CN111139301B

CN111139301B - 一种乳腺癌相关基因ERBB2位点g.39723319C＞A突变体及其应用

Info

Publication number: CN111139301B
Application number: CN202010161716.5A
Authority: CN
Inventors: 顾娟; 张兵; 王玥苹; 王学东; 周道平; 吴怀国
Original assignee: Wuxi Fifth Peoples Hospital
Current assignee: Wuxi Fifth Peoples Hospital
Priority date: 2020-03-10
Filing date: 2020-03-10
Publication date: 2020-12-18
Anticipated expiration: 2040-03-10
Also published as: CN111139301A

Abstract

本发明公开了一种乳腺癌相关基因ERBB2位点g.39723319C＞A突变体、检测该突变体的特异性引物以及含有特异性引物的试剂盒，不仅使乳腺癌的诊断更加方便易实施，便于临床医生及时精准掌握患者病情，而且可作为临床治疗效果的评价标准，并为发现有潜在治疗价值的新型小分子药物靶标提供理论支持。

Description

一种乳腺癌相关基因ERBB2位点g.39723319C＞A突变体及其应用

技术领域

本发明涉及一种医学生物技术，尤其涉及一种乳腺癌相关基因ERBB2位点g.39723319C＞A突变体及其应用。

背景技术

乳腺癌已被认知属于一种全身性疾病，乳腺癌的病因至今尚未明确揭示，随着肿瘤分子遗传学、肿瘤细胞遗传学和分子流行病学的发展，目前认为环境因素和遗传因素共同作用影响乳腺癌的发生，在遗传性癌综合征中，癌相关基因的种系突变决定了该家族的肿瘤遗传易感性；而在散发性癌症中，主要危险因素是环境因子，与此相关基因的遗传多态性决定了个体对这些因素的易感性。

有研究表明携带乳腺癌遗传易感基因的女性，乳腺癌的发病风险将会大大提高，以BRCA1和BRCA2基因为例，携带者终生患乳腺癌的风险高达80％，因此针对这些与乳腺癌相关的易感基因的检测可提高乳腺癌的二级预防(早发现、早诊断、早治疗)。其中，乳腺癌相关基因ERBB2又称为neu或HER-2基因，是一种细胞来原癌基因，在多种肿瘤中其癌基因及其蛋白产物(p185)均有过度表达和扩增。对ERBB2癌基因蛋白产物p185的病理研究首先多见于乳腺癌，其作用也较为明确。目前普遍认为，ERBB2蛋白产物的阳性表达可作为判断乳腺癌预后的一个独立指标。

发明内容

发明目的：为了克服现有技术中存在的不足，本发明提供一种乳腺癌相关基因ERBB2位点g.39723319C＞A突变体、检测该突变体的特异性引物以及含有特异性引物的试剂盒，以便快速方便地辅助判断乳腺癌。

技术方案：为实现上述目的，本发明的一种乳腺癌相关基因ERBB2位点g.39723319C＞A突变体，其野生型ERBB2基因序列如SEQ ID NO:1所示，其突变型ERBB2基因序列如SEQ ID NO:2所示；突变型ERBB2基因序列与野生型ERBB2基因序列具有g.39723319C＞A位点突变。

进一步地，用于检测乳腺癌相关基因ERBB2位点g.39723319C＞A突变体的特异性引物，其上游引物的序列如为SEQ ID NO:3所示，下游引物的序列如SEQ ID NO:4所示，用于检测ERBB2基因位点g.39723319C＞A突变；所述ERBB2基因位点g.39723319C＞A突变是指突变位点在SEQ ID NO:1序列的第205位碱基C突变为A。

进一步地，一种乳腺癌辅助诊断试剂盒，用于检测基因ERBB2位点g.39723319C＞A突变体的特异性引物。

有益效果：本发明的一种乳腺癌相关基因ERBB2位点g.39723319C＞A突变体、检测该突变体的特异性引物以及含有特异性引物的试剂盒，不仅使乳腺癌的诊断更加方便易实施，便于临床医生及时精准掌握患者病情，而且可作为临床治疗效果的评价标准，并为发现有潜在治疗价值的新型小分子药物靶标提供理论支持。

附图说明

附图1为基因ERBB2位点g.39723319C＞A突变体的检测凝胶电泳图；

附图2为基因ERBB2位点g.39723319C＞A突变体的基因测序图。

具体实施方式

下面结合附图对本发明作更进一步的说明。

如附图1和附图2所示的一种乳腺癌相关基因ERBB2位点g.39723319C＞A突变体，其野生型ERBB2基因序列如SEQ ID NO:1所示，其突变型ERBB2基因序列如SEQ ID NO:2所示；突变型ERBB2基因与野生型ERBB2基因序列具有g.39723319C＞A位点突变。

用于上述ERBB2基因的突变位点的特异性引物，进行PCR扩增，检测ERBB2基因有无该突变产物片段；并且采用Sanger测序方法检测有无该位点碱基突变，其中PCR扩增引物的上游引物的序列如SEQ ID NO:3所示，下游引物的序列如SEQ ID NO:4所示，用于检测ERBB2基因位点g.39723319C＞A突变；所述ERBB2基因位点g.39723319C＞A突变是指突变位点在SEQ ID NO:1序列的第205位碱基C突变为A。

通过研究乳腺癌患者及与其年龄匹配的健康对照外周血DNA中的突变，寻找与乳腺癌相关的高特异性的突变位点，为乳腺癌的筛查和诊断提供支持。本实施例通过对118例有肿瘤家族史的乳腺癌病人及300名正常的对照成员ERBB2基因g.39723319C>A突变位点进行筛查，发现3名患者在具有ERBB2基因g.39723319C>A突变(2.5％)。该变异为一个错义变异。这个变异在300例对照组中未发现，说明这一变异位点可增加乳腺的患病风险。该变异在乳腺癌患者中发生频率显著高于正常对照，说明该突变位点与乳腺癌密切相关。

以上研究所发现的与乳腺癌辅助诊断相关的突变位点为g.39723319C>A，该突变发生于第17号染色体的g.39723319C>A位置。该基因在NCBl参考数据库GRCh38.p13中的编号为NC_000017.11(39688084～39728662)。这里列出在该数据库中包含有本位点野生型的部分碱基序列供参考，如SEQIDNO:1所示，ERBB2基因突变相对应的序列如SEQIDNO:2所示，其中突变位点在SEQIDNO:1序列的第205位由碱基C突变为A。ERBB2基因编码序列野生型氨基酸序列如SEQIDNO:5所示，突变型氨基酸序列如SEQIDNO:6所示；其中突变位点在SEQIDNO:6序列的第680位由丝氨酸(S)转变为为精氨酸(R)。

SEQIDNO:1

GATTGCCTACAAGGAGTTTGGACTTTATTGTGGAGGCAGCGGGGAGCCAAGGCAGGTTTTAGAGTAGGAGAGGGTCCAAGCCTGTGGGTCACCCTTCCGACTTCCCTTTCCGAATGCCAAACACCTTCATGTCCCCCGTGGGCCCCCTTTGTCCCTCCCACCCCAAACTAGCCCTCAATCCCTGACCCTGGCTTCCGCCCCCAGCCCTCTGACGTCCATCATCTCTGCGGTGGTTGGCATTCTGCTGGTCGTGGTCTTGGGGGTGGTCTTTGGGATCCTCATCAAGCGACGGCAGCAGAAGATCCGGAAGTACACGATGCGGAGACTGCTGCAGGAAACGGAGGTGAGGCGGGGTGAAGTCCTCCCAGCCCGCGTGGGGTCTGCACCGGCCC

SEQIDNO:2

GATTGCCTACAAGGAGTTTGGACTTTATTGTGGAGGCAGCGGGGAGCCAAGGCAGGTTTTAGAGTAGGAGAGGGTCCAAGCCTGTGGGTCACCCTTCCGACTTCCCTTTCCGAATGCCAAACACCTTCATGTCCCCCGTGGGCCCCCTTTGTCCCTCCCACCCCAAACTAGCCCTCAATCCCTGACCCTGGCTTCCGCCCCCAGACCTCTGACGTCCATCATCTCTGCGGTGGTTGGCATTCTGCTGGTCGTGGTCTTGGGGGTGGTCTTTGGGATCCTCATCAAGCGACGGCAGCAGAAGATCCGGAAGTACACGATGCGGAGACTGCTGCAGGAAACGGAGGTGAGGCGGGGTGAAGTCCTCCCAGCCCGCGTGGGGTCTGCACCGGCCC

SEQIDNO:5

MPRGSWKPQVCTGTDMKLRLPASPETHLDMLRHLYQGCQVVQGNLELTYLPTNASLSFLQDIQEVQGYVLIAHNQVRQVPLQRLRIVRGTQLFEDNYALAVLDNGDPLNNTTPVTGASPGGLRELQLRSLTEILKGGVLIQRNPQLCYQDTILWKDIFHKNNQLALTLIDTNRSRACHPCSPMCKGSRCWGESSEDCQSLTRTVCAGGCARCKGPLPTDCCHEQCAAGCTGPKHSDCLVCASALCPMCSTPQDARGGHPAWYCPIAPGTPGQNSTVKASHLSPQACLHFNHSGICELHCPALVTYNTDTFESMPNPEGRYTFGASCVTACPYNYLSTDVGSCTLVCPLHNQEVTAEDGTQRCEKCSKPCARVCYGLGMEHLREVRAVTSANIQEFAGCKKIFGSLAFLPESFDGDPASNTAPLQPEQLQVFETLEEITGYLYISAWPDSLPDLSVFQNLQVIRGRILHNGAYSLTLQGLGISWLGLRSLRELGSGLALIHHNTHLCFVHTVPWDQLFRNPHQALLHTANRPEDECVGEGLACHQLCARGHCWGPGPTQCVNCSQFLRGQECVEECRVLQGLPREYVNARHCLPCHPECQPQNGSVTCFGPEADQCVACAHYKDPPFCVARCPSGVKPDLSYMPIWKFPDEEGACQPCPINCTHSCVDLDDKGCPAEQRASPLTSIISAVVGILLVVVLGVVFGILIKRRQQKIRKYTMR

SEQIDNO:6

MPRGSWKPQVCTGTDMKLRLPASPETHLDMLRHLYQGCQVVQGNLELTYLPTNASLSFLQDIQEVQGYVLIAHNQVRQVPLQRLRIVRGTQLFEDNYALAVLDNGDPLNNTTPVTGASPGGLRELQLRSLTEILKGGVLIQRNPQLCYQDTILWKDIFHKNNQLALTLIDTNRSRACHPCSPMCKGSRCWGESSEDCQSLTRTVCAGGCARCKGPLPTDCCHEQCAAGCTGPKHSDCLVCASALCPMCSTPQDARGGHPAWYCPIAPGTPGQNSTVKASHLSPQACLHFNHSGICELHCPALVTYNTDTFESMPNPEGRYTFGASCVTACPYNYLSTDVGSCTLVCPLHNQEVTAEDGTQRCEKCSKPCARVCYGLGMEHLREVRAVTSANIQEFAGCKKIFGSLAFLPESFDGDPASNTAPLQPEQLQVFETLEEITGYLYISAWPDSLPDLSVFQNLQVIRGRILHNGAYSLTLQGLGISWLGLRSLRELGSGLALIHHNTHLCFVHTVPWDQLFRNPHQALLHTANRPEDECVGEGLACHQLCARGHCWGPGPTQCVNCSQFLRGQECVEECRVLQGLPREYVNARHCLPCHPECQPQNGSVTCFGPEADQCVACAHYKDPPFCVARCPSGVKPDLSYMPIWKFPDEEGACQPCPINCTHSCVDLDDKGCPAEQRARPLTSIISAVVGILLVVVLGVVFGILIKRRQQKIRKYTMR

所述一种乳腺癌相关基因ERBB2位点g.39723319C>A突变体的检测方法，通过基因扩增方法对包含突变基因的目标部位选择性地进行扩增，由此检测该突变基因的有无。所述检测方法如下：

(1)提取待检样本中DNA；

(2)以该DNA为模板，针对ERBB2基因g.39723319C>A突变体区域的DNA序列设计的PCR引物进行PCR反应，得到PCR反应产物；

(3)测出PCR反应产物的核苷酸序列组成；

(4)将核苷酸序列与ERBB2野生型基因的序列进行比较，确定是否有ERBB2位点g.39723319C>A突变。所述PCR反应产物的核苷酸序列组成可以将PCR反应产物通过测序仪进行测序。

所述一种乳腺癌相关基因ERBB2位点g.39723319C>A突变体的检测，具体步骤如下：

(1)引物设计：根据美国国家生物信息中心(NCBI)GenBank记录的ERBB2基因(序列号：NC_000017.11)，通过Oligo 6.0引物软件设计引物，最终确定1对特异性寡核苷酸引物序列，上游引物序列如表1中SEQID NO:3所示；下游引物序列如SEQID NO:4所示，扩增产物片段长度为217bp。

表1.相关突变位点寡核苷酸引物序列

注：*SEQIDNO:3所列碱基序列是正向引物序列；SEQIDNO:4为反向引物序列

(2)ERBB2基因g.39723319C>A突变体的增扩：反应体系总体积50μL；其中含PCR5×缓冲液10μL，DNA模板5.0μL，1U/μL的Taq聚合酶1.0μL，MgCl2终浓度为2.0mmol/L，dNTP终浓度为200nmol/L，特异性正向引物和反向引物的终浓度均为200nmol/L；加消毒双蒸水至反应体系总体积50μL；将上述反应体系在PCR仪中反应，反应条件：95℃预变性5min，然后依次94℃变性30s，接着58℃退火40s，72℃延伸1min，共32个循环；

(3)ERBB2基因g.39723319C>A突变体的检测：用琼脂糖凝胶对将步骤(2)所得的增扩产物进行电泳，以检测其是否有目的片段。

DNA模板的制备：

采用购置的试剂盒提取全血基因组DNA，具体步骤如下：

(1)取无菌2.0mL离心管一只，加入1mL细胞裂解液。

(2)轻轻震荡然经EDTA抗凝的全血样本，直到彻底混匀；然后吸取500μL血样加入上述含有细胞裂解液的离心管中，轻轻倾倒离心管5～6次混匀。

(3)室温孵育10分钟(期间颠倒离心管2～3次混匀)。

(4)12000rpm室温离心5分钟。

(5)用移液器缓慢的尽可能将上清液移弃干净，注意勿将两相交界处的白色物质吸出。

(6)使用涡旋振荡器(Votex)剧烈混匀，直至白细胞重悬(10～15秒)。

(7)向重悬细胞溶液中加入核裂解液300μL。用移液枪头吸放溶液5～6次裂解白细胞。此时溶液应变得很粘稠。若混合后可见细胞团块，则将溶液置于37℃孵育直至团块消散。若孵育1小时后仍可见细胞团块，则另加核裂解液100μL并重复置于37℃孵育。

(8)向核裂解物中加入蛋白沉淀液100μL，用涡旋振荡器剧烈震荡10～20秒。

(9)12000rpm室温离心5分钟。

(10)将其上清液转至对应编号的已加入300μL室温异丙醇的2.0mL离心管中。

(11)轻轻颠倒以混匀溶液，直至白色线状DNA形成沉淀。

(12)12000rpm室温离心1分钟。

(13)弃去上清液，加入与样本量等体积的室温70％乙醇，轻轻颠倒离心管数次。

(14)用移液器缓慢的尽可能将乙醇液移弃干净。将离心管置于50℃烘烤5～10分钟，尽量让残余的乙醇液挥发干净。

(15)向离心管中加入50～100μL的DNA溶解液，轻轻混匀。

(16)用1％琼脂糖凝胶电泳来评估DNA提取效果，Nanodrop核酸仪检测含量，定量到20～50ng/μL，-20℃保存。

ERBB2基因g.39723319C>A突变基因检测方案：

仪器：Veriti96型PCR仪、BIO-RADGelDocXR+型凝胶成像仪(美国伯乐公司)、凝胶电泳仪(北京六一公司)。

试剂：QIAampDNA提取试剂盒(德国Qiagen公司)；DNAIsolationKit提取试剂盒(北京PELFREEZ公司)；PCR缓冲液、dNTP、Taq酶(美国ABI公司)；引物由上海生工生物有限公司合成。

(1)ERBB2基因g.39723319C>A突变体的扩增：反应总体积：50μL，含PCR5×缓冲液10μL，DNA模板5.0μL，Taq聚合酶(1U/μL)1.0μL，MgCl2终浓度2.0mmol/L，dNTP终浓度200nmol/L，以及特异性上、下引物终浓度200nmol/L，并加消毒双蒸水至总体积50μL。

反应条件：95℃预变性5分钟，然后依次95℃变性30秒，接着58℃退火40秒，72℃延伸1分钟，共32个循环。

(2)ERBB2基因g.39723319C>A突变基因检测：用1.5％琼脂糖凝胶对将步骤(1)所得的增扩产物进行电泳，以检测其是否有目的片段。通过凝胶成像仪观察结果并拍照，PCR产物经电泳后显示为单一条带，无杂带，则提示PCR产物单一，无非特异扩增。若条带位置位于适当大小的位置，则为目的片段。如图1所示，M：50bp梯度分子量标记物，1：空白对照，2：野生型对照，3：ERBB2基因g.39723319C>A突变样本。

(3)扩增产物纯化：本研究采用Takara公司的Agarose Gel DNAPurification Kit试剂盒，将琼脂糖凝胶电泳后的PCR产物进行纯化回收，准备测序。

(4)Sanger测序与结果判断：纯化后PCR产物在ABI3730型全自动DNA测序仪上进行测序，测序结果与ERBB2野生型参考序列(NCBI Reference Sequence:NC_000017.11)进行比对，根据实际突变情况对结果进行报告。检测所得基因突变如图2所示，图中箭头所示为ERBB2基因g.39723319C>A突变。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出：对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

序列表

<110> 无锡市第五人民医院

<120> 一种乳腺癌相关基因ERBB2位点g.39723319C＞A突变体及其应用

<130> 4

<160> 6

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 392

<212> DNA

<213> Homo sapiens

<400> 1

gattgcctac aaggagtttg gactttattg tggaggcagc ggggagccaa ggcaggtttt 60

agagtaggag agggtccaag cctgtgggtc acccttccga cttccctttc cgaatgccaa 120

acaccttcat gtcccccgtg ggcccccttt gtccctccca ccccaaacta gccctcaatc 180

cctgaccctg gcttccgccc ccagccctct gacgtccatc atctctgcgg tggttggcat 240

tctgctggtc gtggtcttgg gggtggtctt tgggatcctc atcaagcgac ggcagcagaa 300

gatccggaag tacacgatgc ggagactgct gcaggaaacg gaggtgaggc ggggtgaagt 360

cctcccagcc cgcgtggggt ctgcaccggc cc 392

<210> 2

<211> 392

<212> DNA

<213> Homo sapiens

<400> 2

gattgcctac aaggagtttg gactttattg tggaggcagc ggggagccaa ggcaggtttt 60

agagtaggag agggtccaag cctgtgggtc acccttccga cttccctttc cgaatgccaa 120

acaccttcat gtcccccgtg ggcccccttt gtccctccca ccccaaacta gccctcaatc 180

cctgaccctg gcttccgccc ccagacctct gacgtccatc atctctgcgg tggttggcat 240

tctgctggtc gtggtcttgg gggtggtctt tgggatcctc atcaagcgac ggcagcagaa 300

gatccggaag tacacgatgc ggagactgct gcaggaaacg gaggtgaggc ggggtgaagt 360

cctcccagcc cgcgtggggt ctgcaccggc cc 392

<210> 3

<211> 26

<212> DNA

<213> Homo sapiens

<400> 3

ccctgaccct ggcttccgcc cccaga 26

<210> 4

<211> 25

<212> DNA

<213> Homo sapiens

<400> 4

ccgggggccg gtgcagaccc cacgc 25

<210> 5

<211> 719

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<400> 5

Met Pro Arg Gly Ser Trp Lys Pro Gln Val Cys Thr Gly Thr Asp Met

1 5 10 15

Lys Leu Arg Leu Pro Ala Ser Pro Glu Thr His Leu Asp Met Leu Arg

20 25 30

His Leu Tyr Gln Gly Cys Gln Val Val Gln Gly Asn Leu Glu Leu Thr

35 40 45

Tyr Leu Pro Thr Asn Ala Ser Leu Ser Phe Leu Gln Asp Ile Gln Glu

50 55 60

Val Gln Gly Tyr Val Leu Ile Ala His Asn Gln Val Arg Gln Val Pro

65 70 75 80

Leu Gln Arg Leu Arg Ile Val Arg Gly Thr Gln Leu Phe Glu Asp Asn

85 90 95

Tyr Ala Leu Ala Val Leu Asp Asn Gly Asp Pro Leu Asn Asn Thr Thr

100 105 110

Pro Val Thr Gly Ala Ser Pro Gly Gly Leu Arg Glu Leu Gln Leu Arg

115 120 125

Ser Leu Thr Glu Ile Leu Lys Gly Gly Val Leu Ile Gln Arg Asn Pro

130 135 140

Gln Leu Cys Tyr Gln Asp Thr Ile Leu Trp Lys Asp Ile Phe His Lys

145 150 155 160

Asn Asn Gln Leu Ala Leu Thr Leu Ile Asp Thr Asn Arg Ser Arg Ala

165 170 175

Cys His Pro Cys Ser Pro Met Cys Lys Gly Ser Arg Cys Trp Gly Glu

180 185 190

Ser Ser Glu Asp Cys Gln Ser Leu Thr Arg Thr Val Cys Ala Gly Gly

195 200 205

Cys Ala Arg Cys Lys Gly Pro Leu Pro Thr Asp Cys Cys His Glu Gln

210 215 220

Cys Ala Ala Gly Cys Thr Gly Pro Lys His Ser Asp Cys Leu Val Cys

225 230 235 240

Ala Ser Ala Leu Cys Pro Met Cys Ser Thr Pro Gln Asp Ala Arg Gly

245 250 255

Gly His Pro Ala Trp Tyr Cys Pro Ile Ala Pro Gly Thr Pro Gly Gln

260 265 270

Asn Ser Thr Val Lys Ala Ser His Leu Ser Pro Gln Ala Cys Leu His

275 280 285

Phe Asn His Ser Gly Ile Cys Glu Leu His Cys Pro Ala Leu Val Thr

290 295 300

Tyr Asn Thr Asp Thr Phe Glu Ser Met Pro Asn Pro Glu Gly Arg Tyr

305 310 315 320

Thr Phe Gly Ala Ser Cys Val Thr Ala Cys Pro Tyr Asn Tyr Leu Ser

325 330 335

Thr Asp Val Gly Ser Cys Thr Leu Val Cys Pro Leu His Asn Gln Glu

340 345 350

Val Thr Ala Glu Asp Gly Thr Gln Arg Cys Glu Lys Cys Ser Lys Pro

355 360 365

Cys Ala Arg Val Cys Tyr Gly Leu Gly Met Glu His Leu Arg Glu Val

370 375 380

Arg Ala Val Thr Ser Ala Asn Ile Gln Glu Phe Ala Gly Cys Lys Lys

385 390 395 400

Ile Phe Gly Ser Leu Ala Phe Leu Pro Glu Ser Phe Asp Gly Asp Pro

405 410 415

Ala Ser Asn Thr Ala Pro Leu Gln Pro Glu Gln Leu Gln Val Phe Glu

420 425 430

Thr Leu Glu Glu Ile Thr Gly Tyr Leu Tyr Ile Ser Ala Trp Pro Asp

435 440 445

Ser Leu Pro Asp Leu Ser Val Phe Gln Asn Leu Gln Val Ile Arg Gly

450 455 460

Arg Ile Leu His Asn Gly Ala Tyr Ser Leu Thr Leu Gln Gly Leu Gly

465 470 475 480

Ile Ser Trp Leu Gly Leu Arg Ser Leu Arg Glu Leu Gly Ser Gly Leu

485 490 495

Ala Leu Ile His His Asn Thr His Leu Cys Phe Val His Thr Val Pro

500 505 510

Trp Asp Gln Leu Phe Arg Asn Pro His Gln Ala Leu Leu His Thr Ala

515 520 525

Asn Arg Pro Glu Asp Glu Cys Val Gly Glu Gly Leu Ala Cys His Gln

530 535 540

Leu Cys Ala Arg Gly His Cys Trp Gly Pro Gly Pro Thr Gln Cys Val

545 550 555 560

Asn Cys Ser Gln Phe Leu Arg Gly Gln Glu Cys Val Glu Glu Cys Arg

565 570 575

Val Leu Gln Gly Leu Pro Arg Glu Tyr Val Asn Ala Arg His Cys Leu

580 585 590

Pro Cys His Pro Glu Cys Gln Pro Gln Asn Gly Ser Val Thr Cys Phe

595 600 605

Gly Pro Glu Ala Asp Gln Cys Val Ala Cys Ala His Tyr Lys Asp Pro

610 615 620

Pro Phe Cys Val Ala Arg Cys Pro Ser Gly Val Lys Pro Asp Leu Ser

625 630 635 640

Tyr Met Pro Ile Trp Lys Phe Pro Asp Glu Glu Gly Ala Cys Gln Pro

645 650 655

Cys Pro Ile Asn Cys Thr His Ser Cys Val Asp Leu Asp Asp Lys Gly

660 665 670

Cys Pro Ala Glu Gln Arg Ala Ser Pro Leu Thr Ser Ile Ile Ser Ala

675 680 685

Val Val Gly Ile Leu Leu Val Val Val Leu Gly Val Val Phe Gly Ile

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Leu Ile Lys Arg Arg Gln Gln Lys Ile Arg Lys Tyr Thr Met Arg

705 710 715

<210> 6

<211> 719

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<400> 6

Met Pro Arg Gly Ser Trp Lys Pro Gln Val Cys Thr Gly Thr Asp Met

1 5 10 15

Lys Leu Arg Leu Pro Ala Ser Pro Glu Thr His Leu Asp Met Leu Arg

20 25 30

His Leu Tyr Gln Gly Cys Gln Val Val Gln Gly Asn Leu Glu Leu Thr

35 40 45

Tyr Leu Pro Thr Asn Ala Ser Leu Ser Phe Leu Gln Asp Ile Gln Glu

50 55 60

Val Gln Gly Tyr Val Leu Ile Ala His Asn Gln Val Arg Gln Val Pro

65 70 75 80

Leu Gln Arg Leu Arg Ile Val Arg Gly Thr Gln Leu Phe Glu Asp Asn

85 90 95

Tyr Ala Leu Ala Val Leu Asp Asn Gly Asp Pro Leu Asn Asn Thr Thr

100 105 110

Pro Val Thr Gly Ala Ser Pro Gly Gly Leu Arg Glu Leu Gln Leu Arg

115 120 125

Ser Leu Thr Glu Ile Leu Lys Gly Gly Val Leu Ile Gln Arg Asn Pro

130 135 140

Gln Leu Cys Tyr Gln Asp Thr Ile Leu Trp Lys Asp Ile Phe His Lys

145 150 155 160

Asn Asn Gln Leu Ala Leu Thr Leu Ile Asp Thr Asn Arg Ser Arg Ala

165 170 175

Cys His Pro Cys Ser Pro Met Cys Lys Gly Ser Arg Cys Trp Gly Glu

180 185 190

Ser Ser Glu Asp Cys Gln Ser Leu Thr Arg Thr Val Cys Ala Gly Gly

195 200 205

Cys Ala Arg Cys Lys Gly Pro Leu Pro Thr Asp Cys Cys His Glu Gln

210 215 220

Cys Ala Ala Gly Cys Thr Gly Pro Lys His Ser Asp Cys Leu Val Cys

225 230 235 240

Ala Ser Ala Leu Cys Pro Met Cys Ser Thr Pro Gln Asp Ala Arg Gly

245 250 255

Gly His Pro Ala Trp Tyr Cys Pro Ile Ala Pro Gly Thr Pro Gly Gln

260 265 270

Asn Ser Thr Val Lys Ala Ser His Leu Ser Pro Gln Ala Cys Leu His

275 280 285

Phe Asn His Ser Gly Ile Cys Glu Leu His Cys Pro Ala Leu Val Thr

290 295 300

Tyr Asn Thr Asp Thr Phe Glu Ser Met Pro Asn Pro Glu Gly Arg Tyr

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Thr Phe Gly Ala Ser Cys Val Thr Ala Cys Pro Tyr Asn Tyr Leu Ser

325 330 335

Thr Asp Val Gly Ser Cys Thr Leu Val Cys Pro Leu His Asn Gln Glu

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Val Thr Ala Glu Asp Gly Thr Gln Arg Cys Glu Lys Cys Ser Lys Pro

355 360 365

Cys Ala Arg Val Cys Tyr Gly Leu Gly Met Glu His Leu Arg Glu Val

370 375 380

Arg Ala Val Thr Ser Ala Asn Ile Gln Glu Phe Ala Gly Cys Lys Lys

385 390 395 400

Ile Phe Gly Ser Leu Ala Phe Leu Pro Glu Ser Phe Asp Gly Asp Pro

405 410 415

Ala Ser Asn Thr Ala Pro Leu Gln Pro Glu Gln Leu Gln Val Phe Glu

420 425 430

Thr Leu Glu Glu Ile Thr Gly Tyr Leu Tyr Ile Ser Ala Trp Pro Asp

435 440 445

Ser Leu Pro Asp Leu Ser Val Phe Gln Asn Leu Gln Val Ile Arg Gly

450 455 460

Arg Ile Leu His Asn Gly Ala Tyr Ser Leu Thr Leu Gln Gly Leu Gly

465 470 475 480

Ile Ser Trp Leu Gly Leu Arg Ser Leu Arg Glu Leu Gly Ser Gly Leu

485 490 495

Ala Leu Ile His His Asn Thr His Leu Cys Phe Val His Thr Val Pro

500 505 510

Trp Asp Gln Leu Phe Arg Asn Pro His Gln Ala Leu Leu His Thr Ala

515 520 525

Asn Arg Pro Glu Asp Glu Cys Val Gly Glu Gly Leu Ala Cys His Gln

530 535 540

Leu Cys Ala Arg Gly His Cys Trp Gly Pro Gly Pro Thr Gln Cys Val

545 550 555 560

Asn Cys Ser Gln Phe Leu Arg Gly Gln Glu Cys Val Glu Glu Cys Arg

565 570 575

Val Leu Gln Gly Leu Pro Arg Glu Tyr Val Asn Ala Arg His Cys Leu

580 585 590

Pro Cys His Pro Glu Cys Gln Pro Gln Asn Gly Ser Val Thr Cys Phe

595 600 605

Gly Pro Glu Ala Asp Gln Cys Val Ala Cys Ala His Tyr Lys Asp Pro

610 615 620

Pro Phe Cys Val Ala Arg Cys Pro Ser Gly Val Lys Pro Asp Leu Ser

625 630 635 640

Tyr Met Pro Ile Trp Lys Phe Pro Asp Glu Glu Gly Ala Cys Gln Pro

645 650 655

Cys Pro Ile Asn Cys Thr His Ser Cys Val Asp Leu Asp Asp Lys Gly

660 665 670

Cys Pro Ala Glu Gln Arg Ala Arg Pro Leu Thr Ser Ile Ile Ser Ala

675 680 685

Val Val Gly Ile Leu Leu Val Val Val Leu Gly Val Val Phe Gly Ile

690 695 700

Leu Ile Lys Arg Arg Gln Gln Lys Ile Arg Lys Tyr Thr Met Arg

705 710 715

Claims

1.一种乳腺癌相关基因ERBB2位点g.39723319C＞A突变体，其特征在于：其野生型ERBB2基因序列如SEQ ID NO:1所示，其突变型ERBB2基因序列如SEQ ID NO:2所示；突变型ERBB2基因序列与野生型ERBB2基因序列具有g.39723319C＞A位点突变。

2.一种用于检测如权利要求1所述的乳腺癌相关基因ERBB2位点g.39723319C＞A突变体的特异性引物，其特征在于：该特异性引物的上游引物的序列如为SEQ ID NO:3所示，下游引物的序列如SEQ ID NO:4所示，用于检测ERBB2基因位点g.39723319C＞A突变；所述ERBB2基因位点g.39723319C＞A突变是指突变位点在SEQ ID NO:1序列的第205位碱基C突变为A。