[go: up one dir, main page]

CN109528664B - 含乌苯美司-抗肿瘤药物协同前药衍生物的冻干粉剂及其制备方法 - Google Patents

含乌苯美司-抗肿瘤药物协同前药衍生物的冻干粉剂及其制备方法 Download PDF

Info

Publication number
CN109528664B
CN109528664B CN201811574582.9A CN201811574582A CN109528664B CN 109528664 B CN109528664 B CN 109528664B CN 201811574582 A CN201811574582 A CN 201811574582A CN 109528664 B CN109528664 B CN 109528664B
Authority
CN
China
Prior art keywords
ubenimex
excipient
freeze
drug
active component
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN201811574582.9A
Other languages
English (en)
Other versions
CN109528664A (zh
Inventor
廖年生
胡贤德
吴涛
邱宏清
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Jiangxi Runze Pharmaceuticals Co Ltd
Original Assignee
Jiangxi Runze Pharmaceuticals Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Jiangxi Runze Pharmaceuticals Co Ltd filed Critical Jiangxi Runze Pharmaceuticals Co Ltd
Priority to CN201811574582.9A priority Critical patent/CN109528664B/zh
Publication of CN109528664A publication Critical patent/CN109528664A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN109528664B publication Critical patent/CN109528664B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/14—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles
    • A61K9/19—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles lyophilised, i.e. freeze-dried, solutions or dispersions
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/185—Acids; Anhydrides, halides or salts thereof, e.g. sulfur acids, imidic, hydrazonic or hydroximic acids
    • A61K31/19—Carboxylic acids, e.g. valproic acid
    • A61K31/195—Carboxylic acids, e.g. valproic acid having an amino group
    • A61K31/197—Carboxylic acids, e.g. valproic acid having an amino group the amino and the carboxyl groups being attached to the same acyclic carbon chain, e.g. gamma-aminobutyric acid [GABA], beta-alanine, epsilon-aminocaproic acid or pantothenic acid
    • A61K31/198—Alpha-amino acids, e.g. alanine or edetic acid [EDTA]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/44—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof
    • A61K31/445—Non condensed piperidines, e.g. piperocaine
    • A61K31/4523—Non condensed piperidines, e.g. piperocaine containing further heterocyclic ring systems
    • A61K31/454—Non condensed piperidines, e.g. piperocaine containing further heterocyclic ring systems containing a five-membered ring with nitrogen as a ring hetero atom, e.g. pimozide, domperidone
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/505—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim
    • A61K31/513—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim having oxo groups directly attached to the heterocyclic ring, e.g. cytosine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7028—Compounds having saccharide radicals attached to non-saccharide compounds by glycosidic linkages
    • A61K31/7034—Compounds having saccharide radicals attached to non-saccharide compounds by glycosidic linkages attached to a carbocyclic compound, e.g. phloridzin
    • A61K31/704—Compounds having saccharide radicals attached to non-saccharide compounds by glycosidic linkages attached to a carbocyclic compound, e.g. phloridzin attached to a condensed carbocyclic ring system, e.g. sennosides, thiocolchicosides, escin, daunorubicin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7042—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings
    • A61K31/7052—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides
    • A61K31/706—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom
    • A61K31/7064—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom containing condensed or non-condensed pyrimidines
    • A61K31/7068—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom containing condensed or non-condensed pyrimidines having oxo groups directly attached to the pyrimidine ring, e.g. cytidine, cytidylic acid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/26—Carbohydrates, e.g. sugar alcohols, amino sugars, nucleic acids, mono-, di- or oligo-saccharides; Derivatives thereof, e.g. polysorbates, sorbitan fatty acid esters or glycyrrhizin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/54—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic compound
    • A61K47/55—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic compound the modifying agent being also a pharmacologically or therapeutically active agent, i.e. the entire conjugate being a codrug, i.e. a dimer, oligomer or polymer of pharmacologically or therapeutically active compounds
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)

Abstract

本发明涉及药物化学领域，公开了一种含乌苯美司‑抗肿药物协同前药衍生物的冻干粉剂及其制备方法。该冻干粉剂含有药物活性组分和赋形剂，所述药物活性组分与所述赋形剂的质量比为1：0.5‑6，其中，所述药物活性组分为乌苯美司的前药衍生物或其光学异构体、非对映异构体、消旋体混合物及其药学上可接受的盐。本发明所述的含乌苯美司‑抗肿药物协同前药衍生物的冻干粉剂可以延长药物在体内的滞留时间，改善药物的药代动力学性质，提高药物的生物利用度，从而达到更好的抗肿瘤效果。

Description

含乌苯美司-抗肿瘤药物协同前药衍生物的冻干粉剂及其制 备方法
技术领域
本发明涉及药物化学领域，具体涉及一种含乌苯美司-抗肿瘤药物协同前药衍生物的冻干粉剂及其制备方法。
背景技术
乌苯美司(Ubenimex，Bestatin)是从网状橄榄链霉菌(Streptomycesolivoreticuli)培养液中发现的一种二肽结构化合物，于1987年在日本上市作为免疫增强剂用于白血病的治疗；乌苯美司于1998年在国内上市。乌苯美司能够抑制APN活性(IC50在2.5-16.9μM)，能够阻断肿瘤干细胞的作用，但本身几乎没有抑制肿瘤细胞增殖的能力，因而乌苯美司与其它细胞类抗肿瘤药物联合应用会大大提高其疗效。有文献研究表明，在小鼠肝癌移植瘤实验中，联合使用乌苯美司与五氟尿嘧啶明显优于单独分别使用抑瘤活性(J Clin Invest 2010，120,3326-3339)，这一研究为乌苯美司与其它化疗药物的联合应用提供很好实验依据。在临床上，乌苯美司可配合化疗、放疗及联合应用于白血病、多发性骨髓瘤、骨髓增生异常综合症，以及其它实体瘤等疾病。
5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil，5FU)是一类广泛应用于临床的抗代谢抗肿瘤药物，其抗肿瘤作用疗效确切且一直作为胃癌、直肠癌、乳腺癌等治疗的首选药物。但5-氟尿嘧啶使用中出现的较严重的骨髓抑制和胃肠道反应、半衰期短、选择性较差等不足限制了其广泛应用。近年来，研究者通过各种途径来减少或避免5FU不足，已合成许多5FU的前体药物并有一些已应用于临床，如FTO、HCFU、CAP、5'dFUrd、BOF-A2、ATFU等。另外，5FU的N3的脲的衍生物通过消除原理形成原药5FU，其原理如下图：
Figure GDA0002985117760000021
来那度胺(Lenalidomide)由美国Gelgene公司开发，是沙利度胺的衍生物，临床上用于治疗骨髓增生异常综合症及与地塞米松联合用药治疗多发性骨髓瘤。来那度胺对细胞内多种生物途径都有影响。在临床I、II期研究中发现其对多种肿瘤都有抑制作用，包括多发性骨髓瘤、前列腺癌、甲状腺癌、肾癌、黑色素瘤、肝癌、慢性淋巴细胞白血病。
表阿霉素(Epirubicin)是一类抗生素类抗肿瘤药，其结构为阿霉素的同分异构体。表阿霉素主要的抗肿瘤作用机制是能直接嵌入DNA核碱对之间，干扰转录过程，从而阻止mRNA的形成，起到抑制DNA和RNA的合成。此外，经研究发现，表阿霉素对拓扑异构酶Ⅱ也有抑制作用，是一类细胞周期非特异性药物。其在临床上主要用于急性白血病、肾母细胞瘤、软组织肉瘤、膀胱癌、睾丸癌、前列腺癌、胃癌、恶性淋巴瘤、乳腺癌、支气管肺癌、卵巢癌、肝癌(包括原发性肝细胞癌和转移性细胞癌)等多种实体瘤。目前，关于表阿霉素的联合应用比较多，如与紫杉醇联合用、与索拉菲尼联合用于晚期乳腺癌等。
阿糖胞苷(Cytarabine)是胞嘧啶与阿拉伯糖形成的糖苷化合物，是DNA聚合酶的竞争性抑制剂，能够抑制体内DNA的生物合成，临床上主要用于白血病的治疗。但临床研究发现，阿糖胞苷存在一系列的缺点：脂溶性差、生物利用度低、毒副作用大等。因此，科学家研究阿糖胞苷与其它药物联合治疗相关疾病，从而改善其药物活性及化学稳定性，较大提高阿糖胞苷临床疗效(阿糖胞苷联合氟达拉滨、米托蒽醌等其它药物治疗各种白血病、淋巴瘤等疾病)。
乌苯美司(Bestatin)、5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil，5FU)、来那度胺(Lenalidomide，Le)、阿糖胞苷(Cytarabine，Cy)、表阿霉素(Epirubicin，Ep)的化学结构式如下。
Figure GDA0002985117760000031
目前，协同前药已成为针对恶性肿瘤的多重发病机制、多个病例环节设计药物的重要策略。药物在体内代谢降解，释放出多个药效结构后再分别结合不同作用部位而实现协同调节作用，可以产生更好的药效与降低毒副作用等。协同前药比联合用药具有单一的理化特性和均一的药代动力学特性，可以避免药物混合后组分间相互作用以及各组分吸收分布代谢不同步等问题。
发明内容
本发明的目的是为了克服现有的抗肿瘤活性化合物各自存在的上述缺点，提供一种含乌苯美司-抗肿瘤药物协同前药衍生物的冻干粉剂及其制备方法。
本发明提供了一种含乌苯美司-抗肿瘤药物协同前药衍生物的冻干粉剂，其含有药物活性组分和赋形剂，所述药物活性组分与所述赋形剂的质量比为1：0.5-6，其中，所述药物活性组分为式(I)所示的乌苯美司的前药衍生物或其光学异构体、非对映异构体、消旋体混合物及其药学上可接受的盐，
Figure GDA0002985117760000041
其中，式(I)中R为具有抗肿瘤活性的化合物残基。
优选地，R为
Figure GDA0002985117760000042
优选地，所述药物活性组分与所述赋形剂的质量比为1：0.8-2。
优选地，所述赋形剂为甘露醇、葡萄糖和乳糖中的至少一种。
本发明还提供了一种制备上述含乌苯美司-抗肿瘤药物协同前药衍生物的冻干粉剂的方法，该方法包括以下步骤：
(1)将所述药物活性组分、赋形剂和注射用水搅拌至完全溶解后，得到冻干原液；
(2)将所述冻干原液在-25℃～-40℃下预冻处理1h～3h，冻结后，抽真空至5-30Pa，以每小时1℃～3℃的速度升温至-5℃～-15℃，升华干燥处理10h～20h，再次以每小时5℃～10℃的速度升温至20℃～40℃，解析干燥处理5h～10h。
优选地，所述药物活性组分和所述赋形剂的总量与所述注射用水的体积比为5-20：100，进一步优选为8-15：100。
在本发明中，采用药效团拼合原理将乌苯美司(Bestatin)通过脲键与其它具有抗肿瘤活性的化合物(如5-氟尿嘧啶、来那度胺、表阿霉素、阿糖胞苷)融合，设计合成一系列新的协同前药。在体内酶作用下可代谢释放出乌苯美司和另一抗癌药物片段，乌苯美司发挥其抑制干细胞作用，具有抗肿瘤活性的化合物发挥其特定的药效作用，从而实现两个药物的协同作用。因此，本发明所述的含乌苯美司-抗肿瘤药物协同前药衍生物的冻干粉剂可以延长药物在体内的滞留时间，改善药物的药代动力学性质，提高药物的生物利用度，从而达到更好的抗肿瘤效果。
附图说明
图1是制备例1制备的化合物5FU-bestatin的液相色谱图；
图2是制备例1制备的化合物5FU-bestatin在人工胃液的稳定性图；
图3是制备例1制备的化合物5FU-bestatin在人工肠液的稳定性图；
图4是制备例1制备的化合物5FU-bestatin在人血浆的稳定性图。
具体实施方式
以下结合附图对本发明的具体实施方式进行详细说明。应当理解的是，此处所描述的具体实施方式仅用于说明和解释本发明，并不用于限制本发明。
在本文中所披露的范围的端点和任何值都不限于该精确的范围或值，这些范围或值应当理解为包含接近这些范围或值的值。对于数值范围来说，各个范围的端点值之间、各个范围的端点值和单独的点值之间，以及单独的点值之间可以彼此组合而得到一个或多个新的数值范围，这些数值范围应被视为在本文中具体公开。
本发明所述的含乌苯美司-抗肿瘤药物协同前药衍生物的冻干粉剂含有药物活性组分和赋形剂。
在所述冻干粉剂中，所述药物活性组分与所述赋形剂的质量比为1：0.5-6，优选为1：0.8-2。
在本发明中，所述药物活性组分为式(I)所示的乌苯美司的前药衍生物或其光学异构体、非对映异构体、消旋体混合物及其药学上可接受的盐，
Figure GDA0002985117760000061
其中，式(I)中R为具有抗肿瘤活性的化合物残基。
在优选的实施方式中，在式(I)中，R为5-氟尿嘧啶残基、来那度胺残基、阿糖胞苷残基或表阿霉素残基，其结构分别如下：
Figure GDA0002985117760000062
在上述优选实施方式中，作为药物活性组分的所述乌苯美司的前药衍生物的结构式如下：
Figure GDA0002985117760000071
对于化合物五氟尿嘧啶-乌苯美司(5FU-Bestatin)，其制备方法可以包括：使五氟尿嘧啶在活性炭催化下与三光气反应，再与乌苯美司反应得到目标化合物5FU-Bestatin。
其具体合成路线如下：
Figure GDA0002985117760000072
反应条件a：BTC,活性炭,Py,0℃，其中BTC为三光气，Py为吡啶
具体制备步骤如下：
将0.65g五氟尿嘧啶(5mmol)于反应瓶中，加入20ml吡啶使其全部溶解，后加入0.65g的活性炭，于冰浴下，缓慢加入0.5g三光气，继续在冰浴下反应1小时，抽出光气，冲入N2，进行三次。冰浴下，缓慢加入1.7g乌苯美司(5mmol)，之后室温反应12小时。过滤活性炭，用乙酸乙酯萃取，6mol/L盐酸溶液洗涤3次，再用饱和食盐水洗涤3次，无水硫酸钠干燥。蒸出乙酸乙酯待有固体析出停止，放入冰箱进行结晶，过滤得白色产物。
对于化合物来那度胺-乌苯美司(Le-Bestatin)，其制备方法可以包括：使来那度胺在活性炭催化下与三光气反应，再与乌苯美司反应得到目标化合物Le-Bestatin。
合成路线如下：
Figure GDA0002985117760000081
反应条件a：BTC,活性炭,Py,0℃，其中BTC为三光气，Py为吡啶
对于化合物阿糖胞苷-乌苯美司(Cy-Bestatin)，其制备方法可以包括：使阿糖胞苷在活性炭催化下与三光气反应，再与乌苯美司反应得到目标化合物Cy-Bestatin。
其合成路线如下：
Figure GDA0002985117760000082
反应条件a：BTC,活性炭,Py,0℃，其中BTC为三光气，Py为吡啶对于化合物表阿霉素-乌苯美司(Ep-Bestatin)，其制备方法可以包括：使表阿霉素在活性炭催化下与三光气反应，再与乌苯美司反应得到目标化合物Ep-Bestatin。
其合成路线如下：
Figure GDA0002985117760000091
反应条件a：BTC,活性炭,Py,0℃，其中BTC为三光气，Py为吡啶
本发明的“药学上可接受的盐”是指那些在合理的医学判断的范围内适用于与人类和低等动物的组织接触而没有不适当的毒性、刺激性、过敏反应等并且与合理的效益/风险比相称的盐。
在本发明中，所述赋形剂可以为本领域的常规选择。在具体的实施方式中，所述赋形剂为甘露醇、葡萄糖和乳糖中的至少一种。
本发明还提供了一种制备上述含乌苯美司-抗肿瘤药物协同前药衍生物的冻干粉剂的方法，包括以下步骤：
(1)将所述药物活性组分、赋形剂和注射用水搅拌至完全溶解后，得到冻干原液；
(2)将所述冻干原液在-25℃～-40℃下预冻处理1h～3h，冻结后，抽真空至5-30Pa，以每小时1℃～3℃的速度升温至-5℃～-15℃，升华干燥处理10h～20h，再次以每小时5℃～10℃的速度升温至20℃～40℃，解析干燥处理5h～10h。
在本发明所述的方法中，所述药物活性组分和所述赋形剂的总量与所述注射用水的体积比可以为5-20：100，优选为8-15：100。
以下将通过实施例对本发明进行详细描述，但本发明的保护范围并不局限于此。
制备例1
将0.65g五氟尿嘧啶(5mmol)于反应瓶中，加入20ml吡啶使其全部溶解，后加入0.65g的活性炭，于冰浴下，缓慢加入0.5g三光气，继续在冰浴下反应1小时，抽出光气，冲入N2，进行三次。冰浴下，缓慢加入1.7g乌苯美司(5mmol)，之后室温反应12小时。过滤活性炭，用乙酸乙酯萃取，6mol/L盐酸溶液洗涤3次，再用饱和食盐水洗涤3次，无水硫酸钠干燥。蒸出乙酸乙酯待有固体析出停止，放入冰箱进行结晶，过滤得白色产物，其为化合物5FU-Bestatin，白色固体，产率：36.7％，熔点＝165-167℃。MS-ESI:[M-1]＝463.6；[M-1+Na]＝485.8。其核磁共振氢谱数据如下：
300MHz 1H NMR1(d6-DMSO)δ＝0.65(d，J＝5.7Hz，3H)，0.74(d，J＝5.7Hz，2H)1.49(m,1H),2.76-2.82(m,1H),2.88-2.96(m,1H)4.01(m,1H),4.21-4.28(m,1H),4.34-4.21(m,1H),6.69-6.71(d,1H),7.20-7.34(m,5H),7.72(d,1H)，8.33(d，1H)9.44(d，1H)12.44(d，1H)12.66(s，1H)。
按照与制备例1类似的方法，可以制备化合物Le-Bestatin、化合物Cy-Bestatin和化合物Ep-Bestatin。
测试例1
(1)体外抑酶活性
1、材料和方法
氨肽酶N、底物L-亮氨酸-p-硝基苯胺(购自Sigma公司)
缓冲液的配制，12.89gNaH2PO4·2H2O，溶解于1000ml容量瓶中，加新煮沸放冷的蒸馏水定容，得pH为7.2的50mM磷酸盐缓冲溶液，室温放置备用；氨肽酶N溶解在缓冲液中配成0.1IU/mL的溶液；底物L-亮氨酸-p-硝基苯胺溶解在DMSO中配成16mmol/mL溶液，放置冰箱备用。
2、实验步骤
编号 氨肽酶N溶液(μL) 底物溶液(μL) 缓冲液(μL) 抑制剂
100％组 10 5 185 0
空白组 0 5 195 0
抑制剂组 10 5 145 40
96孔板中分别加入上述氨肽酶N溶液10μL，底物L-亮氨酸-p-硝基苯胺溶液5μL，不同梯度浓度的化合物40μL，以50mM磷酸盐缓冲溶液(pH7.2)补足200μL，100％组不含抑制剂。空白组用5μL底物以缓冲液补足200μL。37℃孵育0.5小时，于405nm波长处测定吸收值。按照如下公式计算抑制率：
Figure GDA0002985117760000111
根据化合物的浓度与相应的抑制率，利用Origin7.5软件拟合曲线，得到各化合物的IC50，结果如下表1所示。
表1
Figure GDA0002985117760000112
体外抑酶活性实验结果显示，本发明所述的目标化合物5FU-Bestatin表现出对氨肽酶N的抑制作用，且与阳性药乌苯美司抑制活性相当。
(2)体外药效实验(MTT法)
以MTT法检测化合物对卵巢透明细胞癌ES-2细胞株、人白血病K562细胞株、人前列腺癌PC-3细胞株、人结肠癌HCT-116细胞株的生长抑制率。取指数生长期细胞，经Hank's液洗涤后，以0.02％胰蛋白酶+0.05％EDATA消化分解单个细胞，台盼蓝(Trypan blue)染色计数活细胞在95％以上。取细胞接种于96孔培养板中，细胞数5000/孔，加入不同浓度化合物(不加细胞的孔读数时作空白，加细胞不加化合物的孔作100％组，每组均设三个复孔，5FU-Bestatin作为化合物阳性对照)。于37℃，5％CO2中孵育48h，每孔加入100μL5％的MTT染色液，继续孵育4h后，2500rpm离心12min，然后抛板弃孔中培养基，加入DMSO，100μL/孔。在酶标仪上于570nm(吸收波长)，630nm(辅助波长)处测定每孔的吸光度OD值，以OD570-OD630的差值进行计算。细胞生长抑制率按下式计算(公式中的OD值即是OD570-OD630的差值)：
Figure GDA0002985117760000121
结果如表2所示。
表2
Figure GDA0002985117760000122
体外药效实验显示，本发明所述的目标化合物5FU-Bestatin对上述细胞都有一定的增值抑制作用。与阳性对照药乌苯美司(Bestatin)、五氟尿嘧啶(5FU)相比，对卵巢透明细胞癌ES-2、人白血病K562、人前列腺癌PC-3、人结肠癌HCT-116都表现了比乌苯美司、五氟尿嘧啶更好的增殖抑制活性。
(3)体外稳定实验(HPLC法)
对化合物5FU-Bestatin进行人工胃液、人工肠液、人血浆进行研究，为进一步动物实验提供依据。
本实验中人工胃液、人工肠液的配制参考《中国药典》二部。色谱条件：venusilXBPC-18柱(4.6mm×150mm,5μm)；流动相：乙腈-甲醇-0.2％甲酸水溶液(8-47-45，v/v/v)；进样量：20μL；流速：1.0mL/min；检测波长：258nm；柱温：室温；化合物5FU-Bestatin保留时间t＝6.133min(如图1所示)。
化合物5FU-Bestatin的稳定性结果如图2、3、4所示：从图中可以看出，化合物5FU-Bestatin在人工胃液稳定，在人工肠液和人血浆中缓慢降解。由此说明化合物5FU-Bestatin如预期设计那样进入体内后能缓慢降解释放出原药。
实施例1
在无菌环境下，准确称取0.5g化合物5FU-Bestatin和0.5g甘露醇，置于洁净的配制容器中，加入注射用水4ml，搅拌至完全溶解后，再加注射用水至5ml，搅拌均匀，得到冻干原液。
将冻干原液灌装于10ml管制玻璃瓶中，半加塞，移入冷冻干燥机进行冷冻处理，具体冻干工艺为：冻干原液迅速冻结到-30℃，持续时间2小时，抽真空至15Pa，以每小时2℃的速度升温至-10℃，升华干燥处理15小时，再以每小时8℃的速度升温至30℃，解析干燥处理8小时，全加塞，轧盖，即得冻干粉剂A1。
实施例2
在无菌环境下，准确称取0.3g化合物Le-Bestatin和0.6g葡萄糖，置于洁净的配制容器中，加入注射用水4ml，搅拌至完全溶解后，再加注射用水至5ml，搅拌均匀，得到冻干原液。
将冻干原液灌装于10ml管制玻璃瓶中，半加塞，移入冷冻干燥机进行冷冻处理，具体冻干工艺为：冻干原液迅速冻结到-40℃，持续时间1小时，抽真空至30Pa，以每小时1℃的速度升温至-15℃，升华干燥处理10小时，再以每小时5℃的速度升温至20℃，解析干燥处理5小时，全加塞，轧盖，即得冻干粉剂A2。
实施例3
在无菌环境下，准确称取0.5g化合物Cy-Bestatin和0.4g乳糖，置于洁净的配制容器中，加入注射用水4ml，搅拌至完全溶解后，再加注射用水至5ml，搅拌均匀，得到冻干原液。
将冻干原液灌装于10ml管制玻璃瓶中，半加塞，移入冷冻干燥机进行冷冻处理，具体冻干工艺为：冻干原液迅速冻结到-25℃，持续时间3小时，抽真空至10Pa，以每小时3℃的速度升温至-5℃，升华干燥处理20小时，再以每小时10℃的速度升温至40℃，解析干燥处理10小时，全加塞，轧盖，即得冻干粉剂A3。
实施例4
在无菌环境下，准确称取0.4g化合物Ep-Bestatin和0.6g甘露醇，置于洁净的配制容器中，加入注射用水4ml，搅拌至完全溶解后，再加注射用水至5ml，搅拌均匀，得到冻干原液。
将冻干原液灌装于10ml管制玻璃瓶中，半加塞，移入冷冻干燥机进行冷冻处理，具体冻干工艺为：冻干原液迅速冻结到-35℃，持续时间1.5小时，抽真空至10Pa，以每小时1℃的速度升温至-12℃，升华干燥处理12小时，再以每小时6℃的速度升温至25℃，解析干燥处理7小时，全加塞，轧盖，即得冻干粉剂A4。
测试例
对上述实施例所制得的抗肿瘤药物冻干粉剂进行如下稳定性检测：
(1)高温检测
随机抽取实施例成品各45瓶，置于药品稳定性试验箱中。在60℃条件下放置10天，分别取第0、5、10天的样品检测各种指标，包括考察其外观性状、复溶性和澄明度。结果详见表3。
(2)高湿检测
随机抽取实施例成品各45瓶，每瓶准确称重后，置于药品稳定性试验箱中，于温度25℃、相对湿度(RH)90％±5％条件下放置10天，于第5天和第10天取样检测与第0天样品进行比较；考察其外观性状、复溶性和澄明度。结果详见表4。
(3)强光照射检测
随机抽取实施例成品各45瓶，置于药品强光稳定性试验箱中，于照度4500±500Lx条件下放置10天，分别于第0、5、10天取样检测通过比较其外观性状、复溶性和澄明度等指标考察其光稳定性。结果详见表5。
表3
Figure GDA0002985117760000151
表4
Figure GDA0002985117760000161
表5
Figure GDA0002985117760000162
由上表3-5的结果可以看出，按照本发明所述的方法制备的抗肿瘤药物冻干粉剂具有较好的高温稳定性、高湿稳定性和强光照射稳定性。
以上详细描述了本发明的优选实施方式，但是，本发明并不限于此。在本发明的技术构思范围内，可以对本发明的技术方案进行多种简单变型，包括各个技术特征以任何其它的合适方式进行组合，这些简单变型和组合同样应当视为本发明所公开的内容，均属于本发明的保护范围。

Claims (6)

1.一种含乌苯美司结构的抗肿瘤药物的冻干粉剂，其含有药物活性组分和赋形剂，其特征在于，所述药物活性组分与所述赋形剂的质量比为1：0.5-6，其中，所述药物活性组分为式(I)所示的乌苯美司的前药衍生物，
Figure FDA0002985117750000011
其中，式(I)中R选自
Figure FDA0002985117750000012
2.根据权利要求1所述的冻干粉剂，其特征在于，所述药物活性组分与所述赋形剂的质量比为1：0.8-2。
3.根据权利要求1所述的冻干粉剂，其特征在于，所述赋形剂为甘露醇、葡萄糖和乳糖中的至少一种。
4.一种权利要求1-3中任意一项所述的冻干粉剂的制备方法，该方法包括以下步骤：
(1)将所述药物活性组分、赋形剂和注射用水搅拌至完全溶解后，得到冻干原液；
(2)将所述冻干原液在-25℃～-40℃下预冻处理1h～3h，冻结后，抽真空至5-30Pa，以每小时1℃～3℃的速度升温至-5℃～-15℃，升华干燥处理10h～20h，再次以每小时5℃～10℃的速度升温至20℃～40℃，解析干燥处理5h～10h。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述药物活性组分和所述赋形剂的总量与所述注射用水的体积比为5-20：100。
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述药物活性组分和所述赋形剂的总量与所述注射用水的体积比为8-15：100。
CN201811574582.9A 2018-12-21 2018-12-21 含乌苯美司-抗肿瘤药物协同前药衍生物的冻干粉剂及其制备方法 Active CN109528664B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201811574582.9A CN109528664B (zh) 2018-12-21 2018-12-21 含乌苯美司-抗肿瘤药物协同前药衍生物的冻干粉剂及其制备方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201811574582.9A CN109528664B (zh) 2018-12-21 2018-12-21 含乌苯美司-抗肿瘤药物协同前药衍生物的冻干粉剂及其制备方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN109528664A CN109528664A (zh) 2019-03-29
CN109528664B true CN109528664B (zh) 2021-07-06

Family

ID=65856668

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201811574582.9A Active CN109528664B (zh) 2018-12-21 2018-12-21 含乌苯美司-抗肿瘤药物协同前药衍生物的冻干粉剂及其制备方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN109528664B (zh)

Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1621042A (zh) * 2003-11-25 2005-06-01 范敏华 一种氟尿嘧啶冻干粉针剂及其制备方法
CA2606658A1 (en) * 2006-10-13 2008-04-13 Mike Tyers Compositions and methods for treating neurological disorders or damage
CN101948507A (zh) * 2010-09-16 2011-01-19 廖年生 一类以ngr(no2)为靶向载体的新型抗癌药物、制备及其用途
CN102657624A (zh) * 2012-06-01 2012-09-12 齐鲁制药有限公司 高光学纯度反式-右旋奥沙利铂冻干粉针剂及其制备方法
CN103588713A (zh) * 2013-06-07 2014-02-19 潍坊博创国际生物医药研究院 多靶点型乌苯美司前药衍生物及其制备方法和用途
CN107137360A (zh) * 2017-04-14 2017-09-08 鲁南制药集团股份有限公司 一种注射用阿扎胞苷冻干制剂
CN108635333A (zh) * 2018-07-10 2018-10-12 四川通达动物保健科技有限公司 一种盐酸沃尼妙林冻干粉针剂及其制备方法

Family Cites Families (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6689350B2 (en) * 2000-07-27 2004-02-10 Rutgers, The State University Of New Jersey Therapeutic polyesters and polyamides

Patent Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1621042A (zh) * 2003-11-25 2005-06-01 范敏华 一种氟尿嘧啶冻干粉针剂及其制备方法
CA2606658A1 (en) * 2006-10-13 2008-04-13 Mike Tyers Compositions and methods for treating neurological disorders or damage
CN101948507A (zh) * 2010-09-16 2011-01-19 廖年生 一类以ngr(no2)为靶向载体的新型抗癌药物、制备及其用途
CN102657624A (zh) * 2012-06-01 2012-09-12 齐鲁制药有限公司 高光学纯度反式-右旋奥沙利铂冻干粉针剂及其制备方法
CN103588713A (zh) * 2013-06-07 2014-02-19 潍坊博创国际生物医药研究院 多靶点型乌苯美司前药衍生物及其制备方法和用途
CN107137360A (zh) * 2017-04-14 2017-09-08 鲁南制药集团股份有限公司 一种注射用阿扎胞苷冻干制剂
CN108635333A (zh) * 2018-07-10 2018-10-12 四川通达动物保健科技有限公司 一种盐酸沃尼妙林冻干粉针剂及其制备方法

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
乌苯美司联合小剂量阿糖胞苷治疗老年急性髓系白血病疗效观察;冯林等;《现代医药卫生》;20151130;第31卷(第22期);第3382-3384页 *

Also Published As

Publication number Publication date
CN109528664A (zh) 2019-03-29

Similar Documents

Publication Publication Date Title
TWI830262B (zh) 克立咪唑(clemizole)化合物於預防及治療肝癌之用途
US10765660B2 (en) Agent containing flavonoid derivatives for treating cancer and inflammation
EP2947070B1 (en) Multi-targeted ubenimex prodrug derivative and preparation method and use thereof
CN108658983B (zh) 用于抑制Bcl-2蛋白的N-苯磺酰基苯甲酰胺类化合物及其组合物及应用
WO2008092127A1 (en) Use of acetylated or esterificated azacytidine, decitabine, or other nucleoside analogs as oral agents for the treatment of tumors or other dysplastic syndromes sensitive to hypomethylating agents
CN101787064B (zh) 阿糖胞苷衍生物及其在抗癌抗肿瘤中的用途
CN101735276A (zh) 水溶性磷酸单酯衍生物及其应用
WO2018019188A1 (zh) 核苷氨基磷酸酯类前药的多晶型及其制备方法
EP3279201A1 (en) Cdk inhibitor, eutectic crystal of mek inhibitor, and preparation method therefor
CN104327097B (zh) 雷帕霉素的三氮唑衍生物和用途
CN103450301B (zh) 法尼基硫代水杨酸-核苷缀合物、其制备方法及其医药用途
CN101302199B (zh) 桂德霉素及其在制备抗肿瘤药物中的应用
CN109528664B (zh) 含乌苯美司-抗肿瘤药物协同前药衍生物的冻干粉剂及其制备方法
CN109846873B (zh) 一种抗肿瘤药物组合物
CN109705044B (zh) 乌苯美司衍生物与具有抗肿瘤活性化合物的协同前药衍生物及其制备方法和应用
CN109846818B (zh) 一种具有乌苯美司结构的抗肿瘤药物的注射液及其制备方法
WO2013123745A1 (zh) 齐多夫定喹啉共轭化合物及其制备方法和抗肝癌之应用
CN114478561B (zh) 一种依帕司他石蒜碱偶联物及其制备方法和用途
CN112480082B (zh) 一种化合物、制备方法及其在制备治疗小细胞肺癌药物中的应用
CN109646429B (zh) 一种含乌苯美司的前药衍生物的固体剂型及其制备方法
US11850239B2 (en) MDM2 inhibitor and a platinum compound for cancer treatment
US20190029997A1 (en) Small molecular lung-targeting drug
CN102485735B (zh) 6-果糖氨-4-芳胺基喹唑啉衍生物及其用途
WO2016171470A1 (en) Bromodomain-inhibiting compounds and methods to prevent or treat a cancer
JP2018508495A (ja) スニチニブのプロドラッグ及び医薬組成物

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant