CN109762040A

CN109762040A - 一种核苷类ns5b聚合酶抑制剂的制备方法

Info

Publication number: CN109762040A
Application number: CN201910030536.0A
Authority: CN
Inventors: 杨百灵; 徐平洲; 吴劲梓; 陈泽聪
Original assignee: Geli Biopharmaceutical (hangzhou) Co Ltd
Current assignee: Geli Biopharmaceutical (hangzhou) Co Ltd
Priority date: 2019-01-14
Filing date: 2019-01-14
Publication date: 2019-05-17

Abstract

本发明提供了一种核苷类NS5B聚合酶抑制剂的制备方法，包括下述步骤：1.在酸存在下，式ASC21‑RM1所示化合物进行水解反应，得到式ASC21‑A所示化合物；2.在碱存在下，式ASC21‑A所示的化合物进行水解反应得到式ASC21‑B所示化合物；3.在不使用DMPU的条件下，在叔丁基氯化镁存在下，式ASC21‑B所示化合物与式ASC21‑RM2在10～15℃下反应，得到式ASC21所示化合物。与现有技术相比，本申请提供的制备方法成本低、易操作、易于质量控制和适合工业化。

Description

一种核苷类NS5B聚合酶抑制剂的制备方法

技术领域

本发明属于制药领域，具体而言，本发明涉及对HCV感染具有治疗作用的核苷类NS5B聚合酶抑制剂(2S)-2-(((((2R,3R,4S,5R)-4-氯-5-(2,4-二氧代-3,4-二氢嘧啶-1(2H)-基)-4-氟-3-羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)氨基)丙酸异丙酯(ASC21)的制备方法。

背景技术

丙型肝炎病毒(HCV)是单链正义RNA病毒，属于病毒的黄病毒(Flaviviridae)科、肝炎病毒属。RNA多基因的NS5B区域编码RNA依赖性RNA聚合酶(RdRp)，其对于病毒复制是至关重要的。在最初的急性感染后，由于HCV优先在肝细胞中复制而不直接引起细胞病变，大多数感染的个体发展为慢性肝炎。特别地，缺乏有力的T淋巴细胞响应和高病毒突变倾向似乎促成了高比率的慢性感染。慢性肝炎可以进展为肝纤维化，导致肝硬化、晚期肝病和HCC(肝细胞癌)，使其成为肝移植的主要原因。

存在六种主要的HCV基因型和超过50种的亚型，其地理分布不同。HCV基因型1是欧洲和美国的主要基因型。HCV的广泛的遗传异质性有重要的诊断和临床含义，也许可以解释在疫苗开发中的困难和对目前的治疗缺乏响应。

NS5B RdRp对单链正义HCV RNA基因组的复制是绝对必要的，这使其成为抗病毒化合物开发的有吸引力的靶标。有两大类NS5B抑制剂：非核苷抑制剂(NNI)和核苷类似物。NNI结合到蛋白的变构区域，而核苷抑制剂合成代谢(anabolize)为相应的核苷酸并充当聚合酶的供选择的底物。随后形成的核苷酸掺入新生RNA聚合物链并且可以终止该聚合物链的生长。目前，NS5B的核苷和非核苷抑制剂均是已知的。

申请号为WO 2016140615的专利申请公开了一种可用于治疗HCV感染的核苷类NS5B聚合酶抑制剂(2S)-2-(((((2R,3R,4S,5R)-4-氯-5-(2,4-二氧代-3,4-二氢嘧啶-1(2H)-基)-4-氟-3-羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)氨基)丙酸异丙酯，结构如下式ASC21所示；在本发明中为了方便，将该化合物命名为ASC21，其化学式为C₂₁H₂₆ClFN₃O₉P，该核苷类NS5B聚合酶抑制剂适合制备HCV感染的治疗药物。

申请号为WO 2016140615的专利申请同时公开了一种用于制备如上式所述的ASC21的方法，参考该专利提供的工艺制备。该路线具有以下缺点：工业化成本较高，后续环境污染较大，并且使用大量的DMPU(1,3-二甲基-3,4,5,6-四氢-2-嘧啶酮)，容易残留到产品中，且难以用TLC检测反应，后续需经反相柱纯化去除，成本高昂。

发明内容

因此，本发明的一个目的是克服现有技术的缺点和不足，提供一种用于制备核苷类NS5B聚合酶抑制剂ASC21的方法，该方法具有成本低、易操作、易质量控制且适合大规模工业化操作的优点。

在本发明中，除非特别说明，所述式ASC21-RM1所示的化合物的化学名称为(2R,3R,4S,5R)-5-(4-苯甲酰氨基-2-氧代嘧啶-1(2H)-基)-4-氯-4-氟-2-((4-甲基苯甲酰氧基)甲基)-3-甲基-4-甲基苯甲酸甲酯：

所述式ASC21-A所示的化合物的化学名称为(2R,3R,4S,5S)-4-氯-5-(2,4-二氧代-3,4-二氢嘧啶-1(2H)-基)-4-氟-2-((4-甲基苯甲酰氧基)甲基)四氢呋喃-3-基4-甲基苯甲酸酯：

所述式ASC21-B所示的化合物的化学名称为1-((2R,3S,4R,5R)-3-氯-3-氟-4-羟基-5-(羟甲基)四氢呋喃-2-基)嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮：

所述式ASC21-RM2所示的化合物的化学名称为(S)-异丙基2-((S)-(五氟苯氧基)(苯氧基)磷酰基氨基)丙酸异丙酯：

一方面，本发明提供了一种式ASC21所示的核苷NS5B聚合酶抑制剂的制备方法，包括下述步骤：

步骤1.在酸存在下，式ASC21-RM1所示化合物进行水解反应，得到式ASC21-A所示化合物；

步骤2.在碱存在下，式ASC21-A所示的化合物进行水解反应，得到式ASC21-B所示化合物；

步骤3.在不使用DMPU的条件下，在叔丁基氯化镁存在下，式ASC21-B所示化合物与式ASC21-RM2在10～15℃下反应，得到式ASC21所示化合物；

根据本发明所述的方法，其中，在所述步骤3中，在不使用DMPU的条件下，在-15～-10℃下滴加叔丁基氯化镁并在1～2小时内滴完，随后缓慢升温至10～15℃，式ASC21-B所示的化合物与式ASC21-RM2所示的化合物反应，得到式ASC21所示化合物；

上述制备方法的反应方程式如下所示：

根据本发明所述的方法，其中，在步骤1中，所述酸为有机酸，优选为醋酸、甲酸、丙酸或三氟乙酸；

优选地，所述反应在水中进行；

优选地，所述反应的温度为110～120℃；

优选地，所述反应的时间为18～20h。

根据本发明所述的方法，其中，在步骤2中，所述碱为有机碱，优选为三乙胺、N,N-二异丙基乙胺、正丙胺或正丁胺；

优选地，所述反应在有机溶剂中进行；更优选地，所述有机溶剂为甲醇、乙醇或异丁醇；

优选地，所述反应的温度为65℃～70℃；

优选地，所述反应的时间为18～20h。

根据本发明所述的方法，其中，在步骤3中，所述升温的时间为2～3小时，且每小时升温5℃；

优选地，所述反应在有机溶剂中进行；更优选地，所述有机溶剂为四氢呋喃、甲基四氢呋喃或二氧六环；

优选地，升温后，所述反应的时间为8小时。

本发明的发明人发现，通过本发明的方法，在不使用DMPU的前提下，通过适当提高反应温度来加快反应速度，并且减少tBuMgCl的投料量，能使反应转化率达到预期，同时还能将二磷酸酯杂质控制在一个可接受的范围(反应液中9％～15％)；

在一个具体的实施方案中，t-BuMgCl的投料量从原来的2.2个当量降到1.3当量。

在一个优选的实施方案中，所述制备方法各步骤的反应方程式如下所示：

其中，所述方法包括以下步骤：

步骤1.向反应容器中加入式ASC21-RM1所示化合物、冰醋酸和水，磁力搅拌，加热至110～120℃进行反应18h，过滤，干燥，得到式ASC21-A所示化合物；

步骤2.向反应容器中加入式ASC21-A化合物、甲醇和三乙胺，磁力搅拌，加热至65～70℃进行反应18h，浓缩，萃取，过滤，结晶，干燥，得到式ASC21-B所示化合物；

步骤3.在氮气的保护下，在不使用DMPU的条件下，向反应容器中加入式ASC21-B所示化合物、四氢呋喃和式ASC21-RM2所示化合物，搅拌，转速为250～300r/min，降温至-15～-10℃并控温在-15～-10℃，向反应容器中滴加叔丁基氯化镁并在1～2小时内滴完，然后缓慢升温至10～15℃，反应8小时，淬灭，萃取，浓缩，柱层析，过滤，干燥，即得。

其中，所述柱层析使用硅胶柱层析。

其中，在所述反应过程中，使用TLC检测。

与现有技术相比，本申请提供的制备方法具有以下优点：

成本较低，操作容易，反应检测容易，后续产品纯化较易，易于质量控制，后续的环境降解容易，对环境污染较小，更适合大规模的工业化生产。

具体实施方式

实施例1WO 2016140615的合成路线

1.1工艺路线

1.2制备方法

步骤1：ASC21-A的制备

1.向洁净玻璃反应釜中加入醋酸(26.05kg，434mol，70.8eq)，水(13.35kg，741mol，120eq)和3.8kg的ASC21-RM1(3.8kg，6.13mol，1.0eq)，搅拌加热回流(110～120℃)反应18h。

2.中控HPLC检测反应完毕后，反应液降温至60℃，加入13.35kg的水，搅拌降至室温，搅拌2h。过滤，滤饼用12.5kg水洗涤，收集滤饼。

3.干燥：滤饼在通风干燥箱40℃下干燥24h，得2.7kg灰白色固体。HPLC纯度91.4％，收率85％。

步骤2：中间体ASC21-B的制备(使用正丙胺)

1.反应：向洁净玻璃反应釜中加入ASC21-A(2.72kg，5.26mol，1.0eq)、21.3kg甲醇，而后加入正丙胺(3.1kg 52.4mol，10eq)，28℃下反应22h。

2.浓缩：中控合格后，反应液在40℃减压浓缩至冷凝器基本无馏分。

3.萃取：加入6.4kg水和16.9kg二氯甲烷，搅拌后，萃取，静置分层，收集水相，水相再用二氯甲烷重复萃取两次，有机相再用1.5kg水洗，合并水相。而后用3mol/L盐酸调至pH＝1.12，再用11kg 2-甲基四氢呋喃萃取，难于分层。

4.过滤：在漏斗上垫硅藻土，将粗品溶液过滤，用2-甲基四氢呋喃洗涤滤饼，而后静置分出有机相。

5.结晶：滤液在60℃减压蒸馏，而后浓缩物反复用醋酸异丙酯夹带，至目测析出大量固体。降温至20-25℃搅拌10-15分钟。过滤，滤饼用醋酸异丙酯洗涤，得灰白色固体。

6.干燥：滤饼在35℃，减压干燥15.5h，得1123.9g灰白色固体。HPLC纯度99％，收率76％。

步骤3：ASC21的制备

1.反应：向洁净玻璃反应釜1中加入16.55kg四氢呋喃和ASC21-RM2(22.119kg，4.67mol，1.25eq)，DMPU(4.526kg，35.3mol，9.5eq)在18-23℃搅拌待用，向反应釜2中加入ASC21-B(1044g，3.72mol，1.0eq)，22.15kg四氢呋喃，氮气保护降温至-9℃，控温-8～-10℃，向底物中滴入20.7％叔丁基氯化镁-四氢呋喃溶液(4.45kg，7.88mol，2.1eq)，67分钟滴完。滴毕，-10℃左右搅拌42分钟。控温-8～-10℃将反应釜1中的物料缓慢加入到反应釜2中，反应15h。

2.淬灭：中控合格后，滴入9.92kg 1mol/L盐酸，控温≤8℃。

3.萃取：加入21.3kg甲苯，升温至20℃，静置分层，收集上层有机层。有机层用9.93kg 1mol/L盐酸洗涤，然后用5wt％碳酸钠洗涤3次(10kg/次)，收集上层有机层。合并碱水层，用甲苯/四氢呋喃混合液(8.25kg甲苯+8.25kg四氢呋喃)萃取，收集上层有机层。合并有机层，依次用8.25kg含0.1mol/L HCl的25wt％NaCl水溶液、8.25kg 25wt％NaCl水溶液洗涤。

4.浓缩：有机层在50℃下减压浓缩而后用甲醇夹带去除甲苯，形成甲醇的溶液。

5.柱层析：残余物的甲醇溶液用自制的反相色谱柱(BP-C，18.4um，0.15％TFA)纯化。洗脱剂为甲醇/水(从1/1到3：2到4：1，V/V)，

6.萃取：所得目标物洗脱液减压浓缩除去大量甲醇，水相用二氯甲烷萃取，合并有机相，有机相用硫酸镁干燥，过滤

7.浓缩：滤液减压浓缩至无馏分，向残余物中加入4kg丙酮再次浓缩，重复此操作2次。

8.干燥：白色固体在50℃下真空烘干得1432.2g类白色固体(HPLC纯度98.4％，收率70％)。

在根据该实施例的制备方法中，DMPU使用的量较多，产品中残留较大，最终产品中含有0.15％的DMPU；而且DMPU、ASC21、二磷酸酯杂质三者在TLC监控反应时发现很难分开。

实施例2本发明的合成路线

2.1工艺路线

2.2制备方法

步骤1：ASC21-A的制备

表1物料配比

操作步骤：

1.反应：向洁净干燥的1L三口瓶中加入43.0g ASC21-RM1、294.8g冰醋酸和151.1g水，磁力搅拌，加热至110℃反应。反应18h。

2.过滤：中控合格后，降温至60℃，滴入150.5g水，搅拌30分钟。再降温至15℃，搅拌1h。过滤，滤饼用150.5g水洗涤，收集滤饼。

3.干燥：滤饼在40℃，-0.085～-0.098MPa下减压干燥12h，得31.8g灰白色固体。HPLC纯度87.8％，收率88.8％。

步骤2：中间体ASC21-B的制备

表2物料配比

操作步骤：

1.反应：向洁净干燥的500ml三口瓶中加入30.6g ASC21-A、192.8g甲醇和59.9g三乙胺，磁力搅拌，加热至70℃反应。反应18h。

2.浓缩：中控合格后，反应液在50℃水浴，-0.070MPa下旋蒸至冷凝器基本无馏分。

3.萃取：加入120g水和100g正庚烷，搅拌5分钟后静置分层，收集下层。上层再用100g水洗，收集下层。合并下层，用3mol/L盐酸调节pH＝2，再用2-甲基四氢呋喃萃取3次(103g/次)，收集上层。

4.过滤：在布氏漏斗上垫2.0g硅藻土，将粗品溶液过滤，用31g 2-甲基四氢呋喃洗涤滤饼，收集滤液。

5.结晶：滤液在50℃水浴，-0.098MPa下旋蒸至剩100ml残余物，趁热滴入89g醋酸异丙酯，逐渐析出固体。继续旋蒸至剩100ml残余物，加入178g醋酸异丙酯。继续旋蒸至剩150ml残余物，降温至15℃搅拌0.5h。过滤，滤饼用18g醋酸异丙酯洗涤，得灰白色固体。

6.干燥：滤饼在40℃，-0.098MPa下减压干燥8h，得10.8g灰白色固体。HPLC纯度99.5％，收率65.6％。

步骤3：ASC21的制备

表3物料配比

1.反应：氮气保护下，向洁净干燥的500ml玻璃反应釜中加入12.6g ASC21-B、189.5g四氢呋喃和26.5g ASC21-RM2，开启搅拌，转速250r/min，降温至-10℃。控温-10℃，向底物中滴入59ml叔丁基氯化镁，2h滴完。滴毕，缓慢升温至15℃反应(每小时约升温5℃)。反应8h，取样约0.3ml进行HPLC中控，控制原料ASC21-B≤5.0％。若不合格，则降温至-10℃，则根据ASC21-B的剩余量，依次补加1.3当量的ASC21-RM2和1.3当量的叔丁基氯化镁。滴毕，缓慢升温至10℃反应(每小时约升温5℃)，再次取样。

2.淬灭：中控合格后，降温至-5℃，滴入88.4g 1mol/L盐酸，控温≤12℃。

3.萃取：加入253g甲苯，升温至25℃，静置分层，收集上层有机层。有机层用126g1mol/L盐酸洗涤，然后用5wt％碳酸钠洗涤3次(126g/次)，收集上层有机层。合并碱水层，用甲苯/四氢呋喃混合液(110g甲苯+110g四氢呋喃)萃取，收集上层有机层。合并有机层，依次用160g包含0.1mol/L HCl的25wt％NaCl水溶液、160g 25wt％NaCl水溶液洗涤。

4.浓缩：有机层在65℃水浴，-0.098MPa下旋蒸至冷凝器无馏分。

5.柱层析：残余物用柱层析纯化。200～300目硅胶用量为200g，洗脱剂为二氯甲烷/甲醇(30/1，V/V)，TLC监控(展开剂：二氯甲烷/甲醇(10/1，V/V)，254nm UV显色)收集Rf约0.5的主点。所得目标物洗脱液在35℃水浴，-0.098MPa下旋蒸至冷凝器无馏分，得11.9g类白色固体。HPLC纯度98.2％，收率63.9％。

6.过滤：将类白色固体溶于160.0g丙酮，过滤，收集滤液。

7.浓缩：滤液在40℃水浴，-0.070MPa下旋蒸至冷凝器无馏分。

8.溶解：向残余物中加入3.8g丙酮和124.9g甲基叔丁基醚，搅拌溶请，再加入25.2g甲基叔丁基醚，待用。

9.结晶：向1L三口瓶中加入457.4g正庚烷，开启机械搅拌，转速450r/min，降温至5～10℃。将上述配好的产物溶液滴入正庚烷中，析出白色固体，约1小时滴完。滴毕，继续搅拌30分钟。

10.过滤：抽滤，用25.2g正庚烷洗涤滤饼。

11.干燥：滤饼在45℃，-0.098MPa下干燥16h后，取样检测残留溶剂，要求正庚烷≤5000ppm。若不合格，则继续干燥。4小时后再次取样检测残留溶剂，直至合格。得11.3g类白色固体。HPLC纯度98.2％，收率60.7％。

实施例3本发明的合成路线

3.1工艺路线

3.2制备方法

步骤1：ASC21-A的制备

表4物料配比

操作步骤：

1.反应：向洁净干燥的1L三口瓶中加入43.0g ASC21-RM1、294.8g三氟乙酸和151.1g水，磁力搅拌，加热至120℃反应。反应20h。

2.过滤：中控合格后，降温至65℃，滴入150.5g水，搅拌30分钟。再降温至5℃，搅拌1h。过滤，滤饼用150.5g水洗涤，收集滤饼。

3.干燥：滤饼在50℃，-0.085～-0.098MPa下减压干燥12h，得31.8g灰白色固体。HPLC纯度：80.2％，收率：62.4％。

步骤2：中间体ASC21-B的制备

表5物料配比

操作步骤：

1.反应：向洁净干燥的500ml三口瓶中加入30.6g ASC21-A、192.8g异丙醇和76.36g DIEA，磁力搅拌，加热至65℃反应。反应20h。

2.浓缩：中控合格后，反应液在60℃水浴，-0.098MPa下旋蒸至冷凝器基本无馏分。

3.萃取：加入120g水和100g正庚烷，搅拌10分钟后静置分层，收集下层。上层再用100g水洗，收集下层。合并下层，用3mol/L盐酸调节pH＝1，再用2-甲基四氢呋喃萃取3次(103g/次)，收集上层。

5.结晶：滤液在60℃水浴，-0.070MPa下旋蒸至剩90ml残余物，趁热滴入89g醋酸异丙酯，逐渐析出固体。继续旋蒸至剩90ml残余物，加入178g醋酸异丙酯。继续旋蒸至剩150ml残余物，降温至5℃搅拌0.5h。过滤，滤饼用18g醋酸异丙酯洗涤，得灰白色固体。

6.干燥：滤饼在50℃，-0.085～MPa下减压干燥8h，得10.8g灰白色固体。HPLC纯度98.3％，收率56.2％。

步骤3：ASC21的制备

表6

1.反应：氮气保护下，向洁净干燥的500ml玻璃反应釜中加入12.6g ASC21-B、189.5g四氢呋喃和26.5g ASC21-RM2，开启搅拌，转速300r/min，降温至-15℃。控温-15℃，向底物中滴入59ml叔丁基氯化镁，1h滴完。滴毕，缓慢升温至10℃反应(每小时约升温5℃)。反应8h，取样约0.3ml进行HPLC中控，控制原料ASC21-B≤5.0％。若不合格，则降温至-15℃，则根据ASC21-B的剩余量，依次补加1.3当量的ASC21-RM2和1.3当量的叔丁基氯化镁。滴毕，缓慢升温至15℃反应(每小时约升温5℃)，再次取样。

2.淬灭：中控合格后，降温至5℃，滴入88.4g 1mol/L盐酸，控温≤12℃。

3.萃取：加入253g甲苯，升温至15℃，静置分层，收集上层有机层。有机层用126g1mol/L盐酸洗涤，然后用5wt％碳酸钠洗涤3次(126g/次)，收集上层有机层。合并碱水层，用甲苯/四氢呋喃混合液(110g甲苯+110g四氢呋喃)萃取，收集上层有机层。合并有机层，依次用160g包含0.1mol/L HCl的25wt％NaCl水溶液、160g 25wt％NaCl水溶液洗涤。

4.浓缩：有机层在50℃水浴，-0.070MPa下旋蒸至冷凝器无馏分。

5.柱层析：残余物用柱层析纯化。200～300目硅胶用量为200g，洗脱剂为二氯甲烷/甲醇(30/1，V/V)，TLC监控(展开剂：二氯甲烷/甲醇(10/1，V/V)，254nm UV显色)收集Rf约0.5的主点。所得目标物洗脱液在55℃水浴，-0.070MPa下旋蒸至冷凝器无馏分，得11.9g类白色固体。HPLC纯度为97.1％，收率63.2％。

6.过滤：将类白色固体溶于160.0g丙酮，过滤，收集滤液。

7.浓缩：滤液在50℃水浴，-0.098MPa下旋蒸至冷凝器无馏分。

9.结晶：向1L三口瓶中加入457.4g正庚烷，开启机械搅拌，转速350r/min，降温至5～10℃。将上述配好的产物溶液滴入正庚烷中，析出白色固体，约1小时滴完。滴毕，继续搅拌30分钟。

10.过滤：抽滤，用25.2g正庚烷洗涤滤饼。

11.干燥：滤饼在40℃，-0.085MPa下干燥16h后，取样检测残留溶剂，要求正庚烷≤5000ppm。若不合格，则继续干燥。4小时后再次取样检测残留溶剂，直至合格。得9.7g类白色固体，HPLC纯度98.2％，收率52.1％。

实施例4本发明的反应条件的筛选

本发明的发明人发现，现有技术中得到本申请的产物，需要使用DMPU助溶，该反应在-10～-20℃的低温下进行，使反应液呈均相，以加快反应速度。但DMPU在水相和有机相均有较好的溶解性，后处理完成以后仍有大量DMPU残留到产品中去。而且DMPU、ASC21、二磷酸酯杂质三者在TLC监控反应时发现很难分开，难以用普通的正相硅胶进行分离，而需要用C-18反相硅胶进行分离。使用反相硅胶分离虽然分离效果很好，但是也有很多缺点。首先反相硅胶价格昂贵，是普通硅胶价格的200～300倍。其次，考虑到反相硅胶需反复使用，产品在上柱前必须严格处理，不能将其他异物带入到反相硅胶中，影响后续使用，这便增加了后处理的难度。最后，反相硅胶柱层析必须严格控制残留溶剂，以免影响柱效，这也给后处理带来一定难度。

出乎意料地，发明人发现，不使用DMPU，通过适当提高反应温度来加快反应速度。通过减少tBuMgCl投料量，从原来的2.2个当量降到1.3当量提高反应温度，能使反应转化率达到预期，也能将二磷酸酯杂质控制在一个可接受的范围(反应液中9％～15％)。

具体地，比较本申请与现有技术的方法，发明人发现，使用本发明的方法，在满足目标产物的质量指标前提下，避免使用难以去除的DMPU，使得产品较容易纯化。

最后应说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制。尽管参照实施例对本发明进行了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，都不脱离本发明技术方案的精神和范围，其均应涵盖在本发明的权利要求范围当中。

Claims

1.一种式ASC21所示的核苷NS5B聚合酶抑制剂的制备方法，包括下述步骤：

2.根据权利要求1所述的制备方法，其中，在所述步骤3中，在不使用DMPU的条件下，在-15～-10℃下滴加叔丁基氯化镁并在1～2小时内滴完，随后缓慢升温至10～15℃，式ASC21-B所示的化合物与式ASC21-RM2所示的化合物反应，得到式ASC21所示化合物。

3.根据权利要求1或2所述的制备方法，其中，在步骤1中，所述酸为有机酸，优选为醋酸、甲酸、丙酸或三氟乙酸；

优选地，所述反应在水中进行；

优选地，所述反应的温度为110～120℃；

优选地，所述反应的时间为18～20h。

4.根据权利要求1-3中任一项所述的制备方法，其中，在步骤2中，所述碱为有机碱，优选为三乙胺、N,N-二异丙基乙胺、正丙胺或正丁胺；

优选地，所述反应的温度为65℃～70℃；

优选地，所述反应的时间为18～20h。

5.根据权利要求1-4中任一项所述的制备方法，其中，在步骤3中，所述升温的时间为2～3小时，且每小时升温5℃；

优选地，升温后，所述反应的时间为8小时。

6.根据权利要求1-5中任一项所述的制备方法，其中所述方法包括以下步骤：

7.根据权利要求6所述的制备方法，其中，所述柱层析使用硅胶柱层析。

8.根据权利要求1-7中任一项所述的方法，其中，在所述反应过程中，使用HPLC检测。