CN1132012C - 癌症的检测和治疗 - Google Patents

Abstract

一种检测病人的癌症的方法，该方法包括把标记抗体或标记AFP导入病人的生物学样品以使标记抗体或标记AFP与AFP受体结合位点在生物学样品中反应的步骤，然后是在生物学材料中鉴定与标记抗体或标记AFP反应的AFP受体结合位点来确定癌的存在的步骤，优选的是，在导入步骤之前还有一个从病人身体中获得生物学样品的步骤。一种用于治疗病人癌细胞的方法，该方法包括给病人的癌细胞导入AFP受体抗体的步骤，然后是AFP受体抗体与癌细胞的AFP受体反应来抑制癌细胞的生长或杀死癌细胞的步骤。一种监测病人方法，该方法包括治疗病人的癌症的步骤，然后是在治疗之后以预定间隔检测病人的AFP受体位点水平的步骤。一种治疗病人的方法，该方法包括测试病人AFP受体的步骤，如果测试表明AFP受体存在于病人中，则然后是给病人导入AFP受体抗体或AFP以便与病人的癌细胞反应的步骤。一种治疗病人癌细胞的方法，该方法包括给病人癌细胞导入修饰的AFP的步骤，然后是使修饰的AFP与癌细胞的AFP受体反应来抑制癌细胞的生长或杀死癌细胞的步骤。

Description

癌症的检测和治疗

发明领域

本发明涉及癌症的检测和/或治疗。更详细地说，本发明利用存在的AFP受体为基础，测定病人的癌症或者包含或消除癌症。

发明背景

二十年以前，Abelev et al.报道了存在第一个癌胚抗原，α-胎蛋白(AFP)的存在[Abelev，G.I.，Perova，S.D.，Khramkova，N.I.，Postnikova，Z.A.和Irlin，I.S，.《移植》1，174(1963)]，虽然其是胎儿期的主要循环蛋白，但它在出生后差不多消失了，它的正常成人血清浓度低于50ng/ml[Ruoslahti，E.和Seppals.M.，《国际癌症杂志》8，374(1971)]。然而，在某些恶性疾病如肝癌或畸胎瘤中，其血浆水平可以高达一千倍以上[Kuoslahti，E.和Seppals，M.《高级癌症研究》29，275(1979)]。这一发现不仅引起了临床医师的注意，他们设想了一个检测恶性肿瘤和监测癌症病人的新方法，而且引起了研究者研究这个蛋白在胎儿生长过程中的生理作用的兴趣。

首先要研究的参数之一是胎儿中AFP的分布。利用免疫过氧化物酶方法，Benno和Williams描述了在发育的大鼠脑中AFP的分布[Benno.R.H.和Williams，T.H.，《脑研究》142，1982(1978)]。不久，一系列论文报告了在几个种类包括鸟和人的发育的神经细胞中血浆蛋白的分布[Trojan，J.和Uriel.J.，《癌发育生物医学研究杂志》1，107(1980)；Uriel.J.，Trojan，J.，Dubouch，P和Pieiro，A.，《病理生物学》30，79(1982)；Moro，R和Uriel，J.，《癌发育生物医学研究杂志》2，391(1981)；Dzigielewska，K.M.，Evans.C.A.N.，Lorscheides E.L.，Malinowska，D.H.，Mollgard，K.，Reynolds，M.L.，和Saunders，N.R.，《生理学杂志》318，239(1981)；Mollgard，K.，Jacobsen，M.，Krag-Jaeobsen，G.，Praetorius-Claussen，P.和Saunders，N.R.，《神经科学通信》14，85(1979)]。对于一个给定的组织或器官，不同的种类间AFP和SA染色的动力学是一个相当稳定的图案[Uriel.J.，Trojan，J.，Moro.R.和Pieiro，A.，《纽约科学学术年鉴》417，321(1983)]。当一个神经结构发育非常不成熟时，检测不到细胞内的AFP或SA。然后，突然，并在不同种类的生长时间上的某一时期，同时观察到这两种蛋白质，甚至于它们在同一细胞中[Torand-Allerand，C.D.，《自然》286，733(1980)]。随后，首先是AFP后来是SA，染色强度减退，阳性细胞变少，在成熟结构中两种蛋白是阴性的，其它血清成份，如IgG，或鸡胚中的卵清蛋白，尽管存在于脑脊液中，但在胎儿期从没在神经细胞中发现，[Fielitz，W.，Esteves，A.和Moro.R.，《发育脑研究》13.111(1984)]。

通过胚胎细胞掺入AFP

从最初的观察中提出的一个问题是AFP和SA是从胞外源掺入还是原位合成。由于仍不清楚是否神经细胞能够合成血浆蛋白，[Ali，M.，Raul，H.和Sahib，M.，《发育脑研究》1，618(1981)；Ali，M.，Mujoo，K.和Sahib，M.，《发育脑研究》6，47(1983)；Schachter，B.S.和Toran-Allerand，C.D.，《发育脑研究》5，95(1982)；Pieiro，A.，Calvo，M.，Iguaz，F.，Lampreave，F和Neval，J..《国际生化杂志》14，817(1982)]，在体外[Uriel，J.，Faivre-Bauman，A.，Trojan，J.和Foiret，D.《神经科学通信》27，171(1981)；Hajeri-Germond，M.，Trajan，Uriel，J.和Hauw，J.《发育神经科学杂志》6，111(1984)]和在体内[Villacampa，M.J.，Lampreave，F.，Calvo，M.，Pieiro，A和Uriel，J.《发育脑研究》12，77(1984)，Moro，R.，Fielitz，W.，Grunberg，J.和Uriel，J.，《国际发育神经科学杂志》2，143(1984)]已经证明，成神经细胞能容易地从胞外源掺入AFP和血清清蛋白。利用同源和异源的蛋白进行了体内实验，在第一种情况中[Villacampa，M.J.，Lampreave，F.，Calvo，M.，Pieiro，A.和Uriel，J.《发育脑研究》12，77(1984)]，显示出在对怀孕的大鼠注射后，125I-AFP定位于胎脑，同时也在其它胎儿器官如肠，皮肤，和舌，以前已报道在这些器官中有天然细胞内AFP[Trojan，J.和Uriel，J.，《癌发育生物医学》3，13(1982)]。第二套实验[Moro，R.，Fielitz，W.，Grunberg，J.和Uriel，J.，《国际发育神经科学杂志》2，143(1984)]显示，当在鸡胚的中脑腔注射新生大鼠血清时，在它们的天生等同物的同一位置检测到大鼠AFP和大鼠SA。这也表明来自于一个种类的AFP和SA被另一种类的细胞吸收，从而指出了进化过程中保守的结构和机制。这又提示其中涉及一个基本生物学原理。

尽管注射了高浓度的大鼠IgG，但这个蛋白质的染色是阴性的，由于也检测不到卵清蛋白(MW＝43,000)，甚至于当注射两倍于胚胎的脑脊液中AFP的正常分子浓度时也检测不到，因此这不是它的能妨碍被动扩散的高分子量(150,000)的结果，[Fielitz，，W.，Esteves，A.和Moro，R.，《发育脑研究》13，111(1984)]。这一选择性支持了内吞作用的特异受体传递机制的假说[Moro，R.和Uriel，J.，《癌发育生物医学杂志》2，391(1981)；Moro，R.，Fielitz，W.，Grunberg，J.和Uriel，J.，《国际发育神经科学杂志》2，143(1984)]。

AFP的掺入依赖于细胞分化

然而，目前仍未清楚是否AFP和SA的吸收是一个依赖细胞的现象，或者是否由于在胎儿期结束时脑血屏障的关闭或低浓度的循环AFP而导致的胞外蛋白质的可获得性较低而引起染色消失。首先在鸡中[Moro，R.，《神经科学通信》41，253(1983)]，然后在人胎儿中[Jacobsen，M.，Lassen，L.C.和Mollgard，K.，《肿瘤生物学》5，55(1984)]已经证明，在获得血清中AFP的最高峰之前，脊柱神经节神经细胞完成了完整的阴性-阳性-阴性染色循环。此外，当AFP变得不可测时，SA仍继续存在一段时间，从而表明这些血清蛋白已经到达神经节成神经细胞。

未成熟细胞内的AFP受体

AFP的细胞吸收表明存在一个根据细胞分化程度调节其表达的特异受体[Uriel，J.，Trojan，J.，Moro，R.和Pieiro，A.，《纽约学术科学年鉴》417，321(1983)；Moro，R.，《神经科学通信》41，253(1983)]，先前的报道[Uriel.J.，Bonillon，D.，Russel，C和Dupiers，M.，《美国国家科学进展》73，1452(1976)]表明在未成熟大鼠的子宫细胞溶质中存在两种含有AFP的超速离心部分；一个完全对应于AFP的4S部分，另一个只能在用0.4MKCL处理后进行AFP的免疫学检测的8S部分，这一处理把8S部分转化成4S。即使在AFP受体的概念还没有产生的时候，8S部分很可能对应于一个在高KCl浓度时解离的受体-AFP复合物。Smalley和Sarcione也观察到了利用KCl解离AFP-受体复合物[Smalley，J.R.和Sarcione，E.J.《生物化学生物物理研究通讯》94，1429(1980)]，他们也提供了AFP分子能被未成熟的大鼠的子宫细胞合成的证据。

AFP受体在癌细胞中的表达

由于癌细胞具有许多与胎儿细胞相同的生化的和抗原特征[Uriel，J.，《高级癌症研究》29，127(1979)]，来源于在胎儿期掺入AFP的组织的恶性细胞有可能再表达相应的受体从而再吸收AFP。为了支持这一假说，Sarcione等人[Sarcione，E.J.，Zloty，M.，Delluomo，D.S，Mizejewski，G.和Jacobson.H.，《癌症研究》43，3739(1983)]在源于人乳腺癌的8S复合物中发现AFP，该复合物可以用相同于利用未成熟大鼠细胞溶质的实验的KCl处理方法来解离。最近，这些作者已经证明MCF-7人乳房癌细胞系以复合物形式合成AFP，为了使AFP变成免疫学可测，该复合物需要分解[Sarcione，E.J.和Hart，D.，《国际癌症杂志》35，315(1985)]。在另一方面，已证明这一细胞系[Uriel，J.，Failly-Crepin，C.，Villacampa，M.J.，Pieiro，A.，和Gueskens，M.，《肿瘤生物学》5，41(1984)]，和一个镍诱导的大鼠横纹肌肉瘤[Uriel，J.，Poupon，M.F.和Geuskens，M.，《英国癌症杂志》48，263(1983)]在体外吸收AFP。作为这些间接结果的一个证据，在MCF-7细胞系检测到AFP的表面受体[Villacampa，M.J.，Moro，R.，Naval，J.，Failly-Crpin，Ch.，Lampreave，F.和Uriel，J.，《生物化学生物物理研究通讯》122，1322(1984)]。结合参数指出了一个展示阳性协同作用的两位点受体模型。高亲和位点有一个显示阳性协同作用的1.5×10^-9M的Kd。该高亲和位点有一个具有n-2000/细胞的1.5×10^-9M的Kd。以320,000/细胞存在的低亲和位点有一个2.2 ×10^-7M的Kd。后来的研究表明小鼠YACT淋巴瘤细胞的表面存在一个相似的受体体系，该体系在正常成年小鼠T细胞中缺乏[Naval，J.，Villacampa，M.J.，Goguel，A.F.和Uriel，J.《美国国家科学进展》82，3301(1985)]。

平行于体内实验也做了这些研究，其中用放射性碘标记的AFP注射携带自发乳腺肿瘤的小鼠。放射性的组织分布显示了肿瘤组织/正常组织(肝)的比例为3.6[Uriel，J.，Villacampa，M.J.，Moro，R.，Naval，J.和Failly-Crpin，CH.C.R.学术科学(巴黎)297，589(1983)；Uriel.J.，Villacampa.M.J.，Moro，R.，Naval，J.和Failly-Crpin，C.，《癌症研究》44，5314(1984)]。来自这些动物的肿瘤切片的放射自显影显示了环绕恶性细胞而不是正常细胞的核膜的明显的银颗粒的积累[Uriel，J.，Villacampa，M.J.，Moro，R.，Naval，J.和Failly-Crpin，C.，《癌症研究》44，5314(1984)]。

利用131I-AFP的小鼠肿瘤的闪烁照像成象

利用¹³¹I-AFP，已经获得小至3-4mm的鼠乳腺肿瘤的阳性闪烁图像[Uriel，J.，Villacampa，M.J.，Moro，R.，Naval，J.和Fuilly-Crpin，C.《癌症研究》44，5314(1984)；Moro，R，Heuguerot，C.，Vercelli-Retta，J.，Fielitz，W.，Lpez，J.J.和Roca，R.，《核医学通讯》5，5(1984)]，事实上，利用连接于计算机的标准γ-摄像机，可检测12个这样的肿瘤中的11个。用类似的方法，也可以扫描另一种小鼠肿瘤，即成神经细胞瘤[Hajeri-Germond，M.，Naval.J.，Trojan，J.和Uriel，J.，《英国癌症杂志》51，791(1985)]。

已经在几种不同类型的肿瘤中证明AFP吸收的表达或AFP受体的直接证据，这些肿瘤中的一些是：大鼠横纹肌肉瘤[Uriel，J.，Poupon，M.F.和Geuskens，M.，《英国癌症杂志》48，263(1983)]，小鼠成神经细胞瘤[Hajeri-Germond，M.Naval，J.，Trojan，J.和Uriel，J.，《英国癌症杂志》51，791(1985)]，小鼠和人乳腺癌[Villacampa，M.J.，Moro，R.，Naval.J.，Failly-Crpin，Ch，Lampreave，F和Uriel，J.，《生物化学生物物理研究通讯》122，1322(1984)；Naval，J.，Villacampa，M.J.，Goguel，A.F.和Uriel，J.《美国国家科学进展》82，3301(1985)；Uriel，J.，Villacampa，M.J.，Moro，R.，Naval，J.和Failly-Crpin，CH.C.R.学术科学(巴黎)297，589(1983)；Uriel，J.，Villacampa，M.J.，Moro，R.，Naval，J.和Failly-Crpin，C.，《癌症研究》44，5314(1984)；Moro，R.，Heuguerot，C.，Vercelli-Retta，J.，Fielitz，W.，Lpez，J.J.和Roca，R，《核医学通讯》5，5(1984)；Biddle，W.和Sarcione.E.J.，Breast《癌症研究》Treat.10.281(1987)]，小鼠T淋巴瘤[Naval，J，Villacampa，M.J.，Goguel，A.F.和Uriel，J.《美国国家科学进展》82，3301(1985)].人T和B细胞淋巴瘤[Laborda，J.，Naval，J.，Allouche，M.，Calvo，M.，Georgoulias，V.，Mishal，Z.和Uriel，J.《国际癌症杂志》40，314(1987)；Calvo，M.，Laborda，J.，Naval，J.，Georgoulias，V.和Uriel，J.发表在ISOBM的XIII次会议(巴黎1985)；Torres，J.M.，Anel，A.，和Uriel，J.，《细胞生理学杂志》150，458(1992)；Torres，J.M.，Gueskens，M.和Uriel，J，《国际癌症杂志》47，112(1991)]，以及phitto血凝素激活的人T淋巴细胞[Torres，J.M.，Laborda，J.，Naval，J.，Darracq，N.，Calvo，M.，Mishal，Z.和Uriel.J.《分子免疫学》26，851(1989)]，人恶性单核细胞系U937[Suzuki，Y.，Zeng，C.Q.，Alpert.E.《临床研究杂志》90，1530(1992)]和HT29人结肠癌细胞系[Esteban，C.，Gueskens.M.和Uriel.J.，《国家癌症杂志》49，425(1991)]。

这些发现把AFP受体看作是相关于恶性状态而不是肿瘤类型的广泛的癌胚抗原。

针对AFP受体的单克隆抗体

可能是由于固定过程中受体结合位点的部分变性和标记AFP对它的受体显示出的较低的亲和力，标记的AFP(FITC，放射性跟踪物)不结合到在石蜡组织切片中的肿瘤细胞上，所以，利用一组人乳房癌作为免疫原产生了针对AFP受体的单克隆抗体(Mabs)[Moro，R.，Tamaoki，T.，Wegmann.T.G.，Longenecker，B.M.，和Laderoute，M.P.《肿瘤生物学》14，116(1993)，该文引入作为参考文献]。

两个IgM产生的Mabs识别非还原条件下的PAGE凝胶上的一条67KD的双谱带。该67KD谱带也能与¹²⁵I-AFP反应。这些Mabs与AFP受体的结合位点反应，因为它们抑制AFP与肿瘤细胞的结合，并相反在过量AFP存在下他们与细胞的结合受到抑制，Mabs不与AFP反应。他们识别在组织切片中的胎儿细胞和乳房癌，但不识别乳腺腺瘤或者大多数其他正常成人组织。

在过去几十年中，科学家们已经试图鉴定与恶性相关的抗原。应被认为是一个癌胚抗原的AFP受体，可以满足临床有用的肿瘤标记的许多要求。利用这一广泛的与癌相关的抗原的单克隆抗体的进一步工作将使人们能够确定他们的临床用途，同时也能研究AFP受体的生理作用。

发明概述

本发明涉及一种检测病人癌症的方法，该方法包括将标记抗体或标记AFP导入到一个病人的生物学样品，以使标记抗体或标记AFP与生物学样品中的AFP受体结合位点反应的步骤，接着的步骤是鉴定生物学材料中与标记抗体或标记AFP反应的AFP受体结合位点，以确定癌的存在。优选地，在导入步骤之前，有一个从病人身体中获得生物学样品的步骤。

本发明涉及一种治疗病人癌细胞的方法，该方法包括给病人的癌细胞导入AFP受体抗体的步骤，接着的步骤是使AFP受体抗体与癌细胞的AFP受体反应来抑制癌细胞的生长或杀死癌细胞。

本发明涉及一种监测病人的方法，该方法包括治疗病人的癌症的步骤，接着的步骤是在治疗之后在预定的时间间隔检测病人的AFP受体位点水平。

本发明涉及一种治疗病人的方法，该方法包括检测病人的AFP受体的步骤，接着的步骤是如果测试显示病人存在AFP受体则将AFP受体抗体或AFP导入病人以便与病人的癌细胞反应的步骤。

本发明涉及一种治疗病人的癌细胞的方法，该方法包括给病人的癌细胞导入经修饰的AFP的步骤，接着的步骤是将修饰的AFP与癌细胞的AFP受体反应来抑制癌细胞的生长或杀死癌细胞。

本发明的目的是通过检测体液和组织中的α-胎蛋白受体(AFP受体)来诊断和跟踪癌症疾病和怀孕。尽管检测溶液中(体液)或附着于固体基质(组织切片)上的AFP受体的原理和方法是相似的，为了清楚起见将分别论述他们。

附图的简述

在附图中，本发明的优选实施方案和实施本发明的优选方法说明如下：

图1是一个癌性的和非恶性疾病的图。

图2是一个乳房癌的照片，其中明亮的细胞是癌性的。

图3是一个乳房癌的照片，其中暗棕色细胞是癌性的。

图4是良性乳腺瘤。

图5是肺癌的照片，其中棕色细胞是癌细胞。

图6是胃癌的照片，其中暗棕色的是癌细胞。

图7是肠癌的照片。

图8是显示AFPr-1对P-388生长的抑制的照片。

图9是注射五天后，上边三个对照动物和四个治疗动物的照片。

图10是另一个实验的动物照片，其中三个治疗动物解除了疾病，两个仍携带大的肿瘤。

优选实施方案的描述

本发明涉及一种检测病人的癌症的方法，该方法包括将标记的抗体或标记的AFP导入到病人的一个生物学样品中以使标记的抗体或标记的AFP与生物学样品中的AFP受体结合位点反应的步骤。生物学样品可以是血液、唾液、组织、血清、粘液、痰、尿或眼泪或含有癌细胞的材料。生物学样品可以是组织切片。组织切片可以是固定的组织，新鲜的组织或冷冻的组织。抗体可以是单克隆抗体，抗体可以是多克隆抗体。接着的步骤是在生物学材料中鉴定与标记抗体或标记AFP反应的AFP受体结合位点，以确定癌症的存在。优选地，在导入步骤之前，有一个从病人身体中获得生物学样品的步骤。

导入步骤包括将放射性同位素标记的抗体或放射性同位素标记的AFP导入到病人的生物学样品中以使标记抗体或标记AFP与生物学样品中的AFP受体反应的步骤，然后的鉴定步骤包括鉴定生物学样品中存在的放射性。更具体地说，鉴定步骤可以包括测量生物学样品的放射性计数的步骤，或者鉴定步骤包括用照像乳胶包被生物学样品，显影照像乳胶，观察包被的生物学样品的步骤。或者，生物学样品是病人，导入步骤包括用放射性同位素标记的抗体或放射性同位素标记的AFP注射病人的步骤。

在另一个实施方案中，导入步骤包括导入用酶标记的抗体或用酶标记的AFP到病人的生物学样品中以使标记抗体或标记AFP与生物学样品中的AFP受体结合位点反应的步骤，酶标记的抗体或酶标记的AFP改变了生物学样品的颜色，鉴定步骤可以包括把生物学样品的颜色与一个已知颜色相比较来确定癌症存在的步骤。酶可以是过氧化物酶，导入步骤包括导入过氧化物酶标记的抗体到病人的组织中的步骤。或者，导入步骤可以包括放一滴生物学样品到硝酸纤维素或尼龙的一个位置上，然后加过氧化物酶标记的抗体到这个位置的步骤。然后鉴定步骤包括确定是否在硝酸纤维素或尼龙上的这一位置改变了颜色的步骤。

在另一个实施方案中，酶标记的抗体或酶标记的AFP释放离子改变了处理样品的溶液的电导。因而鉴定步骤包括测定溶液的电导来确定生物学样品中癌的存在的步骤。

在另一个实施方案中，导入步骤可以包括导入萤光色素标记的抗体或萤光色素标记的AFP到生物学样品中以使标记抗体或标记AFP与生物学样品中的AFP受体反应的步骤，然后鉴定步骤包括用紫外光照射生物学样品，测量来自被照射的生物学样品的光辐射的步骤。作为另一个例子，生物学样品可以是在玻片上的含有癌细胞的生物学材料的涂片，鉴定步骤包括用显微镜或通过荧光细胞测定法检查涂片的步骤。

本发明涉及一种治疗病人癌细胞的方法，该方法包含导入AFP受体抗体到病人的癌细胞中的步骤。抗体可以是单克隆抗体，多克隆抗体，来自于不同于病人的种类的抗体，或来自于相同于病人的种类的淋巴细胞体外产生的抗体。然后还有一个步骤是使AFP受体抗体与癌细胞的AFP受体反应来抑制癌细胞的生长或杀死癌细胞。

导入步骤包括给病人注射AFP受体抗体的步骤，注射步骤可以包括通过静脉注射AFP抗体受体进入病人的血流的步骤，或者，注射步骤可以包括注射AFP受体抗体进入病人的一个邻近癌细胞的位置。

或者，导入步骤可以包括针对癌细胞免疫接种病人的步骤，免疫接种步骤可以包括注射一个不同于病人的种类的AFP受体进入病人来引起病人产生针对注射的AFP受体的AFP受体抗体的步骤。病人产生的AFP受体抗体与病人的AFP受体或癌细胞交叉反应。

反应步骤可以包括将AFP受体抗体与病人癌细胞的AFP受体反应以使癌细胞的AFP受体被封闭或功能受损的步骤。或者，AFP受体抗体是固定补体的AFP受体抗体。那么反应步骤即是使固定补体的AFP受体抗体与癌细胞反应以使当产生补体链反应时，在癌细胞的膜上穿孔杀死癌细胞。

或者，AFP受体抗体与药物或毒素偶联，然后，反应步骤包括使偶联药物或毒素的AFP受体抗体与癌细胞反应以使癌细胞吞没进入癌细胞的药物或毒素，在癌细胞中，癌细胞的酶把药物或毒素从抗体上切割下来引起细胞不可逆地损害或死亡。

在另一个实施方案中，AFP受体抗体是放射性标记的，接着的反应步骤是包括使放射性标记的AFP受体抗体与病人的癌细胞反应，以使放射性标记的AFP受体抗体从短距离对癌细胞DNA辐射，以损坏DNA从而诱导癌细胞的死亡。

本发明涉及一种监测病人的方法，该方法包括治疗病人的癌症的步骤，然后是在治疗之后在预定间隔测试病人的AFP受体位点水平。

本发明涉及一种治疗病人的方法，该方法包括测试病人的AFP受体的步骤，接着如果测试表明病人具有AFP受体则将AFP受体抗体或AFP导入病人以与病人的癌细胞反应。

本发明涉及一种治疗病人的癌细胞的方法，该方法包括导入修饰的AFP到病人的癌细胞中的步骤，修饰的AFP可以是合成地产生或者是AFP的一部分。接着的步骤是使修饰的AFP与癌细胞的AFP受体反应来抑制癌细胞或杀死癌细胞。

导入步骤可以包括给病人注射修饰的AFP的步骤，注射步骤包括通过静脉注射修饰的AFP进入病人的血流的步骤，或者，注射步骤包括注射修饰的AFP进入病人的一个邻近癌细胞的位置的步骤。

反应步骤可以包括使病人的癌细胞的AFP受体与修饰的AFP反应以使癌细胞的AFP受体位点被封闭或功能受损的步骤。

一般来说，除了运用或利用与AFP受体反应的AFP，修饰的AFP或抗体，本领域熟练技术人员一般是公知上述的技术。本发明的操作：在体液中：

在细胞死亡之后，通过分泌或通过被动扩散，来自癌或胎儿/胚胎组织的AFP受体可以被释放进入血流并从那里进入许多其他液象尿，眼泪，唾液等，然后在体液(包括血清)中AFP受体的浓度在健康个体和癌症或怀孕病人之间有明显的不同。这可以用于诊断，同时，AFP受体浓度在这些体液中的进化可以用于跟踪，例如：一病人被诊断有乳腺癌那么AFP受体的血清浓度是高的。病人被开刀并且肿瘤被移走，随后血清中AFP受体的测定显示了外科手术后的即刻的剧烈下降，接着是一个平稳阶段。然而六个月后血清中AFP受体的浓度又开始增加，这表示了癌症的再出现或转移，这可能领先于传统的临床或其他诊断方法，被所提出的一个不昂贵的测试所提醒；现在医师用更精确昂贵并且如果需要用侵害的方法寻找恶性块。在组织样品中：

AFP受体存在于大多数癌细胞中，所以，可以通过免疫组织学方法或用合适地标记的AFP温育来检测AFP受体(尽管后者还没有成功地用于石蜡切片，它只适用于冰冻切片)。在这个基础上可进行恶性疾病的诊断，除此之外，用萤光素作标记，在一个组织切片上可以点出很少的阳性细胞，这降低了传统病理学分析所产生的错误的界限，在传统病理学分析中，在一个正常组织中的少数癌细胞可能看不到。另外，由于AFP受体的表达不是以结构上变化而是以分化和生化变化为条件的，因而很可能看上去正常而事实上处于肿瘤发生早期的细胞在测试AFP受体的检测中会呈现阳性。

同样，为了清楚起见，尽管原理上没有差别并且所用的技术上仅有微小差别，在体液中和组织切片中的AFP受体的检测将被分别论述：体液：

实施例1

在本例中，通过酶免疫测定(EIA)测试了来自非癌病人的22个血清样品和来自癌症病人的17个样品的AFP受体浓度，所用的技术如下：用在磷酸缓冲盐水(PBS)(0.05MPO₄，0.15MNaCl，pH7.5)中稀释1/16384的来自上述组中的血清样品包被EIA96孔板1小时到过夜。以类似的方法以1/256稀释倍数用来自乳房癌肺转移的病人的胸膜渗出液包被一些孔。由于可大量获得，这一材料，称为P89被用作标准，这使得P89被用作同样的标准来比较所有实验中的所有样品和所有其他样品。在用PBS洗3次之后，1％在PBS中的卵白蛋白或明胶封闭非特异结合位点1小时。在洗3次之后，在每个孔中温育3小时100μl用1％在PBS中的卵白蛋白稀释1/200的鼠产生的抗AFP受体的单克隆抗体(Mab)腹水(如在[Moro，R.，Tamaoki，T.，Wegmann，T.G.，Longenecker.B.M.，和Laderante，M.P.《肿瘤生物学》14，116(1993)]所述的Mab167H.4，引为参考文献)，然后用PBS洗孔3次并且以厂家(Sigma Chemicals.S.Louis)所推荐的浓度加入商购的过氧化物酶抗小鼠IgM偶联物，1小时后用PBS洗板3次并且以厂家(Sigma)所推荐的浓度加入过氧化物酶的显色底物。在室温下做所有的温育，30分钟后，用一个标准的Titertek读板器在405nm处读出每个孔中的光密度(O.D.)，结果如表1和图1所示：

                      表1

          器官                  肿瘤类型1             卵巢                  粘液性腺癌2                                   淋巴性白血病3             肢体                  血管肉瘤4             子宫                  腺癌5             软组织                肉瘤6             卵巢                  囊性腺癌7             直肠                  腺癌8             骨盆                  癌病9                                   一般传播肿瘤10            脑                    星形细胞瘤11            肺                    瘤形成12            肝                    初级肝细胞瘤13            骨盆                  瘤形成14            肾                    瘤形成(转移)15            结肠                  瘤形成16            骨                    骨肉瘤

该表显示了研究过程中病人、肿瘤的类型以及样品与用作标准的P89的比例，结果表明当阳性和阴性的临界设定在54％的P89时，除一人外所有的癌症病人都是阳性，利用同样的界限除一人外所有的非癌病人都是阴性。一个单独的T-测试报告了如下值(利用Excel(TM))中数据分析)：t-测试：具有不等方差的两个样品

                  变量1           变量2平均                  84.74571        33.26582方差                  709.91373       300.2051观察资料              16              22Pearson相关           #N/A合并方差              3.5df                    24.02215t                     6.758736P(T＜＝t)单尾         2.72E-07t临界单尾             1.710882P(T＜＝t)双尾         5.44E-07t临界双尾             2.063898

一个双尾分析产生了P＝0.00000054，一个特别显著的数据，即使是对少量所考虑的样品也是如此。

在阴性对照组的一个病人(不在表中)是阳性的，被所获得的数据的高显著性所提醒，负责这一病人的医师用CAT扫描她并发现一个正好是恶性肾上腺样的肿瘤。这一恶性首先通过利用这一测试检测到，后来被临床证实。

图1示出了以图表表示的相同结果。在该图中，x轴分成两部分(恶性的和非恶性的，单位无关)，并且Y轴代表每个病人的P89的百分数。水平线代表54％+/-界限。

实施例2

在另一个实施方案中，用AFP受体的单克隆抗体(Mab)以适当的浓度包被一种适当的塑料的或玻璃基底(EIA板或试管)。在洗掉多余的Mab后，用一种不相关的蛋白质或氨基酸封闭基底以防止非特异结合，并且用所包被的基底温育病人的体液(血清、唾液、尿等)的合适的样品稀释液一段时间，在洗涤除去未结合的样品材料之后，加入多克隆类型的第二抗体(通过免疫动物产生多克隆抗体并利用它的血清作为反应的抗体源，其与Mab相反，Mab是通过培养无限增殖的脾细胞的个别克隆或移植进入一个合适的寄主而产生)，这个抗体可以与合适的标记或酶偶联以显色，或者，通过加入用所说的标记或酶标记的一个抗第二抗体可以进行可测定的反应或者测定。如果反应涉及这第三抗体，那么第二抗体应该在一个不同于第一抗体的种类中产生并且第一和第三抗体之间应观察到无交叉反应。然后通过对应于所进行的反应的类型(颜色，传导性，化学发光等)的一个合适的检测器来读这一反应。

实施例3

相同于实施例2但是使用了两个不同的多克隆抗体代替单克隆抗体和抗体以分别作为第一和第二抗体。

实施例4

相同于实施例2，其中的基底为硝酸纤维素或尼龙膜，反应不是通过仪器来测定，而是反应在基底上作为颜色点显示。用裸眼判断反应为阳性或阴性。

实施例5

相同于实施例3，其中的基底为硝酸纤维素或尼龙膜，反应不是通过仪器来测定，而是反应在基底上作为颜色点显示，通过裸眼看出反应为阳性或阴性。

实施例6

在实施例2-5中的抗体中的一个被结合到受体上的同源的或异源的AFP所替代。

实施例7

浓度超过0.4M的KCl解离AFP受体复合物，这可能会释放一定量的可能检测不到的AFP受体，因为被前例所述的配体(Mab，多克隆抗体或AFP)中之一识别可能被存在于循环AFP受体复合物中的内源AFP所削弱。结果，可以增加AFP受体的量从而增加测试的灵敏度。在本例中，可以在与分析法的固相温育过程中或之前用KCL处理样品。

实施例8

所有上述提到的例子中的标记是一个放射活性化合物(用于放射性免疫测定和相关的技术)。实施例9

所有上述实施例中的测定的阅读通过cheuriluminescence或荧光。

实施例10

所有上述阅读是基于传导性。在组织样品中：

以下面几种方式获得并加工组织样品：获得：(a)来自于外科手术移去的器官(b)来自分泌物或其它体液或通过接触的涂片(PAP涂片)。(c)来自针活体解剖在AFP受体染色之前加工组织

组织样品可以被固定和切割，如果需要以如下几种方式进行：(a)冰冻切片：在切割之前将组织冰冻成固体，在这些切片上可以使用或不用固定剂。(b)石蜡切片：其中常规地加工组织以在切割之前把样品包埋在一个石蜡块中。(c)丙烯加工和其他加工：主要是为了用于电子显微镜而加工。

实施例11

在这个例子中，利用了来自医院的病理学部门的常规石蜡切片。组织被切成4-8μm厚的切片，在再水合之后，用1∶2000稀释的抗AFP受体的单克隆抗体(Mab)腹水溶液温育切片，45分钟后，洗玻片并用一种抗小鼠IgG+IgG过氧化物或碱性蕊香红标记的偶联物温育玻片，45分钟后，再一次洗玻片，并在合适的光源下用显微镜观察或者用过氧化物底物DAB温育直到显色，然后常规固定玻片并在可见光下观察。图2-7显示了乳房癌(图2-3)，良性乳腺瘤(图4)，肺癌(图5)，胃癌(图6)，和肠癌(图7)的碱性蕊香红染色的AFP受体的照片，这些图显示了癌细胞或癌细胞的索或条是阳性染色的，而非恶性的邻近组织不是阳性，这一点在图4中是明显的，该图显示一个良性乳腺瘤，其中细胞是阴性的，在腺瘤细胞和周围正常组织之间没有染色上的差别。癌症治疗

在癌细胞表面的癌标记的表达使得有可能利用它们来定位癌细胞以实现治疗目的。

有许多方法可通过定位表面抗原促进细胞死亡，例如，可以用固定补体的抗体，当发生补体链反应时，在细胞上穿孔导致细胞死亡。另一种可能性是利用抗肿瘤抗原抗体偶联药物或毒素，一旦附着于细胞表面，偶联物被吞入细胞的细胞质，在那里细胞的酶把药物或毒素从抗体上切割下来。一旦释放，药物或毒素不可逆地损坏细胞诱导细胞死亡。在另一种情况下，可以使用放射性标记抗体，一旦与细胞粘连，其与细胞DNA的短距离的辐射产生对细胞DNA的损伤从而诱导细胞在下一个复制时死亡。

在所有上述过程中的关键成份是特异地识别恶性细胞的抗体，如果(AFP受体)被用作癌症标记，那么不仅仅抗其的抗体了可作为靶分子，而α-胎蛋白(AFP)本身将特异地识别AFP受体，所以也可以用各种溶细胞的试剂标记AFP来诱导细胞死亡。

除了损坏癌细胞，后者还可以被诱导停止增殖，如下例所示。

实施例12

用抗AFP受体的一个单克隆抗体的不同稀释液温育表达AFP受体的P-388小鼠细胞。先进行了一个补体固定试验并显示没有由于补体固定而导致的细胞破坏。在诱导了2-6小时之后，加³H-胸苷到P-388细胞中，清洗并计数。图9显示了用同样浓度的AFPr-1(一个抗AFP受体单克隆抗体)或正常小鼠血清处理的细胞的放射性胸苷计数，正如所描述的，通过Mab大大地降低了P388的增殖。另人感兴趣的是，当用Mab温育细胞几个小时后，然后清洗并再培养，它们的复制速率接近于那些用不相干抗体(正常鼠血清)处理的对照细胞的复制速率，从而指出细胞不是被杀死而是被Mab抑制了增殖，在人LoVo消化道癌细胞系中也观察到体外增殖抑制(结果未显示)。

细胞增殖被抑制的原因不清楚，一个可能的解释是在胎儿期中，据信AFP携带脂肪酸进入胎儿细胞，这些脂肪酸对细胞合成膜，即器官发生过程中一个非常积极的任务是必需的。由于AFP的细胞外浓度随着时间以及从一种组织到另一组织而变化着，对细胞来说，当它周围的AFP的浓度不合适时，进入复制可能是致命的。这一概念支持了AFP受体能作为细胞膜和核之间的信使的论点。在使用P388的实验中所述的抗AFP受体的抗体可能在某种程度上“干扰”(jam)信息传递到核，从而细胞不能进入分裂期，这很重要因为还有其他方法可以用如下将要讨论的Mab以外的物质“干扰”AFP受体系统。

在这个例子和其他例子中的一个重要的考虑是针对人AFP受体产生的小鼠抗AFP受体单克隆抗体也能识别小鼠癌细胞，当温育来自一个种类的AFP并结合到来自不同种类的细胞上时，在结合研究中观察到了类似的种类间的交叉反应，从而提示了不同种类的AFP受体之间的相似性。

实施例13

同时用2×10⁶EL-4细胞注射C57黑鼠的腹部并在尾巴静脉注射100μl抗AFP受体腹水或作为对照的正常鼠血清，由于次要组织不相容性，用300rad照射动物，这帮助EL-4细胞产生肿瘤。动物被观察了21天；杀死动物并照相。图10和11显示了两个这样的实验的结果，图10描述了上部的3个对照动物(注射了正常鼠血清)和4个治疗动物(注射了正常鼠血清)和4个注射5天后的治疗动物。对照组中的肿瘤(它们中的一些被一种红毡所染色而使它们更清楚)的直径大约是5mm，治疗动物没有疾病(仅在注射位置可以看到一个疤痕)。图11显示了来自另一个实验的几个动物，其中所有5个治疗动物没有疾病(显示了其中3个)，2个有大的肿瘤(在注射的15天杀死动物)。

在另一个实验中，治疗动物活了8个月没有任何疾病的信号或异常状态。样品和体液：AFP受体存在于细胞膜上也在细胞质中，当然当放射性AFP与癌细胞温育时，发现大约其2/3在细胞质中，很可能与AFP受体相关，(参考文献32 Naval，J.，Villacampa，M.J.，Goguel，A.和Uriel，J.，《美国国家科学进展》82，3301(1985)在我送你的总的介绍中)，已开发了一种从人索血清中纯化AFP受体的方法[Moro，R.，Tamaoki，T.，Wegmann，T.G.，Longenecker，B.M.，和Laderoute，M.P.《肿瘤生物学》14，116(1993)]，引入作为参考文献，实行这个方法是因为据信垂死的细胞释放或主动地分泌循环的AFP受体，事实是正如所希望的，AFP受体是存在于新生儿血液中的一个可溶性蛋白。

同样情况发生于一个带肿瘤的个体中，只是AFP受体的起源是恶性细胞而不是生理表达其的胎儿细胞，所以，在肿瘤胞外液体中存在AFP受体，这是重要的，因为一些体液或分泌物可以直接从胞外液体中获得，例如，一个腹膜癌病(转移到腹膜并传播到整个腹腔的任何起源的癌细胞)正常地产生我们已经测到并富于AFP受体的腹水液体(不要与在鼠中作为单克隆抗体源诱导的腹水混淆，尽管病理生理学机制是相同的，在腹腔中的癌细胞(在这种情况下，产生单克隆抗体的杂交瘤)产生一个炎性反应，其产生腹水，杂交瘤细胞释放单克隆抗体到腹水中)。

我们曾在酶免疫测定中用作参考标准的P89是一个带有乳房癌肺转移的病人的胸膜渗出液，这里的情况是来自乳房癌的细胞转移到肺并在胸膜上开始生长，膜包裹着肺。胸膜以同样于腹膜的方式与癌细胞反应，只是液体称作胸膜渗出液而不是腹水，在这些情形中(腹水和胸膜渗出液)，与液体直接接触(或漂浮在其中)的癌细胞直接释放AFP受体进入液体。

腹水和胸膜渗出液通过用针穿刺来收集。在其他情况下，分泌物可以自发地排到体外，例如，一个膀胱癌可以释放AFP受体进入随后能监测的尿中，支气管癌可以释放AFP受体到粘液中，其可通过强迫病人咳嗽以痰来收集。

如果恶性细胞与血液有紧密接触，正如白血病和一些淋巴瘤的情况，则AFP受体的最高浓度是在血清中。

所有上述均是确实的情况，但不是最可能发生的，最普通癌症：胃、乳房、子宫、结肠和肺将释放AFP受体进入血流，这一体液在用于分析的液体中将显示最高的标记物浓度。然而，由于不同的免疫化学技术的灵敏度的增加，也有可能在其它液体中检测AFP受体，例如，大部分血清蛋白均有少量存在于唾液中。显然获得唾液样品比血样更容易，如果AFP受体的量足够高并且所用的反应的灵敏度也足够的话，人们可以用唾液而不是血来诊断和跟踪，对其他体液也同样。

总之，在某些情况下，用体液如腹水，关节液(例如：关节骨癌)，胸膜渗出液、痰、脑脊髓液、尿、粪便等是方便的。在其他情况下，血或血清是最佳选择，最后，在某些其他情况下，尽管更多的AFP受体可能存在于血清中，但为了实际或法律的原因测试其他体液如唾液或尿可能更方便，可以通过自发分泌或用一根合适的针穿刺来收集体液。

免疫化学方法：这些方法可以分成2组：一类在试管或平板孔中进行，其中反应所“粘连”的固相是一个人工物，另一类，其中固相是寄主的一个天然部分，例如，组织切片或血细胞涂片。前者通常称为免疫化学测定，后者称为免疫组织化学(在组织切片的情况)或免疫细胞化学(当细胞如在涂片上那样疏松时)技术。原理是相同的；最初的材料不同，对免疫化学测定，待测或测量的分子必须在溶液中，而在免疫组织化学或免疫细胞化学测定中，检查的分子是反应中的细胞的一部分。

这些反应的一般原理是简单的：抗体(单克隆的或来自血清或免疫动物)非常特异地识别他们与之反应的结构。如果用非常纯的人清蛋白的一部分免疫一种动物，它的血清将只识别存在于可能含有非常高浓度的上百种其他蛋白的一个样品中的清蛋白。抗体还具有对产生他们的(称为抗原)的物质的巨大的亲和力，所以，很少量的这些抗原也可以被检测出来。

实现免疫化学或免疫组织化学(免疫细胞化学反应包括在后者中，因为唯一的差别是在一种情况下，细胞是所切割的放在玻片上的一块组织的结构的一部分，在另一种情况下，细胞被涂在玻片上)反应的方法是相同的：所检测的物质(抗原，这里为AFP受体)与一个特异于那个抗原的抗体反应。以某种方式标记(标签)两个(抗体或抗原)中的一个。在把两者一起温育之后，洗去过量的试剂并且以许多方式使标记物显示，如果标记是放射性同位素则用一个合适的检测器测量其放射性计数(通常，在这些技术中用¹²⁵I并测量γ射线辐射，这些技术被总称为放射性免疫测定(RIA)。如果在一个组织切片上进行与放射性标记物的温育，那么³H是优选的，在用照相乳胶包被它之后，它即暴露于玻片上，在有放射性的地方显现银颗粒(黑色)，可以在显微镜下观察这些颗粒。

另一种非常普遍的技术是利用一种酶作为标记。酶是一种催化剂，正因为如此，它可以把一种底物转化成一种新的产物，这里感兴趣的特征是一个单一的酶分子(如辣根过氧化物酶或碱性磷酸酯酶(2个最常用的))可以催化10,000个或者更多的底物分子，所以，由于存在一个10,000倍的放大因子，灵敏度是巨大的，这些反应被称为酶免疫测定(EIA)或酶联免疫吸附测定(ELISA)。这些酶通常在底物中产生颜色变化，在可溶性测定(免疫化学反应)中，在试管中或平板孔中的溶液改变颜色，然后测量这个变化就可以定量这一反应(用光比色计或分光光度计)。在其他情况下，酶从非离子溶液释放离子从而改变了溶液的电导，随后可以进行电测量。在这些技术的一个变化方案中，标记物是生物素，其随后被与酶偶联的抗生素蛋白识别。抗生素蛋白-生物素反应提高了测定的总灵敏度。

最近，介绍了另一类标记，这些标记是萤光色素，他们在被UV光激发在可见光谱发射质子，在暴露于一个高强度的UV刺激光脉冲之后马上用光电池测量反应，这些技术被称为免疫化学发光。

不管标记分子的方式或阅读反应的方式，反应以下述确定好的顺序发生：竞争测定：在这种情况下，自由抗原(这里是AFP受体)必须是以相当高的量和非常纯的形式获得，抗体(Ab)附着于固相(试管或塑料平板孔或一个合适的膜，以下更多的是后者)，将含抗原(Ab)的样品与已知量的纯的标记抗原混合，用在固相上的Ab温育混合物，在原始样品中的Ag越多，可以附着于固相上的给定量的Ab上的标记Ag越少(Ag与Ab量比较处于饱和状态)，通过针对含有已知量的非标记Ag的溶液的外推法定量反应。这项技术只适用于可溶性抗原，对组织样品没有用途，竞争测定具有的主要优点是它们只需要一个抗体。三文治技术：有许多变化方案：传统的夹心ELISA包括把Ab化学地附着于固相，然后加入含有Ag的待测样品，稀释液是使反应在过量的Ab中进行。在温育几分钟到几小时后，洗去过量的试剂并加入第二抗体，这第二抗体必须识别Ag分子上不同于第一Ab识别的位点的位点，否则，第一Ab将占据位点而不发生反应(除非Ag具有多于1个第二Ab识别的相同的结合位点，这种情况很少见)。第二抗体也过量存在以识别所有的Ag，这第二Ab是被标记的。在又一次清洗之后读出反应。夹心技术有一个优点，那就是不需要纯Ag，缺点是：反应时间较长(至少需要2次温育)并需要2个不同的抗体。

“一片”夹心被用于本例中并被用于大多数组织中上的免疫组织化学反应中。这里，Ag被固定在固相上，然后在其上温育标记的Ab(只有1个Ab)。当用试管作固相时，缺点是Ag附着于试管的方式可能影响反应的强度并且“粘度”可能依赖于样品中在一个病人的血清与另一个之间变化很大的其他组份(这是因为相对于结合Ag到它的Ab上，将蛋白质结合到试管或平板孔的玻璃或塑料的力是静电力并很弱)。为了避免这样是用过量的第一Ab进行上述双夹心。如果附着于固相的第一抗体或多或少是不相干的，由于与固相的非特异结合总是用相同于测定中的产物(第一Ab制备液)，因而量总是足够的，从一个样品到另一个样品也没有变化。这里在癌症和非癌症病人之间的实验差别是它们不能用所用的塑料板的包被的不同来解释。

关于固相：其可以是在显微镜玻片上的组织或一个通常通过静电力附着分子的合适的表面(制备液通常刚好在试管中温育几个小时然后洗涤，蛋白质仍然附着于玻璃或塑料上)。然而在其他一些情况下，固相可以是通常由尼龙或硝酸纤维素做的膜，这些膜是白色的。如果一旦用Ag或Ab包被膜，则实现了一个类似于在显微镜组织切片上实现的测定并且利用一种不改变颜色而是产生有颜色的沉淀的底物显色，接着在此过程结束时，有颜色的点指示反应为阳性或阴性。如果有颜色，则有反应，如果没有颜色则反应是阴性的，这是前面所提到的“有或没有”类型的反应的一个例子，其有巨大的优点，它不需要读数指示仪器；有裸眼就够了。主要的缺点是不精确。

人体中抗体的导入：有几种方法可以使病人的癌细胞暴露于抗AFP受体抗体：一种方法是注射纯的鼠单克隆抗体(Mab)给病人。如果恶性细胞是与血液直接接触(如白血病)则选择静脉注射途径，如果肿瘤只能从血液达到，用同样的途径。然而在有些情况下，其它途径可能更好，如上所述，一些肿瘤生长在限定空间如胸腔或腹腔，在这些情况下，注射抗体直接进入腔内而不是血液可能更好。另一个得到针对AFP受体的抗体的方法是通过在寄主中诱导它们，可以用不同种类的AFP受体免疫癌症病人，在受体的人类和其他种的组成之间的细微差别可能允许在那个病人中产生抗甚至例如鼠或牛AFP受体并与自体人AFP受体交叉反应的抗体，所以，病人得到抗其本身肿瘤的“接种”。值得一提的是抗体不是在癌细胞表面阻塞受体的唯一方法，一个变性的AFP可以达到同样的目的，甚至于AFP的一个合成片段也可以获得那样的结果，所以它可以用于终止肿瘤生长。

有几种不同的方法可以获得修饰的AFP，其为天然存在的AFP的一部分或通过分子工程从DNA合成的部分，关键是与AFP受体反应的AFP的部分是有活力的，但是AFP剩余部分是不存在的或被改变或损害到足以不能实现它的功能，所有这些方法本身在现有技术中是已知的，AFP被简单地用于这些方法中的每一种，他们是，例如用来自例如贝克曼仪器的多肽合成仪来生产与AFP受体反应的AFP的合成部分，对应于与AFP受体反应的AFP的部分的氨基酸顺序进入多肽合成仪，激活了合成仪，产生了合成的多肽。或者，利用现有技术中已知的合适的载体将所希望的DNA序列导入寄主系统可以合成AFP部分，寄主系统随后表达所期望的AFP部分，其可被收集并如果需要加以纯化。或者，通常把所希望的DNA序列放入如牛受精卵中可以利用转基因合成，那么所期望的AFP部分从出生后动物中获得，正如本领域所公知的。例如参见Maniatis et al.(1982)。另一种获得所期望的AFP的方法是通过切割天然存在的AFP，用一个链反应剂如花菁苷溴化物切开AFP并随后纯化得到所期望的AFP部分。

虽然在前述的实施方案中已经详细地描述了本发明，应理解的是这种描述仅是为了举例说明，在不脱离本发明的精神和范围内本领域熟练技术人员可以做一些变异。在下面的权利要求中限定了本发明的精神和范围。

Claims (16)

1、一种检测来自癌症病人的生物学样品中的AFP受体或AFP受体上的结合位点的方法，包括如下步骤：

将标记抗α-胎蛋白(AFP)抗体或标记α-胎蛋白导入所述的生物学样品，从而标记抗AFP抗体或标记AFP可以与所述生物学样品中的针对标记AFP分子或标记抗AFP抗体的AFP受体或AFP受体上的结合位点反应，所述生物学样品选自卵巢、淋巴结、肢体、子宫、直肠、骨盆、脑、肺、肝、肾、结肠、骨和血清；

鉴定生物学样品中的与标记抗AFP抗体或标记AFP反应的针对标记AFP分子或标记抗AFP抗体的AFP受体或AFP受体上的结合位点。

2、根据权利要求1所述的方法，其中导入步骤包括将放射性同位素标记的抗体或放射性同位素标记的AFP导入到病人的生物学样品中以使标记抗体或标记AFP与生物学样品中的AFP受体上的结合位点反应的步骤。

3、根据权利要求1所述的方法，其中导入步骤包括将酶标记的抗体或酶标记的AFP导入到病人的生物学样品中以使标记抗体或标记AFP与生物学样品中的AFP受体上的结合位点反应的步骤。

4、根据权利要求1所述的方法，其中导入步骤包括将荧光色素标记的抗体或荧光色素标记的AFP导入到病人的生物学样品中以使标记抗体或标记AFP与生物学样品中的AFP受体上的结合位点反应的步骤。

5、根据权利要求2所述的方法，其中鉴定步骤包括鉴定存在于生物学样品中的放射性的步骤。

6、根据权利要求5所述的方法，其中鉴定步骤包括测量来自生物学样品的放射性计数的步骤。

7、根据权利要求5所述的方法，其中鉴定步骤包括用照相乳胶包被生物学样品，显影照相乳胶并观察生物学样品的包被的步骤。

8、根据权利要求3所述的方法，其中酶标记的抗体或酶标记的AFP改变生物学样品的颜色，并且鉴定步骤包括将生物学样品的颜色与一种公知颜色比较。

9、根据权利要求8所述的方法，其中导入步骤包括将一滴生物学样品放到硝酸纤维素或尼龙的一个位置上并将过氧化物酶标记的抗体加到这一位置的步骤，鉴定步骤包括确定是否硝酸纤维素或尼龙的这一位置改变了颜色的步骤。

10、根据权利要求3所述的方法，其中酶标记的抗体或酶标记的AFP释放离子改变处理生物学样品的溶液的电导，并且鉴定步骤包括测量溶液的电导。

11、根据权利要求4所述的方法，其中鉴定步骤包括用UV光照射生物学样品，并测量来自照射的生物学样品的光子发射的步骤。

12、根据权利要求1所述的方法，其中抗体是单克隆抗体。

13、根据权利要求1所述的方法，其中抗体是多克隆抗体。

14、根据权利要求1所述的方法，其中生物学样品是组织切片。

15、根据权利要求1所述的方法，其中生物学样品是玻片上的含有癌细胞的生物学样品的涂片，并且鉴定步骤包括用显微镜或通过荧光细胞测定检查涂片的步骤。

16、根据权利要求14所述的方法，其中组织切片来自固定组织，新鲜组织或冰冻组织。

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