CN1108096A - 非肽类速激肽受体拮抗剂 - Google Patents

Abstract

本发明包括治疗或预防与速激肽过量有关的生 理紊乱的方法，该方法包括：给需要所述治疗的哺乳 动物施用有效量的式I化合物或其可药用的盐或溶剂化物。式I中，R¹和R³彼此独立地为氢、-CH₃、

(C₁-C₆烷基)、或

其中Ar是任意取代的苯基；R²选自1-吡咯烷基、六亚甲基亚氨基和哌啶子基。

Description

速激肽是具有共同的下列酰胺化羧基末端顺序的一个肽家族：

Phe-Xaa-Gly-Leu-Met-NH₂

以下将该顺序称为1号顺序。P物质是这一家族中第一个被分离出来的肽，但直到七十年代早期才对其进行了纯化和一级顺序测定。P物质具有下列氨基酸顺序：

Arg-Pro-Lys-Pro-Gln-Gln-Phe-Phe-Gly-Leu-Met-NH₂

以下将该顺序称为2号顺序。

1983年和1984年间，一些研究小组报道了两种新的哺乳动物速激肽的分离，这两种速激肽现在称为神经激肽A（也称为K物质、促神经素（neuromedin）L和神经激肽α）和神经激肽B（也称为促神经素K和神经激肽β）。这些发现的综述见J.E.Maggio,Peptides6(Supplement    3)：237-243，1985。神经激肽A具有下列氨基酸顺序：

His-Lys-Thr-Asp-Ser-Phe-Val-Gly-Leu-Met-NH₂

以下将该顺序称为3号顺序。神经激肽B的结构是下列氨基酸顺序：

Asp-Met-His-Asp-Phe-Phe-Val-Gly-Leu-Met-NH₂

以下将该顺序称为4号顺序。

速激肽广泛分布于中枢神经系统和外周神经系统，由神经释放并产生许多生物学作用，这些作用在多数情况下取决于靶细胞膜上表达的特异性受体的活化。许多非神经组织也产生速激肽。

哺乳动物速激肽P物质、神经激肽A和神经激肽B，通过三个主要亚型的受体而起作用，这些亚型分别称为NK-1、NK-2和NK-3。这些受体存在于许多不同的器官中。

据认为，P物质主要参与痛感的神经传递，包括与偏头痛和关节炎有关的疼痛。这些肽也与肠胃紊乱和胃肠道疾病如炎性肠病有关。速激肽也在许多其他疾病中起作用，如下面所讨论的。

鉴于大量的临床疾病都与速激肽过量或速激肽受体刺激不当有关，速激肽受体拮抗剂的研制将有助于控制这些临床病症。最早的速激肽受体拮抗剂是肽衍生物。但证明这些拮抗剂的药物用途有限，因为它们在代谢上不稳定。

本发明实质上提供一类强效的非肽类速激肽受体拮抗剂。本发明化合物由于具有非肽本性，避免了已知的肽基速激肽受体拮抗剂在代谢不稳定性方面的缺点。

本发明包括抑制与速激肽过量有关的生理紊乱的方法，该方法包括：给有需要的哺乳动物施用有效量的式Ⅰ化合物或其可药用盐

其中R¹和R³彼此独立地为氢、-CH₃、

(C₁-C₆烷基)、或

其中Ar是任意取代的苯基；R₂选自1-吡咯烷基、六亚甲基亚氨基和哌啶子基。

本发明涉及以下发现：选定的一组苯并噻吩类化合物，即式Ⅰ的苯并噻吩类化合物，可以作为速激肽受体拮抗剂使用。本发明包括用以下方法实施的应用：给有需要的哺乳动物或人施用一定剂量的式Ⅰ化合物或其可药用盐或溶剂化物，该剂量能有效抑制与速激肽过量有关的生理紊乱。术语抑制包括其普遍接受的含义，即，包括给易患本文所述紊乱的哺乳动物或人预防性施药，以及对已有的紊乱进行控制和/或治疗。因此，这些方法既包括治疗性施药也包括预防性施用。

一般将所述化合物与普通的赋形剂、稀释剂或载体一起配制，并压制成片剂，或者配制成便于口服的酏剂或溶液剂，或者通过肌内或静脉途径给药。所述化合物可以经皮施用，并可以配制成缓释剂型等。

本发明方法中所用的化合物可以按已建立的和类似的方法来制备，例如按美国专利4，133，814、4，418，068和4，380，635所详述的方法来制备，上述的几篇专利都在此列为参考。一般来说，该方法以带有6-羟基和2-（4-羟苯基）的苯并[b]噻吩起始。对起始化合物进行保护，烷基化，再脱保护而生成式Ⅰ化合物。前面讨论的美国专利及本申请的实施例中提供了这些化合物的制备实施例。任意取代的苯基包括苯基和被C₁-C₆烷基、C₁-C₄烷氧基、羟基、硝基、氯、氟或三（氯或氟）甲基单取代或二取代的苯基。

本发明包括如下的化合物拉洛西分（raloxifene）：

本发明方法中所用的化合物可与多种有机和无机酸和碱形成可药用的酸加成盐和碱加成盐，包括药物化学中常用的、生理上可接受的盐。这些盐也是本发明的一部分。用于形成这类盐的典型无机酸包括盐酸、氢溴酸、氢碘酸、硝酸、硫酸、磷酸、连二磷酸等。也可使用由有机酸衍生的盐，例如由以下有机酸衍生的盐：脂族单羧酸和二羧酸、苯基取代的烷酸、羟基烷酸和羟基烷二酸、芳香酸、脂族和芳族磺酸。因此，这类可药用盐包括乙酸盐、苯乙酸盐、三氟乙酸盐、丙烯酸盐、抗坏血酸盐、苯甲酸盐、氯苯甲酸盐、二硝基苯甲酸盐、羟基苯甲酸盐、甲氧基苯甲酸盐、甲基苯甲酸盐、邻乙酰氧基苯甲酸盐、萘-2-苯甲酸盐、氢溴酸盐、异丁酸盐、苯基丁酸盐、β-羟基丁酸盐、丁炔-1，4-二酸盐、己炔-1，4-二酸盐、己酸盐、辛酸盐、盐酸盐、肉桂酸盐、柠檬酸盐、甲酸盐、富马酸盐、乙醇酸盐、庚酸盐、马尿酸盐、乳酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、羟基马来酸盐、丙二酸盐、扁桃酸盐、甲磺酸盐、烟酸盐、异烟酸盐、硝酸盐、草酸盐、邻苯二甲酸盐、对苯二甲酸盐、磷酸盐、磷酸氢盐、磷酸二氢盐、偏磷酸盐、焦磷酸盐、丙炔酸盐、丙酸盐、苯基丙酸盐、水杨酸盐、癸二酸盐、琥珀酸盐、辛二酸盐、硫酸盐、硫酸氢盐、焦硫酸盐、亚硫酸盐、亚硫酸氢盐、磺酸盐、苯磺酸盐、对溴苯磺酸盐、氯苯磺酸盐、乙磺酸盐、2-羟基乙磺酸盐、甲磺酸盐、萘-1-磺酸盐、萘-2-磺酸盐、对甲苯磺酸盐、二甲苯磺酸盐、酒石酸盐等。优选的盐是盐酸盐。

可药用的酸加成盐一般是通过使式Ⅰ化合物与等摩尔或过量的酸反应而形成的。一般将反应物混合在互溶剂如乙醚或苯中。通常在约1小时至10天内从溶液中沉淀出盐，可以用过滤法分离盐，也可用常规方法脱除溶剂。

常用于成盐的碱包括氢氧化铵、碱金属和碱土金属氢氧化物和碳酸盐，以及脂族胺和芳族胺、脂族二胺和羟基烷胺。特别适用于制备加成盐的碱包括氢氧化铵、碳酸钾、碳酸氢钠、氢氧化钙、甲胺、二乙胺、乙二胺、环己胺和乙醇胺。

可药用的盐与衍生出该盐的化合物相比，通常具有增大的溶解度特性，因此常常更易于配制成液体制剂或乳剂。

药物制剂可以用本领域已知的方法制备。例如，这些化合物可以与普通赋形剂、稀释剂或载体一起配制成片剂、胶囊剂、混悬剂、粉剂等。适于这类制剂的赋形剂、稀释剂和载体的实例如下：填充剂和增量剂，如淀粉、糖类、甘露醇和硅衍生物；粘结剂，如羧甲基纤维素和其他纤维素衍生物、藻酸盐、明胶、聚乙烯吡咯烷酮；润湿剂，如甘油；崩解剂，如琼脂、碳酸钙和碳酸氢钠；滞溶剂，如石蜡；吸收促进剂，如季铵类化合物；表面活性剂，如十六烷醇、甘油单硬脂酸酯；吸附性载体，如高岭土和膨润土；以及润滑剂，如滑石、硬脂酸钙、硬脂酸镁、固体聚乙二醇。

本发明化合物也可以配制成便于口服的酏剂或溶液剂，或配制成适于肠胃外给药例如肌内、皮下或静脉给药的溶液剂。另外，这些化合物很适于配制成缓释剂型等。可以把制剂制成使其只在或优选在肠道的特定部分释放活性成分，并可能释放一段时间。包衣、包封和保护基质可以例如由聚合物或蜡来制备。

本发明式Ⅰ化合物的具体剂量将取决于病症的严重程度、给药途径、以及将由主治医生决定的有关因素。一般来说，公认而有效的日剂量应为约0.1-约1000mg/天，更典型的是约50-约200mg/天。这些剂量每天分一至约三次给予需要治疗的主体，需要时次数也可更多。

通常优选以酸加成盐的形式施用式Ⅰ化合物，这是施用带碱性基团如哌啶环药物的常规作法。为此目的，可以利用下列剂型。

制剂

在下列制剂中，“活性成分”指式Ⅰ化合物。

制剂1：明胶胶囊

用下列成分制备硬明胶胶囊：

成分        量（mg/胶囊）

活性成分        0.1-1000

淀粉（NF）        0-650

淀粉流动性粉末        0-650

硅流体（350厘沲）        0-15

混合各成分，通过45目美国筛，并装入硬明胶胶囊。

已制得的化合物拉洛西分的具体胶囊剂的实施例包括下列制剂：

制剂2：拉洛西分胶囊剂

成分        量（mg/胶囊）

拉洛西分        1

淀粉（NF）        112

淀粉流动性粉末        225.3

硅流体（350厘沲）        1.7

制剂3：拉洛西分胶囊剂

成分        量（mg/胶囊）

拉洛西分        5

淀粉（NF）        108

淀粉流动性粉末        225.3

硅流体（350厘沲）        1.7

制剂4：拉洛西分胶囊剂

成分        量（mg/胶囊）

拉洛西分        10

淀粉（NF）        103

淀粉流动性粉末        225.3

硅流体（350厘沲）        1.7

制剂5：拉洛西分胶囊剂

成分        量（mg/胶囊）

拉洛西分        50

淀粉（NF）        150

淀粉流动性粉末        397

硅流体（350厘沲）        3.0

这些具体制剂可以按照所提供的合理变动范围而有所变化。

用下列成分制备片剂：

制剂6：片剂

成分        量（mg/片）

活性成分        0.1-1000

微晶纤维素        0-650

熏制二氧化硅        0-650

硬脂酸        0-15

混合各组分并压制成片。

另外，也可如下制备每片含0.1-1000mg活性成分的片剂：

制剂7：片剂

成分        量（mg/片）

活性成分        0.1-1000

淀粉        45

微晶纤维素        35

聚乙烯吡咯烷酮        4

（10%水溶液）

羧甲基纤维素钠        4.5

硬脂酸镁        0.5

滑石        1

使活性成分、淀粉和纤维素通过45目美国筛并彻底混合。将聚乙烯吡咯烷酮溶液与所得粉末混合，然后通过14目美国筛。所得的颗粒在50°-60℃下干燥，并通过18目美国筛。然后在所得颗粒中加入已预先通过60目美国筛的羧甲基淀粉钠、硬脂酸镁和滑石，混合后在压片机上压制成片剂。

如下制备每5ml剂量含0.1-1000mg药物的混悬剂：

制剂8：混悬剂

成分        量（mg/5ml）

活性成分        0.1-1000mg

羧甲基纤维素钠        50mg

糖浆        1.25mg

苯甲酸溶液        0.10ml

调味剂        适量

着色剂        适量

纯化水        加至5ml

使药物通过45目美国筛并与羧甲基纤维素钠和糖浆混合，形成光滑的糊状物。将苯甲酸溶液、调味剂和着色剂用部分水稀释，并在搅拌下加入。然后加入足量的水达到要求的体积。

利用初始筛选试验评定本发明化合物的生物活性，该试验能快速而准确地测定受试化合物与已知的NK-1受体部位的结合。可用于评定速激肽受体拮抗剂的试验是本领域公知的。参见例如：J.Jukic等，Life    Sciences,49:1463-1469,1991；N.Kucharczyk等，Journal    of    Medicinal    Chemistry,36:1654-1661,1993；N.Rouissi等，Biochemical    and    Biophysical    Research    Communications,176:894-901,(1991)。

NK-1受体结合试验

用经过修改的前已公开的程序进行放射性受体结合试验（D.G.Payan等，Journal of Immunology,133:3260-3265，1984）。在该试验中，取一份IM9细胞试样（1×10⁶个细胞/管，在补充有10%胎牛血清的RPMI 1640培养基中），在浓度递增的竞争剂存在下于4℃与20pM¹²⁵I标记的P物质一起保温45分钟。

IM9细胞系是一种经过充分鉴定且易得的人细胞系（参见例如：Annals    of    the    New    York    Academy    of    Science,190:221-234,1972；Nature(London),251:443-444,1974；Proceedings    of    the    National    Academy    of    sciences(USA),71:84-88,1974）。这些细胞在补充有50μg/ml硫酸庆大霉素和10%胎牛血清的RPMI    1640中进行常规培养。

利用在0.1%聚乙烯亚胺中预先浸泡20分钟的滤膜，通过玻璃纤维滤器收集系统过滤来停止反应。在20nM未标记的配位体存在下测定标记的P物质的特异结合。

NK-2受体结合试验

在装有含10%胎牛血清的最低基本培养基（α改良）的75cm²培养瓶或摇瓶中，培养CHO-hNK-2R细胞，该细胞是用人NK-2受体转化的CHO衍生细胞系，每个细胞表达约400，000个这种受体。人NK-2受体的基因顺序见N.P.Gerard等，Journal    of    Biological    Chemistry,265:20455-20462,1990）。

为制备膜，用下列方法使30个汇合摇瓶培养物解离：每个摇瓶用10ml不含钙和镁的Dulbecco氏磷酸盐缓冲盐水（PBS）洗涤，然后加入10ml无酶细胞解离溶液（用PBS配制，得自Specialty Media公司）。再过15分钟后，合并解离的细胞，并在医用离心机中以1，000RPM离心10分钟。用如下方法制备膜：用Tekmar^R匀浆器将细胞沉淀物在300ml 50mM Tris缓冲液（pH7.4）中匀浆10-15秒，然后用Beckman JA-14^R转子以12，000RPM（20，000×g）离心30秒。用上述步骤将细胞沉淀物洗涤一次，并将最终沉淀物再悬浮于100-120ml 50mM Tris缓冲液（pH7.4）中，以4ml为一份于-70℃下冷藏。该制备物的蛋白浓度为2mg/ml。

为进行受体结合试验，将4ml一份的CHO-hNK-2R膜制备物悬浮于40ml试验缓冲液中，该缓冲液含有50mM Tris pH7.4、3mM氯化锰、0.02%牛血清清蛋白（BSA）和4μg/ml抑凝乳蛋白酶素。每个样品使用200μl体积的匀浆液（40μg蛋白）。放射性配位体为[¹²⁵I]碘组氨酰神经激肽A（New England Nuclear,NEX-252），2200Ci/mmol。该配位体是在试验缓冲液中以20nCi/100μl的浓度配制的，试验中的终浓度为20pM。用1μM章鱼素测定非特异性结合。用从0.1至1000nM的10个浓度的章鱼素来制作浓度-响应标准曲线。

将所有样品和标准品以10μl二甲亚砜（DMSO）溶液形式加到保温液中进行筛选（单剂量），或者以5μlDMSO溶液形式加到保温液中进行IC₅₀测定。保温时的加样顺序为190或195μl试验缓冲液、200μl匀浆液、10或5μl样品的DMSO溶液、100μl放射性配位体。将样品于室温下保温1小时，然后在48孔Brandel细胞收集器上，通过已预先在含有0.5%BSA的50mM    Tris缓冲液（pH7.7）中浸泡2小时的GF/B滤膜进行过滤。滤膜用约3ml冷的50mM    Tris缓冲液（pH7.7）洗3次。然后用打孔器将滤纸圆片打入12×75mm聚苯乙烯管中，并在γ计数器中计数。

本文所述化合物的实用性以其在至少一种上述试验中的活性来加以说明。

由于式Ⅰ化合物是有效的速激肽受体拮抗剂，这些化合物在许多可能由于速激肽过量而引起的临床疾病的治疗上有价值。因此，本发明提供治疗或预防与速激肽过量有关的生理紊乱的方法，该方法包括：给需要所述治疗的哺乳动物施用有效量的式Ⅰ化合物或其可药用盐、溶剂化物或前药。术语“与速激肽过量有关的生理紊乱”包括与速激肽受体刺激不当有关的生理紊乱，而不论该部位的速激肽实际含量多少。

这些生理紊乱可以包括：中枢神经系统的紊乱，例如焦虑、抑郁、精神病和精神分裂症；神经变性紊乱，例如痴呆，包括阿耳茨海默氏型老年性痴呆、阿耳茨海默氏病、艾滋病有关的痴呆和当氏综合症（Down′s    syndrome）；脱髓鞘疾病，如多发性硬化和肌萎缩性侧索硬化，以及其它神经病理性紊乱，如外周神经病（如糖尿病性神经病和化疗诱发的神经病）和带状疱疹神经痛以其他神经痛；急性和慢性导气管阻塞疾病，如成人呼吸窘迫综合症、支气管肺炎、支气管痉挛、慢性支气管炎、司机咳（drivercough）、哮喘；炎性疾病，如炎性肠病；变态反应，如湿疹和鼻炎；过敏性疾病，如毒葛；眼疾病，如结膜炎、春季结膜炎等；皮肤病，如牛皮癣、接触性皮炎、特应性皮炎、荨麻疹及其他湿疹样皮炎；成瘾紊乱，如酒精中毒；紧张相关性躯体紊乱；反射交感性营养不良，如肩手综合症；胸腺机能障碍性紊乱；不良免疫反应，如移植组织排斥、肠胃紊乱或与内脏的神经元控制有关的疾病，如溃疡性结肠炎、克罗恩氏病和应激性肠综合症；膀胱功能紊乱，如膀胱逼尿肌反射亢进和失禁；由血管舒张和血管痉挛疾病引起的血液流动紊乱，如心绞痛、偏头痛和雷诺氏病；疼痛或感受伤害，例如由任何上述病症引起的或与之有关的疼痛或感受伤害，尤其是偏头痛中的疼痛传导。例如，式Ⅰ化合物可适当地用于治疗中神经系统紊乱，例如焦虑、精神病和精神分裂症；神经变性紊乱，如阿耳茨海默氏病和当氏综合症；呼吸疾病，如支气管痉挛和哮喘；炎性疾病，如关节炎、炎性肠病；不良免疫紊乱，如移植组织排斥；肠胃紊乱和与内脏的神经元控制有关的紊乱等疾病，如溃疡性结肠炎、克罗恩氏病和应激性肠综合症；失禁；由血管舒张引起的血液流动紊乱；疼痛或感受伤害，例如由任何上述病症引起或与之有关的疼痛或感受伤害、或偏头痛中的疼痛传导。

例如，NK-1拮抗剂最优选用于治疗疼痛，尤其是慢性疼痛，例如神经性痛、术后痛和偏头痛、与关节炎有关的疼痛、与癌症有关的疼痛、慢性下背痛、群集性头痛（cluster    headaches）、疱疹神经痛、假肢痛、中枢性痛、牙痛、鸦片抵抗性痛（opiod-resistunt    pain）、内脏痛、手术痛、骨损伤痛、娩出期痛、灼伤引起的疼痛、产后痛、心绞痛、与生殖泌尿道有关的疼痛（包括膀胱炎）。

除疼痛外，NK-1拮抗剂还特别优选用于治疗和预防尿失禁；胃肠道运动失调，如应激性肠综合症；急性和慢性导气管阻塞疾病，如支气管痉挛、支气管肺炎、哮喘和成人呼吸窘迫综合症；炎性病症，如关节炎、炎性肠病、溃疡性结肠炎、克罗恩氏病、神经原性炎症、变态反应、鼻炎、咳、荨麻疹、结膜炎、刺激诱发的瞳孔缩小；组织移植排斥；由细胞化疗等引起的血浆外渗；脊髓创伤；中风；脑中风（局部缺血）；阿耳茨海默氏病；帕金森氏病；多发性硬化；肌萎缩性侧索硬化；精神分裂症；焦虑；抑郁。

NK-2拮抗剂特别优选用于治疗尿失禁、支气管痉挛、哮喘、成人呼吸窘迫综合症、胃肠道运动失调如应激性肠综合症和疼痛。

Claims (4)

1、一种适于治疗或预防与速激肽过量有关的生理紊乱的药物组合物，该组合物包含作为活性成分的式Ⅰ化合物或其可药用的盐或溶剂化物：

其中R¹和R³彼此独立地为氢、-CH₃、 (C₁-C₆烷基)、或

其中Ar是任意取代的苯基；R²选自1-吡咯烷基、六亚甲基亚氨基和哌啶子基。

2、权利要求1的药物组合物，其中所述化合物为其盐酸盐。

3、权利要求1的药物组合物，其中所述组合物适于预防性施用。

4、权利要求1的药物组合物，其中所述化合物为下式化合物或其盐酸盐，