[go: up one dir, main page]

CN111935990A - 胍乙酸和/或肌酸在水产养殖中的用途 - Google Patents

胍乙酸和/或肌酸在水产养殖中的用途 Download PDF

Info

Publication number
CN111935990A
CN111935990A CN201980022309.1A CN201980022309A CN111935990A CN 111935990 A CN111935990 A CN 111935990A CN 201980022309 A CN201980022309 A CN 201980022309A CN 111935990 A CN111935990 A CN 111935990A
Authority
CN
China
Prior art keywords
amount
feed
weight
fish
creatine
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201980022309.1A
Other languages
English (en)
Inventor
A·萨马齐斯
M·拉德马赫-海尔绍恩
K·马萨古德尔
G·钱纳拉亚帕特纳克里希内高达
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Evonik Operations GmbH
Original Assignee
Evonik Operations GmbH
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Evonik Operations GmbH filed Critical Evonik Operations GmbH
Publication of CN111935990A publication Critical patent/CN111935990A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23K—FODDER
    • A23K20/00—Accessory food factors for animal feeding-stuffs
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23K—FODDER
    • A23K20/00—Accessory food factors for animal feeding-stuffs
    • A23K20/10—Organic substances
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23K—FODDER
    • A23K50/00—Feeding-stuffs specially adapted for particular animals
    • A23K50/80—Feeding-stuffs specially adapted for particular animals for aquatic animals, e.g. fish, crustaceans or molluscs
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A40/00—Adaptation technologies in agriculture, forestry, livestock or agroalimentary production
    • Y02A40/80—Adaptation technologies in agriculture, forestry, livestock or agroalimentary production in fisheries management
    • Y02A40/81—Aquaculture, e.g. of fish
    • Y02A40/818—Alternative feeds for fish, e.g. in aquacultures

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Animal Husbandry (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Insects & Arthropods (AREA)
  • Marine Sciences & Fisheries (AREA)
  • Birds (AREA)
  • Fodder In General (AREA)
  • Feed For Specific Animals (AREA)

Abstract

令人惊讶地，已经发现根据本发明，通过在水产养殖中给水生动物的饲料中添加胍乙酸、肌酸和/或其盐，可以改善水生动物的生长、饲料转化率和肉质。

Description

胍乙酸和/或肌酸在水产养殖中的用途
本发明涉及包括选自胍乙酸(guanidinoacetic acid)和/或肌酸(creatine)和/或其盐的化合物的饲料在水产养殖中，特别是用于改善水生动物的生长和/或用于改善水生动物的肉质的用途。
水产养殖是农业的一种形式，其涉及在受控环境中繁殖和培育水生动物，和随后将所获得的肉类用作人类的食物。通常，饲养水生动物的饲料包括作为基本成分的鱼料(fishmeal)。鱼料通常来源于野生捕获的小型中上层鱼类(pelagic fish)物种，如鳀鱼(anchovy)、蓝白鱼(blue whiting)、毛鳞鱼(capelin)、杰克鱼(jack)、鲭鱼(mackerel)、鲱鱼(menhaden)或沙丁鱼(sardine)。由于其加工，鱼料通常是丸状或片状产品。
由于过去几年的过程中水产养殖的增加以及鱼料供应的同时停滞或甚至逐步减少，需要找到对于改善水产养殖中水生动物的生长和/或改善此类水生动物的肉质有用的，并且在理想情况下可进一步用作鱼料的同等替代品的替代成分。
令人惊讶地，根据本发明已经发现胍乙酸对水产养殖中水生动物的生长，特别是对罗非鱼(tilapia)的生长有积极作用。事实上，胍乙酸导致水生动物(特别是罗非鱼)的体重增加的显著增加。
此外，已经发现，给水生动物饲喂胍乙酸还使得进一步改善特性，特别是提高水生动物(特别是罗非鱼)的存活率、饲料摄入量、饲料转化率、养分保留率、肉弹性和肉硬度。
此外，已经发现，胍乙酸具备作为水产养殖里水生动物饮食中鱼料的合适替代物的资格，特别是与植物料(plant meal)组合和/或与陆生动物料(meal of terrestrialanimal)组合。
胍乙酸是一种身体物质，其存在于动物中且也存在于人类中，并在肌酸生物合成中起核心作用。肌酸可以随食物摄取，且可以内源性形成。生物合成从甘氨酸和L-精氨酸开始。在哺乳动物中，L-精氨酸的胍基基团主要在肾脏中被脒基转移酶(amidinotransferase)裂解，但也在肝脏和胰腺中裂解，并且N-C-N基团转移到甘氨酸。在这一过程中，L-精氨酸转化为L-鸟氨酸。在下一步骤中，在转甲基化酶的辅助下，因此形成的胍乙酸转化为肌酸，该过程在脊椎动物中仅发生在肝脏中。在这一过程中，S-腺苷甲硫氨酸作为甲基基团的供体。肌酸随后扩散到循环中，在其中其被转运到靶器官。跨细胞膜进入细胞的转运受特定肌酸转运子的影响。
此外，已知胍乙酸具有抗菌活性，并已成功应用于针对细菌感染(金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus))的动物实验(保护哺乳动物免受感染的制剂(Stanley DrugProducts Inc.,USA).Neth.Appl(1976),7pp.NL 7411216)。
肌酸在细胞能量代谢中起重要作用，其中，除三磷酸腺苷(ATP)外，它以富含能量的磷酸肌酸的形式形成肌肉的必需能量储备。当肌肉处于静息状态时，ATP可以将磷酸基团转移至肌酸，以产生磷酸肌酸，其然后与ATP直接平衡。当肌肉工作时，尽快补充ATP储备至关重要。在最大肌肉工作的前几秒中，磷酸肌酸可用于这一目的。该磷酸肌酸能够通过肌酸激酶将磷酸基团以非常快的反应转移到二磷酸腺苷，并因而再生ATP。这也被称之为Lohmann反应。
长期以来，肌酸一直被认为是陆生动物的合适食品补充剂和动物饲料。经过辛苦和长时间的肌肉工作，体内天然存在的肌酸储备迅速被耗尽。这就是为什么靶向施用肌酸对耐力和性能有积极作用的原因，特别是在运动员和女运动员中，并且在这种情况下，体内不良蓄积过程或不利的降解产物尚不清楚。其原因是当肌酸以过高的量供应时，肌酸以肌酐的形式被机体排出。
除肌酸本身外，换句话说肌酸一水合物，大量其他肌酸盐，如抗坏血酸肌酸、柠檬酸肌酸、丙酮酸肌酸等，同时也被证明是合适的食品补充剂。此处提及的欧洲专利EP 894083和德国专利DE 197 07 694 A1可以作为现有技术的代表。
肌酸和胍乙酸不仅在人类中被证实具有积极作用，而且在陆生动物中也被证实具有积极作用，这就是为什么它们在动物饲料中的用途同样已经得到描述的原因。因此，根据国际专利申请WO 00/67 590和WO 05/120246，已知使用肌酸和/或胍乙酸及其盐作为育种陆生动物和育肥动物(fattener)的饲料添加剂，用于增加生育力和繁殖性能，作为肉料、鱼料和/或抗菌生长促进剂、生长激素和合成代谢类固醇的替代品。
GB 2 300 103教导了肌酸以狗饼干形式的用途，为了该目的，将肌酸一水合物与肉类一起作为挤压的物质被饲喂。由于其溶解度较差，肌酸一水合物的生物利用度有限，并因此建议其与其他生理活性化合物一起使用，优选以盐的形式。德国专利DE 198 36 450A1涉及适合用于动物营养的制剂中的稳定的丙酮酸盐(特别是丙酮酸肌酸)的用途。
DE 100 03 835 A1涉及用于在老年人(特别是活动受限的老年人)中常见的脱水状态的制剂。在这一情况下，肌酸作为水的转运介质，从而为受脱水症状影响最大的那些组织提供水分。
关于肌酸或胍乙酸(GAA)用于饲喂水生动物的用途的出版物很少，因为与已明确证实GAA对其有积极作用的陆生动物相比，水生动物的代谢存在差异，这些化合物是否对水生动物的饮食有益也仍存在争议。
有一篇早期出版物，其总体上公开了GAA用于饲喂以素食饮食为主(即基本上不含动物源成分的饮食)的鲑科鱼(salmonids)和纳塔尼亚鱼(natania)的用途(EP1758463)。
Qin等人(Journal of the Chinese Cereals and Oils Association(2015),30(3),85-90)公开了一种饲养鲤鱼方法，其中饲喂鲤鱼的饮食包括浓度为0.025至0.1wt.-％的GAA，和其中饮食包括10wt.-％的鱼料。Qin等人观察到补充GAA不影响鱼的最终重量、特定生长率、体重增加率、平均日饲料摄入量或成活率。
未发现公开GAA对饲喂罗非鱼或其他丽鱼科鱼(cichlids)的积极作用的先有技术水平。此外，未发现公开了GAA对水生动物的存活率和/或体重增加和/或饲料摄入量和/或营养保留和/或肉质(特别是肉弹性和/或肉硬度)具有积极作用的先有技术水平。此外，总体上未发现公开将GAA与陆生动物料组合使用的先有技术水平。
因此，本发明的第一个主题是包括选自胍乙酸、肌酸和这些分子的盐的化合物及其混合物的饲料用于在水产养殖中饲喂水生动物的用途，特别是用于增加水生动物的存活率和/或体重增加和/或饲料摄入量和/或饲料转化率和/或营养保留和/或肉质(特别是肉弹性和/或肉硬度)的用途。
在该上下文中，优选的主题是胍乙酸和/或其盐用于在水产养殖中饲喂水生动物的用途，特别是用于增加水生动物的存活率和/或体重增加和/或饲料摄入量和/或饲料转化率和/或营养保留和/或肉质(特别是肉弹性和/或肉硬度)的用途。
因此，本发明的另一个主题同样是一种用于在水产养殖中饲喂水生动物的方法，特别是用于在水产养殖中提高水生动物(优选有鳍鱼(finfish)，尤其是罗非鱼)的存活率和/或体重增加和/或饲料摄入量和/或饲料转化率和/或营养保留和/或肉质(特别是肉弹性和/或肉硬度)的方法，在所述方法中给水生动物饲喂包括选自胍乙酸、肌酸和其盐的化合物及其混合物的饲料。
在该上下文中，优选的主题是一种用于在水产养殖中饲喂水生动物的方法，特别是用于在水产养殖中提高水生动物(优选有鳍鱼，尤其是罗非鱼)的存活率和/或体重增加和/或饲料摄入量和/或饲料转化率和/或营养保留和/或肉质(特别是肉弹性和/或肉硬度)的方法，在所述方法中给水生动物饲喂包括胍乙酸或其盐的饲料。
根据本发明，“改善生长”特别被理解意味着改善水生动物的体重增加。
根据本发明，“营养保留”特别被理解意味着“能量保留”和/或“蛋白质保留”。
根据本发明，术语“饲料(feed)”和“饲料(feedstuff)”可互换使用。
在用于非治疗目的的优选实施方案中，实施根据本发明的用途和方法。
根据本发明的水生动物优选为有鳍鱼(特别是辐鳍鱼(Actinopterygii)纲)或甲壳动物(crustaceans)。特别是，辐鳍鱼包括罗非鱼和其他丽鱼科鱼、鲤鱼和其他鲤科鱼(cyprinids)、鲑鱼和其他鲑科鱼、鲶鱼(catfish)(特别是非洲鲶鱼和巨鲶(pangasius))、金枪鱼、鲈鱼(perch)、鳕鱼(cod)、胡瓜鱼(smelt)、遮目鱼(milkfish)、丝足鱼(gourami)、海鲈鱼(seabass)(特别是尖吻鲈(barramundi))、海鲤(seabream)、石斑鱼(grouper)和蛇头鱼(snakehead fish)。
在该上下文中，鲑鱼和鲑科鱼的优选类型为大西洋鲑鱼(Atlantic salmon)、红鲑鱼(red salmon)(红大马哈鱼(sockeye salmon))、马苏鲑鱼(masu salmon)(樱桃鲑鱼(cherry salmon))、国王鲑鱼(king salmon)(切努克鲑鱼(Chinook salmon))、ketasalmon(chum salmon)、银鲑鱼(coho salmon)、多瑙河鲑鱼(Danube salmon)、太平洋鲑鱼(Pacific salmon)、粉红鲑鱼(pink salmon)和鳟鱼(trout)。根据本发明的水生动物为非常优选的罗非鱼。
特别是，甲壳动物包括虾、龙虾、螃蟹、对虾(prawns)和小龙虾(crayfish)。
特别是，水生动物还可以是随后加工成鱼料或鱼油的鱼。就此，鱼优选是鲱鱼(herring)、绿鳕(pollack)、鳕鱼(cod)或小型中上层鱼，如鳀鱼、蓝白鱼、毛鳞鱼、漂移鱼(driftfish)、杰克鱼、鲭鱼、鲱鱼、沙丁鱼或竹荚鱼。由此获得的鱼料或鱼油又可以用在水产养殖中用于养殖可食用的鱼或甲壳动物。
水生动物还可以是牡蛎(oysters)、蛤蜊(clam)、鸟蛤(cockle)、赤贝(arkshell)、贻贝(mussel)或扇贝(scallop)。
然而，水生动物也可以是水产养殖中用作饲料的小型生物体。这些小型生物可以是例如线虫(nematode)、甲壳动物或轮虫(rotifer)的形式。
水生动物的养殖可以在池塘(pond)、水箱(tank)、水池(basin)或其他在海洋或在湖泊或在河流中隔离的区域中进行，特别是在这种情况下在笼子(cage)或网围(net pen)中。养殖可以用于养殖可食用鱼成品(finished edible fish)，也可以用于养殖随后释放的鱼苗，从而补充野生鱼群。
在鲑鱼养殖中，鱼优选先在淡水箱或人工水道中生长成二龄鲑(smolt)，并然后在漂浮在海洋、池塘或河流中或优选锚定在海湾或峡湾中的笼子或网围中生长。
因此，根据本发明的饲料优选是用于上述动物的养殖中的饲料。
根据本发明，胍乙酸、肌酸及其盐可以在较宽的剂量范围内使用。例如，日剂量范围为每千克活重约5mg至约200mg，特别是范围为每千克活重约10mg至约100mg，优选范围为每千克活重约20至约60mg，更优选范围为每千克活重约35至50m g，特别是有鳍鱼的情况下，更特别是罗非鱼的情况下。
水生动物优选被饲喂含有胍乙酸和/或肌酸和/或其盐或其组合的饲料，优选含有胍乙酸和/或其盐的饲料，其量为0.02-0.20wt.-％，更优选其量为0.05-0.16wt.-％，特别是其量为0.08-0.15wt.-％，尤其是其量为0.11-0.14wt.-％。
优选地，饲料被提供给水生动物，特别是有鳍鱼的情况下，其量是每天水生动物的实际体重的2％-4％，更优选其量是每天水生动物的体重的2.5％-3.5％，其中所述饲料优选以每天2至4份口粮饲喂给水生动物。
根据本发明的用途和方法优选应用于商业规模的水产养殖，即特别是用于饲养水生动物(特别是有鳍鱼，优选罗非鱼)，同时应用于每水产养殖处理至少100kg的水生动物的最终总重量，优选应用于每水产养殖处理至少200、500、1000或1500kg的最终总重量。
由于饲喂含有胍乙酸的饲料，对于罗非鱼特别观察到很好的结果。
因此，本发明的又一个主题是一种饲喂罗非鱼的方法，其特征在于，罗非鱼被饲喂包括选自胍乙酸、肌酸及其盐和其混合物的化合物的饲料，优选被饲喂包括胍乙酸和/或其盐的饲料，特别是以之前提到的量。
在水生动物的整个寿命中，可以向水生动物饲喂胍乙酸和/或肌酸和/或其盐，以达到根据本发明的作用。可选地，只在饲养的某些饮食周期中向其饲喂那些化合物。
根据本发明，胍乙酸和/或肌酸和/或其盐可以例如作为粉末(powder)、作为颗粒(granule)、作为锭剂(lozenge)、作为胶囊(capsule)、作为丸剂(pellet)或作为胶状物(jelly)(水状胶)产品被提供用于掺入饲料中。取决于各自的特定预期用途，优选的是应用胍乙酸和/或肌酸和/或其盐作为饲料添加剂与其他生理活性物质(特别是碳水化合物、脂肪、氨基酸、蛋白质、维生素、矿物质、微量元素及其衍生物和任何其混合物)组合。
本发明的另一个主题是用于饲喂水生动物(特别是有鳍鱼，优选辐鳍鱼，更优选罗非鱼和其他丽鱼科鱼)而使用的饲料，其包括胍乙酸和/或肌酸和/或其盐或其组合，优选胍乙酸和/或其盐，优选其量为0.02-0.20wt.-％，更优选其量为0.05-0.16wt.-％，特别是其量为0.08-0.15wt.-％，尤其是其量为0.11-0.14wt.-％。
该饲料包括进一步的饲料成分，其优选选自蛋白质来源、碳水化合物来源、脂肪来源以及此外选自其他添加剂(如矿物质、维生素、色素和氨基酸)。
此外，除了营养物，还可以存在结构物(structurant)，从而例如改善饲料的质地或外观。此外，还可以应用粘合剂或包衣，从而影响饲料的稠度(consistency)。淀粉是一种优选应用的组分，并同时构成营养物和结构物。脂肪或聚合物(如乙基纤维素)可以用作包衣。
脂肪通常以海洋油或植物油或其组合提供。植物油的示例是大豆油、菜籽油、葵花籽油、芥菜油(canola oil)、棉籽油和亚麻籽油。除分离的油外，脱脂的生物质本身，如果用作饲料成分，也提供一定量的油，特别是鱼料、其他海洋动物料或植物料(plant meal)，如大豆料、菜籽料、葵花料、芥菜(canola)料、棉籽料或亚麻籽料。
植物料(如大豆料和葵花料)主要作为碳水化合物的来源，特别是作为除玉米和小麦以外的碳水化合物的来源。
由于其蛋白质含量，植物料(如大豆料、葵花料、玉米面筋料、棉籽料和芥菜料)也是除小麦面筋和水稻外的蛋白质的来源。动物源性蛋白质来源为本领域技术人员已知的动物和/或动物副产物蛋白质来源，特别是海洋动物料以及陆生动物料，其中陆生动物料优选选自肉料、肉骨料、血料、肝料、禽肉料和蚕蛹料。动物源性的其他蛋白质来源是乳清粉和蛋粉。
优选地，根据本发明的饲料的总蛋白质含量为20-50重量％，优选25-45重量％，特别是27-40重量％。
此外，优选地，根据本发明的饲料的总脂肪含量为1-15重量％，优选2-10重量％，特别是3-8重量％。
此外，优选地，根据本发明的饲料的总碳水化合物含量为20-60重量％，优选30-50重量％，更优选35-45重量％。
此外，根据本发明的饲料优选含有海洋动物料，特别是鱼料，其量小于10wt.-％，优选其量小于5wt.-％，更优选其量小于2、1或0.5wt.-％。
此外，根据本发明的饲料优选含有植物料，特别是选自大豆料、菜籽料、芥菜料、棉籽料及其组合，更优选大豆料，优选其量为10-60重量％，更优选其量为15-50重量％，特别是其量为20-40重量％；
此外，根据本发明的饲料优选含有陆生动物的动物和/或动物副产物蛋白质来源，特别是陆生动物料，其量为至少2wt.-％，特别是其量为2-30wt.-％，优选其量为至少5或10wt.-％，更优选其量为5-30wt.-％或10-25wt.-％，特别是其量为14-20wt.-％。
根据本发明的饲料优选包括甲硫氨酸、甜菜碱和/或胆碱和/或其他生理上有效的甲基基团供体。在同型半胱氨酸存在下，甜菜碱和胆碱在体内可以转化为甲硫氨酸，其特别是在从胍乙酸出发合成肌酸中起作用。为了该目的，需要从S-腺苷甲硫氨酸形成同型半胱氨酸所转移的甲基基团。如果没有足够的甜菜碱或胆碱，甲硫氨酸被消耗，这可以导致代谢中甲硫氨酸的不足。
在根据本发明优选的方法中，用于饲喂水生动物(优选有鳍鱼，特别是罗非鱼)的饲料包括以下组分的至少一种，优选至少两种、三种或四种，特别是至少五种、六种或七种，特别是优选以下组分的所有：
a)植物料，特别是选自大豆料、菜籽料、芥菜料、棉籽料及其组合，更优选大豆料，优选其量为10-60重量％，更优选其量为15-50重量％，特别是其量为20-40重量％；
b)油或脂肪组分，特别是海洋油、玉米油或其组合，优选其量为1-10重量％，特别是3-8重量％；
c)小麦或小麦粉，优选其量为10-50重量％，更优选其量为15-45重量％，特别是其量为20或40重量％；
d)陆生动物料，特别是禽肉料、肉骨料或其组合，优选其量为5-30重量％，更优选10-25重量％，特别是14-20重量％；
e)磷酸盐，优选其量为0.5-5重量％，特别是2-5重量％；
f)木薯，优选其量为1-5重量％；
g)氨基酸，优选选自赖氨酸、甲硫氨酸、苏氨酸、缬氨酸、组氨酸、色氨酸及其混合物；
h)维生素。
该饲料优选包括鱼料，更优选海洋动物料，通常其量小于10wt.-％，更优选其量小于5wt.-％，特别是其量小于2、1或0.5wt.-％，且尤其是一点不含任何海洋动物料。
根据本发明，“海洋生物料”一般理解为是指海洋生物的加工产品，特别是海洋动物的加工产品。除根据本发明优选使用的鱼料外，根据本发明，这将被理解为也特别是指磷虾料、双壳料、鱿鱼料或虾壳，其为鱼料的经典替代产品。然而，海洋生物料特别是优选鱼料。
根据本发明，“海洋动物油”或“海洋油”一般理解为是指从海洋生物获得的油，优选从海洋动物获得的油。除根据本发明优选的鱼油外，它还指从其他海洋生物中分离的油，特别是从海洋动物中分离的油，例如从磷虾、双壳、鱿鱼或虾中分离的油。优选地，根据本发明使用的海洋油是鱼油，特别是来自鱼类的脂肪油，特别是优选来自鳀(Engraulidae)科、鲹(Carangidae)科、鲱(Clupeidae)科、胡瓜鱼(Osmeridae)科、鲭(Scombridae)科和/或玉筋鱼(Ammodytidae)科的鱼的脂肪油。
根据本发明，“陆生动物料”一般理解为是指为陆生动物的加工产品的食料，且优选是指肉料、肉骨料、血料、肝料、禽肉料、蚕蛹料及其组合。
在本发明的一个实施方案中，胍乙酸、肌酸和/或其盐在主要素食口粮中用作饲料添加剂。
本文中使用的“主要素食口粮”描述了一种口粮，其优选符合欧盟的法律指南，不包括任何动物组分。该上下文的例外只是可能添加的鱼料。此外，根据本发明的“主要素食口粮”也被理解意味着用胍乙酸、肌酸和/或其盐部分替代鱼料或肉料。但是，可选地，也可能除动物组分以外还应用胍乙酸、肌酸和/或其盐，特别是与鱼料和/或肉料组合应用胍乙酸、肌酸和/或其盐。
根据本发明，已证明包含以下组分的饲料是特别有利的：
a)粗蛋白质，其量为25-45重量％，特别是27-40重量％；
b)钙，其量为1-5重量％；
c)磷，其量为0.2-1.5重量％；
d)甲硫氨酸和/或半胱氨酸，其量为0.25-1.0重量％；
e)赖氨酸，其量为0.5-2.5重量％；
f)优选缬氨酸和苏氨酸，其量各自为0.5-2.0重量％；
g)胍乙酸和/或肌酸和/或其盐，其量为0.02-0.20重量％，优选0.05-0.16重量％，特别优选是0.08-0.15重量％，尤其是0.11-0.14重量％；
因此，该饲料以及其中应用该饲料的用于(特别是在水产养殖中)饲喂水生动物(特别是有鳍鱼，尤其是罗非鱼)的方法也是本发明的主题，。
根据本发明，优选的是特别是应用包括以下组分的饲料：
a)植物料，特别是选自大豆料、菜籽料、芥菜料、棉籽料及其组合，更优选大豆料，优选其量为10-60重量％，更优选其量为15-50重量％，特别是其量为20-40重量％；
b)油或脂肪组分，特别是鱼油、玉米油或其组合，优选其量为1-10重量％，特别是3-8重量％；
c)小麦或小麦粉，其量优选为10-50重量％，其量更优选为15-45重量％，特别是20或40重量％；
d)陆生动物料，特别是禽肉料、肉骨料或其组合，优选其量为5-30重量％，更优选10-25重量％，特别是14-20重量％；
e)磷酸盐，优选其量为0.5-5重量％，特别是2-5重量％；
f)优选木薯，特别是其量为1-5重量％；
g)氨基酸，优选选自赖氨酸、甲硫氨酸、苏氨酸、缬氨酸、组氨酸、色氨酸及其混合物；
h)维生素。
因此，该饲料以及其中应用该饲料的用于(特别是在水产养殖中)饲喂水生动物的方法也是本发明的主题。
胍乙酸可以以简单且经济的方式制备，例如，通过如在水溶液中反应甘氨酸和氰胺的过程(胍基脂肪酸的生产(Vassel,Bruno；Janssens,Walter D.)(1952),US 2,620,354；胍基脂肪酸的制备方法(Vassel,Bruno；Garst,Roger)(1953),5pp.US 2,654,779)。
此外，与肌酸和肌酸一水合物相比，胍乙酸及其盐在酸性水溶液中明显更稳定，且其仅在生理条件下转化为肌酸。在该上下文中，胍乙酸仅在其吸收后转化为肌酸，尤其是在肝脏中。因此，与肌酸相反，施用的或饲喂的化合物的主要部分(胍乙酸和/或胍乙酸盐)不被不稳定反应降解(例如在胃中)并且不在吸收前被分泌，而是当发生相应的生理代谢反应时确实可用。
原则上，适用于本发明目的的是所有那些在营养上可接受的胍乙酸盐和肌酸盐。已证明为对于根据本发明的用途特别有利的化合物是用盐酸、氢溴酸和磷酸获得的胍乙酸盐和肌酸盐。也可能应用胍乙酸和/或肌酸与这些盐中一种或多种一起的混合物，或所述盐彼此的其他混合物。
总之，本发明为了提供胍乙酸、肌酸及其盐，其用于在水产养殖中作为饲料或饲料添加剂的新用途。下面的实施例进一步说明了本发明。
工作实施例
材料与方法
将平均初始重量为5±0.02g的总数为300条红罗非鱼(Oreochromis sp.)随机分配到175L的水族箱中。每个水族箱含有15条鱼(相当于85条鱼/m3)，其温度范围为29-30℃，pH为6.51-7.02，盐度为0ppt，溶解氧为6.2-7.01ppm，总氨为0.16-0.254ppm，硬度为38-54ppm，硝酸盐为0.5-1.01ppm。在60天的时间内，每天3次(08:00、12:00和16:00)，以4个实验处理饲喂鱼至明显的饱食。每种处理均一式五份，其中所有饮食含0％的鱼料，但含有主要动物蛋白来源的禽肉料以及肉骨料(表1)。所有实验饮食均来自同一批次，其中唯一的差异是含有不同水平的GAA(
Figure BDA0002701364470000082
购自Evonik，Germany)。对照饮食不含
Figure BDA0002701364470000083
且在处理GAA0.5、GAA1.0和GAA1.5中补充剂分别从每kg饲料的644mg的GAA经1373mg的GAA至1861mg的GAA而逐渐增加(表2)。确定了存活率(％)、饲料摄入量(g/箱)、平均体重(g/条鱼)、生物量增加(g/水族箱)、饲料转化率(g饲喂量/g生物量增加)、以及特定生长率(％/d)。用SPSS 16.0使用ANOVA和Tukey检验(p<0.05)分析该数据。此外，还确定了能量、脂质和蛋白质的保留。
采用探针大小为75的TA-XT2i质地分析仪进行质地情况分析，以确定鱼制品的肉质。对5mm厚和2x2cm大的鱼片样品进行压缩。在室温下以1mm/s的十字头速度进行5秒将样品压缩两次至50％的程度。确定了以下参数：“硬度”，定义为最大力(N)或第一压缩峰值；“弹性”，定义为基线(mm)的第二次压缩；“凝聚力”，定义为第二个峰值下的面积与第一个峰值下的面积之比。
表1：实验饮食的成分和营养组合物
Figure BDA0002701364470000081
Figure BDA0002701364470000091
表2:实验饮食中GAA和
Figure BDA0002701364470000092
的分析水平(mg/kg)
Figure BDA0002701364470000093
结果和讨论：
饲料摄入量、体重增加、饲料转化率、特定生长率
饲喂0％FM饮食的罗非鱼对饲料中补充的分级较低水平GAA表现出明显的反应(表3)。在2个月实验期间，未记录有死亡数。与饲喂补充有0.06或0.14wt.-％的GAA饮食的鱼相比，暴露于未补充任何GAA的对照饮食的鱼表现出显著较低的生长性能。与所有其他处理相比，饲喂饮食GAA1.0(每MT补充1.37kg的GAA)的罗非鱼，每条鱼和每水族箱的生物量增加显著更高。其他性能参数也观察到相同趋势。虽然通过饮食GAA0.5至饮食GAA1.0观察到相对于对照的不同性能参数的逐步增加，但与阴性对照相比，喂食饮食GAA1.5的鱼的性能参数无显著改善。因此，本研究表明，饲料中存在GAA的最佳浓度，这导致鱼类性能的明显改善，同时违背最佳浓度水平会失去GAA的积极作用。因此，支持了罗非鱼可以很好地代谢GAA，和GAA至少在饲料中低肌酸(和/或低至无鱼料)水平下可以显著改善鱼的生长性能的假设。
表3:饲喂4种不同实验饮食的罗非鱼生长性能(均值±1SD)
Figure BDA0002701364470000101
肉质
表4示出了罗非鱼肉冷冻前后的弹性和硬度。
表4:罗非鱼肉的弹性(％)和硬度(gf/mm2)
Figure BDA0002701364470000102
已经发现，与无GAA的对照组的鱼相比，饲喂GAA的鱼表现出更好的肉质，特别是更好的肉弹性和肉硬度。与生长性能参数相反，其中违背GAA的最佳浓度导致GAA的积极作用趋于平稳，增加饲料中GAA的水平导致肉质参数持续增加，至少对于冷冻前的鱼是如此。
营养保留
表5示出了饲养60天后罗非鱼的能量、脂质和蛋白质保留值。
表5:饲喂实验饮食的罗非鱼的能量、脂质和蛋白质的保留
对照 GAA0.5 GAA1.0 GAA1.5
能量(％) 35.73±1.06 39.14±2.39 40.75±3.42 36.12±1.45
脂质(％) 98.54±7.03 93.50±6.92 83.16±16.21 83.87±8.95
蛋白质(％) 46.12±3.10 45.84±2.34 51.63±1.66 47.38±3.73
能量和蛋白质保留的结果与鱼类生长性能的结果相似。在喂食饮食GAA1.0的鱼中观察到最高的能量和蛋白质保留，而违背该浓度导致能量和蛋白质保留值显著降低。

Claims (15)

1.饲料用于在水产养殖中饲喂水生动物的用途，所述饲料包括选自胍乙酸、肌酸和这些分子的盐的化合物及其混合物。
2.根据权利要求1所述的用途，其用于提高水生动物的存活率和/或体重增加和/或饲料摄入量和/或饲料转化率和/或生长速率和/或营养保留和/或肉质，特别是肉弹性和/或肉硬度。
3.根据权利要求1或2所述的用途，其特征在于所述水生动物选自有鳍鱼，特别是选自辐鳍鱼科(Actinopterygii)，和甲壳动物，优选选自罗非鱼和其他丽鱼科鱼，鲤鱼和其他鲤科鱼，鲑鱼和其他鲑科鱼，鲶鱼，金枪鱼，鲈鱼，鳕鱼，胡瓜鱼，遮目鱼，丝足鱼，海鲈鱼，海鲤，石斑鱼，蛇头鱼，虾，龙虾，螃蟹，对虾和小龙虾。
4.根据前述权利要求任意一项所述的用途，其特征在于胍乙酸和/或肌酸和/或这些化合物的盐以0.02重量％至0.20重量％，优选0.05重量％至0.16重量％，特别优选0.08重量％至0.15重量％，尤其是0.11重量％至0.14重量％的量包含在所述饲料中。
5.根据前述权利要求任意一项所述的用途，其中所述饲料包括鱼料，其量小于10重量％、优选其量小于8重量％或5重量％、更优选其量小于3重量％、2重量％或1重量％，和/或植物料，其量为至少5重量％、优选至少10重量％、更优选其量为10重量％至60重量％。
6.在水产养殖中饲喂水生动物的方法，其中给所述水生动物饲喂饲料，所述饲料包括选自胍乙酸、肌酸和这些分子的盐的化合物以及这些化合物的混合物。
7.根据权利要求6所述的方法，其用于提高水生动物的存活率和/或体重增加和/或饲料摄入量和/或饲料转化率和/或生长速率和/或营养保留和/或肉质，特别是肉弹性和/或肉硬度。
8.根据权利要求6或7所述的方法，其特征在于所述水生动物选自有鳍鱼，特别是选自辐鳍鱼科，和甲壳动物，优选选自罗非鱼和其他丽鱼科鱼，鲤鱼和其他鲤科鱼，鲑鱼和其他鲑科鱼，鲶鱼，金枪鱼，鲈鱼，鳕鱼，胡瓜鱼，遮目鱼，丝足鱼，海鲈鱼，海鲤，石斑鱼，蛇头鱼，虾，龙虾，螃蟹，对虾和小龙虾。
9.根据前述权利要求任意一项所述的方法，其特征在于胍乙酸和/或肌酸和/或这些化合物的盐以0.02重量％至0.20重量％，优选0.05重量％至0.16重量％，特别优选0.08重量％至0.15重量％，尤其是0.11重量％至0.14重量％的量存在于饲料中。
10.根据前述权利要求任意一项所述的方法，其中所述饲料包括鱼料，其量小于10重量％、优选其量小于8重量％或5重量％、更优选其量小于3重量％、2重量％或1重量％，和/或植物料，其量为至少5重量％、优选至少10重量％、更优选其量为10重量％至60重量％。
11.根据前述权利要求任意一项所述的方法，其中所述饲料包括陆生动物的动物和/或动物副产物蛋白质来源，特别是陆生动物料，其量为至少2重量％，特别是其量为2重量％至30重量％，优选其量为为5重量％至30重量％，特别是其量为14重量％至20重量％。
12.根据前述权利要求任意一项所述的方法，其特征在于所述饲料包括以下组分的至少一种，优选至少三种或五种，更优选所有以下组分：
a)植物料，特别是选自大豆料、菜籽料、芥菜(canola)料、棉籽料及其组合，优选大豆料，优选其总量为10重量％至60重量％，更优选其量为15重量％至50重量％，特别是其量为20重量％至40重量％；
b)油或脂肪组分，特别是鱼油、玉米油或其组合，优选其量为1重量％至10重量％，特别是3重量％至8重量％；
c)小麦或小麦粉，优选其量为10重量％至50重量％，更优选其量为15重量％至45重量％，特别是其量为20重量％或40重量％；
d)陆生动物料，特别是禽肉料、肉骨料或其组合，优选其量为5重量％至30重量％，更优选10重量％至25重量％，特别是14重量％至20重量％；
e)磷酸盐，优选其量为0.5重量％至5重量％，特别是2重量％至5重量％；
f)木薯，特别是其量为1重量％至5重量％；
g)氨基酸，优选选自赖氨酸、甲硫氨酸、苏氨酸、缬氨酸、组氨酸、色氨酸及其混合物；
h)维生素。
13.饲料，其特征在于所述饲料包括以下组分：
a)胍乙酸和/或肌酸和/或其盐，其量为0.02重量％至0.20重量％，优选0.05重量％至0.16重量％，特别是优选0.08重量％至0.15重量％，尤其是0.11重量％至0.14重量％；
b)植物料，特别是选自大豆料、菜籽料、芥菜料、棉籽料及其组合，优选大豆料，优选其总量为10重量％至60重量％，更优选其量为15重量％至50重量％，特别是其量为20重量％至40重量％；
c)任选的油或脂肪组分，特别是鱼油、玉米油或其组合，优选其量为1重量％至10重量％，特别是3重量％至8重量％；
d)任选的小麦或小麦粉，优选其量为10重量％至50重量％，更优选其量为15重量％至45重量％，特别是其量为20重量％或40重量％；
e)任选的陆生动物料，特别是禽肉料、肉骨料或其组合，优选其量为5重量％至30重量％，优选10重量％至25重量％，特别是14重量％至20重量％；
f)任选的磷酸盐，优选其量为0.5重量％至5重量％，特别是2重量％至5重量％；
g)任选的木薯，优选其量为1重量％至5重量％；
h)任选的氨基酸，优选选自赖氨酸、甲硫氨酸、苏氨酸、缬氨酸、组氨酸、色氨酸及其混合物；
i)任选的维生素。
14.饲料，其特征在于所述饲料包括以下组分：
a)粗蛋白质，其量为25重量％至45重量％，特别是27重量％至40重量％；
b)钙，其量为1重量％至5重量％；
c)磷，其量为0.2重量％至1.5重量％；
d)甲硫氨酸和/或半胱氨酸，其量为0.25重量％至1.0重量％；
e)赖氨酸，其量为0.5重量％至2.5重量％；
f)胍乙酸和/或肌酸和/或其盐，其量为0.02重量％至0.20重量％，优选0.05重量％至0.16重量％，特别是优选0.08重量％至0.15重量％，尤其是0.11重量％至0.14重量％。
15.在水产养殖中饲喂水生动物的方法，特别是选自有鳍鱼，优选选自辐鳍鱼科，和甲壳动物，优选选自罗非鱼和其他丽鱼科鱼，鲤鱼和其他鲤科鱼，鲑鱼和其他鲑科鱼，鲶鱼，金枪鱼，鲈鱼，鳕鱼，胡瓜鱼，遮目鱼，丝足鱼，海鲈鱼，海鲤，石斑鱼，蛇头鱼，虾，龙虾，螃蟹，对虾和小龙虾，其特征在于给所述水生动物饲喂根据权利要求13或14所述的饲料。
CN201980022309.1A 2018-03-27 2019-03-20 胍乙酸和/或肌酸在水产养殖中的用途 Pending CN111935990A (zh)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP18164212.5 2018-03-27
EP18164212 2018-03-27
PCT/EP2019/056905 WO2019185408A1 (en) 2018-03-27 2019-03-20 Use of guanidinoacetic acid and/or creatine in aquaculture

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN111935990A true CN111935990A (zh) 2020-11-13

Family

ID=61837522

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201980022309.1A Pending CN111935990A (zh) 2018-03-27 2019-03-20 胍乙酸和/或肌酸在水产养殖中的用途

Country Status (6)

Country Link
EP (1) EP3772985A1 (zh)
CN (1) CN111935990A (zh)
BR (1) BR112020019467A2 (zh)
CL (1) CL2020002456A1 (zh)
DK (2) DK202070706A1 (zh)
WO (1) WO2019185408A1 (zh)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113208012A (zh) * 2021-05-19 2021-08-06 湖北嘉康生物科技有限公司 一种加州鲈诱食促消化功能性饲料添加剂

Families Citing this family (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110663821A (zh) * 2019-10-16 2020-01-10 固安君德同创生物工程有限公司 一种包被胍基乙酸的制备方法
ES2939033T3 (es) 2019-10-28 2023-04-18 Evonik Operations Gmbh Mezcla de endurecimiento
CN112471367A (zh) * 2020-12-23 2021-03-12 天津现代天骄水产饲料股份有限公司 一种降低鲤鱼饵料系数的配合饲料及其制备方法
EP4503948A1 (en) * 2022-04-08 2025-02-12 Can Technologies, Inc. Fish feed or fish feed additive
CN115553403A (zh) * 2022-11-03 2023-01-03 上海海洋大学 凡纳滨对虾肉质改善剂及其制备方法和应用

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1964633A (zh) * 2004-06-09 2007-05-16 底古萨股份公司 作为饲料添加剂的胍基乙酸
CN106721647A (zh) * 2016-12-19 2017-05-31 长沙瑞多康生物科技有限公司 一种罗非鱼的饲料添加剂
CN106721650A (zh) * 2016-12-19 2017-05-31 长沙瑞多康生物科技有限公司 一种鲤鱼的饲料添加剂

Family Cites Families (16)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US2654779A (en) 1950-12-23 1953-10-06 Int Minerals & Chem Corp Method of preparation of guanidino fatty acids
US2620354A (en) 1951-01-12 1952-12-02 Int Minerals & Chem Corp Production of guanidino fatty acids
US5030657A (en) * 1989-10-23 1991-07-09 University Of Georgia Research Foundation, Inc. L-carnitine supplemented catfish diet
GB9508443D0 (en) 1995-04-26 1995-06-14 Gilbertson & Page Biscuit for working racing or sporting dogs
NZ332830A (en) 1996-12-20 2000-04-28 Sueddeutsche Kalkstickstoff Creatine pyruvates, method for their production and their use in medicaments for weight control, body fat control, increasing muscle strength, the treatment of oxygen deficiency conditions and as free radical scavengers
DE19707694A1 (de) 1997-02-26 1998-08-27 Sueddeutsche Kalkstickstoff Kreatin-ascorbate und Verfahren zu deren Herstellung
DE19836450A1 (de) 1998-08-12 2000-02-17 Sueddeutsche Kalkstickstoff Stabile, Brenztraubensäure (Salze) enthaltende Formulierung für die Tierernährung
EP1051914A1 (de) * 1999-05-08 2000-11-15 DSM Fine Chemicals Austria GmbH Verwendung von Kreatin als Futterzusatz
DE10003835A1 (de) 2000-01-28 2001-08-16 Sueddeutsche Kalkstickstoff Formulierungen bei Dehydratationszuständen
US20090202672A1 (en) * 2008-02-11 2009-08-13 Monsanto Company Aquaculture feed, products, and methods comprising beneficial fatty acids
JP6017474B2 (ja) * 2014-02-14 2016-11-02 マルハニチロ株式会社 養殖魚類、畜産動物、ペット動物の内臓脂肪蓄積抑制用組成物、及び該内臓脂肪蓄積抑制用組成物を用いた動物用飼料
CN107080059A (zh) * 2017-04-26 2017-08-22 安庆贾森生态农业科技有限公司 一种提高鱼幼苗存活率的饲料及其制备方法
CN109198274A (zh) * 2018-10-21 2019-01-15 长沙瑞多康生物科技有限公司 一种增强草鱼免疫力的饲料添加剂
CN109198281A (zh) * 2018-10-21 2019-01-15 长沙瑞多康生物科技有限公司 一种增强鳙鱼免疫力的饲料添加剂
CN109198284A (zh) * 2018-10-22 2019-01-15 长沙瑞多康生物科技有限公司 一种增强黄颡鱼免疫力的饲料添加剂
CN109198729B (zh) * 2018-10-26 2024-01-09 惠州市新泓威科技有限公司 电子烟雾化器模块化自动生产线

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1964633A (zh) * 2004-06-09 2007-05-16 底古萨股份公司 作为饲料添加剂的胍基乙酸
CN106721647A (zh) * 2016-12-19 2017-05-31 长沙瑞多康生物科技有限公司 一种罗非鱼的饲料添加剂
CN106721650A (zh) * 2016-12-19 2017-05-31 长沙瑞多康生物科技有限公司 一种鲤鱼的饲料添加剂

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113208012A (zh) * 2021-05-19 2021-08-06 湖北嘉康生物科技有限公司 一种加州鲈诱食促消化功能性饲料添加剂

Also Published As

Publication number Publication date
EP3772985A1 (en) 2021-02-17
DK202070706A1 (en) 2020-11-02
DK181710B1 (en) 2024-10-25
DK202370244A1 (en) 2023-06-06
WO2019185408A1 (en) 2019-10-03
BR112020019467A2 (pt) 2020-12-29
CL2020002456A1 (es) 2020-12-28

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Jia et al. Protein-sourced feedstuffs for aquatic animals in nutrition research and aquaculture
DK181710B1 (en) Method and use of a guanidinoacetic acid containing feedstock for feeding aquatic animals in aquaculture
Lovell Nutrition of aquaculture species
RU2341972C2 (ru) Применение гуанидинуксусной кислоты в качестве кормовой добавки
Bai et al. Additives in aquafeed: An overview
Kim et al. Comparison of taurine biosynthesis ability between juveniles of Japanese flounder and common carp
Yang et al. Assessment of dietary lysine requirement for silver perch (Bidyanus bidyanus) juveniles
JPH05500755A (ja) カルニチン補充のナマズ飼料
JP2004057156A (ja) 養魚用飼料
CA2871209C (en) Treatment of poultry, pigs or fish for reducing the feed conversion ratio or increasing their bodyweight gain
Lee et al. Haemoglobin powder as a dietary fish meal replacer in juvenile Japanese eel, Anguilla japonica (Temminck et Schlegel)
NO20151589A1 (en) Method for improving mineral resorption in farmed fish and crustacean
CA2704578C (en) Agent for improving carcass performance in finishing hogs
Boonyaratpalin Nutritional requirements of commercially important shrimps in the tropics
Coloso Feed formulation for sustainable aquaculture
Hoseini et al. Effect of dietary free L-Lysine on growth performance and muscle composition of Beluga Huso huso (Linnaeus 1785) juveniles
WO2017175718A1 (ja) 水産生物用飼料
García-Romero et al. Marine and freshwater crab meals in diets for red porgy (Pagrus pagrus): Digestibility, ammonia-N excretion, phosphorous and calcium retention
Subandiyono et al. Growth performances, feed utilization and hematological parameters of the carp (Cyprinus carpio), according to the dietary glutamate
Luo et al. Advances in the study on nutrient requirements of grouper (Epinephelus sp.): a review
Koven Gilt-head sea bream, Sparus aurata.
Akbary Growth yield, carcass traits, biochemical and non-specific immune parameters in grey mullet, Mugil cephalus Linnaeus, 1758 under cyclic starvation and L-carnitine supplementation
Fattahi et al. The effects of dietary betaine on the growth performance and carcass synthesis of caspian roach (Rutilus rutiluscaspicus) fingerlings.
Adebayo et al. Dietary Protein Requirement of Clariid Catfish Hybrid, Clarias gariepinus X Heterobranchus bidorsalis Fry Fed Practical Diets
Bakiu et al. Taurine as an Important Nutrient for Future Fish Feeds of Aquaculture in Albania.

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination