CN108299553B - 胃泌酸调节素修饰物 - Google Patents

Abstract

本发明公开了对GLP‑1受体和胰高血糖素受体具有双重激动效果的胃泌酸调节素类似的修饰物，同时包括该修饰物作为活性成分的药物组合物。该修饰物如式(I)所示：(OXM‘)‑L‑Y(I)其中，OXM’为天然胃泌酸调节素或胃泌酸调节素的类似物，Y为脂肪酸，L为OXM’与Y的连接基团。

Description

胃泌酸调节素修饰物

技术领域

本发明涉及新型的胃泌酸调节素类似物及其修饰物，具体地说，本发明涉及对GLP-1受体和胰高血糖素受体具有双重激动效果的胃泌酸调节素类似物及其修饰物，同时包括该类似物和修饰物作为活性成分的药物组合物。

背景技术

肥胖症是一组常见的代谢症群。当人体进食热量多于消耗热量时，多余热量以脂肪形式储存于体内，其量超过正常生理需要量，且达一定值时遂演变为肥胖症。正常男性成人脂肪组织重量占体重的15％～18％，女性占20％～25％。随年龄增长，体脂所占比例相应增加。关于肥胖的评估方法，包括人体测量学、双能X线吸收法、超声、CT、红外线感应法等多种。如无明显病因者称单纯性肥胖症，有明确病因者称为继发性肥胖症。

世界卫生组织(WHO)估测，世界上10亿以上人超重，并且其中至少3亿是临床上的肥胖。具体地，在欧洲每年250,000人并且在世界上每年250万以上人因超重而死亡。

胖症患者并发冠心病、高血压的几率明显高于非肥胖者，其发生率一般5～10倍于非肥胖者，尤其腰围粗(男性>90cm，女性>85cm)的中心型肥胖患者。肥胖患者肺活量降低且肺的顺应性下降，可导致多种肺功能异常，如肥胖性低通气综合征，临床以嗜睡、肥胖、肺泡性低通气为特征，常伴有阻塞性睡眠呼吸困难。严重者可致肺心综合征。进食过多的热量促进甘油三酯的合成和分解代谢，肥胖症的脂代谢表现得更加活跃，相对糖代谢受到抑制，这种代谢改变参与胰岛素抵抗的形成。肥胖症脂代谢活跃的同时多伴有代谢的紊乱，会出现高甘油三酯血症、高胆固醇血症和低高密度脂蛋白胆固醇血症等。肥胖者脂肪细胞分泌多种脂肪因子和炎性因子，可能会加重肥胖者骨质疏松和骨折的发生。肥胖症还会引起内分泌系统的不良变化。

肥胖难以治疗，因为肥胖是涉及食欲调节和能量代谢的复杂病症。就肥胖治疗而言，应当结合肥胖患者的努力治疗与食欲调节和能量代谢有关的异常表现。临床中曾使用或正在使用的治疗肥胖症的药物包括，利莫那班(Rimonabant，Sanofi-Aventis)、西布曲明(Sibutramin，Abbott)、Contrave(Takeda)和奥利司他(Orlistat，Roche)等，但其具有严重副作用或极微弱抗肥胖效果的缺陷。例如，据报告，利莫那班(Sanofi-Aventis)显示中枢神经病症的副作用，西布曲明(Abbott)和Contrave(Takeda)显示心血管副作用，和奥利司他(Roche)显示服用1年仅减重4kg。目前还没有较为安全且有效的肥胖症治疗药物。

人体食欲和能量代谢调控主要由下丘脑、脑干孤束核、胰岛素、脂联素、瘦素等胰岛、脂肪代谢信号分子、胃促生长激素、高血糖素样肽、胃泌素调节激素等胃肠激素和迷走神经等来共同调节。下丘脑、延脑孤束核分泌的激素和神经递质及脂肪代谢信号分子都需要通过神经系统和血液循环系统来发挥作用，针对这些调节通路的减肥药物需要通过中枢神经来起作用，影响面大，副作用严重。只有胃肠激素多直接作用于胃肠道，调节食欲和能量代谢。因此，针对胃肠激素的减肥药物靶点局限，副作用小。

胃泌酸调节素(Oxyntomodulin，OXM)是肠上皮L-细胞分泌的一种短肽激素。在人肠道末端有大量的OXM分布，在啮齿类动物胃肠道中，从十二指肠到回肠，OXM的浓度逐渐增高，盲肠之后逐渐减少。肠上皮分泌胃泌酸调节素受营养和能量代谢调节，进食后5-10分钟后OXM水平开始升高，30分钟后达到高峰。在体内有一定的昼夜规律，清晨分泌水平低，晚上分泌水平高。OXM是由37个氨基酸组成的肽类激素，是胰高血糖素基因转录后加工的产物，在其前体第33～69位氨基酸区包括了胰高血糖素的全部序列，并在C末端延伸出一个8肽(Lys-Arg-Asn-Lys-Asn-Asn-Ile-Ala)，因此又被成为“胰高血糖素-37”，其典型的氨基酸序列如下：HSQGTFTSDYSKYLDSRRAQDFVQWLMNTKRNRNNIA。

前期研究结果也显示，OXM是有效的减肥药物，因为其如同GLP-1抑制食物摄入，促进饱足感，并且如同胰高血糖素具有脂解活性。长期中枢性和周围性地给与OXM可减少大鼠的体重增加。静脉给与高于生理水平的OXM可减少受试者食物摄取。Dhilfows等在为期四周的研究中发现，自行给与OXM的超重或肥胖受试者，其摄入量显著少于生理盐水对照组，并且体重减轻也显著快于对照组，这种效应在四周的研究过程中持续维持。OXM可减缓胃内营养物质的排空。具有减少食物吸收，抑制食欲及动员脂肪、减少能量摄入，增加能量消耗，使能量代谢处于负平衡状态，从而减轻体重的功能。

但OXM的半衰期较短，可被细胞表面的二肽基肽酶IV(DP-IV)迅速失活，然而，DP-IV抑制剂在临床中的体重效果居中，表明可能需要超生理水平的OXM来实现人体的减肥。因此，胃泌酸调节素显示了作为代谢疾病如糖尿病和肥胖症的治疗手段的潜力，但是，因为OXM的体内稳定性差，所以需要开发可替代OXM的修饰物。

WO2012169798公开了一系列对胰高血糖素样肽-1受体和胰高血糖素受体显示比天然泌酸调节肽更优异的活性的新型肽。其所公开的SEQ ID NO.24和25的多肽具有较为优异的GLP-1和胰高血糖素受体的双重激动作用。

WO2012173422公开了多个泌酸调节肽、免疫球蛋白Fc区和非肽基聚合物的结合物，其中结合物通过非肽基聚合物共价连接泌酸调节肽与免疫球蛋白Fc区而获得。

虽然现有技术中已公开多个胃泌酸调节素修饰物，但由于药品开发过程中，研发失败率较高，需要有较多的前导药物被研究，以增加药品开发的成功率。

发明内容

本发明人通过研发新型的胃泌酸调节素类似物和其修饰物，以期开发出安全有效，具有临床前景的治疗肥胖症、糖尿病、高血脂相关疾病的药物。

典型的天然胃泌酸调节素如SEQ ID NO：1的氨基酸序列所示，在本发明中，该多肽被称为P1。本发明一方面提供了一系列天然胃泌酸调节素的类似物，该类似物为多肽。

SEQ ID NO：1HSQGTFTSDYSKYLDSRRAQDFVQWLMNTKRNRNNIA

本发明多肽如表1所示：

表1本发明胃泌酸调节素类似物

本发明第二方面提供了上述类似物经过修饰得到的修饰物。该修饰物如式(I)所示：

(OXM‘)-L-Y(I)

其中，OXM’为天然胃泌酸调节素或胃泌酸调节素的类似物，Y为脂肪酸，L为OXM’与Y的连接基团。

优选的，上述修饰物如式(II)所示：

n为6-20之间的任一整数。

式(II)优选为

式(II)优选的修饰物中，OXM‘为：

SEQ ID No.2的氨基酸序列的多肽；

SEQ ID No.3的氨基酸序列的多肽；

SEQ ID No.4的氨基酸序列的多肽；

SEQ ID No.5的氨基酸序列的多肽；

SEQ ID No.6的氨基酸序列的多肽；

SEQ ID No.7的氨基酸序列的多肽；

SEQ ID No.8的氨基酸序列的多肽；

SEQ ID No.9的氨基酸序列的多肽；

SEQ ID No.10的氨基酸序列的多肽；

SEQ ID No.24的氨基酸序列的多肽；

SEQ ID No.25的氨基酸序列的多肽。

其中，SEQ ID No.24和SEQ ID No.25的氨基酸序列的多肽为WO2012169798所公开的多肽，其中：

SEQ ID No.24 HAibQG TFTSD YSKYL DEKRAKEFVQ WLMNTC

SEQ ID No.25 HAibQG TFTSD YSKYL DEKRAKEFVQ WLMNTC(下划线表示环形成)

SEQ ID No.24和SEQ ID No.25的氨基酸序列的多肽在本发明中分别称为P2和P3。

具体地说，本发明提供了如下修饰物：

SEQ ID No.2的氨基酸序列的多肽的修饰物：

SEQ ID No.3的氨基酸序列的多肽的修饰物：

SEQ ID No.4的氨基酸序列的多肽的修饰物：

SEQ ID No.5的氨基酸序列的多肽的修饰物：

SEQ ID No.6的氨基酸序列的多肽的修饰物：

SEQ ID No.7的氨基酸序列的多肽的修饰物：

SEQ ID No.8的氨基酸序列的多肽的修饰物：

SEQ ID No.9的氨基酸序列的多肽的修饰物：

SEQ ID No.10的氨基酸序列的多肽的修饰物：

SEQ ID No.24的氨基酸序列的多肽的修饰物：

SEQ ID No.25的氨基酸序列的多肽的修饰物：

其中，m为2-10之间的任一整数；n为6-20之间的任一整数。

更具体地说，本发明提供如下修饰物：

PP03b01：

PP03c01：

PP03d01：

PP03h01：

PP03h02：

PP03h03：

PP03j01：

PP03k01：

PP03m01：

PP03n01：

PP03s01：

PP03p01：

PP03q01：

本发明第三方面提供了本发明胃泌酸调节素类似物和本发明胃泌酸调节素类似物的修饰物在制备用于预防和/或治疗与GLP-1受体活性低下相关的疾病和/或症状的药物中的用途；在制备用于治疗肥胖症及相关疾病的药物中的用途；在制备用于减重的药物中的用途；在制备用于糖代谢相关的疾病和/或症状的药物中的用途；在制备用于糖尿病的用途；在制备预防或治疗高脂血症、脂肪肝病或动脉硬化药物中的用途。

本发明第四方面提供了含有本发明胃泌酸调节素类似物或本发明胃泌酸调节素类似物的修饰物以及任选的药学可接受的载体组成的药物组合物，可以为药学上常见的片剂、胶囊剂、糖浆剂、注射剂等。

本发明第五方面提供了含有本发明胃泌酸调节素类似物或本发明胃泌酸调节素类似物的修饰物的药物组合物在在制备用于预防和/或治疗与GLP-1受体活性低下相关的疾病和/或症状的药物中的用途；在制备用于治疗肥胖症及相关疾病的药物中的用途；在制备用于减重的药物中的用途；在制备用于糖代谢相关的疾病和/或症状的药物中的用途；在制备用于糖尿病的用途；在制备预防或治疗高脂血症、脂肪肝病或动脉硬化药物中的用途。

胃泌酸调节肽对GLP-1和胰高血糖素受体均有激动作用。GLP-1降低血糖、减少食物摄入，和抑制胃排空，而胰高血糖素通过增加能量代谢增加血糖、促进脂解和降低体重。两种肽的不同生物学作用可导致不被期望的效应，如果胰高血糖素显示比GLP-1更强支配作用则增加血糖，或如果GLP-1显示比胰高血糖素更强支配性作用则导致恶心和呕吐。因此，本发明的胃泌酸调节肽类似物和类似物的修饰物不仅旨在增强这些活性，而且具有平衡的胰高血糖素和GLP-1的活性比，以下通过药理试验进行说明：

以下试验所使用的试剂、仪器、样品，除非特别指明，均为市售，其中：

HEPES：4-羟乙基哌嗪乙磺酸

HBSS：Hank's平衡盐溶液

BSA稳定剂：牛血清白蛋白稳定剂

IBMX：3-异丁基-1-甲基黄嘌呤

实验一、靶向胰高血糖素和GLP-1受体的cAMP测定

一、试验目标：

样品对胰高血糖素和GLP-1受体活性的cAMP测试

二、材料：

1.试剂

过度表达胰高血糖素和GLP-1受体的HEK293细胞

cAMP检测试剂盒，Cisbio(Cat#62AM4PEJ)

1M HEPES，Invitrogen(Cat#15630-106)

1X HBSS，Invitrogen(Cat#14025)

BSA稳定剂(7.5％溶液)，PerkinElmer(Cat#CR84-100)

IBMX，Sigma(目录号I5879)

2.耗材和仪器

OptiPlate-384孔板，PerkinElmer(Cat#6007290)

384孔板，Labcyte(Cat#P-05525)

EnVision检测仪，PerkinElmer

Bravo液体处理器(liquid handler)(Agilent)

Vi-cell细胞计数器，Beckman(Cat#Vi-CELL ^TM XR细胞活力分析仪)

3.样品

P1、P2、P3、PP03b、PP03c、PP03d、PP03h、PP03j、PP03k、PP03m、PP03n、PP03s、PP03b01、PP03c01、PP03d01、PP03h01、PP03h02、PP03h03、PP03j01、PP03k01、PP03m01、PP03n01、PP03s01、PP03p01、PP03q01均由博瑞生物医药(苏州)股份有限公司合成。

胰高血糖素购买自Sigma(Cat#91201)，艾塞那肽由合作的临床试验公司提供。

三、试验方法

1.胰高血糖素(GCGR)和GLP-1细胞悬浮液的配置：

1).试验缓冲液：5mM HEPES；0.1％BSA稳定剂；0.5mM IBMX；HBSS。

2).在37℃水浴中，将每一种细胞迅速解冻一管。

3).将每一管细胞悬浮液转移到15ml锥形管中的10ml HBSS中。

4).在室温下以1000rpm的转速离心细胞5分钟，得到下层细胞(pellet cells)

5).轻轻吸出上清液，小心不要吸出细胞。

6).将下层细胞轻弹松散，并将细胞在10ml的HBSS中重悬。使用无菌移液器上下吹打，使其混合均匀。

7).在Vi-cell上测定计数细胞浓度，并确定细胞活性。

8).将细胞重悬于试验缓冲液中，使其细胞浓度为1.5×10⁵/mL。

2.样品配置：

1).使用Bravo液体处理器从最高浓度0.2mM(样品溶解于DMSO)三倍稀释，配置10个浓度测试样品。

2).使用Bravo液体处理器从最高浓度0.002mM(对照样品溶解于DMSO)三倍稀释，配置10个浓度艾塞那肽和胰高血糖素对照样品。

3.HTRF cAMP的测定：

1).使用声波移液系统(Echo transfer)将50nL艾塞那肽、50nL胰高血糖素、50nL样品、50nLDMSO分别转移至OptiPlate-384板。

2).使用电子多通道移液器(Electric Multiple Channel Pipette)将10μL细胞悬浮液根据板图(plate map)加入到检测板的指定区域。

3).以1000rpm的转速旋转平板1分钟。

4).在室温下刺激细胞60分钟。

5).配置cAMP标准曲线的8个浓度，最高浓度800nM，4倍稀释。

6).根据检测板绘制cAMP标准曲线。

7).根据cAMP检测试剂盒说明书制备检测试剂和抗体。

8).通过电子多通道移液器(Electric Multiple Channel Pipette)向检测板中加入5μL检测试剂。

9).用TopSeal-A膜覆盖384板，并在室温下孵育60分钟。

10).移除TopSeal-A，在EnVision检测仪上读取。

11).数据由Prism分析。

％活性＝100×(样品计算值-低质控平均值(Low control_Average)/(高质控平均值(High control_Average)-低质控平均值)

四、试验结果：

P1、P2、P3、PP03b、PP03c、PP03d、PP03h、PP03j、PP03k、PP03m、PP03n、PP03s、PP03b01、PP03c01、PP03d01、PP03h01、PP03h02、PP03h03、PP03j01、PP03k01、PP03m01、PP03n01、PP03s01、PP03p01、PP03q01

表2对胰高血糖素和GLP-1受体活性的cAMP测试

本发明的胃泌酸调节肽类似物和类似物的修饰物，其对GCGR受体和GLP-1受体均具有较高的激动活性，其激动活性均高于天然胃泌酸调节素P1。其中，本发明胃泌酸调节肽类似物PP03b、PP03c、PP03d、PP03h、PP03j、PP03k、PP03m、PP03n、PP03s对GCGR受体和GLP-1受体的活性均高于WO2012169798所公开的SEQ ID No.24和SEQ ID No.25的氨基酸序列的多肽P2和P3，且具有平衡的胰高血糖素和GLP-1的活性比。

本领域技术人员已知，在缀合了聚合物基团的生物活性分子中，随着缀合基团分子量的增加，缀合生物分子的生物活性将呈指数性逐渐降低。本发明技术人员出乎意料的发现，经过本发明技术人员对本发明胃泌酸调节素类似物进行修饰得到的修饰物PP03b01、PP03c01、PP03d01、PP03h01、PP03h02、PP03h03、PP03j01、PP03k01、PP03m01、PP03n01、PP03s01、PP03p01、PP03q01保留了大部分激动剂活性，且具有平衡的胰高血糖素和GLP-1的活性比。

为了进一步验证本发明胃泌酸调节肽类似物和修饰物在减重、降低血糖、促进脂解方面的作用，本发明人又进行了如下药理试验：

实验二、在高脂血症模型仓鼠中降低脂质的作用

一、试验动物组

8周龄的雄性仓鼠(Golden Syrian仓鼠，120-130g)购买自中国科学院上海实验动物中心。已知仓鼠显示与人相似而与其他啮齿类动物不同的血脂谱，并对高脂肪膳食敏感。

允许动物获得灭菌的高脂肪膳食(含有11.5％玉米油、11.5％椰子油、0.5％胆固醇和0.25％脱氧胆酸的Purina 5001；Dyets,Bethlehem,PA)或标准啮齿类动物膳食(低脂肪，2018；Harlan Teklad,Madison,WI)。允许正常膳食组获得过滤和UV灭菌的自来水，并允许高脂肪膳食组获得含有10％果糖的水。将动物关在满足GLP标准的饲养室中，处于12小时照明/12小时避光循环(照明：am 6至pm6)下，所有的实验过程根据动物实验标准指南进行。在3周的高脂血症诱导之后开始施用药物，动物被分为15组(n＝5)。

具体地，组1(正常组)被喂以正常食物，并皮下施用5ml/kg的Dulbecco磷酸盐缓冲盐水(DPBS,Sigma)每周一次或多次。

组2(高脂血症诱导的组)被喂以高脂肪膳食以诱导高脂血症，然后皮下施用5ml/kg的Dulbecco磷酸盐缓冲盐水(DPBS,Sigma)每周一次或多次。

组3(高脂血症诱导组+施用5.00nmol/kg的PP03b01)被喂以高脂肪膳食以诱导高脂血症，然后以5ml/kg的注射剂量施用5nmol/kg的PP03b01每周一次。

组4(高脂血症诱导组+施用5.00nmol/kg的PP03c01)被喂以高脂肪膳食以诱导高脂血症，然后以5ml/kg的注射剂量施用5nmol/kg的PP03c01每周一次。

组5(高脂血症诱导组+施用5.00nmol/kg的PP03d01)被喂以高脂肪膳食以诱导高脂血症，然后以5ml/kg的注射剂量施用5nmol/kg的PP03d01每周一次。

组6(高脂血症诱导组+施用5.00nmol/kg的PP03h01)被喂以高脂肪膳食以诱导高脂血症，然后以5ml/kg的注射剂量施用5nmol/kg的PP03h01每周一次。

组7(高脂血症诱导组+施用5.00nmol/kg的PP03h02)被喂以高脂肪膳食以诱导高脂血症，然后以5ml/kg的注射剂量施用5nmol/kg的PP03h02每周一次。

组8(高脂血症诱导组+施用5.00nmol/kg的PP03h03)被喂以高脂肪膳食以诱导高脂血症，然后以5ml/kg的注射剂量施用5nmol/kg的PP03h03每周一次。

组9(高脂血症诱导组+施用5.00nmol/kg的PP03j01)被喂以高脂肪膳食以诱导高脂血症，然后以5ml/kg的注射剂量施用5nmol/kg的PP03j01每周一次。

组10(高脂血症诱导组+施用5.00nmol/kg的PP03k01)被喂以高脂肪膳食以诱导高脂血症，然后以5ml/kg的注射剂量施用5nmol/kg的PP03k01每周一次。

组11(高脂血症诱导组+施用5.00nmol/kg的PP03m01)被喂以高脂肪膳食以诱导高脂血症，然后以5ml/kg的注射剂量施用5nmol/kg的PP03m01每周一次。

组12(高脂血症诱导组+施用5.00nmol/kg的PP03n01)被喂以高脂肪膳食以诱导高脂血症，然后以5ml/kg的注射剂量施用5nmol/kg的PP03n01每周一次。

组13(高脂血症诱导组+施用5.00nmol/kg的PP03s01)被喂以高脂肪膳食以诱导高脂血症，然后以5ml/kg的注射剂量施用5nmol/kg的PP03s01每周一次。

组14(高脂血症诱导组+施用5.00nmol/kg的PP03p01)被喂以高脂肪膳食以诱导高脂血症，然后以5ml/kg的注射剂量施用5nmol/kg的PP03p01每周一次。

组15(高脂血症诱导组+施用5.00nmol/kg的PP03q01)被喂以高脂肪膳食以诱导高脂血症，然后以5ml/kg的注射剂量施用5nmol/kg的PP03q01每周一次。

整个实验周期为2周，分析其降低脂质水平的作用。继续延长试验周期至24周，分析其抗肥胖作用。

二、实验结果

使用HITACHI 7020分析血液的脂质水平，统计学处理获得的结果，并计算平均值和平均值的标准差。在组间显著性的证明中，使用单因素ANOVA的Dunnett检验(Dunnett'stest)统计学处理数据，p<0.05的值被视为统计学上显著性差异，其结果如下：

1.血液甘油三酯水平的变化

见图1，其中，组2和组1相比，组3-15和组2具有显著性差异。

在血液甘油三酯水平的测量结果中，喂以高脂肪膳食的仓鼠组2，甘油三酯水平显著升高，但本发明胃泌酸调节肽类似物的修饰物P03b01、PP03c01、PP03d01、PP03h01、PP03h02、PP03h03、PP03j01、PP03k01、PP03m01、PP03n01、PP03s01、PP03p01、PP03q01施用于仓鼠中时，甘油三酯水平显著降低。

2.血液总胆固醇水平的变化

见图2，其中，组2和组1相比，组3-15和组2具有显著性差异。

在血液总胆固醇水平的测量结果中，喂以高脂肪膳食的仓鼠组2，甘油三酯水平显著升高，但本发明胃泌酸调节肽类似物的修饰物P03b01、PP03c01、PP03d01、PP03h01、PP03h02、PP03h03、PP03j01、PP03k01、PP03m01、PP03n01、PP03s01、PP03p01、PP03q01施用于仓鼠中时，总胆固醇水平显著降低。

3.抗肥胖作用

见图3，其中，组2和组1相比，组3-15和组2具有显著性差异。

在抗肥胖的测量结果中，喂以高脂肪膳食的仓鼠组2，体重水平显著升高，但本发明胃泌酸调节肽类似物的修饰物P03b01、PP03c01、PP03d01、PP03h01、PP03h02、PP03h03、PP03j01、PP03k01、PP03m01、PP03n01、PP03s01、PP03p01、PP03q01施用于仓鼠中时，体重显著降低。

从以上结果可以看出，本发明胃泌酸调节肽类似物的修饰物可用于治疗高脂血症或相关的脂肪肝病或动脉硬化，且可用作肥胖治疗剂。

实验三、对自发性2型糖尿病db/db小鼠降糖作用

85只5～6周龄C57BL/6db/db小鼠(雄性)购自南京大学模式动物研究所，实验动物饲养在SPF动物房内。动物房通风良好，装备空调，温度保持在20～25℃，湿度保持在40％～70％，换气次数10～15次/h，明暗照明各12小时，实验动物自由进食和饮水，每只小鼠均用耳标标记。每周将小鼠用于一次实验，小鼠使用不超过三周。在一周适应期后，使用血糖仪测定小鼠尾尖毛细血管血糖。选取血糖水平大于16.7mmol/L的小鼠70只，按血糖水平随机分成14组，模型对照组皮下注射给予5mL/kg的PBS(pH＝7.4)，阳性对照组1皮下注射艾塞那肽(10μg/kg，5mL/kg)，给药组分别皮下注射P03b01、PP03c01、PP03d01、PP03h01、PP03h02、PP03h03、PP03j01、PP03k01、PP03m01、PP03n01、PP03s01、PP03p01、PP03q01(10μg/kg，5mL/kg)，给药后使用血糖仪测定0、1、2、4、8、12、18、24、30、36、42、48、72h的血糖，将所有数据输入Graphpad Prism中计算平均血糖。计算最大降糖作用(与模型组比最大下降率)，最大降糖时间(与模型组比，血糖显著降低的最后一个时间点)。

表3对自发性2型糖尿病db/db小鼠降糖作用

本发明胃泌酸调节肽类似物的修饰物与艾塞那肽相比，活性相当或只有轻微下降，使自发性2型糖尿病db/db小鼠的血糖水平显著下降，且将最大降糖时间由4h延长至30h-48h，降血糖持续时间长，具有较好的药代动力学性质。本发明胃泌酸调节肽类似物的修饰物可有效地用于治疗糖尿病，且显示出抑制体重增加的显著效果，表明其可减少糖尿病心血管并发症。

附图说明

图1：在高脂血症模型仓鼠中降低脂质的作用的实验二中，组1-15血液甘油三酯水平的变化；

图2：在高脂血症模型仓鼠中降低脂质的作用的实验二中，组1-15血液总胆固醇水平的变化；

图3：在高脂血症模型仓鼠中降低脂质的作用的实验二中，组1-15抗肥胖作用。

具体实施例

多肽合成部分

氨基酸及缩写和英文简称如下表所示：

实施例1 PP03h的制备

PP03h的合成采用本专业人员熟知的Fmoc法固相合成，利用2-Cl-Trt Resin、采用20％的哌啶/DMF脱除Fmoc，偶联试剂采用HOBT/DIC，DMF为反应溶剂，反应监控采用茚三酮检测法，依次将下列保护氨基酸连接到树脂上：Fmoc-Lys(Alloc)-OH、Fmoc-Thr(tBu)-OH、Fmoc-Asn(Trt)-OH、Fmoc-Met-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Trp(Boc)-OH、Fmoc-Asn(Trt)-OH、Fmoc-Val-OH、Fmoc-Phe-OH、Fmoc-Glu(OtBu)-OH、Fmoc-Lys(Boc)-OH、Fmoc-Ala-OH、Fmoc-Arg(Pbf)-OH、Fmoc-Lys(Boc)-OH、Fmoc-Glu(OtBu)-OH、Fmoc-Asp(OtBu)-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Tyr(tBu)-OH、Fmoc-Lys(Boc)-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Tyr(tBu)-OH、Fmoc-Asp(OtBu)OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Thr(tBu)-OH、Fmoc-Phe-OH、Fmoc-Thr(tBu)-OH、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Gln(Trt)-OH、Fmoc-Aib-OH、Boc-His(Trt)-OH、DMF洗涤、甲醇洗涤、二氯甲烷洗涤后干燥，加入裂解试剂(三氟乙酸：苯甲硫醚：苯酚：三异丙基硅烷＝85：5：5：5)，反应2小时后用冰叔丁基甲基醚沉淀、离心，得到PP03h粗品，经HPLC制备纯化后冻干得PP03h纯品。

ESI-MS m/z计算值3623.31，实测值1028.7[M+3H]³⁺，906.8[M+4H]⁴⁺，725.8[M+5H]⁵⁺

实施例2 PP03b的制备

按照实施例1的方法，采用本专业人员熟知的Fmoc法固相合成，利用2-Cl-TrtResin、采用20％的哌啶/DMF脱除Fmoc，偶联试剂采用HOBT/DIC，DMF为反应溶剂，反应监控采用茚三酮检测法，依次将PP03b序列的氨基酸连接到树脂上后处理方法同实施例1。

ESI-MS m/z计算值3598.28，实测值1200.6[M+3H]³⁺，900.7[M+4H]⁴⁺

实施例3 PP03f的制备

按照实施例1的方法，采用本专业人员熟知的Fmoc法固相合成，利用2-Cl-TrtResin、采用20％的哌啶/DMF脱除Fmoc，偶联试剂采用HOBT/DIC，DMF为反应溶剂，反应监控采用茚三酮检测法，依次将PP03f序列的氨基酸连接到树脂上后处理方法同实施例1。

ESI-MS m/z计算值3495.14，实测值1166.3[M+3H]³⁺，875.0[M+4H]⁴⁺

实施例4 PP03k的制备

按照实施例1的方法，采用本专业人员熟知的Fmoc法固相合成，利用2-Cl-TrtResin、采用20％的哌啶/DMF脱除Fmoc，偶联试剂采用HOBT/DIC，DMF为反应溶剂，反应监控采用茚三酮检测法，依次将PP03k序列的氨基酸连接到树脂上后处理方法同实施例1。

ESI-MS m/z计算值3570.99，实测值1193.5[M+3H]³⁺，893.9[M+4H]⁴⁺

实施例5 PP03n的制备

按照实施例1的方法，采用本专业人员熟知的Fmoc法固相合成，利用2-Cl-TrtResin、采用20％的哌啶/DMF脱除Fmoc，偶联试剂采用HOBT/DIC，DMF为反应溶剂，反应监控采用茚三酮检测法，依次将PP03n序列的氨基酸连接到树脂上后处理方法同实施例1。

ESI-MS m/z计算值3596.29，实测值1199.7[M+3H]³⁺，900.1[M+4H]⁴⁺，720.4[M+5H]⁵⁺

实施例6 PP03c的制备

PP03c的合成采用本专业人员熟知的Fmoc法固相合成，利用2-Cl-Trt Resin、采用20％的哌啶/DMF脱除Fmoc，偶联试剂采用HOBT/DIC，DMF为反应溶剂，反应监控采用茚三酮检测法，依次将下列保护氨基酸连接到树脂上：Fmoc-Cys(Trt)-OH、Fmoc-Thr(tBu)-OH、Fmoc-Asn(Trt)-OH、Fmoc-Met-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Trp(Boc)-OH、Fmoc-Asn(Trt)-OH、Fmoc-Val-OH、Fmoc-Phe-OH、Fmoc-Glu(OtBu)-OH、Fmoc-Lys(Alloc)-OH、Fmoc-Ala-OH、Fmoc-Arg(Pbf)-OH、Fmoc-Lys(Boc)-OH、Fmoc-Glu(OAll)-OH、Fmoc-Asp(OtBu)-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Tyr(tBu)-OH、Fmoc-Lys(Boc)-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Tyr(tBu)-OH、Fmoc-Asp(OtBu)OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Thr(tBu)-OH、Fmoc-Phe-OH、Fmoc-Thr(tBu)-OH、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Gln(Trt)-OH、Fmoc-Aib-OH、Boc-His(Trt)-OH、然后加入3.0eq溶于三氯甲烷：N-甲基吗啉：乙酸(18:2:1)的四(三苯基膦)钯，反应2小时脱除Lys(Alloc)，Glu(OAll)的保护基，DMF洗涤后加入TBTU、DIEA关环，茚三酮检测反应基本完全后DMF洗涤、甲醇洗涤、二氯甲烷洗涤后干燥，加入裂解试剂(三氟乙酸：苯甲硫醚：苯酚：三异丙基硅烷＝85：5：5：5)，反应2小时后用冰叔丁基甲基醚沉淀、离心，得到PP03c粗品，经HPLC制备纯化后冻干得PP03c纯品。ESI-MS m/z计算值3580.28，实测值1194.8[M+3H]³⁺，896.5[M+4H]⁴⁺

实施例7 PP03d的制备

按照实施例6的方法，采用本专业人员熟知的Fmoc法固相合成，利用2-Cl-TrtResin、采用20％的哌啶/DMF脱除Fmoc，偶联试剂采用HOBT/DIC，DMF为反应溶剂，反应监控采用茚三酮检测法，依次将PP03d序列的氨基酸连接到树脂上后处理方法同实施例6。

ESI-MS m/z计算值3580.28，实测值1194.6[M+3H]³⁺，896.3[M+4H]⁴⁺

实施例8 PP03j的制备

按照实施例6的方法，采用本专业人员熟知的Fmoc法固相合成，利用2-Cl-TrtResin、采用20％的哌啶/DMF脱除Fmoc，偶联试剂采用HOBT/DIC，DMF为反应溶剂，反应监控采用茚三酮检测法，依次将PP03j序列的氨基酸连接到树脂上后处理方法同实施例6。

ESI-MS m/z计算值3605.31，实测值1202.8[M+3H]³⁺，902.4[M+4H]⁴⁺，722.3[M+5H]⁵⁺

实施例9 PP03m的制备

按照实施例6的方法，采用本专业人员熟知的Fmoc法固相合成，利用2-Cl-TrtResin、采用20％的哌啶/DMF脱除Fmoc，偶联试剂采用HOBT/DIC，DMF为反应溶剂，反应监控采用茚三酮检测法，依次将PP03m序列的氨基酸连接到树脂上后处理方法同实施例6。

ESI-MS m/z计算值3552.98，实测值1185.6[M+3H]³⁺，889.6[M+4H]⁴⁺

实施例10 PP03s的制备

按照实施6的方法，采用本专业人员熟知的Fmoc法固相合成，利用2-Cl-TrtResin、采用20％的哌啶/DMF脱除Fmoc，偶联试剂采用HOBT/DIC，DMF为反应溶剂，反应监控采用茚三酮检测法，依次将PP03s序列的氨基酸连接到树脂上后处理方法同实施例6。

ESI-MS m/z计算值3578.29，实测值1193.8[M+3H]³⁺，895.6[M+4H]⁴⁺，716.8[M+5H]⁵⁺

实施例11 PP03h01的制备

侧链化合物PEG6-Glu-Octadecanedioic Acid的制备

化合物2的制备

氮气保护下，向500ml三口瓶中加入200mL吡啶，50g化合物1(1.0eq)，搅拌降温至0℃，分批加入35.5g TsCl(1.0eq)，搅拌1h，然后缓慢升温至室温，继续搅拌3-4h。反应结束后，将反应液倒入冰的稀盐酸溶液，有固体产生，加乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯层用稀盐酸洗一次，饱和碳酸氢钠洗涤，饱和食盐水洗，无水Na₂SO₄干燥，减压蒸除溶剂，硅胶柱层析得化合物2纯品38g。

化合物3的制备

向500mL三口瓶中加入38g化合物2(1.0eq)和190mL DMSO，搅拌均匀，然后加入NaN₃ 11.5g(2.0eq)，加热至50℃反应3小时，降温至室温，将反应液倒入水中，用乙酸乙酯萃取多次，合并有机相，无水硫酸钠干燥，浓缩得无色液体化合物3 40g。

化合物4的制备

向1L氢化反应釜中加入化合物3 70g，甲醇500mL，钯碳8.0g，搅拌，氮气置换，通入氢气反应3-4h，TLC监控反应完毕后，过滤反应液，将滤液浓缩得到化合物4的油状物52g。

化合物5的制备

向250mL三口瓶中加入化合物4 10.0g(1.0eq)，(Boc)₂O 15.5g(2.0eq)，甲醇：三乙胺(9：1)的混合溶液200ml，搅拌升温至回流，反应1h，TLC监控反应完毕后，蒸去甲醇、三乙胺，加水溶解，二氯甲烷萃取3次，合并有机层水洗一次，无水硫酸钠干燥，浓缩得9.0g油状物化合物5。

化合物6的制备

向250mL三口瓶中加入化合物5 7.0g(1.0eq)，甲苯和四氢呋喃各40ml，溴乙酸7.6g(3.0eq)，搅拌，加热至45～50℃，再加入氢氧化钠4.4g，反应过夜，TLC监控反应完毕后，蒸除反应液，加水和乙酸乙酯萃取杂质，水相调节pH＝3，水相用二氯甲烷萃取，合并二氯甲烷层，无水硫酸钠干燥后浓缩得化合物6油状物4.2g。

化合物7的制备

向250mL单口瓶中加化合物6 4.0g，20ml乙酸乙酯溶解后降至0℃，加入20ml乙酸乙酯/HCl(7M/L)，TLC监控反应完毕后浓缩，得油状物化合物7 4.2g。

化合物9的制备

向50mL三口瓶中加入1.0g化合物8(1.0eq)，10ml二氯甲烷，10ml叔丁醇，0.40gDIC(1.0eq)，0.39g DMAP(1.0eq)，室温搅拌过夜，TLC监控反应完毕，用乙醚稀释后水洗3次，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，柱层析得泡沫状粉末化合物9 0.4g。

化合物10的制备

向100mL三口瓶中加入0.95g N-羟基琥珀酰亚胺(HOSU)，2.0g化合物9和15ml二氯甲烷，加入1.58g EDC·HCl，室温反应2h，TLC监控反应完毕，用二氯甲烷稀释后用pH＝6.0的50mmol/L的磷酸二氢钾水溶液洗涤2次，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩得白色固体2.6g化合物10。

化合物11的制备

向250mL烧瓶加入3.0g化合物H-Glu-OtBu(1.0eq)，70ml水，2.54g NaHCO₃(2.05eq)，搅拌，滴加6.9g化合物10溶于70ml乙二醇二甲醚的溶液，补加70ml四氢呋喃，搅拌过夜，TLC监控反应完毕，蒸去有机溶剂，用稀盐酸调节pH＝4，二氯甲烷萃取，无水硫酸钠干燥，浓缩，得类白色固体7.7g化合物11。

化合物12的制备

向250mL三口瓶中加入2.4g N-羟基琥珀酰亚胺(HOSU)，7.7g化合物11和77ml二氯甲烷，加入4.1g EDC·HCl，室温反应2h，TLC监控反应完毕，用二氯甲烷稀释后用pH＝6.0的50mmol/L的磷酸二氢钾水溶液洗涤2次，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩类白色固体7.9g化合物12。

化合物13的制备

向250mL烧瓶加入4.4g化合物7(1.0eq)，80ml水，2.1g NaHCO₃(2.05eq)，搅拌，滴加7.9g化合物12溶于80ml乙二醇二甲醚的溶液，补加40ml四氢呋喃，搅拌过夜，TLC监控反应完毕，蒸去有机溶剂，用醋酸调节pH＝6，乙酸乙酯萃取，无水硫酸钠干燥，浓缩，得类白色固体,柱层析后得6.5g淡黄色油状物化合物13。

PP03h01的制备

PP03h01的合成采用本专业人员熟知的Fmoc法固相合成，利用2-Cl-Trt Resin、采用20％的哌啶/DMF脱除Fmoc，偶联试剂采用HOBT/DIC，DMF为反应溶剂，反应监控采用茚三酮检测法，依次将下列保护氨基酸连接到树脂上：Fmoc-Lys(Alloc)-OH、Fmoc-Thr(tBu)-OH、Fmoc-Asn(Trt)-OH、Fmoc-Met-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Trp(Boc)-OH、Fmoc-Asn(Trt)-OH、Fmoc-Val-OH、Fmoc-Phe-OH、Fmoc-Glu(OtBu)-OH、Fmoc-Lys(Boc)-OH、Fmoc-Ala-OH、Fmoc-Arg(Pbf)-OH、Fmoc-Lys(Boc)-OH、Fmoc-Glu(OtBu)-OH、Fmoc-Asp(OtBu)-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Tyr(tBu)-OH、Fmoc-Lys(Boc)-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Tyr(tBu)-OH、Fmoc-Asp(OtBu)OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Thr(tBu)-OH、Fmoc-Phe-OH、Fmoc-Thr(tBu)-OH、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Gln(Trt)-OH、Fmoc-Aib-OH、Boc-His(Trt)-OH，加入3.0eq溶于三氯甲烷：N-甲基吗啉：乙酸(18:2:1)的四(三苯基膦)钯，反应2小时，二氯甲烷洗涤、DMF洗涤后缩合连接化合物13，茚三酮检测反应完毕后DMF洗涤、甲醇洗涤、二氯甲烷洗涤后干燥，加入裂解试剂(T三氟乙酸：苯甲硫醚：苯酚：三异丙基硅烷＝85：5：5：5)，反应2小时后用冰叔丁基甲基醚沉淀、离心，得PP03h01粗品，经HPLC制备纯化后冻干得PP03h01纯品。

ESI-MS m/z计算值4370.25，实测值1458[M+3H]³⁺，1094[M+4H]⁴⁺，875[M+5H]⁵⁺。

实施例12 PP03h02的制备

侧链化合物的制备

化合物21的制备

氮气保护下，向500ml三口瓶中加入200mL吡啶，50.0g化合物20(1.0eq)，搅拌降温至0℃，分批加入89.9g TsCl(1.0eq)，搅拌1h，然后缓慢升温至室温，继续搅拌3-4h。反应结束后，将反应液倒入冰的稀盐酸溶液，有固体产生，加乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯层用稀盐酸洗一次，饱和碳酸氢钠洗涤，饱和食盐水洗，无水Na₂SO₄干燥，减压蒸除溶剂，硅胶柱层析得化合物21纯品44.2g。

化合物22的制备

向500mL三口瓶中加入44.0g化合物21(1.0eq)和200mL DMSO，搅拌均匀，然后加入NaN₃ 22.0g(2.0eq)，加热至50℃反应3小时，降温至室温，将反应液倒入水中，用乙酸乙酯萃取多次，合并有机相，无水硫酸钠干燥，浓缩得45.1g无色液体化合物22。

化合物23的制备

向1L氢化反应釜中加入化合物22 45g，甲醇450mL，钯碳6.0g，搅拌，氮气置换，通入氢气反应3-4h，TLC监控反应完毕后，过滤反应液，将滤液浓缩得到化合物23的油状物37.3g。

化合物24的制备

向1000mL三口瓶中加入化合物23 35.0g(1.0eq)，(Boc)₂O 145.4g(2.0eq)，甲醇：三乙胺(9：1)的混合溶液700ml，搅拌升温至回流，反应1h，TLC监控反应完毕后，蒸去甲醇、三乙胺，加水溶解，二氯甲烷萃取3次，合并有机层水洗一次，无水硫酸钠干燥，浓缩得油状物化合物24的33.6g。

化合物25的制备

向500mL三口瓶中加入化合物24 30.0g(1.0eq)，甲苯和四氢呋喃各150ml，溴乙酸61.0g(3.0eq)，搅拌，加热至45～50℃，再加入氢氧化钠41.1g，反应过夜，TLC监控反应完毕后，蒸除反应液，加水和乙酸乙酯萃取杂质，水相调节pH＝3，水相用二氯甲烷萃取，合并二氯甲烷层，无水硫酸钠干燥后浓缩得化合物2529.4g。

化合物26的制备

向500mL单口瓶中加化合物25 3.0g，100ml乙酸乙酯溶解后降至0℃，加入100ml乙酸乙酯/HCl(7M/L)，TLC监控反应完毕后浓缩，乙酸乙酯打浆，抽滤得2.3g类白色固体化合物26。

化合物28的制备

向500mL三口瓶中加入15.0g化合物27(1.0eq)，150ml二氯甲烷，150ml叔丁醇，5.1g DIC(1.0eq)，5.0g DMAP(1.0eq)，室温搅拌过夜，TLC监控反应完毕，用乙醚稀释后水洗3次，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，柱层析得类白色固体化合物28 5.1g。

化合物29的制备

向100mL三口瓶中加入2.7g N-羟基琥珀酰亚胺(HOSU)，5.1g化合物28和50ml二氯甲烷，加入4.6g EDC·HCl，室温反应2h，TLC监控反应完毕，用二氯甲烷稀释后用pH＝6.0的50mmol/L的磷酸二氢钾水溶液洗涤2次，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩得白色固体5.2g化合物29。

化合物30的制备

向250mL烧瓶加入2.0g化合物H-Glu-OtBu(1.0eq)，50ml水，1.7g NaHCO₃(2.05eq)，搅拌，滴加5.2g(1.0eq)化合物29溶于50ml DME(乙二醇二甲醚)的溶液，补加50ml四氢呋喃，搅拌过夜，TLC监控反应完毕，蒸去有机溶剂，用稀盐酸调节pH＝4，二氯甲烷萃取，无水硫酸钠干燥，浓缩，得类白色固体化合物30 5.1g

化合物31的制备

向100mL三口瓶中加入1.44g(1.53eq)N-羟基琥珀酰亚胺(HOSU)，5.00g化合物30和50ml二氯甲烷，加入2.40g(1.53eq)EDC·HCl，室温反应2h，TLC监控反应完毕，用二氯甲烷稀释后用pH＝6.0的50mmol/L的磷酸二氢钾水溶液洗涤2次，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩类白色固体5.82g化合物31。

化合物32的制备

向250mL烧瓶加入1.63g化合物26(1.0eq)，58ml水，1.41g NaHCO₃(2.05eq)，搅拌，滴加5.80g(1.0eq)化合物31溶于58ml DME(乙二醇二甲醚)的溶液，补加58ml四氢呋喃，搅拌过夜，TLC监控反应完毕，蒸去有机溶剂，用醋酸调节pH＝6，乙酸乙酯萃取，无水硫酸钠干燥，浓缩，得类白色固体,柱层析后得5.63g类白色固体化合物32。

PP03h02的制备

PP03h02的合成采用本专业人员熟知的Fmoc法固相合成，利用2-Cl-Trt Resin、采用20％的哌啶/DMF脱除Fmoc，偶联试剂采用HOBT/DIC，DMF为反应溶剂，反应监控采用茚三酮检测法，依次将下列保护氨基酸连接到树脂上：Fmoc-Lys(Alloc)-OH、Fmoc-Thr(tBu)-OH、Fmoc-Asn(Trt)-OH、Fmoc-Met-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Trp(Boc)-OH、Fmoc-Asn(Trt)-OH、Fmoc-Val-OH、Fmoc-Phe-OH、Fmoc-Glu(OtBu)-OH、Fmoc-Lys(Boc)-OH、Fmoc-Ala-OH、Fmoc-Arg(Pbf)-OH、Fmoc-Lys(Boc)-OH、Fmoc-Glu(OtBu)-OH、Fmoc-Asp(OtBu)-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Tyr(tBu)-OH、Fmoc-Lys(Boc)-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Tyr(tBu)-OH、Fmoc-Asp(OtBu)OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Thr(tBu)-OH、Fmoc-Phe-OH、Fmoc-Thr(tBu)-OH、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Gln(Trt)-OH、Fmoc-Aib-OH、Boc-His(Trt)-OH，加入3.0eq溶于三氯甲烷：N-甲基吗啉：乙酸(18:2:1)的四(三苯基膦)钯，反应2小时，二氯甲烷洗涤、DMF洗涤后缩合连接化合物32，茚三酮检测反应完毕后DMF洗涤、甲醇洗涤、二氯甲烷洗涤后干燥，加入裂解试剂(三氟乙酸：苯甲硫醚：苯酚：三异丙基硅烷＝85：5：5：5)，反应2小时后用冰叔丁基甲基醚沉淀、离心，得到PP03h02粗品，经HPLC制备纯化后冻干得PP03h02纯品。

ESI-MS m/z计算值4250.15，实测值1417.9[M+3H]³⁺，1063.7[M+4H]⁴⁺。

实施例13 PP03h03的制备

侧链化合物的制备

化合物41的制备

氮气保护下，向500ml三口瓶中加入200mL吡啶，50.0g 40(1.0eq)，搅拌降温至0℃，分批加入20.8g TsCl(1.0eq)，搅拌1h，然后缓慢升温至室温，继续搅拌3-4h。反应结束后，将反应液倒入冰的稀盐酸溶液，有固体产生，加乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯层用稀盐酸洗一次，饱和碳酸氢钠洗涤，饱和食盐水洗，无水Na₂SO₄干燥，减压蒸除溶剂，硅胶柱层析得化合物41纯品31g。

化合物42的制备

向500mL三口瓶中加入31g化合物41(1.0eq)和155mL DMSO，搅拌均匀，然后加入NaN₃ 6.6g(2.0eq)，加热至50℃反应3小时，降温至室温，将反应液倒入水中，用乙酸乙酯萃取多次，合并有机相，无水硫酸钠干燥，浓缩得无色液体35.1g化合物42。

化合物43的制备

向1L氢化反应釜中加入35g化合物42，甲醇350mL，钯碳4.5g，搅拌，氮气置换，通入氢气反应3-4h，TLC监控反应完毕后，过滤反应液，将滤液浓缩得油状物化合物43 33.2g。

化合物44的制备

向500mL三口瓶中加入化合物43 32.1g(1.0eq)，(Boc)₂O 30.6g(2.0eq)，甲醇：三乙胺(9：1)的混合溶液300ml，搅拌升温至回流，反应1h，TLC监控反应完毕后，蒸去甲醇、三乙胺，加水溶解，二氯甲烷萃取3次，合并有机层水洗一次，无水硫酸钠干燥，浓缩得油状物44 22.5g。

化合物45的制备

向1000mL三口瓶中加入22.5g(1.0eq)化合物44，甲苯和四氢呋喃各230ml，溴乙酸16.8g(3.0eq)，搅拌，加热至45～50℃，再加入氢氧化钠11.3g，反应过夜，TLC监控反应完毕后，蒸除反应液，加水和乙酸乙酯萃取杂质，水相调节pH＝3，水相用二氯甲烷萃取，合并二氯甲烷层，无水硫酸钠干燥后浓缩得化合物45油状物16.7g。

化合物46的制备

向250mL单口瓶中加化合物45 5.2g，20ml乙酸乙酯溶解后降至0℃，加入20ml乙酸乙酯/HCl(7M/L)，TLC监控反应完毕后浓缩，得油状物化合物46 5.5g。

化合物48的制备

向250mL三口瓶中加入10.0g化合物47(1.0eq)，100ml二氯甲烷，100ml叔丁醇，7.2g DIC(1.0eq)，7.0g DMAP(1.0eq)，室温搅拌过夜，TLC监控反应完毕，用乙醚稀释后水洗3次，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，柱层析得类白色固体48 4.2g。

化合物49的制备

向100mL三口瓶中加入2.3g N-羟基琥珀酰亚胺(HOSU)，4.2g化合物48和42ml二氯甲烷，加入5.3g EDC·HCl，室温反应2h，TLC监控反应完毕，用二氯甲烷稀释后用pH＝6.0的50mmol/L的磷酸二氢钾水溶液洗涤2次，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩得类白色固体5.9g化合物49。

化合物50的制备

向500mL烧瓶加入3.7g化合物H-Glu-OtBu(1.0eq)，60ml水，3.1g NaHCO₃(2.05eq)，搅拌，滴加5.9g化合物49溶于60ml DME(乙二醇二甲醚)的溶液，补加30ml四氢呋喃，搅拌过夜，TLC监控反应完毕，蒸去有机溶剂，用稀盐酸调节pH＝4，二氯甲烷萃取，无水硫酸钠干燥，浓缩，得化合物50类白色固体6.9g。

化合物51的制备

向250mL三口瓶中加入2.9g N-羟基琥珀酰亚胺(HOSU)，6.9g化合物50和70ml二氯甲烷，加入4.9g EDC·HCl，室温反应2h，TLC监控反应完毕，用二氯甲烷稀释后用pH＝6.0的50mmol/L的磷酸二氢钾水溶液洗涤2次，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩类白色固体8.6g化合物51。

化合物52的制备

向250mL烧瓶加入3.8g化合物46(1.0eq)，35ml水，1.2g NaHCO₃(2.05eq)，搅拌，滴加3.5g化合物51溶于35ml DME(乙二醇二甲醚)的溶液，补加35ml四氢呋喃，搅拌过夜，TLC监控反应完毕，蒸去有机溶剂，用醋酸调节pH＝6，乙酸乙酯萃取，无水硫酸钠干燥，浓缩，得类白色固体，柱层析后得4.3g淡黄色油状物化合物52。

PP03h03的制备

PP03h03的合成采用本专业人员熟知的Fmoc法固相合成，利用2-Cl-Trt Resin、采用20％的哌啶/DMF脱除Fmoc，偶联试剂采用HOBT/DIC，DMF为反应溶剂，反应监控采用茚三酮检测法，依次将下列保护氨基酸连接到树脂上：Fmoc-Lys(Alloc)-OH、Fmoc-Thr(tBu)-OH、Fmoc-Asn(Trt)-OH、Fmoc-Met-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Trp(Boc)-OH、Fmoc-Asn(Trt)-OH、Fmoc-Val-OH、Fmoc-Phe-OH、Fmoc-Glu(OtBu)-OH、Fmoc-Lys(Boc)-OH、Fmoc-Ala-OH、Fmoc-Arg(Pbf)-OH、Fmoc-Lys(Boc)-OH、Fmoc-Glu(OtBu)-OH、Fmoc-Asp(OtBu)-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Tyr(tBu)-OH、Fmoc-Lys(Boc)-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Tyr(tBu)-OH、Fmoc-Asp(OtBu)OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Thr(tBu)-OH、Fmoc-Phe-OH、Fmoc-Thr(tBu)-OH、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Gln(Trt)-OH、Fmoc-Aib-OH、Boc-His(Trt)-OH，加入3.0eq溶于三氯甲烷：N-甲基吗啉：乙酸(18:2:1)的四(三苯基膦)钯，反应2小时，二氯甲烷洗涤、DMF洗涤后缩合连接化合物51，茚三酮检测反应完毕后DMF洗涤、甲醇洗涤、二氯甲烷洗涤后干燥，加入裂解试剂(三氟乙酸：苯甲硫醚：苯酚：三异丙基硅烷＝85：5：5：5)，反应2小时后用冰叔丁基甲基醚沉淀、离心，得到PP03h粗品，经HPLC制备纯化后冻干得PP03h03纯品。

ESI-MS m/z计算值4406.20，实测值1470.2[M+3H]³⁺，1102.9[M+4H]⁴⁺。

实施例14 PP03b01的合成

化合物15的制备

向100mL烧瓶加入0.73g化合物14(1.0eq)，20ml二氯甲烷，搅拌溶清后加入0.8gDIEA，0.96g化合物10(1.0eq)，搅拌1h，TLC反应完毕后，二氯甲烷稀释，用盐酸洗涤，碳酸氢钠洗涤，盐水洗涤后无水硫酸钠干燥浓缩得1.34g化合物15。

化合物16的制备

向100mL烧瓶加入1.34g化合物15(1.0eq)，20ml 30％三氟乙酸/二氯甲烷，0℃搅拌反应2h，TLC反应完毕后，二氯甲烷稀释，纯化水洗涤，盐水洗涤后无水硫酸钠干燥浓缩得化合物16粗品。HPLC制备纯化后得到0.65g纯品化合物16。

PP03b01的制备

取100mg化合物PP03b溶解于10ml 20mM的磷酸钠盐缓冲液(pH 7.4)，加入20mg化合物16(1.1eq)溶解于2ml四氢呋喃的溶液，在20℃条件下搅拌4小时，HPLC监控反应完毕后，HPLC制备纯化后冻干，得偶联化合物PP03b0151mg。

ESI-MS m/z计算值4254.28，实测值1419.5[M+3H]³⁺，1065.0[M+4H]⁴⁺，852.2[M+5H]⁵⁺

实施例15 PP03c01的制备

制备方法参照实施例14。

ESI-MS m/z计算值4237.13，实测值1413.5[M+3H]³⁺，1060.4[M+4H]⁴⁺，848.6[M+5H]⁵⁺

实施例16 PP03d01的制备

制备方法参照实施例14。

ESI-MS m/z计算值4237.13，实测值1413.6[M+3H]³⁺，1060.4[M+4H]⁴⁺，848.7[M+5H]⁵⁺

ESI-MS m/z计算值，实测值[M+3H]³⁺，[M+4H]⁴⁺，[M+5H]⁵⁺

实施例17 PP03j01的制备

PP03j01的合成采用本专业人员熟知的Fmoc法固相合成，利用2-Cl-Trt Resin、采用20％的哌啶/DMF脱除Fmoc，偶联试剂采用HOBT/DIC，DMF为反应溶剂，反应监控采用茚三酮检测法，依次将下列保护氨基酸连接到树脂上：Fmoc-Lys(ivDde)-OH、Fmoc-Thr(tBu)-OH、Fmoc-Asn(Trt)-OH、Fmoc-Met-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Trp(Boc)-OH、Fmoc-Asn(Trt)-OH、Fmoc-Val-OH、Fmoc-Phe-OH、Fmoc-Glu(OtBu)-OH、Fmoc-Lys(Alloc)-OH、Fmoc-Ala-OH、Fmoc-Arg(Pbf)-OH、Fmoc-Lys(Boc)-OH、Fmoc-Glu(OAll)-OH、Fmoc-Asp(OtBu)-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Tyr(tBu)-OH、Fmoc-Lys(Boc)-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Tyr(tBu)-OH、Fmoc-Asp(OtBu)OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Thr(tBu)-OH、Fmoc-Phe-OH、Fmoc-Thr(tBu)-OH、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Gln(Trt)-OH、Fmoc-Aib-OH、Boc-His(Trt)-OH，加入3.0eq溶于三氯甲烷：N-甲基吗啉：乙酸(18:2:1)的四(三苯基膦)钯，反应2小时脱除Lys(Alloc)，Glu(OAll)的保护基，DMF洗涤后加入TBTU、DIEA关环，茚三酮检测反应基本完全后DMF洗涤、用水合肼脱除Lys(ivDde)的保护基ivDde，茚三酮检测阳性，缩合连接化合物13，茚三酮检测反应完毕后DMF洗涤、甲醇洗涤、二氯甲烷洗涤后干燥，加入裂解试剂(三氟乙酸：苯甲硫醚：苯酚：三异丙基硅烷＝85：5：5：5)，反应2小时后用冰叔丁基甲基醚沉淀、离心，得到PP03j01粗品，经HPLC制备纯化后冻干得PP03j01纯品。

ESI-MS m/z计算值4352.25，实测值1452.1[M+3H]³⁺，1089.3[M+4H]⁴⁺。

实施例18 PP03k01的合成

制备方法参照实施例17。

ESI-MS m/z计算值4227.84，实测值1410.3[M+3H]³⁺，1058.0[M+4H]⁴⁺，846.5[M+5H]⁵⁺

实施例19 PP03m01的合成(需要补充ESI-MS)

制备方法参照实施例17。

ESI-MS m/z计算值4209.83，实测值1404.3[M+3H]³⁺，1053.5[M+4H]⁴⁺，843.0[M+5H]⁵⁺

实施例20 PP03n01的合成(需要补充ESI-MS)

制备方法参照实施例17。

ESI-MS m/z计算值4343.23，实测值1448.9[M+3H]³⁺，1087.0[M+4H]⁴⁺，869.7[M+5H]⁵⁺

实施例20 PP03s01的合成(需要补充ESI-MS)

制备方法参照实施例17。

ESI-MS m/z计算值4325.23，实测值1442.8[M+3H]³⁺，1082.4[M+4H]⁴⁺

实施例21 PP03p01的合成(需要补充ESI-MS)

制备方法参照实施例14。

ESI-MS m/z计算值4268.86，实测值1424.0[M+3H]³⁺，1068.3[M+4H]⁴⁺

实施例22 PP03q01的合成(需要补充ESI-MS)

制备方法参照实施例14。

ESI-MS m/z计算值4250.86，实测值1418.0[M+3H]³⁺，1063.8[M+4H]⁴⁺，851.2[M+5H]⁵⁺

Claims (7)

1.一种胃泌酸调节素或其类似物的修饰物，该修饰物如下所示：

n为6-20之间的任一整数；

其中，OXM’为天然胃泌酸调节素或胃泌酸调节素的类似物，L为OXM’与Y的连接基团；

所述OXM’为：

SEQ ID No.2的氨基酸序列的多肽；

SEQ ID No.3的氨基酸序列的多肽；

SEQ ID No.4的氨基酸序列的多肽；

SEQ ID No.5的氨基酸序列的多肽；

SEQ ID No.6的氨基酸序列的多肽；

SEQ ID No.7的氨基酸序列的多肽；

SEQ ID No.8的氨基酸序列的多肽；

SEQ ID No.9的氨基酸序列的多肽；

SEQ ID No.10的氨基酸序列的多肽。

2.如权利要求1所述的修饰物，其为：

其中，m为2-10之间的任一整数；n为6-20之间的任一整数。

3.一种胃泌酸调节素类似物的修饰物，其为：

其中，m为2-10之间的任一整数；n为6-20之间的任一整数；序列中下划线表示环形成。

4.如权利要求3所述的修饰物，其为：

5.权利要求1-4所述的任一胃泌酸调节素类似物或其修饰物的用途，其为：在制备用于治疗肥胖症药物中的用途；在制备用于糖尿病药物中的用途；在制备预防或治疗高脂血症、脂肪肝病或动脉硬化药物中的用途。

6.一种药物组合物，其包括如权利要求1-4所述的任一胃泌酸调节素类似物或其修饰物以及任选的药学可接受的载体。

7.如权利要求6所述的组合物的用途，其为：在制备用于治疗肥胖症药物中的用途；在制备用于糖尿病药物中的用途；在制备预防或治疗高脂血症、脂肪肝病或动脉硬化药物中的用途。

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