CN109161554B

CN109161554B - 水稻矮化脆杆突变体dbc1的调控基因及其用途

Info

Publication number: CN109161554B
Application number: CN201811154661.4A
Authority: CN
Inventors: 桑贤春; 张晓琼; 史岭; 谢佳; 王晓雯; 何光华; 杨正林; 凌英华
Original assignee: Southwest University
Current assignee: Southwest University
Priority date: 2018-09-30
Filing date: 2018-09-30
Publication date: 2021-09-28
Anticipated expiration: 2038-09-30
Also published as: CN109161554A

Abstract

本发明属于基因工程技术领域，具体涉及水稻矮化脆杆突变体DBC1的调控基因及其用途。本发明通过对水稻矮化脆杆突变体DBC1进行克隆、测序，挖掘出水稻矮化脆杆的调控基因，并实验验证了所述基因具有调控水稻矮化脆杆的作用，为水稻转基因研究提供了有力的工具，可促进高产优质水稻的育种研究。

Description

水稻矮化脆杆突变体DBC1的调控基因及其用途

技术领域

本发明属于基因工程技术领域，具体涉及水稻矮化脆杆突变体DBC1的调控基因及其用途。

背景技术

水稻是我国最重要的粮食作物，约一半以上的人口以其为主食；同时，水稻因基因组较小、具有较高的同源性、是最早测序的禾谷类粮食作物，使其成为了单子叶植物分子生物学研究的模式植物。“绿色革命”和杂交水稻的应用极大提高了水稻单量，对解决我国粮食安全产生了重要意义。秸秆还田是当今世界上普遍重视的一项培肥地力的增产措施，在杜绝了秸秆焚烧所造成的大气污染的同时还有增肥增产作用。此外，秸秆还田能增加土壤有机质，改良土壤结构，使土壤疏松，孔隙度增加，容量减轻，促进微生物活力和作物根系的发育。秸秆还田增肥增产作用显著，一般可增产5％-10％。由于秸秆有韧度，粉碎还田不是件易事，秸秆处理一直是棘手问题。脆杆突变体茎秆适度变脆，有利于秸秆还田，是解决这一矛盾的重要技术措施之一。水稻脆茎突变体一般表现为细胞壁中纤维素和木质素的含量变化，它们常常会改变茎秆机械强度，进而影响水稻抗倒伏性和环境适应性。因此，鉴定茎秆适度变脆、农艺性状不受影响或受影响较小的突变体，对其进行分子水平研究，不仅有助于阐明水稻细胞壁的生物合成机理，而且对选育“脆而不倒”的环保型水稻新品种具有重要的意义。

发明内容

本发明以水稻矮化脆杆突变体为研究对象，通过对水稻矮化脆杆突变体DBC1进行克隆、测序，挖掘出水稻矮化脆杆的调控基因，并实验验证了所述基因具有调控水稻矮化脆杆的作用。

具体的，本发明包括几个方面：

本发明的一个方面涉及一种水稻矮化脆杆突变体DBC1的调控基因，具有如SEQ IDNo.1所示的核苷酸序列，编码的蛋白质具有如SEQ ID No.2所示的氨基酸序列。

本发明的另一个方面涉及上述水稻矮化脆杆突变体DBC1的调控基因在环保型水稻品种选育中的用途。

本发明的再一方面涉及一种环保型水稻品种选育方法，所述方法包括将上述水稻矮化脆杆突变体DBC1的调控基因转化入水稻。

本发明的再一方面涉及一种调控水稻株高的试剂，其主要活性成分为上述水稻矮化脆杆突变体DBC1的调控基因编码的蛋白质、包含上述水稻矮化脆杆突变体DBC1的调控基因的载体、或包含上述水稻矮化脆杆突变体DBC1的调控基因的宿主细胞。

本发明的有益效果为：通过对水稻矮化脆杆突变体DBC1进行克隆、测序，挖掘出水稻矮化脆杆的调控基因，为水稻转基因研究提供了有力的工具，可促进高产优质水稻的育种研究。经过实验验证，该基因具有调控水稻细胞分裂的作用，为改良水稻株型提供了方向。

附图说明

图1为野生型和突变体DBC1的形态鉴定图；

图1A为为播种7天的野生型和突变体dbc1；

图1B为苗期野生型与突变体；

图1C为分蘖期野生型与突变体；

图1D为成熟期野生型和突变体各节间长；

图1E为野生型和突变体各节间长度统计；

图1F为野生型与突变体株高对比；

图2为野生型(WT)和突变体(DBC1)的组织学分析；

图2A为抽穗期野生型第二节茎杆纵切图；

图2B为抽穗期突变体第二节茎杆纵切图；

图2C为野生型的第二叶叶鞘内表皮扫描电镜图；

图2D为突变体的第二叶叶鞘内表皮扫描电镜图；

图2E为野生型和突变体第二节茎杆细胞大小统计图；

图2F为野生型和突变体第二叶叶鞘内表皮细胞大小统计图；

图2G为野生型的倒二节茎杆横切图；

图2H为突变体的倒二节茎杆横切图；

图2I为图2G红色框区域的放大图；

图2J为图2H红色框区域的放大图；

图3为基因DBC1的图位克隆；

图3A为在第2染色体上的分子定位；

图3B为DBC1的基因结构；

图3C为野生型(WT)和dbc1的扩增片段大小；

图3D为野生型和突变体的测序比对；

图3E为野生型和突变体氨基酸序列比对；

图4为DBC1调控基因的表达模式分析；

图5为转基因植株鉴定与表型分析；

图5A为成熟期野生型、突变体和转基因植株；

图5B为野生型，突变体和转基因植株的脆性分析；

图5C为DBC1调控基因在野生型，突变体以及转基因超表达株系中的表达分析；

图6为突变体DBC1对赤霉素GA3的响应及相关基因分析；

图6A为野生型第二叶叶鞘对赤霉素响应实验；

图6B为突变体DBC1第二叶叶鞘赤霉素响应实验；

图6C为野生型和突变体第二叶叶鞘对赤霉素GA3生长响应实验；

图6D为赤霉素生物信号传导相关基因的表达分析；

图6E为赤霉素生物合成相关基因的表达分析；

图6F为赤霉素GA3对野生型和突变体DBC1中GA2ox3的表达影响；

图7为野生型和突变体的根尖分生区细胞形态及周期蛋白表达分析；

图7A为野生型根尖分生区细胞形态；

图7B为突变体根尖分生区细胞形态；

图7C为图7A中红色框区域的放大图；

图7D为图7B中红色框区域的放大图；

图7E为根尖含两个细胞核的单细胞数目统计图；

图7F为周期蛋白表达分析；

附图说明：“*”表示在0.05水平上差异显著，“**”表示在0.01水平上差异显著。

具体实施方式

下面通过具体实施例对本发明进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明的一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本实用发明的实施例，本领域普通技术人员所获得的所有其他实施例，都属于本发明的保护范围。

实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，例如分子克隆实验指南(第三版，J.萨姆布鲁克等著，黄培堂等译，科学出版社，2002年)中所述的条件，或按照制造厂商所建议的条件。

实施例中使用的材料：野生型缙恢10号和水稻矮化脆杆突变体DBC1由西南大学水稻研究所提供；M-MLV逆转录酶、高保真DNA聚合酶PFU、T4DNA连接酶、Trizol试剂盒、DNA凝胶回收试剂盒、质粒提取试剂盒购自TaKaRa公司；氨苄青霉素(Ampicillin,Amp)为Sigma公司产品；引物合成和DNA测序由上海英俊生物技术有限公司完成；其它化学试剂购自北京鼎国生物技术有限责任公司；大肠杆菌DH5α由西南大学水稻研究所提供；表达载体PTCK303均由西南大学水稻所提供。

在前期研究工作中，西南大学水稻研究所提供了：利用EMS诱变优良恢复系缙恢10号获得了一个遗传稳定的水稻矮化脆杆突变体(命名为DBC1)，表现为株高相比野生型明显矮化，脆性明显增加，达显著差异水平，见图1A-F，其中，1E中，PL代表穗长，NL代表穗颈长，FL代表第1节间长，SL代表第2节间长，Bar＝5cm，“*”表示在0.05水平上差异显著，“**”表示在0.01水平上差异显著。用表型正常的不育系中花11与突变体DBC1杂交，F1代表型正常，说明该突变体受隐性基因控制。F2代群体中出现明显的分离，分别表现双亲性状。经卡方测验，正常株﹕突变株符合3∶1分离比，表明DBC1突变体受隐性单基因控制。通过石蜡切片和电子显微镜(参照博士学位论文：水稻维管束发育相关基因AVB基因的图位克隆和功能分析，2016年，33-34页)进行细胞学观察发现，细胞的大小与野生型相比无显著差异，即通过影响细胞数目从而引起株高矮化，见图2A-F，其中2A-2D中，Bar＝100μm，2E-2F中，n＝50。另外，该基因影响了茎杆中维管束的结构，木质部相对面积增加，见图2G-J，其中，2G-J种，Bar＝200μm，2I-J中，Bar＝50μm。以中花11/DBC1杂交的F2群体作为定位群体，共获得600个突变株，用于基因定位。选用400对均匀分布于12条染色体上的SSR标记对F2代定位群体突变单株进行单株验证(参照硕士学位论文：水稻叶缘白化突变体mal的遗传分析与基因定位，2014年，22页)，结果将连锁定位于2染色体上的Ind标记Indel02-2和Indel02-7与DBC1突变位点表现连锁。在两标记间进一步设计Indel引物，其中Indel02-1-Indel02-7、在两亲本间都表现出多态性，引物序列祥见表1，最终将DBC1定位在Indel标记Indel02-4和Indel02-5之间，物理距离为86.7kb，见图3A。

表1基因精细定位所用引物及其序列

实施1：水稻矮化脆杆突变基因DBC1的克隆、测序及功能验证

1、水稻矮化脆杆基因DBC1的克隆及测序

在前期对突变基因DBC1精细定位的基础上，本发明通过在线基因预测(http://mendel.cs.rhul.ac.uk)、BLAST在线比对(http://blast.ncbi.nlm.nih.gov/)及基因超表达功能分析。通过图位克隆，序列比对发现，该基因是由于基因LOC_Os02g50550的第5内含子的第5碱基由正常的C突变为T。由于基因转录后需要进行修饰、剪切和拼接，即内含子突变可能会影响前体信使RNA的剪切编辑。因此，在cDNA上设计一对相距550bp左右的引物P1，P2，包含突变位点，见图3B，其中灰色盒子代表外显子，黑色连线代表内含子，下划线标示第五外显子，红色碱基代表突变位点。PCR扩增片段经凝胶电泳显示，突变体DBC1的条带相对低于野生型，可能有大片段的缺失，见图3C-D。克隆基因DBC1转入表达载体pMD19-T，挑斑，检测，送阳性菌液测序。比对结果显示，突变体相较于野生型有62bp的缺失，该片段的缺失正好位于第五外显子处，见图3E。即，突变体DBC1第5内含子的单碱基突变导致第5外显子的整体缺失。对野生型和突变体的氨基酸序列比对发现，该基因突变导致GTP结构域发生变化。

2、水稻矮脆基因DBC1的功能验证

通过实时荧光定量qPCR对野生型和突变体的LOC_Os02g50550进行表达量分析发现，(参照博士学位论文：水稻小穗发育相关基因MFS1的图位克隆与功能分析，2013年，29页)突变体DBC1中LOC_Os02g50550基因的表达量相对野生型明显下调，且LOC_Os02g50550在水稻各个部位均有表达，在植株茎秆和顶端分生组织中表达最高，见图4。然后，本发明构建了以野生型缙恢的LOC_Os02g50550基因的cDNA为模板，扩增的片段连接到表达载体pTCK303上，构建pTCK303-DBC1OE基因超表达载体，通过农杆菌介导遗传转化到突变体DBC1中。观察转基因株系表型发现，它们的表型与野生型相似，基本恢复正常。初步确定了LOC_Os02g50550为水稻矮化脆性突变基因DBC1的候选野生型基因，见图5A-C。

实施例2：水稻矮脆突变基因DBC1的激素响应实验分析

1)将突变体和野生型种子催芽，选取露白一致的种子分别播在含有0、10^-10、10^-8、10^-6和10^-4μM赤霉素(GA)的营养液中，放置于恒温培养箱中培养。每天分别添加等量的营养液和含相应浓度赤霉素的营养液。每隔24小时测量统计第二叶鞘的长度变化，至两叶一心期。并在一叶一心期(约第7天)取各处理下的叶片，提取RNA，并反转录成cDNA，保存备用。结果发现，当赤霉素浓度低于10^-8μM时，野生型和突变体第二叶叶鞘的生长与空白对照组几乎无差异；当浓度上升至10^-6μM，植株开始迅速增长，野生型和突变体叶鞘长度差异增大；随着浓度继续上升，野生型和突变体的第二叶叶鞘长度差也逐之增大，见图6A-C。

2)定量PCR分析

植物的生长与激素合成代谢密不可分。取一叶一心期野生型和突变体的地上部分，提取RNA，反转录成cDNA第一链，利用定量PCR分析水稻中参与赤霉素生物合成基因GA2ox-1、GA2ox-3、GA20ox-1、GA20ox-2/SD1、GA3ox-2/D18、氨甲酰磷酸合成酶(CPS1)，和信号传导通路基因MYB61、NAC29、NAC31、SLR1和GID1在野生型和突变体中的表达差异。同时，检测不同浓度处理下的野生型和突变体中赤霉素灭活基因GA2ox-3的表达情况。定量引物序列见表2。结果显示：MYB61、GID1和NAC29在突变体中的表达量降低，SLR1和NAC31表达量升高，见图6D。另外，突变体DBC1中的GA2ox-3表达量显著高于野生型，除此之外，GA20ox-1和GA20ox-2/SD1在突变体中的表达量显著低于野生型，见图6E,其中，ACTIN基因作为内参基因。GA2ox-3是赤霉素灭活基因，外施赤霉素或者内源赤霉素含量增加，GA2ox-3的表达会随之升高。因此，用水和不同浓度的赤霉素处理露白一致的野生型和突变体种子，并在光照、温度及湿度适合的条件下培养。分析不同浓度下GA2ox-3在两者之间的表达差异及表达趋势。由图6F可知，与赤霉素响应实验结果趋势一致，在浓度为10^-6μM时，表达量开始出现差异。随浓度上升，GA2ox-3在野生型和突变体中的表达都随之升高，且在突变体中的表达上调更快。这可能解释了外源赤霉素增加，株高变化缓慢的现象。

表2定量PCR引物序列

实施例3：突变体DBC1的细胞分裂速度实验

石蜡切片分析根尖生长点细胞，相同细胞数目下，DBC1中双核单细胞的平均数量是7.4个，野生型中为4.1个，呈显著水平，见图7A-E。这暗示着突变体细胞分裂速度减慢。RT-PCR分析野生型、突变体以及超表达株系OE-1中细胞周期蛋白相关基因的表达变化，RT-PCR定量引物序列见表3，结果表明，突变体中的相关周期蛋白基因的表达量相比野生型降低；在转基因株系中CycB，CycD，CycP和CycT的表达都有所恢复，见图7F。这就进一步说明了突变体DBC1的细胞分裂速度减缓。即，该基因的突变引起细胞分裂速度减缓。

表3周期蛋白RT-PCR定量引物序列

以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所有的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

序列表

<110> 西南大学

<120> 水稻矮化脆杆突变体DBC1的调控基因及其用途

<160> 2

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 9497

<212> DNA/RNA

<213> 水稻(Oryza sativa)

<400> 1

caaccacatc acatcacacc agacgccacc acgccccccg agatctctcc cacccccgac 60

cagcctcgag atcccagcgc ccatgtcgtc gtcggccatg gaggccatgg acgagctcgt 120

ccagctcgcc gagtccatgc gccaggccgc ctccctcctg gccgacgacg acccctccga 180

cgaggccagc ccgcgccgcc cctccacctt cctcaacgcc gtcgcgctcg gcaacgtcgt 240

aagtgttttg cttccaccgg agccgccgcc gccgccgccc gcggcagctc cccctctctc 300

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accttagact tgtaatttta cagtccttgt ggttccagtt cacattcgat gattcaaact 5940

aaaaaagttg tgtgcacaac tatgagagat gagatatgaa cttaataaca caatttgctg 6000

cgtgagtcag gaatgtaatc tggaagagat agaagaggaa gagctttcca agagtttgaa 6060

ggattcaaag aaggccaatg gggcagagaa aggcccaagt cttgtattta agattactaa 6120

cagagttgcc tacaaaactg tgctgaaatg ttagtgtctc taaacgttat atgctgaggt 6180

tttaaatgct aattatgttg cttaaagtgt gaatttcatg ttgcagctca tagtgctgtt 6240

atactgaagg ccgagactat tgctgacaag gttgaatgga tgaagaagat aagaggtgtc 6300

attcaaagca aagggggttc tgtgaagggt ttaaatactc ctgagggtgg ttccatgagg 6360

caaagccatt ctgatgggtc ccttgtatgt tccttatttg acatttttta tgctattgtc 6420

attgtaaagc ttttaacatc tacaattctg agttattgcc taagctattt ttaccctctc 6480

ttcagtggat gcttgtggca agttttctac tttaccagtg accatgttta tcatttgaat 6540

ttctctaaga aattaaagcc acttgttttg tgcaactatc ttaactgaac actcatatca 6600

acctgttcca ctttcccacg gccatgatta ttttttgaat gtgtcaaaca caaattttga 6660

attgcctgtg acacaattac tctcccttaa ggatacgatg gcccggaagc ctgctgatcc 6720

tgaagaagaa cttcggtgga tgtctcaaga agttcgtggt tatgtagagg ctgttttgaa 6780

cagtttggca gcaaatgttc caaaggttta catttgaacc tcacaattgt ttcaacagtc 6840

atactatttt ttaaactcaa tttaacatgg tcatagttgc aattgttatt attgtctttt 6900

tcatgatcag gcaatcgtac tttgccaagt ggagaaagca aaggaagata tgctaaatca 6960

gctctacagc aaaataaggt ttgatgcgta ttctttcttt gtatttgtgc attgcataag 7020

gtttcgcttc tttctttttc tccactaaat ggacataccc ctagatggaa ctgcattgac 7080

cttaagtata gatattgtct tttttttttt ccttttcaac tcagttttct cttgttaaca 7140

cgccactgtt aacacttgga tcagttgtta acaagtgaaa actgccaaca caaagacttt 7200

ggtgagcacc tgcagatatt tcactaaatg gatataccct tagttttcct ttttcaactt 7260

aaaggactta ctgcaatgtc tgcaggcgct actgaacatt gttcgcataa ctcatatttt 7320

atttattatt tttatttcta ttcatgacat tccttcacat ggcatatcac aagtagatac 7380

atgacatatg gtgcactaaa tggtagaaat tccattaagt aaagcacacc tgaaaaaata 7440

aaactgttac acgctccaca tacatgttaa gtgtttattt catagtcatt ctgttccttt 7500

tgtaacttgc tgctaatctt gttacaactc tcatcattag tgctcaaacc aatgcaaaga 7560

ttgaagaact tctccaagag gaccacaatg ctaaacgtag acgggagaag taccaaaaac 7620

aatcatctct attgtcaaag cttactcgtc agcttagtat ccatgacaat agagcttctg 7680

ttgcatcgta taccaatgat agttctggag ctggtaagtt ggctacattt caaatactta 7740

gttgatagta gcaaatgcaa tagttttgtg tgcttgcaaa tttgtccatt tcttttgtag 7800

gtgtgttttc ttttcttctg aactttaatt ggttgttttc ccatcataat attgagtttt 7860

cctagtctat tttctgcaag ccaatggaat ttactacgat ggccatgttt gaaaccttgt 7920

tgaattacaa ctcatctgat catgaccata attgttctgc cacatgaaca agcacttcag 7980

gacagcacga gtacatatga tggttcaact ttagcagaat ttgtgtgatg acaacttagc 8040

atgaaaatta agataactaa aacttagcaa gtttgctttg ctgcctcttc atctagggaa 8100

gtattaagta gaacaccacc aatttagtgc aatcactgaa accatcacca aacaaattgt 8160

gtacaaattt gctcaaaatc atatgcaagg gaagtgatac tatattatac aacctaaatt 8220

tcgatatctc aatatcataa tcaatttcgt ttggaagatc aaaatttgaa atttagagat 8280

agtatgctaa gggtattagc acgcatcttc atgttttgca tgatcatgac tgtcagcttc 8340

aaaacttcag atctcattag ttcacaaaca agcctgaata ctgcaatatg ataggttctc 8400

atactaggtg agggttttat ctaactattc tgttgccatt aaggttgggt cgatgatgac 8460

attgcatgca tcattttgcc aaaacataag agggtaatgc tggcctaggt tcatgggtaa 8520

caacatcatc ttggtaatct ggtttatatt catggcccat gtttgccagc tattcttgtc 8580

atagtttggg cattgcaatt attggaaatt ttaatggcac aagtctgcaa ccatgatttg 8640

taaattttaa cagaaatgac gataactgaa caagataaat gacctagctg atatctagct 8700

aataacaact gagcaagaca gaacacttgc tgttcacatt taaattttcc tgcatattct 8760

agaagtgtct actatctgtg actctgtata tggattgaga ctgcgtagat ataatggtga 8820

atgattttgt attttcgttc atatttcttt ggctacctgg taggaaatat caagcactta 8880

atcctgacta aacaaaacaa atcatttgca gagagtagcc cacggacctc tggccagtca 8940

ggtgaggact ggaggtctgc gttcgattct gcatcaaatg gctctgttga tcgatccagt 9000

tcacacaatg aaacaaggtc aagaagtgct gacagccgtg gcaaacgcta tgaaaatggg 9060

gacgtgaatg gtggtaactc tggcagccga cgcacaccaa accgtttgcc accagcacct 9120

ccagggcaaa aatattaagc atgttgatca tcatccgcca acatcatatt ttcatgctag 9180

gtatgaagta caacggaatt gatgcatcga gaaccatttg attcaggggg atggcatgca 9240

tgggctcgaa gaatagagct gacgagagat ttgcatgaat ggtgtgtatc cagaggatct 9300

cagttgttca tagaaatata ctcctatagt ttatctacag ttgtttcacg atcattttgg 9360

catattgatc tgtctgaggc tcgctcagcc tgtgggtgtg ggattttgtt accacagatc 9420

ggttgatctt ggtcttgtac tctgctgttg taattcttcc atcaacttgg caatgtatta 9480

tttcttccat tcttttt 9497

<210> 2

<211> 899

<212> PRT

<213> 水稻(Oryza sativa)

<400> 2

Cys Arg Arg Arg Pro Trp Arg Pro Trp Thr Ser Ser Ser Ser Ser Pro

1 5 10 15

Ser Pro Cys Ala Arg Pro Pro Pro Ser Trp Pro Thr Thr Thr Pro Pro

20 25 30

Thr Arg Pro Ala Arg Ala Ala Pro Pro Pro Ser Ser Thr Pro Ser Arg

35 40 45

Ser Ala Thr Ser Ala Pro Ala Ser Arg Pro Cys Ser Thr Ala Ser Ser

50 55 60

Ala Thr Pro Cys Cys Arg Arg Val Arg Thr Gly Arg Arg Gly Arg Arg

65 70 75 80

Trp Ser Thr Cys Arg Gly Ile Arg Gly Ala Ala Asn Pro Ser Ser Cys

85 90 95

Arg Ser Thr Ala Ser Arg Ser Arg Cys Arg Gln Val Leu Ser Ala Ile

100 105 110

Arg Cys Arg Thr Gly Ala Arg Gly Arg Pro Val Asp Gln Gly Lys Ala

115 120 125

Glu Thr Met Arg Phe Thr Ser Ser Cys Gly Gln Val Gln Ile Ser Glu

130 135 140

Tyr Ala Gly His Asn Asp Ala Ile Leu Ile Val Val Ile Pro Ala Met

145 150 155 160

Gln Ala Ala Asp Val Ala Ser Ser Arg Ala Leu Arg Leu Ala Lys Asp

165 170 175

Ile Asp Pro Asp Gly Thr Arg Thr Ile Gly Val Leu Ser Lys Ile Asp

180 185 190

Gln Ala Ser Ala Asp Ala Lys Thr Val Ser Cys Val Gln Ala Ile Leu

195 200 205

Ser Asn Lys Gly Ala Pro Arg Ala Ala Ala Glu Ile Glu Trp Val Ala

210 215 220

Leu Ile Gly Gln Ser Val Ser Ile Ala Ser Ala Gln Ala Gly Ser Val

225 230 235 240

Gly Ser Glu Asn Ser Leu Glu Thr Ala Trp Gln Ala Glu Ala Glu Thr

245 250 255

Leu Lys Ser Ile Leu Thr Gly Ala Pro Arg Ser Lys Leu Gly Arg Ile

260 265 270

Ala Leu Val Asp Thr Ile Ala Lys Gln Ile Arg Lys Arg Met Lys Ile

275 280 285

Arg Leu Pro Asn Leu Leu Ser Gly Leu Gln Gly Lys Ser Gln Ile Val

290 295 300

Gln Asn Glu Leu Ala Arg Leu Gly Glu Gln Met Val Ser Ser Ala Glu

305 310 315 320

Gly Thr Arg Ala Val Ala Leu Glu Leu Cys Arg Glu Phe Glu Asp Lys

325 330 335

Phe Leu Ala His Val Thr Ser Gly Glu Gly Ser Gly Trp Lys Ile Val

340 345 350

Ala Ser Phe Glu Gly Lys Phe Pro Asp Arg Ile Lys Gln Leu Pro Leu

355 360 365

Asp Arg His Phe Asp Ile Asn Asn Val Lys Arg Ile Val Leu Glu Ala

370 375 380

Asp Gly Tyr Gln Pro Tyr Leu Ile Ser Pro Glu Lys Gly Leu Lys Ser

385 390 395 400

Leu Ile Lys Gly Val Leu Glu Met Ala Lys Glu Pro Ser Arg Leu Cys

405 410 415

Val Glu Glu Val His Arg Val Leu Leu Asp Ile Val Asn Ala Ser Ala

420 425 430

Asn Ala Thr Pro Gly Leu Gly Arg Tyr Pro Pro Phe Lys Arg Glu Val

435 440 445

Val Glu Ile Ala Thr Asn Ala Leu Asp Val Phe Lys Ser Asp Ala Lys

450 455 460

Lys Met Val Val Ala Leu Val Asp Met Glu Arg Ala Phe Val Pro Pro

465 470 475 480

Gln His Phe Ile Arg Leu Val Gln Arg Arg Met Glu Arg Gln Arg Arg

485 490 495

Glu Asp Glu Val Lys Asn Arg Ser Ser Lys Lys Ala Gln Asp Ala Glu

500 505 510

Gln Ser Asn Lys Gly Ser Gly Thr Gly Ser Glu Gln Ser Gly Gly Ala

515 520 525

Leu Lys Ser Leu Lys Glu Lys Phe Ser Gln Gln Asp Lys Asp Lys Asp

530 535 540

Ala Lys Glu Gly Pro Asn Leu Gln Val Ala Gly Pro Gly Gly Glu Ile

545 550 555 560

Thr Ala Gly Tyr Leu Leu Lys Lys Ser Ala Lys Asn Asn Glu Trp Ser

565 570 575

Lys Arg Trp Phe Val Leu Asn Glu Lys Ser Gly Lys Leu Gly Tyr Thr

580 585 590

Lys Lys Gln Glu Glu Arg His Phe Arg Gly Val Ile Val Leu Glu Glu

595 600 605

Cys Asn Leu Glu Glu Ile Glu Glu Glu Glu Leu Ser Lys Ser Leu Lys

610 615 620

Asp Ser Lys Lys Ala Asn Gly Ala Glu Lys Gly Pro Ser Leu Val Phe

625 630 635 640

Lys Ile Thr Asn Arg Val Ala Tyr Lys Thr Val Leu Lys Ser His Ser

645 650 655

Ala Val Ile Leu Lys Ala Glu Thr Ile Ala Asp Lys Val Glu Trp Met

660 665 670

Lys Lys Ile Arg Gly Val Ile Gln Ser Lys Gly Gly Ser Val Lys Gly

675 680 685

Leu Asn Thr Pro Glu Gly Gly Ser Met Arg Gln Ser His Ser Asp Gly

690 695 700

Ser Leu Asp Thr Met Ala Arg Lys Pro Ala Asp Pro Glu Glu Glu Leu

705 710 715 720

Arg Trp Met Ser Gln Glu Val Arg Gly Tyr Val Glu Ala Val Leu Asn

725 730 735

Ser Leu Ala Ala Asn Val Pro Lys Ala Ile Val Leu Cys Gln Val Glu

740 745 750

Lys Ala Lys Glu Asp Met Leu Asn Gln Leu Tyr Ser Lys Ile Ser Ala

755 760 765

Gln Thr Asn Ala Lys Ile Glu Glu Leu Leu Gln Glu Asp His Asn Ala

770 775 780

Lys Arg Arg Arg Glu Lys Tyr Gln Lys Gln Ser Ser Leu Leu Ser Lys

785 790 795 800

Leu Thr Arg Gln Leu Ser Ile His Asp Asn Arg Ala Ser Val Ala Ser

805 810 815

Tyr Thr Asn Asp Ser Ser Gly Ala Glu Ser Ser Pro Arg Thr Ser Gly

820 825 830

Gln Ser Gly Glu Asp Trp Arg Ser Ala Phe Asp Ser Ala Ser Asn Gly

835 840 845

Ser Val Asp Arg Ser Ser Ser His Asn Glu Thr Arg Ser Arg Ser Ala

850 855 860

Asp Ser Arg Gly Lys Arg Tyr Glu Asn Gly Asp Val Asn Gly Gly Asn

865 870 875 880

Ser Gly Ser Arg Arg Thr Pro Asn Arg Leu Pro Pro Ala Pro Pro Gly

885 890 895

Gln Lys Tyr

Claims

1.水稻矮化脆杆突变体DBC1的调控基因，编码的蛋白质的氨基酸序列如SEQ ID No.2所示。

2.权利要求1所述的水稻矮化脆杆突变体DBC1的调控基因在环保型水稻品种选育中的用途。

3.一种环保型水稻品种选育方法，所述方法包括将权利要求1中所述的水稻矮化脆杆突变体DBC1的调控基因转化入水稻。

4.调控水稻株高的试剂，其主要活性成分为权利要求1中所述的水稻矮化脆杆突变体DBC1的调控基因编码的蛋白质、包含权利要求1中所述的水稻矮化脆杆突变体DBC1的调控基因的载体、或者包含权利要求1中所述的水稻矮化脆杆突变体DBC1的调控基因的宿主细胞。