CN1132597C - 中药锦鸡儿活性部位及其在制备药物组合物中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明提供一种中药锦鸡儿活性部位(简称Hu-ECS)及其提取方法，包括醇提，水提，层析等过程。同时提供此活性部位直接或与药学上通常用于制剂的固体或液体混合制成适宜制剂的方法。还涉及锦鸡儿活性部位制剂在防治原发性骨质疏松症和妇女绝经期综合征中的用途。

Description

中药锦鸡儿活性部位及其在制备药物组合物中的应用

本发明是关于从中草药锦鸡儿和红花锦鸡儿等锦鸡儿属植物的根中提取活性部位制成药物用于防治原发性骨质疏松症和绝经期综合征。

原发性骨质疏松症和绝经期综合征是广大妇女中年以后严重影响生活质量的健康问题，确立预防和治疗方法是医药研究的热点。原发性骨质疏松症目前主要使用钙制剂、维生素D、降钙素和雌激素等补充治疗，雌激素拮抗剂雷诺昔芬(Renoxifen)、羟膦类等药物治疗，防治效果并不令人满意。绝经期综合征主要使用雌激素替代疗法。由于长期使用雌激素会增加患乳腺癌和子宫内膜癌的危险性，使用受到一定限止。近年来，从自然界存在的丰富天然药物中，尤其是从传统的中草药中寻找防治药物已引起广泛关注。

本发明的目的是提供中药锦鸡儿(Caragana sinica)和红花锦鸡儿(Caragana Rosea)根的活性部位及其提取方法。

本发明的另一目的是将上述活性部位作为药物制剂的原料。

本发明还有一个目的是提供上述活性部位在制备防治原发性骨质疏松症和绝经期综合症药物组合物的应用。

本发明中草药金雀根为豆科锦鸡儿的干燥根，最早收载于《本草纲目拾遗》和《救荒本草》古籍中，上海市中药材标准(1994年版)中用于跌打损伤，体湿浮肿，风湿痛等治疗。

本发明通过大量的化学和药理研究测得，中药锦鸡儿的根(又名金雀根)和同属植物红花锦鸡儿的根含有丰富的低聚二苯乙烯类和异黄酮类成分，而且这些成分集中于提取物的一个特定部位(简称Hu-ECS)，此部位可作为药物制剂的原料。

本发明通过下述方法提取活性部位：

①取锦鸡儿或红花锦鸡儿的干燥根，粉碎后用80-100℃的水煎煮或50％-95％的乙醇(或甲醇)提取。

②水煎药液浓缩液用60％-95％乙醇溶解的醇可溶部分，而乙醇或甲醇提取的浸膏用3-20倍量水搅拌，取其沉淀部分。

③上述醇可溶部分或水沉淀部分，经真空干燥或喷雾干燥，用硅胶检查，其中含有Kobophenol A和α-viniferin二个斑点之间的部位占干燥品的全重比率在30％-80％之间。

根据上述方法提取的活性部位，经硅胶柱层析和R18反相硅胶层析，从中并分离到6种低聚二苯乙烯类化合物：α-viniferin，Miyabenol C，Pallidol，Caraphenol，Isoampelopsin F和KobophenolA。

上述活性部位用硅胶薄层层析，氯仿∶甲醇(4∶1)展开，三氯化铁试剂显色，得二个主要的污绿色斑点，R_f值分别为0.30和0.20左右，前者为α-viniferin，后者为Kobophenol A。

上述活性部位用HPLC测定，使用ODS柱，pH4.56的醋酸-醋酸钠缓冲液∶甲醇(53∶47)，在15-18℃，流速1ml/min，检测波长279nm。α-viniferin和Kobophenol A可以得到很好分离和检测。

本发明锦鸡儿活性部位的提取物干燥粉末可作为药物原料制成胶囊、片剂、散剂以及复方制剂。

经动物实验和临床治疗结果证明，锦鸡儿活性部位对小鼠显示植物雌激素样作用，对大鼠成骨细胞有促进增殖的作用，可预防切除卵巢大鼠的骨密度下降和骨代谢标准改变，锦鸡儿活性部位的胶囊剂经临床试验，对改善绝经期后妇女的腰背和膝关节疼痛有明显效果。

以下列举实施例更具体地说明本发明，实施例所示成分、比率、操作条件和顺序等可在不脱离本发明精神的限定内适当变更。

实施例1

锦鸡儿根或红花锦鸡儿根粗粉(以下简称生药)10kg，用85％以上乙醇(或甲醇)热提二次，每次2小时，60℃以下减压浓缩至浸膏。浸膏拌100-200目硅胶后，常法上硅胶柱，用氯仿洗脱，弃去氯仿洗脱物，然后用氯仿—丙酮(含1％丙酮-全丙酮)洗脱，薄层层析检查，收集从α-viniferin斑点出现至Kobophenol A斑点基本洗完的流份为有效部位，真空干燥得粉末，约0.25kg。

实施例2

生药10kg，用85％以上乙醇或甲醇热提二次，每次2小时，60℃以下减压浓缩得浸膏。常法上硅胶柱，石油醚—乙醚(1∶1)洗脱后改用氯仿—甲醇(或乙醇)洗脱，同实施例1进行薄层层析检查，有效部位真空或喷雾干燥得粉末，得率0.15-0.32kg。

实施例3

生药10kg，用80％以上乙醇或甲醇冷浸1-2天后渗滤，收集8-12倍量渗滤液，60℃以下减压浓缩至浸膏，约0.3-0.8kg，浸膏用2-3倍量石油醚(60-90℃)搅拌，分去石油醚层，余下的浸膏取6-20倍量40℃以上热水边加边搅拌，静置沉淀，过滤，沉淀物真空或喷雾干燥，得干粉0.25kg左右。

实施例4

生药10kg，用热水煎提三次，第一次加水10倍量，煮沸3小时，第二、三次加水8倍量，煮沸2小时，趁热过滤，滤液减压浓缩至密度为1.2左右的浸膏，加入乙醇至醇浓度为70％，搅匀后静置沉淀16小时以上，上清液减压浓缩得浸膏，此浸膏用等量乙酸乙酯提取三次，乙酸乙酯提取液浓缩后真空或喷雾干燥，得干粉0.2kg左右。

实施例5

取干燥的锦鸡儿有效部位提取物干燥粉末，过60目筛，添加适量微晶纤维素、淀粉或其他赋形剂，按常规方法分别制成胶囊剂、片剂、散剂、颗粒剂、丸剂等内服剂型。

实施例6

测试本发明之锦鸡儿活性部位的植物雌激素作用。

取18-22g成年雌性小鼠，摘除两侧卵巢，休息5天后进行阴道涂片，每日一次，连续一周，以检查卵巢是否摘除完全，挑选阴道涂片无角化细胞的小鼠用于实验，按表1随机分为4组，各组分别连续给药30天，每天一次，同时每天阴道涂片一次，最末一次给药后24小时处死动物，取出子宫，剥离周围脂肪组织，滤纸吸干水分，称重并换算成10g体重子宫重量，结果见表1：

表1 Hu-ECS雌激素作用(x±sd)组别            剂量       给药  动物      角化细胞发生率^*   子宫重量        P值

            (g/kg)     途径  数     I     II   III IV     (mg/10g体重)0.5％CMC        -          ig    11     0     0     0  0      3.546±1.173Hu-ECS          0.6        ig    12     17％  17％  0  0      5.187±1.131    P＜0.01Hu-ECS          0.25       ig    11     36％  0     0  0      5.014±2.097    P＞0.05苯甲酸雌二醇    0.5μg/只  sc    13     0     0     0  100％  39.421±11.286  P＜0.01

^*角化细胞出现的百分率＜25％为I；＜50％为II；＜75％为III；＜100％为IV。

以上试验结果表明Hu-ECS能增加去卵巢小鼠的子宫重量，阴道涂片角化细胞主要表现为I-II级，但维持时间极短，阳性发生率低于36％，提示Hu-ECS具有植物雌激素样作用。

实施例7

Hu-ECS对雌性卵巢切除大鼠骨质疏松防治作用的初步观察。

用1年龄SD雌性大鼠，卵巢切除后第3天起灌药，每日一次，连续3个月后处死，测试有关骨代谢指标，结果显示给药组的骨代谢指标获得不同程度的改善，与尼尔雌醇组的改善程度相近。Hu-ECS剂量：L：0.275g/kg，M：0.55g/kg，H：1.10g/kg。

表2  用药后股骨干重、灰重及钙含量变化(x±sd)

组别                干重             灰重              钙

                 (g/cm³)         (g/cm³)          g/m³)A   正常对照         1.208±0.065^**   0.907±0.062^*** 0.415±0.028^**B   切卵对照         1.113±0.081      0.780±0.041     0.385±0.015C   切卵+药(L)       1.202±0.047^**   0.830±0.050^*   0.417±0.034^*D   切卵+药(M)       1.188±0.059^*    0.828±0.045^*   0.406±0.023^*E   切卵+药(H)       1.172±0.048      0.810±0.043     0.386±0.022F   切卵+尼尔雌醇    1.200±0.078^**   0.849±0.069^*   0.405±0.019^*注：n＝10

与切卵对照组比较：*P＜0.05  **P＜0.01  ***P＜0.001

表3用药后骨后密度变化

  组别            全身BMD(g/cm²)             股骨BMD(g/cm²)

                  (n＝8)                        (n＝10)A   正常对照       0.404±0.025^*         0.234±0.024B   切卵对照       0.375±0.012   (-7.2)  0.223±0.027    (-4.7)  与A比C   切卵+药(L)     0.397±0.018^* (+5.3)  0.230±0.018    (+3.1)  与B比D   切卵+药(M)     0.396±0.018^* (+5.6)  0.231±0.021    (+3.6)  与B比E   切卵+药(H)     0.387±0.024   (+3.2)  0.220±0.019    (-0.4)  与B比F   切卵+尼尔雌醇  0.386±0.018   (+2.9)  0.224±0.028    (+0.4)  与B比注：与切卵对照组比较：^*P＜0.05

()为增减％

表4用药后各组骨小梁面积计量(x±sd)

    组别              椎体                 胫骨

                   (μm²/野)         (μm²/野)

A   正常对照       4.284±0.661^***   3.906±0.354^***

B   切卵对照       1.487±0.218       1.204±0.264

C   切卵+药(L)     2.328±0.536^***   2.732±0.962^***

D   切卵+药(M)     2.030±0.827       2.459±0.541^***

E   切卵+药(H)     2.166±0.412^***   2.049±0.517^***

F   切卵+尼尔雌醇  2.728±0.743^***   2.403±0.470^***

注：与切卵对照组比较：^***P＜0.001

    n＝9

实施例8

将锦鸡儿的有效部位制成胶囊剂(220mg/粒)，观察对绝经后妇女的影响，其中给药组18例，年龄54-68岁，绝经2年以上，对照组16例，年龄49-70岁，绝经2年以上。给药组，每天2粒胶囊，分早、晚二次口服，外加每日300mg磷酸氢钙。对照组，服安慰剂，外加每日300mg磷酸氢钙，经3个月服药观察，给药组的腰背和膝关节疼痛有明显改善，有效率85％以上，对肝肾功能、心电图无明显改变。

Claims (5)

1、一种中药锦鸡儿活性部位，其特征在于通过下述的方法提取，依次包括如下步骤：①取锦鸡儿或红花锦鸡儿的干燥根，粉碎后用80-100℃的水煎煮或50％-95％的乙醇或甲醇提取；②水煎药液浓缩液用60％-95％乙醇溶解，得醇可溶部分；而乙醇或甲醇提取的浸膏用3-20倍量水搅拌，取其沉淀部分；③上述醇可溶部分或水沉淀部分经真空干燥或喷雾干燥，用硅胶薄层检查，其中含有Kobophenol A和α-viniferin二个斑点之间的部位占干燥品的全重比率在30％-80％之间。

2、按权利要求1所述的中药锦鸡儿活性部位，其特征在于，用所述的活性部位干燥粉末作为原料制成胶囊、片剂、颗粒剂、丸剂或散剂以及复方制剂。

3、按权利要求1所述中药锦鸡儿活性部位，在制备促进成骨细胞生长的药物中的应用。

4、按权利要求1所述中药锦鸡儿活性部位，在制备防治原发性骨质疏松症药物中的应用。

5、按权利要求1所述中药锦鸡儿活性部位，在制备防治绝经期综合征药物中的应用。