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CN109248326A - 一种骨靶向纳米粒递送系统及其制备方法 - Google Patents

一种骨靶向纳米粒递送系统及其制备方法 Download PDF

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CN109248326A
CN109248326A CN201811332686.9A CN201811332686A CN109248326A CN 109248326 A CN109248326 A CN 109248326A CN 201811332686 A CN201811332686 A CN 201811332686A CN 109248326 A CN109248326 A CN 109248326A
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bone
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CN201811332686.9A
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李玲
曹会娟
黄翠珊
秦岭
李志明
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Shenzhen Institute of Advanced Technology of CAS
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Abstract

本发明涉及药物载体领域，具体而言，涉及一种骨靶向纳米粒递送系统及其制备方法。一种骨靶向纳米粒递送系统，包括纳米粒和骨靶向功能成分；所述纳米粒为单层囊泡，所述单层囊泡内包裹有药物活性成分；所述单层囊泡的囊膜由可降解高分子聚合物和聚乙烯醇组成，所述囊膜上扦插有双硫代琥珀酰亚胺基辛二酸酯，所述纳米粒通过所述双硫代琥珀酰亚胺基辛二酸酯与所述骨靶向功能成分进行共轭结合。本发明提供的该系统由于是单层囊泡包裹药物活性成分，具有更大的载药能力；并且经检测，体外释放试验稳定性较好，药物释放可控。

Description

一种骨靶向纳米粒递送系统及其制备方法
技术领域
本发明涉及药物载体领域，具体而言，涉及一种骨靶向纳米粒递送系统及其制备方法。
背景技术
骨质疏松是以骨量减少、骨的微观结构退化为特征的，致使骨的脆性增加以及易于发生骨折的一种全身性骨骼疾病，多发于绝经后妇女与老年人群，常引发腕部、髋部及脊柱骨折，严重者致死。目前临床上治疗骨质疏松症主要使用雌激素替代疗法、选择性雌激素受体调节剂(SERM，如他莫希芬)、双膦酸盐类(如阿伦膦酸钠)、钙和维生素D、人重组甲状旁腺激素(PTH)等西药，但长期使用会有一定程度的不良反应，且价格昂贵，临床应用受到限制。因此，开发出一种毒副作用小，生物效能高的药物成为骨质疏松治疗中的关键问题，不仅减少骨质疏松患者的不良反应，且具有良好的市场前景，带来好的社会效益和经济效益。
中药活性成份淫羊藿素能够促进成骨细胞骨形成、抑制破骨细胞骨吸收，从而预防去势小鼠骨丢失。在我国，使用中药治疗骨质疏松由来已久，其中淫羊藿使用频率最高。淫羊藿始载于《神农本草经》，有温肾壮阳、强筋骨、祛风湿的功效，用来治疗骨折、骨关节疾病以及肾衰已有上千年的历史。化学成分研究表明淫羊藿中主要含有黄酮苷类化合物，此外还有木脂素类化合物及少量生物碱类化合物，体内代谢研究表明淫羊藿素(icaritin)为淫羊藿黄酮苷类化合物在体内起效的重要物质基础。动物实验证实淫羊藿素能够减少去卵巢小鼠骨丢失、预防骨质疏松。我们的前期研究发现淫羊藿素能上调成骨细胞中骨形成的相关基因Runx2、骨钙素(OC)和骨涎蛋白的表达，提高碱性磷酸酶(ALP)活性，增加矿化结节数量；并且抑制RAW264.7细胞向破骨细胞分化，同时抑制骨吸收陷窝的形成。又有研究显示淫羊藿素能够促进骨保护素(OPG)及细胞核因子κB受体活化因子配基(RANKL)的基因表达水平，从而抑制破骨细胞的成熟进而抑制其发挥骨吸收功能。
然而淫羊藿黄酮类化合物的肠道吸收差，入血后大多迅速分布至肝，且存在胆肠循环，致使骨组织浓度低，生物效能低。淫羊藿黄酮类化合物由于溶解度小，肠壁的渗透系数较小，并且存在肠道P-糖蛋白转运蛋白对淫羊藿苷的外排，导致其口服吸收差。大鼠尾静脉注射淫羊藿次苷I，半衰期t1/2α仅为1.63分钟，有研究表明淫羊藿苷、淫羊藿次苷入血后迅速分布至靶器官，其中肝、肠、肾、肺含量较高，而骨组织浓度低。
最新研究发现家兔灌胃淫羊藿苷后，代谢产物淫羊藿次苷II含量逐渐升高，之后维持较高浓度至8小时；此外，注射淫羊藿苷的家兔粪便中检测到大量去甲基淫羊藿素，表明淫羊藿黄酮在家兔体内代谢过程中存在肝胆肠循环。综上，淫羊藿黄酮类化合物难吸收、入血后迅速分布至组织(半衰期短)、大部分药物分布至肝脏，经代谢和肝胆循环返回小肠，因为难于吸收排出体外，致使骨组织浓度低。
有鉴于此，特提出本发明。
发明内容
本发明使用固/油/水乳化溶剂挥发法将药物活性成分如具有骨相关活性的中药小分子化合物淫羊藿素，包裹制备成纳米粒，纳米粒与骨靶向功能成分混悬并结合，形成具有有效的骨靶向纳米粒递送系统，大大增加了递送系统的载药量，药物在体内的稳定性好，
为了实现本发明的上述目的，特采用以下技术方案：
一种骨靶向纳米粒递送系统，包括纳米粒和骨靶向功能成分；
所述纳米粒为单层囊泡，所述单层囊泡内包裹有药物活性成分；
所述单层囊泡的囊膜由可降解高分子聚合物和聚乙烯醇组成，所述囊膜上扦插有双硫代琥珀酰亚胺基辛二酸酯，所述纳米粒通过所述双硫代琥珀酰亚胺基辛二酸酯与所述骨靶向功能成分进行共轭结合。
脂质体因其具有保护药物降解、靶向药物到达活性部位以及降低毒副作用等独特优点而取代传统的制剂形式作为潜在药物载体。在前期研究中，构建了骨靶向脂质体递送系统将具有骨形成作用的小干扰核酸递送至骨形成表面发挥抗骨质疏松作用,该成果发表在自然-医学(Nature Medicine)杂志。进而在此基础上，制备了淫羊藿素骨靶向脂质体，粒径约为100nm，体外药物释放实验表明淫羊藿素能够缓慢释放，体内组织分布实验显示该淫羊藿素骨靶向脂质体可将淫羊藿素富集至骨组织并延长其滞留时间。然而，由于淫羊藿素极难溶于水，疏水性强，使用脂质体递送系统的载药量小(载药量1mg淫羊藿素/mL脂质体)、另外脂质体膜易于降解、药物快速渗漏、体内稳定性差。
具有生物安全性的可降解聚合物制备的纳米粒载体凭借其稳定性和独特的可控缓释能力，表现出极大的优越性。
本发明人以可降解高分子聚合物作为载体，同时聚乙烯醇协助成膜，将药物活性成分被包裹在单层囊泡中，囊膜上还扦插有双硫代琥珀酰亚胺基辛二酸酯，双硫代琥珀酰亚胺基辛二酸酯两端的活性基团与与骨靶向功能成分共轭结合，得到骨靶向纳米粒递送系统。本发明采用新的载样方式，得到的该系统由于是单层囊泡包裹药物活性成分，具有更大的载药能力；并且经检测，体外释放试验稳定性较好，药物释放可控。
另外，本发明的囊膜通过水解作用降解，体内降解速度可通过体外降解的数据进行预测，能够最大程度保证药物在体内的稳定性。
进一步地，所述可降解高分子聚合物为聚乳酸、聚乙醇酸、聚乳酸共聚乙醇酸、聚己内酯、聚氰基丙烯酸烷基酯、聚羟基丁酸、聚原酸酯、聚酐和多肽中的任一种或多种。
目前常用的聚合物有聚乳酸(PLA)、聚乙醇酸(PGA)、聚乳酸共聚乙醇酸(PLGA)、聚己内酯(PCL)、聚氰基丙烯酸烷基酯、聚羟基丁酸、聚原酸酯、聚酐和多肽等(20)。其中，PLGA是制备纳米粒的常用高分子聚合物，可构成纳米粒的内核，这类聚合物已被美国食品药品监督管理局(FDA)批准。PLGA通过水解作用降解，体内降解速度可通过体外降解的数据进行预测。PLGA降解产物为乳酸和羟基乙酸，这些产物在体内自然存在，具有生物安全性及相容性。
优选地，所述可降解高分子聚合物为聚乳酸共聚乙醇酸。
进一步地，所述骨靶向功能成分为阿伦膦酸盐、8个天冬氨酸重复序列、6个天门冬氨酸-丝氨酸-丝氨酸的重复序列中的任一种或多种。
进一步地，所述纳米粒的粒径为50nm～200nm。如在不同的实施例中，纳米粒的粒径为50nm～80nm、50nm～100nm、80nm～150nm、120nm～150nm、130nm～180nm、150nm～200nm等等。
当然，根据实际需求，纳米粒还可以制备均一粒径，如在不同的实施例中，纳米粒的粒径为50nm、80nm、100nm、120nm、150nm、180nm、200nm等等。
本发明中的药物活性成分可根据情况进行选择，进一步地，所述药物活性成分为中药小分子成分。
进一步地，所述中药小分子成分包括淫羊藿素、淫羊藿苷、葛根素中的任一种或多种。
本发明还提供了一种骨靶向纳米粒递送系统的制备方法，包括以下步骤：可降解高分子聚合物溶解于溶剂中，然后加入到含有药物活性成分和双硫代琥珀酰亚胺基辛二酸酯的质量浓度为0.8％-1.2％的聚乙烯醇水溶液中，所述双硫代琥珀酰亚胺基辛二酸酯的浓度为0.4-0.6mg/mL；
超声后，离心，去除溶剂，得到的粒状物洗涤，经挤压，得到包裹药物成分的单层囊泡即为纳米粒；
所述纳米粒与骨靶向功能团进行共轭结合，即得。
本发明提供的骨靶向纳米粒递送系统的制备方法，将溶解的可降解高分子聚合物加入到含有药物成分和一定双硫代琥珀酰亚胺基辛二酸酯浓度的聚乙烯醇水溶液中，形成膜泡，膜上扦插双硫代琥珀酰亚胺基辛二酸酯，然后经处理，得到包裹药物成分的单层囊泡即为纳米粒；将该纳米粒与骨靶向功能成分混悬并结合，纳米粒上的双硫代琥珀酰亚胺基辛二酸酯两端的活性基团与骨靶向功能团进行共轭结合，形成具有中药活性成分的骨靶向纳米粒递送系统。
本发明可通过选择聚合物的亲水和疏水性能，改变粒径大小，控制纳米粒降解速率及药物的释放速率。
上述步骤中，超声在室温下进行，使用的UP200H的超声波仪(HielscherUltrasonics GmbH，德国)40％的振幅强度，超声2分钟左右。超声的作用是将反应得到的膜状物分开，并使得分离的膜比较平滑。
本发明中，制得的粒状物可根据实际需求制备不同粒径的纳米粒。如，本发明制得粒径为50nm～200nm的纳米粒，粒状物可依次通过孔径为200nm和100nm的滤膜，连续挤压4-5次后制得。
进一步地，所述粒状物依次通过孔径为200nm和100nm的滤膜，连续挤压4-5次后，得到粒径为50nm～200nm的纳米粒。
优选地，所述药物活性成分在聚乙烯醇水溶液中的浓度为3-8mg/mL。如在不同的实施方式中，药物活性成分在聚乙烯醇水溶液中的浓度可以为3mg/mL、5mg/mL、6mg/mL、8mg/mL等等。
进一步地，所述纳米粒还包括进行冷冻干燥的步骤。进行冷冻干燥得到的纳米粒，可置于低温如4℃冷藏保存。
优选地，所述可降解高分子聚合物的溶剂包括乙酸乙酯、1,4-二氧六环、DMF。溶剂需要具有溶解可降解高分子聚合物的作用，同时，对人体安全，易于去除。
进一步地，所述可降解高分子聚合物在所述溶剂中的浓度为60-80mg/mL。
如在不同的实施例中，可降解高分子聚合物在溶剂中的浓度可以为60mg/mL、65mg/mL、70mg/mL、75mg/mL、80mg/mL等等。
进一步地，所述纳米粒与骨靶向功能团进行共轭结合步骤如下：
所述纳米粒与所述骨靶向功能团在溶液中孵育，加入Tris缓冲溶液终止反应。
进一步地，所述纳米粒与所述骨靶向功能团的重量比例为1:0.8-1.2。
优选地，所述溶液为PBS缓冲液。
所述纳米粒与所述骨靶向功能团在溶液中的浓度均不大于20mg/mL。如可以为5mg/mL、10mg/mL、12mg/mL、15mg/mL、18mg/mL、20mg/mL等等。溶液主要提供反应的介质。
优选地，所述孵育的温度为15-25℃，所述孵育的时间为50分钟以上。
进一步地，所述终止反应的时间为15分钟以上。
所用的Tris缓冲溶液浓度为0.05M，pH值为7.4。Tris缓冲溶液浓度可根据需要进行调整。
与现有技术相比，本发明的有益效果为：
(1)本发明采用固/油/水乳化溶剂挥发法将药物活性成分包裹在纳米粒中，并将此纳米粒与骨靶向功能团连接，制备得到淫羊藿素骨靶向纳米粒递送系统，纳米粒采用单层囊膜包裹淫羊藿素等中药小分子成分，尽可能多的包裹增加递送系统的载样量。
(2)本发明通过控制各反应参数，使得纳米粒与骨靶向靶头的连接率为95％以上。
(3)本发明提供的纳米囊通过水解作用降解，体内降解速度可通过体外降解的数据进行预测，能够最大程度保证药物在体内的稳定性。
(4)经体外释放试验得到，释放规律符合双相释放规律，释放过程先快后慢，既能快速缓解症状，又能持久发挥药效。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，以下将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍。
图1为本发明实施例1制得的淫羊藿纳米粒的显微镜图；
图2为本发明实施例1制得的淫羊藿素纳米粒骨靶向递送系统的显微镜图；
图3为本发明实施例1制得的淫羊藿素骨靶向纳米粒递送系统中淫羊藿素的体外释放结果线性图。
具体实施方式
下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限制本发明的范围。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。
实施例1
骨靶向纳米粒递送系统的制备方法如下：
1、纳米粒的制备
将70mg PLGA溶解至1mL乙酸乙酯中，再加入到1％聚乙烯醇(PVA)水溶液中，其中PVA水溶液中含有5mg/mL的中药小分子淫羊藿素和0.5mg/mL的双硫代琥珀酰亚胺基辛二酸酯(BS3，可插入至PLGA与PVA形成的纳米囊中，两端的活性基团可与天冬氨酸链的氨基结合)。
在室温下，对混合物连续超声2分钟，使用UP200H的超声波仪(HielscherUltrasonics GmbH，德国)40％的振幅强度。离心分离后，过量的溶剂在持续搅拌下蒸发掉。分离得到的纳米粒经PBS洗涤3次，并悬浮在水中。以氮气加压，用挤压器(LipexTMExtruder)对该纳米粒悬浮液进行挤压，使得纳米粒悬浮液依次通过孔径为200nm和100nm的滤膜，连续挤压4次后，得到包覆了药物的单层囊泡。进行冷冻干燥得到含淫羊藿素的PLGA纳米粒，该纳米粒置于4℃冷藏保存。显微镜下观察纳米粒，结果如图1所示。
2、纳米粒与骨靶向功能团的结合
室温下，按照1：1的重量比称出干燥的纳米粒与骨靶向功能团(8个天冬氨酸重复序列)分别混悬于500μLPBS中各15分钟。将混悬的两种溶液混合，纳米粒与骨靶向功能团的浓度均为10mg/mL，于室温下孵育1小时进行骨靶向功能团的共轭结合。加入100μLTris缓冲溶液(0.05M，pH值为7.4)反应15分钟来终止结合反应，离心取出未结合的骨靶向功能团。
将结合的骨靶向纳米粒重新混悬于PBS或者其他介质中备用。显微镜下观察纳米粒，结果如图2所示。
3、骨靶向纳米粒递送系统的理化性质
将PLGA纳米粒用纯水稀释后在室温用粒径分析仪Nicomp 380/ZLS zeta电位分析仪测定粒径分布和zeta电位。
采用HPLC法测定淫羊藿素包封率：使用淫羊藿素标准溶液建立标准曲线，将2mg的纳米粒完全溶解在甲醇中，在270nm检测波长扫描，淫羊藿素的浓度用标准曲线基于吸收强度计算，包封率的计算公式如下：
包封率(％)＝(在标准曲线中计算的量/初始加入的量)×100％
采用离心超滤法分离游离Asp8和纳米粒，HPLC测定游离Asp8的浓度，基于如下公式计算靶头的连接效率。
连接效率(％)＝[(Asp8总的加入量-用标曲测定游离的Asp8的量)/理论应结合Asp8的量]×100％
经检测，制备得到纳米粒粒径在130-140nm之间,zeta电位在-15mv～-13mv之间,纳米粒与骨靶向靶头Asp8的连接率为97％。
4、该递送系统中淫羊藿素的体外释放
将3mg的PLGA-Asp8-icaritin纳米粒混悬在PBS中，然后保存在37℃30mL 50％的乙醇溶液透析系统里保温培养(3kDa阻断)。在设定时间点(0，0.5，1，2，4，6，12，24，48，72，96，120，144，172小时)分别取出2mL的样品进行检测，并加入相同量的新鲜培养介质。测定取出样品中淫羊藿素的吸光度，通过往培养介质中添加已知量的标准品得到标准曲线，计算淫羊藿素的量，绘制不同纳米粒中淫羊藿素的释放曲线。如图3所示。
从图3可以看出，淫羊藿素的释放符合“先快后慢”的双相释放特征，该释放类型前期快速释放可快速缓解症状，后期缓慢释放具有药效持久的特点，可满足骨质疏松类疾病的治疗需求。
并且经多次试验，释放稳定性佳。
实施例2
骨靶向纳米粒递送系统的制备方法如下：
1、纳米粒的制备
将60mg聚羟基丁酸溶解至1mL 1,4-二氧六环中，再加入到0.8％聚乙烯醇(PVA)水溶液中，其中PVA水溶液中含有3mg/mL的中药小分子淫羊藿苷和0.4mg/mL的双硫代琥珀酰亚胺基辛二酸酯(BS3，可插入至纳米囊中，两端的活性基团可与天冬氨酸链的氨基结合)。
在室温下，对混合物连续超声1分钟，使用UP200H的超声波仪(HielscherUltrasonics GmbH，德国)40％的振幅强度。离心分离后，过量的溶剂在持续搅拌下蒸发掉。分离得到的纳米粒经PBS洗涤2次，并悬浮在水中。以氮气加压，用挤压器(LipexTMExtruder)对该纳米粒悬浮液进行挤压，使得纳米粒悬浮液依次通过孔径为200nm和100nm的滤膜，连续挤压5次后，得到包覆了药物的单层囊泡。进行冷冻干燥得到含淫羊藿苷的纳米粒，该纳米粒置于4℃冷藏保存。
观察可知，得到单层囊泡包裹药物活性成分的纳米粒。
2、纳米粒与骨靶向功能团的结合
室温下，按照1：0.8的重量比称出干燥的纳米粒与骨靶向功能团(6个天门冬氨酸-丝氨酸-丝氨酸)分别混悬于500μLPBS中各20分钟。将混悬的两种溶液混合，纳米粒与骨靶向功能团的浓度均为20mg/mL，于室温下孵育50分钟，两者进行共轭结合。加入100μLTris缓冲溶液(0.05M，pH值为7.4)反应15分钟来终止结合反应，离心取出未结合的骨靶向功能团。
将结合的骨靶向纳米粒重新混悬于PBS或者其他介质中备用。
采用同实施例1相同的方法测定骨靶向纳米粒递送系统的理化性质，经检测，制备得到纳米粒粒径在120-135nm之间,纳米粒与骨靶向靶头的连接率为95％。
采用与实施例1相同的方法检测药物活性成分的体外释放，淫羊藿苷的释放符合“先快后慢”的双相释放特征，该释放类型前期快速释放可快速缓解症状，后期缓慢释放具有药效持久的特点。
并且经多次试验，释放稳定性佳。
实施例3
骨靶向纳米粒递送系统的制备方法如下：
1、纳米粒的制备
将80mg聚氰基丙烯酸烷基酯溶解至1mL DMF中，再加入到1.2％聚乙烯醇(PVA)水溶液中，其中PVA水溶液中含有8mg/mL的中药小分子葛根素和0.6mg/mL的双硫代琥珀酰亚胺基辛二酸酯(BS3，可插入至纳米囊中，两端的活性基团可与阿伦膦酸盐结合)。
在室温下，对混合物连续超声1分钟，使用UP200H的超声波仪(HielscherUltrasonics GmbH，德国)40％的振幅强度。离心分离后，过量的溶剂在持续搅拌下蒸发掉。分离得到的纳米粒经PBS洗涤3次，并悬浮在水中。以氮气加压，用挤压器(LipexTMExtruder)对该纳米粒悬浮液进行挤压，使得纳米粒悬浮液依次通过孔径为200nm和100nm的滤膜，连续挤压5次后，得到包覆了药物的单层囊泡。进行冷冻干燥得到含葛根素的纳米粒，该纳米粒置于4℃冷藏保存。
观察可知，得到单层囊泡包裹药物活性成分的纳米粒。
2、纳米粒与骨靶向功能团的结合
室温下，按照1：1.2的重量比称出干燥的纳米粒与骨靶向功能团(阿伦膦酸盐)分别混悬于500μLPBS中各20分钟。将混悬的两种溶液混合，纳米粒与骨靶向功能团的浓度均为5mg/mL，于室温下孵育90分钟，两者进行共轭结合。加入150μLTris缓冲溶液(0.05M，pH值为7.4)反应15分钟来终止结合反应，离心取出未结合的骨靶向功能团。
将结合的骨靶向纳米粒重新混悬于PBS或者其他介质中备用。
采用同实施例1相同的方法测定骨靶向纳米粒递送系统的理化性质，经检测，制备得到纳米粒粒径在120-130nm之间,纳米粒与骨靶向靶头的连接率为96％。
采用与实施例1相同的方法检测药物活性成分的体外释放，葛根素的释放符合“先快后慢”的双相释放特征，该释放类型前期快速释放可快速缓解症状，后期缓慢释放具有药效持久的特点。
并且经多次试验，释放稳定性佳。
尽管已用具体实施例来说明和描述了本发明，然而应意识到，在不背离本发明的精神和范围的情况下可以作出许多其它的更改和修改。因此，这意味着在所附权利要求中包括属于本发明范围内的所有这些变化和修改。

Claims (10)

1.一种骨靶向纳米粒递送系统，其特征在于，包括纳米粒和骨靶向功能成分；
所述纳米粒为单层囊泡，所述单层囊泡内包裹有药物活性成分；
所述单层囊泡的囊膜由可降解高分子聚合物和聚乙烯醇组成，所述囊膜上扦插有双硫代琥珀酰亚胺基辛二酸酯，所述纳米粒通过所述双硫代琥珀酰亚胺基辛二酸酯与所述骨靶向功能成分进行共轭结合。
2.根据权利要求1所述的骨靶向纳米粒递送系统，其特征在于，所述可降解高分子聚合物为聚乳酸、聚乙醇酸、聚乳酸共聚乙醇酸、聚己内酯、聚氰基丙烯酸烷基酯、聚羟基丁酸、聚原酸酯、聚酐和多肽中的任一种或多种；
优选地，所述可降解高分子聚合物为聚乳酸共聚乙醇酸。
3.根据权利要求1所述的骨靶向纳米粒递送系统，其特征在于，所述骨靶向功能成分为阿伦膦酸盐、8个天冬氨酸重复序列、6个天门冬氨酸-丝氨酸-丝氨酸的重复序列中的任一种或多种。
4.根据权利要求1-3任一项所述的骨靶向纳米粒递送系统，其特征在于，所述纳米粒的粒径为50nm～200nm。
5.根据权利要求1-3任一项所述的骨靶向纳米粒递送系统，其特征在于，所述药物活性成分为中药小分子成分；
进一步地，所述中药小分子成分包括淫羊藿素、淫羊藿苷、葛根素中的任一种或多种。
6.权利要求1-5任一项所述的骨靶向纳米粒递送系统的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：可降解高分子聚合物溶解于溶剂中，然后加入到含有药物活性成分和双硫代琥珀酰亚胺基辛二酸酯的质量浓度为0.8％-1.2％的聚乙烯醇水溶液中，所述双硫代琥珀酰亚胺基辛二酸酯的浓度为0.4-0.6mg/mL；
超声后，离心，去除溶剂，得到的粒状物洗涤，经挤压，得到包裹药物成分的单层囊泡即为纳米粒；
所述纳米粒与骨靶向功能团进行共轭结合，即得。
7.根据权利要求6所述的骨靶向纳米粒递送系统的制备方法，其特征在于，所述粒状物依次通过孔径为200nm和100nm的滤膜，连续挤压4-5次后，得到粒径为50nm～200nm的纳米粒；
优选地，所述药物活性成分在聚乙烯醇水溶液中的浓度为3-8mg/mL。
8.根据权利要求6所述的骨靶向纳米粒递送系统的制备方法，其特征在于，所述纳米粒还包括进一步进行冷冻干燥的步骤。
9.根据权利要求6所述的骨靶向纳米粒递送系统的制备方法，其特征在于，所述可降解高分子聚合物的溶剂包括乙酸乙酯、1,4-二氧六环、DMF；
进一步地，所述可降解高分子聚合物在所述溶剂中的浓度为60-80mg/mL。
10.根据权利要求6-9任一项所述的骨靶向纳米粒递送系统的制备方法，其特征在于，所述纳米粒与骨靶向功能团进行共轭结合步骤如下：
所述纳米粒与所述骨靶向功能团在溶液中孵育，加入Tris缓冲溶液终止反应；
进一步地，所述纳米粒与所述骨靶向功能团的重量比例为1:0.8-1.2；
优选地，所述溶液为PBS缓冲液；
优选地，所述孵育的温度为15-25℃，所述孵育的时间为50分钟以上；
进一步地，所述终止反应的时间为15分钟以上。
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