CN110200913B - 一种包埋舒巴坦阿莫西林酰胺复合物的制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种包埋舒巴坦阿莫西林酰胺复合物的制备方法，首先在水中将鸭蛋清中蛋白复合物与葡聚糖共价反应得到接枝物，即水相；再将舒巴坦阿莫西林酰胺复合物溶解大豆油中获得油相；然后通过高压均质将水相和油相混合制得包埋的舒巴坦阿莫西林酰胺复合物药物的纳米乳液。该纳米乳液具有稳定的油水界面膜，水溶性好，为上述复合物的制剂生产带来了可能性；包埋效果好，在12月内无团聚或聚集现象，颗粒均一稳定，且粒径较小，能够较好的被人体吸收。原料简单易得，安全，成本低，制备工艺简单，易于在工业化生产中应用，为非水溶性药品制剂的生产提供了新思路，同时也能促进蛋品产业高附加值成分的综合开发利用，提高经济价值。

Description

一种包埋舒巴坦阿莫西林酰胺复合物的制备方法

技术领域

本发明涉及医药技术领域，特别的涉及一种包埋舒巴坦阿莫西林酰胺复合物的制备方法。

背景技术

舒巴坦为人工合成的不可逆的竞争性β-内酰胺酶抑制剂，本身的抗菌活性弱，略强于克拉维酸，单用时仅对淋球菌和不动杆菌属有杀菌作用，它对革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌生产的绝大多数β-内酰胺酶有强大的抑制作用。阿莫西林抗菌谱广、杀菌力强、作用迅速，因其可口服给药而广泛用于临床；可用于治疗伤寒，其他沙门菌感染，伤寒带菌者，尿道、耳、鼻、喉、呼吸道及软组织的感染。WHO推荐其作为首选β-内酰胺类口服抗生素，已成为抗生素品种中最引人注目、发展最快的品种之一。但由于阿莫西林分子中β-内酰胺结构易开环不稳定，易发生降解，且水溶性差，其注射剂中多用其钠盐。舒巴坦也存在一定不稳定性问题，受pH、温度、氧化等因素影响，其β-内酰胺结构也易开环，导致整个分子被破坏，含量下降，有关物增加。

在有机药物的化学结构修饰中，成盐、成酯和酰胺的修饰是一类比较常见的方法。利用具有协同性功能的两种不同药物分子，通过使用这些方法修饰后，将两种药物的结构拼合在一个分子内，或将两者的药效基团兼容在一个分子中，是目前药物工作者研究兴趣之一。本发明人在前期研究中(CN201210290947.1)，利用修饰技术将阿莫西林和舒巴坦酯通过酰胺化形成舒巴坦阿莫西林酰胺复合物，实现了一种新型结构的舒巴坦阿莫西林酰胺复合物的合成，其结构式如下：

该酰胺复合物结构上的改造修饰后药物在某种程度上，可以强化药理作用，减小各自相应的毒副作用；或使两者取长补短，发挥各自的药理活性，协同地完成治疗过程；且修饰后更便于拓展临床使用和疾病的治疗与控制。但是，舒巴坦阿莫西林酰胺复合物的水溶解性较低，给制剂生产带来许多不便，限制了其制剂类型特别是水溶液制剂的发展，同时该酰胺复合物仍属β-内酰胺结构，制剂中如何提高其稳定性，也是急需解决的重要问题。

发明内容

针对上述现有技术的不足，本发明的目的在于提供了一种包埋舒巴坦阿莫西林酰胺复合物的制备方法，解决了舒巴坦阿莫西林酰胺复合物的水溶性差，难以制备水溶性制剂，以及该复合物结构中β-内酰胺结构稳定性差的问题。

为了解决上述技术问题，本发明采用了如下的技术方案：一种包埋舒巴坦阿莫西林酰胺复合物的制备方法，包括以下步骤：

1)将鸭蛋清溶于水中，然后加入葡聚糖得到混合溶液，再将所述混合溶液的pH调至4～8，室温搅拌1～2h至完全溶解，并将其置于50℃水浴中反应1～6h，反应结束后冷却至室温，离心取上清液，再经透析得到接枝物，即水相；

2)将舒巴坦阿莫西林酰胺复合物溶解于大豆油中充分搅拌，得到油相；

3)将步骤1)得到的水相和步骤2)得到的油相混合，通过高压均质得到包埋舒巴坦阿莫西林酰胺复合物的纳米乳液。

鸭蛋清呈透明胶状，主要包含蛋白质、脂肪、碳水化物、钙、磷、铁、核黄素、尼克酸、维生素A及C等成分。其中，固形物所占比重13％，固形物中大约90％是蛋白质，并以卵白蛋白为主(75％)，卵白蛋白多以亲水性蛋白的形式存在，大多数疏水性氨基酸处于分子内部，在高压均质和钙、磷、铁等基团作用下结构极易展开，与卵类粘蛋白(15％)、卵粘蛋白(7％)和伴白蛋白(3％)之间相互作用的蛋白复合物，从而赋予其分子间更强的疏水相互作用和二硫键交联，具有快速的吸附到界面的能力、在达到界面后可迅速伸展和取向以及达到界面后，即与邻近分子相互作用形成具有强内聚力和黏弹性的膜，形成了特定类别的蛋白质类表面活性剂；并且上述蛋白复合物与蛋清中卵转铁蛋白和溶菌酶的协同作用下，进一步提高了其乳化效果。鸭蛋清的成分在蛋白质类型、微量元素和其它的营养素等与其它蛋清存在差异，这些成分上的差异可能导致鸭蛋清适合用于包埋舒巴坦阿莫西林酰胺复合物药物。

在高压下所产生的强烈剪切、撞击和空穴作用，蛋清形成具有蛋白质类表面活性剂的蛋白复合物，该蛋白复合物的亲水基团和水相结合，亲油基团和油相结合，这样复合蛋白会束缚在乳滴表面形成油水界面膜，从而获得油滴固定并完成舒巴坦阿莫西林酰胺复合物药物的高效负载和包埋，形成了无数个微小甚至达到了微米或纳米级的乳液。通过利用空化效应产生的微射流，使油相和水相混和均匀，使液态物质得到超细微化。同时接枝连接在蛋清蛋白上的葡聚糖由于其亲水性而在乳滴表面伸展，使乳滴在水中长时间稳定存在，避免其沉淀和聚集。

作为优选的，所述鸭蛋清、水和葡聚糖的质量为1：2～10：0.05～0.2。

作为优选的，所述葡聚糖的分子量在5000～50000。

作为优选的，步骤2)所述舒巴坦阿莫西林酰胺复合物溶解于大豆油中的浓度为5～100mg/ml。

作为优选的，所述水相和油相的混合体积比为1:5～20。

作为优选的，所述高压均质的压力范围为300～500bar，高压均质时间范围为10～30min。

作为优选的，所述离心速度为4000～6000rpm，离心时间为10～20min。

作为优选的，所述透析中透析膜的分子量为10±0.2kDa。

相比现有技术，本发明具有如下有益效果：

1、本发明所提供舒巴坦阿莫西林酰胺复合物药物-蛋白复合物-葡聚糖包埋型的纳米乳液是一种以包含舒巴坦阿莫西林酰胺复合物药物的油相为内核，鸭蛋清中蛋白复合物为油水界面膜，蛋白复合物上接枝的葡聚糖处于纳米乳液外层。该纳米乳液具有稳定的油水界面膜，由于葡聚糖亲水性而在乳滴表面伸展，避免乳滴聚集，其水溶性好，为上述复合物的制剂生产带来了可能性；包埋效果好，提高复合物的稳定性，在12月内无团聚或聚集现象，提高了舒巴坦阿莫西林酰胺复合物药物的有效贮存期，具有良好的应用前景。

2、本发明制备的纳米乳液颗粒均一稳定，且粒径较小，能够较好的被人体吸收。使用时在人体消化酶的作用下随着葡聚糖和蛋白质的降解而释放出舒巴坦阿莫西林酰胺复合物药物，发挥相应功效；同时分解得到的葡萄糖和蛋白肽也为人体提供了营养物质。

3、本发明以葡聚糖和鸭蛋清为原料，属常规食品，无毒易降解，安全，成本低，制备工艺简单，生产周期短，易于在工业化生产中应用，也为非水溶性药品制剂的生产提供了新思路，同时也能促进蛋品产业高附加值成分的综合开发利用，提高经济价值。

附图说明

图1为本发明实施例1制备包埋后舒巴坦阿莫西林酰胺复合物药物-蛋白复合物-葡聚糖纳米乳液的纳米颗粒粒径分布图。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明作进一步的详细说明。

实施例1

1)在反应瓶中将鸭蛋清溶于2倍体积的蒸馏水中，然后加入分子量为25000的葡聚糖，使葡聚糖的添加量为鸭蛋清质量的0.05倍，再用磷酸盐缓冲溶液调节上述溶液pH到4.0，室温搅拌2h至完全溶解，并将其置于40℃水浴中反应1h，反应结束后冷却至室温，于4000rpm离心15min除去不溶物，取上清液4℃下透析24h(透析分子量10±0.2kDa)后得接枝物，即为水相；

2)将舒巴坦阿莫西林酰胺复合物溶解于大豆油中充分搅拌，使舒巴坦阿莫西林酰胺复合物的浓度为5mg/ml，得到油相；

3)将步骤1)得到的水相和步骤2)得到的油相按照体积比5:1混合，通过高压均质得到所述包埋后的舒巴坦阿莫西林酰胺复合物药物-蛋白复合物-葡聚糖纳米乳液，其中高压均质的压力为500bar，高压均质时间为10min。

实施例2

1)在反应瓶中将鸭蛋清溶于10倍体积的蒸馏水中，然后加入分子量为50000的葡聚糖，使葡聚糖的添加量为鸭蛋清质量的0.2倍，再用磷酸盐缓冲溶液调节上述溶液pH到8.0，室温搅拌2h至完全溶解，并将其置于40℃水浴中反应6h，反应结束后冷却至室温，于6000rpm离心10min除去不溶物，取上清液4℃下透析24h(透析分子量10±0.2kDa)后得接枝物，即为水相；

2)将舒巴坦阿莫西林酰胺复合物溶解于大豆油中充分搅拌，使舒巴坦阿莫西林酰胺复合物的浓度为100mg/ml，得到油相；

3)将步骤1)得到的水相和步骤2)得到的油相按照体积比20:1混合，通过高压均质得到所述包埋后的舒巴坦阿莫西林酰胺复合物药物-蛋白复合物-葡聚糖纳米乳液，其中高压均质的压力为400bar，高压均质时间为30min。

实施例3

1)在反应瓶中将鸭蛋清溶于5倍体积的蒸馏水中，然后加入分子量为5000的葡聚糖，使葡聚糖的添加量为鸭蛋清质量的0.1倍，再用磷酸盐缓冲溶液调节上述溶液pH到5.0，室温搅拌2h至完全溶解，并将其置于40℃水浴中反应2h，反应结束后冷却至室温，于5000rpm离心20min除去不溶物，取上清液4℃下透析24h(透析分子量10±0.2kDa)后得接枝物，即为水相；

2)将舒巴坦阿莫西林酰胺复合物溶解于大豆油中充分搅拌，使舒巴坦阿莫西林酰胺复合物的浓度为50mg/ml，得到油相；

3)将步骤1)得到的水相和步骤2)得到的油相按照体积比10:1混合，通过高压均质得到所述包埋后的舒巴坦阿莫西林酰胺复合物药物-蛋白复合物-葡聚糖纳米乳液，其中高压均质的压力为300bar，高压均质时间为20min。

实施例4

1)在反应瓶中将鸭蛋清溶于5倍体积的蒸馏水中，然后加入分子量为30000的葡聚糖，使葡聚糖的添加量为鸭蛋清质量的0.15倍，再用磷酸盐缓冲溶液调节上述溶液pH到7.0，室温搅拌2h至完全溶解，并将其置于40℃水浴中反应1h，反应结束后冷却至室温，于4000rpm离心20min除去不溶物，取上清液4℃下透析24h(透析分子量10±0.2kDa)后得接枝物，即为水相；

2)将舒巴坦阿莫西林酰胺复合物溶解于大豆油中充分搅拌，使舒巴坦阿莫西林酰胺复合物的浓度为20mg/ml，得到油相；

3)将步骤1)得到的水相和步骤2)得到的油相按照体积比10:1混合，通过高压均质得到所述包埋后的舒巴坦阿莫西林酰胺复合物药物-蛋白复合物-葡聚糖纳米乳液，其中高压均质的压力为400bar，高压均质时间为15min。

实施例5

1)在反应瓶中将鸭蛋清溶于5倍体积的蒸馏水中，然后加入分子量为40000的葡聚糖，使葡聚糖的添加量为鸭蛋清质量的0.2倍，再用磷酸盐缓冲溶液调节上述溶液pH到6.0，室温搅拌2h至完全溶解，并将其置于40℃水浴中反应1h，反应结束后冷却至室温，于4000rpm离心15min除去不溶物，取上清液4℃下透析24h(透析分子量10±0.2kDa)后得接枝物，即为水相；

2)将舒巴坦阿莫西林酰胺复合物溶解于大豆油中充分搅拌，使舒巴坦阿莫西林酰胺复合物的浓度为50mg/ml，得到油相；

3)将步骤1)得到的水相和步骤2)得到的油相按照体积比15:1混合，通过高压均质得到所述包埋后的舒巴坦阿莫西林酰胺复合物药物-蛋白复合物-葡聚糖纳米乳液，其中高压均质的压力为500bar，高压均质时间为10min。

实施例6

1)在反应瓶中将鸭蛋清溶于10倍体积的蒸馏水中，然后加入分子量为6000的葡聚糖，使葡聚糖的添加量为鸭蛋清质量的0.05倍，再用磷酸盐缓冲溶液调节上述溶液pH到4.0，室温搅拌2h至完全溶解，并将其置于40℃水浴中反应2.5h，反应结束后冷却至室温，于6000rpm离心10min除去不溶物，取上清液4℃下透析24h(透析分子量10±0.2kDa)后得接枝物，即为水相；

2)将舒巴坦阿莫西林酰胺复合物溶解于大豆油中充分搅拌，使舒巴坦阿莫西林酰胺复合物的浓度为50mg/ml，得到油相；

3)将步骤1)得到的水相和步骤2)得到的油相按照体积比10:1混合，通过高压均质得到所述包埋后的舒巴坦阿莫西林酰胺复合物药物-蛋白复合物-葡聚糖纳米乳液，其中高压均质的压力为300bar，高压均质时间为20min。

实施例7

1)在反应瓶中将鸭蛋清溶于2倍体积的蒸馏水中，然后加入分子量为10000的葡聚糖，使葡聚糖的添加量为鸭蛋清质量的0.2倍，再用磷酸盐缓冲溶液调节上述溶液pH到4.0，室温搅拌2h至完全溶解，并将其置于40℃水浴中反应5h，反应结束后冷却至室温，于6000rpm离心20min除去不溶物，取上清液4℃下透析24h(透析分子量10±0.2kDa)后得接枝物，即为水相；

2)将舒巴坦阿莫西林酰胺复合物溶解于大豆油中充分搅拌，使舒巴坦阿莫西林酰胺复合物的浓度为50mg/ml，得到油相；

3)将步骤1)得到的水相和步骤2)得到的油相按照体积比10:1混合，通过高压均质得到所述包埋后的舒巴坦阿莫西林酰胺复合物药物-蛋白复合物-葡聚糖纳米乳液，其中高压均质的压力为300bar，高压均质时间为20min。

实施例8

1)在反应瓶中将鸭蛋清溶于5倍体积的蒸馏水中，然后加入分子量为25000的葡聚糖，使葡聚糖的添加量为鸭蛋清质量的0.2倍，再用磷酸盐缓冲溶液调节上述溶液pH到5.0，室温搅拌2h至完全溶解，并将其置于40℃水浴中反应5h，反应结束后冷却至室温，于4000rpm离心20min除去不溶物，取上清液4℃下透析24h(透析分子量10±0.2kDa)后得接枝物，即为水相；

2)将舒巴坦阿莫西林酰胺复合物溶解于大豆油中充分搅拌，使舒巴坦阿莫西林酰胺复合物的浓度为50mg/ml，得到油相；

3)将步骤1)得到的水相和步骤2)得到的油相按照体积比5:1混合，通过高压均质得到所述包埋后的舒巴坦阿莫西林酰胺复合物药物-蛋白复合物-葡聚糖纳米乳液，其中高压均质的压力为300bar，高压均质时间为30min。

实施例9

1)在反应瓶中将鸭蛋清溶于2倍体积的蒸馏水中，然后加入分子量为10000的葡聚糖，使葡聚糖的添加量为鸭蛋清质量的0.2倍，再用磷酸盐缓冲溶液调节上述溶液pH到7.0，室温搅拌2h至完全溶解，并将其置于40℃水浴中反应5h，反应结束后冷却至室温，于4000rpm离心15min除去不溶物，取上清液4℃下透析24h(透析分子量10±0.2kDa)后得接枝物，即为水相；

2)将舒巴坦阿莫西林酰胺复合物溶解于大豆油中充分搅拌，使舒巴坦阿莫西林酰胺复合物的浓度为50mg/ml，得到油相；

3)将步骤1)得到的水相和步骤2)得到的油相按照体积比10:1混合，通过高压均质得到所述包埋后的舒巴坦阿莫西林酰胺复合物药物-蛋白复合物-葡聚糖纳米乳液，其中高压均质的压力为500bar，高压均质时间为20min。

将实施例1制备的舒巴坦阿莫西林酰胺复合物药物-蛋白复合物-葡聚糖纳米水乳液通过激光粒度仪检测乳液粒径，结果如图1。从图中可以看出，本发明制备的舒巴坦阿莫西林酰胺复合物药物-蛋白复合物-葡聚糖纳米水乳液的粒径约为237.7±9.31nm，该乳液可以通过450nm滤膜达到除菌的目的。

将实施例1～9制备的舒巴坦阿莫西林酰胺复合物药物-蛋白复合物-葡聚糖纳米水乳液在不同时间段对其粒径和载药量进行测定，结果如表1所示。

表1

由表1可以看出，在不同时间段内，本发明制备的纳米乳液对舒巴坦阿莫西林酰胺复合物药物的载药量没有显著的变化，说明其具有良好的包埋效果，在12个月内无团聚或聚集现象，说明其具有良好的稳定性；颗粒均一稳定，在水溶液中无团聚现象，说明制备的纳米乳液具有良好的水溶性，且粒径较小，易吸收。

以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不以本发明为限制，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (7)

1.一种包埋舒巴坦阿莫西林酰胺复合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

1）将鸭蛋清溶于水中，然后加入葡聚糖得到混合溶液，再将所述混合溶液的pH调至4~8，室温搅拌1~2 h至完全溶解，并将其置于50℃水浴中反应1~6h，反应结束后冷却至室温，离心取上清液，再经透析得到水相；所述鸭蛋清、水和葡聚糖的质量为1：2~10：0.05~0.2；

2）将舒巴坦阿莫西林酰胺复合物溶解于大豆油中充分搅拌，得到油相；

3）将步骤1）得到的水相和步骤2）得到的油相混合，通过高压均质得到所述包埋舒巴坦阿莫西林酰胺复合物的纳米乳液。

2.根据权利要求1所述包埋舒巴坦阿莫西林酰胺复合物的制备方法，其特征在于，所述葡聚糖的分子量在5000~50000。

3.根据权利要求1所述包埋舒巴坦阿莫西林酰胺复合物的制备方法，其特征在于，步骤2）所述舒巴坦阿莫西林酰胺复合物溶解于大豆油中的浓度为5~100mg/ml。

4.根据权利要求1所述包埋舒巴坦阿莫西林酰胺复合物的制备方法，其特征在于，所述水相和油相的混合体积比为1:5~20。

5.根据权利要求1所述包埋舒巴坦阿莫西林酰胺复合物的制备方法，其特征在于，所述高压均质的压力为300~500bar，高压均质时间为10~30min。

6.根据权利要求1所述包埋舒巴坦阿莫西林酰胺复合物的制备方法，其特征在于，所述离心速度为4000~6000rpm，离心时间为10~20min。

7.根据权利要求1所述包埋舒巴坦阿莫西林酰胺复合物的制备方法，其特征在于，所述透析的分子量为10±0.2 kDa。

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