CN113797177B - 一种离子乳化剂壳聚糖纳米粒修饰的槲皮素口服缓释制剂及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种离子乳化剂壳聚糖纳米粒修饰的槲皮素口服缓释制剂及其制备方法，具体的：以槲皮素为被包裹药物，将具有口服渗透促进作用的阴离子表面活性剂十二烷基硫酸钠与带正电的壳聚糖通过乳化离子交联法进行制备，制备工艺简便，耗能低，易操作，获得具有小于200纳米尺寸和较高的包封率槲皮素口服缓释制剂，以提高槲皮素水溶性，较长缓释效应和促进其制剂渗透增强槲皮素吸收而增强口服生物利用度，且本发明使用额外右旋糖酐‑70与壳聚糖纳米粒以通过氢键相互作用进行稳定反应，提高槲皮素口服缓释制剂的稳定性，适用于天然产物槲皮素医药领域的临床推广，具有巨大的应用价值。

Description

一种离子乳化剂壳聚糖纳米粒修饰的槲皮素口服缓释制剂及其制备方法

技术领域

本发明涉及一种离子乳化剂壳聚糖纳米粒修饰的槲皮素口服缓释制剂及其制备方法，属于槲皮素纳米口服缓释制剂技术领域。

背景技术

槲皮素是天然多羟基黄酮类化合物，广泛存在于瓜果、蔬菜和多种中草药中，具有抗炎、抗过敏、抗自由基抗氧化、抗癌防癌、抗HIV等多种生物活性及药理作用，且存在来源广、价格低、无毒副、生物相容性高等优点，可在临床研究和应用具有重大的开发价值。但因其溶解度低、内在活性小，胃肠吸收差，生物利用度低等缺陷导致其临床应用效果并不理想，从而严重限制它在医药领域的应用。故现在迫切需要一种增加槲皮素溶解度和口服生物利用度的策略，来提高槲皮素资源的有效开发和医药应用价值。

纳米技术是一种非常有效的增强药物溶解度和提高疗效的方法，纳米制剂与传统药物相比，通过减小粒径，增大比表面积，提高溶解度等进而改变药物的药代动力学，组织分布和内在药理活性，以达到降低不良反应，提高药效和生物利用度的效果。目前，研究者们对槲皮素纳米制剂进行了广泛的研究，尝试制备了多种纳米制剂，如槲皮素纳米晶体、槲皮素纳米脂质体、槲皮素纳米乳等。但是槲皮素纳米晶体在制备过程中，如何保证其稳定性仍是研究者面临的一个难点问题，同时槲皮素纳米脂质体由于存在易变质，稳定性差控缓释效果不理想等不足，限制其在临床实际治疗中的应用。此外，槲皮素纳米乳技术也存在着制药成本高、保质期短和影响标准检测等缺点。

聚合物纳米粒载药系统是将药物溶解或分散到纳米颗粒中，目前已被证实其系统作为药物载体可以提高药物溶解度和生物活性，且有载药系统稳定和药物包封率高等优点。在众多药物载体中，聚氰基丙烯酸丁酯和壳聚糖因其良好的生物相容性和生物可降解特性而备受关注，然而聚氰基丙烯酸丁酯存在价格较为昂贵的缺点。壳聚糖作为一种具有生物相容性、溶液中电离为带正电荷的天然聚合物，有良好的渗透增强药物吸收性能，已被广泛应用于形成纳米复合物的载体结构，可以明显提高药物的生物利用度，但壳聚糖难溶于水，单一使用很难形成稳定的纳米制剂。已有报道使用三聚磷酸钠为交联剂制得稳定壳聚糖纳米粒，而因使用三聚磷酸钠增加了制备成本，不利于产业化，且其制备的壳聚糖纳米粒因稳定性差，粒径大，粒子降解致提前释药和肠道吸收不良等限制了它们的应用。

发明内容

本发明正是针对以上现有壳聚糖纳米技术低稳定性，突释和胃肠吸收率低的不足，提供一种利用壳聚糖和十二烷基硫酸钠组合制备具有粒径小、分散性强、稳定性好、缓慢释药，有效促进药物细胞渗透肠吸收等优点的槲皮素纳米口服缓释制剂。

为了解决上述的技术问题，本发明采用如下技术方案：一种离子乳化剂壳聚糖纳米粒修饰的槲皮素口服缓释制剂，包括被包裹药物槲皮素和包裹材料壳聚糖与十二烷基硫酸钠。

进一步地，所述离子乳化剂壳聚糖纳米粒修饰的槲皮素口服缓释制剂的粒径为160-180纳米，在实施本发明过程，发明人发现在此粒径下，槲皮素缓释制剂的口服吸收效率更好。

进一步地，所述离子乳化剂壳聚糖纳米粒修饰的槲皮素口服缓释制剂的包封率为71.97～75.83％，在实施本发明的过程，发明人发现在此包封率下，槲皮素缓释制剂的口服生物利用度较高，其中槲皮素为被包裹药物，壳聚糖与十二烷基硫酸钠为包裹材料。

本发明提供一种上述离子乳化剂壳聚糖纳米粒修饰的槲皮素口服缓释制剂的制备方法，包括以下步骤：

(1)原料配制

配制阳离子交联原料：在冰乙酸水溶液中均匀分散壳聚糖；

配制阴离子乳化交联原料：在超纯水中均匀分散阴离子乳化剂或口服渗透促进剂；

配制稳定反应原料：在超纯水中均匀分散稳定剂；

(2)交联反应

交联反应选用乳化离子交联反应；

乳化离子交联反应过程为：将槲皮素加入到搅拌过夜并用滤膜过滤的阳离子交联原料中，超声使其充分溶解后，用氢氧化钠调pH为中性得到混合物I，然后将阴离子交联原料逐滴缓慢地加入到混合物I中进行乳化离子交联反应。

进一步地，所述乳化剂、离子交联剂和口服渗透促进剂均为十二烷基硫酸钠，在实施本发明的过程，发明人发现采用十二烷基硫酸钠不仅可以作为阴离子表面活性剂保证与壳聚糖进行乳化离子交联反应形成粒径小的壳聚糖纳米粒，且因其是被FDA批准的口服制剂赋形剂，还可为口服制剂中有效的渗透促进剂和胃肠蛋白酶抑制剂，保证制备的壳聚糖纳米粒有效渗透肠上皮细胞，促进药物吸收，提高其口服生物利用度，进而提高槲皮素疗效。

进一步地，阳离子乳化交联原料，每40毫升0.8～1.1％冰乙酸水溶液中分散有壳聚糖0.3～0.6克。在实施本发明的过程，发明人发现，低于或高于这个范围制得的壳聚糖纳米粒对槲皮素的包封率均不高，主要是因为，低于这个范围壳聚糖进行乳化离子交联反应量不够，高于这个范围，其交联反应不完全，浪费壳聚糖原料，且使用这个范围的冰乙酸巧妙地将难溶于水的槲皮素溶解，避免使用有毒害的有机试剂溶解槲皮素。

进一步地，阴离子乳化交联原料，每40毫升超纯水溶液中分散有阴离子乳化剂0.3～0.6克。在实施本发明的过程，发明人发现，在这个范围内，制得的壳聚糖纳米粒粒经较小，分布均一，包封率最高，口服生物利用度最高。主要是因为十二烷基硫酸钠在本发明中作为乳化剂和阴离子交联剂的作用，而低于这个范围粒径偏大且易聚集很不稳定，纳米粒的促渗透作用差。高于这个范围，形成的纳米粒电动势低于30毫伏，也使整个纳米体系很不稳定，且槲皮素包封率也不高。

进一步地，配置稳定反应原料，每20毫升超纯水溶液中分散有稳定剂0.8～1.1克，在实施本发明的过程，发明人发现，在这个范围内，制得的壳聚糖纳米粒稳定性较高，缓释效果较缓慢。

进一步地，阳和阴离子乳化交联原料在乳化离子交联反应中的优化用量体积比为1:1，实施本发明的过程，发明人发现，采用这个比例，反应效率更高，能够保证反应充分进行，且方便操作。

进一步地，将0.04～0.10g槲皮素加入到过夜搅拌且过滤的阳离子交联原料中，用氢氧化钠调pH为中性得到混合物I，实施本发明的过程，发明人发现，使用这个范围既能能保证得到槲皮素包封率为71.97～75.83％，又能保证其利用率。将阳离子交联原料过滤采用0.45微米滤膜，能保证得到160-180纳米的缓释制剂。将混合物调到中性，保证制得到槲皮素纳米制剂的酸碱性接近小肠吸收的生理pH值。

进一步地，在乳化离子交联反应过程中，以900～1100转每分钟的转速进行磁力搅拌。实施本发明的过程，发明人发现，采用这个搅拌速率，能够使制备的纳米粒粒径较小，分布较均匀。

进一步地，乳化离子交联反应的反应时间为1.5～2.5小时。在实施本发明的过程，发明人发现，此范围能够保证阴阳离子交联反应较完全，得到较充分的槲皮素载进壳聚糖的纳米混悬液。

进一步地，本发明还具有以下步骤：

(3)稳定反应

稳定反应过程为：将分散在超纯水中的稳定剂缓慢逐滴的加入交联反应所制得的溶液中进行搅拌稳定反应，可获得稳定性较高的聚合物包裹的槲皮素纳米缓释口服制剂的混悬液，或通过冷冻干燥技术制得槲皮素纳米缓释口服制剂的冻干粉。

进一步地，所述稳定剂为右旋糖苷-70，这种原料虽为常用的纳米制剂稳定剂，但其在实施本发明的过程，发明人发现其加入顺序不同对纳米制剂的提高稳定效果是天壤之别，当其被最后加入，壳聚糖纳米粒已经形成，它可以通过氢键与所制备的纳米结合形成一层保护壳，使制备的槲皮素纳米制剂更稳定，在药物从漫长的胃到小肠递送过程中，保证纳米粒骨架不聚集，不散架，直到到达目的地其穿透细胞再缓慢释放药物，发挥治疗效果。

进一步地，步骤(3)中，搅拌处理采用转速为900～1100转每分钟的磁力搅拌器，时间为0.5～1小时。实施本发明的过程，发明人发现此范围得到的槲皮素纳米制剂稳定性缓释效果和口服生物利用度较好。

本发明提供还提供一种口服药物。包括槲皮素缓释制剂和辅料。该口服药物可制成胶囊、片剂、丸剂、散剂、颗粒剂、糖浆剂等口服药物常用制剂，均属于本发明的保护范畴。具体制备方法可参照制药领域的常规方法制备，所用辅料可根据剂型不同选择制药领域通用的辅料。具体实施中，可以直接在所制备的槲皮素口服缓释制剂的混悬液和冻干粉加入适当的医用或食用领域的辅料，即可制得任何可供药用或食品作用的剂型或材料。

本发明的有益效果体现在：

本发明提供的上述离子乳化剂壳聚糖纳米粒修饰的槲皮素口服缓释制剂利用壳聚糖和十二烷基硫酸钠的低毒，高生物相容性和生物降解性等性能方面的优势而制备出无毒无害，生物相容性好，生物降解性好的纳米粒，且十二烷基硫酸钠是FDA批准的口服制剂赋形剂，具有促小肠渗透吸收作用，从而使制备的纳米制剂在口服过程中不仅使槲皮素能够缓慢释放，且能使其有效进入肠上皮细胞促进吸收，增强疗效的作用。

本发明提供的槲皮素缓释制剂是一种口服制剂，对比于注射制剂和栓剂可极大地提高患者的顺应性，更易推广病人服用进行各种疾病的治疗，从而获得更广泛的生物医学应用。

本发明提供的槲皮素纳米缓释制剂是一种纳制剂，可利用纳米尺寸粒径小的优势，增加制剂于肠上皮细胞的接触面积，进一步促进其更多的进入肠上皮细胞，促进药物吸收，增强槲皮素的治疗作用，为槲皮素的充分开发应用提供了更为便利的前景。

本发明提供的槲皮素纳米缓释制剂的制备方法中，巧妙的利用槲皮素和壳聚糖均溶于冰乙酸，未使用有机溶剂，避免了去除溶剂的后处理和溶剂残留的问题，使其工艺简单、成本低、反应条件要求低，易于产业化，不仅带来经济效益，环保意义，还具有很大的社会效益，具有很高的应用前景。

本发明所述的一种离子乳化剂壳聚糖纳米粒修饰的槲皮素口服缓释制剂的制备方法能够制备得到形态为乳白色混悬液或白色冻干粉，形状为球形或椭球形，粒径小于200纳米，混悬液在超纯水中分散指数为0.128～0.213，电动势为30.10～45.01毫伏，包封率为71.97～75.83％，缓慢释药可长达72小时，具有粒径小，分散均匀无粘连，稳定性好，促渗透易吸收和控缓释等优点。

本发明使用壳聚糖和十二烷基硫酸钠具有同时促吸收作用，且十二烷基硫酸钠的乳化性能增加槲皮素和它纳米制剂的溶解性，其抑制酶活性和促渗透作用，有效的保护槲皮素从胃到小肠漫长递送被降解破坏的障碍，进一步增强了壳聚糖纳米粒渗透进入肠细胞，促进槲皮素在细胞内发挥治疗活性。

本发明在制备离子乳化剂壳聚糖纳米粒修饰的槲皮素口服缓释制剂的制备方法中，将稳定反应最后进行，利用右旋糖酐-70的羟基于壳聚糖纳米粒的羟基以氢键结合，形成一层防止包裹会皮酥纳米粒降解的屏障，更好的防止槲皮素纳米制剂在胃肠恶劣环境递送过程降解，提高其口服制剂的稳定性，从而使得制剂的药效作用时间延长，药效作用增加，生物利用度增加。

附图说明

图1为实施例1制得的一种离子乳化剂壳聚糖纳米粒修饰的槲皮素口服缓释制剂的制备方案流程图。

图2为实施例1制得的一种离子乳化剂壳聚糖纳米粒修饰的槲皮素口服缓释制剂的类球形和粒径小于200纳米的透射电镜图；

图3为实施例1制得的一种离子乳化剂壳聚糖纳米粒修饰的槲皮素口服缓释制剂的高效提高制剂稳定性的Zeta电位图；

图4为实施例1制得的一种离子乳化剂壳聚糖纳米粒修饰的槲皮素口服缓释制剂的证明槲皮素被有效包裹的紫外扫描光谱图；

图5为实施例6证明离子乳化剂壳聚糖纳米粒修饰的槲皮素口服缓释制剂显著提高槲皮素体外缓释研究图；

图6为实施例7说明离子乳化剂壳聚糖纳米粒修饰的槲皮素口服缓释制剂体内口服血药浓度-时间曲线显著高于单用槲皮素的口服吸收和有效生物利用度图。

具体实施方式

下面将结合实施例来详细说明本发明。

实施例1

如图1所示，本实施提供离子乳化剂壳聚糖纳米粒修饰的槲皮素口服缓释制剂的制备

制备方法包括以下步骤：

(1)原料配制

配制阳离子交联原料：在40毫升1.1％冰乙酸水溶液中均匀分散0.6克壳聚糖；

配制阴离子乳化交联原料：在40毫升超纯水溶液中分散0.6克十二烷基硫酸钠；

配制稳定反应原料：在20毫升超纯水溶液中均匀分散1.1克右旋糖酐-70。

(2)乳化离子交联反应

精密称取0.04克槲皮素加入在室温下以1000转每分钟的磁力搅拌速率搅拌过夜并用0.45微米滤膜过滤的阳离子交联原料中，用氢氧化钠调pH为6.9得到混合物I。然后在1100转每分钟的磁力搅拌速率下，将阴离子交联原料逐滴缓慢地加入到混合物I中进行乳化离子交联反应，反应总时间为2.5小时，初步得到槲皮素载进壳聚糖的纳米混悬液。

(3)稳定反应

稳定反应过程为：将均匀分散在超纯水中的右旋糖酐-70缓慢逐滴的加入交联反应所制得的混悬液中，进行1100转每分钟搅拌稳定反应1小时，可获得稳定性较高的壳聚糖包裹的槲皮素纳米口服制剂。

本实施例制得的离子乳化剂壳聚糖纳米粒修饰的槲皮素口服缓释制剂的制备流程图见图1，制得制剂的透射电镜见图2，Zeta电位见图3，紫外扫描光谱见图4。

可以得出，本实施例制得的离子乳化剂壳聚糖纳米粒修饰的槲皮素口服缓释制剂，制备过程简单，易操作，绿色，低耗能，使用的原料经济易得，使得制备过程易于产业化，制得的制剂呈球形，粒径小，尺寸为188.73±5.26纳米，分布均匀，分散良好，无颗粒粘连现象，包封率为75.83％。

图3中，将0.04克槲皮素充分溶解于100毫升冰乙酸水溶液中所得溶液、同本实施例中相同制备过程未加入槲皮素制得的空白纳米粒溶液和本实施例所制得的离子乳化剂壳聚糖纳米粒修饰的槲皮素口服缓释制剂溶液三份样品稀释十倍，分别吸取1毫升使用粒径分析仪对样品进行测定。由此结果知，本实施例制得的离子乳化剂壳聚糖纳米粒修饰的槲皮素口服缓释制剂的Zeta电位约为+36毫伏，拥有较好的稳定性。本实施例制得的离子乳化剂壳聚糖纳米粒修饰的槲皮素口服缓释制剂的Zeta电位为正值，使得易与带有负电荷的肠细胞结合，增加纳米粒与肠细胞的亲和力，使得制剂易于渗透肠道上皮细胞而增强槲皮素的口服吸收能力。

图4中，对0.04克槲皮素充分溶解于100毫升冰乙酸水溶液中所得溶液、同本实施例未加入槲皮素采用相同的制备过程制得的空白纳米粒溶液和本实施例所制得的离子乳化剂壳聚糖纳米粒修饰的槲皮素口服缓释制剂溶液三份样品进行光谱测量的光谱图结果。已知槲皮素的最大吸收波长为374纳米，故根据三份样品的紫外扫描光谱结果可知：本实施例制得的壳聚糖纳米口服缓释制剂能有效包裹槲皮素，增加其溶解性。

实施例2

离子乳化剂壳聚糖纳米粒修饰的槲皮素口服缓释制剂的制备

制备方法包括以下步骤：

(1)原料配制

配制阳离子交联原料：在40毫升0.8％冰乙酸水溶液中均匀分散0.3克壳聚糖；

配制阴离子乳化交联原料：在40毫升超纯水溶液中分散0.3克十二烷基硫酸钠；

配制稳定反应原料：在20毫升超纯水溶液中均匀分散0.8克右旋糖酐-70。

(2)乳化离子交联反应

将精密称取0.10克槲皮素加入到室温下以800转每分钟的磁力搅拌速率搅拌过夜并用0.45微米滤膜过滤的阳离子交联原料中，用氢氧化钠调pH为6.6得到混合物I。然后在900转每分钟的磁力搅拌速率下，将阴离子交联原料逐滴缓慢地加入到混合物I中进行乳化离子交联反应，反应总时间为1.5小时，初步得到槲皮素载进壳聚糖的纳米混悬液。

(3)稳定反应

稳定反应过程为：将均匀分散在超纯水中的右旋糖酐-70缓慢逐滴的加入交联反应所制得的混悬液中，进行900转每分钟搅拌稳定反应0.5小时，可获得稳定性较高的壳聚糖包裹的槲皮素纳米口服制剂。

本实施例制得的离子乳化剂壳聚糖纳米粒修饰的槲皮素口服缓释制剂透射电镜图，Zeta电位图，紫外扫描光谱图与实施例1相似，为简洁描述起见，不再赘示。

本实施例制得的离子乳化剂壳聚糖纳米粒修饰的槲皮素口服缓释制剂的粒径为162.31±5.48纳米，包封率为80.15％。

实施例3

离子乳化剂壳聚糖纳米粒修饰的槲皮素口服缓释制剂的制备

制备方法包括以下步骤:

(1)原料配制

配制阳离子交联原料：在40毫升0.9％冰乙酸水溶液中均匀分散0.4克壳聚糖；

配制阴离子乳化交联原料：在40毫升超纯水溶液中分散0.4克十二烷基硫酸钠；

配制稳定反应原料：在20毫升超纯水溶液中均匀分散0.9克右旋糖酐-70。

(2)乳化离子交联反应

将精密称取0.08克槲皮素加入到室温下以900转每分钟的磁力搅拌速率搅拌过夜并用0.45微米滤膜过滤的阳离子交联原料中，用氢氧化钠调pH为6.7得到混合物I。然后在900转每分钟的磁力搅拌速率下，将阴离子交联原料逐滴缓慢地加入到混合物I中进行乳化离子交联反应，反应总时间为1.5小时，初步得到槲皮素载进壳聚糖的纳米混悬液。

(3)稳定反应

稳定反应过程为：将均匀分散在超纯水中的右旋糖酐-70缓慢逐滴的加入交联反应所制得的混悬液中，进行1000转每分钟搅拌稳定反应0.5小时，可获得稳定性较高的壳聚糖包裹的槲皮素纳米口服制剂。

本实施例制得的离子乳化剂壳聚糖纳米粒修饰的槲皮素口服缓释制剂透射电镜图，Zeta电位图，紫外扫描光谱图与实施例1相近，为简洁描述起见，不再赘示。

本实施例制得的离子乳化剂壳聚糖纳米粒修饰的槲皮素口服缓释制剂的粒径为172.56±4.83纳米，包封率为73.57％。

实施例4

离子乳化剂壳聚糖纳米粒修饰的槲皮素口服缓释制剂的制备

制备方法包括以下步骤:

(1)原料配制

配制阳离子交联原料：在40毫升1.0％冰乙酸水溶液中均匀分散0.5克壳聚糖；

配制阴离子乳化交联原料：在40毫升超纯水溶液中分散0.5克十二烷基硫酸钠；

配制稳定反应原料：在20毫升超纯水溶液中均匀分散1.0克右旋糖酐-70。

(2)乳化离子交联反应

将精密称取0.06克槲皮素加入到室温下以900转每分钟的磁力搅拌速率搅拌过夜并用0.45微米滤膜过滤的阳离子交联原料中，用氢氧化钠调pH为6.8得到混合物I。然后在900转每分钟的磁力搅拌速率下，将阴离子交联原料逐滴缓慢地加入到混合物I中进行乳化离子交联反应，反应总时间为2.0小时，初步得到槲皮素载进壳聚糖的纳米混悬液。

(3)稳定反应

稳定反应过程为：将均匀分散在超纯水中的右旋糖酐-70缓慢逐滴的加入交联反应所制得的混悬液中，进行1000转每分钟搅拌稳定反应1.0小时，可获得稳定性较高的壳聚糖包裹的槲皮素纳米口服制剂。

本实施例制得的离子乳化剂壳聚糖纳米粒修饰的槲皮素口服缓释制剂透射电镜图，Zeta电位图，紫外扫描光谱图与实施例1相近，为简洁描述起见，不再赘示。

本实施例制得的离子乳化剂壳聚糖纳米粒修饰的槲皮素口服缓释制剂的粒径为179.62±4.67纳米，包封率为74.92％。

实施例5

离子乳化剂壳聚糖纳米粒修饰的槲皮素口服缓释制剂的制备

制备方法包括以下步骤:

(1)原料配制

配制阳离子交联原料：在40毫升1.0％冰乙酸水溶液中均匀分散0.5克壳聚糖；

配制阴离子乳化交联原料：在40毫升超纯水溶液中分散0.4克十二烷基硫酸钠；

配制稳定反应原料：在20毫升超纯水溶液中均匀分散0.9克右旋糖酐-70。

(2)乳化离子交联反应

将精密称取0.08克槲皮素加入到室温下以800转每分钟的磁力搅拌速率搅拌过夜并用0.45微米滤膜过滤的阳离子交联原料中，用氢氧化钠调pH为6.7得到混合物I。然后在900转每分钟的磁力搅拌速率下，将阴离子交联原料逐滴缓慢地加入到混合物I中进行乳化离子交联反应，反应总时间为2.0小时，初步得到槲皮素载进壳聚糖的纳米混悬液。

(3)稳定反应

稳定反应过程为：将均匀分散在超纯水中的右旋糖酐-70缓慢逐滴的加入交联反应所制得的混悬液中，进行1100转每分钟搅拌稳定反应0.5小时，可获得稳定性较高的壳聚糖包裹的槲皮素纳米口服制剂。

本实施例制得的离子乳化剂壳聚糖纳米粒修饰的槲皮素口服缓释制剂透射电镜图，Zeta电位图，紫外扫描光谱图与实施例1相近，为简洁描述起见，不再赘示。

本实施例制得的离子乳化剂壳聚糖纳米粒修饰的槲皮素口服缓释制剂的粒径为171.83±5.82纳米，包封率为74.11％。

在透射电子显微镜下观察，实施例1至5制得的槲皮素口服缓释制剂粒径小，粒子呈球形，分布均匀、分散良好，无颗粒粘连现象。经粒度分析仪分析，实施例1至5制得的槲皮素口服缓释制剂产品的尺寸均小于200纳米，分散指数为0.128～0.213，电动势为30.10～45.01毫伏，且得到类似图4的紫外吸收光谱，上述实施例槲皮素已被充分包裹。

实施例6

离子乳化剂壳聚糖纳米粒修饰的槲皮素口服缓释制剂的释放试验

以pH值为7.4的磷酸盐缓冲液(PBS)为释放介质，精确称取槲皮素4毫克与20毫升释放介质均匀混合得到对照槲皮素释放溶液，再将任意实施条列中制得的槲皮素纳米制剂混悬液与释放介质均匀混合，得总体积为20毫升槲皮素口服缓释制剂释放实验组。接着，将它们同时转入经蒸馏水浸泡处理的透析袋中，将透析袋两端扎紧绑于浆上，分别置于盛有250毫升释放介质的溶出三角瓶中，在恒温(37℃)摇床(120转每分钟)中恒速震荡。

分别于设定的时间取样2毫升样品置-4℃冰箱保存，每次取样后再补充2毫升的释放介质溶液，将所取样品经高速低温离心机10000转每分钟、-4℃离心15分钟，取上清液1毫升经0.45微米微孔滤膜过滤，取上清液。

使用高效液相色谱法测定不同时间点样品上清液中中槲皮素的含量，每次进样20微升，测定槲皮素的峰面积，并按标准曲线回归方程计算槲皮素的浓度，得出累积释放槲皮素百分率，并绘制释药曲线，实验结果如图5所示。

图5结果分析发现离子乳化剂壳聚糖纳米粒具有缓慢控制槲皮素的释放，且释药时间长达3天，有效证明了离子乳化剂壳聚糖纳米粒修饰的槲皮素具有缓控释作用。

实施例7

离子乳化剂壳聚糖纳米粒修饰的槲皮素口服缓释制剂的口服生物利用度试验

准备成年健康SD雄性大鼠12只，平均分为两组：A组和B组，禁食12小时，均进行眶后静脉窦取血作为空白对照样品，后按大鼠体重每100克给与1毫升药液对12只大鼠灌胃。其中，A组给予0.04克槲皮素充分溶解于100毫升冰乙酸(0.1％)水溶液中所得溶液，B组给予实施例制得的槲皮素纳米口服缓释制剂溶液，分别记录不同的灌胃时间。

在两组大鼠灌胃后的2小时，4小时，6小时，8小时，10小时，12小时，14小时，16小时，18小时，20小时，22小时，24小时分别于大鼠的眶后静脉窦取血0.5毫升置于5毫升含抗凝剂真空采血管中。接着，加入3毫升甲醇沉淀血液蛋白成分，涡旋10分钟，以1000转每分钟离心10分钟，其上清液经0.45微米滤膜过滤后，精密吸取滤液20微升，采用高效液相色谱法进样测其滤液中槲皮素浓度。并绘制槲皮素和槲皮素纳米制剂的血药浓度-时间曲线如图6所示。

经分析图6结果显示离子乳化剂壳聚糖纳米粒修饰的槲皮素口服缓释制剂溶液血浆峰浓度比槲皮素溶液的血浆峰浓度高且达峰时间延长，同时离子乳化剂壳聚糖纳米粒修饰的槲皮素口服缓释制剂的血药浓度-时间曲线的曲线下面积明显大于槲皮素的曲线下面积。该结果证明离子乳化剂壳聚糖纳米粒修饰的槲皮素口服缓释制剂能明显提高槲皮素的生物利用度且能达到缓慢持续不断口服药物吸收的目的。

实施例1至实施例5制得的离子乳化剂壳聚糖纳米粒修饰的槲皮素口服缓释制剂的槲皮素体外释放试验和口服生物利用度(血药浓度-时间曲线)试验结果与实施例1制得的槲皮素缓释口服制剂相近，为简洁描述起见，不再赘示。

以上内容是结合具体的实施例对本发明所作的详细说明，不能认定本发明具体实施仅限于这些说明。本领域技术人员可根据它做出各种修改或变化，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (5)

1.一种离子乳化剂壳聚糖纳米粒修饰的槲皮素口服缓释制剂，其特征在于：包括被包裹药物槲皮素和包裹材料壳聚糖与十二烷基硫酸钠，所述槲皮素纳米缓释制剂的粒径为160-180纳米，包封率为71.97～75.83％，制备方法包括以下步骤：

(1)原料配制

配制阳离子交联原料：在冰乙酸水溶液中均匀分散壳聚糖，阳离子交联原料中，每40毫升0.8～1.1％冰乙酸水溶液中分散有壳聚糖0.3～0.6克；

配制阴离子乳化交联原料：在超纯水中分散阴离子乳化剂或口服渗透促进剂，阴离子交联原料中，每40毫升超纯水溶液中分散有阴离子乳化剂0.3～0.6克；

配制稳定反应原料：在超纯水中均匀分散稳定剂，稳定反应原料中，每20毫升超纯水溶液中分散有稳定剂0.8～1.1克；

(2)交联反应

交联反应选用乳化离子交联反应；

乳化离子交联反应过程为：将槲皮素加入到搅拌过夜并用滤膜过滤的阳离子交联原料中，超声使其充分溶解后，用氢氧化钠调pH为中性得到混合物I，然后将阴离子交联原料逐滴缓慢地加入到混合物I中进行乳化离子交联反应。

(3)稳定反应

稳定反应过程为：将分散在超纯水中的稳定剂缓慢逐滴的加入交联反应所制得的溶液中进行搅拌稳定反应，可获得稳定性较高的聚合物包裹的槲皮素纳米制剂。

2.如权利要求1中所述的离子乳化剂壳聚糖纳米粒修饰的槲皮素口服缓释制剂，其特征在于：所述乳化剂，阴离子交联剂和口服渗透促进剂均为十二烷基硫酸钠，所述稳定剂为右旋糖苷-70。

3.如权利要求1或2中所述的离子乳化剂壳聚糖纳米粒修饰的槲皮素口服缓释制剂，其特征在于：乳化离子交联反应的过程中，混合物I中槲皮素的质量浓度为1.0～2.5g/L，氢氧化钠调节溶液pH至略中性后溶液pH为6.6～6.9。

4.如权利要求1或2中所述的离子乳化剂壳聚糖纳米粒修饰的槲皮素口服缓释制剂，其特征在于：乳化离子交联反应时间为1.5～2.5小时，稳定反应时间为0.5～1.0小时。

5.一种口服药物，其特征在于：包括如权利要求1至4中任一项所述的离子乳化剂壳聚糖纳米粒修饰的槲皮素口服缓释制剂和辅料。

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