JPH06242112A - 塩基解離アッセイ - Google Patents
塩基解離アッセイInfo
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- JPH06242112A JPH06242112A JP5295568A JP29556893A JPH06242112A JP H06242112 A JPH06242112 A JP H06242112A JP 5295568 A JP5295568 A JP 5295568A JP 29556893 A JP29556893 A JP 29556893A JP H06242112 A JPH06242112 A JP H06242112A
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Abstract
(57)【要約】
【構成】 サンプル中の抗原の検出を増進するための方
法であって、抗体と免疫結合した前記抗原を含み得るサ
ンプルを塩基性ｐＨ溶液で約８．０以上のｐＨに調節
し、免疫結合体を解離させると共に抗原を遊離させ、調
節したサンプルをイムノアッセイにかけ、前記サンプル
中の抗原と固体支持体に結合した抗体との新規免疫結合
体を形成させ、新規免疫結合体の有無を検出し、前記抗
原の有無を決定する段階とを含む方法。 【効果】 該試薬及び方法によって、ヒト免疫不全ウイ
ルスＨＩＶ−１ ｐ２４コアタンパク質の検出が増大さ
れる。
法であって、抗体と免疫結合した前記抗原を含み得るサ
ンプルを塩基性ｐＨ溶液で約８．０以上のｐＨに調節
し、免疫結合体を解離させると共に抗原を遊離させ、調
節したサンプルをイムノアッセイにかけ、前記サンプル
中の抗原と固体支持体に結合した抗体との新規免疫結合
体を形成させ、新規免疫結合体の有無を検出し、前記抗
原の有無を決定する段階とを含む方法。 【効果】 該試薬及び方法によって、ヒト免疫不全ウイ
ルスＨＩＶ−１ ｐ２４コアタンパク質の検出が増大さ
れる。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は抗原、特に抗原に対応す
るか又は交差反応する抗体と免疫結合した抗原を検出す
るための新規試薬及びイムノアッセイにおける前記試薬
の使用方法に係る。特に、この試薬及び方法はヒト免疫
不全ウイルスＨＩＶ−１ ｐ２４コア抗原の検出を増進
する。
るか又は交差反応する抗体と免疫結合した抗原を検出す
るための新規試薬及びイムノアッセイにおける前記試薬
の使用方法に係る。特に、この試薬及び方法はヒト免疫
不全ウイルスＨＩＶ−１ ｐ２４コア抗原の検出を増進
する。
【０００２】
【従来の技術及び発明が解決しようとする課題】免疫学
的に活性な抗原を含有する生物学的サンプル（通常は血
清又は血漿であるが、尿、脳脊髄液又は他の体液でもよ
い）は、これらの抗原と反応する量の抗体も同時に含む
場合が多い。これらの抗体は存在する抗原と結合して免
疫結合体を形成する。これらの免疫結合体は抗原上に存
在する結合部位を固定することにより抗原の検出を妨げ
得る。これは、サンプルがこのような抗原を含有してい
るか否かをイムノアッセイで試験する場合に特に問題と
なる。一般に、イムノアッセイは着目抗原に特異的な抗
体を含み、従って、抗原を捕獲するか又は抗原との免疫
結合体を形成するために抗原上の結合部位に接近するこ
とが必要である。抗原上の全結合部位がサンプル中に存
在する抗体と結合するならば、イムノアッセイで抗原は
捕獲されず、抗原は検出されない。
的に活性な抗原を含有する生物学的サンプル（通常は血
清又は血漿であるが、尿、脳脊髄液又は他の体液でもよ
い）は、これらの抗原と反応する量の抗体も同時に含む
場合が多い。これらの抗体は存在する抗原と結合して免
疫結合体を形成する。これらの免疫結合体は抗原上に存
在する結合部位を固定することにより抗原の検出を妨げ
得る。これは、サンプルがこのような抗原を含有してい
るか否かをイムノアッセイで試験する場合に特に問題と
なる。一般に、イムノアッセイは着目抗原に特異的な抗
体を含み、従って、抗原を捕獲するか又は抗原との免疫
結合体を形成するために抗原上の結合部位に接近するこ
とが必要である。抗原上の全結合部位がサンプル中に存
在する抗体と結合するならば、イムノアッセイで抗原は
捕獲されず、抗原は検出されない。
【０００３】この問題は特にヒト免疫不全ウイルス、Ｈ
ＩＶ−１のｐ２４コア抗原を検出する場合に認められ
る。
ＩＶ−１のｐ２４コア抗原を検出する場合に認められ
る。
【０００４】ＨＩＶ−１感染を検出し、後天性免疫不全
症候群（ＡＩＤＳ）を誘発する疾患の進行を確認し、又
は治療を監視するためには、ＨＩＶ−１のｐ２４コア抗
原を検出することが非常に望ましい。しかしながら、血
清又は血漿中のＨＩＶ−１ｐ２４抗原血症を検出するた
めに使用可能なアッセイは、抗体が陰性から陽性に血清
変換する以前にしかＨＩＶ感染を検出することができな
い。ＨＩＶに対する抗体が出現し始めると、これらの試
験は抗原検出能が著しく制限される。一般に、これらの
制限は抗原と結合する血液中の抗ｐ２４抗体の存在によ
り生じ、従って、このような抗体が存在しないならば試
験イムノアッセイの抗体と結合するために使用可能な反
応部位をブロックすることが教示されている。Ｔ．Ｍ．
ＭｃＨｕｇｈらは、“Ｒｅｌａｔｉｏｎ ｏｆ Ｃｉｒ
ｃｕｌａｔｉｎｇ Ｌｅｖｅｌｓ ｏｆ Ｈｕｍａｎ
Ｉｍｍｕｎｏｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ Ｖｉｒｕｓ （Ｈ
ＩＶ） Ａｎｔｉｇｅｎ，Ａｎｔｉｂｏｄｙ ｔｏ ｐ
２４，ａｎｄ ＨＩＶ−Ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ Ｉｍｍ
ｕｎｅ Ｃｏｍｐｌｅｘｅｓ ｉｎ ＨＩＶ−Ｉｎｆｅ
ｃｔｅｄ Ｐａｔｉｅｎｔｓ，”Ｊ．Ｉｎｆ．Ｄｉ
ｓ．，１５８，Ｎｏ．５，１０８８−１０９１頁，１９
８８年１１月中でこの問題を論じている。
症候群（ＡＩＤＳ）を誘発する疾患の進行を確認し、又
は治療を監視するためには、ＨＩＶ−１のｐ２４コア抗
原を検出することが非常に望ましい。しかしながら、血
清又は血漿中のＨＩＶ−１ｐ２４抗原血症を検出するた
めに使用可能なアッセイは、抗体が陰性から陽性に血清
変換する以前にしかＨＩＶ感染を検出することができな
い。ＨＩＶに対する抗体が出現し始めると、これらの試
験は抗原検出能が著しく制限される。一般に、これらの
制限は抗原と結合する血液中の抗ｐ２４抗体の存在によ
り生じ、従って、このような抗体が存在しないならば試
験イムノアッセイの抗体と結合するために使用可能な反
応部位をブロックすることが教示されている。Ｔ．Ｍ．
ＭｃＨｕｇｈらは、“Ｒｅｌａｔｉｏｎ ｏｆ Ｃｉｒ
ｃｕｌａｔｉｎｇ Ｌｅｖｅｌｓ ｏｆ Ｈｕｍａｎ
Ｉｍｍｕｎｏｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ Ｖｉｒｕｓ （Ｈ
ＩＶ） Ａｎｔｉｇｅｎ，Ａｎｔｉｂｏｄｙ ｔｏ ｐ
２４，ａｎｄ ＨＩＶ−Ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ Ｉｍｍ
ｕｎｅ Ｃｏｍｐｌｅｘｅｓ ｉｎ ＨＩＶ−Ｉｎｆｅ
ｃｔｅｄ Ｐａｔｉｅｎｔｓ，”Ｊ．Ｉｎｆ．Ｄｉ
ｓ．，１５８，Ｎｏ．５，１０８８−１０９１頁，１９
８８年１１月中でこの問題を論じている。
【０００５】この問題に対処するために少なくとも２つ
の方法が提案されている。どちらの方法も抗原の生存能
力を維持しながらサンプル中に形成される免疫結合体を
解離させると同時に、新たに解離された抗体が抗原と再
結合しないように意図している。
の方法が提案されている。どちらの方法も抗原の生存能
力を維持しながらサンプル中に形成される免疫結合体を
解離させると同時に、新たに解離された抗体が抗原と再
結合しないように意図している。
【０００６】現在好適な方法はイムノアッセイで試験す
る前に血清又は血漿サンプルを酸解離処理にかける方法
である（Ｐ．Ｎｉｓｈａｎｉａｎら，“Ａ Ｓｉｍｐｌ
ｅＭｅｔｈｏｄ ｆｏｒ Ｉｍｐｒｏｖｅｄ Ａｓｓａ
ｙ Ｄｅｍｏｎｓｔｒａｔｅｓ ｔｈａｔ ＨＩＶ ｐ
２４ Ａｎｔｉｇｅｎ ｉｓ Ｐｒｅｓｅｎｔ ａｓ
Ｉｍｍｕｎｅ Ｃｏｍｐｌｅｘｅｓ ｉｎ Ｍｏｓｔ
Ｓｅｒａ ｆｒｏｍＨＩＶ−Ｉｎｆｅｃｔｅｄ Ｉｎｄ
ｉｖｉｄｕａｌｓ，”Ｊ．Ｉｎｆ．Ｄｉｓ．，１６２，
２１−２８頁，１９９０年７月；Ｒ．Ｃ．Ｂｏｌｌｉｎ
ｇｅｒ，Ｊｒ．ら，“Ａｃｉｄ Ｄｉｓｓｏｃｉａｔｉ
ｏｎ Ｉｎｃｒｅａｓｅｓ ｔｈｅＳｅｎｓｉｔｉｖｉ
ｔｙ ｏｆ ｐ２４ Ａｎｇｉｔｅｎ Ｄｅｔｅｃｔｉ
ｏｎ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ｏｆ
Ａｎｔｉｖｉｒａｌ Ｔｈｅｒａｐｙ ａｎｄ Ｄｉｓ
ｅａｓｅ Ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ Ａｓｙｍｐ
ｔｏｍａｔｉｃ ＨＩＶ−Ｉｎｆｅｃｔｅｄ Ｐｅｒｓ
ｏｎｓ，”Ｊ．Ｉｎｆ．Ｄｉｓ．，１６５，９１３−９
１６頁，１９９２年５月；Ｓ．Ｋｏｎｔｉｏ，“Ｓｅｎ
ｓｉｔｉｖｅ Ｏｎｅ−Ｓｔｅｐ Ｅｎｚｙｍｅ Ｉｍ
ｍｕｎｏａｓｓａｙ ｆｏｒ ＨＩＶ−１ ｐ２４ Ａ
ｎｔｉｇｅｎ ｉｎ Ｈｕｍａｎ Ｂｌｏｏｄ Ｓｐｅ
ｃｉｍｅｎｓ ａｎｄ Ｃｅｌｌ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｓ
ｕｐｅｒｎａｔａｎｔｓ，”Ｊ．Ｉｍｍ．Ｍｅｔｈｏｄ
ｓ，１３９，２５７−２６３頁、１９９１）。一般に、
手法は血清又は血漿を採取し、０．５Ｎ ＨＣｌ（ｐＨ
約２．０〜３．０）のような酸と混合し、３７℃で６０
〜９０分間インキュベートし、０．５Ｎ ＮａＯＨ（ｐ
Ｈ約６．８〜７．２）のような塩基で中和することから
なる。こうして調製したサンプルをその後、選択イムノ
アッセイで使用する。
る前に血清又は血漿サンプルを酸解離処理にかける方法
である（Ｐ．Ｎｉｓｈａｎｉａｎら，“Ａ Ｓｉｍｐｌ
ｅＭｅｔｈｏｄ ｆｏｒ Ｉｍｐｒｏｖｅｄ Ａｓｓａ
ｙ Ｄｅｍｏｎｓｔｒａｔｅｓ ｔｈａｔ ＨＩＶ ｐ
２４ Ａｎｔｉｇｅｎ ｉｓ Ｐｒｅｓｅｎｔ ａｓ
Ｉｍｍｕｎｅ Ｃｏｍｐｌｅｘｅｓ ｉｎ Ｍｏｓｔ
Ｓｅｒａ ｆｒｏｍＨＩＶ−Ｉｎｆｅｃｔｅｄ Ｉｎｄ
ｉｖｉｄｕａｌｓ，”Ｊ．Ｉｎｆ．Ｄｉｓ．，１６２，
２１−２８頁，１９９０年７月；Ｒ．Ｃ．Ｂｏｌｌｉｎ
ｇｅｒ，Ｊｒ．ら，“Ａｃｉｄ Ｄｉｓｓｏｃｉａｔｉ
ｏｎ Ｉｎｃｒｅａｓｅｓ ｔｈｅＳｅｎｓｉｔｉｖｉ
ｔｙ ｏｆ ｐ２４ Ａｎｇｉｔｅｎ Ｄｅｔｅｃｔｉ
ｏｎ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ｏｆ
Ａｎｔｉｖｉｒａｌ Ｔｈｅｒａｐｙ ａｎｄ Ｄｉｓ
ｅａｓｅ Ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ Ａｓｙｍｐ
ｔｏｍａｔｉｃ ＨＩＶ−Ｉｎｆｅｃｔｅｄ Ｐｅｒｓ
ｏｎｓ，”Ｊ．Ｉｎｆ．Ｄｉｓ．，１６５，９１３−９
１６頁，１９９２年５月；Ｓ．Ｋｏｎｔｉｏ，“Ｓｅｎ
ｓｉｔｉｖｅ Ｏｎｅ−Ｓｔｅｐ Ｅｎｚｙｍｅ Ｉｍ
ｍｕｎｏａｓｓａｙ ｆｏｒ ＨＩＶ−１ ｐ２４ Ａ
ｎｔｉｇｅｎ ｉｎ Ｈｕｍａｎ Ｂｌｏｏｄ Ｓｐｅ
ｃｉｍｅｎｓ ａｎｄ Ｃｅｌｌ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｓ
ｕｐｅｒｎａｔａｎｔｓ，”Ｊ．Ｉｍｍ．Ｍｅｔｈｏｄ
ｓ，１３９，２５７−２６３頁、１９９１）。一般に、
手法は血清又は血漿を採取し、０．５Ｎ ＨＣｌ（ｐＨ
約２．０〜３．０）のような酸と混合し、３７℃で６０
〜９０分間インキュベートし、０．５Ｎ ＮａＯＨ（ｐ
Ｈ約６．８〜７．２）のような塩基で中和することから
なる。こうして調製したサンプルをその後、選択イムノ
アッセイで使用する。
【０００７】この方法は、酸性条件下で抗体が多くの抗
原よりも容易に可逆的に不活化されるという仮定に基づ
いている。抗体の存在下の抗原検出は、この方法により
実質的に増進されることが示されているが、いくつかの
欠点がある。
原よりも容易に可逆的に不活化されるという仮定に基づ
いている。抗体の存在下の抗原検出は、この方法により
実質的に増進されることが示されているが、いくつかの
欠点がある。
【０００８】第１の欠点は、この方法では抗体と共に抗
原も不活化されるという点にあり、このことは、ｐ２４
のみを含有する標準は酸で前処理せずに試験サンプルを
酸で前処理するいくつかの実験室手順により立証されて
いる。抗原も処理中に作用を受けると、抗原含有率が低
いか及び／又は抗体を含有しないサンプル中で抗原を検
出するために必要な感度が低下することは自明である。
原も不活化されるという点にあり、このことは、ｐ２４
のみを含有する標準は酸で前処理せずに試験サンプルを
酸で前処理するいくつかの実験室手順により立証されて
いる。抗原も処理中に作用を受けると、抗原含有率が低
いか及び／又は抗体を含有しないサンプル中で抗原を検
出するために必要な感度が低下することは自明である。
【０００９】別の欠点は、イムノアッセイで試験する前
に試験サンプルを前処理しなければならないという点に
ある。このため、イムノアッセイを行うために試験サン
プルを処理する付加段階が必要であり、実験者の感染の
危険が増加する。イムノアッセイを実施するための段階
数が増加するにつれて実験者が感染性サンプルに暴露さ
れる危険も増加し、また、微量滴定プレートウェルの内
容物を別のプレートウェルに移すと、過誤の可能性も増
加する。
に試験サンプルを前処理しなければならないという点に
ある。このため、イムノアッセイを行うために試験サン
プルを処理する付加段階が必要であり、実験者の感染の
危険が増加する。イムノアッセイを実施するための段階
数が増加するにつれて実験者が感染性サンプルに暴露さ
れる危険も増加し、また、微量滴定プレートウェルの内
容物を別のプレートウェルに移すと、過誤の可能性も増
加する。
【００１０】酸処理は生物学的サンプルの沈殿又は凝固
をもたらし、その後のアッセイ手順に支障をきたす危険
がある。この問題により、沈殿又は凝固の影響を少なく
するために、サンプルを通常は３倍に希釈しなければな
らない。しかしながら、少量の抗原しか含まないサンプ
ルを希釈すると、抗原を検出する可能性は減少する。
をもたらし、その後のアッセイ手順に支障をきたす危険
がある。この問題により、沈殿又は凝固の影響を少なく
するために、サンプルを通常は３倍に希釈しなければな
らない。しかしながら、少量の抗原しか含まないサンプ
ルを希釈すると、抗原を検出する可能性は減少する。
【００１１】抗原を無傷のままその後の試験に使用でき
るようにしながら免疫結合体を解離させるために提案さ
れている別の方法は、ポリエチレングリコール沈殿法を
使用するＳ．Ａ．Ｆｉｓｃｕｓらの方法である（Ｓ．
Ａ．Ｆｉｓｃｕｓら，“Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｉ
ｎｆｅｃｔｉｏｕｓ Ｉｍｍｕｎｅ Ｃｏｍｐｌｅｘｅ
ｓ ｉｎ Ｈｕｍａｎ Ｉｍｍｕｎｏｄｅｆｉｃｉｅｎ
ｃｙ Ｖｉｒｕｓ Ｔｙｐｅ １ （ＨＩＶ−１） Ｉ
ｎｆｅｃｔｉｏｎｓ： Ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎｗｉｔ
ｈ Ｐｌａｓｍａ Ｖｉｒｅｍｉａ ａｎｄ ＣＤ４
Ｃｅｌｌ Ｃｏｕｎｔｓ，”Ｊ．Ｉｎｆ．Ｄｉｓ．，１
６４，７６５−７６９頁，１９９１年１０月）。この方
法は、試験血漿を特別に濾過し、ポリエチレングリコー
ル（ＰＥＧ−８０００）と混合し、渦形成し、一晩冷蔵
し、遠心分離し、ペレットを２％ＰＥＧで２回洗うとい
った複雑な方法である。その後、上清及びＰＥＧ沈殿の
アリコートをイムノアッセイで試験し、ｐ２４を検出す
る。この方法は、抗ｐ２４抗体又はｐ２４免疫結合体を
含有するサンプル中でｐ２４を検出しているらしいが、
現在ではｐ２４の存在を検出するための標準方法として
は使用されていない。他の欠点としては、試験試料の操
作に手間がかかり、インキュベーション時間を必要とす
る複数段階からなる複雑な手順である。
るようにしながら免疫結合体を解離させるために提案さ
れている別の方法は、ポリエチレングリコール沈殿法を
使用するＳ．Ａ．Ｆｉｓｃｕｓらの方法である（Ｓ．
Ａ．Ｆｉｓｃｕｓら，“Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｉ
ｎｆｅｃｔｉｏｕｓ Ｉｍｍｕｎｅ Ｃｏｍｐｌｅｘｅ
ｓ ｉｎ Ｈｕｍａｎ Ｉｍｍｕｎｏｄｅｆｉｃｉｅｎ
ｃｙ Ｖｉｒｕｓ Ｔｙｐｅ １ （ＨＩＶ−１） Ｉ
ｎｆｅｃｔｉｏｎｓ： Ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎｗｉｔ
ｈ Ｐｌａｓｍａ Ｖｉｒｅｍｉａ ａｎｄ ＣＤ４
Ｃｅｌｌ Ｃｏｕｎｔｓ，”Ｊ．Ｉｎｆ．Ｄｉｓ．，１
６４，７６５−７６９頁，１９９１年１０月）。この方
法は、試験血漿を特別に濾過し、ポリエチレングリコー
ル（ＰＥＧ−８０００）と混合し、渦形成し、一晩冷蔵
し、遠心分離し、ペレットを２％ＰＥＧで２回洗うとい
った複雑な方法である。その後、上清及びＰＥＧ沈殿の
アリコートをイムノアッセイで試験し、ｐ２４を検出す
る。この方法は、抗ｐ２４抗体又はｐ２４免疫結合体を
含有するサンプル中でｐ２４を検出しているらしいが、
現在ではｐ２４の存在を検出するための標準方法として
は使用されていない。他の欠点としては、試験試料の操
作に手間がかかり、インキュベーション時間を必要とす
る複数段階からなる複雑な手順である。
【００１２】必要とされるのは、試験サンプル中の抗体
と免疫結合した抗原、特にサンプル中の抗ｐ２４抗体と
結合したｐ２４を検出するための方法である。更に、こ
のような方法は潜在的に感染したサンプルを取り扱う実
験者が暴露される危険を減らすように最少段階で実施す
べきである。
と免疫結合した抗原、特にサンプル中の抗ｐ２４抗体と
結合したｐ２４を検出するための方法である。更に、こ
のような方法は潜在的に感染したサンプルを取り扱う実
験者が暴露される危険を減らすように最少段階で実施す
べきである。
【００１３】
【課題を解決するための手段】本発明は、イムノアッセ
イにおける検出に使用可能な抗原を作製すべく抗原−抗
体免疫結合体中に結合された抗原を含み得る試料を処理
するために使用される方法を提供する。特に本発明の方
法は、抗ｐ２４抗体の存在下または不在下に試料中のＨ
ＩＶ−１ ｐ２４抗原をイムノアッセイによって試験し
たり、ｐ２４を含んで免疫結合体が形成されているか否
かを試験することに適している。該方法は、試料を高ｐ
Ｈ溶液または緩衝液と混合し、それによってｐＨを約
８．０以上に高め、次いで処理した試料を、抗原の存在
または不在を検出するのに適当なイムノアッセイを用い
て分析することからなる。イムノアッセイ前に試料を中
和する必要なしに、イムノアッセイ作業の前または間に
解離ステップを実施することができる。
イにおける検出に使用可能な抗原を作製すべく抗原−抗
体免疫結合体中に結合された抗原を含み得る試料を処理
するために使用される方法を提供する。特に本発明の方
法は、抗ｐ２４抗体の存在下または不在下に試料中のＨ
ＩＶ−１ ｐ２４抗原をイムノアッセイによって試験し
たり、ｐ２４を含んで免疫結合体が形成されているか否
かを試験することに適している。該方法は、試料を高ｐ
Ｈ溶液または緩衝液と混合し、それによってｐＨを約
８．０以上に高め、次いで処理した試料を、抗原の存在
または不在を検出するのに適当なイムノアッセイを用い
て分析することからなる。イムノアッセイ前に試料を中
和する必要なしに、イムノアッセイ作業の前または間に
解離ステップを実施することができる。
【００１４】本発明の別の実施態様は、解離剤、即ち、
主に界面活性剤、塩及び塩基性ｐＨでｐＫａを有する緩
衝液とからなる、ｐＨが約８．０以上の溶液または組成
物である。
主に界面活性剤、塩及び塩基性ｐＨでｐＫａを有する緩
衝液とからなる、ｐＨが約８．０以上の溶液または組成
物である。
【００１５】本発明は、抗原を解離し、それらをイムノ
アッセイにおける検出に使用可能とすべく、抗原−抗体
免疫結合体中に結合された抗原を含み得る試料を処理す
るために使用される塩基解離方法を提供する。酸で前処
理した試料と比較し、一晩インキュベートすると非結合
抗原の検出が向上されることも判明した。特にこの方法
は、最近好まれている酸解離法よりも抗原を傷付けるこ
とが少なく、従って、試料中の少量の抗原を検出するイ
ムノアッセイ能を増大することができる。
アッセイにおける検出に使用可能とすべく、抗原−抗体
免疫結合体中に結合された抗原を含み得る試料を処理す
るために使用される塩基解離方法を提供する。酸で前処
理した試料と比較し、一晩インキュベートすると非結合
抗原の検出が向上されることも判明した。特にこの方法
は、最近好まれている酸解離法よりも抗原を傷付けるこ
とが少なく、従って、試料中の少量の抗原を検出するイ
ムノアッセイ能を増大することができる。
【００１６】イムノアッセイの間または前に、試料を、
免疫結合体を解離して免疫学的に活性な抗原を遊離する
本発明の方法によって処理する。解離ステップは、処理
すべき試料のアリコートを、塩基性の高ｐＨ溶液または
緩衝液（“溶液”）のアリコートに加え、混合液を指定
時間インキュベートすることを含む。インキュベーショ
ン後、試料はイムノアッセイに使用する準備が整ったこ
とになる。この処理ステップは、イムノアッセイを開始
するのに必要な試薬を既に含むマイクロタイター（微量
滴定）ウェルのようなイムノアッセイ装置において行な
うことができるので、続けてイムノアッセイを行なうこ
とができる。試料処理を別の容器で行なうのであれば、
次いで試料をマイクロタイターウェルのような試験ビヒ
クルに移し、イムノアッセイを開始することができる。
免疫結合体を解離して免疫学的に活性な抗原を遊離する
本発明の方法によって処理する。解離ステップは、処理
すべき試料のアリコートを、塩基性の高ｐＨ溶液または
緩衝液（“溶液”）のアリコートに加え、混合液を指定
時間インキュベートすることを含む。インキュベーショ
ン後、試料はイムノアッセイに使用する準備が整ったこ
とになる。この処理ステップは、イムノアッセイを開始
するのに必要な試薬を既に含むマイクロタイター（微量
滴定）ウェルのようなイムノアッセイ装置において行な
うことができるので、続けてイムノアッセイを行なうこ
とができる。試料処理を別の容器で行なうのであれば、
次いで試料をマイクロタイターウェルのような試験ビヒ
クルに移し、イムノアッセイを開始することができる。
【００１７】抗原としては、ペプチド、タンパク質、ハ
プテン、核酸または他の抗原結合被分析物質を挙げるこ
とができる。幾つかの抗原の例としては、ＨＩＶ−１
ｐ２４抗原、ＨＩＶ−２ ｐ２４抗原、ＨＴＬＶ−Ｉ及
びＨＴＬＶ−ＩＩ抗原といったＨＩＶ抗原並びにＣ型肝
炎ウイルス由来の抗原を挙げることができる。
プテン、核酸または他の抗原結合被分析物質を挙げるこ
とができる。幾つかの抗原の例としては、ＨＩＶ−１
ｐ２４抗原、ＨＩＶ−２ ｐ２４抗原、ＨＴＬＶ−Ｉ及
びＨＴＬＶ−ＩＩ抗原といったＨＩＶ抗原並びにＣ型肝
炎ウイルス由来の抗原を挙げることができる。
【００１８】抗体はモノクローナルまたはポリクローナ
ルのいずれかであり、試料中の問題の抗原に反応性を示
す。ポリクローナル抗体は生物学的試料中に認められる
ものであるが、制御された試験条件下でモノクローナル
抗体を使用することができる。本発明の方法は、これら
の抗体を問題の抗原から解離し、抗原に与える損傷を最
小限にし、それによって抗原はイムノアッセイにおいて
検出され得る。
ルのいずれかであり、試料中の問題の抗原に反応性を示
す。ポリクローナル抗体は生物学的試料中に認められる
ものであるが、制御された試験条件下でモノクローナル
抗体を使用することができる。本発明の方法は、これら
の抗体を問題の抗原から解離し、抗原に与える損傷を最
小限にし、それによって抗原はイムノアッセイにおいて
検出され得る。
【００１９】この方法に使用される高ｐＨ溶液として
は、水酸化ナトリウム及び水酸化カリウムのごとき塩
基、またはホスフェート、アミン及び双性イオン緩衝液
のような塩基性ｐＨでｐＫａを有する緩衝液を挙げるこ
とできる。緩衝液、洗剤もしくは界面活性剤、塩及び／
または動物血清を含む解離剤のごとき溶液を使用するの
が好ましい。洗剤は、非イオン性、アニオン性、カチオ
ン性及び双性のもの、例えばＴｗｅｅｎ ２０、Ｎｏｎ
ｙｌｐｈｅｎｏｌ ４０、及びドデシル硫酸ナトリウム
である。動物、例えばウシまたはウマ由来の血清を使用
することもできる。更に、安定溶液を生成するのに必要
な、溶液開発分野の当業者には周知の種々の保存剤、抗
菌剤及び塩が上記タイプの溶液に含められる。好ましい
組成物は、約０．０１Ｍ〜約１０．０Ｍのエタノールア
ミン、０〜約１０％のＴｒｉｔｏｎＸ−１００、及び０
％〜約３ＭのＮａＣｌからなる。最も好ましい溶液は、
２Ｍエタノールアミン、濃度２．５％のＴｒｉｔｏｎ
Ｘ−１００及び０．１５ＭＮａＣｌからなる。この溶液
１部に対して約４部の試験試料の比で使用する。
は、水酸化ナトリウム及び水酸化カリウムのごとき塩
基、またはホスフェート、アミン及び双性イオン緩衝液
のような塩基性ｐＨでｐＫａを有する緩衝液を挙げるこ
とできる。緩衝液、洗剤もしくは界面活性剤、塩及び／
または動物血清を含む解離剤のごとき溶液を使用するの
が好ましい。洗剤は、非イオン性、アニオン性、カチオ
ン性及び双性のもの、例えばＴｗｅｅｎ ２０、Ｎｏｎ
ｙｌｐｈｅｎｏｌ ４０、及びドデシル硫酸ナトリウム
である。動物、例えばウシまたはウマ由来の血清を使用
することもできる。更に、安定溶液を生成するのに必要
な、溶液開発分野の当業者には周知の種々の保存剤、抗
菌剤及び塩が上記タイプの溶液に含められる。好ましい
組成物は、約０．０１Ｍ〜約１０．０Ｍのエタノールア
ミン、０〜約１０％のＴｒｉｔｏｎＸ−１００、及び０
％〜約３ＭのＮａＣｌからなる。最も好ましい溶液は、
２Ｍエタノールアミン、濃度２．５％のＴｒｉｔｏｎ
Ｘ−１００及び０．１５ＭＮａＣｌからなる。この溶液
１部に対して約４部の試験試料の比で使用する。
【００２０】上記溶液のｐＨ範囲は約８．０〜約１４で
あるが、好ましい範囲は約１０〜１２である。かかるｐ
Ｈ範囲において溶液は、酸解離系に使用される酸よりも
タンパク質を傷付けることがはるかに少ない。この理由
で、試料及び溶液の混合液を中和する必要はない。そう
して、イムノアッセイの間、免疫結合体の解離がその場
で進行する。高ｐＨでは抗原−抗体結合の強度が低減さ
れ、従って試料中の遊離抗原対被ブロック抗原の比は増
加する。該方法の効力は、妨害性の液相抗体の破壊では
なく、イムノアッセイに一般に使用される高親和性固相
捕獲抗体が抗原上の結合部位について、妨害性抗体と競
合する能力に依存する。
あるが、好ましい範囲は約１０〜１２である。かかるｐ
Ｈ範囲において溶液は、酸解離系に使用される酸よりも
タンパク質を傷付けることがはるかに少ない。この理由
で、試料及び溶液の混合液を中和する必要はない。そう
して、イムノアッセイの間、免疫結合体の解離がその場
で進行する。高ｐＨでは抗原−抗体結合の強度が低減さ
れ、従って試料中の遊離抗原対被ブロック抗原の比は増
加する。該方法の効力は、妨害性の液相抗体の破壊では
なく、イムノアッセイに一般に使用される高親和性固相
捕獲抗体が抗原上の結合部位について、妨害性抗体と競
合する能力に依存する。
【００２１】一旦試料と溶液を混合したならば、イムノ
アッセイが進行し得る。イムノアッセイは、どんな形式
であろうと、即ち競合、サンドイッチ、阻害のいずれで
あろうとまたは一般には知られていない形式であろう
と、抗体と抗原の間で反応が起こる任意のアッセイであ
り得る。一般にイムノアッセイの抗体は、マイクロタイ
タープレートウェル、セルロースストリップ、ビーズ、
試験官または毛細管の内側表面、並びに、金ゾル、赤血
球及びラテックス粒子といった粒子のごとき固相に結合
される。
アッセイが進行し得る。イムノアッセイは、どんな形式
であろうと、即ち競合、サンドイッチ、阻害のいずれで
あろうとまたは一般には知られていない形式であろう
と、抗体と抗原の間で反応が起こる任意のアッセイであ
り得る。一般にイムノアッセイの抗体は、マイクロタイ
タープレートウェル、セルロースストリップ、ビーズ、
試験官または毛細管の内側表面、並びに、金ゾル、赤血
球及びラテックス粒子といった粒子のごとき固相に結合
される。
【００２２】
【実施例】以下、実施例によって本発明を更に説明す
る。
る。
【００２３】実施例１． コールターとＯＴＣとのイム
ノアッセイの比較 この実験は、サンプル中のＨＩＶ−１ ｐ２４の存在を
検査する、コールター社スクリーニングアッセイ、コー
ルターTM ＨＩＶ ｐ２４ Ａｇアッセイとオルガノン
テクニカ社（ＯＴＣ）ビロノスティカR ＨＩＶ−１抗
原マイクロエリザシステムスクリーニングアッセイとを
比較するために行った。
ノアッセイの比較 この実験は、サンプル中のＨＩＶ−１ ｐ２４の存在を
検査する、コールター社スクリーニングアッセイ、コー
ルターTM ＨＩＶ ｐ２４ Ａｇアッセイとオルガノン
テクニカ社（ＯＴＣ）ビロノスティカR ＨＩＶ−１抗
原マイクロエリザシステムスクリーニングアッセイとを
比較するために行った。
【００２４】同じサンプルを両方のアッセイに用いた。
ｐ２４抗原に対する或るレベルの抗体を含むことがすべ
て分かっている３３個の血清サンプル、陰性の対照およ
び３個の標準を検査した。３個の標準は、１０、３０お
よび９０ｐｇ ｐ２４／ｍｌ血清のレベルで、市販的に
入手可能なデュポンＨＩＶ−１ライゼートでスパイクし
た正常な血清サンプルである。
ｐ２４抗原に対する或るレベルの抗体を含むことがすべ
て分かっている３３個の血清サンプル、陰性の対照およ
び３個の標準を検査した。３個の標準は、１０、３０お
よび９０ｐｇ ｐ２４／ｍｌ血清のレベルで、市販的に
入手可能なデュポンＨＩＶ−１ライゼートでスパイクし
た正常な血清サンプルである。
【００２５】製造元の指示書に従って、下記の通りにコ
ールターアッセイを行った。
ールターアッセイを行った。
【００２６】前もって製造元によりｐ２４抗体でコート
された、マイクロタイタープレートのウェルに２００μ
ｌの対照、標準およびサンプルを入れた。各ウェルに２
０μｌの溶解バッファーを加え、プレートにカバーを
し、３７℃で１時間インキュベートした。この後、カバ
ーをはずし、溶液を吸い出した。３００μｌの洗浄バッ
ファーを用いてウェルを６回洗浄し、最後の洗浄の後、
液体を除去した。次に、２００μｌのＣＨ−ビオチン反
応溶液を各ウェルに加え、プレートにカバーをし、３７
℃で１時間インキュベートした。溶液を捨て、２００μ
ｌのＳＡ−ＨＲＰＯ（西洋ワサビペルオキシダーゼ）を
ウェルに加え、カバーした後３７℃で３０分間インキュ
ベートした。溶液を捨て、ウェルを３回洗浄した。２０
０μｌのＴＭＢ基質溶液を加え、プレートを室温で３０
分間インキュベートした。最後に、５０μｌのＣＳＲ−
１（反応停止試薬）を各ウェルに加え、プレートを５７
０ｎｍで読み取った。
された、マイクロタイタープレートのウェルに２００μ
ｌの対照、標準およびサンプルを入れた。各ウェルに２
０μｌの溶解バッファーを加え、プレートにカバーを
し、３７℃で１時間インキュベートした。この後、カバ
ーをはずし、溶液を吸い出した。３００μｌの洗浄バッ
ファーを用いてウェルを６回洗浄し、最後の洗浄の後、
液体を除去した。次に、２００μｌのＣＨ−ビオチン反
応溶液を各ウェルに加え、プレートにカバーをし、３７
℃で１時間インキュベートした。溶液を捨て、２００μ
ｌのＳＡ−ＨＲＰＯ（西洋ワサビペルオキシダーゼ）を
ウェルに加え、カバーした後３７℃で３０分間インキュ
ベートした。溶液を捨て、ウェルを３回洗浄した。２０
０μｌのＴＭＢ基質溶液を加え、プレートを室温で３０
分間インキュベートした。最後に、５０μｌのＣＳＲ−
１（反応停止試薬）を各ウェルに加え、プレートを５７
０ｎｍで読み取った。
【００２７】ＯＴＣイムノアッセイを以下の通りに行っ
た。
た。
【００２８】２５μｌの分解用バッファー（４Ｍの尿素
および１％のサポニン、２．０％の正常なウマの血清、
０．２％のゲンタマイシン硫酸、０．００５％のシンナ
ムアルデヒド、０．０１％のアマランス、発色試薬とし
てＦＤ＆Ｃ赤色染料Ｎｏ．２、０．０２％のエタノー
ル、０．１５ＭのＮａＣｌ、および０．０１Ｍの燐酸ナ
トリウム）を、抗−ｐ２４抗体でコートした各マイクロ
タイターウェルに加え、続いて１００μｌのサンプル、
対照又は標準を加えた。この後、マイクロタイタープレ
ートにカバーをし、３７℃で１時間インキュベートし
た。各ウェルを希釈したトゥイーン２０および燐酸緩衝
生理食塩水で４回洗浄した。１００μｌの複合物（西洋
ワサビペルオキシダーゼで標識した抗−ＨＩＶ−１）を
各ウェルに加えた。マイクロタイタープレートにカバー
をし、３７℃で６０分間インキュベートした。この後、
各ウェルを希釈した燐酸緩衝液で４回洗浄した。次に、
１００μｌの基質（テトラメチルベンジジン−２ＨＣ
ｌ）を各ウェルに加え、プレートを室温で３０分間イン
キュベートした。２Ｎの硫酸を含有する反応停止溶液１
００μｌを加えることにより、反応を停止させた。各ウ
ェルにおける溶液の吸着を４５０ｎｍで読み取り、結果
を図１に示す。ｙ軸は、吸光度読み取り／計算上のカッ
トオフであるシグナル／カットオフ率（Ｓ／ＣＯ）であ
る。１以上の比率は、陽性であると考えられる。
および１％のサポニン、２．０％の正常なウマの血清、
０．２％のゲンタマイシン硫酸、０．００５％のシンナ
ムアルデヒド、０．０１％のアマランス、発色試薬とし
てＦＤ＆Ｃ赤色染料Ｎｏ．２、０．０２％のエタノー
ル、０．１５ＭのＮａＣｌ、および０．０１Ｍの燐酸ナ
トリウム）を、抗−ｐ２４抗体でコートした各マイクロ
タイターウェルに加え、続いて１００μｌのサンプル、
対照又は標準を加えた。この後、マイクロタイタープレ
ートにカバーをし、３７℃で１時間インキュベートし
た。各ウェルを希釈したトゥイーン２０および燐酸緩衝
生理食塩水で４回洗浄した。１００μｌの複合物（西洋
ワサビペルオキシダーゼで標識した抗−ＨＩＶ−１）を
各ウェルに加えた。マイクロタイタープレートにカバー
をし、３７℃で６０分間インキュベートした。この後、
各ウェルを希釈した燐酸緩衝液で４回洗浄した。次に、
１００μｌの基質（テトラメチルベンジジン−２ＨＣ
ｌ）を各ウェルに加え、プレートを室温で３０分間イン
キュベートした。２Ｎの硫酸を含有する反応停止溶液１
００μｌを加えることにより、反応を停止させた。各ウ
ェルにおける溶液の吸着を４５０ｎｍで読み取り、結果
を図１に示す。ｙ軸は、吸光度読み取り／計算上のカッ
トオフであるシグナル／カットオフ率（Ｓ／ＣＯ）であ
る。１以上の比率は、陽性であると考えられる。
【００２９】これらの結果は、ＯＴＣスクリーニングア
ッセイがコールター試験に比し、より高いＳ／ＣＯ値を
出すことを示している。２つの試験のパフォーマンス間
の差異は、スパイクした（抗体非含有）標準より抗体含
有サンプルの方がより大きい。
ッセイがコールター試験に比し、より高いＳ／ＣＯ値を
出すことを示している。２つの試験のパフォーマンス間
の差異は、スパイクした（抗体非含有）標準より抗体含
有サンプルの方がより大きい。
【００３０】実施例２． サンプルの酸処理 ヒトの血清サンプル中のＨＩＶ−１ ｐ２４抗原の存在
を検出するイムノアッセイは、酸解離前処理手法を用い
たコールタースクリーニングアッセイおよびコールター
イムノアッセイを用いて行った。
を検出するイムノアッセイは、酸解離前処理手法を用い
たコールタースクリーニングアッセイおよびコールター
イムノアッセイを用いて行った。
【００３１】Ａ．酸解離前処理手法 この手法を各サンプルに供した。
【００３２】２００μｌのサンプルをねじぶた付きチュ
ーブに加えた。この後、２００μｌのグリシン試薬
（１．５Ｍのグリシン、ｐＨ１．８５、濃ＨＣｌで調
整）をサンプルに加え、チューブを撹拌した。チューブ
にふたをし、３７℃で１時間インキュベートした。イン
キュベーション後、２００μｌのトリス緩衝試薬（１．
５Ｍトリス緩衝液、ｐＨ９．０）をチューブに加え、チ
ューブを撹拌した。これで、サンプルをイムノアッセイ
マイクロタイタープレートに移す準備ができた。
ーブに加えた。この後、２００μｌのグリシン試薬
（１．５Ｍのグリシン、ｐＨ１．８５、濃ＨＣｌで調
整）をサンプルに加え、チューブを撹拌した。チューブ
にふたをし、３７℃で１時間インキュベートした。イン
キュベーション後、２００μｌのトリス緩衝試薬（１．
５Ｍトリス緩衝液、ｐＨ９．０）をチューブに加え、チ
ューブを撹拌した。これで、サンプルをイムノアッセイ
マイクロタイタープレートに移す準備ができた。
【００３３】Ｂ．ＨＩＶ−１ ｐ２４イムノアッセイ 未処理のサンプルおよび酸で前処理したサンプルを用い
て、上記実施例１に記載の通りにコールタースクリーニ
ングアッセイを行った。結果を図２に示す。
て、上記実施例１に記載の通りにコールタースクリーニ
ングアッセイを行った。結果を図２に示す。
【００３４】図２は、未処理のサンプルのコールタース
クリーニングアッセイの検査の結果と酸解離した前処理
したサンプルを用いたコールターアッセイの検査の結果
を比較したグラフである。図２は、抗体を含有するサン
プルの酸前処理が複合化したＨＩＶ ｐ２４抗原の検出
を増強したことを示している。しかしながら、酸処理
は、スパイクした標準ならびに、程度は小さいがサンプ
ル３および１５の免疫反応性を有意に構成した。
クリーニングアッセイの検査の結果と酸解離した前処理
したサンプルを用いたコールターアッセイの検査の結果
を比較したグラフである。図２は、抗体を含有するサン
プルの酸前処理が複合化したＨＩＶ ｐ２４抗原の検出
を増強したことを示している。しかしながら、酸処理
は、スパイクした標準ならびに、程度は小さいがサンプ
ル３および１５の免疫反応性を有意に構成した。
【００３５】実施例３． 塩基解離前処理手法 この実験は、塩基解離処理工程を含まないＨＩＶ−１
ｐ２４抗原のためのＯＴＣスクリーニングアッセイと、
塩基解離法によりサンプルを処理したＯＴＣスクリーニ
ングアッセイとを比較するために行った。
ｐ２４抗原のためのＯＴＣスクリーニングアッセイと、
塩基解離法によりサンプルを処理したＯＴＣスクリーニ
ングアッセイとを比較するために行った。
【００３６】前述の実施例に記載したものと同じ、対
照、サンプルおよび標準を用いた。
照、サンプルおよび標準を用いた。
【００３７】上記実施例１に記載した通りにＯＴＣスク
リーニングアッセイを行った。
リーニングアッセイを行った。
【００３８】塩基処理工程を含むＯＴＣスクリーニング
アッセイを、以下のことを除いては上記実施例１に記載
した通りに行った。分解用バッファーを、１．５Ｍのエ
タノールアミンおよび２．５％トリトンＸ−１００を加
え一方尿素およびサポニンを除去したことを除いては分
解用バッファーと同じ組成を有しｐＨをＨＣｌで１１．
５に調整した解離試薬２５μｌに置き換えた。また、イ
ンキュベーションも室温で一晩に変えた。結果を図３に
示す。１４以上のＳ／ＣＯを有する結果は、グラフから
はずした。
アッセイを、以下のことを除いては上記実施例１に記載
した通りに行った。分解用バッファーを、１．５Ｍのエ
タノールアミンおよび２．５％トリトンＸ−１００を加
え一方尿素およびサポニンを除去したことを除いては分
解用バッファーと同じ組成を有しｐＨをＨＣｌで１１．
５に調整した解離試薬２５μｌに置き換えた。また、イ
ンキュベーションも室温で一晩に変えた。結果を図３に
示す。１４以上のＳ／ＣＯを有する結果は、グラフから
はずした。
【００３９】図３に示すように、塩基解離手法は、抗体
存在下でＨＩＶ抗原を検出するＯＴＣスクリーニングア
ッセイの能力を増強した。コールター酸解離手法と異な
り、ＯＴＣ塩基解離手法は、抗体非含有サンプルには馴
染まないが、インキュベーションを一晩行った場合、１
時間のスクリーニングアッセイインキュベーションに比
べ、標準によってもたらされたシグナルを実際に増強し
た。更に、図３と図２を比較して、マイクロタイターウ
ェル内で一晩インキュベートしたＯＴＣ塩基解離手法
は、いずれのサンプルにおいても抗原を検出したのに対
し、７個のサンプルは、コールタースクリーニングアッ
セイおよび酸解離アッセイの両方の組み合わせによって
も検出されなかったことが分かった。
存在下でＨＩＶ抗原を検出するＯＴＣスクリーニングア
ッセイの能力を増強した。コールター酸解離手法と異な
り、ＯＴＣ塩基解離手法は、抗体非含有サンプルには馴
染まないが、インキュベーションを一晩行った場合、１
時間のスクリーニングアッセイインキュベーションに比
べ、標準によってもたらされたシグナルを実際に増強し
た。更に、図３と図２を比較して、マイクロタイターウ
ェル内で一晩インキュベートしたＯＴＣ塩基解離手法
は、いずれのサンプルにおいても抗原を検出したのに対
し、７個のサンプルは、コールタースクリーニングアッ
セイおよび酸解離アッセイの両方の組み合わせによって
も検出されなかったことが分かった。
【００４０】実施例４． 解離方法の比較 コールター酸解離アッセイと、３時間および一晩のイン
キュベーションで行ったＯＴＣ塩基解離アッセイとを比
較した。すべてのサンプル、対照および標準は、上記の
通りである。コールター酸解離アッセイは、実施例２に
記載の通りに行った。ＯＴＣ塩基解離アッセイは、一方
のアッセイにおいてマイクロタイタープレートを３７℃
で３時間インキュベーションし、他方を室温で一晩にし
たことを除いては実施例３に記載の通りに行った。解離
試薬は、３時間アッセイにおいてはｐＨ１１、一晩アッ
セイにおいてはｐＨ１１．５であった。結果を図４に示
す。
キュベーションで行ったＯＴＣ塩基解離アッセイとを比
較した。すべてのサンプル、対照および標準は、上記の
通りである。コールター酸解離アッセイは、実施例２に
記載の通りに行った。ＯＴＣ塩基解離アッセイは、一方
のアッセイにおいてマイクロタイタープレートを３７℃
で３時間インキュベーションし、他方を室温で一晩にし
たことを除いては実施例３に記載の通りに行った。解離
試薬は、３時間アッセイにおいてはｐＨ１１、一晩アッ
セイにおいてはｐＨ１１．５であった。結果を図４に示
す。
【００４１】標準およびサンプルの両方において、ＯＴ
Ｃ検査は、コールターアッセイ検査に比べより多量の抗
原を検出した。概して、一晩のＯＴＣイムノアッセイの
Ｓ／ＣＯ値は、３時間の検査で見られるものより高かっ
た。この図によって、一晩のＯＴＣアッセイ（サンプル
１４、２３および２４）は、３時間アッセイに比べ低い
シグナルをもたらすと考えられる。しかしながら、これ
らの各サンプルからのシグナルは、尺度からはずれてお
り、陰性の対照の背景シグナルが僅かに異なることか
ら、各アッセイにより得られた最大Ｓ／ＣＯ値は、僅か
に異なり、一晩のアッセイが不自然に低いと考えさせ
た。サンプル２５のコールターアッセイは、より高いシ
グナルをもたらした。
Ｃ検査は、コールターアッセイ検査に比べより多量の抗
原を検出した。概して、一晩のＯＴＣイムノアッセイの
Ｓ／ＣＯ値は、３時間の検査で見られるものより高かっ
た。この図によって、一晩のＯＴＣアッセイ（サンプル
１４、２３および２４）は、３時間アッセイに比べ低い
シグナルをもたらすと考えられる。しかしながら、これ
らの各サンプルからのシグナルは、尺度からはずれてお
り、陰性の対照の背景シグナルが僅かに異なることか
ら、各アッセイにより得られた最大Ｓ／ＣＯ値は、僅か
に異なり、一晩のアッセイが不自然に低いと考えさせ
た。サンプル２５のコールターアッセイは、より高いシ
グナルをもたらした。
【００４２】図５は、１２以上のＳ／ＣＯ値を有するす
べてのサンプルをはずしたことを除いては図４に見られ
るのと同じデータを有する。Ｓ／ＣＯ値が１である陽性
の結果のカットオフにより、コールターアッセイは、８
個のサンプルを見逃した。
べてのサンプルをはずしたことを除いては図４に見られ
るのと同じデータを有する。Ｓ／ＣＯ値が１である陽性
の結果のカットオフにより、コールターアッセイは、８
個のサンプルを見逃した。
【００４３】実施例５． ＯＴＣイムノアッセイにおけ
る酸および塩基解離方法の比較 これらのアッセイは、ＯＴＣイムノアッセイを用い、Ｈ
ＩＶ−１ ｐ２４抗原を検出する場合のスクリーニング
アッセイならびに酸および塩基解離方法を比較した。
る酸および塩基解離方法の比較 これらのアッセイは、ＯＴＣイムノアッセイを用い、Ｈ
ＩＶ−１ ｐ２４抗原を検出する場合のスクリーニング
アッセイならびに酸および塩基解離方法を比較した。
【００４４】用いた標準、サンプルおよび対照は、上記
実施例に記載のものと同じである。
実施例に記載のものと同じである。
【００４５】実施例３に記載の通りの塩基解離手法を用
いた一方のアッセイを、サンプルについて、ｐＨ１１．
５の解離試薬を用い室温で一晩で行った。
いた一方のアッセイを、サンプルについて、ｐＨ１１．
５の解離試薬を用い室温で一晩で行った。
【００４６】酸解離前処理手法を実施例２に記載の通り
に行い、いったんサンプルを中和し、供試サンプルを、
ビロノスティカR ＨＩＶ−１抗原マイクロエリザシス
テムキットスクリーニングアッセイマイクロタイタープ
レートに移した。
に行い、いったんサンプルを中和し、供試サンプルを、
ビロノスティカR ＨＩＶ−１抗原マイクロエリザシス
テムキットスクリーニングアッセイマイクロタイタープ
レートに移した。
【００４７】上記実施例１に記載の通りの３種類のサン
プルすべてについてイムノアッセイを行った。
プルすべてについてイムノアッセイを行った。
【００４８】イムノアッセイの結果を図６および７に示
す。このスクリーニングの形式は、２５個の陽性サンプ
ルおよび８個のシグナルが高くなったサンプルを検出し
たが、Ｓ／ＣＯ値が１以下のものについてはカットオフ
した。一晩の酸解離方法は、３３個のサンプルのうち３
１個を陽性として検出した。２個の結果が陰性とされた
ものは、標準的スクリーニングアッセイにより陽性であ
ることが示された。一晩の塩基解離アッセイは、３３個
すべてのサンプルを検出した。更に、一晩の塩基解離ア
ッセイは、一晩の酸解離法に比べ抗体非含有サンプル
（標準）に対し４−５倍感受性が高い。
す。このスクリーニングの形式は、２５個の陽性サンプ
ルおよび８個のシグナルが高くなったサンプルを検出し
たが、Ｓ／ＣＯ値が１以下のものについてはカットオフ
した。一晩の酸解離方法は、３３個のサンプルのうち３
１個を陽性として検出した。２個の結果が陰性とされた
ものは、標準的スクリーニングアッセイにより陽性であ
ることが示された。一晩の塩基解離アッセイは、３３個
すべてのサンプルを検出した。更に、一晩の塩基解離ア
ッセイは、一晩の酸解離法に比べ抗体非含有サンプル
（標準）に対し４−５倍感受性が高い。
【００４９】実施例６． 最適ｐＨの決定 塩基解離アッセイに最適なｐＨ範囲を決定するために、
以下の実験を行った。サンプルを、ビロノスティカR
ＨＩＶ−１抗原マイクロエリザシステムキットを用いて
分析した。改変した条件は、下記の通りである。
以下の実験を行った。サンプルを、ビロノスティカR
ＨＩＶ−１抗原マイクロエリザシステムキットを用いて
分析した。改変した条件は、下記の通りである。
【００５０】第一のアッセイで検査しようとするサンプ
ルは、正常のヒトの血清で１ｘ１０5 に希釈したＨＩＶ
−１ ｐ２４抗原ライゼート、１×１０3 抗−ｐ２４抗
体含有血清と混合して１×１０4 に希釈した同じライゼ
ートおよび、１×１０4 抗−ｐ２４抗体含有血清と混合
して１×１０4 に希釈した同じライゼートである。
ルは、正常のヒトの血清で１ｘ１０5 に希釈したＨＩＶ
−１ ｐ２４抗原ライゼート、１×１０3 抗−ｐ２４抗
体含有血清と混合して１×１０4 に希釈した同じライゼ
ートおよび、１×１０4 抗−ｐ２４抗体含有血清と混合
して１×１０4 に希釈した同じライゼートである。
【００５１】サンプルおよび分解用バッファーをマイク
ロタイタープレートウェルに加えた後で２５μｌの塩基
バッファーを加えたことを除いては、実施例１に記載の
通りにアッセイを行った。塩基バッファーは、ｐＨをＮ
ａＯＨまたはＨＣｌで調整した、０．６ＭのＣＡＰＳ
（３ー［シクロヘキシルアミノ］−１−プロパン−スル
ホン酸）および０．６Ｍのエタノールアミン溶液であ
る。各供試サンプルは、ｐＨ９、９．５、１０、１０．
５および１１ならびに、供試ウェル内の最終容量を同じ
くするために塩基バッファーを加えない代りに２５μｌ
の燐酸緩衝生理食塩水を加えたｐＨ７．３で行った。マ
イクロタイタープレートを３７℃で１時間の代りに２時
間インキュベートした。結果を図８に示す。
ロタイタープレートウェルに加えた後で２５μｌの塩基
バッファーを加えたことを除いては、実施例１に記載の
通りにアッセイを行った。塩基バッファーは、ｐＨをＮ
ａＯＨまたはＨＣｌで調整した、０．６ＭのＣＡＰＳ
（３ー［シクロヘキシルアミノ］−１−プロパン−スル
ホン酸）および０．６Ｍのエタノールアミン溶液であ
る。各供試サンプルは、ｐＨ９、９．５、１０、１０．
５および１１ならびに、供試ウェル内の最終容量を同じ
くするために塩基バッファーを加えない代りに２５μｌ
の燐酸緩衝生理食塩水を加えたｐＨ７．３で行った。マ
イクロタイタープレートを３７℃で１時間の代りに２時
間インキュベートした。結果を図８に示す。
【００５２】図８は、ｐＨが７．３から増加するにつれ
て、特にｐＨ１０からｐＨ１２で免疫複合化抗原の検出
能力が増強されることを示している。
て、特にｐＨ１０からｐＨ１２で免疫複合化抗原の検出
能力が増強されることを示している。
【００５３】実施例７． 塩基解離法におけるインキュ
ベーションの効果 塩基解離法を用いてサンプルを前処理した後のイムノア
ッセイの感度を、インキュベーションの時間を長くする
ことにより改良できるかどうかを調査するために、この
実験を行った。
ベーションの効果 塩基解離法を用いてサンプルを前処理した後のイムノア
ッセイの感度を、インキュベーションの時間を長くする
ことにより改良できるかどうかを調査するために、この
実験を行った。
【００５４】ｐＨを１１、１１．５および１２に調整し
た、上記の実施例３に記載の通りの塩基解離試薬で分解
用バッファーを置き換えたことを除いては、上記実施例
１に記載の通りのビロノスティカR 検査キットおよび手
法を、６個の臨床サンプルおよび、１０ｐｇ／ｍｌのｐ
２４抗原を含有するスパイクしたサンプルに対して用い
た。更に、サンプルのインキュベーションを、３７℃で
２時間または室温で一晩のいずれかにした。結果を図９
に示す。
た、上記の実施例３に記載の通りの塩基解離試薬で分解
用バッファーを置き換えたことを除いては、上記実施例
１に記載の通りのビロノスティカR 検査キットおよび手
法を、６個の臨床サンプルおよび、１０ｐｇ／ｍｌのｐ
２４抗原を含有するスパイクしたサンプルに対して用い
た。更に、サンプルのインキュベーションを、３７℃で
２時間または室温で一晩のいずれかにした。結果を図９
に示す。
【００５５】図９は、すべての免疫複合化サンプルは２
時間のインキュベーションにおいてさえも増強した検出
能力を示したが、非複合化サンプル（１０ｐｇ／ｍｌサ
ンプル）は減少した検出能力を示したことを示す。しか
しながら、一晩のインキュベーション後は、非複合化サ
ンプルを含むすべてのサンプルが増強した検出能力を示
した。
時間のインキュベーションにおいてさえも増強した検出
能力を示したが、非複合化サンプル（１０ｐｇ／ｍｌサ
ンプル）は減少した検出能力を示したことを示す。しか
しながら、一晩のインキュベーション後は、非複合化サ
ンプルを含むすべてのサンプルが増強した検出能力を示
した。
【００５６】これらの実施例は、塩基解離法が、マイク
ロタイターウェル内で行うことができ、イムノアッセイ
を行う前に中和化工程を必要としないことから酸解離前
処理法に比べ容易で複雑さの少ないアッセイであること
を示している。これは、遊離の抗原および、解離工程に
よりその抗体との免疫複合体から遊離した抗原の検出な
らびに、サンプル中の抗原の量の検出の両方において、
多数の酸解離法に比べて感受性が高い。
ロタイターウェル内で行うことができ、イムノアッセイ
を行う前に中和化工程を必要としないことから酸解離前
処理法に比べ容易で複雑さの少ないアッセイであること
を示している。これは、遊離の抗原および、解離工程に
よりその抗体との免疫複合体から遊離した抗原の検出な
らびに、サンプル中の抗原の量の検出の両方において、
多数の酸解離法に比べて感受性が高い。
【００５７】実施例８ いくつかのサンプルについて、オルガノンテクニカ社か
ら市販的に入手可能なビロノスティカ(R) ＨＩＶ−１
抗原マイクロエリザシステムを用いイムノアッセイによ
りＨＩＶ−１抗原の存在を検査した。検査したサンプル
は、 １． アッセイシステムキットから得た陰性の対照（Ｎ
Ｃ）； ２． ＨＩＶ−１抗体を含まない低度に陽性のＨＩＶ−
１抗原サンプル（１０ｐｇ／ｍｌ）； ３． ＨＩＶ−１抗原および抗体の両方を含む、人為的
に創った免疫複合体陽性対照（ＩＣＰＣ）；ならびに ４． 臨床のＨＩＶ−１抗体陽性サンプル（ＦＦ ４１
８１１）である。
ら市販的に入手可能なビロノスティカ(R) ＨＩＶ−１
抗原マイクロエリザシステムを用いイムノアッセイによ
りＨＩＶ−１抗原の存在を検査した。検査したサンプル
は、 １． アッセイシステムキットから得た陰性の対照（Ｎ
Ｃ）； ２． ＨＩＶ−１抗体を含まない低度に陽性のＨＩＶ−
１抗原サンプル（１０ｐｇ／ｍｌ）； ３． ＨＩＶ−１抗原および抗体の両方を含む、人為的
に創った免疫複合体陽性対照（ＩＣＰＣ）；ならびに ４． 臨床のＨＩＶ−１抗体陽性サンプル（ＦＦ ４１
８１１）である。
【００５８】塩基解離アッセイに用いた以下の例外、即
ち、 １． 標準アッセイシステム分解用バッファー（ほぼ中
性のｐＨ、洗浄剤含有サンプルバッファー）を指示した
高ｐＨ試薬で置き換えた ２． 初めの（サンプル）インキュベーションを、３７
℃で１時間から室温で一晩に延ばした ことを除いては、パッケージ付随の指示書によるアッセ
イ手法に従った。
ち、 １． 標準アッセイシステム分解用バッファー（ほぼ中
性のｐＨ、洗浄剤含有サンプルバッファー）を指示した
高ｐＨ試薬で置き換えた ２． 初めの（サンプル）インキュベーションを、３７
℃で１時間から室温で一晩に延ばした ことを除いては、パッケージ付随の指示書によるアッセ
イ手法に従った。
【００５９】用いたアッセイプロトコール、即ち、塩基
解離アッセイプロトコールは、下記の通りである。サン
プルおよびエタノールアミンまたは高ｐＨバッファーま
たは標準バッファーを、モノクローナル抗体でコートし
たマイクロタイターウェルに加え、マイクロタイタープ
レートを室温で一晩インキュベートした。この後、ウェ
ルをＰＢＳ／トゥイーン(R) ２０（ロームアンドハース
社の商標）バッファーで４回洗浄し、マイクロタイター
ウェルに複合物を加えた。プレートを３７℃で１時間イ
ンキュベートした後、再度ＰＢＳ／トゥイーン(R) ２０
バッファーで４回洗浄した。ＴＭＢ基質をウェルに加
え、プレートを室温で３０分間インキュベートした後、
反応を停止させ、読み取った。結果を表１に示す。
解離アッセイプロトコールは、下記の通りである。サン
プルおよびエタノールアミンまたは高ｐＨバッファーま
たは標準バッファーを、モノクローナル抗体でコートし
たマイクロタイターウェルに加え、マイクロタイタープ
レートを室温で一晩インキュベートした。この後、ウェ
ルをＰＢＳ／トゥイーン(R) ２０（ロームアンドハース
社の商標）バッファーで４回洗浄し、マイクロタイター
ウェルに複合物を加えた。プレートを３７℃で１時間イ
ンキュベートした後、再度ＰＢＳ／トゥイーン(R) ２０
バッファーで４回洗浄した。ＴＭＢ基質をウェルに加
え、プレートを室温で３０分間インキュベートした後、
反応を停止させ、読み取った。結果を表１に示す。
【００６０】表１の解釈を容易にするために、各サンプ
ルの処理を以下に記す。
ルの処理を以下に記す。
【００６１】サンプル処理 １． ５マイクロリッター（μｌ）の未希釈のエタノー
ルアミンと１００μｌの血清または血漿サンプルとを混
合した。
ルアミンと１００μｌの血清または血漿サンプルとを混
合した。
【００６２】２． １０Ｍのエタノールアミン１０μｌ
と１００μｌの血清または血漿サンプルとを混合した。
と１００μｌの血清または血漿サンプルとを混合した。
【００６３】３． ２５μｌの塩基解離試薬（ＢＤＲ）
と１００μｌの血清または血漿サンプルとを混合した。
市販品として処方されたＢＤＲの組成は、熱失活させた
正常なウマ血清、トリトン(R) Ｘ−１００、エタノー
ル、シンナムアルデヒド、染料、ゲンタマイシン硫酸、
燐酸ナトリウム、塩化ナトリウム、エタノールアミン
（２．０Ｍ）、バッファーおよびｐＨを１１．６に調整
するための水酸化ナトリウムである。
と１００μｌの血清または血漿サンプルとを混合した。
市販品として処方されたＢＤＲの組成は、熱失活させた
正常なウマ血清、トリトン(R) Ｘ−１００、エタノー
ル、シンナムアルデヒド、染料、ゲンタマイシン硫酸、
燐酸ナトリウム、塩化ナトリウム、エタノールアミン
（２．０Ｍ）、バッファーおよびｐＨを１１．６に調整
するための水酸化ナトリウムである。
【００６４】４． ２５μｌの分解用バッファーと１０
０μｌの血清または血漿サンプルとを混合した。
０μｌの血清または血漿サンプルとを混合した。
【００６５】結果 データを表１の４×４の格子内に示す。縦列に示したす
べてのサンプルは、指示された通りのサンプル処理を受
けた。横列に示したすべてのデータは、指示されたもの
と同じサンプルの一部から得た。すべてのサンプルは、
サンプルおよびサンプル処理のそれぞれ別の組み合わせ
で４回重複してアッセイした。平均値、変動係数（ＣＶ
％）およびカットオフに対するシグナル比（Ｓ／ＣＯ）
を、各セットについて求めた。ａ以上またはａに等しい
Ｓ／ＣＯ値は、陽性の結果を示すと考えられる。
べてのサンプルは、指示された通りのサンプル処理を受
けた。横列に示したすべてのデータは、指示されたもの
と同じサンプルの一部から得た。すべてのサンプルは、
サンプルおよびサンプル処理のそれぞれ別の組み合わせ
で４回重複してアッセイした。平均値、変動係数（ＣＶ
％）およびカットオフに対するシグナル比（Ｓ／ＣＯ）
を、各セットについて求めた。ａ以上またはａに等しい
Ｓ／ＣＯ値は、陽性の結果を示すと考えられる。
【００６６】免疫複合体解離処理または試薬が効果的で
あるならば、この試薬と２種の抗体含有サンプル（ＩＣ
ＰＣおよびＦＦ ４１８１１）とを組み合わせた場合に
得られるＳ／ＣＯ値は、これらのサンプルと標準アッセ
イ分解用バッファーとを組み合わせた場合に得られるＳ
／ＣＯ値に比べ有意に高いであろう。
あるならば、この試薬と２種の抗体含有サンプル（ＩＣ
ＰＣおよびＦＦ ４１８１１）とを組み合わせた場合に
得られるＳ／ＣＯ値は、これらのサンプルと標準アッセ
イ分解用バッファーとを組み合わせた場合に得られるＳ
／ＣＯ値に比べ有意に高いであろう。
【００６７】表１は、１０Ｍまたは未希釈のエタノール
アミンおよびＢＤＲで処理した抗体含有サンプルによっ
てもたらされたＳ／ＣＯ値が、標準アッセイ分解用バッ
ファーで処理した同じサンプルのＳ／ＣＯ値に比べ高い
ことを示している。
アミンおよびＢＤＲで処理した抗体含有サンプルによっ
てもたらされたＳ／ＣＯ値が、標準アッセイ分解用バッ
ファーで処理した同じサンプルのＳ／ＣＯ値に比べ高い
ことを示している。
【００６８】更に、この表は、１６Ｍ以上の濃度を有す
る水混和性液である未希釈のエタノールアミンも、この
目的にとって有用であることを示している。
る水混和性液である未希釈のエタノールアミンも、この
目的にとって有用であることを示している。
【００６９】
【表１】
【図１】ｔｈｅ Ｃｏｕｌｔｅｒ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉ
ｏｎスクリーニングイムノアッセイ及びｔｈｅ Ｏｒｇ
ａｎｏｎ Ｔｅｋｎｉｋａ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎス
クリーニングイムノアッセイを使用してＨＩＶ−１ ｐ
２４抗原について試験した試料の、試験試料対Ｓ／ＣＯ
比の計算値を示すグラフである。
ｏｎスクリーニングイムノアッセイ及びｔｈｅ Ｏｒｇ
ａｎｏｎ Ｔｅｋｎｉｋａ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎス
クリーニングイムノアッセイを使用してＨＩＶ−１ ｐ
２４抗原について試験した試料の、試験試料対Ｓ／ＣＯ
比の計算値を示すグラフである。
【図２】一方の試料セットは前処理せず、他方の試料セ
ットは酸解離によって前処理した場合の、ｔｈｅ Ｃｏ
ｕｌｔｅｒ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎスクリーニングイ
ムノアッセイを使用してＨＩＶ−１ ｐ２４抗原につい
て試験した試料のグラフである。
ットは酸解離によって前処理した場合の、ｔｈｅ Ｃｏ
ｕｌｔｅｒ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎスクリーニングイ
ムノアッセイを使用してＨＩＶ−１ ｐ２４抗原につい
て試験した試料のグラフである。
【図３】一方の試料セットは塩基解離によって処理し、
他方の試料セットは処理しない場合の、ｔｈｅ Ｏｒｇ
ａｎｏｎ Ｔｅｋｎｉｋａ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎイ
ムノアッセイを使用してＨＩＶ−１ ｐ２４について試
験した試料のグラフである。
他方の試料セットは処理しない場合の、ｔｈｅ Ｏｒｇ
ａｎｏｎ Ｔｅｋｎｉｋａ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎイ
ムノアッセイを使用してＨＩＶ−１ ｐ２４について試
験した試料のグラフである。
【図４】ｔｈｅ Ｃｏｕｌｔｅｒ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉ
ｏｎ酸解離イムノアッセイとｔｈｅ Ｏｒｇａｎｏｎ
Ｔｅｋｎｉｋａ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ塩基解離イム
ノアッセイとを比較するグラフである。
ｏｎ酸解離イムノアッセイとｔｈｅ Ｏｒｇａｎｏｎ
Ｔｅｋｎｉｋａ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ塩基解離イム
ノアッセイとを比較するグラフである。
【図５】Ｓ／ＣＯが１２以上の全ての値を除いた、図４
と同様のグラフである。
と同様のグラフである。
【図６】ＨＩＶ−１ ｐ２４抗原の検出における、スク
リーニングアッセイ、酸解離前処理方法及び塩基解離方
法を比較するグラフである。
リーニングアッセイ、酸解離前処理方法及び塩基解離方
法を比較するグラフである。
【図７】ＨＩＶ−１ ｐ２４抗原の検出における、スク
リーニングアッセイ、酸解離前処理方法及び塩基解離方
法を比較するグラフである。
リーニングアッセイ、酸解離前処理方法及び塩基解離方
法を比較するグラフである。
【図８】種々のｐＨ値で塩基解離した標準試料における
ｐＨ対Ｓ／ＣＯのグラフである。
ｐＨ対Ｓ／ＣＯのグラフである。
【図９】更に２種類のインキュベーション時間の効果を
比較する図８と同様のグラフである。
比較する図８と同様のグラフである。
Claims (15)
- 【請求項１】 サンプル中の抗原の検出を増進するため
の方法であって、抗体と免疫結合した前記抗原を含み得
るサンプルを塩基性ｐＨ溶液で約８．０以上のｐＨに調
節し、免疫結合体を解離させると共に抗原を遊離させ、
調節したサンプルをイムノアッセイにかけ、前記サンプ
ル中の抗原と固体支持体に結合した抗体との新規免疫結
合体を形成させ、新規免疫結合体の有無を検出し、前記
抗原の有無を決定する段階とを含む方法。 - 【請求項２】 サンプルを約９．０〜約１４．０のｐＨ
に調節することを特徴とする請求項１に記載の方法。 - 【請求項３】 ｐＨ範囲が約１０．０〜約１２．０であ
ることを特徴とする請求項２に記載の方法。 - 【請求項４】 抗原がペプチド、タンパク質、ハプテン
及び核酸から構成される群から選択されることを特徴と
する請求項１に記載の方法。 - 【請求項５】 抗原がヒト免疫不全ウイルスタイプ１
（ＨＩＶ−１）ｐ２４抗原、ＨＩＶ−２ ｐ２４抗原、
ヒトＴ細胞リンパ指向性ウイルスタイプ１（ＨＴＬＶ−
Ｉ）からの抗原、ＨＴＬＶ−２からの抗原及びＣ型肝炎
ウイルスからの抗原から構成される群から選択されるこ
とを特徴とする請求項１に記載の方法。 - 【請求項６】 抗原がヒト免疫不全ウイルスタイプ１
ｐ２４抗原であることを特徴とする請求項１に記載の方
法。 - 【請求項７】 抗原がヒト免疫不全ウイルスタイプ２
ｐ２４抗原であることを特徴とする請求項１に記載の方
法。 - 【請求項８】 サンプルが血漿、血清、尿及び脳脊髄液
から構成される群から選択されることを特徴とする請求
項１に記載の方法。 - 【請求項９】 塩基性溶液が塩、塩基性ｐＨのｐＫａを
有する緩衝液、並びに非イオン性、アニオン性、カチオ
ン性及び双性イオン性界面活性剤から構成される群から
選択される界面活性剤からなる組成物であることを特徴
とする請求項１に記載の方法。 - 【請求項１０】 塩がＮａＣｌであり、緩衝液がエタノ
ールアミンであり、界面活性剤がＴｒｉｔｏｎ Ｘ−１
００であることを特徴とする請求項９に記載の方法。 - 【請求項１１】 ＮａＣｌが０〜約３Ｍの濃度を有して
おり、エタノールアミンガ約０．０１Ｍ〜約１０Ｍの濃
度を有しており、Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１００が０％〜約
１０％の濃度を有していることを特徴とする請求項１０
に記載の方法。 - 【請求項１２】 固体支持体が微量滴定プレートウェ
ル、ビーズ、ストリップ、試験管、毛細管、金ゾル、赤
血球及びラテックス粒子から構成される群から選択され
ることを特徴とする請求項１に記載の方法。 - 【請求項１３】 塩、塩基性ｐＨのｐＫａを有する緩衝
液、並びに非イオン性、アニオン性、カチオン性及び双
性イオン性界面活性剤から構成される群から選択される
界面活性剤を含有する、サンプル中の抗体と免疫結合し
た抗原を解離させるための組成物。 - 【請求項１４】 緩衝液がエタノールアミンであり、塩
が塩化ナトリウムであり、界面活性剤がＴｒｉｔｏｎ
Ｘ−１００であることを特徴とする請求項１３に記載の
組成物。 - 【請求項１５】 ＮａＣｌが０〜約３Ｍの濃度を有して
おり、エタノールアミンガ約０．０１Ｍ〜約１０Ｍの濃
度を有しており、Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１００が０％〜約
１０％の濃度を有していることを特徴とする請求項１４
に記載の組成物。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US07/981,689 US5384240A (en) | 1992-11-25 | 1992-11-25 | Base dissociation assay |
| US981689 | 1992-11-25 |
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| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
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Family
ID=25528576
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP29556893A Expired - Fee Related JP3398199B2 (ja) | 1992-11-25 | 1993-11-25 | 塩基解離アッセイ |
Country Status (13)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5384240A (ja) |
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| JP (1) | JP3398199B2 (ja) |
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| AU (1) | AU674353B2 (ja) |
| CA (1) | CA2109855A1 (ja) |
| DE (1) | DE69332236T2 (ja) |
| DK (1) | DK0599417T3 (ja) |
| ES (1) | ES2182825T3 (ja) |
| FI (1) | FI935217L (ja) |
| PT (1) | PT599417E (ja) |
| ZA (1) | ZA938726B (ja) |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
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| JP2012132869A (ja) * | 2010-12-24 | 2012-07-12 | Eiken Chemical Co Ltd | Ｈｉｖの検出方法 |
| JP2014224829A (ja) * | 2010-03-10 | 2014-12-04 | アンスティテュ・パストゥール | 神経学的障害の予後判定のためのｈｍｇｂ１および抗ｈｍｇｂ１抗体 |
| JP2022058435A (ja) * | 2016-05-31 | 2022-04-12 | エフ．ホフマン－ラ ロシュ アーゲー | ウイルス抗原の血清学的検出方法 |
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