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CN109180681B - 一种dna毒性二聚体化合物 - Google Patents

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CN109180681B CN201810943763.8A CN201810943763A CN109180681B CN 109180681 B CN109180681 B CN 109180681B CN 201810943763 A CN201810943763 A CN 201810943763A CN 109180681 B CN109180681 B CN 109180681B
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李�杰
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万维李
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Chengdu Bailidote Biological Pharmaceutical Co ltd
Sichuan Baili Pharmaceutical Co Ltd
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Chengdu Duote Antibody Medicine Co ltd
Sichuan Baili Pharmaceutical Co Ltd
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Abstract

本发明公开了一种DNA毒性二聚体化合物，与先前技术公开的苯并二氮杂卓类结合物相比，该细胞毒性化合物显示高得多的体内治疗指数(最大耐受剂量与最低有效剂量的比率)。

Description

一种DNA毒性二聚体化合物
发明领域
本发明涉及新型细胞毒性化合物和包含这些细胞毒性化合物和细胞结合剂的药物。更具体地说，本发明涉及新型苯并二氮杂卓二聚体化合物、其衍生物、其中间体其药学上可接受的盐，它们可用作药物，尤其是用作抗增殖剂。
发明背景
苯并二氮杂卓类衍生物，具有识别并结合特定DNA序列的能力，是一种高度有效的链间交联剂，能与DNA小沟中的鸟嘌呤反应，形成DNA加合物，干扰DNA的加工，因此将它们作为抗肿瘤药物使用。(Rahman et al.(2009)Jour.Amer.Chem.Soc.131(38):13756-13766；Thurston et al.(1994)Chem.Rev.,94:433-465；Bose et al.(1992)J.Am.Chem.Soc.114:4939-4941；Gregson et al.(2004)Jour.Med.Chem.47(5):1161-1174)。
1-(氯甲基)-2,3-二氢-1H-苯并[e]吲哚(CBI)类的DNA小沟烷化剂是有力的细胞毒素(Atwell et al.(1999)J.Med.Chem.,42:3400)，而且已经作为效应器单元用于为癌症疗法设计的多类前体药物。已经通过烷基链将CBI和苯并二氮杂卓类衍生物连接到一起(Tercel et al.(2003)J.Med.Chem.,46:2132-2151)。
咪唑并[1,2-a]吡啶类衍生物是一种强有力的DNA粘合单元，已经用于抗肿瘤抗生素倍癌霉素(duocarmycins)衍生物的合成，并表现出非常有效的细胞毒性(RonaldC.Elgersma et al.(2015)Mol.Pharmaceutics.12:1813-1835)。
现有技术公开的苯并二氮杂卓类衍生物毒性极大，在极低剂量时是有毒的，因此，改进的较低毒性且仍有治疗活性的，高治疗窗的苯并二氮杂卓类衍生物显得非常必要。
发明内容
本发明旨在提供一种具有良好治疗窗的细胞毒性的苯并二氮杂卓二聚体衍生物。全新设计的细胞毒性的苯并二氮杂卓二聚体衍生物具有氯甲基(CBI)和亚胺(PBD)或者DNA-binding(DB)和亚胺(PBD)两个官能团。氯甲基是一个前体药物结构，进入体内可形成三元环结构进一步可以发生DNA烷基化。DNA-binding片段具有强有力的DNA粘合作用。这两个官能团的存在可增强DNA的交联。本发明的设计意外发现，与先前技术公开的苯并二氮杂卓类结合物相比，该细胞毒性化合物显示高得多的体内治疗指数(最大耐受剂量与最低有效剂量的比率)。
在总的方面，本发明提供一种一种具有式(I)或式(II)的细胞毒药物或其药学上可接受的盐、水合物或溶剂化物，
Figure GDA0003126256120000021
其中
Y选自于一个或多个H，卤素，C1-4的烷基，OR4，SR4，NR4R5，SO2R4，CONHR4，CN或者COOR4，其中R4和R5可独立的选自于H，C1-4的烃基，苯基或者取代苯基；
X2选自于卤素或OSO2R5，其中R5可独立的选自于H，C1-4的烃基，苯基或者取代苯基；
X1选自于O和NR6，其中R6选自H，C1-6烷基，一个或多个F取代的C1-6烷基；
R1选自于H，P(O)3H2，C(O)NR7R8，其中R7和R8选自H，C1-6烷基，一个或多个F取代的C1-6烷基，或者R7和R8形成五元或六元杂环基基团；
R3为任选的取代基团。
R2选自于H，P(O)3H2，C(O)NR7R8，其中R7和R8选自H，C1-6烷基，一个或多个F取代的C1-6烷基，或者R7和R8形成五元或六元杂环基基团；
D1选自下述的药物模块：
Figure GDA0003126256120000022
其中波浪线表示附着至T的位点；
在N和C之间的双线
Figure GDA0003126256120000031
表示单键或双键，条件是当其为双键时，R9不存在并且R10是H，并且当其为单键时，R9是H或选自乙酰基、三氟乙酰基、叔丁氧羰基、苄氧羰基和9-芴甲氧羰基的氨基保护部分；R10选自OH，由O R11表示的醚、亚硫酸根SO3-或OSO3-，其中R11选自具有1-10个碳原子的直链、支链或环状烷基、烯基或炔基；
在C2和C3之间的虚线表示双键的可选存在；
当在C2和C3之间存在双键时，
R12选自被一个或多个取代基可选取代的C5-10芳基，其中所述取代基选自包括以下组：卤素，硝基，氰基，氨基，醚，羧基，酯，C1-7烃基，C3-7杂环基；
当在C2和C3之间存在单键时，
R12是
Figure GDA0003126256120000032
其中R14和R15独立的选自H、F、C1-4饱和烷基、C2-3烯基，所述烷基和烯基被一基团可选取代，所述基团选自C1-4烷基酰胺基和C1-4烷基酯，或者，当R14和R15之一是H时，另一个选自腈和C1-4烷基酯；
模块D1”可被一个或多个R13所取代，其中R13选自H，卤素，硝基，氰基，氨基，醚，羧基，酯，C1-7烃基，C3-7杂环基；
优选的，所述的药物，R3选自于H、OH、SH、NH2、N3、NO2、NO、CF3、CN、C(O)NH2、C(O)H、C(O)OH、卤素、Rh、SRh、S(O)Rh、S(O)2Rh、S(O)ORh、S(O)2ORh、OS(O)Rh、OS(O)2Rh、OS(O)ORh、OS(O)2ORh、ORh、NHRh、N(Rh)Ri、+N(Rh)(Ri)Rj、P(O)(ORh)(ORi)、OP(O)(ORh)(ORi)、SiRhRiRj、C(O)Rh、C(O)ORh、C(O)N(Rh)Ri、OC(O)Rh、OC(O)ORh、OC(O)N(Rh)Ri、N(Rh)C(O)Ri、N(Rh)C(O)ORi、N(Rh)C(O)N(Ri)Rj。
其中Rh、Ri和Rj独立地选自H和任选被取代的C1-15烷基、C1-15杂烷基、C3-15环烷基、C1-15杂环烷基、C5-15芳基或C1-15杂芳基。
T选自于C2-C12烃基，Z，(C1-C6亚烷基)-Z-(C1-C6亚烷基)，(C1-C6亚烷基)-Z-(C1-C6亚烷基)-Z-(C1-C6亚烷基)，(C1-C6亚烯基)-Z-(C1-C6亚烯基)，(C1-C6亚炔基)-Z-(C1-C6亚炔基)；
其中Z独立选自O，S，NR1，芳基和杂芳基；
其中亚烷基，亚烯基，芳基和杂芳基是独立且任选用F，OH，O(C1-C6烷基)，NH2，NHCH3，N(CH3)2和C1-C6烷基取代的，其中烷基任选是用一个或多个F取代的；
优选的，所述药物，其中X1为O，R1为H；
优选的，所述药物，其中D1为D1’，N和C之间存在双键，C2和C3之间存在双键，以及R12是甲氧基取代的苯基；
优选的，所述药物，其中D1为D2”，N和C之间存在双键，以及R13是甲氧基；
优选的，所述药物，其中T选自C2-12的亚烷基；
优选的，所述药物，其中T为
Figure GDA0003126256120000041
优选的，本发明提供一种治疗有此需要的患者的方法，包括向所述患者给予前述任一项所述的药物，其中所述患者患有肿瘤、自身免疫疾病或感染性疾病。
本发明组合物可用于在哺乳动物(如人类)中抑制异常细胞生长或治疗增值性疾病。本发明组合物可用于治疗哺乳动物(如人类)中的疾病，例如癌症。其中所述癌症选自乳腺癌，胃肠道癌，例如组成的组中结肠直肠癌，胰腺癌，胆管癌，肝细胞癌，骨肉瘤，肺癌，前列腺癌，鳞状细胞癌，卵巢癌，睾丸癌，膀胱癌，胃癌，头颈癌，宫颈癌，肾癌，神经胶质瘤，皮肤癌，如：恶性黑色素瘤，甲状腺癌，白血病，恶性淋巴瘤。
具体实施方案
通过参考本发明的具体实施方式和包括在其中的实施例,可以更容易地理解本发明。
缩写和定义
除非另有说明，否则如本文所用的以下术语和短语旨在具有以下含义。当本文中使用商标名称时，除非上下文中另有指明，否则商标名称包括所述商标名称产品的产品配方、通用药物和活性药物成分。
除非另有说明，术语“芳基”指多不饱和、一般是芳族的羟基团，它可以是单环或者稠合或共价连接的多环(至多三个环)。术语“芳杂基”指含有1-5个选自N、O或S的杂原子的芳基(或环)，其中所述氮和硫原子任选被氧化，所述氮原子任选被季铵化。杂芳基团可通过杂原子连接于分子的其余部分。芳基基团的非限制性例子包括：苯基、萘基和二苯基，而杂芳基团的非限制性例子包括：吡啶基、哒嗪基、吡嗪基、嘧啶基(pyrimindinyl)、三嗪基、喹啉基、喹喔啉基、喹唑啉基、噌啉基、酞嗪基(phthalaziniyl)、苯并三嗪基、嘌呤基、苯并咪唑基、苯并吡唑基、苯并三唑基、苯并异唑基、异苯并呋喃基、异吲哚基、吲嗪基、苯并三嗪基、噻吩并吡啶基、噻吩并嘧啶基、吡啶并嘧啶基、咪唑并吡啶、苯并噻唑基(benzothiaxolyl)、苯并呋喃基、苯并噻吩基、吲哚基、喹啉基、异喹啉基、异噻唑基、吡唑基、吲唑基、蝶啶基、咪唑基、三唑基、四唑基、噁唑基、异噁唑基、噻二唑基、吡咯基、噻唑基、呋喃基、以及噻吩基等。当描述为“取代的”时，上述芳环和杂芳环系统的取代基选自下述可接受的取代基。
除非文中另有说明，烃基(包括通常为称为亚烷基、烯基、炔基和环烷基的那些)的取代基可以是选自下组的多种基团：-卤素、-OR’、-NR’R”、-SR’、-SiR’R”R”’、-OC(O)R’、-C(O)R’、-CO2R’、-CONR’R”、-OC(O)NR’R”、-NR”C(O)R’、-NR’-C(O)NR”R”’、-NR”C(O)2R’、-NH-C(NH2)＝NH、-NR’C(NH2)＝NH、-NH-C(NH2)＝NR’、-S(O)R’、-S(O)2R’、-S(O)2NR’R”、-NR’S(O)2R”、-CN和-NO2，取代基数量为0至(2m’+1)，其中m’为该基团中碳原子的总数。R’、R”和R”’各自独立的指代氢、未取代的C1-8烷基、未取代的芳基、由1-3个卤素取代的芳基、未取代的C1-8烷基、C1-8烷氧基或C1-8硫代烷氧基、或未取代的芳基-C1-4烷基。R’和R”连接于同一个氮原子时，它们可与该氮原子一起形成3-，4-，5-，6-或7-元环。例如，-NR’R”包括1-吡咯烷基和4-吗啉基。
本文中所用的化合物的“衍生物”是指具有与化合物相似的化学结构但还含有至少一个化合物中不存在的化学基团和/或缺少至少一个化合物中存在的化学基团的物质。衍生物所比较的化合物被称为“母体”化合物。通常，“衍生物”可在一个或多个化学反应步骤中由母体化合物产生。
术语“抑制”或“的抑制”指，减少了可检测的量，或完全阻止。
术语“癌症”指的是以失调的细胞生长为特征的生理病症或疾病。“肿瘤”包括癌细胞。
术语“自身免疫疾病”是源自针对个体自身的组织或蛋白质的疾病或紊乱。
本文中所用的短语“药学上可接受的盐”指的是，化合物的药学上可接收到有机或无机盐。该化合物可含有至少一个氨基或羧基，并且因此可与相应的酸或碱形成加成盐。示例性的盐包括但不限于：硫酸盐、三氟乙酸盐、柠檬酸盐、乙酸盐、草酸盐、氯化物、溴化物、碘化物、硝酸盐、硫酸氢盐、磷酸盐、酸性磷酸盐、异烟酸盐、乳酸盐、水杨酸盐、酸性柠檬酸盐、酒石酸盐、油酸盐、单宁酸盐、泛酸盐、酒石酸氢盐、抗坏血酸盐、水杨酸盐、甲酸盐、本甲酸盐、谷氨酸盐、甲磺酸盐、乙磺酸盐、苯磺酸盐、对甲苯磺酸盐，钾盐、钠盐等。另外，药学上可接受的盐在结构中具有超过一个的带点原子。其中多个带电原子是药学上可接受的盐的一部分的示例能有多个抗衡例子。例如，药学上可接受的盐具有一个或多个带电原子和/或一个或多个抗衡原子。
下面结合具体实施例，进一步阐述本发明，应理解，这些实施例只用于说明本发明，而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的试验方法，通常按照常规条件或按照制造厂商所建议的条件。除非另外说明，否则所有的百分数、比例、比率、或份数按重量计。
除非另行定义，文中所使用的所有专业和科学用于与本领域熟练人员所熟悉的意义相同。此外，任何与所记载内容相似或均等的方法及材料皆可应用于本发明方法中。文中所述的较佳实施方法与材料仅作示范之用。
本发明下列实施例中采用的通用步骤是：
通用步骤A
苯并二氮杂卓类衍生物的合成一
Figure GDA0003126256120000061
通用步骤B
苯并二氮杂卓类衍生物的合成二
Figure GDA0003126256120000071
通用步骤C
CBI衍生物的合成
Figure GDA0003126256120000072
通用步骤D
DNA-binding片段的合成
Figure GDA0003126256120000073
通用步骤E
CBI-苯并二氮杂卓衍生物合成方法一
Figure GDA0003126256120000081
通用步骤F CBI-苯并二氮杂卓衍生物合成方法二
Figure GDA0003126256120000082
通用步骤G
Binding-苯并二氮杂卓衍生物合成方法
Figure GDA0003126256120000083
附图说明
图1为hct116实验结果图。
图2为SKOV3实验结果图。
具体实施例
实施例1 3-(甲氧甲酰基)二环[1.1.1]戊烷-1-甲酸的制备
Figure GDA0003126256120000091
50ml三口瓶中加入1.48g二环[1.1.1]戊烷-1,3-二甲酸甲酯，将其用20ml甲醇溶解，室温下缓慢滴加NaOH(324mg)的甲醇(5ml)溶液，加完后升温至80℃反应2h。反应完成后浓缩至干，加入40ml水，用二氯甲烷萃取(50ml*3)，水层用稀盐酸调节PH至酸性，加入二氯甲烷萃取(40ml*4)，合并有机层，干燥浓缩后的白色固体925mg，收率68％。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ3.71(s,3H),2.38(s,6H)；MS m/z 171(M+1).
实施例2 3-(羟甲基)二环[1.1.1]戊烷-1-甲酸甲酯的制备
Figure GDA0003126256120000092
500ml三口瓶中依次加入6.34g 3-(甲氧甲酰基)二环[1.1.1]戊烷-1-甲酸，30ml四氢呋喃，4.89g三乙胺，反应体系降温至-10℃，缓慢滴加3.87g氯甲酸甲酯，加毕于0℃反应1h，分批加入2.54g NaBH4，继续于0℃反应至原料完全。加入400ml水淬灭反应，用乙酸乙酯萃取(600ml*3)，合并有机层，干燥浓缩后所得残留物用柱层析纯化(DCM:MeOH＝20:1)，得3.83g浅黄色油状物，收率66％。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ3.71(s,3H),2.38(s,6H)；3.48(s,2H)；MS＝157(M+1)
实施例3 3-((对甲苯磺酰氧基)甲基)二环[1.1.1]戊烷-1-甲酸甲酯
Figure GDA0003126256120000093
100ml烧瓶中加入700mg 3-(羟甲基)二环[1.1.1]戊烷-1-甲酸甲酯，用10ml二氯甲烷将其溶解，依次加入1.2ml三乙胺和0.55gDMAP，0℃滴加对甲苯磺酰氯的二氯甲烷溶液，加毕后于室温反应至原料反应完全。有机层依次用稀盐酸，饱和食盐水洗涤，无水Na2SO4干燥，浓缩得1.4g黄色固体，无需纯化直接用于下一步反应。
Figure GDA0003126256120000101
实施例4化合物002的制备
于1L单口瓶中加入化合物001(29g,67.38mmol)和400ml DCM，搅拌溶解，冰浴冷却下分批加入三氯异氰尿酸(23.45g,101.07mmol,TCCA)和四甲基哌啶氮氧化物(0.32g,2.03mmol,TEMPO)，加毕，移至室温下反应过夜，TLC显示原料反应完全。于40℃下减压浓缩，残余物溶于500ml乙酸乙酯和500ml水中，分出有机层，依次用饱和NaHCO3溶液、水、饱和食盐水各洗一次，无水硫酸钠干燥，过滤，于45℃下减压浓缩，得到黄色固体34.0g，粗品用40g硅胶拌样，柱层析，展开剂(DCM：MeOH＝40:1-20:1)，得到黄色固体17.8g，收率61.68％。
实施例5化合物003的制备
于500ml单口瓶中加入化合物002(15.0g,35.01mmol)和干燥的DCM300ml，搅拌溶解后，N2保护并降温至-50℃以下，加入2,6-二甲基吡啶(16.3ml,139.95mmol)，然后再滴加三氟甲磺酸酐(17.7ml,105.21mmol,Tf2O)，加毕，同温下反应1.5h，TLC显示原料反应完全。往反应液中加入冰水300ml，分出有机层，依次用饱和NaHCO3溶液、水、饱和食盐水各洗一次，无水硫酸钠干燥，过滤，于45℃下减压浓缩，得到褐色油状物21.5g，粗品用25g硅胶拌样，柱层析，展开剂(PE：EA＝5:1-2:1)，得到黄色油状物15.8g，收率80.5％。
实施例6化合物004的制备
于1L三颈瓶中加入化合物003(13.8g,24.62mmol)、200ml EtOH、200ml甲苯和水60ml，搅拌下依次加入三乙胺(7.0ml,49.85mmol)，4-甲氧基苯硼酸(5.24g,34.5mmol)，N2置换后加入Pd(PPh3)4，加毕，N2保护于30℃下反应过夜，TLC显示原料反应完全。于45℃下减压浓缩，残余物溶于300ml乙酸乙酯和300ml水中，分出有机层，水层再用100ml乙酸乙酯萃取，合并有机层，依次用水、饱和食盐水各洗一次，无水硫酸钠干燥，过滤，于45℃下减压浓缩，得到棕色固体18.2g，粗品用20g硅胶拌样，柱层析，展开剂(PE：EA＝4:1-1:1)，得到黄色固体11.2g，收率87.8％。
实施例7化合物005的制备
于500ml单口瓶中加入化合物004(10.5g,20.25mmol)和5％甲酸/甲醇溶液250ml，冰浴冷却至5℃以下，搅拌下缓慢加入锌粉(26.32g,404.92mmol)，加毕，氮气保护下升温至70℃回流反应8h，TLC显示原料反应完全。趁热过滤，滤饼用少量甲醇洗涤，滤液以饱和碳酸氢钠溶液调pH至7，然后于50℃下减压浓缩，除去溶剂，得到棕黄色油状物，加入300ml DCM，分出有机层，用饱和食盐水洗一次，无水硫酸钠干燥，过滤，于40℃下减压浓缩，得到棕黄色固体11.9g，粗品用15g硅胶拌样，柱层析，展开剂(DCM：MeOH＝50:1)，得到黄色固体8.9g，收率96.3％。
实施例8化合物006的制备
于250ml单口瓶中加入60％NaH(0.96g,24.0mmol)和15ml DMF，搅拌下冷却至-10℃，滴加化合物005(8.4g,18.4mmol)和50ml DMF的混合溶液，加毕，同温下搅拌2h，然后将2-(三甲基硅烷基)乙氧甲基氯(4.0g,24.0mmol)和15ml DMF的混合溶液滴入反应液中，加毕，-5℃下反应过夜，TLC显示原料反应完全。将反应液倒入300ml冰水中，以200ml DCM萃取，有机层依次用饱和NaHCO3溶液、水、饱和食盐水各洗一次，无水硫酸钠干燥，过滤，于40℃下减压浓缩，得到褐色油状物10.5g，粗品用15g硅胶拌样，柱层析，展开剂(DCM：MeOH＝600:1-400:1)，得到黄色固体6.1g，收率56.5％。
实施例9化合物007的制备
于250ml单口瓶中加入化合物006(2.0g,3.41mmol)和30ml MeOH，搅拌溶解后，依次加入HCO2NH4(2.15g,34.10mmol)和5％Pd/BaSO4(0.28g)，加毕，于室温下反应4h，TLC显示原料反应完全。反应液经硅藻土过滤，滤饼用少量DCM洗涤，合并滤液，于45℃下减压浓缩，残余物溶于100ml DCM中，依次用水、饱和食盐水各洗一次，无水硫酸钠干燥，过滤，于40℃下减压浓缩，得到淡黄色固体1.59g，粗品用2.0g硅胶拌样，柱层析，展开剂(PE：EA＝3:1-1:1)，得到黄色固体1.45g，收率85.8％。
Figure GDA0003126256120000121
实施例10中间体008的合成
于150ml单口瓶中加入3-((对甲苯磺酰氧基)甲基)二环[1.1.1]戊烷-1-甲酸甲酯(0.92g,1.85mmol)、中间体007(0.61g,1.96mmol)和20ml DMF，搅拌溶解后加入碳酸铯(1.21g,3.71mmol)，加毕，氮气保护下升温至80℃反应4h，TLC显示原料反应完全。往反应液中加入水60ml，以30ml EA萃取2次，合并有机层，依次用水、饱和食盐水各洗一次，分出有机层，无水硫酸钠干燥，过滤，于45℃下减压浓缩，得到黄色固体1.4g，粗品用2.0g硅胶拌样，柱层析，展开剂(PE：EA＝4:1-2:1)，得到淡黄色固体1.08g，收率92.3％。
实施例11中间体009的合成
于100ml单口瓶中加入中间体008(0.9g,1.42mmol)、15ml THF和5ml MeOH，搅拌下加入1N LiOH(3.0ml,3.0mmol)，加毕，氮气保护于室温下反应过夜，TLC显示原料反应完全。于45℃下减压浓缩，残余物溶于100ml DCM中，冰浴冷却下，以1N HCl溶液调pH至4-5，分出有机层，依次用水、饱和食盐水各洗一次，无水硫酸钠干燥，过滤，于40℃下减压浓缩，得到淡黄色固体0.95g，粗品用1.2g硅胶拌样，柱层析，展开剂(DCM：MeOH＝60:1-30:1)，得到类白色固体0.75g，收率85.2％。
实施例12中间体010的合成
于100ml单口瓶中加入中间体009(650mg,1.047mmol)和15ml DMF，室温搅拌下依次加入1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐(610mg,3.182mmol)和DMAP(385mg,3.151mmol)，N2保护于室温下搅拌1h，然后加入CBI-10(470mg,1.255mmol)，N2保护于室温下反应过夜，TLC显示原料基本反应完全。往反应液中加入水40ml，以30ml DCM萃取2次，合并有机层，依次用水、饱和食盐水各洗一次，分出有机层，无水硫酸钠干燥，过滤，于40℃下减压浓缩，得到棕黄色油状物1.8g，粗品用2.5g硅胶拌样，柱层析，展开剂(PE：EA＝4:1-1:1)，得到淡黄色固体0.71g，收率72.08％。
实施例13中间体011的合成
于100ml单口瓶中加入中间体010(0.6g,0.638mmol)、10ml THF和20ml MeOH，搅拌溶解，室温下依次加入HCO2NH4(0.41g,6.502mmol)和5％Pd/BaSO4(0.085g)，加毕，于室温下反应5h，TLC显示原料反应完全。反应液经硅藻土过滤，滤饼用少量THF和DCM洗涤，合并滤液，于45℃下减压浓缩，得到淡黄色固体0.78g，粗品用1.0g硅胶拌样，柱层析，展开剂(EA:PE＝1:1-2:1)，得到淡黄色固体0.3g，收率55.35％。
实施例14化合物012的合成
于50ml三颈瓶中加入中间体011(0.13g,0.153mmol)，用油泵抽真空，N2切换3次，注入新鲜重蒸处理的THF 5ml，搅拌溶解后并降温至-78℃以下，然后缓慢滴加1N Li.BHEt3(1.2ml,1.20mmol)，加毕，保持同温下反应2h，TLC显示原料基本反应完全。加入20ml DCM稀释，反应液移至冰浴下，同时滴加20ml水淬灭反应，分出有机层，水层再以10ml DCM萃取一次，合并有机层，依次用水、饱和食盐水各洗一次，无水硫酸钠干燥，过滤，于40℃下减压浓缩，得到淡黄色固体152mg，立即加入DCM 3ml、CH3OH 6ml和H2O 1ml，搅拌溶解后加入硅胶至混合液成粘稠状，密封后于室温下搅拌过夜。加入15ml DCM和5ml CH3OH稀释，过滤，滤饼用少量DCM洗涤，合并滤液，于45℃下减压浓缩，得到淡黄色固体0.12g，粗品用1.0g硅胶拌样，柱层析，展开剂(DCM：MeOH＝60:1-30:1)，得到淡黄色固体25mg，收率23.36％。
1H-NMR(CDCl3):δ＝8.46(s,1H),8.23(d,1H),7.88(d,1H),7.58(s,1H),7.29-7.39(m,6H),6.86-6.92(m,3H),4.02-4.61(m,5H),4.00(s,3H),3.83(s,3H),3.49(s,2H),2.76(s,3H),1.62(m,8H).
实施例15 5-((7-(甲氧基)-2-(4-甲氧苯基)-5,11-dioxo-10-((2-(三甲基硅基)乙氧基)甲基)-5,10,11,11a-四氢-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂卓-8-基)氧)戊酸乙酯(化合物013)
Figure GDA0003126256120000141
25ml烧瓶中加入0.1g 7-(甲氧基)-8-羟基-2-(4-甲氧苯基)-10-((2-(三甲基硅基)乙氧基)甲基)-1,11a-二氢-5H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂卓-5,11(10H)-二氧代(化合物007)和4ml DMF，搅拌下依次加入42mg K2CO3和0.1ml 5-溴-戊酸乙酯，加毕于室温反应至原料完全。加入15ml水，乙酸乙酯萃取，有机层用饱和食盐水洗涤后干燥浓缩得淡黄色油状物0.2g。无需纯化，直接用于下一步反应。实施例16化合物014：5-((7-(甲氧基)-2-(4-甲氧苯基)-5,11-dioxo-10-((2-(三甲基硅基)乙氧基)甲基)-5,10,11,11a-四氢-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂卓-8-基)氧)戊酸
Figure GDA0003126256120000142
于50ml烧瓶中加入0.2g 5-((7-(甲氧基)-2-(4-甲氧苯基)-5,11-dioxo-10-((2-(三甲基硅基)乙氧基)甲基)-5,10,11,11a-四氢-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂卓-8-基)氧)戊酸乙酯(化合物013)，用THF/MeOH(V:V＝3:1)将其溶解，搅拌下加入1NLiOH，室温下反应至原料完全。40℃下减压浓缩除去溶剂，残余物溶于二氯甲烷，用稀盐酸调节PH至5～6，分出有机层，水层再用二氯甲烷萃取两次，合并有机层，依次用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得淡黄色固体0.18g。柱层析纯化(DCM:MeOH＝30:1)得淡黄色固体90mg，收率47％。
实施例17化合物015的制备
Figure GDA0003126256120000151
25ml烧瓶中加入20mg 5-((7-(甲氧基)-2-(4-甲氧苯基)-5,11-dioxo-10-((2-(三甲基硅基)乙氧基)甲基)-5,10,11,11a-四氢-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂卓-8-基)氧)戊酸(化合物014)，用1ml DMF将其溶解后加入10mg EDCI和5mg DMAP，室温下搅拌1h，随后加入14mg 5-(苄氧基)-1-(氯甲基)-9-甲基-2,3-二氢-1H-苯并[e]吲哚，室温下反应至原料反映完全。反应液加入水，以乙酸乙酯萃取2次，合并有机层，有机层干燥后减压浓缩得黄色固体0.15g。柱层析纯化(石油醚：乙酸乙酯＝3：1)后得黄色固体10mg，收率30％。
实施例18化合物016的制备
Figure GDA0003126256120000152
25ml烧瓶中加入10mg化合物015和MeOH/THF(V:V＝1:1)，搅拌下依次加入7mg甲酸铵，1.4mg 5％钯硫酸钡，室温下反应支原料反应完全。反应液经硅藻土过滤，滤饼用少量二氯甲烷洗涤，滤液合并后减压浓缩得13mg固体，未经纯化直接用于下一步反应。
实施例19化合物017的制备
Figure GDA0003126256120000153
50ml烧瓶中加入50mg化合物016，用2mlTHF将其溶解并降温至-78℃，缓慢滴加三乙基硼氢化锂的四氢呋喃溶液，加毕于-78℃反应至原料反应完全。反应液缓慢滴加H2O破坏，稀盐酸调节PH至5～6，再用二氯甲烷萃取3次，合并有机层，有机层干燥浓缩后得黄色固体56mg。所得固体溶于甲醇/二氯甲烷(4ml+1.5ml)混合溶剂，搅拌下加入0.5ml水，然后加入3g硅胶(300-400目)，室温下搅拌反应。反应完成后，将反应液过滤，滤饼用甲醇和二氯甲烷混合溶剂(V:V＝1:1)洗涤，合并滤液，减压浓缩得黄色固体。所得固体经制备液相分离纯化，得化合物009 12.5mg。
实施例20化合物018:(S)-1-(4-(苄氧基)-5-甲氧基-2-硝基苯甲酰基)-6-甲氧基二氢吲哚-2-甲酸甲酯的制备
Figure GDA0003126256120000161
将4-(苄氧基)-5-甲氧基-2-硝基苯甲酸110mg溶于3ml二氯甲烷中，0℃下加入62μl草酰氯，升至室温反应3小时，将反应液浓缩得淡黄色固体。将(S)-6-甲氧基二氢吲哚-2-甲酸甲酯50mg溶解于5ml二氯甲烷中，0℃下加入0.1ml三乙胺，缓慢滴加上述所得固体的二氯甲烷溶液，于0℃反应2h。反应液用稀盐酸调节PH至4～5，用乙酸乙酯萃取2次，合并有机层，饱和食盐水洗涤后，干燥浓缩。所得固体经柱层析纯化(石油醚：乙酸乙酯＝20：1)，得107mg黄色固体，收率89.9％。
实施例21(S)-9-(苄氧基)-3,8-二甲氧基-12a,13-二氢-6H-苯并[5,6][1,4]二氮杂卓并[1,2-a]吲哚-6,12(11H)-二酮(化合物019)
Figure GDA0003126256120000162
25ml烧瓶中加入50mg(S)-1-(4-(苄氧基)-5-甲氧基-2-硝基苯甲酰基)-6-甲氧基二氢吲哚-2-甲酸甲酯，用5ml甲醇将其溶解，搅拌下加入96.4mg氯化亚锡，升温至65℃反应至原料完全。将反应液冷却后，用饱和NaHCO3调节PH至7～8，随后用硅藻土过滤，滤液浓缩后加水稀释，用乙酸乙酯萃取2次，合并有机层，饱和食盐水洗涤后干燥浓缩，得淡黄色固体28mg，收率63％。
实施例22(S)-9-(苄氧基)-3,8-二甲氧基-11-((2-(三甲硅基)乙氧基)甲基)-12a,13-二氢-6H-苯并[5,6][1,4]二氮杂卓并[1,2-a]吲哚-6,12(11H)-二酮(化合物020)
Figure GDA0003126256120000171
将26mg氢化钠悬浮于无水DMF中，氮气保护下滴加215mg(S)-9-(苄氧基)-3,8-二甲氧基-12a,13-二氢-6H-苯并[5,6][1,4]二氮杂卓并[1,2-a]吲哚-6,12(11H)-二酮的DMF溶液，加完后搅拌30min，随后缓慢滴加108mg SEMCl的DMF溶液，加毕同温反应至原料完全。将反应液倒入冰水中，用乙酸乙酯萃取3次，合并有机层，有机层用饱和食盐水洗涤后干燥浓缩，所得残留物经柱层析纯化(石油醚：乙酸乙酯＝10：1)，得195mg油状物，收率72％。
实施例23(S)-9-(羟基)-3,8-二甲氧基-11-((2-(三甲硅基)乙氧基)甲基)-12a,13-二氢-6H-苯并[5,6][1,4]二氮杂卓并[1,2-a]吲哚-6,12(11H)-二酮(化合物021)
Figure GDA0003126256120000172
25ml烧瓶中加入190mg(S)-9-(苄氧基)-3,8-二甲氧基-11-((2-(三甲硅基)乙氧基)甲基)-12a,13-二氢-6H-苯并[5,6][1,4]二氮杂卓并[1,2-a]吲哚-6,12(11H)-二酮，加入10ml甲醇将其溶解，室温下依次加入214mg甲酸铵，95mg 5％的钯硫酸钡，氮气保护下反应至原料完全。将反应液用硅藻土过滤，滤饼用甲醇洗涤，合并滤液并浓缩，所得残留物经过柱层析纯化(石油醚:乙酸乙酯＝10:1)，得白色固体135mg，收率84.9％。
实施例24 3-(((8-(苄氧基)-3-甲氧基-6,12-二氧代-11-((2-(三甲基硅基)乙氧基)甲基)-11,12,12a,13-四氢-6H-苯并[5,6][1,4]二氮杂卓并[1,2-a]吲哚-9-基)氧)甲基)二环[1.1.1]戊烷-1-甲酸甲酯(化合物022)
Figure GDA0003126256120000173
50ml烧瓶中加入30mg(S)-9-(羟基)-3,8-二甲氧基-11-((2-(三甲硅基)乙氧基)甲基)-12a,13-二氢-6H-苯并[5,6][1,4]二氮杂卓并[1,2-a]吲哚-6,12(11H)-二酮和2mlDMF，搅拌下加入Cs2CO3，加毕升温至80℃反应至原料完全。加入20ml水，乙酸乙酯萃取，有机层用饱和食盐水洗涤后干燥浓缩得黄色固体36mg。无需纯化，直接用于下一步反应。
实施例25 3-(((8-(苄氧基)-3-甲氧基-6,12-二氧代-11-((2-(三甲基硅基)乙氧基)甲基)-11,12,12a,13-四氢-6H-苯并[5,6][1,4]二氮杂卓并[1,2-a]吲哚-9-基)氧)甲基)二环[1.1.1]戊烷-1-甲酸(化合物023)
Figure GDA0003126256120000181
于25ml烧瓶中加入36mg 3-(((8-(苄氧基)-3-甲氧基-6,12-二氧代-11-((2-(三甲基硅基)乙氧基)甲基)-11,12,12a,13-四氢-6H-苯并[5,6][1,4]二氮杂卓并[1,2-a]吲哚-9-基)氧)甲基)二环[1.1.1]戊烷-1-甲酸甲酯，用THF/MeOH(V:V＝3:1)将其溶解，搅拌下加入1N LiOH，室温下反应至原料完全。40℃下减压浓缩除去溶剂，残余物溶于二氯甲烷，用稀盐酸调节PH至5～6，分出有机层，水层再用二氯甲烷萃取两次，合并有机层，依次用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，所得残留物经柱层析纯化(DCM:MeOH＝30:1)得淡黄色固体20mg。
实施例26化合物024的制备
Figure GDA0003126256120000182
25ml烧瓶中加入20mg 3-(((8-(苄氧基)-3-甲氧基-6,12-二氧代-11-((2-(三甲基硅基)乙氧基)甲基)-11,12,12a,13-四氢-6H-苯并[5,6][1,4]二氮杂卓并[1,2-a]吲哚-9-基)氧)甲基)二环[1.1.1]戊烷-1-甲酸，用2ml DMF将其溶解后加入20mg EDCI和3mgDMAP，室温下搅拌1h，随后加入17mg 5-(苄氧基)-1-(氯甲基)-9-甲基-2,3-二氢-1H-苯并[e]吲哚，室温下反应至原料反映完全。反应液加入水，以乙酸乙酯萃取2次，合并有机层，有机层干燥后减压浓缩，所得残留物经柱层析纯化(石油醚：乙酸乙酯＝3：1)后得黄色固体10mg，收率34％。
实施例27化合物025的制备
Figure GDA0003126256120000191
25ml烧瓶中加入10mg化合物024和MeOH/THF(V:V＝1:1)，搅拌下依次加入7mg甲酸铵，1.4mg 5％钯硫酸钡，室温下反应支原料反应完全。反应液经硅藻土过滤，滤饼用少量二氯甲烷洗涤，滤液合并后减压浓缩得13mg固体，未经纯化直接用于下一步反应。
实施例28化合物026的制备
Figure GDA0003126256120000192
50ml烧瓶中加入20mg化合物025，用2mlTHF将其溶解并降温至-78℃，缓慢滴加三乙基硼氢化锂的四氢呋喃溶液，加毕于-78℃反应至原料反应完全。反应液缓慢滴加H2O破坏，稀盐酸调节PH至5～6，再用二氯甲烷萃取3次，合并有机层，有机层干燥浓缩后得黄色固体25mg。所得固体溶于甲醇/二氯甲烷(4ml+1.5ml)混合溶剂，搅拌下加入0.5ml水，然后加入3g硅胶(300-400目)，室温下搅拌反应。反应完成后，将反应液过滤，滤饼用甲醇和二氯甲烷混合溶剂(V:V＝1:1)洗涤，合并滤液，减压浓缩得黄色固体。所得固体经制备液相分离纯化，得化合物026 8mg。
实施例29 5-((8-(苄氧基)-3-甲氧基-6,12-二氧代-11-((2-(三甲基硅基)乙氧基)甲基)-11,12,12a,13-四氢-6H-苯并[5,6][1,4]二氮杂卓并[1,2-a]吲哚-9-基)氧)戊酸乙酯化合物027
Figure GDA0003126256120000193
50ml烧瓶中加入500mg(S)-9-(羟基)-3,8-二甲氧基-11-((2-(三甲硅基)乙氧基)甲基)-12a,13-二氢-6H-苯并[5,6][1,4]二氮杂卓并[1,2-a]吲哚-6,12(11H)-二酮和20mlDMF，搅拌下依次加入200mg K2CO3和0.5ml 5-溴-戊酸乙酯，加毕于室温反应至原料完全。加入100ml水，乙酸乙酯萃取，有机层用饱和食盐水洗涤后干燥浓缩得淡黄色油状物0.9g。无需纯化，直接用于下一步反应。
实施例30 5-((8-(苄氧基)-3-甲氧基-6,12-二氧代-11-((2-(三甲基硅基)乙氧基)甲基)-11,12,12a,13-四氢-6H-苯并[5,6][1,4]二氮杂卓并[1,2-a]吲哚-9-基)氧)戊酸(化合物028)
Figure GDA0003126256120000201
于50ml烧瓶中加入0.5g 5-((8-(苄氧基)-3-甲氧基-6,12-二氧代-11-((2-(三甲基硅基)乙氧基)甲基)-11,12,12a,13-四氢-6H-苯并[5,6][1,4]二氮杂卓并[1,2-a]吲哚-9-基)氧)戊酸乙酯，用THF/MeOH(V:V＝3:1)将其溶解，搅拌下加入1N LiOH，室温下反应至原料完全。40℃下减压浓缩除去溶剂，残余物溶于二氯甲烷，用稀盐酸调节PH至5～6，分出有机层，水层再用二氯甲烷萃取两次，合并有机层，依次用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，所得残留物经柱层析纯化(DCM:MeOH＝30:1)得淡黄色固体230mg，收率49％。
实施例31化合物029的制备
Figure GDA0003126256120000202
250ml烧瓶中加入200mg 5-((8-(苄氧基)-3-甲氧基-6,12-二氧代-11-((2-(三甲基硅基)乙氧基)甲基)-11,12,12a,13-四氢-6H-苯并[5,6][1,4]二氮杂卓并[1,2-a]吲哚-9-基)氧)戊酸，用10mlDMF将其溶解后加入100mg EDCI和50mg DMAP，室温下搅拌1h，随后加入150mg 5-(苄氧基)-1-(氯甲基)-9-甲基-2,3-二氢-1H-苯并[e]吲哚，室温下反应至原料反映完全。反应液加入水，以乙酸乙酯萃取2次，合并有机层，有机层干燥后减压浓缩，所得残留物经柱层析纯化(石油醚：乙酸乙酯＝3：1)后得黄色固体120mg。
实施例32化合物030的制备
Figure GDA0003126256120000211
25ml烧瓶中加入15mg化合物013和MeOH/THF(V:V＝1:1)，搅拌下依次加入10mg甲酸铵，2mg 5％钯硫酸钡，室温下反应至原料反应完全。反应液经硅藻土过滤，滤饼用少量二氯甲烷洗涤，滤液合并后减压浓缩得20mg固体，未经纯化直接用于下一步反应。
实施例33化合物031的制备
Figure GDA0003126256120000212
25ml烧瓶中加入30mg化合物030，用2mlTHF将其溶解并降温至-78℃，缓慢滴加三乙基硼氢化锂的四氢呋喃溶液，加毕于-78℃反应至原料反应完全。反应液缓慢滴加H2O破坏，稀盐酸调节PH至5～6，再用二氯甲烷萃取3次，合并有机层，有机层干燥浓缩后得黄色固体34mg。所得固体溶于甲醇/二氯甲烷(4ml+1.5ml)混合溶剂，搅拌下加入0.5ml水，然后加入3g硅胶(300-400目)，室温下搅拌反应。反应完成后，将反应液过滤，滤饼用甲醇和二氯甲烷混合溶剂(V:V＝1:1)洗涤，合并滤液，减压浓缩得黄色固体。所得固体经制备液相分离纯化，得化合物031 8mg。
Figure GDA0003126256120000221
实施例34中间体032的合成
于150ml单口瓶中加入4-苄氧基-5-甲氧基-2-硝基苯甲酸(5.73g,18.88mmol)和50ml二氯甲烷，搅拌下加入0.1ml DMF，在冰浴冷却下滴加草酰氯(3.2ml，37.8mmol)，加毕，将反应液移至室温下反应4h，TLC显示原料反应完全。于45℃下减压浓缩，除去二氯甲烷，残余物溶于30ml THF中，备用。
另取150ml单口瓶，加入(S)-6-硝基-吲哚啉-2-羧酸甲酯(2.8g,12.6mmol)和30mlTHF，搅拌下加入三乙胺(5.3ml,38.2mmol)，然后在冰浴冷却下滴加上述制备好的酰氯的THF溶液，加毕，升温至室温下反应过夜，TLC显示原料反应完全。于45℃下减压浓缩，残余物溶于150ml二氯甲烷中，依次用1N HCl、水、饱和食盐水各洗一次，分出有机层，无水硫酸钠干燥，过滤，于40℃下减压浓缩，得到棕色固体9.5g，粗品用11.0g硅胶拌样，柱层析，展开剂(PE：EA＝5:1-1:1)，得到黄色固体6.1g，收率95.4％。
实施例35中间体033的合成
于250ml单口瓶中加入中间体32(4.9g,9.66mmol)和5％甲酸/甲醇溶液150ml，冰浴冷却至5℃以下，搅拌下缓慢加入锌粉(12.56g,193.23mmol)，加毕，氮气保护下升温至70℃回流反应过夜，TLC显示原料反应完全。趁热过滤，滤饼用少量甲醇洗涤，滤液以饱和碳酸氢钠溶液调pH至8-9，然后于50℃下减压浓缩，除去溶剂，得到棕黄色油状物6.2g，粗品直接用7.0g硅胶拌样，柱层析，展开剂(DCM：MeOH＝60:1-30:1)，得到黄色固体3.2g，收率79.8％。
实施例36中间体034的合成
于250ml单口瓶中加入60％NaH(0.38g,9.5mmol)和10ml DMF，搅拌下
冷却至-10℃，滴加中间体2(3.0g,7.23mmol)和50ml DMF的混合溶液，同温下搅拌1h，然后将2-(三甲基硅烷基)乙氧甲基氯(1.67ml,9.41mmol)和10ml DMF的混合溶液滴入反应液中，加毕，同温下反应5h，TLC显示原料反应完全。将反应液倒入250ml水中，以200mlDCM萃取2次，有机层依次用饱和NaHCO3溶液、水、饱和食盐水各洗一次，分出有机层，无水硫酸钠干燥，过滤，于40℃下减压浓缩，得到棕黄色油状物4.1g，粗品用5.0g硅胶拌样，柱层析，展开剂(DCM：MeOH＝60:1-40:1)，得到黄色固体2.7g，收率68.5％。
实施例37中间体035的合成
于150ml单口瓶中加入中间体3(2.5g,4.59mmol)、30ml THF和30ml MeOH，搅拌溶解，室温下依次加入HCO2NH4(2.89g,45.87mmol)和10％Pd/C(1.25g)，加毕，于室温下反应3h，TLC显示原料反应完全。反应液经硅藻土过滤，滤饼用少量DCM洗涤，合并滤液，于45℃下减压浓缩，得到棕黄色固体4.3g，粗品用5.0g硅胶拌样，柱层析，展开剂(DCM：MeOH＝60:1-30:1)，得到黄色固体1.63g，收率78.3％。
Figure GDA0003126256120000241
实施例38中间体036的合成
于100ml单口瓶中加入5-叔丁氧酰胺基戊醇对甲苯磺酸酯(900mg,2.52mmol)和10ml DCM，搅拌溶解并冷却至5℃以下，加入25ml 3mol/L HCl/EA溶液，加毕，氮气保护下升温至室温反应过夜，TLC显示原料反应完全。于45℃下减压浓缩，得到白色油状物670mg，未纯化，直接用于下一步反应。
中间体037的合成
于150ml单口瓶中加入BDN-001(430mg,1.11mmol)和40ml DMF，室温搅拌下依次加入1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐(640mg,3.33mmol)和DMAP(410mg,3.35mmol)，室温下搅拌2h，然后加入中间体5(660mg,2.24mmol)，继续搅拌反应过夜，TLC显示原料基本反应完全。往反应液中加入水100ml，以100ml DCM萃取2次，有机层依次用水、饱和食盐水各洗一次，分出有机层，无水硫酸钠干燥，过滤，于40℃下减压浓缩，得到棕黄色油状物1.5g，粗品用2.0g硅胶拌样，柱层析，展开剂(DCM：MeOH＝70:1-45:1)，得到淡黄色固体0.42g，收率60.4％。
实施例39中间体038的合成
于100ml单口瓶中加入中间体4(0.29g,0.637mmol)和10ml DMF，搅拌溶解后加入碳酸铯(0.52g,1.596mmol)，搅拌30min，然后加入中间体6(0.4g,0.638mmol)，加毕，氮气保护下升温至80℃反应6h，TLC显示原料反应完全。往反应液中加入水40ml，以50ml DCM萃取2次，有机层依次用水、饱和食盐水各洗一次，分出有机层，无水硫酸钠干燥，过滤，于40℃下减压浓缩，得到棕黄色油状物1.1g，粗品用2.0g硅胶拌样，柱层析，展开剂(DCM：MeOH＝60:1-40:1)，得到淡黄色固体0.3g，收率51.8％。
实施例40中间体039的合成
于50ml单口瓶中加入中间体7(0.3g,0.33mmol)、8ml THF和8ml MeOH，搅拌溶解，室温下依次加入HCO2NH4(0.21g,3.33mmol)和5％Pd/BaSO4(0.06g)，加毕，于室温下反应3h，TLC显示原料反应完全。反应液经硅藻土过滤，滤饼用少量THF和DCM洗涤，合并滤液，于45℃下减压浓缩，得到黄色固体0.5g，粗品用1.0g硅胶拌样，柱层析，展开剂(DCM：MeOH＝30:1-10:1)，得到淡黄色固体0.18g，收率66.67％。
实施例41化合物040的合成
于50ml三颈瓶中加入中间体8(80mg,0.098mmol)，用油泵抽真空，N2切换3次，注入新鲜重蒸处理的THF 4ml，搅拌溶解后并降温至-78℃以下，然后缓慢滴加1N Li.BHEt3(0.98ml,0.98mmol)，加毕，保持同温下反应3h，TLC显示原料基本反应完全。加入15ml DCM稀释，反应液移至冰浴下，同时滴加20ml水淬灭反应，分出有机层，水层再以10ml DCM萃取一次，合并有机层，依次用水、饱和食盐水各洗一次，无水硫酸钠干燥，过滤，于40℃下减压浓缩，得到黄色固体105mg，立即加入DCM 3ml、CH3OH 6ml和H2O 1ml，搅拌溶解后加入硅胶至混合液成粘稠状，密封后于室温下搅拌过夜。加入10ml DCM和3ml CH3OH稀释，过滤，滤饼用少量DCM洗涤，合并滤液，于45℃下减压浓缩，得到淡黄色固体85mg，粗品用500mg硅胶拌样，柱层析，展开剂(DCM：MeOH＝40:1-15:1)，得到淡黄色固体27mg，收率41.03％。
实施例42化合物041的合成
Figure GDA0003126256120000261
将4g原料BDN-001分散于50ml无水二氯甲烷(新制)中，冰浴(0±5℃)下滴加2.5ml草酰氯，滴加0.5mlDMF，有气泡生成。缓慢升温至室温，搅拌2h，(TLC监控：原料反应完全DCM/MeOH 10:1)40±5℃减压蒸出溶剂，加入适量无水二氯甲烷带，减压浓缩至淡黄色固体粉末。
冰浴(0±5℃)下将新制的酰氯与50ml无水乙醇和4ml三乙胺混合，冰浴下搅拌2h(TLC监控：原料反应完全DCM/MeOH,10:1)，反应液用1M稀盐酸调节PH中性，过滤，粗品用无水乙醇重结晶，55±5℃真空干燥(≤-0.09MPa)浓缩得到黄色固体3.1g，收率72％(LC-MS确证为目标产物)
实施例43化合物042的合成
Figure GDA0003126256120000262
将5g原料041溶解于新开的5-氨基-1-戊醇45ml中，加100ml乙醇，缓慢升温至78±5℃，搅拌4h
(TLC监控：原料反应完全DCM/MeOH 20:1展开4次)反应液中加入适量水，冰浴(0±5℃)下用6M盐酸调节PH至6左右，乙酸乙酯提取3次，有机相再用5％盐酸洗涤1次，饱和NaCl洗涤1次，干燥40±5℃减压浓缩，55±5℃真空干燥(≤-0.09MPa)浓缩得到黄色固体4.1g，收率77％，无须纯化直接用于下一步反应。
实施例44化合物043的制备
Figure GDA0003126256120000263
将玻璃瓶烘干，N2置换，5g原料042分散于无水二氯甲烷(新制)150ml中，加入4mlDMF促进溶解，冰浴(0±5℃)下缓慢滴加PBr34.3g，反应液逐渐溶清。维持温度搅拌2h，若原料有剩余则补加PBr3至反应完全(TLC监控：原料反应完全DCM/MeOH 20:1展开2次)冰浴(0±5℃)下用饱和NaHCO3溶液调节PH至7，产生大量固体，过滤，柱层析纯化(DCM/MeOH100:1)洗脱得到3g产品，收率54％(LC-MS确证为目标产物)。
实施例45化合物044的制备
Figure GDA0003126256120000271
玻璃瓶烘干，将1g原料7-(甲氧基)-8-羟基-2-(4-甲氧苯基)-10-((2-(三甲基硅基)乙氧基)甲基)-1,11a-二氢-5H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂卓-5,11(10H)-二氧代(化合物007)和用超干DMF溶解，加入0.79g碳酸铯搅拌30min，加入1.5g原料化合物043和0.08g KI 50±5℃搅拌过夜(TLC监控：原料007反应完全DCM/MeOH 30:1)冷却至室温，加入适量水，乙酸乙酯提取4次，饱和NaCl洗涤1次，浓缩得到粗品。柱层析纯化(DCM/MeOH100:1～50:1)得到1.2g产品，收率63％，(LC-MS确证为目标产物)。
实施例46化合物045的制备
Figure GDA0003126256120000272
将1g原料044分散于50ml甲醇加热溶解，降温至室温加入1.32g甲酸铵，0.25g 5％Pd-BaSO4，用适量5％甲酸/甲醇调节PH至7，35±5℃搅拌过夜，次日补加0.25g 5％Pd-BaSO4继续搅拌24h，(TLC监控：原料约剩余10％未反应DCM/MeOH,20:1展开2次)冷却至室温，硅藻土过滤，滤饼用甲醇：二氯甲烷10:1洗涤，滤液40±5℃减压浓缩得到粗品。柱层析纯化(DCM/MeOH 40:1～20:1)得到0.5g产品，原料回收，收率56％，(LC-MS确证为目标产物)。
实施例47化合物046的制备
Figure GDA0003126256120000281
玻璃瓶烘干，绝对N2保护下，将30mg原料045溶于绝对无水四氢呋喃中(新制)，降温至-78℃，缓慢滴加0.07ml三乙基硼氢化锂溶液，搅拌1h-2h,视情况补加三乙基硼氢化锂溶液。(1M新开启25ml规格包装)，(TLC、HPLC跟踪监控：原料反应完全DCM/MeOH 10:1展开2次)维持温度加入适量水淬灭，加入5％柠檬酸溶液调节PH至7，乙酸乙酯提取3次，饱和NaCl洗涤1次，40±5℃浓缩得到25mg粗品。半制备得到10mg产品BL-BDN-007，收率35％。(LC-MS确证为目标产物)。
实施例56毒素细胞活性测定
化合物 hct116 SKOV-3
026(PD-02) 0.36nm 1.04nm
040(PD-01) 209.8nm >2000
046(PD-03) 253.0nm >2000

Claims (8)

1.一种具有式(I)或式(II)的细胞毒药物或其药学上可接受的盐，
Figure FDA0003126256110000011
其中：
Y选自于一个或多个H、C1-4的烷基；
X2选自于卤素或OSO2R5，其中R5可独立的选自于H或苯基；
X1为O；
R1选自于H、P(O)3H2、C(O)NR7R8，其中R7和R8选自H、C1-6烷基、一个或多个F取代的C1-6烷基；
R3为NRhC(O)Ri，其中Rh选自H、C1-15烷基，Ri选自C1-15烷基、苯基或者被羟基取代的苯基；
T选自于C2-C12的亚烷基或T为
Figure FDA0003126256110000012
R2为H；
D1选自下述的药物模块：
Figure FDA0003126256110000013
其中波浪线表示附着至T的位点；
在N和C之间的双线
Figure FDA0003126256110000014
表示双键，在C2和C3之间的双线
Figure FDA0003126256110000015
表示双键,R9不存在并且R10是H；
R12选自被一个或多个取代基可选取代的C5-C10芳基，其中所述取代基选自以下组：卤素、氨基、甲氧基；
模块D1”可被一个或多个R13所取代，其中R13选自H、卤素、硝基、氨基或甲氧基。
2.如权利要求1所述的细胞毒药物或其药学上可接受的盐，其特征在于，R3选自于NRhC(O)Ri,其中Rh选自H，Ri为被羟基取代的苯基。
3.如权利要求1或2所述的细胞毒药物或其药学上可接受的盐，其特征在于，其中R1为H。
4.如权利要求1或2所述的细胞毒药物或其药学上可接受的盐，其特征在于，其中D1为D1’，N和C之间存在双键，以及R12是甲氧基取代的苯基。
5.如权利要求1或2所述的细胞毒药物或其药学上可接受的盐，其特征在于，其中D1为D1”，N和C之间存在双键，以及R13是甲氧基。
6.一种细胞毒药物或其药学上可接受的盐，其特征在于，选自下列化合物：
Figure FDA0003126256110000021
Figure FDA0003126256110000031
7.一种药物组合物，其包含如权利要求1-6任一所述的细胞毒药物或其药学上可接受的盐，以及药学可接受的助流剂，稀释剂或赋形剂。
8.一种如权利要求1-6任一所述的细胞毒药物或其药学上可接受的盐在制备治疗肿瘤、自身免疫疾病或感染性疾病药物的用途。
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