CN111246882A - 抗il1rap抗体 - Google Patents

Abstract

除其他外，本文提供了能够结合白介素‑1受体辅助蛋白(IL1RAP)的抗体。本文提供的抗体包括新的轻链序列和重链序列，并且高效和特异性地结合IL1RAP。本文提供的抗IL1RAP抗体，除其他外，可以用于治疗表达IL1RAP的癌症，如AML。

Description

抗IL1RAP抗体

相关申请的交叉引用

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发明背景

急性髓性白血病(AML)是一种破坏性造血系统恶性肿瘤，其可以导致造血衰竭和死亡。尽管对该疾病的了解日益增加，但目前的治疗选择仅使少数AML患者获益。治疗的有限成功被认为至少部分是由于化疗和/或其他分子靶向治疗不能消除所谓的白血病干细胞(LSC)。因此，本领域需要特异性消除LSC同时不伤害正常造血干细胞的治疗。

免疫治疗方法有希望成为治疗AML患者的有效方法。然而，为了获得成功，免疫治疗必须允许选择性靶向和破坏LSC。本文提供了解决这一问题和本领域其他需求的组合物和方法。

发明简述

在一方面，提供了一种抗白介素-1受体辅助蛋白(IL1RAP)抗体，该抗体包括轻链可变结构域和重链可变结构域，其中该轻链可变结构域包括：如SEQ ID NO:1所述的CDRL1、如SEQ ID NO:2所述的CDR L2和如SEQ ID NO:3所述的CDR L3；其中该重链可变结构域包括：如SEQ ID NO:4所述的CDR H1、如SEQ ID NO:5所述的CDR H2和如SEQ ID NO:6所述的CDR H3。

在一方面，提供了一种编码如本文所提供抗体(包括其实施方案)的分离核酸。

在一方面，提供了一种药物组合物，该药物组合物包括本文所提供的治疗有效量的抗体(包括其实施方案)和药学上可接受的赋形剂。

在一方面，提供了一种在有其需要的受试者中治疗癌症的方法，该方法包括给受试者施用本文提供的治疗有效量的抗体(包括其实施方案)，从而治疗受试者中的癌症。

在一方面，提供了一种重组蛋白，该重组蛋白包括：(i)抗体区，其包括：(a)包括如SEQ ID NO:1所述的CDR L1、如SEQ ID NO:2所述的CDR L2和如SEQ ID NO:3所述的CDR L3的轻链可变结构域；和(b)包括如SEQ ID NO:4所述的CDR H1、如SEQ ID NO:5所述的CDR H2和如SEQ ID NO:6所述的CDR H3的重链可变结构域；和(ii)跨膜结构域。

在另一个方面，提供了一种重组蛋白，该重组蛋白包括：(i)能够结合效应细胞配体的第一抗体区；和(ii)第二抗体区，其包括：(a)包括如SEQ ID NO:1所述的CDR L1、如SEQID NO:2所述的CDR L2和如SEQ ID NO:3所述的CDR L3的轻链可变结构域；和(b)包括如SEQID NO:4所述的CDR H1、如SEQ ID NO:5所述的CDR H2和如SEQ ID NO:6所述的CDR H3的重链可变结构域。

在一方面，提供了一种编码本文所提供重组蛋白(包括其实施方案)的分离核酸。

在一方面，提供了一种药物组合物，该药物组合物包括本文所提供的治疗有效量的重组蛋白(包括其实施方案)和药学上可接受的赋形剂。

在一方面，提供了一种在有其需要的受试者中治疗癌症的方法，该方法包括给受试者施用本文提供的治疗有效量的重组蛋白(包括其实施方案)，从而治疗受试者中的癌症。

在一方面，提供了一种抑制细胞增殖的方法，该方法包括：(i)将该细胞与本文提供的抗IL1RAP抗体(包括其实施方案)接触，或与本文提供的重组蛋白(包括其实施方案)接触，从而形成经接触的细胞；和(ii)允许本文提供的抗IL1RAP抗体，重组蛋白(包括其实施方案)结合经接触的细胞上的IL1RAP，从而抑制该细胞的增殖。

附图简述

图1A-1D.人源天然噬菌体展示文库的构建。图1A：使用来自10名健康供体的外周血单核细胞(PBMC)构建人源抗体噬菌体展示文库。由纯化B细胞的RNA合成的cDNA用作抗体重链(VH)和轻链(VL)可变区扩增的模板，并与接头(Gly4Ser)₃融合。所有scFv的混合物用限制性内切酶消化，并与线性化的噬菌体载体连接。电转化后，收集TG1细菌，制备甘油储备液，以在-80℃条件下储存文库。文库的质量取决于其多样性(图1B-1C)和容量。文库容量为9.72x 10⁹个菌落。图1B：分析了随机挑选的50个克隆中的重链(左)和轻链(右)的CDR3长度。图1C：根据50个克隆的测序结果，分析了噬菌体展示文库的不同重链(上)和轻链(下)超亚家族的重叠度。CDR3长度和VH家族的分布与之前报告的抗体库下一代测序的结果一致。图1D：使用重组人IL1RAP蛋白的IL1RAP抗体的生物扫描。在第四轮时观察到富集。也参见与图1D相对应的表2。

图2A-2D.抗IL1RAP单克隆抗体选自人源天然噬菌体展示文库。筛选/测序过程得到12个独特的抗体序列。因此，申请人从其噬菌体展示文库中挑选12个阳性克隆，将这些克隆中编码这些抗体重链和轻链的基因克隆到IgG表达载体，以在expi293细胞中进行瞬时表达。通过蛋白A树脂纯化抗体，以用于功能研究。图2A：12个阳性克隆与重组IL1RAP蛋白的结合。将1μg/ml重组IL1RAP蛋白包被于96孔板上，4度过夜。从1μg/ml开始以三倍连续稀释的纯化抗体加入每个孔中。HRP-抗人FC抗体用作检测抗体。图2B：根据ELISA结合曲线计算12个阳性克隆的EC₅₀。图2C：通过Cr⁵¹释放试验检测的抗体依赖性细胞毒性(ADCC)。将100ng/ml抗体加入1x10⁴个Cr⁵¹标记的MV4-11细胞中。2x10⁵个NK细胞用作效应细胞。孵育10小时后检测到特异性裂解百分比。图2D：通过BiacoreT100检测的1D5亲和力。结合ELISA和ADCC结果，申请人选择1D5作为双特异性抗体和CAR-T开发的优良克隆。申请人随后使用BiacoreT100检查其K_D的准确性。1D5的KD为21.2nM。

图3A-3C.抗CD3XIL1RAP双特异性抗体。图3A：抗CD3XIL1RAP双特异性抗体设计的示意图。将双特异性抗体组装成scFv-FC。为了促进异源二聚体的形成，将杵臼(Knobs-into-Holes)构建体应用于申请人的双特异性抗体。根据IgG-FC骨架，采用定点诱变试剂盒(Invitrogen,Carlsbad,CA)设计FC杵臼构建体。对于FC-knob构建体，在一个IgG-FC骨架的CH3结构域(T366W，称为knob)引入一个突变。对于FC-hole构建体，在另一种IgG-FC骨架的CH3结构域(T366S、L368A和Y407V，称为hole)引入三种突变。为了避免轻链和重链的错配，申请人构建了单链可变片段(scFv)，通过(Gly3Ser)₄接头将同一抗体的重链和轻链连接起来。然后将抗CD3抗体和抗IL1RAP蛋白抗体的scFv片段分别克隆到IgG-FC-knob和IgG-FC-hole载体上。为进一步消除FCγR与AML细胞的非特异性结合，申请人在CH2区域引入了双突变(L234A、L235A)。图3B：单特异性和双特异性抗体的表达。纯化蛋白的SDS-PAGE凝胶结果显示抗CD3-Knob-FC、抗-IL1RAP-Hole-FC和抗-CD3xIL1RAP抗体均得到表达。泳道1-3是非还原型蛋白：抗CD3 knob抗体，抗IL1RAP hole抗体，抗CD3XIL1RAP双特异性抗体。泳道4-6是还原型蛋白。泳道7为非还原型双特异性抗体，泳道8为还原型双特异性抗体。如图3B所示，双特异性抗体(泳道3)的大小介于两个单特异性抗体之间。图3C：使用流式细胞术检测抗CD3XIL1RAP抗体与T细胞和IL1RAP蛋白的双重结合。将双特异性抗体与T细胞共同孵育后，加入带his标签的重组IL1RAP蛋白。FITC-抗his抗体用于检测IL1RAP蛋白与双特异性抗体的结合。

图4A-4I.抗CD3XIL1RAP双特异性抗体诱导AML细胞系中的T细胞活化和细胞毒性。图4A：不同AML细胞系中IL1RAP表达的基因组平均荧光强度(MFI)，Raji用作阴性对照。除KG1a基因组培养基荧光强度(MFI)略高于Raji的外，其余六个细胞系的MFI均显示IL1RAP表达量显著高于Raji的。图4B：比较不同AML细胞系中每个细胞结合的抗体拷贝数。基于图4A和图4B所示结果，申请人决定使用HL60、MV4-11、THP1和KG1a作为高至低水平IL1RAP的细胞系谱并且Raji作为阴性对照，以用于功能试验。图4C：在E:T(效应细胞：靶细胞比)为3:1时，用效应T细胞和靶向AML细胞孵育检测T细胞依赖性细胞毒性(TDCC)，孵育后48小时时检查特异性裂解百分比。通过流式细胞术测定特异性裂解，使用以下公式计算：％特异性裂解＝(靶细胞^+T细胞-靶细胞^{+BsAb+T细胞})/靶细胞^+T细胞)x100％。通过定量细胞因子TNF-α(图4D)、IFN-r(图4E)、Granzyme B(图4F)和细胞膜标志物CD69(图4G)和CD25(图4H)检查T细胞活化。图4I：长期杀伤试验中检测的不同E:T比。

图5A-5D.AML患者样品显示出高水平的IL1RAP表达。图5A：AML患者样品的三个代表性IL1RAP表达水平。图5B：不同AML患者样品中IL1RAP表达的基因组平均荧光强度(MFI)，PBMC作为正常对照。与来自健康供体的PBMC相比，所有AML患者样品均显示IL1RAP表达增强，如显著更高的MFI所示。图5C：在E:T比为5:1时，通过48小时长期杀伤试验检查T细胞毒性。图5D.T细胞依赖性细胞毒性试验(TDCC)，一式三份。CD34+细胞的IL1RAP表达与大量白血病细胞相当。TDCC表明在大多数样品中特异性杀伤率为90％，在样品667中为60％，该样品的IL1RAP表达水平最低。分选CD34⁺和未分选AML原始细胞之间没有观察到差异。

图6A-6B.抗CD3XIL1RAP有效治疗了NSG小鼠中的MV4-11 AML。图6A：通过生物发光成像监测肿瘤生长。通过尾静脉向每只小鼠注射1x10⁶个MV4-11细胞。第7天开始给予每只小鼠200μg双特异性抗体和3x10⁶个T细胞。后续治疗和成像时间如以下箭头所示。在用溶媒、仅T细胞或对照BsAb和T细胞处理的MV4-11^Luci细胞移植的NSG小鼠中观察到白血病的大量浸润。另外，在第20天，一个剂量治疗后，和第37天消除，除一只小鼠外，于接受T细胞和抗IL1RAPxCD3 BsAb治疗的小鼠中观察到白血病负荷的大量减少。第4次处理时，该组中的一只小鼠在第18天死于操作不当。图6B：生存曲线。4只小鼠中有3只在第40天仍存活，而其他三组无小鼠存活。值得注意的是，接受T细胞或T细胞和同型对照治疗的小鼠生存期也短于对照小鼠的，这可能是由于T细胞的毒性。申请人还观察到BsAb治疗小鼠的体重减轻，这可能是由于细胞因子释放所致。

图7A-7B.与AML细胞系共培养时，转导IL1RAPCAR的Jurkat细胞可以被激活。图7A：含修饰免疫球蛋白G4铰链、CD28的修饰跨膜和细胞内信号传导结构域以及CD3z信号传导结构域的CAR示意图。也显示了T2A核糖体跳跃序列和EGFRt转导标记物。使用pRSV-Rev、pMDLg/pRRE、pMD2.G和pELNS CAR质粒转染293T细胞，在24h和48h收集上清液，采用高速超速离心法进行合并和浓缩。使用HT-78细胞测定慢病毒滴度，并在-80℃保存备用。图7B：使用IL1RAP CAR或mock CAR转导的Jurkat细胞。在HL60、THP1或KG1a细胞共培养的Jurkat细胞中检测到CD69，这三种细胞分别代表不同的IL1RAP表达水平。Raji细胞用作阴性对照。在IL1RAP-CAR细胞的活化中检测到CD69。当与表达靶细胞的IL1RAP共培养时，观察到IL1RAP-CAR-Jurkat细胞的活化，而mock-CAR-Jurkat细胞保持静止。当Raji细胞或单独共培养时，IL1RAP-CAR-Jurkat细胞与mock-CAR-Jurkat细胞一样保持无活性。

图8A-8I.作为AML免疫治疗靶点的IL1RAP。通过流式细胞术，检测AML细胞系(图8A)和CD34富集的AML原代细胞(图8B)的ILRAP表达，但未检测CD34+富集的正常骨髓细胞(图8C)的ILRAP表达。图8D：通过流式细胞术在不同AML细胞系中测定的每个细胞的特异性抗原结合能力(SABC)。图8E：比较AML大量细胞(n＝25)、CD34+富集AML细胞(n＝18)和CD34+富集正常骨髓细胞(n＝4)之间IL1RAP平均荧光强度的倍数变化。图8F：使用符号描述了CD34+富集AML细胞(n＝9)中IL1RAP+、CD123+、CLL-1+和CD33+的百分比。图8G：比较IL1RAP、CD123、CLL-1和CD33在CD34+富集正常骨髓细胞(n＝5)上平均荧光强度的倍数变化。图8H：使用符号描述了CD34+富集正常骨髓细胞(n＝5)中IL1RAP+、CD123+、CLL-1+和CD33+的百分比。图8I：比较G0期和G1期CD34+富集AML细胞上IL1RAP的平均荧光强度(2768与3181，没有显著性差异)。

图9A-9B.抗IL1RAP/CD3双特异性抗体。图9A：ELISA测定全人源抗IL1RAP单克隆抗体的EC₅₀，1D5显示了最低的EC₅₀(4.9ng/ml)。图9B：通过Cr⁵¹释放试验测定的12种候选单克隆抗体的ADCC效力。1D5的ADCC效力最强。图9C：纯化抗体的SDS-PAGE凝胶。将还原性样品上样至泳道1-3，非还原性样品上样至泳道5-7。抗CD3scFv-knob FC(1和5)、抗IL1RAP scFv-hole FC(2和6)和抗IL1RAP/CD3双特异性抗体(3和7)。

图10A-10K.MM001(CD3/IL1RAP双特异性抗体)在不同浓度和E:T比下诱导T细胞活化和AML细胞杀伤。图10A：T细胞和不同AML细胞系(HL60、MV4-11、THP-1和KG-1a)以1:1的E:T比孵育后检测了T细胞依赖性细胞毒性(TDCC)，孵育后48小时检查了特异性裂解百分比。通过流式细胞术，测定特异性裂解，使用以下公式计算：％特异性裂解＝[(靶细胞^+T细胞-靶细胞^{+BsAb+T细胞})]/靶细胞^+T细胞)x100％。平均IC50为45.14pM。图10B：CD25和CD69上调表明为杀伤试验中T细胞被活化。图10C：ELISA法定量测定了相同杀伤实验中T细胞释放的细胞因子。图10D：当在不同的E:T比和不同的抗体浓度下使用MV4-11细胞进行长期杀伤试验时，比较了杀伤效力。图10E：抗IL1RAP/CD3双特异性抗体在1:1的E:T比的健康供体T细胞的长期杀伤实验中可以诱导CD34+富集的AML细胞特异性裂解。通过ELISA法定量测定细胞因子TNF-a(图10F)、IFN-r(图10G)和Granzyme B(图10H)。图10I：使用自体T细胞对AML原代样品进行长期杀伤试验。在该样品中，T细胞百分比为8.97％。检测了另外两个样品(图14)。图10J：抗CD19/CD3同种型对照显示了自体T细胞杀伤实验中的基线杀伤。图10K：在长期杀伤实验中加入的重组IL1RAP显示了抗IL1RAP/CD3双特异性抗体的杀伤效力未见显著性干扰。

图11A-11D.MM001对CD34+富集正常骨髓细胞诱导的毒性最小。图11A：正常骨髓CD34+富集细胞中IL1RAP、CD123和CD33的表达。图11B：三个不同健康供体的1x10⁴个CD34+正常骨髓细胞与自体T细胞以1:1的E:T比混合24小时，同时加入不同浓度的MM001(3.15nM、1.05nM和0nM)。然后取四分之一的细胞进行集落形成试验。比较集落数量。通过48小时长期杀伤试验测定MM001(图11C)和同型对照(图11D)对CD34+富集的正常骨髓细胞的特异性杀伤。

图12A-12D.MM001体内效力的研究。图12A：实验设计。通过尾静脉向每只小鼠注射1x10⁶个MV4-11细胞。第7天开始给予每只小鼠200μg双特异性抗体和3x10⁶个T细胞。后续治疗和成像时间由箭头所示。图12B：通过生物发光成像监测肿瘤生长。在用溶媒、仅T细胞或对照BsAb和T细胞处理的MV4-11^Luci细胞移植的NSG小鼠中观察到白血病的大量浸润。图12C：各组生存期的Kaplan-Meier分析(n＝5)。值得注意的是，接受T细胞治疗的小鼠生存期也短于对照小鼠的，这可能是由于T细胞的毒性。BsAb治疗小鼠的体重减轻，这可能是由于细胞因子释放所致。图12D：各治疗组随时间的生物发光信号。

图13A-13F.候选AML免疫治疗靶点在AML细胞上的表达。使用流式细胞术，检测不同AML细胞系上的IL1RAP(图13A)、CD123(图13B)和CD33(图13C)表达。测定了AML细胞系上每个细胞的IL1RAP(图13D)、CD123(图13E)和CD33(图13F)特异性结合拷贝(ABC或抗体结合拷贝)。

图14A-14I.MM001诱导的自体T细胞的AML原代样品的杀伤。AML 2224的T细胞百分比为8.97％(图14A)，AML 2515的为4.35％(图14D)，AML 3448的为3.05％(图14G)。AML2224的IL1RAP+细胞百分比为87.1％(图14B)，AML 2515的为94.2％(图14E)和AML 3448的为95.9％(图14H)。在AML样品中加入指定浓度的MM001进行杀伤试验。第4、6和8天检测到特异性裂解。AML 2224的实际E:T比为1:10(图14C)，AML 2515的为1:21.9(图14F)，AML 3448的为1:31.8(图14I)。

图15A-15D.靶向CAR-T细胞(CM001)的IL1RAP的设计和效力研究。15A：包含CD8铰链跨膜结构域和4-1BB细胞内信号传导结构域和CD3z信号传导结构域的CAR示意图。通过MV4-11细胞(15B)、HL60(15C)和KG-1a(15D)在不同E:T比下的长期杀伤试验，测定CM001的杀伤效力。

图16A-16D.CD34+富集AML细胞的CM001的效力评估。16A：在指定的E:T比下，IL1RAP特异性CAR-T细胞对CD34+886AML细胞的杀伤。通过ELISA测定IFN-γ(版面1)、TNF-α(版面2)和Granzyme B(版面3)的细胞因子。16B：在指定的E:T比下，IL1RAP特异性CAR-T细胞对CD34+2360AML细胞的杀伤。通过ELISA测定IFN-γ(版面1)、TNF-α(版面2)和GranzymeB(版面3)的细胞因子。16C：在指定的E:T比下，IL1RAP特异性CAR-T细胞对CD34+2568AML细胞的杀伤。通过ELISA测定IFN-γ(版面1)、TNF-α(版面2)和Granzyme B(版面3)的细胞因子。16D：在指定的E:T比下，IL1RAP特异性CAR-T细胞对CD34+1003AML细胞的杀伤。通过ELISA测定IFN-γ(版面1)、TNF-α(版面2)和Granzyme B(版面3)的细胞因子。

发明详述

尽管本文显示和描述了本发明的各种实施方案和方面，但是对于本领域技术人员而言显而易见的是，这些实施方案和方面仅以示例的方式提供。现在本领域技术人员将会想到许多变化、改变和取代，而不背离本发明。应当理解，在实施本发明时，可以使用本文所述发明实施方案的各种替代方法。

本文所用各部分标题仅用于组织目的，并不认为是对所述主题的限制。本申请中引用的所有文件或部分文件，包括但不限于专利、专利申请、文章、书籍、手册和论著，在此以引用的方式明确并入，以用于任何目的。

定义

除非另外定义，否则本文中所用的技术和科学术语与本领域普通技术人员通常理解的含义相同。例如，参见Singleton et al.,DICTIONARY OF MICROBIOLOGY ANDMOLECULAR BIOLOGY 2nd ed.,J.Wiley&Sons(New York,NY 1994)；Sambrook et al.,MOLECULAR CLONING,ALABORATORY MANUAL,Cold Springs Harbor Press(Cold SpringsHarbor,NY 1989)。与那些本文所述相似或相当的任何方法、装置和材料均可以用于本发明的实践。提供以下定义是为了帮助理解本文中常用的特定术语，并不意味着限制本发明的范围。

“核酸”是指单或双链形式的脱氧核糖核苷酸或核糖核苷酸及其聚合物，及其补体。术语“多核苷酸”是指核苷酸的线性序列。术语“核苷酸”通常指多核苷酸的单个单位，即单体。核苷酸可以是核糖核苷酸、脱氧核糖核苷酸或其修饰形式。本文中考虑的多核苷酸的示例包括单链和双链DNA、单链和双链RNA(包括siRNA)以及具有单链和双链DNA和RNA混合物的杂交分子。本文所用核酸也是指与天然存在核酸具有相同基本化学结构的核酸。这类类似物具有修饰糖和/或修饰环取代基，但保留了与天然存在核酸相同的基本化学结构。核酸模拟物是指具有不同于核酸一般化学结构的结构，但其作用方式类似于天然存在核酸的化合物。这类类似物的示例包括但不限于硫代磷酸酯、亚磷酰胺、甲基磷酸酯、手性甲基磷酸酯、2-O-甲基核糖核苷酸和肽核酸(PNA)。

术语“氨基酸”是指天然存在和合成的氨基酸，以及以与天然存在的氨基酸相似的方式发挥作用的氨基酸类似物和氨基酸模拟物。天然存在的氨基酸是由遗传代码编码的氨基酸，以及随后被修饰的氨基酸，例如羟脯氨酸、γ-羧基谷氨酸和O-磷酸丝氨酸。氨基酸类似物是指与天然存在氨基酸具有相同基本化学结构的化合物，即与氢、羧基、氨基和R基结合的α碳，例如高丝氨酸、正亮氨酸、甲硫氨酸亚砜、甲硫氨酸甲基锍。这类类似物具有修饰的R基(例如，正亮氨酸)或修饰的肽骨架，但保留与天然存在氨基酸相同的基本化学结构。氨基酸模拟物是指具有不同于氨基酸一般化学结构的结构，但其作用方式类似于天然存在氨基酸的化合物。

氨基酸在本文可以参考其通常已知的三个字母符号或IUPAC-IUB生化命名委员会推荐的一个字母符号。同样，核苷酸也可以通过其通常接受的单字母代码来表示。

本文的术语“多肽”、“肽”和“蛋白”可以互换使用，以指代氨基酸残基的聚合物。术语适用于氨基酸聚合物，其中一个或多个氨基酸残基是相应天然存在氨基酸的人工化学模拟物，以及适用于天然存在氨基酸聚合物和非天然存在氨基酸聚合物。

氨基酸或核苷酸碱基“位置”表示为根据其相对于N-末端(或5'-末端)的位置，按顺序识别参考序列中每个氨基酸(或核苷酸碱基)的编号。由于在确定最佳比对时可能会考虑缺失、插入、截短、融合等情况，一般而言，通过简单地从N末端计数测定的测试序列中氨基酸残基数量不一定与参考序列中其相应位置的数量相同。例如，在变体相对于比对参考序列有缺失的情况下，变体中没有与参考序列中缺失位点相应的氨基酸。如果比对参考序列中有插入，该插入将不对应于参考序列中编号的氨基酸位置。在截短或融合的情况下，参比序列或比对序列中的氨基酸区段均不对应于相应序列中的任何氨基酸。

在给定氨基酸或多核苷酸序列编号的背景下使用时，术语“以参考编号”或“相应”是指给定氨基酸或多核苷酸序列与参考序列比较时，指定参考序列的残基编号。当蛋白中的氨基酸残基与给定残基在蛋白中占据相同的基本结构位置时，该氨基酸残基“相应”给定残基。例如，当选定残基与Kabat第40位的轻链苏氨酸具有相同的基本空间或其他结构关系时，选定抗体(或Fab结构域)中的选定残基对应于Kabat第40位的轻链苏氨酸。在一些实施方案中，为了与抗体轻链(或Fab结构域)保持最大同源性，对选定蛋白进行比对，苏氨酸40在比对选定蛋白中的位置称为对应于苏氨酸40。也可以使用三维结构比对来取代一级序列比对(例如，所选蛋白的结构比对以获得与Kabat第40位轻链苏氨酸的最大一致性)，并比较总体结构。在这种情况下，在结构模型中与苏氨酸40占据相同基本位置的氨基酸被称为对应于苏氨酸40残基。

“保守修饰变体”同时适用于氨基酸和核酸序列。对于特定的核酸序列，“保守修饰变体”是指那些编码相同或基本相同的氨基酸序列的核酸。由于遗传密码的简并性，许多核酸序列将编码任何给定的蛋白。例如，密码子GCA、GCC、GCG和GCU都编码氨基酸丙氨酸。因此，在任何一个编码丙氨酸的位置上，密码子可以改变为所述的任何相应密码子，而不改变编码的多肽。这类核酸变异为“沉默变异”，其是保守修饰变异的一种。本文编码多肽的每个核酸序列也描述了核酸的每一个可能的沉默变异。本领域技术人员会认识到，核酸中的每个密码子(除了通常情况下是甲硫氨酸的唯一密码子的AUG，和通常情况下是色氨酸的唯一密码子的TGG之外)均可以被修饰以产生功能相同的分子。因此，编码多肽的核酸的每个沉默变异都隐含在每个描述的序列中。

关于氨基酸序列，本技术人员将认识到，核酸、肽、多肽或蛋白质序列的个别取代、删除或添加(改变、添加或删除编码序列中的单个氨基酸或小百分比的氨基酸)是“保守修饰变体”，其中改变导致氨基酸被化学上相似的氨基酸取代。在本领域中，提供功能相似氨基酸的保守取代表是熟知的。这类保守修饰变体是本发明的多态性变体、种间同源物和等位基因的补充，并且不排除这些变体。

以下八组均含有彼此保守取代的氨基酸：

1)丙氨酸(A)，甘氨酸(G)；

2)天冬氨酸(D)、谷氨酸(E)；

3)天冬酰胺(N)，谷氨酰胺(Q)；

4)精氨酸(R)，赖氨酸(K)；

5)异亮氨酸(I)、亮氨酸(L)、甲硫氨酸(M)、缬氨酸(V)；

6)苯丙氨酸(F)、酪氨酸(Y)、色氨酸(W)；

7)丝氨酸(S)、苏氨酸(T)；和

8)半胱氨酸(C)，甲硫氨酸(M)

(例如，参见Creighton,Proteins(1984))。

在两个或多个核酸或多肽序列的背景下，术语“相同”或百分比“同一性”是指当在比较窗口或使用以下序列比较算法之一或通过手动比对和目视检查测量的指定区上进行最大对应的比较和比对时，两个或多个相同的或具有特定百分比的相同的氨基酸残基或核苷酸的序列或子序列(即，在指定区，例如，本发明的整个多肽序列或本发明多肽的单个结构域，60％的同一性，可选65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、98％或99％的同一性)。然后这类序列被称为“实质上相同”。这一定义也是指测试序列的补体。可选地，同一性存在于长度至少约为50个核苷酸长度的区上，或更优选长度为100至500或1000个或更多核苷酸长度的区上。

通过在比较窗口中比较两个最佳比对的序列来测定“序列同一性百分比”，其中比较窗口中的多核苷酸或多肽序列部分可以包括与参考序列比较的添加或删除(即，间隙)，该参考序列(不包括添加或删除)用于两个序列的最佳比对。通过测定两者序列中出现相同的核酸碱基或氨基酸残基的位置数以得到匹配的位置数，再将匹配的位置数除以比较窗口中的位置总数，乘以100以得到序列同一性的百分比，从而计算百分比。

对于序列比较，通常一个序列作为参考序列，以与测试序列比较。当使用序列比较算法时，将测试和参考序列输入计算机，指定子序列坐标(如有必要)，并指定序列算法程序参数。可以使用默认程序参数，或可以指定替代参数。然后，根据程序参数，序列比较算法计算测试序列相对于参考序列的百分比序列同一性。

本文所用的“比较窗口”包括对多个连续位置中任意一个分段的引用，例如，该连续位置选自全长序列或从20至600、从约50至约200或从约100至约150个氨基酸或核苷酸，其中序列可以在两个序列最佳比对后与相同数量连续位置的参考序列进行比较。在本领域内，比较用序列的比对方法是已知的。比较用序列可以进行最佳比对，例如采用SmithandWaterman(1970)Adv.Appl.Math.2:482c的局部同源算法，采用Needleman and Wunsch(1970)J.Mol.Biol.48:443的同源比对算法，采用Pearson and Lipman(1988)Proc.Nat’l.Acad.Sci.USA 85:2444的相似方法检索，采用这些算法的执行程序(WisconsinGenetics软件包中的GAP、BESTFIT、FASTA和TFASTA,Genetics Computer Group,575Science Dr.,Madison,WI)，或通过手动比对和目视检查(例如，参见Ausubel et al.,Current Protocols in Molecular Biology(1995supplement))。

适于确定百分比序列同一性和序列相似性算法的示例是BLAST和BLAST2.0算法，如Altschul et al.(1977)Nuc.Acids Res.25:3389-3402，和Altschul et al.(1990)J.Mol.Biol.215:403-410分别所述。用于进行BLAST分析的软件可以从国家生物技术信息中心获得(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/)。这一算法首先通过识别查询序列中长度为W的短字串来识别高评分序列对(HSP)，当与数据库序列中相同长度的字串比对时，查询序列中的短字串匹配或满足一些正值阈值评分T。T被称为邻近字串评分阈值(Altschul etal.，supra)。这些最初的邻近字串命中作为启动搜索的种子，以找到包含它们的更长的HSP。字串命中沿每个序列向两个方向扩展，直至累积比对评分可以增加。对于核苷酸序列，使用参数M(一对匹配残基的奖励评分；始终>0)和N(不匹配残基的罚分；始终<0)，计算累积评分。对于氨基酸序列，使用评分矩阵计算累积评分。当累积比对分数从其达到的最大值中以X的量递减时，在每个方向上的单词命中扩展停止；由于一个或多个负评分残基比对的累积，累积评分变为零或更低；或达到任一序列的末端。BLAST算法参数W、T和X确定了比对的灵敏度和速度。BLASTN程序(对于核苷酸序列)默认使用的是11的字长(W)、期望(E)或10，M＝5，N＝-4以及两条链的比较。对于氨基酸序列，BLASTP程序默认使用的字长为3，期望(E)为10，以及BLOSUM62评分矩阵(见Henikoff and Henikoff(1989)Proc.Natl.Acad.Sci.USA89:10915)比对(B)为50，期望(E)为10，M＝5，N＝-4，以及双链的比较。

BLAST算法还对两个序列之间的相似性进行了统计分析(例如，参见Karlin andAltschul(1993)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 90:5873-5787)。BLAST算法提供的一个相似性测量是最小和概率(P(N))，其提供了两个核苷酸或氨基酸序列之间偶然发生匹配的概率的指标。例如，如果测试核酸与参考核酸比较中最小概率和小于约0.2，更优选小于约0.01，最优选小于约0.001，则认为核酸与参考序列相似。

两核酸序列或多肽实质上相同的指标是，第一核酸编码的多肽与针对第二核酸编码的多肽产生的抗体具有免疫学交叉反应，正如以下所述。因此，多肽通常与第二个多肽实质相同，例如，两者多肽仅通过保守取代而不同。两者核酸序列实质相同的另一指标是，两个分子或其补体在严格条件下彼此杂交，正如以下所述。然而，两者核酸序列实质相同的另一指标是，可以使用相同的引物扩增序列。

抗体是一种内部结构错综复杂的大而复杂的分子(分子量为～150000或约1320个氨基酸)。天然抗体分子含有两对相同的多肽链，每对均有一条轻链和一条重链。每个轻链和重链依次由两个区组成：可变(“V”)区，参与结合靶抗原；和恒定(“C”)区，与免疫系统的其他组分相互作用。轻链和重链可变区(本文也分别称为轻链可变结构域(VL)和重链可变结构域(VH))在三维空间中折叠在一起，以形成结合抗原(例如，细胞表面的受体)的可变区。在每个轻链或重链可变区内，存在三个短片段(平均10个氨基酸长度)，称为互补决定区(“CDR”)。抗体可变结构域的六个CDR(轻链三个，重链三个)在三维空间内折叠在一起，以形成实际的与靶抗原对接的抗体结合位点。Kabat,E.et al.,Sequences of Proteins ofImmunological Interest,U.S.Department of Health and Human Services,1983,1987中已经精确定义了CDR的位置和长度。CDR中未包含的可变区部分称为框架(“FR”)，其形成了CDR的环境。

本文提供的“抗体变体”是指能够与抗原结合并包括抗体或其片段的一个或多个结构域的多肽。抗体变体的非限制性示例包括单结构域抗体或纳米抗体、亲和体(比单克隆抗体小的多肽(例如约6kDa)，并且能够高亲和力结合抗原和模仿单克隆抗体)，单特异性Fab₂、双特异性Fab₂、三特异性Fab₃、单价IgG、scFv、双特异性双抗体、三特异性三抗体、scFv-Fc、迷你抗体、IgNAR、V-NAR、hcIgG、VhH或肽体。本文所述的“纳米抗体”或“单结构域抗体”通常在本领域是熟知的，并是指由单个单体可变抗体结构域组成的抗体片段。与整个抗体一样，它能够选择性结合特异性抗原。本文提供的“肽体(peptibody)”是指(通过共价或非共价接头)连接到抗体Fc结构域的肽部分。本领域已知的抗体变体的其他非限制性示例包括软骨性鱼类或骆驼科产生的抗体。通过全文引用并入本文并用于所有目的的参考文献WO97/49805和WO97/49805，对来自骆驼科的抗体及其可变区及其生产、分离和使用方法进行了一般描述。同样，来自软骨性鱼类的抗体及其可变区以及其生产、分离和使用方法可在WO2005/118629中找到，其通过全文引用并入本文并用于所有目的。

本文提供的术语“CDR L1”、“CDR L2”和“CDR L3”是指抗体可变轻链(L)的互补决定区(CDR)1、2和3。在实施方案中，本文提供的可变轻链包括在N末端至C末端方向上的CDRL1、CDR L2和CDR L3。同样，本文提供的术语“CDR H1”、“CDR H2”和“CDR H3”是指抗体可变重链(H)的互补决定区(CDR)1、2和3。在实施方案中，本文提供的可变重链包括在N末端至C末端方向上的CDR H1、CDR H2和CDR H3。

本文提供的术语“FR L1”、“FR L2”、“FR L3”和“FR L4”是根据其在本领域中的共同含义使用的，指的是抗体可变轻链(L)的框架区(FR)1、2、3和4。在实施方案中，本文提供的可变轻链包括在N末端至C末端方向上的FR L1、FR L2、FR L3和FR L4。同样，本文提供的术语“FR H1”、“FR H2”、“FR H3”和“FR H4”是根据其在本领域中的共同含义使用的，指的是抗体可变重链(H)的框架区(FR)1、2、3和4。在实施方案中，本文提供的可变重链包括在N末端至C末端方向上的FR H1、FR H2、FR H3和FR H4。

示例性的免疫球蛋白(抗体)结构单元包括四聚体。每个四聚体由相同的两对多肽链组成，每对都有一条“轻链”(约25kD)和一条“重链”(约50-70kD)。每条链的N末端定义了一个由约100至110个或更多氨基酸组成的主要负责抗原识别的可变区。术语可变轻链(VL)、可变轻链(VL)结构域或轻链可变区以及可变重链(VH)、可变重链(VH)结构域或重链可变区分别指的是这些轻链和重链区。术语可变轻链(VL)、可变轻链(VL)结构域和轻链可变区(如本文所述)可以互换使用。术语可变重链(VH)、可变重链(VH)结构域和重链可变区(如本文所述)可以互换使用。Fc(即可结晶片段区)是免疫球蛋白的“基部”或“末端”，通常由两条根据抗体的类别不同有两个或三个恒定结构域的重链组成。通过与特定蛋白结合，Fc区确保各抗体对特定抗原产生适当的免疫应答。Fc区还与多种细胞受体(如Fc受体)和其他免疫分子(如补体蛋白)结合。

根据其在本领域中的常用含义使用术语“抗体”。例如，抗体作为完整免疫球蛋白或作为通过各种肽酶消化产生的许多充分表征的片段。因此，例如，胃蛋白酶消化铰链区二硫键下的抗体，产生F(ab)'₂(Fab的二聚体，其本身是通过二硫键与V_H-C_H1连接的轻链)。在温和条件下还原F(ab)'₂，使铰链区的二硫键断裂，从而将F(ab)'₂二聚体转化为Fab'单体。Fab'单体基本上是具有部分铰链区的Fab(参见，Fundamental Immunology(Paul ed.,3ded.1993)。虽然根据完整抗体的酶切定义了各种抗体片段，但是一个本领域技术人员将了解到可以通过化学方法或使用重组DNA方法从头合成这些片段。因此，本文所用的术语抗体也包括通过全抗体修饰产生的抗体片段，或通过重组DNA方法从头合成的抗体片段(如单链Fv)，或通过噬菌体展示文库识别的抗体片段(六日，参见McCafferty et al.,Nature 348:552-554(1990))。

对于单克隆或多克隆抗体的制备，可以使用本领域已知的任何技术(例如，参见Kohler&Milstein,Nature 256:495-497(1975)；Kozbor et al.,Immunology Today 4:72(1983)；Cole et al.,pp.77-96in Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy(1985))。“单克隆”抗体(mAb)是指来自单个克隆的抗体。单链抗体的生产技术(美国专利号4,946,778)可以用于生产本发明多肽的抗体。此外，转基因小鼠或其他生物(如其他哺乳动物)可以用于表达人源化抗体。或者，可以使用噬菌体展示技术鉴定与选定抗原特异性结合的抗体和异源性Fab片段(例如，参见McCafferty et al.,Nature 348:552-554(1990)；Marks et al.,Biotechnology 10:779-783(1992))。

mAb的表位是mAb与其抗原的结合区。如果各自竞争性抑制(阻断)另一个与抗原的结合，则两个抗体与相同或重叠表位结合。也就是说，在竞争性结合试验中，一种抗体过量1倍、5倍、10倍、20倍或100倍，对另一种抗体的结合的抑制至少为30％，但优选50％、75％、90％或甚至99％(例如，参见Junghans et al.,Cancer Res.50:1495,1990)。或者，如果抗原中减少或消除一种抗体结合的所有氨基酸突变基本上减少或消除另一种抗体结合，则两种抗体具有相同的表位。如果一些减少或消除一种抗体结合的氨基酸突变减少或消除另一种抗体结合，则两种抗体具有重叠表位。

单链可变片段(scFv)通常是免疫球蛋白重链(VH)和轻链(VL)可变区的融合蛋白，该免疫球蛋白与10至约25个氨基酸组成的短接头肽连接。接头通常富含增加柔韧性的甘氨酸，增加溶解性的丝氨酸或苏氨酸。接头可以连接VH的N末端和VL的C末端，反之亦然。在实施方案中，接头包括一个以上丝氨酸。在实施方案中，接头包括一个以上甘氨酸。在实施方案中，接头的结构为–(Gly-Gly-Gly-Gly-Ser)₃-。

为了制备适合本发明的抗体及根据本发明的用途，例如，重组、单克隆或多克隆抗体，可以使用本领域已知的许多技术(例如，参见Kohler&Milstein,Nature 256:495-497(1975)；Kozbor et al.,Immunology Today 4:72(1983)；Cole et al.,pp.77-96inMonoclonal Antibodies and Cancer Therapy,Alan R.Liss,Inc.(1985)；Coligan,Current Protocols in Immunology(1991)；Harlow&Lane,Antibodies,ALaboratoryManual(1988)；和Goding,Monoclonal Antibodies:Principles and Practice(2ded.1986))。可以从细胞中克隆编码目的抗体重链和轻链的基因，例如，可以从杂交瘤中克隆编码单克隆抗体的基因，并用于生产重组单克隆抗体。也可以从杂交瘤或浆细胞构建编码单克隆抗体重链和轻链的基因文库。重链和轻链基因产物的随机组合产生了具有不同抗原特异性的大量抗体库(例如，参见Kuby,Immunology(3rd ed.1997))。单链抗体或重组抗体的生产技术(美国专利号4,946,778，美国专利号4,816,567)可以适用于生产本发明多肽的抗体。此外，转基因小鼠或其他生物(如其他哺乳动物)可以用于表达人源化或人抗体(例如，参见美国专利号5,545,807；5,545,806；5,569,825；5,625,126；5,633,425；5,661,016，Marks et al.,Biotechnology 10:779-783(1992)；Lonberg et al.,Nature 368:856-859(1994)；Morrison,Nature 368:812-13(1994)；Fishwild et al.,Nature Biotechnology14:845-51(1996)；Neuberger,Nature Biotechnology 14:826(1996)；和Lonberg&Huszar,Intern.Rev.Immunol.13:65-93(1995))。或者，可以使用噬菌体展示技术鉴定与选定抗原特异性结合的抗体和异源性Fab片段(例如，参见McCafferty et al.,Nature 348:552-554(1990)；Marks et al.,Biotechnology 10:779-783(1992))。抗体也可以制成双特异性抗体，即能够识别两种不同抗原的抗体(例如，参见WO93/08829,Traunecker et al.,EMBOJ.10:3655-3659(1991)；和Suresh et al.,Methods in Enzymology 121:210(1986))。抗体也可以是异源偶联物，例如，两个共价结合的抗体，或免疫毒素(例如，参见美国专利号4,676,980，WO 91/00360；WO 92/200373；和EP 03089)。

人源化或使灵长非人抗体的方法在本领域是熟知的(例如，美国专利号4,816,567；5,530,101；5,859,205；5,585,089；5,693,761；5,693,762；5,777,085；6,180,370；6,210,671；和6,329,511；WO 87/02671；EP专利申请0173494；Jones et al.(1986)Nature321:522；和Verhoyen et al.(1988)Science 239:1534)。人源化抗体还如Winter andMilstein(1991)Nature 349:293中所述。通常，人源化抗体有一个或多个从非人来源引入的氨基酸残基。这些非人氨基酸残基通常被称为引进残基，其通常取自引进可变结构域。人源化基本上可以按照Winter和同事的方法进行(例如，参见Morrison et al.,PNAS USA,81:6851-6855(1984),Jones et al.,Nature 321:522-525(1986)；Riechmann et al.,Nature 332:323-327(1988)；Morrison and Oi,Adv.Immunol.,44:65-92(1988),Verhoeyen et al.,Science 239:1534-1536(1988)和Presta,Curr.Op.Struct.Biol.2:593-596(1992),Padlan,Molec.Immun.,28:489-498(1991)；Padlan,Molec.Immun.,31(3):169-217(1994))，即通过将啮齿类动物CDR或CDR序列取代人抗体的相应序列。因此，这类人源化抗体为嵌合抗体(美国专利号4,816,567)，其中明显少于完整人可变结构域已被来自非人种属的相应序列所取代。实际上，人源化抗体通常是人抗体，其中一些CDR残基和可能一些FR残基被啮齿类动物抗体中类似位点的残基取代。例如，包括编码人源化免疫球蛋白框架区的第一序列和编码所需免疫球蛋白互补决定区的第二序列组的多核苷酸可以合成或通过结合适当的cDNA和基因组DNA片段来产生。根据熟知的程序，可从多种人细胞中分离人恒定区DNA序列。

“嵌合抗体”是一种抗体分子，其中(a)恒定区或其一部分发生改变、替换或交换，以便抗原结合位点(可变区)与不同或改变类别、效应子功能和/或物种的恒定区连接，或与嵌合抗体产生新特性的完全不同的分子连接，例如酶、毒素、激素、生长因子、药物等；或(b)可变区或其一部分发生改变、替换或交换为具有不同或改变的抗原特异性的可变区。根据本发明优选和使用的抗体包括人源化和/或嵌合单克隆抗体。

熟知治疗剂与抗体偶联的技术(例如，参见Arnon et al.,"MonoclonalAntibodies For Immunotargeting Of Drugs In Cancer Therapy",in MonoclonalAntibodies And Cancer Therapy,Reisfeld et al.(eds.),pp.243-56(Alan R.Liss,Inc.1985)；Hellstrom et al.,“Antibodies For Drug Delivery”in Controlled DrugDelivery(2nd Ed.),Robinson et al.(eds.),pp.623-53(Marcel Dekker,Inc.1987)；Thorpe,"Antibody Carriers Of Cytotoxic Agents In Cancer Therapy:A Review"inMonoclonal Antibodies‘84:Biological And Clinical Applications,Pinchera et al.(eds.),pp.475-506(1985)；和Thorpe et al.,"The Preparation And CytotoxicProperties Of Antibody-Toxin Conjugates",Immunol.Rev.,62:119-58(1982))。正如本文所用术语“抗体-药物偶联物”或“ADC”是指与抗体偶联或以其他方式共价结合的治疗剂。

本文所述的“治疗剂”是一种可用于治疗或预防如癌症的疾病(例如，白血病)的组合物。在实施方案中，治疗剂是一种抗癌剂。“抗癌剂”是根据其普通含义使用的，并是指具有抗肿瘤特性或抑制细胞生长或增殖能力的组合物(例如，化合物、药物、拮抗剂、抑制剂、调节剂)。在实施方案中，抗癌剂是一种化疗药。在实施方案中，抗癌剂是本文中确定的在癌症治疗方法中有用的物质。在实施方案中，抗癌剂是指FDA或美国以外国家类似监管机构批准用于治疗癌症的物质。

当涉及蛋白或肽时，短语“特异性(或选择性)结合”抗体或“特异性(或选择性)免疫反应”是指通常在蛋白和其他生物制剂的异源群体中，确定蛋白存在的结合反应。因此，在指定的免疫分析条件下，特定抗体与特定蛋白的结合至少是背景的两倍，通常是背景的10-100倍以上。在这类条件下，与抗体的特异性结合需要选择对特定蛋白具有特异性的抗体。例如，可以选择多克隆抗体，以获得仅与所选抗原有特异性免疫反应而与其他蛋白没有特异性免疫反应的抗体子集。这一选择可以通过减去与其他分子交叉反应的抗体来实现。可以使用多种免疫分析方法来选择与特定蛋白特异性免疫反应的抗体。例如，固相ELISA免疫试验通常用于选择与蛋白特异性免疫反应的抗体(例如，参见Harlow&Lane，UsingAntibodies,A Laboratory Manual(1998)，以描述可以用于测定特异性免疫反应性的免疫分析方法和条件)。

“配体”是指能够与受体或抗体、抗体变体、抗体区或及片段结合的物质，例如多肽或其他分子。

正如本文所用，术语“IL1RAP”是指任何重组或天然存在的形式的白介素-1受体辅助蛋白(IL1RAP)或其保持IL1RAP活性的变体或同源物(例如，与IL1RAP相比，至少50％、80％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的活性内)。在一些方面，与天然存在IL1RAP多肽相比，变体或同源物在整个序列或序列的一部分(例如，10、20、50、100、150或200个连续氨基酸部分)至少有90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的氨基酸序列同一性。在实施方案中，IL1RAP与UniProt参考编号Q9NPH3鉴别的蛋白或者与其具有实质性同一性的变体或同源物实质上相同。

“标记物”或“可检测部分”是指通过光谱、光化学、生物化学、免疫化学、化学或其他物理方式可检测的组合物。例如，有用的标记物包括32P、荧光染料、电子致密剂、酶(例如，在ELISA中常用的酶)、生物素、地高辛或半抗原以及可检出的蛋白或其他物质，例如，通过将放射性标记物加入与目标肽特异性反应的肽或抗体中。可以使用本领域中已知的任何适当的方法将抗体与标记物结合，例如使用Hermanson,Bioconjugate Techniques 1996,Academic Press,Inc.,San Diego中所述的方法。

“接触”是按其普通含义来使用，并是指允许至少两个不同物种(例如抗体和抗原)足够接近反应、相互作用或物理接触的过程。然而，应该注意的是，所得反应产物可以直接由所添加试剂之间的反应生成，或由一种或多种添加试剂(可以在反应混合物中生成)生成的中间体生成。

术语“接触”可以包括允许两种物质发生反应、相互作用或物理接触，其中两种物质可以是，例如，本文提供的药物组合物和细胞。在实施方案中，例如，接触包括允许本文所述药物组合物与细胞的相互作用。

本文所用的“细胞”是指执行代谢或其他功能足以保存或复制其基因组DNA的细胞。可以通过本领域内已知的方法鉴定细胞，包括存在完整膜、被特定染料染色、产生后代的能力，或者在配子的情况下，与第二个配子结合产生存活后代的能力。细胞可以包括原核细胞和真核细胞。原核细胞包括但不限于细菌。真核细胞包括但不限于酵母细胞和动植物来源的细胞，例如哺乳动物、昆虫(例如蜘蛛)和人细胞。

本文提供的“干细胞”是指具有通过有丝分裂进行自我更新的能力并有分化为组织或器官潜能的细胞。在哺乳动物干细胞中，可以区分胚胎干细胞(ES细胞)和成体干细胞(例如HSC)。胚胎干细胞驻留在囊胚中并产生胚胎组织，而成体干细胞驻留在成熟组织中用于组织再生和修复。在实施方案中，干细胞是一种白血病干细胞(LSC)。本文提供的“白血病干细胞”或“LSC”是指当移植到免疫缺陷动物中时，能够启动疾病(白血病)的细胞，在连续移植中通过引起白血病而可以自我更新，也部分分化为类似于原始疾病但无法自我更新的非LSC母细胞。LSC可以携带基因突变，并能够通过有丝分裂细胞分裂自我更新，并分化为携带所述基因突变的造血谱系或LSC可以仍作为未成熟的祖细胞，也称为母细胞。在实施方案中，LSC表达CD34。

本文所指术语“CD34”包括任何重组形式或天然存在形式的分化34蛋白簇，或其保持CD34活性的变体或同源物(例如，与CD34相比，至少50％、80％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的活性内)。在一些方面，与天然存在CD34蛋白相比，变体或同源物在整个序列或序列的一部分(例如，50、100、150或200个连续氨基酸部分)至少有90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的氨基酸序列同一性。在实施方案中，CD34与UniProt参考编号P28906鉴别的蛋白或者与其具有实质性同一性的变体或同源物实质上相同。

术语“重组”，例如与细胞、核酸、蛋白或载体一起使用时，表示细胞、核酸、蛋白或载体已通过引入异源核酸或蛋白，或改变了天然核酸或蛋白，或该细胞来源于如此修饰的细胞进行了修饰。因此，例如，重组细胞表达了在细胞的天然(非重组)形式中找不到的基因，或表达在其他方面异常、表达不足或根本不表达的天然基因。转基因细胞和植物是那些表达异源基因或编码序列的细胞，通常是重组方法的结果。

术语“异源”，当与核酸的一部分一起使用时，表示核酸包括两个或两个以上在本质上没有相同关系的子序列。例如，核酸通常是重组产生的，由无关基因的两个或多个序列组成新的功能性核酸，例如，一个来源的启动子和另一来源的编码区。类似地，异源蛋白表示该蛋白包括两个或更多在性质上彼此关系不同的子序列(例如，融合蛋白)。

术语“外源”是指来自给定细胞或生物体以外的分子或物质(例如，化合物、核酸或蛋白)。例如，本文所指的“外源启动子”是一种启动子，其并不来源于所表达的细胞或生物体。相反，术语“内源”或“内源启动子”是指在给定细胞或生物体内原生或来源于给定细胞或生物体的分子或物质。

如本文所定义的，术语“抑制(inhibition)”、“抑制(inhibit)”、“抑制(inhibiting)”等关于细胞增殖(例如，癌细胞增殖)的意思是对细胞产生负面影响(例如，增殖减少)或杀伤细胞。在一些实施方案中，抑制是指减少疾病或疾病症状(例如，癌症、癌细胞增殖)。因此，抑制包括，至少部分地包括，部分或完全阻断刺激、减少、阻止或延迟活化、失活、脱敏或下调信号转导或酶活性或蛋白量。类似地，“抑制剂”是一种化合物或蛋白，例如，通过结合部分或完全阻断、减少、阻止、延迟、失活、脱敏或下调活性(例如，受体活性或蛋白质活性)而抑制受体或另一蛋白。

“生物样品”或“样品”是指从受试者或患者中获得或衍生的材料。生物样品包括组织切片，如活检和尸检样品，以及用于组织学目的的冷冻切片。这类样品包括体液，如血液和血液成分或制品(例如，血清、血浆、血小板、红细胞等)、痰液、组织、培养细胞(例如，原代培养物、外植体和转化细胞)、粪便、尿液、滑膜液、关节组织、滑膜组织、滑膜细胞、成纤维细胞样滑膜细胞、巨噬细胞样滑膜细胞、免疫细胞、造血细胞、成纤维细胞、巨噬细胞、T细胞等。生物样品通常是从真核生物获取的，如哺乳动物，如灵长类动物，例如黑猩猩或人；牛；狗；猫；啮齿动物，例如豚鼠、大鼠、小鼠；兔；或鸟；爬行动物；或鱼。

“对照”或“标准对照”是指作为参考的样品、测量结果或值，通常是已知的参考，用于与测试样品、测量结果或值进行比较。例如，可以从疑似患有特定疾病(例如，癌症)的患者中采集测试样品，并与已知的正常(未患病)个体(例如，标准对照受试者)进行比较。标准对照也可以代表从无特定疾病的相似个体(例如，标准对照受试者)人群(例如，标准对照人群)收集的平均测量结果或值，例如，具有相似医学背景、相同年龄、体重等的健康个体。也可以从同一个体获得标准对照值，例如，从发病前的患者早期获得的样品。例如，可以设计对照，以根据药理学数据(例如半衰期)或治疗测量(例如副作用比较)比较治疗获益。对照对确定数据的显著性也很有价值。例如，如果给定参数值在对照中变化较大，则认为测试样品中的变异不显著。一个本领域技术人员将认识到，可设计标准对照以用于评估任何数量的参数(例如，RNA水平、蛋白水平、特定细胞类型、特定体液、特定组织、滑膜细胞、滑膜液、滑膜组织、成纤维细胞样滑膜细胞、巨噬细胞样滑膜细胞等)。

本领域技术人员将理解在给定情况下哪种标准对照最合适，并能够根据与标准对照值的比较分析数据。对照对确定数据的显著性(例如，统计学的显著性)也很有价值。例如，如果给定参数值在标准对照中变化较大，则认为测试样品中的变异不显著。

“患者”或“有需要的受试者”是指患有或易于发生疾病或症状的活生物体，可以通过施用本文中提供的组合物或药物组合物治疗该疾病或症状。非限制性的示例包括人；其他哺乳动物，牛、大鼠、小鼠、犬、猴、山羊、绵羊、牛、鹿；和其他非哺乳动物。在一些实施方案中，患者是人。

术语“疾病”或“症状”是指能够接受本文提供的化合物或方法治疗的患者或受试者的状态或健康状况。该疾病可以是癌症。在一些其他情况下，“癌症”是指人癌症和癌、肉瘤、腺癌、淋巴瘤、白血病(leukemias，包括实体瘤和淋巴样癌)、肾脏、乳腺、肺、膀胱、结肠、卵巢、前列腺、胰腺、胃、脑、头颈部、皮肤、子宫、睾丸、神经胶质瘤、食管和肝癌(包括肝癌)、淋巴瘤(包括B-急性淋巴母细胞淋巴瘤)、非霍奇金淋巴瘤(例如Burkitt's、小细胞和大细胞淋巴瘤)、霍奇金淋巴瘤、白血病(leukemia，包括急性髓性白血病(AML)、ALL和CML)或多发性骨髓瘤。

正如本文所用，术语“癌症”是指哺乳动物(例如，人)中发现的所有类型的癌症、肿瘤或恶性肿瘤，包括白血病、癌和肉瘤。可以使用本文提供的化合物或方法治疗的示例性癌症包括乳腺癌、结肠癌、肾癌、白血病、肺癌、黑色素瘤、卵巢癌、前列腺癌、胰腺癌、脑癌、肝癌、胃癌或肉瘤。

术语“白血病”泛指造血器官的进行性、恶性疾病，通常以血液和骨髓中白细胞及其前体的不正常增殖和发育为特征。通常根据以下对白血病进行临床分类：(1)急性或慢性疾病的持续时间和特征；(2)涉及细胞的类型；髓细胞(髓系)、淋巴细胞(淋巴系)或单核细胞；和(3)白血病或非白血病(亚白血病)的血中异常细胞数量增加或不增加。可以使用本文提供的化合物或方法治疗的示例性的白血病包括，例如，急性髓性白血病、急性非淋巴细胞白血病、慢性淋巴细胞白血病、急性粒细胞白血病、慢性粒细胞白血病、急性早幼粒细胞白血病、成人T细胞白血病、非白血性白血病、白细胞不增多性白血病、嗜碱性粒细胞白血病(basophylic leukemia)、母细胞白血病(blast cell leukemia)、牛白血病、慢性髓性白血病、皮肤白血病、胚胎白血病、嗜酸性粒细胞白血病、Gross白血病、毛细胞白血病、成血性白血病(hemoblastic leukemia)、成血细胞性白血病(hemocytoblastic leukemia)、组织细胞白血病、干细胞白血病、急性单核细胞白血病、白细胞减少性白血病、淋巴白血病、成淋巴细胞白血病、淋巴细胞白血病(lymphocytic leukemia)、淋巴源性白血病(lymphogenousleukemia)、淋巴性白血病(lymphoid leukemia)、淋巴肉瘤细胞白血病、肥大细胞白血病、巨核细胞白血病、微粒细胞白血病、单核细胞白血病、成髓细胞性白血病、髓细胞白血病、髓性粒细胞白血病、髓性单核细胞白血病、Naegeli白血病、浆细胞性白血病(plasma cellleukemia)、多发性骨髓瘤、浆细胞白血病(plasmacytic leukemia)、前髓细胞性白血病、Rieder细胞白血病、Schilling氏白血病、干细胞白血病、亚白血性白血病或未分化细胞性白血病。

术语“肉瘤”通常是指由类似胚胎结缔组织的物质组成的肿瘤，并且通常由紧密排列的细胞包埋在纤维状或同类物质中组成。可以使用本文提供的化合物或方法治疗的肉瘤包括软骨肉瘤、纤维肉瘤、淋巴肉瘤、黑色素瘤、粘液肉瘤、骨肉瘤、阿维埃氏肉瘤、脂肪肉瘤、脂肉瘤、腺泡状软组织肉瘤、成釉细胞肉瘤、葡萄状肉瘤、绿色肉瘤(chloromasarcoma)、绒毛肉瘤(chorio carcinoma)、胚胎肉瘤、威尔姆氏瘤类肉瘤、子宫内膜肉瘤、间质肉瘤、尤文氏肉瘤、筋膜肉瘤、成纤维细胞肉瘤、巨细胞肉瘤、粒细胞肉瘤、霍奇金氏肉瘤、特发性多发性色素出血性肉瘤、B细胞免疫母细胞肉瘤、淋巴瘤、T细胞免疫母细胞肉瘤、延森氏肉瘤、卡波西氏肉瘤、库普弗细胞肉瘤、血管肉瘤、白细胞肉瘤、恶性间叶瘤类肉瘤、骨膜外肉瘤、网织细胞肉瘤、鲁斯氏肉瘤、浆液囊性肉瘤(serocystic sarcoma)、滑膜肉瘤或毛细血管扩张性肉瘤(telangiectaltic sarcoma)。

术语“黑色素瘤”是指由皮肤和其他器官的黑色素细胞系统产生的肿瘤。可以使用本文提供的化合物或方法治疗的黑色素瘤包括，例如，肢端雀斑样痣黑色素瘤、无黑色素性黑色素瘤、良性幼年黑色素瘤、Cloudman黑色素瘤、S91黑色素瘤、Harding-Passey黑色素瘤、幼年黑色素瘤、恶性雀斑样痣黑色素瘤、恶性黑色素瘤、结节性黑色素瘤、甲下黑色素瘤或浅表扩散性黑色素瘤。

术语“癌(carcinoma)”是指由上皮细胞组成的恶性新生长，该上皮细胞倾向于浸润周围组织并产生转移灶。可以使用本文提供的化合物或方法治疗的示例性癌包括，例如，甲状腺髓样癌、家族性甲状腺髓样癌、腺泡癌(acinar carcinoma)、腺泡细胞癌(acinouscarcinoma)、囊性腺样癌(adenocystic carcinoma)、腺样囊性癌(adenoid cysticcarcinoma)、腺癌(carcinoma adenomatosum)、肾上腺皮质癌、肺泡癌、肺泡细胞癌、基细胞癌(basal cell carcinoma)、基底细胞癌(carcinoma basocellulare)、基底细胞样癌(basaloid carcinoma)、基底鳞状细胞癌、细支气管肺泡癌、细支气管癌、支气管肺癌、脑样癌(cerebriform carcinoma)、胆管细胞癌、绒毛膜癌、胶样癌(colloid carcinoma)、粉刺癌、子宫体癌、筛状癌、铠甲状癌、面部皮肤癌、圆柱癌、圆柱细胞癌、导管癌、硬膜癌、胚胎癌、髓样癌(encephaloid carcinoma)、表皮样癌(epiermoid carcinoma)、腺样上皮癌(carcinoma epitheliale adenoides)、外生型癌、溃疡型癌、纤维性癌、粘液状癌(gelatiniforni carcinoma)、胶状癌(gelatinous carcinoma)、巨细胞癌、巨细胞癌、腺体癌、颗粒细胞癌、毛发基质癌、血样癌、肝细胞癌、Hurthle细胞癌、透明细胞癌、高肾样癌、婴儿胚胎性癌、原位癌、表皮内癌、上皮内癌、Krompecher癌、Kulchitzky细胞癌、大细胞癌、豆状癌(lenticular carcinoma)、豆状核癌(carcinoma lenticulare)、脂肪瘤性癌、淋巴上皮癌、髓质性癌(carcinoma medullare)、髓质癌(medullary carcinoma)、黑色素性癌、软癌(carcinoma molle)、粘液癌(mucinous carcinoma)、粘液样癌(carcinoma muciparum)、粘液细胞癌、粘液表皮样癌、粘膜样癌(carcinoma mucosum)、粘膜癌(mucous carcinoma)、粘液瘤样癌、鼻咽癌、燕麦细胞癌、骨化癌(carcinoma ossificans)、骨样癌(osteoidcarcinoma)、乳头状癌、门静脉周围癌、浸润前癌、棘细胞癌、牙髓质癌(pultaceouscarcinoma)、肾细胞癌、储备细胞癌、肉瘤样癌、施奈德癌、硬癌、阴囊癌、印戒细胞癌、单纯性癌、小细胞癌、马铃薯状癌、球形细胞癌、梭形细胞癌、海绵层癌(carcinomaspongiosum)、鳞状细胞癌、鳞状细胞癌、串状细胞癌、毛细血管扩张癌(carcinomatelangiectaticum)、毛细血管扩张性癌(carcinoma telangiectodes)、移行细胞癌、结节癌(carcinoma tuberosum)、结节性皮癌(tuberous carcinoma)、疣状癌、或绒毛状癌。

本文使用的术语“转移”、“转移性”和“转移性癌症”可以互换使用，并且是指增殖性疾病或病症(例如癌症)从一个器官或另一个非邻近器官或身体部分的扩散。癌症发生在原发部位，例如乳腺，该部位被称为原发性肿瘤，例如原发性乳腺癌。原发肿瘤或原发部位的一些癌细胞获得了穿透和浸润局部区域周围正常组织的能力和/或穿透通过系统循环的淋巴系统或血管系统壁进入体内其他部位和组织的能力。由原发肿瘤的癌细胞形成的第二个临床可检测肿瘤称为转移性或继发性肿瘤。当癌细胞转移时，转移肿瘤及其细胞被假定与原始肿瘤相似。因此，如果肺癌转移至乳腺，乳腺部位的继发性肿瘤由异常的肺细胞组成，而不是异常的乳腺细胞。乳腺中的继发性肿瘤被称为转移性肺癌。因此，转移性癌症是指受试者患有或曾患有原发性肿瘤且有一个或多个继发性肿瘤的疾病。术语非转移性癌症或非转移性癌症受试者是指受试者有原发肿瘤但无一个或多个继发肿瘤的疾病。例如，转移性肺癌是指受试者有原发性肺部肿瘤病史或既往有原发性肺部肿瘤病史，且第二个部位或多个部位有一个或多个继发性肿瘤，例如乳腺。

在某种疾病(例如，癌症(例如，白血病、急性髓性白血病))相关的物质或物质活性或功能背景下，术语“相关”或“与···相关”是指该疾病(例如，癌症(例如，白血病、急性髓性白血病))是由(全部或部分)该物质或物质活性或功能导致(全部或部分)该疾病的症状。或者，该物质(例如，IL1RAP)可能是疾病的指标(例如，癌症(例如，白血病、急性髓性白血病))。因此，一种相关物质可作为一种靶向疾病组织的手段(例如，癌细胞(例如，白血病干细胞、急性髓性白血病细胞))。

正如本文所用，“治疗”或“治疗的”一种病症、疾病或障碍或与一种病症、疾病(例如，癌症，例如，AML)或障碍相关的症状是指获得有益或期望结果(包括临床结果)的方法。有益的或期望的临床结果可包括但不限于：减轻或改善一种或多种症状或病症、减少病症、障碍或疾病的程度、稳定病症、病症或疾病、预防病症、障碍或疾病的发展、预防病症、障碍或疾病的传播、延缓或减缓病症、病症或疾病进展、延缓或减缓病症、障碍或疾病发作、改善或缓解病症、障碍、病症、障碍或疾病状态(部分或全部)。“治疗”也意味着在未经治疗的情况下延长受试者的生存期超出预期。“治疗”也意味着暂时抑制病症、障碍或疾病的进展，暂时减缓病症、障碍或疾病的进展，但在一些情况下，它涉及永久停止病症、障碍或疾病的进展。正如本文所用，术语“治疗”是指减少以蛋白酶表达为特征的疾病或病症的一种或多种症状或以蛋白酶表达为特征的疾病或病症的症状的一种方法。因此，在本公开的方法中，治疗可以是指已确定疾病、病症或症状的严重程度降低10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或100％。例如，与对照相比，如果受试者的一个或多个疾病的症状降低10％，则认为治疗疾病的方法是一种治疗。因此，与天然或对照水平相比，降低可以为10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、100％或10％-100％之间的任何百分比的降低。应当了解，治疗不一定是指疾病、病症或症状的治愈或完全消除。此外，正如本文所用，减少、降低或抑制的参考包括与对照水平相比变化10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或更大，这些术语可以包括但不一定包括完全消除。

术语“剂量(dose)”和“剂量(dosage)”在本文中可以互换使用。剂量是指每次施用时给予个体的活性成分量。剂量取决于许多因素，包括给定治疗的正常剂量范围、施用频率；个体大小和耐受性；病症的严重程度；副作用风险；和施用途径。本领域技术人员应认识到，可根据上述因素或治疗进展调整剂量。术语“剂型”是指药物或药物组合物的特定形式，并取决于施用途径。例如，剂型可以是用于雾化的液体形式，例如，对于吸入剂；可以是片剂或液体，例如，用于口服施用；或盐溶液，例如，用于注射。

正如本文所用，“治疗有效剂量或量”是指产生其施用的作用的剂量(例如，治疗或预防疾病)。确切的剂量和处方将取决于治疗目的，并将由一名本领域技术人员使用已知的技术进行确定(例如，参见Lieberman,Pharmaceutical Dosage Forms(vols.1-3,1992)；Lloyd,The Art,Science and Technology of Pharmaceutical Compounding(1999)；Remington:The Science and Practice of Pharmacy,20th Edition,Gennaro,Editor(2003),and Pickar,Dosage Calculations(1999))。例如，对于给定参数，治疗有效量将显示至少增加或减少5％、10％、15％、20％、25％、40％、50％、60％、75％、80％、90％或至少100％。治疗效力也可表示为增加或减少“倍数”。例如，治疗有效量可以比标准对照至少有1.2倍、1.5倍、2倍、5倍或更多的作用。治疗有效剂量或量可以改善疾病的一种或多种症状。当正在给予的效应是治疗有发生疾病风险的人时，治疗有效剂量或量可以预防或延迟疾病或疾病一个或多个症状的发作。

在实施方案中，该方法还包括给予受试者额外的治疗剂。如上所述，治疗剂是用于治疗或预防疾病(如癌症)的组合物。在实施方案中，额外的治疗剂是一种抗癌剂。

术语“抗癌剂(anti-cancer agent)”和“抗癌药(anticancer agent)”是根据其普通含义使用的，并是指具有抗肿瘤特性或抑制细胞生长或增殖能力的组合物(例如，化合物、药物、拮抗剂、抑制剂、调节剂)。在一些实施方案中，抗癌剂是一种化疗药。在一些实施方案中，抗癌剂是本文中确定的在癌症治疗方法中有用的物质。在一些实施方案中，抗癌剂是指FDA或美国以外国家类似监管机构批准用于治疗癌症的物质。抗癌剂的示例包括但不限于，MEK(例如MEK1、MEK2、或MEK1和MEK2)抑制剂类(例如XL518、CI-1040、PD035901、司美替尼/AZD6244、GSK1120212/曲美替尼、GDC-0973、ARRY-162、ARRY-300、AZD8330、PD0325901、U0126、PD98059、TAK-733、PD318088、AS703026、BAY869766)、烷基化剂类(例如，环磷酰胺、异环磷酰胺、苯丁酸氮芥、白消安、美法仑、氮芥、乌莫司汀、塞替派、亚硝基脲、氮芥类(例如、氮芥、环磷酰胺、苯丁酸氮芥、美法仑)、乙撑亚胺和甲基三聚氰胺类(ethylenimine and methylmelamine，例如，六羟甲基三聚氰胺、塞替派)、烷基磺酸酯类(例如，白消安)、亚硝基脲类(例如，卡莫司汀、罗莫司汀、司莫司汀、链脲霉素)、三氮烯类(地卡巴嗪))、抗代谢物类(例如，5-硫唑嘌呤、甲酰四氢叶酸、卡培他滨、氟达拉滨、吉西他滨、培美曲塞、雷替曲塞、叶酸类似物(例如，甲氨喋呤)、或嘧啶类似物(例如，氟尿嘧啶、氟尿苷、阿糖胞苷)、嘌呤类似物(例如，巯基嘌呤、硫鸟嘌呤、喷司他汀)等)、植物生物碱类(例如，长春新碱、长春碱、长春瑞滨、长春地辛、鬼臼毒素、紫杉醇、多西他赛等)、拓扑异构酶抑制剂类(例如，伊立替康、托泊替康、安吖啶、依托泊苷(VP16)、磷酸依托泊苷、替尼泊苷等)、抗肿瘤抗生素(例如，多柔比星、阿霉素、柔红霉素、表柔比星、放线菌素、博来霉素、丝裂霉素、米托蒽醌、普卡霉素等)、铂基化合物类(例如，顺铂、奥沙利铂、卡铂)、蒽二酮(例如，米托蒽醌)、取代脲(例如，羟基脲)、甲基肼衍生物(例如，甲基苄肼)、肾上腺皮质抑制剂(例如，米托坦、氨鲁米特)、表鬼臼毒素(例如，依托泊苷)、抗生素类(例如，柔红霉素、多柔比星、博来霉素)、酶类(例如，L-门冬酰胺酶)、促分裂原活化的蛋白激酶信号传导的抑制剂类(例如，U0126、PD98059、PD184352、PD0325901、ARRY-142886、SB239063、SP600125、BAY43-9006、渥曼青霉素、或LY294002、Syk抑制剂类、mTOR抑制剂类、抗体(例如，利妥昔单抗(rituxan))、棉酚(gossyphol)、genasense、多酚E、Chlorofusin、全反式维甲酸(ATRA)、苔藓抑素、肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)、5-氮杂-2'-脱氧胞苷、全反式维甲酸、多柔比星、长春新碱、依托泊苷、吉西他滨、伊马替尼(Gleevec.RTM.)、格尔德霉素、17-N-烯丙基氨基-17-去甲氧基格尔德霉素(17-AAG)、黄酮吡醇、LY294002、硼替佐米、曲妥珠单抗、BAY11-7082,PKC412、PD184352、20-表-1、25-二羟维生素D3；5-乙炔基尿嘧啶；阿比特龙；阿柔比星；酰基富烯(acylfulvene)；腺环戊醇(adecypenol)；阿多来新；阿地白介素；ALL-TK拮抗剂；六甲蜜胺；氨莫司汀(ambamustine)；2,4-二氯苯氧乙酸(amidox)；氨磷汀；氨基酮戊酸；氨柔比星；安吖啶；阿那格雷；阿那曲唑；穿心莲内酯；血管生成抑制剂；拮抗剂D；拮抗剂G；安雷利克斯(antarelix)；抗背转形态发生蛋白-1；抗雄激素、前列腺癌；抗雌激素；抗瘤酮(antineoplaston)；反义寡核苷酸；阿非迪霉素甘氨酸盐；凋亡基因调节剂；细胞凋亡调节剂；脱嘌呤核酸；ara-CDP-DL-PTBA；精氨酸脱氨酶；奥沙那宁；阿他美坦；阿莫司汀；海洋环肽1；海洋环肽2；海洋环肽3；阿扎司琼；阿扎毒素；重氮酪氨酸；浆果赤霉素III衍生物；balanol；巴马司他；BCR/ABL拮抗剂；苯并二氢卟吩；苯甲酰星形孢菌素(benzoylstaurosporine)；β-内酰胺衍生物；β-阿里辛(beta-alethine)；β克拉霉素B；桦木酸；bFGF抑制剂；比卡鲁胺；比生群；双氮丙啶精胺(bisaziridinylspermine)；双奈法德；比特迪尼(bistratene)A；比折来新；贝伏特(breflate)；溴匹立明；布度钛；丁硫氨酸亚砜胺；卡泊三醇；钙磷酸蛋白C(calphostin C)；喜树碱衍生物；金丝雀痘(canarypox)IL-2；卡培他滨；羧酸胺-氨基-三唑(carboxamide-amino-triazole)；羧胺三唑(carboxyamidotriazole)；CaRest M3；CARN 700；软骨衍生抑制剂；卡折来新；酪蛋白激酶抑制剂(ICOS)；栗精胺；抗菌肽B；西曲瑞克；二氢卟吩；氯喹喔啉磺酰胺(chloroquinoxaline sulfonamide)；西卡前列素；顺式卟啉；克拉屈滨；氯米芬类似物；克霉唑；克利霉素(collismycin)A；克利霉素B；考布他汀A4；考布他汀类似物；克纳宁(conagenin)；科莱贝司丁(crambescidin)816；克立那托(crisnatol)；念珠藻素(cryptophycin)8；念珠藻素A衍生物；麻疯树毒蛋白(curacin A)；环戊蒽醌(cyclopentanthraquinone)；环普拉坦(cycloplatam)；塞培霉素(cypemycin)；阿糖胞苷十八烷基磷酸盐(cytarabine ocfosfate)；溶细胞因子；磷酸己烷雌酚(cytostatin)；达昔单抗(dacliximab)；地西他滨；去氢代代宁(dehydrodidemnin)B；德舍瑞林；地塞米松；右异环磷酰胺；右雷佐生；右维拉帕米；地吖醌；代代宁(didemnin)B；二羟基苯并氧肟酸(didox)；二乙基正精胺(diethyInorspermine)；二氢-5-氮胞苷；9-二氧霉素(9-dioxamycin)；联苯螺莫司汀(diphenyl spiromustine)；二十二烷醇；多拉司琼；去氧氟尿苷；屈洛昔芬；屈大麻酚；多卡霉素(duocarmycin)SA；依布硒；依考莫司汀；依地福新；依决洛单抗；依氟鸟氨酸；榄香烯；乙嘧替氟；表柔比星；依立雄胺；雌莫司汀类似物；雌激素激动剂；雌激素拮抗剂；依他硝唑；磷酸依托泊苷；依西美坦；法屈唑；法扎拉滨；维甲酰酚胺；非格司亭；非那雄胺；黄酮吡醇；氟卓斯汀；夫卢丝龙(fIuasterone)；氟达拉滨；盐酸氟代柔红霉素；福酚美克；福美司坦；福司曲星；福莫司汀；得克萨卟啉钆(gadolinium texaphyrin)；硝酸镓；卡洛他滨；加尼瑞克；明胶酶抑制剂；吉西他滨；谷胱甘肽抑制剂；赫舒反(hepsulfam)；调蛋白(heregulin)；六亚甲基双乙酰胺；金丝桃素；伊班膦酸；依达比星；艾多昔芬；伊决孟酮；伊莫福新；伊洛马司他；咪唑并吖啶酮；咪喹莫特；免疫刺激肽(immunostimulant peptide)；胰岛素样生长因子-1受体抑制剂；干扰素激动剂；干扰素；白介素；碘苄胍；碘多柔比星；4-甘薯黑疤霉二醇(ipomeanol)；伊罗普拉；伊索拉定；异本格唑(isobengazole)；异高软海绵素(isohomohalicondrin)B；依他司琼；促微丝聚合剂(jasplakinolide)；卡哈拉得(kahalalide)F；三醋酸薄片素-N(lamellarin-N triacetate)；兰瑞肽；雷那霉素(leinamycin)；来格司亭；硫酸香菇多糖；莱托斯汀(leptolstatin)；来曲唑；白血病抑制因子；白细胞α干扰素；亮丙瑞林+雌激素+孕酮；亮丙瑞林；左旋咪唑；利阿唑；线性聚胺类似物；亲脂性双糖肽；亲脂性铂化合物；利索纳得(lissoclinamide)7；洛铂；蚯蚓磷脂；洛美曲索；氯尼达明；洛索蒽醌；洛伐他汀；洛索立宾；勒托替康；德卟啉镥(lutetiumtexaphyrin)；莱索菲林(lysofylline)；裂解肽；美坦辛；马诺他汀(mannostatin)A；马立马司他；马索罗酚；乳腺丝抑蛋白(maspin)；基质分解素抑制剂；基质金属蛋白酶抑制剂；美诺立尔；美巴龙；美替瑞林(meterelin)；甲硫氨酸酶；甲氧氯普胺；MIF抑制剂；米非司酮；米替福新；米利司亭；错配双链RNA；米托胍腙；二溴卫矛醇；丝裂霉素类似物；米托萘胺；米托毒素(mitotoxin)成纤维细胞生长因子-皂草毒蛋白；米托蒽醌；莫法罗汀；莫拉司亭；单克隆抗体，人绒毛膜促性腺激素；单磷酰脂质A+分枝杆菌细胞壁骨架(sk)；莫哌达醇；多重耐药基因抑制剂；基于多肿瘤抑制剂1的疗法；芥类抗癌剂；印度洋海绵B(mycaperoxide B)；分枝杆菌细胞壁提取物；米亚普龙(myriaporone)；N-乙酰基地那林(N-acetyldinaline)；N-取代苯甲酰胺；那法瑞林；那瑞替喷(nagrestip)；纳洛酮+喷他佐辛；纳帕英(napavin)；萘萜二醇(naphterpin)；那托司亭；奈达铂；奈莫柔比星；奈立膦酸；中性内肽酶；尼鲁米特；尼萨霉素(nisamycin)；一氧化氮调节剂；氮氧基抗氧化剂(nitroxide antioxidant)；尼多林(nitrullyn)；O6-苄基鸟嘌呤；奥曲肽；奥可斯酮(okicenone)；寡核苷酸；奥那斯酮；昂丹司琼；昂丹司琼；奥莱辛(oracin)；口服细胞因子诱导剂；奥马铂；奥沙特隆；奥沙利铂；氧杂奥诺霉素(oxaunomycin)；帕劳胺(palauamine)；棕榈酰根霉素(palmitoylrhizoxin)；帕米膦酸；人参炔三醇；帕诺米芬；副菌铁素(parabactin)；帕折普汀(pazelliptine)；培门冬酶；培得星(peldesine)；木聚硫钠；喷司他汀；喷托唑(pentrozole)；全氟溴烷；培磷酰胺；紫苏醇；苯那霉素(phenazinomycin)；苯乙酸酯(phenylacetate)；磷酸酶抑制剂；溶链菌制剂(picibanil)；盐酸毛果芸香碱；吡柔比星；吡曲克辛；胎盘素(placetin)A；胎盘素B；纤溶酶原激活物抑制剂；铂复合物；铂化合物；铂-三胺复合物；卟吩姆钠；泊非霉素(porfiromycin)；强的松；丙基双吖啶酮；前列腺素J2；蛋白质酶体抑制剂；蛋白A基免疫调节剂；蛋白激酶C抑制剂；微藻蛋白激酶C抑制剂；蛋白酪氨酸磷酸酶抑制剂；嘌呤核苷磷酸化酶抑制剂；红紫素；吡唑并吖啶；吡哆基化血红蛋白聚氧乙基醚共轭物(pyridoxylatedhemoglobin polyoxyethylerie conjugate)；raf拮抗剂；雷替曲塞；雷莫司琼；ras法呢基蛋白转移酶抑制剂；ras抑制剂；ras-GAP抑制剂；去甲基化瑞替普汀；依替膦酸铼Re 186；利索新(rhizoxin)；核酶；RII维甲酰胺(retinamide)；罗谷亚胺；罗希吐碱；罗莫肽；罗喹美克；卢比格酮(rubiginone)B1；卢伯西(ruboxyl)；沙芬戈；伞托平(saintopin)；SarCNU；肌肉叶绿醇A；沙格司亭；Sdi 1模拟物；司莫司汀；衰老衍生抑制剂1；有义寡核苷酸；信号转导抑制剂；信号转导调节剂；单链抗原结合蛋白；西佐喃(sizofuran)；索布佐生；硼卡钠；苯乙酸钠；索尔醇(solverol)；生长调节素结合蛋白；索纳明；膦门冬酸(sparfosic acid)；斯卡霉素(spicamycin)D；螺莫司汀；斯耐潘定；海绵他汀(spongistatin)1；角鲨胺；干细胞抑制剂；干细胞分裂抑制剂；斯提酰胺(stipiamide)；溶基质素抑制剂；斯菲诺辛(sulfinosine)；超活性血管活性肠肽拮抗剂；素拉迪塔(suradista)；苏拉明；苦马豆素；合成糖胺聚糖；他莫司汀；甲碘他莫昔芬；牛磺莫司汀；他扎罗汀；替可加兰钠；替加氟；碲吡喃洋(tellurapyrylium)；端粒酶抑制剂；替莫卟吩；替莫唑胺；替尼泊苷；四氯十氧化物(tetrachlorodecaoxide)；四佐胺(tetrazomine)；泰立拉汀(thaliblastine)；噻可拉林；血小板生成素；血小板生成素模拟物；胸腺法新；胸腺生成素受体激动剂；胸腺曲南；甲状腺刺激激素；初紫红素乙基锡(tin ethyl etiopurpurin)；替拉扎明；二氯化二茂钛；拓扑森汀(topsentin)；托瑞米芬；全能干细胞因子；翻译抑制剂；维甲酸；三乙酰尿苷；曲西立滨；三甲曲沙；曲普瑞林；托烷司琼；妥罗雄脲；酪氨酸激酶抑制剂；酪氨酸磷酸化抑制剂；UBC抑制剂；乌苯美司；尿生殖窦源性生长抑制因子(urogenital sinus-derived growthinhibitory factor)；尿激酶受体拮抗剂；伐普肽；瓦立奥林(variolin)B；载体系统，红细胞基因疗法；维拉雷琐；藜芦胺；瓦尔丁(verdins)；维替泊芬；长春瑞滨；维卡亭(vinxaltine)；维他辛(vitaxin)；伏氯唑；扎诺特隆；折尼铂；亚苄维C(zilascorb)；净司他丁斯酯(zinostatinstimalamer)、阿霉素(Adriamycin)、放线菌素(Dactinomycin)、博来霉素、长春碱、顺铂、阿西维辛；阿柔比星；盐酸阿考达唑；阿克罗宁；阿多来新；阿地白介素；六甲蜜胺；安波霉素；醋酸阿美蒽醌；氨鲁米特；安吖啶；阿那曲唑；氨茴霉素；门冬酰胺酶；曲林菌素；阿扎胞苷；阿扎替派；阿佐霉素；巴马司他；苯佐替派；比卡鲁胺；盐酸比生群；二甲磺酸双奈法德；比折来新；硫酸博来霉素；布喹那钠；溴匹立明；白消安；放线菌素；卡普睾酮；卡醋胺；卡贝替姆；卡铂；卡莫司汀；盐酸卡柔比星；卡折来新；西地芬戈；苯丁酸氮芥；西罗霉素；克拉屈滨；甲磺酸克雷斯托；环磷酰胺；阿糖胞苷；达卡巴嗪；盐酸柔红霉素；地西他滨；右奥马铂；地扎胍宁；甲磺酸地扎胍宁；地吖醌；阿霉素；盐酸阿霉素；屈洛昔芬；柠檬酸屈洛昔芬；丙酸屈他雄酮；达佐霉素；依达曲沙；盐酸依氟鸟氨酸；依沙芦星；恩洛铂；恩普氨酯；依匹哌啶；盐酸表柔比星；厄布洛唑；盐酸依索比星；雌莫司汀；磷酸雌莫司汀钠；依他硝唑；依托泊苷；磷酸依托泊苷；艾托卜宁；盐酸法屈唑；法扎拉滨；维甲酰酚胺；氟尿苷；氟达拉滨；氟尿嘧啶；氟西他滨(fluorocitabine)；磷喹酮；福司曲星钠；吉西他滨；盐酸吉西他滨；羟基脲；盐酸依达比星；异环磷酰胺；伊莫福新(iimofosine)；白介素I1(包括重组白介素II，或rlL.sub2)干扰素α-2a；干扰素α-2b；干扰素α-n1；干扰素α-n3；干扰素β-1a；干扰素γ-1b；异丙铂；盐酸伊立替康；乙酸兰瑞肽；来曲唑；醋酸亮丙瑞林；盐酸利阿唑；洛美曲索钠；洛莫司汀；盐酸洛索蒽醌；马索罗酚；美登素；盐酸氮芥；醋酸甲地孕酮；醋酸美仑孕酮；马法兰；美诺立尔；巯嘌呤；甲氨蝶呤；甲氨蝶呤钠；氯苯氨啶；美妥替哌；米丁度胺；米托卡星(mitocarcin)；丝裂红素(mitocromin)；米托洁林；米托马星；丝裂霉素；米托司培；米托坦；盐酸米托蒽醌；霉酚酸；诺考达唑(nocodazoie)；诺加霉素；奥马铂；奥昔舒仑；培门冬酶；培利霉素；奈莫司汀；硫酸培洛霉素；培磷酰胺；哌泊溴烷；哌泊舒凡；盐酸吡罗蒽醌；普卡霉素；普洛美坦；卟吩姆钠；泊非霉素；泼尼莫司汀；盐酸丙卡巴肼；嘌呤霉素；盐酸嘌呤霉素；吡唑呋喃菌素；利波腺苷；罗谷亚胺；沙芬戈；盐酸沙芬戈；司莫司汀；辛曲秦；磷乙酰天冬氨酸钠(sparfosate sodium)；司帕霉素；盐酸锗螺胺；螺莫司汀；螺铂；链霉黑素；链脲佐菌素；磺氯苯脲；他利霉素；替可加兰钠；替加氟；盐酸替洛蒽醌；替莫卟吩；替尼泊苷；替罗昔隆；睾内酯；硫咪嘌呤(thiamiprine)；硫鸟嘌呤；噻替哌；噻唑呋林；替拉扎明；柠檬酸托瑞米芬；醋酸曲托龙；磷酸曲西立滨；三甲曲沙；葡糖醛酸三甲曲沙；曲普瑞林；盐酸妥布氯唑；尿嘧啶氮芥；乌瑞替派；伐普肽；维替泊芬；硫酸长春碱；硫酸长春新碱；长春地辛；硫酸长春地辛；硫酸长春匹定；硫酸长春甘酯；硫酸长春罗新；酒石酸长春瑞滨；硫酸长春罗定；硫酸长春利定；伏氯唑；折尼铂；净司他丁；盐酸佐柔比星，将细胞阻滞于G2-M期和/或调节微管形成或稳定性的药物，(例如，Taxol.TM(即紫杉醇)，Taxotere.TM，包含紫杉烷骨架的化合物，厄布洛唑(Erbulozole，即R-55104)、多拉司他汀10(即DLS-10和NSC-376128)、羟乙基磺酸米韦布林(Mivobulin isethionate，即CI-980)、长春新碱、NSC-639829、圆皮海绵内酯(即NVP-XX-a-296)、ABT-751(Abbott，即E-7010)、阿托瑞亭(例如，阿托瑞亭A和阿托瑞亭C)、海绵他汀(例如，海绵他汀1、海绵他汀2、海绵他汀3、海绵他汀4、海绵他汀5、海绵他汀6、海绵他汀7、海绵他汀8，和海绵他汀)、盐酸西马多丁(即LU-103793和NSC-D-669356)、埃博霉素(例如，埃博霉素A、埃博霉素B、埃博霉素C(即脱氧埃博霉素A或dEpoA)、埃坡霉素D(即KOS-862、dEpoB和脱氧埃博霉素B)、埃博霉素E、埃博霉素F、埃博霉素B氮氧化物、埃博霉素A氮氧化物、16-氮杂-埃博霉素B、21-氨基埃博霉素B(即BMS-310705)、21-羟基埃博霉素D(即脱氧埃博霉素F和dEpoF)、26-氟埃博霉素、瑞奥他汀PE(Auristatin PE，即NSC-654663)、索利多汀(Soblidotin，即TZT-1027)、LS-4559-P(Pharmacia，即LS-4577)、LS-4578(Pharmacia，即LS-477-P)、LS-4477(Pharmacia)、LS-4559(Pharmacia)、RPR-112378(Aventis)、硫酸长春新碱、DZ-3358(Daiichi)、FR-182877(Fujisawa,即WS-9885B)、GS-164(Takeda)、GS-198(Takeda)、KAR-2(Hungarian Academy of Sciences)、BSF-223651(BASF，即ILX-651and LU-223651)、SAH-49960(Lilly/Novartis)、SDZ-268970(Lilly/Novartis)、AM-97(Armad/Kyowa Hakko)、AM-132(Armad)、AM-138(Armad/Kyowa Hakko)、IDN-5005(Indena)、大环内酯52(Cryptophycin 52，即LY-355703)、AC-7739(Ajinomoto，即AVE-8063A和CS-39.HCl)、AC-7700(Ajinomoto，即AVE-8062、AVE-8062A、CS-39-L-Ser.HCl和RPR-258062A)、维替乐福酰胺(Vitilevuamide)、微管溶素A(Tubulysin A)、加纳单索(Canadensol)、矢车菊黄素(Centaureidin，即NSC-106969)、T-138067(Tularik，即T-67、TL-138067和TI-138067)、COBRA-1(Parker Hughes Institute，即DDE-261和WHI-261)、H10(Kansas State University)、H16(Kansas State University)、Oncocidin A1(即BTO-956和DIME)、DDE-313(Parker Hughes Institute)、非将诺来B(Fijianolide B)、劳力马来(Laulimalide)、SPA-2(Parker Hughes Institute)、SPA-1(Parker Hughes Institute，即SPIKET-P)、3-IAABU(Cytoskeleton/Mt.Sinai School of Medicine，即MF-569)、Narcosine(也称之为NSC-5366)、纳司卡滨(Nascapine)、D-24851(Asta Medica)、A-105972(Abbott)、哈米特林(Hemiasterlin)、3-BAABU(Cytoskeleton/Mt.Sinai School ofMedicine，即MF-191)、TMPN(Arizona State University)、、双钒乙酰丙酮(Vanadoceneacetylacetonate)、T-138026(Tularik)、单星素(Monsatrol)、那诺新(lnanocine，即NSC-698666)、3-IAABE(Cytoskeleton/Mt.Sinai School of Medicine)、A-204197(Abbott)、T-607(Tuiarik，即T-900607)、RPR-115781(Aventis)、五加素(Eleutherobins，如去甲基五加素、去乙酰基五加素、异五加素A和Z-五加素)、卡巴斯德(Caribaeoside)、卡巴林(Caribaeolin)、海利软骨胶B(Halichondrin B)、D-64131(Asta Medica)、D-68144(AstaMedica)、含氯环肽A(Diazonamide A)、A-293620(Abbott)、NPI-2350(Nereus)、根薯酮内酯A(Taccalonolide A)、TUB-245(Aventis)、A-259754(Abbott)、二奥唑司达汀(Diozostatin)、(-)-苯基阿西司汀((-)-Phenylahistin，即NSCL-96F037)、D-68838(AstaMedica)、D-68836(Asta Medica)、肌割蛋白B(Myoseverin B)、D-43411(Zentaris，即D-81862)、A-289099(Abbott)、A-318315(Abbott)、HTI-286(即SPA-110，三氟醋酸盐)(Wyeth)、D-82317(Zentaris)、D-82318(Zentaris)、SC-12983(NCI)、磷酸力司弗拉司达汀钠(Resverastatin phosphate sodium)、BPR-OY-007(National Health ResearchInstitutes)，和SSR-250411(Sanofi))、类固醇(例如，地塞米松)、非那雄胺、芳香酶抑制剂、促性腺激素释放激素激动剂(GnRH)，如戈舍瑞林或亮丙瑞林、肾上腺皮质类固醇(例如，强的松)、孕激素(例如，羟基孕酮己酸酯、醋酸甲地孕酮、醋酸甲羟孕酮)、雌激素(例如，二乙基己烯雌酚(diethlystilbestrol)，乙炔雌二醇)、抗雌激素(例如，他莫昔芬)、雄激素(例如，丙酸睾酮、氟甲睾酮)、抗雄激素(例如，氟他胺)、免疫刺激剂(例如，卡介苗(BCG)、左旋咪唑、白介素-2、α-干扰素等)、单克隆抗体(例如，抗CD20、抗HER2、抗CD52、抗HLA-DR和抗VEGF单克隆抗体)、免疫毒素(例如，抗CD33单克隆抗体-加利车霉素偶联物、抗CD22单克隆抗体-假单胞菌外毒素偶联物等)、放射性免疫疗法(例如，与111In、90Y或131I等偶联的抗CD20单克隆抗体)、雷公藤甲素、高三尖杉酯碱(homoharringtonine)、放线菌素、阿霉素、表柔比星、拓扑替康、伊曲康唑、长春地辛、西立伐他汀、长春新碱、脱氧腺苷、舍曲林、匹伐他汀、伊立替康、氯法齐明、5-壬氧基色胺、威罗菲尼、达拉菲尼、厄洛替尼、吉非替尼、EGFR抑制剂、表皮生长因子受体(EGFR)靶向疗法或治疗剂(例如，吉非替尼(Iressa^TM)、厄洛替尼(Tarceva^TM)、西妥昔单抗(Erbitux^TM)、拉帕替尼(Tykerb^TM)、帕尼单抗(Vectibix^TM)、凡德他尼(Caprelsa^TM)、阿法替尼/BIBW2992、CI-1033/卡奈替尼、来那替尼/HKI-272、CP-724714、TAK-285、AST-1306、ARRY334543、ARRY-380、AG-1478、达克替尼/PF299804、OSI-420/去甲埃罗替尼、AZD8931、AEE788、培利替尼/EKB-569、CUDC-101、WZ8040、WZ4002、WZ3146、AG-490、XL647、PD153035、BMS-599626)、索拉非尼、伊马替尼、舒尼替尼、达沙替尼等。

正如本文所用，术语“施用”是指受试者口服施用、以栓剂施用、局部接触、静脉施用、腹膜内施用、肌内施用、病灶内施用、鞘内施用、鼻内施用或皮下施用或植入缓释装置，例如微型渗透泵。可以通过任何途径施用，包括肠外和经粘膜施用(例如，口腔施用、舌下施用、腭施用、牙龈施用、鼻施用、阴道施用、直肠施用或经皮施用)。例如，肠外施用包括静脉注射、肌肉注射、动脉内注射、皮内注射、皮下注射、腹膜内注射、脑室内注射和颅内注射。其他施用方式包括但不限于使用脂质体制剂、静脉输注、透皮贴剂等。通过“共同施用”，意味着本文所述组合物在一种或多种其他治疗施用前或施用后同时施用，例如癌症疗法，如化疗、激素疗法、放疗或免疫疗法。本发明的化合物(例如抗体、双特异性抗体或嵌合抗原受体)可以对患者单独施用，也可以对患者联合施用。联合施用是指同时或序贯单独或联合给予化合物(一种以上化合物)。因此，在需要时，制剂也可以与其他活性物质合并(例如，减少代谢降解)。本发明的组合物可以通过透皮、局部施用途径施用，配制为涂药棒、溶液、混悬液、乳液、凝胶、乳膏、软膏、糊剂、凝胶、涂剂、散剂和气雾剂。

本发明的组合物还可以包括提供缓释和/或舒适的组分。这类组分包括高分子量、阴离子泪膜聚合物、凝胶多糖和微细药物载体底物。这些组分在下述专利中进行了更详细的讨论，即美国专利号4,911,920；5,403,841；5,212,162；和4,861,760。这些专利的全部内容出于所有目的通过引用全部并入本文。本发明组合物也可以作为微球递送以在体内缓慢释放。例如，微球可以通过皮内注射含药微球的方式施用，其在皮下缓慢释放(参见Rao,J.Biomater Sci.Polym.Ed.7:623-645,1995；作为可生物降解和可注射的凝胶制剂(例如，参见Gao Pharm.Res.12:857-863,1995)；或作为口服施用的微球(例如，参见Eyles,J.Pharm.Pharmacol.49:669-674,1997)。在实施方案中，本发明组合物的配方可以通过使用与细胞膜融合或被内吞的脂质体来递送，即通过使用附着在脂质体上的受体配体，其与细胞的表面膜蛋白受体结合而导致内吞作用。通过使用脂质体，特别是在脂质体表面携带靶细胞特异性受体配体或以其他方式优先定向于特定器官的情况下，可以将本发明组合物递送至体内靶细胞。(例如，参见Al-Muhammed,J.Microencapsul.13:293-306,1996；Chonn,Curr.Opin.Biotechnol.6:698-708,1995；Ostro,Am.J.Hosp.Pharm.46:1576-1587,1989)。本发明组合物也可以作为纳米颗粒递送。

正如本文所用，术语“药学上可接受”与“生理学上可接受”和“药理学上可接受”同义使用。药物组合物通常包括储存时用于缓冲和保存的试剂，并且根据施用途径，可以包括适当递送的缓冲剂和载体。

“药学上可接受的赋形剂”和“药学上可接受的载体”是指一种辅助施用活性物质以帮助受试者吸收的物质，并且可以纳入本发明的组合物中而不会对患者造成显著的不良毒理学作用。药学上可接受的赋形剂的非限制性示例包括水、NaCl、生理盐水溶液、乳酸林格氏液、正常蔗糖、正常葡萄糖、粘合剂、填充剂、崩解剂、润滑剂、包衣剂、甜味剂、香精、盐溶液(如林格氏液)、醇、油、明胶、碳水化合物(如乳糖、直链淀粉或淀粉)、脂肪酸酯、羟甲基纤维素、聚乙烯吡咯烷和着色剂等。这类制剂可以灭菌，如果需要的话，可以与不与本发明的化合物剧烈反应的辅助剂混合，该辅助剂如润滑剂、防腐剂、稳定剂、润湿剂、乳化剂、影响渗透压的盐、缓冲剂、着色剂和/或芳香族物质等。一个本领域技术人员将认识到其他药用赋形剂在本发明中是有用的。

术语“药学上可接受的盐”是指来源于本领域熟知的各种有机和无机抗衡离子的盐，仅以举例方式包括钠、钾、钙、镁、铵、四烷基铵等；和当分子含有基本功能时，有机或无机酸盐，如盐酸盐、氢溴酸盐、酒石酸盐、甲磺酸盐、醋酸盐、马来酸盐、草酸盐等。

术语“制剂”旨在包括活性化合物的配方，其中将包封材料作为载体以得到胶囊，其中的活性组分(含有或不含有其他载体)被载体包围，因此它们彼此结合。类似地，包括囊剂和锭剂。片剂、散剂、胶囊剂、丸剂、囊剂、锭剂可以用作适合口服施用的固体剂型。

该药物制剂可以选择单位剂型。以这类形式，将制剂细分为含有适量活性组分的单位剂量。单位剂型可以是包装制剂，即含有离散数量制剂的包装，如包装片剂、胶囊和小瓶或安瓿中的粉末。此外，单位剂型可以是胶囊、片剂、囊剂或锭剂本身，或者可以是包装形式的适当数量的任何一种。单位剂型可以是冷冻分散体。

抗体组合物

除其他外，本文提供了能够结合白介素-1受体辅助蛋白(IL1RAP)的抗体。本文提供的抗体包括新的轻链序列和重链序列，并且高效和特异性地结合IL1RAP，从而阻断IL-1信号传导。阻断IL-1信号传导可以抑制IL1RAP表达细胞的增殖。此外，通过募集效应细胞，本文提供的抗ILRAP1抗体能够诱导IL1RAP表达细胞的杀伤。IL1RAP在多种细胞类型上表达，例如，候选白血病干细胞急性髓性白血病(AML)患者，但在正常造血干细胞上不表达。因此，本文提供的抗IL1RAP抗体，除其他外，可以用于治疗表达IL1RAP的癌症，如AML。

在一方面，提供了一种抗白介素-1受体辅助蛋白(IL1RAP)抗体，该抗体包括轻链可变结构域和重链可变结构域，其中该轻链可变结构域包括：如SEQ ID NO:1所述的CDRL1，如SEQ ID NO:2所述的CDR L2和如SEQ ID NO:3所述的CDR L3；和其中该重链可变结构域包括：如SEQ ID NO:4所述的CDR H1，如SEQ ID NO:5所述的CDR H2和SEQ ID NO:6所述的CDR H3。

如上所述，本文提供的“轻链可变(VL)结构域”是指抗体、其抗体变体或片段轻链的可变结构区。同样，本文提供的“重链可变(VH)结构域”是指抗体、其抗体变体或片段重链的可变结构区。该轻链可变结构域和该重链可变结构域共同形成结合抗原(表位)的互补位。互补位或抗原结合位点形成于抗体、其抗体变体或片段的N末端。在实施方案中，该轻链可变结构域(VL)包括抗体轻链的CDR L1、CDR L2、CDR L3和FR L1、FR L2、FR L3和FR L4(框架区)。在实施方案中，该重链可变结构域(VH)包括抗体重链的CDR H1、CDR H2、CDR H3和FRH1、FR H2、FR H3和FR H4(框架区)。在实施方案中，该轻链可变(VL)结构域和轻链恒定(CL)结构域形成抗体轻链的一部分。在实施方案中，该重链可变结构域(VH)和重链恒定区(CH1)形成抗体重链的一部分。在实施方案中，该重链可变结构域(VH)和一个或多个重链恒定(CH1、CH2或CH3)结构域形成抗体重链的一部分。因此，在实施方案中，该轻链可变结构域(VL)形成抗体的一部分。在实施方案中，该重链可变结构域(VH)形成抗体的一部分。在实施方案中，该轻链可变结构域(VL)形成治疗性抗体的一部分。在实施方案中，该重链可变结构域(VH)形成治疗性抗体的一部分。在实施方案中，该轻链可变结构域(VL)形成人抗体的一部分。在实施方案中，该重链可变结构域(VH)形成人抗体的一部分。在实施方案中，该轻链可变结构域(VL)形成人源化抗体的一部分。在实施方案中，该重链可变结构域(VH)形成人源化抗体的一部分。在实施方案中，该轻链可变结构域(VL)形成嵌合抗体的一部分。在实施方案中，该重链可变结构域(VH)形成嵌合抗体的一部分。在实施方案中，该轻链可变结构域(VL)形成抗体片段的一部分。在实施方案中，该重链可变结构域(VH)形成抗体片段的一部分。在实施方案中，该轻链可变结构域(VL)形成抗体变体的一部分。在实施方案中，该重链可变结构域(VH)形成抗体变体的一部分。在实施方案中，该轻链可变结构域(VL)形成Fab的一部分。在实施方案中，该重链可变结构域(VH)形成Fab的一部分。在实施方案中，该轻链可变结构域(VL)形成scFv的一部分。在实施方案中，该重链可变结构域(VH)形成scFv的一部分。

在实施方案中，该轻链可变结构域包括SEQ ID NO:7的序列。在实施方案中，该轻链可变结构域为SEQ ID NO:7的序列。在实施方案中，该重链可变结构域包括SEQ ID NO:8的序列。在实施方案中，该重链可变结构域为SEQ ID NO:8的序列。在实施方案中，该轻链可变结构域包括如SEQ ID NO:9所述的FR L1、如SEQ ID NO:10所述的FR L2、如SEQ ID NO:11所述的FR L3和如SEQ ID NO:12所述的FR L4。在实施方案中，该重链可变结构域包括如SEQID NO:13所述的FR H1、如SEQ ID NO:14所述的FR H2、如SEQ ID NO:15所述的FR H3和如SEQ ID NO:16所述的FR H4。

在一个实施方案中，该抗体包括(i)轻链可变结构域，该可变结构域包括如SEQ IDNO:1所述的CDR L1，如SEQ ID NO:2所述的CDR L2，如SEQ ID NO:3所述的CDR L3；如SEQ IDNO:9所述的FR L1，如SEQ ID NO:10所述的FR L2，如SEQ ID NO:11所述的FR L3和如SEQ IDNO:12所述的FR L4；和(ii)重链可变结构域，该可变结构域包括如SEQ ID NO:4所述的CDRH1、如SEQ ID NO:5所述的CDR H2，如SEQ ID NO:6所述的CDR H3；如SEQ ID NO:13所述的FRH1，如SEQ ID NO:14所述的FR H2，如SEQ ID NO:15所述的FR H3和如SEQ ID NO:16所述的FR H4。

在一个实施方案中，该抗体包括SEQ ID NO:7的轻链可变结构域和SEQ ID NO:8的重链可变结构域。

在实施方案中，该抗体为IgG。在实施方案中，该抗体为人IgG。在实施方案中，该抗体为IgG1。在实施方案中，该抗体为人IgG1。

在实施方案中，该抗体为Fab'片段。在实施方案中，该抗体形成Fab'片段的一部分。在实施方案中，该抗体为单链抗体(scFv)。在实施方案中，该轻链可变结构域和该重链可变结构域形成scFv的一部分。在实施方案中，该scFv包括SEQ ID NO:17的序列。在实施方案中，该scFv为SEQ ID NO:17的序列。

抗体结合特定表位(例如，IL1RAP)的能力可以用平衡解离常数(K_D)来描述。本文定义的平衡解离常数(K_D)是抗体与IL1RAP解离速率(K-off)和结合速率(K-on)的比值。通过以下公式描述：K_D＝K-off/K-on。在实施方案中，该抗体能够以约21nM的平衡解离常数(K_D)结合IL1RAP。在实施方案中，该抗体能够以21nM的平衡解离常数(K_D)结合IL1RAP。在实施方案中，该抗体能够以约80.6nM的平衡解离常数(K_D)结合IL1RAP。在实施方案中，该抗体能够以80.6nM的平衡解离常数(K_D)结合IL1RAP。

在实施方案中，该抗体能够以20至25nM的平衡解离常数(K_D)结合IL1RAP。在实施方案中，该抗体能够以21至25nM的平衡解离常数(K_D)结合IL1RAP。在实施方案中，该抗体能够以22至25nM的平衡解离常数(K_D)结合IL1RAP。在实施方案中，该抗体能够以23至25nM的平衡解离常数(K_D)结合IL1RAP。在实施方案中，该抗体能够以24至25nM的平衡解离常数(K_D)结合IL1RAP。

在实施方案中，该抗体能够以75至85nM的平衡解离常数(K_D)结合IL1RAP。在实施方案中，该抗体能够以76至85nM的平衡解离常数(K_D)结合IL1RAP。在实施方案中，该抗体能够以77至85nM的平衡解离常数(K_D)结合IL1RAP。在实施方案中，该抗体能够以78至85nM的平衡解离常数(K_D)结合IL1RAP。在实施方案中，该抗体能够以79至85nM的平衡解离常数(K_D)结合IL1RAP。在实施方案中，该抗体能够以80至85nM的平衡解离常数(K_D)结合IL1RAP。在实施方案中，该抗体能够以81至85nM的平衡解离常数(K_D)结合IL1RAP。在实施方案中，该抗体能够以82至85nM的平衡解离常数(K_D)结合IL1RAP。在实施方案中，该抗体能够以83至85nM的平衡解离常数(K_D)结合IL1RAP。在实施方案中，该抗体能够以84至85nM的平衡解离常数(K_D)结合IL1RAP。

在实施方案中，该抗体能够以约20至约85nM的平衡解离常数(K_D)结合IL1RAP。在实施方案中，该抗体能够以约25至约85nM的平衡解离常数(K_D)结合IL1RAP。在实施方案中，该抗体能够以约30至约85nM的平衡解离常数(K_D)结合IL1RAP。在实施方案中，该抗体能够以约35至约85nM的平衡解离常数(K_D)结合IL1RAP。在实施方案中，该抗体能够以约40至约85nM的平衡解离常数(K_D)结合IL1RAP。在实施方案中，该抗体能够以约45至约85nM的平衡解离常数(K_D)结合IL1RAP。在实施方案中，该抗体能够以约50至约85nM的平衡解离常数(K_D)结合IL1RAP。在实施方案中，该抗体能够以约55至约85nM的平衡解离常数(K_D)结合IL1RAP。在实施方案中，该抗体能够以约60至约85nM的平衡解离常数(K_D)结合IL1RAP。在实施方案中，该抗体能够以约65至约85nM的平衡解离常数(K_D)结合IL1RAP。在实施方案中，该抗体能够以约70至约85nM的平衡解离常数(K_D)结合IL1RAP。在实施方案中，该抗体能够以约75至约85nM的平衡解离常数(K_D)结合IL1RAP。在实施方案中，该抗体能够以约80至约85nM的平衡解离常数(K_D)结合IL1RAP。

在实施方案中，该抗体能够以约20至约80nM的平衡解离常数(K_D)结合IL1RAP。在实施方案中，该抗体能够以约25至约80nM的平衡解离常数(K_D)结合IL1RAP。在实施方案中，该抗体能够以约30至约80nM的平衡解离常数(K_D)结合IL1RAP。在实施方案中，该抗体能够以约35至约80nM的平衡解离常数(K_D)结合IL1RAP。在实施方案中，该抗体能够以约40至约80nM的平衡解离常数(K_D)结合IL1RAP。在实施方案中，该抗体能够以约45至约80nM的平衡解离常数(K_D)结合IL1RAP。在实施方案中，该抗体能够以约50至约80nM的平衡解离常数(K_D)结合IL1RAP。在实施方案中，该抗体能够以约55至约80nM的平衡解离常数(K_D)结合IL1RAP。在实施方案中，该抗体能够以约60至约80nM的平衡解离常数(K_D)结合IL1RAP。在实施方案中，该抗体能够以约65至约80nM的平衡解离常数(K_D)结合IL1RAP。在实施方案中，该抗体能够以约70至约80nM的平衡解离常数(K_D)结合IL1RAP。在实施方案中，该抗体能够以约75至约80nM的平衡解离常数(K_D)结合IL1RAP。

在实施方案中，该抗体能够以约20至约70nM的平衡解离常数(K_D)结合IL1RAP。在实施方案中，该抗体能够以约25至约70nM的平衡解离常数(K_D)结合IL1RAP。在实施方案中，该抗体能够以约30至约70nM的平衡解离常数(K_D)结合IL1RAP。在实施方案中，该抗体能够以约35至约70nM的平衡解离常数(K_D)结合IL1RAP。在实施方案中，该抗体能够以约40至约70nM的平衡解离常数(K_D)结合IL1RAP。在实施方案中，该抗体能够以约45至约70nM的平衡解离常数(K_D)结合IL1RAP。在实施方案中，该抗体能够以约50至约70nM的平衡解离常数(K_D)结合IL1RAP。在实施方案中，该抗体能够以约55至约70nM的平衡解离常数(K_D)结合IL1RAP。在实施方案中，该抗体能够以约60至约70nM的平衡解离常数(K_D)结合IL1RAP。在实施方案中，该抗体能够以约65至约70nM的平衡解离常数(K_D)结合IL1RAP。

在实施方案中，该抗体能够以约20至约60nM的平衡解离常数(K_D)结合IL1RAP。在实施方案中，该抗体能够以约25至约60nM的平衡解离常数(K_D)结合IL1RAP。在实施方案中，该抗体能够以约30至约60nM的平衡解离常数(K_D)结合IL1RAP。在实施方案中，该抗体能够以约35至约60nM的平衡解离常数(K_D)结合IL1RAP。在实施方案中，该抗体能够以约40至约60nM的平衡解离常数(K_D)结合IL1RAP。在实施方案中，该抗体能够以约45至约60nM的平衡解离常数(K_D)结合IL1RAP。在实施方案中，该抗体能够以约50至约60nM的平衡解离常数(K_D)结合IL1RAP。在实施方案中，该抗体能够以约55至约60nM的平衡解离常数(K_D)结合IL1RAP。

在实施方案中，该抗体能够以约20至约50nM的平衡解离常数(K_D)结合IL1RAP。在实施方案中，该抗体能够以约25至约50nM的平衡解离常数(K_D)结合IL1RAP。在实施方案中，该抗体能够以约30至约50nM的平衡解离常数(K_D)结合IL1RAP。在实施方案中，该抗体能够以约35至约50nM的平衡解离常数(K_D)结合IL1RAP。在实施方案中，该抗体能够以约40至约50nM的平衡解离常数(K_D)结合IL1RAP。在实施方案中，该抗体能够以约45至约50nM的平衡解离常数(K_D)结合IL1RAP。

在实施方案中，该抗体能够以约20至约40nM的平衡解离常数(K_D)结合IL1RAP。在实施方案中，该抗体能够以约25至约40nM的平衡解离常数(K_D)结合IL1RAP。在实施方案中，该抗体能够以约30至约40nM的平衡解离常数(K_D)结合IL1RAP。在实施方案中，该抗体能够以约35至约40nM的平衡解离常数(K_D)结合IL1RAP。

在实施方案中，该抗体能够以约20至约30nM的平衡解离常数(K_D)结合IL1RAP。在实施方案中，该抗体能够以约25至约30nM的平衡解离常数(K_D)结合IL1RAP。

在实施方案中，该抗体的EC₅₀为约1ng/ml至约20ng/ml。在实施方案中，该抗体的EC₅₀为约2ng/ml至约20ng/ml。在实施方案中，该抗体的EC₅₀为约3ng/ml至约20ng/ml。在实施方案中，该抗体的EC₅₀为约4ng/ml至约20ng/ml。在实施方案中，该抗体的EC₅₀为约5ng/ml至约20ng/ml。在实施方案中，该抗体的EC₅₀为约6ng/ml至约20ng/ml。在实施方案中，该抗体的EC₅₀为约7ng/ml至约20ng/ml。在实施方案中，该抗体的EC₅₀为约8ng/ml至约20ng/ml。在实施方案中，该抗体的EC₅₀为约9ng/ml至约20ng/ml。在实施方案中，该抗体的EC₅₀为约10ng/ml至约20ng/ml。

在实施方案中，该抗体的EC₅₀为约11ng/ml至约20ng/ml。在实施方案中，该抗体的EC₅₀为约12ng/ml至约20ng/ml。在实施方案中，该抗体的EC₅₀为约13ng/ml至约20ng/ml。在实施方案中，该抗体的EC₅₀为约14ng/ml至约20ng/ml。在实施方案中，该抗体的EC₅₀为约15ng/ml至约20ng/ml。在实施方案中，该抗体的EC₅₀为约16ng/ml至约20ng/ml。在实施方案中，该抗体的EC₅₀为约17ng/ml至约20ng/ml。在实施方案中，该抗体的EC₅₀为约18ng/ml至约20ng/ml。在实施方案中，该抗体的EC₅₀为约19ng/ml至约20ng/ml。

在实施方案中，该抗体的EC₅₀为约1ng/ml至约19ng/ml。在实施方案中，该抗体的EC₅₀为约1ng/ml至约18ng/ml。在实施方案中，该抗体的EC₅₀为约1ng/ml至约17ng/ml。在实施方案中，该抗体的EC₅₀为约1ng/ml至约16ng/ml。在实施方案中，该抗体的EC₅₀为约1ng/ml至约15ng/ml。在实施方案中，该抗体的EC₅₀为约1ng/ml至约14ng/ml。在实施方案中，该抗体的EC₅₀为约1ng/ml至约13ng/ml。在实施方案中，该抗体的EC₅₀为约1ng/ml至约12ng/ml。在实施方案中，该抗体的EC₅₀为约1ng/ml至约11ng/ml。

在实施方案中，该抗体的EC₅₀为约1ng/ml至约10ng/ml。在实施方案中，该抗体的EC₅₀为约1ng/ml至约9ng/ml。在实施方案中，该抗体的EC₅₀为约1ng/ml至约8ng/ml。在实施方案中，该抗体的EC₅₀为约1ng/ml至约7ng/ml。在实施方案中，该抗体的EC₅₀为约1ng/mL至约6ng/mL。在实施方案中，该抗体的EC₅₀为约1ng/ml至约5ng/ml。在实施方案中，该抗体的EC₅₀为约1ng/ml至约4ng/ml。在实施方案中，该抗体的EC₅₀为约1ng/ml至约3ng/ml。在实施方案中，该抗体的EC₅₀为约1ng/ml至约2ng/ml。

在实施方案中，该抗体的EC₅₀为约1ng/ml、2ng/ml、4ng/ml、5ng/ml、6ng/ml、7ng/ml、8ng/ml、9ng/ml、10ng/ml、11ng/ml、12ng/ml、13ng/ml、14ng/ml、15ng/ml、16ng/ml、17ng/ml、18ng/ml、19ng/ml或20ng/ml。在实施方案中，该抗体的EC₅₀为1ng/ml、2ng/ml、4ng/ml、5ng/ml、6ng/ml、7ng/ml、8ng/ml、9ng/ml、10ng/ml、11ng/ml、12ng/ml、13ng/ml、14ng/ml、15ng/ml、16ng/ml、17ng/ml、18ng/ml、19ng/ml或20ng/ml。

在实施方案中，该抗体的EC₅₀为约4ng/ml至约7ng/ml。在实施方案中，该抗体的EC₅₀为约4.5ng/ml至约7ng/ml。在实施方案中，该抗体的EC₅₀为约5ng/ml至约7ng/ml。在实施方案中，该抗体的EC₅₀为约5.5ng/ml至约7ng/ml。在实施方案中，该抗体的EC₅₀为约6ng/ml至约7ng/ml。在实施方案中，该抗体的EC₅₀为约6.5ng/ml至约7ng/ml。

在实施方案中，该抗体的EC₅₀为4ng/ml至7ng/ml。在实施方案中，该抗体的EC₅₀为4.5ng/ml至7ng/ml。在实施方案中，该抗体的EC₅₀为5ng/ml至7ng/ml。在实施方案中，该抗体的EC₅₀为5.5ng/ml至7ng/ml。在实施方案中，该抗体的EC₅₀为6ng/ml至7ng/ml。在实施方案中，该抗体的EC₅₀为6.5ng/ml至7ng/ml。

在实施方案中，该抗体的EC₅₀为约4.9ng/ml。在实施方案中，该抗体的EC₅₀为4.9ng/ml。在实施方案中，该抗体的EC₅₀为约6.8ng/ml。在实施方案中，该抗体的EC₅₀为6.8ng/ml。在实施方案中，该抗体的EC₅₀为约6.4ng/ml。在实施方案中，该抗体的EC₅₀为6.4ng/ml。在实施方案中，该抗体的EC₅₀为约5.4ng/ml。在实施方案中，该抗体的EC₅₀为5.4ng/ml。

在实施方案中，该抗体与IL1RAP结合。在实施方案中，IL1RAP为人IL1RAP。在实施方案中，IL1RAP形成细胞的一部分。在实施方案中，IL1RAP表达于细胞表面。在实施方案中，该细胞为癌细胞。在实施方案中，该癌细胞是白血病干细胞(LSC)。在实施方案中，该癌细胞为急性髓性白血病(AML)细胞。在实施方案中，该癌细胞为慢性髓性白血病(CML)细胞。在实施方案中，该癌细胞为肺癌细胞。在实施方案中，该癌细胞为非小细胞肺癌(NSCLC)细胞。在实施方案中，该细胞为胰腺癌细胞。在实施方案中，该细胞为黑色素瘤细胞。在实施方案中，该细胞为乳腺癌细胞。在实施方案中，该细胞为结肠癌细胞。

在实施方案中，抗白介素-1受体辅助蛋白(IL1RAP)抗体具有SEQ ID NO：17的序列。

重组蛋白组合物

如上所述，本文提供的轻链可变(VL)结构域和重链可变(VH)结构域(包括其实施方案)可以各自独立形成抗体、抗体变体、抗体片段、抗体变体片段或重组蛋白(例如，嵌合抗原受体、双特异性抗体)的一部分。本文提供重组蛋白(例如，嵌合抗原受体，双特异性抗体)，其包括本文提供的轻链可变(VL)结构域和重链可变(VH)结构域，并因而能够结合IL1RAP并募集效应细胞至表达IL1RAP的细胞(例如，LSC)，从而消除IL1RAP表达细胞。在实施方案中，该重组蛋白为嵌合抗原受体(CAR)。在实施方案中，该重组蛋白为双特异性抗体。

本文提供的轻链可变(VL)结构域和重链可变(VH)结构域可以形成嵌合抗原受体的一部分。因此，在一方面，提供了一种重组蛋白，该重组蛋白包括：(i)抗体区，其包括：(a)轻链可变结构域，其包括如SEQ ID NO:1所述的CDR L1，如SEQ ID NO:2所述的CDR L2和如SEQ ID NO:3所述的CDR L3；和(b)重链可变区结构域，其包括如SEQ ID NO:4所述的CDRH1、如SEQ ID NO:5所述的CDR H2，如SEQ ID NO:6所述的CDR H3；和(ii)跨膜结构域。

本文提供的“抗体区”是指形成本文中提供的重组蛋白(包括其实施方案，例如CAR)一部分的单价或多价蛋白部分。因此，本领域普通技术人员将立即认识到抗体区是能够结合抗原(表位)的蛋白部分。因此，本文提供的抗体区可以包括抗体的结构域(例如，轻链可变(VL)结构域、重链可变(VH)结构域)或抗体的片段(例如，Fab)。在实施方案中，该抗体区是蛋白偶联物。本文提供的“蛋白偶联物”是指由多个多肽组成的结构，其中该多肽以共价或非共价方式结合在一起。在实施方案中，该蛋白偶联物包括共价连接到scFv部分(单价scFv)的Fab部分(单价Fab)。在实施方案中，该蛋白偶联物包括多个(至少两个)Fab基团。在实施方案中，该蛋白偶联物的多肽由一个核酸分子编码。在实施方案中，该蛋白偶联物的多肽由不同的核酸分子编码。在实施方案中，该多肽通过接头连接。在实施方案中，该多肽通过化学接头连接。在实施方案中，该抗体区是scFv。

本文提供的“跨膜结构域”是指形成生物膜一部分的多肽。本文提供的跨膜结构域能够从膜的一侧跨膜到膜的另一侧的生物膜(例如，细胞膜)。在实施方案中，该跨膜结构域从细胞膜的细胞内侧跨膜至细胞外侧。该跨膜结构域可以包括非极性的疏水残基，其将本文提供的蛋白(包括其实施方案)锚定在生物膜(例如，T细胞的细胞膜)内。考虑了能够锚定本文提供蛋白(包括其实施方案)的任何跨膜结构域。跨膜结构域的非限制性示例包括CD28、CD8、CD4或CD3-ζ的跨膜结构域。在实施方案中，该跨膜结构域为CD4跨膜结构域。

在实施方案中，该跨膜结构域为CD28跨膜结构域。本文提供的术语“CD28跨膜结构域”包括任何重组或天然存在形式的CD28跨膜结构域，或其能够维持CD28跨膜结构域活性的变体或同源物(例如，与CD28跨膜结构域相比，在至少50％、80％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％活性内)。在一些方面，与天然存在CD28跨膜结构域多肽相比，变体或同源物在整个序列或序列的一部分(例如，50、100、150或200个连续氨基酸部分)至少有90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的氨基酸序列同一性。在实施方案中，CD28为根据NCBI序列参考GI:340545506鉴定的蛋白，其同源物或功能片段。

在实施方案中，该跨膜结构域为CD8跨膜结构域。本文提供的术语“CD8跨膜结构域”包括任何重组或天然存在形式的CD8跨膜结构域，或其能够维持CD8跨膜结构域活性的变体或同源物(例如，与CD8跨膜结构域相比，在至少50％、80％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％活性内)。在一些方面，与天然存在CD8跨膜结构域多肽相比，变体或同源物在整个序列或序列的一部分(例如，50、100、150或200个连续氨基酸部分)至少有90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的氨基酸序列同一性。在实施方案中，CD8为根据NCBI序列参考GI:225007534鉴定的蛋白，其同源物或功能片段。

在实施方案中，该跨膜结构域为CD4跨膜结构域。本文提供的术语“CD4跨膜结构域”包括任何重组或天然存在形式的CD4跨膜结构域，或其能够维持CD4跨膜结构域活性的变体或同源物(例如，与CD4跨膜结构域相比，在至少50％、80％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％活性内)。在一些方面，与天然存在CD4跨膜结构域多肽相比，变体或同源物在整个序列或序列的一部分(例如，50、100、150或200个连续氨基酸部分)至少有90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的氨基酸序列同一性。在实施方案中，CD4为根据NCBI序列参考GI:303522473鉴定的蛋白，其同源物或功能片段。

在实施方案中，该跨膜结构域为CD3-ζ(也称为CD247)跨膜结构域。本文提供的术语“CD3-ζ跨膜结构域”包括任何重组或天然存在形式的CD3-ζ跨膜结构域，或其能够维持CD3-ζ跨膜结构域活性的变体或同源物(例如，与CD3-ζ跨膜结构域相比，在至少50％、80％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％活性内)。在一些方面，与天然存在CD3-ζ跨膜结构域多肽相比，变体或同源物在整个序列或序列的一部分(例如，50、100、150或200个连续氨基酸部分)至少有90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的氨基酸序列同一性。在实施方案中，CD3-ζ为根据NCBI序列参考GI:166362721鉴定的蛋白，其同源物或功能片段。

在实施方案中，该轻链可变结构域包括SEQ ID NO:7的序列。在实施方案中，该轻链可变结构域是SEQ ID NO:7的序列。在实施方案中，该重链可变结构域包括SEQ ID NO:8的序列。在实施方案中，该重链可变结构域是SEQ ID NO:8的序列。在实施方案中，该轻链可变结构域包括如SEQ ID NO:9所述的FR L1、如SEQ ID NO:10所述的FR L2、如SEQ ID NO:11所述的FR L3和如SEQ ID NO:12所述的FR L4。在实施方案中，该重链可变结构域包括如SEQID NO:13所述的FR H1、如SEQ ID NO:14所述的FR H2、如SEQ ID NO:15所述的FR H3和如SEQ ID NO:16所述的FR H4。

在实施方案中，该抗体区包括单链可变片段(scFv)。在实施方案中，该scFv包括SEQ ID NO:17的序列。在实施方案中，该scFv为SEQ ID NO:17的序列。

在实施方案中，该重组蛋白能够以约21nM的平衡解离常数(K_D)结合IL1RAP。在实施方案中，该重组蛋白能够以21nM的平衡解离常数(K_D)结合IL1RAP。本文定义的IL1RAP抗体的K_D值适用于本文所述的重组蛋白(包括其实施方案)。

因此，在实施方案中，该重组蛋白(例如，嵌合抗原受体)的EC₅₀(半数最大有效浓度)为约1ng/ml至约20ng/ml。正如本文所用，术语“EC50”或“半数最大有效浓度”是指在特定的暴露时间后，能够诱导基线反应和最大反应中间水平的分子(例如，抗体、嵌合抗原受体或双特异性抗体)的浓度。在实施方案中，EC50为产生该分子50％最大可以效应的分子(例如，抗体、嵌合抗原受体或双特异性抗体)的浓度。在实施方案中，该重组蛋白的EC₅₀为约2ng/ml至约20ng/ml。在实施方案中，该重组蛋白的EC₅₀为约3ng/ml至约20ng/ml。在实施方案中，该重组蛋白的EC₅₀为约4ng/ml至约20ng/ml。在实施方案中，该重组蛋白的EC₅₀为约5ng/ml至约20ng/ml。在实施方案中，该重组蛋白的EC₅₀为约6ng/ml至约20ng/ml。在实施方案中，该重组蛋白的EC₅₀为约7ng/ml至约20ng/ml。在实施方案中，该重组蛋白的EC₅₀为约8ng/ml至约20ng/ml。在实施方案中，该重组蛋白的EC₅₀为约9ng/ml至约20ng/ml。在实施方案中，该重组蛋白的EC₅₀为约10ng/ml至约20ng/ml。

在实施方案中，该重组蛋白的EC₅₀为约11ng/ml至约20ng/ml。在实施方案中，该重组蛋白的EC₅₀为约12ng/ml至约20ng/ml。在实施方案中，该重组蛋白的EC₅₀为约13ng/ml至约20ng/ml。在实施方案中，该重组蛋白的EC₅₀为约14ng/ml至约20ng/ml。在实施方案中，该重组蛋白的EC₅₀为约15ng/ml至约20ng/ml。在实施方案中，该重组蛋白的EC₅₀为约16ng/ml至约20ng/ml。在实施方案中，该重组蛋白的EC₅₀为约17ng/ml至约20ng/ml。在实施方案中，该重组蛋白的EC₅₀为约18ng/ml至约20ng/ml。在实施方案中，该重组蛋白的EC₅₀为约19ng/ml至约20ng/ml。

在实施方案中，该重组蛋白的EC₅₀为约1ng/ml、2ng/ml、4ng/ml、5ng/ml、6ng/ml、7ng/ml、8ng/ml、9ng/ml、10ng/ml、11ng/ml、12ng/ml、13ng/ml、14ng/ml、15ng/ml、16ng/ml、17ng/ml、18ng/ml、19ng/ml或20ng/ml。在实施方案中，该重组蛋白的EC₅₀为1ng/ml、2ng/ml、4ng/ml、5ng/ml、6ng/ml、7ng/ml、8ng/ml、9ng/ml、10ng/ml、11ng/ml、12ng/ml、13ng/ml、14ng/ml、15ng/ml、16ng/ml、17ng/ml、18ng/ml、19ng/ml或20ng/ml。

在实施方案中，该重组蛋白的EC₅₀为约1至19ng/ml。在实施方案中，该重组蛋白的EC₅₀为约1ng/ml至约18ng/ml。在实施方案中，该重组蛋白的EC₅₀为约1ng/ml至约17ng/ml。在实施方案中，该重组蛋白的EC₅₀为约1ng/ml至约16ng/ml。在实施方案中，该重组蛋白的EC₅₀为约1ng/ml至约15ng/ml。在实施方案中，该重组蛋白的EC₅₀为约1ng/ml至约14ng/ml。在实施方案中，该重组蛋白的EC₅₀为约1ng/ml至约13ng/ml。在实施方案中，该重组蛋白的EC₅₀为约1ng/ml至约12ng/ml。在实施方案中，该重组蛋白的EC₅₀为约1ng/ml至约11ng/ml。

在实施方案中，该重组蛋白的EC₅₀为约1ng/ml至约10ng/ml。在实施方案中，该重组蛋白的EC₅₀为约1ng/ml至约9ng/ml。在实施方案中，该重组蛋白的EC₅₀为约1ng/ml至约8ng/ml。在实施方案中，该重组蛋白的EC₅₀为约1ng/ml至约7ng/ml。在实施方案中，该重组蛋白的EC₅₀为约1ng/ml至约6ng/ml。在实施方案中，该重组蛋白的EC₅₀为约1ng/ml至约5ng/ml。在实施方案中，该重组蛋白的EC₅₀为约1ng/ml至约4ng/ml。在实施方案中，该重组蛋白的EC₅₀为约1ng/ml至约3ng/ml。在实施方案中，该重组蛋白的EC₅₀为约1ng/ml至约2ng/ml。

在实施方案中，该重组蛋白的EC₅₀为约4ng/ml至约7ng/ml。在实施方案中，该重组蛋白的EC₅₀为约4.5ng/ml至约7ng/ml。在实施方案中，该重组蛋白的EC₅₀为约5ng/ml至约7ng/ml。在实施方案中，该重组蛋白的EC₅₀为约5.5ng/ml至约7ng/ml。在实施方案中，该重组蛋白的EC₅₀为约6ng/ml至约7ng/ml。在实施方案中，该重组蛋白的EC₅₀为约6.5ng/ml至约7ng/ml。

在实施方案中，该重组蛋白的EC₅₀为4ng/ml至7ng/ml。在实施方案中，该重组蛋白的EC₅₀为4.5ng/ml至7ng/ml。在实施方案中，该重组蛋白的EC₅₀为5ng/ml至7ng/ml。在实施方案中，该重组蛋白的EC₅₀为5.5ng/ml至7ng/ml。在实施方案中，该重组蛋白的EC₅₀为6ng/ml至7ng/ml。在实施方案中，该重组蛋白的EC₅₀为6.5ng/ml至7ng/ml。

在实施方案中，该重组蛋白的EC₅₀为约4.9ng/ml。在实施方案中，该重组蛋白的EC₅₀为4.9ng/ml。在实施方案中，该重组蛋白的EC₅₀为约6.8ng/ml。在实施方案中，该重组蛋白的EC₅₀为6.8ng/ml。在实施方案中，该重组蛋白的EC₅₀为约6.4ng/ml。在实施方案中，该重组蛋白的EC₅₀为6.4ng/ml。在实施方案中，该重组蛋白的EC₅₀为约5.4ng/ml。在实施方案中，该重组蛋白的EC₅₀为5.4ng/ml。

在实施方案中，该重组蛋白与IL1RAP结合。在实施方案中，IL1RAP为人IL1RAP。在实施方案中，IL1RAP形成细胞的一部分。在实施方案中，IL1RAP表达于细胞表面。在实施方案中，该细胞为癌细胞。在实施方案中，该癌细胞为白血病干细胞(LSC)。在实施方案中，该癌细胞为急性髓性白血病(AML)细胞。在实施方案中，该癌细胞为慢性髓性白血病(CML)细胞。在实施方案中，该癌细胞为肺癌细胞。在实施方案中，该癌细胞为非小细胞肺癌(NSCLC)细胞。在实施方案中，该细胞为胰腺癌细胞。在实施方案中，该细胞为黑色素瘤细胞。在实施方案中，该细胞为乳腺癌细胞。在实施方案中，该细胞为结肠癌细胞。

在实施方案中，该抗体区包括Fc结构域。在实施方案中，该Fc结构域为IgG4 Fc结构域。在实施方案中，该抗体区包括Fc铰链结构域。在实施方案中，该抗体区包括IgG4 Fc铰链结构域。在实施方案中，该抗体区包括间隔区。在实施方案中，该间隔区位于跨膜结构域和抗体区之间。本文提供的“间隔区”是连接抗体区与跨膜结构域的多肽。在实施方案中，该间隔区将重链恒定区与跨膜结构域连接。在实施方案中，该间隔区包括Fc区。在实施方案中，该间隔区为Fc区。本文提供的重组蛋白组合物的间隔区的示例包括但不限于免疫球蛋白分子或其片段(例如，IgG1、IgG2、IgG3、IgG4)和包括影响Fc受体结合突变的免疫球蛋白分子或其片段(例如，IgG1、IgG2、IgG3、IgG4)。在实施方案中，该间隔区为铰链区。在实施方案中，该间隔区为IgG4铰链区。在实施方案中，该间隔区为修饰的IgG4铰链区。

在实施方案中，正如本文提供的重组蛋白(包括其实施方案)还包括细胞内共刺激信号传导结构域。本文提供的“细胞内共刺激信号传导结构域”包括能够提供共刺激信号传导以响应抗原与本文提供的抗体区(包括其实施方案)结合的氨基酸序列。在实施方案中，该共刺激信号传导结构域的信号传导导致细胞因子的产生和表达其的T细胞增殖。在实施方案中，该细胞内共刺激信号传导结构域为CD28细胞内共刺激信号传导结构域、4-1BB细胞内共刺激信号传导结构域、ICOS细胞内共刺激信号传导结构域或OX-40细胞内共刺激信号传导结构域。在实施方案中，该细胞内共刺激信号传导结构域为CD28细胞内共刺激信号传导结构域。在实施方案中，该细胞内共刺激信号传导结构域为4-1BB细胞内共刺激信号传导结构域。在实施方案中，该细胞内共刺激信号传导结构域为ICOS细胞内共刺激信号传导结构域。在实施方案中，该细胞内共刺激信号传导结构域为OX-40细胞内共刺激信号传导结构域。

在实施方案中，本文提供的重组蛋白(包括其实施方案)还包括细胞内T细胞信号传导结构域。本文提供的“细胞内T细胞信号传导结构域”包括能够提供主要信号传导响应抗原与本文提供的抗体区(包括其实施方案)结合的氨基酸序列。在实施方案中，该细胞内T细胞信号传导结构域的信号传导导致表达其的T细胞活化。在实施方案中，该细胞内T细胞信号传导结构域的信号传导导致表达其的T细胞的增值(细胞分裂)。在实施方案中，细胞内T细胞信号传导结构域的信号传导导致通过所述T细胞表达本领域已知的以活化T细胞(例如，CTLA-4、PD-1、CD28、CD69)为特征的蛋白的表达。在实施方案中，该细胞内T细胞信号传导结构域包括人CD3复合物ζ链的信号传导结构域。在实施方案中，该细胞内T细胞信号传导结构域是CD3ζ细胞内T细胞信号传导结构域。

本文所指术语“CTLA-4”包括任何重组形式或天然存在形式的细胞毒性T淋巴细胞相关蛋白4，也称为CD152(分化抗原簇152)，或其保持CTLA-4活性的变体或同源物(例如，与CTLA-4相比，在至少50％、80％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％活性内)。在一些方面，与天然存在CTLA-4蛋白相比，变体或同源物在整个序列或序列的一部分(例如，50、100、150或200个连续氨基酸部分)至少有90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的氨基酸序列同一性。在实施方案中，CTLA-4蛋白与UniProt参考编号P16410鉴别的蛋白或者与其具有实质性同一性的变体或同源物实质上相同。

本文所指术语“PD-1”包括任何重组形式或天然存在形式的程序性细胞死亡蛋白1，也称为CD279(分化簇279)，或其保持PD-1活性的变体或同源物(例如，与PD-1相比，在至少50％、80％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％活性内)。在一些方面，与天然存在PD-1蛋白相比，变体或同源物在整个序列或序列的一部分(例如，50、100、150或200个连续氨基酸部分)至少有90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的氨基酸序列同一性。在实施方案中，PD-1蛋白与UniProt参考编号Q15116鉴别的蛋白或者与其具有实质性同一性的变体或同源物实质上相同。

本文所指术语“CD-28”包括任何重组形式或天然存在形式的分化簇28蛋白，或其保持CD-28活性的变体或同源物(例如，与CD-28相比，至少在50％、80％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％活性内)。在一些方面，与天然存在CD-28蛋白相比，变体或同源物在整个序列或序列的一部分(例如，50、100、150或200个连续氨基酸部分)至少有90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的氨基酸序列同一性。在实施方案中，CD-28蛋白与UniProt参考编号P10747鉴别的蛋白或者与其具有实质性同一性的变体或同源物实质上相同。

本文所指术语“CD69”包括任何重组形式或天然存在形式的分化簇69蛋白，或其保持CD69活性的变体或同源物(例如，与CD69相比，在至少50％、80％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％活性内)。在一些方面，与天然存在CD69蛋白相比，变体或同源物在整个序列或序列的一部分(例如，50、100、150或200个连续氨基酸部分)至少有90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的氨基酸序列同一性。在实施方案中，CD69蛋白与UniProt参考编号Q07108鉴别的蛋白或者与其具有实质性同一性的变体或同源物实质上相同。

本文所指术语“4-1BB”包括任何重组或天然存在形式的4-1BB蛋白，也称为肿瘤坏死因子受体超家族成员9(TNFRSF9)、分化簇137(CD137)，并由淋巴细胞活化(ILA)诱导，或其维持4-1BB活性的变体或同源物(例如，与4-1BB相比，至少50％、80％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％活性内)。在一些方面，与天然存在EGFR蛋白相比，变体或同源物在整个序列或序列的一部分(例如，50、100、150或200个连续氨基酸部分)至少有90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的氨基酸序列同一性。在实施方案中，4-1BB蛋白与UniProt参考编号Q07011鉴别的蛋白或者与其具有实质性同一性的变体或同源物实质上相同。

在实施方案中，本文提供的重组蛋白(包括其实施方案)还包括自裂解肽基序列。在实施方案中，该自裂解肽基接头序列为T2A序列或2A序列。在实施方案中，该自裂解肽基接头序列为T2A序列。在实施方案中，该自裂解肽基接头序列为2A序列。

在实施方案中，正如本文提供的重组蛋白(包括其实施方案)还包括可检测结构域。“可检测结构域”是指通过光谱、光化学、生物化学、免疫化学、化学或其他物理方式可检测的肽部分。例如，本文提供的可检测结构域可以是蛋白或其他可以被检测的实体，例如通过加入放射性标记或与抗体特异性反应。可以使用本领域中已知的任何适当的方法将抗体与标记物结合，例如使用Hermanson,Bioconjugate Techniques 1996,Academic Press,Inc.,San Diego中所述的方法。在实施方案中，该可检测结构域为截短的EGFR(EGFRt)结构域。术语“EGFRt”是指缺乏细胞内信号传导能力的截短表皮生长因子受体蛋白。正如本文所用，EGFRt是一种作为可检测结构域的惰性细胞表面分子，以允许识别转导的T细胞。在实施方案中，该重组蛋白形成细胞的一部分。在实施方案中，该重组蛋白形成T细胞的一部分。

本文所指术语“EGFR”包括任何重组形式或天然存在形式的表皮生长因子受体蛋白，也称为ErbB-1和HER1，或其保持EGFR活性的变体或同源物(例如，与EGFR相比，至少在50％、80％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％活性内)。在一些方面，与天然存在EGFR蛋白相比，变体或同源物在整个序列或序列的一部分(例如，50、100、150或200个连续氨基酸部分)至少有90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的氨基酸序列同一性。在实施方案中，EGFR蛋白与UniProt参考编号P00533鉴别的蛋白或者与其具有实质性同一性的变体或同源物实质上相同。

在一个实施方案中，该重组蛋白包括SEQ ID NO:7的轻链可变结构域，SEQ ID NO:8的重链可变结构域，其中跨膜结构域为CD4跨膜结构域，Fc结构域为IgG4铰链结构域，细胞内共刺激结构域为4-1BB细胞内共刺激结构域，细胞内T细胞信号传导结构域为CD3ζ细胞内T细胞信号传导结构域，自裂解肽基序列为T2A序列，可检测结构域为截短的EGFR结构域。

在实施方案中，该重组蛋白为嵌合抗原受体，其包括SEQ ID NO:17的抗体区、CD4跨膜结构域、IgG4铰链结构域、4-1BB细胞内共刺激结构域、CD3ζ细胞内T细胞信信号传导结构域、T2A自裂解肽基序列和截短的EGFR结构域。

在实施方案中，该重组蛋白为嵌合抗原受体，其包括SEQ ID NO:17的抗体区、CD8铰链和CD8跨膜结构域、4-1BB细胞内共刺激结构域和CD3ζ细胞内T细胞信号传导结构域。

在实施方案中，该重组蛋白为SEQ ID NO:90的嵌合抗原受体。

本文提供的轻链可变(VL)结构域和重链可变(VH)结构域可以形成双特异性抗体的一部分。因此，在另一方面，提供了重组蛋白，该重组蛋白包括：(i)能够结合效应细胞配体的第一抗体区；和(ii)第二抗体区，其包括：(a)轻链可变结构域，该可变结构域包括如SEQ ID NO:1所述的CDR L1、如SEQ ID NO:2所述的CDR L2和如SEQ ID NO:3所述的CDR L3；和(b)重链可变区结构域，其包括如SEQ ID NO:4所述的CDR H1、如SEQ ID NO:5所述的CDRH2和如SEQ ID NO:6所述的CDR H3。

本文提供的术语“效应细胞配体”是指在免疫系统效应细胞(例如，细胞毒性T细胞、辅助性T细胞、B细胞、自然杀伤细胞)上表达的细胞表面分子。第一抗体区与效应细胞上表达的效应细胞配体结合后，效应细胞被激活并能够发挥其功能(例如，选择性杀伤或根除恶性、感染或其他不健康细胞)。在实施方案中，该效应细胞配体为CD3蛋白。在实施方案中，该效应细胞配体为CD16蛋白。在实施方案中，该效应细胞配体为CD32蛋白。在实施方案中，该效应细胞配体为NKp46蛋白。本文提供的第一个抗体区可以为抗体、抗体变体、抗体片段或抗体变体片段。

本文所指“CD3蛋白”包括任何重组形式或天然存在形式的分化簇3(CD3)蛋白或其变体或同源物，或其包括介导信号转导并维持CD3复合物活性的CD3复合物(例如，与CD3复合物相比，在至少50％、80％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％活性内)。在一些方面，与CD3复合物中天然存在的CD3蛋白相比，变体或同源物在整个序列或序列的一部分(例如，50、100、150或200个连续氨基酸部分)至少有90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的氨基酸序列同一性。

本文所指“CD16蛋白”包括任何重组形式或或天然存在形式的分化簇16(CD16)蛋白，也称为低亲和力免疫球蛋白γFc区受体III-A，或其保持CD16活性的变体或同源物(例如，与CD16相比，在至少50％、80％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％活性内)。在一些方面，与天然存在的CD16蛋白相比，变体或同源物在整个序列或序列的一部分(例如，50、100、150或200个连续氨基酸部分)至少有90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的氨基酸序列同一性。在实施方案中，CD16蛋白与UniProt参考编号P08637鉴别的蛋白或者与其具有实质性同一性的变体或同源物实质上相同。

本文所指“CD32蛋白”包括任何重组形式或或天然存在形式的分化簇32(CD32)蛋白，也称为低亲和力免疫球蛋白γFc区受体II-A，或其保持CD32活性的变体或同源物(例如，与CD32相比，在至少50％、80％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％活性内)。在一些方面，与天然存在的CD32蛋白相比，变体或同源物在整个序列或序列的一部分(例如，50、100、150或200个连续氨基酸部分)至少有90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的氨基酸序列同一性。在实施方案中，CD32蛋白与UniProt参考编号P12318鉴别的蛋白或者与其具有实质性同一性的变体或同源物实质上相同。

本文所指术语“NKp46蛋白”包括任何重组形式或天然存在形式的NKp46蛋白，也称为天然细胞毒性触发受体1，或其保持NKp46活性的变体或同源物(例如，与NKp46相比，至少在50％、80％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％活性内)。在一些方面，与天然存在的NKp46蛋白相比，变体或同源物在整个序列或序列的一部分(例如，50、100、150或200个连续氨基酸部分)至少有90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的氨基酸序列同一性。在实施方案中，NKp46蛋白与UniProt参考编号O76036鉴别的蛋白或者与其具有实质性同一性的变体或同源物实质上相同。

在实施方案中，该重组蛋白(例如，双特异性抗体)的IC50(半数最大抑制浓度)为约10pM至约100pM。在实施方案中，该重组蛋白的IC50为约15pM至约100pM。在实施方案中，该重组蛋白的IC50为约20pM至约100pM。在实施方案中，该重组蛋白的IC50为约25pM至约100pM。在实施方案中，该重组蛋白的IC50为约30pM至约100pM。在实施方案中，该重组蛋白的IC50为约35pM至约100pM。在实施方案中，该重组蛋白的IC50为约40pM至约100pM。在实施方案中，该重组蛋白的IC50为约45pM至约100pM。在实施方案中，该重组蛋白的IC50为约50pM至约100pM。在实施方案中，该重组蛋白的IC50为约55pM至约100pM。在实施方案中，该重组蛋白的IC50为约60pM至约100pM。在实施方案中，该重组蛋白的IC50为约65pM至约100pM。在实施方案中，该重组蛋白的IC50为约70pM至约100pM。在实施方案中，该重组蛋白的IC50为约75pM至约100pM。在实施方案中，该重组蛋白的IC50为约80pM至约100pM。在实施方案中，该重组蛋白的IC50为约85pM至约100pM。在实施方案中，该重组蛋白的IC50为约90pM至约100pM。在实施方案中，该重组蛋白的IC50为约95pM至约100pM。

在实施方案中，该重组蛋白的IC50(半数最大抑制浓度)为10pM至100pM。在实施方案中，该重组蛋白的IC50为15pM至100pM。在实施方案中，该重组蛋白的IC50为20pM至100pM。在实施方案中，该重组蛋白的IC50为25pM至100pM。在实施方案中，该重组蛋白的IC50为30pM至100pM。在实施方案中，该重组蛋白的IC50为35pM至100pM。在实施方案中，该重组蛋白的IC50为40pM至100pM。在实施方案中，该重组蛋白的IC50为45pM至100pM。在实施方案中，该重组蛋白的IC50为50pM至100pM。在实施方案中，该重组蛋白的IC50为55pM至100pM。在实施方案中，该重组蛋白的IC50为60pM至100pM。在实施方案中，该重组蛋白的IC50为65pM至100pM。在实施方案中，该重组蛋白的IC50为70pM至100pM。在实施方案中，该重组蛋白的IC50为75pM至100pM。在实施方案中，该重组蛋白的IC50为80pM至100pM。在实施方案中，该重组蛋白的IC50为85pM至100pM。在实施方案中，该重组蛋白的IC50为90pM至100pM。在实施方案中，该重组蛋白的IC50为95pM至100pM。

在实施方案中，该重组蛋白的IC50为约40至约50pM。在实施方案中，该重组蛋白的IC50为约41至约50pM。在实施方案中，该重组蛋白的IC50为约42至约50pM。在实施方案中，该重组蛋白的IC50为约43至约50pM。在实施方案中，该重组蛋白的IC50为约44至约50pM。在实施方案中，该重组蛋白的IC50为约45至约50pM。在实施方案中，该重组蛋白的IC50为约46至约50pM。在实施方案中，该重组蛋白的IC50为约47至约50pM。在实施方案中，该重组蛋白的IC50为约48至约50pM。在实施方案中，该重组蛋白的IC50为约49至约50pM。

在实施方案中，该重组蛋白的IC50为约40至约49pM。在实施方案中，该重组蛋白的IC50为约40至约48pM。在实施方案中，该重组蛋白的IC50为约40至约47pM。在实施方案中，该重组蛋白的IC50为约40至约46pM。在实施方案中，该重组蛋白的IC50为约40至约45pM。在实施方案中，该重组蛋白的IC50为约40至约44pM。在实施方案中，该重组蛋白的IC50为约40至约43pM。在实施方案中，该重组蛋白的IC50为约40至约42pM。在实施方案中，该重组蛋白的IC50为约40至约41pM。

在实施方案中，该重组蛋白的IC50为40至50pM。在实施方案中，该重组蛋白的IC50为41至50pM。在实施方案中，该重组蛋白的IC50为42至50pM。在实施方案中，该重组蛋白的IC50为43至50pM。在实施方案中，该重组蛋白的IC50为44至50pM。在实施方案中，该重组蛋白的IC50为45至50pM。在实施方案中，该重组蛋白的IC50为46至50pM。在实施方案中，该重组蛋白的IC50为47至50pM。在实施方案中，该重组蛋白的IC50为48至50pM。在实施方案中，该重组蛋白的IC50为49至50pM。

在实施方案中，该重组蛋白的IC50为40至49pM。在实施方案中，该重组蛋白的IC50为40至48pM。在实施方案中，该重组蛋白的IC50为40至47pM。在实施方案中，该重组蛋白的IC50为40至46pM。在实施方案中，该重组蛋白的IC50为40至45pM。在实施方案中，该重组蛋白的IC50为40至44pM。在实施方案中，该重组蛋白的IC50为40至43pM。在实施方案中，该重组蛋白的IC50为40至42pM。在实施方案中，该重组蛋白的IC50为40至41pM。

在实施方案中，该重组蛋白的IC50为40至48.5pM。在实施方案中，该重组蛋白的IC50为40至47.5pM。在实施方案中，该重组蛋白的IC50为40至46.5pM。在实施方案中，该重组蛋白的IC50为40至45.5pM。在实施方案中，该重组蛋白的IC50为40至44.5pM。在实施方案中，该重组蛋白的IC50为40至43.5pM。在实施方案中，该重组蛋白的IC50为40至42.5pM。在实施方案中，该重组蛋白的IC50为40至41.5pM。在实施方案中，该重组蛋白的IC50为40至40.5pM。

在实施方案中，该重组蛋白的IC50为40.5至49pM。在实施方案中，该重组蛋白的IC50为40.5至48pM。在实施方案中，该重组蛋白的IC50为40.5至47pM。在实施方案中，该重组蛋白的IC50为40.5至46pM。在实施方案中，该重组蛋白的IC50为40.5至45pM。在实施方案中，该重组蛋白的IC50为40.5至44pM。在实施方案中，该重组蛋白的IC50为40.5至43pM。在实施方案中，该重组蛋白的IC50为40.5至42pM。在实施方案中，该重组蛋白的IC50为40.5至41pM。

在实施方案中，该重组蛋白的IC50为41.5至49pM。在实施方案中，该重组蛋白的IC50为41.5至48pM。在实施方案中，该重组蛋白的IC50为41.5至47pM。在实施方案中，该重组蛋白的IC50为41.5至46pM。在实施方案中，该重组蛋白的IC50为41.5至45pM。在实施方案中，该重组蛋白的IC50为41.5至44pM。在实施方案中，该重组蛋白的IC50为41.5至43pM。在实施方案中，该重组蛋白的IC50为41.5至42pM。

在实施方案中，该重组蛋白的IC50为42.5至49pM。在实施方案中，该重组蛋白的IC50为42.5至48pM。在实施方案中，该重组蛋白的IC50为42.5至47pM。在实施方案中，该重组蛋白的IC50为42.5至46pM。在实施方案中，该重组蛋白的IC50为42.5至45pM。在实施方案中，该重组蛋白的IC50为42.5至44pM。在实施方案中，该重组蛋白的IC50为42.5至43pM。

在实施方案中，该重组蛋白的IC50为43.5至49pM。在实施方案中，该重组蛋白的IC50为43.5至48pM。在实施方案中，该重组蛋白的IC50为43.5至47pM。在实施方案中，该重组蛋白的IC50为43.5至46pM。在实施方案中，该重组蛋白的IC50为43.5至45pM。在实施方案中，该重组蛋白的IC50为43.5至44pM。

在实施方案中，该重组蛋白的IC50为44.5至49pM。在实施方案中，该重组蛋白的IC50为44.5至48pM。在实施方案中，该重组蛋白的IC50为44.5至47pM。在实施方案中，该重组蛋白的IC50为44.5至46pM。在实施方案中，该重组蛋白的IC50为44.5至45pM。

在实施方案中，该重组蛋白的IC50为约10pM、20pM、30pM、40pM、41pM、42pM、43pM、44pM、45pM、46pM、47pM、48pM、49pM、50pM、60pM、70pM、80pM、90pM或100pM。在实施方案中，该重组蛋白的IC50为10pM、20pM、30pM、40pM、41pM、42pM、43pM、44pM、45pM、46pM、47pM、48pM、49pM、50pM、60pM、70pM、80pM、90pM或100pM。

在实施方案中，该重组蛋白的IC50为约45.14pM。在实施方案中，该重组蛋白的IC50为45.14pM。在实施方案中，该重组蛋白的IC50为约45.14pM。在实施方案中，该重组蛋白的IC50为45.14pM。

在实施方案中，该轻链可变结构域包括SEQ ID NO:7的序列。在实施方案中，该轻链可变结构域为SEQ ID NO:7的序列。在实施方案中，该重链可变结构域包括SEQ ID NO:8的序列。在实施方案中，该重链可变结构域为SEQ ID NO:8的序列。在实施方案中，该轻链可变结构域包括如SEQ ID NO:9所述的FR L1、如SEQ ID NO:10所述的FR L2、如SEQ ID NO:11所述的FR L3和如SEQ ID NO:12所述的FR L4。在实施方案中，该重链可变结构域包括如SEQID NO:13所述的FR H1、如SEQ ID NO:14所述的FR H2、如SEQ ID NO:15所述的FR H3和如SEQ ID NO:16所述的FR H4。

在实施方案中，该重组蛋白(双特异性抗体)包括对应于Kabat位置366位的色氨酸。在实施方案中，该重组蛋白(双特异性抗体)包括对应于Kabat位置366位的丝氨酸。在实施方案中，该重组蛋白(双特异性抗体)包括对应于Kabat位置368位的丙氨酸。在实施方案中，该重组蛋白(双特异性抗体)包括对应于Kabat位置407位的缬氨酸。在实施方案中，该重组蛋白(双特异性抗体)包括对应于Kabat位置234位的丙氨酸。在实施方案中，该重组蛋白(双特异性抗体)包括对应于Kabat位置235位的丙氨酸。

在实施方案中，该第一抗体区为第一Fab'片段或该第二抗体区为第二Fab'片段。在实施方案中，该第一抗体区为单链可变片段(scFv)或该第二抗体区为第二单链可变片段(scFv)。在实施方案中，该第二scFv包括SEQ ID NO:17的序列。在实施方案中，该第二scFv为SEQ ID NO:17的序列。

在实施方案中，该第二抗体区能够以约21nM的平衡解离常数(K_D)结合IL1RAP。在实施方案中，该第二抗体区能够以21nM的平衡解离常数(K_D)结合IL1RAP。

在实施方案中，该第二抗体区的EC₅₀为约4.9ng/ml。在实施方案中，该第二抗体区的EC₅₀为4.9ng/ml。

在实施方案中，该第二抗体区与IL1RAP结合。在实施方案中，IL1RAP为人IL1RAP。在实施方案中，IL1RAP形成细胞的一部分。在实施方案中，IL1RAP表达于细胞表面。

在实施方案中，该细胞为癌细胞。在实施方案中，该癌细胞为白血病干细胞(LSC)。在实施方案中，该癌细胞为急性髓性白血病(AML)细胞。

在一个实施方案中，该重组蛋白为双特异性抗体，该双特异性抗体包括SEQ IDNO:21的第一抗体区和SEQ ID NO:20的第二抗体区。

核酸组合物

在一方面，提供了一种编码本文所提供抗体(包括其实施方案)的分离核酸。在实施方案中，该核酸包括SEQ ID NO:18的序列。在实施方案中，该核酸为SEQ ID NO:18的序列。

在另一方面，提供了一种编码本文所提供重组蛋白(包括其实施方案)的分离核酸。在实施方案中，该核酸包括SEQ ID NO:18的序列。

药物组合物

在一方面，提供了一种药物组合物，该药物组合物包括本文所提供的治疗有效量的抗体(包括其实施方案)和药学上可接受的赋形剂。

在另一方面，提供了一种药物组合物，该药物组合物包括本文所提供的治疗有效量的重组蛋白(包括其实施方案)和药学上可接受的赋形剂。

治疗方法

本文提供的组合物(包括其实施方案)被视为可以有效治疗如癌症等疾病(例如，白血病(例如，AML))。因此，在一方面，提供了一种在有需要的受试者中治疗癌症的方法，该方法包括给受试者施用本文提供的治疗有效量的抗体(包括其实施方案)，从而治疗受试者中的癌症。

在另一方面，提供了一种在有需要的受试者中治疗癌症的方法，该方法包括给受试者施用本文提供的治疗有效量的重组蛋白(包括其实施方案)，从而治疗受试者的癌症。在实施方案中，该癌症为白血病。在实施方案中，该癌症为急性髓性白血病。在实施方案中，该癌症为慢性髓性白血病(CML)。在实施方案中，该癌症为肺癌。在实施方案中，该癌症为非小细胞肺癌(NSCLC)。在实施方案中，该癌症为胰腺癌。在实施方案中，该癌症为黑色素瘤。在实施方案中，该癌症为乳腺癌。在实施方案中，该癌症为结肠癌。在实施方案中，该方法还包括给受试者施用第二治疗剂。

在实施方案中，该抗体的施用量为约0.01nM至约10nM。在实施方案中，该抗体的施用量为约0.05nM至约10nM。在实施方案中，该抗体的施用量为约0.1nM至约10nM。在实施方案中，该抗体的施用量为约0.5nM至约10nM。在实施方案中，该抗体的施用量为约1nM至约10nM。在实施方案中，该抗体的施用量为约2nM至约10nM。在实施方案中，该抗体的施用量为约4nM至约10nM。在实施方案中，该抗体的施用量为约6nM至约10nM。在实施方案中，该抗体的施用量为约4nM至约10nM。在实施方案中，该抗体的施用量为约8nM至约10nM。在实施方案中，该抗体的施用量为约0.01nM、0.05nM、0.1nM、0.5nM、1nM、2nM、2nM、4nM、5nM、6nM、7nM、8nM、9nM或10nM。

在实施方案中，该抗体的施用量为0.01nM至10nM。在实施方案中，该抗体的施用量为0.05nM至10nM。在实施方案中，该抗体的施用量为0.1nM至10nM。在实施方案中，该抗体的施用量为0.5nM至10nM。在实施方案中，该抗体的施用量为1nM至10nM。在实施方案中，该抗体的施用量为2nM至10nM。在实施方案中，该抗体的施用量为4nM至10nM。在实施方案中，该抗体的施用量为6nM至10nM。在实施方案中，该抗体的施用量为4nM至10nM。在实施方案中，该抗体的施用量为8nM至10nM。在实施方案中，该抗体的施用量为0.01nM、0.05nM、0.1nM、0.5nM、1nM、2nM、2nM、4nM、5nM、6nM、7nM、8nM、9nM或10nM。

在实施方案中，该抗体的施用量为约0.01nM至约8nM。在实施方案中，该抗体的施用量为约0.05nM至约8nM。在实施方案中，该抗体的施用量为约0.1nM至约8nM。在实施方案中，该抗体的施用量为约0.5nM至约8nM。在实施方案中，该抗体的施用量为约1nM至约8nM。在实施方案中，该抗体的施用量为约2nM至约8nM。在实施方案中，该抗体的施用量为约4nM至约8nM。在实施方案中，该抗体的施用量为约6nM至约8nM。在实施方案中，该抗体的施用量为约4nM至约8nM。

在实施方案中，该抗体的施用量为0.01nM至8nM。在实施方案中，该抗体的施用量为0.05nM至8nM。在实施方案中，该抗体的施用量为0.1nM至8nM。在实施方案中，该抗体的施用量为0.5nM至8nM。在实施方案中，该抗体的施用量为1nM至8nM。在实施方案中，该抗体的施用量为2nM至8nM。在实施方案中，该抗体的施用量为4nM至8nM。在实施方案中，该抗体的施用量为6nM至8nM。在实施方案中，该抗体的施用量为4nM至8nM。

在实施方案中，该抗体的施用量为约0.01nM至约6nM。在实施方案中，该抗体的施用量为约0.05nM至约6nM。在实施方案中，该抗体的施用量为约0.1nM至约6nM。在实施方案中，该抗体的施用量为约0.5nM至约8nM。在实施方案中，该抗体的施用量为约1nM至约6nM。在实施方案中，该抗体的施用量为约2nM至约6nM。在实施方案中，该抗体的施用量为约4nM至约6nM。

在实施方案中，该抗体的施用量为0.01nM至6nM。在实施方案中，该抗体的施用量为0.05nM至6nM。在实施方案中，该抗体的施用量为0.1nM至6nM。在实施方案中，该抗体的施用量为0.5nM至6nM。在实施方案中，该抗体的施用量为1nM至6nM。在实施方案中，该抗体的施用量为2nM至6nM。在实施方案中，该抗体的施用量为4nM至6nM。

在实施方案中，该抗体的施用量为约0.01nM至约4nM。在实施方案中，该抗体的施用量为约0.05nM至约4nM。在实施方案中，该抗体的施用量为约0.1nM至约4nM。在实施方案中，该抗体的施用量为约0.5nM至约4nM。在实施方案中，该抗体的施用量为约1nM至约4nM。在实施方案中，该抗体的施用量为约2nM至约4nM。

在实施方案中，该抗体的施用量为0.01nM至4nM。在实施方案中，该抗体的施用量为0.05nM至4nM。在实施方案中，该抗体的施用量为0.1nM至4nM。在实施方案中，该抗体的施用量为0.5nM至4nM。在实施方案中，该抗体的施用量为1nM至4nM。在实施方案中，该抗体的施用量为2nM至4nM。

在实施方案中，该抗体的施用量为约0.01nM至约2nM。在实施方案中，该抗体的施用量为约0.05nM至约2nM。在实施方案中，该抗体的施用量为约0.1nM至约2nM。在实施方案中，该抗体的施用量为约0.5nM至约2nM。在实施方案中，该抗体的施用量为约1nM至约2nM。

在实施方案中，该抗体的施用量为0.01nM至2nM。在实施方案中，该抗体的施用量为0.05nM至2nM。在实施方案中，该抗体的施用量为0.1nM至2nM。在实施方案中，该抗体的施用量为0.5nM至2nM。在实施方案中，该抗体的施用量为1nM至2nM。

在实施方案中，该抗体的施用量为约0.01nM至约1nM。在实施方案中，该抗体的施用量为约0.05nM至约1nM。在实施方案中，该抗体的施用量为约0.1nM至约1nM。在实施方案中，该抗体的施用量为约0.5nM至约1nM。

在实施方案中，该抗体的施用量为0.01nM至1nM。在实施方案中，该抗体的施用量为0.05nM至1nM。在实施方案中，该抗体的施用量为0.1nM至1nM。在实施方案中，该抗体的施用量为0.5nM至1nM。

在实施方案中，该抗体的施用量为约3.15nM。在实施方案中，该抗体的施用量为3.15nM。在实施方案中，该抗体的施用量为约1.05nM。在实施方案中，该抗体的施用量为1.05nM。

应当了解，本文提供的重组蛋白(即双特异性抗体或嵌合抗原受体，包括其实施方案)可以在本文所述的用于抗体施用的任何浓度下施用(例如，0.01nM-10nM)。

在实施方案中，该抗体的施用量为约10μg至约500μg。在实施方案中，该抗体的施用量为约20μg至约500μg。在实施方案中，该抗体的施用量为约30μg至约500μg。在实施方案中，该抗体的施用量为约40μg至约500μg。在实施方案中，该抗体的施用量为约50μg至约500μg。在实施方案中，该抗体的施用量为约60μg至约500μg。在实施方案中，该抗体的施用量为约70μg至约500μg。在实施方案中，该抗体的施用量为约80μg至约500μg。在实施方案中，该抗体的施用量为约90μg至约500μg。在实施方案中，该抗体的施用量为约100μg至约500μg。

在实施方案中，该抗体的施用量为约110μg至约500μg。在实施方案中，该抗体的施用量为约120μg至约500μg。在实施方案中，该抗体的施用量为约130μg至约500μg。在实施方案中，该抗体的施用量为约140μg至约500μg。在实施方案中，该抗体的施用量为约150μg至约500μg。在实施方案中，该抗体的施用量为约160μg至约500μg。在实施方案中，该抗体的施用量为约170μg至约500μg。在实施方案中，该抗体的施用量为约180μg至约500μg。在实施方案中，该抗体的施用量为约190μg至约500μg。在实施方案中，该抗体的施用量为约200μg至约500μg。

在实施方案中，该抗体的施用量为约210μg至约500μg。在实施方案中，该抗体的施用量为约220μg至约500μg。在实施方案中，该抗体的施用量为约230μg至约500μg。在实施方案中，该抗体的施用量为约240μg至约500μg。在实施方案中，该抗体的施用量为约250μg至约500μg。在实施方案中，该抗体的施用量为约260μg至约500μg。在实施方案中，该抗体的施用量为约270μg至约500μg。在实施方案中，该抗体的施用量为约280μg至约500μg。在实施方案中，该抗体的施用量为约290μg至约500μg。在实施方案中，该抗体的施用量为约300μg至约500μg。

在实施方案中，该抗体的施用量为约310μg至约500μg。在实施方案中，该抗体的施用量为约320μg至约500μg。在实施方案中，该抗体的施用量为约330μg至约500μg。在实施方案中，该抗体的施用量为约340μg至约500μg。在实施方案中，该抗体的施用量为约350μg至约500μg。在实施方案中，该抗体的施用量为约360μg至约500μg。在实施方案中，该抗体的施用量为约370μg至约500μg。在实施方案中，该抗体的施用量为约380μg至约500μg。在实施方案中，该抗体的施用量为约390μg至约500μg。在实施方案中，该抗体的施用量为约400μg至约500μg。

在实施方案中，该抗体的施用量为约410μg至约500μg。在实施方案中，该抗体的施用量为约420μg至约500μg。在实施方案中，该抗体的施用量为约430μg至约500μg。在实施方案中，该抗体的施用量为约440μg至约500μg。在实施方案中，该抗体的施用量为约450μg至约500μg。在实施方案中，该抗体的施用量为约460μg至约500μg。在实施方案中，该抗体的施用量为约470μg至约500μg。在实施方案中，该抗体的施用量为约480μg至约500μg。在实施方案中，该抗体的施用量为约490μg至约500μg。

在实施方案中，该抗体的施用量为约10μg至约400μg。在实施方案中，该抗体的施用量为约20μg至约400μg。在实施方案中，该抗体的施用量为约30μg至约400μg。在实施方案中，该抗体的施用量为约40μg至约400μg。在实施方案中，该抗体的施用量为约50μg至约400μg。在实施方案中，该抗体的施用量为约60μg至约400μg。在实施方案中，该抗体的施用量为约70μg至约400μg。在实施方案中，该抗体的施用量为约80μg至约400μg。在实施方案中，该抗体的施用量为约90μg至约400μg。在实施方案中，该抗体的施用量为约100μg至约400μg。

在实施方案中，该抗体的施用量为约10μg至约300μg。在实施方案中，该抗体的施用量为约20μg至约300μg。在实施方案中，该抗体的施用量为约30μg至约300μg。在实施方案中，该抗体的施用量为约40μg至约300μg。在实施方案中，该抗体的施用量为约50μg至约300μg。在实施方案中，该抗体的施用量为约60μg至约300μg。在实施方案中，该抗体的施用量为约70μg至约300μg。在实施方案中，该抗体的施用量为约80μg至约300μg。在实施方案中，该抗体的施用量为约90μg至约300μg。在实施方案中，该抗体的施用量为约100μg至约300μg。

在实施方案中，该抗体的施用量为约10μg至约200μg。在实施方案中，该抗体的施用量为约20μg至约200μg。在实施方案中，该抗体的施用量为约30μg至约200μg。在实施方案中，该抗体的施用量为约40μg至约200μg。在实施方案中，该抗体的施用量为约50μg至约200μg。在实施方案中，该抗体的施用量为约60μg至约200μg。在实施方案中，该抗体的施用量为约70μg至约200μg。在实施方案中，该抗体的施用量为约80μg至约200μg。在实施方案中，该抗体的施用量为约90μg至约200μg。在实施方案中，该抗体的施用量为约100μg至约200μg。

在实施方案中，该抗体的施用量为约10μg至约100μg。在实施方案中，该抗体的施用量为约20μg至约100μg。在实施方案中，该抗体的施用量为约30μg至约100μg。在实施方案中，该抗体的施用量为约40μg至约100μg。在实施方案中，该抗体的施用量为约50μg至约100μg。在实施方案中，该抗体的施用量为约60μg至约100μg。在实施方案中，该抗体的施用量为约70μg至约100μg。在实施方案中，该抗体的施用量为约80μg至约100μg。在实施方案中，该抗体的施用量为约90μg至约100μg。

在实施方案中，该抗体的施用量为约10μg、20μg、30μg、40μg、50μg、60μg、70μg、80μg、90μg、100μg、110μg、120μg、130μg、140μg、150μg、160μg、170μg、180μg、190μg、200μg、210μg、220μg、230μg、240μg、250μg、260μg、270μg、280μg、290μg、300μg、310μg、320μg、330μg、340μg、350μg、360μg、370μg、380μg、390μg、400μg、410μg、420μg、430μg、440μg、450μg、460μg、470μg、480μg、490μg或500μg。

在实施方案中，该抗体的施用量为10μg、20μg、30μg、40μg、50μg、60μg、70μg、80μg、90μg、100μg、110μg、120μg、130μg、140μg、150μg、160μg、170μg、180μg、190μg、200μg、210μg、220μg、230μg、240μg、250μg、260μg、270μg、280μg、290μg、300μg、310μg、320μg、330μg、340μg、350μg、360μg、370μg、380μg、390μg、400μg、410μg、420μg、430μg、440μg、450μg、460μg、470μg、480μg、490μg或500μg。

应当了解，本文提供的重组蛋白(即双特异性抗体或嵌合抗原受体，包括其实施方案)可以在本文所述的用于抗体施用的任何浓度下施用(例如，10μg-500μg)。

在实施方案中，该重组蛋白或抗体的施用量为约200μg。在实施方案中，该重组蛋白或抗体的施用量为200μg。

抑制细胞增殖的方法

本文提供的组合物(包括其实施方案)将进一步考虑用于抑制细胞增殖。因此，在一方面，提供了一种抑制细胞增殖的方法，该方法包括：(i)将该细胞与本文提供的抗IL1RAP抗体(包括其实施方案)接触，或与本文提供的重组蛋白(包括其实施方案)接触，从而形成经接触的细胞；和(ii)允许本文提供的抗IL1RAP抗体，重组蛋白(包括其实施方案)结合经接触的细胞上的IL1RAP，从而抑制该细胞的增殖。在实施方案中，该细胞为癌细胞。在实施方案中，该细胞为白血病干细胞(LSC)。在实施方案中，该癌细胞为急性髓性白血病(AML)细胞。在实施方案中，该癌细胞为慢性髓性白血病(CML)细胞。在实施方案中，该癌细胞为肺癌细胞。在实施方案中，该癌细胞为非小细胞肺癌(NSCLC)细胞。在实施方案中，该癌细胞为胰腺癌细胞。在实施方案中，该癌细胞为黑色素瘤细胞。在实施方案中，该癌细胞为乳腺癌细胞。在实施方案中，该癌细胞为结肠癌细胞。

实施例

提供了以下示例来说明，但并不限制所要保护的发明。

实施例1

急性髓性白血病(AML)与较差的生存率相关，目前迫切需要新型更有效的疗法，其在理想情况下靶向作用于对维持疾病至关重要的AML干细胞。申请人实验室和其他出版物报告称，在大多数AML患者中，候选白血病干细胞的IL1RAP蛋白上调，但正常造血干细胞的IL1RAP蛋白则没有上调。

申请人开发了一种可以结合AML细胞上IL1RAP的新型人单克隆抗体(1D5)，并将该抗体应用于双特异性抗体(抗CD3x ILIRAP)和CAR-T技术。申请人的研究表明，该双特异性抗体可以有效杀伤所有检测的AML细胞株和10例AML患者的样品。体内研究也证实了其治疗效力。

体外和体内实验结果表明，该抗体在临床上具有治疗AML疾病的巨大潜力。

申请人从其人源抗IL1RAP蛋白的噬菌体展示抗体文库中筛选了单克隆抗体(1D5)，据报告，该IL1RAP蛋白在急性髓性白血病(AML)细胞中是上调的。该抗体对重组IL1RAP蛋白的亲和力为约20nM。

使用该单克隆抗体(1D5)，申请人随后合成了双特异性抗体。该双特异性抗体由两个臂组成：一个是CD3抗体，另一个是单克隆抗体1D5。这一双特异性抗体与表达IL1RAP蛋白的细胞结合，然后辅助招募T细胞到表达ILIRAP的细胞中并杀伤细胞。申请人随后检测了该抗体与7种不同AML细胞系的结合。在证实该抗体与所有检测的AML细胞系结合后，申请人尝试使用所有7种AML细胞系和10份AML患者样品进行特异性杀伤试验。杀伤试验显示，对AML细胞系和AML患者样品的特异性杀伤率均超过90％。

申请人的体内研究也证明，通过在植入MV4-11细胞系的小鼠中输注该双特异性抗体和人T细胞，与对照组相比，MV4-11细胞被清除。

这一双特异性抗体可以进一步开发用于AML的治疗。单克隆抗体1D5现在用于CAR-T，这是治疗AML的另一种有效方法。

实施例2

以IL1RAP为靶标的免疫治疗可以消除急性髓性白血病(AML)中的白血病干细胞(LSC)。

摘要AML是一种破坏性造血系统恶性肿瘤，可以导致原始和部分分化的克隆原始细胞进行性积累，如果不及时治疗，可以迅速导致造血衰竭和死亡。尽管对白血病发生的分子机制、治疗指导的风险分层策略的实施和分子靶向治疗的应用有了越来越多的了解，但只有少数AML患者可以通过当前的化疗方案治愈，而其中大多数患者要么立即对诱导治疗无反应，要么在短暂完全缓解后随后复发。目前的观点认为，AML的治疗耐药和复发是由于化疗和/或其他分子靶向治疗无法消除所谓的白血病干细胞(LSC)。这些克隆原始细胞处于白血病发生的层级顶点，具有可以维持无限期克隆扩增的干细胞特性。申请人的目标是开发能够有效根除AML患者的LSC并提高治愈率，同时保留正常造血干细胞(HSC)的新型疗法。

异基因造血细胞移植(alloHCT)已成功应用于AML患者，并提供了功能正常(供体)免疫系统可以靶向清除LSC的概念证据。然而，由于内在毒性和移植相关死亡率，只能在AML患者亚组中进行alloHCT。最近，其他免疫治疗方法，如裸的、偶联的或与T细胞结合的双特异性单克隆抗体(BsAb)募集T或NK细胞或嵌合抗原受体(CAR)工程化T细胞，已被证明是癌症和白血病的一种可行和有效的治疗方法，其毒性相对较小。BsAb或CART细胞将免疫系统重定向至癌症或白血病细胞表面表达的特异性抗原靶点，从而增强免疫介导的对恶性肿瘤细胞的特异性杀伤作用。在此，申请者提出选择AML LSC上特异性富集的新型膜抗原(与正常HSC相比)，并使用T细胞参与的BsAb和/或CART细胞靶向它们。近期申请人重点关注白介素-1受体辅助蛋白(IL1RAP)。已在LSC中证实先天性免疫组分(如TLR、IRAK/TRAF6、IL8/CXCR2和IL1信号传导通路)过度活化。IL1RAP是IL1受体的辅助受体。申请人已经表明，与正常HSC相比，IL1RAP在慢性髓性白血病(CML)LSC上选择性上调，用IL-1受体拮抗剂(IL-1RA)阻断IL-1信号传导可以抑制白血病生长，同时保留正常造血功能。申请人发现，与正常CD34+细胞相比，IL1RAP在人AML CD34+原始细胞表面也过度表达，其他研究表明，IL1RAP高表达与AML的总生存期较差相关。总之，这些数据表明IL1RAP是靶向LSC的理想靶点。

申请人利用10名健康供体的人源噬菌体展示文库，开发了功能性IL1RAP单克隆和T细胞接合的BsAb和CAR-T细胞。初步数据表明，根据上述人源噬菌体展示文库中IL1RAP表位构建的重组体可以用于产生高亲和力的BsAb和CAR-T细胞。作为原理的证据，申请人发现，在存在抗IL1RAPXCD3 BsAb的体外T细胞依赖性细胞毒性(TDCC)试验中，对AML细胞系和原发性AML患者白血病原始细胞均有特异性杀伤作用，在体内植入MV4-11AML细胞并用BsAb和人T细胞处理的免疫缺陷小鼠中，疾病得到消除。

因此，申请人具有一种新型结构，其可以在AML LSC上产生靶向IL1RAP的免疫治疗剂。申请人将优化抗IL1RAPxCD3 BsAb靶向LSC治疗AML的疗效、剂量和方案，开发IL1RAPCAR-T细胞以根除人AML LSC并确定临床适用性，以及使用免疫检查点抑制剂增强基于IL1RAP的免疫治疗的抗白血病活性。对于这些实验，申请人将使用多个AML小鼠模型和在免疫缺陷小鼠中连续移植原代AML原始细胞来功能性证明LSC的消除。

背景急性髓性白血病(AML)是一种破坏性造血系统恶性肿瘤，可以导致原始和部分分化的克隆原始细胞进行性积累，如果不治疗，可以迅速导致造血衰竭和死亡[1]。AML原始细胞在个体患者中具有特定分子特征，包括细胞遗传学畸变、基因突变、编码和非编码基因RNA水平异常以及表观遗传变化。这种异质性具有临床相关性，可以用于选择最合适的风险调整治疗。然而，尽管对白血病发生的分子机制和实施风险分层治疗策略的了解不断增加，但仅少数AML患者获得治愈，而其中绝大多数患者或为化疗立即难治，或为短暂达到完全缓解后复发[2,3]。化疗和/或其他分子靶向治疗无法治愈AML很可以是由于所谓的白血病干细胞(LSC)的持续存在。这些克隆原始细胞处于白血病发生的层级顶点，具有可以维持无限期克隆扩增的干细胞特性。因此，申请人的目标是开发能够有效根除AML患者的LSC并提高治愈率，同时保留正常造血干细胞(HSC)的新型疗法。异基因造血细胞移植(alloHCT)已成功应用于AML患者，并提供了功能正常(供体)免疫系统可以靶向清除LSC的概念证据[4,5]。然而，由于内在毒性和移植相关死亡率，只能在AML患者亚组中进行alloHCT。最近，利用免疫系统(如裸的、偶联的或与T细胞结合的双特异性单克隆抗体(BsAb)、免疫检查点抑制剂或嵌合抗原受体(CAR)工程化T细胞)的疗法已被证明在晚期人类恶性肿瘤中是可行和有效的，包括实体瘤、淋巴瘤和急性白血病。在这些方法中，BsAb或CAR-T细胞都是基于免疫系统重定向癌细胞上特异性抗原靶点的原理，几乎没有毒性[6,7]。申请者提出选择AMLLSC上特异性富集的新型膜抗原(与正常HSC相比)，并使用T细胞参与的BsAb和/或CART细胞靶向它们。最近，鉴于固有免疫组分(如TLR、IRAK/TRAF6、IL8/CXCR2和IL1信号传导通路)的过度活化，据报告对LSC稳态至关重要，申请人重点关注IL1R共受体白介素-1受体辅助蛋白(IL1RAP)。申请人还发现，与正常CD34+细胞相比，IL1RAP在人AML CD34+原始细胞表面过度表达。Barreyo等人报告了相似的结果，表明AML和高风险骨髓增生异常综合征患者的HSC表面高水平表达IL1RAP蛋白，且与总生存期较差相关[9]。

方法

优化抗IL1RAPxCD3 BsAb靶向AML LSC的疗效、剂量和施用方案T细胞重定向肿瘤细胞杀伤是治疗血液恶性肿瘤的一种有前景的免疫学方法[7,10,11]。BsAb可以通过与肿瘤抗原和T细胞共受体CD3结合，使多克隆T细胞针对肿瘤细胞进行重定向。这一相互作用以一种主要组织相容性复合物依赖性方式，绕过免疫逃逸机制，诱导T效应细胞对靶癌细胞的活化和细胞毒性[7]。为创建抗IL1RAPxCD3 BsAb，申请人首先从健康供体来源的外周血B细胞构建了人源噬菌体展示文库(图1A-1C，表1)，并筛选出12个产生抗-IL1RAP单克隆抗体(Ab)的克隆。使用ELISA(图2A-2B，2D和表2，EC50为4.9ng/ml)，克隆ID5的Ab与重组人IL1RAP蛋白的结合能力最高，在抗体依赖性细胞毒性(ADCC)试验(图2C)中特异性裂解率最高，因此被选定用于开发抗IL1RAPxCD3BsAb(图3A-3C)和IL1RAP-CAR-T细胞(图7A-7B)。在不同细胞系的48小时长期杀伤试验中测定的EC50值为：HL60细胞为6.718ng/ml，MOLM13细胞为5.362ng/ml，OCI-AML3细胞为6.368ng/ml，

表1：50个随机挑选克隆的CDR3H和CDR3L氨基酸序列列表。CDR3序列显示，从这些随机挑取的50个克隆中未发现重复序列。

表2：使用重组人IL1RAP蛋白的IL1RAP抗体的生物扫描。在第四轮时观察到富集。也可参见相应的图1D。

	第一轮	第2轮	第3轮	第4轮
					输入	1x 10<sup>13</sup>	1x 10<sup>12</sup>	1x 10<sup>12</sup>	1x 10<sup>12</sup>
输出	1x 10<sup>8</sup>	3.5x 10<sup>5</sup>	8.1x 10<sup>5</sup>	4.6x 10<sup>7</sup>
					输出/输入比例	1x 10<sup>-5</sup>	3.5x 10<sup>-7</sup>	8.1x 10<sup>-7</sup>	4.6x 10<sup>-5</sup>

评价抗IL1RAPxCD3 BsAb诱导的T细胞杀伤效力与AML患者亚群原代原始细胞中IL1RAP表达水平之间的相关性申请人证明IL1RAP表达于AML细胞系(图4A-4B)和原代患者原始细胞(图5A-5B)的表面，申请人的抗-IL1RAPxCD3 BsAb可以诱导AML细胞系(图4C-4I)和AML患者样品(图5C-5D)的T细胞活化和细胞毒性，杀伤效率与靶细胞表面的IL1RAP水平相关。为了获得基于AML患者不同细胞遗传学和分子子集的疗效数据，申请者拟定使用抗IL1RAPxCD3 BsAb对代表三个ELN2017细胞遗传学/分子风险组(良好、中等和不良)的另外30例患者样品进行T细胞依赖性细胞毒性(TDCC)试验[3]。暴露于抗-IL1RAPxCD3 BsAb和T细胞前，将通过流式细胞术评价这30例AML患者样品中未分类的单核细胞(MNC)和分选的CD34⁺CD38⁺定向祖细胞和CD34⁺CD38^-原始祖细胞的IL1RAP表达进行评估。由于T细胞在培养过程中可以丢失特异性T细胞标志物，申请人将AML细胞与T细胞共培养前，先用CFSE标记，以区分两种细胞类型。根据前期数据，申请人将采用效应T细胞与靶细胞(E:T)的5:1比例进行长期杀伤试验。检测从330ng/ml开始连续稀释三倍的Ab，一式三份。申请人将记录活靶细胞(DAPI^-CSFE⁺)和T细胞计数，并计算裂解率：％特异性裂解＝(靶细胞^+T细胞-靶细胞^{+BsAb+T细胞})]/靶细胞^+T细胞)x100％。采用Graphpad prism计算30份AML样品的BsAb的EC₅₀。EC₅₀和IL1RAP表达水平相关。在AML患者的特定亚群中富集IL1RAP以及BsAb在这些亚群中的效力可以重新决定开发这种新型药物靶向特异性细胞遗传学/分子AML亚群的工作，并为使用IL1RAP作为BsAb应答的预测生物标志物提供见解。

优化抗IL1RAPxCD3 BsAb和T细胞靶向AML LSC的体内施用剂量和施用方案。申请人表明，抗IL1RAPxCD3 BsAb与人T细胞联合使用可以有效消除移植了表达萤火虫荧光素酶的人AML细胞系MV4-11(MV4-11^Luci)细胞(图6A-6B)的免疫缺陷(NSG)小鼠的白血病负荷。申请人拟定进行药代动力学(PK)和药效学(PD)研究，并通过PK-PD建模优化Ab剂量/时间表。NSG小鼠将接受3个对数剂量水平(1mg/kg、3mg/kg、10mg/kg)的BsAb治疗。将在1、2、4、8、24、48、72、96、120和148小时采集血液(n＝6/时间点x10个时间点x3次施用＝180只小鼠)。基于进行临床前小鼠PK研究的广泛经验，在评价的1个对数倍数剂量范围内，每个时间点5-7只小鼠可充分评估变异性并表征PK和PD。将使用TDCC试验测定BsAb血清浓度，并根据通过连续稀释纯化BsAb获得的标准曲线进行计算。根据BsAb血液半衰期确定最佳施用剂量/时间表。接下来，申请人将用1x10⁶个MV4-11^Luci细胞移植NSG小鼠，并在移植后第7天用优化的BsAb剂量/时间表和3个剂量(即1x10⁶、3x10⁶或5x10⁶)的T细胞处理小鼠。每周进行体内成像以监测肿瘤负荷。计算的每只小鼠的总生物发光强度水平将代表主要PD终点。将使用标准线性相关和线性回归初步评价PK和PD数据之间的关系，并将构建PK-PD模型，用于模拟血浆浓度-时间曲线和达到相应的PD终点，以指导未来的体内实验。成功进行模型的计算机模拟后，申请人将获得预测生物发光最大程度降低的一个或多个BsAb剂量/方案。申请人将根据以下标准选择体内验证方案：a.)无毒性，b.)达到最大的生物发光变化，c.)需要减少施用频率和d.)成本更低。通过将3例患者的AML原始细胞移植至NSG小鼠(16只小鼠/组x6组x2份样品＝192只小鼠)并采用申请人PK/PD模型预测的剂量评价抗IL1RAPxCD3 BsAb和人T细胞的体内抗白血病效力，进行验证。将对一组小鼠进行生存期随访，同时对另一组小鼠进行人道处死，并在二次移植实验中使用BM和脾脏MNC，以确定处理对残留LSC负荷的影响。

开发IL1RAP CAR-T细胞以根除人AMLLSC，并确定其临床适用性。利用工程化嵌合抗原受体(CAR)将T细胞重定向至特异性抗原靶标，是目前治疗恶性血液病的有效方法[12,13]。为了增强反应性，使用工程化受体结构对T细胞进行基因修饰，允许特异性靶向肿瘤细胞表面抗原，否则在未修饰的T细胞中无免疫原性(或更低)。申请人建议继续生产和检测IL1RAP CAR-T细胞。值得注意的是，肿瘤靶向T细胞在体内必须持续足够长的时间才能成功消除肿瘤；然而，成熟的CAR-T细胞迅速分化为短效效应细胞，这限制了其体内抗肿瘤活性[6,14,15]。因此，申请者将同时检测成熟T细胞和脐带血CD34+细胞生成的T细胞前体，以生成IL1RAP CAR-T细胞。

IL1RAP CAR-T细胞的开发申请人已经开发出编码IL1RAP CAR的慢病毒载体[17](图7A)。与对照细胞相比(图7B)，转导IL1RAP CAR慢病毒的Jurkat细胞显示细胞活化，从而证实了IL1RAP CAR构建的作用。申请人提出用50IU/ml的OKT3/CD28磁珠和白介素-2(IL-2)刺激健康供体外周血单核细胞(PBMC)，纯化T细胞，并使用所述的IL1RAP CAR慢病毒转导[17]。申请人还将产生如下CAR-T细胞前体。脐带血CD34⁺细胞将通过编码IL1RAP CAR的慢病毒载体转导，并用固定化Notch配体Delta-like4(DL4)培养，以促进T细胞分化。通过流式细胞术检测IL1RAP-scFv，确认T细胞中的IL1RAP CAR表达。

IL1RAP CAR-T细胞的疗效评价申请人在获得成熟和前体IL1RAP CAR-T细胞后，将对其活性进行检测。首先，申请人将IL1RAP CAR-T细胞与AML细胞系(HL60、MV4-11、THP-1、KG-1a)和Raji细胞(阴性对照)共同孵育。6小时后，将通过流式细胞术监测CD107a、IFN-γ和TNF-α水平，作为T细胞活化的指标。将通过4小时⁵¹Cr释放试验测定靶向AML细胞的杀伤效率。接下来，IL1RAP CAR-T细胞将与原代人AML细胞一起孵育，评估T细胞活化和AML细胞的杀伤。为了达到体内杀灭效果，将MV4-11^Luci细胞(1x10⁶/只小鼠)移植到NSG小鼠体内，7天后，小鼠将接受单次、两次(第1天和第14天)或三次(第1天、第14天、第28天)注射3种剂量(即1x10⁶、3X10⁶或5X10⁶)的IL1RAP CAR-T细胞。每周进行体内成像以监测肿瘤负荷，直至所有对照小鼠死亡。如上所述，将根据IL1RAP CAR-T细胞的血药浓度随时间的变化和生物发光作为白血病负荷的变化进行BsAb PK-PD建模的实验，以确定IL1RAP CAR-T细胞的最佳施用剂量和频率。申请者随后将使用AML患者样品进行类似实验，并进行体内效力、T细胞持久性、记忆T细胞形成和挑战性研究。如上文BsAb研究所述，还将进行连续移植实验，以确保消除LSC。

使用免疫检查点抑制剂，增强了IL1RAP基免疫治疗(即抗IL1RAPxCD3 BsAb或IL1RAP CAR-T细胞)的抗白血病活性尽管在临床前模型和患者中获得了令人鼓舞的结果，但免疫抑制通路的激活可对抗过继性T细胞治疗[18]。程序性死亡受体-1(PD-1)通路已成为癌症治疗的有前景的靶点。PD-1与配体PD-L1(在许多肿瘤类型中上调的主要免疫抑制介质)结合，与巨噬细胞和树突状细胞上表达的PD-L2结合[19][20,21]。近期使用人源IgG4PD-1单克隆抗体(mAb；BMS-936558)表明，Ab抑制PD1免疫检查点并恢复肿瘤细胞免疫原性，在晚期恶性肿瘤患者中产生持久的临床反应[19,21-24]。在此，假设PD-1抑制剂与抗IL1RAPxCD3 BsAb或IL1RAP CAR-T细胞联合使用时可以增强过继性T细胞的功能。

确定PD-1阻断在AML细胞系和AML患者样品中的抗白血病活性据报道，T细胞刺激可以增强AML细胞系上的PD-L1(B7-H1)表达，IFN-γ治疗可以显著增强AML患者样品中的PD-L1表达[25]。IFN-γ或TLR配体诱导的PD-L1表达增强，或作为对白血病细胞的免疫应答或由感染微生物释放，可以保护白血病细胞对抗T细胞。为确定CAR或BsAb诱导的T细胞刺激是否会增加PD-1表达，申请者将采用两种方法评价阻断PD-1通路对增强BsAb+T细胞或IL1RAP CAR-T细胞治疗效力的影响。T细胞将与MV4-11AML细胞(E:T比为1:1、1:5和1:10)共培养，使用和不使用IFN-γ处理上调PD-1配体，使用和不使用PD-1阻断抗体(派姆单抗或纳武单抗)。将根据裂解率确定PD-1阻断对T细胞溶解活性的影响。效应细胞因子分泌(IL-2、IFN-γ和TNF-α)将通过ELISA试验进行测定。还将在植入MV4-11^Luci并用CAR-T(有或无PD-1阻断抗体)治疗的NSG小鼠中评估PD-1阻断。将通过体内成像确定白血病负荷，并通过流式细胞术测量血液CAR-T细胞。

确定BsAb+T细胞或IL1RAP CAR-T细胞与PD-1抑制剂联用时的抗白血病活性如果PD-1/PD-L1阻断增强了AML细胞杀伤作用，申请人将在体内评估BsAb+T细胞或IL1RAP CAR-T细胞联合PD-1阻断的效果。申请人将采用抗IL1RAPxCD3 BsAb和人T细胞或IL1RAP CAR-T细胞联合派姆单抗或纳武单抗或同型对照抗体处理移植有MV4-11^Luci或人AML患者样品的NSG小鼠(基本方案如上所述)。将测定PB、BM和脾脏中的肿瘤负荷和生存期，并将进行第二次移植以监测LSC根除情况。

统计考虑基于既往经验，为达到至少90％的把握度来检测存活率差异，在α＝0.05水平下使用单侧检验每组需要11只小鼠。通过对数秩检验评估Kaplan-Meier生存曲线之间的差异。将在其他体外和PD研究中使用描述性和图形统计描述BsAb+T细胞和IL1RAP CAR-T细胞的作用；将采用t检验和/或Mann-WhitneyU检验进行正式比较。类似的方法将用于分析功能分析数据。

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非正式序列表

SEQ ID NO:1(CDR L1):QSLLHSNGYKY

SEQ ID NO:2(CDR L2):LGS

SEQ ID NO:3(CDR L3):MQALQTPLT

SEQ ID NO:4(CDR H1):GYSFSSHW

SEQ ID NO:5(CDR H2):IYPGDSDT

SEQ ID NO:6(CDR H3):ARGELPGEAYYFDN

SEQ ID NO:7(轻链可变区):

EIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSNGYKYLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQALQTPLTFGGGTKVEIK

SEQ ID NO:8(重链可变区):

QVQLVQSGAEVKKPGESLKISCKGSGYSFSSHWIGWVRQMPGKGLEWMGIIYPGDSDTRYSPSFQGQVTISADKSISTAYLQWSSLKASDTAMYYCARGELPGEAYYFDNWGQGTLVTVSS

SEQ ID NO:9(FR L1):EIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSS

SEQ ID NO:10(FR L2):LDWYLQKPGQSPQLLIY

SEQ ID NO:11(FR L3):NRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYC

SEQ ID NO:12(FR L4):FGGGTKVEIK

SEQ ID NO:13(FR H1):QVQLVQSGAEVKKPGESLKISCKGS

SEQ ID NO:14(FR H2):IGWVRQMPGKGLEWMGI

SEQ ID NO:15(FR H3):RYSPSFQGQVTISADKSISTAYLQWSSLKASDTAMYYC

SEQ ID NO:16(FR H4):WGQGTLVTVSS

SEQ ID NO:17(1D5-scFv的氨基酸序列):

QVQLVQSGAEVKKPGESLKISCKGSGYSFSSHWIGWVRQMPGKGLEWMGIIYPGDSDTRYSPSFQGQVTISADKSISTAYLQWSSLKASDTAMYYCARGELPGEAYYFDNWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSEIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSNGYKYLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQALQTPLTFGGGTKVEIK

SEQ ID NO:18(1D5 scFv的核苷酸序列):

CAGGTGCAGCTGGTGCAGAGCGGCGCCGAAGTGAAGAAGCCCGGCGAGAGCCTGAAGATCAGCTGCAAGGGCAGCGGCTACAGCTTCAGCAGCCACTGGATCGGCTGGGTCAGGCAGATGCCCGGCAAAGGCCTGGAGTGGATGGGCATCATCTATCCCGGCGACAGCGACACCAGGTACTCCCCCAGCTTCCAGGGCCAGGTGACCATCTCCGCCGACAAGAGCATTAGCACCGCCTACCTGCAGTGGAGCAGCCTCAAAGCCAGCGACACCGCCATGTACTACTGCGCCAGAGGCGAACTGCCCGGAGAGGCCTACTACTTCGATAACTGGGGCCAGGGCACCCTGGTGACAGTGAGCAGCGGAGGAGGCGGCAGCGGCGGCGGCGGATCCGGAGGAGGCGGCTCCGAGATCGTGATGACCCAGAGCCCTCTGAGCCTGCCCGTGACACCTGGCGAACCTGCCAGCATCAGCTGCAGAAGCAGCCAGAGCCTGCTCCACTCCAACGGCTACAAATACCTGGACTGGTATCTCCAGAAGCCTGGCCAGAGCCCCCAGCTGCTCATCTACCTGGGCAGCAATAGGGCCAGCGGAGTGCCCGACAGGTTTAGCGGCTCCGGAAGCGGCACCGATTTCACCCTGAAAATCAGCAGAGTGGAGGCCGAGGACGTGGGCGTGTACTACTGCATGCAGGCTCTGCAGACACCCCTGACCTTCGGCGGAGGCACCAAGGTGGAGATCAAG

SEQ ID NO:19(接头区):GGGGSGGGGSGGGGS

SEQ ID NO:20(1D5-scFv-Hole-FC-LA序列):

QVQLVQSGAEVKKPGESLKISCKGSGYSFSSHWIGWVRQMPGKGLEWMGIIYPGDSDTRYSPSFQGQVTISADKSISTAYLQWSSLKASDTAMYYCARGELPGEAYYFDNWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSEIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSNGYKYLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQALQTPLTFGGGTKVEIKCAPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK

SEQ ID NO:21(Anti-CD3-scFv-Knob-FC-LA序列):

EVQLVESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFTFNKYAMNWVRQAPGKGLEWVARIRSKYNNYATYYADSVKDRFTISRDDSKNTAYLQMNNLKTEDTAVYYCVRHGNFGNSYISYWAYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSQTVVTQEPSLTVSPGGTVTLTCGSSTGAVTSGNYPNWVQQKPGQAPRGLIGGTKFLAPGTPARFSGSLLGGKAALTLSGVQPEDEAEYYCVLWYSNRWVFGGGTKLTVLCAPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK

SEQ ID NO:90(1D5-scFv-CAR氨基酸序列)

MLLLVTSLLLCELPHPAFLLIPQVQLVQSGAEVKKPGESLKISCKGSGYSFSSHWIGWVRQMPGKGLEWMGIIYPGDSDTRYSPSFQGQVTISADKSISTAYLQWSSLKASDTAMYYCARGELPGEAYYFDNWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSEIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSNGYKYLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQALQTPLTFGGGTKVEIKVAAAAFVPVFLPAKPTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCNHRNRFSVVKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR

P实施方案

P实施方案1.一种抗白介素-1受体辅助蛋白(IL1RAP)抗体，包括轻链可变结构域和重链可变结构域，

其中所述轻链可变结构域包括：

如SEQ ID NO:1所述的CDR L1、如SEQ ID NO:2所述的CDR L2和如SEQ ID NO:3所述的CDR L3；和

其中所述重链可变结构域包括：

如SEQ ID NO:4所述的CDR H1、如SEQ ID NO:5所述的CDR H2和如SEQ ID NO:6所述的CDR H3。

P实施方案2.P实施方案1的抗体，其中所述轻链可变结构域包括SEQ ID NO:7的序列。

P实施方案3.如P实施方案1或2的抗体，其中所述重链可变结构域包括SEQ ID NO:8的序列。

P实施方案4.如P实施方案1-3之一的抗体，其中所述轻链可变结构域包括如SEQID NO:9所述的FR L1，如SEQ ID NO:10所述的FR L2，如SEQ ID NO:11所述的FR L3和如SEQID NO:12所述的FR L4。

P实施方案5.如P实施方案1-4之一的抗体，其中所述重链可变结构域包括如SEQID NO:13所述的FR H1、如SEQ ID NO:14所述的FR H2、如SEQ ID NO:15所述的FR H3和如SEQ ID NO:16所述的FR H4。

P实施方案6.如P实施方案1-5之一的抗体，其中所述抗体为IgG。

P实施方案7.如P实施方案1-6之一的抗体，其中所述抗体为IgG1。

P实施方案8.如P实施方案1-5之一的抗体，其中所述抗体为Fab'片段。

P实施方案9.如P实施方案1-5之一的抗体，其中所述抗体为单链抗体(scFv)。

P实施方案10.如P实施方案1-5之一的抗体，其中所述轻链可变结构域和所述重链可变结构域形成scFv的一部分。

P实施方案11.如P实施方案9或10的抗体，其中所述scFv包括SEQ ID NO:17的序列。

P实施方案12.如P实施方案1-11之一的抗体，其中所述抗体能够以约21nM的平衡解离常数(K_D)结合IL1RAP。

P实施方案13.如P实施方案1-11之一的抗体，其中所述抗体的EC₅₀为约4.9ng/ml。

P实施方案14.如P实施方案1-13之一的抗体，其中所述抗体与IL1RAP结合。

P实施方案15.如P实施方案14的抗体，其中所述IL1RAP为人IL1RAP。

P实施方案16.如P实施方案14或15的抗体，其中所述IL1RAP形成细胞的一部分。

P实施方案17.如P实施方案16的抗体，其中所述IL1RAP表达于所述细胞表面。

P实施方案18.如P实施方案16或17的抗体，其中所述细胞为癌细胞。

P实施方案19.如P实施方案18的抗体，其中所述癌细胞为白血病干细胞(LSC)。

P实施方案20.如P实施方案18的抗体，其中所述癌细胞为急性髓性白血病(AML)细胞。

P实施方案21.编码如P实施方案1-21之一的抗体的分离核酸。

P实施方案22.一种药物组合物，其包括治疗有效量的P实施方案1-21之一的抗体和药学上可接受的赋形剂。

P实施方案23.一种在有其需要的受试者中治疗癌症的方法，所述方法包括给予受试者治疗有效量的P实施方案1-21之一的抗体，从而治疗受试者的癌症。

P实施方案24.一种重组蛋白，其包括：

(i)抗体区，其包括：

(a)轻链可变结构域，其包括如SEQ ID NO:1中所述的CDR L1，如SEQ ID NO:2所述的CDR L2和如SEQ ID NO:3所述的CDR L3；和

(b)重链可变区结构域，其包括如SEQ ID NO:4所述的CDR H1，如SEQ ID NO:5所述的CDR H2和如SEQ ID NO:6所述的CDR H3；和

(ii)跨膜结构域。

P实施方案25.如P实施方案24的重组蛋白，其中所述轻链可变结构域包括SEQ IDNO:7的序列。

P实施方案26.如P实施方案24或25的重组蛋白，其中所述重链可变结构域包括SEQID NO:8的序列。

P实施方案27.如P实施方案24-26之一的重组蛋白，其中所述轻链可变结构域包括如SEQ ID NO:9所述的FR L1，如SEQ ID NO:10所述的FR L2，如SEQ ID NO:11所述的FR L3和如SEQ ID NO:12所述的FR L4。

P实施方案28.如P实施方案24-27之一的重组蛋白，其中所述重链可变结构域包括如SEQ ID NO:13所述的FR H1、如SEQ ID NO:14所述的FR H2、如SEQ ID NO:15所述的FR H3和如SEQ ID NO:16所述的FR H4。

P实施方案29.如P实施方案24-28之一的重组蛋白，其中所述抗体区包括单链可变片段(scFv)

P实施方案30.如P实施方案29的重组蛋白，其中所述scFv包括SEQ ID NO:17的序列。

P实施方案31.如P实施方案24-30之一的重组蛋白，其中所述重组蛋白能够以约为21nM的平衡解离常数(K_D)结合IL1RAP。

P实施方案32.如P实施方案24-31之一的重组蛋白，其中所述重组蛋白的EC₅₀为约4.9ng/ml。

P实施方案33.如P实施方案24-32之一的重组蛋白，其中所述重组蛋白与IL1RAP结合。

P实施方案34.如P实施方案33的重组蛋白，其中所述IL1RAP为人IL1RAP。

P实施方案35.如P实施方案33或34的重组蛋白，其中所述IL1RAP形成细胞的一部分。

P实施方案36.如P实施方案33-35之一的重组蛋白，其中所述IL1RAP表达于所述细胞表面。

P实施方案37.如P实施方案36的重组蛋白，其中所述细胞为癌细胞。

P实施方案38.如P实施方案37的重组蛋白，其中所述癌细胞为白血病干细胞(LSC)。

P实施方案39.如P实施方案37的重组蛋白，其中所述癌细胞为急性髓性白血病(AML)细胞。

P实施方案40.如P实施方案24-39之一的重组蛋白，其中所述抗体区包括Fc结构域。

P实施方案41.如P实施方案40的重组蛋白，其中所述Fc结构域为IgG4 Fc结构域。

P实施方案42.如P实施方案24-41之一的重组蛋白，还包括细胞内共刺激信号传导结构域。

P实施方案43.如P实施方案42的重组蛋白，其中所述细胞内共刺激信号传导结构域为CD28细胞内共刺激信号传导结构域、4-1BB细胞内共刺激信号传导结构域、ICOS细胞内共刺激信号传导结构域或OX-40细胞内共刺激信号传导结构域。

P实施方案44.如P实施方案24-43之一的重组蛋白，还包括细胞内T细胞信号传导结构域。

P实施方案45.如P实施方案44的重组蛋白，其中所述细胞内T细胞信号传导结构域为CD3ζ细胞内T细胞信号传导结构域。

P实施方案46.如P实施方案24-45之一的重组蛋白，还包括自裂解肽基序列。

P实施方案47.如P实施方案46的重组蛋白，其中所述自裂解肽基接头为T2A序列或2A序列。

P实施方案48.如P实施方案24-47之一的重组蛋白，还包括可检测结构域。

P实施方案49.如P实施方案48的重组蛋白，其中所述可检测结构域为截短EGFR(EGFRt)结构域。

P实施方案50.如P实施方案24-49之一的重组蛋白，其中所述重组蛋白形成细胞的一部分。

P实施方案51.如P实施方案24-49之一的重组蛋白，其中所述重组蛋白形成T细胞的一部分。

P实施方案52.一种编码P实施方案24-51之一的重组蛋白的分离核酸。

P实施方案53.一种药物组合物，其包括治疗有效量的P实施方案24-51之一的重组蛋白和药学上可接受的赋形剂。

P实施方案54.一种在有需要的受试者中治疗癌症的方法，所述方法包括给受试者施用治疗有效量的P实施方案24-51之一的重组蛋白，从而治疗所述受试者的癌症。

P实施方案55.一种重组蛋白，其包括：

(i)能够结合效应细胞配体的第一抗体区；和

(ii)第二抗体区，其包括：

(a)轻链可变结构域，其包括如SEQ ID NO:1中所述的CDR L1，如SEQ ID NO:2所述的CDR L2和如SEQ ID NO:3所述的CDR L3；和

(b)重链可变区结构域，其包括如SEQ ID NO:4所述的CDR H1，如SEQ ID NO:5所述的CDR H2和如SEQ ID NO:6所述的CDR H3。

P实施方案56.如P实施方案55的重组蛋白，其中所述效应细胞为CD3蛋白。

P实施方案57.如P实施方案55-56之一的重组蛋白，其中所述轻链可变结构域包括SEQ ID NO:7的序列。

P实施方案58.如P实施方案55-57之一的重组蛋白，其中所述重链可变结构域包括SEQ ID NO:8的序列。

P实施方案59.如P实施方案55-58之一的重组蛋白，其中所述轻链可变结构域包括如SEQ ID NO:9所述的FR L1，如SEQ ID NO:10所述的FR L2，如SEQ ID NO:11所述的FR L3和如SEQ ID NO:12所述的FR L4。

P实施方案60.如P实施方案55-59之一的重组蛋白，其中所述重链可变结构域包括如SEQ ID NO:13所述的FR H1、如SEQ ID NO:14所述的FR H2、如SEQ ID NO:15所述的FR H3和如SEQ ID NO:16所述的FR H4。

P实施方案61.如P实施方案55-60之一的重组蛋白，其中所述第一抗体区为第一Fab'片段或所述第二抗体区为第二Fab'片段。

P实施方案62.如P实施方案55-60之一的重组蛋白，其中所述第一抗体区为单链可变片段(scFv)，或所述第二抗体区为第二单链可变片段(scFv)。

P实施方案63.如P实施方案55-56之一的重组蛋白，其中所述第二scFv包括SEQ IDNO:17的序列。

P实施方案64.如P实施方案55-63之一的重组蛋白，其中所述第二抗体区能够以约为21nM的平衡解离常数(K_D)结合IL1RAP。

P实施方案65.如P实施方案55-64之一的重组蛋白，其中所述第二抗体区的EC₅₀为约4.9ng/ml。

P实施方案66.如P实施方案55-65之一的重组蛋白，其中所述第二抗体区与IL1RAP结合。

P实施方案67.如P实施方案66的重组蛋白，其中所述IL1RAP为人IL1RAP。

P实施方案68.如P实施方案66-67之一的重组蛋白，其中所述IL1RAP形成细胞的一部分。

P实施方案69.如P实施方案66-68之一重组蛋白，其中所述IL1RAP表达于所述细胞表面。

P实施方案70.如P实施方案69的重组蛋白，其中所述细胞为癌细胞。

P实施方案71.如P实施方案70的重组蛋白，其中所述癌细胞为白血病干细胞(LSC)。

P实施方案72.如P实施方案70的重组蛋白，其中所述癌细胞为急性髓性白血病(AML)细胞。

P实施方案73.一种药物组合物，其包括治疗有效量的P实施方案55-72之一的重组蛋白和药学上可接受的赋形剂。

P实施方案74.一种在有需要的受试者中治疗癌症的方法，所述方法包括给受试者施用治疗有效量的P实施方案55-72之一的重组蛋白，从而治疗所述受试者的癌症。

P实施方案75.如P实施方案23、54或74的方法，其中所述癌症为白血病。

P实施方案76.如P实施方案23、54或74的方法，其中所述癌症为急性髓性白血病。

P实施方案77.如P实施方案23、54或74的方法，其中所述方法还包括给予所述受试者第二种治疗剂。

P实施方案78.一种抑制细胞增殖的方法，所述方法包括：

(i)使P实施方案1-21之一的抗IL1RAP抗体，P实施方案24-51之一的重组蛋白，或P实施方案55-72之一的重组蛋白与细胞接触，从而形成经接触的细胞；和

(ii)允许所述P实施方案1-21之一的抗IL1RAP抗体，所述P实施方案24-51之一的重组蛋白，或所述P实施方案55-72之一的重组蛋白与所述经接触的细胞上的IL1RAP结合，从而抑制所述细胞增殖。

P实施方案79.如P实施方案78的方法，其中所述细胞为癌细胞。

P实施方案80.如P实施方案78或79的方法，其中所述癌细胞为白血病干细胞(LSC)。

序列表

<110> 希望之城

W·孟

G·马尔库奇

<120> 抗-IL1RAP 抗体

<130> 048440-667001WO

<150> 62/539,895

<151> 2017-08-01

<160> 90

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成多肽

<400> 1

Gln Ser Leu Leu His Ser Asn Gly Tyr Lys Tyr

1 5 10

<210> 2

<211> 3

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成多肽

<400> 2

Leu Gly Ser

1

<210> 3

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成多肽

<400> 3

Met Gln Ala Leu Gln Thr Pro Leu Thr

1 5

<210> 4

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成多肽

<400> 4

Gly Tyr Ser Phe Ser Ser His Trp

1 5

<210> 5

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成多肽

<400> 5

Ile Tyr Pro Gly Asp Ser Asp Thr

1 5

<210> 6

<211> 14

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成多肽

<400> 6

Ala Arg Gly Glu Leu Pro Gly Glu Ala Tyr Tyr Phe Asp Asn

1 5 10

<210> 7

<211> 112

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成多肽

<400> 7

Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly

1 5 10 15

Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Ser

20 25 30

Asn Gly Tyr Lys Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser

35 40 45

Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile

65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln Ala

85 90 95

Leu Gln Thr Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105 110

<210> 8

<211> 121

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成多肽

<400> 8

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu

1 5 10 15

Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Ser Phe Ser Ser His

20 25 30

Trp Ile Gly Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Ile Ile Tyr Pro Gly Asp Ser Asp Thr Arg Tyr Ser Pro Ser Phe

50 55 60

Gln Gly Gln Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Gly Glu Leu Pro Gly Glu Ala Tyr Tyr Phe Asp Asn Trp Gly

100 105 110

Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 9

<211> 26

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成多肽

<400> 9

Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly

1 5 10 15

Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser

20 25

<210> 10

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成多肽

<400> 10

Leu Asp Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Gln Leu Leu Ile

1 5 10 15

Tyr

<210> 11

<211> 36

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成多肽

<400> 11

Asn Arg Ala Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly

1 5 10 15

Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly

20 25 30

Val Tyr Tyr Cys

35

<210> 12

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成多肽

<400> 12

Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

1 5 10

<210> 13

<211> 25

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成多肽

<400> 13

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu

1 5 10 15

Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser

20 25

<210> 14

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成多肽

<400> 14

Ile Gly Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met Gly

1 5 10 15

Ile

<210> 15

<211> 38

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成多肽

<400> 15

Arg Tyr Ser Pro Ser Phe Gln Gly Gln Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys

1 5 10 15

Ser Ile Ser Thr Ala Tyr Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp

20 25 30

Thr Ala Met Tyr Tyr Cys

35

<210> 16

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成多肽

<400> 16

Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

1 5 10

<210> 17

<211> 248

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成多肽

<400> 17

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu

1 5 10 15

Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Ser Phe Ser Ser His

20 25 30

Trp Ile Gly Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Ile Ile Tyr Pro Gly Asp Ser Asp Thr Arg Tyr Ser Pro Ser Phe

50 55 60

Gln Gly Gln Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Gly Glu Leu Pro Gly Glu Ala Tyr Tyr Phe Asp Asn Trp Gly

100 105 110

Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly

115 120 125

Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro

130 135 140

Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg

145 150 155 160

Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Ser Asn Gly Tyr Lys Tyr Leu Asp Trp

165 170 175

Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Gly

180 185 190

Ser Asn Arg Ala Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser

195 200 205

Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val

210 215 220

Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln Ala Leu Gln Thr Pro Leu Thr Phe Gly

225 230 235 240

Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

245

<210> 18

<211> 744

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成多核苷酸

<400> 18

caggtgcagc tggtgcagag cggcgccgaa gtgaagaagc ccggcgagag cctgaagatc 60

agctgcaagg gcagcggcta cagcttcagc agccactgga tcggctgggt caggcagatg 120

cccggcaaag gcctggagtg gatgggcatc atctatcccg gcgacagcga caccaggtac 180

tcccccagct tccagggcca ggtgaccatc tccgccgaca agagcattag caccgcctac 240

ctgcagtgga gcagcctcaa agccagcgac accgccatgt actactgcgc cagaggcgaa 300

ctgcccggag aggcctacta cttcgataac tggggccagg gcaccctggt gacagtgagc 360

agcggaggag gcggcagcgg cggcggcgga tccggaggag gcggctccga gatcgtgatg 420

acccagagcc ctctgagcct gcccgtgaca cctggcgaac ctgccagcat cagctgcaga 480

agcagccaga gcctgctcca ctccaacggc tacaaatacc tggactggta tctccagaag 540

cctggccaga gcccccagct gctcatctac ctgggcagca atagggccag cggagtgccc 600

gacaggttta gcggctccgg aagcggcacc gatttcaccc tgaaaatcag cagagtggag 660

gccgaggacg tgggcgtgta ctactgcatg caggctctgc agacacccct gaccttcggc 720

ggaggcacca aggtggagat caag 744

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<223> 合成多肽

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<210> 20

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<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成多肽

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Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Lys Tyr

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<212> PRT

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<220>

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<213> 人工序列

<220>

<223> 合成多肽

<400> 87

Gln His Tyr Gly Ser Ser Leu Trp Pro

1 5

<210> 88

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成多肽

<400> 88

Met Gln Ala Leu Gln Thr Pro Val Thr

1 5

<210> 89

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成多肽

<400> 89

Gln Arg Tyr Asn Asn Trp Pro Pro Gly Ile Thr

1 5 10

<210> 90

<211> 517

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成多肽

<400> 90

Met Leu Leu Leu Val Thr Ser Leu Leu Leu Cys Glu Leu Pro His Pro

1 5 10 15

Ala Phe Leu Leu Ile Pro Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu

20 25 30

Val Lys Lys Pro Gly Glu Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly

35 40 45

Tyr Ser Phe Ser Ser His Trp Ile Gly Trp Val Arg Gln Met Pro Gly

50 55 60

Lys Gly Leu Glu Trp Met Gly Ile Ile Tyr Pro Gly Asp Ser Asp Thr

65 70 75 80

Arg Tyr Ser Pro Ser Phe Gln Gly Gln Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys

85 90 95

Ser Ile Ser Thr Ala Tyr Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp

100 105 110

Thr Ala Met Tyr Tyr Cys Ala Arg Gly Glu Leu Pro Gly Glu Ala Tyr

115 120 125

Tyr Phe Asp Asn Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly

130 135 140

Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Ile

145 150 155 160

Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly Glu Pro

165 170 175

Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Ser Asn Gly

180 185 190

Tyr Lys Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Gln

195 200 205

Leu Leu Ile Tyr Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser Gly Val Pro Asp Arg

210 215 220

Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile Ser Arg

225 230 235 240

Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln Ala Leu Gln

245 250 255

Thr Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Val Ala

260 265 270

Ala Ala Ala Phe Val Pro Val Phe Leu Pro Ala Lys Pro Thr Thr Thr

275 280 285

Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro

290 295 300

Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val

305 310 315 320

His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro

325 330 335

Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu

340 345 350

Tyr Cys Asn His Arg Asn Arg Phe Ser Val Val Lys Arg Gly Arg Lys

355 360 365

Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr

370 375 380

Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu

385 390 395 400

Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro

405 410 415

Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly

420 425 430

Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro

435 440 445

Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr

450 455 460

Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly

465 470 475 480

Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln

485 490 495

Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln

500 505 510

Ala Leu Pro Pro Arg

515

Claims (80)

1.一种抗白介素-1受体辅助蛋白(IL1RAP)抗体，其包括轻链可变结构域和重链可变结构域，

其中所述轻链可变结构域包括：

如SEQ ID NO:1所述的CDR L1、如SEQ ID NO:2所述的CDR L2和如SEQ ID NO:3所述的CDR L3；和

其中所述重链可变结构域包括：

如SEQ ID NO:4所述的CDR H1、如SEQ ID NO:5所述的CDR H2和如SEQ ID NO:6所述的CDR H3。

2.如权利要求1所述的抗体，其中所述轻链可变结构域包括SEQ ID NO:7的序列。

3.如权利要求1所述的抗体，其中所述重链可变结构域包括SEQ ID NO:8的序列。

4.如权利要求1所述的抗体，其中所述轻链可变结构域包括如SEQ ID NO:9所述的FRL1，如SEQ ID NO:10所述的FR L2，如SEQ ID NO:11所述的FR L3和如SEQ ID NO:12所述的FR L4。

5.如权利要求1所述的抗体，其中所述重链可变结构域包括如SEQ ID NO:13所述的FRH1、如SEQ ID NO:14所述的FR H2、如SEQ ID NO:15所述的FR H3和如SEQ ID NO:16所述的FR H4。

6.如权利要求1所述的抗体，其中所述抗体为IgG。

7.如权利要求6所述的抗体，其中所述抗体为IgG1。

8.如权利要求1所述的抗体，其中所述抗体为Fab'片段。

9.如权利要求1所述的抗体，其中所述抗体为单链抗体(scFv)。

10.如权利要求1所述的抗体，其中所述轻链可变结构域和所述重链可变结构域形成scFv的一部分。

11.如权利要求9或10所述的抗体，其中所述scFv包括SEQ ID NO:17的序列。

12.如权利要求1所述的抗体，其中所述抗体能够以约21nM的平衡解离常数(K_D)结合IL1RAP。

13.如权利要求1所述的抗体，其中所述抗体的EC₅₀约为4.9ng/ml。

14.如权利要求1所述的抗体，其中所述抗体与IL1RAP结合。

15.如权利要求14所述的抗体，其中所述IL1RAP为人IL1RAP。

16.如权利要求14所述的抗体，其中所述IL1RAP形成细胞的一部分。

17.如权利要求16所述的抗体，其中所述IL1RAP表达于所述细胞的表面。

18.如权利要求16所述的抗体，其中所述细胞为癌细胞。

19.如权利要求18所述的抗体，其中所述癌细胞是白血病干细胞(LSC)。

20.如权利要求18所述的抗体，其中所述癌细胞为急性髓性白血病(AML)细胞。

21.一种编码如权利要求1所述抗体的分离核酸。

22.一种药物组合物，所述药物组合物包括治疗有效量的如权利要求1所述的抗体和药学上可接受的赋形剂。

23.一种在有需要的受试者中治疗癌症的方法，所述方法包括给受试者施用治疗有效量的如权利要求1所述的抗体，从而治疗所述受试者的癌症。

24.一种重组蛋白，所述重组蛋白包括：

(i)抗体区，所述抗体区包括：

(a)轻链可变结构域，所述轻链可变结构域包括如SEQ ID NO:1所述的CDR L1、如SEQID NO:2所述的CDR L2和如SEQ ID NO:3所述的CDR L3；和

(b)重链可变区结构域，所述重链可变区结构域包括如SEQ ID NO:4所述的CDR H1、如SEQ ID NO:5所述的CDR H2和如SEQ ID NO:6所述的CDR H3；和

(ii)跨膜结构域。

25.如权利要求24所述的重组蛋白，其中所述轻链可变结构域包括SEQ ID NO:7的序列。

26.如权利要求24所述的重组蛋白，其中所述重链可变结构域包括SEQ ID NO:8的序列。

27.如权利要求24所述的重组蛋白，其中所述轻链可变结构域包括如SEQ ID NO:9所述的FR L1，如SEQ ID NO:10所述的FR L2，如SEQ ID NO:11所述的FR L3和如SEQ ID NO:12所述的FR L4。

28.如权利要求24所述的重组蛋白，其中所述重链可变结构域包括如SEQ ID NO:13所述的FR H1、如SEQ ID NO:14所述的FR H2、如SEQ ID NO:15所述的FR H3和如SEQ ID NO:16所述的FR H4。

29.如权利要求24所述的重组蛋白，其中所述抗体区包括单链可变片段(scFv)。

30.如权利要求29所述的重组蛋白，其中所述scFv包括SEQ ID NO:17的序列。

31.如权利要求24所述的重组蛋白，其中所述重组蛋白能够以约为21nM的平衡解离常数(K_D)结合IL1RAP。

32.如权利要求24所述的重组蛋白，其中所述重组蛋白的EC₅₀为约4.9ng/ml。

33.如权利要求24所述的重组蛋白，其中所述重组蛋白与IL1RAP结合。

34.如权利要求33所述的重组蛋白，其中所述IL1RAP为人IL1RAP。

35.如权利要求33所述的重组蛋白，其中所述IL1RAP形成细胞的一部分。

36.如权利要求33所述的重组蛋白，其中所述IL1RAP表达于所述细胞的表面。

37.如权利要求36所述的重组蛋白，其中所述细胞为癌细胞。

38.如权利要求37所述的重组蛋白，其中所述癌细胞是白血病干细胞(LSC)。

39.如权利要求37所述的重组蛋白，其中所述癌细胞为急性髓性白血病(AML)细胞。

40.如权利要求24所述的重组蛋白，其中所述抗体区包括Fc结构域。

41.如权利要求40所述的重组蛋白，其中所述Fc结构域为IgG4 Fc结构域。

42.如权利要求24所述的重组蛋白，所述重组蛋白还包括细胞内共刺激信号传导结构域。

43.如权利要求42所述的重组蛋白，其中所述细胞内共刺激信号传导结构域为CD28细胞内共刺激信号传导结构域、4-1BB细胞内共刺激信号传导结构域、ICOS细胞内共刺激信号传导结构域或OX-40细胞内共刺激信号传导结构域。

44.如权利要求24所述的重组蛋白，所述重组蛋白还包括细胞内T细胞信号传导结构域。

45.如权利要求44所述的重组蛋白，其中所述细胞内T细胞信号传导结构域为CD3ζ细胞内T细胞信号传导结构域。

46.如权利要求24所述的重组蛋白，所述重组蛋白还包括自裂解肽基序列。

47.如权利要求46所述的重组蛋白，其中所述自裂解肽基接头为T2A序列或2A序列。

48.如权利要求24所述的重组蛋白，所述重组蛋白还包括可检测结构域。

49.如权利要求48所述的重组蛋白，其中所述可检测结构域为截短的EGFR(EGFRt)结构域。

50.如权利要求24所述的重组蛋白，其中所述重组蛋白形成细胞的一部分。

51.如权利要求24所述的重组蛋白，其中所述重组蛋白形成T细胞的一部分。

52.一种编码如权利要求24所述重组蛋白的分离核酸。

53.一种药物组合物，所述药物组合物包括治疗有效量的如权利要求24所述的重组蛋白和药学上可接受的赋形剂。

54.一种在有需要的受试者中治疗癌症的方法，所述方法包括给受试者施用治疗有效量的权利要求24所述的重组蛋白，从而治疗所述受试者中的癌症。

55.一种重组蛋白，所述重组蛋白包括：

(i)能够结合效应细胞配体的第一抗体区；和

(ii)第二抗体区，其包括：

(a)轻链可变结构域，所述轻链可变结构域包括如SEQ ID NO:1所述的CDR L1、如SEQID NO:2所述的CDR L2和如SEQ ID NO:3所述的CDR L3；和

(b)重链可变区结构域，所述重链可变区结构域包括如SEQ ID NO:4所述的CDR H1、如SEQ ID NO:5所述的CDR H2和如SEQ ID NO:6所述的CDR H3。

56.如权利要求55所述的重组蛋白，其中所述效应细胞配体为CD3蛋白。

57.如权利要求55所述的重组蛋白，其中所述轻链可变结构域包括SEQ ID NO:7的序列。

58.如权利要求55所述的重组蛋白，其中所述重链可变结构域包括SEQ ID NO:8的序列。

59.如权利要求55所述的重组蛋白，其中所述轻链可变结构域包括如SEQ ID NO:9所述的FR L1，如SEQ ID NO:10所述的FR L2，如SEQ ID NO:11所述的FR L3和如SEQ ID NO:12所述的FR L4。

60.如权利要求55所述的重组蛋白，其中所述重链可变结构域包括如SEQ ID NO:13所述的FR H1、如SEQ ID NO:14所述的FR H2、如SEQ ID NO:15所述的FR H3和如SEQ ID NO:16所述的FR H4。

61.如权利要求55所述的重组蛋白，其中所述第一抗体区为第一Fab'片段或所述第二抗体区为第二Fab'片段。

62.如权利要求55所述的重组蛋白，其中所述第一抗体区为单链可变片段(scFv)或所述第二抗体区为第二单链可变片段(scFv)。

63.如权利要求55所述的重组蛋白，其中所述第二scFv包括SEQ ID NO:17的序列。

64.如权利要求55所述的重组蛋白，其中所述第二抗体区能够以约为21nM的平衡解离常数(K_D)结合IL1RAP。

65.如权利要求55所述的重组蛋白，其中所述第二抗体区的EC₅₀为约4.9ng/ml。

66.如权利要求55所述的重组蛋白，其中所述第二抗体区与IL1RAP结合。

67.如权利要求66所述的重组蛋白，其中所述IL1RAP为人IL1RAP。

68.如权利要求66所述的重组蛋白，其中所述IL1RAP形成细胞的一部分。

69.如权利要求66述的重组蛋白，其中所述IL1RAP表达于所述细胞的表面。

70.如权利要求69所述的重组蛋白，其中所述细胞为癌细胞。

71.如权利要求70所述的重组蛋白，其中所述癌细胞是白血病干细胞(LSC)。

72.如权利要求70所述的重组蛋白，其中所述癌细胞为急性髓性白血病(AML)细胞。

73.一种药物组合物，所述药物组合物包括治疗有效量的如权利要求55所述的重组蛋白和药学上可接受的赋形剂。

74.一种在有需要的受试者中治疗癌症的方法，所述方法包括给受试者施用治疗有效量的权利要求55所述的重组蛋白，从而治疗所述受试者中的癌症。

75.如权利要求23、54或74中任意一项所述的方法，其中所述癌症为白血病。

76.如权利要求23、54或74中任意一项所述的方法，其中所述癌症为急性髓性白血病。

77.如权利要求23、54或74中任意一项所述的方法，其中所述方法还包括给所述受试者施用第二种治疗剂。

78.一种抑制细胞增殖的方法，所述方法包括：

(i)将细胞与权利要求1所述的抗IL1RAP抗体、权利要求24所述的重组蛋白或权利要求55所述的重组蛋白接触，从而形成经接触的细胞；和

(ii)允许权利要求1的所述抗IL1RAP抗体、权利要求24所述的重组蛋白或权利要求55所述的重组蛋白与所述经接触的细胞上的IL1RAP结合，从而抑制所述细胞的增殖。

79.如权利要求78所述的方法，其中所述细胞为癌细胞。

80.如权利要求78所述的方法，其中所述细胞为白血病干细胞(LSC)。

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