CN110251485A

CN110251485A - 一种氧化敏感药物组合物及其制备和应用

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Publication number: CN110251485A
Application number: CN201910640475.XA
Authority: CN
Inventors: 李新松; 何伟; 杜亚伟
Original assignee: Southeast University
Current assignee: Southeast University
Priority date: 2019-07-16
Filing date: 2019-07-16
Publication date: 2019-09-20

Abstract

本发明公开了一种氧化敏感药物组合物及其制备和应用，该药物组合物是双‑正烷基硫代正烷酸甘油磷酸胆碱和药物组成的纳米颗粒，具有氧化敏感快速降解性，不仅稳定性好、长循环，具有靶向解体和快速释药功能。该氧化敏感药物组合物通过薄膜分散法、逆相蒸发法、冷冻干燥法、超声波分散法、喷雾干燥法、膜挤压法或高压均质法制备，简单工艺。该氧化敏感药物组合物用于制备抗肿瘤药物、抗菌药物。

Description

一种氧化敏感药物组合物及其制备和应用

技术领域

本发明是一种氧化敏感药物组合物及其制备和应用，涉及医药技术领域。

背景技术

纳米颗粒是一种重要的药物载体，包括脂质体、固体脂质纳米粒、纳米胶束等，可以负载控释各种药物。疏水性药物通常在纳米颗粒的脂质中。负载药物的纳米颗粒在体内循环过程中，药物易于从纳米颗粒中渗漏出来，影响药效的发挥。

在脂质体表面覆盖亲水性大分子如聚乙二醇，可以延长脂质体在血液中的循环时间，也称为隐形纳米颗粒，减缓药物的渗漏。隐形纳米颗粒不仅具有长循环时间，而且可以利用肿瘤毛细血管增强渗透效应，提高药物的肿瘤靶向作用，提高抗肿瘤效果。但是，由于循环时间过长，又容易导致纳米颗粒在手足部分沉积，例如多柔比星最常见的给药方式是通过纳米颗粒负载注射给药，但是多柔比星长循环纳米颗粒在手足部位的沉积常导致手足病。因此，载药纳米颗粒特别是长循环纳米颗粒在血液中循环有利于到达肿瘤部位，但在肿瘤部位需要快速解体释药，也就是要求具有一定的肿瘤靶向降解作用。

炎症组织、肿瘤组织特别是肿瘤细胞内活性氧(reactiveoxygenspecies，ROS)水平较正常细胞高，细胞处于氧化应激状态。利用其微环境可以促进含有硫醚键的前药分子或载体降解，实现药物的释放和有效药物浓度的提高。

因此，特别需要发明一种既有组装能力，又具有氧化敏感靶向的功能磷脂，其组装的纳米颗粒因氧化敏感而彻底解体而快速释药，克服长循环纳米颗粒释药太慢的缺陷。

蒽环类药物如多柔比星等是一类重要的抗肿瘤药物，但通常具有心脏毒性、骨髓毒性等。负载于脂质体中可以一定程度降低其毒性，但易于泄漏，释药太快。采用聚乙二醇大分子磷脂构建的纳米颗粒载体可以延长药物释放时间，但是过长循环时间导致纳米颗粒易于在手足部位沉积，引起手足病。因此，特别需要发明一种肿瘤部位微环境氧化响应快速释药方法，也就是在肿瘤部位易于快速释药的给药系统。

发明内容

本发明的目的在于提供一种氧化敏感药物组合物及其制备和应用，该药物组合物是双-正烷基硫代正烷酸甘油磷酸胆碱和药物组成的纳米颗粒(根据情况还包括药效学上可接受的助剂)，具有氧化敏感快速裂解性；同时提供一种基于该药物组合物的制备方法和其在制备抗肿瘤药物、抗病毒药物、抗菌药物中的应用。

本发明的技术方案是提供了一种氧化敏感药物组合物，该氧化敏感药物组合物为纳米颗粒，包括双-正烷基硫代正烷酸甘油磷酸胆碱和药物。

其中：

所述的氧化敏感药物组合物还包括药效学上可接受的助剂。

所述的氧化敏感药物组合物为纳米颗粒中，纳米颗粒为脂质体、固体脂质纳米粒、胶束或可降解聚合物纳米粒中的一种或者几种，且颗粒粒径为10～1000nm。

所述的双-正烷基硫代正烷酸甘油磷酸胆碱的结构通式如下：

式中，m是2～9的正整数，n是5～15的正整数。

所述的药物是抗肿瘤药物或者抗菌药物。

所述的抗肿瘤药物是紫杉醇、多烯紫杉醇、卡巴他赛、喜树碱、羟基喜树碱、7-乙基-10-羟基喜树碱、伊立替康、拓扑替康、勒托替康、贝洛替康、7-羟甲基喜树碱、长春新碱、长春瑞滨、安沙霉素、雷帕霉素、阿糖胞苷、依托泊苷、米托蒽醌、多柔比星、佐柔比星、表柔比星、伊达比星、莎巴比星或者铂药物中的一种。

所述铂药物包括顺铂、卡铂、奥沙利铂、奈达铂、乐铂或者顺式-双新癸酸-反式-R,R-1,2-环已二胺合铂(Ⅱ)。

所述的抗菌药物是两性霉素B、庆大霉素、制霉菌素、氟康唑、阿米卡星、左氧氟沙星或者硝酸益康唑中的一种。

所述的药效学上可接受的助剂为磷脂、甘油酯、脂肪酸、吐温、泊洛沙姆或者胆固醇中的一种或多种。

所述的磷脂包括卵磷脂、合成磷脂。

所述的磷脂包括靶向磷脂。

所述可降解聚合物是聚乳酸、巯基乙酸-乳酸共聚物。

所述的磷脂包括二硬脂酸甘油磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇和二硬脂酸甘油磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-叶酸。

本发明还提供了一种氧化敏感药物组合物的制备方法，该氧化敏感药物组合物通过薄膜分散法、逆相蒸发法、冷冻干燥法、超声波分散法、喷雾干燥法、膜挤压法或高压均质法制备。

本发明还提供了一种氧化敏感药物组合物的应用，该氧化敏感药物组合物应用于抗肿瘤药剂、抗病毒药剂、抗菌药剂的制备。

其中：

所述的药剂为液体制剂、固体制剂、半固体制剂、胶囊剂、颗粒剂或凝胶剂。

所述的药剂可以单位剂量形式给药，给药途径可为肠道或非肠道，如口服、肌肉、皮下、鼻腔、口腔粘膜、皮肤、腹膜或直肠等。

从体外降解速度来看，本发明的药物组合物表现氧化敏感快速降解性。

本发明的有益效果：本发明与现有技术相比，具有以下优点：

本发明所述的氧化敏感药物组合物为纳米颗粒，具有氧化敏感快速降解性，在炎症、肿瘤部位或肿瘤细胞中高浓度活性氧存在下，所述双-正烷基硫代正烷酸甘油磷酸胆碱的硫醚键快速氧化，脂质体崩解，快速释放药物，发挥药效；

本发明所述氧化敏感药物组合物，不仅稳定性好、长循环，而且在肿瘤部位因氧化微环境响应而具有靶向解体和快速释药功能；

本发明所述氧化敏感药物组合物可以采用简单工艺，如薄膜法、高压均质法等非常容易地制备，颗粒直径10～1000纳米；

本发明所述的氧化敏感药物组合物是脂质体、固体脂质纳米粒或胶束；

本发明所述的氧化敏感药物组合物制备得到的抗肿瘤药剂，具有优异抗肿瘤活性；

本发明的氧化敏感药物组合物，可用作液体制剂、固体制剂、半固体制剂。

本发明的有益效果是：该药物组合物是双-正烷基硫代正烷酸甘油磷酸胆碱和药物组成的纳米颗粒，具有氧化敏感快速降解性，不仅稳定性好、长循环，具有靶向解体和快速释药功能。该氧化敏感药物组合物通过薄膜分散法、逆相蒸发法、冷冻干燥法、超声波分散法、喷雾干燥法、膜挤压法或高压均质法制备，简单工艺。该氧化敏感药物组合物用于制备抗肿瘤药物、抗菌药物。

附图说明

图1是本发明中14S3-LP脂质体透射电镜图(插入冷冻透射电镜图)；

图2是本发明中14S3-LP脂质体(a)，过氧化氢(100mM处理)3h(b)，12h(c)，48h(d)后透射电镜图；

图3是本发明中14S3-LP脂质体经过氧化氢(100mM)氧化产物核磁共振谱图(a：氧化前，b：氧化后)和高分辨质谱图(c)；

图4是本发明中负载多柔比星的氧化敏感脂质体在不同介质中药物释放行为：(1)DOX/LP，10mMH₂O₂；(2)DOX/14S3-LP；(3)DOX/14S3-LP，10mMH₂O₂；(4)DOX/12S3-LP，10mMH₂O₂；(5)DOX/10S3-LP，10mMH₂O₂。

图5是本发明中载药氧化敏感脂质体的体外细胞毒性(a)A549(b)MCF-7细胞；4T1细胞荷瘤小鼠模型体内抗肿瘤试验(d)肿瘤体积，(e)小鼠体重，(f)肿瘤重量。

具体实施方式

下面结合说明书附图和实施例对本发明的技术方案做进一步详细说明。

本发明的氧化敏感药物组合物，该氧化敏感药物组合物为纳米颗粒，包括双-正烷基硫代正烷酸甘油磷酸胆碱和药物。

其中：

所述的氧化敏感药物组合物还包括药效学上可接受的助剂。

所述的氧化敏感药物组合物为纳米颗粒，其粒径为10～1000nm，纳米颗粒可以是脂质体、固体脂质纳米粒、胶束或可降解聚合物纳米粒；

所述双-正烷基硫代正烷酸甘油磷酸胆碱具有如下结构：

式中，m是2～9的正整数，n是5～15的正整数。

所述药物是抗肿瘤药物、抗菌药物。

所述抗肿瘤药物是以下其中一种：紫杉醇、多烯紫杉醇、卡巴他赛、喜树碱、羟基喜树碱、7-乙基-10-羟基喜树碱、伊立替康、拓扑替康、勒托替康、贝洛替康、7-羟甲基喜树碱、长春新碱、长春瑞滨、安沙霉素、雷帕霉素、阿糖胞苷、依托泊苷、米托蒽醌、多柔比星、佐柔比星、表柔比星、伊达比星、莎巴比星、铂药物。

所述抗菌药物是以下其中一种：两性霉素B、庆大霉素、制霉菌素、氟康唑、阿米卡星、左氧氟沙星或者硝酸益康唑。

所述的磷脂包括卵磷脂、合成磷脂。

所述的磷脂包括靶向磷脂。

所述可降解聚合物是聚乳酸、巯基乙酸-乳酸共聚物。

一种氧化敏感药物组合物的制备方法，通过薄膜分散法、逆相蒸发法、冷冻干燥法、超声波分散法、喷雾干燥法、膜挤压法或高压均质法制备。

一种氧化敏感药物组合物的应用，该氧化敏感药物组合物应用于抗肿瘤药剂、抗病毒药剂、抗菌药剂的制备。

其中：

药物组合物制备成的药剂可以单位剂量形式给药，给药途径可为肠道或非肠道，如口服、肌肉、皮下、鼻腔、口腔粘膜、皮肤、腹膜或直肠等。

从体外药效筛选来看，本发明氧化敏感药物组合物表现良好的抗炎、抗肿瘤活性。

本发明所述氧化敏感药物组合物的制备方法，是由双-正烷基硫代正烷酸甘油磷酸胆碱、药物和药效学上可接受的助剂通过薄膜分散法、逆相蒸发法、冷冻干燥法、超声波分散法、喷雾干燥法、膜挤压法、或高压均质法等方法制备。

下述通过实施例进一步说明本发明，但本发明不限于以下实施例。

实施例中，以下代号表示的磷脂化合物和结构式如下：

8S3-PC双-正辛基二硫代丙酸甘油磷酸胆碱，

10S3-PC双-正癸基硫代丙酸甘油磷酸胆碱，

12S3-PC双-正十二烷基硫代丙酸甘油磷酸胆碱，

14S3-PC双-正十四烷基硫代丙酸甘油磷酸胆碱，

16S3-PC双-正十六烷基硫代丙酸甘油磷酸胆碱。

10S6-PC双-正癸烷基硫代正己酸甘油磷酸胆碱

8S11-PC双-正辛烷基硫代正十一烷酸甘油磷酸胆碱

14S6-PC双-正十四烷基硫代己酸甘油磷酸胆碱

6S11-PC双-正己烷基硫代正十一烷酸甘油磷酸胆碱

实施例1

一种氧化敏感药物组合物，该药物组合物为多柔比星(DOX)氧化响应脂质体，为颗粒状且粒径为110纳米，包括双-正十四烷基硫代丙酸甘油磷酸胆碱、多柔比星、胆固醇和二硬脂酰磷脂酰胆碱DSPC。

其制备方法如下：

将双-正十四烷基硫代丙酸甘油磷酸胆碱12S3-PC0.5mmol、二硬脂酰磷脂酰胆碱DSPC0.5mmol、胆固醇0.3mmol、三氯甲烷20ml加至茄形瓶中溶解，60℃缓慢旋蒸干，氮气吹扫10分钟，在茄形瓶内壁形成一层薄膜；加入20ml硫酸铵溶液，60℃起膜，200nm滤膜过滤，得到脂质体溶液；脂质体溶液用半透膜透析，除去脂质体外面的硫酸铵，将多柔比星盐酸盐0.1mmol加入到脂质体溶液中，50℃下孵育；多柔比星进入脂质体中形成硫酸盐凝胶沉积在脂质体内部，得到多柔比星氧化响应脂质体。

采用激光粒度仪测量脂质体平均粒径为110nm，透射电镜和冷冻透射电镜测量纳米颗粒的形态，显示球形结构(图1)；将脂质体纳米颗粒溶液冻干，得到粉状纳米颗粒。

该实施例制备得到的多柔比星氧化响应脂质体应用于制备抗肿瘤药剂。

实施例2

一种氧化敏感药物组合物，该氧化敏感药物组合物为紫杉醇氧化响应脂质体，为颗粒状且粒径为108纳米，包括双-正十二烷基硫代丙酸甘油磷酸胆碱、紫杉醇、二棕榈酸磷脂酰胆碱、胆固醇。

其制备方法如下：

紫杉醇0.1mmol、双-正十二烷基硫代丙酸甘油磷酸胆碱14S3-PC1.0mmol、二棕榈酸磷脂酰胆碱1.0mmol、胆固醇0.3mmol、三氯甲烷20ml加至茄形瓶中溶解，60℃缓慢旋蒸干，氮气吹扫10分钟，在茄形瓶内壁形成一层薄膜，加入20mlPBS(pH7.4)溶液，60℃起膜，200nm滤膜过滤，得到脂质体纳米颗粒。

采用激光粒度仪测量平均粒径，为108nm，透射电镜测量纳米颗粒的形态，显示球形结构；将紫杉醇氧化响应脂质体纳米颗粒溶液冻干，得到粉状纳米颗粒。

该实施例制备得到的紫杉醇氧化响应脂质体应用于制备抗肿瘤药剂。

实施例3

一种氧化敏感药物组合物，该氧化敏感药物组合物为多烯紫杉醇氧化响应脂质体，为颗粒状且粒径为112纳米，包括双-正十四烷基硫代丙酸甘油磷酸胆碱、多烯紫杉醇和助剂卵磷脂和胆固醇。

其制备方法如下：

多烯紫杉醇0.1mmol、双-正十四烷基硫代丙酸甘油磷酸胆碱14S3-PC0.2mmol、卵磷脂0.7mmol、胆固醇0.3mmol、三氯甲烷20ml加至茄形瓶中溶解，60℃缓慢旋蒸干，氮气吹扫10分钟，在茄形瓶内壁形成一层薄膜；加入20mlPBS(pH7.4)溶液，60℃起膜，200nm滤膜过滤，得到脂质体纳米颗粒溶液。

该实施例制备得到的多烯紫杉醇氧化响应脂质体应用于制备抗肿瘤药剂。

实施例4

一种氧化敏感药物组合物，该氧化敏感药物组合物为紫杉醇氧化响应隐形脂质体，为颗粒状且粒径为120纳米，包括双-正十四烷基硫代丙酸甘油磷酸胆碱、紫杉醇和二硬脂酰磷脂酰胆碱DSPC、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇和胆固醇。

其制备方法如下：

紫杉醇0.1mmol、双-正十四烷基硫代丙酸甘油磷酸胆碱14S3-PC0.5mmol、二硬脂酰磷脂酰胆碱(DSPC)0.5mmol、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇(DSPE-PEG2000，PEG分子量2000)0.1mmol、胆固醇0.3mmol、三氯甲烷20ml加至茄形瓶中溶解，60℃缓慢旋蒸干，氮气吹扫10分钟，在茄形瓶内壁形成一层薄膜；加入20mlPBS(pH7.4)溶液，60℃起膜，200nm滤膜过滤，得到脂质体纳米颗粒溶液；将脂质体纳米颗粒溶液冻干，得到粉状纳米颗粒。

为了便于对照，制备紫杉醇普通隐形脂质体，其制备方法同上，除用等摩尔DSPC替代14-SS3-PC外。

实施例5

一种氧化敏感药物组合物，该氧化敏感药物组合物为多柔比星氧化响应隐形脂质体，为颗粒状且粒径为116纳米，包括双-正十四烷基硫代丙酸甘油磷酸胆碱、多柔比星和助剂胆固醇和二硬脂酰磷脂酰胆碱DSPC。

其制备方法为：

双-正十四烷基硫代丙酸甘油磷酸胆碱14S3-PC0.5mmol、二硬脂酰磷脂酰胆碱(DSPC)0.5mmol、胆固醇0.3mmol、三氯甲烷20ml加至茄形瓶中溶解，60℃缓慢旋蒸干，氮气吹扫10分钟，在茄形瓶内壁形成一层薄膜；加入20ml硫酸铵溶液，60℃起膜，200nm滤膜过滤；得到脂质体溶液用半透膜透析，除去脂质体外面的硫酸铵；将多柔比星盐酸盐0.1mmol加入到脂质体溶液中，50℃下孵育；多柔比星进入脂质体中形成硫酸盐凝胶沉积在脂质体内部；然后，加入二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇(DSPE-PEG2000)0.1mmol与脂质体溶液中共孵育30分钟，得到多柔比星氧化响应隐形脂质体，将脂质体纳米颗粒溶液冻干，得到粉状纳米颗粒。

该实施例制备得到的多柔比星氧化响应隐形脂质体应用于制备抗肿瘤药剂。

实施例6

一种氧化敏感药物组合物，该氧化敏感药物组合物为阿糖胞苷脂质体，为颗粒状且粒径为130纳米，包括双-正十四烷基硫代丙酸甘油磷酸胆碱、阿糖胞苷。

其制备方法如下：

双-正十四烷基硫代丙酸甘油磷酸胆碱14S3-PC0.5mmol、二棕榈酰磷脂酰甘油1.0mmol、胆固醇0.2mmol、三油酸甘油酯0.3mmol置于3mL氯仿-乙醚(体积比1∶1)混合溶剂中，搅拌混合,得到混悬液；盐酸阿糖胞苷水溶液2mL(浓度0.1M)加至上述混悬液中,10000rpm高速搅拌成初乳；取初乳1mL快速注入含质量分数4％葡萄糖和40mM赖氨酸混合溶液10mL中，涡旋振荡成复乳，37℃水浴中振摇，用生理盐水稀释至10mL，得到脂质体混悬液；加入10mL生理盐水，3000rpm离心5min,弃去上清液，用生理盐水洗涤沉淀3次；沉淀用生理盐水稀释制成浓度5mM的阿糖胞苷多囊脂质体。

该实施例制备得到的阿糖胞苷脂质体颗粒应用于制备抗肿瘤药剂。

实施例7

一种氧化敏感药物组合物，该氧化敏感脂质体药物组合物为伊立替康脂质体，为颗粒状且粒径为120纳米，包括双-正十四烷基硫代丙酸甘油磷酸胆碱、阿糖胞苷胆固醇、二硬脂酸甘油磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇(DSPE-PEG2000)和二硬脂酰磷脂酰胆碱(DSPC)。

其制备方法如下：

双-正十四烷基硫代丙酸甘油磷酸胆碱14S3-PC0.5mmol、二硬脂酰磷脂酰胆碱(DSPC)1.0mmol、胆固醇0.2mmol、二硬脂酸甘油磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇(DSPE-PEG2000)0.1mmol溶于适量2mL无水乙醇中，逐滴加入到温度为60℃的蔗糖八硫酸酯三乙胺溶液中，搅拌10min；减压旋蒸除去乙醇，过0.2μm滤膜均化；将空白脂质体混悬液以PBS透析，除去外水相中的蔗糖八硫酸酯三乙胺，得到空白脂质体；分别吸取空白脂质体与伊立替康药物溶液，在60℃水浴条件下孵育载药30min，得到伊立替康脂质体。

该实施例制备得到的伊立替康脂质体颗粒应用于制备抗肿瘤药剂。

实施例8

一种氧化敏感药物组合物，该氧化敏感脂质体药物组合物为长春新碱脂质体，为颗粒状且粒径为132纳米，包括双-正十六烷基硫代丙酸甘油磷酸胆碱、长春新碱、胆固醇、二硬脂酸甘油磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇(DSPE-PEG2000，PEG分子量2000)和二硬脂酰磷脂酰胆碱(DSPC)。

其制备方法如下：

长春新碱0.1mmol、双-正十六烷基硫代丙酸甘油磷酸胆碱16S3-PC0.5mmol、二硬脂酰磷脂酰胆碱(DSPC)2.0mmol、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇(DSPE-PEG2000)0.1mmol、胆固醇0.3mmol、三氯甲烷20ml加至茄形瓶中溶解，60℃缓慢旋蒸干，氮气吹扫10分钟，在茄形瓶内壁形成一层薄膜；加入20mlPBS(pH7.4)溶液，60℃起膜，200nm滤膜过滤，得到脂质体纳米颗粒溶液。

该实施例制备得到的长春新碱脂质体颗粒应用于制备抗肿瘤药剂。

实施例9

一种氧化敏感药物组合物，该氧化敏感脂质体药物组合物为米托蒽醌脂质体，为颗粒状且粒径为120纳米，包括双-正十六烷基硫代丙酸甘油磷酸胆碱、米托蒽醌和药效学上可接受的助剂胆固醇、二硬脂酸甘油磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇(DSPE-PEG2000)和二硬脂酰磷脂酰胆碱(DSPC)。

其制备方法如下：

米托蒽醌0.1mmol、双-正十六烷基硫代丙酸甘油磷酸胆碱16S3-PC0.5mmol、二硬脂酰磷脂酰胆碱(DSPC)2.5mmol、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇(DSPE-PEG2000)0.1mmol、胆固醇0.3mmol、三氯甲烷20ml加至茄形瓶中溶解，60℃缓慢旋蒸干，氮气吹扫10分钟，在茄形瓶内壁形成一层薄膜；加入20mlPBS(pH7.4)溶液，60℃起膜，200nm滤膜过滤，得到脂质体纳米颗粒溶液。

该实施例制备得到的米托蒽醌脂质体颗粒应用于制备抗肿瘤药剂。

实施例10

一种氧化敏感药物组合物，该氧化敏感脂质体药物组合物为两性霉素B脂质体，为颗粒状且粒径为136纳米，包括双-正癸烷基硫代正己酸甘油磷酸胆碱、两性霉素B、胆固醇、二硬脂酸甘油磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇(DSPE-PEG2000)和二硬脂酰磷脂酰胆碱(DSPC)。

其制备方法如下：

两性霉素B0.5mmol、双-正癸烷基硫代正己酸甘油磷酸胆碱10S6-PC0.5mmol、二硬脂酰磷脂酰胆碱(DSPC)5.0mmol、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇(DSPE-PEG2000)0.3mmol、胆固醇1.0mmol、三氯甲烷20ml加至茄形瓶中溶解，60℃缓慢旋蒸干，氮气吹扫10分钟，在茄形瓶内壁形成一层薄膜；加入20mlPBS(pH7.4)溶液，60℃起膜，200nm滤膜过滤，得到脂质体纳米颗粒溶液。

该实施例制备得到的两性霉素B脂质体颗粒应用于制备抗菌药剂。

实施例11

一种氧化敏感药物组合物，该氧化敏感脂质体药物组合物为阿米卡星脂质体，为颗粒状且粒径为142纳米，包括双-正辛烷基硫代正十一烷酸甘油磷酸胆碱、阿米卡星、胆固醇、二硬脂酸甘油磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇(DSPE-PEG4000,PEG分子量4000)和二硬脂酰磷脂酰胆碱(DSPC)。

其制备方法如下：

阿米卡星0.1mmol、双-正辛烷基硫代正十一烷酸甘油磷酸胆碱8S11-PC0.5mmol、二硬脂酰磷脂酰胆碱DSPC0.5mmol、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇(DSPE-PEG2000)0.1mmol、胆固醇0.3mmol、三氯甲烷20ml加至茄形瓶中溶解，60℃缓慢旋蒸干，氮气吹扫10分钟，在茄形瓶内壁形成一层薄膜；加入20mlPBS(pH7.4)溶液，60℃起膜，200nm滤膜过滤，得到脂质体纳米颗粒溶液。

该实施例制备得到的阿米卡星脂质体颗粒应用于制备抗菌药剂。

实施例12

一种氧化敏感药物组合物，该氧化敏感脂质体药物组合物为顺铂脂质体，为颗粒状且粒径为110纳米，包括双-正十四烷基硫代己酸甘油磷酸胆碱、顺铂、卵磷脂、胆固醇。

其制备步骤如下：

双-正十四烷基硫代己酸甘油磷酸胆碱14S6-PC、卵磷脂、胆固醇、DSPE-PEG2000(摩尔比为2:2:2:0.3)于茄型瓶中，加入15mL氯仿溶解，在45℃水浴中旋蒸除去氯仿，在瓶壁形成一层磷脂薄膜；真空除去残留溶剂，并用氮气吹扫；形成磷脂膜后，加入9mL含有9.0mg顺铂的生理盐水溶液，在37℃恒温振荡器中震荡水化1h；水化完成后，涡旋振荡5min，超声10min，得到多层脂质体悬液；脂质体混悬液依次挤压通过450nm、220nm聚碳酸酯滤膜各5遍；得到平均粒径110nm左右、分布均一的顺铂隐形脂质体。

该实施例制备得到的顺铂脂质体颗粒应用于制备抗肿瘤药剂。

实施例13

一种氧化敏感药物组合物，该氧化敏感脂质体药物组合物为拓扑替康脂质体，为颗粒状且粒径为120纳米，包括双-正十四烷基硫代丙酸甘油磷酸胆碱、伊立替康、胆固醇、二硬脂酸甘油磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇(DSPE-PEG2000)和二硬脂酰磷脂酰胆碱(DSPC)。

其制备方法如下：

双-正十四烷基硫代丙酸甘油磷酸胆碱14S3-PC0.5mmol、DSPC0.5mmol、胆固醇0.2mmol、DSPE-PEG20000.1mmol溶于适量2mL无水乙醇中，逐滴加入到温度为60℃的蔗糖八硫酸酯三乙胺溶液中，搅拌10min；减压旋蒸除去乙醇，过0.2μm滤膜均化；将空白脂质体混悬液以PBS透析，除去外水相中的蔗糖八硫酸酯三乙胺，得到空白脂质体；分别吸取空白脂质体与拓扑替康药物溶液，在60℃水浴条件下孵育载药30min，得到伊立替康脂质体。

该实施例制备得到的拓扑替康脂质体颗粒应用于制备抗肿瘤药剂。

实施例14

一种氧化敏感药物组合物，该氧化敏感脂质体药物组合物为多柔比星氧化敏感隐形脂质体系列颗粒，包括双-正烷基硫代正烷酸甘油磷酸胆碱系列(双-正辛基二硫代丙酸甘油磷酸胆碱8S3-PC、双-正癸基硫代丙酸甘油磷酸胆碱10S3-PC、双-正十二烷基硫代丙酸甘油磷酸胆碱12S3-PC、双-正十四烷基硫代丙酸甘油磷酸胆碱14S3-PC、双-正十六烷基硫代丙酸甘油磷酸胆碱16S3-PC)、多柔比星、胆固醇、二硬脂酸甘油磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇(DSPE-PEG2000)。

多柔比星氧化敏感隐形脂质体系列的制备：

双-正烷基硫代正烷酸甘油磷酸胆碱系列(双-正癸基硫代丙酸甘油磷酸胆碱10S3-PC、双-正十二烷基硫代丙酸甘油磷酸胆碱12S3-PC或双-正十四烷基硫代丙酸甘油磷酸胆碱14S3-PC)0.9mmol，与二硬脂酰磷脂酰乙醇胺聚乙二醇DSPE-PEG20000.1mmol、胆固醇0.3mmol和三氯甲烷20ml混合，60℃旋蒸干溶剂成膜，加入20ml250mM硫酸铵溶液水化，60℃起膜，并用超声均化，200nm滤膜过滤，得到氧化敏感隐形脂质体系列纳米颗粒溶液，分别记为10S3-LP、12S3-LP、14S3-LP。

上述脂质体系列溶液用半透膜透析(MWCO8000)2小时，除去脂质体外面的硫酸铵；与0.5微克/毫升多柔比星溶液60℃共孵育2小时，透析除去未负载的多柔比星；多柔比星进入脂质体中形成硫酸盐凝胶沉积在脂质体内部，得到多柔比星氧化响应隐形脂质体系列，分别记为DOX/10S3-LP、DOX/12S3-LP、DOX/14S3-LP。

多柔比星普通隐形脂质体(记为DOX/LP)的制备方法同上，除用等摩尔DSPC替代10S3-PC外。

采用紫外光谱法(波长490nm)测量脂质体溶液中多柔比星的含量，计算多柔比星载药效率(EE％)和载药量(DL％)，结果列于表1中。

采用动态激光光散射方法(DLS)测量脂质体颗粒平均直径和表面电位，结果见表1；可以看出，二硫代磷脂长循环脂质体大小为100纳米左右，表面带负电荷，说明脂质体具有稳定性。

表1.载药(多柔比星)硫代磷脂隐形脂质体的表征

实施例15

14S3-LP氧化敏感隐形脂质体的裂解：

降解实验使用过氧化氢溶液模拟体内氧化环境；实施例14的硫代磷脂隐形脂质体14S3-LP(10μg/mL)2mL与过氧化氢水溶液2mL(100mM)室温下共孵育3、12、48小时；用透射电镜观察脂质体结构变化，结果见图2；并采用质谱和核磁共振谱仪测量脂质体降解产物，结果见图3。

可以看出，未经过氧化氢处理的14S3-LP脂质体呈完整的球形结构；过氧化氢处理3小时后球形脂质体表面出现裂缝；12小时后仅有少量不规则的小直径球形结构，大直径球形脂质体结构不复存在；48小时后视野中看不到球形脂质体，只有降解后的不规则碎片。

14S3-LP脂质体降解产物在858.52和880.50处出现分子离子峰，分别归结为14S3-PC氧化产物亚砜(结构见图3)的[M+H]⁺和[M+Na]⁺峰(理论值分别为858.53，880.52)；结果表明，脂质体在过氧化氢作用下逐渐氧化成亚砜结构，进而硫代磷脂亲水性改变引发脂质体结构破坏，导致脂质体解体；这种硫代磷脂脂质体氧化裂解过程对长循环脂质体氧化敏感彻底崩解和快速充分释药是有利的。

实施例16

多柔比星氧化响应隐形脂质体体外降解释药试验：

实施例14制备的多柔比星氧化响应隐形脂质体溶液系列DOX/10S3-LP、DOX/12S3-LP、DOX/14S3-LP(DOX/LP为对照)各2mL移入透析袋中(MWCO8000Da)，分别置于三类PBS溶液介质(pH7.4，不含H₂O₂，含有20mM或200mM H₂O₂)200mL中(37℃)；在固定时间取样透析液1mL，同时补加相同体积的新鲜透析液；采用紫外光谱法测量样品中多柔比星的浓度(490nm)，计算多柔比星释放率。

结果如图4所示，与负载DOX的普通长循环脂质体(DOX/LP，实施例14)相比，三种负载DOX的氧化敏感长循环脂质体在含过氧化氢的释放介质中均呈现高释放率，24小时内累积释放量可达80％左右；相比之下，在无过氧化氢的释放介质中，负载DOX的氧化敏感隐形脂质体的累积释放量小于20％，由此可见，负载DOX的氧化敏感隐形脂质体具有明显的氧化响应性，并快速释放出负载的DOX药物。

实施例17

体外肿瘤细胞杀伤实验：

实施例14中负载DOX的氧化敏感隐形脂质体(DOX/10S3-LP、DOX/12S3-LP、DOX/14S3-LP(DOX/LP为对照))的体外抗肿瘤效果评价使用A549和MCF-7两种细胞模型；A549和MCF-7细胞以10000个细胞/孔的密度接种于96孔培养板中；设置0.001、0.01、0.1、1和10μg/mL五个浓度梯度，孵育时间为24小时；孵育结束后，吸弃每孔中的培养基，加入MTT溶液20μL，37摄氏度孵育4小时；然后，吸弃每孔中的MTT溶液，加入DMSO溶液150μL；最后，使用酶标仪在490nm波长处读取每孔的吸光度(OD)；根据公式计算细胞活性(cell viability)。

OD_drug代表孵育药物的孔的OD值、OD_control是无药物仅孵育培养基的孔的OD值、OD_blank是只加DMSO的孔的OD值。

结果见图5，与DOX/LP(实施例14)相比，DOX/10S3-LP、DOX/12S3-LP、DOX/14S3-LP具有相对更强的杀伤细胞的效果；DOX为自由药物，具有最快的细胞摄取速度，因而常显示出较强的杀伤细胞效果。

实验例18

动物体内抗肿瘤实验：

裸鼠模型的制备：小鼠选择2月龄，15-20克雌性BALB/c小鼠；收集培养的4T1细胞悬液，浓度为1×10⁷个/ml，以每只0.1ml接种于裸小鼠右侧腋窝皮下，直至肿瘤平均大小0.1立方厘米。

分组与给药：裸鼠移植瘤用游标卡尺测量移植瘤直径，肿瘤生长至75mm³时将动物随机分组，实验动物共20只，随机分5组；同时，各组裸鼠开始尾静脉注射给药，给药方案见组别与给药方案，使用测量瘤径的方法，动态观察受试样品的抗肿瘤效应；肿瘤体积(TV)的计算公式为：TV＝1/2×a×b²(式3-2)，其中a、b分别表示长宽。

组别及给药方案：给药量5mg/kg。

空白组：生理盐水，静脉注射，每三天注射一次，体积为0.2ml，连续3周。

对照组：多柔比星溶于生理盐水组，静脉注射，每三天注射一次，体积为0.2ml，连续3周。普通负载多柔比星DOX/LP隐形脂质体组(实施例14)，静脉注射，每三天注射一次，体积为0.2ml，连续3周。

药物组：DOX/14S3-LP组(实施例14)。静脉注射，每三天注射一次，体积为0.2ml，连续3周。

在实验过程中，小鼠的体重和肿瘤尺寸每两天记录一次；在给药21天后，所有组的小鼠均被处死，将肿瘤分离出来并称重记录，结果见图5。

与空白组、对照组、自由药物组相比，DOX/14S3-LP组表现出明显降低肿瘤体积的效果，说明具有更好的抑制肿瘤生长作用(图5a和5c)；从小鼠体重变化曲线(图5b)可知，多柔比星生理盐水组的体重最低，显示明显的毒副作用；氧化敏感长循环脂质体组的体重较高，与DOX脂质体DOX/LP相当，显示氧化敏感脂质体药物不增加毒性。

实施例19

一种氧化敏感药物组合物，该氧化敏感药物组合物为紫杉醇氧化响应固体脂质纳米粒，粒径为132nm，包括双-正十四烷基硫代丙酸甘油磷酸胆碱、紫杉醇、硬脂酸、泊洛沙姆Poloxamer188。

其制备方法如下：

紫杉醇0.1g、硬脂酸5.0g混合，加热至60℃缓慢溶解，加入20mlPBS(pH7.4)含有双-正十四烷基硫代丙酸甘油磷酸胆碱14S3-PC0.5g和泊洛沙姆Poloxamer1880.5g水溶液中，高速搅拌，高压均质机均值3次，冷却，得到固体脂质纳米粒。

采用激光粒度仪测量平均粒径，为132nm，透射电镜测量纳米颗粒的形态，显示球形结构。

实施例20

一种氧化敏感药物组合物，该氧化敏感药物组合物为紫杉醇氧化响应纳米胶束，粒径为120nm，包括双-正十四烷基硫代丙酸甘油磷酸胆碱、紫杉醇、三辛酸甘油酯、吐温80。

其制备方法如下：

多烯紫杉醇0.1mmol、双-正十四烷基硫代丙酸甘油磷酸胆碱14S3-PC1.0mmol、二棕榈酸磷脂酰胆碱1.0mmol、单辛酸甘油酯2.0mmol、三辛酸甘油酯1.0mmol、吐温800.3mmol加热至60℃缓慢溶解，加入20mlPBS(pH7.4)溶液，高速搅拌，高压均质机均值3次，得到纳米胶束。

采用激光粒度仪测量平均粒径，为120nm，透射电镜测量纳米颗粒的形态，显示球形结构。

实施例21

一种紫杉醇氧化敏感药物组合物，该药物组合物是粒径65nm的纳米颗粒，包括两层结构，其内层是乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA)作为载体包裹紫杉醇形成的载药纳米粒子，外层是双-正十四烷基硫代丙酸甘油磷酸胆碱14S3-PC和二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇(聚乙二醇PEG的分子量2000)构成的氧化敏感脂质分子层。

其通过纳米沉淀法制备得到，具体步骤如下：

1、将紫杉醇0.03克、乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA，分子量MW5-7万，摩尔比LA：GA＝50:50)0.1克溶于10毫升乙腈中，得到聚合物溶液；

2、双-正十四烷基硫代丙酸甘油磷酸胆碱14S3-PC0.015克和二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇(聚乙二醇PEG的分子量2000)0.015克溶于4％乙醇水溶液中，加热到50℃，得到脂质溶液；

3、将聚合物溶液逐滴加入到脂质溶液中，并快速搅拌，然后蜗旋3分钟；之后搅拌2小时，真空除去乙腈；之后离心过滤3次(MWCO10kDa)并与水混悬，冷冻干燥后得到紫杉醇还原敏感脂质药物组合物。

对得到的紫杉醇还原敏感脂质药物组合物采用激光粒度仪测量其平均粒径为65nm，透射电镜测量其形态显示为球形结构。

该实施例制备得到的紫杉醇还原敏感脂质药物组合物应用于制备抗肿瘤制剂。

实施例22

一种多柔比星(DOX)氧化敏感脂质药物组合物，该药物组合物是粒径90nm的纳米颗粒，包括两层结构，其内层是乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA)作为载体包裹多柔比星形成的载药纳米粒子，外层是双-正十二烷基硫代丙酸甘油磷酸胆碱12S3-PC和二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇(聚乙二醇PEG的分子量2000)构成的脂质分子层。

其通过纳米沉淀法制备得到，具体步骤如下：

1、多柔比星(DOX)0.03克、聚乳酸(PLA，分子量MW5-7万)0.1克溶于10毫升乙腈中，得到聚合物溶液；

2、将双-正十二烷基硫代丙酸甘油磷酸胆碱12S3-PC0.02克和二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇(DSPE-PEG2000，PEG分子量2000)0.01克溶于4％乙醇水溶液中，加热到50℃，得到脂质溶液；

3、将聚合物溶液逐滴加入到脂质溶液中，并快速搅拌，然后蜗旋3分钟；之后搅拌2小时，真空除去乙腈；之后离心过滤3次(MWCO10kDa)与水混悬，冷冻干燥后得到多柔比星还原敏感脂质药物组合物。

对得到的多柔比星还原敏感脂质药物组合物采用激光粒度仪测量其平均粒径为102nm，透射电镜测量其形态显示球形结构。

该实施例制备得到的多柔比星还原敏感脂质药物组合物应用于制备抗肿瘤制剂。

上述实施例仅是本发明的优选实施方式，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和等同替换，这些对本发明权利要求进行改进和等同替换后的技术方案，均落入本发明的保护范围。

Claims

1.一种氧化敏感药物组合物，其特征在于：该氧化敏感药物组合物为纳米颗粒，包括双-正烷基硫代正烷酸甘油磷酸胆碱和药物。

2.根据权利要求1所述的一种氧化敏感药物组合物，其特征在于：所述的氧化敏感药物组合物还包括药效学上可接受的助剂。

3.根据权利要求1所述的一种氧化敏感药物组合物，其特征在于：所述的氧化敏感药物组合物为纳米颗粒中，纳米颗粒为脂质体、固体脂质纳米粒、胶束或可降解聚合物纳米粒中的一种或者几种，且颗粒粒径为10～1000nm。

4.根据权利要求1所述的一种氧化敏感药物组合物，其特征在于：所述的双-正烷基硫代正烷酸甘油磷酸胆碱的结构通式如下：

式中，m是2～9的正整数，n是5～15的正整数。

5.根据权利要求1所述的一种氧化敏感药物组合物，其特征在于：所述的药物是抗肿瘤药物或者抗菌药物。

6.根据权利要求5所述的一种氧化敏感药物组合物，其特征在于：所述的抗肿瘤药物是紫杉醇、多烯紫杉醇、卡巴他赛、喜树碱、羟基喜树碱、7-乙基-10-羟基喜树碱、伊立替康、拓扑替康、勒托替康、贝洛替康、7-羟甲基喜树碱、长春新碱、长春瑞滨、安沙霉素、雷帕霉素、阿糖胞苷、依托泊苷、米托蒽醌、多柔比星、佐柔比星、表柔比星、伊达比星、莎巴比星或者铂药物中的一种；其中所述铂药物包括顺铂、卡铂、奥沙利铂、奈达铂、乐铂或者顺式-双新癸酸-反式-R,R-1,2-环已二胺合铂(Ⅱ)。

7.根据权利要求5所述的一种氧化敏感药物组合物，其特征在于：所述的抗菌药物是两性霉素B、庆大霉素、制霉菌素、氟康唑、阿米卡星、左氧氟沙星或者硝酸益康唑中的一种。

8.根据权利要求2所述的一种氧化敏感药物组合物，其特征在于：所述的药效学上可接受的助剂为磷脂、甘油酯、脂肪酸、吐温、泊洛沙姆或者胆固醇中的一种或多种。

9.一种如权利要求1～8所述的氧化敏感药物组合物的制备方法，其特征在于：该氧化敏感药物组合物通过薄膜分散法、逆相蒸发法、冷冻干燥法、超声波分散法、喷雾干燥法、膜挤压法或高压均质法制备。

10.一种如权利要求1～8任一所述的氧化敏感药物组合物的应用，其特征在于：该氧化敏感药物组合物应用于抗肿瘤药剂、抗病毒药剂或抗菌药剂的制备，且所述的抗肿瘤药剂、抗病毒药剂或抗菌药剂为液体制剂、固体制剂、半固体制剂、胶囊剂、颗粒剂或凝胶剂。