CN111239319A

CN111239319A - 一种喉咽清口服液中竹节参皂苷IVa的含量测定方法

Info

Publication number: CN111239319A
Application number: CN202010099521.2A
Authority: CN
Inventors: 欧阳文; 于炜民; 曾颖; 陈韬; 刘梓琛; 胡云舒; 唐琴; 张云坤; 李顺祥; 唐纯玉; 王雄龙; 陈林; 郭丽娟
Original assignee: Hunan Timesun Pharmaceutical Co ltd
Current assignee: Hunan Timesun Pharmaceutical Co ltd
Priority date: 2020-02-18
Filing date: 2020-02-18
Publication date: 2020-06-05

Abstract

本发明提供了一种喉咽清口服液中竹节参皂苷IVa的含量测定方法，使用HPLC检测，色谱条件为：色谱柱C18，检测波长200～210nm，柱温20～40℃，流速0.8～1mL/min，流动相用乙腈‑磷酸水溶液等度洗脱。该方法具有样品处理简便、精密度和准确性高、稳定性好，成本低等优点，将为喉咽清口服液质量控制奠定了基础。

Description

一种喉咽清口服液中竹节参皂苷IVa的含量测定方法

技术领域

本发明属于药品质量检测领域，具体地，涉及一种喉咽清口服液中竹节参皂苷IVa的含量测定方法。

背景技术

“喉咽清口服液”来源于民间秘方，由土牛膝、马兰草、天名精和车前草四位药味组成，为湖南时代阳光药业股份有限公司自主研制开发的国家级新药，具有清热解毒、利咽痛的功效，主要用于肺胃实热所导致的咽部肿痛、发热、口渴、便秘、扁桃体炎、咽炎等证。该处方君药土牛膝，为苋科牛膝属植物牛膝Achyranthes bidentata Blume的野生种及柳叶牛膝Achyranthes longifolia(Makino)Makino、粗毛牛膝Achyranthes aspera L.、钝叶土牛膝Achyranthes aspera L.var.indica L.的根及根茎。具有活血祛瘀，泻火解毒，利尿通淋之功效。主治闭经，跌打损伤，风湿关节痛，痢疾，白喉，咽喉肿痛，疮痈，淋证，水肿。研究表明，蜕皮甾酮类化合物和以齐墩果酸为苷元的三萜皂苷类化合物是土牛膝的主要活性成分。

现行《中国药典》关于喉咽清口服液的质量标准“含量测定项”中，是先将样品水解、石油醚萃取，薄层层析分离后采用薄层色谱扫描法，测定水解产物中齐墩果酸的含量。该方法缺点之一是采用薄层色谱扫描法进行定量实验，无论准确性、稳定性还是精密度上都不好，薄层色谱扫描法用于定量研究已经处于逐步被取消境地。另外通过水解方式获得的齐墩果酸，是多种皂苷的苷元而不是喉咽清口服液中君药土牛膝的单一活性指标成分，因而不能精准的控制土牛膝及喉咽清口服液质量。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明提供一种能精准、稳定检测喉咽清口服液中君药土牛膝主要活性单体竹节参皂苷Iva的含量测定方法，具体方案如下：

一种喉咽清口服液中竹节参皂苷IVa的含量测定方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：将供试液进行HPLC检测，色谱条件如下：色谱柱C18，检测波长200～210nm，柱温20～40℃，流速0.8～1mL/min，流动相用乙腈-磷酸水溶液等度洗脱，所述乙腈浓度为31.5％～33％，所述磷酸水浓度为0.2％～0.6％，乙腈与磷酸水溶液的体积比为30～35:65～70。

进一步地，所述供试液的制备方法包括以下步骤：先将喉咽清口服液稀释，然后超声，过滤取滤液即得。

进一步地，所述稀释是将喉咽清口服液用上述流动相稀释，稀释倍数为4～6倍，优选地，稀释倍数为5倍。

进一步地，所述过滤为使用0.45um微孔滤膜过滤。

进一步地，所述检测波长为203nm。

进一步地，所述磷酸水浓度为0.5％。

进一步地，所述流速为1mL/min。

与现有技术相比，本发明的有益效果如下：

本发明通过建立反相高效液相色谱法测定喉咽清口服液中竹节参皂苷IVa含量，进而来控制产品质量，这一方案有样品处理简便、精密度和准确性高、稳定性好，成本低等优点，将为喉咽清口服液质量控制奠定了基础。

附图说明

图1是实施例1中竹节参皂苷IVa对照品液相色谱图。

图2是实施例1中供试液样品液相色谱图。

图3是实施例1中供试液和竹节参皂苷IVa对照品液混合后的液相色谱图。

图4是实施例1中竹节参皂苷Iva对照品的标准曲线。

具体实施方式

以下说明描述了本发明的可选实施方式以教导本领域普通技术人员如何实施和再现本明。为了教导本发明技术方案，已简化或省略了一些常规方面。本领域普通技术人员应该理解源自这些实施方式的变型或替换将落在本发明的保护范围内。

实施例1

1、色谱条件

岛津HPLC仪(LC-20A二元高压梯度仪，SPD-20A紫外检测仪)，色谱柱为岛津YMC C₁₈柱(250mm×4.6mm,5μm)，检测波长203nm，柱温室温，流动相为乙腈-0.5％磷酸水溶液(33:67，V/V)，流速为1mL/min。

2、样品制备

1)竹节参皂苷IVa对照品溶液的制备

精密称取3.0mg竹节参皂苷IVa(成都普思生物科技股份有限公司，纯度大于98％)，流动相溶解定容于10mL容量瓶中，过0.45μm微孔滤膜，即得0.30mg/mL的竹节参皂苷IVa对照品溶液。

2)口服液供试液的制备

喉咽清口服液充分摇匀后，精密吸取2mL，置于10mL容量瓶中，加流动相超声、定容，过0.45μm微孔滤膜，即得。用微量进样器精密吸取20μL按步骤1中色谱条件进行分析测定。

3、方法学考察

1)线性关系考察

精密吸取竹节参皂苷IVa对照品溶液各0.5、1、2、4、8、10μL进样，按“色谱条件”测定峰面积，以对照品峰面积值为纵坐标，进样量(μg)为横坐标，绘制标准曲线。

2)精密度试验

精密吸取竹节参皂苷IVa对照品溶液5μL，按照“色谱条件”中的方法测定，重复进样5次。

3)重复性试验

分别取同一批口服液(批号20190716)6份，按“供试液制备”操作，按照“色谱条件”下进行测定。

4)样品稳定性试验

取同一份样品(批号为20180705)溶液，按“供试液制备”操作，室温放置，分别于0，2，4，8，12，24h测定竹节参皂苷IVa峰面积值。

5)回收率试验

采用加样回收试验，精密吸取已知含量的口服液0.5mL，加入大体相同量的对照品溶液，流动相定容至5mL容量瓶，过膜，微量进样器精密吸取20μL按照“色谱条件”下进行测定。

4、结果与分析

1)系统适用性试验结果与分析

分别吸取竹节参皂苷IVa对照品溶液、供试样品溶液，样品溶液加竹节参皂苷IVa溶液，按“色谱条件”注入液相色谱仪测定，记录色谱图，结果见图1～3。

结果表明，采用本色谱条件，竹节参皂苷IVa与相邻峰可基线分离，分离度大于1.5，且在与对照品相同的保留时间内，空白无干扰。

2)线性关系考察结果与分析

精密吸取竹节参皂苷IVa对照品溶液(0.3mg/mL)各0.5、1、2、4、8、10μL进样，记录峰面积，计算线性回归结果如图4所示，竹节参皂苷IVa在0.15～3.0μg范围内线性良好(R²＝0.9996)，线性回归方程为y＝359972x-20210。

3)精密度试验结果与分析

精密吸取竹节参皂苷IVa对照品溶液5μL，按照“色谱条件”中的方法测定，重复进样5次。结果见表1。

表1精密度试验结果

由上表1可知，对照品溶液峰面积值的RSD为1.15％，说明仪器精密度好。

4)重复性试验结果与分析

分别取同一批(批号20190716)6份，按“供试液的制备”操作，按照“色谱条件”下进行测定。结果如下表2所示。

表2重复性试验结果

由上表可知，样品溶液测得的RSD分别为1.48％，说明方法的重现性好。

5)样品稳定性试验结果与分析

取同一份样品(批号为20180705)溶液，按“供试液制备”操作，室温放置，分别于0，2，4，8，12，24h测定竹节参皂苷IVa峰面积值，结果如下表3。

表3供试品稳定性测验

由表3可知，样品溶液测得竹节参皂苷IVa峰面积值的RSD分别为1.09％，说明样品溶液在24小时内稳定性好。

6)回收率试验

精密吸取批号为20180705口服液0.5mL，置于5mL容量瓶中，然后加入0.46mL对照品溶液(含竹节参皂苷IVa 0.138mg)后，流动相定容至刻度，过膜、测定。结果如下表4所示。

表4加样回收率试验结果

由表4可知，对照品平均回收率为104.22％，RSD为1.61％，说明该实验建立的方法准确，可用于口服液中竹节参皂苷IVa的含量测定。

7)样品测定结果

采集不同批次喉咽清口服液，按照本实验建立方法测定竹节参皂苷IVa含量，结果如下表5所示。

表5不同批次喉咽清口服液含量测定结果

由表5可知，这四个批次喉咽清口服液中竹节参皂苷IVa的含量均超过了0.2mg/mL。

实施例2：

采用高效液相色谱仪(紫外检测仪)，色谱柱为C₁₈柱(250mm×4.6mm，5μm)，检测波长203nm，柱温室温，流速为1mL/min，流动相为乙腈-0.5％磷酸水溶液等度洗脱(31.5:68.5，v/v)。样品处理为将口服液用流动相5倍稀释后过0.45um微孔滤膜，进样20μL。方法学考察结果表明，竹节参皂苷IVa保留时间约为55min，与相邻峰基线分离、无干扰，分离度大于1.5；对照品在0.15～3.0μg范围内线性好，线性方程为y＝298454x-15712，R²＝0.9992；仪器精密度好，RSD为1.12％；方法重现性好，RSD为1.63％；供试品在24小时内稳定，RSD为0.9％；加样回收率实验表明，该方法平均回收率为105.9％，RSD为1.82％，可用于喉咽清口服液中竹节参皂苷IVa的定量测定。

上述实施例阐明的内容应当理解为这些实施例仅用于更清楚地说明本发明，而不用于限制本发明的范围，在阅读了本发明之后，本领域技术人员对本发明的各种等价形式的修改均落入本申请所附权利要求所限定的范围。

Claims

1.一种喉咽清口服液中竹节参皂苷IVa的含量测定方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：将供试液进行HPLC检测，色谱条件如下：色谱柱C18，检测波长200～210nm，柱温20～40℃，流速0.8～1mL/min，流动相用乙腈-磷酸水溶液等度洗脱，所述乙腈浓度为31.5％～33％，所述磷酸水浓度为0.2％～0.6％，乙腈与磷酸水溶液的体积比为30～35:65～70。

2.根据权利要求1所述的含量测定方法，其特征在于，所述供试液的制备方法包括以下步骤：先将喉咽清口服液稀释，然后超声，过滤取滤液即得。

3.根据权利要求2所述的含量测定方法，其特征在于，所述过滤为使用0.45um微孔滤膜过滤。

4.根据权利要求1所述的含量测定方法，其特征在于，所述检测波长为203nm。

5.根据权利要求1所述的含量测定方法，其特征在于，所述磷酸水浓度为0.5％。

6.根据权利要求1所述的含量测定方法，其特征在于，所述流速为1mL/min。