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CN108761064A - 一种辣根过氧化物酶标记抗体用稀释液及其制备方法 - Google Patents

一种辣根过氧化物酶标记抗体用稀释液及其制备方法 Download PDF

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CN108761064A
CN108761064A CN201810488799.1A CN201810488799A CN108761064A CN 108761064 A CN108761064 A CN 108761064A CN 201810488799 A CN201810488799 A CN 201810488799A CN 108761064 A CN108761064 A CN 108761064A
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CN
China
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horseradish peroxidase
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peroxidase conjugates
dilution
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CN201810488799.1A
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凌云
凌天阳
金可心
夏戊君
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SUZHOU YOUJUN ENVIRONMENTAL SCIENCE AND TECHNOLOGY Co Ltd
Original Assignee
SUZHOU YOUJUN ENVIRONMENTAL SCIENCE AND TECHNOLOGY Co Ltd
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    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/531—Production of immunochemical test materials
    • G01N33/532—Production of labelled immunochemicals
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Abstract

本发明公开了一种辣根过氧化物酶标记抗体用稀释液及其制备方法，由以下组分按重量份数配比组成：磷酸氢二钾51～83份，磷酸二氢钾48～78份，氯化钠26～37份，氯化镁19～31份，蔗糖4～11份，山羊IgG11～21份，马血清2～5份，吐温‑20 2～4份，叠氮化钠1～3份，去离子水300～400份。本发明利用各组分之间的协同作用，制备获得的辣根过氧化物酶标记抗体用稀释液，在抗体标记辣根过氧化物酶用该稀释液制成工作液，保证试剂的具有良好的重复性、准确度。

Description

一种辣根过氧化物酶标记抗体用稀释液及其制备方法
技术领域
本发明涉及生物领域，尤其涉及一种辣根过氧化物酶标记抗体用稀释液及其制备方法。
背景技术
免疫分析技术被广泛应用于生物分子的检测。免疫标记技术是将某种可微量测定或超微量测定的物质标记于抗体上制成标记物，加入到抗原-抗体的反应体系中发生反应，通过检测标记物的含量间接反映待测样本的含量多少。以该标记技术为主的免疫学检测以其灵敏度高、准确性好、便于操作、重复性好等优势，逐步成为主流免疫学检验技术。其中辣根过氧化物酶因其标记技术成熟，方法简单，性价比高，成为多种可测定标识物中优选。同时，以辣根过氧化物酶标记的抗体要与相匹配的抗体共同捕获抗原，除了抗体自身结合位点的对应，还需要适合的缓冲体系，才能保证试剂的重复性、准确度。
发明内容
本发明解决的技术问题：为了获得一种辣根过氧化物酶标记抗体用稀释液，保证抗体标记辣根过氧化物酶制成工作液后，试剂具有较好的重复性、准确度，本发明提供了一种碱性磷酸酶标记抗体用稀释液及其制备方法。
技术方案：一种辣根过氧化物酶标记抗体用稀释液，由以下组分按重量份数配比组成：磷酸氢二钾51～83份，磷酸二氢钾48～78份，氯化钠26～37份，氯化镁19～31份，蔗糖4～11 份，山羊IgG11～21份，马血清2～5份，吐温-20 2～4份，叠氮化钠1～3份，去离子水300～400 份。
优选的一种辣根过氧化物酶标记抗体用稀释液由以下组分按重量份数配比组成：磷酸氢二钾65份，磷酸二氢钾58份，氯化钠31份，氯化镁25份，蔗糖7份，山羊IgG16份，马血清3份，吐温-20 3份，叠氮化钠1份，去离子水350份。
一种辣根过氧化物酶标记抗体用稀释液的制备方法，包含以下步骤：
第1步、将去离子水盛入烧杯内，以100～150rpm的搅拌速度边搅拌边加入磷酸氢二钾、磷酸二氢钾、氯化钠、氯化镁、蔗糖，全部加入后再搅拌30～50min；
第2步、调节第1步得到的溶液pH至6.5～7.4；
第3步、在第2步所得溶液中加入山羊IgG、马血清，并以50～90rpm的搅拌速度搅拌15～25min；
第4步、将吐温-20、叠氮化钠加入第3步所得溶液内，并以30～70rpm的搅拌速度搅拌 20～40min，即可制得辣根过氧化物酶标记抗体用稀释液。
优选的，第1步中加入的磷酸氢二钾、磷酸二氢钾、氯化钠、氯化镁、蔗糖，需等上一份试剂溶解后再加入下一份试剂。
优选的，第1步中将去离子水盛入烧杯内，以120rpm的搅拌速度边搅拌边加入磷酸氢二钾、磷酸二氢钾、氯化钠、氯化镁、蔗糖，全部加入后再搅拌40min。
优选的，第2步中调节第1步得到的溶液pH至7.1。
优选的，第3步中在第2步所得溶液中加入山羊IgG、马血清，并以80rpm的搅拌速度搅拌20min。
优选的，第4步中将吐温-20、叠氮化钠加入第3步所得溶液内，并以40rpm的搅拌速度搅拌30min，即可制得辣根过氧化物酶标记抗体用稀释液。
有益效果：本发明利用各组分之间的协同作用，制备获得的辣根过氧化物酶标记抗体用稀释液，在抗体标记辣根过氧化物酶用该稀释液制成工作液，保证试剂的具有良好的重复性、准确度。
具体实施方式
实施例1
一种辣根过氧化物酶标记抗体用稀释液，由以下组分按重量份数配比组成：磷酸氢二钾 65份，磷酸二氢钾58份，氯化钠31份，氯化镁25份，蔗糖7份，山羊IgG16份，马血清3份，吐温-20 3份，叠氮化钠1份，去离子水350份。
一种辣根过氧化物酶标记抗体用稀释液的制备方法，包含以下步骤：
第1步、将去离子水盛入烧杯内，以120rpm的搅拌速度边搅拌边加入磷酸氢二钾、磷酸二氢钾、氯化钠、氯化镁、蔗糖，等上一份试剂溶解后再加入下一份试剂，全部加入后再搅拌40min；
第2步、调节第1步得到的溶液pH至7.1；
第3步、在第2步所得溶液中加入山羊IgG、马血清，并以80rpm的搅拌速度搅拌20min；
第4步、将吐温-20、叠氮化钠加入第3步所得溶液内，并以40rpm的搅拌速度搅拌30min，即可制得辣根过氧化物酶标记抗体用稀释液。、
实施例2
一种辣根过氧化物酶标记抗体用稀释液，由以下组分按重量份数配比组成：磷酸氢二钾 56份，磷酸二氢钾58份，氯化钠30份，氯化镁27份，蔗糖6份，山羊IgG17份，马血清3份，吐温-20 3份，叠氮化钠1份，去离子水300份。
一种辣根过氧化物酶标记抗体用稀释液的制备方法，包含以下步骤：
第1步、将去离子水盛入烧杯内，以100rpm的搅拌速度边搅拌边加入磷酸氢二钾、磷酸二氢钾、氯化钠、氯化镁、蔗糖，等上一份试剂溶解后再加入下一份试剂，全部加入后再搅拌50min；
第2步、调节第1步得到的溶液pH至6.9；
第3步、在第2步所得溶液中加入山羊IgG、马血清，并以80rpm的搅拌速度搅拌20min；
第4步、将吐温-20、叠氮化钠加入第3步所得溶液内，并以50rpm的搅拌速度搅拌30min，即可制得辣根过氧化物酶标记抗体用稀释液。
实施例3
一种辣根过氧化物酶标记抗体用稀释液，由以下组分按重量份数配比组成：磷酸氢二钾 68份，磷酸二氢钾71份，氯化钠31份，氯化镁27份，蔗糖8份，山羊IgG17份，马血清4份，吐温-20 4份，叠氮化钠1份，去离子水380份。
一种辣根过氧化物酶标记抗体用稀释液的制备方法，包含以下步骤：
第1步、将去离子水盛入烧杯内，以120rpm的搅拌速度边搅拌边加入磷酸氢二钾、磷酸二氢钾、氯化钠、氯化镁、蔗糖，等上一份试剂溶解后再加入下一份试剂，全部加入后再搅拌35min；
第2步、调节第1步得到的溶液pH至6.8；
第3步、在第2步所得溶液中加入山羊IgG、马血清，并以80rpm的搅拌速度搅拌20min；
第4步、将吐温-20、叠氮化钠加入第3步所得溶液内，并以60rpm的搅拌速度搅拌35min，即可制得辣根过氧化物酶标记抗体用稀释液。
实施例4
将实施例1～3制备获得的辣根过氧化物酶标记抗体用稀释液用于抗体稀释，对其进行重复性试验与准确度试验，结果如下：
重复性试验(％) 准确度试验(％)
实施例1 4.9 7.7
实施例2 6.8 8.1
实施例3 5.7 9.5

Claims (8)

1.一种辣根过氧化物酶标记抗体用稀释液，其特征在于，由以下组分按重量份数配比组成：磷酸氢二钾51～83份，磷酸二氢钾48～78份，氯化钠26～37份，氯化镁19～31份，蔗糖4～11份，山羊IgG11～21份，马血清2～5份，吐温-20 2～4份，叠氮化钠1～3份，去离子水300～400份。
2.根据权利要求1所述一种辣根过氧化物酶标记抗体用稀释液，其特征在于，由以下组分按重量份数配比组成：磷酸氢二钾65份，磷酸二氢钾58份，氯化钠31份，氯化镁25份，蔗糖7份，山羊IgG16份，马血清3份，吐温-20 3份，叠氮化钠1份，去离子水350份。
3.权利要求1所述一种辣根过氧化物酶标记抗体用稀释液的制备方法，其特征在于，包含以下步骤：
第1步、将去离子水盛入烧杯内，以100～150rpm的搅拌速度边搅拌边加入磷酸氢二钾、磷酸二氢钾、氯化钠、氯化镁、蔗糖，全部加入后再搅拌30～50min；
第2步、调节第1步得到的溶液pH至6.5～7.4；
第3步、在第2步所得溶液中加入山羊IgG、马血清，并以50～90rpm的搅拌速度搅拌15～25min；
第4步、将吐温-20、叠氮化钠加入第3步所得溶液内，并以30～70rpm的搅拌速度搅拌20～40min，即可制得辣根过氧化物酶标记抗体用稀释液。
4.根据权利要求3所述一种辣根过氧化物酶标记抗体用稀释液的制备方法，其特征在于，第1步中加入的磷酸氢二钾、磷酸二氢钾、氯化钠、氯化镁、蔗糖，需等上一份试剂溶解后再加入下一份试剂。
5.根据权利要求3所述一种辣根过氧化物酶标记抗体用稀释液的制备方法，其特征在于，第1步中将去离子水盛入烧杯内，以120rpm的搅拌速度边搅拌边加入磷酸氢二钾、磷酸二氢钾、氯化钠、氯化镁、蔗糖，全部加入后再搅拌40min。
6.根据权利要求3所述一种辣根过氧化物酶标记抗体用稀释液的制备方法，其特征在于，第2步中调节第1步得到的溶液pH至7.1。
7.根据权利要求3所述一种辣根过氧化物酶标记抗体用稀释液的制备方法，其特征在于，第3步中在第2步所得溶液中加入山羊IgG、马血清，并以80rpm的搅拌速度搅拌20min。
8.根据权利要求3所述一种辣根过氧化物酶标记抗体用稀释液的制备方法，其特征在于，第4步中将吐温-20、叠氮化钠加入第3步所得溶液内，并以40rpm的搅拌速度搅拌30min，即可制得辣根过氧化物酶标记抗体用稀释液。
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