CN109439716A - 一种白鲢鱼蛋白肽的制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种白鲢鱼蛋白肽的制备方法，包括准备、第一次酶解、第二次酶解、灭活、过滤去粗渣、高速离心脱脂、脱色去味、干燥八个步骤。本发明工艺流程相对简单且原材料易得，第一步酶解后无需升温灭活及再降温，简化了工艺，适合大工业化生产；且制得的白鲢鱼蛋白肽是纯天然营养物质，为低分子量多肽，人体极易吸收，含有人体所需的8种必须氨基酸，不但可以维持人体健康，还可以促进生长发育，是高档营养食品、保健食品。
Description
技术领域
本发明涉及淡水鱼水产深加工领域，特别是涉及一种白鲢鱼蛋白肽的制备方法。
背景技术
我国淡水渔业资源丰富，年产淡水鱼2800万吨以上，以白鲢、草鱼、鳙鱼、鲤鱼为主，其中白鲢养殖占70%以上，但目前市场的供应相对过剩，人们需求不旺，淡水鱼加工不深，养殖成本提高，鱼价又相对走低，所以精深加工是其必然出路。
白鲢是主要的淡水鱼种之一，它肉质细嫩，富含蛋白质及氨基酸、脂肪、糖类、欧咪伽3、维生素A、维生素D、维生素B、钙、磷、铁、硫胺素、核黄素、烟酸的营养成分，均可为机体所利用；具体所含营养素如下：鲢鱼的营养价值很高，蛋白质含量约为15%-20%，而脂肪含量却不高，仅为1%-10%，蛋白质易为人体消化吸收，可利用率高达95%以上；营养成分高，同时具有生长快、产量高、价廉易得的优点，适宜做深加工。
蛋白肽是一种有生物活性的蛋白类多肽物质，分子量介于氨基酸与蛋白质之间，一般由2～10个氨基酸组成，以二肽、三肽为主，它是人体内肝、肾、脾细胞自分泌和旁分泌的产物，具有很重要的生物学意义，有促生长、促细胞分化、创伤修复的作用，又有降血糖、降血脂、舒张血管、促进骨的合成代谢保持其正常结构功能的作用。
中国专利CN103289875A提供了一种淡水鱼蛋白肽酒的制备方法，将基酒或其他露酒与淡水鱼蛋白肽按照质量配比为0.1%-20%配置原料，再经过微滤澄清后制得鱼蛋白肽酒或其他含鱼蛋白肽露酒，本发明技术所制得的淡水鱼蛋白肽酒(或露酒)中含有鱼蛋白小肽和氨基酸，该鱼蛋白肽有修复人体衰老细胞，促进生命活力，延年益寿的功能。此发明蛋白质酶解之前没有任何处理，就会导致不能得到完全酶切，生成的蛋白肽不是小分子肽，那么人体就不能完全吸收，蛋白质的品质不能得到保障。
发明内容
本发明的目的是针对以上问题，提供一种淡水鱼蛋白肽的制备方法。
为实现以上目的，本发明采用的技术方案是：
一种白鲢鱼蛋白肽的制备方法，包括以下步骤：
步骤1、准备：将白鲢鱼去鳃去内脏清洗后，加柠檬汁、磷酸搅拌均匀，过滤，按鱼水重量比1:2加水，用捣碎机捣碎得到捣碎物；
步骤2、第一次酶解：将步骤1制得的捣碎物放入酶解反应罐中，加入碱性蛋白酶制得酶解物；
步骤3、第二次酶解：将步骤2得到的酶解物加入风味蛋白酶第二次酶解制得酶解物；
步骤4、灭活：将步骤3制得的酶解物升温至85-90℃，维持10-15min；
步骤5、过滤去粗渣：将步骤4灭活后的酶解物在60目滤网上过滤，去粗渣留上清液；
步骤6、高速离心脱脂：将步骤5得到的上清液加盐酸调节PH至3-4.5，采用高速离心分离出脂肪，离心速度4500-5000r/min，将分离后的白鲢鱼蛋白肽混合液加碱中和到PH为6-6.5；
步骤7、脱色去味：将步骤6得到的白鲢鱼蛋白肽混合液放入脱色罐中过滤脱色去味，脱色剂采用活性碳和珍珠岩滤料1∶1混合搅拌得到；
步骤8、干燥：将步骤7脱色去味后的白鲢鱼蛋白肽混合液采用140℃-150℃喷雾干燥得到白鲢鱼蛋白肽粉，其主要为二肽和三肽的小分子肽。
所述步骤1中加入占鱼重量3-5%的柠檬汁、2-6%的磷酸搅拌均匀，浸泡2-5h。
所述步骤2中酶解的条件是：用0.1-1mol/L的氢氧化钠溶液调节pH值至8.5-9，在反应罐中加压至10-30MPa。
所述步骤2中加入碱性蛋白酶的用量为鱼重量的0.1%-0.15%。
所述步骤2中碱性蛋白酶的活性为20万U/g，酶解温度为50-55℃，酶解时间为6-8h。
所述步骤3中酶解的条件是：用1-2mol/L的稀盐酸溶液调节pH值至7-7.5，在反应罐中加压至10-30MPa。
所述步骤3中加入风味蛋白酶的用量为鱼重量的0.1%-0.2%。
所述步骤3中风味蛋白酶的活性为10万U/g，酶解温度为50-55℃，酶解时间为6-8h。
本发明的有益效果：（1）本发明使用的原材料白鲢为低值淡水鱼，产量大，来源丰富，价格便宜，降低了生产成本；
（2）步骤1所述的加柠檬汁和磷酸进行浸泡，不仅可以提高白鲢鱼蛋白肽的提取率，还可以提高白鲢鱼蛋白肽的纯度和品质，并且经过酸处理改变了蛋白质的结构，破坏原有的氢键，使得更多的肽键裸露在外，提高酶切的准确性，为之后酶解成小分子肽提供良好的条件；
（3）步骤2所述的碱性蛋白酶是由细菌原生质体诱变选育出的地衣芽孢杆菌，经深层发酵、提取及精制而成的一种蛋白水解酶，其主要酶成分为地衣芽孢杆菌蛋白酶，是一种丝氨酸型的内切蛋白酶，它能水解蛋白质分子肽链生成多肽或氨基酸，具有较强的分解蛋白质的能力；步骤4所述的风味蛋白酶是利用米曲霉发酵经提纯、复配而成的复合风味蛋白酶，包含了内切蛋白酶与外切肽酶两种活性，可以用来去除低水解度产物的苦肽链，也可以用于彻底水解蛋白质，增进和改善水解液的风味；这两种蛋白酶相互协同，不仅更好的提高蛋白肽的提取率，而且在酶解过程中能得到完全酶切，通过高速离心脱脂、纯化、浓缩得到纯度≥96%的蛋白肽溶液，使制得的小分子蛋白肽粉品质提高；并且在步骤2和步骤3酶解时加压处理使得蛋白质结构伸展而变得松散，从而暴露出更多位点，易于酶解反应的进行；肌原纤维蛋白是白鲢鱼蛋白的主要成分之一，它有极好的功能特性，且许多加工特性都与其特性息息相关，加压处理改变了肌原纤维蛋白的结构，进而改变了蛋白肽的性质和功能，从表1可以看出，通过对DPPH自由基清除能力进行测定，得出DPPH清除率最高为85.5%，说明加压处理与碱性蛋白酶和风味蛋白酶一起协同作用，很大地提高蛋白肽的抗氧化活性，对于开发具有降血压作用的功能性食品或药物有一定的利用价值；
（5）步骤6中的将分离后的白鲢鱼蛋白肽混合液加碱中和到PH为6是为了保护蛋白肽一个弱酸性，有利于人体吸收；步骤8中利用活性炭和珍珠岩过滤吸附，可有效去除腥味，提高蛋白肽的品质；
（6）本发明工艺流程相对简单且原材料易得，第一步酶解后无需升温灭活及再降温，简化了工艺，适合大工业化生产；且制得的白鲢鱼蛋白肽是纯天然营养物质，相对分子质量在3000Da以下，为低分子量多肽，人体极易吸收，含有人体所需的8种必须氨基酸，不但可以维持人体健康，还可以促进生长发育，是高档营养食品、保健食品。
具体实施方式
为了使本领域技术人员更好地理解本发明的技术方案，下面结合表1和具体实施例对本发明进行详细描述，本部分的描述仅是示范性和解释性，不应对本发明的保护范围有任何的限制作用。
实施例1：
一种白鲢鱼蛋白肽的制备方法，包括以下步骤：
步骤1、准备：将白鲢鱼去鳃去内脏清洗后，加入占鱼重量3%的柠檬汁、2%的磷酸搅拌均匀，浸泡2h过滤，按鱼水重量比1:2加水，用捣碎机捣碎得到捣碎物；
步骤2、第一次酶解：将步骤1制得的捣碎物放入酶解反应罐中，用0.1mol/L的氢氧化钠溶液调节pH值至8.5，在反应罐中加压至10MPa，加入碱性蛋白酶制得酶解物，加入碱性蛋白酶的用量为鱼重量的0.1%；碱性蛋白酶的活性为20万U/g，酶解温度为50℃，酶解时间为6h；
步骤3、第二次酶解：将步骤2得到的酶解物用1mol/L的稀盐酸溶液调节pH值至7，在反应罐中加压至10MPa，加入风味蛋白酶第二次酶解制得酶解物，加入风味蛋白酶的用量为鱼重量的0.1%；风味蛋白酶的活性为10万U/g，酶解温度为50℃，酶解时间为6h；
步骤4、灭活：将步骤3制得的酶解物升温至85℃，维持10min；
步骤5、过滤去粗渣：将步骤4灭活后的酶解物在60目滤网上过滤，去粗渣留上清液；
步骤6、高速离心脱脂：将步骤5得到的上清液加盐酸调节PH至3，采用高速离心分离出脂肪，离心速度4500r/min，将分离后的白鲢鱼蛋白肽混合液加碱中和到PH为6；
步骤7、脱色去味：将步骤6得到的白鲢鱼蛋白肽混合液放入脱色罐中过滤脱色去味，脱色剂采用活性碳和珍珠岩滤料1∶1混合搅拌得到；
步骤8、干燥：将步骤7脱色去味后的白鲢鱼蛋白肽混合液采用140℃喷雾干燥得到白鲢鱼蛋白肽粉，其主要为二肽和三肽的小分子肽。
实施例2
一种白鲢鱼蛋白肽的制备方法，包括以下步骤：
步骤1、准备：将白鲢鱼去鳃去内脏清洗后，加入占鱼重量5%的柠檬汁、6%的磷酸搅拌均匀，浸泡5h过滤，按鱼水重量比1:2加水，用捣碎机捣碎得到捣碎物；
步骤2、第一次酶解：将步骤1制得的捣碎物放入酶解反应罐中，用1mol/L的氢氧化钠溶液调节pH值至9，在反应罐中加压至30MPa，加入碱性蛋白酶制得酶解物，加入碱性蛋白酶的用量为鱼重量的0.15%；碱性蛋白酶的活性为20万U/g，酶解温度为55℃，酶解时间为8h；
步骤3、第二次酶解：将步骤2得到的酶解物用2mol/L的稀盐酸溶液调节pH值至7.5，在反应罐中加压至30MPa，加入风味蛋白酶第二次酶解制得酶解物，加入风味蛋白酶的用量为鱼重量的0.2%；风味蛋白酶的活性为10万U/g，酶解温度为55℃，酶解时间为8h；
步骤4、灭活：将步骤3制得的酶解物升温至90℃，维持15min；
步骤5、过滤去粗渣：将步骤4灭活后的酶解物在60目滤网上过滤，去粗渣留上清液；
步骤6、高速离心脱脂：将步骤5得到的上清液加盐酸调节PH至4.5，采用高速离心分离出脂肪，离心速度5000r/min，将分离后的白鲢鱼蛋白肽混合液加碱中和到PH为6.5；
步骤7、脱色去味：将步骤6得到的白鲢鱼蛋白肽混合液放入脱色罐中过滤脱色去味，脱色剂采用活性碳和珍珠岩滤料1∶1混合搅拌得到；
步骤8、干燥：将步骤7脱色去味后的白鲢鱼蛋白肽混合液采用150℃喷雾干燥得到白鲢鱼蛋白肽粉，其主要为二肽和三肽的小分子肽。
实施例3
一种白鲢鱼蛋白肽的制备方法，包括以下步骤：
步骤1、准备：将白鲢鱼去鳃去内脏清洗后，加入占鱼重量4%的柠檬汁、3%的磷酸搅拌均匀，浸泡3h过滤，按鱼水重量比1:2加水，用捣碎机捣碎得到捣碎物；
步骤2、第一次酶解：将步骤1制得的捣碎物放入酶解反应罐中，用0.5mol/L的氢氧化钠溶液调节pH值至8.6，在反应罐中加压至20MPa，加入碱性蛋白酶制得酶解物，加入碱性蛋白酶的用量为鱼重量的0.12%；碱性蛋白酶的活性为20万U/g，酶解温度为53℃，酶解时间为7h；
步骤3、第二次酶解：将步骤2得到的酶解物用1mol/L的稀盐酸溶液调节pH值至7.3，在反应罐中加压至20MPa，加入风味蛋白酶第二次酶解制得酶解物，加入风味蛋白酶的用量为鱼重量的0.15%；风味蛋白酶的活性为10万U/g，酶解温度为52℃，酶解时间为7h；
步骤4、灭活：将步骤3制得的酶解物升温至88℃，维持13min；
步骤5、过滤去粗渣：将步骤4灭活后的酶解物在60目滤网上过滤，去粗渣留上清液；
步骤6、高速离心脱脂：将步骤5得到的上清液加盐酸调节PH至4，采用高速离心分离出脂肪，离心速度4800r/min，将分离后的白鲢鱼蛋白肽混合液加碱中和到PH为6.2；
步骤7、脱色去味：将步骤6得到的白鲢鱼蛋白肽混合液放入脱色罐中过滤脱色去味，脱色剂采用活性碳和珍珠岩滤料1∶1混合搅拌得到；
步骤8、干燥：将步骤7脱色去味后的白鲢鱼蛋白肽混合液采用145℃喷雾干燥得到白鲢鱼蛋白肽粉，其主要为二肽和三肽的小分子肽。
实施例4
一种白鲢鱼蛋白肽的制备方法，包括以下步骤：
步骤1、准备：将白鲢鱼去鳃去内脏清洗后，加入占鱼重量4%的柠檬汁、5%的磷酸搅拌均匀，浸泡4h过滤，按鱼水重量比1:2加水，用捣碎机捣碎得到捣碎物；
步骤2、第一次酶解：将步骤1制得的捣碎物放入酶解反应罐中，用1mol/L的氢氧化钠溶液调节pH值至9，在反应罐中加压至15MPa，加入碱性蛋白酶制得酶解物，加入碱性蛋白酶的用量为鱼重量的0.1%；碱性蛋白酶的活性为20万U/g，酶解温度为54℃，酶解时间为8h；
步骤3、第二次酶解：将步骤2得到的酶解物用2mol/L的稀盐酸溶液调节pH值至7，在反应罐中加压至30MPa，加入风味蛋白酶第二次酶解制得酶解物，加入风味蛋白酶的用量为鱼重量的0.2%；风味蛋白酶的活性为10万U/g，酶解温度为53℃，酶解时间为7h；
步骤4、灭活：将步骤3制得的酶解物升温至86℃，维持13min；
步骤5、过滤去粗渣：将步骤4灭活后的酶解物在60目滤网上过滤，去粗渣留上清液；
步骤6、高速离心脱脂：将步骤5得到的上清液加盐酸调节PH至3.5，采用高速离心分离出脂肪，离心速度4500r/min，将分离后的白鲢鱼蛋白肽混合液加碱中和到PH为6.5；
步骤7、脱色去味：将步骤6得到的白鲢鱼蛋白肽混合液放入脱色罐中过滤脱色去味，脱色剂采用活性碳和珍珠岩滤料1∶1混合搅拌得到；
步骤8、干燥：将步骤7脱色去味后的白鲢鱼蛋白肽混合液采用150℃喷雾干燥得到白鲢鱼蛋白肽粉，其主要为二肽和三肽的小分子肽。
DPPH自由基清除能力测定：
称取20mgDPPH，用95%乙醇溶解，定容至20mL，取等体积水解液及2×10-4mol/LDPPH溶液加入试管中，摇匀，30min后用95%乙醇作参比在517nm下测定吸光度Ai，同时测定2×10- 4mol/LDPPH溶液与等体积95%乙醇混合液的吸光度Ac，以及水解液与等体积95%乙醇混合液的吸光度Aj。DPPH清除率计算公式：K（%）=[1-（Ai-Aj）/Ac]×100%。
表1各个实施例的DPPH清除率
根据表1可以看出，本发明制备的白鲢鱼蛋白肽DPPH清除率较高，说明抗氧化活性好，可以延缓身体退化速度，防止肌肤衰老，预防心血管病、老年痴呆、糖尿病这些常见疾病。
需要说明的是，在本文中，术语“包括”、“包含”或者其任何其他变体意在涵盖非排他性的包含，从而使得包括一系列要素的过程、方法、物品或者设备不仅包括那些要素，而且还包括没有明确列出的其他要素，或者是还包括为这种过程、方法、物品或者设备所固有的要素。
本文中应用了具体个例对本发明的原理及实施方式进行了阐述，以上实例的说明只是用于帮助理解本发明的方法及其核心思想。以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，由于文字表达的有限性，而客观上存在无限的具体结构，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进、润饰或变化，也可以将上述技术特征以适当的方式进行组合；这些改进润饰、变化或组合，或未经改进将发明的构思和技术方案直接应用于其它场合的，均应视为本发明的保护范围。
Claims (8)
1.一种白鲢鱼蛋白肽的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤1、准备：将白鲢鱼去鳃去内脏清洗后，加柠檬汁、磷酸搅拌均匀，过滤，按鱼水重量比1:2加水，用捣碎机捣碎得到捣碎物；
步骤2、第一次酶解：将步骤1制得的捣碎物放入酶解反应罐中，加入碱性蛋白酶制得酶解物；
步骤3、第二次酶解：将步骤2得到的酶解物加入风味蛋白酶第二次酶解制得酶解物；
步骤4、灭活：将步骤3制得的酶解物升温至85-90℃，维持10-15min；
步骤5、过滤去粗渣：将步骤4灭活后的酶解物在60目滤网上过滤，去粗渣留上清液；
步骤6、高速离心脱脂：将步骤5得到的上清液加盐酸调节PH至3-4.5，采用高速离心分离出脂肪，离心速度4500-5000r/min，将分离后的白鲢鱼蛋白肽混合液加碱中和到PH为6-6.5；
步骤7、脱色去味：将步骤6得到的白鲢鱼蛋白肽混合液放入脱色罐中过滤脱色去味，脱色剂采用活性碳和珍珠岩滤料1∶1混合搅拌得到；
步骤8、干燥：将步骤7脱色去味后的白鲢鱼蛋白肽混合液采用140℃-150℃喷雾干燥得到白鲢鱼蛋白肽粉，其主要为二肽和三肽的小分子肽。
2.根据权利要求1所述的一种白鲢鱼蛋白肽的制备方法，其特征在于，所述步骤1中加入占鱼重量3-5%的柠檬汁、2-6%的磷酸搅拌均匀，浸泡2-5h。
3.根据权利要求1所述的一种白鲢鱼蛋白肽的制备方法，其特征在于，所述步骤2中酶解的条件是：用0.1-1mol/L的氢氧化钠溶液调节pH值至8.5-9，在反应罐中加压至10-30MPa。
4.根据权利要求1所述的一种白鲢鱼蛋白肽的制备方法，其特征在于，所述步骤2中加入碱性蛋白酶的用量为鱼重量的0.1%-0.15%。
5.根据权利要求1所述的一种白鲢鱼蛋白肽的制备方法，其特征在于，所述步骤2中碱性蛋白酶的活性为20万U/g，酶解温度为50-55℃，酶解时间为6-8h。
6.根据权利要求1所述的一种白鲢鱼蛋白肽的制备方法，其特征在于，所述步骤3中酶解的条件是：用1-2mol/L的稀盐酸溶液调节pH值至7-7.5，在反应罐中加压至10-30MPa。
7.根据权利要求1所述的一种白鲢鱼蛋白肽的制备方法，其特征在于，所述步骤3中加入风味蛋白酶的用量为鱼重量的0.1%-0.2%。
8.根据权利要求1所述的一种白鲢鱼蛋白肽的制备方法，其特征在于，所述步骤3中风味蛋白酶的活性为10万U/g，酶解温度为50-55℃，酶解时间为6-8h。
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