CN110437306A - 基于希夫碱保护的无溶剂机械化学n→c多肽合成方法及回收方法 - Google Patents
基于希夫碱保护的无溶剂机械化学n→c多肽合成方法及回收方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN110437306A CN110437306A CN201910669249.4A CN201910669249A CN110437306A CN 110437306 A CN110437306 A CN 110437306A CN 201910669249 A CN201910669249 A CN 201910669249A CN 110437306 A CN110437306 A CN 110437306A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- schiff base
- polypeptide
- solvent
- amino acid
- derivatives
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 title claims abstract description 76
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 61
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 title claims abstract description 61
- 239000002262 Schiff base Substances 0.000 title claims abstract description 53
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 title claims abstract description 47
- 150000004753 Schiff bases Chemical class 0.000 title claims abstract description 33
- 238000001308 synthesis method Methods 0.000 title claims abstract description 14
- 238000011084 recovery Methods 0.000 title claims description 9
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims abstract description 51
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims abstract description 43
- SMQUZDBALVYZAC-UHFFFAOYSA-N salicylaldehyde Chemical compound OC1=CC=CC=C1C=O SMQUZDBALVYZAC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 38
- 238000010511 deprotection reaction Methods 0.000 claims abstract description 19
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 40
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 39
- -1 Schiff base amino acids Chemical class 0.000 claims description 33
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 27
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 claims description 22
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N trifluoroacetic acid Substances OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 21
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims description 19
- 230000008878 coupling Effects 0.000 claims description 18
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 claims description 18
- 108010016626 Dipeptides Proteins 0.000 claims description 15
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 13
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 claims description 12
- 239000000047 product Substances 0.000 claims description 12
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims description 11
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 9
- 238000002390 rotary evaporation Methods 0.000 claims description 9
- 239000007822 coupling agent Substances 0.000 claims description 7
- 238000000926 separation method Methods 0.000 claims description 7
- 230000018044 dehydration Effects 0.000 claims description 6
- 238000006297 dehydration reaction Methods 0.000 claims description 6
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 claims description 6
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 claims description 6
- 239000012535 impurity Substances 0.000 claims description 6
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 claims description 6
- 239000002243 precursor Substances 0.000 claims description 6
- 238000000746 purification Methods 0.000 claims description 6
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 6
- 238000012546 transfer Methods 0.000 claims description 6
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 5
- 238000005406 washing Methods 0.000 claims description 5
- 230000001476 alcoholic effect Effects 0.000 claims description 4
- 239000012024 dehydrating agents Substances 0.000 claims description 4
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 4
- NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N Ammonia chloride Chemical class [NH4+].[Cl-] NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 230000004913 activation Effects 0.000 claims description 3
- 239000003513 alkali Substances 0.000 claims description 3
- 239000002274 desiccant Substances 0.000 claims description 3
- 238000000605 extraction Methods 0.000 claims description 3
- 238000010025 steaming Methods 0.000 claims description 3
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims description 3
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims description 3
- 238000010189 synthetic method Methods 0.000 claims description 3
- 239000012190 activator Substances 0.000 claims description 2
- WROMPOXWARCANT-UHFFFAOYSA-N tfa trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F.OC(=O)C(F)(F)F WROMPOXWARCANT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims 1
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims 1
- 238000010647 peptide synthesis reaction Methods 0.000 abstract description 34
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 abstract description 31
- 238000000227 grinding Methods 0.000 abstract description 18
- 239000002994 raw material Substances 0.000 abstract description 16
- 239000002699 waste material Substances 0.000 abstract description 11
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 abstract description 5
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 abstract description 4
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 abstract description 4
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 abstract description 2
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 57
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 49
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 38
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 23
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 21
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 21
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 19
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 18
- 125000003088 (fluoren-9-ylmethoxy)carbonyl group Chemical group 0.000 description 12
- 230000008569 process Effects 0.000 description 11
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 11
- 238000005481 NMR spectroscopy Methods 0.000 description 9
- VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N n-Hexane Chemical compound CCCCCC VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- SECXISVLQFMRJM-UHFFFAOYSA-N N-Methylpyrrolidone Chemical compound CN1CCCC1=O SECXISVLQFMRJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- WGLUMOCWFMKWIL-UHFFFAOYSA-N dichloromethane;methanol Chemical compound OC.ClCCl WGLUMOCWFMKWIL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 7
- 239000004570 mortar (masonry) Substances 0.000 description 7
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 description 7
- NQRYJNQNLNOLGT-UHFFFAOYSA-N Piperidine Chemical compound C1CCNCC1 NQRYJNQNLNOLGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 6
- NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N hydroxybenzotriazole Substances O=C1C=CC=C2NNN=C12 NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 description 6
- OTKXCALUHMPIGM-FQEVSTJZSA-N (2s)-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)-5-[(2-methylpropan-2-yl)oxy]-5-oxopentanoic acid Chemical compound C1=CC=C2C(COC(=O)N[C@@H](CCC(=O)OC(C)(C)C)C(O)=O)C3=CC=CC=C3C2=C1 OTKXCALUHMPIGM-FQEVSTJZSA-N 0.000 description 5
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 5
- 238000011160 research Methods 0.000 description 5
- PAQZWJGSJMLPMG-UHFFFAOYSA-N 2,4,6-tripropyl-1,3,5,2$l^{5},4$l^{5},6$l^{5}-trioxatriphosphinane 2,4,6-trioxide Chemical compound CCCP1(=O)OP(=O)(CCC)OP(=O)(CCC)O1 PAQZWJGSJMLPMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- VHYFNPMBLIVWCW-UHFFFAOYSA-N 4-Dimethylaminopyridine Chemical compound CN(C)C1=CC=NC=C1 VHYFNPMBLIVWCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- SJRJJKPEHAURKC-UHFFFAOYSA-N N-Methylmorpholine Chemical compound CN1CCOCC1 SJRJJKPEHAURKC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 4
- WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N Tetrahydrofuran Chemical compound C1CCOC1 WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 150000001370 alpha-amino acid derivatives Chemical class 0.000 description 4
- 235000008206 alpha-amino acids Nutrition 0.000 description 4
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 4
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 4
- HPNMFZURTQLUMO-UHFFFAOYSA-N diethylamine Chemical compound CCNCC HPNMFZURTQLUMO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229960003180 glutathione Drugs 0.000 description 4
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 description 4
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 4
- 125000000999 tert-butyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(*)(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 4
- BNXZHVUCNYMNOS-UHFFFAOYSA-N 1-butylpyrrolidin-2-one Chemical compound CCCCN1CCCC1=O BNXZHVUCNYMNOS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- JWUJQDFVADABEY-UHFFFAOYSA-N 2-methyltetrahydrofuran Chemical compound CC1CCCO1 JWUJQDFVADABEY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- KPFBUSLHFFWMAI-HYRPPVSQSA-N [(8r,9s,10r,13s,14s,17r)-17-acetyl-6-formyl-3-methoxy-10,13-dimethyl-1,2,7,8,9,11,12,14,15,16-decahydrocyclopenta[a]phenanthren-17-yl] acetate Chemical compound C1C[C@@H]2[C@](CCC(OC)=C3)(C)C3=C(C=O)C[C@H]2[C@@H]2CC[C@](OC(C)=O)(C(C)=O)[C@]21C KPFBUSLHFFWMAI-HYRPPVSQSA-N 0.000 description 3
- 239000008186 active pharmaceutical agent Substances 0.000 description 3
- 239000002585 base Substances 0.000 description 3
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 3
- KLBPUVPNPAJWHZ-UMSFTDKQSA-N (2r)-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)-3-tritylsulfanylpropanoic acid Chemical compound C([C@@H](C(=O)O)NC(=O)OCC1C2=CC=CC=C2C2=CC=CC=C21)SC(C=1C=CC=CC=1)(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 KLBPUVPNPAJWHZ-UMSFTDKQSA-N 0.000 description 2
- ZDUMTHLUTJOUML-IBGZPJMESA-N (2r)-3-(tert-butyldisulfanyl)-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)propanoic acid Chemical compound C1=CC=C2C(COC(=O)N[C@@H](CSSC(C)(C)C)C(O)=O)C3=CC=CC=C3C2=C1 ZDUMTHLUTJOUML-IBGZPJMESA-N 0.000 description 2
- OIOAKXPMBIZAHL-LURJTMIESA-N (2s)-2-azaniumyl-5-[(2-methylpropan-2-yl)oxy]-5-oxopentanoate Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)CC[C@H](N)C(O)=O OIOAKXPMBIZAHL-LURJTMIESA-N 0.000 description 2
- FPQQSJJWHUJYPU-UHFFFAOYSA-N 3-(dimethylamino)propyliminomethylidene-ethylazanium;chloride Chemical compound Cl.CCN=C=NCCCN(C)C FPQQSJJWHUJYPU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N DMSO Substances CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IAZDPXIOMUYVGZ-WFGJKAKNSA-N Dimethyl sulfoxide Chemical compound [2H]C([2H])([2H])S(=O)C([2H])([2H])[2H] IAZDPXIOMUYVGZ-WFGJKAKNSA-N 0.000 description 2
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000007821 HATU Substances 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical class [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- CSCPPACGZOOCGX-WFGJKAKNSA-N acetone d6 Chemical compound [2H]C([2H])([2H])C(=O)C([2H])([2H])[2H] CSCPPACGZOOCGX-WFGJKAKNSA-N 0.000 description 2
- 238000010976 amide bond formation reaction Methods 0.000 description 2
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 description 2
- 238000013475 authorization Methods 0.000 description 2
- 239000012964 benzotriazole Substances 0.000 description 2
- 150000001565 benzotriazoles Chemical class 0.000 description 2
- 150000001718 carbodiimides Chemical class 0.000 description 2
- 230000003197 catalytic effect Effects 0.000 description 2
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 2
- 238000003912 environmental pollution Methods 0.000 description 2
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 2
- 231100001261 hazardous Toxicity 0.000 description 2
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 2
- RUOJZAUFBMNUDX-UHFFFAOYSA-N propylene carbonate Chemical compound CC1COC(=O)O1 RUOJZAUFBMNUDX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000006340 racemization Effects 0.000 description 2
- 238000010532 solid phase synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 2
- DLMYFMLKORXJPO-FQEVSTJZSA-N (2R)-2-amino-3-[(triphenylmethyl)thio]propanoic acid Chemical compound C=1C=CC=CC=1C(C=1C=CC=CC=1)(SC[C@H](N)C(O)=O)C1=CC=CC=C1 DLMYFMLKORXJPO-FQEVSTJZSA-N 0.000 description 1
- ASOKPJOREAFHNY-UHFFFAOYSA-N 1-Hydroxybenzotriazole Chemical compound C1=CC=C2N(O)N=NC2=C1 ASOKPJOREAFHNY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FPIRBHDGWMWJEP-UHFFFAOYSA-N 1-hydroxy-7-azabenzotriazole Chemical compound C1=CN=C2N(O)N=NC2=C1 FPIRBHDGWMWJEP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000005160 1H NMR spectroscopy Methods 0.000 description 1
- YEDUAINPPJYDJZ-UHFFFAOYSA-N 2-hydroxybenzothiazole Chemical compound C1=CC=C2SC(O)=NC2=C1 YEDUAINPPJYDJZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WUBBRNOQWQTFEX-UHFFFAOYSA-N 4-aminosalicylic acid Chemical compound NC1=CC=C(C(O)=O)C(O)=C1 WUBBRNOQWQTFEX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960000549 4-dimethylaminophenol Drugs 0.000 description 1
- TZCYLJGNWDVJRA-UHFFFAOYSA-N 6-chloro-1-hydroxybenzotriazole Chemical compound C1=C(Cl)C=C2N(O)N=NC2=C1 TZCYLJGNWDVJRA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical class CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101800004538 Bradykinin Proteins 0.000 description 1
- 108010092674 Enkephalins Proteins 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 1
- BZLVMXJERCGZMT-UHFFFAOYSA-N Methyl tert-butyl ether Chemical compound COC(C)(C)C BZLVMXJERCGZMT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N N,N-Diisopropylethylamine (DIPEA) Chemical compound CCN(C(C)C)C(C)C JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 1
- 238000004617 QSAR study Methods 0.000 description 1
- 206010074268 Reproductive toxicity Diseases 0.000 description 1
- 239000012317 TBTU Substances 0.000 description 1
- CLZISMQKJZCZDN-UHFFFAOYSA-N [benzotriazol-1-yloxy(dimethylamino)methylidene]-dimethylazanium Chemical compound C1=CC=C2N(OC(N(C)C)=[N+](C)C)N=NC2=C1 CLZISMQKJZCZDN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 1
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 1
- 150000001299 aldehydes Chemical class 0.000 description 1
- 229960004909 aminosalicylic acid Drugs 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 239000003125 aqueous solvent Substances 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- QRUDEWIWKLJBPS-UHFFFAOYSA-N benzotriazole Chemical compound C1=CC=C2N[N][N]C2=C1 QRUDEWIWKLJBPS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000001797 benzyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 1
- 238000001311 chemical methods and process Methods 0.000 description 1
- 239000007810 chemical reaction solvent Substances 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 1
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 1
- 238000013461 design Methods 0.000 description 1
- 125000003963 dichloro group Chemical group Cl* 0.000 description 1
- 238000000113 differential scanning calorimetry Methods 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 1
- 238000005265 energy consumption Methods 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- ZIUSEGSNTOUIPT-UHFFFAOYSA-N ethyl 2-cyanoacetate Chemical compound CCOC(=O)CC#N ZIUSEGSNTOUIPT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002360 explosive Substances 0.000 description 1
- 238000001125 extrusion Methods 0.000 description 1
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 1
- 238000005111 flow chemistry technique Methods 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 1
- 238000011065 in-situ storage Methods 0.000 description 1
- 238000011031 large-scale manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 1
- 238000001819 mass spectrum Methods 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 238000003801 milling Methods 0.000 description 1
- 238000001728 nano-filtration Methods 0.000 description 1
- 239000002105 nanoparticle Substances 0.000 description 1
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 1
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 1
- NMHMNPHRMNGLLB-UHFFFAOYSA-N phloretic acid Chemical compound OC(=O)CCC1=CC=C(O)C=C1 NMHMNPHRMNGLLB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000003017 phosphorus Chemical class 0.000 description 1
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 239000000376 reactant Substances 0.000 description 1
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 1
- 230000007696 reproductive toxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000372 reproductive toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 238000013341 scale-up Methods 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 238000010008 shearing Methods 0.000 description 1
- 238000007086 side reaction Methods 0.000 description 1
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 1
- 238000003746 solid phase reaction Methods 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 125000005931 tert-butyloxycarbonyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(OC(*)=O)(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N tetrahydrofuran Natural products C=1C=COC=1 YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 239000010891 toxic waste Substances 0.000 description 1
- 231100000027 toxicology Toxicity 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- 238000000844 transformation Methods 0.000 description 1
- 229910052723 transition metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000003624 transition metals Chemical class 0.000 description 1
- 125000002221 trityl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C1C([*])(C1=C(C(=C(C(=C1[H])[H])[H])[H])[H])C1=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C1[H] 0.000 description 1
- 238000010977 unit operation Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
- C07K7/06—Linear peptides containing only normal peptide links having 5 to 11 amino acids
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
- Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
- Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
- Y02P20/55—Design of synthesis routes, e.g. reducing the use of auxiliary or protecting groups
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
本发明涉及一种基于希夫碱保护的无溶剂机械化学N→C多肽合成方法及回收方法，以水杨醛及其衍生物等与多肽N‑端的第一个氨基酸通过机械研磨形成希夫碱来保护氨基，进而依次与若干其他氨基酸进行无溶剂机械研磨，以N→C的方向逐步形成肽键的多肽合成方法，能够有效避免传统多肽合成法中每步都需进行脱保护的繁复操作和造成的成本浪费和污染问题。本发明的多肽合成方法兼备了原子经济和环境友好的优点，可以更加简便、快捷、节约、高效地大规模合成多肽及其衍生物，溶剂用量最小化、绿色化，而且原料易得，可以回收并直接再利用，可降低原材料浪费、减少废弃物污染、节约成本、利于环保，在有机合成和多肽化学中具有明显的实际应用价值。
Description
技术领域
本发明属于有机合成与多肽化学领域，涉及一种基于希夫碱保护的无溶剂机械化学N→C多肽合成方法及回收方法。
背景技术
多肽的合成方法主要分为生物合成法和化学合成法，本发明所涉及的多肽合成法主要是化学合成法，经典的多肽化学合成方法包括液相多肽合成法(LPPS)和固相多肽合成法(SPPS)。目前多肽化学合成方法方面的创新主要集中在对于这两大类方法的改进优化和绿色化的方面，进展相对缓慢，仍然存在瓶颈和挑战。
1.经典的多肽合成方法
液相多肽合成(LPPS)：肽的早期合成是在溶液中进行的，需要对保护基团进行仔细的操作，并进行多次具有挑战性的检验和分离。这种方法的使用对于长的和更复杂的肽的合成是有问题的，但对于短的肽和片段仍然有效，见文献[1]：Verlander,M.Int.J.Pept.Res.Ther.2007,13,75.。
固相多肽合成(SPPS)：Bruce Merrifield的开创性工作引入了固相多肽合成(SPP)，大大简化了对试剂和溶剂等非系链实体的去除，见文献[2]Merrifield,R.B.J.Am.Chem.Soc.1963,85,2149.。这种方法为自动化打开了大门，因为随后的偶合可以通过一组确定的单元操作反复进行，见文献[3,4]：Gausepohl,H.；Boulin,C.；Kraft,M.；Frank,R.W.Pept.Res.1992,5,315.；Bicciato,S.；Bagno,A.；Dettin,M.；Buso,O.；DiBello,C.Chem.Eng.Technol.1995,18,210.。因此，采用SPPS方法合成了许多具有挑战性的多肽，见文献[5,6]：Winkler,D.F.H.；Tian,K.Amino Acids 2015,47,787.；Made,V.；Els-Heindl,S.；Beck-Sickinger,A.G.Beilstein J.Org.Chem.2014,10,1197.。最初使用了N-α-Boc保护的氨基酸构建基元模块(Boc/苄基策略)。后来，Fmoc/tBu策略才获得了广泛的应用，主要是因为它避免了使用有害的HF来从固相载体上剪切和最终脱保护，见文献[7]：Behrendt,R.；White,P.；Offer,J.J.Pept.Sci.2016,22,4.。然而，SPPS还远远不够完美，特别是在绿色方面。典型的合成需要过量的氨基酸、碱和偶联剂来在每一步实现最大的转化率。此外，Fmoc氨基酸的原子经济性很差，因此可以认为其绿色证书不太好。经常被忽视的是使用大量过量的哌啶(>20当量)来促进Fmoc脱除的完成。这些工艺还依赖于在每次操作后使用大量过量的溶剂清洗树脂。这导致其过程质量强度(PMI：所有输入材料的总质量与分离后所得产品的质量之比)的增加，商品成本比小分子要高得多。由于生长的肽链聚集是一个常见问题，疏水多肽的合成面临着额外的挑战，见文献[8,9]：Ludwick,A.G.；Jelinski,L.W.；Live,D.；et al.Am.Chem.Soc.1986,108,6493.；Masuda,K.；Ooyama,H.；Shikano,K.；et al.J.Pept.Sci.2015,21,454.。通常需要使用专用树脂、溶剂和较低的树脂负载，从而进一步影响工艺的绿色性和商品成本，见文献[10-12]：de la Torre,B.G.；Jakab,A.；Andreu,D.Int.J.Pept.Res.Ther.2007,13,265.；García-Martín,F.；Quintanar-Audelo,M.；García-Ramos,Y.；et al.J.Comb.Chem.2006,8,213.；Mukherjee,S.；Huo,L.；Thibodeaux,G.N.；van derDonk,W.A.Org.Lett.2016,18,6188.。另一方面，大量的树脂在完成多肽合成后都不能再用，因此，大规模生产时会产生不可降解的毒性废弃物，而造成严重的环境污染问题。
2.经典多肽合成方法的改进
2.1偶联剂
尽管酰胺键的形成是制药工业中最重要的转化之一，但它仍然缺乏通用的和强大的催化方法。Beller、Milstein、Gooβen和Sheppard的出色报告为未来的发展铺平了道路，见文献(13)Dong,K.；Fang,X.；Jackstell,R.；et al.J.Am.Chem.Soc.2015,137,6053.；(14)Gnanaprakasam,B.；Milstein,D.J.Am.Chem.Soc.2011,133,1682.；(15)Gunanathan,C.；Ben-David,Y.；Milstein,D.Science 2007,317,790.；(16)Krause,T.；Baader,S.；Erb,B.；Gooβen,L.J.Nat.Commun.2016,7,11732.；(17)Sabatini,M.T.；Boulton,L.T.；Sheppard,T.D.Sci.Adv.2017,3,No.e1701028.，但要实现活性药物成分(API)成熟的应用和可行的催化工艺之路还很漫长。仅从毒理学和管理学的角度来看，要求原料药中过渡金属的残留量非常低，通常低于或等于10ppm，这进一步增加了技术挑战。因此，目前多肽合成中大多数酰胺偶联方案都涉及苯并三唑衍生物的应用。其中的关键实例是尿盐/胺盐HATU、HCTU和TBTU；磷盐PyBOP、PyAOP和PyCLOCK；碳化二亚胺与HOBt、HOAt或6-Cl-HOBt的组合，见文献[18,19]：El-Faham,A.；Albericio,F.Chem.Rev.2011,111,6557.；Albericio,F.；El-Faham,A.Org.Process Res.Dev.2018,22,760.。这些试剂提供了高偶合效率和低氨基酸外消旋化，并且以稳定的固体形式呈现，其中一些甚至在溶液中都很稳定。然而，据报道苯并三唑基序具有爆炸性，使其在高温下难以放大生产规模，见文献[20]：Wehrstedt,K.D.；Wandrey,P.A.；Heitkamp,D.J.Hazard.Mater.2005,126,1.。此外，这些试剂的原子效率都非常低。
在肽合成过程中，特别是长肽合成过程中，酰胺键的绿色形成还没有通用的解决方案。其中一个巨大的挑战是，在过去的十年中，多肽的复杂性显著增加，许多肽产品现在含有超过30个氨基酸，见文献[21]：Lau,J.L.；Dunn,M.K.Bioorg.Med.Chem.2018,26,2700.。该领域太广泛，无法从某个角度进行详细介绍，因为会不断地开发出新的偶联剂，而没有对其可持续性特性进行充分测试。氰基乙酸乙酯(羟基亚氨基)酯“Oxyma pure”，文献[22]：Subiros-Funosas,R.；Prohens,R.；Barbas,R.；et al.Chem.-Eur.J.2009,15,9394.；与碳化二亚胺联合使用，其衍生的尿盐(COMU)，文献[23]：El-Faham,A.；Subiros Funosas,R.；Prohens,R.；Albericio,F.Chem.-Eur.J.2009,15,9404.通常表现出与苯并三唑对应物相同或更好的偶联效率，以及较低的氨基酸外消旋化。由于其在DMF中的不稳定性，其在固相肽自动合成中的应用非常有限。然而，最近的一项研究表明，COMU在γ-缬内酯中相对稳定，这使得它对更绿色的自动化固相多肽合成更具吸引力，文献[24]：Kumar,A.；Jad,Y.E.；de la Torre,B.G.；et al.J.Pept.Sci.2017,23,763.。但必须注意的是，另一份最近出版的报告用差示扫描量热法(DSC)研究后将COMU划归为“最不优选”的多肽生产试剂，文献[25]：Sperry,J.B.；Minteer,C.J.；Tao,J.；et al.Org.Process Res.Dev.2018,22,1262.。因此，COMU的实用性仍然存在疑问。其他较少使用但相对绿色的偶联剂是四甲基氟代脲六氟磷酸酯(TFFH)及其衍生物，它们可以原位生成氨基酰氟化物，并已应用于许多固相肽合成，文献[26]：Carpino,L.A.；El-Faham,A.J.Am.Chem.Soc.1995,117,5401.，以及丙基膦酸酐(T3P)，它们在溶液中稳定并且可能用于SPPS，见文献[27]：http://cphi.euticals.com/wpcontent/uploads/2015/09/EuticalsT3P.pdf.。
目前商业合成大型多肽的最新技术仍主要使用DIC/HOBt。然而，“Oxyma pure”的使用在工业上获得了巨大的吸引力。最后，还提出了形成酰胺键的替代方法，旨在提高原子效率和与各种溶剂的相容性等，文献[28]：Pattabiraman,V.R.；Bode,J.W.Nature 2011,480,471.。这些方法中的大多数都没有如预期的那样绿色，或者还不能完全应用于多肽合成，但我们相信这类研究将为更绿色的合成铺平道路。
2.2溶剂
溶剂是化学过程中产生的绝大多数废物，这与固相多肽合成尤其相关。因此，使用更环保的溶剂或寻找减少或回收溶剂的方法是很有兴趣的。用于固相多肽合成的主要溶剂为DMF、NMP，少量溶剂为二氯甲烷、二乙醚和叔丁基甲醚。所有这些溶剂都有各种危险。最重要的是，DMF和NMP具有生殖毒性危害，可能受到欧洲化学品注册、评估、授权和限制法规(REACH)的限制或授权，这可能最终阻止使用这些溶剂，文献[29]：Regulation(EC)No.1907/2006of the European Parliament and of the Council of 18December2006concerning the Registration,Evaluation,Authorisation and Restriction ofChemicals(“REACH”).。因此，有必要研究适用于多肽合成的新型绿色溶剂以及使多肽化学与绿色溶剂相容的新合成策略。理想的溶剂应能溶解所有的肽合成试剂，实现高效的酰胺键形成反应和脱保护，并能膨胀所选的固相载体。
近年来，许多绿色溶剂被用于肽合成。例如，2-甲基四氢呋喃(2-Me-THF)已用于聚乙二醇基载体(Chemmatrix)上的Aib-脑啡肽五肽的固相合成。偶合条件为2-甲基中的DIC/Oxyma pure，2-甲基四氢呋喃中的Fmoc基团用20％哌啶去除，文献[30]：Jad,Y.E.；Acosta,G.A.；Khattab,S.N.；et al.Amino Acids 2016,48,419.。最近，γ-缬内酯已在SPPS中作为DMF的替代物用于在Chemmatrix树脂上合成Aib-ACP十肽，文献[24]。此种情况下，DMF仍用于洗涤和Fmoc脱除步骤。然而，同样的作者描述了在聚苯乙烯和聚乙二醇(Chemmatrix)树脂上使用20％的哌啶在γ-缬内酯中成功地去除Fmoc，文献[31]：Jad,Y.E.；Govender,T.；Kruger,H.G.；et al.Org.Process Res.Dev.2017,21,365.。有趣的是，作者还指出，最常见的Fmoc氨基酸衍生物在大于0.1m时可溶于γ-缬内酯，这使得可能用于自动化合成的溶剂。碳酸丙烯酯已被用于溶液中的多肽合成(Boc/Bn策略)和Chemmatrix树脂上的非肽缓激肽(Fmoc/tBu策略)的手动固相合成。固相偶合时间比平时长(2×1小时)，但在这种情况下，偶合和Fmoc脱除都是在碳酸丙烯酯中进行的。同一课题组已经发表了对各种树脂在绿色溶剂中膨胀的深入研究，文献[32]：Lawrenson,S.；North,M.；Peigneguy,F.；Routledge,A.GreenChem.2017,19,952.，我们认为这将对将来的绿色合成肽极为有用。
最近，一项针对SPPS的DMF替代品的深入研究强调，正丁基吡咯烷酮(NBP)是某些应用的合适替代品，文献[33]：Lopez,J.；Pletscher,S.；Aemissegger,A.；etal.Org.Process Res.Dev.2018,22,494.。突出显示的缺点之一是，NBP的粘度比DMF等已建立的溶剂更高，尽管在合成过程中，加热被认为是克服这一问题的一种实用方法。然而，尽管已发表的替代溶剂大多数示例用于非常短的模型肽。需要用更大多肽的合成来举例说明这些发现应该有助于工业吸收应用。
在水中实现SPP将解决与有毒有害溶剂使用相关的主要可持续性问题。虽然目前还没有通用的解决方案，但有一些成功的案例，都是在室温下进行的，文献[34-37]：(34)Hojo,K.；Shinozaki,N.；Hara,A.；et al.Protein Pept.Lett.2013,20,1122.；(35)Galanis,A.S.；Albericio,F.；M.Org.Lett.2009,11,4488.；(36)Knauer,S.；Michael,T.；Roese,L.；Avrutina,O.；Kolmar,H.WO 2016050764A1,2016.；(37)Gabriel,C.M.；Keener,M.；Gallou,F.；Lipshutz,B.H.Org.Lett.2015,17,3968.。例如，用EDC-HONB作为偶联剂，在两性离子清洁剂的存在和微波辐射的辅助下结合某些受Boc保护的氨基酸，在聚乙二醇基树脂上成功地在水中合成亮氨酸-脑啡肽，文献[38]：(38)Hojo,K.；Ichikawa,H.；Maeda,M.；et al.J.Pept.Sci.2007,13,493.。纳米颗粒形式的Fmoc氨基酸也已成功地在水中实施SPPS，文献[39]：Hojo,K.；Ichikawa,H.；Fukumori,Y.；etal.Int.J.Pept.Res.Ther.2008,14,373.。最近，报道了几种以水溶性保护基团辅助的水溶性SPPS，而且，磺化的Fmoc和Boc保护基团已获得专利，文献[36,39]。此外，还提出了在有机溶剂和水溶液中实施偶合和脱除保护步骤的混合方法。在水性溶剂中进行SPPS，以提高工艺的绿色度，同时尽量减少与水性合成相关的副反应，文献[40]：Collins,J.M.WO2013115813A1,2012.。最后，我们认为还需要更安全、更环保的无氟替代品来替代危险的三氟乙酸。也就是说，在溶液和固相肽合成中逐步合成，与肽制备有关的主要问题之一是需要大量的溶剂，特别是在固体载体上合成(大肽为2000-5000kg)。目前仍在探索高效、方便、环保的肽合成方法，特别是在肽生产规模扩大的时候，“绿色化学”领域最近发展得很缓慢。出现了一些主要的主题领域：替代原料和无害试剂的使用、天然工艺的使用、替代溶剂的使用、安全化学品的设计、替代反应条件的发展和能耗的最小化。
2.3有助于绿色固相多肽合成的树脂
关于可回收的树脂，目前主要是对2-氯三苯甲基树脂的树脂回收进行了描述，但据我们所知，这仍然是一个非常小的研究领域，文献[41-43]：(41)García-Martín,F.；Bayo-Puxan,N.；Cruz,L.J.；et al.QSAR Comb.Sci.2007,26,1027.；(42)Barlos,K.；Knipp,B.WO 2004056883A2 2004.；(43)Harre,M.；Nickisch,K.；Tilstam,U.React.Funct.Polym.1999,41,111.。许多新型绿色树脂(即聚乙烯乙二醇基树脂)的一个重要特征是，它们在大多数溶剂中，尤其是在三氟乙酸中，膨胀程度明显更大。这使得单位质量树脂所需的溶剂要大得多。根据最近的报告，与聚乙二醇基树脂相比，聚-ε-赖氨酸树脂球体与绿色溶剂的相容性较差。然而，它具有高负载和可生物降解性，树脂的起始材料来源于可再生资源，文献[42]。我们认为理想的树脂应充分膨胀，以便有效发生反应，但膨胀不超过要求，理想情况下应与更绿色的溶剂相容。
3多肽合成方法的创新
近年来，将合成化学在生产尖端药物方面的先进性与减少其对环境影响的创新方法相匹配就变得至关重要。作为限制化学品对人类和环境负面影响的全球努力的一部分，在多肽合成研究和生产制造中限制或替代常用试剂、溶剂和树脂的压力正在加大。在这方面，学术界和工业界在绿色多肽合成和纯化领域都取得了相应的进展。尽管人们正在努力开发诸如流式多肽合成、绿色标签辅助的LPPS、有机纳滤/膜反应器系统、酶促多肽偶联等新式多肽合成技术，然而，绿色多肽化学仍然是一个相对较小的研究领域，其中许多进展需要很长的时间才能应用到多肽的制造中。
自1990年以来，机械化学通过诱导的机械能促进固体之间反应(例如，在球磨机中研磨所有反应物)的领域迅速扩大，文献[44,45]：James,S.L.；Adams,C.J.；Bolm,C.；etal.Chem.Soc.Rev.2012,41,413.；Stolle,A.；Ranu,B.Ball Milling TowardsGreenSynthesis,:Applications,Projects,Challenges；RSC Green Chemistry,2015。使用氨基甲酸酯保护的短肽(2到5个氨基酸)评估无溶剂合成或最小溶剂合成(液体辅助研磨)。α-氨基酸N-羧基氰醇(NCAS)、BOC保护α-氨基酸或N-羟基琥珀酰亚胺酯，通过在球磨机中与α-氨基酸、酰胺或酯研磨，文献[46-51]：(46)Declerck,V.；Nun,P.；Martinez,J.；Lamaty,F.Chem.,Int.Ed.2009,48,9318.；(47)Bonnamour,J.；Metro,T.-X.；Martinez,J.；Lamaty,F.′Green Chem.2013,15,1116.；(48)V.；Bartolec,B.；Portada,T.；etal.Chem.Commun.2012,48,12100.；(49)Porte,V.；Thioloy,M.；Pigoux,T.；etal.Eur.J.Org.Chem.2016,2016,3505.；(50)Hernandez,J.G.；Juaristi,E.J.Org.Chem.2010,75,7107-7111.；(51)Landeros,J.M.；Juaristi,E.Eur.J.Org.Chem.2017,687-694.。此外，利用机械力化学和流动化学的原理，反应挤出显示了短肽(2-3氨基酸)应用的机械力化学的演变，文献[52]：Yeboue,Y.；Gallard,B.；LeMoigne,N.；et al.ACS Sustainable Chem.Eng.2018,6,16001.。这些出版物已经证明，机械化学是一种环境友好的替代品制备短肽产量高，表观异构非常低。
发明内容
要解决的技术问题
为了避免现有技术的不足之处，本发明提出一种基于希夫碱保护的无溶剂机械化学N→C多肽合成方法及回收方法，解决目前多肽化学合成方法的液相反应比较复杂，分离步骤多、耗时周期长、纯化规模小、生产成本高，而固相反应的生产规模小，原料价格贵、浪费大，树脂类废弃物多和环境污染严重的问题。
技术方案
一种基于希夫碱保护的无溶剂机械化学N→C多肽合成方法，其特征在于步骤如下：
步骤1、氨基酸的活化与偶联：以希夫碱氨基酸，SB＝N-AA1-OH为起始原料，加入脱水偶联剂，置于球磨机中室温下研磨活化0.5-2h后，再加入第二个氨基酸H-AA2-OH，置于球磨机中室温下继续研磨1-3h，直至前一个氨基酸的活化酯消耗殆尽，偶联反应后得到生成物为希夫碱二肽A，即SB＝N-AA1-AA2-OH；所述氨基酸SB＝N-AA1-OH与H-AA2-OH的摩尔比为1:1～1.5；所述脱水偶联剂为1︰1摩尔比的脱水偶联活化剂和碱性物质；
所述AA1和AA2是指由目标多肽的具体氨基酸序列而定的氨基酸；
步骤2、肽的提取与洗涤：将步骤1反应的希夫碱二肽A采用醇类溶剂转入烧杯中，搅拌均匀后，静置0.5-2小时过滤，并用醇类溶剂洗涤，收集滤液；旋蒸，回收滤液中的醇类溶剂，残留物用乙酸乙酯溶解，再依次用饱和氯化铵溶液和蒸馏水各洗涤2-3次，除去未反应完的氨基酸H-AA2-OH、碱和脱水剂残留的杂质得到乙酸乙酯相；将乙酸乙酯相转入三角瓶，加适量干燥剂，静置2～3h；旋蒸，回收乙酸乙酯，抽干；固体残留物经真空干燥，即提取得希夫碱二肽A：SB＝N-AA1-AA2-OH；
步骤3、多肽偶联：重复步骤1～2，重复时：二肽希夫碱再依次与侧链保护的第三个氨基酸H-AA3-OH、直至第n个氨基酸H-AAn-OH进行偶联反应，制备目标序列的多肽的前体化合物B：SB＝N-AA1-AA2······-AAn-OH；
步骤4、希夫碱和侧链脱保护：采用鸡尾酒型脱保护试剂TFA/TIS/H2O＝95:2.5:2.5处理目标序列的多肽的前体化合物B，脱除N-端希夫碱上的水杨醛或其衍生物，以及侧链上的保护基团tBu、Boc、Pbf；反应完毕后，旋蒸，回收三氟乙酸TFA；
步骤5、多肽的分离纯化：将步骤4所得剩余物用4～5倍体积量的溶剂溶解，加乙醚沉淀，过滤或离心分离；然后沉淀用乙醚洗涤2-3次，干燥，即得到目标序列的多肽：H-AAn-······-AA3-AA2-AA1-OH的固体。
所述希夫碱氨基酸是水杨醛及其衍生物与氨基酸反应生成希夫碱氨基酸的分子结构通式为：
一种利用所述合成方法中回收得到水杨醛或其衍生物的方法，其特征在于：将步骤5中分离和洗涤的乙醚上清液合并，转入分液漏斗中，用蒸馏水洗pH＝6-7的弱酸性，再旋蒸，回收溶剂，抽干，剩余物即为水杨醛或其衍生物，分子结构通式为：
一种所述方法制备过程中得到的脱保护后的目标序列多肽，其特征在于：所述H2N-AA1-AA2-XXXXXX-AAn-OH分子结构通式为：
有益效果
本发明提出的一种基于希夫碱保护的无溶剂机械化学N→C多肽合成方法及回收方法，以水杨醛及其衍生物等与多肽N-端的第一个氨基酸通过机械研磨形成希夫碱来保护氨基，进而依次与若干其他氨基酸(除侧链上连有活泼基团如-OH,-SH,-COOH或-NH2等的氨基酸侧链需要保护外，大多数氨基酸无需保护)进行无溶剂机械研磨，以N→C的方向逐步形成肽键的多肽合成方法，能够有效避免传统多肽合成法中每步都需进行脱保护的繁复操作和造成的成本浪费和污染问题。本发明所涉及的水杨醛及其衍生物可以替代多肽合成中的氨基保护基团，与文献[46-51]已报道的同类方法中的Fmo、Boc或α-氨基酸N-羧基氰醇(NCAS)等相比，有利于以更低成本来辅助多肽的分离纯化，剪切后水杨醛及其衍生物不被破坏，容易回收再用。因此，本发明的多肽合成方法兼备了原子经济和环境友好的优点，可以更加简便、快捷、节约、高效地大规模合成多肽及其衍生物，溶剂用量最小化、绿色化，而且原料易得，可以回收并直接再利用，可降低原材料浪费、减少废弃物污染、节约成本、利于环保，在有机合成和多肽化学中具有明显的实际应用价值。
附图说明
图1：基于希夫碱保护的无溶剂机械化学多肽合成方法示意图
图2：基于希夫碱保护的无溶剂机械化学多肽合成方法的技术路线
图3：基于希夫碱保护的无溶剂机械化学多肽合成方法实例流程图
图4：研磨法Fmoc-Glu(OtBu)-OH脱Fmoc保护图示
图5：研磨法Fmoc-Cys(StBu)-OH脱Fmoc保护图示
图6：研磨法合成α-谷氨酸席夫碱图示
图7：研磨法合成α-谷氨酸席夫碱二肽图示
图8：研磨法合成α-谷氨酸席夫碱三肽图示
图9：α-谷胱甘肽的脱保护图示
图10：化合物B6的1HNMR
图11：化合物B6的13HNMR
图12：化合物B6的质谱图
图13：化合物B6的高效液相色谱
具体实施方式
现结合实施例、附图对本发明作进一步描述：
本发明的基于希夫碱保护的无溶剂机械化学多肽合成方法，合成步骤是：(1)希夫碱氨基酸C-端羧基的活化：采用目标多肽N-端的第一个氨基酸与水杨醛或其衍生物形成的希夫碱氨基酸SB＝N-AA1-OH加脱水剂，经球磨机研磨，生成希夫碱氨基酸SB＝N-AA1-OH的活化酯SB＝N-AA1-O-R；(2)与第二个氨基酸的偶联生成二肽希夫碱：待(1)反应完成后，加入适量的第二个氨基酸H-AA2-OH和适当的碱，并置于球磨机中继续研磨，直至前一个氨基酸的活化酯消耗殆尽；(3)肽的提取与洗涤：将(2)反应的混合物用醇类溶剂转入烧杯中，搅拌均匀后，静置30min。过滤，并用醇类溶剂洗涤，收集滤液。旋蒸，回收滤液中的醇类溶剂，残留物用乙酸乙酯溶解，再依次用饱和氯化铵溶液和蒸馏水各洗涤2-3次，除去未反应完的氨基酸H-AA2-OH、碱和脱水剂残留等杂质。将乙酸乙酯相转入三角瓶，加适量干燥剂，静置3h。旋蒸，回收乙酸乙酯，抽干。固体残留物经真空干燥，即得二肽希夫碱A(SB＝N-AA1-AA2-OH)；(4)多肽偶联：重复以上步骤(1)、(2)、(3)，二肽希夫碱再依次与侧链保护的第三个氨基酸(H-AA3-OH)、直至第n个氨基酸(H-AAn-OH)进行偶联反应，制备目标序列的多肽的前体B(SB＝N-AA1-AA2······-AAn-OH)；(5)希夫碱和侧链脱保护：采用鸡尾酒型脱保护试剂TFA/TIS/H2O＝95:2.5:2.5处理目标序列的多肽的前体化合物B，脱除N-端希夫碱上的水杨醛或其衍生物，以及侧链上的保护基团tBu、Boc、Pbf等。反应完毕后，旋蒸，回收三氟乙酸(TFA)；(6)多肽的分离纯化：将(5)所得残留物用适量溶剂溶解，加乙醚沉淀，过滤或离心分离，沉淀用乙醚洗涤2-3次，干燥，即得到目标序列的多肽(H-AAn-······-AA3-AA2-AA1-OH)的固体。(7)水杨醛或其衍生物的回收：将(6)中分离和洗涤的乙醚上清液合并，转入分液漏斗中，用蒸馏水洗至弱酸性(pH＝6-7)，旋蒸，回收溶剂，抽干，残留物即为水杨醛或其衍生物。与目前已有的合成方法相比，本发明的优点是：可以更加简便、快捷、节约、高效地合成制备目标序列的多肽，所用氨基酸原料中，除N-端第一个氨基酸的氨基用水杨醛或其衍生物的希夫碱保护外，其余氨基酸无需保护(但如果侧链上有活泼基团如-OH,-SH,-COOH或-NH2等，则需要保护)，能够省去传统多肽合成法中每步偶联后都要脱保护的繁复操作，而且水杨醛或其衍生物可以回收并直接再利用，降低原材料浪费，减少废弃物污染，节约成本，利于环保。本发明的详细合成路线见图2。
所述希夫碱氨基酸采用2018年申请的、专利申请号为201810206775.2的发明专利中提出的方法制备得到。
本发明中一些常用的缩写具有以下含义：
Boc：叔丁氧羰基
DCM：二氯甲烷CH2Cl2
DMAP:4-二甲氨基吡啶
DMF:N,N-二甲基甲酰胺
EDC-HCl:1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐
Fmoc：芴甲氧羰基
HATU:2-(7-氧化苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐
HOBT:1-羟基苯并三唑
HBTU:O-苯并三氮唑-四甲基脲六氟磷酸盐
NMM:N-甲基吗啉
NMP:N-甲基吡咯烷酮
PyBop:六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基磷
PG:保护基团
PSS:含磷小分子载体
tBu:叔丁基
TFA：三氟乙酸
THF：四氢呋喃
Trt:三苯甲基
具体实施方式：
以下将参照实例合成α-谷胱甘肽过程对本发明作进一步的详细描述，但本发明不限于该具体实例。本发明适用于基于希夫碱保护的无溶剂机械化学多肽合成方法，反应原理与实例路线如图3：
实际操作步骤
1.原料制备
1.1研磨法Fmoc-Glu(OtBu)-OH脱Fmoc保护，见图4
称量Fmoc-Glu(OtBu)-OH 0.42g(1mmol)于研钵中，然后向研钵中加154uL二乙胺，室温下手动研磨脱保护。TLC监测反应(甲醇：二氯甲烷＝3:17(即15％的甲醇二氯甲烷),V/V)，直至反应原料Fmoc-Glu(OtBu)-OH全部反应完,则反应结束，反应时间为60min。反应结束后，加入溶剂乙醇溶解，然后旋蒸除去二乙胺，然后再加入10mL的乙醇溶解产物，倒入250mL的烧杯中，加入50mL的正己烷，有大量白色固体析出，过滤得到白色固体。产率为80％。结构表征数据：1H NMR(400MHz,D2O),δ(ppm):1.43(s,9H)，2.08(m,2H)，2.44(m,2H)，3.73(t,1H).13C NMR(100MHz,D2O),δ(ppm)：25.7，27.2，31.2，54.0，82.9，173.9，174.1ppm，符合结构信息。可见，研磨法脱Fmoc-Glu(OtBu)-OH中的Fmoc保护基团是可行的，虽然产率不如液相法高，脱保护时间较长，而且反应过程中不用溶剂，绿色环保。
1.2研磨法Fmoc-Cys(StBu)-OH脱Fmoc保护，见图5。
称量Fmoc-Cys(Trt)-OH 0.58g(1.00mmol)于研钵中，然后向研钵中加154uL二乙胺，室温下研磨脱保护。TLC监测反应(甲醇：二氯甲烷＝3:17(即15％的甲醇二氯甲烷),V/V)，直至反应原料Fmoc-Cys(Trt)-OH全部反应完,则反应结束，反应时间为70min。反应结束后，旋蒸除去溶剂乙醇以及多余二乙胺，然后加入5mL的乙醇溶解产物，倒入250mL的烧杯中，加入50mL的正己烷，有大量白色固体析出，过滤得到白色固体。产率为85％。结构表征数据：1H NMR(400MHz,d6-Acetone)δ(ppm):7.51-7.24(m,15H),3.64(t,1H),2.60(m,2H)，符合结构信息。另外δ＝2.05ppm处的峰为氘代丙酮的溶剂峰。
1.3研磨法合成α-谷胱甘肽。
1.3.1研磨法合成α-谷氨酸席夫碱，见图6。
称量1.00gH-Glu(OtBu)-OH(4.92mmol)于研钵中，加入487mg KOH(5.90mmol)快速研磨2min后，加入620uL(5.90mmol)水杨醛，快速研磨10min。TLC监测反应(甲醇：二氯甲烷＝1:4(即20％的甲醇二氯甲烷),V/V)，直至反应原料H-Glu(OtBu)-OH全部反应完,则反应结束，反应时间为10min。反应结束后，加入甲醇溶解，最后产物经柱色谱分离(梯度洗脱，流动相为10％甲醇二氯甲烷，V/V)，得到黄色固体，产率为70％。结构表征数据：1H NMR(400MHz,CD3OD)δ(ppm):8.39(s,1H),7.30,6.80(m,4H),3.91(t,1H),2.47-2.31(m,4H),1.45(s,9H)；13C NMR(100MHz,CD3OD)δ(ppm):27.4,28.3,32.2,81.5,81.7,118.3,119.4,133.6,134.6,166.4,166.7,173.7,174.0。HRMS(ESI)m/z calcd for C16H21KNO5 +[M+H]+＝346.10513,found 346.10544。符合结构信息。另外δ＝49.00ppm处的峰为CD3OD的溶剂峰。
1.3.2研磨法合成α-谷氨酸席夫碱二肽，见图7.
称量1.00gα-谷氨酸席夫碱于研钵中，加入666mg EDC·HCl,469mg HOBt,574uLDIEA,于球磨机中研磨8h。TLC监测反应(甲醇：二氯甲烷＝5:17(即15％的甲醇二氯甲烷),V/V)，直至反应原料α-谷氨酸席夫碱全部反应完,则反应结束，反应时间为6h。反应结束后，加入1.4g H-Cys(Trt)-OH，继续研磨4h,TLC监测反应(甲醇：二氯甲烷＝5:17(即15％的甲醇二氯甲烷),V/V)，直至反应原料活性酯全部反应完,则反应结束，反应时间为6h。反应结束后，加入甲醇溶解，静置10min，过滤除去不溶的杂质，将溶液旋蒸至大约30mL，加入正己烷萃取除去活性酯，TLC监测，萃取三次，活性酯基本上全部被洗掉，旋蒸除去甲醇，加入二氯溶解产物，加入饱和NaCl水溶液洗涤三次，除去EDC·HCl、HOBt，之后将二氯甲烷溶液旋蒸除去，加入大约10mL甲醇溶解，滴入100mL的5℃的pH＝6-7之间的稀盐酸水溶液中，有大量固体析出，放入冰箱静置12h，离心分离得到产物。产率为60％。结构表征数据：1H NMR(400MHz,d6-DMSO)δ(ppm):1.38(s,9H),1.89(m,2H),2.21(m,2H),2.64(s,1H),2.94(s,1H),3.61(m,1H),4.24(m,1H),7.32(m,19H),7.80(s,1H),8.33(s,1H)；13C NMR(100MHz,d6-DMSO)δ(ppm):27.2,27.7,31.3,36.1,62.2,65.8,72.2,80.6,126.6,126.8,127.5,127.8,128.9,129.1,129.6,129.9,147.0,161.5,164.9,165.1,171.0,171.6；HRMS(ESI)m/zcalcd for C38H41N2O6S+[M+H]+＝653.26798,found 653.26727，符合预期结构信息。
1.3.3研磨法合成α-谷氨酸席夫碱三肽，见图8。
称量2.00gα-谷氨酸席夫碱二肽于研钵中，加入700mg EDC·HCl，497mgHOBt，600uL DIEA于球磨机中研磨8h。TLC监测反应(甲醇：二氯甲烷＝5:17(即15％的甲醇二氯甲烷)，V/V)，直至反应原料α-谷氨酸席夫碱二肽全部反应完,则反应结束，反应时间为14h。反应结束后，加入260mg甘氨酸，继续研磨，TLC监测反应(甲醇：二氯甲烷＝5:17(即15％的甲醇二氯甲烷),V/V)，直至反应原料活性酯全部反应完,则反应结束，反应时间为14h。反应结束后，加入甲醇溶解，静置10min，过滤除去不溶的杂质，将溶液旋蒸除去溶剂甲醇，加入大约50mL乙酸乙酯进行溶解，加入饱和NaCl水溶液洗涤三次，除去HOBt、EDC·HCl，之后将乙酸乙酯溶液旋蒸除去，加入大约30mL甲醇溶液，再加入大约50mL正己烷，萃取除去未反应的谷氨酸席夫碱活性酯以及杂质半胱氨酸活性酯，之后将溶液进一步浓缩至大约10mL，产物经柱色谱分离(流动相为二氯甲烷→1％甲醇/二氯甲烷→3％甲醇/二氯甲烷→甲醇，V/V)进一步提纯得到产物。产率为51％。结构表征数据：1H NMR(400MHz,d6-DMSO)δ(ppm):1.37(s,9H),1.83(m,2H),2.26(m,2H),3.09(d,2H),3.97(s,1H),4.27(s,1H),7.24(m,19H)；13CNMR(100MHz,d6-DMSO)δ(ppm):27.8,31.1,31.2,35.1,37.4,53.8,65.9,79.7,126.5,126.7,127.9,128.0,129.2,144.7,171.9；HRMS(ESI)m/z calcd forC40H42N3O7S+[M+H]+＝710.28945,found 710.25837.符合预期结构信息。
1.4.4α-谷胱甘肽的脱保护，见图9.
称取1.43g产物B5(3mmol)于50ml的圆底烧瓶中，然后先向圆底烧瓶中加入2.16mL的二氯甲烷溶液，超声溶解，再向圆底烧瓶中加入2.16mL的三氟乙酸(TFA)，114uL的TIS，114uL的水(H2O)，室温下脱保护，TLC点板分析，一小时后，反应结束，旋蒸除去反应溶剂，加入6mL甲醇溶解，将溶液转移至2个14mL的离心管中，分别加入11mL的乙醚，有大量白色固体析出，离心分离得到白色固体，再加入8mL乙醚进行洗涤，得到产物。产率为75％。结构表征数据：1H NMR(400MHz,D2O)δ(ppm)：1.34(t,1H),2.22-2.59(m,4H),2.97(m,2H),3.93(d,2H),4.17(t,1H),4.62(m,1H)；13C NMR(100MHz,D2O)δ(ppm):25.4,26.1,29.7,42.1,52.6,55.7,169.6,171.5,174.5,176.8；HRMS(ESI)m/z calcd for C10H18N3O6S+[M+H]+＝308.09108,found 308.09180.结果符合预期结构信息。
Claims (4)
1.一种基于希夫碱保护的无溶剂机械化学N→C多肽合成方法，其特征在于步骤如下：
步骤1、氨基酸的活化与偶联：以希夫碱氨基酸，SB＝N-AA1-OH为起始原料，加入脱水偶联剂，置于球磨机中室温下研磨活化0.5-2h后，再加入第二个氨基酸H-AA2-OH，置于球磨机中室温下继续研磨1-3h，直至前一个氨基酸的活化酯消耗殆尽，偶联反应后得到生成物为希夫碱二肽A，即SB＝N-AA1-AA2-OH；所述氨基酸SB＝N-AA1-OH与H-AA2-OH的摩尔比为1:1～1.5；所述脱水偶联剂为1︰1摩尔比的脱水偶联活化剂和碱性物质；
所述AA1和AA2是指由目标多肽的具体氨基酸序列而定的氨基酸；
步骤2、肽的提取与洗涤：将步骤1反应的希夫碱二肽A采用醇类溶剂转入烧杯中，搅拌均匀后，静置0.5-2小时过滤，并用醇类溶剂洗涤，收集滤液；旋蒸，回收滤液中的醇类溶剂，残留物用乙酸乙酯溶解，再依次用饱和氯化铵溶液和蒸馏水各洗涤2-3次，除去未反应完的氨基酸H-AA2-OH、碱和脱水剂残留的杂质得到乙酸乙酯相；将乙酸乙酯相转入三角瓶，加适量干燥剂，静置2～3h；旋蒸，回收乙酸乙酯，抽干；固体残留物经真空干燥，即提取得希夫碱二肽A：SB＝N-AA1-AA2-OH；
步骤3、多肽偶联：重复步骤1～2，重复时：二肽希夫碱再依次与侧链保护的第三个氨基酸H-AA3-OH、直至第n个氨基酸H-AAn-OH进行偶联反应，制备目标序列的多肽的前体化合物B：SB＝N-AA1-AA2······-AAn-OH；
步骤4、希夫碱和侧链脱保护：采用鸡尾酒型脱保护试剂TFA/TIS/H2O＝95:2.5:2.5处理目标序列的多肽的前体化合物B，脱除N-端希夫碱上的水杨醛或其衍生物，以及侧链上的保护基团tBu、Boc、Pbf；反应完毕后，旋蒸，回收三氟乙酸TFA；
步骤5、多肽的分离纯化：将步骤4所得剩余物用4～5倍体积量的溶剂溶解，加乙醚沉淀，过滤或离心分离；然后沉淀用乙醚洗涤2-3次，干燥，即得到目标序列的多肽：H-AAn-······-AA3-AA2-AA1-OH的固体。
2.根据权利要求1所述基于希夫碱保护的无溶剂机械化学N→C多肽合成方法，其特征在于：所述希夫碱氨基酸是水杨醛及其衍生物与氨基酸反应生成希夫碱氨基酸的分子结构通式为：
3.一种利用权利要求1所述合成方法中回收得到水杨醛或其衍生物的方法，其特征在于：将步骤5中分离和洗涤的乙醚上清液合并，转入分液漏斗中，用蒸馏水洗pH＝6-7的弱酸性，再旋蒸，回收溶剂，抽干，剩余物即为水杨醛或其衍生物，分子结构通式为：
4.一种权利要求2所述方法制备过程中得到的脱保护后的目标序列多肽，其特征在于：所述H2N-AA1-AA2-XXXXXX-AAn-OH分子结构通式为：
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201910669249.4A CN110437306A (zh) | 2019-07-24 | 2019-07-24 | 基于希夫碱保护的无溶剂机械化学n→c多肽合成方法及回收方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201910669249.4A CN110437306A (zh) | 2019-07-24 | 2019-07-24 | 基于希夫碱保护的无溶剂机械化学n→c多肽合成方法及回收方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN110437306A true CN110437306A (zh) | 2019-11-12 |
Family
ID=68431250
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201910669249.4A Pending CN110437306A (zh) | 2019-07-24 | 2019-07-24 | 基于希夫碱保护的无溶剂机械化学n→c多肽合成方法及回收方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN110437306A (zh) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN113621003A (zh) * | 2021-09-10 | 2021-11-09 | 国科温州研究院(温州生物材料与工程研究所) | 一种制备有机分子共价修饰的功能化核酸材料的方法及其应用 |
Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20040038348A1 (en) * | 2002-08-20 | 2004-02-26 | Pena Louis A. | Synthetic heparin-binding growth factor analogs |
| CN107001409A (zh) * | 2014-09-26 | 2017-08-01 | 株式会社钟化 | 疏水性肽的制造方法 |
| CN108299234A (zh) * | 2018-03-14 | 2018-07-20 | 西北工业大学 | 一种无溶剂研磨合成n-希夫碱氨基酸及其衍生物的方法 |
| CN109678927A (zh) * | 2018-12-26 | 2019-04-26 | 西北工业大学 | 一种基于磷酸酯类载体的谷胱甘肽全合成方法 |
| CN109836455A (zh) * | 2019-01-30 | 2019-06-04 | 西北工业大学 | 基于磷或亚磷酰氧基二苯甲醇及其衍生物及辅助的胸腺五肽液相合成方法 |
-
2019
- 2019-07-24 CN CN201910669249.4A patent/CN110437306A/zh active Pending
Patent Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20040038348A1 (en) * | 2002-08-20 | 2004-02-26 | Pena Louis A. | Synthetic heparin-binding growth factor analogs |
| CN107001409A (zh) * | 2014-09-26 | 2017-08-01 | 株式会社钟化 | 疏水性肽的制造方法 |
| CN108299234A (zh) * | 2018-03-14 | 2018-07-20 | 西北工业大学 | 一种无溶剂研磨合成n-希夫碱氨基酸及其衍生物的方法 |
| CN109678927A (zh) * | 2018-12-26 | 2019-04-26 | 西北工业大学 | 一种基于磷酸酯类载体的谷胱甘肽全合成方法 |
| CN109836455A (zh) * | 2019-01-30 | 2019-06-04 | 西北工业大学 | 基于磷或亚磷酰氧基二苯甲醇及其衍生物及辅助的胸腺五肽液相合成方法 |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| CORY A. BONTRAGER ET AL.: ""Hydrolysis of a Ni-Schiff-Base Complex Using Conditions Suitable for Retention of Acid-labile Protecting Groups"", 《JOURNAL OF VISUALIZED EXPERIMENTS》 * |
| 周佳栋 等: ""一种基于共保护策略合成谷胱甘肽的新方法"", 《有机化学》 * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN113621003A (zh) * | 2021-09-10 | 2021-11-09 | 国科温州研究院(温州生物材料与工程研究所) | 一种制备有机分子共价修饰的功能化核酸材料的方法及其应用 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Varnava et al. | Making solid‐phase peptide synthesis greener: a review of the literature | |
| JP6713983B2 (ja) | ペプチド合成方法 | |
| Cortes-Clerget et al. | Tandem deprotection/coupling for peptide synthesis in water at room temperature | |
| JP7063408B1 (ja) | 液相ペプチド製造方法 | |
| Wan et al. | Amide bond-containing monodisperse polyethylene glycols beyond 10000 Da | |
| CN106589071B (zh) | 一种地加瑞克的合成方法 | |
| CN111978369B (zh) | 一种制备多肽的方法 | |
| CN109503655B (zh) | 一种Fmoc-氨基酸酯类衍生化产物的制备方法 | |
| Tung et al. | Peptide 2-formylthiophenol esters do not proceed through a Ser/Thr ligation pathway, but participate in a peptide aminolysis to enable peptide condensation and cyclization | |
| CN110437306A (zh) | 基于希夫碱保护的无溶剂机械化学n→c多肽合成方法及回收方法 | |
| CN101846649B (zh) | 磷酸化和/或糖基化蛋白质或多肽的一步富集修饰测定方法 | |
| He et al. | Solid-phase synthesis of reactive peptide crosslinker by selective deprotection | |
| JP2017537875A (ja) | ペプチドを合成する方法およびペプチドを固相合成する方法を実施するための装置 | |
| CN110372777A (zh) | 一种基于含磷小分子载体pss进行目标多肽的液相合成方法 | |
| Jobin et al. | Toward solid-phase peptide fragment ligation by a traceless-Ugi multicomponent reaction approach | |
| CN103709233A (zh) | 一种Fmoc法固相合成胸腺五肽的方法 | |
| Vandersteen et al. | Liquid-phase combinatorial synthesis: in search of small-molecule enzyme mimics | |
| JPH03504495A (ja) | 反応溶媒として超臨界二酸化炭素を用いての有機合成 | |
| CN105622424B (zh) | 化合物及其制备方法和应用 | |
| CN104177475B (zh) | 一种19f核磁共振探针及其制备方法 | |
| JPH0240986B2 (zh) | ||
| CN112175002A (zh) | 一种以tdpbp衍生载体辅助合成抗sars八肽的方法 | |
| Vivenzio et al. | Application of a new green protocol in solid-phase peptide synthesis: identification of a new green solvent mixture compatible with TBEC/ETT | |
| CN111285921A (zh) | Bdk辅助基团及基于bdk辅助基团的普卡那肽及类似物的液相全合成方法 | |
| Pennington et al. | Alternative strategies which help improve sustainability and “green” peptide manufacturing |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication | ||
| WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |
Application publication date: 20191112 |