CN109908363B - 一种靶向无痕释放药物缀合物及其制备方法与应用 - Google Patents
一种靶向无痕释放药物缀合物及其制备方法与应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN109908363B CN109908363B CN201711320821.3A CN201711320821A CN109908363B CN 109908363 B CN109908363 B CN 109908363B CN 201711320821 A CN201711320821 A CN 201711320821A CN 109908363 B CN109908363 B CN 109908363B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- cancer
- targeted
- drug conjugate
- coi
- release drug
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 239000003814 drug Substances 0.000 title claims abstract description 55
- 229940079593 drug Drugs 0.000 title claims abstract description 51
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 15
- 230000008685 targeting Effects 0.000 claims abstract description 18
- IYMAXBFPHPZYIK-BQBZGAKWSA-N Arg-Gly-Asp Chemical group NC(N)=NCCC[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O IYMAXBFPHPZYIK-BQBZGAKWSA-N 0.000 claims abstract description 15
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 claims abstract description 11
- 102000001189 Cyclic Peptides Human genes 0.000 claims abstract description 7
- 108010069514 Cyclic Peptides Proteins 0.000 claims abstract description 5
- 230000009471 action Effects 0.000 claims abstract description 4
- 108010072041 arginyl-glycyl-aspartic acid Proteins 0.000 claims abstract description 3
- 125000001302 tertiary amino group Chemical group 0.000 claims abstract description 3
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 18
- JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N N,N-Diisopropylethylamine (DIPEA) Chemical group CCN(C(C)C)C(C)C JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 11
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims description 9
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims description 9
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims description 8
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 8
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N Triethylamine Chemical compound CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 claims description 5
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 claims description 5
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 claims description 4
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 claims description 4
- WNLRTRBMVRJNCN-UHFFFAOYSA-N adipic acid Chemical compound OC(=O)CCCCC(O)=O WNLRTRBMVRJNCN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 239000003054 catalyst Substances 0.000 claims description 4
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 4
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 claims description 4
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 claims description 4
- 208000003174 Brain Neoplasms Diseases 0.000 claims description 3
- 206010033128 Ovarian cancer Diseases 0.000 claims description 3
- 206010061535 Ovarian neoplasm Diseases 0.000 claims description 3
- 238000005520 cutting process Methods 0.000 claims description 3
- 238000002347 injection Methods 0.000 claims description 3
- 239000007924 injection Substances 0.000 claims description 3
- 208000002154 non-small cell lung carcinoma Diseases 0.000 claims description 3
- 208000029729 tumor suppressor gene on chromosome 11 Diseases 0.000 claims description 3
- AGGWFDNPHKLBBV-YUMQZZPRSA-N (2s)-2-[[(2s)-2-amino-3-methylbutanoyl]amino]-5-(carbamoylamino)pentanoic acid Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCNC(N)=O AGGWFDNPHKLBBV-YUMQZZPRSA-N 0.000 claims description 2
- ASSMPDZEDVTRKG-UHFFFAOYSA-N 4-(bromomethyl)aniline Chemical group NC1=CC=C(CBr)C=C1 ASSMPDZEDVTRKG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- FOMVMXBARQUECW-UHFFFAOYSA-N 4-(chloromethyl)aniline Chemical group NC1=CC=C(CCl)C=C1 FOMVMXBARQUECW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- FCQCSCFHFSBKRM-UHFFFAOYSA-N 4-(iodomethyl)aniline Chemical group NC1=CC=C(CI)C=C1 FCQCSCFHFSBKRM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 208000036764 Adenocarcinoma of the esophagus Diseases 0.000 claims description 2
- 206010005003 Bladder cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 206010008342 Cervix carcinoma Diseases 0.000 claims description 2
- 208000001333 Colorectal Neoplasms Diseases 0.000 claims description 2
- 206010014733 Endometrial cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 206010014759 Endometrial neoplasm Diseases 0.000 claims description 2
- 208000032612 Glial tumor Diseases 0.000 claims description 2
- 206010018338 Glioma Diseases 0.000 claims description 2
- 208000002454 Nasopharyngeal Carcinoma Diseases 0.000 claims description 2
- 206010061306 Nasopharyngeal cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 208000015914 Non-Hodgkin lymphomas Diseases 0.000 claims description 2
- 206010030137 Oesophageal adenocarcinoma Diseases 0.000 claims description 2
- 206010061534 Oesophageal squamous cell carcinoma Diseases 0.000 claims description 2
- 206010061902 Pancreatic neoplasm Diseases 0.000 claims description 2
- 206010060862 Prostate cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 208000000236 Prostatic Neoplasms Diseases 0.000 claims description 2
- 208000015634 Rectal Neoplasms Diseases 0.000 claims description 2
- 208000006265 Renal cell carcinoma Diseases 0.000 claims description 2
- 208000000453 Skin Neoplasms Diseases 0.000 claims description 2
- 208000036765 Squamous cell carcinoma of the esophagus Diseases 0.000 claims description 2
- KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-N Succinic acid Natural products OC(=O)CCC(O)=O KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 208000024770 Thyroid neoplasm Diseases 0.000 claims description 2
- 208000007097 Urinary Bladder Neoplasms Diseases 0.000 claims description 2
- 208000006105 Uterine Cervical Neoplasms Diseases 0.000 claims description 2
- 239000001361 adipic acid Substances 0.000 claims description 2
- 235000011037 adipic acid Nutrition 0.000 claims description 2
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 claims description 2
- KDYFGRWQOYBRFD-NUQCWPJISA-N butanedioic acid Chemical compound O[14C](=O)CC[14C](O)=O KDYFGRWQOYBRFD-NUQCWPJISA-N 0.000 claims description 2
- 239000002775 capsule Substances 0.000 claims description 2
- 201000010881 cervical cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 208000029742 colonic neoplasm Diseases 0.000 claims description 2
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 2
- 208000028653 esophageal adenocarcinoma Diseases 0.000 claims description 2
- 208000007276 esophageal squamous cell carcinoma Diseases 0.000 claims description 2
- 208000005017 glioblastoma Diseases 0.000 claims description 2
- 239000008187 granular material Substances 0.000 claims description 2
- 201000010536 head and neck cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 208000014829 head and neck neoplasm Diseases 0.000 claims description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 2
- 201000007270 liver cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 208000014018 liver neoplasm Diseases 0.000 claims description 2
- 208000015486 malignant pancreatic neoplasm Diseases 0.000 claims description 2
- 201000011216 nasopharynx carcinoma Diseases 0.000 claims description 2
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 claims description 2
- 201000002528 pancreatic cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 208000008443 pancreatic carcinoma Diseases 0.000 claims description 2
- 206010038038 rectal cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 201000001275 rectum cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 2
- 201000000849 skin cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 206010041823 squamous cell carcinoma Diseases 0.000 claims description 2
- DPKBAXPHAYBPRL-UHFFFAOYSA-M tetrabutylazanium;iodide Chemical compound [I-].CCCC[N+](CCCC)(CCCC)CCCC DPKBAXPHAYBPRL-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 2
- 201000002510 thyroid cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 201000005112 urinary bladder cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims 1
- -1 p-aminobenzyl quaternary ammonium salt Chemical class 0.000 abstract description 15
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 abstract description 8
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 abstract description 7
- 230000007017 scission Effects 0.000 abstract description 7
- 108010045325 cyclic arginine-glycine-aspartic acid peptide Chemical group 0.000 abstract description 6
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 6
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 abstract description 5
- OVBPIULPVIDEAO-LBPRGKRZSA-N folic acid Chemical compound C=1N=C2NC(N)=NC(=O)C2=NC=1CNC1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 OVBPIULPVIDEAO-LBPRGKRZSA-N 0.000 abstract description 4
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 abstract description 4
- OVBPIULPVIDEAO-UHFFFAOYSA-N N-Pteroyl-L-glutaminsaeure Natural products C=1N=C2NC(N)=NC(=O)C2=NC=1CNC1=CC=C(C(=O)NC(CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 OVBPIULPVIDEAO-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 2
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 abstract description 2
- 229960000304 folic acid Drugs 0.000 abstract description 2
- 235000019152 folic acid Nutrition 0.000 abstract description 2
- 239000011724 folic acid Substances 0.000 abstract description 2
- 239000008186 active pharmaceutical agent Substances 0.000 abstract 1
- 108091008104 nucleic acid aptamers Proteins 0.000 abstract 1
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 abstract 1
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 43
- 239000000562 conjugate Substances 0.000 description 35
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 25
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 25
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 21
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 15
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 13
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 9
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 7
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 7
- FEMOMIGRRWSMCU-UHFFFAOYSA-N ninhydrin Chemical compound C1=CC=C2C(=O)C(O)(O)C(=O)C2=C1 FEMOMIGRRWSMCU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 6
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 6
- NLKNQRATVPKPDG-UHFFFAOYSA-M potassium iodide Substances [K+].[I-] NLKNQRATVPKPDG-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 150000003242 quaternary ammonium salts Chemical class 0.000 description 6
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 6
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 6
- TUMQZNBKSWFFAZ-OFVILXPXSA-N N-[(2S)-1-[[(2S)-5-(carbamoylamino)-1-[4-(chloromethyl)anilino]-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-methyl-1-oxobutan-2-yl]-6-(2,5-dioxopyrrol-1-yl)hexanamide Chemical compound CC(C)[C@H](NC(=O)CCCCCN1C(=O)C=CC1=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=O)C(=O)Nc1ccc(CCl)cc1 TUMQZNBKSWFFAZ-OFVILXPXSA-N 0.000 description 5
- 239000003638 chemical reducing agent Substances 0.000 description 5
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 5
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 5
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 5
- 150000003512 tertiary amines Chemical class 0.000 description 5
- LMDZBCPBFSXMTL-UHFFFAOYSA-N 1-Ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimide Substances CCN=C=NCCCN(C)C LMDZBCPBFSXMTL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- LVHKHLZPRPTQJG-BNLDXBMISA-N [(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(3S,6S,9S,12S,15S,18S,21S,22R)-15-[(2S)-butan-2-yl]-18-(methoxymethyl)-6-[(4-methoxyphenyl)methyl]-3,4,10,12,16,19,22-heptamethyl-9-(2-methylpropyl)-2,5,8,11,14,17,20-heptaoxo-1-oxa-4,7,10,13,16,19-hexazacyclodocos-21-yl]-methylamino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]-methylamino]-3-methoxy-1-oxopropan-2-yl]-methylamino]-3-methyl-1-oxobutan-2-yl] (2S)-2-(dimethylamino)-3-methylbutanoate Chemical compound N1C(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)CC)N(C)C(=O)[C@H](COC)N(C)C(=O)[C@@H](N(C)C(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)[C@H](COC)N(C)C(=O)[C@@H](OC(=O)[C@H](C(C)C)N(C)C)C(C)C)[C@@H](C)OC(=O)[C@H](C)N(C)C(=O)[C@@H]1CC1=CC=C(OC)C=C1 LVHKHLZPRPTQJG-BNLDXBMISA-N 0.000 description 4
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 4
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 4
- 108010010996 coibamide A Proteins 0.000 description 4
- RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N glutathione Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(=O)N[C@@H](CS)C(=O)NCC(O)=O RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N 0.000 description 4
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 4
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 4
- AMKBTTRWLGVRER-OFVILXPXSA-N n-[(2s)-1-[[(2s)-5-(carbamoylamino)-1-[4-(hydroxymethyl)anilino]-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-methyl-1-oxobutan-2-yl]-6-(2,5-dioxopyrrol-1-yl)hexanamide Chemical compound N([C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=O)C(=O)NC=1C=CC(CO)=CC=1)C(=O)CCCCCN1C(=O)C=CC1=O AMKBTTRWLGVRER-OFVILXPXSA-N 0.000 description 4
- 239000000047 product Substances 0.000 description 4
- 238000011894 semi-preparative HPLC Methods 0.000 description 4
- FPIRBHDGWMWJEP-UHFFFAOYSA-N 1-hydroxy-7-azabenzotriazole Chemical compound C1=CN=C2N(O)N=NC2=C1 FPIRBHDGWMWJEP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- FPQQSJJWHUJYPU-UHFFFAOYSA-N 3-(dimethylamino)propyliminomethylidene-ethylazanium;chloride Chemical compound Cl.CCN=C=NCCCN(C)C FPQQSJJWHUJYPU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102000004225 Cathepsin B Human genes 0.000 description 3
- 108090000712 Cathepsin B Proteins 0.000 description 3
- 239000007821 HATU Substances 0.000 description 3
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 3
- 239000000611 antibody drug conjugate Substances 0.000 description 3
- 229940049595 antibody-drug conjugate Drugs 0.000 description 3
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 3
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 3
- 238000006482 condensation reaction Methods 0.000 description 3
- 125000004122 cyclic group Chemical group 0.000 description 3
- 238000010511 deprotection reaction Methods 0.000 description 3
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 3
- 238000011161 development Methods 0.000 description 3
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 3
- 239000002086 nanomaterial Substances 0.000 description 3
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 3
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 3
- 238000011160 research Methods 0.000 description 3
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 3
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 3
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 3
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 3
- 125000003088 (fluoren-9-ylmethoxy)carbonyl group Chemical group 0.000 description 2
- 238000005160 1H NMR spectroscopy Methods 0.000 description 2
- NDKDFTQNXLHCGO-UHFFFAOYSA-N 2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)acetic acid Chemical compound C1=CC=C2C(COC(=O)NCC(=O)O)C3=CC=CC=C3C2=C1 NDKDFTQNXLHCGO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N Ammonia Chemical compound N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IAZDPXIOMUYVGZ-WFGJKAKNSA-N Dimethyl sulfoxide Chemical compound [2H]C([2H])([2H])S(=O)C([2H])([2H])[2H] IAZDPXIOMUYVGZ-WFGJKAKNSA-N 0.000 description 2
- 208000030453 Drug-Related Side Effects and Adverse reaction Diseases 0.000 description 2
- 108010024636 Glutathione Proteins 0.000 description 2
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 2
- LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N N-Butanol Chemical compound CCCCO LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010070863 Toxicity to various agents Diseases 0.000 description 2
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Chemical compound CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 150000004982 aromatic amines Chemical class 0.000 description 2
- 201000007455 central nervous system cancer Diseases 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 229960003180 glutathione Drugs 0.000 description 2
- 230000009036 growth inhibition Effects 0.000 description 2
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 2
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 2
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 2
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 2
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 2
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 2
- 229930014626 natural product Natural products 0.000 description 2
- KDLHZDBZIXYQEI-UHFFFAOYSA-N palladium Substances [Pd] KDLHZDBZIXYQEI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 2
- FYSNRJHAOHDILO-UHFFFAOYSA-N thionyl chloride Chemical compound ClS(Cl)=O FYSNRJHAOHDILO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N trifluoroacetic acid Substances OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ALBODLTZUXKBGZ-JUUVMNCLSA-N (2s)-2-amino-3-phenylpropanoic acid;(2s)-2,6-diaminohexanoic acid Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O.OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 ALBODLTZUXKBGZ-JUUVMNCLSA-N 0.000 description 1
- FDKXTQMXEQVLRF-ZHACJKMWSA-N (E)-dacarbazine Chemical compound CN(C)\N=N\c1[nH]cnc1C(N)=O FDKXTQMXEQVLRF-ZHACJKMWSA-N 0.000 description 1
- BDNKZNFMNDZQMI-UHFFFAOYSA-N 1,3-diisopropylcarbodiimide Chemical compound CC(C)N=C=NC(C)C BDNKZNFMNDZQMI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RZVAJINKPMORJF-UHFFFAOYSA-N Acetaminophen Chemical compound CC(=O)NC1=CC=C(O)C=C1 RZVAJINKPMORJF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091023037 Aptamer Proteins 0.000 description 1
- 108010051109 Cell-Penetrating Peptides Proteins 0.000 description 1
- 102000020313 Cell-Penetrating Peptides Human genes 0.000 description 1
- 241000195493 Cryptophyta Species 0.000 description 1
- 238000012404 In vitro experiment Methods 0.000 description 1
- FADYJNXDPBKVCA-UHFFFAOYSA-N L-Phenylalanyl-L-lysin Natural products NCCCCC(C(O)=O)NC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 FADYJNXDPBKVCA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RHGKLRLOHDJJDR-BYPYZUCNSA-N L-citrulline Chemical group NC(=O)NCCC[C@H]([NH3+])C([O-])=O RHGKLRLOHDJJDR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- 241000215469 Leptolyngbya sp. Species 0.000 description 1
- 241001366278 Leptotes marina Species 0.000 description 1
- 108010028921 Lipopeptides Proteins 0.000 description 1
- RHGKLRLOHDJJDR-UHFFFAOYSA-N Ndelta-carbamoyl-DL-ornithine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=O RHGKLRLOHDJJDR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000845082 Panama Species 0.000 description 1
- NFHFRUOZVGFOOS-UHFFFAOYSA-N Pd(PPh3)4 Substances [Pd].C1=CC=CC=C1P(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1.C1=CC=CC=C1P(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1.C1=CC=CC=C1P(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1.C1=CC=CC=C1P(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 NFHFRUOZVGFOOS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RHQDFWAXVIIEBN-UHFFFAOYSA-N Trifluoroethanol Chemical compound OCC(F)(F)F RHQDFWAXVIIEBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910021529 ammonia Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000001093 anti-cancer Effects 0.000 description 1
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 1
- 229940041181 antineoplastic drug Drugs 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 230000005907 cancer growth Effects 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 238000005660 chlorination reaction Methods 0.000 description 1
- 239000007979 citrate buffer Substances 0.000 description 1
- 235000013477 citrulline Nutrition 0.000 description 1
- 229960002173 citrulline Drugs 0.000 description 1
- 229940121657 clinical drug Drugs 0.000 description 1
- 239000013068 control sample Substances 0.000 description 1
- 230000001351 cycling effect Effects 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 1
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 238000002784 cytotoxicity assay Methods 0.000 description 1
- 231100000263 cytotoxicity test Toxicity 0.000 description 1
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 238000012377 drug delivery Methods 0.000 description 1
- 230000000857 drug effect Effects 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 231100000086 high toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000003463 hyperproliferative effect Effects 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 125000001967 indiganyl group Chemical group [H][In]([H])[*] 0.000 description 1
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 1
- 230000002601 intratumoral effect Effects 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 230000002147 killing effect Effects 0.000 description 1
- 150000002611 lead compounds Chemical class 0.000 description 1
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 231100001252 long-term toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 231100000053 low toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 description 1
- CMWYAOXYQATXSI-UHFFFAOYSA-N n,n-dimethylformamide;piperidine Chemical compound CN(C)C=O.C1CCNCC1 CMWYAOXYQATXSI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002547 new drug Substances 0.000 description 1
- 238000010899 nucleation Methods 0.000 description 1
- 230000003285 pharmacodynamic effect Effects 0.000 description 1
- PARWUHTVGZSQPD-UHFFFAOYSA-N phenylsilane Chemical compound [SiH3]C1=CC=CC=C1 PARWUHTVGZSQPD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002953 preparative HPLC Methods 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 230000004043 responsiveness Effects 0.000 description 1
- 238000007363 ring formation reaction Methods 0.000 description 1
- 231100001251 short-term toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 1
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 1
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 238000001308 synthesis method Methods 0.000 description 1
- WROMPOXWARCANT-UHFFFAOYSA-N tfa trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F.OC(=O)C(F)(F)F WROMPOXWARCANT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- ZGYICYBLPGRURT-UHFFFAOYSA-N tri(propan-2-yl)silicon Chemical compound CC(C)[Si](C(C)C)C(C)C ZGYICYBLPGRURT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004474 valine Substances 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
Images
Landscapes
- Medicinal Preparation (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
本发明涉及一种靶向无痕释放药物缀合物及其制备方法与应用。具体公开了一种靶向无痕释放药物缀合物，其结构为T‑L‑D，T代表靶向基团，L代表接头，D代表活性成分，其中，T选自RGD肽、环RGD肽，RGD肽衍生物、RGD环肽衍生物、叶酸、穿膜肽、核酸适体、荧光染料；D为具有叔胺基的药物活性成份，优选为柯义巴肽A、柯义巴肽A衍生物；L为A‑BC‑E，BC代表酶切位点。本发明使用具有靶向作用、易合成修饰的环RGD代替价格昂贵、不易合成的抗体作为靶向分子，制备更简单，也达到了很高的特异性靶向作用，同时在酶的特异性切割作用下，通过对氨基苄基季铵盐的自我消除，实现药物活性成分的无痕释放。
Description
技术领域
本发明涉及医药领域，具体涉及一种靶向无痕释放药物缀合物及其制备方法与应用。
背景技术
柯义巴肽A(Coibamide A，Coi A)是一种高度N-甲基化的天然环酯肽，对肺癌、乳腺癌、黑色素瘤、白血病以及中枢神经癌等细胞都具有纳摩尔级的细胞毒性，同时对乳腺、中枢神经以及卵巢癌细胞具有较好的组织选择性。但是由于Coi A水溶性较差，不易修饰，并且体外实验表明Coi A对正常细胞也具有较大的毒性，因此Coi A作为药物应用于体内研究时受到极大的限制。研究表明，对氨基苄基季铵盐能在酶特异性切割酰胺键或还原剂还原二硫键时，发生自我消除反应，无痕释放叔胺或芳香胺类药物。本课题组的研究表明CoiA的类似物Coi A3与Coi A具有同等的细胞毒性，但合成较Coi A简单。因此本发明拟采用Coi A3为模型，将Coi A3与对酶或还原剂敏感的含有对氨基苄基的臂(linker)连接形成季铵盐，然后将具有靶向作用的环RGD连接在臂的另一端，形成RGD-Coi A3缀合物。当RGD-CoiA3被靶向运输到肿瘤细胞内时，细胞内过表达的酶cathepsin B或谷胱甘肽将连接药物的linker特异性切割，对氨基苄基发生自我消除，从而无痕释放药物。
有效的药物递送体系能够将毒性大，副反应多的疏水药物高效、快速地运送至肿瘤部位。目前研究者们多采用脂质体、聚合物、多肽、纳米材料等，通过包埋或者共价偶联疏水药物的方法形成纳米组装体，实现抗癌药物的靶向递送，提高药物利用度，降低药物毒性。2016年，Nature Chemistry报道了一种抗体-药物缀合物无痕释放药物的方法(NatureChemistry，2016，8，1112-1119)。该方法针对不易修饰的叔胺和芳香胺类药物，这些药物能够与对氨基苄基形成季铵盐，在酶或氧化还原特异性切割linker时，对氨基苄基通过1,6消除，自我牺牲，无痕释放药物。然而该方法采用抗体作为靶向分子，虽然抗体特异性强，但其价格昂贵，不易合成，因此需要发展一种制备简单、价格经济的刺激响应的药物缀合物，为新药开发提供新的模式。Coi A是2008年从巴拿马海洋蓝藻Leptolyngbya sp.中分离得到的一种海洋天然产物。它是一种富含多个N-甲基化氨基酸的环脂肽，对多种癌细胞具有低的纳摩尔级的细胞毒性，是具有潜在优势的抗癌先导化合物。但是Coi A的水溶性差，不易修饰，毒性大，使其发展至临床药物受到限制。本课题组自2015年对Coi A的结构做出正确修正后，不断地对其结构进行改造，合成了一系列Coi A类似物，药效关系研究表明Coi A3(N-Me-Ser(Me)-OH替换为N-Me-Ala-OH)与Coi A具有同等的细胞毒性，合成相对较简单。因此本发明将利用对氨基苄基能够与叔胺形成季铵盐，并在酶等特定条件下发生自我消除，无痕释放叔胺类药物的特点，采用具有靶向作用、易合成得到的小分子肽环RGD作为靶向分子，先将Coi A3连接在含有对氨基苄基和特异性切割位点的linker的一端形成季铵盐，得到的物质再与环RGD连接，形成RGD-Coi A3缀合物。该缀合物被靶向递送至肿瘤细胞，胞内高表达的酶cathepsin B或谷胱甘肽特异性切割linker，Coi A3被无痕释放。
在现有技术中，无论是通过脂质体、聚合物、多肽、纳米材料等包埋的方法递送药物，还是共价偶联的载药体系，都存在一定的短期和长期的毒性问题，并且很难获得定量、高效的药物装载率。另外，使用纳米材料、多肽等作为载体通过共价结合的方法递送药物时，需要对药物进行修饰，以方便药物与载体进行共价偶联，该方法释放的药物是修饰后的药物，并不是药物本身，药效可能会降低。Nature Chemistry虽然报道了一种抗体-药物缀合物无痕释放药物的方法，但是该方法采用价格昂贵，样品量少，不易合成的抗体作为靶向分子，使该药物缀合物的使用受到极大限制。
发明内容
本发明基于对氨基苄基能够与叔胺形成季铵盐，设计了酶或还原剂特异性切割含有对氨基苄基的linker，该linker与Coi A3形成季铵盐，在linker的另一端接上靶向的环RGD肽，形成RGD-Coi A3缀合物，当RGD-Coi A3缀合物被靶向运送至癌细胞后，在酶或还原剂的特异性切割作用下，对氨基苄基发生1，6消除，自我牺牲，无痕释放药物，以达到降低药物毒性，提高药物利用度的目的。
一种靶向无痕释放药物缀合物，其结构为T-L-D，T代表靶向基团，L代表接头，D代表活性成分，其中，
T选自RGD肽、环RGD肽，RGD肽衍生物、环RGD肽衍生物、叶酸、穿膜肽、核酸适体、荧光染料；优选为RGDyK环肽，其中赖氨酸侧链上偶联有-OCCH2CH2SH、-OCCH2SH、-OCCH2CH2CH2SH；更优选地，所述的T选自
D为具有叔胺基的药物活性成份，优选为柯义巴肽A、柯义巴肽A衍生物、以及公告号为CN105646675A的专利中公开的柯义巴肽A衍生物，具体选自
L为A-BC-E，BC代表酶切位点，A代表与靶向基团连接的基团，E代表与活性成分D连接，并进行无痕释放的基团；
A选自马来酰亚胺基己酰基(MC)、丁二酸、己二酸
E选自对氨基苄基氯、对氨基苄基溴、对氨基苄基碘；
BC选自Val-Cit、Phe-Lys。
在本发明的一个具体的技术方案中，所述靶向无痕释放药物缀合物为
在本发明的一个具体的技术方案中，所述靶向无痕释放药物缀合物为RGD-MC-Val-Cit-PAB-Coi A3。
在本发明的一个具体的技术方案中，所述靶向无痕释放药物缀合物为叶酸-MC-Val-Cit-PAB-Coi A3。
在本发明的一个具体的技术方案中，所述靶向无痕释放药物缀合物为穿膜肽-MC-Val-Cit-PAB-Coi A3。
在本发明的一个具体的技术方案中，所述靶向无痕释放药物缀合物为核酸适体-MC-Val-Cit-PAB-Coi A3。
本发明另一个方面提供了一种靶向无痕释放药物缀合物的制备方法，其包括如下步骤：
1)将接头与活性成分在催化剂和碱剂的作用下在有机溶剂中反应，获得L-D缀合物；
2)将L-D缀合物与靶向基团在于在碱性条件的20％-80％乙腈的NH4HCO3缓冲液中反应，获得T-L-D缀合物。
在本发明的技术方案中，所述的催化剂为KI或四丁基碘化铵，碱剂为DIEA或三乙胺。本发明另一个方面提供了一种药物组合物，其含有有效量的本发明的靶向无痕释放药物缀合物或其药学上可接受的盐，和药学上可接受的载体。
在本发明的技术方案中，药物组合物的给药方式包括注射或随时间逐渐输注。例如，可以是经口、静脉内、腹膜内、肌内、腔内、肿瘤内、或透皮。
在本发明的技术方案中，药物组合物的制剂类型为注射剂、片剂、口服液、胶囊剂、颗粒剂、透皮制剂、吸入制剂。
在本发明的另一个方面提供了一种药物组合物，其含有有效量的本发明的靶向无痕释放药物缀合物和至少一种其他活性成分。
本发明的另一个方面提供了本发明的无痕释放药物缀合物在制备治疗肿瘤药物用的用途。
所述的肿瘤选自括结肠癌、直肠癌、脑瘤(优选为成胶质细胞瘤)、肺癌(优选为非小细胞肺癌)、表皮鳞癌、膀胱癌、胰腺癌、乳腺癌、卵巢癌、宫颈癌、子宫内膜癌、结直肠癌、肾细胞癌、食管腺癌、食管鳞状细胞癌、非霍奇金淋巴瘤、肝癌、皮肤癌、甲状腺癌、头颈癌、前列腺癌、神经胶质瘤及鼻咽癌中的一种或多种；更优选地，所述的过度增殖性疾病为乳腺癌、非小细胞肺癌。
在本发明的技术方案中，所述的Val为缬氨酸，Cit为瓜氨酸，PAB为对氨基苄基，MC为马来酰亚胺基己酰基，Coi A3为
有益效果
1、本发明使用具有靶向作用、易合成修饰的环RGD代替价格昂贵、不易合成的抗体作为靶向分子，制备更简单，也达到了很高的特异性靶向作用。
2、本发明采用的Coi A3没有活性基团，而本发明采用的方法无需对Coi A3进行额外修饰，即可将其与接头进行偶联，降低了制备难度，提高了药物效率。
3、本发明的接头能够特异性释放活性成分，在酶或还原剂特异性切割linker时，基于对氨基苄基发生的自我消除，将Coi A3无痕释放，降低Coi A3的毒性。该方法有望发展成一种高效低毒的具有刺激响应性的载药体系。
附图说明
图1：cyclo RGDyK的HRMS图。
图2：MC-Val-Cit-PAB-OH的HRMS图。
图3：MC-Val-Cit-PAB-Cl的1H-NMR图。
图4：Coi A3的HRMS图。
图5：cRGDyK-linker-Coi A3缀合物的HRMS图。
图6：cRGDyK-linker-Coi A3缀合物体外酶切HPLC分析。
图7：cRGDyK-linker-Coi A3缀合物的细胞毒性分析。
具体实施方式
下面通过实施例进一步描述本发明，而不应理解为对本发明的限制。
实施例1环RGDyK的合成
环RGDyK的合成路线如下路线所示：
步骤一、线性肽的合成
于一个50mL的固相反应器中加入TCP树脂(1mmol/g，2g，2mmol)及CH2Cl2(6ml)，溶胀树脂30min。抽除CH2Cl2，用无水DMF(2×6mL)洗涤树脂。同时将Fmoc-Gly-OH((297mg,1mmol，0.5eq.)溶于无水DMF(4ml)加入树脂中，向树脂中加入DIEA(520μL,3mmol，1.5eq.)，N2鼓泡混匀，缩合反应2h。抽除反应液，用DMF(4×6mL)洗涤树脂，再用无水DMF(6mL)洗涤树脂。向树脂中加入乙酸(230μL,4mmol,2eq.)和DIEA(2ml,12mmol,6eq.)的DMF(4mL)溶液，反应30min，抽除反应液，用DMF(4×6mL)洗涤树脂，得到树脂的取代度为0.50mmol/g(2g，1mmol，1eq.)。
Fmoc-Gly-OH连接至树脂后，随后肽链上每一个氨基酸的加入都通过以下方法A、方法B和方法C进行脱保护，氨基酸的偶联以及茚三酮循环进行，依次偶联Arg、Lys、Tyr、Asp直至得到线性五肽(1a)。脱保护，氨基酸的偶联，茚三酮的检测方法如下：
方法A：脱掉Fmoc
20％哌啶/DMF溶液(6ml)加入树脂中，鼓气5min，抽去溶剂，再加入20％哌啶/DMF溶液(6ml)加入树脂，鼓气5min，抽去溶剂，用DMF(4x 6mL)洗涤树脂，再用无水DMF(2x 6mL)洗涤树脂。
方法B:Fmoc-Xaa-OH的偶联
Fmoc-Xaa-OH(4.0eq.)和HATU(4.0eq.)溶于无水DMF(4ml)，向该溶液中加入DIEA(12eq.)，混匀，将该反应液转移到脱除Fmoc的TCP树脂中，N2鼓泡混匀，缩合反应0.5h(茚三酮试剂检测至反应完全)。抽除反应液，用DMF(4x 6mL)洗涤树脂。
方法C:茚三酮检测
偶联反应时，取出少量树脂，DMF洗两遍，加入两滴茚三酮检测液(茚三酮15g,乙酸3ml,正丁醇100ml)，90℃加热3min，树脂不发生颜色变化表明反应完全。树脂变蓝表明存在初级氨。
得到五肽的树脂(1a)后，将溶有Pd(PPh3)4(0.1eq.)，PhSiH3(10eq.)的二氯甲烷溶液8ml加入树脂中，N2鼓泡8min，抽除二氯甲烷，用二氯甲烷洗涤树脂(4×6mL)，用DMF洗涤树脂(4×6mL)，再用无水的DMF(2x 6mL)洗涤树脂。同时将HOOCCH2CH2STrt(4.0eq.)和HATU(4.0eq.)溶于无水DMF(4ml)，向该溶液中加入DIEA(12eq.)，混匀，将该反应液转移到脱除Alloc的TCP树脂中，N2鼓泡混匀，缩合反应0.5h(茚三酮试剂检测至反应完全)。抽除反应液，用DMF(4×6mL)洗涤树脂。然后脱除N端的Fmoc(使用方法A)，随后用二氯甲烷洗涤(4×6mL)，将三氟乙醇：乙酸：二氯甲烷为1:1:8的切割液加入树脂中，切割过夜。切割产物经半制备型HPLC纯化，冻干，得到白色固体的线性六肽(1b)。
步骤二、环化
将EDCI(10eq.)，HOAt(10eq.),DIEA(40eq.)溶于CH2Cl2(30mL)中，在冰浴下冷却至0℃。将线性六肽(1b)(1eq.)溶于CH2Cl2(2mL)中，0℃缓慢滴加至EDCI/HOAt/DIEA的反应液中，反应1h后撤去冰浴，将反应混合物继续在室温下搅拌反应48h，减压蒸除溶剂，用制备型HPLC纯化，收集产物，冷冻干燥，得到白色固体的环肽(1c)。
步骤三、最终脱保护
将得到的环肽1c溶于TFA:TIS:H2O为95:2.5:2.5的切割液中，室温搅拌2h,减压除去TFA，产物经半制备型HPLC纯化，冻干，得到白色固体的cyclo RGD。HRMS(ESI)m/z:calcdfor C30H46N9O9S[M+H]+708.3139,found 708.3137；calcd for C30H45N9O9SNa[M+Na]+730.2959,found 730.2940.
实施例2接头MC-Val-Cit-PAB-Cl的合成
MC-Val-Cit-PAB-Cl由MC-Val-Cit-PAB-OH的氯代得到。MC-Val-Cit-PAB-OH的合成参见专利“Antibody drug conjugates,WO2014/191578 A1”。HRMS(ESI)m/z:calcd forC28H41N6O7[M+H]+573.3073,found 573.3044；calcd for C28H40N6O7Na[M+Na]+595.2856,found595.2849。
将得到的MC-Val-Cit-PAB-OH溶于无水DMF中，冰浴下加入二氯亚砜(2eq.)，冰浴搅拌2h。减压除去DMF，反应产物经硅胶柱分离，得到MC-Val-Cit-PAB-Cl。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ0.82(d,J＝60Hz,3H),0.85(d,J＝6.8Hz,3H),1.16-1.25(m,2H),1.28-1.40(m,1H),1.40-1.54(m,5H),1.54-1.78(m,1H),1.81-2.02(m,1H),2.05-2.31(m,2H),2.86-3.09(m,3H),4.11-4.22(m,1H),4.29-4.45(m,2H),4.71(s,2H),5.42(s,2H),5.91-6.04(t,J＝5.6Hz,1H),7.01(s,2H),7.16-7.25(d,J＝8.4Hz,1H),7.30-7.39(d,J＝8.4Hz,2H),7.49-7.67(m,2H),7.73-7.85(d,J＝8.8Hz,1H),8.04-8.17(d,J＝7.6Hz,1H),10.05(s,1H)ppm.
实施例3Coi A3药物的合成
Coi A3是天然产物Coibamide A的类似物，即将Coibamide A中的N-Me-Ser(Me)-OH替换为N-Me-Ala-OH，其合成方法参见文献“Yao,G.Y.；Pan,Z.Y.；Wu,C.L.；Wang,W.；Fang,L.J.；Su,W.Efficient synthesis and stereochemical revision of coibamideA.J.Am.Chem.Soc.,2015,137,13488-13491.”HRMS(ESI)m/z:calcd for C63H107N10O14[M+H]+1227.7968,found 1227.7971；calcd for C63H106N10O14Na[M+Na]+1249.7788,found1249.7751。
实施例4RGD-Coi A3缀合物的制备
RGD-linker-Coi A3
将MC-Val-Cit-PAB-Cl和Coi A3(1.1eq.)溶于无水DMF中，加入KI(0.2eq.)，随后加入DIEA(2.5eq)，室温震荡12h。反应产物经半制备型HPLC纯化，冻干，得到白色固体的MC-Val-Cit-PAB-Coi A3。
将得到的MC-Val-Cit-PAB-Coi A3和cyclo RGDyK(2eq.)溶于30％乙腈的NH4HCO3缓冲液(pH＝8)，冰浴搅拌2h。反应产物经半制备型HPLC纯化，冻干，得到白色固体的RGD-Coi A3缀合物。HRMS(ESI)m/z:calcd for C121H190N25O29S[M]+2489.3882,found 2489.3612.
实施例5体外药物释放研究
将RGD-Coi A3缀合物溶于10％DMF的柠檬酸盐缓冲液，pH＝5.5，向该溶液中加入半胱氨酸，终浓度为5mM，然后加入组织蛋白酶B，37℃培育。24h后，取少量样品进行HPLC分析。
实施例6体内细胞毒性研究
将肿瘤细胞MDA-MB-231和正常细胞HFL分别接种于96孔板，接种24h后，去掉培养基，加入新的培养基，然后将新的含有不同浓度的RGD-Coi A3缀合物(0.04μM-4μM)的培养基加至细胞中，用DMSO做对照。细胞在5％的CO2培养箱中，37℃培育。72h后，细胞用MTT(20μL/孔，5mg/ml)处理，继续培育4h。然后去掉培养基，加入DMSO，轻轻振摇10min，用全波长读数仪(Thermol Multiskan GO)测490nm处的吸收。每个实验独立重复三次。生长抑制速率计算公式如下：生长抑制速率(％)＝[1-缀合物样品的吸光度/对照样品的吸光度]*100％。最小抑制浓度定义为相比于对照细胞，缀合物使细胞减少50％时的药物浓度。
RGD-Coi A3缀合物的细胞毒性实验结果表明，RGD-Coi A3缀合物对MDA-MB-231癌细胞的最小抑制浓度为110nM，与原药Coi A3(IC50＝5nM)相比，毒性降低了25倍，对正常细胞HFL的最小抑制浓度为990nM，与原药Coi A3(IC50＝0.1nM)相比，毒性降低了9900倍，说明RGD-Coi A3缀合物能够有效抑制癌细胞的生长，同时降低对正常细胞的杀伤能力。
上述具体实施方式不以任何形式限制本发明的技术方案，凡是采用等同替换或等效变换的方式所获得的技术方案均落在本发明的保护范围。
Claims (9)
1.一种靶向无痕释放药物缀合物，其结构为T-L-D，T代表靶向基团，L代表接头，D代表活性成分，其中，
T选自RGD肽、RGDyK环肽；
D为具有叔胺基的药物活性成份，选自柯义巴肽A3；
L为A-BC-E，BC代表酶切位点，A代表与靶向基团连接的基团，E代表与活性成分D连接，并进行无痕释放的基团；
A选自马来酰亚胺基己酰基(MC)、丁二酸、己二酸
E选自对氨基苄基氯、对氨基苄基溴、对氨基苄基碘；
BC选自Val-Cit。
2.根据权利要求1所述的靶向无痕释放药物缀合物，所述靶向无痕释放药物缀合物为cRGDyK-MC-Val-Cit-PAB-Coi A3、RGD-MC-Val-Cit-PAB-Coi A3。
3.一种权利要求1-2任一项所述的靶向无痕释放药物缀合物的制备方法，其包括如下步骤：
1)将接头与活性成分在催化剂和碱剂的作用下在有机溶剂中反应，获得L-D缀合物；
2)将L-D缀合物与靶向基团在碱性条件的20％-80％乙腈的NH4HCO3缓冲液中反应，获得T-L-D缀合物。
4.根据权利要求3所述的制备方法，所述的催化剂为KI或四丁基碘化铵，碱剂为DIEA或三乙胺。
5.一种药物组合物，其含有有效量的权利要求1-2任一项所述的靶向无痕释放药物缀合物或其药学上可接受的盐，和药学上可接受的载体。
6.根据权利要求5所述的药物组合物，所述药物组合物的制剂类型为注射剂、片剂、口服液、胶囊剂、颗粒剂、透皮制剂、吸入制剂。
7.一种药物组合物，其含有有效量的权利要求1-2任一项所述的靶向无痕释放药物缀合物和至少一种其他活性成分。
8.根据权利要求1-2任一项所述的无痕释放药物缀合物在制备治疗肿瘤药物中的用途，
所述的肿瘤选自括结肠癌、直肠癌、脑瘤、肺癌、表皮鳞癌、膀胱癌、胰腺癌、乳腺癌、卵巢癌、宫颈癌、子宫内膜癌、结直肠癌、肾细胞癌、食管腺癌、食管鳞状细胞癌、非霍奇金淋巴瘤、肝癌、皮肤癌、甲状腺癌、头颈癌、前列腺癌、神经胶质瘤及鼻咽癌中的一种或多种。
9.根据权利要求8所述的用途，其中，脑瘤为成胶质细胞瘤、肺癌为非小细胞肺癌。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201711320821.3A CN109908363B (zh) | 2017-12-12 | 2017-12-12 | 一种靶向无痕释放药物缀合物及其制备方法与应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201711320821.3A CN109908363B (zh) | 2017-12-12 | 2017-12-12 | 一种靶向无痕释放药物缀合物及其制备方法与应用 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN109908363A CN109908363A (zh) | 2019-06-21 |
| CN109908363B true CN109908363B (zh) | 2022-03-08 |
Family
ID=66957784
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201711320821.3A Active CN109908363B (zh) | 2017-12-12 | 2017-12-12 | 一种靶向无痕释放药物缀合物及其制备方法与应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN109908363B (zh) |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN114533891B (zh) * | 2020-11-24 | 2023-04-18 | 深圳先进技术研究院 | 一种靶向无痕释放药物缀合物及其制备方法与应用 |
| CN113717246B (zh) * | 2021-08-05 | 2025-03-25 | 核欣(苏州)医药科技有限公司 | 一种多肽异二聚体的制备方法 |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN105288639A (zh) * | 2015-11-23 | 2016-02-03 | 中国药科大学 | 一种载阿霉素的主动靶向白蛋白纳米载体的制备及其应用 |
| CN105646675A (zh) * | 2015-10-09 | 2016-06-08 | 深圳先进技术研究院 | 柯义巴肽a类似物及其合成方法与应用 |
-
2017
- 2017-12-12 CN CN201711320821.3A patent/CN109908363B/zh active Active
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN105646675A (zh) * | 2015-10-09 | 2016-06-08 | 深圳先进技术研究院 | 柯义巴肽a类似物及其合成方法与应用 |
| CN105288639A (zh) * | 2015-11-23 | 2016-02-03 | 中国药科大学 | 一种载阿霉素的主动靶向白蛋白纳米载体的制备及其应用 |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| Novel N-Methylated Cyclodepsipeptide Prodrugs for Targeted Cancer Therapy;Wu, CL et al.;《JOURNAL OF MEDICINAL CHEMISTRY》;20210108;第64卷(第2期);第991-1000页 * |
| Targeted drug delivery through the traceless release of tertiary and heteroaryl amines from antibody–drug conjugates;Staben, LR et al.;《nature chemistry》;20161017;第8卷(第12期);第1112-1119页 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN109908363A (zh) | 2019-06-21 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| EP3452096B1 (en) | Bicyclic peptide-toxin conjugates specific for mt1-mmp | |
| US20230340020A1 (en) | Peptide ligands for binding to mt1-mmp | |
| EP2632934B1 (en) | Process for the manufacture of degarelix and its intermediates | |
| CN112386707B (zh) | 一种肿瘤靶向多肽药物偶联物及其制备方法 | |
| TW201408701A (zh) | 自我組織化肽衍生物的製造方法 | |
| EP2285396A1 (en) | Novel dual targeting antitumoural conjugates | |
| CN109908363B (zh) | 一种靶向无痕释放药物缀合物及其制备方法与应用 | |
| JP2021501201A (ja) | ステープルペプチドの細胞内送達のためのポリペプチド接合体 | |
| US11319341B2 (en) | Immune-stimulating soluble doxorubicin-conjugated complex | |
| ES2369872T3 (es) | Procesos para la preparación de eptifibatide y los compuestos intermedios pertinentes. | |
| CN103864885B (zh) | 1-羟基-1,2,3-苯并三嗪-4(3h)-酮在多肽合成中的应用 | |
| US20030125243A1 (en) | Synthesis of cyclic peptides | |
| Jiang et al. | Peptide conjugates of 4-aminocyclophosphamide as prodrugs of phosphoramide mustard for selective activation by prostate-specific antigen (PSA) | |
| EP0640618B1 (de) | Tetrahydronaphthalin-Peptidderivate | |
| CN105646675B (zh) | 柯义巴肽a类似物及其合成方法与应用 | |
| CN112830975B (zh) | α-螺旋构象稳定的促凋亡双环多肽及制备方法与应用 | |
| JPH05501865A (ja) | チオアシル化試薬および中間体，チオペプチド，およびこれらの調製および使用法 | |
| ES2934161T3 (es) | Rutas de fase de solución lineal para hexapéptidos de WNT | |
| US20240408219A1 (en) | Bicyclic peptide ligand drug conjugates | |
| Ning et al. | Modification of oligopeptides on aspartic acid or lysine residues by solid-phase synthesis through on-resin side-chain conjugation | |
| US20240398965A1 (en) | Bicyclic peptide ligand drug conjugates | |
| CN112159462B (zh) | 柯义巴肽a衍生物及其用途 | |
| Parente | Diketopiperazines as scaffold for the synthesis of new compounds modulating protein-protein interactions and functions | |
| CN104478995A (zh) | 液固相结合合成富勒烯双加成多肽的方法 | |
| CN111196841A (zh) | 一种多聚化RGD肽偶联Pyro光敏剂的合成和应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |