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CN110869392A - 用抗gitr激动性抗体治疗癌症 - Google Patents

用抗gitr激动性抗体治疗癌症 Download PDF

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CN110869392A
CN110869392A CN201880046058.6A CN201880046058A CN110869392A CN 110869392 A CN110869392 A CN 110869392A CN 201880046058 A CN201880046058 A CN 201880046058A CN 110869392 A CN110869392 A CN 110869392A
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proliferative
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gitr
dose
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CN201880046058.6A
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S·克里希南
P·E·菲利普斯
杨峥
王海顷
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Bristol Myers Squibb Co
Original Assignee
Bristol Myers Squibb Co
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Abstract

本文中提供了治疗癌症的方法，其包括对患有癌症的受试者单独地或与抗PD‑1或抗PD‑L1抗体一起施用治疗有效量的抗GITR抗体。

Description

用抗GITR激动性抗体治疗癌症
相关申请的交叉引用
本申请分别要求2017年5月16日提交的美国临时申请No.62/507,071；2017年6月2日提交的62/514,245；2017年6月2日提交的62/514,312；以及2017年10月17日提交的62/573,494的优先权。将上述申请的内容通过提述并入本文。
背景
据国家癌症研究所(National Cancer Institute)估计，仅仅在美国，1/3的人在其一生中会患上癌症。而且，大约有50％到60％患癌症的人最终会死于这种疾病。这种疾病的普遍存在凸显了改善治疗恶性肿瘤的抗癌方案的需要。
最近，几种免疫检查点途径抑制剂已开始提供用于治疗癌症的新的免疫治疗方法，包括结合并抑制细胞毒性T淋巴细胞抗原-4(CTLA-4)的用于治疗晚期黑色素瘤患者的抗体(Ab)伊匹单抗
Figure BDA0002361346870000011
的开发，以及与程序性死亡-1(PD-1)受体特异性地结合并阻断抑制性PD-1/PD-1配体途径的抗体比如纳武单抗和派姆单抗(以前的拉姆布罗力珠单抗(lambrolizumab)；USAN Council Statement，2013)的开发。
概述
本文中提供了通过与抗PD-1或抗PD-L1抗体联合施用抗GITR激动性抗体治疗患有癌症例如晚期实体瘤的受试者的方法。
附图简述
图1显示了28F3.IgG1±纳武单抗在晚期实体瘤患者中的1/2a期研究。DLT，剂量限制性毒性；HCC，肝细胞癌；MAD，最大给药剂量；MTD，最大耐受剂量；NSCLC，非小细胞肺癌；PD，药效学；PK，药代动力学；SCCHN，头颈部鳞状细胞癌；Q2W，每2周一次。
图2显示了GITR抗体和纳武单抗具有线性PK和低免疫原性。显示了时间的函数的GITR抗体的浓度，和施用第一剂量之后，在有或没有纳武单抗情况下的GITR抗体的浓度。单一疗法的最下的线到最上的线的浓度为10mg、30mg、100mg、240mg和800mg。与纳武单抗联用的GITR抗体的最下的线到最上的线的浓度为30mg、100mg、240mg和800mg(与240mg的纳武单抗一起施用)。
图3显示28F3.IgG1+纳武单抗增加了外周血中的增殖性(Ki67+)NK细胞和CD8细胞。a星号表示10.9的离群值。b星号表示7.8的离群值。
图4显示GITR Ab+纳武单抗增加了CD8记忆细胞的增殖和活化。显示了效应记忆CD8细胞的增殖(用Ki67标志物量度)或活化(用HLA-DR标志物量度)相对基线的倍数变化。GITR抗体和纳武单抗的给药时间用箭头表示。
图5显示了宫颈癌患者在基线(治疗前)和联合240mg 28F3.IgG1和240mg纳武单抗治疗期间(“2017年4月”和“2017年5月”)的肿瘤截面。用圆圈显示肿瘤大小的变化。
图6显示了Vater壶腹腺癌患者在基线处(治疗前)和联合240mg28F3.IgG1和240mg纳武单抗治疗期间(“2017年12月”)的肿瘤截面。用圆圈显示肿瘤大小的变化。图7显示了抗PD-1治疗进展之后的黑色素瘤患者在基线处(治疗前)和联合100mg 28F3.IgG1和240mg纳武单抗治疗期间(“2017年12月”)的肿瘤截面。用圆圈显示肿瘤大小的变化。
图8显示了抗PD-1治疗进展之后的鼻咽癌患者在基线处(治疗前)和联合240mg28F3.IgG1和240mg纳武单抗治疗期间(“2017年2月”)的肿瘤截面。用圆圈显示肿瘤大小的变化。
图9是用于新型免疫调节蛋白治疗剂的FIH安全起始剂量选择方法的示意图。
图10是28F3.IgG1首次人体剂量选择策略的示意图。
图11是用于首次人体剂量选择的数据分析方法的示意图。
图12是显示在指示浓度的28F3.IgG1下NK细胞活化的图。
图13是DTA1-mIgG2a在CT26小鼠肿瘤模型中的给药方案的示意图。
图14是显示在指示剂量的DTAmIgG2a下在细胞植入后第12天在CD8+T细胞中的Ki67阳性细胞百分比的图。
图15是显示用指示剂量的DTAmIgG2a治疗的CT26小鼠肿瘤模型的肿瘤中CD8+ T细胞/Treg细胞比率的图。
图16是显示在指示剂量的DTAmIgG2a下无肿瘤小鼠的时间进程的图。
图17是显示基于小鼠功效数据(无肿瘤小鼠)的人有效剂量的推算的图。
发明详述
本文中提供了用抗GITR激动剂(例如抗体)以及抗PD-1或抗PD-L1(“PD-1/PD-L1轴”)拮抗剂(例如抗体)治疗癌症的方法。
定义
为了更易于理解本说明，首先对某些术语进行了定义。其他定义在整个详细说明中进行阐述。
如本文中使用的术语“糖皮质激素诱导的TNF受体”或“GITR”是指一种与GITR配体(GITR-L)结合的受体，其为TNF受体超家族的成员。GITR也称为肿瘤坏死因子受体超家族成员18(TNFRSF18)、AITR和CD357。术语“GITR”包括由细胞天然表达的GITR的任何变体或同种型。因此，本文所述的抗体可与来自除了人以外的物种的GITR(例如，食蟹猴GITR)交叉反应。或者，抗体对人GITR可以是特异的，而与其他物种可能不展现出任何交叉反应性。GITR或其任何变体和同种型可以分离自天然表达它们的细胞或组织，或使用本领域熟知的技术和/或本文所述的技术以重组方式产生。
已经鉴定了人GITR的三个同种型，三者均共有相同的细胞外结构域，但C端部分除外。变体1(登录号NP_004186；SEQ ID NO：1)由241个氨基酸组成，代表最长的转录物。与变体2相比，其含有导致移码的额外编码区段。与同种型2相比，所得的蛋白质(同种型1)含有不同的较短的C端。变体2(登录号NP_683699；SEQ ID NO：2)编码最长的蛋白质(同种型2)，其由255个氨基酸组成，且是可溶的。与变体2相比，变体3(登录号NP_683700；SEQ ID NO：3)含有导致移码的额外编码区段。与同种型2相比，所得的蛋白质(同种型3)含有不同的较短的C端，且由234个氨基酸组成。
以下是三个已知的人GITR同种型、食蟹猴GITR和GITR-L的氨基酸序列。
人GITR同种型1(登录号NP_004186；SEQ ID NO：1；由具有登录号NM_004195.2的核苷酸序列编码)：
Figure BDA0002361346870000041
人GITR同种型2(登录号NP_683699.1；SEQ ID NO：2；由具有登录号NM_148901.1的核苷酸序列编码)：
Figure BDA0002361346870000042
人GITR同种型3(登录号NP_683700.1；SEQ ID NO：3；由具有登录号NM_148902.1的核苷酸序列编码)：
Figure BDA0002361346870000043
同种型1-3的信号序列对应于氨基酸1-25。因此，成熟同种型1、2和3分别由氨基酸26至241、255或234组成。成熟GITR的细胞外结构域由氨基酸26-162组成且具有以下氨基酸序列：
Figure BDA0002361346870000044
食蟹猴GITR蛋白序列(SEQ ID NO：5)：
Figure BDA0002361346870000045
Figure BDA0002361346870000051
人GITR-L蛋白序列(登录号NP_005083.2；SEQ ID NO：6)：
Figure BDA0002361346870000052
如本文中使用的术语“抗体”包括全抗体及其任何抗原结合片段(即“抗原结合部分”)或单链。在一个实施方案中，“抗体”是指包含由二硫键互连的至少两条重(H)链和两条轻(L)链的糖蛋白或其抗原结合部分。每条重链包含重链可变区(在本文中缩写为VH)和重链恒定区。在某些天然存在的抗体中，重链恒定区包含三个结构域CH1、CH2和CH3。在某些天然存在的抗体中，每条轻链包含轻链可变区(在本文中缩写为VL)和轻链恒定区。轻链恒定区包含一个结构域CL。VH区和VL区可以进一步细分为高变区，称为互补决定区(CDR)，互补决定区与更为保守的被称为框架区(FR)的区域间隔。VH和VL各自由3个CDR和4个FR组成，按下列顺序从氨基端到羧基端排列：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。重链和轻链的可变区含有与抗原相互作用的结合结构域。抗体的恒定区可介导免疫球蛋白与宿主组织或因子(包括免疫系统的各种细胞(例如，效应细胞)和经典补体系统的第一组分(C1q))结合。
抗体一般以高亲和力与其同源抗原特异性结合，反映在解离常数(KD)上为10-5到10-11M或更小。大于约10-4M的任何KD通常被认为指示非特异性结合。如本文中使用的，与抗原“特异性结合”的抗体是指以高亲和力与抗原及基本上相同的抗原结合的抗体，高亲和力意味着KD为10-7M或更小、优选地10-8M或更小、甚至更优选地5x 10-9M或更小、最优选地在10-8M和10-10M之间或更小，但是不会以高亲和力与无关抗原结合。如果一种抗原相对于给定抗原展现出高度的序列同一性，例如如果它相对于给定抗原的序列展现出至少80％、至少90％、优选地至少95％、更优选地至少97％、或者甚至更优选地至少99％的序列同一性，则该抗原与给定抗原“基本上相同”。作为举例，与人GITR特异性结合的抗体也可以和来自某些灵长类物种的GITR抗原(例如，食蟹猴GITR)具有交叉反应性，但是不会和来自其他物种的GITR抗原、或者与除GITR之外的抗原交叉反应。
免疫球蛋白可来自公知的同种型中的任一者，包括但不限于IgA、分泌型IgA、IgG和IgM。IgG同种型在某些物种中分成亚类：在人类中为IgG1、IgG2、IgG3和IgG4，在小鼠中为IgG1、IgG2a、IgG2b和IgG3。在某些实施方案中，本文所述的抗GITR抗体属IgG1或IgG2亚型。免疫球蛋白(例如，IgG1)存在若干同种异型，这些同种异型以至多少数个氨基酸而彼此不同。作为举例，“抗体”包括天然和非天然抗体；单克隆和多克隆抗体；嵌合和人源化抗体；人和非人抗体；全合成抗体；以及单链抗体。抗体可以是抗体多聚体(或多聚抗体)例如二聚体、三聚体、四聚体、五聚体和六聚体的一部分。
如本文中使用的，术语“单克隆抗体”是指对特定表位展示单一结合特异性和亲和力的抗体，或其中所有抗体都对特定表位展示单一结合特异性和亲和力的抗体组合物。因此，术语“人单克隆抗体”指展示单一结合特异性且具有衍生自人种系免疫球蛋白序列的可变区和任选的恒定区的抗体或抗体组合物。在一个实施方案中，人单克隆抗体由杂交瘤产生，所述杂交瘤包括与永生化细胞融合的获自转基因非人动物(例如，转基因小鼠)的B细胞，所述B细胞的基因组包含人重链转基因和轻链转基因。
“人”抗体(HuMAb)是指具有如下可变区的抗体，其中框架区和CDR区都衍生自人种系免疫球蛋白序列。此外，如果抗体含有恒定区，则恒定区也衍生自人种系免疫球蛋白序列。本文所述抗体可以包括并非由人种系免疫球蛋白序列编码的氨基酸残基(例如，通过体外随机诱变或定点诱变或者通过体内体细胞突变引入的突变)。然而，如本文中使用的，术语“人抗体”预期不包括这样的抗体：其中源自另一个哺乳动物物种种系比如小鼠的CDR序列被移植到人框架序列上。术语“人”抗体和“全人”抗体可作为同义词使用。
“人源化”抗体是指这样的抗体，其中非人抗体CDR结构域外部的一些、大多数或全部氨基酸被衍生自人免疫球蛋白的相应氨基酸代替。在人源化抗体形式的一个实施方案中，CDR结构域外部的一些、大多数或全部氨基酸被来自人免疫球蛋白的氨基酸代替，而一个或多个CDR区域内的一些、大多数或全部氨基酸没有改变。氨基酸的少量添加、缺失、插入、取代或修饰也允许的，只要它们不会消除抗体结合特定抗原的能力即可。“人源化”抗体保留与原始抗体相似的抗原特异性。
“嵌合抗体”是指这样的抗体：其中可变区衍生自一个物种而恒定区衍生自另一个物种，比如这样的抗体：其中可变区衍生自小鼠抗体而恒定区衍生自人抗体。
如本文中使用的，“同种型”是指由重链恒定区基因编码的抗体类别(例如，IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgM、IgA1、IgA2、IgD和IgE抗体)。
“同种异型”是指特定同种型组内的天然存在的变体，所述变体有少数氨基酸不同(例如，参见Jefferis等人(2009)mAbs 1∶1)。本文所述抗体可属于任何同种异型。如本文中使用的，称为“IgG1f”或“IgG1.1f”同种型的抗体分别是同种异型“f”的IgG1抗体及无效应子的IgG1.1抗体，即根据如Kabat中的EU索引具有214R、356E和358M，正如例如SEQ ID NO：7中所示(参见表2的SEQ ID NO：7中的加下划线的残基)。
短语“识别抗原的抗体”和“对抗原特异的抗体”在本文中可与术语“与抗原特异性地结合的抗体”互换使用。
如本文中使用的“分离的抗体”意指基本上不含具有不同抗原特异性的其他抗体的抗体(例如，与GITR特异性地结合的分离的抗体基本上不含与除GITR以外的抗原特异性地结合的抗体)。然而，与GITR的表位特异性结合的分离的抗体可与来自不同物种的其他GITR蛋白具有交叉反应性。
“程序性死亡-1(PD-1)”是指属于CD28家族的免疫抑制受体。PD-1主要在体内表达于预先活化的T细胞，并与两个配体PD-L1和PD-L2结合。如本文中使用的术语“PD-1”包括人PD-1(hPD-1)，hPD-1的变体、同种型、和物种同源物，以及与hPD-1具有至少一个共同表位的类似物。完整的hPD-1序列可以GenBank登录号U64863找到。
“程序性死亡配体-1(PD-L1)”为PD-1的两种细胞表面糖蛋白配体之一(另一种为PD-L2)，其在与PD-1结合时下调T细胞活化和细胞因子分泌。如本文中使用的术语“PD-L1”包括人PD-L1(hPD-L1)，hPD-L1的变体、同种型、和物种同源物，以及与hPD-L1具有至少一个共同表位的类似物。完整的hPD-L1序列可以GenBank登录号Q9NZQ7找到。
“Fc区”(片段可结晶区)或“Fc结构域”或“Fc”是指介导免疫球蛋白与宿主组织或因子的结合(包括与位于免疫系统的各种细胞(例如，效应细胞)上的Fc受体或与经典补体系统的第一组分(C1q)结合))的抗体重链C端区。因此，Fc区包含抗体的恒定区，但第一恒定区免疫球蛋白结构域(例如，CH1或CL)除外。在IgG、IgA和IgD抗体同种型中，Fc区包含衍生自抗体的两条重链的第二(CH2)和第三(CH3)恒定结构域的两个相同的蛋白质片段；IgM和IgE Fc区在每一多肽链中包含三个重链恒定结构域(CH结构域2-4)。对于IgG而言，Fc区包含免疫球蛋白结构域Cγ2和Cγ3及以及在Cγ1与Cγ2之间的铰链。虽然免疫球蛋白重链的Fc区的边界可以变化，但通常将人IgG重链Fc区定义为从位置C226或P230处的氨基酸残基(或这两个氨基酸之间的氨基酸)延伸至重链的羧基端，其中编号的根据是如Kabat中的EU索引。人IgG Fc区的CH2结构域从约氨基酸231延伸至约氨基酸340，而CH3结构域位于Fc区中的CH2结构域的C端侧上，即，其从IgG的约氨基酸341延伸至约氨基酸447。如本文中使用的，Fc区可以是天然序列Fc(包括任何同种异型变体)或变体Fc(例如，非天然存在的Fc)。Fc还可以是指这个区域处于分离状态或处于包含Fc的蛋白多肽的背景下，所述包含Fc的蛋白多肽例如“包含Fc区的结合蛋白”，也称为“Fc融合蛋白”(例如，抗体或免疫粘附素)。
“天然序列Fc区”或“天然序列Fc”包含与自然界中发现的Fc区的氨基酸序列相同的氨基酸序列。天然序列人Fc区包括天然序列人IgG1 Fc区；天然序列人IgG2 Fc区；天然序列人IgG3 Fc区；和天然序列人IgG4 Fc区以及其天然存在的变体。天然序列Fc包括Fc的各种同种异型(例如，参见Jefferis等人(2009)mAbs 1：1)。
“铰链”、“铰链结构域”或“铰链区”或“抗体铰链区”是指重链恒定区中将CH1结构域与CH2结构域连接的结构域，其包括铰链的上部、中间及下部部分(Roux等人，J.Immunol.1998 161：4083)。铰链提供在抗体的结合区与效应子区之间的不同程度的柔性，并且还提供在两个重链恒定区之间的分子间二硫键键合的位点。如本文中使用的，对于所有IgG同种型而言，铰链始于Glu216且止于Gly237(Roux等人，1998J Immunol 161：4083)。野生型IgG1、IgG2、IgG3和IgG4铰链的序列示于表1和表2中。
表1.铰链区氨基酸序列
Figure BDA0002361346870000081
Figure BDA0002361346870000091
术语“铰链”包括野生型铰链(如在表1或2中列出的那些)以及其变体(例如，非天然存在的铰链或修饰的铰链)。例如，术语“IgG2铰链”包括如表1或2中所示的野生型IgG2铰链以及具有1、2、3、4、5、1-3、1-5、3-5和/或至多5、4、3、2或1个突变(例如，取代、缺失或添加)的变体。示例性IgG2铰链变体包括其中1、2、3或全部4个半胱氨酸(C219、C220、C226及C229)变为另一个氨基酸的IgG2铰链。在特定实施方案中，IgG2包含C219S取代。在某些实施方案中，铰链是包含来自至少两个同种型的序列的杂合铰链。例如，铰链可包含来自一个同种型的上部、中间或下部铰链，且铰链的其余部分来自一个或多个其他同种型。例如，铰链可以是IgG2/IgG1铰链，且可包含，例如，IgG2的上部和中间铰链以及IgG1的下部铰链。铰链可具有效应子功能或丧失效应子功能。例如，野生型IgG1的下部铰链提供效应子功能。
术语“CH1结构域”是指重链恒定结构域中将可变结构域与铰链连接的重链恒定区。如本文中使用的，CH1结构域始于A118且止于V215。术语“CH1结构域”包括野生型CH1结构域(例如，对于IgG1，具有SEQ ID NO：278；对于IgG2，具有SEQ ID NO：279；表2)以及其变体(例如，非天然存在的CH1结构域或修饰的CH1结构域)。例如，术语“CH1结构域”包括野生型CH1结构域以及具有1、2、3、4、5、1-3、1-5、3-5个和/或至多5、4、3、2或1个突变(例如，取代、缺失或添加)的变体。示例性CH1结构域包括具有改变抗体的生物活性(比如ADCC、CDC或半衰期)的突变的CH1结构域。本文中提供了影响抗体的生物活性的CH1结构域的修饰。
术语“CH2结构域”是指重链恒定结构域中将铰链与CH3结构域连接的重链恒定区。如本文中使用的，CH2结构域始于P238且止于K340。术语“CH2结构域”包括野生型CH2结构域(例如，对于IgG1，具有SEQ ID NO：280；对于IgG2，具有SEQ ID NO：297；表2)以及其变体(例如，非天然存在的CH2结构域或修饰的CH2结构域)。例如，术语“CH2结构域”包括野生型CH2结构域以及具有1、2、3、4、5、1-3、1-5、3-5个和/或至多5、4、3、2或1个突变(例如，取代、缺失或添加)的变体。示例性CH2结构域包括具有改变抗体的生物活性(比如ADCC、CDC或半衰期)的突变的CH2结构域。在某些实施方案中，CH2结构域包含降低效应子功能的取代A330S/P331S。本文中提供了影响抗体的生物活性的CH2结构域的其他修饰。
术语“CH3结构域”是指重链恒定结构域中在CH2结构域C端的重链恒定区。如本文中使用的，CH3结构域始于G341且止于K447。术语“CH3结构域”包括野生型CH3结构域(例如，对于IgG1，具有SEQ ID NO：282；对于IgG2，具有SEQ ID NO：298；表2)以及其变体(例如，非天然存在的CH3结构域或修饰的CH3结构域)。例如，术语“CH3结构域”包括野生型CH3构域以及具有1、2、3、4、5、1-3、1-5、3-5个和/或至多5、4、3、2或1个突变(例如，取代、缺失或添加)的变体。示例性CH3结构域包括具有改变抗体的生物活性(比如ADCC、CDC或半衰期)的突变的CH3结构域。本文中提供了影响抗体的生物活性的CH3结构域的修饰。
“天然序列Fc区”或“天然序列Fc”包含与自然界中发现的Fc区的氨基酸序列相同的氨基酸序列。天然序列人Fc区包括天然序列人IgG1 Fc区；天然序列人IgG2 Fc区；天然序列人IgG3 Fc区；和天然序列人IgG4 Fc区以及其天然存在的变体。天然序列Fc包括Fc的各种同种异型(例如，参见Jefferis等人(2009)mAbs 1：1)。
术语“表位”或“抗原决定簇”是指免疫球蛋白或抗体与其特异性地结合的抗原(例如，GITR)上的位点。表位可由蛋白质的连续氨基酸形成(通常是线性表位)，或者由通过蛋白质的三级折叠而并置的非连续氨基酸形成(通常是构象表位)。由连续氨基酸形成的表位在暴露于变性溶剂时通常会但不总是保留，而通过三级折叠形成的表位在用变性溶剂处理时通常会丧失。表位一般包括处于独特空间构象的至少3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15个氨基酸。用于确定什么表位被给定抗体结合的方法(即，表位作图)是本领域熟知的，并且包括，例如，免疫印迹测定法和免疫沉淀测定法，其中测试了重叠或连续肽(例如，来自GITR的)与给定抗体(例如，抗GITR抗体)的反应性。确定表位空间构象的方法包括本领域和本文中描述的那些技术，例如，X射线晶体学、2维核磁共振和HDX-MS(参见，例如，EpitopeMapping Protocols in Methods in Molecular Biology，Vol.66，G.E.Morris，Ed.(1996))。
术语“表位作图”是指鉴定抗体-抗原识别的分子决定簇的过程。
关于两种或更多种抗体的术语“与相同表位结合”意指所述抗体与相同的氨基酸残基区段结合，正如通过给定方法所确定。确定抗体与本文所述的抗体是否结合“GITR上的相同表位”的技术包括，例如，表位作图方法，例如抗原：抗体复合物的晶体的x射线分析，其提供表位的原子解析，以及氢/氘交换质谱(HDX-MS)。其他方法监测抗体与抗原片段或抗原的突变变异的结合，其中由于抗原序列内氨基酸残基的修饰导致的结合丧失经常被认为是表位组分的指示。另外，还可以使用表位作图的计算组合方法。这些方法依赖于感兴趣的抗体从组合噬菌体展示肽文库中亲和分离特异性短肽的能力。预期具有相同VH和VL或相同CDR1、2和3序列的抗体结合相同的表位。
“与另一抗体竞争结合靶标”的抗体是指抑制(部分或完全地)另一抗体与靶标结合的抗体。可使用已知的竞争实验确定两个抗体是否彼此竞争结合靶标，即，一个抗体是否抑制另一抗体与靶标的结合及其抑制程度。在某些实施方案中，抗体与另一抗体竞争结合靶标且使另一抗体与靶标的结合抑制至少10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或100％。抑制或竞争的程度可取决于哪个抗体是“阻断抗体”(即，先与靶标一起温育的冷抗体)而不同。竞争测定法可如下所述进行：例如，Harlow和David Lane编辑的ColdSpring Harb Protoc；2006；doi：10.1101/pdb.prot4277或“Using Antibodies”的第11章，Harlow和David Lane编辑，Cold Spring Harbor Laboratory Press，Cold SpringHarbor，NY，USA 1999。竞争性抗体结合相同的表位、重叠表位或相邻表位(例如，如通过空间位阻所证明的)。
其他的竞争性结合测定法包括：固相直接或间接放射免疫测定(RIA)、固相直接或间接酶免疫测定(EIA)、夹心竞争测定(参见Stahli等人，Methods in Enzymology 9：242(1983))；固相直接生物素-亲和素EIA(参见Kirkland等人，J.Immunol.137：3614(1986))；固相直接标记测定、固相直接标记夹心测定(参见Harlow和Lane，Antibodies：ALaboratory Manual，Cold Spring Harbor Press(1988))；使用I-125标记物的固相直接标记RIA(参见Morel等人，Mol.Immunol.25(1)：7(1988))；固相直接生物素-亲和素EIA(Cheung等人，Virology 176：546(1990))；和直接标记RIA(Moldenhauer等人，Scand.J.Immunol.32：77(1990))。
如本文中使用的，术语“特异性结合”、“选择性结合”、“选择性地结合”、和“特异性地结合”是指抗体与预定抗原上的表位的结合。一般来说，抗体(i)在通过(例如)在BIACORE2000仪器中使用预定抗原(例如，重组人GITR)作为分析物和抗体作为配体的表面等离子体共振(SPR)技术、或抗体与抗原阳性细胞的结合的Scatchard分析测定时，以约低于10-7M、比如约低于10-8M、10-9M或10-10M或甚至更低的平衡解离常数(KD)结合，及(ii)结合预定抗原的亲和力较其与预定抗原或密切相关抗原以外的非特异性抗原(例如，BSA、酪蛋白)的结合亲和力大至少两倍。因此，“与人GITR特异性地结合”的抗体是指以10-7M或更低，例如约低于10-8M、10-9M或10-10 M或甚至更低的KD与可溶性或细胞结合的人GITR结合的抗体。“与食蟹猴GITR交叉反应”的抗体是指以10-7M或更低，例如约低于10-8M、10-9M或10-10M或甚至更低的KD与食蟹猴GITR的结合的抗体。在某些实施方案中，这些不与来自非人物种的GITR交叉反应的抗体在标准结合测定中基本上未显示可检测出的针对这些蛋白质的结合。
如本文中使用的，适用于某一客体的术语“天然存在”是指这样的事实，即所述客体可以在自然界中找到。例如，可以从自然界的来源分离但是尚未在实验室中被人有意修饰的存在于生物(包括病毒)中的多肽或多核苷酸序列是天然存在的。
“多肽”是指包含至少两个连续连接的氨基酸残基的链，链的长度没有上限。多肽中的一个或多个氨基酸残基可含有修饰，例如但不限于，糖基化、磷酸化或二硫键形成。“蛋白质”可包含一个或多个多肽。
如本文中使用的，术语“核酸分子”意图包括DNA分子和RNA分子。核酸分子可以是单链或双链的，并且可以是cDNA。
还提供了在本文中(例如，表2中)列出的序列比如在SEQ ID NO：13-191中的“保守序列修饰”，即，不消除由核苷酸序列编码或含有氨基酸序列的抗体与抗原的结合的核苷酸和氨基酸序列修饰。这样的保守序列修饰包括保守核苷酸和氨基酸取代、以及核苷酸及氨基酸添加和缺失。例如，可通过本领域已知的标准技术(例如定点诱变和PCR介导的诱变)向表2中的序列(例如SEQ ID NO：13-191)中引入修饰。“保守氨基酸取代”包括其中氨基酸残基被具有相似侧链的氨基酸残基置换的取代。本领域中已经定义了具有相似侧链的氨基酸残基的家族。这些家族包括具有碱性侧链的氨基酸(例如，赖氨酸、精氨酸、组氨酸)、具有酸性侧链的氨基酸(例如，天冬氨酸、谷氨酸)、具有不带电荷的极性侧链的氨基酸(例如，甘氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、半胱氨酸、色氨酸)、具有非极性侧链的氨基酸(例如，丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸)、具有β分支侧链的氨基酸(例如，苏氨酸、缬氨酸、异亮氨酸)及具有芳香族侧链的氨基酸(例如，酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、组氨酸)。因此，抗GITR抗体中的预测的非必需氨基酸残基优选被来自相同侧链家族的另一氨基酸残基置换。鉴定不消除抗原结合的核苷酸和氨基酸保守取代的方法是本领域熟知的(例如，参见Brummell等人，Biochem.32：1180-1187(1993)；Kobayashi等人，Protein Eng.12(10)：879-884(1999)；和Burks等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 94：412-417(1997))。或者，在某些实施方案中，可以例如通过饱和诱变沿着抗GITR抗体编码序列的全部或一部分随机引入突变，并且可以筛选所得的修饰的抗GITR抗体的结合活性。
对于多肽而言，术语“实质同源性”表明，两个多肽或它们的指定序列在最佳比对和比较时有至少约80％的氨基酸、通常至少约90％至95％且更优选至少约98％至99.5％的氨基酸相同，其中适当插入或缺失氨基酸。
考虑为了两个序列的最佳比对而需要引入的空位的数目和每个空位的长度，两个序列之间的同一性百分比是序列所共有的相同位置的数目的函数(即，同源性％＝相同位置#/总位置#x 100)。序列的比较和两个序列之间同一性百分比的确定可以使用数学算法来完成，如下文的非限制性实施例所述。
也可以使用纳入ALIGN程序(2.0版)中的E.Meyers和W.Miller(CABIOS，4：11-17(1989))的算法，使用PAM120权重残基表、空位长度罚分12、和空位罚分4，确定两个核苷酸或氨基酸序列之间的同一性百分比。另外，可以使用纳入GCG软件包(可在http://www.gcg.com获得)中的GAP程序中的Needleman和Wunsch(J.Mol.Biol.(48)：444-453(1970))算法，使用Blossum 62矩阵或PAM250矩阵，空位权重16、14、12、10、8、6、或4，长度权重1、2、3、4、5、或6，确定两个氨基酸序列之间的同一性百分比。
本文所述核酸和蛋白质序列可以进一步用作“查询序列”针对公共数据库进行搜索，以便例如鉴定相关序列。可以使用Altschul等人，(1990)J.Mol.Biol.215：403-10的NBLAST和XBLAST程序(2.0版)进行这样的搜索。可以用NBLAST程序以得分＝100、字长＝12进行BLAST核苷酸搜索，以获得与本文所述核酸分子同源的核苷酸序列。可以用XBLAST程序以得分＝50、字长＝3进行BLAST蛋白质搜索，以获得与本文所述蛋白质分子同源的氨基酸序列。出于比较的目的，为了获得带空位的比对，可以如Altschul等人，(1997)NucleicAcids Res.25(17)：3389-3402所述利用带空位的BLAST。当利用BLAST和带空位的BLAST程序时，可以使用对应程序(例如，XBLAST和NBLAST)的默认参数。参见www.ncbi.nlm.nih.gov.
“免疫应答”是指脊椎动物内针对外来物质的生物应答，所述应答保护生物抵抗这些物质和由它们引起的疾病。免疫应答由免疫系统的细胞(例如，T淋巴细胞、B淋巴细胞、自然杀伤(NK)细胞、巨噬细胞、嗜酸性粒细胞、肥大细胞、树突细胞或嗜中性粒细胞)及由这些细胞中的任一者或肝产生的可溶性大分子(包括抗体、细胞因子和补体)的作用介导，其导致侵入病原体的脊椎动物身体、病原体感染的细胞或组织、癌性或其他异常细胞、或在自身免疫或病理性炎症的情况下的正常人细胞或组织的选择性靶向、结合、损伤、破坏和/或消除。免疫应答包括例如T细胞(例如，效应T细胞)或Th细胞(比如CD4+或CD8+ T细胞)的活化或抑制或Treg细胞的抑制。
“免疫调制剂”或“免疫调节剂”是指可能涉及调制、调节或修饰免疫应答的作用剂，例如信号转导通路的组分。“调制”、“调节”或“修饰”免疫应答指免疫系统的细胞或这些细胞(例如，效应T细胞)的活性的任何改变。这样的调制包括免疫系统的刺激或抑制，其可表现为各种细胞类型的数目的增加或减少、这些细胞的活性的增加或降低、或可在免疫系统内发生的任何其他变化。已经鉴定了抑制性和刺激性免疫调制剂，其中一些在肿瘤微环境中可具有增强的功能。在优选的实施方案中，免疫调制剂位于T细胞表面上。“免疫调制性靶标”或“免疫调节性靶标”是被某种物质、作用剂、模块、化合物或分子靶向结合，且其活性通过所述结合而被改变的免疫调制剂。免疫调制性靶标包括例如细胞表面上的受体(“免疫调制性受体”)和受体配体(“免疫调制性配体”)。
术语“免疫疗法”是指通过包括诱导、增强、抑制或以其他方式修饰免疫应答在内的方法治疗罹患疾病或处于患上疾病或遭受疾病复发风险的受试者。
“免疫刺激疗法”或“免疫刺激性疗法”是指引起受试者中的免疫应答增加(诱导或增强)以便例如治疗癌症的疗法。
“增强内源性免疫应答”意指增加受试者中现有的免疫应答的有效性或效力。这种有效性和效力的增加可通过例如克服抑制内源性宿主免疫应答的机制或通过刺激增强内源性宿主免疫应答的机制来实现。
“效应T”(“Teff”)细胞指具有细胞溶解活性的T细胞(例如，CD4+和CD8+T细胞)以及T辅助(Th)细胞，其分泌细胞因子且激活和指导其他免疫细胞，但不包括调节性T细胞(Treg细胞)。本文所述的抗GITR抗体激活Teff细胞，例如CD4+和CD8+ Teff细胞。
刺激免疫应答或免疫系统的能力提高可以来自T细胞共刺激受体的激动剂活性增强和/或抑制性受体的拮抗剂活性增强。可以在测量免疫应答的测定法中，例如在测量细胞因子或趋化因子释放、细胞溶解活性(在靶细胞上直接测定或经由检测CD107a或颗粒酶间接测定)以及增殖方面的变化的测定法中，通过EC50或最大活性水平的倍数增加反映刺激免疫应答或免疫系统的能力提高。刺激免疫应答或免疫系统活性的能力可增强至少10％、30％、50％、75％、2倍、3倍、5倍或更多。
可以通过例如测量与抗体接触过的T细胞的IFN-γ或IL-2的分泌水平来确定抗体的激动剂活性。一种激动剂(例如抗体)的激动剂活性相对于另一种激动剂可以高至少10％、30％、50％、75％、2倍、3倍、5倍或更多，正如通过以下所定义：效应T细胞的细胞因子释放增加或增殖增加；调节性T细胞活性的降低(如果Treg上的接合降低Treg功能的话)；或Treg耗竭增加。例如，用第一激动剂例如抗体刺激的T细胞分泌的IFN-γ或IL-2的量，与用第二激动剂例如抗体刺激的T细胞相比，可以高至少10％、30％、50％、75％、2倍、3倍、5倍或更多。
配体或受体的“激动剂”是反映天然配体/受体相互作用的活性的药剂。28F3.IgG1是示例性GITR激动性抗体。
配体或受体的“拮抗剂”是抑制配体和受体之间相互作用的药剂。纳武单抗是示例性PD-1拮抗剂抗体。
如本文中使用的，术语“连接”是指两个或更多个分子的结合。连接可以是共价或非共价的。连接也可以是遗传的(即，重组融合)。这样的连接可以使用多种本领域公认的技术来实现，比如化学缀合和重组蛋白生产。
如本文中使用的，“给药”是指使用本领域技术人员已知的各种方法和递送系统中的任何一种(例如静脉内)将包含治疗剂的组合物以物理方式引入到受试者中。本文所述抗体的给药途径包括静脉内、腹膜内、肌内、皮下、脊柱或其他肠胃外给药途径(例如通过注射或输注)。如本文中使用的短语“肠胃外给药”是指通常通过注射而不是肠内和局部给药的给药方式，包括但不限于静脉内、腹膜内、肌内、动脉内、鞘内、淋巴管内、病灶内、囊内、眶内、心内、皮内、经气管、皮下、表皮下、关节内、囊下、蛛网膜下、脊柱内、硬膜外和胸骨内注射和输注、以及体内电穿孔。或者，本文所述抗体可经由非肠胃外途径施用，比如局部、表皮或粘膜施用途径，例如鼻内、经口、阴道、直肠、舌下或局部。还可以例如一次、多次、和/或经一个或多个延长的时期进行给药。
如本文中使用的术语“T细胞介导的应答”是指由T细胞(包括效应T细胞(例如，CD8+细胞)和辅助T细胞(例如，CD4+细胞))介导的应答。T细胞介导的应答包括例如T细胞细胞毒性和增殖。
如本文中使用的术语“细胞毒性T淋巴细胞(CTL)应答”指由细胞毒性T细胞诱导的免疫应答。CTL应答主要由CD8+T细胞介导。
如本文中使用的，术语“抑制”或“阻断”(例如，在提及抑制/阻断GITR-L与细胞上的GITR或PD-1与细胞上的PD-L1或PD-L2的结合时)可互换使用，并且涵盖部分和完全抑制/阻断。在一些实施方案中，例如，正如本文中进一步描述所确定的，抗GITR抗体将GITR-L与GITR的结合抑制至少约50％，例如约60％、70％、80％、90％、95％、99％或100％。在一些实施方案中，例如，正如本文中进一步描述所确定的，抗GITR抗体将GITR-L与GITR的结合抑制不超过50％，例如约40％、30％、20％、10％、5％或1％。
如本文中使用的，术语“抑制肿瘤的生长”包括肿瘤生长的任何可测量的降低，例如，肿瘤生长抑制至少约10％，例如至少约20％、至少约30％、至少约40％、至少约50％、至少约60％、至少约70％、至少约80％、至少约90％、至少约99％或100％。
如本文中使用的，“癌症”是指以体内异常细胞的不受控制的生长为特征的广泛的疾病。不受调节的细胞分裂可以导致恶性肿瘤或细胞的形成，所述恶性肿瘤或细胞侵袭邻近组织并且可能通过淋巴系统或血流转移到身体的远处部位。
如本文中使用的术语“治疗”(“treat”)、“治疗”(“treating”)和“治疗”(“treatment”)是指为了逆转、减轻、改善、抑制、或减缓或预防与疾病相关的症状进展、发展、严重性或复发、并发症、病症或生化标记而对受试者进行的或施用活性剂的任何类型的干预或过程。治疗可针对患有疾病的受试者或无疾病的受试者(例如，用于预防)。
“血液恶性肿瘤”包括淋巴瘤、白血病、骨髓瘤或淋巴恶性肿瘤以及脾和淋巴结的癌症。示例性淋巴瘤包括B细胞淋巴瘤(B细胞血液癌)和T细胞淋巴瘤。B细胞淋巴瘤包括霍奇金淋巴瘤和大部分非霍奇金淋巴瘤。B细胞淋巴瘤的非限制性实例包括弥漫性大B细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、粘膜相关淋巴组织淋巴瘤、小细胞淋巴细胞性淋巴瘤(与慢性淋巴细胞白血病重叠)、套细胞淋巴瘤(MCL)、伯基特淋巴瘤(Burkitt′s lymphoma)、纵膈大B细胞淋巴瘤、瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症、结内边缘区B细胞淋巴瘤、脾边缘区淋巴瘤、血管内大B细胞淋巴瘤、原发性渗出性淋巴瘤、淋巴瘤样肉芽肿病。T细胞淋巴瘤的非限制性实例包括结外T细胞淋巴瘤、皮肤T细胞淋巴瘤、间变性大细胞淋巴瘤和血管免疫母细胞T细胞淋巴瘤。血液恶性肿瘤还包括白血病，例如但不限于继发性白血病、慢性淋巴细胞白血病、急性髓性白血病、慢性髓性白血病和急性淋巴母细胞白血病。血液恶性肿瘤进一步包括骨髓瘤，例如但不限于多发性骨髓瘤和冒烟型多发性骨髓瘤。术语血液恶性肿瘤涵盖其他血液和/或B细胞-或T细胞-相关的癌症。
术语“有效剂量”或“有效药量”被定义为足以实现或者至少部分实现期望效果的量。药物或治疗剂的“治疗有效量”或“治疗有效剂量”是药物的在单独或与其他治疗剂联合使用时能够促进疾病消退的任何量，其中疾病消退的证据是疾病症状的严重程度降低、疾病无症状期的频率或持续时间增加、或防止由于疾病痛苦导致的损害或失能。药物的治疗有效量或剂量包括“预防有效量”或“预防有效剂量”，这是药物的在对具有疾病发生风险或正在遭受疾病复发的受试者单独或与其他治疗剂联合给药时能够抑制疾病发生或复发的任何量。治疗剂促进疾病消退或抑制疾病发生或复发的能力可以使用多种技术人员已知的方法进行评估，例如在临床试验期间的人类受试者中，在预测在人体内效力的动物模型系统中，或者通过体外测定法中测定药剂的活性。
作为举例，抗癌剂是促进受试者体内癌症消退的药物。在优选的实施方案中，药物的治疗有效量促进癌症消退直至癌症消除。“促进癌症消退”是指有效量的药物单独给药或与抗肿瘤剂联合给药导致肿瘤生长降低或大小变小、肿瘤坏死、至少一种疾病症状的严重程度降低、疾病无症状期的频率和持续时间增加、防止由于疾病痛苦导致的损害或失能、或者以其他方式缓解患者的疾病症状。另外，对于治疗而言，术语“有效的”和“有效性”既包括药理有效性也包括生理安全性。药理有效性是指药物促进患者体内癌症消退的能力。生理安全性是指毒性水平或其他的由于药物施用导致的细胞、器官和/或生物体水平上的不良生理效应(不良作用)的水平。
作为肿瘤治疗的实例，相对于未治疗的受试者，治疗有效量或治疗有效剂量的药物优选抑制细胞生长或肿瘤生长的至少约20％，更优选地至少约40％，甚至更优选地至少约60％，并且还更优选地至少约80％。在最优选的实施方案中，治疗有效量或剂量的药物完全抑制细胞生长或肿瘤生长，即，优选地抑制细胞生长或肿瘤生长的100％。化合物抑制肿瘤生长的能力可以使用下文描述的测定法进行评价。或者，组合物的这种特性可以通过检验所述化合物抑制细胞生长的能力加以评价，这种抑制可以通过本领域技术人员已知的测定法进行体外测量。在本文所述的其他优选的实施方案中，肿瘤消退可以观察到，并且持续的时期为至少约20天，更优选地至少约40天，或甚至更优选地至少约60天。
术语“患者”包括接受预防性或治疗性治疗的人和其他哺乳动物受试者。
如本文中使用的，术语“受试者”包括任何人或非人类的动物。例如，本文所述的方法和组合物可用于治疗患有癌症的受试者。
“治疗协同作用”是指在用治疗剂联合疗法患者情况下的一种现象，相对于所述联合的以其最佳剂量使用的每个单独成分所实现的结果，联合疗法表现出在治疗上优越的结果(Corbett，T.H.等人，Cancer Treatment Reports，66：1187(1982))。例如，在治疗上优越的结果是其中患者a)在获得治疗益处的同时表现出更少的不良事件的发生率，该治疗益处等于或大于所述联合的单独成分各自以与所述联合中相同的剂量作为单一疗法施用时的治疗益处，或者b)在获得治疗益处的同时未表现出剂量限制性毒性，该治疗益处大于所述联合中的每个单独的成分在每个成分以与所述联合中相同的剂量作为单独组分施用时的治疗益处。
治疗癌症的方法
可以将抗GITR激动剂，比如抗GITR激动性抗体，以3mg、10mg、30mg、100mg、240mg、480mg、600mg、800mg或1000mg的单一剂量的抗GITR激动剂(例如抗体)按照每周一次、每两周一次、每3周一次、每4周一次、每5周一次、每6周一次、每7周一次或每8周一次施用于患有癌症例如晚期实体瘤的受试者。可以按照8周的周期进行治疗，例如一个8周的周期，两个8周的周期，三个8周的周期，四个8周的周期，五个8周的周期，六个8周的周期或更长时间。一个周期可以包括8、7、6、5、4、3、2或1次施用抗GITR激动剂，比如抗体。一个周期优选包括4次施用，每两周施用一次。治疗可为单一疗法或为联合疗法的一部分。
可以将抗GITR激动剂，例如抗体，以3mg、10mg、30mg、100mg、200mg、240mg、250mg、300mg、400mg、480mg、500mg、600mg、700mg、800mg、900mg或1000mg(例如30mg至1000mg；30mg至800mg；100mg至800mg；100mg至600mg)的单一剂量的抗GITR激动剂(例如抗体)，以连同抗PD-1或抗PD-L1拮抗剂例如抗体的联合疗法形式，按照每周一次、每两周一次、每3周一次、每4周一次、每5周一次、每6周一次、每7周一次或每8周一次施用于患有癌症例如晚期实体瘤的受试者。可以按照8周的周期进行治疗，例如一个8周的周期，两个8周的周期，三个8周的周期，四个8周的周期，五个8周的周期，六个8周的周期或更长时间。可按照例如100-500mg、200mg-500mg、100-300mg，比如200-300mg、220-260mg、230-250mg、120mg、240mg或480mg的单一剂量施用抗PD-1或抗PD-L1拮抗剂，例如抗体。
可以将抗GITR激动剂，例如抗体，以单一疗法或联合疗法(“第一疗法”)的形式施用于患有癌症例如晚期实体瘤的受试者，持续1-6个周期，随后是休息期(“随访期”)，然后用抗GITR激动剂例如抗体以单一疗法或联合疗法(“第二疗法”)的形式再治疗。可以在第一疗法的最后剂量之后的6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16或更多个月内施用所述再治疗(即第二疗法)的第一剂量。在某些实施方案中，在第一疗法的最后剂量的12个月内施用再治疗的第一剂量。
示例性的联合疗法包括抗GITR激动剂，例如抗体，以及抗PD-1或抗PD-L1拮抗剂，例如，拮抗剂抗体。在某些实施方案中，首先输注抗GITR激动剂，例如抗体，然后输注PD-1或PD-L1拮抗剂。例如，可以通过输注持续30-60分钟的时段来施用抗GITR剂，例如抗体，随后经30-60分钟的时段输注抗PD-1或抗PD-L1剂。在某些实施方案中，通过输注持续30-60分钟的时段来施用抗PD-1或抗PD-L1剂，随后经30-60分钟的时段输注抗GITR激动剂，例如抗体。在某些实施方案中，两次输注分开一定的时间段，例如10分钟、30分钟、60分钟、2小时、3小时、6小时、12小时、24小时、10分钟至12小时、10分钟至6小时、10分钟至3小时或20分钟至2小时。
可以同时施用抗GITR激动剂，例如抗体，以及抗PD-1或抗PD-L1拮抗剂，例如抗体，并且可以将它们共同配制。
一种示例性的联合疗法包括与抗PD-1抗体纳武单抗联合施用抗GITR激动剂，例如抗体。可以每两周以240mg的固定剂量施用纳武单抗。
抗GITR激动剂，例如抗体，可以通过输注施用，例如经过至少30分钟例如30-60或30-90分钟的时段输注。例如，可以通过经30分钟的时段或60分钟的时段输注来施用抗GITR激动剂，例如抗体。例如，通过输注给药的抗GITR剂(例如抗体)可以被提供为1mg/ml、2mg/ml、3mg/ml、4mg/ml、5mg/ml、6mg/ml、7mg/ml、8mg/ml、9mg/ml、10mg/ml、20mg/ml或更高的制剂。
一种示例性治疗(例如单一疗法)包括对患有晚期实体瘤的受试者施用1mg固定剂量的抗GITR激动剂，例如抗体，例如其施用经过60分钟静脉内输注，每2周一次。一种治疗可包括对患有晚期实体瘤的受试者施用3mg固定剂量的抗GITR激动剂，例如抗体，例如其施用经过60分钟静脉内输注，每2周一次。一种治疗可包括对患有晚期实体瘤的受试者施用10mg固定剂量的抗GITR激动剂，例如抗体，例如其施用经过60分钟静脉内输注，每2周一次。一种治疗可包括对患有晚期实体瘤的受试者施用30mg固定剂量的抗GITR激动剂，例如抗体，例如其施用经过60分钟静脉内输注，每2周一次。一种治疗可包括对患有晚期实体瘤的受试者施用100mg固定剂量的抗GITR激动剂，例如抗体，例如其施用经过60分钟静脉内输注，每2周一次。一种治疗可包括对患有晚期实体瘤的受试者施用240mg固定剂量的抗GITR激动剂，例如抗体，例如其施用经过800分钟静脉内输注，每2周一次。一种治疗可包括对患有晚期实体瘤的受试者施用800mg固定剂量的抗GITR激动剂，例如抗体，例如其施用经过800分钟静脉内输注，每2周一次。
示例性联合疗法包括对患有晚期实体瘤的受试者施用1mg固定剂量的抗GITR激动剂，例如抗体，以及240mg固定剂量的抗PD-1或抗PD-L1拮抗剂，例如纳武单抗，两者一起或分开施用，通过一次或两次静脉内输注，例如每次经过30-60分钟，每2周一次。一种治疗可包括对患有晚期实体瘤的受试者施用3mg固定剂量的抗GITR激动剂，例如抗体，以及240mg固定剂量的抗PD-1或抗PD-L1拮抗剂，例如纳武单抗，两者一起或分开施用，通过一次或两次静脉内输注，例如每次经过30-60分钟，每2周一次。一种治疗可包括对患有晚期实体瘤的受试者施用10mg固定剂量的抗GITR激动剂，例如抗体，以及240mg固定剂量的抗PD-1或抗PD-L1拮抗剂，例如纳武单抗，两者一起或分开施用，通过一次或两次静脉内输注，例如每次经过30-60分钟，每2周一次。一种治疗可包括对患有晚期实体瘤的受试者施用30mg固定剂量的抗GITR激动剂，例如抗体，以及240mg固定剂量的抗PD-1或抗PD-L1拮抗剂，例如纳武单抗，两者一起或分开施用，通过一次或两次静脉内输注，例如每次经过30-60分钟，每2周一次。一种治疗可包括对患有晚期实体瘤的受试者施用100mg固定剂量的抗GITR激动剂，例如抗体，以及240mg固定剂量的抗PD-1或抗PD-L1拮抗剂，例如纳武单抗，两者一起或分开施用，通过一次或两次静脉内输注，例如每次经过30-60分钟，每2周一次。一种治疗可包括对患有晚期实体瘤的受试者施用240mg固定剂量的抗GITR激动剂，例如抗体，以及240mg固定剂量的抗PD-1或抗PD-L1拮抗剂，例如纳武单抗，两者一起或分开施用，通过一次或两次静脉内输注，例如每次经过30-60分钟，每2周一次。一种治疗可包括对患有晚期实体瘤的受试者施用800mg固定剂量的抗GITR激动剂，例如抗体，以及240mg固定剂量的抗PD-1或抗PD-L1拮抗剂，例如纳武单抗，两者一起或分开施用，通过一次或两次静脉内输注，例如每次经过30-60分钟，每2周一次。联合疗法可表现出治疗协同作用。
一种示例性联合疗法包括对患有晚期实体瘤的受试者施用1mg固定剂量的抗GITR激动剂，例如抗体，以及120mg固定剂量的抗PD-1或抗PD-L1拮抗剂，例如纳武单抗，两者一起或分开施用，通过一次或两次静脉内输注，例如每次经过30-60分钟，每周一次。一种治疗可包括对患有晚期实体瘤的受试者施用3mg固定剂量的抗GITR激动剂，例如抗体，以及120mg固定剂量的抗PD-1或抗PD-L1拮抗剂，例如纳武单抗，两者一起或分开施用，通过一次或两次静脉内输注，例如每次经过30-60分钟，每周一次。一种治疗可包括对患有晚期实体瘤的受试者施用10mg固定剂量的抗GITR激动剂，例如抗体，以及120mg固定剂量的抗PD-1或抗PD-L1拮抗剂，例如纳武单抗，两者一起或分开施用，通过一次或两次静脉内输注，例如每次经过30-60分钟，每周一次。一种治疗可包括对患有晚期实体瘤的受试者施用30mg固定剂量的抗GITR激动剂，例如抗体，以及120mg固定剂量的抗PD-1或抗PD-L1拮抗剂，例如纳武单抗，两者一起或分开施用，通过一次或两次静脉内输注，例如每次经过30-60分钟，每周一次。一种治疗可包括对患有晚期实体瘤的受试者施用100mg固定剂量的抗GITR激动剂，例如抗体，以及120mg固定剂量的抗PD-1或抗PD-L1拮抗剂，例如纳武单抗，两者一起或分开施用，通过一次或两次静脉内输注，例如每次经过30-60分钟，每周一次。一种治疗可包括对患有晚期实体瘤的受试者施用240mg固定剂量的抗GITR激动剂，例如抗体，以及120mg固定剂量的抗PD-1或抗PD-L1拮抗剂，例如纳武单抗，两者一起或分开施用，通过一次或两次静脉内输注，例如每次经过30-60分钟，每周一次。一种治疗可包括对患有晚期实体瘤的受试者施用800mg固定剂量的抗GITR激动剂，例如抗体，以及120mg固定剂量的抗PD-1或抗PD-L1拮抗剂，例如纳武单抗，两者一起或分开施用，通过一次或两次静脉内输注，例如每次经过30-60分钟，每周一次。联合疗法可表现出治疗协同作用。
一种示例性联合疗法包括对患有晚期实体瘤的受试者施用1mg固定剂量的抗GITR激动剂，例如抗体，以及360mg固定剂量的抗PD-1或抗PD-L1拮抗剂，例如纳武单抗，两者一起或分开施用，通过一次或两次静脉内输注，例如每次经过30-60分钟，每3周一次。一种治疗可包括对患有晚期实体瘤的受试者施用3mg固定剂量的抗GITR激动剂，例如抗体，以及360mg固定剂量的抗PD-1或抗PD-L1拮抗剂，例如纳武单抗，两者一起或分开施用，通过一次或两次静脉内输注，例如每次经过30-60分钟，每3周一次。一种治疗可包括对患有晚期实体瘤的受试者施用10mg固定剂量的抗GITR激动剂，例如抗体，以及360mg固定剂量的抗PD-1或抗PD-L1拮抗剂，例如纳武单抗，两者一起或分开施用，通过一次或两次静脉内输注，例如每次经过30-60分钟，每3周一次。一种治疗可包括对患有晚期实体瘤的受试者施用30mg固定剂量的抗GITR激动剂，例如抗体，以及360mg固定剂量的抗PD-1或抗PD-L1拮抗剂，例如纳武单抗，两者一起或分开施用，通过一次或两次静脉内输注，例如每次经过30-60分钟，每3周一次。一种治疗可包括对患有晚期实体瘤的受试者施用100mg固定剂量的抗GITR激动剂，例如抗体，以及360mg固定剂量的抗PD-1或抗PD-L1拮抗剂，例如纳武单抗，两者一起或分开施用，通过一次或两次静脉内输注，例如每次经过30-60分钟，每3周一次。一种治疗可包括对患有晚期实体瘤的受试者施用240mg固定剂量的抗GITR激动剂，例如抗体，以及360mg固定剂量的抗PD-1或抗PD-L1拮抗剂，例如纳武单抗，两者一起或分开施用，通过一次或两次静脉内输注，例如每次经过30-60分钟，每3周一次。一种治疗可包括对患有晚期实体瘤的受试者施用360mg固定剂量的抗GITR激动剂，例如抗体，以及360mg固定剂量的抗PD-1或抗PD-L1拮抗剂，例如纳武单抗，两者一起或分开施用，通过一次或两次静脉内输注，例如每次经过30-60分钟，每3周一次。一种治疗可包括对患有晚期实体瘤的受试者施用460mg固定剂量的抗GITR激动剂，例如抗体，以及360mg固定剂量的抗PD-1或抗PD-L1拮抗剂，例如纳武单抗，两者一起或分开施用，通过一次或两次静脉内输注，例如每次经过30-60分钟，每3周一次。一种治疗可包括对患有晚期实体瘤的受试者施用600mg固定剂量的抗GITR激动剂，例如抗体，以及360mg固定剂量的抗PD-1或抗PD-L1拮抗剂，例如纳武单抗，两者一起或分开施用，通过一次或两次静脉内输注，例如每次经过30-60分钟，每3周一次。一种治疗可包括对患有晚期实体瘤的受试者施用800mg固定剂量的抗GITR激动剂，例如抗体，以及360mg固定剂量的抗PD-1或抗PD-L1拮抗剂，例如纳武单抗，两者一起或分开施用，通过一次或两次静脉内输注，例如每次经过30-60分钟，每3周一次。联合疗法可表现出治疗协同作用。
一种示例性联合疗法包括对患有晚期实体瘤的受试者施用1mg固定剂量的抗GITR激动剂，例如抗体，以及480mg固定剂量的抗PD-1或抗PD-L1拮抗剂，例如纳武单抗，两者一起或分开施用，通过一次或两次静脉内输注，例如每次经过30-60分钟，每4周一次。一种治疗可包括对患有晚期实体瘤的受试者施用3mg固定剂量的抗GITR激动剂，例如抗体，以及480mg固定剂量的抗PD-1或抗PD-L1拮抗剂，例如纳武单抗，两者一起或分开施用，通过一次或两次静脉内输注，例如每次经过30-60分钟，每4周一次。一种治疗可包括对患有晚期实体瘤的受试者施用10mg固定剂量的抗GITR激动剂，例如抗体，以及480mg固定剂量的抗PD-1或抗PD-L1拮抗剂，例如纳武单抗，两者一起或分开施用，通过一次或两次静脉内输注，例如每次经过30-60分钟，每4周一次。一种治疗可包括对患有晚期实体瘤的受试者施用30mg固定剂量的抗GITR激动剂，例如抗体，以及480mg固定剂量的抗PD-1或抗PD-L1拮抗剂，例如纳武单抗，两者一起或分开施用，通过一次或两次静脉内输注，例如每次经过30-60分钟，每4周一次。一种治疗可包括对患有晚期实体瘤的受试者施用100mg固定剂量的抗GITR激动剂，例如抗体，以及480mg固定剂量的抗PD-1或抗PD-L1拮抗剂，例如纳武单抗，两者一起或分开施用，通过一次或两次静脉内输注，例如每次经过30-60分钟，每4周一次。一种治疗可包括对患有晚期实体瘤的受试者施用240mg固定剂量的抗GITR激动剂，例如抗体，以及480mg固定剂量的抗PD-1或抗PD-L1拮抗剂，例如纳武单抗，两者一起或分开施用，通过一次或两次静脉内输注，例如每次经过30-60分钟，每4周一次。一种治疗可包括对患有晚期实体瘤的受试者施用360mg固定剂量的抗GITR激动剂，例如抗体，以及480mg固定剂量的抗PD-1或抗PD-L1拮抗剂，例如纳武单抗，两者一起或分开施用，通过一次或两次静脉内输注，例如每次经过30-60分钟，每4周一次。一种治疗可包括对患有晚期实体瘤的受试者施用480mg固定剂量的抗GITR激动剂，例如抗体，以及480mg固定剂量的抗PD-1或抗PD-L1拮抗剂，例如纳武单抗，两者一起或分开施用，通过一次或两次静脉内输注，例如每次经过30-60分钟，每4周一次。一种治疗可包括对患有晚期实体瘤的受试者施用600mg固定剂量的抗GITR激动剂，例如抗体，以及480mg固定剂量的抗PD-1或抗PD-L1拮抗剂，例如纳武单抗，两者一起或分开施用，通过一次或两次静脉内输注，例如每次经过30-60分钟，每4周一次。一种治疗可包括对患有晚期实体瘤的受试者施用800mg固定剂量的抗GITR激动剂，例如抗体，以及480mg固定剂量的抗PD-1或抗PD-L1拮抗剂，例如纳武单抗，两者一起或分开施用，通过一次或两次静脉内输注，例如每次经过30-60分钟，每4周一次。联合疗法可表现出治疗协同作用。
可以将抗GITR激动剂例如抗体施用于患有肺癌比如非小细胞肺癌(NSCLC)的患者，例如在先前的铂双联化疗期间或之后有进行性或复发性疾病，随后在后续的抗PD-1或抗PD-L1治疗期间或之后有复发性或进行性疾病(根据RECIST v1.1)的NSCLC受试者。可以将抗GITR激动剂例如抗体施用于患有宫颈癌比如持续性、复发性或转移性宫颈癌的患者。
可以将抗GITR激动剂(例如抗体)与抗PD-1或抗PD-L1剂(例如纳武单抗)联合施用于以下类型的受试者中：(i)在先前的铂双联化疗期间或之后有进行性或复发性疾病，随后在后续的抗PD-1或抗PD-L1治疗期间或之后有进行性或复发性疾病(根据RECIST v1.1)的NSCLC受试者；(ii)在先前没有抗PD-1或抗PD-L1疗法的情况下的铂双联化疗期间或之后有进行性或复发性疾病的NSCLC受试者；以及(iii)持续性、复发性或转移性宫颈癌。
治疗(例如单一疗法)可由多达三个8周的治疗周期组成，其中，例如，每个治疗周期包含4个剂量的抗GITR激动剂，例如抗体，在治疗周期的第1、15、29和43天每2周施用一次。对于联合疗法，每个治疗周期可包括4个剂量的抗GITR激动剂(例如抗体)(在第1、15、29和43天施用)，其与在治疗周期的第1、15、29和43天施用的4个剂量的抗PD-1或PD-L1剂例如纳武单抗联合。当给予抗GITR激动剂(例如抗体)和抗PD-1或抗PD-L1剂时，可以先给予抗PD-1或抗PD-L1剂，然后在完成抗PD-1或抗PD-L1剂的输注之后至少30分钟(例如30分钟至3小时、4小时或5小时)给予抗GITR激动剂(例如抗体)。
大致完成24周(例如6个月)的持续疾病控制(完全缓解(CR)、部分缓解(PR)或病情稳定(SD)或未经证实的进行性疾病(PD))治疗的受试者除了最初24周之外可以接受另外3个周期的单一疗法或联合疗法。
可以通过放射学肿瘤评估(例如，肿瘤扫描)和临床肿瘤评估来监测癌症，例如，每12周或每6个月一次。
接受抗GITR激动剂(例如抗体)作为单一疗法或作为联合疗法一部分的患者可能患有化学疗法后NSCLC或晚期/转移性宫颈癌。
在每个治疗周期后，基于肿瘤评估(例如，在每个周期的第49和56天之间进行的并且在下一个周期的第一剂量之前完成的评估)，可以决定用另外周期的抗GITR激动剂(例如抗体)作为单一疗法或联合疗法来治疗受试者。可以使用针对实体瘤的RECIST v1.1标准来评估肿瘤进展或反应终点。
在用抗GITR激动剂例如抗体作为单一疗法或联合疗法治疗患有NSCLC的受试者的某些实施方案中，受试者在铂双联化疗期间或之后患有进行性或复发性疾病；具有非鳞状组织学的受试者具有已知的EGFR和ALK状态；具有激活的EGFR突变的受试者已接受EGFR酪氨酸激酶抑制剂；并且/或者具有ALK易位的受试者已接受ALK抑制剂。
在用抗GITR激动剂例如抗体作为单一疗法或联合疗法治疗的患有实体瘤例如晚期实体瘤比如宫颈癌的受试者的某些实施方案中，受试者患有记录的疾病进展的持续性、复发性或转移性宫颈癌；受试者具有鳞状、腺鳞状或腺癌组织学；受试者已针对持续性、复发性或转移性疾病接受了一种先前的全身化疗方案(例如紫杉醇/顺铂、紫杉醇/顺铂/贝伐单抗)；受试者在初级放射的同时接受化学疗法(例如每周一次顺铂)，放射疗法完成后被给予辅助化学疗法，或者同时接受化学疗法和放射疗法(例如紫杉醇和卡铂最多4个周期)；受试者是HPV阳性或阴性；受试者的ECOG体能状态≤1；受试者具有由用于实体瘤的RECISTv1.1所定义的可测量疾病的至少一个病灶、和/或病灶表现出明显的进展并且可以准确测量；受试者先前暴露于任何特异性地靶向检查点途径抑制的药剂(比如抗PD-1、抗PD-L1、抗PDL-2、抗LAG-3、抗CTLA-4抗体)的治疗，优选具有从最后一次治疗起大于4周的任何时间的洗脱期；受试者经历过先前的1至2级检查点疗法相关的免疫介导的不良事件，在开始抗GITR激动剂(例如抗体)治疗时，除了用补充给药法治疗的内分泌病外，受试者被证实可能已经或尚未从这些事件中恢复，正如通过所有相关的临床症状、体格检查的异常发现和/或相关的实验室异常的消退所证明；和/或受试者先前有≥3级检查点治疗相关的免疫不良事件；受试者先前接受了用任何特异性地靶向T细胞共刺激途径的药剂比如抗CD137、抗OX40抗体治疗，优选具有从最后一次治疗起大于4周的任何时间的洗脱期；受试者先前的姑息性放疗已经完成，例如，在第一剂量的抗GITR激动剂例如抗体治疗之前至少2周完成；受试者具有在基线的症状性肿瘤病灶；受试者在第一剂量的抗GITR激动剂(例如抗体)治疗的4周内接受了姑息性放疗；和/或对于具有实体瘤组织学的受试者，受试者具有足够的器官功能，其定义如下：1)WBC≥2000/μL(第一次给药4周内稳定脱离任何生长因子)；2)中性粒细胞≥1500/μL(在第一次给药4周内稳定脱离任何生长因子)；3)血小板≥100x103/μL(不允许为了达到这个水平在第一次给药2周内输血)；4)血红蛋白≥8.5g/dL；5)ALT和AST≤3xULN；6)总胆红素≤1.5x ULN(吉尔伯特综合征受试者例外，其必须具有正常的直接胆红素)；7)甲状腺功能正常、亚临床甲状腺功能减退((TSH＜10mIU/mL)或通过适当补充甲状腺素可控制甲状腺功能减退；8)血清肌酐≤1.5x ULN或肌酐清除率(CrCl)≥40ml/min(使用下面的Cockcroft-Gault公式测量)：女性CrCl＝(140-年龄)x体重(kg)x 0.8572x血清肌酐(mg/dL)，男性CrCl＝(140-年龄)x体重(kg)x 1.0072x血清肌酐(mg/dL)。
接受本文所述治疗的患者可以是具有实施例1中列出的一项或多项纳入标准的患者，或者是不具有实施例1中列出的一项或多项排除标准的患者。
在具有实体瘤例如晚期实体瘤比如宫颈癌的受试者用抗GITR激动剂例如抗体作为单一疗法或联合疗法治疗的某些实施方案中，受试者没有已知或可疑的中枢神经系统(CNS)转移、未治疗的CNS转移，或者，以CNS为唯一疾病部位，不过受试者的脑转移可能已受到控制(即放射和/或手术治疗后至少4周没有影像学进展(如果临床上没有干预指征，则需进行4周的观察)，并且脱离类固醇至少2周，并且没有新的或进行性的神经系统体征和症状；受试者没有已知的癌性脑膜炎。
在某些实施方案中，用抗GITR激动性抗体治疗的方法包括将抗GITR激动剂例如抗体施用于受试者的一个或多个肿瘤例如实体瘤中。施用到肿瘤中可以是通过注射进入肿瘤中。在某些实施方案中，通过肠胃外(例如静脉内或皮下)施用抗GITR剂例如抗体，并且直接施用到一个或多个肿瘤中(即肿瘤内)。本文所述用于施用抗体的任何剂量都可用于瘤内给药。或者，本文所述的一半剂量通过肠胃外给药，而另一半剂量通过瘤内给药。在某些实施方案中，将0.01-10mg的抗GITR剂例如抗体以单剂量，或者例如，每周一次、每2周一次、每3周一次或每月一次以瘤内方式施用于受试者，直到肿瘤缩小为止。例如，将0.01mg、0.05mg、0.1mg、0.5mg、1mg、2mg、5mg、7mg或10mg的抗GITR剂例如抗体以单剂量、每周一次、每2周一次、每3周一次或每月一次以瘤内方式施用，直到肿瘤缩小为止。在某些实施方案中，可以施用较低量的药剂，例如抗体，例如1μg、3μg、5μg、10μg、25μg、50μg或100μg。
可以将抗PD-1或PD-L1拮抗剂抗体与抗GITR激动剂例如抗体共同施用到受试者的一个或多个肿瘤中。可以在施用抗GITR剂例如抗体的同时、之前或之后施用抗PD-1或PD-L1抗体。例如，可在将抗GITR剂例如抗体注射到肿瘤中的同时将抗PD-1或PD-L1抗体注射到肿瘤中。在某些实施方案中，在施用到肿瘤中之前将两种药剂共同配制。在某些实施方案中，通过肠胃外施用一种药剂，并且将另一种药剂直接施用到一个或多个肿瘤中。例如，通过肠胃外施用抗PD-1剂(例如抗体)或PD-L1剂(例如抗体)，并且以瘤内方式施用抗GITR剂，例如抗体。
抗GITR激动剂(例如抗体)单独或与抗PD-1或抗PD-L1拮抗剂(例如抗体，例如纳武单抗)联合的抗肿瘤活性可以通过相对于用安慰剂治疗的受试者增加总生存期得到证明，例如增加1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、16、24个月或更长时间。可以通过测量客观缓解率(ORR)来确定治疗的有效性。可以通过Clopper和Pearson方法确定ORR和相应的双侧精确95％精确置信区间。可以确定中位缓解持续时间和相应的双侧95％置信区间。可以使用Kaplan-Meier方法分析缓解持续时间。可以通过Kaplan-Meier方法估计无进展生存率(PFSR)，即受试者保持无进展或存活至24周的概率。可以基于格林伍德公式推导出相应的90％置信区间。可以使用Kaplan-Meier方法绘制总生存期。
GITR激动剂
GITR激动剂是增强通常由GITR和GITRL之间的相互作用产生的活性的药剂。在某些实施方案中，GITR激动剂是抗体或其变体，比如其多聚体，或单链或抗原结合片段或双特异性剂。在某些实施方案中，GITR激动剂是人GITRL或其变体，比如其片段、融合蛋白(包含GITRL的全长或GITR结合片段)或GITRL的全长或GITR结合片段的多聚体。示例性GITR激动剂包括以下抗体或其多聚体或基于GITRL的分子：
TRX518；MK-4166；MK-1248；Medi 1873；AMG 228；LKZ-145；GWN-323；INCAGN01876；iNBRX-110(FPA-154)；CK-302；OMP-336B11；Regeneron/Sanofi抗GITR抗体；HERA-GITR-配体；或以下任一出版物中所述的GITR激动剂：WO06/105021；WO201I/028683；JP2008278814；US20140072566；US20140072565；US20140065152；WO2015/031667；WO/2015/116178；WO2015/184099；WO/2016/054638；WO2016/057841；WO2016/057846；CN105669867；WO/2016/126781；WO/2017/015623；WO/2017/025610；WO/2017/068185；和WO/2017/068186，将其各自通过提述明确并入本文。
抗GITR抗体
用于本文所述方法中的抗GITR激动性抗体可以是单克隆抗体，特别是特异性地结合GITR并具期望的功能特性的人单克隆抗体，所述功能特性例如与人GITR的高亲和力结合和刺激抗原特异性T细胞应答的能力。还可以使用这样的抗体的抗原结合片段。
在一个方面，与GITR结合的抗GITR激动性抗体或其抗原结合部分可表现出以下特 性中的至少一种：
(a)与可溶性人GITR结合；
(b)与膜结合的人GITR结合；
(c)与膜结合的食蟹猴GITR结合；
(d)诱导或增强T细胞活化，例如，抗原特异性T细胞活化；
(e)抑制GITR配体与3A9-hGITR细胞上的GITR结合；
(f)至多部分地抑制GITR配体与活化的T细胞上的GITR结合；
(g)与成熟人GITR(SEQ ID NO：4)上的构象表位结合；
(h)与O-连接的和N-糖基化的及未糖基化的人GITR结合；
(i)在没有与Fc受体结合时具有激动剂活性，但其中与Fc受体的结合进一步增强激动剂活性；及
(j)在任一方向或两个方向上与抗体28F3、3C3-1、3C3-2、2G6、8A6、9G7-1、9G7-2、14E3、19H8-1、19H8-2、19D3、18E10及6G10中的一者或多者竞争结合人GITR。
在某些实施方案中，本文所述抗GITR激动性抗体或其抗原结合部分刺激抗肿瘤免疫应答，例如，抗原特异性T细胞应答。在某些实施方案中，抗GITR激动性抗体或其抗原结合部分增加表达GITR的T细胞中的细胞因子(例如，IL-2和/或IFN-γ)产生和/或增加T细胞增殖。
在某些实施方案中，抗GITR激动性抗体或其抗原结合部分不与Fc受体结合。在某些实施方案中，抗GITR激动性抗体或其抗原结合部分结合一种或多种FcγR，例如活化或抑制性FcγR。
在某些实施方案中，抗GITR激动性抗体或其抗原结合部分以如通过Biacore测量的100nM或更小的KD与可溶性人GITR结合，以如通过Scatchard测量的10nM或更小的KD与膜结合的人GITR结合，以如通过FACS测量的1nM或更小的EC50与膜结合的人GITR结合，以如通过FACS测量的10nM或更小的EC50与膜结合的食蟹猴GITR结合，诱导或增强T细胞(例如Teff细胞)活化而无需多价交联，以如通过FACS测量的1μg/mL或更小的EC50抑制GITR配体与GITR结合，和/或结合在成熟人GITR(SEQ ID NO：4)的区域PTGGPGCGPGRLLLGTGT(SEQ ID NO：217)和CRDYPGEE(SEQ ID NO：218)内。
本文中提供了分离的抗GITR激动剂单克隆抗体或其抗原结合部分，其与GITR特异性地结合并且包含选自以下序列的呈可变重链和可变轻链对的三个可变重链CDR和三个可变轻链CDR：
(a)SEQ ID NO：13和14；
(b)SEQ ID NO：26和27；
(c)SEQ ID NO：39和40；
(d)SEQ ID NO：52和53；
(e)SEQ ID NO：52和54；
(f)SEQ ID NO：71和72；
(g)SEQ ID NO：84和85；
(h)SEQ ID NO：97和98；
(i)SEQ ID NO：97和99；
(j)SEQ ID NO：115和116；
(k)SEQ ID NO：128和129；
(1)SEQ ID NO：128和130；以及
(m)SEQ ID NO：335和336。
本文中提供了分离的抗GITR激动剂单克隆抗体或其抗原结合部分，其与GITR结合并且包含：
(a)分别包含SEQ ID NO：20、21和22的重链CDR1、CDR2和CDR3序列，和/或分别包含SEQ ID NO：23、24和25的轻链CDR1、CDR2和CDR3序列；
(b)分别包含SEQ ID NO：33、34和35的重链CDR1、CDR2和CDR3序列，和/或分别包含SEQ ID NO：36、37和38的轻链CDR1、CDR2和CDR3序列；
(c)分别包含SEQ ID NO：46、47和48的重链CDR1、CDR2和CDR3序列，和/或分别包含SEQ ID NO：49、50和51的轻链CDR1、CDR2和CDR3序列；
(d)分别包含SEQ ID NO：62、63和64的重链CDR1、CDR2和CDR3序列，和/或分别包含SEQ ID NO：65、66和67的轻链CDR1、CDR2和CDR3序列；
(e)分别包含SEQ ID NO：62、63和64的重链CDR1、CDR2和CDR3序列，和/或分别包含SEQ ID NO：68、69和70的轻链CDR1、CDR2和CDR3序列；
(f)分别包含SEQ ID NO：78、79和80的重链CDR1、CDR2和CDR3序列，和/或分别包含SEQ ID NO：81、82和83的轻链CDR1、CDR2和CDR3序列；
(g)分别包含SEQ ID NO：91、92和93的重链CDR1、CDR2和CDR3序列，和/或分别包含SEQ ID NO：94、95和96的轻链CDR1、CDR2和CDR3序列；
(h)分别包含SEQ ID NO：106、107和108的重链CDR1、CDR2和CDR3序列，和/或分别包含SEQ ID NO：109、110和111的轻链CDR1、CDR2和CDR3序列；
(i)分别包含SEQ ID NO：106、107和108的重链CDR1、CDR2和CDR3序列，和/或分别包含SEQ ID NO：112、113和114的轻链CDR1、CDR2和CDR3序列；
(j)分别包含SEQ ID NO：122、123和124的重链CDR1、CDR2和CDR3序列，和/或分别包含SEQ ID NO：125、126和127的轻链CDR1、CDR2和CDR3序列；
(k)分别包含SEQ ID NO：138、139和140的重链CDR1、CDR2和CDR3序列，和/或分别包含SEQ ID NO：141、142和143的轻链CDR1、CDR2和CDR3序列；
(1)分别包含SEQ ID NO：138、139和140的重链CDR1、CDR2和CDR3序列，和/或分别包含SEQ ID NO：144、145和146的轻链CDR1、CDR2和CDR3序列；或
(m)分别包含SEQ ID NO：342、343和344的重链CDR1、CDR2和CDR3序列，和/或分别包含SEQ ID NO：345、346和347的轻链CDR1、CDR2和CDR3序列。
本文中提供了与GITR结合并且包含重链和轻链可变区的分离的抗GITR激动剂单克隆抗体或其抗原结合部分，其中所述重链可变区包含与选自下组的氨基酸序列至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列：SEQ ID NO：13、26、39、52、71、84、97、115、128和335。
本文中提供了与GITR结合并且包含重链和轻链可变区的分离的抗GITR激动剂单克隆抗体或其抗原结合部分，其中所述轻链可变区包含与选自下组的氨基酸序列至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列：SEQ ID NO：14、27、40、53、54、72、85、98、99、116、129、130和336。
本文中提供了与GITR结合并且包含重链和轻链可变区序列的分离的抗GITR激动性抗体例如单克隆抗体或其抗原结合部分，所述重链和轻链可变区序列与选自下组的氨基酸序列至少85％相同，例如90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同：
(a)分别为SEQ ID NO：13和14；
(b)分别为SEQ ID NO：26和27；
(c)分别为SEQ ID NO：39和40；
(d)分别为SEQ ID NO：52和53；
(e)分别为SEQ ID NO：52和54；
(f)分别为SEQ ID NO：71和72；
(g)分别为SEQ ID NO：84和85；
(h)分别为SEQ ID NO：97和98；
(i)分别为SEQ ID NO：97和99；
(j)分别为SEQ ID NO：115和116；
(k)分别为SEQ ID NO：128和129；
(1)分别为SEQ ID NO：128和130；以及
(m)分别为SEQ ID NO：335和336。
本文中提供了与GITR结合并且包含重链和轻链序列的分离的抗GITR激动性抗体例如单克隆抗体或其抗原结合部分，所述重链和轻链序列与选自下组的氨基酸序列至少80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同：
(a)分别为SEQ ID NO：15和16；
(b)分别为SEQ ID NO：17和19；
(c)分别为SEQ ID NO：18和19；
(d)分别为SEQ ID NO：28和29；
(e)分别为SEQ ID NO：30和32；
(f)分别为SEQ ID NO：31和32；
(g)分别为SEQ ID NO：41和42；
(h)分别为SEQ ID NO：43和45；
(i)分别为SEQ ID NO：44和45；
(j)分别为SEQ ID NO：55和56；
(k)分别为SEQ ID NO：55和57；
(1)分别为SEQ ID NO：58和60；
(m)分别为SEQ ID NO：59和60；
(n)分别为SEQ ID NO：58和61；
(o)分别为SEQ ID NO：59和61；
(p)分别为SEQ ID NO：73和74；
(q)分别为SEQ ID NO：75和77；
(r)分别为SEQ ID NO：76和77；
(s)分别为SEQ ID NO：86和87；
(t)分别为SEQ ID NO：88和90；
(u)分别为SEQ ID NO：89和90；
(v)分别为SEQ ID NO：102和104；
(w)分别为SEQ ID NO：103和104；
(x)分别为SEQ ID NO：100和101；
(y)分别为SEQ ID NO：100和371；
(z)分别为SEQ ID NO：102和105；
(za)分别为SEQ ID NO：103和105；
(zb)分别为SEQ ID NO：117和118；
(zc)分别为SEQ ID NO：119和121；
(zd)分别为SEQ ID NO：120和121；
(ze)分别为SEQ ID NO：131和132；
(zf)分别为SEQ ID NO：134和136；
(zg)分别为SEQ ID NO：135和136；
(zh)分别为SEQ ID NO：131和133；
(zi)分别为SEQ ID NO：134和137；
(zj)分别为SEQ ID NO：135和137；
(zk)分别为SEQ ID NO：337和338；
(zl)分别为SEQ ID NO：339和341；以及
(zm)分别为SEQ ID NO：340和341。
还提供了包含与28F3、3C3-1、3C3-2、2G6、8A6、9G7-1、9G7-2、14E3、19H8-1、19H8-2、19D3、18E10和/或6G10的相应CDR因有1、2、3、4、5、1-2、1-3、1-4或1-5个氨基酸变化(即，氨基酸取代、添加或缺失)而不同的VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、VLCDR1、VLCDR2和/或VLCDR3的抗GITR激动性抗体。在某些实施方案中，相对于28F3、3C3-1、3C3-2、2G6、8A6、9G7-1、9G7-2、14E3、19H8-1、19H8-2、19D3、18E10和/或6G10中的相应序列，抗GITR抗体包含在1、2、3、4、5或6个CDR的每一个中的1-5个氨基酸变化。在某些实施方案中，相对于28F3、3C3-1、3C3-2、2G6、8A6、9G7-1、9G7-2、14E3、19H8-1、19H8-2、19D3、18E10和/或6G10中的CDR，抗GITR抗体包含在所有CDR中的总共1-5个氨基酸变化。
在某些实施方案中，抗GITR抗体包含由28F3的VH和VL CDR组成的VH和VL CDR，其中一个或多个CDR中的一个或多个氨基酸是本文中公开的其他抗GITR激动性抗体之一的一个或多个氨基酸。
例如，在某些实施方案中，抗GITR激动性抗体含有包含相对于SYGMH(SEQ ID NO：20)的一个或多个氨基酸修饰的VHCDR1，并且可包含例如以下简并序列之一：
SYGXH(SEQ ID NO：372)，其中X是任何氨基酸，例如M或F；
X1YGX2H，其中X1是任何氨基酸，例如S、N或D；并且X2是任何氨基酸，例如M或F；和
X1YGX2X3，其中X1是任何氨基酸，例如S、N或D；X2是任何氨基酸，例如M或F，并且X3是任何氨基酸，例如H或Q。
在某些实施方案中，抗GITR激动性抗体含有包含相对于VIWYEGSNKYYADSVKG(SEQID NO：21)的一个或多个氨基酸修饰的VHCDR2，并且可包含例如以下简并序列之一：
V1WYX1GSNKX2YADSVKG(SEQ ID NO：373)，其中X1是任何氨基酸，例如E或A；并且X2是任何氨基酸，例如Y或F；和
VIWYX1GSNKX2YX3DSVKG(SEQ ID NO：374)，其中X1是任何氨基酸，例如E、A、G或D；X2是任何氨基酸，例如Y或F；且X3是任何氨基酸，例如A或V。
在某些实施方案中，抗GITR激动性抗体含有包含相对于GGSMVRGDYYYGMDV(SEQ IDNO：22)的一个或多个氨基酸修饰的VHCDR3，并且可包含例如以下简并序列之一：
GGSX1VRGDYYYGMDV(SEQ ID NO：375)，其中X1是任何氨基酸，例如M或V、L、I或A。
GGSX1VRGX2YYYGMDV(SEQ ID NO：376)，其中X1是任何氨基酸，例如M或V、L、I或A；并且X2是任何氨基酸，例如D或E。X1与X2的具体组合公开于实施例中。
GG(6-7aa)MDVWYYX1MDVW(SEQ ID NO：377)，其中X1是任何氨基酸，例如G、S或V。在某些实施方案中，这里的6-7个氨基酸对应于本文中公开的抗GITR抗体的VHCDR3序列中该位置处的氨基酸。
在某些实施方案中，抗GITR激动性抗体含有包含相对于RASQGISSALA(SEQ ID NO：23)的一个或多个氨基酸修饰的VLCDR1，并且可包含例如以下简并序列之一：
RASQGISSXLA(SEQ ID NO：378)，其中X是任何氨基酸，例如A或W(或A、W或Y)；和
RASQG(2-3aa)SX1LA(SEQ ID NO：379)，其中X1是任何氨基酸，例如W、Y或A，并且这里的2-3个氨基酸是任何氨基酸，例如GI、SVS或SVT。
在某些实施方案中，抗GITR激动性抗体含有包含相对于DASSLES(SEQ ID NO：24)的一个或多个氨基酸修饰的VLCDR2，并且可包含例如以下简并序列之一：
DASSLXS(SEQ ID NO：380)，其中X是任何氨基酸，例如E或Q；和
X1ASSX2X3X4，其中X1是任何氨基酸，例如A、D或G；X4是任何氨基酸，例如L或R；X3是任何氨基酸，例如Q、E或A；并且X4是任何氨基酸，例如S或T。
在某些实施方案中，抗GITR激动性抗体含有包含相对于QQFNSYPYT(SEQ ID NO：25)的一个或多个氨基酸修饰的VLCDR3，并且可包含例如以下简并序列之一：
QQXNSYPYT(SEQ ID NO：381)，其中X是任何氨基酸，例如F或Y；和
QQX1X2SX3PX4T(SEQ ID NO：382)，其中X1是任何氨基酸，例如F或Y；X2是任何氨基酸，例如N或G；X3是任何氨基酸，例如Y或S；并且X4是任何氨基酸，例如Y、W、I、P或Q。
在某些实施方案中，分离的单克隆抗体或其抗原结合部分(a)与28F3、19D3、18E10、3C3-1、3C3-2、2G6、9G7-1、9G7-2、14E3、19H8-1、19H8-2和/或6G10结合GITR上的相同表位，并且/或者(b)使28F3、19D3、18E10、3C3-1、3C3-2、2G6、9G7-1、9G7-2、14E3、19H8-1、19H8-2、和/或6G10与活化T细胞上的GITR的结合抑制至少50％、60％、70％、80％或90％，如通过(例如)FACS所测量。
在某些实施方案中，抗GITR激动性抗体或其抗原结合部分结合在成熟人GITR(SEQID NO：4)的区域PTGGPGCGPGRLLLGTGT(SEQ ID NO：217)和CRDYPGEE(SEQ ID NO：218)内。在一些实施方案中，本文所述的抗GITR激动性抗体或其抗原结合部分与人GITR和食蟹猴GITR两者都结合。
在某些实施方案中，抗GITR激动性抗体或其抗原结合部分为IgG1、IgG2、IgG3或IgG4抗体或其变体。在某些实施方案中，抗GITR激动性抗体或其抗原结合部分包含无效应子的(effectorless)IgG1 Fc，例如具有以下突变的无效应子的IgG1 Fc：L234A、L235E、G237A、A330S和P331S。在某些实施方案中，抗GITR激动性抗体或其抗原结合部分包含这样的Fc：其与活化性FcγR结合，或具有增强的(例如相对于野生型IgGl Fc)与活化性FcγR的结合。在某些实施方案中，抗GITR激动性抗体或其抗原结合部分的CDR区中的甲硫氨酸残基被不经历氧化的氨基酸残基取代。在某些实施方案中，抗GITR激动性抗体或其抗原结合部分是人抗体或人源化抗体。
抗GITR激动性抗体或其抗原结合部分可包含修饰的重链恒定区，所述修饰的重链恒定区包含IgG2铰链和非IgG2同种型的CH1、CH2和CH3中的至少一者，其中所述抗GITR激动性抗体相对于相同但具有非IgG2铰链的抗GITR抗体具有增强的激动剂活性。
在某些实施方案中，所述修饰的重链恒定区包括包含选自SEQ ID NO：223-226和283-290的氨基酸序列的重链恒定区、或与选自SEQ ID NO：223-226和283-290的氨基酸序列有至多5个氨基酸不同或至少95％、96％、97％、98％或99％相同的重链恒定区。
在某些实施方案中，重链包括：选自下组的氨基酸序列：SEQ ID NO：15、17、18、28、30、31、41、43、44、55、58、59、73、75、76、86、88、89、100、102、103、117、119、120、131、134、135、227-275、337、339、340、348-352、361和362，或与氨基酸序列SEQ ID NO：15、17、18、28、30、31、41、43、44、55、58、59、73、75、76、86、88、89、100、102、103、117、119、120、131、134、135、227-275、337、339、340、348-352、361和362有至多10个氨基酸不同或至少95％、96％、97％、98％或99％相同的重链。
在某些实施方案中，轻链包括：选自下组的氨基酸序列：SEQ ID NO：16、19、29、32、42、45、56、57、60、61、74、87、90、101、104、105、118、121、132、133、136、137、338、341和371，或与氨基酸序列SEQ ID NO：16、19、29、32、42、45、56、57、60、61、74、87、90、101、104、105、118、121、132、133、136、137、338、341和371有至多10个氨基酸不同或至少95％、96％、97％、98％或99％相同的轻链。
当在抗体序列的背景下提及同一性％或氨基酸取代时，氨基酸取代可以是保守氨基酸取代。
可以如本文所述施用的其他抗GITR激动性抗体包括这样的抗体，所述抗体包含下列抗体的CDR序列、VH和VL链或重链和轻链：(i)TRX-518或6C8，如描述于例如WO2006/105021和Schaer等人，Curr Opin Immunol.(2012)Apr；24(2)：217-224；(ii)在WO201I/028683中描述的抗GITR抗体，例如MK4166；在JP2008278814中描述的抗GITR抗体；或在WO2015/031667中描述的抗GITR抗体。
在其他实施方案中，抗GITR激动性抗体是与TRX518、MK4166、MK-1248或WO2015/031667中描述的抗GITR抗体交叉竞争的抗体。在一些实施方案中，用于本发明组合物的抗GITR抗体与TRX518、MK4166或WO2015/031667中描述的抗GITR抗体结合相同的表位。在某些实施方案中，抗GITR激动性抗体包含TRX518、MK4166、MK-1248或WO2015/031667中描述的抗GITR抗体的六个CDR。
本文所述的抗GITR抗体或其他抗体的重链可以包含或可以不包含C末端赖氨酸(K)，因为该氨基酸经常被切下。
抗PD-1和抗PD-L1抗体
抗GITR激动性抗体可以与抗PD1抗体或抗PD-L1抗体一起施用。PD-1是由活化的T细胞和B细胞表达的关键免疫检查点受体，并介导免疫抑制。PD-1是CD28受体家族的成员，该家族包括CD28、CTLA-4、ICOS、PD-1和BTLA。已经鉴定了PD-1的两种细胞表面糖蛋白配体：程序性死亡配体-1(PD-L1)和程序性死亡配体-2(PD-L2)，这两种配体在抗原递呈细胞以及许多人类癌症中表达，并且已被证明在与结合PD-1后下调T细胞活化和细胞因子分泌。在临床前模型中，PD-1/PD-L1相互作用的抑制介导了有力的抗肿瘤活性。
在美国专利No.8,008,449和8,779,105中已经公开了以高亲和力与PD-1特异性地结合的HuMAb。其他抗PD-1mAb已经描述于例如美国专利No.6,808,710、7,488,802、8,168,757和8,354,509、以及PCT公开号WO 2012/145493中。美国专利No.8,008,449中公开的每种抗PD-1 HuMAb已被证明表现出一个或多个以下特征：(a)以通过使用Biacore生物传感器系统的表面等离子体共振测定的1x 10-7M或更小的KD与人PD-1结合；(b)基本上不与CD28、CTLA-4或ICOS结合；(c)在混合淋巴细胞反应(MLR)测定中增加T细胞增殖；(d)在MLR测定中增加干扰素γ产生；(e)在MLR测定中增加IL-2分泌；(f)与人PD-1和食蟹猴PD-1结合；(g)抑制PD-L1和/或PD-L2与PD-1结合；(h)刺激抗原特异性回忆应答；(i)刺激抗体应答；和(j)体内抑制肿瘤细胞生长。可用于本发明的抗PD-1抗体包括与人PD-1特异性结合并且表现出至少一个、优选至少五个前述特征的mAb。
在一个实施方案中，所述抗PD-1抗体是纳武单抗。纳武单抗(也称为
Figure BDA0002361346870000381
以前命名为5C4、BMS-936558、MDX-1106、或ONO-4538)是选择性地阻止与PD-1配体(PD-L1和PD-L2)相互作用，由此阻断抗肿瘤T细胞功能下调的全人IgG4(S228P)PD-1免疫检查点抑制剂抗体(美国专利No.8,008,449；Wang等人，2014Cancer Immunol Res.2(9)：846-56)。纳武单抗也可称为BMS-936558、MDX-1106 ONO-4538，或其CAS登记号为946414-94-4，并且被公开为WO 2006/121168中的抗体5C4，出于所有目的通过提述将其完整并入本文。纳武单抗是特异性地结合PD1的人单克隆抗体，并且包含提供为SEQ ID NO：397的轻链可变区和提供为SEQ ID NO：395的重链可变区。纳武单抗也可以描述为包含具有SEQ ID NO：397的氨基酸24-34的轻链CDR1；具有SEQ ID NO：397的氨基酸50-56的轻链CDR2；和具有SEQ ID NO：397的氨基酸89-97的轻链CDR3；并且包含具有SEQ ID NO：395的氨基酸31-35的重链CDR1；具有SEQ ID NO：395的氨基酸50-66的重链CDR2；和具有SEQ ID NO：395的氨基酸99-102的重链CDR3的抗体。BMS-936558的药物组合物包括包含BMS-936558和一种或多种稀释剂、载体和/或赋形剂的所有药学上可接受的组合物。BMS-936558可以通过静脉内给药。
纳武单抗的轻链可变区：
Figure BDA0002361346870000392
纳武单抗的重链可变区：
Figure BDA0002361346870000393
在一个实施方案中，抗PD-1抗体是派姆单抗。派姆单抗(也称为
Figure BDA0002361346870000391
拉姆布罗力珠单抗(lambrolizumab)、和MK-3475)是针对人细胞表面受体PD-1(程序性死亡受体-1或程序性细胞死亡受体-1)的人源化单克隆IgG4抗体。派姆单抗描述于例如美国专利No.8,354,509和8,900,587中；还参见http://www.cancer.goV/drugdictionary？cdrid＝695789(最后访问日期：2014年12月14日)。派姆单抗已被FDA批准用于治疗复发性或难治性黑色素瘤。
在其他实施方案中，抗PD-1抗体是MEDI0608(以前称为AMP-514)，其为单克隆抗体。MEDI0608描述于例如美国专利No.8,609,089B2或描述于http://www.cancer.gov/drugdictionary？cdrid＝756047(最后访问日期：2014年12月14日)。
在一些实施方案中，抗PD-1抗体是皮地利珠单抗(CT-011)，其为人源化单克隆抗体。皮地利珠单抗描述于美国专利No.8686119 B2或WO 2013/014668 A1中。CT-011对PD-1结合的特异性受到质疑。
可用于本公开组合物中的抗PD-1抗体还包括与人PD-1特异性结合并且与纳武单抗(参见，例如，美国专利No.8,008,449和8,779,105；WO 2013/173223)或其他抗PD-1抗体竞争或交叉竞争结合人PD-1的分离的抗体。这些抗体竞争或交叉竞争结合抗原的能力表明这些抗体与抗原的相同或相似表位区结合，并且在空间上阻碍了其他竞争性或交叉竞争性抗体与该特定表位区的结合。预期这些竞争性或交叉竞争性抗体具有的功能特性和那些与例如纳武单抗竞争的抗体的功能特性非常相似，因为它们与PD-1的相同或相似表位区结合。竞争性或交叉竞争性抗体可以容易地分别根据它们在标准PD-1结合测定(如Biacore分析、ELISA测定或流式细胞术)中与纳武单抗(或其他抗PD-1抗体)竞争或交叉竞争的能力加以鉴定(参见例如，WO 2013/173223)。“交叉竞争”是指在两个方向上竞争。
在某些实施方案中，与例如纳武单抗竞争或交叉竞争结合人PD-1或与人PD-1的相同或相似表位区结合的抗体是mAb。为了对人类受试者给药，这些竞争性或交叉竞争性抗体可以是嵌合抗体、或人源化或人抗体。这样的嵌合、人源化或人mAb可以通过本领域熟知的方法加以制备和分离。
可用于本公开发明的组合物的抗PD-1抗体还包括上述抗体的抗原结合部分。已经充分证明，抗体的抗原结合功能可以通过全长抗体的片段来执行。术语抗体的“抗原结合部分”所涵盖的结合片段的实例包括：(i)Fab片段，由VL、VH、CL和CH1结构域组成的单价片段；(ii)F(ab’)2片段，包含通过铰链区的二硫桥连接的两个Fab片段的二价片段；(iii)Fd片段，由VH和CH1结构域组成；和(iv)Fv片段，由抗体单臂的VL和VH结构域组成。
适合在公开的组合物中使用的抗PD-1抗体是与PD-1以高特异性和亲和力结合、阻断PD-L1和/或PD-L2的结合并抑制PD-1信号通路的免疫抑制作用的抗体。在本文公开的任何组合物或方法中，抗PD-1“抗体”包括与PD-1受体结合的抗原结合部分或片段，并在抑制配体结合和上调免疫系统方面表现出与完整抗体相似的功能特性。在某些实施方案中，抗PD-1抗体或其抗原结合部分与纳武单抗交叉竞争结合人PD-1。在其他实施方案中，抗PD-1抗体或其抗原结合部分是嵌合的、人源化的或人单克隆抗体或其一部分。在某些实施方案中，所述抗体是人源化抗体。在其他实施方案中，所述抗体是人抗体。可以使用IgG1、IgG2、IgG3或IgG4同种型的抗体。
在某些实施方案中，抗PD-1抗体或其抗原结合部分包含人IgG1或IgG4同种型的重链恒定区。在某些其他实施方案中，抗PD-1抗体的IgG4重链恒定区或其抗原结合部分的序列包含S228P突变，即，铰链区中的丝氨酸残基被通常在IgG1同种型抗体中的相应位置处存在脯氨酸残基替换。这种突变存在于纳武单抗中，阻止了与内源性IgG4抗体的Fab臂交换，同时保留与野生型IgG4抗体相关的与活化性Fc受体的低亲和力(Wang等人，2014)。仍然在其他实施方案中，所述抗体包含轻链恒定区，其为人κ或λ恒定区。在其他实施方案中，抗PD-1抗体或其抗原结合部分是mAb或或其抗原结合部分。在本文所述的包括施用抗PD-1抗体的任何治疗方法的某些实施方案中，所述抗PD-1抗体是纳武单抗。在其他实施方案中，所述抗PD-1抗体是派姆单抗。在其他实施方案中，抗PD-1抗体选自美国专利No.8,008,449中所述的人抗体17D8、2D3、4H1、4A11、7D3和5F4。仍然在其他实施方案中，抗PD-1抗体是MEDI0608(以前的AMP-514)、AMP-224或皮地利珠单抗(CT-011)。
示例性抗PD-1抗体为包含重链和轻链的5C4、或其抗原结合片段和变体，所述重链和轻链分别具有在SEQ ID NO：393和394中所示的序列。在其他实施方案中，所述抗体包含5C4的重链和轻链CDR或可变区。因此，在一个实施方案中，所述抗体包含具有SEQ ID NO：395中列出的序列的5C4的VH的CDR1、CDR2、和CDR3结构域，以及具有SEQ ID NO：397中列出的序列的5C4的VL的CDR1、CDR2和CDR3结构域。在一个实施方案中，所述抗体包含具有分别在SEQ ID NO：399-401中列出的序列的VH CDR1、CDR2和CDR3结构域，以及具有分别在SEQID NO：402-404中列出的序列的VL CDR1、CDR2和CDR3结构域。在一个实施方案中，所述抗体包含具有分别在SEQ ID NO：395和/或SEQ ID NO：397中列出的氨基酸序列的VH和/或VL区。在一个实施方案中，所述抗体包含由分别在SEQ ID NO：396和/或SEQ ID NO：398中列出的核酸序列编码的重链可变(VH)和/或轻链可变(VL)区。在一个实施方案中，所述抗体与上文提及的抗体竞争与在PD-1上的同一个表位结合和/或结合到其上。在一个实施方案中，所述抗体与上文提及的抗体具有至少约90％可变区氨基酸序列同一性(例如，与SEQ ID NO：395或SEQ ID NO：397具有至少约90％、95％或99％可变区同一性)。
在某些实施方案中，PD1抗体表现出一种或多种期望的功能特性，比如与PD-1的高亲和力结合，例如以10-7M或更小的KD与人PD-1结合；与其他CD28家族成员，例如CD28、CTLA-4和ICOS没有明显的交叉反应性；在混合淋巴细胞反应(MLR)测定中刺激T细胞增殖的能力；在MLR中增加IFN-γ和/或IL-2分泌的能力；抑制一种或多种PD-1配体(例如PD-L1和/或PD-L2)与PD-1结合的能力；刺激抗原特异性回忆应答的能力；刺激抗体应答的能力和/或体内抑制肿瘤细胞生长的能力。
在某些实施方案中，将与抗GITR抗体一起施用的抗体是抗PD-L1抗体。由于抗PD-1和抗PD-L1靶向相同的信号通路，并且在临床试验中已显示在多种癌症中表现出相似的功效水平，因此抗PD-L1抗体在本文中公开的任何治疗方法或组合物中可以取代抗PD-1抗体。在一个实施方案中，抗PD-L1抗体是BMS-9365599(以前的12A4或MDX-1105)(参见，例如美国专利No.7,943,743；WO 2013/173223)、或包含描述于PCT公开WO 07/005874和美国专利No.7,943,743中的3G10、12A4、10A5、5F8、10H10、1B12、7H1、11E6、12B7和13G4的CDR或可变区的抗体。在某些实施方案中，抗PD-L1抗体是阿维鲁单抗、德瓦鲁单抗(MEDI4736(也称作抗B7-H1))、MPDL3280A(也称作RG7446、阿特珠单抗和TECENTRIQ)、MSB0010718C(WO2013/79174)或rHigM12B7。还可使用在WO2013/173223、WO201I/066389、WO2012/145493、美国专利No.7,635,757和8,217,149以及美国公开号2009/145493中公开的抗PD-L1抗体中的任一者。与这些抗体中的任一者竞争和/或结合相同表位的抗PD-L1抗体也可用于本文所述的治疗中。
示例性抗PD-L1抗体是12A4(WO 2007/005874和美国专利No.7,943,743)。在一个实施方案中，所述抗体包含12A4的重链和轻链CDR或VR。因此，在一个实施方案中，所述抗体包含具有SEQ ID NO：383中所示序列的12A4的VH区的CDR1、CDR2、和CDR3结构域，以及具有SEQ ID NO：385中所示序列的12A4的VL区的CDR1、CDR2和CDR3结构域。在一个实施方案中，所述抗体包含具有分别在SEQ ID NO：387-389中列出的序列的重链CDR1、CDR2和CDR3结构域，以及具有分别在SEQ ID NO：390-392中列出的序列的轻链CDR1、CDR2和CDR3结构域。在一个实施方案中，所述抗体包含具有分别在SEQ ID NO：383和/或SEQ ID NO：385中列出的氨基酸序列的VH和/或VL区。在一个实施方案中，所述抗体包含由分别在SEQ ID NO：384和/或SEQ ID NO：386中列出的核酸序列编码的重链可变(VH)和/或轻链可变(VL)区。在一个实施方案中，所述抗体与上文提及的抗体竞争与在PD-L1上的同一个表位结合和/或结合到其上。在一个实施方案中，所述抗体与上文提及的抗体具有至少约90％可变区氨基酸序列同一性(例如，与SEQ ID NO：383或SEQ ID NO：385具有至少约90％、95％或99％可变区同一性)。
因此，通常，可用于本文所述方法中的PD-1/PD-L1拮抗剂包括纳武单抗、派姆单抗、阿特珠单抗、德瓦鲁单抗、REGN2810、PDR001、AMP-514(MEDI0608)、AMP-224、BGB-A317或以下出版物的任一者中所述的PD-1或PD-L1拮抗剂：WO 2009/014708、WO 03/099196、WO2009/114335和WO 2011/161699。
组合物
进一步提供了组合物，例如药物组合物，其含有与药学上可接受的载体配制在一起的单独的或与针对其他靶标(例如PD-1或PD-L1)的抗体联合的抗GITR抗体。如本文中使用的，“药学上可接受的载体”包括任何及所有溶剂、分散介质、包衣、抗细菌和抗真菌剂、等渗剂及吸收延迟剂以及生理学上相容的其他物质。优选地，载体适合于静脉内、肌内、皮下、肠胃外、脊柱或表皮施用(例如，通过注射或输注)。
本文所述的药物化合物可包括一种或多种药学上可接受的盐。“药学上可接受的盐”是指保留亲本化合物的期望生物活性且不赋予任何不期望的毒理学效应的盐(例如参见Berge，S.M.等人(1977)J.Pharm.Sci.66：1-19)。这样的盐的实例包括酸加成盐和碱加成盐。酸加成盐包括那些衍生自无毒无机酸比如盐酸、硝酸、磷酸、硫酸、氢溴酸、氢碘酸、亚磷酸，等等的盐，以及那些衍生自无毒有机酸比如脂肪族单及二羧酸、苯基取代的链烷酸、羟基链烷酸、芳香族酸、脂肪族和芳香族磺酸等等的盐。碱加成盐包括那些衍生自碱土金属比如钠、钾、镁、钙，等等的盐，以及那些衍生自无毒有机胺比如N,N′--二苄基乙二胺、N-甲基葡萄糖胺、氯普鲁卡因、胆碱、二乙醇胺、乙二胺、普鲁卡因，等等的盐。
本文所述的药物组合物还可包括药学上可接受的抗氧化剂。药学上可接受的抗氧化剂的实例包括：(1)水溶性抗氧化剂，比如抗坏血酸、盐酸半胱氨酸、硫酸氢钠、焦亚硫酸钠、亚硫酸钠，等等；(2)油溶性抗氧化剂，比如棕榈酸抗坏血酸酯、丁基化羟基苯甲醚(BHA)、丁基化羟基甲苯(BHT)、卵磷脂、没食子酸丙酯、α-生育酚，等等；和(3)金属螯合剂，比如柠檬酸、乙二胺四乙酸(EDTA)、山梨醇、酒石酸、磷酸，等等。
可用于本文所述的药物组合物中的适合的水性和非水性载体的实例包括水、乙醇、多元醇(比如，甘油、丙二醇、聚乙二醇，等等)及其适当的混合物、植物油(比如橄榄油)以及注射用有机酯(比如油酸乙酯)。可以通过例如使用包衣材料诸如卵磷脂借助于维持在分散体情况下所需的粒径并且通过使用表面活性剂来维持适当的流动性。
这些组合物还可含有辅料，比如防腐剂、润湿剂、乳化剂和分散剂。通过上文的灭菌程序以及通过包括各种抗细菌剂和抗真菌剂(例如，对羟基苯甲酸酯、氯丁醇、苯酚、山梨酸，等等)这两者可确保阻止微生物的存在。还可期望在这些组合物中包括等渗剂，比如糖、氯化钠，等等。另外，可通过包括吸收延迟剂(比如单硬脂酸铝和明胶)来实现注射药物形式的延长吸收。
药学上可接受的载体包括无菌水溶液或分散液和用于临时配制无菌注射溶液或分散液的无菌粉末。针对药学活性物质的此类介质和作用剂的用途是本领域已知的。除了任何常规介质或作用剂与活性化合物不相容之外，考虑了它们在本文所述的药物组合物中的用途。药物组合物可包含防腐剂或可不含防腐剂。组合物中还可掺入补充的活性化合物。
治疗组合物通常必须无菌并且在制造和储存条件下稳定。可将组合物配制成溶液、微乳剂、脂质体或其他适于高药物浓度的有序结构。载体可以是含有例如水、乙醇、多元醇(例如丙三醇、丙二醇、和液态聚乙二醇等等)、和其适合的混合物的溶剂或分散介质。可以通过例如使用包衣诸如卵磷脂借助于维持在分散体情况下所需的粒径和通过使用表面活性剂而维持适当的流动性。在许多情况下，优选的是在组合物中包括等渗剂，例如糖、多元醇诸如甘露醇、山梨醇、或氯化钠。可以通过在组合物中包含吸收延迟剂(例如单硬脂酸盐和明胶)来实现注射组合物的延长吸收。
可以通过将活性化合物以所需的量掺入适当的溶剂中然后微孔过滤除菌来制备无菌注射溶液，其中所述溶剂根据需要具有一种上文列举的成分或其组合。通常，通过将活性化合物掺入无菌载体中来制备分散体，所述无菌载体含有基础分散介质和所需的来自本文中列举的其他成分。在用于制备无菌注射液的无菌粉末的情况下，优选的制备方法为真空干燥和冷冻干燥(冻干)，由此从预先无菌过滤的溶液产生活性成分加上任何其他期望的成分的粉末。
在某些实施方案中，将抗GITR激动剂(例如抗体)与抗PD-1或PD-L1拮抗剂(例如抗体)共同配制。示例性药物组合物包含抗PD-1抗体，例如纳武单抗(例如，OPDIVO)或MK-3475(派姆单抗；KEYTRUDA)或其他PD-1/PD-L1轴拮抗剂(例如本文所述)和抗GITR激动剂(例如本文所述)，例如抗体，所述抗体具有28F3.IgG1或28F3.IgG1.1或本文所述的其他抗GITR抗体(例如TRX518、MK4166、MK-1248)或在本文中引证的参考文献(例如，WO2015/031667或本文所述的其他文献)中所述的抗体的CDR、可变区或重链和轻链序列，其中抗PD-1剂(例如抗体)的量(例如浓度(例如mg/ml)或重量)相对于抗GITR剂(例如抗体)的量(例如，分别为浓度(例如，mg/ml)或重量)的比率为1∶1-20；1∶1-10；1∶1-5；1∶2-5；1∶2-3；1∶3-5；1-20∶1；1-10∶1；1-5∶1；2-5∶1；2-3∶1；或3-5∶1。所述组合制剂可以按照每周一次、每两周一次、每三周一次、每月一次、每5周一次或每6周一次给药。例如，可以将10-1000mg，比如100-400mg，例如200-300mg或240mg或250mg固定剂量的抗PD-1剂，例如抗体(例如纳武单抗)或抗PD-L1拮抗剂，例如抗体，例如以固定剂量联合的形式与3mg、10mg、30mg、100mg、120mg、200mg、240mg、250mg、300mg、400mg、480mg、500mg、600mg、700mg、800mg、900mg或1000mg固定剂量的抗GITR激动剂，例如抗体(例如28F3.IgG1、28F3.IgG1.1、TRX518、MK4166或在WO2015/031667中所述的抗体或本文所述的其他GITR激动剂)一起施用于患有癌症(例如晚期实体瘤)的受试者，例如，静脉内输注例如30、30-60、60或60-90分钟，每1、2、3、4、5或6周一次。在另一个实例中，可以将约3mg/kg的抗PD-1剂(例如抗体，例如纳武单抗)例如以固定剂量联合的形式与0.1-10mg/kg、0.1-5mg/kg、0.5-10mg/kg、0.5-5mg/kg、0.5-2mg/kg、1-2mg/kg或2-5mg/kg的抗GITR剂，例如抗体(例如28F3.IgG1、28F3.IgG1.1、TRX518、MK4166、MK-1248或在WO2015/031667中或本文中其他地方所述的抗体)一起施用，例如，静脉内输注例如30、30-60、60或60-90分钟，每1、2、3、4、5或6周一次。在某些实施方案中，将2mg/kg抗PD-1抗体(例如MK-3475)例如以固定剂量联合的形式与0.1-10mg/kg、0.1-5mg/kg、0.5-10mg/kg、0.5-5mg/kg、0.5-2mg/kg、1-2mg/kg或2-5mg/kg抗GITR剂，例如抗体(例如MK4166或MK-1248)一起施用，例如，静脉内输注例如30、30-60或60分钟，每1、2、3或4周一次。可以计算以mg/kg计的抗体量，以确定固定剂量比例制剂所需的抗体的重量(mg)或浓度(mg/ml)。在某些实施方案中，将抗PD-1剂(例如抗体)和抗GITR剂(例如抗体)以冻干组合物的形式提供在例如在小瓶或双室注射器中。冻干组合物可以包含例如50mg的抗PD-1剂，例如抗体，例如MK3475，以及5-250mg、约10-250mg、约30-100mg、约30-70mg或约50mg的抗GITR剂，例如抗体，例如28F3.IgG1、28F3.IgG1.1、TRX518、MK4166或在WO2015/031667或本文中引证的其他出版物中所述的抗体。将WO/2016/196792中描述的联合方案通过提述明确并入本文，其可以应用于GITR剂和PD-1/PD-L1轴拮抗剂。
治疗方法
本文中提供了例如通过抑制受试者中的肿瘤生长来治疗癌症的方法，其包括对受试者施用治疗有效量的本文所述的抗GITR激动剂，例如抗体(例如28F3.IgG1或28F3.IgG1.1)或其抗原结合部分。所述抗体可以是人抗GITR剂，例如抗体(比如本文所述的人抗人GITR抗体中的任一者)。另外地或可替代地，所述抗体可以是嵌合或人源化抗GITR抗体，例如包含本文所述的28F3或其他抗GITR抗体的序列的嵌合或人源化抗GITR抗体。
使用本发明抗体可抑制其生长的癌症包括：通常对免疫疗法有反应的癌症以及那些通常对免疫疗法无反应的癌症。癌症可以是具有实体瘤(例如晚期实体瘤)的癌症或血液恶性肿瘤(液体肿瘤)。待治疗的癌症的非限制性实例包括鳞状细胞癌、小细胞肺癌、非小细胞肺癌、鳞状非小细胞肺癌(NSCLC)、非鳞状NSCLC、神经胶质瘤、胃肠癌、肾癌(例如透明细胞癌)、卵巢癌、肝癌、结肠直肠癌、子宫内膜癌、肾癌(例如，肾细胞癌(RCC))、前列腺癌(例如激素难治性前列腺腺癌)、甲状腺癌、神经母细胞瘤、胰腺癌、胶质母细胞瘤(多形性神经胶质母细胞瘤)、宫颈癌、胃癌、膀胱癌、肝细胞瘤、乳腺癌、结肠癌和头颈癌(或癌瘤)、胃癌、生殖细胞肿瘤、儿科肉瘤、鼻窦自然杀伤细胞淋巴瘤(sinonasal natural killer)、黑色素瘤(例如，转移性恶性黑色素瘤，例如皮肤或眼内恶性黑色素瘤)、骨癌、皮肤癌、子宫癌、肛区癌、睾丸癌、输卵管癌、子宫内膜癌、子宫颈癌、阴道癌、外阴癌、食道癌、小肠癌、内分泌系统癌、甲状旁腺癌、肾上腺癌、软组织肉瘤、尿道癌、阴茎癌、儿童实体瘤、输尿管癌、肾盂癌、中枢神经系统的新生物(CNS)、原发性CNS淋巴瘤、肿瘤血管生成、脊柱轴(spinal axis)肿瘤、脑癌、脑干胶质瘤、垂体腺瘤、卡波西肉瘤、表皮样癌、鳞状细胞癌、T细胞淋巴瘤、环境诱导的癌症(包括那些由石棉诱导的癌症)、病毒相关癌症或病毒起源的癌症(例如，人乳头瘤病毒(HPV相关或起源的肿瘤))、衍生自两种主要血细胞谱系(即，骨髓细胞系(其产生粒细胞、红细胞、凝血细胞、巨噬细胞和肥大细胞)或淋巴细胞系(其产生B、T、NK和浆细胞)中的任一者的血液学恶性肿瘤，比如所有类型的白血病、淋巴瘤和骨髓瘤，例如急性、慢性、淋巴细胞性及/或骨髓性白血病，例如急性白血病(ALL)、急性骨髓性白血病(AML)、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)和慢性骨髓性白血病(CML)、未分化的AML(M0)、成髓细胞性白血病(M1)、成髓细胞性白血病(M2；细胞成熟)、前髓细胞性白血病(M3或M3变体[M3V])、骨髓单核细胞性白血病(M4或具有嗜酸性粒细胞增多症的M4变体[M4E])、单核细胞白血病(M5)、红白血病(M6)、巨核细胞白血病(M7)、分离的粒细胞肉瘤和绿色瘤；淋巴瘤，例如霍奇金淋巴瘤(HL)、非霍奇金淋巴瘤(NHL)、B细胞血液学恶性肿瘤(例如B细胞淋巴瘤)、T细胞淋巴瘤、淋巴浆细胞样淋巴瘤、单核细胞样B细胞淋巴瘤、粘膜相关淋巴样组织(MALT)淋巴瘤、间变性(例如，Ki 1+)大细胞淋巴瘤、成人T细胞淋巴瘤/白血病、套细胞淋巴瘤、血管免疫母细胞T细胞淋巴瘤、血管中心性淋巴瘤、肠T细胞淋巴瘤、原发性纵膈B细胞淋巴瘤、前体T淋巴母细胞性淋巴瘤、T淋巴母细胞性；和淋巴瘤/白血病(T-Lbly/T-ALL)、外周T细胞淋巴瘤、淋巴母细胞性淋巴瘤、移植后淋巴组织增殖性疾病、真性组织细胞淋巴瘤、原发性中枢神经系统淋巴瘤、原发性渗出性淋巴瘤、B细胞淋巴瘤、淋巴母细胞淋巴瘤(LBL)、淋巴谱系的造血肿瘤、急性淋巴母细胞白血病、弥漫性大B细胞淋巴瘤、伯基特淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、弥漫性组织细胞性淋巴瘤(DHL)、免疫母细胞大细胞淋巴瘤、前体B-淋巴母细胞性淋巴瘤、皮肤T细胞淋巴瘤(CTLC)(也称为蕈样真菌病或塞扎里综合征(Sezary syndrome))和具有瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症的淋巴浆细胞性淋巴瘤(LPL)；骨髓瘤，比如IgG骨髓瘤、轻链骨髓瘤、非分泌型骨髓瘤、冒烟型骨髓瘤(也称为惰性骨髓瘤)、孤立性浆细胞瘤和多发性骨髓瘤、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、毛细胞淋巴瘤；骨髓谱系的造血肿瘤、间质起源的肿瘤(包括纤维肉瘤和横纹肌肉瘤)；精原细胞瘤、畸胎癌、中枢和周围神经肿瘤，包括星形细胞瘤、许旺细胞瘤；间质起源的肿瘤，包括纤维肉瘤、横纹肌肉瘤和骨肉瘤；及其他肿瘤，包括黑色素瘤、着色性干皮病、角化棘皮瘤、精原细胞瘤、甲状腺滤泡癌和畸胎癌、淋巴谱系的造血肿瘤，例如T细胞和B细胞肿瘤，包括但不限于T细胞疾病，例如T前淋巴细胞性白血病(T-PLL)，包括小细胞和脑回样细胞型；优选T细胞型的大颗粒淋巴细胞白血病(LGL)；a/d T-NHL肝脾淋巴瘤；外周/胸腺后T细胞淋巴瘤(多形性和免疫母细胞亚型)；血管中心性(鼻)T细胞淋巴瘤；头或颈癌、肾癌、直肠癌、甲状腺癌；急性骨髓性淋巴瘤，以及所述癌症的任何组合。本文所述的方法也可用于治疗转移性癌症、不可切除和/或难治性癌症(例如，例如用阻断CTLA-4或PD-1抗体的先前免疫疗法难治的癌症)以及复发性癌症。本文所述的治疗方法还可用于治疗已在免疫疗法(例如，免疫刺激疗法)例如抗PD1或抗PD-L1治疗之上发生进展的受试者。
在某些实施方案中，对患有对先前治疗(例如用肿瘤免疫药物的先前治疗)的反应不足的癌症的患者、或患有难治或抗性、固有难治或抗性(例如，用PD-1通路拮抗剂难治)癌症的患者、或其中抗性或难治性状态是获得性的癌症的患者施用抗GITR剂，例如抗体。例如，对于第一疗法无反应或反应不足或在治疗(例如抗PD-1治疗)后观察到疾病进展的受试者，可通过单独施用抗GITR剂例如抗体或与另一种疗法(例如，抗PD-1疗法)联合进行治疗。
在某些实施方案中，对先前未接受过(即，未用药治疗过)肿瘤免疫剂例如PD-1通路拮抗剂(PD-1/PD-L1轴拮抗剂或PD-1/PD-L1拮抗剂)的患者施用抗GITR剂，例如抗体。
可通过标准护理治疗施用抗GITR剂，例如抗体，以及PD-1/PD-L1拮抗剂。可作为维持疗法(例如，旨在预防肿瘤发生或复发的疗法)施用抗GITR剂，例如抗体，和/或PD-1/PD-L1拮抗剂。
可与另一种治疗例如放射、手术或化学疗法一起施用抗GITR剂，例如抗体，以及PD-1/PD-L1拮抗剂。例如，当有可能存在微转移的风险时，和/或为了降低复发的风险，可施用抗GITR剂，例如抗体，和/或PD-1/PD-L1拮抗剂辅助治疗。
至少基于这样的发现：接受GITR激动剂和PD-1/PD-L1轴拮抗剂治疗的受试者在施用一定剂量的GITR激动剂和PD-1/PD-L1轴拮抗剂之后8天具有以下细胞的外周血水平(或数目)升高：(1)增殖性CD8+细胞；(2)增殖性和活化的CD4+和CD8+效应记忆和中央记忆T细胞，以及(3)增殖性NK细胞，本文中提供了通过免疫刺激疗法(例如，GITR激动剂和PD-1/PD-L1拮抗剂)治疗患有癌症的受试者的方式，其中所述治疗升高这些细胞群中的一个或多个的水平或数目。在某些实施方案中，单剂量免疫刺激剂的施用诱导这些细胞群中的一个或多个的水平相对于其基础水平例如刚好在施用所述治疗的第一剂量之前(例如少于10、5、4、3、2或1小时之前)的水平升高至少1.5、2、3、4或5倍。可以如实施例中所述测量这些细胞类型在受试者外周血中的水平。因此，本文中提供了用免疫刺激疗法(例如，肿瘤免疫药，例如单独的PD-1/PD-L1轴拮抗剂，或与一种或多种免疫刺激剂例如GITR激动剂一起)治疗患有癌症的受试者的方法，其包括对受试者施用第一剂量的免疫刺激疗法，其中在施用之后约5-12天(例如8天)，(1)增殖性CD8+细胞；(2)增殖性和活化的CD4+和CD8+效应记忆和中央记忆T细胞和/或(3)增殖性NK细胞的水平(或数目)相对于施用之前的所述细胞群的水平高例如1.5倍、2、3、4或5倍。在某些实施方案中，本文中提供了用免疫刺激疗法(例如，肿瘤免疫药，例如单独的PD-1/PD-L1轴拮抗剂，或与一种或多种免疫刺激剂例如GITR激动剂一起)治疗患有癌症的受试者的方法，其包括对受试者施用第一剂量的免疫刺激疗法，其中在施用之后约5-12天(例如8天)，(1)增殖性CD8+细胞；(2)增殖性和活化的CD4+和CD8+效应记忆和中央记忆T细胞和(3)增殖性NK细胞的水平(或数目)相对于施用之前的所述细胞群的水平高例如1.5倍、2、3、4或5倍。一种方法可包括用免疫刺激疗法(例如，肿瘤免疫药，例如单独的PD-1/PD-L1轴拮抗剂，或与一种或多种免疫刺激剂例如GITR激动剂一起)治疗患有癌症的受试者，其包括对受试者施用第一剂量的免疫刺激疗法，其中在施用之后约5-12天(例如8天)，(i)增殖性CD8+效应记忆细胞；(ii)活化的CD8+效应记忆细胞；(iii)增殖性CD8+中央记忆细胞；和(iv)活化的CD8+中央记忆细胞的水平(或数目)相对于施用之前的所述细胞群的水平高例如1.5倍、2、3、4或5倍。一种方法可包括用免疫刺激疗法(例如，肿瘤免疫药，例如单独的PD-1/PD-L1轴拮抗剂，或与一种或多种免疫刺激剂例如GITR激动剂一起)治疗患有癌症的受试者，其包括对受试者施用第一剂量的免疫刺激疗法，其中在施用之后约5-12天(例如8天)，(i)增殖性CD4+效应记忆细胞；(ii)活化的CD4+效应记忆细胞；(iii)增殖性CD4+中央记忆细胞；和(iv)活化的CD4+中央记忆细胞的水平(或数目)相对于施用之前的所述细胞群的水平高例如1.5倍、2、3、4或5倍。一种方法可包括用免疫刺激疗法(例如，肿瘤免疫药，例如单独的PD-1/PD-L1轴拮抗剂，或与一种或多种免疫刺激剂例如GITR激动剂一起)治疗患有癌症的受试者，其包括对受试者施用第一剂量的免疫刺激疗法，其中在施用之后约5-12天(例如8天)，(i)增殖性CD8+效应记忆细胞；(ii)活化的CD8+效应记忆细胞；(iii)增殖性CD8+中央记忆细胞；(iv)活化的CD8+中央记忆细胞；(v)增殖性CD4+效应记忆细胞；(vi)活化的CD4+效应记忆细胞；(vii)增殖性CD4+中央记忆细胞；和(viii)活化的CD4+中央记忆细胞的水平(或数目)相对于施用之前的所述细胞群的水平高例如1.5倍、2、3、4或5倍。
一种方法可包括用免疫刺激疗法(例如，肿瘤免疫药，例如单独的PD-1/PD-L1轴拮抗剂，或与一种或多种免疫刺激剂例如GITR激动剂一起)治疗患有癌症的受试者，其包括对受试者施用第一剂量的免疫刺激疗法，其中在施用之后约5-12天(例如8天)，(i)增殖性CD4+中央记忆细胞；(ii)增殖性CD8+中央记忆细胞；(iii)活化的CD4+中央记忆细胞和(iv)活化的CD8+中央记忆细胞中任一项的水平(或数目)相对于施用之前的所述细胞群的水平高例如1.5倍、2、3、4或5倍。
一种方法可包括用免疫刺激疗法(例如，肿瘤免疫药，例如单独的PD-1/PD-L1轴拮抗剂，或与一种或多种免疫刺激剂例如GITR激动剂一起)治疗患有癌症的受试者，其包括对受试者施用第一剂量的免疫刺激疗法，其中在施用之后约5-12天(例如8天)，(i)增殖性CD4+中央记忆细胞；(ii)增殖性CD8+中央记忆细胞；(iii)活化的CD4+中央记忆细胞和(iv)活化的CD8+中央记忆细胞的水平(或数目)相对于施用之前的所述细胞群的水平高例如1.5倍、2、3、4或5倍。
一种方法可包括用免疫刺激疗法(例如，肿瘤免疫药，例如单独的PD-1/PD-L1轴拮抗剂，或与一种或多种免疫刺激剂例如GITR激动剂一起)治疗患有癌症的受试者，其包括对受试者施用第一剂量的免疫刺激疗法，其中在施用之后约5-12天(例如8天)，(i)增殖性CD4+效应记忆细胞；(ii)增殖性CD8+效应记忆细胞；(iii)活化的CD4+效应记忆细胞和(iv)活化的CD8+效应记忆细胞中任一项的水平(或数目)相对于施用之前的所述细胞群的水平高例如1.5倍、2、3、4或5倍。
一种方法可包括用免疫刺激疗法(例如，肿瘤免疫药，例如单独的PD-1/PD-L1轴拮抗剂，或与一种或多种免疫刺激剂例如GITR激动剂一起)治疗患有癌症的受试者，其包括对受试者施用第一剂量的免疫刺激疗法，其中在施用之后约5-12天(例如8天)，(i)增殖性CD4+效应记忆细胞；(ii)增殖性CD8+效应记忆细胞；(iii)活化的CD4+效应记忆细胞和(iv)活化的CD8+效应记忆细胞的水平(或数目)相对于施用之前的所述细胞群的水平高例如1.5倍、2、3、4或5倍。
在任何这些实施方案中，增殖性CD4效应记忆细胞是CD45+CD3+CD4+CD8-CD197-CD45RA-Ki67+T细胞(CD197是CCR7)；活化的CD4效应记忆细胞是CD45+CD3+CD4+CD8-CD197-CD45RA-HLA-DR+的；增殖性CD4中央记忆细胞是CD45+CD3+CD4+CD8-CD197+CD45RA-Ki67+的；活化的CD4中央记忆细胞是CD45+CD3+CD4+CD8-CD197+CD45RA-HLA-DR+的；增殖性CD8效应记忆细胞是CD45+CD3+CD4-CD8+CD197-CD45RA-Ki67+细胞；活化的CD8效应记忆细胞是CD45+CD3+CD4-CD8+CD197-CD45RA-HLA-DR+的；增殖性CD8中央记忆细胞是CD45+CD3+CD4-CD8+CD197+CD45RA-Ki67+的；并且活化的CD8中央记忆细胞是CD45+CD3+CD4-CD8+CD197+CD45RA-HLA-DR+的，并且这些细胞的水平通过流式细胞术确定，例如，如在实施例中所述。
在某些实施方案中，将一定剂量例如第一剂量的免疫刺激疗法(例如GITR激动剂和PD-1/PD-L1拮抗剂)施用于患有癌症的受试者，从而导致一个或多个选自以下的细胞群的数目升高：(1)增殖性CD8+细胞；(2)增殖性和活化的CD4+和CD8+效应记忆和中央记忆T细胞，和(3)增殖性NK细胞；并且当这些细胞群中的一个或多个(例如外周效应记忆T细胞和/或中央记忆T细胞)的增殖或活化处于或接近于它们各自的基线水平时，施用第二剂量的免疫刺激疗法，所述基线水平为刚好在施用所述剂量(例如第一剂量)的免疫刺激疗法之前存在于受试者中的水平。在某些方法中，将一定剂量例如第一剂量的免疫刺激疗法(例如，GITR激动剂和PD-1/PD-L1拮抗剂)施用于患有癌症的受试者，从而导致(i)增殖性CD8+效应记忆细胞；(ii)活化的CD8+效应记忆细胞；(iii)活化的CD8+效应记忆细胞；和/或(iv)活化的CD8+效应记忆细胞的水平(或数目)升高，其比施用之前的所述细胞群的水平高例如1.5倍、2、3、4或5倍；并且当(i)增殖性CD8+效应记忆细胞；(ii)活化的CD8+效应记忆细胞；(iii)增殖性CD8+中央记忆细胞；和/或(iv)活化的CD8+中央记忆细胞的水平(或数目处于或接近于(例如2倍以内)它们各自的基线水平时，施用第二剂量的免疫刺激疗法，所述基线水平为刚好在施用所述剂量(例如第一剂量)的免疫刺激疗法之前存在于受试者中的水平。在某些方法中，将一定剂量例如第一剂量的免疫刺激疗法(例如，GITR激动剂和PD-1/PD-L1拮抗剂)施用于患有癌症的受试者，从而导致(i)增殖性CD4+效应记忆细胞；(ii)活化的CD4+效应记忆细胞；(iii)增殖性CD4+中央记忆细胞；和/或(iv)活化的CD4+中央记忆细胞的水平(或数目)升高，其比施用之前的所述细胞群的水平高例如1.5倍、2、3、4或5倍；并且当(i)增殖性CD4+效应记忆细胞；(ii)活化的CD4+效应记忆细胞；(iii)增殖性CD4+中央记忆细胞；和/或(iv)活化的CD4+中央记忆细胞的水平(或数目处于或接近于(例如2倍以内)它们各自的基线水平时，施用第二剂量的免疫刺激疗法，所述基线水平为刚好在施用所述剂量(例如第一剂量)的免疫刺激疗法之前存在于受试者中的水平。在某些方法中，将一定剂量例如第一剂量的免疫刺激疗法(例如，GITR激动剂和PD-1/PD-L1拮抗剂)施用于患有癌症的受试者，从而导致(i)增殖性CD8+效应记忆细胞；(ii)活化的CD8+效应记忆细胞；(iii)增殖性CD8+中央记忆细胞；(iv)活化的CD8+中央记忆细胞；(v)增殖性CD4+效应记忆细胞；(vi)活化的CD4+效应记忆细胞；(vii)增殖性CD4+中央记忆细胞；和/或(viii)活化的CD4+中央记忆细胞的水平(或数目)升高，其比施用之前的所述细胞群的水平高例如1.5倍、2、3、4或5倍；并且当(i)增殖性CD8+效应记忆细胞；(ii)活化的CD8+效应记忆细胞；(iii)增殖性CD8+中央记忆细胞；(iv)活化的CD8+中央记忆细胞；(v)增殖性CD4+效应记忆细胞；(vi)活化的CD4+效应记忆细胞；(vii)增殖性CD4+中央记忆细胞；和/或(viii)活化的CD4+中央记忆细胞的水平(或数目)处于或接近于(例如2倍以内)它们各自的基线水平时，施用第二剂量的免疫刺激疗法，所述基线水平为刚好在施用所述剂量(例如第一剂量)的免疫刺激疗法之前存在于受试者中的水平。可以按照与第一剂量和第二剂量之间大约相同的时间间隔施用后续剂量。在任何这些实施方案中，增殖性CD4效应记忆细胞是CD45+CD3+CD4+CD8-CD197-CD45RA-Ki67+T细胞(CD197是CCR7)；活化的CD4效应记忆细胞是CD45+CD3+CD4+CD8-CD197-CD45RA-HLA-DR+的；增殖性CD4中央记忆细胞是CD45+CD3+CD4+CD8-CD197+CD45RA-Ki67+的；活化的CD4中央记忆细胞是CD45+CD3+CD4+CD8-CD197+CD45RA-HLA-DR+的；增殖性CD8效应记忆细胞是CD45+CD3+CD4-CD8+CD197-CD45RA-Ki67+细胞；活化的CD8效应记忆细胞是CD45+CD3+CD4-CD8+CD197-CD45RA-HLA-DR+的；增殖性CD8中央记忆细胞是CD45+CD3+CD4-CD8+CD197+CD45RA-Ki67+的；并且活化的CD8中央记忆细胞是CD45+CD3+CD4-CD8+CD197+CD45RA-HLA-DR+的，并且这些细胞的水平通过流式细胞术确定，例如，如在实施例中所述。
还提供了确定受试者是否可能对给定的免疫刺激疗法有反应的方法，例如其反应为肿瘤的稳定或缩小。在一个实施方案中，一种方法包括将一定剂量的免疫刺激疗法(例如，GITR激动剂和PD-1/PD-L1轴拮抗剂)施用于受试者，并在约3-12天后确定一个或多个选自以下的细胞群的水平：(1)增殖性CD8+细胞；(2)增殖性和活化的CD4+和CD8+效应记忆和中央记忆T细胞，和(3)增殖性NK细胞，其中这些细胞群中的一个或多个相对于施用治疗之前它们各自的水平升高(高1.5、2、3、4或5倍或更多倍)，表明受试者可能对所述治疗有反应，而这些细胞群中的一个或多个没有升高则表明受试者不太可能对治疗有反应。一种方法可包括将一定剂量的免疫刺激疗法(例如，GITR激动剂和PD-1/PD-L1轴拮抗剂)施用于受试者，并在约3-12天后确定以下细胞群的水平：(i)增殖性CD8+效应记忆细胞；(ii)活化的CD8+效应记忆细胞；(iii)增殖性CD8+中央记忆细胞；和/或(iv)活化的CD8+中央记忆细胞，其中这些细胞群中的一个或多个(例如全部)相对于施用治疗之前它们各自的水平升高(1.5、2、3、4或5倍或更多倍)表明受试者可能对所述治疗有反应，而这些细胞群中的一个或多个(或全部)没有升高则表明受试者不太可能对治疗有反应。一种方法可包括将一定剂量的免疫刺激疗法(例如，GITR激动剂和PD-1/PD-L1轴拮抗剂)施用于受试者，并在约3-12天后确定以下细胞群的水平：(i)增殖性CD4+效应记忆细胞；(ii)活化的CD4+效应记忆细胞；(iii)增殖性CD4+中央记忆细胞；(iv)活化的CD4+中央记忆细胞，其中这些细胞群中的一个或多个(例如全部)相对于施用治疗之前它们各自的水平升高(1.5、2、3、4或5倍或更多倍)表明受试者可能对所述治疗有反应，而这些细胞群中的一个或多个(或全部)没有升高则表明受试者不太可能对治疗有反应。一种方法可包括将一定剂量的免疫刺激疗法(例如，GITR激动剂和PD-1/PD-L1轴拮抗剂)施用于受试者，并在约3-12天后确定以下细胞群的水平：(i)增殖性CD8+效应记忆细胞；(ii)活化的CD8+效应记忆细胞；(iii)增殖性CD8+中央记忆细胞；(iv)活化的CD8+中央记忆细胞；(v)增殖性CD4+效应记忆细胞；(vi)活化的CD4+效应记忆细胞；(vii)增殖性CD4+中央记忆细胞；和(viii)活化的CD4+中央记忆细胞，其中这些细胞群中的一个或多个(例如全部)相对于施用治疗之前它们各自的水平升高(1.5、2、3、4或5倍或更多倍)表明受试者可能对所述治疗有反应，而这些细胞群中的一个或多个(或全部)没有升高则表明受试者不太可能对治疗有反应。在任何这些实施方案中，增殖性CD4效应记忆细胞是CD45+CD3+CD4+CD8-CD197-CD45RA-Ki67+T细胞(CD197是CCR7)；活化的CD4效应记忆细胞是CD45+CD3+CD4+CD8-CD197-CD45RA-HLA-DR+的；增殖性CD4中央记忆细胞是CD45+CD3+CD4+CD8-CD197+CD45RA-Ki67+的；活化的CD4中央记忆细胞是CD45+CD3+CD4+CD8-CD197+CD45RA-HLA-DR+的；增殖性CD8效应记忆细胞是CD45+CD3+CD4-CD8+CD197-CD45RA-Ki67+细胞；活化的CD8效应记忆细胞是CD45+CD3+CD4-CD8+CD197-CD45RA-HLA-DR+的；增殖性CD8中央记忆细胞是CD45+CD3+CD4-CD8+CD 197+CD45RA-Ki67+的；并且活化的CD8中央记忆细胞是CD45+CD3+CD4-CD8+CD197+CD45RA-HLA-DR+的，并且这些细胞的水平通过流式细胞术确定，例如，如在实施例中所述。
试剂盒
在本发明范围内的还有包含抗GITR激动剂(例如抗体)和任选地抗PD-1或抗PD-L1拮抗剂(例如抗体)的试剂盒、组合物和用于治疗用途的说明书。试剂盒通常包括指示试剂盒内容物的预期用途的标签和使用说明书。术语“标签”包括在试剂盒上或与试剂盒一起提供的或以其他方式伴随试剂盒的任何书面或记录材料。因此，本公开提供了一种试剂盒，其包含：(a)适当剂量的一种或多种本文公开的组合物(例如，单独的抗GITR激动剂例如抗体的组合物或同时具有抗PD-1或抗PD-L1拮抗剂的组合物、或包含这两种抗体的组合物)和(b)在本文公开的任何方法中使用所述组合物的说明书。
示例性实施方案
1.一种治疗患有癌症的受试者的方法，其包括每2-4周一次以1-800mg范围内的固定剂量对患有癌症的受试者施用抗GITR激动性抗体(Ab)。
2.实施方案1的方法，其中抗GITR激动性抗体每2周施用一次。
3.实施方案1的方法，其中抗GITR激动性抗体每3周施用一次。
4.实施方案1-3中任一项的方法，其中抗GITR激动性抗体以10-800mg范围内的固定剂量施用。
5.实施方案4的方法，其中抗GITR激动性抗体以100-500mg范围内的固定剂量施用。
6.实施方案1-5中任一项的方法，其中抗GITR激动性抗体以100-500mg范围内的固定剂量每2-3周施用一次。
7.实施方案1-6中任一项的方法，其中施用抗GITR激动性抗体1-5个周期，其中每个周期长8周。
8.实施方案7的方法，其中施用抗GITR激动性抗体3个周期。
9.实施方案1-8中任一项的方法，其中所述癌症是实体瘤癌症。
10.实施方案1-8中任一项的方法，其中所述癌症是晚期癌症。
11.实施方案9的方法，其中所述癌症是晚期实体瘤癌症。
12.实施方案1-8中任一项的方法，其中所述癌症是造血癌。
13.实施方案1-12中任一项的方法，其中所述癌症包括表达高于正常GITR水平的肿瘤。
14.实施方案13的方法，其中所述癌症包括具有高水平GITR阳性Treg/Teff浸润的肿瘤。
15.实施方案1-14中任一项的方法，其中GITR激动性抗体以单一疗法的形式施用。
16.实施方案1-14中任一项的方法，其中GITR激动性抗体作为联合疗法的一部分施用。
17.实施方案16的方法，其中所述联合疗法是固定剂量联合疗法。
18.实施方案16的方法，其中所述联合疗法包括施用除抗GITR激动性抗体之外的肿瘤免疫剂。
19.实施方案18的方法，其中所述肿瘤免疫剂是抗PD1或抗PD-L1拮抗剂。
20.实施方案19的方法，其中所述抗PD1或抗PD-L1拮抗剂是抗体。
21.实施方案19或20的方法，其中在施用抗GITR激动性抗体之前施用抗PD1或抗PD-L1拮抗剂。
22.实施方案21的方法，其中所述抗GITR激动性抗体和抗PD-1或抗PD-L1拮抗剂通过输注静脉内施用。
23.实施方案22的方法，其中在抗PD1或抗PD-L1拮抗剂输注结束之后10-120分钟开始输注抗GITR激动性抗体。
24.实施方案23的方法，其中在抗PD1或抗PD-L1拮抗剂输注结束之后30-60分钟开始输注抗GITR激动性抗体。
25.实施方案24的方法，其中所述癌症是肺癌或宫颈癌。
26.实施方案23的方法，其中将抗GITR激动性抗体和抗PD-1或抗PD-L1拮抗剂抗体联合输注。
27.实施方案1-26中任一项的方法，其中先前未曾用肿瘤免疫剂治疗所述受试者。
28.实施方案27的方法，其中在一年内未曾用肿瘤免疫剂治疗所述受试者。
29.实施方案1-26和28中任一项的方法，其中所述受试者对另一种肿瘤免疫剂疗法无反应或抵抗。
30.实施方案29的方法，其中另一种肿瘤免疫剂疗法是PD-1或PD-L1拮抗剂疗法。
31.实施方案1-30中任一项的方法，其中抗GITR激动性抗体包含28F3.IgG1的VHCDR1、CDR2、CDR3和VL CDR1、CDR2、CDR3。
32.实施方案1-31中任一项的方法，其中抗GITR激动性抗体包含分别与28F3.IgG1的VH和VL序列至少95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的VH和VL链。
33.实施方案1-32中任一项的方法，其中抗GITR激动性抗体包含分别与28F3.IgG1的重链和轻链序列至少95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的重链(任选地不具有重链的C末端赖氨酸)和轻链。
34.实施方案1-33中任一项的方法，当其为联合疗法时，其与抗PD-1抗体一起施用，所述抗PD-1抗体包含纳武单抗的VH CDR1、CDR2、CDR3和VL CDR1、CDR2、CDR3。
35.实施方案34的方法，其中抗PD-1抗体包含分别与纳武单抗的VH和VL序列至少95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的VH和VL链。
36.实施方案35的方法，其中抗PD-1抗体包含分别与纳武单抗的重链和轻链序列至少95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的重链(任选地不具有重链的C末端赖氨酸)和轻链。
37.实施方案1-33中任一项的方法，当其为联合疗法时，其与抗PD-L1抗体一起施用，所述抗PD-L1抗体包含12A4的VH CDR1、CDR2、CDR3和VL CDR1、CDR2、CDR3。
38.实施方案34的方法，其中抗PD-L1抗体包含分别与12A4的VH和VL序列至少95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的VH和VL链。
39.实施方案35的方法，其中抗PD-L1抗体包含分别与12A4的重链和轻链序列至少95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的重链(任选地不具有重链的C末端赖氨酸)和轻链。
40.实施方案1-39中任一项的方法，其中先前已经用不同的治疗剂治疗受试者的同一疾病。
41.实施方案40的方法，其中所述不同的治疗剂不是肿瘤免疫剂。
表2：序列
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Figure BDA0002361346870001111
Figure BDA0002361346870001121
Figure BDA0002361346870001131
Figure BDA0002361346870001141
Figure BDA0002361346870001151
以上表格提供了成熟可变区以及重链和轻链的序列及(在标明的情况下)具有信号肽的序列。
表3：
Figure BDA0002361346870001152
Figure BDA0002361346870001161
Figure BDA0002361346870001171
Figure BDA0002361346870001181
Figure BDA0002361346870001191
Figure BDA0002361346870001201
Figure BDA0002361346870001211
通过下列实施例进一步展示了本公开，这些实施例不应该解释为进一步的限制。所有附图和所有参考文献的内容、Genbank序列、在本申请各处引证的专利和公开的专利申请都通过提述明确并入本文。具体而言，将PCT公开WO 09/045957、WO 09/073533、WO 09/073546、WO 09/054863、PCT/US2013/072918、WO16168716、PCT/US2015/033991(WO15/187,835)、WO16081746、WO16196792、WO17087678、美国专利No.9,228,016(申请系列号14/732,082)以及美国专利公开号2011/0150892的公开内容通过提述明确并入本文。
实施例
实施例1：用于治疗晚期实体瘤的抗GITR激动性抗体
将抗GITR激动性抗体28F3.IgG1施用于患有晚期实体瘤的受试者，以确定安全性、耐受性和功效。当在本实施例和随后的实施例中提及抗GITR抗体的施用时，所述抗GITR抗体是抗体28F3.IgG1(即，分别具有SEQ ID NO：17和19(表2)的全长重链和轻链氨基酸序列)。在晚期实体瘤中抗GITR激动性抗体28F3.IgG1单独或与纳武单抗(BMS-936558；抗PD-1单克隆抗体)联合施用的安全性、耐受性和功效的1/2a期剂量递增和群组扩展研究。基于治疗期间每8周的肿瘤测量、缓解和随访期的生存率，在24周时将测量ORR、缓解持续时间和无进展生存率(PFSF)。
将在8周的周期内对每位受试者每2周一次以10、30、100、240或800mg的剂量水平施用静脉内剂量的28F3.IgG1，持续最多3个研究治疗周期。某些患者在8周的周期内将接受每2周一次包括10、30、100、240或800mg的28F3.IgG1与纳武单抗联合的联合疗法，其中纳武单抗施用的剂量为240mg每2周一次，持续最多3个研究治疗周期。也可以给予1mg和3mg的28F3.IgG1。
在研究治疗的最后剂量后的12个月内的随访期期间，可以按照研究入组时指定的剂量和方案通过单一疗法或联合疗法进行3个周期后(最多总共6个周期)的额外治疗周期或再治疗。
28F3.IgG1将在2种疾病限制人群中施用：(i)在先前的铂双联化疗期间或之后有进行性或复发性疾病，随后在后续的抗PD-1或抗PD-L1治疗期间或之后有复发性或进行性疾病(根据RECIST v1.1)的NSCLC受试者，以及(ii)持续性、复发性或转移性宫颈癌。
28F3.IgG1将在如下疾病限制人群中施用：(i)在先前的铂双联化疗期间或之后有进行性或复发性疾病，随后在后续的抗PD-1或抗PD-L1治疗期间或之后有进行性或复发性疾病(根据RECIST v1.1)的NSCLC受试者；(ii)在先前没有抗PD-1或抗PD-L1疗法的情况下的铂双联化疗期间或之后有进行性或复发性疾病的NSCLC受试者；以及(iii)持续性、复发性或转移性宫颈癌。
将静脉内输注28F3.IgG1和纳武单抗60分钟，每2周一次。治疗期将包括最多三个8周的治疗周期。每个治疗周期将包括4个剂量的28F3.IgG1，其在治疗周期的第1、15、29和43天施用，每2周一次。在具有纳武单抗的治疗中，每个治疗周期将包括4个剂量的28F3.IgG1(在第1、15、29和43天施用)，与在治疗周期的第1、15、29和43天施用的4个剂量的纳武单抗联合。当给予28F3.IgG1和纳武单抗两者时，首先给予纳武单抗，然后在完成纳武单抗输注之后至少30分钟给予28F3.IgG1。
以下联合将施用于患有晚期实体瘤的患者：
表4：
Figure BDA0002361346870001231
如果发现计划剂量/方案作为单一疗法或与纳武单抗联合均不耐受，可以测试28F3.IgG1的中等剂量或较低剂量、或较低频率给药。
对于某些治疗，受试者必须患有以下肿瘤类型之一才适宜：化学疗法后NSCLC或晚期/转移性宫颈癌。
将使用以下纳入和排除标准：
纳入标准：
1.同意取肿瘤活检样品
2.ECOG体能状态应该≤1
3.具有如用于反应评估的针对实体瘤的RECIST v1.1所定义的可测量疾病的至少一个病灶的存在。对于具有在先前照射野中的病灶作为可测量疾病的唯一部位的受试者，允许将其纳入，前提是所述病灶已显示出明确的进展并且可被准确测量。
4.在从最后一次治疗起大于4周的任何时间的洗脱期之后，先前暴露于用任何特异性地靶向检查点途径抑制的药剂(比如抗PD-1、抗PD-L1、抗PDL-2、抗LAG-3、抗CTLA-4抗体)治疗的受试者是允许的。
5.在从最后一次治疗起大于4周的任何时间的洗脱期之后，先前接受了用除抗GITR抗体之外的任何特异性地靶向T细胞共刺激途径的药剂比如抗CD137、抗OX40抗体治疗的受试者是允许的。
6.必须在第一剂量的研究药物之前至少2周已经完成先前的姑息性放疗。强烈建议在基线时具有症状性肿瘤病灶的在第一剂量的研究药物后4周内可能需要姑息性放疗的受试者并在入组前接受姑息性放疗。
7.受试者必须同意允许获取新鲜的肿瘤活检或现有的福尔马林-固定石蜡-包埋(FFPE)的材料(组织块或至少15-20个未染色载玻片)，以进行关联性研究。
8.对于具有实体瘤组织学的受试者的足够的器官功能定义如下：
a.WBC≥2000/μL(第一次研究药物给药4周内稳定脱离任何生长因子)
b.中性粒细胞≥1500/μL(在第一次研究药物给药4周内稳定脱离任何生长因子)
c.血小板≥100x 103/μL(不允许为了达到这个水平在第一次研究药物给药2周内输血)
d.血红蛋白≥8.5g/dL(不允许为了达到这个水平在第一次研究药物给药2周内输血)
e.ALT和AST≤3x ULN
f.总胆红素≤1.5x ULN(吉尔伯特综合征受试者例外，其必须具有正常的直接胆红素)
g.甲状腺功能正常、亚临床甲状腺功能减退((TSH＜10mIU/mL)或通过适当补充甲状腺素已控制甲状腺功能减退
h.血清肌酐≤1.5x ULN或肌酐清除率(CrCl≥40ml/min(使用Cockcroft-Gault测量)
9.对治疗、PK及PD样品采集和必需的研究随访的依从能力。
10.剂量递增：
a.在晚期或转移背景下，受试者必须已经接受过至少一种标准治疗方案(如果这样一种治疗存在的话)并且然后已经进展或对这种方案不耐受。拒绝或不符合标准疗法的受试者将被允许入组，只要将他们的拒绝/不符合项记录在医疗记录中即可。
b.除患有原发性CNS肿瘤或CNS转移灶是活动性疾病的唯一部位的受试者外，所有实体肿瘤组织学均允许。
11.剂量扩展：
a.非小细胞肺癌(NSCLC)
i.所有受试者必须在铂双联化疗期间或之后有进行性或复发性疾病。
ii.具有非鳞状组织学的所有受试者必须有已知的EGFR和ALK状态。
iii.具有活化性EGFR突变的受试者必须已接受EGFR酪氨酸激酶抑制剂。
iv.具有ALK易位的受试者必须已接受ALK抑制剂
b.宫颈癌
i.具有记录的疾病进展的持续性、复发性或转移性子宫颈癌
ii.鳞状、腺鳞状或腺癌组织学-需要确认原始原发肿瘤
iii.对于持续性、复发性或转移性疾病，先前必须已接受一种全身化疗方案(例如紫杉醇/顺铂、紫杉醇/顺铂/贝伐单抗)。在初级放射的同时施用的化学疗法(例如每周一次顺铂)、放射疗法完成后给予的辅助化学疗法、或同时的化学疗法和放射疗法(例如紫杉醇和卡铂最多4个周期)不被视为全身化疗方案。
iv.确认肿瘤HPV状态：如果已知，先前的测试结果是可以接受的。如果肿瘤HPV状态未知，则受试者必须同意允许测试其处于块状或未染色载玻片形式的提交的存档肿瘤组织样品，以确认肿瘤HPV状态。
排除标准：
1.具有已知或可疑中枢神经系统(CNS)转移、未治疗的CNS转移或以CNS为唯一疾病部位的受试者被排除在外。然而，将允许具有受到控制的脑转移的受试者入组。受到控制的脑转移被定义为在放射和/或手术治疗后至少4周没有放射学进展(或者如果没有临床指示干预则观察4周)，停止类固醇至少2周，并且没有新的或进行性的神经系统体征和症状。
a.具有癌性脑膜炎的受试者
b.参与任何在先的关于纳武单抗的临床研究，包括比较组中的受试者，其中总生存率列为主要终点或共同主要终点，并且其中基于主要终点的分析未完成。
2.排除具有先前的恶性肿瘤的受试者(非黑色素瘤皮肤癌以及例如以下原位癌除外：膀胱癌、结肠癌、宫颈癌/非典型增生、黑色素瘤或乳腺癌)。具有超过2年以前诊断的其他第二种恶性肿瘤的受试者是适宜的，所述受试者已接受了带有根治目的的治疗，在间隔期间没有疾病的证据，其被研究者视为具有低复发风险。
3.需要同时干预的其他活动性恶性肿瘤
4.先前的器官同种异体移植物
5.在第一剂量的研究药物给药之前的4周内，包括研究药物在内的任何抗癌疗法(例如化学疗法、生物制剂、疫苗或激素治疗)，例外情况是针对前列腺癌受试者的GnRH激动剂疗法和半衰期＜4周的抗癌疗法(例如先前使用EGFR TKI(第一剂量的研究药物之前至少两周完成是可接受的)。
6.利用抗GITR抗体的先前治疗
7.具有活动性的、已知的或可疑的自身免疫病的受试者。患有白癜风、I型糖尿病、由于自身免疫病症所致的仅需要激素替代的残留甲状腺功能减退的受试者、具有格雷夫病史的甲状腺机能正常(在第一剂量的研究药物之前，具有可疑自身免疫性甲状腺疾病的受试者的甲状腺球蛋白、甲状腺过氧化物酶抗体和甲状腺刺激性免疫球蛋白必须是阴性的)、不需要全身治疗的银屑病、或在缺乏外部触发因素的情况下预期不复发的病症的患者允许入组。
8.有症状的或可能干扰疑似的药物相关肺毒性的检测或管理的间质性肺病的受试者。
9.需要剂量大于10mg/天的泼尼松或等效物的反复类固醇冲击或长期类固醇的慢性阻塞性肺病。
10.具有在研究药物给药的14天内需要用皮质类固醇(＞10mg每日泼尼松等效物)或其他免疫抑制药物进行全身治疗的病症的受试者，在没有活动性自身免疫病的情况下＞10mg每日泼尼松等效物的肾上腺替代类固醇剂量除外。允许用短疗程(＜5天)的类固醇治疗，直到开始研究药物之前7天。
11.未控制的或重大的心血管疾病，包括但不限于，任何下述疾病：
a.过去6个月之内的心肌梗死或中风/TIA
b.过去3个月之内未控制的心绞痛
c.任何临床上显著的心律失常病史(比如室性心动过速、心室颤动或尖端扭转型室性心动过速)
d.QTcF延长＞480msec
e.其他临床上显著的心脏病史(例如，心肌病、NYHA功能分类为III-IV的充血性心力衰竭、心包炎、显著心包积液)
f.需要每日补充氧疗
12.可通过以下试验证明的任何慢性肝炎病史：
a.乙型肝炎表面抗原(HBsAg)阳性试验
b.定量丙型肝炎病毒载量阳性试验(通过PCR)
13.在研究药物给药4周之内的任何大手术。受试者必须在第一剂量的服用研究药物之前至少14天从大手术或重大外伤的影响中恢复。
14.在研究药物之前12周之内，使用含有活病毒的非肿瘤疫苗预防传染病。允许在研究中不受限制地使用灭活的季节性流感疫苗，例如
Figure BDA0002361346870001271
15.在第一剂量的研究药物之前2周之内使用pRBC或血小板输注。
实施例2：在晚期实体瘤受试者中单独地以及与纳武单抗联合给予28F3.IgG1的1/ 2a期研究
目的
这项研究的目的是评估28F3.IgG1在晚期实体瘤受试者中单独地以及与纳武单抗联合给药时的安全性、耐受性、药代动力学、药效学、免疫原性和初步的抗肿瘤活性。
表5：
Figure BDA0002361346870001281
研究类型：干预
研究设计：治疗、平行分配、开放标签、非随机、安全性/功效研究正式名称：在晚期实体瘤中抗GITR单克隆抗体(28F3.IgGl)单独地以及与纳武单抗(BMS-936558，抗PD-1单克隆抗体)联合施用的安全性、耐受性和功效的1/2a期剂量递增和群组扩展研究。
进一步的研究细节：
主要结局测量指标：
●基于不良事件(AE)、严重不良事件(SAE)、除了临床实验室检测异常外还导致停药和死亡的不良事件的发生数量[时间范围：最后剂量的研究药物之后最多30天]的28F3.IgG1的安全性
次要结局测量指标：
●客观缓解率(ORR)[时间范围：治疗期间每8周一次]
ORR被定义为完全缓解(CR)或部分缓解(PR)形式的所有被治疗受试者的最佳总缓解的比例
●无进展生存率(PFSR)[时间范围：治疗期间每8周一次]
被治疗受试者在第24周保持无进展且生存的比例。将通过考虑截尾数据的K-M估计算出该比例
●缓解持续时间[时间范围：治疗期间每8周一次]
缓解持续时间定义为在首次缓解日期与疾病进展或死亡日期(以先发生者为准)之间的时间
●28F3.IgG1的最大观察浓度(Cmax)[时间范围：第1天至第56天]
●28F3.IgG1的最大观察浓度的时间(Tmax)[时间范围：第1天至第56天]
●在28F3.IgG1的一个给药间隔中的浓度-时间曲线下面积(AUC[TAU])[时间范围：第1天至第56天]
●28F3.IgG1的从时间零到最后可定量浓度的时间的血浆浓度-时间曲线下面积(AUC(0-T)[时间范围：第1天至第56天]
●对28F3.IgG1的抗药物抗体(ADA)反应[时间范围：第1天至第56天]
●对28F3.IgG1和纳武单抗的抗药物抗体反应[时间范围：第1天至第56天]
表6：
Figure BDA0002361346870001291
适格性：
有资格纳入研究的年龄：18岁及以上
有资格纳入研究的性别：男女均可
纳入标准：
●对于剂量递增：
i)患有任何先前经过治疗的晚期(转移性或难治性)实体瘤的受试者
●对于群组扩展：
i)受试者的晚期实体瘤先前必须经过治疗才有资格
●美国东部肿瘤协作组(ECOG)体能状态为0或1
●愿意并且能够提供治疗前和治疗中的新鲜肿瘤活检
●有生育能力的女性和男性在治疗过程中，且女性在治疗后持续23周、男性在治疗后持续31周，必须使用可接受的避孕方法
排除标准：
●已知的中枢神经系统转移或者中枢神经系统是唯一的疾病来源
●其他伴随的恶性肿瘤(按照方案有一些例外)
●活动性的、已知的或可疑的自身免疫病
●未控制或重大的心血管疾病
●慢性肝炎病史
●活动性肝炎(乙型或丙型)病史
●肝或骨髓功能受损
●在研究开始之前不到1个月进行大手术。
实施例3：在晚期实体瘤患者中单独的28F3.IgG1(糖皮质激素诱导的肿瘤坏死因 子受体相关基因[GITR]激动剂)或与纳武单抗联合的1/2a其研究的初步结果
背景：28F3.IgG1是结合GITR并促进效应T细胞激活以及可能的调节性T细胞的减少/失活的全人IgG1激动性单克隆抗体。临床前数据显示，抗GITR+抗程序性死亡蛋白分子1(PD-1)可增强抗肿瘤T细胞活性。在这里，我们描述了来自28F3.IgG1±纳武单抗(一种抗PD-1单克隆抗体)在晚期实体瘤患者中的1/2a期研究的初步剂量递增数据。
方法：在剂量递增期间，患者每2周一次接受28F3.IgG1(10-800mg)或28F3.IgG1(30-800mg)+纳武单抗(240mg)(图1)。目标包括安全性(主要)、免疫原性、药代动力学(PK)、药效学(PD)和功效。
结果：截至2016年12月12日，有66名患者接受了28F3.IgG1(n＝29)或28F3.IgG1+纳武单抗(n＝37)治疗。在剂量递增期间无剂量限制性毒性(DLT)报道。关于28F3.IgG1/28F3.IgG1+纳武单抗报道的最常见的治疗相关不良事件包括发热(21％/30％)、发冷(10％/16％)和疲劳(14％/14％)；所有患者中的事件均为G1/2，接受联合疗法的4名患者(6％)除外(G3脂肪酶[n＝1]、G3肺部感染[n＝1]、G3疲劳[n＝1]和G3天冬氨酸氨基转移酶连同G4肌酸磷酸激酶[n＝1；导致治疗中断])。初步数据表明，当施用28F3.IgG1±纳武单抗时，针对28F3.IgG1的免疫原性发生率是低的。初步数据还表明，28F3.IgG1±纳武单抗在单个剂量之后表现出与剂量成比例的线性PK，并且28F3.IgG1±纳武单抗在外周血PD分析中具有生物活性。在用所述联合疗法的几名患者中已观察到初步抗肿瘤活性。
结论：这是关于抗GITR单克隆抗体+PD-1抑制剂的临床数据的第一次报告。28F3.IgG1±纳武单抗的耐受性良好，无DLT，并且免疫原性低。对于预计具有生物活性的剂量的28F3.IgG1+纳武单抗观察到抗肿瘤活性。该组合在晚期实体瘤患者中的进一步评估正在进行中。
实施例4：基线人口统计学、先前治疗和治疗暴露
表7提供了有关参与实施例1至3中所述的临床试验的患者的信息。
表7：基线人口统计学、先前治疗和治疗暴露
Figure BDA0002361346870001311
a包括1名Vater壶腹腺癌患者。
28F3.IgG1单一疗法的中位治疗持续时间范围为7至15.5周，28F3.IgG1+纳武单抗的中位治疗持续时间为8至18周(240/240mg和800/240mg剂量的持续时间更长)。
实施例5：28F3.IgG1±纳武单抗耐受良好
这个实施例描述了在实施例1-4中描述的临床试验期间观察到的任何不良事件。
未观察到剂量相关毒性(DLT)或治疗相关死亡，并且28F3.IgG1+纳武单抗的安全性与先前对纳武单抗单一疗法的研究中所观察到的一致。表8列出了所有患者是否存在治疗相关不良事件(TRAE)。
Figure BDA0002361346870001331
28F3.IgG1+纳武单抗的安全性与先前对纳武单抗单一疗法的研究中所观察到的一致(Brahmer J等人，New EnglJMed. 2015；373：123-135.Motzer RJ等人，New EnglJMed.2015；373：1803-1813.Ferris RL等人，New Engl J Med.2016；375：1856-1867)。
实施例6：28F3.IgG1±纳武单抗展示出线性PK和低免疫原性
这个实施例提供了来自参与实施例1至5中所述的临床试验的患者的PK和免疫原性数据。
图2显示了在用GITR抗体或GITR抗体和纳武单抗治疗的患者中在施用第一剂量后不同时间(以天计)的GITR抗体(28F3.IgG1)浓度(μg/ml)。图2中的绘图显示：
■PK是线性的，并且不受与240mg纳武单抗联合的影响；
■240mg剂量(±纳武单抗；稳态水平)超过了估计在临床前研究中具有生物活性的浓度(13μg/mL；虚线)；并且
■免疫原性是低的，没有患者持续存在抗药物抗体阳性。
另外，GITR抗体单一疗法的PK在10-800mg剂量范围是线性的，并且所述抗体的半衰期为9-12天。
实施例7：28F3.IgG1±纳武单抗增加外周血中的增殖性(Ki67+)NK和CD8细胞
这个实施例提供了来自参与实施例1至6中所述的临床试验的患者的PD数据。
在对患者施用GITR抗体或GITR抗体和纳武单抗的第一剂量后的第8天，在有或没有纳武单抗情况下的GITR抗体都会增加患者外周血中的增殖性(Ki67+)NK和CD8细胞(参见图3)。增殖性CD8+ T细胞水平是通过测量CD45+CD3+CD4-CD8+Ki67+细胞水平来确定的。Ki67阳性细胞用抗Ki-67抗体PerCP5.5(克隆B56；目录号561284，BD Biosciences)来检测。
以下方案用于增殖性NK细胞的流式细胞术分析。通过直接静脉穿刺采集血样，并采集在Streck Cytochex BCT管中。在这些试管中采集血液，可容许样品直到采血后72小时均得到准确分析。取一等份供TBNK(BD biosciences)分析，用于下游计算离散细胞群的绝对计数。对剩余的样品使用标准BD PharmLyse程序进行红细胞裂解。然后使用对表面抗原特异的荧光标记抗体将细胞染色，所述荧光标记抗体为CD45-ApC-H7(2D1，BDbiosciences)、CD3-AF700(SK7，Biolegend)、CD16-BV510(3G8，BD biosciences)、CD27-BV605(O323，Biolegend)、CD56-AF647(HCD56，Biolegend)、CD94-FITC(DX22，Biolegend)、NKp46-BV421(9E2，BD biosciences)、HLA-DR-BV650(G46-6，BD biosciences)、TIM-3-PE(344823，R&D systems)、NKG2D-PE-CF594(1D 11，BD biosciences)和CD57-PE-Cy7(TB01，ebiosciences)。在表面染色之后，使用BD biosciences Cytofix/Cytoperm试剂的标准方案将样品固定并透化。使用用PerCP5.5标记的特异性抗Ki67抗体(B56，BD biosciences)测量Ki67的存在。然后将样品采集在Beckman Coulter Cytoflex S流式细胞仪上，并使用FlowJo软件(TreeStar)分析所得数据。下表列出了使用的抗体：
表9：
抗原 克隆 标记物 目录号 供应商
CD94 DX22 FITC 305504 Biolegend
Ki-67 B56 PerCP5.5 561284 BD biosciences
CD56 HCD56 AF6A7 318314 Biolegend
CD3 SK7 AF700 344822 Biolegend
CD45 2D1 APC-H7 560178 BD biosciences
NKp46 9E2 BV421 564065 BD biosciences
CD16 3G8 BV510 563830 BD biosciences
CD27 O323 BV605 302830 Biolegend
HLA-DR G46-6 BV650 564231 BD biosciences
TIM-3 344823 PE FAB2365P R&D Svstems
NKG2D 1D11 PE-CF594 562498 BD biosciences
CD57 TB01 PE Cv-7 25-0577-42 ebioscience
增殖性NK细胞是CD45+CD3-CD56+Ki67+的。
以下方案用于增殖性CD8细胞的流式细胞术分析。通过直接静脉穿刺采集血样，并采集在Streck Cytochex BCT管中。在这些试管中采集血液可容许样品直到采血后72小时均得到准确分析。取一等份供TBNK(BD biosciences)分析，用于下游计算离散细胞群的绝对计数。使用标准BD PharmLyse程序对剩余的样品进行红细胞裂解。使用对表面抗原特异的荧光标记抗体将细胞染色，所述荧光标记抗体为CD45-ApC-H7(2D1，BD biosciences)、CD3-AF700(SK7，Biolegend)、CD4-BV510(OKT4，Biolegend)、CD8a-BV605(RPA-T8，BDbiosciences)、CD27-AF647(O323，Biolegend)、CD45RA-BB515(HI100，BD biosciences)、CD197-BV421(GO43H7，Biolegend)、HLA-DR-BV650(G46-6，BD biosciences)、PD-1-PE(MIH4，eBiosciences)、CD38-PE Dazzle 594(HB7，Biolegend)和CD 152-PE-Cy7(BNI3，BDbiosciences)。在表面染色之后，使用BD biosciences Cytofix/Cytoperm试剂的标准方案将样品固定并透化。使用用PerCP5.5标记的特异性抗Ki67抗体(B56，BD biosciences)测量Ki67的存在。然后将样品采集在Beckman Coulter Cytoflex S流式细胞仪上，并使用FlowJo软件(TreeStar)分析所得数据。下表列出了使用的抗体：
表10：
抗原 克隆 标记物 目录号 供应商
CD45RA HI100 BB515 564552 BD Biosciences
Ki-67 B56 PerCP5.5 561284 BD Biosciences
CD197 GO43H7 BV421 353208 Biolegend
CD4 OKT4 BV510 300546 Biolegend
CD8a RPA-T8 BV605 563821 BD Biosciences
HLA-DR G46-6 BV650 563965 BD Biosciences
CD27 O323 AF647 302812 Biolegend
CD3 SK7 AF700 344822 Biolegend
CD45 2D1 APC-H7 560178 BD Biosciences
PD1 MIH4 PE 12-9969-42 eBiosciences
CD38 HB7 PE Dazzle 594(TR) 331226 Biolegend
CD152 BNI3 PE-Cv7 560651 BD Biosciences
CD8增殖性CD8+细胞为CD45+CD3+CD4-CD8+Ki67+。
结果表明，30mg-240mg GITR抗体单独以及与纳武单抗结合使用时具有生物活性。
实施例8：28F3.IgG1+纳武单抗增加CD8记忆细胞的增殖和活化
这个实施例提供了来自参与实施例1至7中所述的临床试验的患者的PD数据。
扩展期患者的免疫表型分型显示CD8效应记忆细胞和中央记忆细胞的增殖和活化增加(参见图4)。在第8天到给药前第15天之间观察到短暂增加。对CD4细胞观察到了相似的结果。
对于流式细胞术分析，通过直接静脉穿刺采集血样，并采集在Streck CytochexBCT管中。这些试管中采集血液可容许样品直到采血后72小时均得到准确分析。取一等份供TBNK(BD biosciences)分析，用于下游计算离散细胞群的绝对计数。对剩余的样品使用标准BD PharmLyse程序进行红细胞裂解。使用对表面抗原特异的荧光标记抗体将细胞染色，所述荧光标记抗体为CD45-ApC-H7(2D1，BD biosciences)、CD3-AF700(SK7，Biolegend)、CD4-BV510(OKT4，Biolegend)、CD8a-BV605(RPA-T8，BD biosciences)、CD27-AF647(O323，Biolegend)、CD45RA-BB515(HI100，BD biosciences)、CD197-BV421(GO43H7，Biolegend)、HLA-DR-BV650(G46-6，BD biosciences)、PD-1-PE(MIH4，eBiosciences)、CD38-PE Dazzle594(HB7，Biolegend)和CD152-PE-Cy7(BNI3，BD biosciences)。在表面染色之后，使用BDbiosciences Cytofix/Cytoperm试剂的标准方案将样品固定并透化。使用用PerCP5.5标记的特异性抗Ki67抗体(B56，BD biosciences)测量Ki67的存在。然后将样品采集在BeckmanCoulter Cytoflex S流式细胞仪上，并使用FlowJo软件(TreeStar)分析所得数据。下表列出了使用的抗体：
表11：
Figure BDA0002361346870001371
Figure BDA0002361346870001381
使用以下标志物来量化不同类型的细胞：
CD8效应记忆：CD45+CD3+CD4-CD8+CD197-CD45RA-
活化的CD8效应记忆：CD45+CD3+CD4-CD8+CD197-CD45RA-HLA-DR+
增殖性CD8效应记忆：CD45+CD3+CD4-CD8+CD197-CD45RA-Ki67+
CD8中央记忆：CD45+CD3+CD4-CD8+CD197+CD45RA-
活化的CD8中央记忆：CD45+CD3+CD4-CD8+CD197+CD45RA-HLA-DR+
增殖性CD8中央记忆：CD45+CD3+CD4-CD8+CD197+CD45RA-Ki67+
CD4效应记忆：CD45+CD3+CD4+CD8-CD197-CD45RA-
活化的CD4效应记忆：CD45+CD3+CD4+CD8-CD197-CD45RA-HLA-DR+
增殖性CD4效应记忆：CD45+CD3+CD4+CD8-CD197-CD45RA-Ki67+
CD4中央记忆：CD45+CD3+CD4+CD8-CD197+CD45RA-
活化的CD4中央记忆：CD45+CD3+CD4+CD8-CD197+CD45RA-HLA-DR+
增殖性CD4中央记忆：CD45+CD3+CD4+CD8-CD197+CD45RA-Ki67+
实施例9：在已知具有高GITR表达的肿瘤类型中的反应：宫颈癌患者对28F3.IgG1+ 纳武单抗的反应
宫颈癌与高GITR表达相关(Padovani CTJ等人，Rev Soc Bras Med Trop.2013；46：288-292.2 and Visser J等人，Clin Exp Immunol.2007；150：199-209)。用GITR抗体240mg和纳武单抗240mg联合疗法一名44岁的既往接受过3线治疗(化疗±VEGF抑制剂)的转移性宫颈癌患者。约9个月后，患者表现出部分缓解，具有-62％的肿瘤负荷最佳变化(图5)。数据截止时的缓解持续时间为8周，并且缓解仍在继续之中。
实施例10：在通常不具有IO反应性的肿瘤类型中的反应：vater壶腹腺癌患者中的 28F3.IgG1+纳武单抗
用GITR抗体240mg和纳武单抗240mg联合疗法一名69岁的既往接受过3线化疗的Vater壶腹腺癌患者。观察到部分缓解，具有-38％的肿瘤负荷最佳变化(图6)。数据截止时的缓解持续时间为16周；并且缓解仍在继续之中。
实施例11：在黑色素瘤患者中抗PD-1治疗进展后的反应：28F3.IgG1+纳武单抗
用GITR抗体100mg和纳武单抗240mg联合疗法一名59岁的转移性黑色素瘤患者，其既往接受过3线治疗(BRAF抑制剂、PD-1抑制剂[派姆单抗治疗3个月(2014年2月至2014年5月)；最佳反应是进行性疾病]以及BRAF+MEK抑制剂)。观察到部分缓解，具有-41％的肿瘤负荷最佳变化(图7)。数据截止时的缓解持续时间为24周；并且缓解仍在继续之中。
实施例12：在鼻咽癌患者中抗PD-1治疗进展后的反应：28F3.IgG1+纳武单抗
用GITR抗体240mg和纳武单抗240mg联合疗法一名32岁的鼻咽癌患者，其既往接受过3线治疗(化学疗法、PD-1抑制剂[派姆单抗治疗6个月(2014年7月至2015年1月)；最佳反应是部分缓解，随后进展]以及FGFR+PI3K抑制剂)。观察到部分缓解，具有-43％的肿瘤负荷最佳变化(图8)。数据截止时的缓解持续时间为17周；并且缓解仍在继续之中。
至少基于实施例10和11中描述的结果可见，，在先前的抗PD1治疗过程中/之后进展的患者可以用抗GITR抗体和抗PD-1或PD-L1拮抗剂联合疗法。
如上，前述实施例展现了抗GITR单克隆抗体+PD-1抑制剂的第一份临床报告。该联合治疗显示：
-线性PK，暴露与剂量相关地增加，免疫原性发生率低；
-耐受良好的安全性特征，与纳武单抗单一疗法一致；和
-生物活性，其中，外周血中NK和CD8细胞的增殖增加，效应和中央记忆细胞的增殖和活化增加。
另外，生物活性剂量下的28F3.IgGl+纳武单抗观察到临床反应，包括在先前的抗PD1疗法过程中或之后进展的患者在内。
实施例13.用于首次人体起始剂量选择的基于模型的PK/PD整合
这个实施例描述了如何确定在先前实施例中描述的临床试验中使用的人28F3.IgG1的首次人体(FIH)起始剂量。
选择用于癌症免疫疗法的蛋白治疗剂的FIH起始剂量是很重要的，这对于癌症免疫疗法激动剂(例如GITR激动剂)尤其具有挑战性。免疫介导的不良反应(irAE)是癌症免疫疗法前期开发的关键挑战之一。irAE大多是由于药理学作用过大所致的中靶毒性。FIH起始剂量选择已经从主要基于毒理学的方法演变为基于整合药理学的方法。针对癌症患者的起始剂量选择旨在平衡FIH研究中的安全性和有效性。PK/PD建模在非临床PK和药理学数据整合中起重要作用。
图9显示了用于新型免疫调节蛋白治疗剂的FIH安全起始剂量选择的方法。
28F3.IgG1是一种全人源激动性抗体，其提高Teff存活并降低Treg介导的抑制作用。FcγR介导的ADCC活性导致肿瘤内GITR高表达Treg的优先耗竭。由于对临床安全性信息未知的新型靶标的激动机制，因此采用最小预期生物效应水平(MABEL)方法选择FIH起始剂量。图10中提供了28F3.IgG1 FIH起始剂量选择的简图。DTA-mIgG2a和G2b是具有mIgG2a或mIgG2b Fc的抗mGITR替代抗体。数据分析方法显示在图11中。MABEL的标准如下：
●体外活性/PD反应：有＞50％的几率与对照组显著不同(P＜0.05)。
●抗肿瘤功效：最大功效的20％
表12显示了28F3.IgG1及其小鼠替代物(DTA1-mIgG2a和G2b)的体外效能。所有三种抗体对CD4+ T细胞和CD8+ T细胞的亲和力相似。
表12：
Figure BDA0002361346870001401
确定了28F3.IgG1对人全血PBMC中的体外细胞因子释放和淋巴细胞活化的影响。如图12所示：
●在人T或B细胞上没有细胞因子释放或活化标志物表达增加；
●NK细胞活化(高CD69+和CD25+)，与NK细胞上组成型低水平GITR表达一致；和
●NK细胞活化，其中在1μg/mL增加最小。
确定了小鼠替代抗体DTA1-mIgG2a在同基因小鼠CT26肿瘤模型(CT26细胞植入Balb/C小鼠)中的体内功效。给药方案如图13所示，在细胞植入之后第7、14和21天给予抗体。第12天确定在肿瘤(％CD8+ T细胞、％Tregs、CD8+T细胞/Treg比)中和血液(在CD8+ T细胞中的％Ki67和％Ki67+CD25+)中的PD。如图14所示，0.3-1mg/kg的剂量实现了血液中增殖性CD8+ T细胞的最小增加。在肿瘤中，在0.3-1mg/kg时观察到相似的CD8+ T细胞/Treg比的最小增加，与血液中见到的相似(图15)。
关于抗肿瘤功效，对于DTA1-mIgG2a，在0.2mg/kg时观察到最小功效。观察到在0.6mg/kg时的DTA1-mIgG2b的最小功效。如图16所示，实现20％存活率的抗体暴露量相当于单个0.2mg/kg剂量的暴露量。
利用上面讨论的数据来预计28F3.IgG1的MABEL剂量。如表13所示，将预计剂量确定为2.4-13.6mg固定剂量或0.03-0.17mg/kg的抗体。
表13：
Figure BDA0002361346870001411
Figure BDA0002361346870001421
人体有效剂量是基于小鼠功效数据通过推算确定的，如图17所示。预期的人体有效剂量被确定为0.7-1.4mg/kg静脉注射，每2周一次，目标是13μg/mL的平均稳态浓度(Css_ave)。所述模型中的一些不确定性包括：小鼠肿瘤模型的相关性；小鼠替代抗体被用于研究中；mIgG2a相对于huIgG1可能具有不同的耗竭效力。
总之，基于模型的非临床PK/PD数据整合有助于前期临床开发。选择10mg的I期起始剂量(在2.4-13.6mg MABEL剂量范围内)以平衡药理活性和安全性。这个剂量比根据猴子的IND毒性研究推算的最大推荐起始剂量(992mg或12mg/kg)低约100倍，比预期人体有效剂量(0.7-1.4mg/kg)低约10倍。
如本文中进一步描述的，一项10、30、100、240和800mg的1期剂量递增得到了良好的耐受；240mg Css_谷值超过13μg/mL的浓度；与每2周一次的240mg的纳武单抗联合时，在外周血中观察到增殖性NK和CD8细胞增加。
等效形式：
本领域技术人员将认识到、或能够确定使用不超出常规的实验、本文中公开的具体实施方案的许多等效形式。这样的等效形式预期被下列权利要求涵盖。
序列表
<110> 百时美施贵宝公司
<120> 用抗GITR激动性抗体治疗癌症
<130> MXI-559PC
<140> 未指定
<141> 同时
<150> US 62/507,071
<151> 2017-05-16
<150> US 62/514,245
<151> 2017-06-02
<150> US 62/514,312
<151> 2017-06-02
<150> US 62/573,494
<151> 2017-10-17
<160> 407
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 241
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(241)
<223> 人GITR 同种型1
<400> 1
Met Ala Gln His Gly Ala Met Gly Ala Phe Arg Ala Leu Cys Gly Leu
1 5 10 15
Ala Leu Leu Cys Ala Leu Ser Leu Gly Gln Arg Pro Thr Gly Gly Pro
20 25 30
Gly Cys Gly Pro Gly Arg Leu Leu Leu Gly Thr Gly Thr Asp Ala Arg
35 40 45
Cys Cys Arg Val His Thr Thr Arg Cys Cys Arg Asp Tyr Pro Gly Glu
50 55 60
Glu Cys Cys Ser Glu Trp Asp Cys Met Cys Val Gln Pro Glu Phe His
65 70 75 80
Cys Gly Asp Pro Cys Cys Thr Thr Cys Arg His His Pro Cys Pro Pro
85 90 95
Gly Gln Gly Val Gln Ser Gln Gly Lys Phe Ser Phe Gly Phe Gln Cys
100 105 110
Ile Asp Cys Ala Ser Gly Thr Phe Ser Gly Gly His Glu Gly His Cys
115 120 125
Lys Pro Trp Thr Asp Cys Thr Gln Phe Gly Phe Leu Thr Val Phe Pro
130 135 140
Gly Asn Lys Thr His Asn Ala Val Cys Val Pro Gly Ser Pro Pro Ala
145 150 155 160
Glu Pro Leu Gly Trp Leu Thr Val Val Leu Leu Ala Val Ala Ala Cys
165 170 175
Val Leu Leu Leu Thr Ser Ala Gln Leu Gly Leu His Ile Trp Gln Leu
180 185 190
Arg Ser Gln Cys Met Trp Pro Arg Glu Thr Gln Leu Leu Leu Glu Val
195 200 205
Pro Pro Ser Thr Glu Asp Ala Arg Ser Cys Gln Phe Pro Glu Glu Glu
210 215 220
Arg Gly Glu Arg Ser Ala Glu Glu Lys Gly Arg Leu Gly Asp Leu Trp
225 230 235 240
Val
<210> 2
<211> 255
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(255)
<223> 人GITR 同种型2
<400> 2
Met Ala Gln His Gly Ala Met Gly Ala Phe Arg Ala Leu Cys Gly Leu
1 5 10 15
Ala Leu Leu Cys Ala Leu Ser Leu Gly Gln Arg Pro Thr Gly Gly Pro
20 25 30
Gly Cys Gly Pro Gly Arg Leu Leu Leu Gly Thr Gly Thr Asp Ala Arg
35 40 45
Cys Cys Arg Val His Thr Thr Arg Cys Cys Arg Asp Tyr Pro Gly Glu
50 55 60
Glu Cys Cys Ser Glu Trp Asp Cys Met Cys Val Gln Pro Glu Phe His
65 70 75 80
Cys Gly Asp Pro Cys Cys Thr Thr Cys Arg His His Pro Cys Pro Pro
85 90 95
Gly Gln Gly Val Gln Ser Gln Gly Lys Phe Ser Phe Gly Phe Gln Cys
100 105 110
Ile Asp Cys Ala Ser Gly Thr Phe Ser Gly Gly His Glu Gly His Cys
115 120 125
Lys Pro Trp Thr Asp Cys Cys Trp Arg Cys Arg Arg Arg Pro Lys Thr
130 135 140
Pro Glu Ala Ala Ser Ser Pro Arg Lys Ser Gly Ala Ser Asp Arg Gln
145 150 155 160
Arg Arg Arg Gly Gly Trp Glu Thr Cys Gly Cys Glu Pro Gly Arg Pro
165 170 175
Pro Gly Pro Pro Thr Ala Ala Ser Pro Ser Pro Gly Ala Pro Gln Ala
180 185 190
Ala Gly Ala Leu Arg Ser Ala Leu Gly Arg Ala Leu Leu Pro Trp Gln
195 200 205
Gln Lys Trp Val Gln Glu Gly Gly Ser Asp Gln Arg Pro Gly Pro Cys
210 215 220
Ser Ser Ala Ala Ala Ala Gly Pro Cys Arg Arg Glu Arg Glu Thr Gln
225 230 235 240
Ser Trp Pro Pro Ser Ser Leu Ala Gly Pro Asp Gly Val Gly Ser
245 250 255
<210> 3
<211> 234
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(234)
<223> 人GITR 同种型3
<400> 3
Met Ala Gln His Gly Ala Met Gly Ala Phe Arg Ala Leu Cys Gly Leu
1 5 10 15
Ala Leu Leu Cys Ala Leu Ser Leu Gly Gln Arg Pro Thr Gly Gly Pro
20 25 30
Gly Cys Gly Pro Gly Arg Leu Leu Leu Gly Thr Gly Thr Asp Ala Arg
35 40 45
Cys Cys Arg Val His Thr Thr Arg Cys Cys Arg Asp Tyr Pro Gly Glu
50 55 60
Glu Cys Cys Ser Glu Trp Asp Cys Met Cys Val Gln Pro Glu Phe His
65 70 75 80
Cys Gly Asp Pro Cys Cys Thr Thr Cys Arg His His Pro Cys Pro Pro
85 90 95
Gly Gln Gly Val Gln Ser Gln Gly Lys Phe Ser Phe Gly Phe Gln Cys
100 105 110
Ile Asp Cys Ala Ser Gly Thr Phe Ser Gly Gly His Glu Gly His Cys
115 120 125
Lys Pro Trp Thr Asp Cys Thr Gln Phe Gly Phe Leu Thr Val Phe Pro
130 135 140
Gly Asn Lys Thr His Asn Ala Val Cys Val Pro Gly Ser Pro Pro Ala
145 150 155 160
Glu Pro Leu Gly Trp Leu Thr Val Val Leu Leu Ala Val Ala Ala Cys
165 170 175
Val Leu Leu Leu Thr Ser Ala Gln Leu Gly Leu His Ile Trp Gln Leu
180 185 190
Arg Lys Thr Gln Leu Leu Leu Glu Val Pro Pro Ser Thr Glu Asp Ala
195 200 205
Arg Ser Cys Gln Phe Pro Glu Glu Glu Arg Gly Glu Arg Ser Ala Glu
210 215 220
Glu Lys Gly Arg Leu Gly Asp Leu Trp Val
225 230
<210> 4
<211> 137
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(137)
<223> 人GITR (mature)
<400> 4
Gln Arg Pro Thr Gly Gly Pro Gly Cys Gly Pro Gly Arg Leu Leu Leu
1 5 10 15
Gly Thr Gly Thr Asp Ala Arg Cys Cys Arg Val His Thr Thr Arg Cys
20 25 30
Cys Arg Asp Tyr Pro Gly Glu Glu Cys Cys Ser Glu Trp Asp Cys Met
35 40 45
Cys Val Gln Pro Glu Phe His Cys Gly Asp Pro Cys Cys Thr Thr Cys
50 55 60
Arg His His Pro Cys Pro Pro Gly Gln Gly Val Gln Ser Gln Gly Lys
65 70 75 80
Phe Ser Phe Gly Phe Gln Cys Ile Asp Cys Ala Ser Gly Thr Phe Ser
85 90 95
Gly Gly His Glu Gly His Cys Lys Pro Trp Thr Asp Cys Thr Gln Phe
100 105 110
Gly Phe Leu Thr Val Phe Pro Gly Asn Lys Thr His Asn Ala Val Cys
115 120 125
Val Pro Gly Ser Pro Pro Ala Glu Pro
130 135
<210> 5
<211> 235
<212> PRT
<213> Macaca fascicularis
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(235)
<223> Cynomolgus GITR
<400> 5
Met Cys Ala Ser Gly Thr Leu Cys Cys Leu Ala Leu Leu Cys Ala Ala
1 5 10 15
Ser Leu Gly Gln Arg Pro Thr Gly Gly Pro Gly Cys Gly Pro Gly Arg
20 25 30
Leu Leu Leu Gly Thr Gly Lys Asp Ala Arg Cys Cys Arg Val His Pro
35 40 45
Thr Arg Cys Cys Arg Asp Tyr Gln Gly Glu Glu Cys Cys Ser Glu Trp
50 55 60
Asp Cys Val Cys Val Gln Pro Glu Phe His Cys Gly Asn Pro Cys Cys
65 70 75 80
Thr Thr Cys Gln His His Pro Cys Pro Ser Gly Gln Gly Val Gln Pro
85 90 95
Gln Gly Lys Phe Ser Phe Gly Phe Arg Cys Val Asp Cys Ala Leu Gly
100 105 110
Thr Phe Ser Arg Gly His Asp Gly His Cys Lys Pro Trp Thr Asp Cys
115 120 125
Thr Gln Phe Gly Phe Leu Thr Val Phe Pro Gly Asn Lys Thr His Asn
130 135 140
Ala Val Cys Val Pro Gly Ser Pro Pro Ala Glu Pro Pro Gly Trp Leu
145 150 155 160
Thr Ile Ile Leu Leu Ala Val Ala Ala Cys Val Leu Leu Leu Thr Ser
165 170 175
Ala Gln Leu Gly Leu His Ile Trp Gln Leu Arg Ser Gln Pro Thr Gly
180 185 190
Pro Arg Glu Thr Gln Leu Leu Leu Glu Val Pro Pro Ser Thr Glu Asp
195 200 205
Ala Ser Ser Cys Gln Phe Pro Glu Glu Glu Arg Gly Glu Arg Leu Ala
210 215 220
Glu Glu Lys Gly Arg Leu Gly Asp Leu Trp Val
225 230 235
<210> 6
<211> 199
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(199)
<223> 人GITR-L
<400> 6
Met Thr Leu His Pro Ser Pro Ile Thr Cys Glu Phe Leu Phe Ser Thr
1 5 10 15
Ala Leu Ile Ser Pro Lys Met Cys Leu Ser His Leu Glu Asn Met Pro
20 25 30
Leu Ser His Ser Arg Thr Gln Gly Ala Gln Arg Ser Ser Trp Lys Leu
35 40 45
Trp Leu Phe Cys Ser Ile Val Met Leu Leu Phe Leu Cys Ser Phe Ser
50 55 60
Trp Leu Ile Phe Ile Phe Leu Gln Leu Glu Thr Ala Lys Glu Pro Cys
65 70 75 80
Met Ala Lys Phe Gly Pro Leu Pro Ser Lys Trp Gln Met Ala Ser Ser
85 90 95
Glu Pro Pro Cys Val Asn Lys Val Ser Asp Trp Lys Leu Glu Ile Leu
100 105 110
Gln Asn Gly Leu Tyr Leu Ile Tyr Gly Gln Val Ala Pro Asn Ala Asn
115 120 125
Tyr Asn Asp Val Ala Pro Phe Glu Val Arg Leu Tyr Lys Asn Lys Asp
130 135 140
Met Ile Gln Thr Leu Thr Asn Lys Ser Lys Ile Gln Asn Val Gly Gly
145 150 155 160
Thr Tyr Glu Leu His Val Gly Asp Thr Ile Asp Leu Ile Phe Asn Ser
165 170 175
Glu His Gln Val Leu Lys Asn Asn Thr Tyr Trp Gly Ile Ile Leu Leu
180 185 190
Ala Asn Pro Gln Phe Ile Ser
195
<210> 7
<211> 329
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(329)
<223> 人IgG1恒定域
<400> 7
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
100 105 110
Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
115 120 125
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
130 135 140
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
145 150 155 160
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
165 170 175
Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
180 185 190
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
195 200 205
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
210 215 220
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu
225 230 235 240
Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
245 250 255
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
260 265 270
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
275 280 285
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
290 295 300
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
305 310 315 320
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
325
<210> 8
<211> 329
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(329)
<223> 人IgG1恒定域 (同种异型变体)
<400> 8
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
100 105 110
Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
115 120 125
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
130 135 140
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
145 150 155 160
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
165 170 175
Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
180 185 190
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
195 200 205
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
210 215 220
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu
225 230 235 240
Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
245 250 255
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
260 265 270
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
275 280 285
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
290 295 300
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
305 310 315 320
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
325
<210> 9
<211> 329
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(329)
<223> 人IgG1恒定域，具有L234A, L235E,和G237A突变
<400> 9
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
100 105 110
Pro Ala Pro Glu Ala Glu Gly Ala Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
115 120 125
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
130 135 140
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
145 150 155 160
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
165 170 175
Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
180 185 190
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
195 200 205
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
210 215 220
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu
225 230 235 240
Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
245 250 255
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
260 265 270
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
275 280 285
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
290 295 300
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
305 310 315 320
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
325
<210> 10
<211> 329
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(329)
<223> 人IgG1恒定域，具有A330S和P331S突变
<400> 10
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
100 105 110
Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
115 120 125
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
130 135 140
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
145 150 155 160
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
165 170 175
Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
180 185 190
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
195 200 205
Lys Ala Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
210 215 220
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu
225 230 235 240
Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
245 250 255
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
260 265 270
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
275 280 285
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
290 295 300
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
305 310 315 320
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
325
<210> 11
<211> 329
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(329)
<223> 人IgG1.1恒定域 (L234A, L235E, G237A, A330S,和
P331S突变)
<400> 11
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
100 105 110
Pro Ala Pro Glu Ala Glu Gly Ala Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
115 120 125
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
130 135 140
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
145 150 155 160
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
165 170 175
Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
180 185 190
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
195 200 205
Lys Ala Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
210 215 220
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu
225 230 235 240
Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
245 250 255
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
260 265 270
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
275 280 285
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
290 295 300
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
305 310 315 320
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
325
<210> 12
<211> 107
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(107)
<223> 人IgG1 kappa 轻链恒定区(CL)
<400> 12
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
1 5 10 15
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
20 25 30
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
35 40 45
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
50 55 60
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
65 70 75 80
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
85 90 95
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
100 105
<210> 13
<211> 124
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 28F3 (VH)
<400> 13
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Val Ile Trp Tyr Glu Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gly Ser Met Val Arg Gly Asp Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp
100 105 110
Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 14
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 28F3 (VL)
<400> 14
Ala Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Ala
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asp Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe Asn Ser Tyr Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 15
<211> 450
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 28F3 (全长野生型重链)
<400> 15
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Val Ile Trp Tyr Glu Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gly Ser Met Val Arg Gly Asp Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp
100 105 110
Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys
115 120 125
Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu
130 135 140
Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro
145 150 155 160
Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr
165 170 175
Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val
180 185 190
Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr Tyr Thr Cys Asn
195 200 205
Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val Glu Arg
210 215 220
Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly
225 230 235 240
Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile
245 250 255
Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu
260 265 270
Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His
275 280 285
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg
290 295 300
Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys
305 310 315 320
Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro Ile Glu
325 330 335
Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr
340 345 350
Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu
355 360 365
Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp
370 375 380
Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met
385 390 395 400
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp
405 410 415
Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His
420 425 430
Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
435 440 445
Gly Lys
450
<210> 16
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 28F3 (全长野生型轻链)
<400> 16
Ala Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Ala
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asp Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe Asn Ser Tyr Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 17
<211> 453
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 28F3.IgG1 (VH + IgG1)
<400> 17
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Val Ile Trp Tyr Glu Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gly Ser Met Val Arg Gly Asp Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp
100 105 110
Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys
115 120 125
Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly
130 135 140
Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro
145 150 155 160
Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr
165 170 175
Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val
180 185 190
Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn
195 200 205
Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro
210 215 220
Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu
225 230 235 240
Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
245 250 255
Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
260 265 270
Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
275 280 285
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn
290 295 300
Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp
305 310 315 320
Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro
325 330 335
Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu
340 345 350
Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn
355 360 365
Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile
370 375 380
Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr
385 390 395 400
Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys
405 410 415
Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys
420 425 430
Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
435 440 445
Ser Leu Ser Pro Gly
450
<210> 18
<211> 453
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 28F3.IgG1.1 (VH + IgG1.1)
<400> 18
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Val Ile Trp Tyr Glu Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gly Ser Met Val Arg Gly Asp Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp
100 105 110
Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys
115 120 125
Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly
130 135 140
Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro
145 150 155 160
Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr
165 170 175
Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val
180 185 190
Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn
195 200 205
Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro
210 215 220
Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu
225 230 235 240
Ala Glu Gly Ala Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
245 250 255
Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
260 265 270
Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
275 280 285
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn
290 295 300
Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp
305 310 315 320
Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro
325 330 335
Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu
340 345 350
Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn
355 360 365
Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile
370 375 380
Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr
385 390 395 400
Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys
405 410 415
Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys
420 425 430
Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
435 440 445
Ser Leu Ser Pro Gly
450
<210> 19
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 28F3.IgG1 (VL + CL)
<400> 19
Ala Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Ala
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asp Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe Asn Ser Tyr Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 20
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 28F3 VH CDR1
<400> 20
Ser Tyr Gly Met His
1 5
<210> 21
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 28F3 VH CDR2
<400> 21
Val Ile Trp Tyr Glu Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 22
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 28F3 VH CDR3
<400> 22
Gly Gly Ser Met Val Arg Gly Asp Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp Val
1 5 10 15
<210> 23
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 28F3 VL CDR1
<400> 23
Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Ala Leu Ala
1 5 10
<210> 24
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 28F3 VL CDR2
<400> 24
Asp Ala Ser Ser Leu Glu Ser
1 5
<210> 25
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 28F3 VL CDR3
<400> 25
Gln Gln Phe Asn Ser Tyr Pro Tyr Thr
1 5
<210> 26
<211> 123
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 19D3 (VH)
<400> 26
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Gly Phe His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Val Ile Trp Tyr Ala Gly Ser Asn Lys Phe Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gly Gln Leu Asp Tyr Tyr Tyr Tyr Tyr Val Met Asp Val
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 27
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 19D3 (VL)
<400> 27
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Glu Lys Ala Pro Lys Ser Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 28
<211> 449
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 19D3 (全长野生型重链)
<400> 28
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Gly Phe His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Val Ile Trp Tyr Ala Gly Ser Asn Lys Phe Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gly Gln Leu Asp Tyr Tyr Tyr Tyr Tyr Val Met Asp Val
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly
115 120 125
Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser
130 135 140
Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val
145 150 155 160
Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe
165 170 175
Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val
180 185 190
Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr Tyr Thr Cys Asn Val
195 200 205
Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val Glu Arg Lys
210 215 220
Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro
225 230 235 240
Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
245 250 255
Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp
260 265 270
Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn
275 280 285
Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val
290 295 300
Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu
305 310 315 320
Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys
325 330 335
Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr
340 345 350
Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr
355 360 365
Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu
370 375 380
Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu
385 390 395 400
Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys
405 410 415
Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu
420 425 430
Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
435 440 445
Lys
<210> 29
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 19D3 (全长野生型轻链)
<400> 29
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Glu Lys Ala Pro Lys Ser Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Tyr
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Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 30
<211> 452
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 19D3.IgG1 (VH + IgG1)
<400> 30
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Gly Phe His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Val Ile Trp Tyr Ala Gly Ser Asn Lys Phe Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gly Gln Leu Asp Tyr Tyr Tyr Tyr Tyr Val Met Asp Val
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly
115 120 125
Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly
130 135 140
Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val
145 150 155 160
Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe
165 170 175
Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val
180 185 190
Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val
195 200 205
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Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr
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Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val
260 265 270
Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val
275 280 285
Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser
290 295 300
Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu
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Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala
325 330 335
Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro
340 345 350
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355 360 365
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370 375 380
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Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu
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420 425 430
Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser
435 440 445
Leu Ser Pro Gly
450
<210> 31
<211> 452
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 19D3.IgG1.1 (VH + IgG1.1)
<400> 31
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Gly Phe His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
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50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
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100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly
115 120 125
Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly
130 135 140
Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val
145 150 155 160
Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe
165 170 175
Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val
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Glu Gly Ala Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr
245 250 255
Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val
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Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val
275 280 285
Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser
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Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ser
325 330 335
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340 345 350
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Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu
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Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser
420 425 430
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435 440 445
Leu Ser Pro Gly
450
<210> 32
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 19D3.IgG1 (VL + CL)
<400> 32
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
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Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Glu Lys Ala Pro Lys Ser Leu Ile
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65 70 75 80
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Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
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Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
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Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
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Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
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Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 33
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 19D3 VH CDR1
<400> 33
Ser Tyr Gly Phe His
1 5
<210> 34
<211> 17
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<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 19D3 VH CDR2
<400> 34
Val Ile Trp Tyr Ala Gly Ser Asn Lys Phe Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 35
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 19D3 VH CDR3
<400> 35
Gly Gly Gln Leu Asp Tyr Tyr Tyr Tyr Tyr Val Met Asp Val
1 5 10
<210> 36
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 19D3 VL CDR1
<400> 36
Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp Leu Ala
1 5 10
<210> 37
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 19D3 VL CDR2
<400> 37
Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser
1 5
<210> 38
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 19D3 VL CDR3
<400> 38
Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Tyr Thr
1 5
<210> 39
<211> 123
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 18E10 (VH)
<400> 39
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Val Ile Trp Tyr Ala Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gly Arg Ile Ala Val Ala Phe Tyr Tyr Ser Met Asp Val
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 40
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 18E10 (VL)
<400> 40
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Glu Lys Ala Pro Lys Ser Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 41
<211> 449
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 18E10 (全长野生型重链)
<400> 41
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Val Ile Trp Tyr Ala Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gly Arg Ile Ala Val Ala Phe Tyr Tyr Ser Met Asp Val
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly
115 120 125
Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser
130 135 140
Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val
145 150 155 160
Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe
165 170 175
Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val
180 185 190
Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr Tyr Thr Cys Asn Val
195 200 205
Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val Glu Arg Lys
210 215 220
Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro
225 230 235 240
Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
245 250 255
Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp
260 265 270
Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn
275 280 285
Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val
290 295 300
Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu
305 310 315 320
Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys
325 330 335
Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr
340 345 350
Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr
355 360 365
Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu
370 375 380
Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu
385 390 395 400
Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys
405 410 415
Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu
420 425 430
Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
435 440 445
Lys
<210> 42
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 18E10 (全长野生型轻链)
<400> 42
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Glu Lys Ala Pro Lys Ser Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
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115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 43
<211> 452
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 18E10.IgG1 (VH + IgG1)
<400> 43
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Val Ile Trp Tyr Ala Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gly Arg Ile Ala Val Ala Phe Tyr Tyr Ser Met Asp Val
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly
115 120 125
Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly
130 135 140
Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val
145 150 155 160
Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe
165 170 175
Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val
180 185 190
Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val
195 200 205
Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys
210 215 220
Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu
225 230 235 240
Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr
245 250 255
Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val
260 265 270
Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val
275 280 285
Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser
290 295 300
Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu
305 310 315 320
Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala
325 330 335
Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro
340 345 350
Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln
355 360 365
Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala
370 375 380
Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr
385 390 395 400
Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu
405 410 415
Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser
420 425 430
Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser
435 440 445
Leu Ser Pro Gly
450
<210> 44
<211> 452
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 18E10.IgG1.1 (VH + IgG1.1)
<400> 44
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Val Ile Trp Tyr Ala Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
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65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gly Arg Ile Ala Val Ala Phe Tyr Tyr Ser Met Asp Val
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly
115 120 125
Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly
130 135 140
Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val
145 150 155 160
Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe
165 170 175
Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val
180 185 190
Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val
195 200 205
Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys
210 215 220
Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala
225 230 235 240
Glu Gly Ala Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr
245 250 255
Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val
260 265 270
Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val
275 280 285
Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser
290 295 300
Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu
305 310 315 320
Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ser
325 330 335
Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro
340 345 350
Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln
355 360 365
Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala
370 375 380
Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr
385 390 395 400
Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu
405 410 415
Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser
420 425 430
Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser
435 440 445
Leu Ser Pro Gly
450
<210> 45
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 18E10.IgG1 (VL + CL)
<400> 45
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Glu Lys Ala Pro Lys Ser Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 46
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 18E10 VH CDR1
<400> 46
Ser Tyr Gly Met His
1 5
<210> 47
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 18E10 VH CDR2
<400> 47
Val Ile Trp Tyr Ala Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 48
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 18E10 VH CDR3
<400> 48
Gly Gly Arg Ile Ala Val Ala Phe Tyr Tyr Ser Met Asp Val
1 5 10
<210> 49
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 18E10 VL CDR1
<400> 49
Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp Leu Ala
1 5 10
<210> 50
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 18E10 VL CDR2
<400> 50
Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser
1 5
<210> 51
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 18E10 VL CDR3
<400> 51
Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Tyr Thr
1 5
<210> 52
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 3C3 (VH)
<400> 52
Gln Val Gln Leu Gln Gln Trp Gly Ala Gly Leu Leu Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Tyr Gly Gly Ser Phe Ser Gly Tyr
20 25 30
Tyr Trp Thr Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Lys Ile Asn His Ser Gly Asn Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys
50 55 60
Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu
65 70 75 80
Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Leu Gly Ala Phe Asp Ala Phe Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr Met
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 53
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 3C3 (VL1)
<400> 53
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Glu Lys Ala Pro Lys Ser Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 54
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 3C3 (VL2)
<400> 54
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Gly Val Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Pro Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Asn Trp His Thr
85 90 95
Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 55
<211> 447
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 3C3 (全长野生型重链)
<400> 55
Gln Val Gln Leu Gln Gln Trp Gly Ala Gly Leu Leu Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Tyr Gly Gly Ser Phe Ser Gly Tyr
20 25 30
Tyr Trp Thr Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Lys Ile Asn His Ser Gly Asn Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys
50 55 60
Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu
65 70 75 80
Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Leu Gly Ala Phe Asp Ala Phe Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr Met
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu
115 120 125
Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys
130 135 140
Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser
145 150 155 160
Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser
165 170 175
Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser
180 185 190
Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn
195 200 205
Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His
210 215 220
Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val
225 230 235 240
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr
245 250 255
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu
260 265 270
Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
275 280 285
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser
290 295 300
Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
305 310 315 320
Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile
325 330 335
Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
340 345 350
Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu
355 360 365
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
370 375 380
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser
385 390 395 400
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
405 410 415
Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu
420 425 430
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435 440 445
<210> 56
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 3C3 L1 (全长野生型轻链 1)
<400> 56
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Glu Lys Ala Pro Lys Ser Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 57
<211> 213
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 3C3 L2 (全长野生型轻链 2)
<400> 57
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Gly Val Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Pro Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Asn Trp His Thr
85 90 95
Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro
100 105 110
Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr
115 120 125
Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys
130 135 140
Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu
145 150 155 160
Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser
165 170 175
Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala
180 185 190
Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe
195 200 205
Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 58
<211> 446
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 3C3.IgG1 (VH + IgG1)
<400> 58
Gln Val Gln Leu Gln Gln Trp Gly Ala Gly Leu Leu Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Tyr Gly Gly Ser Phe Ser Gly Tyr
20 25 30
Tyr Trp Thr Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Lys Ile Asn His Ser Gly Asn Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys
50 55 60
Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu
65 70 75 80
Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Leu Gly Ala Phe Asp Ala Phe Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr Met
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu
115 120 125
Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys
130 135 140
Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser
145 150 155 160
Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser
165 170 175
Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser
180 185 190
Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn
195 200 205
Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His
210 215 220
Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val
225 230 235 240
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr
245 250 255
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu
260 265 270
Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
275 280 285
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser
290 295 300
Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
305 310 315 320
Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile
325 330 335
Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
340 345 350
Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu
355 360 365
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
370 375 380
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser
385 390 395 400
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
405 410 415
Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu
420 425 430
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
435 440 445
<210> 59
<211> 446
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 3C3.IgG1.1 (VH + IgG1.1)
<400> 59
Gln Val Gln Leu Gln Gln Trp Gly Ala Gly Leu Leu Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Tyr Gly Gly Ser Phe Ser Gly Tyr
20 25 30
Tyr Trp Thr Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Lys Ile Asn His Ser Gly Asn Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys
50 55 60
Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu
65 70 75 80
Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Leu Gly Ala Phe Asp Ala Phe Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr Met
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu
115 120 125
Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys
130 135 140
Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser
145 150 155 160
Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser
165 170 175
Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser
180 185 190
Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn
195 200 205
Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His
210 215 220
Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Glu Gly Ala Pro Ser Val
225 230 235 240
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr
245 250 255
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu
260 265 270
Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
275 280 285
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser
290 295 300
Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
305 310 315 320
Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile
325 330 335
Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
340 345 350
Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu
355 360 365
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
370 375 380
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser
385 390 395 400
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
405 410 415
Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu
420 425 430
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
435 440 445
<210> 60
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 3C3.IgG1 (VL1 + CL)
<400> 60
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Glu Lys Ala Pro Lys Ser Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 61
<211> 213
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 3C3IgG1.2 (VL2 + CL)
<400> 61
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Gly Val Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Pro Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Asn Trp His Thr
85 90 95
Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro
100 105 110
Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr
115 120 125
Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys
130 135 140
Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu
145 150 155 160
Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser
165 170 175
Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala
180 185 190
Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe
195 200 205
Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 62
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 3C3 VH CDR1
<400> 62
Gly Tyr Tyr Trp Thr
1 5
<210> 63
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 3C3 VH CDR2
<400> 63
Lys Ile Asn His Ser Gly Asn Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser
1 5 10 15
<210> 64
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 3C3 VH CDR3
<400> 64
Leu Gly Ala Phe Asp Ala Phe Asp Ile
1 5
<210> 65
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 3C3 VL1 CDR1
<400> 65
Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp Leu Ala
1 5 10
<210> 66
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 3C3 VL1 CDR2
<400> 66
Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser
1 5
<210> 67
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 3C3 VL1 CDR3
<400> 67
Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Tyr Thr
1 5
<210> 68
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 3C3 VL2 CDR1
<400> 68
Arg Ala Ser Gln Gly Val Ser Ser Tyr Leu Ala
1 5 10
<210> 69
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 3C3 VL2 CDR2
<400> 69
Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr
1 5
<210> 70
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 3C3 VL2 CDR3
<400> 70
Gln Gln Arg Ser Asn Trp His Thr
1 5
<210> 71
<211> 124
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 2G6 (VH)
<400> 71
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ile Leu Ser Asp Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Thr Val Ile Trp Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Phe Tyr Val Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Val Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gly Arg Leu Ala Thr Gly His Phe Tyr Tyr Val Met Asp
100 105 110
Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 72
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 2G6 (VL)
<400> 72
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Glu Lys Ala Pro Lys Ser Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 73
<211> 450
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 2G6 (全长野生型重链)
<400> 73
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ile Leu Ser Asp Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Thr Val Ile Trp Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Phe Tyr Val Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Val Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gly Arg Leu Ala Thr Gly His Phe Tyr Tyr Val Met Asp
100 105 110
Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys
115 120 125
Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu
130 135 140
Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro
145 150 155 160
Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr
165 170 175
Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val
180 185 190
Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr Tyr Thr Cys Asn
195 200 205
Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val Glu Arg
210 215 220
Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly
225 230 235 240
Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile
245 250 255
Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu
260 265 270
Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His
275 280 285
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg
290 295 300
Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys
305 310 315 320
Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro Ile Glu
325 330 335
Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr
340 345 350
Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu
355 360 365
Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp
370 375 380
Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met
385 390 395 400
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp
405 410 415
Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His
420 425 430
Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
435 440 445
Gly Lys
450
<210> 74
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 2G6 (全长野生型轻链)
<400> 74
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Glu Lys Ala Pro Lys Ser Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 75
<211> 453
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 2G6.IgG1 (VH + IgG1)
<400> 75
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ile Leu Ser Asp Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Thr Val Ile Trp Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Phe Tyr Val Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Val Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gly Arg Leu Ala Thr Gly His Phe Tyr Tyr Val Met Asp
100 105 110
Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys
115 120 125
Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly
130 135 140
Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro
145 150 155 160
Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr
165 170 175
Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val
180 185 190
Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn
195 200 205
Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro
210 215 220
Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu
225 230 235 240
Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
245 250 255
Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
260 265 270
Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
275 280 285
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn
290 295 300
Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp
305 310 315 320
Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro
325 330 335
Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu
340 345 350
Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn
355 360 365
Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile
370 375 380
Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr
385 390 395 400
Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys
405 410 415
Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys
420 425 430
Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
435 440 445
Ser Leu Ser Pro Gly
450
<210> 76
<211> 453
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 2G6.IgG1.1 (VH + IgG1.1)
<400> 76
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ile Leu Ser Asp Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Thr Val Ile Trp Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Phe Tyr Val Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Val Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gly Arg Leu Ala Thr Gly His Phe Tyr Tyr Val Met Asp
100 105 110
Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys
115 120 125
Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly
130 135 140
Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro
145 150 155 160
Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr
165 170 175
Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val
180 185 190
Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn
195 200 205
Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro
210 215 220
Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu
225 230 235 240
Ala Glu Gly Ala Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
245 250 255
Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
260 265 270
Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
275 280 285
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn
290 295 300
Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp
305 310 315 320
Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro
325 330 335
Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu
340 345 350
Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn
355 360 365
Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile
370 375 380
Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr
385 390 395 400
Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys
405 410 415
Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys
420 425 430
Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
435 440 445
Ser Leu Ser Pro Gly
450
<210> 77
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 2G6.IgG1 (VL + CL)
<400> 77
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Glu Lys Ala Pro Lys Ser Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 78
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 2G6 VH CDR1
<400> 78
Asp Tyr Gly Met His
1 5
<210> 79
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 2G6 VH CDR2
<400> 79
Val Ile Trp Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Phe Tyr Val Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 80
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 2G6 VH CDR3
<400> 80
Gly Gly Arg Leu Ala Thr Gly His Phe Tyr Tyr Val Met Asp Val
1 5 10 15
<210> 81
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 2G6 VL CDR1
<400> 81
Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp Leu Ala
1 5 10
<210> 82
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 2G6 VL CDR2
<400> 82
Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser
1 5
<210> 83
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 2G6 VL CDR3
<400> 83
Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Tyr Thr
1 5
<210> 84
<211> 124
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 8A6 (VH)
<400> 84
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Gly Met Gln Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Val Ile Trp Tyr Glu Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Glu Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gly Leu Met Val Arg Gly Leu Phe Tyr Tyr Gly Met Asp
100 105 110
Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 85
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 8A6 (VL)
<400> 85
Ala Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Ala
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Phe Leu Ile
35 40 45
Tyr Asp Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe Asn Ser Tyr Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 86
<211> 450
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 8A6 (全长野生型重链)
<400> 86
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Gly Met Gln Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Val Ile Trp Tyr Glu Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Glu Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gly Leu Met Val Arg Gly Leu Phe Tyr Tyr Gly Met Asp
100 105 110
Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys
115 120 125
Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu
130 135 140
Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro
145 150 155 160
Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr
165 170 175
Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val
180 185 190
Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr Tyr Thr Cys Asn
195 200 205
Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val Glu Arg
210 215 220
Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly
225 230 235 240
Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile
245 250 255
Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu
260 265 270
Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His
275 280 285
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg
290 295 300
Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys
305 310 315 320
Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro Ile Glu
325 330 335
Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr
340 345 350
Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu
355 360 365
Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp
370 375 380
Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met
385 390 395 400
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp
405 410 415
Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His
420 425 430
Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
435 440 445
Gly Lys
450
<210> 87
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 8A6 (全长野生型轻链)
<400> 87
Ala Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Ala
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Phe Leu Ile
35 40 45
Tyr Asp Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe Asn Ser Tyr Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 88
<211> 453
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 8A6.IgG1 (VH + IgG1)
<400> 88
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Gly Met Gln Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Val Ile Trp Tyr Glu Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Glu Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gly Leu Met Val Arg Gly Leu Phe Tyr Tyr Gly Met Asp
100 105 110
Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys
115 120 125
Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly
130 135 140
Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro
145 150 155 160
Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr
165 170 175
Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val
180 185 190
Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn
195 200 205
Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro
210 215 220
Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu
225 230 235 240
Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
245 250 255
Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
260 265 270
Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
275 280 285
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn
290 295 300
Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp
305 310 315 320
Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro
325 330 335
Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu
340 345 350
Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn
355 360 365
Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile
370 375 380
Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr
385 390 395 400
Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys
405 410 415
Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys
420 425 430
Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
435 440 445
Ser Leu Ser Pro Gly
450
<210> 89
<211> 453
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 8A6.IgG1.1 (VH + IgG1.1)
<400> 89
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Gly Met Gln Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Val Ile Trp Tyr Glu Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Glu Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gly Leu Met Val Arg Gly Leu Phe Tyr Tyr Gly Met Asp
100 105 110
Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys
115 120 125
Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly
130 135 140
Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro
145 150 155 160
Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr
165 170 175
Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val
180 185 190
Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn
195 200 205
Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro
210 215 220
Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu
225 230 235 240
Ala Glu Gly Ala Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
245 250 255
Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
260 265 270
Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
275 280 285
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn
290 295 300
Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp
305 310 315 320
Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro
325 330 335
Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu
340 345 350
Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn
355 360 365
Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile
370 375 380
Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr
385 390 395 400
Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys
405 410 415
Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys
420 425 430
Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
435 440 445
Ser Leu Ser Pro Gly
450
<210> 90
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 8A6.IgG1 (VL + CL)
<400> 90
Ala Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Ala
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Phe Leu Ile
35 40 45
Tyr Asp Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe Asn Ser Tyr Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 91
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 8A6 VH CDR1
<400> 91
Ser Tyr Gly Met Gln
1 5
<210> 92
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 8A6 VH CDR2
<400> 92
Val Ile Trp Tyr Glu Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 93
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 8A6 VH CDR3
<400> 93
Gly Gly Leu Met Val Arg Gly Leu Phe Tyr Tyr Gly Met Asp Val
1 5 10 15
<210> 94
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 8A6 VL CDR1
<400> 94
Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Ala Leu Ala
1 5 10
<210> 95
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 8A6 VL CDR2
<400> 95
Asp Ala Ser Ser Leu Glu Ser
1 5
<210> 96
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 8A6 VL CDR3
<400> 96
Gln Gln Phe Asn Ser Tyr Pro Tyr Thr
1 5
<210> 97
<211> 125
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 9G7 (VH)
<400> 97
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Thr Val
20 25 30
Trp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Gly Arg Ile Lys Ser Lys Thr Asp Gly Gly Thr Thr Asp Tyr Ala Ala
50 55 60
Pro Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr
65 70 75 80
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu His Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys Thr Thr Gly Gln Leu Ile Pro Tyr Ser Tyr Tyr Tyr Gly Met
100 105 110
Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 98
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 9G7 (VL1)
<400> 98
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu
65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Ser Ser Pro
85 90 95
Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 99
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 9G7 (VL2)
<400> 99
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Thr Ser Ser
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu
65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Ser Ser Pro
85 90 95
Ile Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 100
<211> 452
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 9G7 (全长野生型重链)
<400> 100
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Thr Val
20 25 30
Trp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Gly Arg Ile Lys Ser Lys Thr Asp Gly Gly Thr Thr Asp Tyr Ala Ala
50 55 60
Pro Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr
65 70 75 80
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu His Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys Thr Thr Gly Gln Leu Ile Pro Tyr Ser Tyr Tyr Tyr Gly Met
100 105 110
Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr
115 120 125
Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser
130 135 140
Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu
145 150 155 160
Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His
165 170 175
Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser
180 185 190
Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys
195 200 205
Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu
210 215 220
Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Ser Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu
225 230 235 240
Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu
245 250 255
Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser
260 265 270
Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu
275 280 285
Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr
290 295 300
Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn
305 310 315 320
Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser
325 330 335
Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln
340 345 350
Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val
355 360 365
Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val
370 375 380
Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro
385 390 395 400
Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr
405 410 415
Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val
420 425 430
Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu
435 440 445
Ser Leu Gly Lys
450
<210> 101
<211> 215
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 9G7 L2 (全长野生型轻链 2)
<400> 101
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Thr Ser Ser
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu
65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Ser Ser Pro
85 90 95
Ile Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala
100 105 110
Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser
115 120 125
Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu
130 135 140
Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser
145 150 155 160
Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu
165 170 175
Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val
180 185 190
Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys
195 200 205
Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 102
<211> 454
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 9G7.IgG1 (VH + IgG1)
<400> 102
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Thr Val
20 25 30
Trp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Gly Arg Ile Lys Ser Lys Thr Asp Gly Gly Thr Thr Asp Tyr Ala Ala
50 55 60
Pro Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr
65 70 75 80
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu His Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys Thr Thr Gly Gln Leu Ile Pro Tyr Ser Tyr Tyr Tyr Gly Met
100 105 110
Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr
115 120 125
Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser
130 135 140
Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu
145 150 155 160
Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His
165 170 175
Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser
180 185 190
Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys
195 200 205
Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu
210 215 220
Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
225 230 235 240
Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
245 250 255
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
260 265 270
Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp
275 280 285
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr
290 295 300
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
305 310 315 320
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu
325 330 335
Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
340 345 350
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys
355 360 365
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
370 375 380
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
385 390 395 400
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
405 410 415
Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser
420 425 430
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
435 440 445
Leu Ser Leu Ser Pro Gly
450
<210> 103
<211> 454
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 9G7.IgG1.1 (VH + IgG1.1)
<400> 103
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Thr Val
20 25 30
Trp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Gly Arg Ile Lys Ser Lys Thr Asp Gly Gly Thr Thr Asp Tyr Ala Ala
50 55 60
Pro Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr
65 70 75 80
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu His Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys Thr Thr Gly Gln Leu Ile Pro Tyr Ser Tyr Tyr Tyr Gly Met
100 105 110
Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr
115 120 125
Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser
130 135 140
Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu
145 150 155 160
Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His
165 170 175
Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser
180 185 190
Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys
195 200 205
Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu
210 215 220
Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
225 230 235 240
Glu Ala Glu Gly Ala Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
245 250 255
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
260 265 270
Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp
275 280 285
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr
290 295 300
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
305 310 315 320
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu
325 330 335
Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
340 345 350
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys
355 360 365
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
370 375 380
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
385 390 395 400
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
405 410 415
Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser
420 425 430
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
435 440 445
Leu Ser Leu Ser Pro Gly
450
<210> 104
<211> 215
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 9G7.IgG1 (VL1 + CL)
<400> 104
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu
65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Ser Ser Pro
85 90 95
Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala
100 105 110
Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser
115 120 125
Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu
130 135 140
Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser
145 150 155 160
Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu
165 170 175
Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val
180 185 190
Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys
195 200 205
Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 105
<211> 215
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 9G7.IgG1.2 (VL2 + CL)
<400> 105
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Thr Ser Ser
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu
65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Ser Ser Pro
85 90 95
Ile Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala
100 105 110
Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser
115 120 125
Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu
130 135 140
Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser
145 150 155 160
Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu
165 170 175
Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val
180 185 190
Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys
195 200 205
Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 106
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 9G7 VH CDR1
<400> 106
Thr Val Trp Met Ser
1 5
<210> 107
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 9G7 VH CDR2
<400> 107
Arg Ile Lys Ser Lys Thr Asp Gly Gly Thr Thr Asp Tyr Ala Ala Pro
1 5 10 15
Val Lys Gly
<210> 108
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 9G7 VH CDR3
<400> 108
Gly Gln Leu Ile Pro Tyr Ser Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp Val
1 5 10
<210> 109
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 9G7 VL1 CDR1
<400> 109
Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser Tyr Leu Ala
1 5 10
<210> 110
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 9G7 VL1 CDR2
<400> 110
Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr
1 5
<210> 111
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 9G7 VL1 CDR3
<400> 111
Gln Gln Tyr Gly Ser Ser Pro Trp Thr
1 5
<210> 112
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 9G7 VL2 CDR1
<400> 112
Arg Ala Ser Gln Ser Val Thr Ser Ser Tyr Leu Ala
1 5 10
<210> 113
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 9G7 VL2 CDR2
<400> 113
Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr
1 5
<210> 114
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 9G7 VL2 CDR3
<400> 114
Gln Gln Tyr Gly Ser Ser Pro Ile Thr
1 5
<210> 115
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 14E3 (VH)
<400> 115
Gln Val Gln Leu Gln Gln Trp Gly Ala Gly Leu Leu Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Tyr Gly Gly Ser Phe Ser Gly Tyr
20 25 30
Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Glu Ile Asn His Ser Gly Asn Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser Leu Lys
50 55 60
Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Leu Ser Leu
65 70 75 80
Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Phe Gly Ser Asn Asp Ala Phe Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr Met
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 116
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 14E3 (VL)
<400> 116
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Glu Lys Ala Pro Lys Ser Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Pro
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 117
<211> 447
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 14E3 (全长野生型重链)
<400> 117
Gln Val Gln Leu Gln Gln Trp Gly Ala Gly Leu Leu Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Tyr Gly Gly Ser Phe Ser Gly Tyr
20 25 30
Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Glu Ile Asn His Ser Gly Asn Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser Leu Lys
50 55 60
Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Leu Ser Leu
65 70 75 80
Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Phe Gly Ser Asn Asp Ala Phe Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr Met
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu
115 120 125
Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys
130 135 140
Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser
145 150 155 160
Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser
165 170 175
Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser
180 185 190
Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn
195 200 205
Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His
210 215 220
Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val
225 230 235 240
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr
245 250 255
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu
260 265 270
Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
275 280 285
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser
290 295 300
Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
305 310 315 320
Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile
325 330 335
Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
340 345 350
Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu
355 360 365
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
370 375 380
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser
385 390 395 400
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
405 410 415
Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu
420 425 430
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435 440 445
<210> 118
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 14E3 (全长野生型轻链)
<400> 118
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Glu Lys Ala Pro Lys Ser Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Pro
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 119
<211> 446
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 14E3.IgG1 (VH + IgG1)
<400> 119
Gln Val Gln Leu Gln Gln Trp Gly Ala Gly Leu Leu Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Tyr Gly Gly Ser Phe Ser Gly Tyr
20 25 30
Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Glu Ile Asn His Ser Gly Asn Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser Leu Lys
50 55 60
Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Leu Ser Leu
65 70 75 80
Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Phe Gly Ser Asn Asp Ala Phe Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr Met
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu
115 120 125
Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys
130 135 140
Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser
145 150 155 160
Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser
165 170 175
Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser
180 185 190
Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn
195 200 205
Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His
210 215 220
Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val
225 230 235 240
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr
245 250 255
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu
260 265 270
Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
275 280 285
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser
290 295 300
Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
305 310 315 320
Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile
325 330 335
Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
340 345 350
Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu
355 360 365
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
370 375 380
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser
385 390 395 400
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
405 410 415
Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu
420 425 430
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
435 440 445
<210> 120
<211> 446
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 14E3.IgG1.1 (VH + IgG1.1)
<400> 120
Gln Val Gln Leu Gln Gln Trp Gly Ala Gly Leu Leu Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Tyr Gly Gly Ser Phe Ser Gly Tyr
20 25 30
Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Glu Ile Asn His Ser Gly Asn Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser Leu Lys
50 55 60
Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Leu Ser Leu
65 70 75 80
Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Phe Gly Ser Asn Asp Ala Phe Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr Met
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu
115 120 125
Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys
130 135 140
Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser
145 150 155 160
Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser
165 170 175
Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser
180 185 190
Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn
195 200 205
Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His
210 215 220
Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Glu Gly Ala Pro Ser Val
225 230 235 240
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr
245 250 255
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu
260 265 270
Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
275 280 285
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser
290 295 300
Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
305 310 315 320
Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile
325 330 335
Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
340 345 350
Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu
355 360 365
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
370 375 380
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser
385 390 395 400
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
405 410 415
Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu
420 425 430
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
435 440 445
<210> 121
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 14E3.IgG1 (VL + CL)
<400> 121
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Glu Lys Ala Pro Lys Ser Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Pro
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 122
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 14E3 VH CDR1
<400> 122
Gly Tyr Tyr Trp Ser
1 5
<210> 123
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 14E3 VH CDR2
<400> 123
Glu Ile Asn His Ser Gly Asn Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser
1 5 10 15
<210> 124
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 14E3 VH CDR3
<400> 124
Phe Gly Ser Asn Asp Ala Phe Asp Ile
1 5
<210> 125
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 14E3 VL CDR1
<400> 125
Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp Leu Ala
1 5 10
<210> 126
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 14E3 VL CDR2
<400> 126
Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser
1 5
<210> 127
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 14E3 VL CDR3
<400> 127
Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Pro Thr
1 5
<210> 128
<211> 124
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 19H8 (VH)
<400> 128
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Ala Val Ile Trp Tyr Gly Gly Ser Asn Lys Phe Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Ser Leu Ser
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gly Ala Met Val Arg Gly Val Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp
100 105 110
Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 129
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 19H8 (VL1)
<400> 129
Ala Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Ala
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Phe Leu Ile
35 40 45
Tyr Asp Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe Asn Ser Tyr Pro Gln
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 130
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 19H8 (VL2)
<400> 130
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Asn Trp Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 131
<211> 450
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 19H8 (全长野生型重链)
<400> 131
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Ala Val Ile Trp Tyr Gly Gly Ser Asn Lys Phe Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Ser Leu Ser
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gly Ala Met Val Arg Gly Val Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp
100 105 110
Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys
115 120 125
Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu
130 135 140
Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro
145 150 155 160
Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr
165 170 175
Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val
180 185 190
Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr Tyr Thr Cys Asn
195 200 205
Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val Glu Arg
210 215 220
Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly
225 230 235 240
Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile
245 250 255
Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu
260 265 270
Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His
275 280 285
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg
290 295 300
Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys
305 310 315 320
Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro Ile Glu
325 330 335
Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr
340 345 350
Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu
355 360 365
Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp
370 375 380
Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met
385 390 395 400
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp
405 410 415
Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His
420 425 430
Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
435 440 445
Gly Lys
450
<210> 132
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 19H8 L1 (全长野生型轻链 1)
<400> 132
Ala Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Ala
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Phe Leu Ile
35 40 45
Tyr Asp Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe Asn Ser Tyr Pro Gln
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 133
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 19H8 L2 (全长野生型轻链 2)
<400> 133
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Asn Trp Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 134
<211> 453
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 19H8.IgG1 (VH + IgG1)
<400> 134
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Ala Val Ile Trp Tyr Gly Gly Ser Asn Lys Phe Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Ser Leu Ser
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gly Ala Met Val Arg Gly Val Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp
100 105 110
Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys
115 120 125
Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly
130 135 140
Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro
145 150 155 160
Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr
165 170 175
Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val
180 185 190
Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn
195 200 205
Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro
210 215 220
Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu
225 230 235 240
Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
245 250 255
Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
260 265 270
Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
275 280 285
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn
290 295 300
Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp
305 310 315 320
Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro
325 330 335
Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu
340 345 350
Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn
355 360 365
Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile
370 375 380
Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr
385 390 395 400
Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys
405 410 415
Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys
420 425 430
Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
435 440 445
Ser Leu Ser Pro Gly
450
<210> 135
<211> 453
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 19H8.IgG1.1 (VH + IgG1.1)
<400> 135
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Ala Val Ile Trp Tyr Gly Gly Ser Asn Lys Phe Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Ser Leu Ser
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gly Ala Met Val Arg Gly Val Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp
100 105 110
Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys
115 120 125
Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly
130 135 140
Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro
145 150 155 160
Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr
165 170 175
Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val
180 185 190
Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn
195 200 205
Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro
210 215 220
Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu
225 230 235 240
Ala Glu Gly Ala Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
245 250 255
Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
260 265 270
Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
275 280 285
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn
290 295 300
Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp
305 310 315 320
Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro
325 330 335
Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu
340 345 350
Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn
355 360 365
Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile
370 375 380
Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr
385 390 395 400
Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys
405 410 415
Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys
420 425 430
Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
435 440 445
Ser Leu Ser Pro Gly
450
<210> 136
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 19H8.IgG1 (VL1 + CL)
<400> 136
Ala Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Ala
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Phe Leu Ile
35 40 45
Tyr Asp Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe Asn Ser Tyr Pro Gln
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 137
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 19H8.IgG1.2 (VL2 + CL)
<400> 137
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Asn Trp Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 138
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 19H8 VH CDR1
<400> 138
Asn Tyr Gly Met His
1 5
<210> 139
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 19H8 VH CDR2
<400> 139
Val Ile Trp Tyr Gly Gly Ser Asn Lys Phe Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 140
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 19H8 VH CDR3
<400> 140
Gly Gly Ala Met Val Arg Gly Val Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp Val
1 5 10 15
<210> 141
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 19H8 VL1 CDR1
<400> 141
Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Ala Leu Ala
1 5 10
<210> 142
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 19H8 VL1 CDR2
<400> 142
Asp Ala Ser Ser Leu Glu Ser
1 5
<210> 143
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 19H8 VL1 CDR3
<400> 143
Gln Gln Phe Asn Ser Tyr Pro Gln Thr
1 5
<210> 144
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 19H8 VL2 CDR1
<400> 144
Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr Leu Ala
1 5 10
<210> 145
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 19H8 VL2 CDR2
<400> 145
Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr
1 5
<210> 146
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 19H8 VL2 CDR3
<400> 146
Gln Gln Arg Ser Asn Trp Pro Leu Thr
1 5
<210> 147
<211> 372
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 28F3 (VH)核苷酸序列
<400> 147
caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cgtctggatt caccttcagt agctatggca tgcactgggt ccgccaggct 120
ccaggcaagg ggctggagtg ggtggcagtt atatggtatg aaggaagtaa taaatattat 180
gcagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240
ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggctgtgt attactgtgc gagagggggg 300
agtatggttc ggggggacta ctactacggt atggacgtct ggggccaagg gaccacggtc 360
accgtctcct ca 372
<210> 148
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 28F3 (VL)核苷酸序列
<400> 148
gccatccagt tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60
atcacttgcc gggcaagtca gggcattagc agtgctttag cctggtatca gcagaaacca 120
gggaaagctc ctaagctcct gatctatgat gcctccagtt tggaaagtgg ggtcccatca 180
aggttcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240
gaagattttg caacttatta ctgtcaacag tttaatagtt acccgtacac ttttggccag 300
gggaccaagc tggagatcaa a 321
<210> 149
<211> 1350
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 28F3 (全长野生型重链) 核苷酸
序列
<400> 149
caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cgtctggatt caccttcagt agctatggca tgcactgggt ccgccaggct 120
ccaggcaagg ggctggagtg ggtggcagtt atatggtatg aaggaagtaa taaatattat 180
gcagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240
ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggctgtgt attactgtgc gagagggggg 300
agtatggttc ggggggacta ctactacggt atggacgtct ggggccaagg gaccacggtc 360
accgtctcct cagcctccac caagggccca tcggtcttcc ccctggcgcc ctgctccagg 420
agcacctccg agagcacagc ggccctgggc tgcctggtca aggactactt ccccgaaccg 480
gtgacggtgt cgtggaactc aggcgctctg accagcggcg tgcacacctt cccagctgtc 540
ctacagtcct caggactcta ctccctcagc agcgtggtga ccgtgccctc cagcaacttc 600
ggcacccaga cctacacctg caacgtagat cacaagccca gcaacaccaa ggtggacaag 660
acagttgagc gcaaatgttg tgtcgagtgc ccaccgtgcc cagcaccacc tgtggcagga 720
ccgtcagtct tcctcttccc cccaaaaccc aaggacaccc tcatgatctc ccggacccct 780
gaggtcacgt gcgtggtggt ggacgtgagc cacgaagacc ccgaggtcca gttcaactgg 840
tacgtggacg gcgtggaggt gcataatgcc aagacaaagc cacgggagga gcagttcaac 900
agcacgttcc gtgtggtcag cgtcctcacc gttgtgcacc aggactggct gaacggcaag 960
gagtacaagt gcaaggtctc caacaaaggc ctcccagccc ccatcgagaa aaccatctcc 1020
aaaaccaaag ggcagccccg agaaccacag gtgtacaccc tgcccccatc ccgggaggag 1080
atgaccaaga accaggtcag cctgacctgc ctggtcaaag gcttctaccc cagcgacatc 1140
gccgtggagt gggagagcaa tgggcagccg gagaacaact acaagaccac acctcccatg 1200
ctggactccg acggctcctt cttcctctac agcaagctca ccgtggacaa gagcaggtgg 1260
cagcagggga acgtcttctc atgctccgtg atgcatgagg ctctgcacaa ccactacacg 1320
cagaagagcc tctccctgtc tccgggtaaa 1350
<210> 150
<211> 642
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 28F3 (全长野生型轻链) 核苷酸
序列
<400> 150
gccatccagt tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60
atcacttgcc gggcaagtca gggcattagc agtgctttag cctggtatca gcagaaacca 120
gggaaagctc ctaagctcct gatctatgat gcctccagtt tggaaagtgg ggtcccatca 180
aggttcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240
gaagattttg caacttatta ctgtcaacag tttaatagtt acccgtacac ttttggccag 300
gggaccaagc tggagatcaa acgaactgtg gctgcaccat ctgtcttcat cttcccgcca 360
tctgatgagc agttgaaatc tggaactgcc tctgttgtgt gcctgctgaa taacttctat 420
cccagagagg ccaaagtaca gtggaaggtg gataacgccc tccaatcggg taactcccag 480
gagagtgtca cagagcagga cagcaaggac agcacctaca gcctcagcag caccctgacg 540
ctgagcaaag cagactacga gaaacacaaa gtctacgcct gcgaagtcac ccatcagggc 600
ctgagctcgc ccgtcacaaa gagcttcaac aggggagagt gt 642
<210> 151
<211> 1362
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 28F3.IgG1 (VH + IgG1)核苷酸序列
<400> 151
caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cgtctggatt caccttcagt agctatggca tgcactgggt ccgccaggct 120
ccaggcaagg ggctggagtg ggtggcagtt atatggtatg aaggaagtaa taaatattat 180
gcagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240
ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggctgtgt attactgtgc gagagggggg 300
agtatggttc ggggggacta ctactacggt atggacgtct ggggccaagg gaccacggtc 360
accgtctcct cagctagcac caagggccca tcggtcttcc ccctggcacc ctcctccaag 420
agcacctctg ggggcacagc ggccctgggc tgcctggtca aggactactt ccccgaaccg 480
gtgacggtgt cgtggaactc aggcgccctg accagcggcg tgcacacctt cccggctgtc 540
ctacagtcct caggactcta ctccctcagc agcgtggtga ccgtgccctc cagcagcttg 600
ggcacccaga cctacatctg caacgtgaat cacaagccca gcaacaccaa ggtggacaag 660
agagttgagc ccaaatcttg tgacaaaact cacacatgcc caccgtgccc agcacctgaa 720
ctcctggggg gaccgtcagt cttcctcttc cccccaaaac ccaaggacac cctcatgatc 780
tcccggaccc ctgaggtcac atgcgtggtg gtggacgtga gccacgaaga ccctgaggtc 840
aagttcaact ggtacgtgga cggcgtggag gtgcataatg ccaagacaaa gccgcgggag 900
gagcagtaca acagcacgta ccgtgtggtc agcgtcctca ccgtcctgca ccaggactgg 960
ctgaatggca aggagtacaa gtgcaaggtc tccaacaaag ccctcccagc ccccatcgag 1020
aaaaccatct ccaaagccaa agggcagccc cgagaaccac aggtgtacac cctgccccca 1080
tcccgggagg agatgaccaa gaaccaggtc agcctgacct gcctggtcaa aggcttctat 1140
cccagcgaca tcgccgtgga gtgggagagc aatgggcagc cggagaacaa ctacaagacc 1200
acgcctcccg tgctggactc cgacggctcc ttcttcctct atagcaagct caccgtggac 1260
aagagcaggt ggcagcaggg gaacgtcttc tcatgctccg tgatgcatga ggctctgcac 1320
aaccactaca cgcagaagag cctctccctg tccccgggtt ga 1362
<210> 152
<211> 1362
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 28F3.IgG1.1 (VH + IgG1.1)核苷酸序列
<400> 152
caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cgtctggatt caccttcagt agctatggca tgcactgggt ccgccaggct 120
ccaggcaagg ggctggagtg ggtggcagtt atatggtatg aaggaagtaa taaatattat 180
gcagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240
ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggctgtgt attactgtgc gagagggggg 300
agtatggttc ggggggacta ctactacggt atggacgtct ggggccaagg gaccacggtc 360
accgtctcct cagctagcac caagggccca tcggtcttcc ccctggcacc ctcctccaag 420
agcacctctg ggggcacagc ggccctgggc tgcctggtca aggactactt ccccgaaccg 480
gtgacggtgt cgtggaactc aggcgccctg accagcggcg tgcacacctt cccggctgtc 540
ctacagtcct caggactcta ctccctcagc agcgtggtga ccgtgccctc cagcagcttg 600
ggcacccaga cctacatctg caacgtgaat cacaagccca gcaacaccaa ggtggacaag 660
agagttgagc ccaaatcttg tgacaaaact cacacatgcc caccgtgccc agcacctgaa 720
gccgaagggg ccccgtcagt cttcctcttc cccccaaaac ccaaggacac cctcatgatc 780
tcccggaccc ctgaggtcac atgcgtggtg gtggacgtga gccacgaaga ccctgaggtc 840
aagttcaact ggtacgtgga cggcgtggag gtgcataatg ccaagacaaa gccgcgggag 900
gagcagtaca acagcacgta ccgtgtggtc agcgtcctca ccgtcctgca ccaggactgg 960
ctgaatggca aggagtacaa gtgcaaggtc tccaacaaag ccctcccaag cagcatcgag 1020
aaaaccatct ccaaagccaa agggcagccc cgagaaccac aggtgtacac cctgccccca 1080
tcccgggagg agatgaccaa gaaccaggtc agcctgacct gcctggtcaa aggcttctat 1140
cccagcgaca tcgccgtgga gtgggagagc aatgggcagc cggagaacaa ctacaagacc 1200
acgcctcccg tgctggactc cgacggctcc ttcttcctct atagcaagct caccgtggac 1260
aagagcaggt ggcagcaggg gaacgtcttc tcatgctccg tgatgcatga ggctctgcac 1320
aaccactaca cgcagaagag cctctccctg tccccgggtt ga 1362
<210> 153
<211> 645
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 28F3.IgG1 (VL + CL)核苷酸序列
<400> 153
gccatccagt tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60
atcacttgcc gggcaagtca gggcattagc agtgctttag cctggtatca gcagaaacca 120
gggaaagctc ctaagctcct gatctatgat gcctccagtt tggaaagtgg ggtcccatca 180
aggttcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240
gaagattttg caacttatta ctgtcaacag tttaatagtt acccgtacac ttttggccag 300
gggaccaagc tggagatcaa acgtacggtg gctgcaccat ctgtcttcat cttcccgcca 360
tctgatgagc agttgaaatc tggaactgcc tctgttgtgt gcctgctgaa taacttctat 420
cccagagagg ccaaagtaca gtggaaggtg gataacgccc tccaatcggg taactcccag 480
gagagtgtca cagagcagga cagcaaggac agcacctaca gcctcagcag caccctgacg 540
ctgagcaaag cagactacga gaaacacaaa gtctacgcct gcgaagtcac ccatcagggc 600
ctgagctcgc ccgtcacaaa gagcttcaac aggggagagt gttag 645
<210> 154
<211> 369
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 19D3 (VH)核苷酸序列
<400> 154
caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc gtggtccaac ctgggaggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cgtctggatt caccttcagt agctatggct tccactgggt ccgccaggct 120
ccaggcaagg ggctggagtg ggtggcagtt atatggtatg ctggaagtaa taaattctat 180
gcagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240
ctgcaaatga acagcctaag agccgaggac acggctgtgt attactgtgc gagaggggga 300
cagttggact actactacta ttacgttatg gacgtctggg gccaagggac cacggtcacc 360
gtctcctca 369
<210> 155
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 19D3 (VL)核苷酸序列
<400> 155
gacatccaga tgacccagtc tccatcctca ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60
atcacttgtc gggcgagtca gggtattagc agctggttag cctggtatca gcagaaacca 120
gagaaagccc ctaagtccct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180
aggttcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240
gaagattttg caacttatta ctgccaacag tataatagtt acccgtacac ttttggccag 300
gggaccaagc tggagatcaa a 321
<210> 156
<211> 1347
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 19D3 (全长野生型重链) 核苷酸
序列
<400> 156
caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc gtggtccaac ctgggaggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cgtctggatt caccttcagt agctatggct tccactgggt ccgccaggct 120
ccaggcaagg ggctggagtg ggtggcagtt atatggtatg ctggaagtaa taaattctat 180
gcagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240
ctgcaaatga acagcctaag agccgaggac acggctgtgt attactgtgc gagaggggga 300
cagttggact actactacta ttacgttatg gacgtctggg gccaagggac cacggtcacc 360
gtctcctcag cctccaccaa gggcccatcg gtcttccccc tggcgccctg ctccaggagc 420
acctccgaga gcacagcggc cctgggctgc ctggtcaagg actacttccc cgaaccggtg 480
acggtgtcgt ggaactcagg cgctctgacc agcggcgtgc acaccttccc agctgtccta 540
cagtcctcag gactctactc cctcagcagc gtggtgaccg tgccctccag caacttcggc 600
acccagacct acacctgcaa cgtagatcac aagcccagca acaccaaggt ggacaagaca 660
gttgagcgca aatgttgtgt cgagtgccca ccgtgcccag caccacctgt ggcaggaccg 720
tcagtcttcc tcttcccccc aaaacccaag gacaccctca tgatctcccg gacccctgag 780
gtcacgtgcg tggtggtgga cgtgagccac gaagaccccg aggtccagtt caactggtac 840
gtggacggcg tggaggtgca taatgccaag acaaagccac gggaggagca gttcaacagc 900
acgttccgtg tggtcagcgt cctcaccgtt gtgcaccagg actggctgaa cggcaaggag 960
tacaagtgca aggtctccaa caaaggcctc ccagccccca tcgagaaaac catctccaaa 1020
accaaagggc agccccgaga accacaggtg tacaccctgc ccccatcccg ggaggagatg 1080
accaagaacc aggtcagcct gacctgcctg gtcaaaggct tctaccccag cgacatcgcc 1140
gtggagtggg agagcaatgg gcagccggag aacaactaca agaccacacc tcccatgctg 1200
gactccgacg gctccttctt cctctacagc aagctcaccg tggacaagag caggtggcag 1260
caggggaacg tcttctcatg ctccgtgatg catgaggctc tgcacaacca ctacacgcag 1320
aagagcctct ccctgtctcc gggtaaa 1347
<210> 157
<211> 642
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 19D3 (全长野生型轻链) 核苷酸
序列
<400> 157
gacatccaga tgacccagtc tccatcctca ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60
atcacttgtc gggcgagtca gggtattagc agctggttag cctggtatca gcagaaacca 120
gagaaagccc ctaagtccct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180
aggttcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240
gaagattttg caacttatta ctgccaacag tataatagtt acccgtacac ttttggccag 300
gggaccaagc tggagatcaa acgaactgtg gctgcaccat ctgtcttcat cttcccgcca 360
tctgatgagc agttgaaatc tggaactgcc tctgttgtgt gcctgctgaa taacttctat 420
cccagagagg ccaaagtaca gtggaaggtg gataacgccc tccaatcggg taactcccag 480
gagagtgtca cagagcagga cagcaaggac agcacctaca gcctcagcag caccctgacg 540
ctgagcaaag cagactacga gaaacacaaa gtctacgcct gcgaagtcac ccatcagggc 600
ctgagctcgc ccgtcacaaa gagcttcaac aggggagagt gt 642
<210> 158
<211> 369
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 18E10 (VH)核苷酸序列
<400> 158
caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cgtctggatt caccttcagt agctatggca tgcactgggt ccgccaggct 120
ccaggcaagg ggctggagtg ggtggcagtt atatggtatg ctggaagtaa taaatactat 180
gcagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240
ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggctgtgt attactgtgc gagagggggg 300
cgtatagcag tggccttcta ctacagtatg gacgtctggg gccaagggac cacggtcacc 360
gtctcctca 369
<210> 159
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 18E10 (VL)核苷酸序列
<400> 159
gacatccaga tgacccagtc tccatcctca ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60
atcacttgtc gggcgagtca gggtattagc agctggttag cctggtatca gcagaaacca 120
gagaaagccc ctaagtccct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180
aggttcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240
gaagattttg caacttatta ctgccaacag tataatagtt acccgtacac ttttggccag 300
gggaccaagc tggagatcaa a 321
<210> 160
<211> 1347
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 18E10 (全长野生型重链) 核苷酸
序列
<400> 160
caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cgtctggatt caccttcagt agctatggca tgcactgggt ccgccaggct 120
ccaggcaagg ggctggagtg ggtggcagtt atatggtatg ctggaagtaa taaatactat 180
gcagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240
ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggctgtgt attactgtgc gagagggggg 300
cgtatagcag tggccttcta ctacagtatg gacgtctggg gccaagggac cacggtcacc 360
gtctcctcag cctccaccaa gggcccatcg gtcttccccc tggcgccctg ctccaggagc 420
acctccgaga gcacagcggc cctgggctgc ctggtcaagg actacttccc cgaaccggtg 480
acggtgtcgt ggaactcagg cgctctgacc agcggcgtgc acaccttccc agctgtccta 540
cagtcctcag gactctactc cctcagcagc gtggtgaccg tgccctccag caacttcggc 600
acccagacct acacctgcaa cgtagatcac aagcccagca acaccaaggt ggacaagaca 660
gttgagcgca aatgttgtgt cgagtgccca ccgtgcccag caccacctgt ggcaggaccg 720
tcagtcttcc tcttcccccc aaaacccaag gacaccctca tgatctcccg gacccctgag 780
gtcacgtgcg tggtggtgga cgtgagccac gaagaccccg aggtccagtt caactggtac 840
gtggacggcg tggaggtgca taatgccaag acaaagccac gggaggagca gttcaacagc 900
acgttccgtg tggtcagcgt cctcaccgtt gtgcaccagg actggctgaa cggcaaggag 960
tacaagtgca aggtctccaa caaaggcctc ccagccccca tcgagaaaac catctccaaa 1020
accaaagggc agccccgaga accacaggtg tacaccctgc ccccatcccg ggaggagatg 1080
accaagaacc aggtcagcct gacctgcctg gtcaaaggct tctaccccag cgacatcgcc 1140
gtggagtggg agagcaatgg gcagccggag aacaactaca agaccacacc tcccatgctg 1200
gactccgacg gctccttctt cctctacagc aagctcaccg tggacaagag caggtggcag 1260
caggggaacg tcttctcatg ctccgtgatg catgaggctc tgcacaacca ctacacgcag 1320
aagagcctct ccctgtctcc gggtaaa 1347
<210> 161
<211> 642
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 18E10 (全长野生型轻链) 核苷酸
序列
<400> 161
gacatccaga tgacccagtc tccatcctca ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60
atcacttgtc gggcgagtca gggtattagc agctggttag cctggtatca gcagaaacca 120
gagaaagccc ctaagtccct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180
aggttcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240
gaagattttg caacttatta ctgccaacag tataatagtt acccgtacac ttttggccag 300
gggaccaagc tggagatcaa acgaactgtg gctgcaccat ctgtcttcat cttcccgcca 360
tctgatgagc agttgaaatc tggaactgcc tctgttgtgt gcctgctgaa taacttctat 420
cccagagagg ccaaagtaca gtggaaggtg gataacgccc tccaatcggg taactcccag 480
gagagtgtca cagagcagga cagcaaggac agcacctaca gcctcagcag caccctgacg 540
ctgagcaaag cagactacga gaaacacaaa gtctacgcct gcgaagtcac ccatcagggc 600
ctgagctcgc ccgtcacaaa gagcttcaac aggggagagt gt 642
<210> 162
<211> 351
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 3C3 (VH)核苷酸序列
<400> 162
caggtgcaac tacagcagtg gggcgcagga ctgttgaagc cttcggagac cctgtccctc 60
acctgcgctg tctatggtgg gtccttcagt ggttactact ggacctggat ccgccagccc 120
ccagggaagg ggctggagtg gattgggaaa atcaatcata gtggaaacac caactacaac 180
ccgtccctca agagtcgagt caccatatca gtagacacgt ccaagaacca gttctccctg 240
aagctgagct ctgtgaccgc cgcggacacg gctgtgtatt actgtgcgag actgggggcc 300
tttgatgctt ttgatatctg gggccaaggg acaatggtca ccgtctcttc a 351
<210> 163
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 3C3 (VL1)核苷酸序列
<400> 163
gacatccaga tgacccagtc tccatcctca ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60
atcacttgtc gggcgagtca gggtattagc agctggttag cctggtatca gcagaaacca 120
gagaaagccc ctaagtccct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180
aggttcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240
gaagattttg caacttatta ctgccaacag tataatagtt acccgtacac ttttggccag 300
gggaccaagc tggagatcaa a 321
<210> 164
<211> 318
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 3C3 (VL2)核苷酸序列
<400> 164
gaaattgtgt tgacacagtc tccagccacc ctgtctttgt ctccagggga aagagccacc 60
ctctcctgca gggccagtca gggtgttagc agctacttag cctggtacca gcagaaacct 120
ggccaggctc ccaggctcct catctatgat gcatccaaca gggccactgg catcccagcc 180
aggttcagtg gcagtgggcc tgggacagac ttcactctca ccatcagcag cctagagcct 240
gaagattttg cagtttatta ctgtcagcag cgtagcaact ggcacacttt tggccagggg 300
accaagctgg agatcaaa 318
<210> 165
<211> 1341
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 3C3 (全长野生型重链) 核苷酸
序列
<400> 165
caggtgcaac tacagcagtg gggcgcagga ctgttgaagc cttcggagac cctgtccctc 60
acctgcgctg tctatggtgg gtccttcagt ggttactact ggacctggat ccgccagccc 120
ccagggaagg ggctggagtg gattgggaaa atcaatcata gtggaaacac caactacaac 180
ccgtccctca agagtcgagt caccatatca gtagacacgt ccaagaacca gttctccctg 240
aagctgagct ctgtgaccgc cgcggacacg gctgtgtatt actgtgcgag actgggggcc 300
tttgatgctt ttgatatctg gggccaaggg acaatggtca ccgtctcttc agcctccacc 360
aagggcccat cggtcttccc cctggcaccc tcctccaaga gcacctctgg gggcacagcg 420
gccctgggct gcctggtcaa ggactacttc cccgaaccgg tgacggtgtc gtggaactca 480
ggcgccctga ccagcggcgt gcacaccttc ccggctgtcc tacagtcctc aggactctac 540
tccctcagca gcgtggtgac cgtgccctcc agcagcttgg gcacccagac ctacatctgc 600
aacgtgaatc acaagcccag caacaccaag gtggacaaga gagttgagcc caaatcttgt 660
gacaaaactc acacatgccc accgtgccca gcacctgaac tcctgggggg accgtcagtc 720
ttcctcttcc ccccaaaacc caaggacacc ctcatgatct cccggacccc tgaggtcaca 780
tgcgtggtgg tggacgtgag ccacgaagac cctgaggtca agttcaactg gtacgtggac 840
ggcgtggagg tgcataatgc caagacaaag ccgcgggagg agcagtacaa cagcacgtac 900
cgtgtggtca gcgtcctcac cgtcctgcac caggactggc tgaatggcaa ggagtacaag 960
tgcaaggtct ccaacaaagc cctcccagcc cccatcgaga aaaccatctc caaagccaaa 1020
gggcagcccc gagaaccaca ggtgtacacc ctgcccccat cccgggatga gctgaccaag 1080
aaccaggtca gcctgacctg cctggtcaaa ggcttctatc ccagcgacat cgccgtggag 1140
tgggagagca atgggcagcc ggagaacaac tacaagacca cgcctcccgt gctggactcc 1200
gacggctcct tcttcctcta cagcaagctc accgtggaca agagcaggtg gcagcagggg 1260
aacgtcttct catgctccgt gatgcatgag gctctgcaca accactacac gcagaagagc 1320
ctctccctgt ctccgggtaa a 1341
<210> 166
<211> 642
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 3C3 L1 (全长野生型轻链) 核苷酸
序列
<400> 166
gacatccaga tgacccagtc tccatcctca ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60
atcacttgtc gggcgagtca gggtattagc agctggttag cctggtatca gcagaaacca 120
gagaaagccc ctaagtccct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180
aggttcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240
gaagattttg caacttatta ctgccaacag tataatagtt acccgtacac ttttggccag 300
gggaccaagc tggagatcaa acgaactgtg gctgcaccat ctgtcttcat cttcccgcca 360
tctgatgagc agttgaaatc tggaactgcc tctgttgtgt gcctgctgaa taacttctat 420
cccagagagg ccaaagtaca gtggaaggtg gataacgccc tccaatcggg taactcccag 480
gagagtgtca cagagcagga cagcaaggac agcacctaca gcctcagcag caccctgacg 540
ctgagcaaag cagactacga gaaacacaaa gtctacgcct gcgaagtcac ccatcagggc 600
ctgagctcgc ccgtcacaaa gagcttcaac aggggagagt gt 642
<210> 167
<211> 639
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 3C3 L2 (全长野生型轻链) 核苷酸
序列
<400> 167
gaaattgtgt tgacacagtc tccagccacc ctgtctttgt ctccagggga aagagccacc 60
ctctcctgca gggccagtca gggtgttagc agctacttag cctggtacca gcagaaacct 120
ggccaggctc ccaggctcct catctatgat gcatccaaca gggccactgg catcccagcc 180
aggttcagtg gcagtgggcc tgggacagac ttcactctca ccatcagcag cctagagcct 240
gaagattttg cagtttatta ctgtcagcag cgtagcaact ggcacacttt tggccagggg 300
accaagctgg agatcaaacg aactgtggct gcaccatctg tcttcatctt cccgccatct 360
gatgagcagt tgaaatctgg aactgcctct gttgtgtgcc tgctgaataa cttctatccc 420
agagaggcca aagtacagtg gaaggtggat aacgccctcc aatcgggtaa ctcccaggag 480
agtgtcacag agcaggacag caaggacagc acctacagcc tcagcagcac cctgacgctg 540
agcaaagcag actacgagaa acacaaagtc tacgcctgcg aagtcaccca tcagggcctg 600
agctcgcccg tcacaaagag cttcaacagg ggagagtgt 639
<210> 168
<211> 372
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 2G6 (VH)核苷酸序列
<400> 168
caggttcagc tggtggagtc tgggggaggc gtggtccagc ctggggggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cgtctggatt catcttgagt gactatggca tgcactgggt ccgccaggct 120
ccaggcaagg gactggagtg ggtgacagtt atctggtatg atggaagtaa taaattctat 180
gtagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgttgtat 240
ctgcaaatga acagcctgag agtcgaggac acggctgtgt attactgtgc gagaggggga 300
cgtctagcaa caggtcactt ctactacgtt atggacgtct ggggccaagg gaccacggtc 360
accgtctcct ca 372
<210> 169
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 2G6 (VL)核苷酸序列
<400> 169
gacatccaga tgacccagtc tccatcctca ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60
atcacttgtc gggcgagtca gggtattagc agctggttag cctggtatca gcagaaacca 120
gagaaagccc ctaagtccct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180
aggttcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240
gaagattttg caacttatta ctgccaacag tataatagtt acccgtacac ttttggccag 300
gggaccaagc tggagatcaa a 321
<210> 170
<211> 1350
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 2G6 (全长野生型重链) 核苷酸
序列
<400> 170
caggttcagc tggtggagtc tgggggaggc gtggtccagc ctggggggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cgtctggatt catcttgagt gactatggca tgcactgggt ccgccaggct 120
ccaggcaagg gactggagtg ggtgacagtt atctggtatg atggaagtaa taaattctat 180
gtagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgttgtat 240
ctgcaaatga acagcctgag agtcgaggac acggctgtgt attactgtgc gagaggggga 300
cgtctagcaa caggtcactt ctactacgtt atggacgtct ggggccaagg gaccacggtc 360
accgtctcct cagcctccac caagggccca tcggtcttcc ccctggcgcc ctgctccagg 420
agcacctccg agagcacagc ggccctgggc tgcctggtca aggactactt ccccgaaccg 480
gtgacggtgt cgtggaactc aggcgctctg accagcggcg tgcacacctt cccagctgtc 540
ctacagtcct caggactcta ctccctcagc agcgtggtga ccgtgccctc cagcaacttc 600
ggcacccaga cctacacctg caacgtagat cacaagccca gcaacaccaa ggtggacaag 660
acagttgagc gcaaatgttg tgtcgagtgc ccaccgtgcc cagcaccacc tgtggcagga 720
ccgtcagtct tcctcttccc cccaaaaccc aaggacaccc tcatgatctc ccggacccct 780
gaggtcacgt gcgtggtggt ggacgtgagc cacgaagacc ccgaggtcca gttcaactgg 840
tacgtggacg gcgtggaggt gcataatgcc aagacaaagc cacgggagga gcagttcaac 900
agcacgttcc gtgtggtcag cgtcctcacc gttgtgcacc aggactggct gaacggcaag 960
gagtacaagt gcaaggtctc caacaaaggc ctcccagccc ccatcgagaa aaccatctcc 1020
aaaaccaaag ggcagccccg agaaccacag gtgtacaccc tgcccccatc ccgggaggag 1080
atgaccaaga accaggtcag cctgacctgc ctggtcaaag gcttctaccc cagcgacatc 1140
gccgtggagt gggagagcaa tgggcagccg gagaacaact acaagaccac acctcccatg 1200
ctggactccg acggctcctt cttcctctac agcaagctca ccgtggacaa gagcaggtgg 1260
cagcagggga acgtcttctc atgctccgtg atgcatgagg ctctgcacaa ccactacacg 1320
cagaagagcc tctccctgtc tccgggtaaa 1350
<210> 171
<211> 642
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 2G6 (全长野生型轻链) 核苷酸
序列
<400> 171
gacatccaga tgacccagtc tccatcctca ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60
atcacttgtc gggcgagtca gggtattagc agctggttag cctggtatca gcagaaacca 120
gagaaagccc ctaagtccct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180
aggttcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240
gaagattttg caacttatta ctgccaacag tataatagtt acccgtacac ttttggccag 300
gggaccaagc tggagatcaa acgaactgtg gctgcaccat ctgtcttcat cttcccgcca 360
tctgatgagc agttgaaatc tggaactgcc tctgttgtgt gcctgctgaa taacttctat 420
cccagagagg ccaaagtaca gtggaaggtg gataacgccc tccaatcggg taactcccag 480
gagagtgtca cagagcagga cagcaaggac agcacctaca gcctcagcag caccctgacg 540
ctgagcaaag cagactacga gaaacacaaa gtctacgcct gcgaagtcac ccatcagggc 600
ctgagctcgc ccgtcacaaa gagcttcaac aggggagagt gt 642
<210> 172
<211> 372
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 8A6 (VH)核苷酸序列
<400> 172
caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc 60
tcctgtacag cgtctggatt caccttcagt agctatggca tgcagtgggt ccgccaggct 120
ccaggcaagg ggctggagtg ggtggcagtt atatggtatg aaggaagtaa taaatactat 180
gcagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaaa attccaagaa cacgctgtat 240
ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggctgtgt attactgtgc gagaggcggt 300
cttatggttc ggggtctctt ctactacggt atggacgtct ggggccaagg gaccacggtc 360
accgtctcct ca 372
<210> 173
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 8A6 (VL)核苷酸序列
<400> 173
gccatccagt tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60
atcacttgcc gggcaagtca gggcattagc agtgctttag cctggtatca gcagaaacca 120
gggaaagctc ctaagttcct gatctatgat gcctccagtt tggaaagtgg ggtcccatca 180
aggttcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240
gaagattttg caacttatta ctgtcaacag tttaatagtt acccgtacac ttttggccag 300
gggaccaagc tggagatcaa a 321
<210> 174
<211> 1350
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 8A6 (全长野生型重链) 核苷酸
序列
<400> 174
caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc 60
tcctgtacag cgtctggatt caccttcagt agctatggca tgcagtgggt ccgccaggct 120
ccaggcaagg ggctggagtg ggtggcagtt atatggtatg aaggaagtaa taaatactat 180
gcagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaaa attccaagaa cacgctgtat 240
ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggctgtgt attactgtgc gagaggcggt 300
cttatggttc ggggtctctt ctactacggt atggacgtct ggggccaagg gaccacggtc 360
accgtctcct cagcctccac caagggccca tcggtcttcc ccctggcgcc ctgctccagg 420
agcacctccg agagcacagc ggccctgggc tgcctggtca aggactactt ccccgaaccg 480
gtgacggtgt cgtggaactc aggcgctctg accagcggcg tgcacacctt cccagctgtc 540
ctacagtcct caggactcta ctccctcagc agcgtggtga ccgtgccctc cagcaacttc 600
ggcacccaga cctacacctg caacgtagat cacaagccca gcaacaccaa ggtggacaag 660
acagttgagc gcaaatgttg tgtcgagtgc ccaccgtgcc cagcaccacc tgtggcagga 720
ccgtcagtct tcctcttccc cccaaaaccc aaggacaccc tcatgatctc ccggacccct 780
gaggtcacgt gcgtggtggt ggacgtgagc cacgaagacc ccgaggtcca gttcaactgg 840
tacgtggacg gcgtggaggt gcataatgcc aagacaaagc cacgggagga gcagttcaac 900
agcacgttcc gtgtggtcag cgtcctcacc gttgtgcacc aggactggct gaacggcaag 960
gagtacaagt gcaaggtctc caacaaaggc ctcccagccc ccatcgagaa aaccatctcc 1020
aaaaccaaag ggcagccccg agaaccacag gtgtacaccc tgcccccatc ccgggaggag 1080
atgaccaaga accaggtcag cctgacctgc ctggtcaaag gcttctaccc cagcgacatc 1140
gccgtggagt gggagagcaa tgggcagccg gagaacaact acaagaccac acctcccatg 1200
ctggactccg acggctcctt cttcctctac agcaagctca ccgtggacaa gagcaggtgg 1260
cagcagggga acgtcttctc atgctccgtg atgcatgagg ctctgcacaa ccactacacg 1320
cagaagagcc tctccctgtc tccgggtaaa 1350
<210> 175
<211> 642
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 8A6 (全长野生型轻链) 核苷酸
序列
<400> 175
gccatccagt tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60
atcacttgcc gggcaagtca gggcattagc agtgctttag cctggtatca gcagaaacca 120
gggaaagctc ctaagttcct gatctatgat gcctccagtt tggaaagtgg ggtcccatca 180
aggttcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240
gaagattttg caacttatta ctgtcaacag tttaatagtt acccgtacac ttttggccag 300
gggaccaagc tggagatcaa acgaactgtg gctgcaccat ctgtcttcat cttcccgcca 360
tctgatgagc agttgaaatc tggaactgcc tctgttgtgt gcctgctgaa taacttctat 420
cccagagagg ccaaagtaca gtggaaggtg gataacgccc tccaatcggg taactcccag 480
gagagtgtca cagagcagga cagcaaggac agcacctaca gcctcagcag caccctgacg 540
ctgagcaaag cagactacga gaaacacaaa gtctacgcct gcgaagtcac ccatcagggc 600
ctgagctcgc ccgtcacaaa gagcttcaac aggggagagt gt 642
<210> 176
<211> 375
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 9G7 (VH)核苷酸序列
<400> 176
gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttagtaaagc ctggggggtc ccttagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt cactttcagt accgtctgga tgagctgggt ccgccaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggttggccgt attaaaagca aaactgatgg tgggacaaca 180
gactacgctg cacccgtgaa aggcagattc accatctcaa gagatgattc aaaaaacacg 240
ctgtatctgc aaatgaacag cctgcacacc gaggacacag ccgtgtatta ctgtaccaca 300
gggcagctga tcccttactc ctactactac ggtatggacg tctggggcca agggacctcg 360
gtcaccgtct cctca 375
<210> 177
<211> 324
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 9G7 (VL1)核苷酸序列
<400> 177
gaaattgtgt tgacgcagtc tccaggcacc ctgtctttgt ctccagggga aagagccacc 60
ctctcctgca gggccagtca gagtgttagc agcagctact tagcctggta ccagcagaaa 120
cctggccagg ctcccaggct cctcatctat ggtgcatcca gcagggccac tggcatccca 180
gacaggttca gtggcagtgg gtctgggaca gacttcactc tcaccatcag cagactggag 240
cctgaagatt ttgcagtgta ttactgtcag cagtatggta gctcaccgtg gacgttcggc 300
caagggacca aggtggaaat caaa 324
<210> 178
<211> 324
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 9G7 (VL2)核苷酸序列
<400> 178
gaaattgtgt tgacgcagtc tccaggcacc ctgtctttgt ctccagggga aagagccacc 60
ctctcctgca gggccagtca gagtgttacc agcagctact tagcctggta ccagcagaaa 120
cctggccagg ctcccaggct cctcatctat ggtgcatcca gcagggccac tggcatccca 180
gagaggttca gtggcagtgg gtctgggaca gacttcactc tcaccatcag cagactggag 240
cctgaagatt ttgcagtgta ttactgtcag cagtatggta gctcaccgat caccttcggc 300
caagggacac gactggagat taaa 324
<210> 179
<211> 1356
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 9G7 (全长野生型重链) 核苷酸
序列
<400> 179
gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttagtaaagc ctggggggtc ccttagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt cactttcagt accgtctgga tgagctgggt ccgccaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggttggccgt attaaaagca aaactgatgg tgggacaaca 180
gactacgctg cacccgtgaa aggcagattc accatctcaa gagatgattc aaaaaacacg 240
ctgtatctgc aaatgaacag cctgcacacc gaggacacag ccgtgtatta ctgtaccaca 300
gggcagctga tcccttactc ctactactac ggtatggacg tctggggcca agggacctcg 360
gtcaccgtct cctcagcttc caccaagggc ccatccgtct tccccctggc gccctgctcc 420
aggagcacct ccgagagcac agccgccctg ggctgcctgg tcaaggacta cttccccgaa 480
ccggtgacgg tgtcgtggaa ctcaggcgcc ctgaccagcg gcgtgcacac cttcccggct 540
gtcctacagt cctcaggact ctactccctc agcagcgtgg tgaccgtgcc ctccagcagc 600
ttgggcacga agacctacac ctgcaacgta gatcacaagc ccagcaacac caaggtggac 660
aagagagttg agtccaaata tggtccccca tgcccatcat gcccagcacc tgagttcctg 720
gggggaccat cagtcttcct gttcccccca aaacccaagg acactctcat gatctcccgg 780
acccctgagg tcacgtgcgt ggtggtggac gtgagccagg aagaccccga ggtccagttc 840
aactggtacg tggatggcgt ggaggtgcat aatgccaaga caaagccgcg ggaggagcag 900
ttcaacagca cgtaccgtgt ggtcagcgtc ctcaccgtcc tgcaccagga ctggctgaac 960
ggcaaggagt acaagtgcaa ggtctccaac aaaggcctcc cgtcctccat cgagaaaacc 1020
atctccaaag ccaaagggca gccccgagag ccacaggtgt acaccctgcc cccatcccag 1080
gaggagatga ccaagaacca ggtcagcctg acctgcctgg tcaaaggctt ctaccccagc 1140
gacatcgccg tggagtggga gagcaatggg cagccggaga acaactacaa gaccacgcct 1200
cccgtgctgg actccgacgg ctccttcttc ctctacagca ggctaaccgt ggacaagagc 1260
aggtggcagg aggggaatgt cttctcatgc tccgtgatgc atgaggctct gcacaaccac 1320
tacacacaga agagcctctc cctgtctctg ggtaaa 1356
<210> 180
<211> 645
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 9G7 L2 (全长野生型轻链) 核苷酸
序列
<400> 180
gaaattgtgt tgacgcagtc tccaggcacc ctgtctttgt ctccagggga aagagccacc 60
ctctcctgca gggccagtca gagtgttacc agcagctact tagcctggta ccagcagaaa 120
cctggccagg ctcccaggct cctcatctat ggtgcatcca gcagggccac tggcatccca 180
gagaggttca gtggcagtgg gtctgggaca gacttcactc tcaccatcag cagactggag 240
cctgaagatt ttgcagtgta ttactgtcag cagtatggta gctcaccgat caccttcggc 300
caagggacac gactggagat taaacgaact gtggctgcac catctgtctt catcttcccg 360
ccatctgatg agcagttgaa atctggaact gcctctgttg tgtgcctgct gaataacttc 420
tatcccagag aggccaaagt acagtggaag gtggataacg ccctccaatc gggtaactcc 480
caggagagtg tcacagagca ggacagcaag gacagcacct acagcctcag cagcaccctg 540
acgctgagca aagcagacta cgagaaacac aaagtctacg cctgcgaagt cacccatcag 600
ggcctgagct cgcccgtcac aaagagcttc aacaggggag agtgt 645
<210> 181
<211> 645
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 9G7 L1 (全长野生型轻链) 核苷酸
序列
<400> 181
gaaattgtgt tgacgcagtc tccaggcacc ctgtctttgt ctccagggga aagagccacc 60
ctctcctgca gggccagtca gagtgttagc agcagctact tagcctggta ccagcagaaa 120
cctggccagg ctcccaggct cctcatctat ggtgcatcca gcagggccac tggcatccca 180
gacaggttca gtggcagtgg gtctgggaca gacttcactc tcaccatcag cagactggag 240
cctgaagatt ttgcagtgta ttactgtcag cagtatggta gctcaccgtg gacgttcggc 300
caagggacca aggtggaaat caaacgaact gtggctgcac catctgtctt catcttcccg 360
ccatctgatg agcagttgaa atctggaact gcctctgttg tgtgcctgct gaataacttc 420
tatcccagag aggccaaagt acagtggaag gtggataacg ccctccaatc gggtaactcc 480
caggagagtg tcacagagca ggacagcaag gacagcacct acagcctcag cagcaccctg 540
acgctgagca aagcagacta cgagaaacac aaagtctacg cctgcgaagt cacccatcag 600
ggcctgagct cgcccgtcac aaagagcttc aacaggggag agtgt 645
<210> 182
<211> 351
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 14E3 (VH)核苷酸序列
<400> 182
caggtgcagc tacagcagtg gggcgcagga ctgttgaagc cttcggagac cctgtccctc 60
acctgcgctg tctatggtgg gtccttcagt ggttactact ggagctggat ccgccagccc 120
ccagggaagg ggctggagtg gattggagaa atcaatcata gtggaaacac ctactacaac 180
ccgtccctca agagtcgcgt caccatatca gtagacacgt ccaagaacca gttatccctg 240
aagctgagct ctgtgaccgc cgcggacacg gctgtgtatt actgtgcgag atttgggagt 300
aatgatgctt ttgatatctg gggccaaggg acaatggtca ccgtctcttc a 351
<210> 183
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 14E3 (VL)核苷酸序列
<400> 183
gacatccaga tgacccagtc tccatcctca ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60
atcacttgtc gggcgagtca gggtattagc agctggttag cctggtatca gcagaaacca 120
gagaaagccc ctaagtccct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180
aggttcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240
gaagattttg caacttatta ctgccaacag tataatagtt accctccgac gttcggccaa 300
gggaccaagg tggaaatcaa a 321
<210> 184
<211> 1341
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 14E3 (全长野生型重链) 核苷酸
序列
<400> 184
caggtgcagc tacagcagtg gggcgcagga ctgttgaagc cttcggagac cctgtccctc 60
acctgcgctg tctatggtgg gtccttcagt ggttactact ggagctggat ccgccagccc 120
ccagggaagg ggctggagtg gattggagaa atcaatcata gtggaaacac ctactacaac 180
ccgtccctca agagtcgcgt caccatatca gtagacacgt ccaagaacca gttatccctg 240
aagctgagct ctgtgaccgc cgcggacacg gctgtgtatt actgtgcgag atttgggagt 300
aatgatgctt ttgatatctg gggccaaggg acaatggtca ccgtctcttc agcctccacc 360
aagggcccat cggtcttccc cctggcaccc tcctccaaga gcacctctgg gggcacagcg 420
gccctgggct gcctggtcaa ggactacttc cccgaaccgg tgacggtgtc gtggaactca 480
ggcgccctga ccagcggcgt gcacaccttc ccggctgtcc tacagtcctc aggactctac 540
tccctcagca gcgtggtgac cgtgccctcc agcagcttgg gcacccagac ctacatctgc 600
aacgtgaatc acaagcccag caacaccaag gtggacaaga gagttgagcc caaatcttgt 660
gacaaaactc acacatgccc accgtgccca gcacctgaac tcctgggggg accgtcagtc 720
ttcctcttcc ccccaaaacc caaggacacc ctcatgatct cccggacccc tgaggtcaca 780
tgcgtggtgg tggacgtgag ccacgaagac cctgaggtca agttcaactg gtacgtggac 840
ggcgtggagg tgcataatgc caagacaaag ccgcgggagg agcagtacaa cagcacgtac 900
cgtgtggtca gcgtcctcac cgtcctgcac caggactggc tgaatggcaa ggagtacaag 960
tgcaaggtct ccaacaaagc cctcccagcc cccatcgaga aaaccatctc caaagccaaa 1020
gggcagcccc gagaaccaca ggtgtacacc ctgcccccat cccgggatga gctgaccaag 1080
aaccaggtca gcctgacctg cctggtcaaa ggcttctatc ccagcgacat cgccgtggag 1140
tgggagagca atgggcagcc ggagaacaac tacaagacca cgcctcccgt gctggactcc 1200
gacggctcct tcttcctcta cagcaagctc accgtggaca agagcaggtg gcagcagggg 1260
aacgtcttct catgctccgt gatgcatgag gctctgcaca accactacac gcagaagagc 1320
ctctccctgt ctccgggtaa a 1341
<210> 185
<211> 642
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 14E3 (全长野生型轻链) 核苷酸
序列
<400> 185
gacatccaga tgacccagtc tccatcctca ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60
atcacttgtc gggcgagtca gggtattagc agctggttag cctggtatca gcagaaacca 120
gagaaagccc ctaagtccct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180
aggttcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240
gaagattttg caacttatta ctgccaacag tataatagtt accctccgac gttcggccaa 300
gggaccaagg tggaaatcaa acgaactgtg gctgcaccat ctgtcttcat cttcccgcca 360
tctgatgagc agttgaaatc tggaactgcc tctgttgtgt gcctgctgaa taacttctat 420
cccagagagg ccaaagtaca gtggaaggtg gataacgccc tccaatcggg taactcccag 480
gagagtgtca cagagcagga cagcaaggac agcacctaca gcctcagcag caccctgacg 540
ctgagcaaag cagactacga gaaacacaaa gtctacgcct gcgaagtcac ccatcagggc 600
ctgagctcgc ccgtcacaaa gagcttcaac aggggagagt gt 642
<210> 186
<211> 372
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 19H8 (VH)核苷酸序列
<400> 186
caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cgtctggatt caccttcagt aactatggca tgcactgggt ccgccaggct 120
ccaggcaagg ggctggagtg gatggcagtt atatggtatg gtggaagtaa taaattctat 180
gcagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca attccaagaa ctcgctgtct 240
ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggctgtgt attactgtgc gagagggggg 300
gctatggttc ggggagtcta ctactacggt atggacgtct ggggccaagg gaccacggtc 360
accgtctcct ca 372
<210> 187
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 19H8 (VL1)核苷酸序列
<400> 187
gccatccagt tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60
atcacttgcc gggcaagtca gggcattagc agtgctttag cctggtatca gcagaaacca 120
gggaaagctc ctaagttcct gatctatgat gcctccagtt tggaaagtgg ggtcccatca 180
aggttcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240
gaagattttg caacttatta ctgtcaacag tttaatagtt accctcagac gttcggccaa 300
gggaccaagg tggaaatcaa a 321
<210> 188
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 19H8 (VL2)核苷酸序列
<400> 188
gaaattgtgt tgacacagtc tccagccacc ctgtctttgt ctccagggga aagagccacc 60
ctctcctgca gggccagtca gagtgttagc agctacttag cctggtacca acagaaacct 120
ggccaggctc ccaggctcct catctatgat gcatccaaca gggccactgg catcccagcc 180
aggttcagtg gcagtgggtc tgggacagac ttcactctca ccatcagcag cctagagcct 240
gaagattttg cagtttatta ctgtcagcag cgtagcaact ggccgctcac tttcggcgga 300
gggaccaagg tggagatcaa a 321
<210> 189
<211> 1350
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 19H8 (全长野生型重链) 核苷酸
序列
<400> 189
caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cgtctggatt caccttcagt aactatggca tgcactgggt ccgccaggct 120
ccaggcaagg ggctggagtg gatggcagtt atatggtatg gtggaagtaa taaattctat 180
gcagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca attccaagaa ctcgctgtct 240
ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggctgtgt attactgtgc gagagggggg 300
gctatggttc ggggagtcta ctactacggt atggacgtct ggggccaagg gaccacggtc 360
accgtctcct cagcctccac caagggccca tcggtcttcc ccctggcgcc ctgctccagg 420
agcacctccg agagcacagc ggccctgggc tgcctggtca aggactactt ccccgaaccg 480
gtgacggtgt cgtggaactc aggcgctctg accagcggcg tgcacacctt cccagctgtc 540
ctacagtcct caggactcta ctccctcagc agcgtggtga ccgtgccctc cagcaacttc 600
ggcacccaga cctacacctg caacgtagat cacaagccca gcaacaccaa ggtggacaag 660
acagttgagc gcaaatgttg tgtcgagtgc ccaccgtgcc cagcaccacc tgtggcagga 720
ccgtcagtct tcctcttccc cccaaaaccc aaggacaccc tcatgatctc ccggacccct 780
gaggtcacgt gcgtggtggt ggacgtgagc cacgaagacc ccgaggtcca gttcaactgg 840
tacgtggacg gcgtggaggt gcataatgcc aagacaaagc cacgggagga gcagttcaac 900
agcacgttcc gtgtggtcag cgtcctcacc gttgtgcacc aggactggct gaacggcaag 960
gagtacaagt gcaaggtctc caacaaaggc ctcccagccc ccatcgagaa aaccatctcc 1020
aaaaccaaag ggcagccccg agaaccacag gtgtacaccc tgcccccatc ccgggaggag 1080
atgaccaaga accaggtcag cctgacctgc ctggtcaaag gcttctaccc cagcgacatc 1140
gccgtggagt gggagagcaa tgggcagccg gagaacaact acaagaccac acctcccatg 1200
ctggactccg acggctcctt cttcctctac agcaagctca ccgtggacaa gagcaggtgg 1260
cagcagggga acgtcttctc atgctccgtg atgcatgagg ctctgcacaa ccactacacg 1320
cagaagagcc tctccctgtc tccgggtaaa 1350
<210> 190
<211> 642
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 19H8 L1 (全长野生型轻链) 核苷酸
序列
<400> 190
gccatccagt tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60
atcacttgcc gggcaagtca gggcattagc agtgctttag cctggtatca gcagaaacca 120
gggaaagctc ctaagttcct gatctatgat gcctccagtt tggaaagtgg ggtcccatca 180
aggttcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240
gaagattttg caacttatta ctgtcaacag tttaatagtt accctcagac gttcggccaa 300
gggaccaagg tggaaatcaa acgaactgtg gctgcaccat ctgtcttcat cttcccgcca 360
tctgatgagc agttgaaatc tggaactgcc tctgttgtgt gcctgctgaa taacttctat 420
cccagagagg ccaaagtaca gtggaaggtg gataacgccc tccaatcggg taactcccag 480
gagagtgtca cagagcagga cagcaaggac agcacctaca gcctcagcag caccctgacg 540
ctgagcaaag cagactacga gaaacacaaa gtctacgcct gcgaagtcac ccatcagggc 600
ctgagctcgc ccgtcacaaa gagcttcaac aggggagagt gt 642
<210> 191
<211> 642
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 19H8 L2 (全长野生型轻链) 核苷酸
序列
<400> 191
gaaattgtgt tgacacagtc tccagccacc ctgtctttgt ctccagggga aagagccacc 60
ctctcctgca gggccagtca gagtgttagc agctacttag cctggtacca acagaaacct 120
ggccaggctc ccaggctcct catctatgat gcatccaaca gggccactgg catcccagcc 180
aggttcagtg gcagtgggtc tgggacagac ttcactctca ccatcagcag cctagagcct 240
gaagattttg cagtttatta ctgtcagcag cgtagcaact ggccgctcac tttcggcgga 300
gggaccaagg tggagatcaa acgaactgtg gctgcaccat ctgtcttcat cttcccgcca 360
tctgatgagc agttgaaatc tggaactgcc tctgttgtgt gcctgctgaa taacttctat 420
cccagagagg ccaaagtaca gtggaaggtg gataacgccc tccaatcggg taactcccag 480
gagagtgtca cagagcagga cagcaaggac agcacctaca gcctcagcag caccctgacg 540
ctgagcaaag cagactacga gaaacacaaa gtctacgcct gcgaagtcac ccatcagggc 600
ctgagctcgc ccgtcacaaa gagcttcaac aggggagagt gt 642
<210> 192
<211> 98
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： VH 3-33 (28F3, 18E10, 19D3, 2G6, 8A6, 19H8)
<400> 192
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Val Ile Trp Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg
<210> 193
<211> 4
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： VH 3-10 (28F3, 8A6)
<400> 193
Met Val Arg Gly
1
<210> 194
<211> 4
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： VH 3-10 (9G7)
<400> 194
Tyr Tyr Tyr Gly
1
<210> 195
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： VH 3-10 (19H8)
<400> 195
Tyr Tyr Tyr
1
<210> 196
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： VH JH6 (28F3, 19H8)
<400> 196
Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val
1 5 10 15
Ser Ser
<210> 197
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： VH JH6 (18E10, 2G6, 8A6)
<400> 197
Tyr Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser
1 5 10 15
Ser
<210> 198
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： VH JH6 (19D3, 9G7)
<400> 198
Tyr Tyr Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val
1 5 10 15
Thr Val Ser Ser
20
<210> 199
<211> 4
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： VH 6-19 (18E10)
<400> 199
Ile Ala Val Ala
1
<210> 200
<211> 2
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： VH 3-16 (19D3)
<400> 200
Asp Tyr
1
<210> 201
<211> 97
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： VH 4-34 (3C3, 14E3)
<400> 201
Gln Val Gln Leu Gln Gln Trp Gly Ala Gly Leu Leu Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Tyr Gly Gly Ser Phe Ser Gly Tyr
20 25 30
Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Glu Ile Asn His Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys
50 55 60
Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu
65 70 75 80
Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg
<210> 202
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： VH JH3 (3C3, 14E3)
<400> 202
Asp Ala Phe Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser
1 5 10 15
<210> 203
<211> 100
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： VH 3-15 (9G7)
<400> 203
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Ala
20 25 30
Trp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Gly Arg Ile Lys Ser Lys Thr Asp Gly Gly Thr Thr Asp Tyr Ala Ala
50 55 60
Pro Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr
65 70 75 80
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys Thr Thr
100
<210> 204
<211> 94
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： VL L18 (28F3, 8A6, 19H8VK1)
<400> 204
Ala Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Ala
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asp Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe Asn Asn Tyr
85 90
<210> 205
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： VL JK2 (28F3, 18E10, 19D3, 3C3VK1, 8A6, 2G6)
<400> 205
Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
1 5 10
<210> 206
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： VL JK2 (3C3VK2)
<400> 206
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
1 5 10
<210> 207
<211> 94
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： VL L15 (18E10, 19D3, 3C3VK1, 2G6, 14E3)
<400> 207
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Glu Lys Ala Pro Lys Ser Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr
85 90
<210> 208
<211> 94
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： VL L20 (3C3VK2)
<400> 208
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Gly Val Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Pro Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Asn Trp
85 90
<210> 209
<211> 95
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： VL A27 (9G7VK1, 9G7VK2)
<400> 209
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu
65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Ser Ser
85 90 95
<210> 210
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： VL JK1 (9G7VK1)
<400> 210
Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
1 5 10
<210> 211
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： VL JK1 (14E3, 19H8VK1)
<400> 211
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
1 5 10
<210> 212
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： VL JK5 (9G7VK2)
<400> 212
Ile Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys
1 5 10
<210> 213
<211> 94
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： VL L6 (19H8VK2)
<400> 213
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Asn Trp
85 90
<210> 214
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： VL JK4 (19H8VK2)
<400> 214
Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
1 5 10
<210> 215
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： GITR epitope
<400> 215
Gln Arg Pro Thr Gly Gly Pro Gly Cys Gly Pro Gly Arg Leu Leu Leu
1 5 10 15
Gly Thr Gly Thr Asp Ala Arg Cys Cys Arg Val His Thr Thr Arg Cys
20 25 30
Cys Arg Asp Tyr Pro Gly Glu
35
<210> 216
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： GITR epitope
<400> 216
Gln Arg Pro Thr Gly Gly Pro Gly Cys Gly Pro Gly Arg Leu Leu Leu
1 5 10 15
Gly Thr Gly Thr
20
<210> 217
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： GITR 表位(区域1)
<400> 217
Pro Thr Gly Gly Pro Gly Cys Gly Pro Gly Arg Leu Leu Leu Gly Thr
1 5 10 15
Gly Thr
<210> 218
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： GITR 表位(区域2)
<400> 218
Cys Arg Asp Tyr Pro Gly Glu Glu
1 5
<210> 219
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 肽接头
<400> 219
Pro Val Gly Val Val
1 5
<210> 220
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 重链C-末端
<400> 220
Leu Ser Pro Gly Lys
1 5
<210> 221
<211> 325
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： G2恒定区
<400> 221
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg
1 5 10 15
Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Thr Val Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
100 105 110
Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
115 120 125
Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
130 135 140
Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
145 150 155 160
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn
165 170 175
Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp
180 185 190
Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro
195 200 205
Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu
210 215 220
Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn
225 230 235 240
Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile
245 250 255
Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr
260 265 270
Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys
275 280 285
Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys
290 295 300
Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
305 310 315 320
Ser Leu Ser Pro Gly
325
<210> 222
<211> 325
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： G2(C219S)恒定区
<400> 222
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg
1 5 10 15
Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Thr Val Glu Arg Lys Ser Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
100 105 110
Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
115 120 125
Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
130 135 140
Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
145 150 155 160
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn
165 170 175
Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp
180 185 190
Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro
195 200 205
Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu
210 215 220
Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn
225 230 235 240
Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile
245 250 255
Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr
260 265 270
Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys
275 280 285
Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys
290 295 300
Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
305 310 315 320
Ser Leu Ser Pro Gly
325
<210> 223
<211> 326
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： G2.g1 modified恒定区
<400> 223
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg
1 5 10 15
Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Thr Val Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
100 105 110
Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
115 120 125
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
130 135 140
Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp
145 150 155 160
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr
165 170 175
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
180 185 190
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu
195 200 205
Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
210 215 220
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys
225 230 235 240
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
245 250 255
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
260 265 270
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
275 280 285
Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser
290 295 300
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
305 310 315 320
Leu Ser Leu Ser Pro Gly
325
<210> 224
<211> 325
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： G2.g1.1 modified恒定区
<400> 224
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg
1 5 10 15
Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Thr Val Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
100 105 110
Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
115 120 125
Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
130 135 140
Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
145 150 155 160
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn
165 170 175
Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp
180 185 190
Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro
195 200 205
Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu
210 215 220
Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn
225 230 235 240
Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile
245 250 255
Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr
260 265 270
Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys
275 280 285
Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys
290 295 300
Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
305 310 315 320
Ser Leu Ser Pro Gly
325
<210> 225
<211> 326
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： G2(C219S).g1 modified恒定区
<400> 225
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg
1 5 10 15
Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Thr Val Glu Arg Lys Ser Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
100 105 110
Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
115 120 125
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
130 135 140
Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp
145 150 155 160
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr
165 170 175
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
180 185 190
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu
195 200 205
Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
210 215 220
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys
225 230 235 240
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
245 250 255
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
260 265 270
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
275 280 285
Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser
290 295 300
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
305 310 315 320
Leu Ser Leu Ser Pro Gly
325
<210> 226
<211> 325
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： G2(C219S).g1.1 modified恒定区
<400> 226
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1 5 10 15
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20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
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Thr Val Glu Arg Lys Ser Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
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Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
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Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
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Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
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Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile
245 250 255
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260 265 270
Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys
275 280 285
Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys
290 295 300
Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
305 310 315 320
Ser Leu Ser Pro Gly
325
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
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<400> 227
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20 25 30
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65 70 75 80
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115 120 125
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130 135 140
Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro
145 150 155 160
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165 170 175
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195 200 205
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Gly
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<220>
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Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
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450
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Gly
<210> 230
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<213> 人工序列
<220>
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450
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Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ser Ser Ile Glu
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Gly
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<213> 人工序列
<220>
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<210> 233
<211> 449
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 19D3 (VH + G2.g1) 或19D3-IgG2-IgG1
<400> 233
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195 200 205
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210 215 220
Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly
225 230 235 240
Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile
245 250 255
Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu
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275 280 285
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290 295 300
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305 310 315 320
Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu
325 330 335
Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr
340 345 350
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355 360 365
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435 440 445
Gly
<210> 234
<211> 448
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 19D3 (VH + G2.g1.1) 或19D3-IgG2-IgG1.1
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Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu
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His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
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Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp
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Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
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Gly
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<223> 合成的： 9G7 (VH + G2(C219S).g1.1) 或9G7-IgG2-C219S-IgG1.1
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275 280 285
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355 360 365
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 14E3 (VH + G2(C219S)) 或14E3-IgG2-C219S
<400> 266
Gln Val Gln Leu Gln Gln Trp Gly Ala Gly Leu Leu Lys Pro Ser Glu
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210 215 220
Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro
225 230 235 240
Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr
245 250 255
Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn
260 265 270
Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg
275 280 285
Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val
290 295 300
Val His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser
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Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu
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Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe
385 390 395 400
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<213> 人工序列
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Gly
<210> 274
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 19H8 (VH + G2(C219S).g1)或19H8-IgG2-C219S-IgG1
<400> 274
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
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Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr
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275 280 285
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Pro Gly
450
<210> 275
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<212> PRT
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<400> 275
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Ala Val Ile Trp Tyr Gly Gly Ser Asn Lys Phe Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Ser Leu Ser
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gly Ala Met Val Arg Gly Val Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp
100 105 110
Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys
115 120 125
Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu
130 135 140
Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro
145 150 155 160
Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr
165 170 175
Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val
180 185 190
Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr Tyr Thr Cys Asn
195 200 205
Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val Glu Arg
210 215 220
Lys Ser Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly
225 230 235 240
Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile
245 250 255
Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu
260 265 270
Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His
275 280 285
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg
290 295 300
Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys
305 310 315 320
Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ser Ser Ile Glu
325 330 335
Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr
340 345 350
Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu
355 360 365
Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp
370 375 380
Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val
385 390 395 400
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp
405 410 415
Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His
420 425 430
Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
435 440 445
Gly
<210> 276
<211> 4
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 重链C-末端
<400> 276
Leu Ser Pro Gly
1
<210> 277
<400> 277
000
<210> 278
<211> 98
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(98)
<223> Wildtype 人IgG1 CH1
<400> 278
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Lys Val
<210> 279
<211> 98
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(98)
<223> Wildtype 人IgG2 CH1
<400> 279
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg
1 5 10 15
Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Thr Val
<210> 280
<211> 103
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(103)
<223> Wildtype 人IgG1 CH2
<400> 280
Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile
1 5 10 15
Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu
20 25 30
Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His
35 40 45
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg
50 55 60
Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys
65 70 75 80
Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu
85 90 95
Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys
100
<210> 281
<211> 103
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(103)
<223> 人IgG1 CH2 with A330S/P331S
<400> 281
Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile
1 5 10 15
Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu
20 25 30
Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His
35 40 45
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg
50 55 60
Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys
65 70 75 80
Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ser Ser Ile Glu
85 90 95
Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys
100
<210> 282
<211> 106
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(106)
<223> Wildtype 人IgG1 CH3
<400> 282
Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu
1 5 10 15
Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe
20 25 30
Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu
35 40 45
Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe
50 55 60
Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly
65 70 75 80
Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr
85 90 95
Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
100 105
<210> 283
<211> 326
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： IgG1-IgG2-IgG1f
<400> 283
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Lys Val Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
100 105 110
Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
115 120 125
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
130 135 140
Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp
145 150 155 160
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr
165 170 175
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
180 185 190
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu
195 200 205
Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
210 215 220
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys
225 230 235 240
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
245 250 255
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
260 265 270
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
275 280 285
Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser
290 295 300
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
305 310 315 320
Leu Ser Leu Ser Pro Gly
325
<210> 284
<211> 325
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： IgG1-IgG2CS-IgG1f
<400> 284
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Lys Val Glu Arg Lys Ser Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
100 105 110
Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
115 120 125
Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
130 135 140
Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
145 150 155 160
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn
165 170 175
Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp
180 185 190
Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro
195 200 205
Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu
210 215 220
Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn
225 230 235 240
Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile
245 250 255
Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr
260 265 270
Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys
275 280 285
Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys
290 295 300
Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
305 310 315 320
Ser Leu Ser Pro Gly
325
<210> 285
<211> 325
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： IgG1-IgG2-IgG1.1f
<400> 285
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Lys Val Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
100 105 110
Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
115 120 125
Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
130 135 140
Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
145 150 155 160
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn
165 170 175
Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp
180 185 190
Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro
195 200 205
Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu
210 215 220
Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Arg Glu Met Thr Lys Asn
225 230 235 240
Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile
245 250 255
Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr
260 265 270
Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys
275 280 285
Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys
290 295 300
Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
305 310 315 320
Ser Leu Ser Pro Gly
325
<210> 286
<211> 325
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： IgG1-IgG2CS-IgG1.1f
<400> 286
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Lys Val Glu Arg Lys Ser Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
100 105 110
Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
115 120 125
Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
130 135 140
Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
145 150 155 160
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn
165 170 175
Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp
180 185 190
Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro
195 200 205
Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu
210 215 220
Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn
225 230 235 240
Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile
245 250 255
Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr
260 265 270
Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys
275 280 285
Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys
290 295 300
Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
305 310 315 320
Ser Leu Ser Pro Gly
325
<210> 287
<211> 325
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： IgG1-IgG2-1gG1f2
<400> 287
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Lys Val Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
100 105 110
Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
115 120 125
Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
130 135 140
Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
145 150 155 160
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn
165 170 175
Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp
180 185 190
Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro
195 200 205
Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu
210 215 220
Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn
225 230 235 240
Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile
245 250 255
Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr
260 265 270
Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys
275 280 285
Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys
290 295 300
Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
305 310 315 320
Ser Leu Ser Pro Gly
325
<210> 288
<211> 325
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： IgG1-IgG2(C219S)-IgG1f2
<400> 288
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Lys Val Glu Arg Lys Ser Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
100 105 110
Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
115 120 125
Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
130 135 140
Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
145 150 155 160
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn
165 170 175
Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp
180 185 190
Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro
195 200 205
Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu
210 215 220
Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn
225 230 235 240
Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile
245 250 255
Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr
260 265 270
Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys
275 280 285
Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys
290 295 300
Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
305 310 315 320
Ser Leu Ser Pro Gly
325
<210> 289
<211> 325
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： IgG2-IgG1f2
<400> 289
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg
1 5 10 15
Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Thr Val Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
100 105 110
Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
115 120 125
Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
130 135 140
Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
145 150 155 160
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn
165 170 175
Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp
180 185 190
Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro
195 200 205
Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu
210 215 220
Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn
225 230 235 240
Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile
245 250 255
Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr
260 265 270
Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys
275 280 285
Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys
290 295 300
Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
305 310 315 320
Ser Leu Ser Pro Gly
325
<210> 290
<211> 325
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： IgG2(C219S)-IgG1f2
<400> 290
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg
1 5 10 15
Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Thr Val Glu Arg Lys Ser Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
100 105 110
Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
115 120 125
Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
130 135 140
Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
145 150 155 160
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn
165 170 175
Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp
180 185 190
Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro
195 200 205
Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu
210 215 220
Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn
225 230 235 240
Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile
245 250 255
Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr
260 265 270
Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys
275 280 285
Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys
290 295 300
Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
305 310 315 320
Ser Leu Ser Pro Gly
325
<210> 291
<211> 18
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(18)
<223> WT 人IgG2 hinge
<400> 291
Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val
1 5 10 15
Ala Gly
<210> 292
<211> 18
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(18)
<223> 人IgG2 hinge with C219S
<400> 292
Glu Arg Lys Ser Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val
1 5 10 15
Ala Gly
<210> 293
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： IgG2/IgG1 hinge
<400> 293
Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu
1 5 10 15
Leu Gly Gly
<210> 294
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： IgG2 (C219S)/IgG1 hinge
<400> 294
Glu Arg Lys Ser Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu
1 5 10 15
Leu Gly Gly
<210> 295
<211> 22
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(22)
<223> Wild type 人IgG1 hinge
<400> 295
Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala
1 5 10 15
Pro Glu Leu Leu Gly Gly
20
<210> 296
<211> 22
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： IgG1.1 Hinge (L234A/L235E/G237A)
<400> 296
Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala
1 5 10 15
Pro Glu Ala Glu Gly Ala
20
<210> 297
<211> 103
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(103)
<223> Wildtype 人IgG2 CH2
<400> 297
Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile
1 5 10 15
Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu
20 25 30
Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His
35 40 45
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg
50 55 60
Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys
65 70 75 80
Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro Ile Glu
85 90 95
Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys
100
<210> 298
<211> 107
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(107)
<223> Wildtype 人IgG2 CH3
<400> 298
Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu
1 5 10 15
Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe
20 25 30
Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu
35 40 45
Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe
50 55 60
Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly
65 70 75 80
Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr
85 90 95
Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
100 105
<210> 299
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： IgG1 C-termianl CH1 (同IgG3 (17-15-15-15), igG3
(17-15-15), IgG3 (17-15), IgG3 (15-15-15), IgG3 (15),和IgG4
<400> 299
Val Asp Lys Arg Val
1 5
<210> 300
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： IgG2 C-termianl CH1
<400> 300
Val Asp Lys Thr Val
1 5
<210> 301
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： IgG1 upper hinge
<400> 301
Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr
1 5 10
<210> 302
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： IgG3 (17-15-15-15) upper hinge (同IgG3
(17-15-15)和IgG3 (17-15))
<400> 302
Glu Leu Lys Thr Pro Leu Gly Asp Thr Thr His Thr
1 5 10
<210> 303
<211> 4
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： IgG3 (15-15-15) upper hinge (同IgG3(15))
<400> 303
Glu Pro Lys Ser
1
<210> 304
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： IgG4 upper hinge
<400> 304
Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro
1 5
<210> 305
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： IgG1 middle hinge
<400> 305
Cys Pro Pro Cys Pro
1 5
<210> 306
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： IgG2 middle hinge
<400> 306
Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro
1 5
<210> 307
<211> 50
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： IgG3 (17-15-15-15) middle hinge
<400> 307
Cys Pro Arg Cys Pro Glu Pro Lys Ser Cys Asp Thr Pro Pro Pro Cys
1 5 10 15
Pro Arg Cys Pro Glu Pro Lys Ser Cys Asp Thr Pro Pro Pro Cys Pro
20 25 30
Arg Cys Pro Glu Pro Lys Ser Cys Asp Thr Pro Pro Pro Cys Pro Arg
35 40 45
Cys Pro
50
<210> 308
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： IgG3 (17-15-15) middle hinge
<400> 308
Cys Pro Arg Cys Pro Glu Pro Lys Ser Cys Asp Thr Pro Pro Pro Cys
1 5 10 15
Pro Arg Cys Pro Glu Pro Lys Ser Cys Asp Thr Pro Pro Pro Cys Pro
20 25 30
Arg Cys Pro
35
<210> 309
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： IgG3 (17-15) middle hinge
<400> 309
Cys Pro Arg Cys Pro Glu Pro Lys Ser Cys Asp Thr Pro Pro Pro Cys
1 5 10 15
Pro Arg Cys Pro
20
<210> 310
<211> 41
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： IgG3 (15-15-15) middle hinge
<400> 310
Cys Asp Thr Pro Pro Pro Cys Pro Arg Cys Pro Glu Pro Lys Ser Cys
1 5 10 15
Asp Thr Pro Pro Pro Cys Pro Arg Cys Pro Glu Pro Lys Ser Cys Asp
20 25 30
Thr Pro Pro Pro Cys Pro Arg Cys Pro
35 40
<210> 311
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： IgG3 (15) middle hinge
<400> 311
Cys Asp Thr Pro Pro Pro Cys Pro Arg Cys Pro
1 5 10
<210> 312
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： IgG4 middle hinge
<400> 312
Cys Pro Ser Cys Pro
1 5
<210> 313
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： IgG1 lower hinge (同IgG3 (17-15-15-15), IgG3
(17-15-15), IgG3 (17-15), IgG3 (15-15-15), IgG3 (15),和IgG4)
<400> 313
Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly
1 5
<210> 314
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： IgG2 lower hinge
<400> 314
Ala Pro Pro Val Ala Gly
1 5
<210> 315
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 28F3 VH 信号序列 (同18E10, 19D3, 19H8,
6G10)
<400> 315
Met Glu Phe Gly Leu Ser Trp Val Phe Leu Val Ala Leu Leu Arg Gly
1 5 10 15
Val Gln Cys
<210> 316
<211> 57
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 28F3 VH 信号序列 (核苷酸序列)
<400> 316
Ala Thr Gly Gly Ala Gly Thr Thr Thr Gly Gly Gly Cys Thr Gly Ala
1 5 10 15
Gly Cys Thr Gly Gly Gly Thr Thr Thr Thr Cys Cys Thr Cys Gly Thr
20 25 30
Thr Gly Cys Thr Cys Thr Thr Thr Thr Ala Ala Gly Ala Gly Gly Thr
35 40 45
Gly Thr Cys Cys Ala Gly Thr Gly Thr
50 55
<210> 317
<211> 22
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 28F3 VL 信号序列 (同18E10, 8A6, 19H8VL1,
6G10)
<400> 317
Met Asp Met Arg Val Pro Ala Gln Leu Leu Gly Leu Leu Leu Leu Trp
1 5 10 15
Leu Pro Gly Ala Arg Cys
20
<210> 318
<211> 64
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 28F3 VL 信号序列 (核苷酸序列)
<400> 318
Ala Thr Gly Gly Ala Cys Ala Thr Gly Ala Gly Gly Gly Thr Cys Cys
1 5 10 15
Cys Cys Gly Cys Thr Cys Ala Gly Cys Thr Cys Cys Thr Gly Gly Gly
20 25 30
Gly Cys Thr Thr Cys Thr Gly Cys Thr Gly Cys Thr Cys Thr Gly Gly
35 40 45
Cys Thr Cys Cys Cys Ala Gly Gly Thr Gly Cys Cys Ala Gly Ala Thr
50 55 60
<210> 319
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 19D3 VL 信号序列
<400> 319
Met Arg Val Leu Ala Gln Leu Leu Gly Leu Leu Leu Leu Cys Phe Pro
1 5 10 15
Gly Ala Arg Cys
20
<210> 320
<211> 60
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 19D3 VL 信号序列 (核苷酸序列)
<400> 320
Ala Thr Gly Ala Gly Gly Gly Thr Cys Cys Thr Cys Gly Cys Thr Cys
1 5 10 15
Ala Gly Cys Thr Cys Cys Thr Gly Gly Gly Gly Cys Thr Cys Cys Thr
20 25 30
Gly Cys Thr Gly Cys Thr Cys Thr Gly Thr Thr Thr Cys Cys Cys Ala
35 40 45
Gly Gly Thr Gly Cys Cys Ala Gly Ala Thr Gly Thr
50 55 60
<210> 321
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 3C3 VH 信号序列 (同14E3)
<400> 321
Met Lys His Leu Trp Phe Phe Leu Leu Leu Val Ala Ala Pro Arg Trp
1 5 10 15
Val Leu Ser
<210> 322
<211> 57
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 3C3 VH 信号序列 (核苷酸序列)
<400> 322
Ala Thr Gly Ala Ala Ala Cys Ala Cys Cys Thr Gly Thr Gly Gly Thr
1 5 10 15
Thr Cys Thr Thr Cys Cys Thr Cys Cys Thr Cys Cys Thr Gly Gly Thr
20 25 30
Gly Gly Cys Ala Gly Cys Thr Cys Cys Cys Ala Gly Ala Thr Gly Gly
35 40 45
Gly Thr Cys Cys Thr Gly Thr Cys Cys
50 55
<210> 323
<211> 22
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 3C3 VL 信号序列 (同14E3)
<400> 323
Met Asp Met Arg Val Leu Ala Gln Leu Leu Gly Leu Leu Leu Leu Cys
1 5 10 15
Phe Pro Gly Ala Arg Cys
20
<210> 324
<211> 66
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 3C3 VL 信号序列 (核苷酸序列)
<400> 324
Ala Thr Gly Gly Ala Cys Ala Thr Gly Ala Gly Gly Gly Thr Cys Cys
1 5 10 15
Thr Cys Gly Cys Thr Cys Ala Gly Cys Thr Cys Cys Thr Gly Gly Gly
20 25 30
Gly Cys Thr Cys Cys Thr Gly Cys Thr Gly Cys Thr Cys Thr Gly Thr
35 40 45
Thr Thr Cys Cys Cys Ala Gly Gly Thr Gly Cys Cys Ala Gly Ala Thr
50 55 60
Gly Thr
65
<210> 325
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 3C3 VL2 信号序列 (同19H8 VL2)
<400> 325
Met Glu Ala Pro Ala Gln Leu Leu Phe Leu Leu Leu Leu Trp Leu Pro
1 5 10 15
Asp Thr Thr Gly
20
<210> 326
<211> 60
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 3C3 VL2 信号序列 (核苷酸序列)
<400> 326
Ala Thr Gly Gly Ala Ala Gly Cys Cys Cys Cys Ala Gly Cys Gly Cys
1 5 10 15
Ala Gly Cys Thr Thr Cys Thr Cys Thr Thr Cys Cys Thr Cys Cys Thr
20 25 30
Gly Cys Thr Ala Cys Thr Cys Thr Gly Gly Cys Thr Cys Cys Cys Ala
35 40 45
Gly Ala Thr Ala Cys Cys Ala Cys Cys Gly Gly Ala
50 55 60
<210> 327
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 8A6 VH 信号序列
<400> 327
Met Glu Phe Gly Leu Asn Trp Val Phe Leu Val Ala Leu Leu Arg Gly
1 5 10 15
Val Gln Cys
<210> 328
<211> 57
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 8A6 VH 信号序列 (核苷酸序列)
<400> 328
Ala Thr Gly Gly Ala Gly Thr Thr Thr Gly Gly Gly Cys Thr Gly Ala
1 5 10 15
Ala Cys Thr Gly Gly Gly Thr Thr Thr Thr Cys Cys Thr Cys Gly Thr
20 25 30
Thr Gly Cys Thr Cys Thr Thr Thr Thr Ala Ala Gly Ala Gly Gly Thr
35 40 45
Gly Thr Cys Cys Ala Gly Thr Gly Thr
50 55
<210> 329
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 9G7 VH 信号序列
<400> 329
Met Glu Phe Gly Leu Ser Trp Ile Phe Leu Ala Ala Ile Leu Lys Gly
1 5 10 15
Val Gln Cys
<210> 330
<211> 57
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 9G7 VH 信号序列 (核苷酸序列)
<400> 330
Ala Thr Gly Gly Ala Gly Thr Thr Thr Gly Gly Gly Cys Thr Gly Ala
1 5 10 15
Gly Cys Thr Gly Gly Ala Thr Thr Thr Thr Cys Cys Thr Thr Gly Cys
20 25 30
Thr Gly Cys Thr Ala Thr Thr Thr Thr Ala Ala Ala Ala Gly Gly Thr
35 40 45
Gly Thr Cys Cys Ala Gly Thr Gly Thr
50 55
<210> 331
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 9G7 VL1和VL2 信号序列
<400> 331
Met Glu Thr Pro Ala Gln Leu Leu Phe Leu Leu Leu Leu Trp Leu Pro
1 5 10 15
Asp Thr Thr Gly
20
<210> 332
<211> 60
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 9G7 VL1和VL2 信号序列 (核苷酸序列)
<400> 332
Ala Thr Gly Gly Ala Ala Ala Cys Cys Cys Cys Ala Gly Cys Gly Cys
1 5 10 15
Ala Gly Cys Thr Thr Cys Thr Cys Thr Thr Cys Cys Thr Cys Cys Thr
20 25 30
Gly Cys Thr Ala Cys Thr Cys Thr Gly Gly Cys Thr Cys Cys Cys Ala
35 40 45
Gly Ala Thr Ala Cys Cys Ala Cys Cys Gly Gly Ala
50 55 60
<210> 333
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 14E3 VH 信号序列
<400> 333
Met Lys His Leu Trp Phe Phe Leu Leu Leu Val Ala Ala Pro Arg Trp
1 5 10 15
Val Leu Ser
<210> 334
<211> 57
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 14E3 VH 信号序列 (核苷酸序列)
<400> 334
Ala Thr Gly Ala Ala Ala Cys Ala Cys Cys Thr Gly Thr Gly Gly Thr
1 5 10 15
Thr Cys Thr Thr Cys Cys Thr Cys Cys Thr Cys Cys Thr Gly Gly Thr
20 25 30
Gly Gly Cys Ala Gly Cys Thr Cys Cys Cys Ala Gly Ala Thr Gly Gly
35 40 45
Gly Thr Cys Cys Thr Gly Thr Cys Cys
50 55
<210> 335
<211> 124
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 6G10 (VH)
<400> 335
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Asp Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Thr Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Val Thr Trp Tyr Ala Gly Ser Asn Lys Phe Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gly Ser Met Val Arg Gly Leu Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp
100 105 110
Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 336
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 6G10 (VL)
<400> 336
Ala Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Ala
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asp Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe Asn Ser Tyr Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 337
<211> 450
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 6G10 (全长野生型重链)
<400> 337
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Asp Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Thr Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Val Thr Trp Tyr Ala Gly Ser Asn Lys Phe Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gly Ser Met Val Arg Gly Leu Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp
100 105 110
Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys
115 120 125
Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu
130 135 140
Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro
145 150 155 160
Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr
165 170 175
Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val
180 185 190
Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr Tyr Thr Cys Asn
195 200 205
Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val Glu Arg
210 215 220
Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly
225 230 235 240
Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile
245 250 255
Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu
260 265 270
Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His
275 280 285
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg
290 295 300
Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys
305 310 315 320
Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro Ile Glu
325 330 335
Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr
340 345 350
Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu
355 360 365
Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp
370 375 380
Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met
385 390 395 400
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp
405 410 415
Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His
420 425 430
Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
435 440 445
Gly Lys
450
<210> 338
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 6G10 (全长野生型轻链)
<400> 338
Ala Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Ala
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asp Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe Asn Ser Tyr Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 339
<211> 453
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<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 6G10.IgG1 (VH + IgG1)
<400> 339
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Asp Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Thr Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Val Thr Trp Tyr Ala Gly Ser Asn Lys Phe Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gly Ser Met Val Arg Gly Leu Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp
100 105 110
Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys
115 120 125
Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly
130 135 140
Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro
145 150 155 160
Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr
165 170 175
Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val
180 185 190
Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn
195 200 205
Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro
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Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
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Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
275 280 285
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450
<210> 340
<211> 453
<212> PRT
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<220>
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Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Thr Tyr
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Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
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65 70 75 80
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115 120 125
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Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
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275 280 285
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Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro
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35 40 45
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50 55 60
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65 70 75 80
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Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
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1 5
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65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
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100 105 110
Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys
115 120 125
Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu
130 135 140
Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro
145 150 155 160
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165 170 175
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Gly
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Ala Arg Gly Gly Ser Met Val Arg Gly Leu Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp
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115 120 125
Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu
130 135 140
Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro
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Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val
180 185 190
Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr Tyr Thr Cys Asn
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210 215 220
Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly
225 230 235 240
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
245 250 255
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260 265 270
Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
275 280 285
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290 295 300
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305 310 315 320
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile
325 330 335
Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
340 345 350
Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser
355 360 365
Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
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405 410 415
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His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
435 440 445
Pro Gly
450
<210> 350
<211> 449
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 6G10 (VH + G2.g1.1)或6G10-IgG2-IgG1.1
<400> 350
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Asp Val Val Gln Pro Gly Arg
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Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
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Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu
130 135 140
Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro
145 150 155 160
Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr
165 170 175
Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val
180 185 190
Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr Tyr Thr Cys Asn
195 200 205
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Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile
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275 280 285
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg
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Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys
305 310 315 320
Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ser Ser Ile Glu
325 330 335
Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr
340 345 350
Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu
355 360 365
Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp
370 375 380
Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val
385 390 395 400
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp
405 410 415
Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His
420 425 430
Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
435 440 445
Gly
<210> 351
<211> 450
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 6G10 (VH + G2(C219S).g1)或6G10-IgG2-C219S-IgG1
<400> 351
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195 200 205
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Lys Ser Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly
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Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
245 250 255
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Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
275 280 285
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr
290 295 300
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
305 310 315 320
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile
325 330 335
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340 345 350
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355 360 365
Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
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385 390 395 400
Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val
405 410 415
Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
420 425 430
His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
435 440 445
Pro Gly
450
<210> 352
<211> 449
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 6G10 (VH + G2(C219S).g1.1)或6G10-IgG2-C219S-IgG1.1
<400> 352
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Asp Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
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20 25 30
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35 40 45
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50 55 60
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65 70 75 80
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100 105 110
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130 135 140
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225 230 235 240
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245 250 255
Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu
260 265 270
Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His
275 280 285
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg
290 295 300
Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys
305 310 315 320
Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ser Ser Ile Glu
325 330 335
Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr
340 345 350
Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu
355 360 365
Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp
370 375 380
Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val
385 390 395 400
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp
405 410 415
Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His
420 425 430
Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
435 440 445
Gly
<210> 353
<211> 372
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 6G10 (VH)核苷酸序列
<400> 353
Cys Ala Gly Gly Thr Gly Cys Ala Gly Cys Thr Gly Gly Thr Gly Gly
1 5 10 15
Ala Gly Thr Cys Thr Gly Gly Gly Gly Gly Ala Gly Ala Cys Gly Thr
20 25 30
Gly Gly Thr Cys Cys Ala Gly Cys Cys Thr Gly Gly Gly Ala Gly Gly
35 40 45
Thr Cys Cys Cys Thr Gly Ala Gly Ala Cys Thr Cys Thr Cys Cys Thr
50 55 60
Gly Thr Gly Cys Ala Gly Cys Gly Thr Cys Thr Gly Gly Ala Thr Thr
65 70 75 80
Cys Ala Cys Cys Thr Thr Cys Ala Gly Thr Ala Cys Cys Thr Ala Thr
85 90 95
Gly Gly Cys Ala Thr Gly Cys Ala Cys Thr Gly Gly Gly Thr Cys Cys
100 105 110
Gly Cys Cys Ala Gly Gly Cys Thr Cys Cys Ala Gly Gly Cys Ala Ala
115 120 125
Gly Gly Gly Gly Cys Thr Gly Gly Ala Gly Thr Gly Gly Gly Thr Gly
130 135 140
Gly Cys Ala Gly Thr Thr Ala Cys Ala Thr Gly Gly Thr Ala Thr Gly
145 150 155 160
Cys Thr Gly Gly Ala Ala Gly Thr Ala Ala Thr Ala Ala Ala Thr Thr
165 170 175
Thr Thr Ala Thr Gly Cys Ala Gly Ala Cys Thr Cys Cys Gly Thr Gly
180 185 190
Ala Ala Gly Gly Gly Cys Cys Gly Ala Thr Thr Cys Ala Cys Cys Ala
195 200 205
Thr Cys Thr Cys Cys Ala Gly Ala Gly Ala Cys Ala Ala Thr Thr Cys
210 215 220
Cys Ala Ala Gly Ala Ala Cys Ala Cys Gly Cys Thr Gly Thr Ala Thr
225 230 235 240
Cys Thr Gly Cys Ala Ala Ala Thr Gly Ala Ala Cys Ala Gly Cys Cys
245 250 255
Thr Gly Ala Gly Ala Gly Cys Cys Gly Ala Gly Gly Ala Cys Ala Cys
260 265 270
Gly Gly Cys Thr Gly Thr Gly Thr Ala Thr Thr Ala Cys Thr Gly Thr
275 280 285
Gly Cys Gly Ala Gly Ala Gly Gly Ala Gly Gly Thr Ala Gly Thr Ala
290 295 300
Thr Gly Gly Thr Thr Cys Gly Gly Gly Gly Ala Cys Thr Thr Thr Ala
305 310 315 320
Thr Thr Ala Thr Thr Ala Cys Gly Gly Thr Ala Thr Gly Gly Ala Cys
325 330 335
Gly Thr Cys Thr Gly Gly Gly Gly Cys Cys Ala Ala Gly Gly Gly Ala
340 345 350
Cys Cys Ala Cys Gly Gly Thr Cys Ala Cys Cys Gly Thr Cys Thr Cys
355 360 365
Cys Thr Cys Ala
370
<210> 354
<211> 321
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 6G10 (VL)核苷酸序列
<400> 354
Gly Cys Cys Ala Thr Cys Cys Ala Gly Thr Thr Gly Ala Cys Cys Cys
1 5 10 15
Ala Gly Thr Cys Thr Cys Cys Ala Thr Cys Cys Thr Cys Cys Cys Thr
20 25 30
Gly Thr Cys Thr Gly Cys Ala Thr Cys Thr Gly Thr Ala Gly Gly Ala
35 40 45
Gly Ala Cys Ala Gly Ala Gly Thr Cys Ala Cys Cys Ala Thr Cys Ala
50 55 60
Cys Thr Thr Gly Cys Cys Gly Gly Gly Cys Ala Ala Gly Thr Cys Ala
65 70 75 80
Gly Gly Gly Cys Ala Thr Thr Ala Gly Cys Ala Gly Thr Gly Cys Thr
85 90 95
Thr Thr Ala Gly Cys Cys Thr Gly Gly Thr Ala Thr Cys Ala Gly Cys
100 105 110
Ala Gly Ala Ala Ala Cys Cys Ala Gly Gly Gly Ala Ala Ala Gly Cys
115 120 125
Thr Cys Cys Thr Ala Ala Gly Cys Thr Cys Cys Thr Gly Ala Thr Cys
130 135 140
Thr Ala Thr Gly Ala Thr Gly Cys Cys Thr Cys Cys Ala Gly Thr Thr
145 150 155 160
Thr Gly Gly Ala Ala Ala Gly Thr Gly Gly Gly Gly Thr Cys Cys Cys
165 170 175
Ala Thr Cys Ala Ala Gly Gly Thr Thr Cys Ala Gly Cys Gly Gly Cys
180 185 190
Ala Gly Thr Gly Gly Ala Thr Cys Thr Gly Gly Gly Ala Cys Ala Gly
195 200 205
Ala Thr Thr Thr Cys Ala Cys Thr Cys Thr Cys Ala Cys Cys Ala Thr
210 215 220
Cys Ala Gly Cys Ala Gly Cys Cys Thr Gly Cys Ala Gly Cys Cys Thr
225 230 235 240
Gly Ala Ala Gly Ala Thr Thr Thr Thr Gly Cys Ala Ala Cys Thr Thr
245 250 255
Ala Thr Thr Ala Cys Thr Gly Thr Cys Ala Ala Cys Ala Gly Thr Thr
260 265 270
Thr Ala Ala Thr Ala Gly Thr Thr Ala Cys Cys Cys Gly Thr Ala Cys
275 280 285
Ala Cys Thr Thr Thr Thr Gly Gly Cys Cys Ala Gly Gly Gly Gly Ala
290 295 300
Cys Cys Ala Ala Gly Cys Thr Gly Gly Ala Gly Ala Thr Cys Ala Ala
305 310 315 320
Ala
<210> 355
<211> 1350
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 6G10 (全长野生型重链) 核苷酸
序列
<400> 355
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1 5 10 15
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20 25 30
Gly Gly Thr Cys Cys Ala Gly Cys Cys Thr Gly Gly Gly Ala Gly Gly
35 40 45
Thr Cys Cys Cys Thr Gly Ala Gly Ala Cys Thr Cys Thr Cys Cys Thr
50 55 60
Gly Thr Gly Cys Ala Gly Cys Gly Thr Cys Thr Gly Gly Ala Thr Thr
65 70 75 80
Cys Ala Cys Cys Thr Thr Cys Ala Gly Thr Ala Cys Cys Thr Ala Thr
85 90 95
Gly Gly Cys Ala Thr Gly Cys Ala Cys Thr Gly Gly Gly Thr Cys Cys
100 105 110
Gly Cys Cys Ala Gly Gly Cys Thr Cys Cys Ala Gly Gly Cys Ala Ala
115 120 125
Gly Gly Gly Gly Cys Thr Gly Gly Ala Gly Thr Gly Gly Gly Thr Gly
130 135 140
Gly Cys Ala Gly Thr Thr Ala Cys Ala Thr Gly Gly Thr Ala Thr Gly
145 150 155 160
Cys Thr Gly Gly Ala Ala Gly Thr Ala Ala Thr Ala Ala Ala Thr Thr
165 170 175
Thr Thr Ala Thr Gly Cys Ala Gly Ala Cys Thr Cys Cys Gly Thr Gly
180 185 190
Ala Ala Gly Gly Gly Cys Cys Gly Ala Thr Thr Cys Ala Cys Cys Ala
195 200 205
Thr Cys Thr Cys Cys Ala Gly Ala Gly Ala Cys Ala Ala Thr Thr Cys
210 215 220
Cys Ala Ala Gly Ala Ala Cys Ala Cys Gly Cys Thr Gly Thr Ala Thr
225 230 235 240
Cys Thr Gly Cys Ala Ala Ala Thr Gly Ala Ala Cys Ala Gly Cys Cys
245 250 255
Thr Gly Ala Gly Ala Gly Cys Cys Gly Ala Gly Gly Ala Cys Ala Cys
260 265 270
Gly Gly Cys Thr Gly Thr Gly Thr Ala Thr Thr Ala Cys Thr Gly Thr
275 280 285
Gly Cys Gly Ala Gly Ala Gly Gly Ala Gly Gly Thr Ala Gly Thr Ala
290 295 300
Thr Gly Gly Thr Thr Cys Gly Gly Gly Gly Ala Cys Thr Thr Thr Ala
305 310 315 320
Thr Thr Ala Thr Thr Ala Cys Gly Gly Thr Ala Thr Gly Gly Ala Cys
325 330 335
Gly Thr Cys Thr Gly Gly Gly Gly Cys Cys Ala Ala Gly Gly Gly Ala
340 345 350
Cys Cys Ala Cys Gly Gly Thr Cys Ala Cys Cys Gly Thr Cys Thr Cys
355 360 365
Cys Thr Cys Ala Gly Cys Cys Thr Cys Cys Ala Cys Cys Ala Ala Gly
370 375 380
Gly Gly Cys Cys Cys Ala Thr Cys Gly Gly Thr Cys Thr Thr Cys Cys
385 390 395 400
Cys Cys Cys Thr Gly Gly Cys Gly Cys Cys Cys Thr Gly Cys Thr Cys
405 410 415
Cys Ala Gly Gly Ala Gly Cys Ala Cys Cys Thr Cys Cys Gly Ala Gly
420 425 430
Ala Gly Cys Ala Cys Ala Gly Cys Gly Gly Cys Cys Cys Thr Gly Gly
435 440 445
Gly Cys Thr Gly Cys Cys Thr Gly Gly Thr Cys Ala Ala Gly Gly Ala
450 455 460
Cys Thr Ala Cys Thr Thr Cys Cys Cys Cys Gly Ala Ala Cys Cys Gly
465 470 475 480
Gly Thr Gly Ala Cys Gly Gly Thr Gly Thr Cys Gly Thr Gly Gly Ala
485 490 495
Ala Cys Thr Cys Ala Gly Gly Cys Gly Cys Thr Cys Thr Gly Ala Cys
500 505 510
Cys Ala Gly Cys Gly Gly Cys Gly Thr Gly Cys Ala Cys Ala Cys Cys
515 520 525
Thr Thr Cys Cys Cys Ala Gly Cys Thr Gly Thr Cys Cys Thr Ala Cys
530 535 540
Ala Gly Thr Cys Cys Thr Cys Ala Gly Gly Ala Cys Thr Cys Thr Ala
545 550 555 560
Cys Thr Cys Cys Cys Thr Cys Ala Gly Cys Ala Gly Cys Gly Thr Gly
565 570 575
Gly Thr Gly Ala Cys Cys Gly Thr Gly Cys Cys Cys Thr Cys Cys Ala
580 585 590
Gly Cys Ala Ala Cys Thr Thr Cys Gly Gly Cys Ala Cys Cys Cys Ala
595 600 605
Gly Ala Cys Cys Thr Ala Cys Ala Cys Cys Thr Gly Cys Ala Ala Cys
610 615 620
Gly Thr Ala Gly Ala Thr Cys Ala Cys Ala Ala Gly Cys Cys Cys Ala
625 630 635 640
Gly Cys Ala Ala Cys Ala Cys Cys Ala Ala Gly Gly Thr Gly Gly Ala
645 650 655
Cys Ala Ala Gly Ala Cys Ala Gly Thr Thr Gly Ala Gly Cys Gly Cys
660 665 670
Ala Ala Ala Thr Gly Thr Thr Gly Thr Gly Thr Cys Gly Ala Gly Thr
675 680 685
Gly Cys Cys Cys Ala Cys Cys Gly Thr Gly Cys Cys Cys Ala Gly Cys
690 695 700
Ala Cys Cys Ala Cys Cys Thr Gly Thr Gly Gly Cys Ala Gly Gly Ala
705 710 715 720
Cys Cys Gly Thr Cys Ala Gly Thr Cys Thr Thr Cys Cys Thr Cys Thr
725 730 735
Thr Cys Cys Cys Cys Cys Cys Ala Ala Ala Ala Cys Cys Cys Ala Ala
740 745 750
Gly Gly Ala Cys Ala Cys Cys Cys Thr Cys Ala Thr Gly Ala Thr Cys
755 760 765
Thr Cys Cys Cys Gly Gly Ala Cys Cys Cys Cys Thr Gly Ala Gly Gly
770 775 780
Thr Cys Ala Cys Gly Thr Gly Cys Gly Thr Gly Gly Thr Gly Gly Thr
785 790 795 800
Gly Gly Ala Cys Gly Thr Gly Ala Gly Cys Cys Ala Cys Gly Ala Ala
805 810 815
Gly Ala Cys Cys Cys Cys Gly Ala Gly Gly Thr Cys Cys Ala Gly Thr
820 825 830
Thr Cys Ala Ala Cys Thr Gly Gly Thr Ala Cys Gly Thr Gly Gly Ala
835 840 845
Cys Gly Gly Cys Gly Thr Gly Gly Ala Gly Gly Thr Gly Cys Ala Thr
850 855 860
Ala Ala Thr Gly Cys Cys Ala Ala Gly Ala Cys Ala Ala Ala Gly Cys
865 870 875 880
Cys Ala Cys Gly Gly Gly Ala Gly Gly Ala Gly Cys Ala Gly Thr Thr
885 890 895
Cys Ala Ala Cys Ala Gly Cys Ala Cys Gly Thr Thr Cys Cys Gly Thr
900 905 910
Gly Thr Gly Gly Thr Cys Ala Gly Cys Gly Thr Cys Cys Thr Cys Ala
915 920 925
Cys Cys Gly Thr Thr Gly Thr Gly Cys Ala Cys Cys Ala Gly Gly Ala
930 935 940
Cys Thr Gly Gly Cys Thr Gly Ala Ala Cys Gly Gly Cys Ala Ala Gly
945 950 955 960
Gly Ala Gly Thr Ala Cys Ala Ala Gly Thr Gly Cys Ala Ala Gly Gly
965 970 975
Thr Cys Thr Cys Cys Ala Ala Cys Ala Ala Ala Gly Gly Cys Cys Thr
980 985 990
Cys Cys Cys Ala Gly Cys Cys Cys Cys Cys Ala Thr Cys Gly Ala Gly
995 1000 1005
Ala Ala Ala Ala Cys Cys Ala Thr Cys Thr Cys Cys Ala Ala Ala
1010 1015 1020
Ala Cys Cys Ala Ala Ala Gly Gly Gly Cys Ala Gly Cys Cys Cys
1025 1030 1035
Cys Gly Ala Gly Ala Ala Cys Cys Ala Cys Ala Gly Gly Thr Gly
1040 1045 1050
Thr Ala Cys Ala Cys Cys Cys Thr Gly Cys Cys Cys Cys Cys Ala
1055 1060 1065
Thr Cys Cys Cys Gly Gly Gly Ala Gly Gly Ala Gly Ala Thr Gly
1070 1075 1080
Ala Cys Cys Ala Ala Gly Ala Ala Cys Cys Ala Gly Gly Thr Cys
1085 1090 1095
Ala Gly Cys Cys Thr Gly Ala Cys Cys Thr Gly Cys Cys Thr Gly
1100 1105 1110
Gly Thr Cys Ala Ala Ala Gly Gly Cys Thr Thr Cys Thr Ala Cys
1115 1120 1125
Cys Cys Cys Ala Gly Cys Gly Ala Cys Ala Thr Cys Gly Cys Cys
1130 1135 1140
Gly Thr Gly Gly Ala Gly Thr Gly Gly Gly Ala Gly Ala Gly Cys
1145 1150 1155
Ala Ala Thr Gly Gly Gly Cys Ala Gly Cys Cys Gly Gly Ala Gly
1160 1165 1170
Ala Ala Cys Ala Ala Cys Thr Ala Cys Ala Ala Gly Ala Cys Cys
1175 1180 1185
Ala Cys Ala Cys Cys Thr Cys Cys Cys Ala Thr Gly Cys Thr Gly
1190 1195 1200
Gly Ala Cys Thr Cys Cys Gly Ala Cys Gly Gly Cys Thr Cys Cys
1205 1210 1215
Thr Thr Cys Thr Thr Cys Cys Thr Cys Thr Ala Cys Ala Gly Cys
1220 1225 1230
Ala Ala Gly Cys Thr Cys Ala Cys Cys Gly Thr Gly Gly Ala Cys
1235 1240 1245
Ala Ala Gly Ala Gly Cys Ala Gly Gly Thr Gly Gly Cys Ala Gly
1250 1255 1260
Cys Ala Gly Gly Gly Gly Ala Ala Cys Gly Thr Cys Thr Thr Cys
1265 1270 1275
Thr Cys Ala Thr Gly Cys Thr Cys Cys Gly Thr Gly Ala Thr Gly
1280 1285 1290
Cys Ala Thr Gly Ala Gly Gly Cys Thr Cys Thr Gly Cys Ala Cys
1295 1300 1305
Ala Ala Cys Cys Ala Cys Thr Ala Cys Ala Cys Gly Cys Ala Gly
1310 1315 1320
Ala Ala Gly Ala Gly Cys Cys Thr Cys Thr Cys Cys Cys Thr Gly
1325 1330 1335
Thr Cys Thr Cys Cys Gly Gly Gly Thr Ala Ala Ala
1340 1345 1350
<210> 356
<211> 642
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 6G10 (全长野生型轻链) 核苷酸
序列
<400> 356
Gly Cys Cys Ala Thr Cys Cys Ala Gly Thr Thr Gly Ala Cys Cys Cys
1 5 10 15
Ala Gly Thr Cys Thr Cys Cys Ala Thr Cys Cys Thr Cys Cys Cys Thr
20 25 30
Gly Thr Cys Thr Gly Cys Ala Thr Cys Thr Gly Thr Ala Gly Gly Ala
35 40 45
Gly Ala Cys Ala Gly Ala Gly Thr Cys Ala Cys Cys Ala Thr Cys Ala
50 55 60
Cys Thr Thr Gly Cys Cys Gly Gly Gly Cys Ala Ala Gly Thr Cys Ala
65 70 75 80
Gly Gly Gly Cys Ala Thr Thr Ala Gly Cys Ala Gly Thr Gly Cys Thr
85 90 95
Thr Thr Ala Gly Cys Cys Thr Gly Gly Thr Ala Thr Cys Ala Gly Cys
100 105 110
Ala Gly Ala Ala Ala Cys Cys Ala Gly Gly Gly Ala Ala Ala Gly Cys
115 120 125
Thr Cys Cys Thr Ala Ala Gly Cys Thr Cys Cys Thr Gly Ala Thr Cys
130 135 140
Thr Ala Thr Gly Ala Thr Gly Cys Cys Thr Cys Cys Ala Gly Thr Thr
145 150 155 160
Thr Gly Gly Ala Ala Ala Gly Thr Gly Gly Gly Gly Thr Cys Cys Cys
165 170 175
Ala Thr Cys Ala Ala Gly Gly Thr Thr Cys Ala Gly Cys Gly Gly Cys
180 185 190
Ala Gly Thr Gly Gly Ala Thr Cys Thr Gly Gly Gly Ala Cys Ala Gly
195 200 205
Ala Thr Thr Thr Cys Ala Cys Thr Cys Thr Cys Ala Cys Cys Ala Thr
210 215 220
Cys Ala Gly Cys Ala Gly Cys Cys Thr Gly Cys Ala Gly Cys Cys Thr
225 230 235 240
Gly Ala Ala Gly Ala Thr Thr Thr Thr Gly Cys Ala Ala Cys Thr Thr
245 250 255
Ala Thr Thr Ala Cys Thr Gly Thr Cys Ala Ala Cys Ala Gly Thr Thr
260 265 270
Thr Ala Ala Thr Ala Gly Thr Thr Ala Cys Cys Cys Gly Thr Ala Cys
275 280 285
Ala Cys Thr Thr Thr Thr Gly Gly Cys Cys Ala Gly Gly Gly Gly Ala
290 295 300
Cys Cys Ala Ala Gly Cys Thr Gly Gly Ala Gly Ala Thr Cys Ala Ala
305 310 315 320
Ala Cys Gly Ala Ala Cys Thr Gly Thr Gly Gly Cys Thr Gly Cys Ala
325 330 335
Cys Cys Ala Thr Cys Thr Gly Thr Cys Thr Thr Cys Ala Thr Cys Thr
340 345 350
Thr Cys Cys Cys Gly Cys Cys Ala Thr Cys Thr Gly Ala Thr Gly Ala
355 360 365
Gly Cys Ala Gly Thr Thr Gly Ala Ala Ala Thr Cys Thr Gly Gly Ala
370 375 380
Ala Cys Thr Gly Cys Cys Thr Cys Thr Gly Thr Thr Gly Thr Gly Thr
385 390 395 400
Gly Cys Cys Thr Gly Cys Thr Gly Ala Ala Thr Ala Ala Cys Thr Thr
405 410 415
Cys Thr Ala Thr Cys Cys Cys Ala Gly Ala Gly Ala Gly Gly Cys Cys
420 425 430
Ala Ala Ala Gly Thr Ala Cys Ala Gly Thr Gly Gly Ala Ala Gly Gly
435 440 445
Thr Gly Gly Ala Thr Ala Ala Cys Gly Cys Cys Cys Thr Cys Cys Ala
450 455 460
Ala Thr Cys Gly Gly Gly Thr Ala Ala Cys Thr Cys Cys Cys Ala Gly
465 470 475 480
Gly Ala Gly Ala Gly Thr Gly Thr Cys Ala Cys Ala Gly Ala Gly Cys
485 490 495
Ala Gly Gly Ala Cys Ala Gly Cys Ala Ala Gly Gly Ala Cys Ala Gly
500 505 510
Cys Ala Cys Cys Thr Ala Cys Ala Gly Cys Cys Thr Cys Ala Gly Cys
515 520 525
Ala Gly Cys Ala Cys Cys Cys Thr Gly Ala Cys Gly Cys Thr Gly Ala
530 535 540
Gly Cys Ala Ala Ala Gly Cys Ala Gly Ala Cys Thr Ala Cys Gly Ala
545 550 555 560
Gly Ala Ala Ala Cys Ala Cys Ala Ala Ala Gly Thr Cys Thr Ala Cys
565 570 575
Gly Cys Cys Thr Gly Cys Gly Ala Ala Gly Thr Cys Ala Cys Cys Cys
580 585 590
Ala Thr Cys Ala Gly Gly Gly Cys Cys Thr Gly Ala Gly Cys Thr Cys
595 600 605
Gly Cys Cys Cys Gly Thr Cys Ala Cys Ala Ala Ala Gly Ala Gly Cys
610 615 620
Thr Thr Cys Ala Ala Cys Ala Gly Gly Gly Gly Ala Gly Ala Gly Thr
625 630 635 640
Gly Thr
<210> 357
<211> 141
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 28F3 (VH) (SEQ ID NO: 13) 带有信号肽
<400> 357
Met Arg Ala Trp Ile Phe Phe Leu Leu Cys Leu Ala Gly Arg Ala Leu
1 5 10 15
Ala Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly
20 25 30
Arg Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser
35 40 45
Tyr Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp
50 55 60
Val Ala Val Ile Trp Tyr Glu Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser
65 70 75 80
Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu
85 90 95
Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr
100 105 110
Cys Ala Arg Gly Gly Ser Met Val Arg Gly Asp Tyr Tyr Tyr Gly Met
115 120 125
Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
130 135 140
<210> 358
<211> 124
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 28F3 (VL) (SEQ ID NO: 14) 带有信号肽
<400> 358
Met Arg Ala Trp Ile Phe Phe Leu Leu Cys Leu Ala Gly Arg Ala Leu
1 5 10 15
Ala Ala Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val
20 25 30
Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser
35 40 45
Ala Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu
50 55 60
Ile Tyr Asp Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser
65 70 75 80
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln
85 90 95
Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe Asn Ser Tyr Pro
100 105 110
Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
115 120
<210> 359
<211> 423
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 28F3 (VH) 带有信号肽；核苷酸序列SEQ
ID NO: 147 带有信号肽编码序列
<400> 359
atgagggctt ggatcttctt tctgctctgc ctggccggga gagcgctcgc acaggtgcag 60
ctggtggagt ctgggggagg cgtggtccag cctgggaggt ccctgagact ctcctgtgca 120
gcgtctggat tcaccttcag tagctatggc atgcactggg tccgccaggc tccaggcaag 180
gggctggagt gggtggcagt tatatggtat gaaggaagta ataaatatta tgcagactcc 240
gtgaagggcc gattcaccat ctccagagac aattccaaga acacgctgta tctgcaaatg 300
aacagcctga gagccgagga cacggctgtg tattactgtg cgagaggggg gagtatggtt 360
cggggggact actactacgg tatggacgtc tggggccaag ggaccacggt caccgtctcc 420
tca 423
<210> 360
<211> 372
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 28F3 (VL) 带有信号肽核苷酸序列SEQ
ID NO: 148 带有信号肽编码序列
<400> 360
atgagggctt ggatcttctt tctgctctgc ctggccgggc gcgccttggc cgccatccag 60
ttgacccagt ctccatcctc cctgtctgca tctgtaggag acagagtcac catcacttgc 120
cgggcaagtc agggcattag cagtgcttta gcctggtatc agcagaaacc agggaaagct 180
cctaagctcc tgatctatga tgcctccagt ttggaaagtg gggtcccatc aaggttcagc 240
ggcagtggat ctgggacaga tttcactctc accatcagca gcctgcagcc tgaagatttt 300
gcaacttatt actgtcaaca gtttaatagt tacccgtaca cttttggcca ggggaccaag 360
ctggagatca aa 372
<210> 361
<211> 470
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 28F3.IgG1 (VH + IgG1) (SEQ ID NO: 17)带有信号肽
<400> 361
Met Arg Ala Trp Ile Phe Phe Leu Leu Cys Leu Ala Gly Arg Ala Leu
1 5 10 15
Ala Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly
20 25 30
Arg Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser
35 40 45
Tyr Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp
50 55 60
Val Ala Val Ile Trp Tyr Glu Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser
65 70 75 80
Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu
85 90 95
Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr
100 105 110
Cys Ala Arg Gly Gly Ser Met Val Arg Gly Asp Tyr Tyr Tyr Gly Met
115 120 125
Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr
130 135 140
Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser
145 150 155 160
Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu
165 170 175
Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His
180 185 190
Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser
195 200 205
Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys
210 215 220
Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu
225 230 235 240
Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
245 250 255
Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
260 265 270
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
275 280 285
Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp
290 295 300
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr
305 310 315 320
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
325 330 335
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu
340 345 350
Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
355 360 365
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys
370 375 380
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
385 390 395 400
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
405 410 415
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
420 425 430
Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser
435 440 445
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
450 455 460
Leu Ser Leu Ser Pro Gly
465 470
<210> 362
<211> 470
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 28F3.IgG1.1 (VH + IgG1.1) (SEQ ID NO: 18) 带有信号肽
<400> 362
Met Arg Ala Trp Ile Phe Phe Leu Leu Cys Leu Ala Gly Arg Ala Leu
1 5 10 15
Ala Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly
20 25 30
Arg Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser
35 40 45
Tyr Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp
50 55 60
Val Ala Val Ile Trp Tyr Glu Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser
65 70 75 80
Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu
85 90 95
Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr
100 105 110
Cys Ala Arg Gly Gly Ser Met Val Arg Gly Asp Tyr Tyr Tyr Gly Met
115 120 125
Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr
130 135 140
Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser
145 150 155 160
Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu
165 170 175
Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His
180 185 190
Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser
195 200 205
Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys
210 215 220
Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu
225 230 235 240
Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
245 250 255
Glu Ala Glu Gly Ala Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
260 265 270
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
275 280 285
Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp
290 295 300
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr
305 310 315 320
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
325 330 335
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu
340 345 350
Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
355 360 365
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys
370 375 380
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
385 390 395 400
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
405 410 415
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
420 425 430
Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser
435 440 445
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
450 455 460
Leu Ser Leu Ser Pro Gly
465 470
<210> 363
<211> 1413
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 28F3.IgG1 (VH + IgG1) 带有信号肽；核苷酸序列SEQ ID NO: 151带有信号肽编码序列
<400> 363
atgagggctt ggatcttctt tctgctctgc ctggccggga gagcgctcgc acaggtgcag 60
ctggtggagt ctgggggagg cgtggtccag cctgggaggt ccctgagact ctcctgtgca 120
gcgtctggat tcaccttcag tagctatggc atgcactggg tccgccaggc tccaggcaag 180
gggctggagt gggtggcagt tatatggtat gaaggaagta ataaatatta tgcagactcc 240
gtgaagggcc gattcaccat ctccagagac aattccaaga acacgctgta tctgcaaatg 300
aacagcctga gagccgagga cacggctgtg tattactgtg cgagaggggg gagtatggtt 360
cggggggact actactacgg tatggacgtc tggggccaag ggaccacggt caccgtctcc 420
tcagctagca ccaagggccc atcggtcttc cccctggcac cctcctccaa gagcacctct 480
gggggcacag cggccctggg ctgcctggtc aaggactact tccccgaacc ggtgacggtg 540
tcgtggaact caggcgccct gaccagcggc gtgcacacct tcccggctgt cctacagtcc 600
tcaggactct actccctcag cagcgtggtg accgtgccct ccagcagctt gggcacccag 660
acctacatct gcaacgtgaa tcacaagccc agcaacacca aggtggacaa gagagttgag 720
cccaaatctt gtgacaaaac tcacacatgc ccaccgtgcc cagcacctga actcctgggg 780
ggaccgtcag tcttcctctt ccccccaaaa cccaaggaca ccctcatgat ctcccggacc 840
cctgaggtca catgcgtggt ggtggacgtg agccacgaag accctgaggt caagttcaac 900
tggtacgtgg acggcgtgga ggtgcataat gccaagacaa agccgcggga ggagcagtac 960
aacagcacgt accgtgtggt cagcgtcctc accgtcctgc accaggactg gctgaatggc 1020
aaggagtaca agtgcaaggt ctccaacaaa gccctcccag cccccatcga gaaaaccatc 1080
tccaaagcca aagggcagcc ccgagaacca caggtgtaca ccctgccccc atcccgggag 1140
gagatgacca agaaccaggt cagcctgacc tgcctggtca aaggcttcta tcccagcgac 1200
atcgccgtgg agtgggagag caatgggcag ccggagaaca actacaagac cacgcctccc 1260
gtgctggact ccgacggctc cttcttcctc tatagcaagc tcaccgtgga caagagcagg 1320
tggcagcagg ggaacgtctt ctcatgctcc gtgatgcatg aggctctgca caaccactac 1380
acgcagaaga gcctctccct gtccccgggt tga 1413
<210> 364
<211> 1413
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 28F3.IgG1.1 (VH + IgG1.1) 带有信号肽
核苷酸序列SEQ ID NO: 152带有信号肽编码序列
<400> 364
atgagggctt ggatcttctt tctgctctgc ctggccggga gagcgctcgc acaggtgcag 60
ctggtggagt ctgggggagg cgtggtccag cctgggaggt ccctgagact ctcctgtgca 120
gcgtctggat tcaccttcag tagctatggc atgcactggg tccgccaggc tccaggcaag 180
gggctggagt gggtggcagt tatatggtat gaaggaagta ataaatatta tgcagactcc 240
gtgaagggcc gattcaccat ctccagagac aattccaaga acacgctgta tctgcaaatg 300
aacagcctga gagccgagga cacggctgtg tattactgtg cgagaggggg gagtatggtt 360
cggggggact actactacgg tatggacgtc tggggccaag ggaccacggt caccgtctcc 420
tcagctagca ccaagggccc atcggtcttc cccctggcac cctcctccaa gagcacctct 480
gggggcacag cggccctggg ctgcctggtc aaggactact tccccgaacc ggtgacggtg 540
tcgtggaact caggcgccct gaccagcggc gtgcacacct tcccggctgt cctacagtcc 600
tcaggactct actccctcag cagcgtggtg accgtgccct ccagcagctt gggcacccag 660
acctacatct gcaacgtgaa tcacaagccc agcaacacca aggtggacaa gagagttgag 720
cccaaatctt gtgacaaaac tcacacatgc ccaccgtgcc cagcacctga agccgaaggg 780
gccccgtcag tcttcctctt ccccccaaaa cccaaggaca ccctcatgat ctcccggacc 840
cctgaggtca catgcgtggt ggtggacgtg agccacgaag accctgaggt caagttcaac 900
tggtacgtgg acggcgtgga ggtgcataat gccaagacaa agccgcggga ggagcagtac 960
aacagcacgt accgtgtggt cagcgtcctc accgtcctgc accaggactg gctgaatggc 1020
aaggagtaca agtgcaaggt ctccaacaaa gccctcccaa gcagcatcga gaaaaccatc 1080
tccaaagcca aagggcagcc ccgagaacca caggtgtaca ccctgccccc atcccgggag 1140
gagatgacca agaaccaggt cagcctgacc tgcctggtca aaggcttcta tcccagcgac 1200
atcgccgtgg agtgggagag caatgggcag ccggagaaca actacaagac cacgcctccc 1260
gtgctggact ccgacggctc cttcttcctc tatagcaagc tcaccgtgga caagagcagg 1320
tggcagcagg ggaacgtctt ctcatgctcc gtgatgcatg aggctctgca caaccactac 1380
acgcagaaga gcctctccct gtccccgggt tga 1413
<210> 365
<211> 231
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 28F3.IgG1 (VL+CL) (SEQ ID NO: 19) 带有信号肽
<400> 365
Met Arg Ala Trp Ile Phe Phe Leu Leu Cys Leu Ala Gly Arg Ala Leu
1 5 10 15
Ala Ala Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val
20 25 30
Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser
35 40 45
Ala Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu
50 55 60
Ile Tyr Asp Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser
65 70 75 80
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln
85 90 95
Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe Asn Ser Tyr Pro
100 105 110
Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala
115 120 125
Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser
130 135 140
Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu
145 150 155 160
Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser
165 170 175
Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu
180 185 190
Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val
195 200 205
Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys
210 215 220
Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
225 230
<210> 366
<211> 696
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 28F3.IgG1 (VL+CL) 带有信号肽；核苷酸序列SEQ ID NO: 153 带有信号序列
<400> 366
atgagggctt ggatcttctt tctgctctgc ctggccgggc gcgccttggc cgccatccag 60
ttgacccagt ctccatcctc cctgtctgca tctgtaggag acagagtcac catcacttgc 120
cgggcaagtc agggcattag cagtgcttta gcctggtatc agcagaaacc agggaaagct 180
cctaagctcc tgatctatga tgcctccagt ttggaaagtg gggtcccatc aaggttcagc 240
ggcagtggat ctgggacaga tttcactctc accatcagca gcctgcagcc tgaagatttt 300
gcaacttatt actgtcaaca gtttaatagt tacccgtaca cttttggcca ggggaccaag 360
ctggagatca aacgtacggt ggctgcacca tctgtcttca tcttcccgcc atctgatgag 420
cagttgaaat ctggaactgc ctctgttgtg tgcctgctga ataacttcta tcccagagag 480
gccaaagtac agtggaaggt ggataacgcc ctccaatcgg gtaactccca ggagagtgtc 540
acagagcagg acagcaagga cagcacctac agcctcagca gcaccctgac gctgagcaaa 600
gcagactacg agaaacacaa agtctacgcc tgcgaagtca cccatcaggg cctgagctcg 660
cccgtcacaa agagcttcaa caggggagag tgttag 696
<210> 367
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的：信号肽
<400> 367
Met Arg Ala Trp Ile Phe Phe Leu Leu Cys Leu Ala Gly Arg Ala Leu
1 5 10 15
Ala
<210> 368
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的：信号肽核苷酸序列
<400> 368
atgagggctt ggatcttctt tctgctctgc ctggccggga gagcgctcgc a 51
<210> 369
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的：信号肽核苷酸序列
<400> 369
atgagggctt ggatcttctt tctgctctgc ctggccgggc gcgccttggc c 51
<210> 370
<211> 31
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(31)
<223> 人GITR fragment
<400> 370
Gln Arg Pro Thr Gly Gly Pro Gly Cys Gly Pro Gly Arg Leu Leu Leu
1 5 10 15
Gly Thr Gly Thr Asp Ala Arg Cys Cys Arg Val His Thr Thr Arg
20 25 30
<210> 371
<211> 215
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 9G7 L1 (全长野生型轻链 1)
<400> 371
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu
65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Ser Ser Pro
85 90 95
Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala
100 105 110
Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser
115 120 125
Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu
130 135 140
Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser
145 150 155 160
Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu
165 170 175
Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val
180 185 190
Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys
195 200 205
Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 372
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 简并VH CDR1
<220>
<221> misc_feature
<222> (4)..(4)
<223> Xaa 可为任何天然氨基酸
<400> 372
Ser Tyr Gly Xaa His
1 5
<210> 373
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 简并VH CDR2
<220>
<221> misc_feature
<222> (5)..(5)
<223> Xaa 可为任何天然氨基酸
<220>
<221> misc_feature
<222> (10)..(10)
<223> Xaa 可为任何天然氨基酸
<400> 373
Val Ile Trp Tyr Xaa Gly Ser Asn Lys Xaa Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 374
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 简并VH CDR2
<220>
<221> misc_feature
<222> (5)..(5)
<223> Xaa 可为任何天然氨基酸
<220>
<221> misc_feature
<222> (10)..(10)
<223> Xaa 可为任何天然氨基酸
<220>
<221> misc_feature
<222> (12)..(12)
<223> Xaa 可为任何天然氨基酸
<400> 374
Val Ile Trp Tyr Xaa Gly Ser Asn Lys Xaa Tyr Xaa Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 375
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 简并VH CDR3
<220>
<221> misc_feature
<222> (4)..(4)
<223> Xaa 可为任何天然氨基酸
<400> 375
Gly Gly Ser Xaa Val Arg Gly Asp Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp Val
1 5 10 15
<210> 376
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 简并VH CDR3
<220>
<221> misc_feature
<222> (4)..(4)
<223> Xaa 可为任何天然氨基酸
<220>
<221> misc_feature
<222> (8)..(8)
<223> Xaa 可为任何天然氨基酸
<400> 376
Gly Gly Ser Xaa Val Arg Gly Xaa Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp Val
1 5 10 15
<210> 377
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 简并VH CDR3
<220>
<221> misc_feature
<222> (3)..(8)
<223> Xaa 可为任何天然氨基酸
<220>
<221> misc_feature
<222> (9)..(9)
<223> Xaa 可为任何天然氨基酸和may或may not
be present
<220>
<221> misc_feature
<222> (16)..(16)
<223> Xaa 可为任何天然氨基酸
<400> 377
Gly Gly Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Met Asp Val Trp Tyr Tyr Xaa
1 5 10 15
Met Asp Val Trp
20
<210> 378
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 简并VL CDR1
<220>
<221> misc_feature
<222> (9)..(9)
<223> Xaa 可为任何天然氨基酸
<400> 378
Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Xaa Leu Ala
1 5 10
<210> 379
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 简并VL CDR1
<220>
<221> misc_feature
<222> (6)..(6)
<223> Xaa 可为任何天然氨基酸
<220>
<221> misc_feature
<222> (7)..(7)
<223> Xaa 可为任何天然氨基酸和may或may not
be present
<220>
<221> misc_feature
<222> (8)..(8)
<223> Xaa 可为任何天然氨基酸
<220>
<221> misc_feature
<222> (10)..(10)
<223> Xaa 可为任何天然氨基酸
<400> 379
Arg Ala Ser Gln Gly Xaa Xaa Xaa Ser Xaa Leu Ala
1 5 10
<210> 380
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 简并VL CDR2
<220>
<221> misc_feature
<222> (6)..(6)
<223> Xaa 可为任何天然氨基酸
<400> 380
Asp Ala Ser Ser Leu Xaa Ser
1 5
<210> 381
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 简并VL CDR3
<220>
<221> misc_feature
<222> (3)..(3)
<223> Xaa 可为任何天然氨基酸
<400> 381
Gln Gln Xaa Asn Ser Tyr Pro Tyr Thr
1 5
<210> 382
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 简并VL CDR3
<220>
<221> misc_feature
<222> (3)..(4)
<223> Xaa 可为任何天然氨基酸
<220>
<221> misc_feature
<222> (6)..(6)
<223> Xaa 可为任何天然氨基酸
<220>
<221> misc_feature
<222> (8)..(8)
<223> Xaa 可为任何天然氨基酸
<400> 382
Gln Gln Xaa Xaa Ser Xaa Pro Xaa Thr
1 5
<210> 383
<211> 123
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 重链可变区(VH)氨基酸序列 抗-PD-L1单抗
(12A4;WO 2007/005874和美国专利7,943,743号中的12A4)
<400> 383
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Thr Ser Gly Asp Thr Phe Ser Thr Tyr
20 25 30
Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Gly Ile Ile Pro Ile Phe Gly Lys Ala His Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Lys Phe His Phe Val Ser Gly Ser Pro Phe Gly Met Asp Val
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 384
<211> 366
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的：重链可变区(VH)核苷酸序列 抗-PD-L1单抗
(12A4;WO 2007/005874和美国专利7,943,743号中的12A4))
<400> 384
caggtccagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctgggtcctc ggtgaaggtc 60
tcctgcaaga cttctggaga caccttcagc acctatgcta tcagctgggt gcgacaggcc 120
cctggacaag ggcttgagtg gatgggaggg atcatcccta tatttggtaa agcacactac 180
gcacagaagt tccagggcag agtcacgatt accgcggacg aatccacgag cacagcctac 240
atggagctga gcagcctgag atctgaggac acggccgtgt atttttgtgc gagaaagttt 300
cactttgttt cggggagccc cttcggtatg gacgtctggg gccaagggac cacggtcacc 360
gtctcc 366
<210> 385
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的：轻链可变区(VH)氨基酸序列 抗-PD-L1单抗
(12A4;WO 2007/005874和美国专利7,943,743号中的12A4)
<400> 385
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Asn Trp Pro Thr
85 90 95
Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 386
<211> 318
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的：轻链可变区(VH)核苷酸序列抗-PD-L1单抗
(12A4;WO 2007/005874和美国专利7,943,743号中的12A4))
<400> 386
gaaattgtgt tgacacagtc tccagccacc ctgtctttgt ctccagggga aagagccacc 60
ctctcctgca gggccagtca gagtgttagc agctacttag cctggtacca acagaaacct 120
ggccaggctc ccaggctcct catctatgat gcatccaaca gggccactgg catcccagcc 180
aggttcagtg gcagtgggtc tgggacagac ttcactctca ccatcagcag cctagagcct 240
gaagattttg cagtttatta ctgtcagcag cgtagcaact ggccgacgtt cggccaaggg 300
accaaggtgg aaatcaaa 318
<210> 387
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 重链CDR1氨基酸序列 抗PD-L1单抗
(12A4;WO 2007/005874和美国专利7,943,743号中的12A4))
<400> 387
Thr Tyr Ala Ile Ser
1 5
<210> 388
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 重链CDR2氨基酸序列 抗PD-L1单抗
(12A4;WO 2007/005874和美国专利7,943,743号中的12A4))
<400> 388
Gly Ile Ile Pro Ile Phe Gly Lys Ala His Tyr Ala Gln Lys Phe Gln
1 5 10 15
<210> 389
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 重链CDR3氨基酸序列抗PD-L1单抗
(12A4;WO 2007/005874和美国专利7,943,743号中的12A4))
<400> 389
Lys Phe His Phe Val Ser Gly Ser Pro Phe Gly Met Asp Val
1 5 10
<210> 390
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 轻链CDR1氨基酸序列抗PD-L1单抗
(12A4;WO 2007/005874和美国专利7,943,743号中的12A4))
<400> 390
Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr Leu Ala
1 5 10
<210> 391
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 轻链CDR2氨基酸序列抗PD-L1单抗
(12A4;WO 2007/005874和美国专利7,943,743号中的12A4))
<400> 391
Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr
1 5
<210> 392
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 轻链CDR3氨基酸序列抗PD-L1单抗
(12A4;WO 2007/005874和美国专利7,943,743号中的12A4))
<400> 392
Gln Gln Arg Ser Asn Trp Pro Thr
1 5
<210> 393
<211> 440
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 重链Amino Acid 序列Anti-PD-1单抗(5C4 in
WO 2006/121168)
<400> 393
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Asp Cys Lys Ala Ser Gly Ile Thr Phe Ser Asn Ser
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Val Ile Trp Tyr Asp Gly Ser Lys Arg Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Phe
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Thr Asn Asp Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser
100 105 110
Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser
115 120 125
Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp
130 135 140
Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr
145 150 155 160
Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr
165 170 175
Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys
180 185 190
Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp
195 200 205
Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala
210 215 220
Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro
225 230 235 240
Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val
245 250 255
Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val
260 265 270
Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln
275 280 285
Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln
290 295 300
Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly
305 310 315 320
Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro
325 330 335
Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr
340 345 350
Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser
355 360 365
Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr
370 375 380
Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr
385 390 395 400
Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe
405 410 415
Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys
420 425 430
Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys
435 440
<210> 394
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 轻链氨基酸序列 抗-PD-1单抗
(WO 2006/121168中的5C4)
<400> 394
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Ser Asn Trp Pro Arg
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 395
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 重链可变区(VH)氨基酸序列
　　　抗-PD-1 单抗(WO 2006/121168中的5C4)
来自WO 2006/121168的SEQ ID NO:4)
<400> 395
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Asp Cys Lys Ala Ser Gly Ile Thr Phe Ser Asn Ser
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Val Ile Trp Tyr Asp Gly Ser Lys Arg Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Phe
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Thr Asn Asp Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser
100 105 110
Ser
<210> 396
<211> 339
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 重链可变区(VH) 核苷酸序列抗-PD-1单抗(WO 2006/121168中的5C4)(来自WO 2006/121168的SEQ ID NO:60)
<400> 396
caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc 60
gactgtaaag cgtctggaat caccttcagt aactctggca tgcactgggt ccgccaggct 120
ccaggcaagg ggctggagtg ggtggcagtt atttggtatg atggaagtaa aagatactat 180
gcagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgttt 240
ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggctgtgt attactgtgc gacaaacgac 300
gactactggg gccagggaac cctggtcacc gtctcctca 339
<210> 397
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 轻链可变区(VL) 氨基酸
序列抗-PD-1单抗(WO 2006/121168中的5C4) (来自WO 2006/121168的SEQ ID NO:11)
<400> 397
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Ser Asn Trp Pro Arg
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 398
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 轻链可变区(VL)核苷酸序列抗-PD-1单抗(WO 2006/121168中的5C4)(来自WO 2006/121168的SEQ ID NO:67)
<400> 398
gaaattgtgt tgacacagtc tccagccacc ctgtctttgt ctccagggga aagagccacc 60
ctctcctgca gggccagtca gagtgttagt agttacttag cctggtacca acagaaacct 120
ggccaggctc ccaggctcct catctatgat gcatccaaca gggccactgg catcccagcc 180
aggttcagtg gcagtgggtc tgggacagac ttcactctca ccatcagcag cctagagcct 240
gaagattttg cagtttatta ctgtcagcag agtagcaact ggcctcggac gttcggccaa 300
gggaccaagg tggaaatcaa a 321
<210> 399
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 重链CDR1氨基酸序列 抗-PD-1单抗
(WO 2006/121168中的5C4) (来自WO 2006/121168的SEQ ID NO:18)
<400> 399
Asn Ser Gly Met His
1 5
<210> 400
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 重链CDR2氨基酸序列抗-PD-1单抗(WO 2006/121168中的5C4) (来自WO 2006/121168的SEQ ID NO:25)
<400> 400
Val Ile Trp Tyr Asp Gly Ser Lys Arg Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 401
<211> 4
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 重链CDR3氨基酸序列抗-PD-1单抗(WO 2006/121168中的5C4) (来自WO 2006/121168的SEQ ID NO:32)
<400> 401
Asn Asp Asp Tyr
1
<210> 402
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 轻链CDR1氨基酸序列抗-PD-1单抗(WO 2006/121168中的5C4) (来自WO 2006/121168的SEQ ID NO:39 WO 2006/121168)
<400> 402
Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr Leu Ala
1 5 10
<210> 403
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 轻链CDR2氨基酸序列抗-PD-1单抗(WO 2006/121168中的5C4) (来自WO 2006/121168的SEQ ID NO:46)
<400> 403
Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr
1 5
<210> 404
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的： 轻链CDR3氨基酸序列抗-PD-1单抗(WO 2006/121168中的5C4) (来自WO 2006/121168的SEQ ID NO:53)
<400> 404
Gln Gln Ser Ser Asn Trp Pro Arg Thr
1 5
<210> 405
<211> 2106
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(2106)
<223> 完整PD-1 序列 (GenBank Accession No.: U64863)
<400> 405
agtttccctt ccgctcacct ccgcctgagc agtggagaag gcggcactct ggtggggctg 60
ctccaggcat gcagatccca caggcgccct ggccagtcgt ctgggcggtg ctacaactgg 120
gctggcggcc aggatggttc ttagactccc cagacaggcc ctggaacccc cccaccttct 180
tcccagccct gctcgtggtg accgaagggg acaacgccac cttcacctgc agcttctcca 240
acacatcgga gagcttcgtg ctaaactggt accgcatgag ccccagcaac cagacggaca 300
agctggccgc cttccccgag gaccgcagcc agcccggcca ggactgccgc ttccgtgtca 360
cacaactgcc caacgggcgt gacttccaca tgagcgtggt cagggcccgg cgcaatgaca 420
gcggcaccta cctctgtggg gccatctccc tggcccccaa ggcgcagatc aaagagagcc 480
tgcgggcaga gctcagggtg acagagagaa gggcagaagt gcccacagcc caccccagcc 540
cctcacccag gccagccggc cagttccaaa ccctggtggt tggtgtcgtg ggcggcctgc 600
tgggcagcct ggtgctgcta gtctgggtcc tggccgtcat ctgctcccgg gccgcacgag 660
ggacaatagg agccaggcgc accggccagc ccctgaagga ggacccctca gccgtgcctg 720
tgttctctgt ggactatggg gagctggatt tccagtggcg agagaagacc ccggagcccc 780
ccgtgccctg tgtccctgag cagacggagt atgccaccat tgtctttcct agcggaatgg 840
gcacctcatc ccccgcccgc aggggctcag ccgacggccc tcggagtgcc cagccactga 900
ggcctgagga tggacactgc tcttggcccc tctgaccggc ttccttggcc accagtgttc 960
tgcagaccct ccaccatgag cccgggtcag cgcatttcct caggagaagc aggcagggtg 1020
caggccattg caggccgtcc aggggctgag ctgcctgggg gcgaccgggg ctccagcctg 1080
cacctgcacc aggcacagcc ccaccacagg actcatgtct caatgcccac agtgagccca 1140
ggcagcaggt gtcaccgtcc cctacaggga gggccagatg cagtcactgc ttcaggtcct 1200
gccagcacag agctgcctgc gtccagctcc ctgaatctct gctgctgctg ctgctgctgc 1260
tgctgctgcc tgcggcccgg ggctgaaggc gccgtggccc tgcctgacgc cccggagcct 1320
cctgcctgaa cttgggggct ggttggagat ggccttggag cagccaaggt gcccctggca 1380
gtggcatccc gaaacgccct ggacgcaggg cccaagactg ggcacaggag tgggaggtac 1440
atggggctgg ggactcccca ggagttatct gctccctgca ggcctagaga agtttcaggg 1500
aaggtcagaa gagctcctgg ctgtggtggg cagggcagga aacccctccc acctttacac 1560
atgcccaggc agcacctcag gccctttgtg gggcagggaa gctgaggcag taagcgggca 1620
ggcagagctg gaggcctttc aggccagcca gcactctggc ctcctgccgc cgcattccac 1680
cccagcccct cacaccactc gggagaggga catcctacgg tcccaaggtc aggagggcag 1740
ggctggggtt gactcaggcc cctcccagct gtggccacct gggtgttggg agggcagaag 1800
tgcaggcacc tagggccccc catgtgccca ccctgggagc tctccttgga acccattcct 1860
gaaattattt aaaggggttg gccgggctcc caccagggcc tgggtgggaa ggtacaggcg 1920
ttcccccggg gcctagtacc cccgcgtggc ctatccactc ctcacatcca cacactgcac 1980
ccccactcct ggggcagggc caccagcatc caggcggcca gcaggcacct gagtggctgg 2040
gacaagggat cccccttccc tgtggttcta ttatattata attataatta aatatgagag 2100
catgct 2106
<210> 406
<211> 290
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(290)
<223> 人PD-L1氨基酸序列- 同种型a前体
<400> 406
Met Arg Ile Phe Ala Val Phe Ile Phe Met Thr Tyr Trp His Leu Leu
1 5 10 15
Asn Ala Phe Thr Val Thr Val Pro Lys Asp Leu Tyr Val Val Glu Tyr
20 25 30
Gly Ser Asn Met Thr Ile Glu Cys Lys Phe Pro Val Glu Lys Gln Leu
35 40 45
Asp Leu Ala Ala Leu Ile Val Tyr Trp Glu Met Glu Asp Lys Asn Ile
50 55 60
Ile Gln Phe Val His Gly Glu Glu Asp Leu Lys Val Gln His Ser Ser
65 70 75 80
Tyr Arg Gln Arg Ala Arg Leu Leu Lys Asp Gln Leu Ser Leu Gly Asn
85 90 95
Ala Ala Leu Gln Ile Thr Asp Val Lys Leu Gln Asp Ala Gly Val Tyr
100 105 110
Arg Cys Met Ile Ser Tyr Gly Gly Ala Asp Tyr Lys Arg Ile Thr Val
115 120 125
Lys Val Asn Ala Pro Tyr Asn Lys Ile Asn Gln Arg Ile Leu Val Val
130 135 140
Asp Pro Val Thr Ser Glu His Glu Leu Thr Cys Gln Ala Glu Gly Tyr
145 150 155 160
Pro Lys Ala Glu Val Ile Trp Thr Ser Ser Asp His Gln Val Leu Ser
165 170 175
Gly Lys Thr Thr Thr Thr Asn Ser Lys Arg Glu Glu Lys Leu Phe Asn
180 185 190
Val Thr Ser Thr Leu Arg Ile Asn Thr Thr Thr Asn Glu Ile Phe Tyr
195 200 205
Cys Thr Phe Arg Arg Leu Asp Pro Glu Glu Asn His Thr Ala Glu Leu
210 215 220
Val Ile Pro Glu Leu Pro Leu Ala His Pro Pro Asn Glu Arg Thr His
225 230 235 240
Leu Val Ile Leu Gly Ala Ile Leu Leu Cys Leu Gly Val Ala Leu Thr
245 250 255
Phe Ile Phe Arg Leu Arg Lys Gly Arg Met Met Asp Val Lys Lys Cys
260 265 270
Gly Ile Gln Asp Thr Asn Ser Lys Lys Gln Ser Asp Thr His Leu Glu
275 280 285
Glu Thr
290
<210> 407
<211> 176
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(176)
<223> 人PD-L1氨基酸序列- 同种型b前体
<400> 407
Met Arg Ile Phe Ala Val Phe Ile Phe Met Thr Tyr Trp His Leu Leu
1 5 10 15
Asn Ala Pro Tyr Asn Lys Ile Asn Gln Arg Ile Leu Val Val Asp Pro
20 25 30
Val Thr Ser Glu His Glu Leu Thr Cys Gln Ala Glu Gly Tyr Pro Lys
35 40 45
Ala Glu Val Ile Trp Thr Ser Ser Asp His Gln Val Leu Ser Gly Lys
50 55 60
Thr Thr Thr Thr Asn Ser Lys Arg Glu Glu Lys Leu Phe Asn Val Thr
65 70 75 80
Ser Thr Leu Arg Ile Asn Thr Thr Thr Asn Glu Ile Phe Tyr Cys Thr
85 90 95
Phe Arg Arg Leu Asp Pro Glu Glu Asn His Thr Ala Glu Leu Val Ile
100 105 110
Pro Glu Leu Pro Leu Ala His Pro Pro Asn Glu Arg Thr His Leu Val
115 120 125
Ile Leu Gly Ala Ile Leu Leu Cys Leu Gly Val Ala Leu Thr Phe Ile
130 135 140
Phe Arg Leu Arg Lys Gly Arg Met Met Asp Val Lys Lys Cys Gly Ile
145 150 155 160
Gln Asp Thr Asn Ser Lys Lys Gln Ser Asp Thr His Leu Glu Glu Thr
165 170 175

Claims (98)

1.一种治疗患有晚期实体癌的受试者的方法，所述方法包括对患有晚期实体癌的受试者施用包括(1)GITR激动剂和(2)PD-1或PD-L1拮抗剂的联合方案，其中GITR激动剂和PD-1或PD-L1拮抗剂在同一天施用并且持续至少一个周期，其中每个周期包括联合方案的4次施用，其中联合方案增加受试者外周血中以下细胞群中的一个多个的水平：(a)增殖性(Ki67+)CD8细胞；(b)增殖性(Ki67+)和/或活化的(HLA-DR+)记忆CD4+细胞；(c)增殖性(Ki67+)和/或活化的(HLA-DR+)记忆CD8细胞和/或(d)增殖性(Ki67+)NK细胞。
2.权利要求1的方法，其中增殖性CD8细胞为CD45+CD3+CD4-CD8+Ki67+；增殖性CD4记忆细胞为CD45+CD3+CD4+CD8-CD45RA-Ki67+细胞(CD197是CCR7)；活化的CD4记忆细胞为CD45+CD3+CD4+CD8-CD45RA-HLA-DR+的；增殖性CD8记忆细胞是CD45+CD3+CD4-CD8+CD45RA-Ki67+细胞；活化的CD8记忆细胞为CD45+CD3+CD4-CD8+CD45RA-HLA-DR+；增殖性NK细胞为CD45+CD3-CD56+Ki67+。
3.权利要求1或2的方法，其中所述联合方案增加受试者外周血中以下一个或多个细胞群的水平：增殖性(Ki67+)CD8细胞；增殖性CD4效应记忆T细胞；活化的CD4效应记忆T细胞；增殖性CD4中央记忆T细胞；活化的CD4中央记忆T细胞；增殖性CD8效应记忆T细胞；活化的CD8效应记忆T细胞；增殖性CD8中央记忆T细胞；和/或活化的CD8中央记忆T细胞,其中增殖性(Ki67+)CD8细胞为CD45+CD3+CD4-CD8+Ki67+；增殖性CD4效应记忆细胞是CD45+CD3+CD4+CD8-CD197-CD45RA-Ki67+细胞(CD197是CCR7)；活化的CD4效应记忆细胞为CD45+CD3+CD4+CD8-CD197-CD45RA-HLA-DR+；增殖性CD4中央记忆细胞是CD45+CD3+CD4+CD8-CD197+CD45RA-Ki67+的；并且活化的CD4中央记忆细胞是CD45+CD3+CD4+CD8-CD197+CD45RA-HLA-DR+的；增殖性CD8效应记忆细胞是CD45+CD3+CD4-CD8+CD197-CD45RA-Ki67+细胞；活化的CD8效应记忆细胞为CD45+CD3+CD4-CD8+CD197-CD45RA-HLA-DR+；增殖性CD8中央记忆细胞为CD45+CD3+CD4-CD8+CD197+CD45RA-Ki67+；活化的CD8中央记忆细胞为CD45+CD3+CD4-CD8+CD197+CD45RA-HLA-DR+。
4.权利要求3的方法，其中所述联合方案增加受试者外周血中以下细胞群的水平：增殖性CD8效应记忆T细胞；活化的CD8效应记忆T细胞；增殖性CD8中央记忆T细胞；和活化的CD8中央记忆T细胞。
5.权利要求3的方法，其中所述联合方案增加受试者外周血中以下细胞群的水平：增殖性CD4效应记忆T细胞；活化的CD4效应记忆T细胞；增殖性CD4中央记忆T细胞；和活化的CD4中央记忆T细胞。
6.权利要求5的方法，其中所述联合方案增加受试者外周血中以下细胞群的水平：增殖性CD8效应记忆T细胞；活化的CD8效应记忆T细胞；增殖性CD8中央记忆T细胞；和活化的CD8中央记忆T细胞。
7.权利要求4-6中任一项的方法，其中所述联合方案增加受试者外周血中以下细胞群的水平：增殖性CD8细胞。
8.权利要求1至7中任一项的方法，其中，被增加的细胞群的水平相对于该细胞群的基础水平(即，在即将施用联合方案之前(例如，在施用之前1、2、3、4或5小时之内)的水平)增加到至少2倍或3倍。
9.权利要求1-8中任一项的方法，其中细胞群的增加在施用联合方案的第一个剂量之后3-10天发生。
10.权利要求9的方法，其中细胞群的增加在施用联合方案的一个剂量例如第一个剂量之后7-9天发生。
11.权利要求10的方法，其中细胞群的增加在施用联合方案的一个剂量例如第一个剂量之后8天发生。
12.权利要求1-11中任一项的方法，其中在受试者外周血中以下一种或多种细胞群处于或接近于即将施用联合方案的第一个剂量之前的水平之日施用联合方案的第二个剂量：(a)增殖性(Ki67+)CD8细胞；(b)增殖性(Ki67+)和/或活化的(HLA-DR+)记忆CD4和/或CD8细胞；和(c)增殖性(Ki67+)NK细胞。
13.权利要求12的方法，其中在受试者外周血中以下一种或多种细胞群处于或接近于即将施用联合方案的第一个(或先前的)剂量之前的水平之日施用联合方案的第二个(或后续的)剂量：增殖性CD8效应记忆T细胞；活化的CD8效应记忆T细胞；增殖性CD8中央记忆T细胞；和活化的CD8中央记忆T细胞。
14.权利要求12或13的方法，其中在受试者外周血中以下一种或多种细胞群处于或接近于即将施用联合方案的第一个(或先前的)剂量之前的水平之日施用联合方案的第二个(或后续的)剂量：增殖性CD4效应记忆T细胞；活化的CD4效应记忆T细胞；增殖性CD4中央记忆T细胞；和活化的CD4中央记忆T细胞。
15.权利要求14的方法，其中在受试者外周血中以下一种或多种细胞群处于或接近于即将施用联合方案的第一个(或先前的)剂量之前的水平之日施用联合方案的第二个(或后续的)剂量：增殖性CD8效应记忆T细胞；活化的CD8效应记忆T细胞；增殖性CD8中央记忆T细胞；和活化的CD8中央记忆T细胞。
16.权利要求13-15中任一项的方法，其中在受试者外周血中以下一种或多种细胞群处于或接近于即将施用联合方案的第一个(或先前的)剂量之前的水平之日施用联合方案的第二个(或后续的)剂量：增殖性CD8细胞。
17.权利要求12-16中任一项的方法，其中在被增加的一个或多个细胞群为其基础水平(即，即将施用联合方案之前(例如，施用之前1、2、3、4或5小时之内)的水平)的2倍以内之日施用联合方案的第二个(或后续的)剂量。
18.权利要求12-17中任一项的方法，其中以与第一个剂量和第二个剂量之间(或权利要求12-17的两个连续剂量之间)的时间间隔相同的时间间隔对受试者施用联合方案的后续剂量。
19.权利要求1-18任一项的方法，其中所述治疗包括
a.在施用联合方案的一个剂量，例如第一个剂量，之前和之后3-10天内测量受试者循环血液中的(a)增殖性CD8细胞；(b)增殖性(Ki67+)和/或活化的(HLA-DR+)记忆T细胞和/或(c)增殖性(Ki67+)NK细胞的水平；和
b.当(a)增殖性CD8细胞；(b)增殖性(Ki67+)和/或活化的(HLA-DR+)记忆T细胞和/或(c)增殖性(Ki67+)NK细胞的水平分别接近于其基线水平(例如在2倍之内)时，施用联合方案的第二个(或后续的)剂量。
20.权利要求19的方法，其中所述治疗包括
a.在施用联合方案的一个剂量，例如第一剂量，之前和之后3-10天内测量受试者循环血液中的增殖性CD8细胞；增殖性CD4效应记忆T细胞；活化的CD4效应记忆T细胞；增殖性CD4中央记忆T细胞；活化的CD4中央记忆T细胞；增殖性CD8效应记忆T细胞；活化的CD8效应记忆T细胞；增殖性CD8中央记忆T细胞；和/或活化的CD8中央记忆T细胞的水平；和
b.当增殖性CD8细胞；增殖性CD4效应记忆T细胞；活化的CD4效应记忆T细胞；增殖性CD4中央记忆T细胞；活化的CD4中央记忆T细胞；增殖性CD8效应记忆T细胞；活化的CD8效应记忆T细胞；增殖性CD8中央记忆T细胞；和/或活化的CD8中央记忆T细胞的水平分别接近于其基线水平(例如在2倍之内)时，施用联合方案的第二个(或后续的)剂量；
其中增殖性(Ki67+)CD8细胞是CD45+CD3+CD4-CD8+Ki67+；增殖性CD4效应记忆细胞为CD45+CD3+CD4+CD8-CD197-CD45RA-Ki67+细胞(CD197是CCR7)；活化的CD4效应记忆细胞为CD45+CD3+CD4+CD8-CD197-CD45RA-HLA-DR+；增殖性CD4中央记忆细胞为CD45+CD3+CD4+CD8-CD197+CD45RA-Ki67+；活化的CD4中央记忆细胞是CD45+CD3+CD4+CD8-CD197+CD45RA-HLA-DR+的；增殖性CD8效应记忆细胞是CD45+CD3+CD4-CD8+CD197-CD45RA-Ki67+细胞；活化的CD8效应记忆细胞为CD45+CD3+CD4-CD8+CD197-CD45RA-HLA-DR+；增殖性CD8中央记忆细胞是CD45+CD3+CD4-CD8+CD197+CD45RA-Ki67+的；并且活化的CD8中央记忆细胞为
CD45+CD3+CD4-CD8+CD197+CD45RA-HLA-DR+。
21.权利要求19或20的方法，其中在重复权利要求19或20的步骤(a)和(b)之后，将联合方案的后续的剂量(第三个、第四个…)施用于受试者。
22.权利要求1-21中任一项的方法，其中每2、3或4周对受试者施用联合方案，持续至少一个周期，其中每个周期包括所述联合方案的4次施用。
23.一种治疗受试者中的晚期实体癌的方法，其包括对患有晚期实体癌的受试者施用包括(1)GITR激动剂和(2)PD-1或PD-L1拮抗剂的联合方案，其中每2、3或4周对受试者施用联合方案，持续至少一个周期，其中每个周期包括所述联合方案的4次施用。
24.权利要求1-23中任一项的方法，其中联合方案包括固定剂量的GITR激动剂。
25.权利要求1-24中任一项的方法，其中联合疗法包括固定剂量的PD-1或PD-L1拮抗剂。
26.权利要求24或25的方法，其中固定剂量的GITR激动剂包含30-800mg的GITR激动剂。
27.权利要求26的方法，其中每2或3周施用一次联合方案。
28.权利要求24-27中任一项的方法，其中联合方案包括在30-800mg范围内的固定剂量的GITR激动剂和30-800mg固定剂量的PD-1或PD-L1拮抗剂，并且每2、3或4周施用联合方案持续至少一个周期，其中每个周期包括GITR激动剂的4次施用和PD-1或PD-L1拮抗剂的4次施用。
29.权利要求24-28中任一项的方法，其中GITR激动剂和PD-1或PD-L1拮抗剂被配制成固定剂量组合。
30.权利要求1-29中任一项的方法，其中GITR激动剂和抗PD-1或抗PD-L1拮抗剂通过输注静脉内施用。
31.权利要求1-30中任一项的方法，其中通过输注静脉内施用GITR激动剂和PD-1或PD-L1拮抗剂，并且在PD1或PD-L1拮抗剂输注结束之后10-120分钟开始输注抗GITR激动剂。
32.权利要求31的方法，其中在PD1或PD-L1拮抗剂输注结束之后30-60分钟开始输注GITR激动剂。
33.权利要求1-32中任一项的方法，其中所述癌症是这样的肿瘤类型，该类型包括表达高水平GITR(例如高于大多数肿瘤类型的水平的GITR)的肿瘤。
34.权利要求33的方法，其中所述癌症包括具有高水平的GITR阳性Treg和/或Teff细胞的肿瘤。
35.权利要求34的方法，其中所述癌症包括具有高水平的GITR阳性Treg细胞的肿瘤。
36.权利要求1-35中任一项的方法，其中所述癌症(或肿瘤)为PD-L1阳性。
37.权利要求36的方法，其中至少5％的肿瘤细胞为PD-L1阳性(例如通过FDA批准的试验，例如用于OPDIVO或KEYTRUDA的试验确定的)。
38.权利要求37的方法，其中至少50％的肿瘤细胞为PD-L1阳性。
39.权利要求1-38中任一项的方法，其中所述癌症是通常对免疫疗法无反应的癌症，例如对抗PD-1或抗PD-L1拮抗剂无反应的癌症。
40.权利要求1-39中任一项的方法，其中所述受试者先前未曾接受肿瘤免疫剂治疗。
41.权利要求40的方法，其中所述受试者在一年内未曾接受肿瘤免疫剂治疗。
42.权利要求1-41中任一项的方法，其中所述受试者在先前的癌症治疗之时或之后发生了进展。
43.权利要求42的方法，其中所述受试者在先前的癌症治疗之时或之后发生进展，所述癌症治疗包括以下一种或多种：化学疗法、BRAF抑制剂、MEK抑制剂、PI3K抑制剂、FGFR抑制剂或VEGF抑制剂。
44.权利要求42的方法，其中所述受试者在先前的免疫疗法之时或之后发生了进展。
45.权利要求44的方法，其中先前的免疫疗法是PD-1或PD-L1拮抗剂疗法。
46.权利要求1-45中任一项的方法，其中所述癌症是肺癌(例如，NSCLC)、SCCHN、宫颈癌(例如，转移性宫颈癌)、黑色素瘤、结肠癌、乳腺癌、膀胱癌、卵巢癌、HCC、鼻咽癌或Vater壶腹腺癌。
47.权利要求1-46中任一项的方法，其中所述方法不引起重大的治疗相关不良事件(TRAE)，例如在临床试验中确定的重大的治疗相关不良事件。
48.权利要求47的方法，其中所述方法不比单独的纳武单抗引起更多的TRAE。
49.权利要求1-48中任一项的方法，其中所述治疗至少产生部分缓解。
50.权利要求1-49中任一项的方法，其中在一个或多个治疗周期之后所述受试者的至少一个肿瘤缩小至少20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％或100％(100％相当于肿瘤消除)。
51.权利要求1-50中任一项的方法，其中GITR激动剂和PD-1或PD-L1拮抗剂在对受试者施用联合方案的第一个剂量之后例如0、2、4、6、8、10、12和/或14天展示出线性PK。
52.权利要求1-51中任一项的方法，其中GITR激动剂和PD-1或PD-L1拮抗剂在对受试者施用联合方案的第一剂量之后例如0、2、4、6、8、10、12和/或14天展示出低免疫原性。
53.权利要求1-52中任一项的方法，其中PD-1或PD-L1拮抗剂是抗PD-1或抗PD-L1拮抗剂抗体。
54.权利要求53的方法，其中PD-1或PD-L1拮抗剂抗体是纳武单抗、派姆单抗、阿特珠单抗、德瓦鲁单抗、阿维鲁单抗、REGN2810、PDR001、AMP-514(MEDI0608)、AMP-224、BGB-A317或以下公开的任一者中所述的PD-1或PD-L1拮抗剂：WO 2009/014708、WO 03/099196、WO2009/114335和WO 2011/161699。
55.权利要求54的方法，其中PD-1或PD-L1拮抗剂抗体是纳武单抗。
56.权利要求53的方法，其中PD-1或PD-L1拮抗剂抗体是包含纳武单抗的VH CDR1、CDR2、CDR3和VL CDR1、CDR2和CDR3或与纳武单抗竞争结合人PD-1的抗体。
57.权利要求53或56的方法，其中PD-1或PD-L1拮抗剂抗体是包含分别与纳武单抗的VH和VL区的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、97％、98％或99％相同的VH和VL区的抗体。
58.权利要求57的方法，其中PD-1或PD-L1拮抗剂抗体是包含纳武单抗的VH和VL区的抗体。
59.权利要求56-58中任一项的方法，其中PD-1或PD-L1拮抗剂抗体包含IgG重链恒定区。
60.权利要求59的方法，其中IgG重链恒定区是IgG1重链恒定区。
61.权利要求59的方法，其中IgG重链恒定区是IgG2或IgG4重链恒定区。
62.权利要求61的方法，其中IgG重链恒定区是包含S228P突变的IgG4恒定区。
63.权利要求56-62中任一项的方法，其中所述重链是全长重链，并且所述轻链是全长轻链。
64.权利要求56-63中任一项的方法，其中PD-1或PD-L1拮抗剂抗体是包含重链和轻链的抗体，所述重链包含与纳武单抗的重链的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、97％、98％或99％相同的氨基酸序列，并且所述轻链包含与纳武单抗的轻链的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、97％、98％或99％相同的氨基酸序列。
65.权利要求64的方法，其中PD-1或PD-L1拮抗剂抗体包含纳武单抗的重链和轻链。
66.权利要求1-65中任一项的方法，其中GITR激动剂是GITR激动性抗体(包括多价抗体)。
67.权利要求1-41中任一项的方法，其中GITR激动剂是GITRL或其融合蛋白或多价形式。
68.权利要求66或67的方法，其中GITR激动剂是TRX518；MK-4166；MK-1248；Medi 1873；AMG 228；LKZ-145；GWN-323；INCAGN01876；iNBRX-110(FPA-154)；CK-302；OMP-336B11；Regeneron/Sanofi抗GITR抗体；HERA-GITR-配体；或以下任一出版物中所述的GITR激动剂：WO06/105021；WO2011/028683；JP2008278814；US20140072566；US20140072565；US20140065152；WO2015/031667；WO/2015/116178；WO2015/184099；WO/2016/054638；WO2016/057841；WO2016/057846；CN105669867；WO/2016/126781；WO/2017/015623；WO/2017/025610；WO/2017/068185；和WO/2017/068186。
69.权利要求66的方法，其中抗GITR激动性抗体包含分别含有在SEQ ID NO:20、21和22中列出的氨基酸序列的VH CDR1、CDR2、CDR3，以及含有在SEQ ID NO:23、24和25中列出的氨基酸序列的VL CDR1、CDR2、CDR3，并且其与人GITR例如细胞上的人GITR结合，或与28F3.IgG1竞争结合人GITR。
70.权利要求66或69的方法，其中抗GITR激动性抗体包含可变重链结构域和可变轻链结构域，所述可变重链结构域包含与在SEQ ID NO:13中列出的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、97％、98％或99％相同的氨基酸序列，并且所述可变轻链结构域包含与在SEQ ID NO:14中列出的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、97％、98％或99％相同的氨基酸序列。
71.权利要求70的方法，其中抗GITR激动性抗体含有包含在SEQ ID NO:13中列出的氨基酸序列的可变重链结构域和包含在SEQ ID NO:14中列出的氨基酸序列的可变轻链结构域。
72.权利要求66和69-71中任一项的方法，其中抗GITR激动性抗体包含IgG重链恒定区。
73.权利要求72的方法，其中IgG重链恒定区是IgG1重链恒定区。
74.权利要求73的方法，其中IgG1重链恒定区是野生型IgG1重链恒定区。
75.权利要求72的方法，其中IgG重链恒定区是IgG2或IgG4重链恒定区。
76.权利要求66和69-75中任一项的方法，其中所述重链是全长重链，并且所述轻链是全长轻链。
77.权利要求66和69中任一项所述的方法，其中抗GITR激动性抗体包含重链和轻链，所述重链包含与在SEQ ID NO:17中列出的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、97％、98％或99％相同的氨基酸序列，并且所述轻链包含与在SEQ ID NO:19中列出的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、97％、98％或99％相同的氨基酸序列。
78.权利要求77的方法，其中抗GITR激动性抗体含有包含在SEQ ID NO:17中列出的氨基酸序列的重链和包含在SEQ ID NO:19中列出的氨基酸序列的轻链。
79.权利要求78的方法，其包括每2周以30-800mg范围内的固定剂量对患有晚期实体癌的受试者施用抗GITR激动性抗体，所述抗GITR激动性抗体含有包含在SEQ ID NO:17中列出的氨基酸序列的重链和包含在SEQ ID NO:19中列出的氨基酸序列的轻链，并且每2周与所述抗GITR激动性抗体同日施用240mg的纳武单抗，持续至少3个或4个周期，其中每个周期包括抗GITR激动性抗体的4次施用和纳武单抗的4次施用。
80.权利要求1-79中任一项的方法，其中，在治疗(用例如30-240mg的抗GITR激动剂和240mg的纳武单抗)8天之后，外周血中增殖性(Ki67+)NK细胞的数目相对于基线水平(第一个剂量之前的水平)至少高出2倍(例如，在接受治疗的受试者群体中平均而言)。
81.权利要求80的方法，其中，在治疗(例如用30-240mg抗GITR激动性抗体和240mg纳武单抗)8天之后，外周血中增殖性(Ki67+)CD8+T细胞，或其子集如记忆CD8+T细胞(例如Teff记忆细胞和中央记忆T细胞)，的数目相对于基线水平(第一个剂量之前的水平)至少高出1.5倍(例如，在接受治疗的受试者群体中平均而言)。
82.权利要求1-81中任一项的方法，其中，在治疗(例如用30-240mg抗GITR激动性抗体和240mg纳武单抗)8天之后，外周血中活化的(HLA-DR+)CD8+T细胞，或其子集如记忆CD8+T细胞(例如Teff记忆细胞和中央记忆T细胞)，的数目相对于基线水平(第一个剂量之前的水平)至少高出1.5倍(例如，在接受治疗的受试者群体中平均而言)。
83.权利要求80-82中任一项的方法，其中通过以下标志物鉴定CD8效应记忆增殖性T细胞：CD45+CD3+CD4-CD8+CD197-CD45RA-Ki67+；通过以下标志物鉴定CD8效应记忆活化的T细胞：CD45+CD3+CD4-CD8+CD197-CD45RA-HLA-DR+；通过以下标志物鉴定CD8中央记忆增殖性T细胞：CD45+CD3+CD4-CD8+CD197+CD45RA-Ki67+，并且通过以下标志物鉴定CD8中央记忆活化的T细胞：CD45+CD3+CD4-CD8+CD197+CD45RA-HLA-DR+。
84.权利要求1-83中任一项的方法，其中，在治疗(例如用30-240mg抗GITR激动性抗体和240mg纳武单抗)8天之后，外周血中活化的(HLA-DR+)CD4+T细胞，或其子集如记忆CD4+T细胞(例如Teff记忆细胞和中央记忆T细胞)，的数目相对于基线水平(第一个剂量之前的水平)至少高出1.5倍(例如，在接受治疗的受试者群体中平均而言)。
85.权利要求84的方法，其中通过以下标志物鉴定CD4效应记忆增殖性T细胞：CD45+CD3+CD4+CD8-CD197-CD45RA-Ki67+；通过以下标志物鉴定CD8效应记忆活化的T细胞：CD45+CD3+CD4+CD8-CD197-CD45RA-HLA-DR+；通过以下标志物鉴定CD8中央记忆增殖性T细胞：CD45+CD3+CD4+CD8-CD197+CD45RA-Ki67+，并且通过以下标志物鉴定CD8中央记忆活化的T细胞：CD45+CD3+CD4+CD8-CD197+CD45RA-HLA-DR+。
86.一种用免疫疗法治疗患有癌症的受试者的方法，其包括对受试者施用第一个剂量和至少第二个剂量，其中施用第一个剂量的免疫疗法，并且当外周效应记忆T细胞和/或中央记忆T细胞的增殖或活化处于或接近于它们各自的基线水平时施用第二个剂量的免疫疗法，所述基线水平为即将施用第一个剂量的免疫疗法之前存在于受试者中的水平。
87.一种用免疫疗法治疗患有癌症的受试者的方法，包括在开始免疫疗法之前(基础水平)以及在施用第一个剂量的免疫疗法之后确定外周效应记忆T细胞和/或中央记忆T细胞(例如，CD8+或CD4+效应记忆或中央记忆T细胞)的增殖和/或活化水平，其中，当外周效应记忆T细胞和/或中央记忆T细胞的增殖和/或活化接近于它们各自的基础水平时，施用第二个剂量及任选的后续剂量的免疫疗法。
88.权利要求86或87的方法，其中效应记忆T细胞是CD8+效应记忆T细胞并且/或者中央记忆T细胞是CD8+中央记忆T细胞。
89.权利要求86-88中任一项的方法，其中增殖性CD8效应记忆T细胞是CD45+CD3+CD4-CD8+CD197-CD45RA-Ki67+T细胞(CD197是CCR7)；活化的CD8效应记忆T细胞为CD45+CD3+CD4-CD8+CD197-CD45RA-HLA-DR+；增殖性CD8中央记忆T细胞为CD45+CD3+CD4-CD8+CD197+CD45RA-Ki67+；并且活化的CD8中央记忆T细胞为CD45+CD3+CD4-CD8+CD197+CD45RA-HLA-DR+。
90.一种预测患有癌症的受试者是否将对免疫疗法治疗有反应的方法，包括在开始免疫疗法之前(基础水平)和施用第一个和/或后续的剂量的免疫疗法之后确定外周效应记忆T细胞和/或中央记忆T细胞(例如，CD8+效应记忆或中央记忆T细胞)的增殖和/或活化水平，其中在施用第一个或后续的剂量的免疫疗法之后的外周效应记忆T细胞和/或中央记忆T细胞的增殖或活化相对于它们各自的基础水平提高，表明受试者正在对免疫疗法作出反应。
91.权利要求90的方法，其中在施用第一个和/或后续的剂量的免疫疗法之后确定外周效应记忆T细胞和/或中央记忆T细胞(例如，CD8+效应记忆或中央记忆T细胞)的增殖或活化水平包括确定这样的时间范围内的所述细胞的增殖或活化水平：该时间范围将显示在有反应的受试者中的所述细胞的增殖或活化，例如在施用后1-3天之间。
92.权利要求90或91的方法，其中所述免疫疗法包括PD-1或PD-L1拮抗剂。
93.权利要求90-92中任一项的方法，其中所述免疫疗法包括GITR激动剂。
94.权利要求90-93中任一项的方法，其中所述免疫疗法包括GITR激动剂和PD-L1拮抗剂。
95.权利要求90-94中任一项的方法，其中效应记忆T细胞是CD8+效应记忆T细胞并且/或者中央记忆T细胞是CD8+中央记忆T细胞。
96.权利要求90-95中任一项的方法，其中增殖性CD8效应记忆T细胞是CD45+CD3+CD4-CD8+CD197-CD45RA-Ki67+T细胞；活化的CD8效应记忆T细胞是CD45+CD3+CD4-CD8+CD197-CD45RA-HLA-DR+的；增殖性CD8中央记忆T细胞为CD45+CD3+CD4-CD8+CD197+CD45RA-Ki67+；并且活化的CD8中央记忆T细胞为
CD45+CD3+CD4-CD8+CD197+CD45RA-HLA-DR+。
97.权利要求90-96中任一项的方法，其中效应记忆T细胞是CD4+效应记忆T细胞并且/或者中央记忆T细胞是CD4+中央记忆T细胞。
98.权利要求90-97中任一项的方法，其中增殖性CD8效应记忆T细胞是CD45+CD3+CD4+CD8-CD197-CD45RA-Ki67+T细胞；活化的CD8效应记忆T细胞为CD45+CD3+CD4+CD8-CD197-CD45RA-HLA-DR+；增殖性CD8中央记忆T细胞为CD45+CD3+CD4+CD8-CD197+CD45RA-Ki67+；并且活化的CD8中央记忆T细胞为
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