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CN1098352C - 高效支原体培养基及其制备方法 - Google Patents

高效支原体培养基及其制备方法 Download PDF

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Abstract

本发明提供一种高效支原体培养基及其制备方法。其配方为：蛋白胨、新鲜牛肉提取纯粉、氯化钠、磷酸二氢钾和蒸馏水组成基础培养基。使用前加入；新生牛血清、新鲜酵母浸液、10%尿素溶液或10%精氨酸溶液、0.4%酚红溶液及青霉素。在固体培养基中还加有琼脂。在同样实验条件下，本高效支原体培养基具有生长速度快、检出率高的特点。

Description

高效支原体培养基及其制备方法
本发明涉及一种高效支原体培养基及其制备方法，特别是一种能使解脲支原体快速生长、分离的的高敏感性和高特异性的培养基及其制备方法。
非淋菌性尿道炎是世界上发病人数最多的性病，仅次于淋病。解脲支原体和人型支原体是引起非淋菌性尿道炎的病原体之一。在性病的预防和治疗工作中，对患者作支原体检测是十分重要的。而对支原体的各种实验室诊断方法中，分离培养仍被作为最可靠的“金标准”。现有技术中的支原体培养基有多种，例如：
U98尿素酶颜色试验培养基
基础肉汤
胰酶消化肉汤(粉剂)                   0.75g
氯化钠                               0.50g
磷酸二氢钾                           0.02g
去离子水                             100ml
用1N HCL调pH值到5.5。经121℃高压灭菌15分钟，分离备用。
完全培养基(pH6.0)
灭菌的基础肉汤(pH5.5)                95ml
灭菌的未加热马血清                   5ml
灭菌的10％尿素贮存液                 0.5ml
灭菌的2％L-半胱氨酸(盐酸盐)          0.1ml
灭菌的1％酚红溶液                    0.1ml
青霉素G钾盐10万u/ml                  1.0ml
再如：
新鲜牛肉浸液                         100ml
NaCl                                 0.5g
K2HPO4                             0.15g
蛋白胨                               1.0g
尿素                                 0.05g
酚红                        0.02g
临用前加：
青霉素                      1000u/ml
无菌的胎牛血清              10ml
调整pH至6.0±0.1
固体培养基：加1.4％琼脂
另外还有“A78鉴别琼脂”等多种不同配方，均可以在科研或临床上用于支原体的分离培养。但现有技术的共同缺点是，支原体在培养基中的生长速度较慢，同时其检出阳性率也不够理想。
针对现有技术的缺点，本发明的任务是提供一种新的培养基配方，它应具有使支原体生长速度快、分离的敏感性和特异性高的特点。同时，本发明还提供出该培养基的制备方法。
高效支原体培养基的配方如下：
首先用下列成分制成基础培养基：
1、蛋白胨                           9.0-11.0g
2、新鲜牛肉提取纯粉                 9.0-11.0g
3、氯化钠                           4.0-6.0g
4、磷酸二氢钾                       0.4-0.6g
5、蒸馏水                           1000ml
使用前加入下列成分，制成液体培养基：
6、新生牛血清                       90-110ml
7、新鲜酵母浸液                     90-110ml
8、10％尿素溶液或10％精氨酸溶液     5-15ml
9、0.4％酚红溶液                    4-6ml
10、青霉素                          500-2000u/ml
在固体培养基中还有
11、琼脂                            1.2-1.4％。
上述培养基的制备方法为：
一、制备基础培养基
取上述1-4的成份混合、搅拌，使之完全溶入蒸馏水中，过滤，
高压灭菌后即为基础培养基，备用。
二、制备液体培养基
使用前加入上述6-10的成份，
用HCL调pH为6.0，分装备用。
三、制备固体培养基：
取上述基础培养基，加入
琼脂                                       1.2-1.4％
高压灭菌后，冷却至50℃左右，
以无菌手续逐一加入6-10的成份，
摇匀，倒入灭菌平皿中，备用。
本发明所提供的培养基同现有技术中的几种培养基的比较结果表明，在同样实验条件下，本高效支原体培养基具有生长速度快、检出率高的特点。比较结果见表1、表2：
                  表1  解尿支原体培养基比较培养基         检查例数         阳性数                    生长速度
                            (％)       ≤24hr(％)    ＞24hr(％)    ≥48hr(％)本发明          91              29(31.9)    25(86.2)     4(13.8)        0(0)现技术A         91              18(19.8)    4(22.2)      8(44.4)        6(33.4)本发明          54              18(33.3)    17(94.4)     1(5.6)         0(0)现技术B         54              3(5.6)      0(0)         0(0)           3(94.4)本发明          144             53(36.8)    42(79.2)     11(20.8)       0(0)现技术C         144             38(26.4)    14(36.9)     17(44.7)       7(18.4)
               表2  两种人型支原体培养基比较培养基         检查例数        阳性数               生长速度
                           (％)    ≤24hr(％)    ＞24hr(％)    ≥48hr(％)本发明           52            4(7.7)    0(0)          4(7.7)         0(0)现技术B          52            0(0)      0(0)          0(0)           0(0)本发明           144           21(14.6)  1(4.8)        12(57.1)       8(38.1)现技术C          144           19(13.2)  0(0)          8(42.1)        11(57.9)
现结合实施例作进一步说明。实施例1：高效支原体培养基的配方及制备方法如下：一、首先用下列成分制成基础培养基：
1、蛋白胨                         10.0g
2、新鲜牛肉提取纯粉               10.0g
3、氯化钠                         5.0g
4、磷酸二氢钾                     0.5g
5、蒸馏水                         1000ml
取上述成份混合、搅拌，使之完全溶入蒸馏水中，
用滤纸过滤，
置高压灭菌器内，经15磅20分钟灭菌后备用。二、制备液体培养基：
使用前，取基础培养基加入下列无菌制剂：
6、新生牛血清                     100ml
7、新鲜酵母浸液                   100ml
8、10％尿素溶液(检测解脲支原体)   5-15ml
或10％精氨酸溶液(检测人型支原体)  5-15ml
 9、0.4％酚红溶液             5ml
 10、青霉素                   500-2000u/ml用HCL调pH为6.0，灭菌试管分装备用。三、制备固体培养基：
在液体基础培养基内加入
11、琼脂                      1.2-1.4％
高压灭菌后，冷却至50℃左右，以无菌手续逐一加入6-10的成份，
调pH值到6.0，摇匀，倒入灭菌平皿中，凝固后置冰箱中备用。实施例2：配制方法与上例基本相同，但配方比例如下：一、首先用下列成分制成基础培养基：
1、蛋白胨                     9.0g
2、新鲜牛肉提取纯粉           9.0g
3、氯化钠                     4.0g
4、磷酸二氢钾                 0.4g
5、蒸馏水                     1000ml
取1-4成份混合、搅拌，使之完全溶入蒸馏水中，
用滤纸过滤，
置高压灭菌内，经15磅20分钟灭菌后备用。二、液体培养基：
使用前，取基础培养基加入下列无菌制剂：
6、新生牛血清                         90ml
7、新鲜酵母浸液                       90ml
8、10％尿素溶液(检测解脲支原体)       5-15ml
或10％精氨酸溶液                      5-15ml
9、0.4％酚红溶液                      4ml
10、青霉素                            506-2000u/ml用HCL调pH为6.0，灭菌试管分装备用。三、制备固体培养基：
在液体基础培养基内加入
11、琼脂                                1.2-1.4％
高压灭菌后，冷却至50℃左右，以无菌手续逐一加入6-10的成份，
调pH值到6.0，摇匀，倒入灭菌平皿中，凝固后置冰箱中备用。实施例3、与上两例基本相同，但配方比例如下：一、首先用下列成分制成基础培养基：
1、蛋白胨                               11.0g
2、新鲜牛肉提取纯粉                     11.0g
3、氯化钠                               6.0g
4、磷酸二氢钾                           0.6g
5、蒸馏水                               1000ml
取上述1-4成份混合、搅拌，使之完全溶入蒸馏水中，
用滤纸过滤，
置高压灭菌内，经15磅20分钟灭均后备用。二、制备液体培养基：
使用前，取基础培养基加入下列无菌制剂：
6、新生牛血清                           110ml
7、新鲜酵母浸液                         110ml
8、10％尿素溶液(检测解脲支原体)         5-15ml
或10％精氨酸溶液(检测人型支原体)        5-15ml
9、0.4％酚红溶液                        6ml
10、青霉素                              500-2000u/ml用HCL调pH为6.0，灭菌试管分装备用。三、制备固体培养基：
在液体基础培养基内加入
11、琼脂                                1.2-1.4％
高压灭菌后，冷却至50℃左右，以无菌手续逐一加入6-10的成份，
调pH值到6.0，摇匀，倒入灭菌平皿中，凝固后置冰箱中备用。

Claims (3)

1、一种高效支原体培养基，其特征是配方如下：基础培养基：
1、蛋白胨                            9.0-11.0g
2、新鲜牛肉提取纯粉                   9.0-11.0g
3、氯化钠                            4.0-6.0g
4、磷酸二氢钾                        0.4-0.6g
5、蒸馏水                            1000ml
使用前加入下列成分制出液体培养基：
6、新生牛血清                        90-110ml
7、新鲜酵母浸液                      90-110ml
8、10％尿素溶液或10％精氨酸溶液       5-15ml
9、0.4％酚红溶液                     4-6ml
10、青霉素                           500-2000u/ml
可再加入下列成分制出固体培养基：
11、琼脂                             1.2-1.4％。
2、按照权利要求1所述的高效支原体培养基，其特征是：配方限定如下：
1、蛋白胨                            10.0g
2、新鲜牛肉提取纯粉                   10.0g
3、氯化钠                            5.0g
4、磷酸二氢钾                        0.5g
5、蒸馏水                            1000ml
6、新生牛血清                        100ml
7、新鲜酵母浸液                      100ml
8、10％尿素溶液(检测解脲支原体)       5-15ml
   或10％精氨酸溶液(检测人型支原体)   5-15ml
9、0.4％酚红溶液                     5ml
10、青霉素                           500-2000u/ml在固体培养基中还有
11、琼脂                                   1.2-1.4％。
3、一种高效支原体培养基的制备方法，其特征是：
首先用下列成分制成基础培养基：
1、蛋白胨                                  9.0-11.0g
2、新鲜牛肉提取纯粉                         9.0-11.0g
3、氯化钠                                  4.0-6.0g
4、磷酸二氢钾                              0.4-0.5g
5、蒸馏水                                  1000ml
取上述1-4成份混合、搅拌，使之完全溶入蒸馏水中，过滤，灭菌后备用。制备液体培养基：
使用前，取上述基础培养基加入下列无菌制剂：
6、新生牛血清                              90-110ml
7、新鲜酵母浸液                            90-110ml
8、10％尿素溶液(检测解脲支原体)             5-15ml
或10％精氨酸溶液                           5-15ml
9、0.4％酚红溶液                           4-6ml
10、青霉素                                 500-2000u/ml
调pH为6.0，灭菌试管分装备用，制备固体培养基：
在基础培养基内加入
11、琼脂                                   1.2-1.4％
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