CN109613239B - A群轮状病毒检测试纸 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种A群轮状病毒检测的胶体金免疫层析试纸，所述胶体金免疫层析试纸包括层析膜，所述层析膜上设有一条检测线和一条质控线；其中，所述胶体金上包被有第一抗A群轮状病毒单克隆抗体，所述检测线上包被有第二抗A群轮状病毒单克隆抗体。本发明还涉及相应的试剂。在检测A群轮状病毒时提高抗干扰能力和灵敏度。

Description

A群轮状病毒检测试纸

技术领域

本发明涉及免疫检测领域，具体涉及检测A群轮状病毒的胶体金免疫层析试纸。

背景技术

轮状病毒(Rotavirus,RV)属于呼肠孤病毒科(Reoviridae)轮状病毒属(Rotavirus)的双链RNA病毒，是引起婴幼儿及各种幼龄动物非细菌型腹泻的主要病原体。其主要感染小肠上皮细胞，从而造成细胞损伤，引起腹泻。轮状病毒每年在夏秋冬季流行，感染途径为粪－口途径，临床表现为急性胃肠炎，呈渗透性腹泻病，病程一般为7天，发热持续3天，呕吐2～3天，腹泻5天，严重出现脱水症状。

RV粒子表面有三种抗原，即群抗原(VP6)、中和抗原(VP7)和血凝素抗原(VP4)。群抗原与多种结构蛋白有关，主要是第6基因片段编码的内衣壳VP6；中和抗原是由第9基因片段编码的VP7外衣壳糖蛋白；血凝素抗原是由基因片段4编码的外衣壳蛋白VP4，可被蛋白水解酶水解。根据VP6的抗原性差异性，现已报道了7群的轮状病毒血清型(A～G)。其中A群是引发婴幼儿腹泻的主要病原体，最为常见，而人类轮状病毒感染超过90％的案例也都是该群造成的。

自1973年，Bishop等研究婴幼儿胃肠炎时，从十二指肠粘膜细胞活检标本中发现轮状病毒后，它已被证明是造成婴幼儿腹泻性疾病的主要原因，我国的资料表明，在秋冬季50％-60％的婴幼儿腹泻是由轮状病毒引起的。婴幼儿感染RV后若不及时治疗，会造成严重的脱水和酸中毒，严重时会危及生命。因此及时、准确、快速的对RV感染的诊断对临床有极其重要的意义。

目前轮状病毒检测主要包括以下几类检测方法：1)用轮状病毒抗体致敏血球的检测方法，主要从唾液、粪便等分泌物中检测轮状病毒。该方法的结果不易重复，需要有经验的技术人员；2)聚丙烯酰胺凝胶电泳技术，其通过提取粪便中病毒RNA，进行聚丙烯酰胺凝胶电泳，电泳形成独特11条区带，来判断是否感染轮状病毒，但是RNA提取较难成功且操作繁琐耗时；3)电镜技术，在大便中用电镜直接检出特殊形态的轮状病毒颗粒，敏感性较高，是鉴定轮状病毒的经典方法。但由于病毒颗粒易于降解常常影响正确诊断，并且电镜设备昂贵，难以普及，故电镜技术的应用大大受到限制，一般只能用于研究；4)基因检测技术，其特异性强、灵敏度高、定量准确，在病原学诊断方面具有很高的应用价值，但其操作复杂、需要专门培训的技术人员、特殊的仪器设备；5)酶联免疫吸附检测(ELISA)是目前应用最广泛的免疫检测方法，灵敏度和特异度高，但仍需要专业的机器和人员进行操作；6)免疫胶体金技术，检测快速且不需要任何仪器设备，适合现场检测。

免疫胶体金技术(Immune colloidal gold technique)是以胶体金作为示踪标志物应用于抗原抗体的一种新型的免疫标记技术，英文缩写为：GICT。胶体金是由氯金酸(HAuCl4)在还原剂如白磷、抗坏血酸、枸橼酸钠、鞣酸等作用下，聚合成为特定大小的金颗粒，并由于静电作用成为一种稳定的胶体状态，称为胶体金。胶体金颗粒表面带负电荷，与蛋白质的正电荷集团间靠静电力相互吸引，达到范德华引力范围内即形成牢固的结合，同时胶体金颗粒的粗糙表面也是形成吸附的重要条件。

然而，胶体金颗粒连接了抗原抗体之后，很不稳定，很容易因电荷的变化使得抗原抗体脱离，造成每个胶体金颗粒连接的抗原抗体量大大减少，从而造成灵敏度的降低。

因此，环境pH、离子强度、胶体金颗粒的用量、抗原抗体的分子量及抗原抗体的浓度等均会影响抗原抗体的吸附，进而影响检测结果的灵敏度，所以，免疫胶体金技术虽然是一种比较成熟的方法，但是具体到每种特定的检测物质，其检测效果仍然各不相同。

另一方面，基于免疫胶体金法，检测粪便样本中的轮状病毒抗原时，还面临粪便样本中存在的食物残渣、药物残留、血红蛋白、白细胞等各类物质的干扰的问题。

据此，在A群轮状病毒的胶体金免疫层析检测中，存在提高灵敏度和提高抗干扰能力的强烈需求。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种胶体金免疫层析试纸，该试纸在检测A群轮状病毒时具有很高的抗干扰能力的同时实现较高的灵敏度。

对此，本发明提供了以下技术方案。

第一方面，本发明提供了一种胶体金免疫层析试纸，所述胶体金免疫层析试纸包括层析膜，所述层析膜上设有一条检测线和一条质控线；

其中，所述胶体金上包被有第一抗A群轮状病毒单克隆抗体，形成胶体金标记蛋白复合物，所述检测线上包被有第二抗A群轮状病毒单克隆抗体。

在一个实施方式中，所述第二抗A群轮状病毒单克隆抗体的包被量为0.5～1mg/mL。

在一个实施方式中，所述胶体金标记蛋白复合物的量为30～40OD。

在一个实施方式中，所述第一抗A群轮状病毒单克隆抗体的包被量为15～30μg/mL。

在一个实施方式中，所述质控线上包被有抗动物IgG抗体。

在优选的实施方式中，所述抗动物IgG抗体的包被量为0.5～1mg/mL。

第二方面，本发明提供了一种试剂，包括样品垫预处理液，所述样品垫预处理液包括缓冲液、盐离子、封闭蛋白、表面活性剂。

在优选的实施方式中，所述缓冲液为Tris缓冲液、磷酸盐缓冲液、硼酸盐缓冲液中的一种。

在优选的实施方式中，所述盐离子为氯化钠、氯化钾、氯化镁中的一种。

在优选的实施方式中，所述封闭蛋白为牛血清白蛋白、酪蛋白、卵清蛋白中的一种或多种。

在优选的实施方式中，所述表面活性剂为非离子表面活性剂。

第三方面，本发明提供了一种试剂盒，包括本发明的胶体金免疫层析试纸和本发明的试剂。

第四方面，提供了本发明的胶体金免疫层析试纸和/或本发明的试剂用于制备检测A群轮状病毒的试剂盒的用途。

第五方面，本发明提供了一种A群轮状病毒的测定方法，所述方法包括使用本发明的胶体金免疫层析试纸和/或本发明的试剂的步骤。

本发明的有益效果为：

通过调整胶体金的包被量、包被抗体的包被量和标记抗体的包被量，同时，配合本发明的样品垫预处理液提高了A群轮状病毒的抗干扰能力和检测灵敏度。

具体实施方式

下文将结合具体实施方式和实施例，具体阐述本发明，本发明的优点和各种效果将由此更加清楚地呈现。本领域技术人员应理解，这些具体实施方式和实施例是用于说明本发明，而非限制本发明。

在整个说明书中，除非另有特别说明，本文使用的术语应理解为如本领域中通常所使用的含义。因此，除非另有定义，本文使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属领域技术人员的一般理解相同的含义。若存在矛盾，本说明书优先。

在本发明中，表述“第一”和“第二”在修饰抗A群轮状病毒单克隆抗体时仅用于描述目的，用于区分所限定的物质；而不以任何方式限定次序或主次，也不限定物质特定种类。

在本发明中，胶体金免疫层析试纸包含在底板上顺次固定且端部互相连接的样品垫、胶体金垫、层析膜、吸水垫，所述层析膜上沿着从样品垫到吸水垫的方向在膜本体上顺次分布有互相间隔开的检测线T和质控线C。

其中，

所述胶体金垫上包被有第一抗A群轮状病毒单克隆抗体，

所述检测线上包被有第二抗A群轮状病毒单克隆抗体，

所述质控线上包被有抗动物IgG抗体，

优选地，

对于所述第一抗A群轮状病毒单克隆抗体的包被量，可以为15～30μg/mL。例如，所述第一抗A群轮状病毒单克隆抗体的包被量可以为15μg/mL、16μg/mL、17μg/mL、18μg/mL、19μg/mL、20μg/mL、21μg/mL、22μg/mL、23μg/mL、24μg/mL、25μg/mL、26μg/mL、27μg/mL、28μg/mL、29μg/mL、30μg/mL。将第一抗A群轮状病毒单克隆抗体的包被量控制在15～30μg/mL的范围内时可以有效地保证检测试纸的灵敏度和特异性。

对于所述第二抗A群轮状病毒单克隆抗体的包被量，可以为0.5～1mg/mL。例如，第二抗A群轮状病毒单克隆抗体的包被量可以为0.5mg/mL、0.55mg/mL、0.6mg/mL、0.65mg/mL、0.7mg/mL、0.75mg/mL、0.8mg/mL、0.85mg/mL、0.9mg/mL、0.95mg/mL、1mg/mL。将第二抗A群轮状病毒单克隆抗体的包被量控制在0.5～1mg/mL的范围内时可以有效地保证检测试纸的灵敏度和特异性。

对于所述胶体金标记蛋白复合物的量，可以为30～40OD。例如，胶体金标记蛋白复合物的量可以为30OD、31OD、32OD、33OD、34OD、35OD、36OD、37OD、38OD、39OD、40OD。胶体金标记蛋白复合物的量在30～40OD的范围内时可以有效地保证检测试纸的灵敏度和特异性。

在本发明中，用胶体金标记第一抗A群轮状病毒单克隆抗体后，需要离心浓缩收集，优选的，离心力为7741～12096×g。

对于所述抗动物IgG抗体的包被量，可以为0.5～1mg/mL。例如，抗动物IgG抗体的包被量可以为0.5mg/mL、0.55mg/mL、0.6mg/mL、0.65mg/mL、0.7mg/mL、0.75mg/mL、0.8mg/mL、0.85mg/mL、0.9mg/mL、0.95mg/mL、1mg/mL。将抗动物IgG抗体的包被量控制在0.5～1mg/mL的范围内时可以有效地保证质控线的显色强度，便于结果的判读。

在本发明中，所述动物IgG可以选自兔IgG、鸡IgG或鼠IgG，优选为鼠IgG。

在本发明中，所述抗动物IgG抗体可以为单克隆抗体或多克隆抗体，优选为多克隆抗体。

在本发明中，层析膜可例如为：混合纤维素膜、硝酸纤维素膜、Predator膜、硝化纤维素膜或玻璃纤维素膜，优选为硝酸纤维素膜。

在本发明中，样品垫预处理液包括缓冲液、盐离子、封闭蛋白、表面活性剂。

对于缓冲液的种类，本发明选自Tris缓冲液、磷酸盐缓冲液和硼酸盐缓冲液中一种。

对于缓冲液的用量，本领域技术人员可以根据缓冲液的种类进行选择，比如，在使用Tris缓冲液时可以采用例如大于等于40mM的浓度，优选可以采用40～100mM的含量。

对于盐离子的种类，本发明选自氯化钠、氯化钾和氯化镁中的一种或多种，优选为氯化钠。

对于盐离子的用量，本领域技术人员可以根据盐离子的种类进行选择，比如，在使用氯化钠时可以采用例如0.4～2％(质量体积比)。

对于封闭蛋白的种类，本发明选自牛血清白蛋白、酪蛋白和卵清蛋白中的一种或多种，优选为牛血清白蛋白、酪蛋白和卵清蛋白中的两种。

对于封闭蛋白的用量，可以采用例如5％～20％(质量体积比)，其中牛血清白蛋白、酪蛋白或卵清蛋白的含量分别为封闭蛋白含量的50％。

对于表面活性剂的种类，本发明选自非离子表面活性剂，优选为曲拉通X-100(TX-100)。

对于表面活性剂的用量，本领域技术人员可以根据表面活性剂的种类进行选择，比例，在使用曲拉通X-100时可以采用例如0.5～1％(体积百分比)。

在大量实验研究过程中，本发明人意外的发现，本发明的样品垫预处理液配合本发明胶体金的包被量、包被抗体的包被量和标记抗体的包被量，能够在提高A群轮状病毒检测的抗干扰能力的同时保证较高的灵敏度。对此，我们推测这是由于本发明的样本垫预处理液对不同封闭蛋白与表面活性剂、盐离子的合理搭配使用，在消除非特异性反应的同时亦增强了检测抗原与抗体之间的特异性反应。

在本发明中，试剂盒根据需要可以包括容器、使用说明书、免疫助剂和/或用于进行结果判断所需的其他结构和/或试剂。

本发明的试剂盒中用于进行结果判断所需的其他结构包括但不限于，用于取样结构、用于进行对照结构和/或用于观察测定过程或结果的结构。

本发明的试剂盒中用于进行结果判断所需的其他试剂包括但不限于，洗涤剂、稀释液、显色剂和/或终止液，以及除本发明的样品垫预处理外的其他预处理液。例如，本发明在检测之前，可以使用本领域公知的稀释液稀释样品；优选地，含氯化钠稀释液；更优选地，样品的稀释比例为1:30～1:40。

在检测之前，使用稀释液稀释样品，在检测过程中，胶体金垫包被有第一抗A群轮状病毒单克隆抗体，免疫层析试纸的层析膜上检测线(T线)包被有第二抗A群轮状病毒单克隆抗体，质控线(C线)包被有抗动物IgG抗体。样品中的A群轮状病毒先与胶体金标记的第一抗A群轮状病毒单克隆抗体反应，随侧流层析效应在层析膜上移动，至检测线(T线)与第二抗A群轮状病毒单克隆抗体反应，形成夹心结构，呈整齐的红色条带，根据红色条带有无判定结果。胶体金标记的第一抗A群轮状病毒单克隆抗体继续向前移动，至质控线(C线)与抗动物IgG抗体反应，呈整齐的红色条带，表示检测反应体系有效。

以下通过实施例更详细地说明本发明，但本发明不限于这些实施例。

实施例1第一抗A群轮状病毒单克隆抗体的标记

将适宜量的标记缓冲液，缓慢加入胶体金溶液并混匀，再加入适量第一抗A群轮状病毒单克隆抗体，最后加入终止液，形成第一抗A群轮状病毒单克隆抗体-胶体金复合物，再通过适度离心后得到纯化后的胶体金标记蛋白复合物，将其喷涂到所述胶体金垫上。

实施例2第二抗A群轮状病毒单克隆抗体的包被

将膜包被液放到操作台上，先准确量取膜包被液加入相应洁净容器，再量取第二抗A群轮状病毒单克隆抗体加入到相应膜包被液中，混匀，使检测线(T线)第二抗A群轮状病毒单克隆抗体的终浓度为1.2mg/mL。

实施例3抗动物IgG抗体的包被

将膜包被液放到操作台上，先准确量取所需膜包被液加入相应洁净容器，再量取所需羊抗鼠IgG多克隆抗体加入到相应膜包被液中，混匀，使质控线(C线)羊抗鼠IgG多克隆抗体的终浓度为1mg/mL。

实施例4第一抗A群轮状病毒单克隆抗体标记条件的优化

取6支洁净的玻璃瓶，编号为1至6，每瓶分别加入1000μl胶体金溶液；然后在1～6号瓶中分别加入100μl pH值为9.0的0.1M硼酸盐缓冲液(BB)；然后分别加入5、10、15、20、25、30μg第一抗A群轮状病毒单克隆抗体；最后分别加入100μ10％氯化钠溶液，观察显色、并将胶体金蛋白复合物用纯化水稀释4倍，用分光光度计在450nm～700nm波长范围内进行扫描，记录λmax。

采用胶体金标记第一抗A群轮状病毒单克隆抗体，筛选出最佳标记条件，以保证试剂盒的整体性能良好，结果如表1所示。

表1

由表1可知，标记蛋白的饱和量约15μg，为保证试剂盒性能，第一抗A群轮状病毒单克隆抗体的最佳包被量为15～30μg/mL。

实施例5标记离心力的优化

将适宜量的标记缓冲液，缓慢加入胶体金溶液并混匀，再加入适量第一抗A群轮状病毒单克隆抗体，最后加入终止液，形成第一抗A群轮状病毒单克隆抗体-胶体金复合物，再通过如表2所示的不同离心力进行离心，得到纯化后的抗体-胶体金复合物。观察现象，结果如表2所示。

表2

沉淀松散，上清无色或淡红色对应离心转速符合要求，由表2可知，离心力为7741～12096×g时符合要求。

实施例6第二抗A群轮状病毒单克隆抗体包被量的优化

使用膜包被液，将第二抗A群轮状病毒单克隆抗体分别稀释到0.3mg/mL、0.5mg/mL、0.7mg/mL、0.9mg/mL、1.0mg/mL、1.2mg/mL，然后喷涂到硝酸纤维素膜形成检测线，制备成试纸检测企业参考品，结果如表3所示。

表3

由表3可知，第二抗A群轮状病毒单克隆抗体包被浓度为0.5mg/mL～1mg/mL时，检测效果最好，满足标准要求。

实施例7标记所用胶体金包被量的优化(胶体金标记蛋白复合物量的优化)

将标记纯化后的胶体金复合物用胶体金复溶液分别稀释到OD＝25、OD＝30、OD＝35、OD＝40、OD＝45；然后喷涂到胶体金垫上，制备成试纸检测企业参考品，结果如表4所示。

表4

胶体金包被量	最低检出量	阳性符合率	阴性符合率
				OD＝25	1︰32为弱阳性	7/10	10/10
OD＝30	1︰32为阳性	10/10	10/10
				OD＝35	1︰32为阳性	10/10	10/10
OD＝40	1︰32为阳性	10/10	10/10
				OD＝45	1︰32为阳性	10/10	9/10

由表4可知，胶体金包被量过低或过高均会影响检测结果，如包被量过高会出现假阳性，而包被量在30～40OD均满足标准要求。

实施例8样品稀释比例的优化

将所需检测样本/企业最低检出量参考品，用稀释液按照表5中不同稀释倍数进行稀释后，用制备好的试纸进行检测，结果如表5所示。

表5

由表5可知，最低检测量参考品用稀释液稀释1:10～1:50倍时检测结果均为阳性；而对于交叉干扰的样品，如果样品稀释倍数过低，会导致假阳性的结果。以上结果表明理想的加样方式为将待测样品按照1:30～1:40稀释后检测。

实施例9样品垫预处理液的筛选

9.1样品垫预处理液组分的优化

采用表6所示的不同组合的样品垫预处理液对样品垫进行预处理，于烘箱干燥后备用，制备成试纸，对A群轮状病毒的检测试剂盒(胶体金法)企业参考品和临床干扰样本进行检测，结果如表7所示。

表6

表7

由表7可知，组合8、10、12、20、22、24、32、34和36的最低检出量、阳性符合率、阴性符合率和交叉样本检测均能满足要求，上述组合特征在于含两种不同的封闭蛋白，表面活性剂为TX-100。

9.2样品垫预处理液中各物质含量的优化

将如下所示组分按照如下所示含量配制样品垫预处理液：40mM缓冲液、0.6％氯化钠、8％封闭蛋白(其中牛血清白蛋白和酪蛋白的含量分别为封闭蛋白总含量的50％)、1％TX-100，当样品垫预处理液中其它组分的含量保持不变时，改变某一组分的含量。结果如表8～11所示。

缓冲液含量的优化

表8

结果显示：40～100mM含量的PB、Tris或BB缓冲液，其最低检出量符合检测滴度不低于32倍，阳性符合率、阴性符合率也均满足条件，且在交叉干扰样本的检测中也未发现假阳。

氯化钠含量的优化

表9

结果显示：氯化钠含量为0.4％～2％时，其最低检出量符合检测滴度不低于32倍，阳性符合率和阴性符合率均为100％，且在交叉干扰样本的检测中均未发现假阳。

封闭蛋白含量的优化(其中牛血清白蛋白和酪蛋白的含量分别为封闭蛋白总含量的50％)

表10

结果显示：封闭蛋白含量在5％～20％时，其最低检出量符合检测滴度不低于32倍，阳性符合率和阴性符合率均为100％，且在交叉干扰样本的检测中均未发现假阳。

TX-100含量的优化

表11

TX-100含量	最低检出量	阳性符合率	阴性符合率	交叉干扰样本
					0.25％	1︰32为弱阳性	8/10	10/10	未发现假阳
0.5％	1︰32为阳性	10/10	10/10	未发现假阳
					1％	1︰32为阳性	10/10	10/10	未发现假阳
1.5％	1︰32为阳性	10/10	9/10	未发现假阳
					2％	1︰32为弱性	9/10	5/10	未发现假阳

结果显示：TX-100含量在0.5％～1％时，其最低检出量符合检测滴度不低于32倍，阳性符合率和阴性符合率均为100％，且在交叉干扰样本的检测中均未发现假阳。

实施例10性能测试

按照各自产品的说明书要求，同时检测粪便样本，分析比较本发明试剂盒和市场公认质量较好的试剂盒的临床相关性。

按照各自产品的说明书要求，稀释1例A群轮状病毒抗原阳性粪便样本，将稀释后样本再按照表13所述倍数进行梯度稀释后进行检测，分析比较本发明试剂盒和市场公认质量较好的试剂盒的阳性梯度显色和灵敏度。

任选3例粪便样本，将按照表14所示方式粪便样本稀释，再用本发明试剂盒和市场公认质量较好的试剂盒进行检测，分析比较本发明试剂盒和市场公认质量较好的试剂盒检测结果受样本干扰的情况。

10.1以市场公认质量较好的A群轮状病毒抗原检测试剂盒(现有技术)与本发明的试剂盒进行比较，结果如表12所示。

表12

由表12可知，本发明试剂盒和市售试剂盒的阳性符合率为93.18％，阴性符合率为100％，总符合率为99.15％，满足A群轮状病毒检测试剂盒的检测要求。

10.2以市场公认质量较好的A群轮状病毒抗原检测试剂盒(现有技术)与本发明的试剂盒进行阳性样品梯度检测，结果如表13所示。

表13

由表13可知，本发明与现有技术的灵敏度相当，但本发明的阳性显色梯度更为明显。

10.3以市场公认质量较好的A群轮状病毒抗原检测试剂盒(现有技术)与本发明的试剂盒进行临床样本不同取样量检测，结果如表14所示。

表14

由表14可知，在一定范围内(1～4滴，1滴约35μl)，本发明随取样量的增强，其检测结果仍保证一致，与现有技术按照说明书取样量结果相同；而现有技术随取样量的增加出现阴性结果变为阳性结果的现象。综上，说明本发明试剂盒在同等条件下，抗干扰能力更好。

应该理解到披露的本发明不仅仅限于描述的特定的方法、方案和物质，因为这些均可变化。还应理解这里所用的术语仅仅是为了描述特定的实施方式方案的目的，而不是意欲限制本发明的范围，本发明的范围仅受限于所附的权利要求。

本领域的技术人员还将认识到，或者能够确认使用不超过常规实验，在本文中所述的本发明的具体的实施方案的许多等价物。这些等价物也包含在所附的权利要求中。

Claims (5)

1.一种试剂盒，其中，所述试剂盒包括胶体金免疫层析试纸；所述胶体金免疫层析试纸包括在底板上顺次固定且端部互相连接的样品垫、胶体金垫、层析膜和吸水垫；所述层析膜上设有一条检测线和一条质控线；

其中，所述胶体金垫上包被有第一抗A群轮状病毒单克隆抗体，所述检测线上包被有第二抗A群轮状病毒单克隆抗体；

所述第二抗A群轮状病毒单克隆抗体的包被量为0.5～1mg/mL；所述第一抗A群轮状病毒单克隆抗体的包被量为15～30μg/mL；所述质控线上包被有0.5～1mg/mL的抗动物IgG抗体；

所述胶体金免疫层析试纸是试剂预处理样品垫后、烘干制备而成；

所述试剂包括样品垫预处理液，其中，所述样品垫预处理液包括缓冲液、盐离子、封闭蛋白、表面活性剂；

其中，所述缓冲液为Tris缓冲液、磷酸盐缓冲液、BB缓冲液中的一种；

所述盐离子为氯化钠；

所述封闭蛋白为牛血清白蛋白、酪蛋白、卵清蛋白中的两种；

所述表面活性剂为曲拉通X-100；

其中，缓冲液的含量为40～100mM；所述盐离子是质量体积比为0.4％～2％wt的氯化钠；所述封闭蛋白的质量体积比为5％～20％；所述表面活性剂为体积百分比为0.5％～1％的曲拉通X-100；

所述胶体金垫上包被有第一抗A群轮状病毒单克隆抗体，得到的胶体金标记蛋白复合物的量为30～40OD。

2.根据权利要求1所述的试剂盒，所述抗动物IgG抗体为多克隆抗体。

3.根据权利要求1所述的试剂盒，所述动物IgG选自兔IgG、鸡IgG或鼠IgG。

4.根据权利要求1所述的试剂盒，所述层析膜选自混合纤维素膜、硝酸纤维素膜、硝化纤维素膜或玻璃纤维素膜。

5.根据权利要求1所述的试剂盒，所述牛血清白蛋白、酪蛋白或卵清蛋白的含量分别为封闭蛋白总含量的50％。