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CN110283241B - PtTST1.1和PtTST2.1在制备促进植物生长物质中的应用 - Google Patents

PtTST1.1和PtTST2.1在制备促进植物生长物质中的应用 Download PDF

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CN110283241B
CN110283241B CN201910669634.9A CN201910669634A CN110283241B CN 110283241 B CN110283241 B CN 110283241B CN 201910669634 A CN201910669634 A CN 201910669634A CN 110283241 B CN110283241 B CN 110283241B
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Abstract

本发明公开了一种PtTST1.1和PtTST2.1在制备促进植物生长物质中的应用。本发明方法简便；根据转基因杨树和转基因拟南芥的结果，PtTST1.1和PtTST2.1可以显著促进拟南芥和杨树的生长，对于培育速生高产的植物新品种具有重大基因价值。

Description

PtTST1.1和PtTST2.1在制备促进植物生长物质中的应用
技术领域
本发明涉及一种基因的用途和作用机制的研究方法。
背景技术
木质部是维管植物的运输组织，负责将根吸收的水分和矿物质往上运输，另外还具有支持植物体的作用。更好的运用糖由源(成熟叶片)到库(种子、果实、块根、块茎和木材等)的运输机制，尤其是糖转运蛋白等在运输过程中的作用，对于通过调控植物碳源分配，改良植物的产量和生长速度具有重要意义。
杨树是重要的生物能源树种和环境保护用树，培育出生长迅速和生物量增加的杨树新品种具有巨大的经济价值和生态效益。
由于林木生长周期长、遗传杂合性高、许多性状的遗传机理不明及种间地理隔离、生殖隔离等因素限制，严重阻碍依靠传统林木育种手段定向培育林木速生高产新品种的进程。林木基因工程技术及转基因技术的不断发展，弥补了传统林木育种周期长，定向改良过程复杂，难以控制等不足，为林木遗传育种做出重要贡献。高产、速生基因资源的挖掘及功能解析，培育出新的速生高产品种，是提高杨树产量和生长速度最根本、最经济、最有效的方法。
因此，利用现代分子生物学技术手段，特别是通过基因工程手段提高林木速生高产能力，为提供优良速生高产林木新品种开辟了新途径。
发明内容
本发明的目的在于提供一种PtTST1.1和PtTST2.1在制备促进植物生长物质中的应用和作用机制的研究方法。
本发明的技术解决方案是：
一种PtTST1.1和PtTST2.1在制备促进植物生长物质中的应用。
一种研究PtTST1.1和PtTST2.1在促进植物生长中的作用机制的方法，其特征是：包括下列步骤；
(1)基因的选择和系统进化分析
通过BLAST的方法在毛果杨基因组中找到5个与拟南芥和甜菜中的TST基因同源性较高的基因序列，根据系统进化分析结果，将这5个基因分别命名为PtTST1.1、PtTST1.2、PtTST2.1、PtTST2.2和PtTST3；接下来通过RT-PCR的方法克隆2个与拟南芥中的ST基因同源性最高的基因，分别是PtTST1.1和PtTST2.1；其中，PtTST1.1包含2217对碱基，编码738个氨基酸，分子量79.18KD；PtTST2.1包含2223个碱基，编码740个氨基酸，分子量为79.15KD；
用TMHMM软件http://www.cbs.dtu.dk/services/TMHMM/对杨树的两个TST蛋白进行疏水性分析，发现PtTST1.1有10个可能的跨膜区，PtTST2.1有11个可能的跨膜区，两个TST蛋白有10个共同的跨膜域，并且在跨膜域5和6之间也有一个大约由320个氨基酸组成的亲水性中央大环，这与拟南芥中的TSTs蛋白结构是一致的；
(2)PtTST1.1、PtTST2.1基因的启动子分析
对PtTST1.1和PtTST2.1基因启动子元件进行分析，发现杨树的3个TST基因均有赤霉素响应元件GARE-motif和油菜素内酯的结合位点E-box，并且三个基因的E-box数目均比较多；同时，PtTST2.1还有赤霉素响应元件P-box，PtTST1.1有1个生长素相关的顺式调控元件AuXRR-core，PtTST3有1个脱落酸响应元件ABRE，由此说明，PtTST1.1、PtTST2.1和PtTST3基因可能对赤霉素、生长素、油菜素内酯和脱落酸有响应，同时也会受到这些激素的调控，尤其是赤霉素和油菜素内酯的调控；
表：杨树TST基因启动子区分布的与激素响应相关的顺式作用元件；
用Plant CARE软件对PtTST1.1和PtTST2.1启动子区进行分析；
Figure BDA0002141260050000031
(3)相关载体构建
根据野生型山新杨中PtTST1.1、PtTST2.1和PtTST3的表达模式分析，用2×35S启动子驱动的pCAMBIA2301载体来构建过表达载体；用pA7-YFP载体来构建目标蛋白与YFP的融合蛋白，用来瞬时转化杨树叶肉细胞原生质体；用pCAMBIA1300+pBI101来构建目标启动子与+GUS基因融合的载体用来转化山新杨并通过GUS染色来检测杨树TST蛋白的表达模式；
(4)基因转化和转基因株系的筛选
将构建好的pCambia2301s2-PtTST1.1/PtTST2.1过表达载体分别转化野生型山新杨，得到了转基因杨树；通过PCR检测、GUS染色检测和荧光定量PCR对过表达的转基因苗子进行鉴定，鉴定出PtTST1.1基因的15个过表达株系，鉴定出PtTST2.1基因的10个过表达株系；将构建好的pCAMBIA1300+pBI101-PtTST1.1/PtTST2.1启动子-GUS载体转化野生型山新杨，获得了proPtTST1.1的10个株系，鉴定出proPtTST2.1的11个株系；
对H.Ekkehard Neuhaus教授提供的拟南芥attst1-2::tDNA突变体用三轮PCR的方法进行了鉴定，并将pCambia2301s2-PtTST1.1/PtTST2.1过表达载体转化该突变体，获得了T3代纯合的PtTST1.1/PtTST2.1-attst1-2::tDNA互补的株系；
(5)表达模式分析
以三个月大的野生型山新杨为材料，对杨树的两个TST基因进行了表达模式分析，研究结果发现两个TST基因在多个组织器官中普遍表达，其中PtTST2.1在成熟叶中表达量最高，在木质部、韧皮部和幼叶中也有较高的表达水平，PtTST1.1在木质部中表达量最高，在成熟叶中有较高的表达水平；用山新杨叶肉细胞的原生质体对PtTST1.1和PtTST2.1蛋白进行亚细胞定位，研究发现杨树的这两个TST蛋白均定位在液泡膜上；
用不同浓度的BR将相同状态的野生型山新杨组培苗处理一个月，发现10nM BR处理后，PtTST1.1和PtTST2.1表达量下调；50nM和100nM的BR处理后，PtTST1.1和PtTST2.1的表达量升高；用100nM的BR处理2个月大的野生型山新杨茎，0h、0.5h、1h、2h、4h时取样，研究发现，PtTST1.1和PtTST2.1基因在BR处理0.5h和1h时表达量显著升高，2h时表达量下调，4h时表达量无显著变化，说明TST基因可能参与了BR的应答响应；
对生长于MS生根培养基20d的proPtTST1.1和proPtTST2.1进行GUS染色，酒精脱色后进行拍照，研究发现，PtTST1.1和PtTST2.1在杨树的多个部位都有表达；
(6)转基因拟南芥的功能分析
将T3代纯合的PtTST1.1/PtTST2.1-attst1-2::tDNA互补的株系、野生型col和拟南芥突变体attst1-2::tDNA用10％的次氯酸钠溶液消毒10min，然后用灭菌的去离子水冲洗5次，加水后置于4℃黑暗春化3d；春华结束后，将种子播于不加抗生素的MS培养基上，10d后将幼苗转移至土里面：腐殖土:蛭石＝1:2；
每日定点观察幼苗生长情况，及时记录拍照；当幼苗主茎抽至1cm时，定位为该植株已经抽薹，及时记录抽薹时间、抽薹时莲座叶及茎生叶数目、开花时间；拟南芥生长至48d时，拍照记录苗子生长情况，统计单株荚果数目及单个荚果内种子数量；
研究发现，种子萌发后18d，与野生型相比，突变体的幼苗生长较小，互补植株的苗子长势较大；种子萌发后26天，野生型与突变体的表型没有显著差异，但是互补植株的长势要强于野生型和突变体，由此推测PtTST1.1和PtTST2.1可显著促进拟南芥幼苗期的生长；
研究发现PtTST1.1和PtTST2.1可显著促进拟南芥的开花，与野生型相比，突变体的抽薹时间和开花时间没有显著差异，互补植株的开花时间和抽薹时间显著提前；
(7)转基因杨树的功能分析
pCambia2301s2-PtTST1.1/PtTST2.1过表达杨树继代到含有200mM特美汀的MS生根培养基中，培养4周左右，测量转基因植株的株高、叶片数、节间长、鲜重与野生型相比，转基因杨树的株高、平均节间长度显著高于野生型，而叶片数没有显著差异。
本发明方法简便；根据转基因杨树和转基因拟南芥的结果，PtTST1.1和PtTST2.1可以显著促进拟南芥和杨树的生长，对于培育速生高产的植物新品种具有重大基因价值。
附图说明
下面结合附图和实施例对本发明作进一步说明。
图1是不同植物来源的TST蛋白的氨基酸序列比对及跨膜域和亲水环的位置图。
同源序列比对用DNAMAN分析软件完成。
图2是PtTST1.1、PtTST2.1基因编码蛋白质的系统进化分析示意图。
使用MEGA5.1软件邻位相接法构建进化树，在每个节点的数字代表bootstrap值示意图。
图3是PtTST1.1和PtTST2.1蛋白结构预测。
用TMHMM软件分别对杨树(a)PtTST1.1和(b)PtTST2.1的跨膜域进行分析。
图4是相关载体构建结构图。
(a)PtTST1.1和PtTST2.1过表达载体的载体构建结构图；(b)PtTST1.1和PtTST2.1启动子与GUS基因融合的载体构建结构图；(c)PtTST1.1和PtTST2.1与YFP融合蛋白的载体构建结构图。
图5是杨树PtTST1.1基因过表达转基因株系的鉴定示意图。
图6是杨树PtTST2.1基因过表达转基因株系的鉴定示意图。
图7是PtTST1.1和PtTST2.1的组织特异性表达分析示意图。
利用荧光定量PCR分析‘山新杨’屮目标基因在各组织屮的转录表达水平。杨树EF1β为内参基因。
图8是PtTST1.1、和PtTST2.1蛋白与YFP融合蛋白的亚细胞定位示意图。
图9是PtTST1.1和PtTST2.1对赤霉素的响应方式示意图。
图10是PtTST1.1和PtTST2.1对油菜素内酯的响应方式。
(a)野生型山新杨组培苗用不同浓度的油菜素内酯BL处理1个月，利用荧光定量PCR分析PtTST1.1、PtTST2.1和PtTST3的基因表达量变化；(b)2个月大的野生型山新杨茎用100nM BL处理0h、0.5h、1h、2h和4h，利用荧光定量PCR分析PtTST1.1和PtTST2.1的基因表达量变化。
图11是proTST1.1(A)和proTST2.1(B)启动子GUS染色分析示意图。
图12是PtTST1.1-attst1-2::tDNA互补的表型示意图。
A为发芽后18d的表型，B为发芽后26d的表型。C为real-time检测PtTST1.1的表达量，AtTUB为内参基因。D为PCR鉴定结果。
图13是PtTST2.1-attst1-2::tDNA互补的表型示意图。
A为发芽后18d的表型，B为发芽后26d的表型。C为real-time检测PtTST1.1的表达量，AtTUB为内参基因。D为PCR鉴定结果。
图14是PtTST1.1-attst1-2::tDNA互补的表型示意图。
A为发芽后32d的表型，B为数据统计(莲座叶数目、茎生叶数目、叶片总数目、开花时间、抽薹时间)。
图15是PtTST2.1-attst1-2::tDNA互补的表型示意图。
A为发芽后32d的表型，B为数据统计(莲座叶数目、茎生叶数目、叶片总数目、开花时间、抽薹时间)。
图16是杨树PtTST1.1过表达的表型示意图。A为组培苗30d的表型。B为株高、叶片数、平均节间长度、生根时间的统计。
图17是杨树PtTST2.1过表达的表型示意图。
A为组培苗30d的表型。B为株高、叶片数、平均节间长度、生根时间的统计。
具体实施方式
一种PtTST1.1和PtTST2.1在制备促进植物生长物质中的应用。
一种研究PtTST1.1和PtTST2.1在促进植物生长中的作用机制的方法，其特征是：包括下列步骤；
(1)基因的选择和系统进化分析
通过BLAST的方法在毛果杨基因组中找到5个与拟南芥和甜菜中的TST基因同源性较高的基因序列，根据系统进化分析结果，将这5个基因分别命名为PtTST1.1、PtTST1.2、PtTST2.1、PtTST2.2和PtTST3；接下来通过RT-PCR的方法克隆2个与拟南芥中的ST基因同源性最高的基因，分别是PtTST1.1和PtTST2.1；其中，PtTST1.1包含2217对碱基，编码738个氨基酸，分子量79.18KD；PtTST2.1包含2223个碱基，编码740个氨基酸，分子量为79.15KD；
用TMHMM软件http://www.cbs.dtu.dk/services/TMHMM/对杨树的两个TST蛋白进行疏水性分析，发现PtTST1.1有10个可能的跨膜区，PtTST2.1有11个可能的跨膜区，两个TST蛋白有10个共同的跨膜域，并且在跨膜域5和6之间也有一个大约由320个氨基酸组成的亲水性中央大环，这与拟南芥中的TSTs蛋白结构是一致的；
(2)PtTST1.1、PtTST2.1基因的启动子分析
对PtTST1.1和PtTST2.1基因启动子元件进行分析，发现杨树的3个TST基因均有赤霉素响应元件GARE-motif和油菜素内酯的结合位点E-box，并且三个基因的E-box数目均比较多；同时，PtTST2.1还有赤霉素响应元件P-box，PtTST1.1有1个生长素相关的顺式调控元件AuXRR-core，PtTST3有1个脱落酸响应元件ABRE，由此说明，PtTST1.1、PtTST2.1和PtTST3基因可能对赤霉素、生长素、油菜素内酯和脱落酸有响应，同时也会受到这些激素的调控，尤其是赤霉素和油菜素内酯的调控；
表：杨树TST基因启动子区分布的与激素响应相关的顺式作用元件；
用Plant CARE软件对PtTST1.1和PtTST2.1启动子区进行分析；
Figure BDA0002141260050000091
(3)相关载体构建
根据野生型山新杨中PtTST1.1、PtTST2.1和PtTST3的表达模式分析，用2×35S启动子驱动的pCAMBIA2301载体来构建过表达载体；用pA7-YFP载体来构建目标蛋白与YFP的融合蛋白，用来瞬时转化杨树叶肉细胞原生质体；用pCAMBIA1300+pBI101来构建目标启动子与+GUS基因融合的载体用来转化山新杨并通过GUS染色来检测杨树TST蛋白的表达模式；
(4)基因转化和转基因株系的筛选
将构建好的pCambia2301s2-PtTST1.1/PtTST2.1过表达载体分别转化野生型山新杨，得到了转基因杨树；通过PCR检测、GUS染色检测和荧光定量PCR对过表达的转基因苗子进行鉴定，鉴定出PtTST1.1基因的15个过表达株系，鉴定出PtTST2.1基因的10个过表达株系；将构建好的pCAMBIA1300+pBI101-PtTST1.1/PtTST2.1启动子-GUS载体转化野生型山新杨，获得了proPtTST1.1的10个株系，鉴定出proPtTST2.1的11个株系；
对H.Ekkehard Neuhaus教授提供的拟南芥attst1-2::tDNA突变体用三轮PCR的方法进行了鉴定，并将pCambia2301s2-PtTST1.1/PtTST2.1过表达载体转化该突变体，获得了T3代纯合的PtTST1.1/PtTST2.1-attst1-2::tDNA互补的株系；
(5)表达模式分析
以三个月大的野生型山新杨为材料，对杨树的两个TST基因进行了表达模式分析，研究结果发现两个TST基因在多个组织器官中普遍表达，其中PtTST2.1在成熟叶中表达量最高，在木质部、韧皮部和幼叶中也有较高的表达水平，PtTST1.1在木质部中表达量最高，在成熟叶中有较高的表达水平；用山新杨叶肉细胞的原生质体对PtTST1.1和PtTST2.1蛋白进行亚细胞定位，研究发现杨树的这两个TST蛋白均定位在液泡膜上；
用不同浓度的BR将相同状态的野生型山新杨组培苗处理一个月，发现10nM BR处理后，PtTST1.1和PtTST2.1表达量下调；50nM和100nM的BR处理后，PtTST1.1和PtTST2.1的表达量升高；用100nM的BR处理2个月大的野生型山新杨茎，0h、0.5h、1h、2h、4h时取样，研究发现，PtTST1.1和PtTST2.1基因在BR处理0.5h和1h时表达量显著升高，2h时表达量下调，4h时表达量无显著变化，说明TST基因可能参与了BR的应答响应；
对生长于MS生根培养基20d的proPtTST1.1和proPtTST2.1进行GUS染色，酒精脱色后进行拍照，研究发现，PtTST1.1和PtTST2.1在杨树的多个部位都有表达；
(6)转基因拟南芥的功能分析
将T3代纯合的PtTST1.1/PtTST2.1-attst1-2::tDNA互补的株系、野生型col和拟南芥突变体attst1-2::tDNA用10％的次氯酸钠溶液消毒10min，然后用灭菌的去离子水冲洗5次，加水后置于4℃黑暗春化3d；春华结束后，将种子播于不加抗生素的MS培养基上，10d后将幼苗转移至土里面：腐殖土:蛭石＝1:2；
每日定点观察幼苗生长情况，及时记录拍照；当幼苗主茎抽至1cm时，定位为该植株已经抽薹，及时记录抽薹时间、抽薹时莲座叶及茎生叶数目、开花时间；拟南芥生长至48d时，拍照记录苗子生长情况，统计单株荚果数目及单个荚果内种子数量；
研究发现，种子萌发后18d，与野生型相比，突变体的幼苗生长较小，互补植株的苗子长势较大；种子萌发后26天，野生型与突变体的表型没有显著差异，但是互补植株的长势要强于野生型和突变体，由此推测PtTST1.1和PtTST2.1可显著促进拟南芥幼苗期的生长；
研究发现PtTST1.1和PtTST2.1可显著促进拟南芥的开花，与野生型相比，突变体的抽薹时间和开花时间没有显著差异，互补植株的开花时间和抽薹时间显著提前；
(7)转基因杨树的功能分析
pCambia2301s2-PtTST1.1/PtTST2.1过表达杨树继代到含有200mM特美汀的MS生根培养基中，培养4周左右，测量转基因植株的株高、叶片数、节间长、鲜重与野生型相比，转基因杨树的株高、平均节间长度显著高于野生型，而叶片数没有显著差异。
(8)总结
根据转基因杨树和转基因拟南芥的结果，PtTST1.1和PtTST2.1可以显著促进拟南芥和杨树的生长，对于培育速生高产的植物新品种具有重大基因价值。
序列相关信息：
PtTST1.1-CDS序列，蛋白序列
>PtTST1.1-2217bp
ATGAAGGGAGCATCTCTAGTGGCTATTGCTGCTTGCGTTGGTAACTTCTTGCAAGGATGGGATAATGCTACCATTGCTGGCGCTGTCATTTACGTCAAGAAAGACCTCAAGTTGCAATCGAGTGTGGAAGGTCTTGTTGTGGCCATGTCACTTATTGGAGCCGCTGCTATCACAACATGCTCAGGACCCATATCAGATTGGATTGGTCGGCGTCCAATGCTAATAAGCTCATCAATTCTCTACTTTGTCAGTGGTTTGGTAATGTTTTGGTCACCCAATGTTTATGTCTTGTGCATAGGAAGACTGTTGGATGGATTTGGCGTTGGTTTAGCAGTTACTCTTATTCCACTCTATATTTCTGAGACCGCCCCATCAGATATAAGGGGAATGTTAAATACTCTACCTCAGTTTGCCGGTTCAGGTGGCATGTTTCTGTCGTACTGTATGGTTTTTGGGATGTCATTGACAACTTCACCTAGTTGGAGGATGATGCTTGGAATTCTTTCCATTCCTTCTTTACTATATTTTGTACTCACAGTGTTTTACTTGCCTGAATCTCCTCGATGGCTTGTAAGTAAAGGAAAGATGCTTGAGGCAAAGCAGGTTCTCCAGAGATTGCGTGGCAGGGAAGATGTTTCAGGCGAGATGGCTTTACTGGCTGAAGGTCTTGGTATCGGGGGTGAAACATCCATAGAAGAATACATAATAGGGCCTGCTGATGAAGTCGCTGATGGTCAAGAACCCATTGTTGATAAAGACAAAATCAAGTTATATGGACCTGAAGAAGGCCTTTCCTGGGTTGCTAAACCCGTAACTGGACAGAGTTCTCTTGCTCTTGTATCGCGCCAAGGAAGCATGGTGAACCAAGGCGTGCCTCTTATGGACCCTCTTGTGACTCTTTTTGGTAGTGTTCATGAAAAGCTCCCTGAGACAGGAAGCATGCGGAGCATGCTTTTCCCTAATTTTGGCAGCATGTTTAGTACAGCAGAACCTCACTTTAGGACTGAGCAGTGGGATGAAGAGAGTGTACAAAGAGAAGGTGAGGGCTACACATCAGAGGCTGGTGGTGAGGATTCTGATGACAATTTGCACAGTCCACTAATATCACGCCAGACGACAAGCATGGAAAAGGATATGGCCCACCCAACTTCCCATGGCAGTGCTCTGAGCATGAGACGGCATAGCAGTCTATTGCAAGGAGCTGGGGAGGCAGTTGACGGTACTGGCATTGGTGGGGGTTGGCAGTTGGCATGGAAATGGTCCGAGAGAGAAGGTGAGGATGGAAAGAAGGAAGGGGGGTTTAAAAGGATTTATTTGCACCAAGAGGGAGTTCCTGGATCCCGACGCGGGTCTGTTGTTTCACTTCCTGGTGGTGATGTTCCTGTTGAAGGTGAGTATATCCAGGCTGCTGCTCTGGTAAGCCAGCCAGCTCTTTATTCAAAGGAGCTTATGGATCAGCATCCAGTTGGACCCGCAATGGTTCACCCATCTCAAACAGCTACAAAAGCTCCGATATGGGCCGCTCTGCTTGAACCCGGAGTTAAGCATGCTTTGTTTGTTGGGATGGGAATTCAATTGCTTCAGCAGTTTGCTGGTATAAATGGAGTTCTTTACTACACGCCTCAAATTCTTGAAGACGCAGGTGTTTCGGTTCTTCTTGCAAACTTGGGCCTCAGCACAAACTCTGCATCATTCCTTATAAGTGCATTTACAAACCTCCTTATGCTTCCATGTATAGGAGTAGCGATGAAGCTTATGGATATCTCAGGGAGAAGGACGCTCCTACTTACCACAATTCCTGTGCTGATACTTTCCCTCGTCGTCTTAATTATTTTTGAACTAGTGACTGTGAGCGCAATCGTCAGTGCTGCAATCTTAACTGCCTGTGTTATCATCTTCATCTGCTGTTTTGTGTCGGCTTATGGACCAATTCCTAATATCCTCTGCTCGGAGATCTTCCCGACAAGAGTCCGAGGCCTCTGCATTGCCATTTGTGCCATGGTTTACTGGATTGGAGACATCATTGTCACCTACACACTGCCTGTGATGCTAACTTCCATCGGCCTAGTTGGTATCTTCAGCATTTACGCCGCTGTGTGCGTCATCTCTTGGATCTTTGTTTTCTTGAAGGTCCCAGAGACCAAAGGAATGCCTCTTGAAGTCATTACTGAGTTCTTTGCTGTGGGCGCAAGACAAGCTGCTGCTGCCAAGAATTAA
>PtTST1.1
MKGASLVAIAACVGNFLQGWDNATIAGAVIYVKKDLKLQSSVEGLVVAMSLIGAAAITTCSGPISDWIGRRPMLISSSILYFVSGLVMFWSPNVYVLCIGRLLDGFGVGLAVTLIPLYISETAPSDIRGMLNTLPQFAGSGGMFLSYCMVFGMSLTTSPSWRMMLGILSIPSLLYFVLTVFYLPESPRWLVSKGKMLEAKQVLQRLRGREDVSGEMALLAEGLGIGGETSIEEYIIGPADEVADGQEPIVDKDKIKLYGPEEGLSWVAKPVTGQSSLALVSRQGSMVNQGVPLMDPLVTLFGSVHEKLPETGSMRSMLFPNFGSMFSTAEPHFRTEQWDEESVQREGEGYTSEAGGEDSDDNLHSPLISRQTTSMEKDMAHPTSHGSALSMRRHSSLLQGAGEAVDGTGIGGGWQLAWKWSEREGEDGKKEGGFKRIYLHQEGVPGSRRGSVVSLPGGDVPVEGEYIQAAALVSQPALYSKELMDQHPVGPAMVHPSQTATKAPIWAALLEPGVKHALFVGMGIQLLQQFAGINGVLYYTPQILEDAGVSVLLANLGLSTNSASFLISAFTNLLMLPCIGVAMKLMDISGRRTLLLTTIPVLILSLVVLIIFELVTVSAIVSAAILTACVIIFICCFVSAYGPIPNILCSEIFPTRVRGLCIAICAMVYWIGDIIVTYTLPVMLTSIGLVGIFSIYAAVCVISWIFVFLKVPETKGMPLEVITEFFAVGARQAAAAKN
PtTST2.1-CDS序列，蛋白序列
>PtTST2.1-2223bp
ATGAATGGAGCTGTGCTTGTAGCTGTTGCTGCTGCTATTGGCAACTTATTGCAAGGATGGGATAATGCAACCATCGCAGGGGCTGTTTTATACATAAAAAGGGAATTTCATTTGGAAAGTGAACCTACTATTGAAGGATTAATCGTGGCTACATCACTTGTTGGAGCCACTTTAATTACTACGTGTTCTGGACCCATATCTGATTGTCTAGGCCGCCGTCCTTTGTTGATAATCTCATCAATACTTTATTTTGTTAGTGGTCTTGTAATGTTATGGTCTCCCAATGTTTACGTTCTGCTTTTGGCAAGGCTTTTGGATGGATTTGGCATTGGTTTGGCAGTAACTCTTGTTCCAGTTTATATATCTGAGACAGCACCACCTGAAATAAGGGGGTTGTTGAATACCCTTCCTCAGTTCACTGGATCTGGTGGAATGTTTCTGTCATATTGCATGGTGTTCGGAATGTCCTTGATGGAGGCTCCAAGTTGGAGAGTGATGCTTGGAGTTCTTTTTATTCCCTCAATCATCTATTTTCTATTGACTGTATTTTTCTTGCCTGAGTCTCCAAGGTGGCTTGTAAGTAAAGGACGGATGCTTGAGGCCAAGAAGGTTCTGCAGAGGCTCCGTGGCAGAGAAGATGTTTCTGGTGAGCTGGCTTTACTGGTTGAGGGACTTGGAGTTGGGACTGACATATCAATAGAGGAGTACATAATTGGCCCTGCCAACGATTTCACCGATGACCATGATATAGCTGCCGACAAAGATCATATCAAGTTATATGGGCCTGAACAAGGTCACTCCTGGGTTGCCAGACCTGTCAGTGGGCAGAGTGCTATTGGTCTTGCGTCTAGGCATGGAAGCATGGCAAACCAGAGTCTAGCTCTCATGGATCCTCTTGTCACCCTCTTTGGTAGCGTCCATGAGAAGCTCCCTGAACAAGGAAGCATGAGAAGCATGCTTTTCCCTCACTTTGGAAGCATGTTCAGTGTAGGAGGGAATCATCCTAGAAATGAAGATTGGGATGAGGAGAGCCAAGCCAGAGATGGTGAGGATTATGCATCTGATGGTGCTGCTGGTGATTCTGATGACAATTTGCAGAGTCCATTGATCTCACGTCAGGCAACAAGCATGGACAAGGACATGGTCCCGCCTGCCCATGGAAGCATGTCAAGCATGAGACATGGGAGTCTGATTACAGGAAATGCTGGAGATCCAGTTGGTAACACAGGGATTGGTGGTGGTTGGCAGCTGGCATGGAAATGGTCCGAGAGAGAAGGTCAAGATGGAAAGAAGGAAGGGGGCTTTAAGAGAATTTATTTGCATCAAGAGGGAGCCCCTGGTTCTCGCCGTGGATCTCTGGTTTCTCTGACTGGTGCTGATGCCCATGCAGACAGTGAATACATCCAGGCTGCTGCTCTGGTGAGTCAATCAGCTCTTTATCCCAAGGAGCTTGTGAATGAGAATCCAGCTGGACCAGCTATGGTCCACCCATCTGAAACTGTAGCTAAAGGACCAAGCTGGAGAGATCTTTTTGAACCAGGAGTCAAGCATGCCTTGGCTGTTGGTGTGGGAATTCAAATACTTCAGCAGTTCGCTGGCATAAATGGGGTTCTCTACTATACTCCTCAAATTCTTGAGCAGGCAGGAGTTGGAGTTCTTCTTTCAAACTTGGGCCTCAGTTCAGCTTCTACATCTCTGCTTATCAGCGCCCTTACAACATTGTTGATGCTCCCTTGTATAGCTGTTGCCATGAGGCTCATGGATATCTCTGGGAGAAGGACTTTGCTGCTCACCACCATCCCCGTGTTGATCATATCCCTCATTTTGTTAGTCCTTGGAAGCTTGGTGGATATGGGCAGTGTTGTTAATGCATCAATCTCAACTGTTAGCGTTGTGCTCTACTTCTGTTTTTTCGTCATGGGTTTTGGGCCAATTCCCAACATATTATGTGCAGAGATCTTCCCTACTCGTGTTCGTGGCCTTTGCATAGCCATATGCGCCCTTACTTTCTGGATTTGCGACATCATTGTGACGTATACGCTCCCAGTTATGCTTAAATCTATCGGCCTTGCTGGTGTTTTTGGCTTATATGCAATCGTGTGCGTCATATCATTTGTGTTTGTCTACTTGAAAGTTCCAGAGACCAAGGGCATGCCTCTGGAAGTGATTTCCGAGTTCTTTGCCGTTGGTGCAAAGCAGGCTGCAGCTGCTAAGGAAAACTGA
>PtTST2.1
MNGAVLVAVAAAIGNLLQGWDNATIAGAVLYIKREFHLESEPTIEGLIVATSLVGATLITTCSGPISDCLGRRPLLIISSILYFVSGLVMLWSPNVYVLLLARLLDGFGIGLAVTLVPVYISETAPPEIRGLLNTLPQFTGSGGMFLSYCMVFGMSLMEAPSWRVMLGVLFIPSIIYFLLTVFFLPESPRWLVSKGRMLEAKKVLQRLRGREDVSGELALLVEGLGVGTDISIEEYIIGPANDFTDDHDIAADKDHIKLYGPEQGHSWVARPVSGQSAIGLASRHGSMANQSLALMDPLVTLFGSVHEKLPEQGSMRSMLFPHFGSMFSVGGNHPRNEDWDEESQARDGEDYASDGAAGDSDDNLQSPLISRQATSMDKDMVPPAHGSMSSMRHGSLITGNAGDPVGNTGIGGGWQLAWKWSEREGQDGKKEGGFKRIYLHQEGAPGSRRGSLVSLTGADAHADSEYIQAAALVSQSALYPKELVNENPAGPAMVHPSETVAKGPSWRDLFEPGVKHALAVGVGIQILQQFAGINGVLYYTPQILEQAGVGVLLSNLGLSSASTSLLISALTTLLMLPCIAVAMRLMDISGRRTLLLTTIPVLIISLILLVLGSLVDMGSVVNASISTVSVVLYFCFFVMGFGPIPNILCAEIFPTRVRGLCIAICALTFWICDIIVTYTLPVMLKSIGLAGVFGLYAIVCVISFVFVYLKVPETKGMPLEVISEFFAVGAKQAAAAKEN
PtTST3-CDS序列，蛋白序列
>PtTST3-2160bp
ATGAGGGGAGCTGTTCTTGTAGCACTTGCTGCTACGGTGGGGAATCTGTTACAAGGATGGGATAATTCAACCATTGCAGGATCCATTCCTTACATCAAGGAGGAGTTAAATTTGCAGTCTCAACCAGCAGTAGAAGGGCTGATTGTAGCCATGTCAATTATCGGTGGCACTACTATCACAACATTTTCTGGAACAGTATCAGATATCTTCGGAAGACGTCCGATGCTGATAATGTCGTCAATTCTTTATTTTCTAAGCAGCATAATTATACTATGGGCTCCCAATGTTTATGTCCTACTTTTGGCGAGACTACTTGATGGTTTTGGAGTAGGTCTTGCTGTCACTCTTGTTCCTTTATATATATCTGAAACGGCTCCATCTGAGATGAGGGGGCAATTAAATACACTTCCACAGTTTATGGGTTCAGGAGGAATGTTTTTGTCATATTGCATGGTGTTTTTCATGTCAATGATGGATTCACCAAGCTGGCGGCTGATGCTTGGGACTCTGTCAATCCCCGCTGTCATTTATCTAGCATTGACGCTTTTTTTCTTGCCTGAATCTCCAAGGTGGCTTGTGAGTAAAGGAAAGATGATCGAAGCTAAACAGGTTTTGCAGAGACTTCGTGGTAGGGAAGACGTTTCAGGTGAGCTGGCTTTGCTACTTGAAGGTCTTGGTGTTGGGACCGAAACAACAATAGAAGAGTACATTATTGGCCCAGCCAATGAGATCACTGGTGAAACTGATGCGAAAGAACATGTTAAATTATATGGGCCCGAGGAAGGTGTCTCGTGGATTGCCAAACCCGTCACCGCTGGATTCAGTAGTTTAGGGATGTTGTCCCGTAACGGCAGTTTGGTAAACCAAACCGTGCCTTTGATGGATCCACTTGTCACTCTATTTGGAAGTGTCCATGAGAACATGCCTACAACGGGAAGCACACGCAGCTTGCTTTTTCCAAACACTGCAAGCATGGTGAGTGTTGGAGAAAATCAAGGTAGAAATGAACAGTGGGACGAAGAGGGCGACAAGGATGGCGAGGACTCTTATCCAGAAGCTTCTAGAGCTGATTCTGATGACAATTTGCGAAGCCCGTTACTATCACACCAACATTCTAGCATGGAAAAGGGCATCAGTCATTGGCGCAATAGCAGCCTCGTAAATTCTGGGGAAGAAGGTGCGATGGGTATTGGTGGCGGATGGCAGCTGGCATATAAATGGTCTGAGAAGATAGGTAAAGATGGTAGTAAGGAAGGAGGGCTTCAGAGGATATATTTGCACCAGGAAGGTACGATTGGTTCTCAGAAGCATTCAGTTACTTCCTCTGCTGGAATTGACATTCCTGAAGATGAGTTTGTACAAGCTGCTGCTCTGGTTAGCCAACCTGCTGTTTGTTCTAAGGACATACTGGGTCAAGCATCAGAAGGTCTAGCAGCTATTCACCCATCAGAAATTGCTGCTAAAGGTCCAAGCTGCGGTGACCTTTTTGAACCAGGAGTTAAGCGTGCATTGATTGTTGGAGTAGGGCTTCAAATACTCCAGCAGGTTGCTGGCATAAATGGTGTTCTCTACTACACACCCCAGATTCTTGAGCAAGCAGGGGTGGTAGTTCTTCTATCAAGTCTGGGCTTGAGTTCAGCTTCTGCATCTTACTTGATGAGTATTCTCACTACATTCTTGATGCTTCCTTGCATATTTCTTGCCATGAGACTAATGGATGTCTCTGGCAGAAGATCTATTTTGCTGTACACCATTCCTATCTTGGTAGCATCGCTAGTTGCTTTTGTCCTTGGCAGTATTGTCAACATGGACTCGTCTTTGAAAGCAGTGATCTCTACTGGCAGTGTTATGATCTATTTGAGTTGTTTCGTCATGGGCTTCGGAGTAATTCCAAACATCCTCTGTGCTGAAATTTTCCCGACTCGTGTTCGTGGCATTTGCATCACAATATGTTCTCTGACATATTGGATTGGAAACATCACGATCACGTACTCGCTTCCTGTTATGCTAAACTTCTTTGGCCTTTCTGGTGTCTTCACAATCTATGCCATTGGATGCGCGGTGTCATGGATTTTTGTTTTCTTGAAGGTTCCTGAGACAAAGGGCATGCCCCTTGAAGTCATCACCGAGTTCTTTGCTGTGGGTTCCAAGAATGATTGA>PtTST3
MRGAVLVALAATVGNLLQGWDNSTIAGSIPYIKEELNLQSQPAVEGLIVAMSIIGGTTITTFSGTVSDIFGRRPMLIMSSILYLLSSIIILWAPNVYVLLLARLLDGFGVGLAVTLVPLYISETAPSEMRGQLNTLPQFMGSGGMFLSYCMVFFMSMMDSPSWRLMLGTLSIPAVIYLALTLFFLPESPRWLVSKGKMIEAKQVLQRLRGREDVSGELALLLEGLGVGTETTIEEYIIGPANEITGETDAKEHVKLYGPEEGVSWIAKPVTAGFSSLGMLSRNGSLVNQTVPLMDPLVTLFGSVHENMPTTGSTRSLLFPNTASMVSVGENQGRNEQWDEEGDKDGEDSYPEASRADSDDNLRSPLLSHQHSSMEKGISHWRNSSLVNSGEEGAMGIGGGWQLAYKWSEKIGKDGSKEGGLQRIYLHQEGTIGSQKHSVTSSAGIDIPEDEFVQAAALVSQPAVCSKDILGQASEGLAAIHPSEIAAKGPSCGDLFEPGVKRALIVGVGLQILQQVAGINGVLYYTPQILEQAGVVVLLSSLGLSSASASYLMSILTTFLMLPCIFLAMRLMDVSGRRSILLYTIPILVASLVAFVLGSIVNMDSSLKAVISTGSVMIYLSCFVMGFGVIPNILCAEIFPTRVRGICITICSLTYWIGNITITYSLPVMLNFFGLSGVFTIYAIGCAVSWIFVFLKVPETKGMPLEVITEFFAVGSKND。
SEQUENCE LISTING
<110> 鲁东大学
<120> PtTST1.1和PtTST2.1在制备促进植物生长物质中的应用
<130> 3321
<160> 1
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 2217
<212> DNA
<213> Populus tomentosa
<400> 1
atgaagggag catctctagt ggctattgct gcttgcgttg gtaacttctt gcaaggatgg 60
gataatgcta ccattgctgg cgctgtcatt tacgtcaaga aagacctcaa gttgcaatcg 120
agtgtggaag gtcttgttgt ggccatgtca cttattggag ccgctgctat cacaacatgc 180
tcaggaccca tatcagattg gattggtcgg cgtccaatgc taataagctc atcaattctc 240
tactttgtca gtggtttggt aatgttttgg tcacccaatg tttatgtctt gtgcatagga 300
agactgttgg atggatttgg cgttggttta gcagttactc ttattccact ctatatttct 360
gagaccgccc catcagatat aaggggaatg ttaaatactc tacctcagtt tgccggttca 420
ggtggcatgt ttctgtcgta ctgtatggtt tttgggatgt cattgacaac ttcacctagt 480
tggaggatga tgcttggaat tctttccatt ccttctttac tatattttgt actcacagtg 540
ttttacttgc ctgaatctcc tcgatggctt gtaagtaaag gaaagatgct tgaggcaaag 600
caggttctcc agagattgcg tggcagggaa gatgtttcag gcgagatggc tttactggct 660
gaaggtcttg gtatcggggg tgaaacatcc atagaagaat acataatagg gcctgctgat 720
gaagtcgctg atggtcaaga acccattgtt gataaagaca aaatcaagtt atatggacct 780
gaagaaggcc tttcctgggt tgctaaaccc gtaactggac agagttctct tgctcttgta 840
tcgcgccaag gaagcatggt gaaccaaggc gtgcctctta tggaccctct tgtgactctt 900
tttggtagtg ttcatgaaaa gctccctgag acaggaagca tgcggagcat gcttttccct 960
aattttggca gcatgtttag tacagcagaa cctcacttta ggactgagca gtgggatgaa 1020
gagagtgtac aaagagaagg tgagggctac acatcagagg ctggtggtga ggattctgat 1080
gacaatttgc acagtccact aatatcacgc cagacgacaa gcatggaaaa ggatatggcc 1140
cacccaactt cccatggcag tgctctgagc atgagacggc atagcagtct attgcaagga 1200
gctggggagg cagttgacgg tactggcatt ggtgggggtt ggcagttggc atggaaatgg 1260
tccgagagag aaggtgagga tggaaagaag gaaggggggt ttaaaaggat ttatttgcac 1320
caagagggag ttcctggatc ccgacgcggg tctgttgttt cacttcctgg tggtgatgtt 1380
cctgttgaag gtgagtatat ccaggctgct gctctggtaa gccagccagc tctttattca 1440
aaggagctta tggatcagca tccagttgga cccgcaatgg ttcacccatc tcaaacagct 1500
acaaaagctc cgatatgggc cgctctgctt gaacccggag ttaagcatgc tttgtttgtt 1560
gggatgggaa ttcaattgct tcagcagttt gctggtataa atggagttct ttactacacg 1620
cctcaaattc ttgaagacgc aggtgtttcg gttcttcttg caaacttggg cctcagcaca 1680
aactctgcat cattccttat aagtgcattt acaaacctcc ttatgcttcc atgtatagga 1740
gtagcgatga agcttatgga tatctcaggg agaaggacgc tcctacttac cacaattcct 1800
gtgctgatac tttccctcgt cgtcttaatt atttttgaac tagtgactgt gagcgcaatc 1860
gtcagtgctg caatcttaac tgcctgtgtt atcatcttca tctgctgttt tgtgtcggct 1920
tatggaccaa ttcctaatat cctctgctcg gagatcttcc cgacaagagt ccgaggcctc 1980
tgcattgcca tttgtgccat ggtttactgg attggagaca tcattgtcac ctacacactg 2040
cctgtgatgc taacttccat cggcctagtt ggtatcttca gcatttacgc cgctgtgtgc 2100
gtcatctctt ggatctttgt tttcttgaag gtcccagaga ccaaaggaat gcctcttgaa 2160
gtcattactg agttctttgc tgtgggcgca agacaagctg ctgctgccaa gaattaa 2217

Claims (1)

1.一种PtTST1.1在制备促进拟南芥幼苗期生长和促进拟南芥开花的物质中的应用，所述PtTST1.1的序列如SEQ ID NO.1。
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XP_002300629.1;Tuskan等;《NCBI》;20090225;ORIGIN部分 *
XP_024464012.1;无;《NCBI》;20180409;ORIGIN部分 *

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