空下除去挥发物，并将残余物通过在Xtimate C18 150*25mm*5µm柱上的制备型HPLC纯化，用12-52%的水(0.05%氢氧化铵v/v)在乙腈中的溶液洗脱。将含有产物的级分冻干，得到作为白色固体的丙烷-2-基氨基甲酸(1R,3S)-3-(3-{[(2-甲基-1,3-噻唑-5-基)乙酰基]氨基}-1H-吡唑-5-基)环戊酯(实施例2, 60.35 mg, 58%)。1H NMR(400MHz, DMSO-d6) δ = 12.10 (s, 1H), 10.58 (s, 1H), 7.41 (s, 1H), 6.95 (br d,J=6.3 Hz, 1H), 6.29 (s, 1H), 4.98 (br s, 1H), 3.81 (s, 2H), 3.57 (br d, J=6.5Hz, 1H), 3.03 (br s, 1H), 2.59 (s, 3H), 2.45 (br s, 1H), 2.07-1.81 (m, 2H),1.78-1.44 (m, 3H), 1.03 (br d, J=6.5 Hz, 6H)。MS: 392 [M+H]+。手性纯度：通过手性分析SFC为99%ee。
实施例3:乙基氨基甲酸(1R,3S)-3-(3-{[(1-甲基-1H-吲唑-5-基)乙酰基]氨基}- 1H-吡唑-5-基)环戊酯
将碳酸(1R,3S)-3-(5-{[(苄氧基)羰基]氨基}-1-叔丁基-1H-吡唑-3-基)环戊基4-硝基苯基酯(1A, 2.5 g, 4.8 mmol)和乙胺(1.08 g, 23.9 mmol)在THF (20 mL)中的溶液在30℃搅拌3小时，浓缩至干燥，并将残余物溶解在二氯甲烷(30 mL)中。将溶液用NaOH水溶液洗涤直到有机层无色(5 x 5 mL)，然后用水(5 mL)和饱和NaCl水溶液(5 mL)洗涤，经硫酸钠干燥，过滤，并浓缩以得到作为无色油的粗制的(1-叔丁基-3-{(1S,3R)-3-[(乙基氨甲酰基)氧基]环戊基}-1H-吡唑-5-基)氨基甲酸苄酯(3A, 2.0 g, 97%，通过LCMS >80%纯度)。MS: 429 [M+H]+, 451 [M+Na]+。
将粗制的(1-叔丁基-3-{(1S,3R)-3-[(乙基氨甲酰基)氧基]环戊基}-1H-吡唑-5-基)氨基甲酸苄酯(3A, 2.0 g, 4.7 mmol)溶解在乙酸乙酯(30 mL)和THF (10 mL)中，将溶液脱气，并加入10%Pd/C催化剂(湿的，200 mg)。将悬浮液在室温(10℃)在氢气球下搅拌2小时。将催化剂通过过滤除去，将滤液浓缩至干燥，并将残余物通过硅胶色谱法(用0-60%的乙酸乙酯在石油醚中的溶液洗脱)纯化以得到作为浅黄色树胶的乙基氨基甲酸(1R,3S)-3-(5-氨基-1-叔丁基-1H-吡唑-3-基)环戊酯(3B, 1.15 g, 84%)，其在静置后固化为浅黄色固体。MS: 295 [M+H]+。1H NMR (400MHz, 氯仿-d) δ = 5.43 (s, 1H), 5.13 (br s, 1H),4.58 (br s, 1H), 3.50 (br s, 2H), 3.31-3.13 (m, 2H), 2.99 (quin, J=8.5 Hz,1H), 2.53-2.39 (m, 1H), 2.04-1.96 (m, 1H), 1.95-1.87 (m, 1H), 1.87-1.68 (m,3H), 1.62 (s, 9H), 1.14 (t, J=7.2 Hz, 3H)。手性纯度：通过手性分析SFC >98%ee。
将丙基膦酸酐(T3P®, 50重量%的在EtOAc中的溶液，0.485 mL, 0.815 mmol)加入乙基氨基甲酸(1R,3S)-3-(5-氨基-1-叔丁基-1H-吡唑-3-基)环戊酯(3B, 80.0 mg,0.272 mmol)、2-(1-甲基-1H-吲唑-5-基)乙酸(CAS# 1176749-66-8, 59.1 mg, 0.311mmol)和二异丙基乙基胺(0.142 mL, 0.815 mmol)在二氯甲烷(5 mL)中的室温(10℃)溶液中。将混合物搅拌3小时，然后在二氯甲烷(5 mL)和水(3 mL)之间分配。将有机层用饱和Na2CO3水溶液(2 x 3 mL)、饱和NH4Cl水溶液(2 x 3 mL)、水(2 mL)和饱和NaCl水溶液(2mL)洗涤，然后经硫酸钠干燥，过滤，并浓缩以得到作为浅黄色树胶的粗制的乙基氨基甲酸(1R,3S)-3-(1-叔丁基-5-{[(1-甲基-1H-吲唑-5-基)乙酰基]氨基}-1H-吡唑-3-基)环戊酯(3C, 127 mg, 100%粗制物)。MS: 489 [M+Na]+。
将粗制的乙基氨基甲酸(1R,3S)-3-(1-叔丁基-5-{[(1-甲基-1H-吲唑-5-基)乙酰基]氨基}-1H-吡唑-3-基)环戊酯(3C, 127 mg, 0.272 mmol)在甲酸(6 mL)中的溶液在75℃加热18小时。将反应混合物浓缩至干燥，然后通过DuraShell 150*25mm*5µm柱上的制备型HPLC纯化，用24-44%的水(0.05%氢氧化铵v/v)在乙腈中的溶液洗脱。将含有产物的级分冻干以后，得到作为白色固体的乙基氨基甲酸(1R,3S)-3-(3-{[(1-甲基-1H-吲唑-5-基)乙酰基]氨基}-1H-吡唑-5-基)环戊酯(实施例3, 52.39 mg, 47%)。MS: 411 [M+H]+。1H NMR(400MHz, DMSO-d 6) δ = 12.05 (br s, 1H), 10.51 (s, 1H), 8.06-7.95 (m, 1H),7.64 (s, 1H), 7.56 (d, J=8.5 Hz, 1H), 7.35 (dd, J=1.4, 8.7 Hz, 1H), 7.02 (brt, J=5.5 Hz, 1H), 6.27 (br s, 1H), 4.97 (br s, 1H), 4.04-3.95 (m, 3H), 3.66(s, 2H), 3.10-2.85 (m, 3H), 2.43 (td, J=6.9, 14.0 Hz, 1H), 2.04-1.92 (m, 1H),1.91-1.80 (m, 1H), 1.74-1.49 (m, 3H), 0.97 (t, J=7.2 Hz, 3H)。手性纯度：通过手性分析SFC为99%ee。
实施例4: (2S)-丁-2-基氨基甲酸(1R,3S)-3-(3-{[(1-甲基-1H-1,2,3-三唑-5- 基)羰基]氨基}-1H-吡唑-5-基)环戊酯
将碳酸(1R,3S)-3-(5-{[(苄氧基)羰基]氨基}-1-叔丁基-1H-吡唑-3-基)环戊基4-硝基苯基酯(1A, 22.0 g, 42.1 mmol)、(S)-(+)-仲丁基胺(4.00 g, 54.7 mmol)和二异丙基乙基胺(36.7 mL, 211 mmol)在THF (300 mL)中的溶液在10℃搅拌16小时。将混合物浓缩至干燥，并将残余物用乙酸乙酯(500 mL)稀释。将溶液用1M NaOH水溶液(4 x 200 mL)和饱和NaCl水溶液(100 mL)洗涤。将有机层经硫酸钠干燥，过滤，并浓缩以得到粗制的{3-[(1S,3R)-3-{[(2S)-丁-2-基氨甲酰基]氧基}环戊基]-1-叔丁基-1H-吡唑-5-基}氨基甲酸苄酯(4A, 18 g, 94%，通过LCMS ~80%纯度)。MS: 479 [M+Na]+。
将粗制的{3-[(1S,3R)-3-{[(2S)-丁-2-基氨甲酰基]氧基}环戊基]-1-叔丁基-1H-吡唑-5-基}氨基甲酸苄酯(4A, 18 g, 39 mmol)在乙酸乙酯(200 mL)和THF (100 mL)中的室温(10℃)溶液脱气并用Pd/C催化剂(湿的，5 g)处理。将悬浮液在氢气球下搅拌16小时。将混合物过滤以除去催化剂，将滤液浓缩至干燥。为了纯化，将该批与通过相同方法从20 g 4A衍生出的第二批粗制物合并(两批共计: 38 g, 83 mmol)，并通过在PhenomenexGemini C18 250*50mm*10µm柱上的制备型HPLC纯化，用30-50%的水(0.05%氢氧化铵v/v)在乙腈中的溶液洗脱。在冻干以后，(2S)-丁-2-基氨基甲酸(1R,3S)-3-(5-氨基-1-叔丁基-1H-吡唑-3-基)环戊酯(4B, 20.1 g,合并批次75%)。MS: 323 [M+H]+。1H NMR (400MHz,DMSO-d 6) δ = 6.86 (br d, J=8.3 Hz, 1H), 5.22 (s, 1H), 4.94 (br s, 1H), 4.82-4.49 (m, 2H), 3.46-3.36 (m, 1H), 2.90-2.71 (m, 1H), 2.38-2.24 (m, 1H), 1.91-1.75 (m, 2H), 1.74-1.53 (m, 3H), 1.52-1.46 (m, 9H), 1.43-1.27 (m, 2H), 1.01(d, J=6.5 Hz, 3H), 0.81 (t, J=7.4 Hz, 3H)。旋光度[α]D +4.0 (c 1.3, MeOH)。手性纯度：通过手性分析SFC为98%de。
将丙基膦酸酐(T3P®, 50重量%的在EtOAc中的溶液，592 mg, 0.93 mmol)加入冷却的(0℃) (2S)-丁-2-基氨基甲酸(1R,3S)-3-(5-氨基-1-叔丁基-1H-吡唑-3-基)环戊酯(4B, 100 mg, 0.310 mmol)、1-甲基-1H-1,2,3-三唑-5-甲酸(CAS# 716361-91-0, 59.1mg, 0.465 mmol)和二异丙基乙基胺(120 mg, 0.93 mmol)在二氯甲烷(5 mL)中的溶液中。将混合物在10℃搅拌18小时，然后用饱和Na2CO3水溶液和饱和NaCl水溶液洗涤，经硫酸钠干燥，过滤，并浓缩以得到作为黄色树胶的粗制的(2S)-丁-2-基氨基甲酸(1R,3S)-3-(1-叔丁基-5-{[(1-甲基-1H-1,2,3-三唑-5-基)羰基]氨基}-1H-吡唑-3-基)环戊酯(4C, 130 mg,97%)。MS: 432 [M+H]+,454 [M+Na]+。
将粗制的(2S)-丁-2-基氨基甲酸(1R,3S)-3-(1-叔丁基-5-{[(1-甲基-1H-1,2,3-三唑-5-基)羰基]氨基}-1H-吡唑-3-基)环戊酯(4C, 130 mg, 0.301 mmol)在甲酸(3 mL)中的溶液在75℃搅拌6天。将混合物浓缩至干燥，并将残余物通过DuraShell 150*25mm*5µm柱上的制备型HPLC纯化，用10-51%水(0.05%氢氧化铵v/v)在乙腈中的溶液洗脱。在冻干以后，得到作为淡黄色固体的(2S)-丁-2-基氨基甲酸(1R,3S)-3-(3-{[(1-甲基-1H-1,2,3-三唑-5-基)羰基]氨基}-1H-吡唑-5-基)环戊酯(实施例4, 27.67 mg, 24%)。MS: 376 [M+H]+。1HNMR (400MHz, DMSO-d 6) δ = 12.32 (br s, 1H), 11.14 (s, 1H), 8.46 (s, 1H), 6.90(br d, J=8.0 Hz, 1H), 6.45 (br s, 1H), 5.00 (br d, J=3.8 Hz, 1H), 4.25 (s,3H), 3.36 (br s, 2H), 3.29-2.99 (m, 1H), 2.09-2.01 (m, 1H), 1.95-1.84 (m,1H), 1.81-1.56 (m, 3H), 1.44-1.27 (m, 2H), 1.01 (br d, J=6.5 Hz, 3H), 0.80(br t, J=7.4 Hz, 3H)。手性纯度：通过手性分析SFC为>98%de。
实施例5: (1-甲基环丙基)氨基甲酸(1R,3S)-3-(3-{[(5-甲基-1,3-噁唑-2-基) 乙酰基]氨基}-1H-吡唑-5-基)环戊酯
将碳酸(1R,3S)-3-(5-{[(苄氧基)羰基]氨基}-1-叔丁基-1H-吡唑-3-基)环戊基4-硝基苯基酯(1A, 9.50 g, 18.2 mmol)、1-甲基环丙胺盐酸盐(2.93 g, 27.2 mmol)和二异丙基乙基胺(10.0 mL, 58.2 mmol)在DMF (80 mL)中的溶液在60℃搅拌2小时。冷却至室温以后，将混合物在乙酸乙酯(300 mL)和水(300 mL)之间分配。将有机层用水(2 x 300mL)、2M Na2CO3水溶液(300 mL)和饱和NaCl水溶液(300 mL)洗涤，然后经硫酸钠干燥，过滤，浓缩，并通过硅胶色谱法(用0-100%的乙酸乙酯在庚烷中的溶液洗脱)纯化以得到作为固体的{1-叔丁基-3-[(1S,3R)-3-{[(1-甲基环丙基)氨甲酰基]氧基}环戊基]-1H-吡唑-5-基}氨基甲酸苄酯(5A, 6.28 g, 76%)。MS: 455 [M+H]+。1H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ =7.45-7.30 (m, 5H), 6.30 (br. s., 1H), 6.10 (br. s., 1H), 5.20 (s, 2H), 5.15(br. s., 1H), 5.06 (br. s., 1H), 3.08 (quin, J=8.3 Hz, 1H), 2.44 (br. s.,1H), 2.12-1.97 (m, 1H), 1.96-1.75 (m, 4H), 1.58 (s, 9H), 1.35 (br. s., 3H),0.74 (br. s., 2H), 0.58 (br. s., 2H)。
将{1-叔丁基-3-[(1S,3R)-3-{[(1-甲基环丙基)氨甲酰基]氧基}环戊基]-1H-吡唑-5-基}氨基甲酸苄酯(5A, 6.28 g, 13.8 mmol)和10%Pd/C (620 mg)在甲醇(200mL)中的混合物在氢气球下在室温搅拌(20℃) 18小时。将悬浮液通过硅藻土垫过滤以除去催化剂。将烧瓶和滤垫用额外的甲醇冲洗，然后将合并的滤液浓缩以得到作为泡沫样固体的(1-甲基环丙基)氨基甲酸(1R,3S)-3-(5-氨基-1-叔丁基-1H-吡唑-3-基)环戊酯(5B, 4.42 g,100%粗制物)。MS: 321 [M+H]+。1H NMR (400 MHz, 甲醇-d 4) δ = 5.06 (br. s., 1H),3.14-2.97 (m, 1H), 2.58-2.37 (m, 1H), 2.14-2.00 (m, 1H), 2.00-1.69 (m, 4H),1.69-1.54 (m, 10H), 1.31 (s, 3H), 0.74-0.66 (m, 2H), 0.60- 0.53 (m, 2H)。
将(1-甲基环丙基)氨基甲酸(1R,3S)-3-(5-氨基-1-叔丁基-1H-吡唑-3-基)环戊酯(5B, 4.00 g, 12.5 mmol)、(5-甲基-1,3-噁唑-2-基)乙酸锂(中间体3, 3.52 g, 24.9mmol)、1-[双(二甲基氨基)亚甲基]-1H-1,2,3-三唑并[4,5-b]吡啶鎓3-氧化物六氟磷酸盐(HATU, 14.2 g, 37.3 mmol)和三乙胺(5.30 mL0, 38.0 mmol)在DMF (100 mL)中的溶液在60℃搅拌2小时。冷却至室温以后，将反应混合物在乙酸乙酯(200 mL)和水(200 mL)之间分配。将有机相进一步用水(2 x 200mL)和饱和NaCl水溶液(200mL)洗涤。将合并的水层用乙酸乙酯(200mL)萃取。将合并的有机萃取物经硫酸钠干燥，浓缩，并通过硅胶色谱法(用10-100%的乙酸乙酯在庚烷中的溶液洗脱)纯化以得到不纯产物(5.50 g固体)。将该不纯物质通过硅胶色谱法(用100%乙酸乙酯洗脱)重纯化以得到作为固体的纯的(1-甲基环丙基)氨基甲酸(1R,3S)-3-(1-叔丁基-5-{[(5-甲基-1,3-噁唑-2-基)乙酰基]氨基}-1H-吡唑-3-基)环戊酯(5C, 4.22 g, 76%)。MS: 444 [M+H]+。1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 9.78(s, 1H), 7.32 (br. s., 1H), 6.78 (d, J=1.1 Hz, 1H), 5.93 (s, 1H), 4.97 (br.s., 1H), 3.83 (s, 2H), 3.03-2.88 (m, 1H), 2.42-2.30 (m, 1H), 2.27 (d, J=1.1Hz, 3H), 1.98-1.88 (m, 1H), 1.87-1.77 (m, 1H), 1.73-1.58 (m, 3H), 1.49 (s,9H), 1.23 (s, 3H), 0.63-0.56 (m, 2H), 0.50-0.44 (m, 2H)。
将(1-甲基环丙基)氨基甲酸(1R,3S)-3-(1-叔丁基-5-{[(5-甲基-1,3-噁唑-2-基)乙酰基]氨基}-1H-吡唑-3-基)环戊酯(5C, 4.20 g, 9.47 mmol)在甲酸(50 mL)中的溶液在100℃搅拌1小时。冷却至室温以后，将反应混合物浓缩以除去大部分的甲酸。将残余物在乙酸乙酯(200 mL)和碳酸氢钠(200 mL)之间分配。将水层用更多的乙酸乙酯(200 mL)萃取。将合并的有机萃取物经硫酸钠干燥，过滤，并浓缩至干燥。将固体残余物与乙醚(30 mL)一起研磨2次以得到作为固体的(1-甲基环丙基)氨基甲酸(1R,3S)-3-(3-{[(5-甲基-1,3-噁唑-2-基)乙酰基]氨基}-1H-吡唑-5-基)环戊酯(实施例5, 1.93 g, 53%)。MS: 388 [M+H]+。1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 12.08 (br. s., 1H), 10.59 (br. s., 1H), 7.32(br. s., 1H), 6.74 (d, J=1.0 Hz, 1H), 6.27 (br. s., 1H), 4.97 (br. s., 1H),3.79 (s, 2H), 3.14-2.93 (m, 1H), 2.44 (dd, J=14.1, 7.0 Hz, 1H), 2.26 (d, J=0.7 Hz, 3H), 1.99 (t, J=3.4 Hz, 1H), 1.93-1.81 (m, 1H), 1.68 (d, J=8.2 Hz,2H), 1.60-1.46 (m, 1H), 1.22 (s, 3H), 0.58 (br. s., 2H), 0.49- 0.42 (m, 2H)。
实施例6: (1-甲基环丙基)氨基甲酸(1R,3S)-3-(3-{[(5-甲氧基吡嗪-2-基)乙酰 基]氨基}-1H-吡唑-5-基)环戊酯
将(1-甲基环丙基)氨基甲酸(1R,3S)-3-(5-氨基-1-叔丁基-1H-吡唑-3-基)环戊酯(5B, 150.0 mg, 0.468 mmol)、(5-甲氧基吡嗪-2-基)乙酸锂(中间体4, 118 mg, 0.702mmol)、二异丙基乙基胺(182 mg, 1.40 mmol)和丙基膦酸酐(T3P®, 50重量%的在EtOAc中的溶液，447 mg, 0.702 mmol)在二氯甲烷(10.0 mL)中的溶液在40℃搅拌30小时。将反应用饱和NaHCO3水溶液(8 mL)淬灭，并用二氯甲烷(3 x 8 mL)萃取。将合并的有机萃取物用饱和NaCl水溶液(15 mL)洗涤，浓缩，并通过硅胶色谱法(用50%的乙酸乙酯在石油醚中的溶液洗脱)纯化以得到作为浅黄色树胶的(1-甲基环丙基)氨基甲酸(1R,3S)-3-(1-叔丁基-5-{[(5-甲氧基吡嗪-2-基)乙酰基]氨基}-1H-吡唑-3-基)环戊酯(6A, 100 mg, 45%，通过LCMS为81%纯度)。MS: 471 [M+H]+。
将(1-甲基环丙基)氨基甲酸(1R,3S)-3-(1-叔丁基-5-{[(5-甲氧基吡嗪-2-基)乙酰基]氨基}-1H-吡唑-3-基)环戊酯(6A, 100 mg, 0.213 mmol)溶解在甲酸(5 mL)中并在75℃搅拌16小时。将溶液在真空下浓缩，并将残余物通过DuraShell 150*25mm*5µm柱上的制备型HPLC纯化，用26-46%的水(0.05%氢氧化铵v/v)在乙腈中的溶液洗脱。在冻干以后，得到作为白色固体的(1-甲基环丙基)氨基甲酸(1R,3S)-3-(3-{[(5-甲氧基吡嗪-2-基)乙酰基]氨基}-1H-吡唑-5-基)环戊酯(实施例6, 15.55 mg, 18%)。MS: 415 [M+H]+。1H NMR(400MHz, DMSO-d 6) δ = 12.07 (br s, 1H), 10.54 (s, 1H), 8.23 (d, J=1.3 Hz,1H), 8.16 (s, 1H), 7.35 (br s, 1H), 6.26 (br s, 1H), 4.96 (br s, 1H), 3.89(s, 3H), 3.77 (s, 2H), 3.02 (br d, J=8.5 Hz, 1H), 2.47-2.39 (m, 1H), 1.97 (brd, J=9.3 Hz, 1H), 1.90-1.80 (m, 1H), 1.72-1.59 (m, 2H), 1.58-1.45 (m, 1H),1.21 (s, 3H), 0.57 (br s, 2H), 0.48-0.40 (m, 2H)。手性纯度：通过手性分析SFC为99%ee。
实施例7: (1-甲基环丙基)氨基甲酸(1R,3S)-3-(3-{[(5-甲基-1,2-噁唑-3-基) 乙酰基]氨基}-1H-吡唑-5-基)环戊酯
将(1-甲基环丙基)氨基甲酸(1R,3S)-3-(5-氨基-1-叔丁基-1H-吡唑-3-基)环戊酯(5B, 78 mg, 0.24 mmol)、(5-甲基-1,2-噁唑-3-基)乙酸(CAS#57612-87-0, 51.5 mg,0.365 mmol)、二异丙基乙基胺(0.130 mL, 0.730 mmol)和丙基膦酸酐(T3P®, 50重量%的在EtOAc中的溶液，0.435 mL, 0.730 mmol)在二氯甲烷(5.0 mL)中的溶液在30-35℃搅拌18小时。将溶液用饱和NaHCO3水溶液(5 mL)和饱和NaCl水溶液(5 mL)洗涤，干燥，过滤，并浓缩，以得到作为树胶的粗制的(1-甲基环丙基)氨基甲酸(1R,3S)-3-(1-叔丁基-5-{[(5-甲基-1,2-噁唑-3-基)乙酰基]氨基}-1H-吡唑-3-基)环戊酯(7A, 95 mg, 88%)。MS: 444[M+H]+。
将粗制的(1-甲基环丙基)氨基甲酸(1R,3S)-3-(1-叔丁基-5-{[(5-甲基-1,2-噁唑-3-基)乙酰基]氨基}-1H-吡唑-3-基)环戊酯(7A, 95 mg, 0.21 mmol)溶解在甲酸(5.0mL)中并加热至75℃保持15小时。将样品浓缩至干燥，将残余物溶解在乙酸乙酯(30 mL)中，用饱和NaHCO3水溶液(10 mL)洗涤，干燥，过滤，并浓缩。将粗产物通过在Agela DuraShellC18 150*25mm 5µ柱上的制备型HPLC纯化，用18-58%的水(含有0.05%氢氧化铵)在乙腈中的溶液洗脱，以得到作为米色固体的(1-甲基环丙基)氨基甲酸(1R,3S)-3-(3-{[(5-甲基-1,2-噁唑-3-基)乙酰基]氨基}-1H-吡唑-5-基)环戊酯(实施例7, 39.71 mg, 50%)。MS: 388[M+H]+。1H NMR (400MHz, DMSO-d6) δ = 12.08 (br s, 1H), 10.59 (s, 1H), 7.34 (brs, 1H), 6.36-6.03 (m, 2H), 4.97 (br s, 1H), 3.64 (s, 2H), 3.15-2.87 (m, 1H),2.46-2.40 (m, 1H), 2.37 (s, 3H), 1.98 (br d, J=9.0 Hz, 1H), 1.90-1.81 (m,1H), 1.77-1.59 (m, 2H), 1.54 (br d, J=8.0 Hz, 1H), 1.22 (s, 3H), 0.58 (br s,2H), 0.49-0.43 (m, 2H)。手性纯度：通过手性分析SFC>99%ee。
实施例8: (1-甲基环丙基)氨基甲酸(1R,3S)-3-[3-({[3-(甲氧基甲基)-1-甲基- 1H-吡唑-5-基]羰基}氨基)-1H-吡唑-5-基]环戊酯
将(1-甲基环丙基)氨基甲酸(1R,3S)-3-(5-氨基-1-叔丁基-1H-吡唑-3-基)环戊酯(5B, 5.47 g, 17.1 mmol)和3-(甲氧基甲基)- 1-甲基-1H-吡唑-5-甲酸(中间体5,4.36 g, 25.6 mmol)在乙酸乙酯(80 mL)中的溶液用二异丙基乙基胺(9.00 mL, 52.4mmol)和丙基膦酸酐(T3P®, 50重量%的在EtOAc中的溶液，10.9 g, 10.0 mL, 31.4 mmol)处理，并在室温搅拌过夜。由于LCMS表明反应没有完全，将混合物加热至50℃保持3小时，但是LCMS仍然表明不完全转化。冷却至室温以后，将溶液在乙酸乙酯(100 mL)和去离子水(200 mL)之间分配。将有机层经硫酸钠干燥，过滤，并浓缩。将残余物溶解在乙酸乙酯(80mL)中。加入另外的3-(甲氧基甲基)- 1-甲基-1H-吡唑-5-甲酸(中间体5, 2.90 g, 17.1mmol)、二异丙基乙基胺(9.00 mL, 52.4 mmol)和T3P (10.0 mL, 33.6 mmol)，并将反应物在室温搅拌4小时。将溶液用乙酸乙酯(100 mL)稀释；用水(200 mL)、饱和NaHCO3水溶液(200 mL)和饱和NaCl水溶液(200 mL)洗涤；经硫酸钠干燥，过滤，并浓缩。将残余物通过硅胶色谱法(用0-100%的乙酸乙酯在庚烷中的溶液梯度洗脱)纯化，以得到作为泡沫样固体的(1-甲基环丙基)氨基甲酸(1R,3S)-3-[1-叔丁基-5-({[3-(甲氧基甲基)-1-甲基-1H-吡唑-5-基]羰基}氨基)-1H-吡唑-3-基]环戊酯(8A, 4.83 g, 60%)。MS: 473 [M+H]+。1H NMR(400 MHz, 氯仿-d) δ = 7.71 (br. s., 1 H), 6.68 (br. s., 1 H), 6.23 (br. s., 1H), 5.12 (br. s., 2 H), 4.47 (s, 2 H), 4.18 (s, 3 H), 3.43 (s, 3 H), 3.03-3.16 (m, 1 H), 2.41 (br. s., 1 H), 1.97-2.11 (m, 1 H), 1.87 (m, J=5.9 Hz, 4H), 1.63 (s, 9 H), 1.33 (s, 3 H), 0.73 (br. s., 2 H), 0.52-0.61 (m, 2 H)。
将(1-甲基环丙基)氨基甲酸(1R,3S)-3-[1-叔丁基-5-({[3-(甲氧基甲基)-1-甲基-1H-吡唑-5-基]羰基}氨基)-1H-吡唑-3-基]环戊酯(8A, 4.77 g, 10.1 mmol)在甲酸(50 mL)中的溶液在100℃搅拌2小时。冷却至室温以后，在真空下除去大部分的甲酸，并将残余物在乙酸乙酯(200 mL)和饱和NaHCO3水溶液(200 mL)之间分配。将水层用乙酸乙酯(200 mL)萃取。将合并的有机萃取物经硫酸钠干燥，过滤，浓缩，并通过硅胶色谱法(用0-10%的甲醇在乙酸乙酯中的溶液洗脱)纯化以得到白色固体(3.15 g)。将该固体从乙酸乙酯/庚烷重结晶以得到作为结晶固体的(1-甲基环丙基)氨基甲酸(1R,3S)-3-[3-({[3-(甲氧基甲基)-1-甲基-1H-吡唑-5-基]羰基}氨基)-1H-吡唑-5-基]环戊酯(实施例8, 2.90 g,69%)。MS: 417 [M+H]+。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 12.20 (br. s., 1 H), 10.69(s, 1 H), 7.33 (br. s., 1 H), 7.11 (s, 1 H), 6.41 (br. s., 1 H), 4.99 (br.s., 1 H), 4.33 (s, 2 H), 4.05 (s, 3 H), 3.27 (s, 3 H), 3.00-3.13 (m, 1 H),2.41-2.49 (m, 1 H), 1.97-2.10 (m, 1 H), 1.83-1.95 (m, 1 H), 1.72 (br. s., 2H), 1.59 (br. s., 1 H), 1.24 (s, 3 H), 0.60 (br. s., 2 H), 0.47 (br. s., 2H)。
实施例9: [(2ξ)-4,4,4-三氟丁-2-基]氨基甲酸(1R,3S)-3-[3-({[3-(甲氧基甲 基)-1-甲基-1H-吡唑-5-基]羰基}氨基)-1H-吡唑-5-基]环戊酯- 异构体A
实施例10: [(2ξ)-4,4,4-三氟丁-2-基]氨基甲酸(1R,3S)-3-[3-({[3-(甲氧基甲 基)-1-甲基-1H-吡唑-5-基]羰基}氨基)-1H-吡唑-5-基]环戊酯- 异构体B
将碳酸(1R,3S)-3-(5-{[(苄氧基)羰基]氨基}-1-叔丁基-1H-吡唑-3-基)环戊基4-硝基苯基酯(1A, 2.5 g, 4.8 mmol)、4,4,4-三氟丁-2-胺(CAS# 37143-52-5, 900 mg,5.5 mmol)和二异丙基乙基胺(4.17 mL, 23.9 mmol)在2-甲基四氢呋喃(40 mL)和二氯甲烷(20 mL)中的溶液在40-50℃搅拌15小时。在真空下除去溶剂，并将残余物在乙酸乙酯(150 mL)和1N氢氧化钠水溶液(2 x 50 m)之间分配。将有机层用饱和NaCl水溶液(60 mL)洗涤，经硫酸钠干燥，过滤，浓缩，并通过硅胶色谱法(用15-30%的乙酸乙酯在石油醚中的溶液洗脱)纯化，以得到作为黄色油的{1-叔丁基-3-[(1S,3R)-3-{[(4,4,4-三氟丁-2-基)氨甲酰基]氧基}环戊基]-1H-吡唑-5-基}氨基甲酸苄酯(9A，非对映异构体的混合物，2.0 g,82%，通过LCMS为79%纯度)。MS: 511 [M+H]+。
将{1-叔丁基-3-[(1S,3R)-3-{[(4,4,4-三氟丁-2-基)氨甲酰基]氧基}环戊基]-1H-吡唑-5-基}氨基甲酸苄酯混合物(9A, 2.0 g, 3.9 mmol)溶解在乙酸乙酯(20 mL)和THF (20 mL)中，并加入10%Pd/C催化剂(50%湿的，650 mg)。将悬浮液脱气，用来自气球的氢气填充，并在20-25℃在氢气球下搅拌16小时。将催化剂通过过滤除去，并将滤液浓缩以得到作为黄色油的粗制的(4,4,4-三氟丁-2-基)氨基甲酸(1R,3S)-3-(5-氨基-1-叔丁基-1H-吡唑-3-基)环戊酯(9B，非对映异构体的混合物，1.4 g, 95%，通过LCMS为76%纯度)。MS:377 [M+H]+。
将冷却的(0℃)粗制的(4,4,4-三氟丁-2-基)氨基甲酸(1R,3S)-3-(5-氨基-1-叔丁基-1H-吡唑-3-基)环戊酯(9B, 225 mg, 0.598 mmol)、3-(甲氧基甲基)-1-甲基-1H-吡唑-5-甲酸酯(中间体5, 173 mg, 0.897 mmol)和二异丙基乙基胺(232 mg, 1.79 mmol)在二氯甲烷(10 mL)中的溶液用丙基膦酸酐(T3P®, 50重量%的在EtOAc中的溶液，1.14 g,1.79 mmol)处理。将混合物温热至20℃并搅拌36小时，然后温热至40℃保持90小时。将混合物在二氯甲烷和半饱和的Na2CO3之间分配。将有机层经硫酸钠干燥，过滤，并浓缩以得到作为黄色树胶的粗制的(4,4,4-三氟丁-2-基)氨基甲酸(1R,3S)-3-[1-叔丁基-5-({[3-(甲氧基甲基)-1-甲基-1H-吡唑-5-基]羰基}氨基)-1H-吡唑-3-基]环戊酯(9C，非对映异构体的混合物，300 mg, 95%)。MS: 529 [M+H]+。
将粗制的(4,4,4-三氟丁-2-基)氨基甲酸(1R,3S)-3-[1-叔丁基-5-({[3-(甲氧基甲基)-1-甲基-1H-吡唑-5-基]羰基}氨基)-1H-吡唑-3-基]环戊酯(9C, 300 mg, 0.57mmol)在甲酸(10 mL)中的溶液在80℃搅拌2小时。将混合物浓缩至干燥并将残余物通过DuraShell 150*25mm*5µm柱上的制备型HPLC纯化，用32%的水(0.05%氢氧化铵v/v)在乙腈中的溶液洗脱。在冻干以后，得到作为白色固体的(4,4,4-三氟丁-2-基)氨基甲酸(1R,3S)-3-[3-({[3-(甲氧基甲基)-1-甲基-1H-吡唑-5-基]羰基}氨基)-1H-吡唑-5-基]环戊酯(9D，非对映异构体的混合物，45 mg, 17%)。MS: 473 [M+H]+。
将非对映异构体混合物9D通过Phenomenex-Amylose-1 250mm*30mm 5µm柱上的手性制备型SFC分离，用在CO2中的40%乙醇(+0.1%NH3H2O)洗脱，得到作为白色固体的实施例9(峰1, 12.26 mg, 27%, 99%de)和实施例10 (峰2, 11.53 mg, 26%, 98%de)。没有确定每种分子的4,4,4-三氟丁-2-基]氨基甲酸酯中的手性中心的绝对立体化学。
实施例9: [(2ξ)-4,4,4-三氟丁-2-基]氨基甲酸(1R,3S)-3-[3-({[3-(甲氧基甲基)-1-甲基-1H-吡唑-5-基]羰基}氨基)-1H-吡唑-5-基]环戊酯- 异构体A。1H NMR(400MHz, DMSO-d6) δ = 12.25 (br s, 1H), 10.74 (s, 1H), 7.22 (br d, J=8.4 Hz,1H), 7.12 (s, 1H), 6.43 (br s, 1H), 5.10-4.96 (m, 1H), 4.34 (s, 2H), 4.05 (s,3H), 3.92-3.79 (m, 1H), 3.27 (s, 3H), 3.17-3.03 (m, 1H), 2.46 (br d, J=6.1Hz, 1H), 2.43-2.31 (m, 2H), 2.12-1.85 (m, 2H), 1.80-1.57 (m, 3H), 1.13 (d, J=6.7 Hz, 3H)。19F NMR (377MHz, DMSO-d6) δ = -62.57 (s, 3F)。MS: 473 [M+H]+。旋光度: [α]D -2 (c 0.1, MeOH)。手性纯度：99%de。在Chiralpak AD-3 (150×4.6mm I.D., 3µm)柱上进行手性SFC/MS分析，用在CO2中的40%乙醇(+0.05%DEA)洗脱，以2.5 mL/min流动，在35℃，将压强设定在1500 psi。在这些条件下，该峰具有3.372分钟的保留时间。
实施例10: [(2ξ)-4,4,4-三氟丁-2-基]氨基甲酸(1R,3S)-3-[3-({[3-(甲氧基甲基)-1-甲基-1H-吡唑-5-基]羰基}氨基)-1H-吡唑-5-基]环戊酯- 异构体B。1H NMR(400MHz, DMSO-d6) δ = 12.25 (br s, 1H), 10.74 (s, 1H), 7.24 (br d, J=8.3 Hz,1H), 7.12 (s, 1H), 6.42 (br s, 1H), 5.16-4.91 (m, 1H), 4.34 (s, 2H), 4.05 (s,3H), 3.84 (td, J=7.0, 13.8 Hz, 1H), 3.27 (s, 3H), 3.16-3.01 (m, 1H), 2.50-2.46 (m, 1H), 2.45-2.29 (m, 2H), 2.12-1.99 (m, 1H), 1.95-1.85 (m, 1H), 1.80-1.53 (m, 3H), 1.13 (d, J=6.7 Hz, 3H)。19F NMR (377MHz, DMSO-d6) δ = -62.56 (s,3F)。MS: 473 [M+H]+。旋光度: [α]D +10 (c 0.1, MeOH)。手性纯度：98%de。在ChiralpakAD-3 (150×4.6mm I.D., 3µm)柱上进行手性SFC/MS分析，用在CO2中的40%乙醇(+0.05%DEA)洗脱，以2.5 mL/min流动，在35℃，将压强设定在1500 psi。在这些条件下，该峰具有4.123分钟的保留时间。
方法B
实施例11: 叔丁基氨基甲酸(1R,3S)-3-(3-{[(5-甲基-1,3-噁唑-2-基)乙酰基] 氨基}-1H-吡唑-5-基)环戊酯.
将{1-叔丁基-3-[(1S,3R)-3-羟基环戊基]-1H-吡唑-5-基}氨基甲酸苄酯(中间体1, 20 g, 56 mmol)和咪唑(5.71 g, 83.9 mmol)在声处理下溶解在DMF (200 mL)中。当溶液是在室温时，分份加入叔丁基二甲基甲硅烷基氯(11.0 g, 72.7 mmol)。加入完成后，将澄清溶液在25℃搅拌1小时。在真空下除去溶剂，并将残余物在乙酸乙酯(500 mL)和饱和NaCl水溶液(200 mL)之间分配。将有机层经硫酸钠干燥，过滤，并浓缩以得到作为无色油的粗制的{1-叔丁基-3-[(1S,3R)-3-{[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}环戊基]-1H-吡唑-5-基}氨基甲酸苄酯(11A, 26 g, 99%)。MS: 472 [M+H]+。
将粗制的{1-叔丁基-3-[(1S,3R)-3-{[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}环戊基]-1H-吡唑-5-基}氨基甲酸苄酯(11A, 26 g, 55 mmol)溶解在乙酸乙酯(100 mL)和THF (100mL)中。加入Pd/C (50%湿的，4 g)，将溶液脱气，且在氢气球下在25℃搅拌2小时。然后将混合物过滤，并将滤液在真空下浓缩以得到作为浅黄色油的粗制的1-叔丁基-3-[(1S,3R)-3-{[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}环戊基]-1H-吡唑-5-胺(11B, 19 g, >99%)。MS: 338[M+H]+。
向粗制的1-叔丁基-3-[(1S,3R)-3-{[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}环戊基]-1H-吡唑-5-胺(11B, 5.00 g, 14.8 mmol)、(5-甲基-1,3-噁唑-2-基)乙酸锂(中间体3,3.14 g, 21.3 mmol)和二异丙基乙基胺(5.74 g, 44.4 mmol)在DMF (150 mL)中的室温(25℃)溶液中加入1-[双(二甲基氨基)亚甲基]-1H-1,2,3-三唑并[4,5-b]吡啶鎓3-氧化物六氟磷酸盐(HATU, 8.45 g, 22.2 mmol)。将混合物加热至40℃保持1小时，然后用乙酸乙酯(300 mL)稀释，并依次用水(150 mL)和饱和NaCl水溶液洗涤。将有机层经硫酸钠干燥，过滤，并浓缩。将残余物通过硅胶色谱法(用30%的乙酸乙酯在石油醚中的溶液洗脱)纯化以得到作为黄色油的N-{1-叔丁基-3-[(1S,3R)-3-{[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}环戊基]-1H-吡唑-5-基}-2-(5-甲基-1,3-噁唑-2-基)乙酰胺(11C, 5.5 g, 81%,通过LCMS为77%纯度)。MS: 461 [M+H]+。
将N-{1-叔丁基-3-[(1S,3R)-3-{[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}-环戊基]-1H-吡唑-5-基}-2-(5-甲基-1,3-噁唑-2-基)乙酰胺(11C, 5.5 g, 11.9 mmol)在甲酸(50 mL)中的溶液在25℃搅拌14小时。将溶液浓缩至干燥并将浅黄色油状残余物溶解在甲醇(20mL)中。向其中加入氢氧化锂一水合物(2.50 g, 59.7 mmol)在水(10 mL)中的溶液，并将混合物在25℃搅拌30分钟。将溶液浓缩至干燥。将残余物溶解在二氯甲烷(30 mL)中，用水(10mL)和饱和NaCl水溶液(10 mL)洗涤，经硫酸钠干燥，过滤，浓缩，并通过硅胶色谱法(用3%的甲醇在二氯甲烷中的溶液洗脱)纯化，以得到作为浅黄色油的N-{1-叔丁基-3-[(1S,3R)-3-羟基环戊基]-1H-吡唑-5-基}-2-(5-甲基-1,3-噁唑-2-基)乙酰胺(11D, 3.8 g, 92%, 通过LCMS为79%纯度)。MS: 347 [M+H]+。
将N-{1-叔丁基-3-[(1S,3R)-3-羟基环戊基]-1H-吡唑-5-基}-2-(5-甲基-1,3-噁唑-2-基)乙酰胺(11D, 3.8 g, 11 mmol)、DMAP (134 mg, 1.10 mmol)、吡啶(2.60 g,32.9 mmol)和氯甲酸4-硝基苯酯(4.42 g, 21.9 mmol)在二氯甲烷(40 mL)和THF (40 mL)中的悬浮液在25℃搅拌2小时。在真空下除去溶剂。将残余物溶解在乙酸乙酯(200 mL)中，用饱和NH4Cl水溶液(100 mL)和饱和NaCl水溶液洗涤，经硫酸钠干燥，过滤，浓缩，并通过硅胶色谱法(用50%的乙酸乙酯在石油醚中的溶液洗脱)纯化以得到作为黄色油的碳酸(1R,3S)-3-(1-叔丁基-5-{[(5-甲基-1,3-噁唑-2-基)乙酰基]氨基}-1H-吡唑-3-基)环戊基4-硝基苯基酯(11E, 5.0 g, 89%,通过LCMS为89%纯度)。MS: 512 [M+H]+。
将碳酸(1R,3S)-3-(1-叔丁基-5-{[(5-甲基-1,3-噁唑-2-基)乙酰基]氨基}-1H-吡唑-3-基)环戊基4-硝基苯基酯(11E, 5.0 g, 9.8 mmol)在甲酸(30 mL)中的溶液在75℃搅拌16小时。将混合物浓缩以除去大部分甲酸，然后将残余物溶解在二氯甲烷(30 mL)中，并用饱和NaHCO3水溶液(2 x 15 mL)、水(15 mL)和饱和NaCl水溶液(15 mL)洗涤。将有机层经硫酸钠干燥，过滤，浓缩，并通过硅胶色谱法(用80%的乙酸乙酯在石油醚中的溶液洗脱)纯化以得到作为浅黄色固体的碳酸(1R,3S)-3-(3-{[(5-甲基-1,3-噁唑-2-基)乙酰基]氨基}-1H-吡唑-5-基)环戊基4-硝基苯基酯(11F, 1.7 g, 38%)。MS: 456 [M+H]+。
将碳酸(1R,3S)-3-(3-{[(5-甲基-1,3-噁唑-2-基)乙酰基]氨基}-1H-吡唑-5-基)环戊基4-硝基苯基酯(11F, 4.00 g, 8.78 mmol)和叔丁基胺(6.42 g, 87.8 mmol)在THF(30 mL)中的溶液在25℃搅拌1小时。将混合物浓缩至干燥，将残余物溶解在二氯甲烷(80mL)中，用1M NaOH (2 x 20 mL)和饱和NaCl水溶液(20 mL)洗涤，经硫酸钠干燥，过滤，浓缩并通过硅胶色谱法(用3%的甲醇在二氯甲烷中的溶液洗脱)纯化以得到不纯的叔丁基氨基甲酸(1R,3S)-3-(3-{[(5-甲基-1,3-噁唑-2-基)乙酰基]氨基}-1H-吡唑-5-基)环戊酯(实施例11, 2.3 g, 67%, 通过HPLC为73%纯度)。将第二批的碳酸(1R,3S)-3-(3-{[(5-甲基-1,3-噁唑-2-基)乙酰基]氨基}-1H-吡唑-5-基)环戊基4-硝基苯基酯(11F, 1.50 g, 3.29mmol)溶解在叔丁基胺(10 mL)中并在40℃搅拌1小时。将该反应混合物浓缩至干燥，并将如此得到的粗产物与来自上面第一批的2.3 g不纯产物合并(在两批中消耗了共12.08 mmol11F)，并通过Phenomenex Gemimi C18 250x50 mm, 10µm柱上的制备型HPLC进一步纯化，用3-45%水(+0.05%NH4OH)在ACN中的溶液洗脱。得到作为白色固体的纯的叔丁基氨基甲酸(1R,3S)-3-(3-{[(5-甲基-1,3-噁唑-2-基)乙酰基]氨基}-1H-吡唑-5-基)环戊酯(实施例11, 2.23 g，合并批次为47%)。1H NMR (400MHz, DMSO-d 6) δ = 12.10 (s, 1H), 10.62(s, 1H), 6.87-6.63 (m, 2H), 6.29 (d, J=1.8 Hz, 1H), 4.96 (br s, 1H), 3.79 (s,2H), 3.03 (quin, J=8.6 Hz, 1H), 2.48-2.40 (m, 1H), 2.25 (d, J=1.1 Hz, 3H),2.04-1.94 (m, 1H), 1.92-1.80 (m, 1H), 1.75-1.63 (m, 2H), 1.55 (br s, 1H),1.19 (s, 9H)。MS: 390 [M+H]+。旋光度[α]D +3.5 (c 0.8, MeOH)。手性纯度：通过手性分析SFC为98%ee。
实施例12: 2,2-二甲基氮杂环丁烷-1-甲酸(1R,3S)-3-(3-{[(3-甲基-1,2-噁唑- 5-基)乙酰基]氨基}-1H-吡唑-5-基)环戊酯
将丙基膦酸酐(T3P®, 50重量%的在EtOAc中的溶液，4.41 g, 6.93 mmol)加入冷却的(0℃) 1-叔丁基-3-[(1S,3R)-3-{[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}环戊基]-1H-吡唑-5-胺(11B, 780 mg, 2.31 mmol)、3-甲基-5-异噁唑乙酸(CAS# 19668-85-0, 489 mg,3.47 mmol)和二异丙基乙基胺(1.23 mL, 6.93 mmol)在二氯甲烷(10 mL)中的溶液中。将混合物在30℃搅拌1小时，然后在二氯甲烷和半饱和的Na2CO3之间分配。将有机层用饱和NaCl水溶液洗涤，经硫酸钠干燥，过滤，浓缩，并通过硅胶色谱法(用10-50%的乙酸乙酯在石油醚中的溶液洗脱)纯化以得到作为无色油的N-{1-叔丁基-3-[(1S,3R)-3-{[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}环戊基]-1H-吡唑-5-基}-2-(3-甲基-1,2-噁唑-5-基)乙酰胺(12A,1.1 g)。MS: 461 [M+H]+。
将N-{1-叔丁基-3-[(1S,3R)-3-{[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}环戊基]-1H-吡唑-5-基}-2-(3-甲基-1,2-噁唑-5-基)乙酰胺(12A, 1.1 g)在甲酸(15 mL)中的溶液在45℃搅拌1小时，然后在室温静置过夜。将混合物浓缩至干燥，将残余物溶解在甲醇(30 mL)和NH4OH水溶液(10 mL)中，并将溶液在20℃搅拌1小时。将混合物浓缩并通过硅胶色谱法(用1/10甲醇/二氯甲烷洗脱)纯化以得到作为浅黄色油的N-{1-叔丁基-3-[(1S,3R)-3-羟基环戊基]-1H-吡唑-5-基}-2-(3-甲基-1,2-噁唑-5-基)乙酰胺(12B, 1.0 g)。MS: 347 [M+H]+。
将N-{1-叔丁基-3-[(1S,3R)-3-羟基环戊基]-1H-吡唑-5-基}-2-(3-甲基-1,2-噁唑-5-基)乙酰胺(12B, 1.0 g)在二氯甲烷(30 mL)和THF (30 mL)中的溶液用DMAP (70.5mg, 0.577 mmol)、吡啶(1.14 g, 14.4 mmol)和氯甲酸4-硝基苯酯(1.16 g, 5.77 mmol)处理。将得到的悬浮液在20℃搅拌12小时。在真空下除去溶剂，将残余物溶解在二氯甲烷(30 mL)中，并将溶液依次用饱和NH4Cl水溶液(15 mL)和饱和NaCl水溶液(15 mL)洗涤。将有机层干燥，浓缩，并通过硅胶色谱法(用50%的乙酸乙酯在石油醚中的溶液洗脱)纯化以得到碳酸(1R,3S)-3-(1-叔丁基-5-{[(3-甲基-1,2-噁唑-5-基)乙酰基]氨基}-1H-吡唑-3-基)环戊基4-硝基苯基酯(12C, 1.3 g)。MS: 512 [M+H]+。
将碳酸(1R,3S)-3-(1-叔丁基-5-{[(3-甲基-1,2-噁唑-5-基)乙酰基]氨基}-1H-吡唑-3-基)环戊基4-硝基苯基酯(12C, 1.3 g)在甲酸(20 mL)中的溶液在75℃加热16小时。在真空下除去大部分的甲酸，将残余物溶解在二氯甲烷(30 mL)中，并将溶液依次用饱和NaHCO3水溶液(2 x 15 mL)、水(15 mL)和饱和NaCl水溶液(15 mL)洗涤。将有机层经硫酸钠干燥，过滤，浓缩，并通过硅胶色谱法(用80%的乙酸乙酯在石油醚中的溶液洗脱)纯化以得到作为白色固体的碳酸(1R,3S)-3-(3-{[(3-甲基-1,2-噁唑-5-基)乙酰基]氨基}-1H-吡唑-5-基)环戊基4-硝基苯基酯(12D, 850 mg, 基于11B经5个步骤为81%)。MS: 456 [M+H]+。
将碳酸(1R,3S)-3-(3-{[(3-甲基-1,2-噁唑-5-基)乙酰基]氨基}-1H-吡唑-5-基)环戊基4-硝基苯基酯(12D, 60 mg, 0.13 mmol)、2,2-二甲基氮杂环丁烷(CAS#1086266-55-8, 13.5 mg, 0.158 mmol)和二异丙基乙基胺(102 mg, 0.79 mmol)在二氯甲烷(1 mL)和2-甲基四氢呋喃(1 mL)中的溶液在15℃搅拌1小时，然后浓缩并将残余物通过制备型HPLC(在Xbridge 150*30mm*10µm柱上)纯化，用17-57%的水(0.05%氢氧化铵v/v)在乙腈中的溶液)洗脱。在冻干以后，得到作为白色固体的2,2-二甲基氮杂环丁烷-1-甲酸(1R,3S)-3-(3-{[(3-甲基-1,2-噁唑-5-基)乙酰基]氨基}-1H-吡唑-5-基)环戊酯(实施例12, 28.21mg, 53%)。MS: 402 [M+H]+。1H NMR (400MHz, DMSO-d 6) δ = 12.13 (br d, J=8.2 Hz,1H), 10.62 (br s, 1H), 6.29 (s, 1H), 6.21 (s, 1H), 5.03-4.91 (m, 1H), 3.82(s, 2H), 3.71 (br t, J=8.4 Hz, 1H), 3.64 (t, J=7.5 Hz, 1H), 3.12-3.01 (m,1H), 2.41 (dt, J=6.7, 15.5 Hz, 1H), 2.19 (s, 3H), 2.04-1.97 (m, 1H), 1.96-1.89 (m, 2H), 1.87-1.79 (m, 1H), 1.77-1.57 (m, 3H), 1.37-1.27 (m, 6H)。手性纯度：通过手性分析SFC为99%ee。
实施例13: 丙烷-2-基氨基甲酸(1R,3S)-3-[3-({[3-(甲氧基甲基)-1-甲基-1H- 吡唑-5-基]羰基}氨基)-1H-吡唑-5-基]环戊酯
将丙基膦酸酐(T3P®, 50重量%的在EtOAc中的溶液，50.3 g, 79.1 mmol)加入1-叔丁基-3-[(1S,3R)-3-{[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}环戊基]-1H-吡唑-5-胺(11B,8.90g, 26.4 mmol)、3-(甲氧基甲基)-1-甲基-1H-吡唑-5-甲酸锂(中间体5, 5.83 g,34.3 mmol)和二异丙基乙基胺(10.2 g, 79.1 mmol)在2-甲基四氢呋喃(100.0 mL)中的室温(26℃)溶液中。将得到的混合物在该温度搅拌18小时。将混合物浓缩至干燥以后，将残余物溶解在二氯甲烷(150 mL)中，并将溶液依次用水(2 x 30 mL)、饱和NaHCO3水溶液(2 x30 mL)和饱和NaCl水溶液(30 mL)洗涤。将有机层经硫酸钠干燥，过滤，并浓缩以得到作为油的粗制的N-{1-叔丁基-3-[(1S,3R)-3-{[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}环戊基]-1H-吡唑-5-基}-3-(甲氧基甲基)-1-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺(13A, 12.9 g, 100%)。MS: 490[M+H]+。
将粗制的N-{1-叔丁基-3-[(1S,3R)-3-{[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}环戊基]-1H-吡唑-5-基}-3-(甲氧基甲基)-1-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺(13A, 12.9 g, 26.3mmol)溶解在甲酸(80 mL)中并在室温(27℃)搅拌30分钟。将混合物浓缩至干燥，并将残余物溶解在甲醇(80 mL)中。加入氢氧化锂一水合物(3.43 g, 81.8 mmol)在水(15 mL)中的溶液，并将混合物在室温(27℃)搅拌1小时。将混合物浓缩至干燥，并将残余物通过硅胶色谱法(用0-80%的乙酸乙酯在石油醚中的溶液洗脱)纯化以得到作为黄色树胶的N-{1-叔丁基-3-[(1S,3R)-3-羟基环戊基]-1H-吡唑-5-基}-3-(甲氧基甲基)-1-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺(13B, 8.0 g, 78%)。MS: 376 [M+H]+。
将N-{1-叔丁基-3-[(1S,3R)-3-羟基环戊基]-1H-吡唑-5-基}-3-(甲氧基甲基)-1-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺(13B, 8.0 g, 21 mmol)在二氯甲烷(80 mL)和THF (80 mL)中的溶液用DMAP (260 mg, 2.13 mmol)、吡啶(5.06 g, 63.9 mmol)和氯甲酸4-硝基苯酯(8.59 g, 42.6 mmol)处理。将得到的黄色悬浮液在室温搅拌18小时。将反应混合物浓缩至干燥并通过硅胶色谱法(用0-45%的乙酸乙酯在石油醚中的溶液洗脱)纯化以得到作为浅棕色树胶的碳酸(1R,3S)-3-[1-叔丁基-5-({[3-(甲氧基甲基)-1-甲基-1H-吡唑-5-基]羰基}氨基)-1H-吡唑-3-基]环戊基4-硝基苯基酯(13C, 10.6 g, 92%)。MS: 541 [M+H]+。
将碳酸1R,3S)-3-[1-叔丁基-5-({[3-(甲氧基甲基)-1-甲基-1H-吡唑-5-基]羰基}氨基)-1H-吡唑-3-基]环戊基4-硝基苯基酯(13C, 10.6 g, 19.6 mmol)在甲酸(80 mL)中的溶液在70℃搅拌18小时。将溶液浓缩至干燥。将残余物溶解在二氯甲烷(150 mL)中，并将溶液用饱和NaHCO3水溶液中和。将有机层用水(30 mL)和饱和NaCl水溶液(30 mL)洗涤，经碳酸钠干燥，过滤，并浓缩以得到作为浅黄色玻璃的粗制的碳酸(1R,3S)-3-[3-({[3-(甲氧基甲基)-1-甲基-1H-吡唑-5-基]羰基}氨基)-1H-吡唑-5-基]环戊基4-硝基苯基酯(13D,8.5 g, 90%, 通过LCMS为86%纯度)。MS: 485 [M+H]+。
将粗制的碳酸(1R,3S)-3-[3-({[3-(甲氧基甲基)-1-甲基-1H-吡唑-5-基]羰基}氨基)-1H-吡唑-5-基]环戊基4-硝基苯基酯(13D, 1.7 g, 3.5 mmol)和2-丙胺(1.04 g,17.5 mmol)在THF (30 mL)中的室温(27℃)溶液搅拌6小时。将溶液浓缩至干燥，并将残余物与来自第二批（其已经源自1.7 g, 3.5 mmol 13D）的残余物合并(合并的两批消耗了共6.27 mmol 13D)以得到3.2 g粗产物。将该产物在Phenomenex Gemini C18 250*50mm*10µm柱上通过制备型HPLC纯化，用15-45%的水(0.05%氢氧化铵v/v)在乙腈中的溶液洗脱。在冻干以后，得到作为白色结晶固体的丙烷-2-基氨基甲酸(1R,3S)-3-[3-({[3-(甲氧基甲基)-1-甲基-1H-吡唑-5-基]羰基}氨基)-1H-吡唑-5-基]环戊酯(实施例13, 2.06 g, 78%)，基于元素分析发现为一水合物(形式1)。MS: 405 [M+H]+。1H NMR (400MHz, DMSO-d6) δ =12.23 (br s, 1H), 10.73 (br s, 1H), 7.11 (s, 1H), 6.96 (br d, J=7.0 Hz, 1H),6.41 (br s, 1H), 5.00 (br s, 1H), 4.33 (s, 2H), 4.04 (s, 3H), 3.57 (qd, J=6.6, 13.4 Hz, 1H), 3.26 (s, 3H), 3.17-2.96 (m, 1H), 2.48-2.39 (m, 1H), 2.03(br d, J=6.8 Hz, 1H), 1.95-1.83 (m, 1H), 1.73 (br d, J=8.5 Hz, 2H), 1.61 (brs, 1H), 1.03 (br d, J=6.3 Hz, 6H)。旋光度[α]D +4.8 (c 1.0, MeOH)。手性纯度：通过手性分析SFC为>99%ee。C19H28N6O4-H2O的计算分析: C, 54.02；H, 7.16；N, 19.89。实测：C,53.94；H, 7.22；N, 19.81。将来自上面的白色结晶固体(500 mg)如下从9: 1 H2O/CH3CN (2mL)重结晶：加热直到溶解，并然后将得到的溶液在室温静置18 h。在18 h时间段中，形成一水合物(形式1)的较大晶体。在图1的结构中提供了来自该物质的选定晶体的单晶X-射线衍射。
通过粉末X-射线衍射(PXRD)进一步表征了上面制备为一水合物(形式1)的结晶固体。
仪器粉末X-射线衍射：
使用配备有Cu辐射源的Bruker AXS D8 Advance衍射仪进行粉末X-射线衍射分析。用带有动力化的狭缝的LYNXEYE_EX检测器检测衍射辐射。初级和次级都配备了2.5条索勒狭缝。X射线管电压和安培数分别设置在40kV和40 mA。在θ-θ测角仪中在Cu K-α波长从3.0到40.0度2-θ的锁定耦合扫描中收集数据，增量为0.01度，使用的扫描速度为每步1.0秒。通过放置在硅低背景样品中来制备样品。使用Bruker DIFFRAC Plus软件收集和分析数据。在峰搜索之前未处理PXRD数据文件。将在EVA软件中的峰值搜索算法用于使用阈值1进行初步峰分配。为确保有效性，人工进行了调整；目视检查自动分配的输出，并将峰位置调整到峰最大值。通常选择具有≥3%的相对强度的峰。没有选择未解析或与噪声一致的峰。与美国药典中规定的PXRD峰位置相关的典型误差最高达±0.2°2-θ(USP-941)。
实施例13形式1一水合物的PXRD图样如图2所示。下表1中提供了实施例13的化合物形式1一水合物的PXRD峰列表和相对强度数据(2-θ°)：
表1
角度(2-θ°)±0.2°2θ 相对强度(%) 角度(2θ°)±0.2°2θ 相对强度(%)
3.9 19.5% 25.0 25.9%
9.1 18.3% 25.7 8.3%
10.4 96.5% 26.0 10.1%
11.7 64.3% 26.3 15.1%
12.9 41.4% 26.6 8.4%
16.0 15.5% 27.0 5.0%
18.2 100.0% 27.6 21.3%
18.6 14.4% 28.2 31.7%
19.4 38.1% 28.9 5.2%
19.6 20.3% 30.4 6.8%
20.0 10.5% 31.1 7.8%
20.3 20.6% 31.5 9.9%
20.6 43.0% 33.9 11.6%
20.8 26.1% 35.1 3.3%
21.0 23.7% 35.8 3.0%
22.2 20.6% 36.6 7.1%
22.7 3.4% 37.6 3.9%
23.5 22.9% 38.3 5.2%
24.2 64.0%
实施例14: (2S)-丁-2-基氨基甲酸(1R,3S)-3-[3-({[3-(甲氧基甲基)-1-甲基- 1H-吡唑-5-基]羰基}氨基)-1H-吡唑-5-基]环戊酯
将粗制的碳酸(1R,3S)-3-[3-({[3-(甲氧基甲基)-1-甲基-1H-吡唑-5-基]羰基}氨基)-1H-吡唑-5-基]环戊基4-硝基苯基酯(13D, 5.5 g, 11 mmol)、(S)-(+)-仲丁基胺(1.49 g, 13.6 mmol)和二异丙基乙基胺(4.40 g, 34.1 mmol)在THF (100 mL)中的溶液在室温(30℃)搅拌18小时。将反应混合物浓缩至干燥，并将残余物通过在PhenomenexGemini C18 250*50mm*10µm柱上的制备型HPLC纯化，用25-45%的水(0.05%氢氧化铵v/v)在乙腈中的溶液洗脱，以得到作为浅黄色固体的(2S)-丁-2-基氨基甲酸(1R,3S)-3-[3-({[3-(甲氧基甲基)-1-甲基-1H-吡唑-5-基]羰基}氨基)-1H-吡唑-5-基]环戊酯(实施例14,3.50 g, 74%)。MS: 419 [M+H]+。1H NMR (400MHz, DMSO-d6) δ = 12.23 (br s, 1H),10.72 (s, 1H), 7.11 (s, 1H), 6.90 (br d, J=8.2 Hz, 1H), 6.42 (br s, 1H), 5.00(br s, 1H), 4.33 (s, 2H), 4.04 (s, 3H), 3.43-3.37 (m, 1H), 3.26 (s, 3H),3.14-2.98 (m, 1H), 2.45 (br s, 1H), 2.08-1.97 (m, 1H), 1.95-1.82 (m, 1H),1.80-1.68 (m, 2H), 1.67-1.52 (m, 1H), 1.42-1.26 (m, 2H), 1.00 (d, J=6.5 Hz,3H), 0.80 (t, J=7.4 Hz, 3H)。旋光度[α]D +16.6 (c 2.05, MeOH)。手性纯度：通过手性分析SFC为>99%ee。
实施例15: (1-甲基环丙基)氨基甲酸(1R,3S)-3-(3-{[(3-甲基-1,2-噁唑-5-基) 乙酰基]氨基}-1H-吡唑-5-基)环戊酯
将碳酸(1R,3S)-3-(1-叔丁基-5-{[(3-甲基-1,2-噁唑-5-基)乙酰基]氨基}-1H-吡唑-3-基)环戊基4-硝基苯基酯(12C, 1.64 g, 3.2 mmol)在DMF (10.7 mL)中的溶液用1-甲基环丙烷-1-胺盐酸盐(516 mg, 4.8 mmol)和二异丙基乙基胺(1.7 mL, 9.6 mmol)处理。将混合物在氮气下在60℃搅拌2小时，然后在室温搅拌过夜。用乙酸乙酯(150 mL)稀释以后，将溶液用去离子水(20 mL)、2 M Na2CO3水溶液(20 mL)和饱和NaCl水溶液(20 mL)洗涤。将合并的水层用乙酸乙酯(30 mL)反萃取。将合并的有机萃取物经硫酸钠干燥，过滤，浓缩并通过硅胶色谱法(用0-100%的乙酸乙酯在庚烷中的溶液洗脱)纯化以得到作为油的(1-甲基环丙基)氨基甲酸(1R,3S)-3-(1-叔丁基-5-{[(3-甲基-1,2-噁唑-5-基)乙酰基]氨基}-1H-吡唑-3-基)环戊酯(15A, 1.58 g, 82%)。
将(1-甲基环丙基)氨基甲酸1R,3S)-3-(1-叔丁基-5-{[(3-甲基-1,2-噁唑-5-基)乙酰基]氨基}-1H-吡唑-3-基)环戊酯(15A, 1.50 g, 3.4 mmol)在甲酸(10 mL)中的溶液在100℃油浴中加热1小时。在真空下除去大部分的甲酸。将残余物用饱和NaHCO3水溶液(30mL)处理，然后用乙酸乙酯(150 mL，然后50 mL)萃取。将合并的有机层经硫酸镁干燥，过滤，浓缩，并通过硅胶色谱法(用0-40%的异丙醇在庚烷中的溶液洗脱)纯化以得到白色固体(960 mg)。将该固体溶解在乙腈(20 mL)和水(10 mL)中，并将溶液冻干过夜以得到白色固体(796 mg)。将冻干的物质悬浮于乙酸乙酯(28 mL)中，在60℃油浴中搅拌1小时，并在搅拌下冷却至室温另外3小时。将固体通过过滤进行收集并干燥(50℃, 10 mmHg)以得到作为白色固体的(1-甲基环丙基)氨基甲酸(1R,3S)-3-(3-{[(3-甲基-1,2-噁唑-5-基)乙酰基]氨基}-1H-吡唑-5-基)环戊酯(实施例15 565 mg, 41%)。MS: 388 [M+H]+。1H NMR (400MHz,DMSO-d6) δ = 12.10 (br s, 1H), 10.61 (s, 1H), 7.34 (br s, 1H), 6.28 (br s,1H), 6.21 (s, 1H), 4.97 (br s, 1H), 3.82 (s, 2H), 3.14-2.94 (m, 1H), 2.48-2.39 (m, 1H), 2.20 (s, 3H), 1.99 (s, 1H), 1.93-1.80 (m, 1H), 1.78-1.60 (m,2H), 1.54 (br s, 1H), 1.22 (s, 3H), 0.58 (br s, 2H), 0.49-0.42 (m, 2H)。旋光度[α]D +10.0°(c 0.2, MeOH)。
方法C
实施例16: (2S)-丁-2-基氨基甲酸(1R,3S)-3-{3-[(1,2-噁唑-5-基乙酰基)氨 基]-1H-吡唑-5-基}环戊酯
将三乙胺(4.7 mL, 33.4 mmol)加入{1-叔丁基-3-[(1S,3R)-3-羟基环戊基]-1H-吡唑-5-基}氨基甲酸苄酯(中间体1, 5.97 g, 16.7 mmol)在无水乙腈(50 mL)中的悬浮液中。将溶液冷却至0℃，然后加入碳酸N,N'-二琥珀酰亚胺基酯(8.56 g, 33.4 mmol)。在0℃搅拌10分钟以后，除去冷却浴，并将混合物在室温(23℃)搅拌24小时。LCMS表明未反应的开始醇仍然存在，所以加入额外的碳酸N,N'-二琥珀酰亚胺基酯(2.36 g；共10.92 g, 42.63mmol)和三乙胺((2.8 mL；共7.5 mL, 54 mmol)，并继续在室温搅拌另外5小时。在真空下除去溶剂，并将残余物用乙酸乙酯(150 mL)和去离子水(100 mL)稀释。将得到的乳状液抽吸过滤以除去白色固体。将滤液的各层分离。将滤饼用乙酸乙酯(2 x 100 mL)冲洗，并将冲洗物用于进一步萃取水层。将合并的有机萃取物经硫酸镁干燥，过滤，并浓缩。将残余物通过硅胶色谱法(用20-70%的乙酸乙酯在庚烷中的溶液洗脱)纯化，得到作为固体的{1-叔丁基-3-[(1S,3R)-3-({[(2,5-二氧代吡咯烷-1-基)氧基]羰基}氧基)环戊基]-1H-吡唑-5-基}氨基甲酸苄酯(16A, 4.5 g, 54%)。1H NMR (400MHz, 氯仿-d) δ = 7.42-7.34 (m, 5H),6.24 (br. s., 1H), 6.13 (br. s., 1H), 5.30-5.22 (m, 1H), 5.20 (s, 2H), 3.21-3.12 (m, 1H), 2.82 (s, 4H), 2.57 (ddd, J=6.7, 8.4, 14.8 Hz, 1H), 2.15-2.05(m, 2H), 2.04-1.87 (m, 3H), 1.59 (s, 9H)。MS: 499 [M+H]+。
将{1-叔丁基-3-[(1S,3R)-3-({[(2,5-二氧代吡咯烷-1-基)氧基]羰基}氧基)环戊基]-1H-吡唑-5-基}氨基甲酸苄酯(16A, 3.5 g, 7.0 mmol)和10%Pd/C (1.2 g)在乙酸乙酯(150 mL)中的溶液在氢气球下在室温(23℃)搅拌过夜。将混合物穿过硅藻土垫过滤，将滤垫用乙酸乙酯(3 x 30 mL)冲洗，并将合并的滤液浓缩以得到粗制的1-[({[(1R,3S)-3-(5-氨基-1-叔丁基-1H-吡唑-3-基)环戊基]氧基}羰基)氧基]吡咯烷-2,5-二酮(16B)，将其立即用于下一步。MS: 365 [M+H]+。
将粗制的1-[({[(1R,3S)-3-(5-氨基-1-叔丁基-1H-吡唑-3-基)环戊基]氧基}羰基)氧基]吡咯烷-2,5-二酮(16B, 最多7.0 mmol)溶解在DMF (20 mL)中，加入1,2-噁唑-5-基乙酸(CAS# 4992-21-6, 1.4 g, 11 mmol)和丙基膦酸酐(T3P®, 11 mL的50重量%的在EtOAc中的溶液，14 mmol)，并将溶液在氮气下冷却至0℃。历时10分钟逐滴加入三乙胺(3.5ml, 25 mmol)，足够缓慢以保持内部温度低于20℃。除去冷却浴并将混合物在室温搅拌1小时。将反应用饱和NaHCO3水溶液淬灭，并用乙酸乙酯(3x)萃取。将合并的有机层用饱和NaHCO3水溶液(2x)和饱和NaCl水溶液(1x)洗涤，经硫酸镁干燥，过滤，浓缩，并通过硅胶色谱法(用30-100%的乙酸乙酯在庚烷中的溶液洗脱)纯化，产生作为白色泡沫的N-(1-叔丁基-3-{(1S,3R)-3-[(2,5-二氧代吡咯烷-1-基)氧基]环戊基}-1H-吡唑-5-基)-2-(1,2-噁唑-5-基)乙酰胺(16C, 2.46 g, 74%)。1H NMR (400MHz, 甲醇-d 4) δ = 8.35 (d, J=1.7Hz, 1H), 6.42-6.37 (m, 1H), 6.05 (s, 1H), 5.33-5.23 (m, 1H), 3.98 (s, 2H),3.16 (td, J=8.8, 17.2 Hz, 1H), 2.82 (s, 4H), 2.63-2.51 (m, 1H), 2.16-2.02 (m,3H), 2.00-1.80 (m, 3H), 1.56 (s, 9H)。MS: 474 [M+H]+。
将N-(1-叔丁基-3-{(1S,3R)-3-[(2,5-二氧代吡咯烷-1-基)氧基]环戊基}-1H-吡唑-5-基)-2-(1,2-噁唑-5-基)乙酰胺(16C, 158 mg, 0.334 mmol)、二异丙基乙基胺(0.15mL, 0.91 mmol)和(S)-(+)-仲丁基胺(50µL, 0.50 mmol)在二氯甲烷(3.5 mL)中的溶液在20℃搅拌3小时。将反应混合物用二氯甲烷(10 mL)稀释，并用饱和NaHCO3水溶液(2 x 3mL)、去离子水(3 mL)、饱和NH4Cl水溶液(3 mL)和饱和NaCl水溶液(3 mL)洗涤。将有机层经硫酸镁干燥，过滤，并浓缩至干燥，剩下作为黄色凝胶的粗制的(2S)-丁-2-基氨基甲酸(1R,3S)-3-{1-叔丁基-5-[(1,2-噁唑-5-基乙酰基)氨基]-1H-吡唑-3-基}环戊酯(16D, 115.0mg, 80%)。1H NMR (400MHz, DMSO-d 6) δ = 9.79 (s, 1H), 8.50 (d, J=1.7 Hz, 1H),6.85 (d, J=8.1 Hz, 1H), 6.40 (d, J=1.6 Hz, 1H), 5.93 (s, 1H), 4.97 (br. s.,1H), 3.95 (s, 2H), 3.43-3.33 (m, 1H), 2.95 (quin, J=8.5 Hz, 1H), 2.40-2.31(m, 1H), 1.99-1.77 (m, 2H), 1.76-1.57 (m, 3H), 1.47 (s, 9H), 1.39-1.30 (m,2H), 1.00 (d, J=6.6 Hz, 3H), 0.79 (t, J=7.4 Hz, 3H)。MS: 432 [M+H]+。
将粗制的(2S)-丁-2-基氨基甲酸(1R,3S)-3-{1-叔丁基-5-[(1,2-噁唑-5-基乙酰基)氨基]-1H-吡唑-3-基}环戊酯(16D, 115.0 mg, 0.2665 mmol)溶解在甲酸(6.0 mL)和三乙基硅烷(1.5 mL)中并在70℃搅拌18小时。将得到的两相混合物的各层分离。将上面的三乙基硅烷层抛弃。将下面的酸层浓缩至干燥，溶解在乙腈中，并再次浓缩至干燥。将残余物在真空下进一步干燥以得到作为蜡状棕色固体的粗产物(109.9 mg)。加入乙腈(5 mL)，并将悬浮液在室温搅拌1小时。将得到的沉淀物通过抽滤进行收集，并风干以得到作为灰白色固体的(2S)-丁-2-基氨基甲酸(1R,3S)-3-{3-[(1,2-噁唑-5-基乙酰基)氨基]-1H-吡唑-5-基}环戊酯(实施例16, 42.1 mg, 42%)。1H NMR (400MHz, DMSO-d 6) δ = 12.11 (br.s., 1H), 10.65 (s, 1H), 8.48 (d, J=1.7 Hz, 1H), 6.87 (d, J=8.1 Hz, 1H), 6.37(d, J=1.5 Hz, 1H), 6.29 (br. s., 1H), 4.98 (br. s., 1H), 3.91 (s, 2H), 3.43-3.33 (m, 1H), 3.11-2.97 (m, 1H), 2.48-2.38 (m, 1H), 2.05-1.94 (m, 1H), 1.94-1.81 (m, 1H), 1.78-1.62 (m, 2H), 1.61-1.50 (m, 1H), 1.41-1.27 (m, 2H), 0.99(d, J=6.6 Hz, 3H), 0.79 (t, J=7.4 Hz, 3H)。MS: 376 [M+H]+。
方法D
实施例17: 叔丁基氨基甲酸(1R,3S)-3-{3-[(1,2-噁唑-3-基乙酰基)氨基]-1H- 吡唑-5-基}环戊酯
将碳酸(1R,3S)-3-(5-{[(苄氧基)羰基]氨基}-1-叔丁基-1H-吡唑-3-基)环戊基4-硝基苯基酯(1A, 5.00 g, 9.57 mmol)在甲酸(30 mL)中的溶液在75℃搅拌20小时。将混合物浓缩至干燥并将残余物通过硅胶色谱法(用50-70%的乙酸乙酯在石油醚中的溶液洗脱)纯化以得到作为浅黄色固体的碳酸(1R,3S)-3-(5-{[(苄氧基)羰基]氨基}-1H-吡唑-3-基)环戊基4-硝基苯基酯(17A, 3.6 g, 81%，通过LCMS为82%纯度)。MS: 467 [M+H]+。
将碳酸(1R,3S)-3-(5-{[(苄氧基)羰基]氨基}-1H-吡唑-3-基)环戊基4-硝基苯基酯(17A, 2.2 g, 4.7 mmol)和叔丁基胺(1.38 g, 18.9 mmol)在THF (40 mL)中的混合物在室温(29℃)搅拌18小时。在真空下除去溶剂，并将残余物通过硅胶色谱法(用0-90%的乙酸乙酯在石油醚中的溶液洗脱)纯化以得到作为浅黄色玻璃的(3-{(1S,3R)-3-[(叔丁基氨甲酰基)氧基]环戊基}-1H-吡唑-5-基)氨基甲酸苄酯(17B, 1.5 g, 79%)。MS: 401 [M+H]+。
将氯甲酸乙酯(970 mg, 8.94 mmol)分份加入(3-{(1S,3R)-3-[(叔丁基氨甲酰基)氧基]环戊基}-1H-吡唑-5-基)氨基甲酸苄酯(17B, 1.50 g, 3.75 mmol)和二异丙基乙基胺(1.45 g, 11.2 mmol)在二氯甲烷(30 mL)中的室温(29℃)溶液中，然后将混合物在室温搅拌18小时。将溶液用饱和NH4Cl水溶液(3 x 5 mL)和饱和NaCl水溶液(5 mL)洗涤，经硫酸钠干燥，过滤，并浓缩以得到作为浅黄色树胶的粗制的5-{[(苄氧基)羰基]氨基}-3-{(1S,3R)-3-[(叔丁基氨甲酰基)氧基]环戊基}-1H-吡唑-1-甲酸乙酯(17C, 2.0 g, >99%)，将其不经进一步纯化地使用。MS: 473 [M+H]+。
将粗制的5-{[(苄氧基)羰基]氨基}-3-{(1S,3R)-3-[(叔丁基氨甲酰基)氧基]环戊基}-1H-吡唑-1-甲酸乙酯(17C, 2.0 g, 4.2 mmol(如果纯的话))溶解在乙酸乙酯(15mL)和THF (15 mL)中。加入10%Pd/C催化剂(200 mg)，脱气，并在氢气球下在室温(29℃)搅拌1.5小时。将悬浮液过滤以除去催化剂，将滤液浓缩至干燥，并将残余物通过硅胶色谱法(用0-100%的乙酸乙酯在石油醚中的溶液洗脱，然后用0-30%的乙酸乙酯在二氯甲烷中的溶液洗脱)纯化以得到作为浅黄色树胶的5-氨基-3-{(1S,3R)-3-[(叔丁基氨甲酰基)氧基]环戊基}-1H-吡唑-1-甲酸乙酯(17D, 900 mg, 63%, 从17A算56%)。MS: 339 [M+H]+。
将在室温(29℃)的5-氨基-3-{(1S,3R)-3-[(叔丁基氨甲酰基)氧基]环戊基}-1H-吡唑-1-甲酸乙酯(17D, 250 mg, 0.739 mmol)、二异丙基乙基胺(286 mg, 2.22 mmol)和1,2-噁唑-3-基乙酸(CAS# 57612-86-9, 113 mg, 0.887 mmol)在二氯甲烷(10 mL)中的溶液用丙基膦酸酐(T3P®, 50重量%的在EtOAc中的溶液，1.41 g, 2.22 mmol)处理，然后在室温搅拌6小时。将溶液用二氯甲烷(10 mL)稀释，然后用水(5 mL)、饱和NaHCO3水溶液(2 x5 mL)、饱和NH4Cl水溶液(5 mL)和饱和NaCl水溶液(5 mL)洗涤。将有机层经硫酸钠干燥，过滤，并浓缩以得到作为棕色树胶的粗制的3-{(1S,3R)-3-[(叔丁基氨甲酰基)氧基]环戊基}-5-[(1,2-噁唑-3-基乙酰基)氨基]-1H-吡唑-1-甲酸乙酯(17E, 331 mg, 100%)。MS:448 [M+H]+。
将该粗制的3-{(1S,3R)-3-[(叔丁基氨甲酰基)氧基]环戊基}-5-[(1,2-噁唑-3-基乙酰基)氨基]-1H-吡唑-1-甲酸乙酯(17E, 331 mg, 0.739 mmol)溶解在甲醇(5 mL)中，加入氢氧化锂一水合物(93.1 mg, 2.22 mmol)在水(1 mL)中的溶液，并将混合物在室温(30℃)搅拌1小时。将混合物静置过夜，然后浓缩至干燥。将残余物溶解在甲醇(3 mL)中，过滤，并将滤液通过YMC-Actus Triart C18 150*30 5µ柱上的制备型HPLC纯化，用20-50%的水(0.05%氢氧化铵v/v)在乙腈中的溶液洗脱。将含有产物的级分冻干以后，得到作为白色固体的叔丁基氨基甲酸(1R,3S)-3-{3-[(1,2-噁唑-3-基乙酰基)氨基]-1H-吡唑-5-基}环戊酯(实施例17, 74.84 mg, 27%, 通过手性分析SFC为99%ee)。1H NMR (500MHz, DMSO-d6) δ = 12.09 (br s, 1H), 10.63 (s, 1H), 8.83 (s, 1H), 6.76 (br s, 1H), 6.53(s, 1H), 6.29 (s, 1H), 4.96 (br s, 1H), 3.75 (s, 2H), 3.02 (quin, J=8.7 Hz,1H), 2.47-2.41 (m, 1H), 2.04-1.93 (m, 1H), 1.92-1.79 (m, 1H), 1.78-1.61 (m,2H), 1.55 (br s, 1H), 1.19 (s, 9H)。MS: 376 [M+H]+。
方法E
实施例18: (1-甲基环丁基)氨基甲酸(1R,3S)-3-(3-{[(5-甲基-1,3,4-噻二唑- 2-基)乙酰基]氨基}-1H-吡唑-5-基)环戊酯
将{1-叔丁基-3-[(1S,3R)-3-({[(2,5-二氧代吡咯烷-1-基)氧基]羰基}氧基)环戊基]-1H-吡唑-5-基}氨基甲酸苄酯(16A, 1.20 g, 2.41 mmol)、1-甲基环丁基胺盐酸盐(CAS# 174886-05-6, 439 mg, 3.61 mmol)和二异丙基乙基胺(1.56 g, 12.0 mmol)在THF(15 mL)中的溶液在室温(32℃)搅拌18小时。将混合物在真空下浓缩，并将残余物溶解在二氯甲烷(25 mL)中。将溶液用水(2 x 5 mL)、饱和NH4Cl水溶液(5 mL)和饱和NaCl水溶液(5mL)洗涤。将有机层经硫酸钠干燥，过滤，浓缩。将粗产物通过硅胶色谱法(用0-30%的乙酸乙酯在石油醚中的溶液洗脱)纯化以得到作为浅黄色树胶的{1-叔丁基-3-[(1S,3R)-3-{[(1-甲基环丁基)氨甲酰基]氧基}环戊基]-1H-吡唑-5-基}氨基甲酸苄酯(18A, 920 mg, 82%)。MS: 469 [M+H]+。
将{1-叔丁基-3-[(1S,3R)-3-{[(1-甲基环丁基)氨甲酰基]氧基}环戊基]-1H-吡唑-5-基}氨基甲酸苄酯(18A, 920 mg, 1.96 mmol)在甲酸(10 mL)中在75℃搅拌18小时。在真空下除去挥发物，并将残余物在二氯甲烷(20 mL)和饱和NaHCO3水溶液之间分配。将有机层经硫酸钠干燥，过滤，浓缩，并通过硅胶色谱法(用0-80%的乙酸乙酯在石油醚中的溶液洗脱)纯化以得到作为浅黄色树胶的{3-[(1S,3R)-3-{[(1-甲基环丁基)氨甲酰基]氧基}环戊基]-1H-吡唑-5-基}氨基甲酸苄酯(18B, 500 mg, 62%)。MS: 435 [M+Na]+。
将氯甲酸乙酯(197 mg, 1.82 mmol)分份加入给出的{3-[(1S,3R)-3-{[(1-甲基环丁基)氨甲酰基]氧基}环戊基]-1H-吡唑-5-基}氨基甲酸苄酯(18B, 500 mg, 1.21mmol)和二异丙基乙基胺(470 mg, 3.64 mmol)在二氯甲烷(15 mL)中的溶液中。将混合物在室温(35℃)搅拌4小时，然后用饱和NH4Cl水溶液(2 x 5 mL)和饱和NaCl水溶液(5 mL)洗涤。将有机层经硫酸钠干燥，过滤，并浓缩以得到作为浅黄色玻璃的粗制的5-{[(苄氧基)羰基]氨基}-3-[(1S,3R)-3-{[(1-甲基环丁基)氨甲酰基]氧基}环戊基]-1H-吡唑-1-甲酸乙酯(18C, 560 mg, 95%,通过NMR为80%纯度)。1H NMR (400MHz, 氯仿-d) δ = 9.50 (s,1H), 7.44-7.32 (m, 5H), 7.33-7.32 (m, 1H), 6.62 (br. s., 1H), 5.22 (s, 2H),5.17 (br. s., 1H), 4.51 (q, J=7.0 Hz, 2H), 3.25-3.13 (m, 1H), 2.51-2.30 (m,2H), 2.14-2.03 (m, 1H), 2.00-1.73 (m, 8H), 1.47 (t, J=7.2 Hz, 4H), 1.44 (s,3H)。MS: 485 [M+H]+；507 [M+Na]+。
将粗制的5-{[(苄氧基)羰基]氨基}-3-[(1S,3R)-3-{[(1-甲基环丁基)氨甲酰基]氧基}环戊基]-1H-吡唑-1-甲酸乙酯(18C, 560 mg, 1.16 mmol)和Pd/C催化剂(湿的，50重量%, 150 mg)在乙酸乙酯(10 mL)和THF (10 mL)中的悬浮液脱气，用氢气回填，然后在氢气球下在室温搅拌1小时。将催化剂通过过滤除去，并将滤液浓缩以得到作为浅黄色树胶的粗制的5-氨基-3-[(1S,3R)-3-{[(1-甲基环丁基)氨甲酰基]氧基}环戊基]-1H-吡唑-1-甲酸乙酯(18D, 430 mg, 100%粗制物)。MS: 351 [M+H]+；373 [M+Na]+。
在室温(35℃)将粗制的5-氨基-3-[(1S,3R)-3-{[(1-甲基环丁基)氨甲酰基]氧基}环戊基]-1H-吡唑-1-甲酸乙酯(18D, 100.0 mg, 0.285 mmol)和2-(5-甲基-1,3,4-噻二唑-2-基)乙酸钠(CAS# 1909316-87-5, 77.6 mg, 0.428 mmol)悬浮于二氯甲烷(10 mL)中。加入二异丙基乙基胺(184 mg, 1.43 mmol)和丙基膦酸酐(T3P®, 50重量%的在EtOAc中的溶液，545 mg, 0.856 mmol)，并将得到的溶液在35℃搅拌3小时。将反应混合物用水(3mL)、饱和NH4Cl水溶液(2 x 3mL)和饱和NaCl水溶液(3 mL)洗涤。将有机层经硫酸钠干燥，过滤，并浓缩以得到作为浅黄色树胶的粗制的3-[(1S,3R)-3-{[(1-甲基环丁基)氨甲酰基]氧基}环戊基]-5-{[(5-甲基-1,3,4-噻二唑-2-基)乙酰基]氨基}-1H-吡唑-1-甲酸乙酯(18E, 140 mg, 100%粗制物)。MS: 513 [M+Na]+。
将粗制的3-[(1S,3R)-3-{[(1-甲基环丁基)氨甲酰基]氧基}环戊基]-5-{[(5-甲基-1,3,4-噻二唑-2-基)乙酰基]氨基}-1H-吡唑-1-甲酸乙酯(18E, 140 mg, 0.285 mmol)和氢氧化锂一水合物(35.9 mg, 0.856 mmol)在甲醇(5 mL)和水(1 mL)中的混合物在室温(35℃)搅拌30分钟，然后静置过夜。将悬浮液浓缩至~3 mL，通过过滤除去固体，并将滤液通过DuraShell 150*25mm*5µm柱上的制备型HPLC纯化，用27-47%的水(0.05%氢氧化铵v/v)在乙腈中的溶液洗脱。将含有产物的级分冻干以后，得到作为白色固体的(1-甲基环丁基)氨基甲酸(1R,3S)-3-(3-{[(5-甲基-1,3,4-噻二唑-2-基)乙酰基]氨基}-1H-吡唑-5-基)环戊酯(实施例18, 30.89 mg, 26%，通过手性分析SFC为>99%ee)。1H NMR (500MHz, DMSO-d6)δ = 12.14 (br s, 1H), 10.78 (s, 1H), 7.18 (br s, 1H), 6.30 (br s, 1H), 4.97(br s, 1H), 4.19 (s, 2H), 3.13-2.95 (m, 1H), 2.69 (s, 3H), 2.48-2.40 (m, 1H),2.21 (br s, 2H), 1.99 (br d, J=8.9 Hz, 1H), 1.92-1.83 (m, 1H), 1.82-1.75 (m,2H), 1.74-1.63 (m, 4H), 1.57 (br s, 1H), 1.34-1.23 (m, 3H)。MS: 419 [M+H]+。
通过本文举例说明的方法的修改，制备本发明的另外化合物。当手性起始反应物可用时，将化合物制备和分离为具有如其结构上的(R)和(S)标记所示的已知绝对构型的单一立体异构体。当使用外消旋起始反应物时，将化合物合成为非对映异构体的混合物，并然后在表征和试验之前通过适当的手性制备型HPLC或SFC方法分离成单一立体异构体。在这些情况下，用楔形键绘制已知的立构中心，并用(R)和(S)标记标注；未知的立构中心被绘制为带星号的平面键，且在表2中包含了解释。在已知相对而非绝对立体化学的情况下，用带星号的楔形键绘制结构，没有(R)和/或(S)标记，并在表2中包含了解释。
选定的化合物及其相应的表征数据列于下表2中。
表2
通过本文举例说明的方法的修改来制备本发明的另外化合物，并显示在表3中。
表3
生化测定
CDK2/细胞周期蛋白E1全长迁移率变动测定
CDK2/细胞周期蛋白E1测定的目的是通过使用基于荧光的微流体迁移率变动测定来评价小分子抑制剂的抑制(%抑制, Kiapp和Ki值)。CDK2/细胞周期蛋白E1全长催化从ATP产生ADP，伴有磷酰基向底物肽FL-肽-18 (5-FAM-QSPKKG-CONH2, CPC Scientific,Sunnyvale, CA) (SEQ ID NO:1)的转移。迁移率变动测定在激酶反应后电泳分离荧光标记的肽(底物和磷酸化的产物)。通过LabChip EZ Reader测量底物和产物并使用这些值的比率来产生底物到产物的％转化率。在内部生产野生型CDK2/野生型全长细胞周期蛋白E1酶复合物(杆状病毒表达, LJIC-2080/LJIC-2103)，并在有10 mM MgCl2和5 mM ATP存在下在室温以50:1 (浓度mg/mL)的CDK2:CDK7比例通过CDK7/细胞周期蛋白H1/Mat1酶复合物进行磷酸化1小时。典型的反应溶液(50 μL最终反应体积)含有在25 mM HEPES缓冲液（pH 7.15）中的2%DMSO (±抑制剂)、4 mM MgCl2、1 mM DTT、150 μM ATP (ATP K m = 67.4 μM)、0.005%吐温-20、3 μM FL-肽-18和0.36 nM (催化活性的活性位点)磷酸化野生型全长CDK2/细胞周期蛋白E1酶复合物。在室温在反应混合物中用酶和抑制剂预温育15分钟后，通过加入ATP开始测定。在室温45分钟后通过添加50 μL 80 mM EDTA终止反应。通过将数据拟合至酶浓度作为变量的Morrison紧密结合竞争抑制方程1, 2来确定Ki值。
GSK3β(GSK3β)迁移率变动测定
GSK3β测定的目的是通过使用基于荧光的微流体迁移率变动测定来评价小分子抑制剂的抑制(%抑制, Kiapp和Ki值)。GSK3β催化从ATP产生ADP，伴有磷酰基向底物肽FL-肽-15(5-FAM-KRREILSRRPpSYR-COOH, CPC Scientific, Sunnyvale, CA) (SEQ ID NO:2)的转移。迁移率变动测定在激酶反应后电泳分离荧光标记的肽(底物和磷酸化的产物)。通过LabChip EZ Reader测量底物和产物并使用这些值的比率来产生底物到产物的％转化率。活性GSK3β (H350L)购自Upstate/Millipore。典型的反应溶液(50 μL最终反应体积)含有在25 mM HEPES缓冲液（pH 7.5）中的2%DMSO (±抑制剂)、4 mM MgCl2、1 mM DTT、40 μMATP (ATP K m = 9.43 μM)、0.005%吐温-20、2 μM FL-肽-15和0.6 nM GSK3β。在室温在反应混合物中用酶和抑制剂预温育15分钟后，通过加入ATP开始测定。在室温30分钟后通过添加50 μL 80 mM EDTA终止反应。通过将数据拟合至酶浓度作为变量的Morrison紧密结合竞争抑制方程来确定Ki值。参见Morrison, J. F. (1969) Kinetics of the reversibleinhibition of enzyme-catalysed reactions by tight-binding inhibitors,Biochimica et biophysica acta 185, 269-286; Murphy, D. J. (2004)Determination of accurate KI values for tight-binding enzyme inhibitors: anin silico study of experimental error and assay design, Analytical biochemistry 327, 61-67。
CDK4/细胞周期蛋白D1迁移率变动测定
CDK4/细胞周期蛋白D1测定的目的是通过使用基于荧光的微流体迁移率变动测定来评价在有小分子抑制剂存在下的抑制(%抑制，Kiapp和Ki值)。CDK4/细胞周期蛋白D3催化从ATP产生ADP，伴有磷酰基向底物肽5-FAM-Dyrktide (5-FAM-RRRFRPASPLRGPPK) (SEQ IDNO:3)的转移。迁移率变动测定在激酶反应后电泳分离荧光标记的肽(底物和磷酸化的产物)。通过LabChip EZ Reader测量底物和产物并使用这些值的比率来产生底物到产物的％转化率。典型的反应溶液含有在40mM HEPES缓冲液（pH7.5）中的2%DMSO (±抑制剂)、10 mMMgCl2、1 mM DTT、3.5 mM ATP、0.005%TW-20、3 μM 5-FAM-Dyrktide、3 nM (活性位点)活化的CDK4/细胞周期蛋白D1。
在反应混合物中将酶和抑制剂在22℃预温育18分钟以后，通过加入ATP (50 μL最终的反应体积)开始活化的CDK4/细胞周期蛋白D1(2007 E1/2008 +PO4)的抑制剂Ki确定。在195分钟以后通过加入50 μL 30 mM EDTA停止反应。由拟合至酶浓度作为变量的Morrison方程的分数速度(fractional velocity)随抑制剂浓度变化的图进行Ki确定。
CDK6/细胞周期蛋白D3迁移率变动测定
CDK6/细胞周期蛋白D3测定的目的是通过使用基于荧光的微流体迁移率变动测定来评价在有小分子抑制剂存在下的抑制(%抑制、Kiapp和Ki值)。CDK6/细胞周期蛋白D3催化从ATP产生ADP，伴有磷酰基向底物肽5-FAM-Dyrktide (5-FAM-RRRFRPASPLRGPPK) (SEQ IDNO:3)的转移。迁移率变动测定在激酶反应后电泳分离荧光标记的肽(底物和磷酸化的产物)。通过LabChip EZ Reader测量底物和产物并使用这些值的比率来产生底物到产物的％转化率。典型的反应溶液含有在40mM HEPES缓冲液（pH7.5）中的2%DMSO (±抑制剂)、2%甘油、10 mM MgCl2、1 mM DTT、3.5 mM ATP、0.005%吐温20 (TW-20)、3 μM 5-FAM-Dyrktide、4nM (活性位点)活化的CDK6/细胞周期蛋白D3。
在反应混合物中将酶和抑制剂在22℃预温育18分钟以后，通过加入ATP (50 μL最终的反应体积)开始活化的CDK6/细胞周期蛋白D3 (LJIC-2009G1/2010 +PO4)的抑制剂Ki确定。在95分钟以后通过加入50 μL 30 mM EDTA停止反应。由拟合至酶浓度作为变量的Morrison方程的分数速度(fractional velocity)随抑制剂浓度变化的图进行Ki确定。
对于拟合由CDK4和CDK6迁移率变动测定产生的紧密结合抑制剂数据，方程和原理源自Morrison, J. F. (1969) Kinetics of the reversible inhibition of enzyme-catalysed reactions by tight-binding inhibitors, Biochimica et biophysica acta 185, 269-286；和Murphy, D. J. (2004) and Determination of accurate Kivalues for tight-binding enzyme inhibitors: an in silico study ofexperimental error and assay design, Analytical biochemistry 327, 61-67。
生物活性数据
本发明的代表性化合物的生物活性数据提供在下面表4中。
表4
选择的化合物的额外生物活性数据提供在下面表5中。
表5
在说明书中引用的所有出版物和专利申请通过引用整体并入本文。本领域普通技术人员会明白，可以对其做出某些变化和改进，而不偏离所附权利要求书的精神或范围。
序列表
<110> Pfizer Inc.
Behenna, Douglas C
Freeman-Cook, Kevin D
Hoffman, Robert L
Nagata, Asako
Ninkovic, Sacha
Sutton, Scott C
<120> CDK2抑制剂
<130> PC72484A
<160> 3
<170> PatentIn 3.5版
<210> 1
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> 合成构建体
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(1)
<223> 5-FAM 标记的谷氨酰胺
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (6)..(6)
<223> 甘氨酸 羧酰胺
<400> 1
Gln Ser Pro Lys Lys Gly
1 5
<210> 2
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> 合成构建体
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(1)
<223> 5-FAM标记的赖氨酸
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (11)..(11)
<223> 在丝氨酸上磷酰化
<400> 2
Lys Arg Arg Glu Ile Leu Ser Arg Arg Pro
1 5 10
<210> 3
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> 合成构建体
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(1)
<223> 5-FAM标记的精氨酸
<400> 3
Arg Arg Arg Phe Arg Pro Ala Ser Pro Leu Arg Gly Pro Pro Lys
1 5 10 15

Claims (16)

1.式(I)的化合物：
或其药学上可接受的盐，其中：
R1是-L1-(5-10元杂芳基)或-L1-(C6-C12芳基)，其中所述5-10元杂芳基或C6-C12芳基任选地被一个或多个R4取代；
R2和R3独立地是H、C1-C6烷基、C1-C6氟代烷基、-L2-(C3-C7环烷基)或-L2-(4-7元杂环基)，其中每个所述C1-C6烷基和C1-C6氟代烷基任选地被一个或多个R5取代，且每个所述C3-C7环烷基和4-7元杂环基任选地被一个或多个R6取代；且其中所述4-7元杂环基是含有至少一个选自N、O和S的杂原子作为环成员的非芳族饱和环系；或者
R2和R3与它们所连接的N-原子一起形成4-6元杂环基，所述杂环基任选地含有选自O、N(R7)和S(O)q的额外杂原子作为环成员，其中所述4-6元杂环基任选地被一个或多个R8取代；
每个L1和L2独立地是键或任选地被一个或多个R9取代的C1-C2亚烷基；
每个R4独立地是F、Cl、OH、CN、NR10R11、C1-C4烷基、C1-C4氟代烷基、C1-C4烷氧基、C1-C4氟代烷氧基、C3-C8环烷基、C(O)NR10R11、SO2R12、SO(＝NH)R12或SO2NR10R11，其中每个C1-C4烷基和C1-C4氟代烷基任选地被一个或多个R13取代；
每个R5独立地是OH或C1-C4烷氧基；
每个R6独立地是OH、C1-C4烷基或C1-C4氟代烷基，其中每个C1-C4烷基和C1-C4氟代烷基任选地被一个或多个R13取代；
R7是H、C1-C4烷基或C(O)-C1-C4烷基；
每个R8独立地是OH、C1-C4烷基、C1-C4烷氧基或CN；
每个R9独立地是C1-C2烷基；
每个R10和R11独立地是H或C1-C4烷基；
每个R12是C1-C4烷基或C3-C6环烷基；
每个R13独立地是OH或C1-C4烷氧基；且
q是0、1或2。
2.具有式(II)的权利要求1所述的化合物：
或其药学上可接受的盐。
3.式(III)的化合物：
或其药学上可接受的盐，其中：
R1是-L1-(5-10元杂芳基)或-L1-(C6-C12芳基)，其中所述5-10元杂芳基或C6-C12芳基任选地被一个或多个R4取代；
R2和R3独立地是H、C1-C6烷基、C1-C6氟代烷基、-L2-(C3-C7环烷基)或-L2-(4-7元杂环基)，其中每个所述C1-C6烷基和C1-C6氟代烷基任选地被一个或多个R5取代，且每个所述C3-C7环烷基和4-7元杂环基任选地被一个或多个R6取代；且其中所述4-7元杂环基是含有至少一个选自N、O和S的杂原子作为环成员的非芳族饱和环系；或者
R2和R3与它们所连接的N-原子一起形成4-6元杂环基，所述杂环基任选地含有选自O、N(R7)和S(O)q的额外杂原子作为环成员，其中所述4-6元杂环基任选地被一个或多个R8取代；
每个L1和L2独立地是键或任选地被一个或多个R9取代的C1-C2亚烷基；
每个R4独立地是F、Cl、OH、CN、NR10R11、C1-C4烷基、C1-C4氟代烷基、C1-C4烷氧基、C1-C4氟代烷氧基、C3-C8环烷基、C(O)NR10R11、SO2R12、SO(＝NH)R12或SO2NR10R11，其中每个C1-C4烷基和C1-C4氟代烷基任选地被一个或多个R13取代；
每个R5独立地是OH或C1-C4烷氧基；
每个R6独立地是OH、C1-C4烷基或C1-C4氟代烷基，其中每个C1-C4烷基和C1-C4氟代烷基任选地被一个或多个R13取代；
R7是H、C1-C4烷基或C(O)-C1-C4烷基；
每个R8独立地是OH、C1-C4烷基、C1-C4烷氧基或CN；
每个R9独立地是C1-C2烷基；
每个R10和R11独立地是H或C1-C4烷基；
每个R12是C1-C4烷基或C3-C6环烷基；
每个R13独立地是OH或C1-C4烷氧基；且
q是0、1或2。
4.权利要求1-3中的任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R1是-L1-(5-10元杂芳基)，其中所述5-10元杂芳基任选地被一个或多个R4取代。
5.权利要求4所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中所述5-10元杂芳基是吡唑基、三唑基、异噁唑基、噁唑基、噻唑基、噻二唑基、咪唑基、吡啶基、吡嗪基、吲唑基或苯并咪唑基，其中所述5-10元杂芳基任选地被一个或多个R4取代。
6.权利要求5所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中所述5-10元杂芳基是任选地被一个或多个R4取代的吡唑基。
7.权利要求5所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中所述5-10元杂芳基是任选地被一个或多个R4取代的异噁唑基。
8.权利要求1-3中的任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中L1是键或亚甲基。
9.权利要求1-3中的任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中每个R4独立地是C1-C4烷基或C1-C4烷氧基，其中每个C1-C4烷基任选地被一个或多个R13取代。
10.权利要求1-3中的任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R2是H且R3是C1-C6烷基。
11.权利要求1-3中的任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R2是H且R3是-L2-(C3-C7环烷基)，其中所述C3-C7环烷基任选地被一个或多个R6取代。
12.权利要求11所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中L2是键或亚甲基。
13.选自以下的化合物：
丙烷-2-基氨基甲酸(1R,3S)-3-[3-({[3-(甲氧基甲基)-1-甲基-1H-吡唑-5-基]羰基}氨基)-1H-吡唑-5-基]环戊酯；和
(1-甲基环丙基)氨基甲酸(1R,3S)-3-(3-{[(3-甲基-1,2-噁唑-5-基)乙酰基]氨基}-1H-吡唑-5-基)环戊酯。
14.一种化合物，其中所述化合物是一水合物。
15.一种药物组合物，其包含权利要求1-14中的任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，和药学上可接受的载体或赋形剂。
16.权利要求1-14中的任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐用于制备药物的用途，所述药物用于在有此需要的对象中治疗癌症。
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