CN110627863B

CN110627863B - 蛋白多糖提取方法、提取物及其应用和化妆品

Info

Publication number: CN110627863B
Application number: CN201910954373.5A
Authority: CN
Inventors: 张铎; 孙云起; 孙怀庆; 聂艳峰; 郭朝万; 胡露
Original assignee: Guangdong Marubi Biological Technology Co Ltd
Current assignee: Guangdong Marubi Biological Technology Co Ltd
Priority date: 2019-10-09
Filing date: 2019-10-09
Publication date: 2021-07-06
Anticipated expiration: 2039-10-09
Also published as: CN110627863A

Abstract

本发明提供了一种蛋白多糖提取方法、提取物及其应用和化妆品，涉及蛋白多糖提取技术领域。该蛋白多糖提取方法包括在破壁酶存在的条件下超声浸提红藻掌叶树得到浸提液，然后使用硫酸铵沉淀所述浸提液得到粗品蛋白多糖，再使用乙醇纯化所述粗品蛋白多糖得到蛋白多糖；其中破壁酶包括纤维素酶，半纤维素酶和果胶酶。该蛋白提取方法原料来源广泛，提取成本低，操作简便，易于工业化生产。

Description

蛋白多糖提取方法、提取物及其应用和化妆品

技术领域

本发明涉及蛋白多糖提取技术领域，尤其是涉及一种蛋白多糖提取方法、提取物及其应用和化妆品。

背景技术

蛋白多糖是一类由糖类和蛋白质通过一个或等多个共价键连接而成的复合物，是生物体内重要的一类生物大分子物质之一。由于蛋白多糖本身的特殊性质，其价值越来越受到认可，被广泛的应用于生物化学、医药、食品及化妆品等领域。具有增强免疫、抗氧化、抗疲劳、抗辐射、抗病毒、提高细胞膜延展性，保护细胞等功效。

以往，天然海洋蛋白多糖主要来源于海洋动物，如鲸、鲨鱼等软骨，但由于这类海洋生物捕获困难以及捕获量的限制，很难大量的获得海洋蛋白多糖。因此，一种能够较易获得海洋来源的蛋白多糖的方法是目前需要的。

有鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的第一目的在于提供一种蛋白多糖提取方法，缓解了现有技术中存在的缺少一种能够较易获得海洋来源的蛋白多糖的方法的问题。

本发明的第二目的在于提供一种上述红藻掌叶树来源的蛋白多糖提取方法制备得到的提取物。

本发明的第三目的在于提供一种上述红藻掌叶树来源的蛋白多糖提取方法或上述提取物在制备化妆品中的应用。

本发明的第四目的在于提供一种化妆品，该化妆品包含上述提取物。

为解决上述技术问题，本发明特采用如下技术方案：

根据本发明的一个方面，本发明提供了一种蛋白多糖提取方法，所述提取方法包括：在破壁酶存在的条件下超声浸提红藻掌叶树得到浸提液，然后使用硫酸铵沉淀所述浸提液得到粗品蛋白多糖，再使用乙醇纯化所述粗品蛋白多糖得到蛋白多糖；所述破壁酶包括纤维素酶，半纤维素酶和果胶酶。

优选地，所述超声浸提的时间为6～8h，优选为6.5～7.5h，更优选为7h；

优选地，先粉碎红藻掌叶树，过筛后得到红藻掌叶树粉末，再超声浸提红藻掌叶树的粉末、水和破壁酶的混合物；

优选地，水的用量是红藻掌叶树的粉末重量的20～25倍；

优选地，所述破壁酶中纤维素酶的质量百分比为25～50％，半纤维素酶的质量百分比为30～45％，余量为果胶酶；

优选地，破壁酶的用量为红藻掌叶树重量的0.03～0.07倍，更优选为0.04倍；

优选地，所述水包括去离子水；

优选地，所述粉碎红藻掌叶树包括粉碎干燥后的红藻掌叶树；

优选地，所述干燥包括冷冻干燥。

优选地，超声浸提红藻掌叶树后，对超声浸提的产物固液分离后得到所述浸提液，再使用硫酸铵沉淀所述浸提液；

优选地，硫酸铵沉淀所述浸提液包括：使所述浸提液中的硫酸铵浓度为70％～90％，沉淀后得到粗品蛋白多糖；

优选地，向所述浸提液中加入饱和硫酸铵溶液至所述浸提液中的硫酸铵浓度为70％～90％；

优选地，使用硫酸铵沉淀所述浸提液12～18h；

优选地，使用硫酸铵沉淀所述浸提液前，先将所述浸提液进行脱色处理；

优选地，使用活性炭对所述浸提液进行脱色处理。

优选地，先去除粗品蛋白多糖中的硫酸根离子，再使用乙醇纯化所述粗品蛋白多糖；

优选地，采用透析的方法去除粗品蛋白多糖中的硫酸根离子；

优选地，透析使用的缓冲液包括磷酸盐缓冲液；磷酸盐缓冲液的浓度优选为0.005～0.015mol/L，pH优选为6.5～7.5；

优选地，透析过程中更换缓冲液5～7次。

优选地，所述乙醇纯化所述粗品蛋白多糖包括：使含有粗蛋白多糖的溶液中乙醇的终体积浓度至40％～50％，沉淀后得到蛋白多糖；

优选地，向含有粗蛋白多糖的溶液中加入体积浓度为85％～95％的乙醇，至含有粗蛋白多糖的溶液中乙醇的终体积浓度为40％～50％；

优选地，将含有粗蛋白多糖的溶液中乙醇的终体积浓度至40％～50％后在0～5℃的温度条件下静置10～15h，得到沉淀。

优选地，干燥经乙醇纯化后的产物，得到所述蛋白多糖；

优选地，所述干燥包括40～45℃下干燥。

优选地，所述提取方法包括如下步骤：

(a)将清洗后的红藻掌叶树冷冻干燥；

(b)将冷冻干燥后的红藻掌叶树用粉碎机进行粉碎，过筛，得到红藻掌叶树粉末；

(c)取红藻掌叶树粉末，加入到20～25倍重量的去离子水中，再加入破壁酶，超声浸提7小时；

(d)将步骤(c)处理后的样品离心过滤，获得浸提液；

(e)向步骤(d)得到的浸提液中加入活性炭进行脱色；

(f)向步骤(e)中脱色后的浸提液中加入饱和硫酸铵溶液至其浓度为70％～90％，沉淀12～18h后离心，得粗品蛋白多糖沉淀；

(g)将(f)中所得沉淀用浓度为0.01mol/L、pH为7的磷酸盐缓冲液透析，换5～7次透析液，至溶液中无硫酸根离子；

(h)向将除去硫酸根离子的溶液中加入85％～95％乙醇，直至其最终浓度为40％～50％；0～5℃静置10～15h，离心后所得沉淀为纯化后的蛋白多糖；

(i)40～45℃下干燥步骤(h)中所得沉淀，得到蛋白多糖。

根据本发明的一个方面，本发明还提供了上述蛋白多糖提取方法制备得到的提取物。

根据本发明的一个方面，本发明还提供了上述蛋白多糖提取方法或上述提取物在制备化妆品中的应用。

根据本发明的一个方面，本发明还提供了一种化妆品，该化妆品包含上述提取物。

与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：

本发明提供的蛋白多糖提取方法以红藻掌叶树(palmaria palmata)作为原料，红藻掌叶树又名掌状红皮藻，已经被广泛的应用于食品，保健品及化妆品护肤领域，因此该原料来源安全。红藻掌叶树生长旺盛，成本低廉，易于流通，可以有效的增加海洋生物利用率。

本发明提供的蛋白多糖提取方法采用在破壁酶存在的条件下对红藻掌叶树进行超声浸提。本发明使用的破壁酶包括纤维素酶，半纤维素酶和果胶酶，能够破坏红藻掌叶树的细胞壁，促进细胞液流出。将破壁酶和超声结合使用，能够高效的获得红藻掌叶树的细胞裂解液。依次采用硫酸铵和乙醇进行分级沉淀，能够有效的获得纯度较高的蛋白多糖。且以破壁酶、硫酸铵和乙醇作为主要提取试剂，安全易得，工艺流程简单，过程绿色环保，对环境无污染，且通过此工艺流程所提取出的产品提取率较高，操作简便，易于工业化生产。

本发明提供的上述蛋白多糖提取方法制备得到的提取物，其主要成分是海洋来源的蛋白多糖，具有良好的抗炎、保湿、抗氧化、抑制黑色素等作用，可用于制备化妆品。

本发明提供的上述蛋白多糖提取方法或上述提取物在制备化妆品中的应用，可赋予化妆品良好的抗炎、保湿、抗氧化、抑制黑色素等。且由于上述蛋白多糖提取方法原料来源广泛，成本低廉，将上述蛋白多糖提取方法或上述提取物应用于制备化妆品，可降低化妆品的生产成本。

附图说明

为了更清楚地说明本发明具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本发明的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。

图1为本发明效果例中蛋白标准曲线。

具体实施方式

下面将结合实施例对本发明的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

需要说明的是：

本发明中，如果没有特别的说明，本文所提到的所有实施方式以及优选实施方法可以相互组合形成新的技术方案；本文所提到的所有技术特征以及优选特征可以相互组合形成新的技术方案；所涉及的各组分或其优选组分可以相互组合形成新的技术方案。

本发明中，除非有其他说明，数值范围“a～b”表示a到b之间的任意实数组合的缩略表示，其中a和b都是实数。例如数值范围“1～10”表示本文中已经全部列出了“1～10”之间的全部实数，“1～10”只是这些数值组合的缩略表示。本发明所公开的“范围”以下限和上限的形式，可以分别为一个或多个下限，和一个或多个上限。

除非另有说明，本文中所用的专业与科学术语与本领域熟练人员所熟悉的意义相同。此外，任何与所记载内容相似或均等的方法或材料也可应用于本发明中。

根据本发明的一个方面，本发明提供了一种蛋白多糖提取方法，该提取方法包括：在破壁酶存在的条件下超声浸提红藻掌叶树得到浸提液，然后使用硫酸铵沉淀所述浸提液得到粗品蛋白多糖，再使用乙醇纯化所述粗品蛋白多糖得到蛋白多糖，其中破壁酶包括纤维素酶，半纤维素酶和果胶酶。

本发明提供的蛋白多糖提取方法以红藻掌叶树(palmaria palmata)作为原料，红藻掌叶树又名掌状红皮藻，富含丰富的生物活性物质，具有优异的抗炎、抗氧化、抑制黑色素等作用，已经被广泛的应用于食品，保健品及化妆品护肤领域。红藻掌叶树主要分布于大西洋和太平洋海岸线，目前在我国红藻掌叶树的利用率较低，并且其再养殖区内，红藻掌叶树往往由于其过分生长而成为一种隐患，以生长旺盛的红藻掌叶树作为蛋白多糖的提取原料，成本低廉，易于流通，可以有效的增加海洋生物利用率。

本发明使用的破壁酶包含纤维素酶、半纤维素酶和果胶酶，能够破坏红藻掌叶树的细胞壁，促进细胞液流出。并且破壁酶、硫酸铵和乙醇作为主要提取试剂，安全易得，工艺流程简单，过程绿色环保，对环境无污染，且通过此工艺流程所提取出的产品提取率较高，操作简便，易于工业化生产。

在一些优选的实施方式中，所述超声浸提的时间为6～8h，例如可以为但不限于为6h、6.5h、7h、7.5h或8h，优选为6.5～7.5h，更优选为7h。

在一些优选的实施方式中，先粉碎红藻掌叶树，红藻掌叶树优选使用经过干燥的红藻掌叶树，更优选使用经冷冻干燥的红藻掌叶树；将粉碎后的红藻掌叶树过筛后得到红藻掌叶树粉末，再超声浸提红藻掌叶树的粉末、水和破壁酶的混合物，其中水的用量优选是红藻掌叶树的粉末重量的20～25倍，例如可以为但不限于为20倍、21倍、22倍、23倍、24倍或25倍，水优选使用杂质较少的去离子水。破壁酶中各组分的用量优选为纤维素酶的质量百分比为25～50％，例如可以为但不限于为25％、30％、35％、40％、45％或50％；半纤维素酶的质量百分比为30～45％，例如可以为但不限于为30％、35％、40％或45％，余量为果胶酶，例如可以为但不限于为5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％或45％。破壁酶的用量优选为红藻掌叶树重量的0.03～0.07倍，例如可以为但不限于为0.03倍、0.04倍、0.05倍、0.06倍或0.07倍，更优选为0.04倍。

在一些优选的实施方式中，超声浸提红藻掌叶树后，对超声浸提的产物固液分离，以去除浸提液中的固体杂质，固液分离优选使用操作简单且分离效果好的离心并过滤，得到的滤液即为掌叶树细胞裂解液，将滤液作为浸提液，再使用硫酸铵沉淀浸提液。

在一些优选的实施方式中，使用硫酸铵沉淀浸提液前先对浸提液进行脱色处理，以去除浸提液中的有色物质，从而减少蛋白多糖中的杂质。优选使用脱色效率高且无副作用的活性炭对浸提液脱色处理。

在一些优选的实施方式中，使用硫酸铵沉淀浸提液的步骤，包括使浸提液中的硫酸铵浓度调整至为70％～90％，例如可以为但不限于为70％、72％、75％、78％、80％、83％、85％、88％或90％，优选采用向浸提液中缓慢加入饱和硫酸铵溶液至所述浸提液中的硫酸铵浓度为70％～90％的方式沉淀浸提液。当浸提液中的硫酸铵浓度为70％～90％时，可有效的将浸提液中的蛋白多糖沉淀出。将使用硫酸铵处理过的浸提液得到的沉淀作为粗品蛋白多糖，优选向浸提液中加入硫酸铵后沉淀12～18h，得到粗品蛋白多糖沉淀，以作为乙醇纯化的物料。

在一些优选的实施方式中，在使用乙醇纯化粗品蛋白多糖前，先去除粗蛋白多糖中的硫酸根离子，以避免硫酸根离子的残留影响乙醇对蛋白多糖的纯化。在一些优选地实施方式中，采用透析的方法去除粗蛋白多糖中的硫酸根离子。透析时透析液优选使用磷酸盐缓冲液，其中磷酸盐缓冲液的浓度优选为0.005～0.015mol/L，pH优选为6.5～7.5。为了使粗蛋白多糖中的硫酸根离子去除的更彻底，优选在透析的过程中更换5～7次缓冲液。

在一些优选的实施方式中，使用乙醇纯化粗品蛋白多糖包括使含有粗蛋白多糖的溶液中乙醇的终体积浓度至40％～50％，例如可以为但不限于为40％、41％、42％、43％、44％、45％、46％、47％、48％、49％或50％，固液分离后得到沉淀，沉淀即为蛋白多糖。当含有粗品蛋白多糖的溶液中含有终体积浓度为40％～50％的乙醇时，可以有效的将蛋白多糖沉淀出，并减少非蛋白多糖类物质的纯度，以提高蛋白多糖的纯度。

在一些优选的实施方式中，优选向含有粗蛋白多糖的溶液中加入体积浓度为85％～95％的乙醇，例如可以为但不限于为85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％或95％，至含有粗蛋白多糖的溶液中乙醇的终体积浓度为40％～50％。

在一些优选的实施方式中，将含有粗蛋白多糖的溶液中乙醇的终体积浓度至40％～50％后，在0～5℃的温度条件下，例如可以为但不限于为0℃、1℃、2℃、3℃、4℃或5℃，静置10～15h，例如可以为但不限于为10h、11h、12h、13h、14h或15h，在该条件下获得的沉淀中蛋白多糖的纯度较高。

在一些优选的实施方式中，干燥经乙醇纯化后的产物，得到所述蛋白多糖，优选在40～45℃下干燥，例如可以为但不限于为41℃、42℃、43℃、44℃或45℃。

在一些优选的实施方式中，采用如下方法从红藻掌叶树中提取蛋白多糖，效果更佳：

(a)将清洗后的红藻掌叶树冷冻干燥；

(d)将步骤(c)处理后的样品离心过滤，获得浸提液；

(e)向步骤(d)得到的浸提液中加入活性炭进行脱色；

(f)向步骤(e)中脱色后的浸提液中加入饱和硫酸铵溶液至其浓度为70％～90％，沉淀过夜后离心，得粗品蛋白多糖沉淀；

(h)向将除去硫酸根离子的溶液中加入85％～95％乙醇，直至其最终浓度为40％～50％；0～5℃，静置10～15h，离心后所得沉淀为纯化后的蛋白多糖；

(i)40～45℃下干燥步骤(h)中所得沉淀，得到蛋白多糖。

根据本发明的一个方面，本发明还提供了上述蛋白多糖提取方法制备得到的提取物。采用上述蛋白多糖提取方法制备得到的提取物中主要成分是海洋来源的蛋白多糖，具有良好的抗炎、保湿、抗氧化、抑制黑色素等作用，可用于制备化妆品。

根据本发明的一个方面，本发明还提供了上述蛋白多糖提取方法或上述提取物在制备化妆品中的应用，可赋予化妆品良好的抗炎、保湿、抗氧化、抑制黑色素等。且由于上述蛋白多糖提取方法原料来源广泛，成本低廉，将上述蛋白多糖提取方法或上述提取物应用于制备化妆品，可降低化妆品的生产成本。

根据本发明的一个方面，本发明还提供了一种化妆品，该化妆品包含上述提取物。上述提取物可以作为化妆品中的主要活性成分，也可以作为化妆品的辅助活性成分以配合其他活性成分共同发挥作用。含有上述提取物的化妆品能够具有良好的亮白、修复、延缓氧化、提亮肤色、提拉紧致、滋润和补水保湿的效果。所述化妆品可以但不限于为以达到清洁、保养、美容、修饰和改变外观的等各种类的护肤品、彩妆或药妆；化妆品的剂型可以但不限于为保湿水、润肤乳液、护肤精华、护肤膏霜、洁面乳或面膜等。

下面结合优选实施例进一步说明本发明的技术方案和有益效果。

实施例1

本实施例提供了一种蛋白多糖提取方法，包括如下步骤：

(a)从海域中采集适量红藻掌叶树，自来水冲洗，去除附着物后，冷冻干燥；

(c)称取红藻掌叶树粉末，加入到25倍重量的去离子水中，再加入红藻掌叶树粉末重量0.04倍的破壁酶，按质量百分比计破壁酶含有40％的纤维素酶、40％的半纤维素酶和20％的果胶酶，超声浸提7小时；

(d)将步骤(c)处理后的样品离心过滤，获得浸提液；

(e)向步骤(d)得到的浸提液中加入活性炭进行脱色；

(f)向步骤(e)中脱色后的浸提液中加入饱和硫酸铵溶液至其浓度为80％，沉淀12h后离心，得粗品蛋白多糖沉淀；

(g)将(f)中所得沉淀用浓度为0.01mol/L、pH为7的磷酸盐缓冲液透析，换6次透析液，至溶液中无硫酸根离子；

(h)向将除去硫酸根离子的溶液中加入90％乙醇，直至其最终浓度为45％；4℃静置12h，离心后所得沉淀为纯化后的蛋白多糖；

(i)45℃下干燥步骤(h)中所得沉淀，得到蛋白多糖。

实施例2

本实施例提供了一种蛋白多糖提取方法，包括如下步骤：

(c)称取红藻掌叶树粉末，加入到20倍重量的去离子水中，再加入红藻掌叶树粉末重量0.07倍的破壁酶，按质量百分比计破壁酶含有25％的纤维素酶、45％的半纤维素酶和30％的果胶酶，超声浸提6小时；

(d)将步骤(c)处理后的样品离心过滤，获得浸提液；

(e)向步骤(d)得到的浸提液中加入活性炭进行脱色；

(f)向步骤(e)中脱色后的浸提液中加入饱和硫酸铵溶液至其浓度为90％，沉淀18h后离心，得粗品蛋白多糖沉淀；

(g)将(f)中所得沉淀用浓度为0.01mol/L、pH为7的磷酸盐缓冲液透析，换7次透析液，至溶液中无硫酸根离子；

(h)向将除去硫酸根离子的溶液中加入85％乙醇，直至其最终浓度为50％；4℃静置15h，离心后所得沉淀为纯化后的蛋白多糖；

(i)40℃下干燥步骤(h)中所得沉淀，得到蛋白多糖。

实施例3

本实施例提供了一种蛋白多糖提取方法，包括如下步骤：

(c)称取红藻掌叶树粉末，加入到20倍重量的去离子水中，再加入红藻掌叶树粉末重量0.03倍的破壁酶，按质量百分比计破壁酶含有50％的纤维素酶、30％的半纤维素酶和20％的果胶酶，超声浸提8小时；

(d)将步骤(c)处理后的样品离心过滤，获得浸提液；

(e)向步骤(d)得到的浸提液中加入活性炭进行脱色；

(f)向步骤(e)中脱色后的浸提液中加入饱和硫酸铵溶液至其浓度为70％，沉淀12h后离心，得粗品蛋白多糖沉淀；

(g)将(f)中所得沉淀用浓度为0.01mol/L、pH为7的磷酸盐缓冲液透析，换5次透析液，至溶液中无硫酸根离子；

(h)向将除去硫酸根离子的溶液中加入95％乙醇，直至其最终浓度为40％；0℃静置15h，离心后所得沉淀为纯化后的蛋白多糖；

(i)40℃下干燥步骤(h)中所得沉淀，得到蛋白多糖。

实施例4

本实施例提供了一种蛋白多糖提取方法，包括如下步骤：

(c)称取红藻掌叶树粉末，加入到30倍重量的去离子水中，再加入红藻掌叶树粉末重量0.05倍的破壁酶，按质量百分比计破壁酶含有20％的纤维素酶、50％的半纤维素酶和30％的果胶酶，超声浸提5小时；

(d)将步骤(c)处理后的样品离心过滤，获得浸提液；

(e)向步骤(d)得到的浸提液中加入活性炭进行脱色；

(f)向步骤(e)中脱色后的浸提液中加入饱和硫酸铵溶液至其浓度为60％，沉淀12h后离心，得粗品蛋白多糖沉淀；

(h)向将除去硫酸根离子的溶液中加入95％乙醇，直至其最终浓度为60％；0℃静置5h，离心后所得沉淀为纯化后的蛋白多糖；

(i)45℃下干燥步骤(h)中所得沉淀，得到蛋白多糖。

实施例5

本实施例提供了一种蛋白多糖提取方法，包括如下步骤：

(c)称取红藻掌叶树粉末，加入到15倍重量的去离子水中，再加入红藻掌叶树粉末重量0.02倍的破壁酶，按质量百分比计破壁酶含有20％的纤维素酶、50％的半纤维素酶和30％的果胶酶，超声浸提10小时；

(d)将步骤(c)处理后的样品离心过滤，获得浸提液；

(e)向步骤(d)得到的浸提液中加入活性炭进行脱色；

(f)向步骤(e)中脱色后的浸提液中加入饱和硫酸铵溶液至其浓度为90％，沉淀5h后离心，得粗品蛋白多糖沉淀；

(h)向将除去硫酸根离子的溶液中加入95％乙醇，直至其最终浓度为30％；0℃静置20h，离心后所得沉淀为纯化后的蛋白多糖；

(i)45℃下干燥步骤(h)中所得沉淀，得到蛋白多糖。

实施例6

本实施例提供了一种蛋白多糖提取方法，与实施例1的区别在于，不使用活性炭对浸提液脱色。

实施例7

本实施例提供了一种蛋白多糖提取方法，与实施例1的区别在于，不使用透析的方法去除硫酸根离子，直接使用乙醇沉淀。

实施例8

本实施例提供了一种蛋白多糖提取方法，与实施例1的区别在于，直接破碎未经干燥的红藻掌叶树。

对比例1

本对比例提供了一种蛋白多糖提取方法，与实施例1的区别在于，在超声浸提的过程中不使用破壁酶。

对比例2

本对比例提供了一种蛋白多糖提取方法，与实施例1的区别在于，所述提取方法不包含乙醇纯化的步骤，即实施步骤(f)后直接干燥所得沉淀。

对比例3

本对比例提供了一种蛋白多糖提取方法，与实施例1的区别在于，直接使用乙醇沉淀脱色后的浸提液，即实施步骤(e)后，直接实施步骤(h)。

效果例

采用双缩脲反应、CTAB反应、斐林试剂检测及碘-碘化钾反应对实施例1～实施例7和对比例1～对比例3制备得到的蛋白多糖进行定性分析，结果如表1所示：

表1

上述实验中，双缩脲反应呈阳性，说明产物中含有蛋白质；CTAB反应呈阳性说明产物中含有酸性多糖；斐林试剂检测结果成阴性说明所得产物中不含有游离多糖类物质；碘-碘化钾反应呈阴性说明所得产物中不含有淀粉类物质。

从上述实施例1-3和实施例4-5对比可以看出，优化工艺参数可以提高蛋白多糖的提取效果；从实施例1和实施例6对比可以看出，对浸提液进行脱色处理可以提高蛋白多糖的提取效果；从实施例1和实施例7对比可以看出，硫酸铵沉淀浸提液后，去除残留的硫酸根离子能进一步提高蛋白多糖的提取效率；从实施例1和对比例1对比可以看出，不使用破壁酶将导致蛋白多糖的提取效果显著降低；从实施例1和对比例2-3对比可以看出，采用硫酸铵和乙醇进行分级沉淀，能够有效的获得纯度较高的蛋白多糖。

Claims

1.一种蛋白多糖提取方法，其特征在于，所述提取方法包括：在破壁酶存在的条件下超声浸提红藻掌叶树得到浸提液，然后使用硫酸铵沉淀所述浸提液得到粗品蛋白多糖，再使用乙醇纯化所述粗品蛋白多糖得到蛋白多糖；所述破壁酶包括纤维素酶，半纤维素酶和果胶酶;

具体包括如下步骤：

（a）将清洗后的红藻掌叶树冷冻干燥；

（b）将冷冻干燥后的红藻掌叶树用粉碎机进行粉碎，过筛，得到红藻掌叶树粉末；

（c）取红藻掌叶树粉末，加入到20~25倍重量的去离子水中，再加入破壁酶，超声浸提7小时；

（d）将步骤（c）处理后的样品离心过滤，获得浸提液；

（e）向步骤（d）得到的浸提液中加入活性炭进行脱色；

（f）向步骤（e）中脱色后的浸提液中加入饱和硫酸铵溶液至其浓度为70%~90%，沉淀12~18h后离心，得粗品蛋白多糖沉淀；

（g）将（f）中所得沉淀用浓度为0.01mol/L、pH为7的磷酸盐缓冲液透析，换5~7次透析液，至溶液中无硫酸根离子；

（h）向除去硫酸根离子的溶液中加入85%~95%乙醇，直至其最终浓度为40%~50%；0~5℃静置10~15h，离心后所得沉淀为纯化后的蛋白多糖；

（i）40~45℃下干燥步骤（h）中所得沉淀，得到蛋白多糖。

2.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于，

所述破壁酶中纤维素酶的质量百分比为25~50%，半纤维素酶的质量百分比为30~45%，余量为果胶酶。

3.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于，所述破壁酶的用量为红藻掌叶树重量的0.03~0.07倍。

4.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于，所述破壁酶的用量为红藻掌叶树重量的0.04倍。

5.权利要求1-4任一项所述的蛋白多糖提取方法制备得到的提取物。

6.权利要求1-4任一项所述的蛋白多糖提取方法或权利要求5所述的提取物在制备化妆品中的应用。

7.化妆品，其特征在于，包含权利要求5所述的提取物。