CN109517025B - 28-(l-苯丙氨酸)-五环三萜衍生物及其合成方法和应用 - Google Patents
28-(l-苯丙氨酸)-五环三萜衍生物及其合成方法和应用 Download PDFInfo
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Classifications
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Abstract
本发明公开了一系列28‑(L‑苯丙氨酸)‑五环三萜衍生物及其合成方法和应用。所述的五环三萜衍生物具体包括2个28‑(L‑苯丙氨酸)‑齐墩果酸衍生物、2个28‑(L‑苯丙氨酸)‑熊果酸衍生物和2个28‑(L‑苯丙氨酸)‑甘草次酸衍生物。申请人的体外试验结果表明，它们对某些肿瘤细胞株具有良好的增殖抑制活性，具有较好的潜在药用价值，有望用于各种抗肿瘤药物的制备。
Description
技术领域
本发明涉及五环三萜衍生物，具体涉及28-(L-苯丙氨酸)-五环三萜衍生物及其合成方法和应用。
背景技术
五环三萜类化合物在自然界中分布广泛，是很多常用中草药的有效成分，按其烷烃结构骨架的不同主要分为：齐墩果烷型、熊果烷型、和羽扇豆烷型等。五环三萜类化合物一般具有广泛的生物活性，如降血糖血脂、抗炎、抗肿瘤、抗HIV、抗病毒等。齐墩果酸作为护肝片在中国已上市近40年。
氨基酸，作为生物功能大分子蛋白质的基本组成单位，在生命过程中发挥着重要的作用。肿瘤细胞代谢旺盛，需要大量的营养物质来维持细胞高速繁殖的状态，其中氨基酸是其必须的营养物质。L-苯丙氨酸属于人体必需氨基酸，人体不能自主合成，必须从食物中摄取。目前尚未见有关于28-(L-苯丙氨酸)-五环三萜衍生物用于肿瘤治疗的相关报道。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一系列结构新颖的28-(L-苯丙氨酸)-五环三萜衍生物，以及它们的合成方法和应用。
本发明涉及下述式1-6所示的28-(L-苯丙氨酸)-五环三萜衍生物及其药学上可接受的盐：
本发明还提供上述28-(L-苯丙氨酸)-五环三萜衍生物的合成方法，包括：
化合物1的合成方法，主要包括以下步骤：取3-丙酰氧基-齐墩果酸溶于第一有机溶剂中，加入二氯亚砜或草酰氯，在加热条件下反应，反应液减压浓缩，并用第一有机溶剂旋除二氯亚砜或草酰氯，所得残余物溶于第一有机溶剂中，冰浴条件下加入L-苯丙氨酸甲酯和弱碱性溶液，于加热或不加热条件下反应，反应完成后，所得物料旋干，得到化合物1粗品；
化合物2的合成方法，主要包括以下步骤：取化合物1溶于第二有机溶剂中，冰浴条件下加入强碱性溶液，在不加热条件下反应，反应完成后，调节反应所得物料的pH＝1-2，之后旋干，得到化合物2粗品；
化合物3的合成方法，主要包括以下步骤：以3-丙酰氧基-熊果酸为初始原料，按照化合物1的合成方法合成得到化合物3粗品；
化合物4的合成方法，主要包括以下步骤：以3-丙酰氧基-熊果酸为初始原料，按照化合物2的合成方法合成得到化合物4粗品；
化合物5的合成方法，主要包括以下步骤：以3-丙酰氧基-甘草次酸为初始原料，按照化合物1的合成方法合成得到化合物5粗品；
化合物6的合成方法，主要包括以下步骤：取3-丙酰氧基-甘草次酸和HATU(2-(7-氧化苯并三氮唑)-N，N，N’，N’-四甲基脲六氟磷酸酯)溶于第一有机溶剂中，加入L-苯丙氨酸和三乙胺或二异丙基乙胺(DIPEA)，于加热或不加热条件下反应，反应完成后，所得物料旋干，得到化合物6粗品；
其中，所述的第一有机溶剂为选自二氯甲烷、氯仿、甲醇和四氢呋喃中的一种或两种以上的组合；所述的第二有机溶剂为水与选自甲醇和四氢呋喃中的一种或两种的组合。
在上述各化合物的合成方法中，各反应原料的摩尔比均为它们的化学计量比。所述第一有机溶剂或第二有机溶剂的用量通常为能够溶解参加反应的原料为宜。在第二有机溶剂的组成中，水的体系中的所占的比例≤50％体积；当体系由水、甲醇和四氢呋喃组成时，水、甲醇和四氢呋喃的体积比优选为1：1-5：1-5；当体系由水和甲醇组成时，水和甲醇的体积比优选为1：1-5；当体系由水和四氢呋喃组成时，水和四氢呋喃的体积比优选为1：1-5。
在上述各化合物的合成方法中，涉及的弱碱性溶液可以是现有常用弱碱性物质的水溶液，优选为选自碳酸钠水溶液、碳酸氢钠水溶液、碳酸钾水溶液和碳酸氢钾水溶液中的一种或两种以上的组合；更优选为饱和碳酸钠水溶液、饱和碳酸氢钠水溶液、饱和碳酸钾水溶液或饱和碳酸氢钾水溶液。涉及的强碱性溶液可以是现有常用强碱性物质的水溶液，优选为氢氧化钠水溶液和/或氢氧化钾水溶液，更优选为1-5mol/L的氢氧化钠水溶液和/或1-5mol/L的氢氧化钾水溶液。所述弱碱性溶液所起的作用均为中和反应过程中生成的酸，以促进反应的进行，因此，它们的用量通常是相对过量的。在化合物6的合成方法中，三乙胺和二异丙基乙胺的作用也是如此。
在上述化合物1、化合物3和化合物5的合成方法中，所述3-丙酰氧基-齐墩果酸与二氯亚砜或草酰氯的反应，3-丙酰氧基-熊果酸与二氯亚砜或草酰氯的反应，以及3-丙酰氧基-甘草次酸与二氯亚砜或草酰氯的反应，均优选在40-90℃条件下进行，更优选是在50-90℃条件下进行。反应是否完全可用薄层层析(TLC)跟踪检测。当反应在前述条件下进行时，各反应的时间通常控制在1-24h。
在上述化合物1、化合物3和化合物5的合成方法中，所述加入L-苯丙氨酸甲酯和弱碱性溶液后的反应在低于或等于50℃条件下进行，更优选是在10-40℃条件下进行，此时反应的时间常控制在8-24h。。
在上述化合物6的合成方法中，所述反应在低于或等于50℃条件下进行，更优选是在10-40℃条件下进行，此时反应的时间常控制在8-48h。
上述合成方法中，涉及的原料3-丙酰氧基-齐墩果酸、3-丙酰氧基-熊果酸和3-丙酰氧基-甘草次酸，可参考现有文献(European Journal of Medicinal Chemistry,2014,74:278–301(3-丙酰氧基-齐墩果酸)，European Journal of Medicinal Chemistry,2014,80:502-508(3-丙酰氧基-熊果酸)，Bioorganic&Medicinal Chemistry Letters,2012,22(10):3473-3479(3-丙酰氧基-甘草次酸))进行合成，也可自行设计合成路线进行合成。所述3-丙酰氧基-齐墩果酸、3-丙酰氧基-熊果酸和3-丙酰氧基-甘草次酸的结构分别如下所示：
上述合成方法制得的是各化合物的粗品，可采用现有常规的纯化方法对它们进行纯化以提高各化合物的纯度。通常采用硅胶柱层析进行纯化。当将化合物1粗品或化合物3粗品上硅胶柱层析时，用于洗脱的洗脱剂为由石油醚和乙酸乙酯组成的混合溶剂，其中石油醚和乙酸乙酯的体积比优选为50-5：1，进一步优选为30-5：1。当将化合物2粗品或化合物4粗品上硅胶柱层析时，用于洗脱的洗脱剂优选为由石油醚和乙酸乙酯组成的混合溶剂，其中石油醚和乙酸乙酯的体积比优选为1-5：1，进一步优选为1-3：1。当将化合物5粗品或化合物6粗品上硅胶柱层析时，用于洗脱的洗脱剂优选为由石油醚和乙酸乙酯组成的混合溶剂，其中石油醚和乙酸乙酯的体积比优选为30-1：1，进一步优选为10-1：1。
为了进一步减少硅胶柱的负担，优选先对各化合物粗品进行除杂后再上硅胶柱层析。具体的：
对于化合物1粗品、化合物3粗品和化合物5粗品来说，由于合成过程中使用的弱碱性溶液过量，可以先将化合物1粗品、化合物3粗品或化合物5粗品溶于稀盐酸(通常为1-2mol/L的稀盐酸)中以中和过量的碱，然后再用萃取剂萃取，收集有机相，经洗涤(通常经水、饱和食盐水洗涤)、干燥后旋干，得到除杂后的化合物1粗品、化合物3粗品或化合物5。所述的萃取剂可以是二氯甲烷、氯仿或乙酸乙酯等。
对于化合物2粗品和化合物4粗品来说，可先将它们分散于二氯甲烷、氯仿或乙酸乙酯中，经水、饱和食盐水洗涤，干燥(无水硫酸钠或无水硫酸镁干燥)后旋干，得到除杂后的化合物2粗品和化合物4粗品。
对于化合物6粗品来说，除杂操作与化合物2粗品和化合物4粗品相同，只是在洗涤时，优选依次用1mol/L稀盐酸、水、饱和食盐水洗涤。
本发明进一步包括上述化合物1-6中任一化合物或其药学上可接受的盐在制备抗肿瘤药物中的应用。
本发明更进一步包括一种药物组合物，含有治疗上有效剂量的上述化合物1-6中任一化合物或其药学上可接受的盐。
与现有技术相比，本发明提供了一系列结构新颖的28-(L-苯丙氨酸)-五环三萜衍生物及其合成方法，申请人的体外试验试验结果表明，它们对某些肿瘤细胞株具有良好的增殖抑制活性，具有较好的潜在药用价值，有望用于各种抗肿瘤药物的制备。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步的详述，以更好地理解本发明的内容，但本发明并不限于以下实施例。
实施例1：化合物1的合成
将3-丙酰氧基-齐墩果酸(0.50g,1.0mmol)溶于CH2Cl2(10mL)，滴加SOCl2(0.45mL)，72℃回流2h，反应液减压浓缩，并用CH2Cl2(2×20mL)旋除SOCl2；所得残余物溶解于CH2Cl2(20mL)，冰浴条件下依次加入L-苯丙氨酸甲酯(0.26g,1.5mmol)、饱和碳酸氢钠水溶液(1.25mL)，室温搅拌反应12h；所得反应物料分散在1mol/L HCl(100mL)中，CH2Cl2(3×30mL)萃取，合并有机层，分别用水、饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液旋干，得粗产物。粗产物上硅胶柱层析分离(洗脱剂:V石油醚:V乙酸乙酯＝30:1to5:1)，得到化合物1(0.48g,73.0％,白色固体)。
Yield:0.48g,73.0％,white solid；Rf＝0.689(Petroleum ether:EtOAc＝2:1).m.p.85-87℃.1H NMR(500MHz,CDCl3):δ0.60,0.83,0.84,0.85(4s,each 3H,4×CH3),0.88(s,6H,2×CH3),1.11(s,3H,CH3),0.79-1.97(m,25H),2.28-2.33(m,2H,CH2COO),2.41-2.45(dd,J＝4.4,12.9Hz,1H,H-18),3.01-3.19(m,2H,phCH2),3.68(s,3H,OCH3),4.46-4.49(m,1H,H-3),4.71-4.75(m,1H,NCHCOO),5.26-5.28(t,J＝3.6Hz,H-12),6.38(d,J＝6.2Hz,1H,NH),7.08(d,J＝6.7Hz,2H,Ar-H),7.22-7.27(m,3H,Ar-H).13C NMR(125MHz,CDCl3):δ9.6,15.7,16.7,17.0,18.4,23.75,23.79,23.8,24.0,25.9,27.5,28.36,28.39,31.0,32.7,33.0,33.2,34.4,37.1,38.0,38.2,38.4,39.7,42.2,46.7,46.8,47.8,52.4,53.7,55.5,80.8,123.5,127.3,128.7,129.6,136.4,143.9,127.3,174.5,177.8.HRMS(ESI)m/z:calcdfor C43H64NO5[M+H]+674.4784,found674.4749.
实施例2：化合物1的合成
将3-丙酰氧基-齐墩果酸(0.50g,1.0mmol)溶于MeOH和THF组成的混合溶剂中(MeOH和THF各5mL)，滴加草酰氯(0.45mL)，60℃回流1h，反应液减压浓缩，并用MeOH(2×20mL)旋除草酰氯；所得残余物溶解于MeOH(20mL)，冰浴条件下依次加入L-苯丙氨酸甲酯(0.26g,1.5mmol)、饱和碳酸钾水溶液(1.25mL)，50℃条件下搅拌反应8h；所得反应物料分散在2mol/L HCl(100mL)中，用EtOAc(3×30mL)萃取，合并有机层，分别用水、饱和食盐水洗涤，无水硫酸镁干燥，过滤，滤液旋干，得粗产物。粗产物上硅胶柱层析分离(洗脱剂:V石油醚:V乙酸乙酯＝30:1to 5:1)，得到白色固体(0.35g，53.8％)。
所得产物经核磁氢谱表征，确定为化合物1。
实施例3：化合物2的合成
将化合物1(0.45g,0.66mmol)溶于由MeOH、THF和H2O组成的混合溶剂(9mL,MeOH、THF和H2O的体积比为1：1：1)中，冰浴条件下加入2mol/L氢氧化钠溶液(0.5mL/30min,1.5mL,3.0mmol)，室温搅拌反应12h；所得反应液用2mol/L HCl调pH＝2，减压旋除MeOH和THF；所得残余物分散于EtOAc(100mL)中，分别用水和饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液旋干得粗产物。粗产物上硅胶柱层析分离(洗脱剂:V石油醚:V乙酸乙酯＝3:1to 1:1)，得到化合物2(0.41g，94％，白色固体)。
Yield:0.41g,94％,white solid；Rf＝0.29(Petroleum ether:EtOAc＝1:1).m.p.108-110℃.1H NMR(500MHz,CDCl3):δ0.62,0.76(2s,each 3H,2×CH3),0.84(s,6H,2×CH3),0.87,0.88,1.10(3s,each 3H,3×CH3),0.79-1.97(m,25H),2.25(dd,J＝3.1,13.7Hz,1H,H-18),2.29-2.34(m,2H,CH2COO),3.04-3.33(m,2H,phCH2),4.46-4.49(m,1H,H-3),4.66-4.70(m,1H,NCHCOO),5.20(t,J＝3.2Hz,1H,H-12),6.39(d,J＝4.7Hz,1H,NH),7.18(d,J＝7.3Hz,2H,Ar-H),7.27-7.32(m,3H,Ar-H).13C NMR(125MHz,CDCl3):δ9.6,15.7,16.7,17.0,18.4,23.5,23.7,23.8,24.1,25.9,27.4,28.3,28.4,30.9,32.61,32.66,33.1,34.3,36.9,37.1,38.0,38.4,39.7,42.1,42.2,46.7,46.8,47.7,54.0,55.5,80.8,123.9,127.5,128.9,129.7,136.0,143.8,174.3,174.7,180.0.HRMS(ESI)m/z calcd forC42H62NO5[M+H]+660.4628；found 660.4612.
实施例4：化合物2的合成
将化合物1(0.45g,0.66mmol)溶于由MeOH和H2O组成的混合溶剂(9mL,MeOH和H2O的体积比为5：1)中，冰浴条件下加入5mol/L氢氧化钠溶液(0.5mL/30min,1.5mL,3.0mmol)，室温搅拌反应20h；所得反应液用1mol/L HCl调pH＝1，减压旋除MeOH；所得残余物分散于CH2Cl2(100mL)中，分别用水和饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液旋干得粗产物。粗产物上硅胶柱层析分离(洗脱剂:V石油醚:V乙酸乙酯＝3:1to 1:1)，得到白色固体(0.35g，80％)。
所得产物经核磁氢谱表征，确定为化合物2。
实施例5：化合物2的合成
重复实施例4，不同的是：溶剂改为由THF和H2O组成的混合溶剂(8mL,THF和H2O的体积比为3：1)中，反应在35℃条件下进行，反应时间控制为8h，其余不变。最终得到白色固体(0.36g，83％)。
所得产物经核磁氢谱表征，确定为化合物2。
实施例6：化合物3的合成
将3-丙酰氧基-熊果酸(1.00g,1.95mmol)溶于THF(20mL)中，滴加SOCl2(0.9mL)，80℃回流5h；反应液减压浓缩，并用THF(2×20mL)旋除SOCl2；残余物溶解于THF(20mL)中，冰浴条件下下依次加入L-苯丙氨酸甲酯(0.52g,2.9mmol)和饱和碳酸氢钾溶液(2.5mL)，室温搅拌反应12h；所得反应液分散于1mol/L HCl(100mL)中，CH2Cl2(3×30mL)萃取，合并有机层，分别用水、饱和食盐水洗涤，无水硫酸镁干燥，过滤，滤液旋干得粗产物。粗产物上硅胶柱层析分离(洗脱剂:V石油醚:V乙酸乙酯＝30:1to5:1)，得到化合物3(1.09g，83.0％，白色固体)。
Yield:1.09g,83.0％,white solid；Rf＝0.56(Petroleum ether:EtOAc＝3:1).m.p.85-87℃.1H NMR(500MHz,CDCl3):δ0.59,0.831,0.837,0.84,0.89,0.93,1.04(7s,each 3H,7×CH3),0.78-2.00(m,26H),2.28-2.33(m,2H,CH2COO),3.01-3.14(m,2H,phCH2),3.66(s,3H,OCH3),4.46-4.49(m,1H,H-3),4.69-4.73(m,1H,NCHCOO),5.24(t,J＝3.7Hz,H-12),6.38(d,J＝6.5Hz,1H,NH),7.09(d,J＝6.8Hz,2H,Ar-H),7.21-7.28(m,3H,Ar-H).13CNMR(125MHz,CDCl3):δ9.6,15.8,16.7,17.0,17.4,18.4,21.5,23.63,23.65,23.8,25.1,28.0,28.3,31.1,33.0,37.1,37.5,38.0,38.52,38.59,39.4,39.8,39.9,42.5,47.7,48.0,52.4,53.8,55.5,80.8,126.6,127.3,128.7,129.6,136.5,138.6,172.4,174.5,177.8.HRMS(ESI)m/z:calcd for C43H63NO5Na[M+Na]+696.4604,found696.4572.
实施例7：化合物3的合成
重复实施例6，不同的是：用草酰氯代替SOCl2，反应在10℃条件下进行，反应时间控制为24h，其余不变。最终得到白色固体(0.93g，70.5％)。
所得产物经核磁氢谱表征，确定为化合物3。
实施例8：化合物4的合成
将化合物3(1.00g,1.48mmol)溶于由MeOH、THF和H2O组成的混合溶剂(9mL,MeOH、THF和H2O的体积比为5：3：1)中，冰浴条件下加入2mol/L氢氧化钠溶液(1.1mL/30min,3.3mL,6.6mmol)，室温搅拌反应12h。反应液用2mol/L HCl调pH＝1.5，减压旋除MeOH和THF，残余物分散于EtOAc(150mL)中，分别用水和饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液旋干得粗产物。粗产物上硅胶柱层析分离(洗脱剂:V石油醚:V乙酸乙酯＝3:1～1:1)得化合物4(0.783g，87.74％，白色固体)。
Yield:0.783g,87.74％,white solid；Rf＝0.478(Petroleum ether:EtOAc＝1:1).m.p.108-110℃.1H NMR(400MHz,CDCl3):δ0.60(s,3H,CH3),0.80(d,J＝6.3Hz,3H,CH3),0.84(s,6H,2×CH3),0.87(s,3H,CH3),0.93(d,J＝6.3Hz,CH3),1.04(s,3H,CH3),0.77-2.00(m,26H),2.29-2.35(m,2H,CH2COO),3.05-2.29(m,2H,phCH2),4.46-4.50(m,1H,H-3),4.65-4.69(m,1H,NCHCOO),5.14(t,J＝3.5Hz,H-12),6.40(d,J＝5.7Hz,1H,NH),7.16-7.18(m,2H,Ar-H),7.26-7.33(m,3H,Ar-H).13C NMR(100MHz,CDCl3):δ9.6,15.8,16.8,17.0,17.4,18.4,21.4,23.5,23.6,23.8,25.2,27.9,28.40,28.41,31.0,32.9,37.1,37.3,38.0,38.6,39.3,39.8,39.9,42.5,47.7,48.2,53.7,54.1,55.5,80.8,126.9,127.5,128.9,129.8,136.1,138.6,174.4,174.7,180.1.HRMS(ESI)m/z:calcd for C42H61NO5Na[M+Na]+682.4447；found 682.4412.
实施例9：化合物5的合成
将3-丙酰氧基-甘草次酸(0.50g,0.95mmol)溶于MeOH(15mL)中，滴加SOCl2(0.45mL)，65℃回流10h。反应液减压浓缩，并用MeOH(2×20mL)旋除SOCl2；残余物溶解于MeOH(20mL)中，冰浴条件下依次加入L-苯丙氨酸甲酯(0.25g,1.4mmol)、饱和碳酸钠溶液(1.25mL)，20℃搅拌反应12h；反应液分散在1mol/L HCl(100mL)中，CH2Cl2(3×30mL)萃取，合并有机层，分别用水和饱和食盐水洗涤，无水Na2SO4干燥，过滤，滤液旋干得粗产物。粗产物上硅胶柱层析分离(洗脱剂:V石油醚:V乙酸乙酯＝10:1)，，得到化合物5(0.21g，32.1％，白色固体)。
Yield:0.21g,32.1％,white solid；Rf＝0.396(Petroleum ether:EtOAc＝4:1).m.p.85-87℃.1H NMR(500MHz,CDCl3):δ0.74,0.85,0.87,1.04,1.09,1.14,1.33(7s,each3H,7×CH3),0.77-2.13(m,22H),2.29-2.34(m,3H,H-9,CH2COO),2.75-2.79(m,1H,H-18),3.05-3.21(m,2H,phCH2),3.76(s,3H,OCH3),4.51(dd,J＝4.7,11.7Hz,1H,H-3),4.89-4.93(m,1H,NCHCOO),5.60(s,1H,H-12),5.99(d,J＝7.9Hz,1H,NH),7.09(d,J＝6.7Hz,2H,Ar-H),7.21-7.28(m,3H,Ar-H).13C NMR(125MHz,CDCl3):δ9.6,16.7,17.0,17.7,18.9,23.6,23.9,26.6,26.7,28.38,28.39,28.6,29.6,31.6,32.1,33.0,37.2,37.5,38.1,38.4,39.1,42.0,43.4,43.9,45.6,48.0,52.7,52.9,55.3,62.0,80.6,127.5,128.7,128.9,129.4,136.2,169.2,172.3,174.5,175.6,200.2.HRMS(ESI)m/z:calcd for C43H61NO6Na[M+Na]+710.4397；found 710.4356.
实施例10：化合物6的合成
将3-丙酰氧基-甘草次酸(0.50g,0.95mmol)、HATU(0.46g,1.23mmol)溶于THF(15mL)中，室温搅拌30min；之后依次加入L-苯丙氨酸(0.18g,1.14mmol)和三乙胺(0.31g,3.13mmol)，室温搅拌24h；反应液减压浓缩，所得残余物分散于EtOAc(150mL)中，依次用1mol/L HCl(150mL)、饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥。过滤，滤液旋干得粗产物。粗产物上硅胶柱层析分离(洗脱剂:V石油醚:V乙酸乙酯＝10:1to 1:1)，得化合物6(0.40g,62.5％)。Rf＝0.42(Petroleum ether:EtOAc＝1:1，白色固体)。
Yield:0.40g,62.5％,white solid；Rf＝0.42(Petroleum ether:EtOAc＝1:1).m.p.130-132℃.1H NMR(400MHz,CDCl3):δ0.74,0.86,0.87,1.02,1.09,1.14,1.31(7s,each 3H,7×CH3),0.77-2.11(m,22H),2.29-2.35(m,3H,H-9,CH2COO),2.71-2.76(m,1H,H-18),3.02-3.30(m,2H,phCH2),4.51(dd,J＝4.8,11.5Hz,1H,H-3),4.96-5.01(m,1H,NCHCOO),5.64(s,1H,H-12),6.51(d,J＝7.0Hz,1H,NH),7.14-7.24(m,5H,Ar-H).13C NMR(100MHz,CDCl3):δ9.6,14.5,16.6,17.0,17.6,18.9,21.3,23.5,23.8,26.6,26.8,28.37,28.39,28.6,29.4,30.0,31.4,32.1,33.0,37.2,37.4,37.7,38.4,39.0,41.9,43.5,43.9,45.9,48.3,52.9,55.2,61.9,80.5,127.2,128.1,128.7,129.7,136.6,170.8,174.6,176.0,201.4.HRMS(ESI)m/z:calcd for C42H59NO6Na[M+Na]+696.4240；found696.4229.
实施例11：化合物6的合成
将3-丙酰氧基-甘草次酸(0.50g,0.95mmol)、HATU(0.46g,1.23mmol)溶于MeOH(15mL)中，搅拌10min；之后依次加入L-苯丙氨酸(0.18g,1.14mmol)和DIPEA(0.40g，3.13mmol)，40℃搅拌8h；反应液减压浓缩，所得残余物分散于EtOAc(150mL)中，依次用1mol/L HCl(150mL)、饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥。过滤，滤液旋干得粗产物。粗产物上硅胶柱层析分离(洗脱剂:V石油醚:V乙酸乙酯＝10:1to 1:1)，得到白色固体(0.36g，56.5％)。
所得产物经核磁氢谱表征，确定为化合物6。
实验例：本发明所述化合物1-6对多种肿瘤细胞株的增殖抑制活性实验：
1、细胞株与细胞培养
本实验选用人膀胱癌细胞T24、人非小肺癌细胞A549、人胃癌细胞MGC-803、人肝癌细胞HepG2、人正常肝细胞HL-7702等5种人类细胞株。
所有细胞株均培养在含10％小牛血清、100U/mL链霉素的RPMI-1640培养液内，置37℃含体积浓度5％CO2孵箱中培养。
2、待测化合物的配制所用的受试药物的纯度≥95％，将其DMSO储液用生理缓冲液稀释后配置成200μmol/L的终溶液，其中助溶剂DMSO的浓度≤1％，测试该浓度下化合物对各种肿瘤细胞生长得抑制程度。
3、细胞生长抑制实验(MTT法)
(1)取对数生长期的肿瘤细胞，经胰蛋白酶消化后，用含10％小牛血清的培养液配置成浓度为5000个/mL的细胞悬液，以没孔190μL接种于96孔培养板中，使待测细胞浓度至每孔1000～10000/孔(边缘孔用无菌PBS填充)；
(2)5％CO2，37℃孵育24h，至细胞单层铺满孔底，每孔加入一定浓度梯度的药物10μL，每个浓度梯度设4个复孔；
(3)5％CO2，37℃孵育48h，至倒置显微镜下观察；
(4)每孔加入10μL的MTT溶液(5mg/mL PBS，即0.5％MTT)，继续培养4h；
(5)终止培养，小心吸去孔内培养液，每孔加入150μL的DMSO充分溶解甲瓒沉淀，振荡器混匀后，在酶标仪用波长为570nm，参比波长为450nm测定各孔的光密度值；
(6)同时设置调零孔(培养基、MTT、DMSO)，对照孔(细胞、相同浓度的药物溶解介质、培养液、MTT、DMSO)。
(7)根据测得的光密度值(OD值)，来判断活细胞数量，OD值越大，细胞活性越强。利用公式：
肿瘤细胞生长抑制率(％)＝[(1-实验组平均OD值)/(对照组平均OD值)]×％；
IC50测定：利用以上方法，每种化合物须设置浓度梯度，其中含多个(一般5～8个)浓度，每个浓度也须设置3～5个副孔，实验得到每个不同浓度的抑制率，然后在SPSS软件中计算化合物的IC50值，结果如下述表1所示。
表1：各化合物对不同细胞株的IC50值(μM)
注：实验数据为3次实验的平均值。IC50值越低，说明该化合物抑制肿瘤细胞生长的活性越强。
Claims (10)
1.下述式2、4、6所示的28-(L-苯丙氨酸)-五环三萜衍生物及其药学上可接受的盐：
2.权利要求1所述28-(L-苯丙氨酸)-五环三萜衍生物的合成方法，包括：
化合物2的合成方法，包括以下步骤：取化合物1溶于第二有机溶剂中，冰浴条件下加入强碱性溶液，在不加热条件下反应，反应完成后，调节反应所得物料的pH＝1-2，之后旋干，得到化合物2粗品；其中，
所述化合物1的结构如下述式1所示，其合成方法包括以下步骤：取3-丙酰氧基-齐墩果酸溶于第一有机溶剂中，加入二氯亚砜或草酰氯，在加热条件下反应，反应液减压浓缩，并用第一有机溶剂旋除二氯亚砜或草酰氯，所得残余物溶于第一有机溶剂中，冰浴条件下加入L-苯丙氨酸甲酯和弱碱性溶液，于加热或不加热条件下反应，反应完成后，所得物料旋干，得到化合物1粗品；
化合物4的合成方法，包括以下步骤：以3-丙酰氧基-熊果酸为初始原料，按照化合物2的合成方法合成得到化合物4粗品；
化合物6的合成方法，包括以下步骤：取3-丙酰氧基-甘草次酸和HATU溶于第一有机溶剂中，加入L-苯丙氨酸和三乙胺或二异丙基乙胺，于加热或不加热条件下反应，反应完成后，所得物料旋干，得到化合物6粗品；
其中，所述的第一有机溶剂为选自二氯甲烷、氯仿、甲醇和四氢呋喃中的一种或两种以上的组合；所述的第二有机溶剂为水与选自甲醇和四氢呋喃中的一种或两种的组合。
3.根据权利要求2所述的合成方法，其特征在于：
所述的弱碱性溶液为选自碳酸钠水溶液、碳酸氢钠水溶液、碳酸钾水溶液和碳酸氢钾水溶液中的一种或两种以上的组合；
所述的强碱性溶液为氢氧化钠水溶液和/或氢氧化钾水溶液。
4.根据权利要求2所述的合成方法，其特征在于：在化合物1的合成方法中，所述3-丙酰氧基-齐墩果酸与二氯亚砜或草酰氯的反应，3-丙酰氧基-熊果酸与二氯亚砜或草酰氯的反应，以及3-丙酰氧基-甘草次酸与二氯亚砜或草酰氯的反应，均在40-90℃条件下进行。
5.根据权利要求2所述的合成方法，其特征在于：在化合物1的合成方法中，所述加入L-苯丙氨酸甲酯和弱碱性溶液后的反应在低于或等于50℃条件下进行。
6.根据权利要求2所述的合成方法，其特征在于：在化合物6的合成方法中，所述反应在低于或等于50℃条件下进行。
7.根据权利要求2-6中任一项所述的合成方法，其特征在于：在各化合物的合成方法中，还包括对各化合物粗品进行纯化的纯化步骤。
8.根据权利要求7所述的合成方法，其特征在于：所述的纯化步骤为：将各化合物粗品进行柱层析，以得到纯化后的各化合物。
9.权利要求1中任一化合物或其药学上可接受的盐在制备抗肿瘤药物中的应用。
10.一种药物组合物，含有治疗上有效剂量的权利要求1中任一化合物或其药学上可接受的盐。
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