CN111320604B - 一种治疗小儿口腔黏膜疾病的化合物、制备方法及其用途 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种改进的沙利度胺的衍生物或其药学上接受的盐、制备方法及其用途，所述衍生物的结构如式I所示，其中n为0至3的整数。实验结果显示，所述化合物具有优异的对于口腔黏膜细菌的抑制作用，而对于引发周围神经细胞病变的毒副作用却大大低于沙利度胺，临床应用的潜在风险大大减小，尤其适用于治疗小儿口腔黏膜疾病。

Description

一种治疗小儿口腔黏膜疾病的化合物、制备方法及其用途

技术领域

本发明涉及药学领域，具体涉及一种用于治疗小儿口腔黏膜的化合物，更具体地，涉及一种沙利度胺类改进衍生物的化合物、制备方法及其应用。

背景技术

口腔黏膜病是指发生于口腔黏膜及软组织上类型各异、种类繁多的疾病总称。儿童易患的口腔黏膜病包括：口腔黏膜感染性疾病、变态反应性疾病、溃疡类疾病、斑纹类疾病及唇舌疾病等。由于儿童正处在全身器官发育期，肝、肾、中枢神经系统等尚未发育完全，药物代谢易对肝肾功能产生不良影响，具体表现在，1)婴幼儿的皮肤角化层较薄，黏膜血液丰富，皮肤、黏膜娇嫩，因此经皮肤或黏膜吸收药物较成人快而多，用药不当易引起药物吸收过量甚至中毒；2)新生儿肝肾功能极度不成熟，肝药酶活性低，对药物的代谢能力较差；婴幼儿的血脑屏障不完善，中枢对部分药物比较敏感；3)小儿的新陈代谢旺盛，体液所占比例大，会对药物分布容积及药物效应强度产生影响，特别是对影响水盐代谢或酸碱代谢的药物比较敏感。因此，儿童由于自身的生理特点，作为特殊人群，针对疾病特征，对于合适的药物和给药途径的选择较成年人会更加谨慎，相较于对成人的疾病治疗，对所用药的副作用也更加关注，避免用药的不当对儿童的成长发育造成深远的影响。

沙利度胺是由联邦德国的Chemie Grünenthal公司于1954年研发，最初作为一种镇静药品推向市场。1998年，沙利度胺作为抗麻风结节性红斑药物被美国食品药品监督管理局批准上市。目前，沙利度胺作为抗肿瘤药物以及许多炎症性疾病、自身免疫性疾病等免疫相关疾病的二线用药而广泛应用于临床。近年来的研究发现，在口腔黏膜疾病中，除了常用于治疗复发性阿弗他溃疡、白塞病等疾病外，沙利度胺用于治疗口腔扁平苔藓、慢性盘状红斑狼疮、大疱性疾病等，能取得良好的治疗效果。然而，由于沙利度胺副作用较大，其很少被用于儿童的口腔黏膜疾病的治疗。其中，周围神经病变是沙利度胺的最常见不良反应中，且对患者日常生活影响最大的一种，大多出现在服药的第一年中。经过临床电生理测定发现，在服用沙利度胺的患者中，有50％的患者可出现周围神经的电位改变，而出现此种变化的患者有50％出现周围神经病变的体征。在出现周围神经病变的患者中，约有25％的患者停药后症状可消失，另有25％的患者停药后症状好转，其余的患者症状无明显改善。发生周围神经病变的人数随着单次使用沙利度胺的量的增加而增加，与服用沙利度胺的总量并没有明显联系。对于成年人，当单次口服的剂量小于25mg时，周围神经病变的发生率最低，50～75mg时周围神经病变发生率为前者的8.2倍，大于75mg时周围神经病变发生率是小于25mg时的20.2倍。因此，只能通过给患者使用尽可能低的剂量来防止周围神经病变的发生，而无法通过监测周围神经的电位改变来对周围神经病变做出预测和预防。

基于上述背景，寻找一种疗效好、副作用小、用药安全的，尤其适用于治疗小儿口腔黏膜疾病的药物化合物成为了一种迫切需求，本发明的目的就是为了解决以上技术问题。

发明内容

本发明的目的之一，在于基于现有技术，提供一种新型的治疗小儿口腔黏膜疾病的药物，副作用潜在风险小，治疗效果好。为了达到这个目的，本发明提供一种改进的沙利度胺类衍生物或其药学上接受的盐，所述化合物具有式I所示的结构：

其中，n为0至3的整数。

作为优选，所述化合物选自如下化合物I-a：

进一步地，所述的药学上接受的盐为式I化合物与无机酸或有机酸形成的盐，优选为式Ⅰ化合物与盐酸、硫酸、苯磺酸、对甲苯磺酸、磷酸、氢溴酸、马来酸、富马酸或苹果酸形成的盐。

本发明的另一目的在于提供所述式I化合物的制备方法，其合成路线如下：

进一步地，所述方法具体包括如下步骤：

步骤(1)，将沙利度胺溶于有机溶剂1中，加热至45～70℃，边搅拌边滴加式II化合物，加完后保持该温度继续反应3～6小时，冷却至室温，滴加无机碱水溶液，调节pH至7.5～8，加入乙酸乙酯，静置分层，减压蒸馏有机相，得到中间体式III化合物；

步骤(2)，将式III化合物溶于有机溶剂2中，在缚酸剂的存在下，加入氯代环氧乙烷，在70～95℃下反应4～8小时后，加入稀盐酸水溶液，常温下反应1～2小时，得到式I化合物。

进一步地，所述步骤(1)中，沙利度胺与式II化合物的摩尔比为1:1.05～1.5，优选为1:1.05～1.2；所述有机溶剂1选自乙腈、二氯乙烷、DMSO或DMF；所述的无机碱选自氢氧化钠、氢氧化钾、碳酸钠或碳酸钾。

进一步地，所述步骤(2)中的式III化合物与氯代环氧乙烷的摩尔比为1:1～2，优选为1:1.2～1.5；所述有机溶剂2选自乙腈或DMF；所述缚酸剂选自三乙胺、吗啉、乙醇钠、碳酸钾或碳酸钠。

本发明的再一个目的在于提供一种药物组合物，包含如上所述的化合物或其药学上可接受的盐，以及药学上接受的辅料；所述药学上可接受的辅料例如但不限定于可选自以下一种或多种组合：纤维素衍生物、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙二醇、甘露醇、木糖醇、淀粉、环糊精、硬脂酸镁、对羟基苯甲酸乙酯；特别优选为纤维素衍生物，所述纤维素衍生物的例子包括微晶纤维素、羟丙基纤维素、羟甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、交联羧甲基纤维素钠等。

作为优选，所述药物组合物为口服剂型，例如选自溶液剂、糖浆、悬浮液、片剂、膜剂、泡腾片；优选为咀嚼片，口服速崩片。

本发明的另一目的在于提供所述的化合物或其药学上可接受的盐，或所述的药物组合物用于制备用于治疗口腔黏膜类疾病的药物的用途，优选用于制备治疗小儿口腔黏膜类疾病的药物。

上述所述的医药用途中，根据动物病情以及用药部位可以将药物组合物制备成合适的药物制剂以方便用药，对于本发明药物组合物的给药时间和给药次数需要根据病情的具体诊断结果而定，这在本领域技术人员掌握的技术范围之内。例如，将对小鼠的治疗方案应用于人身上，所有药物对人的有效剂量可以通过该药物对小鼠的有效剂量进行换算，这对于本领域的普通技术人员来说是显而易见的。

附图说明

图1表示缩爪阈值，表明了由机械性刺激引起异常性疼痛，施用药物沙利度胺、化合物I-a、载体的动物(对照组)，在对照组和施用药物沙利度胺或化合物I-a之前(第-1天)或之后(第5、7、10、14天)，以克(g)为单位测量所述缩爪阈值。数据显示为每组10只动物的平均值±SEM。*＊*表示相比于假模组P<0.001；###表示相比于对照组P<0.001，#表示相比于对照组P<0.05。

图2表示缩爪的次数，表明了由冷刺激引起异常性疼痛，所述缩爪的次数被测量为在5分钟的间隔内将丙酮涂抹于爪背面之后缩足响应的次数，在施用药物沙利度胺、化合物I-a、载体的动物(对照组)中，在对照组和施用组施用药物沙利度胺或化合物I-a之前(第-1天)和之后(第5、7、10、14天)评价所述缩爪的次数。数据显示为每组10只动物的平均值±SEM。*＊*表示相比于假模组P<0.001；###表示相比于对照组P<0.001，#表示相比于对照组P<0.05。

具体实施方式

尽管在本申请中示出和描述了本发明优选的实施方案，但是对本领域技术人员而言明显的是，该实施方案仅以实例的方式提供。本领域技术人员将想起大量的变更、变换和置换，这些均在本发明范围内。应理解的是，在实践本发明中，可以使用本申请所述的本发明实施方案的各种备选方案。意在所附权利要求限定了本发明范围并且由此覆盖了在这些权利要求范围内的方法和结构及它们的等同形式。

除非另外定义，本申请使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属领域技术人员通常所理解相同的含义。将本申请提及的所有专利和出版物通过引用的方式并入本文。

实施例1：

化合物I-a的制备：

步骤(1)：将沙利度胺(258mg，1mmol)溶于二氯乙烷中，加热至60℃，边搅拌边滴加式II化合物(83.5mg，1.05mmol)，加完后保持该温度继续反应5小时，冷却至室温，滴加无机碱水溶液，调节pH至7.5，加入乙酸乙酯，静置分层，减压蒸馏有机相，得到中间体式III化合物280mg，直接用于下一步；

步骤(2)，将步骤(1)所得到的式III化合物溶于乙腈中，加入碳酸钠(50mg)，加入氯代环氧乙烷(86.3mg，1.1mmol)，在70～95℃下反应6小时后，加入稀盐酸水溶液，常温下反应1小时，得到式I-a化合物302mg(HPLC纯度99.5％)。，两步反应的总收率为87.5％。

¹HNMR(CDCl₃)：δ7.42(d，2H)，7.29(d，2H)，6.22(t，1H)，5.87(s，1H)，5.13(t，1H)，4.92(t，2H)，3.89(m，2H)，3.76(t，2H)，3.23(d，2H)，3.12(d，2H)，2.86(m，2H)。

实施例2：本发明药物化合物对口腔常见细菌的抗菌实验

(1)体外的抗菌活性实验：采用中华人民共和国卫生行业标准WS/T248-2005：厌氧菌的抗微生物药敏感试验方法—琼脂稀释法，对6种口腔常见的致病菌进行体外的抗菌活性实验，根据MIC值测定结果可以比较几种抗菌药物的效果，实验方法如下：

①抗菌药物贮存液制备：采用无菌去离子水，配制质量百分比浓度为1％化合物I-a溶液，质量百分比浓度为1％沙利度胺溶液；

②药物实验液配制：取配置好的药物贮存液，用无菌BHI肉汤培养基对倍稀释，配制成对倍递减的实验溶液：溶液浓度分别为400、200、100、50、25mg/ml，置5℃保存；

③含药琼脂平皿的配制：选用BHI琼脂作为实验琼脂培养基，取药物实验液与温度为45-55℃的BHI营养琼脂混合并立即倾注于无菌平皿中，待冷却后备用，含药琼脂平皿的药物质量浓度分别为：80、40、20、10、5、2.5mg/ml；

④实验菌株准备：选用口腔临床常见的口腔致病优势菌作为本实验的实验菌株，细菌名称如下：菌株1为白色念珠菌，菌株2为金黄色葡萄球菌，菌株3为产黑色素类杆菌，菌株4为牙龈卟啉单胞菌；菌株5为化脓性球菌，菌株6为大肠肝菌；

⑤实验菌液的准备：校正菌液浓度为105CFU/ml，在每个BHI琼脂表面接种实验菌株2μl，置于厌氧培养箱中培养48h，取48h纯培养物接种BHI肉汤并放置厌氧培养箱内培养48h；

⑥MIC值测定：釆用厌氧菌的抗微生物药敏感试验方法—琼脂稀释法，测定化合物I-a、沙利度胺、去离子水(对照试验)，对6株口腔临床常见优势菌的最小抑菌浓度(MIC)。

两种实验药物对6株口腔临床常见优势菌的MIC值结果见表1。

表1:种实验药物水溶液对口腔主要致病菌的MIC值(mg/ml)

实验结果显示：本发明化合物I-a对6株口腔临床常见优势菌有明显的抑制作用，抑菌效果不低于沙利度胺，其中对白色念珠菌，牙龈卟啉单胞菌与化脓性球菌的抑菌效果最佳。

实施例3：本发明化合物对大鼠的周围神经病变的影响

将雄性大鼠(200-250g)饲养在具有受控的温度(22±1℃)、湿度(60±10％)和光照(每天12h)的房间中；食物和水可随意获得。

四次(每天一次)腹膜内注射药物：(1)沙利度胺、或(2)化合物I-a(注射剂量均为：2mg/kg/日；累积剂量8mg/kg)或载体(盐水，1ml/kg/日)，隔日(第0、2、4和6天)施用。在施用药物/载体之前(第-1天)进行行为测试，并在注射药物(1)/(2)/载体之后第5-7-10-14天再次进行行为测试。

机械性异常性疼痛的评价：

为了评估机械性异常性疼痛的发展，使用动态足底触觉计(Dynamic PlantarAesthesiometer，DPA)测量对触觉刺激的敏感性。将动物放置在具有网状金属地板并由塑料穹顶覆盖的房间中，所述房间使得动物能够自由行走，但不能跳跃。然后，在后爪的足底中部皮肤中传递机械性刺激。截止值(cut-off)固定在50g。在施用药物(1)/(2)/载体之前(第-1天)和施用之后第5、7、10和14天对两只爪进行测试。

冷异常性疼痛的评价：

将冷敏感度测量为将丙酮涂抹于爪背面之后缩足响应的次数。当大鼠站立在金属网上时，用与薄聚乙烯管连接的注射器将一滴丙酮涂抹于爪背面。在丙酮在爪背面铺开之后，快速缩足响应被视为是冷异常性疼痛的体征。在施用药物(1)/(2)/载体之前(第-1天)和施用之后第5、7、10和14天对两只爪测量冷响应。

统计分析：

所有数据均以平均值±SEM表示。通过双向方差分析(ANOVA)和其后的用于多重比较的邦弗朗尼事后检验(Bonferroni post hoc test)确定组间差异的显著性。显著性水平设定为P<0.05。

结果：

在三组动物中评价机械性异常性疼痛和冷异常性疼痛：药物I-a组，药物沙利度胺组，载体的对照组。根据在方法中所描述的方案进行处理的施用。

在施用药物沙利度胺之后，与载体对照组大鼠相比，沙利度胺组动物显示出明显的机械性异常性疼痛和冷异常性疼痛(图1和图2)。特别地，在对照组中，在动态足底触觉计测试中，在第5、7、10和14天缩爪阈值显著降低，证明了神经病变的发作(图1，黑色柱)。在同一组中，在冷异常性疼痛测试中，在第5、7、10和14天缩爪阈值的数量显著增加，证明了神经病变的发作(图2，黑色柱)。

相较于施用沙利度胺的动物，施用本发明药物I-a的动物(药物I-a组)在第5天(P<0.05)、第7天(P<0.001)和第10天(P<0.001)显示出的机械性异常性疼痛的显著降低。在第14天没有测量到额外的显著的抗异常性疼痛作用(图1)。类似地，与施用沙利度胺的动物相比，施用本发明药物I-a的动物(药物I-a组)在第5天(P<0.05)、第7天(P<0.001)和第10天(P<0.001)显示出冷异常性疼痛的显著降低。在第14天没有测量到额外的抗异常性疼痛作用(图2)。

所获得的结果清楚地显示，施用本发明化合物I-a相较于施用沙利度胺所引起的机械性异常性疼痛和冷异常性疼痛的显著降低。

实施例4片剂

将1g化合物I-a、25g淀粉、5g甘露醇、8g木糖醇和45g微晶纤维素研细混匀，以70％乙醇制粒过筛，添加3g硬脂酸镁混匀，压片即得。

本发明内容仅仅举例说明了要求保护的一些具体实施方案，其中一个或更多个技术方案中所记载的技术特征可以与任意的一个或多个技术方案相组合，这些经组合而得到的技术方案也在本申请保护范围内，就像这些经组合而得到的技术方案已经在本发明公开内容中具体记载一样。

Claims (10)

1.式I所示的化合物：

或其药学上接受的盐，其中，n为0至3的整数。

2.权利要求1所述的化合物或其药学上接受的盐，其为如下化合物I-a：

3.权利要求1或2所述的化合物或其药学上接受的盐，其特征在于：所述的药学上接受的盐为式Ⅰ化合物与盐酸、硫酸、苯磺酸、对甲苯磺酸、磷酸、氢溴酸、马来酸、富马酸或苹果酸形成的盐。

4.权利要求1所述的式I化合物的制备方法，其合成路线如下：

5.权利要求4所述的制备方法，其具体包括如下步骤：

步骤(1)，将沙利度胺溶于有机溶剂1中，加热至45～70℃，边搅拌边滴加式II化合物，加完后保持该温度继续反应3～6小时，冷却至室温，滴加无机碱水溶液，调节pH至7.5～8，加入乙酸乙酯，静置分层，减压蒸馏有机相，得到中间体式III化合物；

步骤(2)，将式III化合物溶于有机溶剂2中，在缚酸剂的存在下，加入氯代环氧乙烷，在70～95℃下反应4～8小时后，加入稀盐酸水溶液，常温下反应1～2小时，得到式I化合物。

6.权利要求5所述的制备方法，其特征在于：所述步骤(1)中，沙利度胺与式II化合物的摩尔比为1:1.05～1.5；所述有机溶剂1选自乙腈、二氯乙烷、DMSO或DMF；所述的无机碱选自氢氧化钠、氢氧化钾、碳酸钠或碳酸钾。

7.权利要求5或6所述的制备方法，其特征在于：所述步骤(2)中的式III化合物与氯代环氧乙烷的摩尔比为1:1～2；所述有机溶剂2选自乙腈或DMF；所述缚酸剂选自三乙胺、吗啉、乙醇钠、碳酸钾或碳酸钠。

8.一种药物组合物，包含权利要求1-3任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，以及药学上接受的辅料；所述药学上可接受的辅料选自以下一种或多种组合：纤维素衍生物、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙二醇、甘露醇、木糖醇、淀粉、环糊精、硬脂酸镁、对羟基苯甲酸乙酯；所述纤维素衍生物选自微晶纤维素、羟丙基纤维素、羟甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、交联羧甲基纤维素钠。

9.根据权利要求8所述的药物组合物，其特征在于所述药物组合物为口服剂型，所述口服剂型选自溶液剂、糖浆、悬浮液、片剂、膜剂。

10.根据权利要求1-3任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐或权利要求8或9所述的药物组合物用于制备用于治疗口腔黏膜类疾病的药物的用途，所述口腔黏膜类疾病为小儿口腔黏膜类疾病。

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