CN110144357A - 基因的过表达在提高植物的氮含量和/或蛋白含量或选育高蛋白植物品种中的应用 - Google Patents
基因的过表达在提高植物的氮含量和/或蛋白含量或选育高蛋白植物品种中的应用 Download PDFInfo
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- C12N15/8242—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with non-agronomic quality (output) traits, e.g. for industrial processing; Value added, non-agronomic traits
- C12N15/8243—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with non-agronomic quality (output) traits, e.g. for industrial processing; Value added, non-agronomic traits involving biosynthetic or metabolic pathways, i.e. metabolic engineering, e.g. nicotine, caffeine
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Abstract
本发明涉及生物技术领域，特别涉及基因的过表达在提高植物的氮含量和/或蛋白含量或选育高蛋白植物品种中的应用。本发明克隆获得的BnGS1基因通过在烟草中超表达表明氮含量和粗蛋白含量分别为4.88％和30.52％，野生型烟草叶片的氮含量和粗蛋白含量分别为2.29％和14.32％，转基因植株和野生型的叶片氮含量和粗蛋白含量均达到显著差异。这也是苎麻中首次通过在烟草中超量表达获得氮和氮含量达到显著差异的GS基因，该基因具有很好的应用前景。通过分子育种克隆蛋白相关的基因通过超表达的方式提高苎麻蛋白含量，选育新的高蛋白品种周期短，且蛋白含量更高。
Description
技术领域
本发明涉及生物技术领域，特别涉及基因的过表达在提高植物的氮含量和/或蛋白含量或选育高蛋白植物品种中的应用。
背景技术
苎麻嫩茎叶营养丰富，粗蛋白含量高，是很好的植物性饲料蛋白原料，我国南方高蛋白优质牧草极其匮乏，在我国南方大力开发苎麻饲料作物具有极其广阔的前景，饲用苎麻作为牧草利用我们首先就要检测粗蛋白含量，它是衡量一个饲用苎麻特性好坏的重要指标。传统的苎麻高氮含量品种材料筛选是通过杂交等手段进行，这种选育方法周期需要几年时间，本身苎麻品种材料中很难有氮含量特别高的材料，提高苎麻氮含量是目前饲用苎麻育种需要解决的重大问题，通过常规的选育高氮含量苎麻品种材料周期很长，很难获得高的氮含量品种。
在植物中，谷氨酰胺合成酶(Glutamine synthetase，GS)将NH4+同化为谷氨酰胺，与GOGAT(谷氨酸合成酶)统称为GS/GOGAT循环。GS包括两大家族，GS1和GS2，其中GS1主要位于胞质，GS2位于质体中。植物中，一般具有一个GS2基因，多个GS1基因。GS基因对植物氮利用率有影响。在水稻高氮利用率和低氮利用率两个品种中，GS的活性是前者显著高于后者。Zheng JS等在烟草中超表达BnGS1-2，结果表明转基因烟草的NO3 -和NH4 +的吸收能力增强，NR活性显著增加，可溶性蛋白含量和氮含量均高于对照组，但差异不显著。同时，BnGS2-1和BnGS2-2转基因烟草的株高、鲜重和叶片可溶性蛋白均有显著提高；氮含量也有提高，但没有达到显著差异。
因此，提供苎麻氮代谢相关基因来提高苎麻蛋白含量、缩短选育高蛋白品种的周期具有重要的现实意义。
发明内容
有鉴于此，本发明提供了基因的过表达在提高植物的氮含量和/或蛋白含量或选育高蛋白植物品种中的应用。本发明采用分子育种的手段克隆苎麻氮含量相关的基因来选育氮含量高苎麻新品种材料，时间相对较短，氮含量增加较大，能较快的获得苎麻高氮含量的品种。
为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：
本发明提供了基因的过表达在提高植物的氮含量和/或蛋白含量或选育高蛋白植物品种中的应用；
所述基因具有如下所示的核苷酸序列中的任意一项：
I、具有BnGS1的核苷酸序列；或
II、具有如I所示的核苷酸序列经修饰、取代、缺失或添加一个或多个碱基获得的核苷酸序列；或
III、与如I所示的核苷酸序列具有至少80％同源性的序列或翻译后所得蛋白与基因BnGS1表达的蛋白功能相同或相近的核苷酸序列；或
IV、如I、II或III所示序列的互补序列。
在本发明的一些具体实施方案中，所述植物为苎麻或烟草。
在上述研究的基础上，本发明还提供了表达载体，包括过表达的基因和
基础载体；
所述基因具有如下所示的核苷酸序列中的任意一项：
I、具有BnGS1的核苷酸序列；或
II、具有如I所示的核苷酸序列经修饰、取代、缺失或添加一个或多个碱基获得的核苷酸序列；或
III、与如I所示的核苷酸序列具有至少80％同源性的序列或翻译后所得蛋白与基因BnGS1表达的蛋白功能相同或相近的核苷酸序列；或
IV、如I、II或III所示序列的互补序列。
本发明还提供了所述表达载体的构建方法，将基因与所述基础载体连接，转化，挑菌，提取质粒，测序；
所述基因具有如下所示的核苷酸序列中的任意一项：
I、具有BnGS1的核苷酸序列；或
II、具有如I所示的核苷酸序列经修饰、取代、缺失或添加一个或多个碱基获得的核苷酸序列；或
III、与如I所示的核苷酸序列具有至少80％同源性的序列或翻译后所得蛋白与基因BnGS1表达的蛋白功能相同或相近的核苷酸序列；或
IV、如I、II或III所示序列的互补序列。
本发明还提供了转化或转染所述表达载体的宿主细胞。
本发明还提供了所述表达载体或所述宿主细胞在提高植物的氮含量和/或蛋白含量或选育高蛋白植物品种中的应用
在本发明的一些具体实施方案中，所述植物为苎麻或烟草。
本发明还提供了提高植物中氮含量的方法，取所述表达载体转入农杆菌感受态中，培养，挑菌，取阳性菌落侵染植物。
本发明还提供了提高植物中蛋白含量的方法，取所述表达载体转入农杆菌感受态中，培养，挑菌，取阳性菌落侵染植物。
本发明还提供了高蛋白植物的育种方法，取所述表达载体转入农杆菌感受态中，培养，挑菌，取阳性菌落侵染植物。
本发明克隆获得的BnGS1基因通过在烟草中超表达表明氮含量和粗蛋白含量分别为4.88％和30.52％，野生型烟草叶片的氮含量和粗蛋白含量分别为2.29％和14.32％，转基因植株和野生型的叶片氮含量和粗蛋白含量均达到显著差异。这也是苎麻中首次通过在烟草中超量表达获得氮和氮含量达到显著差异的GS基因，该基因具有很好的应用前景。通过分子育种克隆蛋白相关的基因通过超表达的方式提高苎麻蛋白含量，选育新的高蛋白品种周期短，且蛋白含量更高。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍。
图1示BnGS1基因凝胶电泳图；其中，图1(A)示BnGS1基因的PCR扩增产物，泳道从左至右依次为1：DNA marker，2-3：BnGS1基因；图1(B)示TA单克隆的PCR验证，泳道从左至右依次为1、4：DNA marker，2-3：BnGS1基因；
图2示BnGS1的CDS序列和氨基酸序列(灰度表示保守结构域)；
图3示BnGS1蛋白质结构分析；
图4示PEZR-(K)-LN-GFP：空载在烟草叶片中的表达情况；其中，A，D：明场；B，E：绿色荧光；C，F：合成；
图5示单菌落PCR鉴定；其中图5(A)示BnDof14基因，泳道从左至右依次为1：DNAmarker，2-6：BnDof14基因；图5(B)示BnGS1基因，泳道从左至右依次为1、6：DNA marker，2-3：BnGS1基因；
图6示农杆菌阳性转化菌落的PCR鉴定；其中，图6(A)示BnDof14基因，泳道从左至右依次为1：DNA marker，2-5、8：假阳性菌落；6-7：BnDof14基因阳性菌落；图6(B)示BnGS1基因，泳道从左至右依次为1-4：BnGS1基因的阳性菌落，6：DNA marker；
图7示转基因烟草的再生；其中，图7(A)示烟草的愈伤组织；图7(B)示幼芽生根；图7(C)示转基因烟草苗移栽到土壤中；
图8示转基因烟草的DNA；泳道从左至右依次为1、7：DNA marker，2-6：转基因烟草的DNA；
图9示转基因烟草PCR产物；泳道从左至右依次为1-3：BnGS1基因，4：DNA marker；
图10示BnGS1转基因和野生型烟草中BnGS1基因的相对表达量；
图11示转基因烟草叶片的GUS染色；
图12示BnGS1转基因烟草与野生型烟草表型；其中，图12(A)示转基因烟草和野生型烟草株高对比；图12(B)示转基因烟草与野生型烟草叶片颜色对比；
图13示BnGS1转基因烟草与野生型烟草叶片氮含量；
图14示BnGS1转基因烟草与野生型烟草叶片粗蛋白含量。
具体实施方式
本发明公开了基因的过表达在提高植物的氮含量和/或蛋白含量或选育高蛋白植物品种中的应用，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文所述的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。
本发明提供的基因的过表达在提高植物的氮含量和/或蛋白含量或选育高蛋白植物品种中的应用中所用原料及试剂均可由市场购得。
下面结合实施例，进一步阐述本发明：
实施例1苎麻BnGS1基因克隆以及筛选TA单克隆
苎麻BnGS1基因PCR产物的琼脂糖凝胶电泳图如图1(A)，PCR条件为：(1)94℃预变性4min，(2)94℃变性30s，(3)54℃复性30s，(4)72℃延伸1min 30s，(2)-(4)循环32次，(5)72℃延伸5min，4℃保存。BnGS1基因长1518bp，胶图显示PCR产物与所需的目的片段相符。将目的片段胶回收后与pMD18-T连接，转化到DH5α中，涂板与38℃条件培养，在平板上挑选白斑摇菌。菌液PCR结果如图1(B)。
实施例2苎麻BnGS1基因生物信息学分析
BnGS1基因的CDS序列(如SEQ ID No.1所示)和氨基酸序列(如SEQ ID No.2所示)如图2，蛋白质结构如图3。BnGS1基因的CDS序列长1071bp，氨基酸序列长356aa。蛋白分子量为39.19Da，等电点pI为5.60。从氨基酸13到354位点有1个保守的结构域，该结构域为GS蛋白特有的结构域。
实施例3BnGS1基因的亚细胞定位
通过双酶切实验构建PEZR-(K)-LN-BnGS1-GFP载体。具体方法如下：
(1)使用EcoRI和KpnI对PEZR-(K)-LN进行双酶切，体系如下：
(2)37℃酶切1h，然后胶回收。
(3)使用EcoRI和KpnI限制酶BnGS1基因进行双酶切，体系如下：
(4)37℃酶切1h，然后胶回收。
(5)将(2)、(4)中的胶回收产物用T4DNA连接酶连接，反应体系(10μL)：质粒DNA100ng，目的片段10ng，10*Buffer 1μL，T4DNA连接酶0.5μL，加ddH2O至10μL。25℃条件下，连接3h。
构建好的PEZR-(K)-LN-BnGS1-GFP载体转化到农杆菌GV3101中，使用注射器将含有载体的GV3101注射到烟草叶片中，暗培养2h后再培养3d，然后在激光共聚焦显微镜观察叶切片的荧光表达情况，结果如图4。亚细胞定位图片显示空载在细胞质和细胞核中产生了绿色荧光信号，说明空载定位于细胞核和细胞质。PEZR-(K)-LN-BnGS1-GFP只在细胞质中产生绿色荧光，因此BnGS1蛋白主要分布在细胞质中。
实施例4转基因烟草的获得
通过单酶切方法构建超表达载体，具体方法如下：
(1)使用TSAP Thermosensitive Alkaline Phosphatase试剂盒(Promega，美国)对pBI121进行单酶切，反应体系如下(10μL)：
(2)37℃酶切2h。
(3)74℃灭活15min。
(4)用SpeI对BnGS1基因进行单酶切，反应体系如下(20μL)：
(5)37℃酶切1h，然后胶回收。
(6)将(3)、(5)中的产物用T4DNA连接酶连接，反应体系(10μL)：质粒DNA 100ng，目的片段10ng，10*Buffer 1μL，T4DNA连接酶2μL，加ddH2O至10μL。25℃条件下，连接3h。
将连接好的超表达载体转化到大肠杆菌DH5α感受态中，转化方法如下：
(1)取100μL感受态于冰上融化，无菌条件下加入带有目的片段的pBI121载体10μL，轻轻混匀，冰上放置25min。
(2)42℃热激45s，然后将离心管迅速转移到冰上，静置2min。
(3)无菌条件下，在离心管中加入600μL不含抗生素的LB液体培养基，37℃、200rpm条件下，振荡培养1h，使菌体复苏。
将复苏的菌体在含有Kan的平板上涂板，37℃条件下培养12h，挑取单菌落摇菌。对菌液进行PCR验证，其结果如图5。图5说明挑选的单菌落含有目的片段。提取质粒，将质粒测序，结果证明基因与pBI121载体连接成功。
农杆菌转化及阳性菌落鉴定：
将构建好的植物超表达载体通过热激方法转入农杆菌GV3101感受态中，具体如下：
(1)取-70℃保存的农杆菌感受态细胞GV3101于冰水浴中融化。
(2)无菌条件下，向感受态细胞中加入1μg质粒DNA，轻轻混匀，冰水浴静置5min。
(3)将离心管置于液氮中速冻5min，然后快速将离心管置于37℃水浴中保持5min，此时注意不要晃动水面；再将离心管放回冰水浴中，冰浴5min。
(4)无菌条件下在离心管中加800μL、无抗生素的LB培养基，28℃条件下振荡培养2-3h，使菌体复苏。
将复苏的菌液在含Kan和Rif的培养基上培养2-3d。挑取单菌落进行菌落PCR，结果如图6。结果显示植物超表达载体成功转化到GV3101菌体中。
农杆菌侵染烟草叶片：
将农杆菌阳性单菌落摇菌，通过叶盘法侵染烟草。将侵染后的烟草叶片在MS0培养基上暗培养2d后转移到MS1培养基上，持续光照培养，直到愈伤组织长出芽(图7A)。芽长到2-3cm时，将其切下，转移到MS2中，诱导芽生根(图7B)。MS2培养基含有Kan，阳性苗能够正常生长，阴性苗会死亡。将健康生长的幼苗从MS2培养基中取出，用自来水冲洗根部琼脂后，种植于土壤中(图7C)。
转基因烟草的鉴定：
转基因烟草DNA的提取：
提取转基因烟草的DNA，用1％的琼脂糖凝胶对DNA进行电泳实验，验证DNA的质量，结果如图8。胶图显示提取的DNA中没有蛋白污染，也没有发生断裂，质量好，能够用于PCR。
转基因烟草的PCR验证：
以转基因烟草的DNA为模板，以GS1F-1和GS1R-1为引物进行PCR反应。BnGS1转基因烟草植株的PCR产物如图9。BnGS1基因长1071bp，琼脂糖凝胶图显示BnGS1基因成功转入烟草中，转基因烟草苗构建成功。
转基因烟草的qRT-PCR分析：
对转基因烟草进行qRT-PCR分析，从而进一步确定转基因烟草植株的准确性。以烟草Nlt25基因为内参基因，BnGS1基因在转基因植株中的相对表达量如图10，结果显示BnGS1在转基因植株中得到表达，且在野生型中未能检测到BnGS1等位基因的mRNA水平。
转基因烟草GUS染色：
取转基因烟草嫩叶进行GUS染色，验证载体在烟草叶片中的表达情况，结果如图11。GUS染色实验表明BnGS1基因在转基因植株中具有较强的表达。
转基因烟草的氮含量分析：
开花时期，分别取BnGS1转基因、野生型烟草植株的叶片测量氮含量。取样时对植株进行观察，结果如图12。从图片上可以发现与野生型相比，BnGS1转基因烟草植株的株高显著的降低，转基因植株的叶片颜色更深。野生型和BnGS1转基因植株叶片的氮含量和粗蛋白含量分别如图13、图14。BnGS1转基因烟草叶片的氮含量和粗蛋白含量分别为4.88％和30.52％，野生型烟草叶片的氮含量和粗蛋白含量分别为2.29％和14.32％，转基因植株和野生型的叶片氮含量和粗蛋白含量均达到显著差异。
综上所述，苎麻BnGS1基因的氮和粗蛋白含量功能验证结果表明，BnGS1基因首次在烟草中超表达表明氮和粗蛋白含量显著增加2倍以上；利用BnGS1基因可以通过分子育种的方法选育高的粗蛋白含量饲用苎麻品种。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
序列表
<110> 中国农业科学院麻类研究所
<120> 基因的过表达在提高植物的氮含量和/或蛋白含量或选育高蛋白植物品种中的应用
<130> MP1904417
<160> 2
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 1071
<212> DNA
<213> BnGS1
<400> 1
atgtctctcc tcaacgatct cctcaacatt aacctgtcag acaccacaga gaagatcatc 60
gccgagtaca tatggatcgg tggatctggc atggacctaa gaagcaaagc caggactttg 120
aatggaccag tttcagatcc atcaaagctt cccaaatgga actacgacgg ttcaagcaca 180
gaccaagctc ccggggacga cagtgaagtc atcttatacc ctcaagcggt gtttaaggat 240
ccattcagga gaggaaacaa tatcctggtg atgtgtgacg cttatacgcc agctggcgag 300
ccgattccga cgaacaaacg acacaatgct gcgaagattt tcagtcaccc tgatgtggtc 360
gctgaggagc cttggtatgg cattgagcaa gaatacactc tccttcagaa ggatgttaac 420
tggccacttg gttggcccgt cggcggcttc ccggggcccc agggtcctta ctactgtgcc 480
gccggggcag acaaggcttt cggtcgcgac atagtgaacg cgcactacaa ggcttgcctc 540
tacgccggag tcaacatcag cggaatcaac ggcgaagtca tgcctggcca atgggagttt 600
caagtgggtc cttctgtcgg cattagctcc ggtgatcaag tctggattgc tcgctacatt 660
cttgagagga tcactgaaat tgcaggagtt gttctttcat ttgatcctaa gccgatcccg 720
ggtgactgga acggcgccgg tgcccacact aactacagca ccaagtcgat gagaaatgaa 780
ggcgggatcg acgtgatcaa gaaggccatc gagaaattag ggttgcgcca caaggagcac 840
atcgccgcct atggagaagg caacgagagg agactgaccg gtcgtcacga gaccgctgac 900
atcaacacct tctcttgggg tgtagcaaat cgtggagcct ctgttcgcgt tggtcgtgac 960
accgaaaagg aaggcaaagg ctacttcgag gaccgaaggc ctgcctcgaa catggatcct 1020
tacgttgtga cgtcgatgat tgcggagacc accatccttt ggaagccttg a 1071
<210> 2
<211> 356
<212> PRT
<213> BnGS1
<400> 2
Met Ser Leu Leu Asn Asp Leu Leu Asn Ile Asn Leu Ser Asp Thr Thr
1 5 10 15
Glu Lys Ile Ile Ala Glu Tyr Ile Trp Ile Gly Gly Ser Gly Met Asp
20 25 30
Leu Arg Ser Lys Ala Arg Thr Leu Asn Gly Pro Val Ser Asp Pro Ser
35 40 45
Lys Leu Pro Lys Trp Asn Tyr Asp Gly Ser Ser Thr Asp Gln Ala Pro
50 55 60
Gly Asp Asp Ser Glu Val Ile Leu Tyr Pro Gln Ala Val Phe Lys Asp
65 70 75 80
Pro Phe Arg Arg Gly Asn Asn Ile Leu Val Met Cys Asp Ala Tyr Thr
85 90 95
Pro Ala Gly Glu Pro Ile Pro Thr Asn Lys Arg His Asn Ala Ala Lys
100 105 110
Ile Phe Ser His Pro Asp Val Val Ala Glu Glu Pro Trp Tyr Gly Ile
115 120 125
Glu Gln Glu Tyr Thr Leu Leu Gln Lys Asp Val Asn Trp Pro Leu Gly
130 135 140
Trp Pro Val Gly Gly Phe Pro Gly Pro Gln Gly Pro Tyr Tyr Cys Ala
145 150 155 160
Ala Gly Ala Asp Lys Ala Phe Gly Arg Asp Ile Val Asn Ala His Tyr
165 170 175
Lys Ala Cys Leu Tyr Ala Gly Val Asn Ile Ser Gly Ile Asn Gly Glu
180 185 190
Val Met Pro Gly Gln Trp Glu Phe Gln Val Gly Pro Ser Val Gly Ile
195 200 205
Ser Ser Gly Asp Gln Val Trp Ile Ala Arg Tyr Ile Leu Glu Arg Ile
210 215 220
Thr Glu Ile Ala Gly Val Val Leu Ser Phe Asp Pro Lys Pro Ile Pro
225 230 235 240
Gly Asp Trp Asn Gly Ala Gly Ala His Thr Asn Tyr Ser Thr Lys Ser
245 250 255
Met Arg Asn Glu Gly Gly Ile Asp Val Ile Lys Lys Ala Ile Glu Lys
260 265 270
Leu Gly Leu Arg His Lys Glu His Ile Ala Ala Tyr Gly Glu Gly Asn
275 280 285
Glu Arg Arg Leu Thr Gly Arg His Glu Thr Ala Asp Ile Asn Thr Phe
290 295 300
Ser Trp Gly Val Ala Asn Arg Gly Ala Ser Val Arg Val Gly Arg Asp
305 310 315 320
Thr Glu Lys Glu Gly Lys Gly Tyr Phe Glu Asp Arg Arg Pro Ala Ser
325 330 335
Asn Met Asp Pro Tyr Val Val Thr Ser Met Ile Ala Glu Thr Thr Ile
340 345 350
Leu Trp Lys Pro
355
Claims (10)
1.基因的过表达在提高植物的氮含量和/或蛋白含量或选育高蛋白植物品种中的应用；
所述基因具有如下所示的核苷酸序列中的任意一项：
I、具有BnGS1的核苷酸序列；或
II、具有如I所示的核苷酸序列经修饰、取代、缺失或添加一个或多个碱基获得的核苷酸序列；或
III、与如I所示的核苷酸序列具有至少80％同源性的序列或翻译后所得蛋白与基因BnGS1表达的蛋白功能相同或相近的核苷酸序列；或
IV、如I、II或III所示序列的互补序列。
2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述植物为苎麻或烟草。
3.表达载体，其特征在于，包括过表达的基因和基础载体；
所述基因具有如下所示的核苷酸序列中的任意一项：
I、具有BnGS1的核苷酸序列；或
II、具有如I所示的核苷酸序列经修饰、取代、缺失或添加一个或多个碱基获得的核苷酸序列；或
III、与如I所示的核苷酸序列具有至少80％同源性的序列或翻译后所得蛋白与基因BnGS1表达的蛋白功能相同或相近的核苷酸序列；或
IV、如I、II或III所示序列的互补序列。
4.如权利要求3所述表达载体的构建方法，其特征在于，将基因与所述基础载体连接，转化，挑菌，提取质粒，测序；
所述基因具有如下所示的核苷酸序列中的任意一项：
I、具有BnGS1的核苷酸序列；或
II、具有如I所示的核苷酸序列经修饰、取代、缺失或添加一个或多个碱基获得的核苷酸序列；或
III、与如I所示的核苷酸序列具有至少80％同源性的序列或翻译后所得蛋白与基因BnGS1表达的蛋白功能相同或相近的核苷酸序列；或
IV、如I、II或III所示序列的互补序列。
5.转化或转染如权利要求3所述表达载体的宿主细胞。
6.如权利要求3所述表达载体或如权利要求5所述宿主细胞在提高植物的氮含量和/或蛋白含量或选育高蛋白植物品种中的应用。
7.如权利要求6所述的应用，其特征在于，所述植物为苎麻或烟草。
8.提高植物中氮含量的方法，其特征在于，取如权利要求3所述表达载体转入农杆菌感受态中，培养，挑菌，取阳性菌落侵染植物。
9.提高植物中蛋白含量的方法，其特征在于，取如权利要求3所述表达载体转入农杆菌感受态中，培养，挑菌，取阳性菌落侵染植物。
10.高蛋白植物的育种方法，其特征在于，取如权利要求3所述表达载体转入农杆菌感受态中，培养，挑菌，取阳性菌落侵染植物。
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| CN111575292A (zh) * | 2020-06-17 | 2020-08-25 | 中国农业科学院麻类研究所 | 一种dna分子及其应用和获得高根量苎麻植株的方法 |
| CN118726317A (zh) * | 2023-03-29 | 2024-10-01 | 中国农业科学院麻类研究所 | 一种具有激发植物免疫活性的木葡聚糖酶NfXYG12A及其突变体与应用 |
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101407824A (zh) * | 2008-11-24 | 2009-04-15 | 昆明理工大学 | 拟南芥细胞质型谷氨酰胺合成酶基因的植物表达载体的构建和应用 |
| CN101413011A (zh) * | 2008-11-24 | 2009-04-22 | 昆明理工大学 | 叶绿体型谷氨酰胺合成酶基因的植物表达载体及其构建和应用 |
-
2019
- 2019-04-28 CN CN201910350183.2A patent/CN110144357A/zh active Pending
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101407824A (zh) * | 2008-11-24 | 2009-04-15 | 昆明理工大学 | 拟南芥细胞质型谷氨酰胺合成酶基因的植物表达载体的构建和应用 |
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