CN108137698B

CN108137698B - 抗人cd19抗体

Info

Publication number: CN108137698B
Application number: CN201680057493.XA
Authority: CN
Inventors: T·霍弗; 科勒 C·费拉拉; E·莫斯纳; M·何
Original assignee: F Hoffmann La Roche AG
Current assignee: F Hoffmann La Roche AG
Priority date: 2015-10-02
Filing date: 2016-09-28
Publication date: 2022-04-19
Anticipated expiration: 2036-09-28
Also published as: TW201718654A; CA3000045C; KR102761077B1; JP2018535657A; CL2018000829A1; IL258271A; CA3000045A1; BR112018006350A2; CR20180175A; PE20181089A1; CN108137698A; RU2761077C1; AU2016330807B2; IL258271B; US20230312710A1; PH12018500707A1; ZA201801993B; TWI748964B; MY193249A; CO2018004532A2

Abstract

本发明涉及针对人CD19的抗体(抗人CD19抗体)，用于生成它们的方法，含有这些抗体的药物组合物，和使用它们的方法。

Description

抗人CD19抗体

发明领域

本发明涉及针对人CD19的人源化抗体(抗人CD19抗体)，用于生成它们的方法，含有这些抗体的药物组合物，和使用它们的方法。

发明背景

人CD19是一种唯独在B细胞上和在滤泡树突细胞上表达的95kDa跨膜蛋白(B细胞共受体)。发现CD19与CD21和CD81相关。CD19和CD21是正常B细胞分化所需要的(Carter,R.H.,et al.,Immunol.Res.26(2002)45-54)。针对CD19的抗体已经在数项临床试验中使用(参见例如Hekman,A.,et al.,Cancer Immunol.Immunother.32(191)364-372；Vlasfeld,L.T.,et al.,Cancer Immunol.Immunother.40(1995)37-47；Conry,R.M.,et al.,J.Immunother.Emphasis Tumor Immunol.18(1995)231-241；Manzke,O.,et al.,Int.J.Cancer 91(2001)516-522)。

针对CD19的抗体可以对B细胞激活具有抑制性或刺激性效果。CD19抗体对受到丝裂原刺激的B细胞的结合抑制后续的Ca2+升高和所致的这些细胞的激活和增殖，而且取决于所使用的促有丝分裂性刺激和抗体所致交联程度，CD19抗体能抑制或增强B细胞增殖和分化。要通过针对CD19的抗体治疗的癌症包括例如B细胞谱系恶性，诸如例如B细胞淋巴瘤或B细胞白血病，包括但不限于非霍奇金(Hodgkin)淋巴瘤，慢性淋巴细胞性白血病，和急性成淋巴细胞性白血病。针对CD19的抗体还可能对治疗自身免疫疾病，类风湿性关节炎，狼疮，银屑病，或骨疾病是有用的。

在WO 2011/147834中报告了针对CD19的抗体及其用途。然而，已经发现这些抗体在它们的序列中具有某些脱酰胺热点。本文中描述的抗体不仅特征在于没有这些脱酰胺热点的序列，而且它们拥有更高的对靶物CD19的亲和力。

发明概述

在一个方面，本发明提供具有高亲和力的抗人CD19抗体。

在一个方面，提供的是一种以比包含包含SEQ ID NO:113的氨基酸序列的可变重链和包含SEQ ID NO:114的氨基酸序列的可变轻链的抗体要高的亲和力特异性结合人CD19的抗体。

在另一个方面，提供的是一种特异性结合人CD19的抗体，其中该抗体包含

(a)包含SEQ ID NO:43的氨基酸序列的CDR-L1，

(b)包含SEQ ID NO:44的氨基酸序列的CDR-L2，

(c)包含SEQ ID NO:45的氨基酸序列的CDR-L3，

(d)包含SEQ ID NO:46的氨基酸序列的CDR-H1，

(e)包含SEQ ID NO:47的氨基酸序列的CDR-H2，和

(f)包含SEQ ID NO:48的氨基酸序列的CDR-H3。

在又一个方面，该抗体是单克隆抗体。在另一个方面，该抗体是人，人源化或嵌合抗体。在另一个方面，该抗体是特异性结合人CD19的抗体片段。

在一个特定的方面，提供的是一种抗体，其中该抗体包含包含SEQ ID NO:99的氨基酸序列的VH域和包含SEQ ID NO:100的氨基酸序列的VL域。

在又一个方面，提供的是本文中之前描述的抗体，其是全长IgG1抗体。

在一个特定的方面，提供的是本文中描述的抗体，其是具有突变L234A，L235A和P329G(编号方式依照Kabat的EU索引)的全长IgG1抗体。

在又一个方面，提供的是本文中描述的抗体，其对人和食蟹猴CD19是交叉反应性的。

在另一个方面，提供的是一种双特异性抗体，其中所述抗体特异性结合人CD19和第二抗原结合模块，其中该抗体包含

(a)包含SEQ ID NO:43的氨基酸序列的CDR-L1，

(b)包含SEQ ID NO:44的氨基酸序列的CDR-L2，

(c)包含SEQ ID NO:45的氨基酸序列的CDR-L3，

(d)包含SEQ ID NO:46的氨基酸序列的CDR-H1，

(e)包含SEQ ID NO:47的氨基酸序列的CDR-H2，和

(f)包含SEQ ID NO:48的氨基酸序列的CDR-H3。

依照本发明的另一个方面，提供一种分离的多核苷酸，其编码本文中之前定义的抗体。本发明进一步提供一种载体，特别是表达载体，其包含本发明的分离的多核苷酸和一种宿主细胞，其包含本发明的分离的多核苷酸或载体。在一些实施方案中，该宿主细胞是真核细胞，特别是哺乳动物细胞。

在另一个方面，提供的是一种用于生成本发明的抗体的方法，其包括下述步骤：(i)在适合于该抗原结合分子表达的条件下培养本发明的宿主细胞，并(ii)回收该抗原结合分子。本发明还涵盖通过本发明的方法生成的抗体。

本发明进一步提供一种药物组合物，其包含本发明的抗体和至少一种药学可接受赋形剂。

本发明还涵盖的是本发明的抗体，或本发明的药物组合物，其用作药物。在一个方面，提供的是本发明的抗体，或本发明的药物组合物，其用于在有所需要的个体中治疗疾病。在一个具体的方面，提供的是本发明的抗体，或本发明的药物组合物，其用于治疗癌症。在另一个方面，提供的是本发明的抗体，或本发明的药物组合物，其用于治疗自身免疫疾病，类风湿性关节炎，狼疮，银屑病，或骨疾病。

还提供的是本发明的抗体用于制造用于在有所需要的个体中治疗疾病的药物，特别是用于制造用于治疗癌症的药物的用途，以及一种在个体中治疗疾病的方法，其包括对所述个体施用治疗有效量的包含药学可接受形式的该抗体的组合物。在一个具体的方面，该疾病是癌症。在另一个方面，该疾病选自由自身免疫疾病，类风湿性关节炎，狼疮，银屑病，或骨疾病组成的组。在任何上述实施方案中，该个体优选是哺乳动物，特别是人。

附图简述

在图1中图示用于亲本克隆8B8的CDR区的随机化策略。显示的是亲本克隆8B8的可变域和依照Kabat的编号方式的CDR区(加框的)。VL序列对应于SEQ ID NO:114且VH序列对应于SEQ ID NO:113。(X)代表随机化的位置。

图2显示文库生成策略的示意性描述。显示的是用于生成基于8B8的文库的PCR扩增和克隆策略：A)随机化轻和重链中的CDR1和CDR2区或B)随机化轻链中的CDR1和CDR3区和重链中的CDR3区。标示了用于克隆入噬菌粒的各自酶。

图3显示亲本抗CD19克隆8B8与选定的亲和力成熟结合物的比对。显示的是克隆8B8和所有选定的亲和力成熟结合物的序列。重和轻链二者的CDR加框。

图4A至4H涉及亲本8B8克隆和它的亲和力成熟变体的SPR分析。显示的是克隆8B8和它的没有LCDR1 N27d和N28热点的亲和力成熟衍生物的传感图。

图5显示不同CD19 IgG1克隆对表达人CD19的肿瘤细胞(WSU-DLCL2细胞)的结合。结合是用PE缀合的AffiniPure抗人IgG F(ab`)2片段特异性山羊F(ab`)2片段检测的。显示的是荧光强度中值(MFI)对所测试克隆的浓度。

发明详述

定义

除非另有定义，本文中使用的技术和科学术语具有与本发明所属领域中通常使用的含义相同的含义。出于解读本说明书的目的，下面的定义会适用且在适宜时，以单数使用的术语也会包括复数，反之亦然。

如本文中使用的，术语“抗原结合分子”以其最广义指特异性结合抗原决定簇的分子。抗原结合分子的例子是抗体，抗体片段和支架抗原结合蛋白。

术语“抗原结合模块”指特异性结合抗原决定簇的多肽分子。在一个方面，抗原结合模块能够经由它的靶细胞抗原激活信号传导。在一个特定的方面，抗原结合模块能够将其所附着的实体引导至靶位点。抗原结合模块包括能够特异性结合靶细胞抗原的抗体及其片段。另外，能够特异性结合靶细胞抗原的抗原结合模块包括本文中下文定义的支架抗原结合蛋白，例如基于设计的重复蛋白或设计的重复域诸如设计的锚蛋白重复蛋白(DARPin)(参见例如WO 2002/020565)或脂质运载蛋白(Anticalin)的结合域。

术语“抗体”在本文中以最广义使用且涵盖各种抗体结构，包括但不限于单克隆抗体，多克隆抗体，单特异性和多特异性抗体(例如双特异性抗体)，和抗体片段，只要它们展现期望的抗原结合活性。

如本文中使用的，术语“单克隆抗体”指从实质性同质的抗体的群体获得的抗体，即构成该群体的抗体个体是同一的和/或结合相同表位，可能的抗体变体除外，例如含有天然发生的突变的或在单克隆抗体制剂的生成期间产生的，此类变体通常以微小量存在。与通常包括针对不同决定簇(表位)的不同抗体的多克隆抗体制剂相反，单克隆抗体制剂的每个单克隆抗体针对抗原上的单一决定簇。

如本文中使用的，术语“单特异性”抗体表示具有一个或多个结合位点的抗体，所述位点每一个结合相同抗原的相同表位。术语“双特异性”意指抗原结合分子能够特异性结合至少两种截然不同的抗原决定簇。通常，双特异性抗原结合分子包含两种抗原结合位点，所述抗原结合位点每一种是对不同抗原决定簇特异性的。在某些实施方案中，双特异性抗原结合分子能够同时结合两种抗原决定簇，特别是在两种截然不同的细胞上表达的两种抗原决定簇。

如本申请内使用的，术语“价”表示抗原结合分子中规定数目的结合位点的存在。照此，术语“二价”，“四价”，和“六价”分别表示抗原结合分子中两个结合位点，四个结合位点，和六个结合位点的存在。

术语“全长抗体”，“完整抗体”，和“全抗体”在本文中可互换使用，指具有与天然抗体结构实质性相似的结构的抗体。“天然抗体”指具有不同结构的天然发生免疫球蛋白分子。例如，天然IgG类抗体是约150,000道尔顿的异四聚体糖蛋白，由成二硫键的两条轻链和两条重链构成。从N端至末端，每条重链具有一个可变区(VH)，也称作可变重域或重链可变域，接着是三个恒定域(CH1，CH2，和CH3)，也称作重链恒定区。类似地，从N端至C端，每条轻链具有一个可变区(VL)，也称作可变轻域或轻链可变域，接着是一个轻链恒定域(CL)，也称作轻链恒定区。抗体的重链可指派至五种型之一，称作α(IgA)，δ(IgD)，ε(IgE)，γ(IgG)，或μ(IgM)，所述型中的一些可以进一步分为亚型，例如γ1(IgG1)，γ2(IgG2)，γ3(IgG3)，γ4(IgG4)，α1(IgA1)和α2(IgA2)。基于它的恒定域的氨基酸序列，抗体的轻链可指派为两种型之一，称作卡帕(κ)和拉姆达(λ)。

“抗体片段”指不同于完整抗体，包含完整抗体中结合完整抗体所结合的抗原的部分的分子。抗体片段的例子包括但不限于Fv，Fab，Fab’，Fab’-SH，F(ab’)₂；双抗体，三抗体，四抗体，交叉Fab片段；线性抗体；单链抗体分子(例如scFv)；和单域抗体。关于某些抗体片段的综述，参见Hudson et al.,Nat Med 9,129-134(2003)。关于scFv片段的综述，参见例如Plückthun,in The Pharmacology of Monoclonal Antibodies,vol.113,Rosenburgand Moore eds.,Springer-Verlag,New York,pp.269-315(1994)；还参见WO 93/16185；和美国专利No.5,571,894和5,587,458。关于包含补救受体结合表位残基且具有升高的体内半衰期的Fab和F(ab’)₂片段的讨论，参见美国专利No.5,869,046。双抗体是具有两个抗原结合位点的抗体片段，它可以是二价的或双特异性的，参见例如EP 404,097；WO 1993/01161；Hudson et al.,Nat Med 9,129-134(2003)；和Hollinger et al.,Proc Natl AcadSci USA 90,6444-6448(1993)。Hudson et al.,Nat Med 9,129-134(2003)中还描述了三抗体和四抗体。单域抗体是包含抗体的整个或部分重链可变域或整个或部分轻链可变域的抗体片段。在某些实施方案中，单域抗体是人单域抗体(Domantis,Inc.,Waltham,MA；参见例如美国专利No.6,248,516B1)。可以通过各种技术生成抗体片段，包括但不限于完整抗体的蛋白水解消化以及由重组宿主细胞(例如大肠杆菌或噬菌体)生成，如本文中描述的。

完整抗体的木瓜蛋白酶消化产生两个同一的抗原结合片段，称作“Fab”片段，每一个含有重和轻链可变域，还有轻链的恒定域和重链的第一恒定域(CH1)。因此，如本文中使用的，术语“Fab片段”指包含包含VL域和轻链恒定域(CL)的轻链片段，和VH域和重链第一恒定域(CH1)的抗体片段。Fab’片段因重链CH1域的羧基末端处增加少数残基而与Fab片段不同，包括来自抗体铰链区的一个或多个半胱氨酸。Fab’-SH是其中恒定域的半胱氨酸残基携带游离硫醇基团的Fab’片段。胃蛋白酶处理产生具有两个抗原结合位点(两个Fab片段)和Fc区一部分的F(ab’)₂片段。

术语“交叉Fab片段”或“xFab片段”或“交换Fab片段”指其中重和轻链的可变区或恒定区任一交换的Fab片段。交换Fab分子的两种不同链组成是可能的且包含在本发明的双特异性抗体中。一方面，Fab重和轻链的可变区交换，即交换Fab分子包含由轻链可变区(VL)和重链恒定区(CH1)构成的一条肽链，和由重链可变区(VH)和轻链恒定区(CL)构成的一条肽链。这种交换Fab分子也称作CrossFab_(VLVH)。另一方面，当Fab重和轻链的恒定区交换时，交换Fab分子包含由重链可变区(VH)和轻链恒定区(CL)构成的一条肽链，和由轻链可变区(VL)和重链恒定区(CH1)构成的一条肽链。这种交换Fab分子也称作CrossFab_(CLCH1)。

“单链Fab片段”或“scFab”是由抗体重链可变域(VH)，抗体恒定域1(CH1)，抗体轻链可变域(VL)，抗体轻链恒定域(CL)和接头组成的多肽，其中所述抗体域和所述接头以N端至C端方向具有下面的次序之一：a)VH-CH1-接头-VL-CL，b)VL-CL-接头-VH-CH1，c)VH-CL-接头-VL-CH1或d)VL-CH1-接头-VH-CL；且其中所述接头是至少30个氨基酸，优选32至50个氨基酸的多肽。所述单链Fab片段经由CL域和CH1域之间的天然二硫键而稳定化。另外，通过经由插入半胱氨酸残基(例如依照Kabat编号方式的可变重链中的位置44和可变轻链中的位置100)产生链间二硫键，这些单链Fab分子可以进一步稳定化。

“交换单链Fab片段”或“x-scFab”是由抗体重链可变域(VH)，抗体恒定域1(CH1)，抗体轻链可变域(VL)，抗体轻链恒定域(CL)和接头组成的多肽，其中所述抗体域和所述接头以N端至C端方向具有下面的次序之一：a)VH-CL-接头-VL-CH1和b)VL-CH1-接头-VH-CL；其中VH和VL一起形成特异性结合抗原的抗原结合位点，且其中所述接头是至少30个氨基酸的多肽。另外，通过经由插入半胱氨酸残基(例如依照Kabat编号方式的可变重链中的位置44和可变轻链中的位置100)产生链间二硫键，这些x-scFab分子可以进一步稳定化。

“单链可变片段(scFv)”是用10个至约25个氨基酸的短接头肽连接的抗体重(V_H)和轻(V_L)链可变区的融合蛋白。接头通常富含甘氨酸(出于柔性)，以及丝氨酸或苏氨酸(出于溶解性)，而且可以将V_H的N末端与V_L的C末端连接，或反之亦然。尽管去除了恒定区并引入了接头，但是这种蛋白质保留了原始抗体的特异性。scFv抗体描述于例如Houston,J.S.,Methods in Enzymol.203(1991)46-96。另外，抗体片段包含具有VH域的(即能够与VL域一起)或VL域的(即能够与VH域一起)特征(组装成功能性抗原结合位点且由此提供全长抗体的抗原结合特性)的单链多肽。

“支架抗原结合蛋白”是本领域已知的，例如，纤连蛋白和设计的锚蛋白重复蛋白(DARPin)已经用作抗原结合域的备选支架，参见例如Gebauer and Skerra,Engineeredprotein scaffolds as next-generation antibody therapeutics.Curr Opin ChemBiol 13:245-255(2009)和Stumpp et al.,Darpins:A new generation of proteintherapeutics.Drug Discovery Today 13:695-701(2008)。在本发明的一个方面，支架抗原结合蛋白选自由CTLA-4(Evibody)，脂质运载蛋白(Anticalin)，蛋白A衍生的分子诸如蛋白A的Z域(Affibody)，A域(Avimer/Maxibody)，血清载铁蛋白(Trans-body)；设计的锚蛋白重复蛋白(DARPin)，抗体轻链或重链的可变域(单域抗体，sdAb)，抗体重链的可变域(纳米抗体，aVH)，V_NAR片段，纤连蛋白(AdNectin)，C型凝集素域(Tetranectin)；新的抗原受体β-内酰胺酶的可变域(V_NAR片段)，人γ-晶体蛋白或泛素(Affilin分子)；人蛋白酶抑制剂的kunitz型域，微体诸如来自knottin家族的蛋白质，肽适体和纤连蛋白(Adnectin)组成的组。

CTLA-4(细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4)是一种主要在CD4+T细胞上表达的CD28家族受体。它的胞外域具有可变域样Ig折叠。可以用异源序列替代与抗体CDR对应的环以赋予不同的结合特性。改造成具有不同结合特异性的CTLA-4分子也称作Evibody(例如US7166697B1)。Evibody的尺寸与抗体(例如域抗体)的分离的可变区大致相同。进一步的详情参见Journal of Immunological Methods 248(1-2),31-45(2001)。

脂质运载蛋白是一个细胞外蛋白质家族，其转运小的疏水性分子，诸如类固醇，胆红素，类视黄醇和脂质。它们具有刚性β-片层二级结构，在锥形结构的开口端具有一些环，可以改造成结合不同靶抗原。Anticalin的尺寸介于160-180个氨基酸之间，而且衍生自脂质运载蛋白。进一步的详情参见Biochim Biophys Acta 1482:337-350(2000)，US7250297B1和US20070224633。

Affibody是一种自金黄色葡萄球菌蛋白A衍生的支架，可以改造成结合抗原。该域由大约58个氨基酸的三螺旋束组成。通过表面残基的随机化生成了文库。进一步的详情参见Protein Eng.Des.Sel.17,455-462(2004)和EP1641818A1。

Avimer是自A域支架家族衍生的多域蛋白。大约35个氨基酸的天然域采取限定的成二硫键的结构。多样性是通过由A域家族展现的天然变异的改组而产生的。进一步的详情参见Nature Biotechnology 23(12),1556-1561(2005)和Expert Opinion onInvestigational Drugs 16(6),909-917(June 2007)。

转铁蛋白是一种单体血清转运糖蛋白。通过在允许的表面环中插入肽序列，转铁蛋白能改造成结合不同的靶抗原。经过改造的转铁蛋白支架的例子包括Trans-body。进一步的详情参见J.Biol.Chem 274,24066-24073(1999)。

设计的锚蛋白重复蛋白(DARPin)衍生自锚蛋白，锚蛋白是介导整合膜蛋白附着至细胞骨架的一个蛋白质家族。单个锚蛋白重复是一个33个残基的基序，由两个α-螺旋和一个β-转角组成。通过随机化每个重复的第一个α-螺旋和β-转角中的残基，它们能改造成结合不同的靶抗原。通过增加模块的数目(亲和力成熟的一种方法)能增加它们的结合界面。进一步的详情参见J.Mol.Biol.332,489-503(2003)，PNAS 100(4),1700-1705(2003)和J.Mol.Biol.369,1015-1028(2007)和US20040132028A1。

单域抗体是由单个单体可变抗体域组成的抗体片段。第一种单域是自来自骆驼科动物(camelids)的抗体重链的可变域衍生的(纳米抗体或V_HH片段)。而且，术语单域抗体包括自主的(autonomous)人重链可变域(aVH)或自鲨鱼衍生的V_NAR片段。

纤连蛋白是一种能改造成结合抗原的支架。Adnectin由人纤连蛋白III型(FN3)的15个重复单元的第10个域的天然氨基酸序列的主链组成。可以将β-夹心一端处的三个环改造，使得Adnectin能够特异性识别感兴趣的治疗靶。进一步的详情参见ProteinEng.Des.Sel.18,435-444(2005)，US20080139791，WO2005056764和US6818418B1。

肽适体是由恒定支架蛋白组成的组合识别分子，所述恒定支架蛋白通常是含有在活性位点处插入的受到约束的可变肽环的硫氧还蛋白(TrxA)。进一步的详情参见ExpertOpin.Biol.Ther.5,783-797(2005)。

微体衍生自长度为25-50个氨基酸的天然发生微蛋白，其含有3-4个半胱氨酸桥-微蛋白的例子包括KalataBI和芋螺毒素和半knottin。微蛋白具有能改造成包括多达25个氨基酸而不影响微蛋白的总体折叠的环。经过改造的knottin域的进一步详情参见WO2008098796。

与参照分子“结合相同表位的抗原结合分子”指在竞争测定法中将参照分子对它的抗原的结合阻断50％或更多的抗原结合分子，反之，参照分子在竞争测定法中将抗原结合分子对它的抗原的结合阻断50％或更多。

术语“抗原结合域”指抗原结合分子中包含特异性结合或与部分或整个抗原互补的区域的部分。在抗原较大的情况中，抗原结合分子可以仅仅结合抗原的特定部分，该部分称作表位。抗原结合域可以由例如一个或多个可变域(也称作可变区)提供。优选地，抗原结合域包含抗体轻链可变区(VL)和抗体重链可变区(VH)。

如本文中使用的，术语“抗原决定簇”与“抗原”和“表位”同义，而且指多肽大分子上受到抗原结合模块结合，形成抗原结合模块-抗原复合物的位点(例如氨基酸的连续区段或由不连续氨基酸的不同区域构成的构象构造)。有用的抗原决定簇可以例如在肿瘤细胞的表面上，在受到病毒感染的细胞的表面上，在其它患病细胞的表面上，在免疫细胞的表面上找到，在血清中，和/或在细胞外基质(ECM)中游离。作为本文中的抗原有用的蛋白质可以是来自任何脊椎动物来源的蛋白质的任何天然形式，包括哺乳动物，诸如灵长类动物(例如人)和啮齿类动物(例如小鼠和大鼠)，除非另外指明。在一个特定的实施方案中，抗原是人蛋白质。在提及本文中的具体蛋白质的情况中，该术语涵盖“全长的”，未加工的蛋白质以及源自细胞中加工的该蛋白质的任何形式。该术语还涵盖蛋白质的天然发生变体，例如剪接变体或等位变体。

“特异性结合”意指结合对于抗原是选择性的，而且可以与不想要的或非特异性的相互作用区分开。抗原结合分子结合特定抗原的能力可以经由酶联免疫吸附测定法(ELISA)或本领域技术人员熟悉的其它技术来测量，例如表面等离振子共振(SPR)技术(在BIAcore仪器上分析)(Liljeblad et al.,Glyco J 17,323-329(2000))和传统的结合测定法(Heeley,Endocr Res 28,217-229(2002))。在一个实施方案中，抗原结合分子对无关蛋白质的结合程度小于该抗原结合分子对抗原的结合的约10％，如通过例如SPR测量的。在某些实施方案中，结合抗原的分子具有≤1μM，≤100nM，≤10nM，≤1nM，≤0.1nM，≤0.01nM，或≤0.001nM(例如10^-8M或更小，例如10^-8M至10^-13M，例如10^-9M至10^-13M)的解离常数(Kd)。

“亲和力”或“结合亲和力”指分子(例如抗体)的一个结合位点和它的结合配偶(例如抗原)之间的非共价相互作用的总和的强度。除非另外指明，如本文中使用的，“结合亲和力”指反映结合对的成员(例如抗体和抗原)之间的1:1相互作用的内在结合亲和力。分子X对它的配偶Y的亲和力一般可以用解离常数(Kd)来代表，它是解离和结合速率常数(分别是koff和kon)的比率。如此，等同的亲和力可以包含不同的速率常数，只要速率常数的比率保持相同。可以通过本领域已知的常用方法来测量亲和力，包括本文中描述的那些。用于测量亲和力的一种特定方法是表面等离振子共振(SPR)。

术语“CD19”指B淋巴细胞抗原CD19，也称作B淋巴细胞表面抗原B4或T细胞表面抗原Leu-12，而且包括任何脊椎动物来源的任何天然CD19，包括哺乳动物，诸如灵长类动物(例如人)，非人灵长类动物(例如食蟹猴)和啮齿类动物(例如小鼠和大鼠)，除非另外指明。人CD19的氨基酸序列在Uniprot登录号P15391(版本160，SEQ ID NO:115)中显示。该术语涵盖“全长的”，未加工的人CD19以及源自细胞中加工的任何形式的人CD19，只要本文中报告的抗体与其之结合。CD19是在人B细胞的表面上表达的结构上独特的细胞表面受体，所述B细胞包括但不限于前B细胞，处于早期发育中的B细胞(即未成熟B细胞)，通过终末分化成浆细胞的成熟B细胞，和恶性B细胞。CD19由大多数前B急性成淋巴细胞性白血病(ALL)，非霍奇金氏淋巴瘤，B细胞慢性淋巴细胞性白血病(CLL)，原淋巴细胞性白血病，毛细胞白血病，常见急性淋巴细胞性白血病，和一些Null-急性成淋巴细胞性白血病表达。CD19在浆细胞上的表达进一步提示它可能在已分化的B细胞肿瘤诸如多发性骨髓瘤上表达。因此，CD19抗原是治疗非霍奇金氏淋巴瘤，慢性淋巴细胞性白血病和/或急性成淋巴细胞性白血病的免疫疗法的靶标。

术语“可变区”或“可变域”指抗体重或轻链中涉及抗原结合分子结合抗原的域。天然抗体的重链和轻链的可变域(分别为VH和VL)一般具有相似的结构，每个域包含四个保守的框架区(FR)和三个高变区(HVR)。参见例如Kindt et al.,Kuby Immunology,6th ed.,W.H.Freeman and Co.,page 91(2007)。单个VH或VL域可能足以赋予抗原结合特异性。

如本文中使用的，术语“高变区”或“HVR”指抗体可变域中在序列上高变/或形成结构上定义的环(“高变环”)的每个区域。一般地，天然四链抗体包含六个HVR：三个在VH中(H1，H2，H3)，三个在VL中(L1，L2，L3)。HVR一般包含来自高变环和/或来自“互补决定区”(CDR)的氨基酸残基，后者具有最高的序列变异性和/或涉及抗原识别。例示性高变环发生于氨基酸残基26-32(L1)，50-52(L2)，91-96(L3)，26-32(H1)，53-55(H2)，和96-101(H3)(Chothia and Lesk,J.Mol.Biol.196:901-917(1987))。例示性CDR(CDR-L1，CDR-L2，CDR-L3，CDR-H1，CDR-H2，和CDR-H3)发生于L1的24-34，L2的50-56，L3的89-97，H1的31-35B，H2的50-65，和H3的95-102氨基酸残基(Kabat et al.,Sequences of Proteins ofImmunological Interest,5th Ed.Public Health Service,National Institutes ofHealth,Bethesda,MD(1991))。高变区(HVR)也称作互补决定区(CDR)，而且在这些术语在提到可变区中形成抗原结合区的部分在本文中可互换使用。这个特定的区域已经由Kabat etal.,U.S.Dept.of Health and Human Services,“Sequences of Proteins ofImmunological Interest”(1983)和Chothia et al.,J.Mol.Biol.196:901-917(1987)描述，其中定义包括当针对彼此比较时的氨基酸残基的子集或交叠。不过，将任一定义应用于提及抗体的CDR或其变体意图在本文中定义和使用的该术语的范围内。涵盖由每一篇上文引用的参考文献定义的CDR的适宜的氨基酸残基在下文表A中列出作为比较。涵盖特定CDR的确切残基数目会取决于CDR的序列和尺寸而变化。鉴于抗体的可变区氨基酸序列，本领域技术人员能例行确定哪些残基构成特定的CDR。

表A：CDR定义¹

CDR	Kabat	Chothia	AbM<sup>2</sup>
				V<sub>H</sub> CDR1	31-35	26-32	26-35
V<sub>H</sub> CDR2	50-65	52-58	50-58
				V<sub>H</sub> CDR3	95-102	95-102	95-102
V<sub>L</sub> CDR1	24-34	26-32	24-34
				V<sub>L</sub> CDR2	50-56	50-52	50-56
V<sub>L</sub> CDR3	89-97	91-96	89-97

¹表A中的所有CDR定义的编号方式依照Kabat等人列出的编号规则(见下文)。

²表A中使用的具有小写“b”的“AbM”指由Oxford Molecular的“AbM”抗体建模软件定义的CDR。

Kabat等人还定义了可应用于任何抗体的可变区序列的编号系统。本领域普通技术人员能将这种“Kabat编号”系统明确地指派给任何可变区序列，不依赖于序列本身以外的任何实验数据。如本文中使用的，“Kabat编号(方式)”指由Kabat et al.,U.S.Dept.ofHealth and Human Services,“Sequence of Proteins of Immunological Interest”(1983)中列出的编号系统。除非另有说明，抗体可变区中具体氨基酸残基位置的编号的提及依照Kabat编号系统。

除了VH中的CDR1之外，CDR一般包含形成高变环的氨基酸残基。CDR还包含“特异性决定残基”或“SDR”，它们是接触抗原的残基。SDR包含在称作缩短的CDR或a-CDR的CDR区域中。例示性a-CDR(a-CDR-L1，a-CDR-L2，a-CDR-L3，a-CDR-H1，a-CDR-H2，和a-CDR-H3)发生于L1的31-34，L2的50-55，L3的89-96，H1的31-35B，H2的50-58，和H3的95-102氨基酸残基(参见Almagro and Fransson,Front.Biosci.13:1619-1633(2008))。除非另外指明，在本文中依照Kabat et al.,supra对可变域中的HVR残基和其它残基(例如FR残基)编号。

如本文中使用的，在抗原结合分子(例如抗体)的背景中，术语“亲和力成熟的”指例如通过突变而自参照抗原结合分子衍生，与参照抗体结合相同抗原，优选结合相同表位；而且具有比参考抗原结合分子要高的对抗原的亲和力的抗原结合分子。亲和力成熟一般涉及抗原结合分子的一个或多个CDR中的一个或多个氨基酸残基的修饰。典型地，亲和力成熟的抗原结合分子与初始参照抗原结合分子结合相同表位。

“框架”或“FR”指除了高变区(HVR)残基以外的可变域残基。可变域的FR一般由FR1，FR2，FR3，和FR4四个FR域组成。因而，HVR和FR序列一般在VH(或VL)中以下面处顺序出现：FR1-H1(L1)-FR2-H2(L2)-FR3-H3(L3)-FR4。

出于本文中的目的，“受体人框架”是包含自下文定义的人免疫球蛋白框架或人共有框架衍生的轻链可变域(VL)框架或重链可变域(VH)框架的氨基酸序列的框架。“衍生自”人免疫球蛋白框架或人共有框架的受体人框架可以包含与之相同的氨基酸序列，或者它可以含有氨基酸序列变化。在一些实施方案中，氨基酸变化的数目为10处或更少，9处或更少，8处或更少，7处或更少，6处或更少，5处或更少，4处或更少，3处或更少，或2处或更少。在一些实施方案中，VL受体人框架在序列上与VL人免疫球蛋白框架序列或人共有框架序列同一。

术语“嵌合”抗体指其中一部分重和/或轻链衍生自特定的来源或物种，而剩余重和/或轻链衍生自不同的来源或物种的抗体。

抗体的“类”指它的重链所拥有的恒定域或恒定区的类型。有五大类的抗体：IgA，IgD，IgE，IgG，和IgM，而且这些中的数项可以进一步分为亚类(同种型)，例如IgG₁，IgG₂，IgG₃，IgG₄，IgA₁，和IgA₂。与不同类的免疫球蛋白对应的重链恒定域分别称作α，δ，ε，γ，和μ。

“人源化”抗体指包含来自非人HVR的氨基酸残基和来自人FR的氨基酸残基的嵌合抗体。在某些实施方案中，人源化抗体会包含至少一个，通常两个实质上整个如下的可变域，其中所有或实质上所有HVR(例如CDR)对应于非人抗体的那些，而且所有或实质上所有FR对应于人抗体的那些。人源化抗体任选可以包含自人抗体衍生的抗体恒定区的至少一部分。抗体，例如非人抗体的“人源化形式”指经历人源化的抗体。本发明涵盖的其它形式的“人源化抗体”是那些其中恒定区已经自原始抗体的恒定区另外修饰或改变以产生依照本发明的特性，尤其是关于C1q结合和/或Fc受体(FcR)结合的。

“人”抗体是拥有与由人或人细胞生成的或自利用人抗体全集或其它人抗体编码序列的非人来源衍生的抗体的氨基酸序列对应的氨基酸序列的抗体。人抗体的这种定义明确排除包含非人抗原结合残基的人源化抗体。

术语“Fc域”或“Fc区”在本文中用于定义抗体重链中含有恒定区的至少一部分的C端区域。该术语包括天然序列Fc区和变体Fc区。IgG Fc区包含IgG CH2和IgG CH3域。人IgGFc区的“CH2域”通常从约位置231的氨基酸残基延伸至约位置340的氨基酸残基。在一个实施方案中，碳水化合物链附着于CH2域。CH2域在本文中可以是天然序列CH2域或变体CH2域。“CH3域”包含Fc区中在CH2域C端的那段残基(即IgG的约位置341处的氨基酸残基至约位置447处的氨基酸残基)。CH3区在本文中可以是天然序列CH3域或变体CH3域(例如在其一条链中引入“隆起”(“节”)且在其另一条链中相应地引入“空腔”(“穴”)的CH3域；参见美国专利No.5,821,333，通过援引明确收入本文)。如本文中描述的，此类变体CH3域可用于促进两个不相同的抗体重链的异二聚化。在一个实施方案中，人IgG重链Fc区从Cys226或从Pro230延伸至重链的羧基末端。然而，Fc区的C末端赖氨酸(Lys447)可以存在或不存在。除非本文中另外规定，Fc区或恒定区中的氨基酸残基的编号依照EU编号系统，也称作EU索引，如Kabatet al.,Sequences of Proteins of Immunological Interest,5th Ed.Public HealthService,National Institutes of Health,Bethesda,MD,1991中描述的。

“节入穴”技术描述于例如US 5,731,168；US 7,695,936；Ridgway et al.,ProtEng 9,617-621(1996)和Carter,J Immunol Meth 248,7-15(2001)。一般地，该方法涉及在第一多肽的界面处引入隆起(“节”)及在第二多肽的界面中引入相应的空腔(“穴”)，使得该隆起能安置在该空腔中，从而促进异二聚体形成及阻碍同二聚体形成。通过将来自第一多肽的界面的小氨基酸侧链用更大的侧链(例如酪氨酸或色氨酸)替换来构建隆起。通过将大氨基酸侧链用更小的氨基酸侧链(例如丙氨酸或苏氨酸)替换，在第二多肽的界面中产生与隆起相同或相似大小的补偿空腔。可以通过改变编码多肽的核酸，例如通过位点特异性诱变，或通过肽合成而生成隆起和空腔。在一个具体的实施方案中，节修饰包括Fc域的两个亚基之一中的氨基酸替代T366W，且穴修饰包括Fc域的两个亚基之另一中的氨基酸替代T366S，L368A和Y407V。在又一个具体的实施方案中，Fc域中包含节修饰的亚基另外包含氨基酸替代S354C，且Fc域中包含穴修饰的亚基另外包含氨基酸替代Y349C。引入这两个半胱氨酸残基导致在Fc区的两个亚基之间形成二硫桥，从而进一步稳定化二聚体(Carter,JImmunol Methods 248,7-15(2001))。

“与免疫球蛋白Fc区等同的区域”意图包括免疫球蛋白Fc区的天然发生等位变体以及具有产生替代，添加，或删除的改变但并不实质性降低免疫球蛋白介导效应器功能(诸如抗体依赖性细胞的细胞毒性)的能力的变体。例如，可以从免疫球蛋白Fc区的N端或C端删除一个或多个氨基酸，而没有生物学功能的实质性损失。可以依照本领域已知的一般规则来选择此类变体，从而对活性具有最小限度的影响(参见例如Bowie,J.U.et al.,Science247:1306-10(1990))。

术语“效应器功能”指可归于抗体Fc区的那些生物学活性，其随抗体同种型而变化。抗体效应器功能的例子包括：C1q结合和补体依赖性细胞毒性(CDC)，Fc受体结合，抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)，抗体依赖性细胞吞噬(ADCP)，细胞因子分泌，免疫复合物介导的抗原呈递细胞对抗原的摄取，细胞表面受体(例如B细胞受体)的下调，和B细胞激活。

“激活性Fc受体”是受到抗体Fc区啮合后引发刺激携带受体的细胞实施效应器功能的信号传导事件的Fc受体。激活性Fc受体包括FcγRIIIa(CD16a)，FcγRI(CD64)，FcγRIIa(CD32)，和FcαRI(CD89)。一种特定的激活性Fc受体是人FcγRIIIa(参见UniProt登录号P08637，版本141)。

“外域”是膜蛋白中延伸入细胞外空间(即靶细胞外部的空间)的域。外域通常是蛋白质中发起与表面接触，导致信号转导的部分。

术语“肽接头”指包含一个或多个氨基酸，通常是约2-20个氨基酸的肽。肽接头是本领域已知的或本文中描述的。合适的是，非免疫原性接头肽是例如(G₄S)_n，(SG₄)_n或G₄(SG₄)_n肽接头，其中“n”一般是1至10，通常是1至4的数字，特别是2。

如本申请中使用的，术语“氨基酸”表示天然发生羧基α-氨基酸的组，包含丙氨酸(三字母代码：ala，单字母代码：A)，精氨酸(arg，R)，天冬酰胺(asn，N)，天冬氨酸(asp，D)，半胱氨酸(cys，C)，谷氨酰胺(gln，Q)，谷氨酸(glu，E)，甘氨酸(gly，G)，组氨酸(his，H)，异亮氨酸(ile，I)，亮氨酸(leu，L)，赖氨酸(lys，K)，甲硫氨酸(met，M)，苯丙氨酸(phe，F)，脯氨酸(pro，P)，丝氨酸(ser，S)，苏氨酸(thr，T)，色氨酸(trp，W)，酪氨酸(tyr，Y)，和缬氨酸(val，V)的。

“融合”或“连接”意指各成分通过肽键连接，或是直接地或是经由一个或多个肽接头。

就参照多肽(蛋白质)序列而言的“百分比(％)氨基酸序列同一性”定义为在比对序列和在必要时引入缺口以实现最大百分比序列同一性后，而且不考虑任何保守替代作为序列同一性的一部分，候选序列中与参照多肽序列中的氨基酸残基同一的氨基酸残基的百分比。可以以本领域技术范围内的多种方式实现为了确定百分比氨基酸序列同一性目的的比对，例如使用公众可获得的计算机软件，诸如BLAST，BLAST-2，ALIGN，SAWI或Megalign(DNASTAR)软件。本领域技术人员能确定用于比对序列的适宜参数，包括在所比较的序列的全长上实现最大比对所需要的任何算法。然而，出于本文中的目的，使用序列比较计算机程序ALIGN-2生成％氨基酸序列同一性值。ALIGN-2序列比较计算机程序由Genentech公司创作，而且源代码已经与用户文件一起在美国版权局(U.S.Copyright Office,WashingtonD.C.,20559)备案，在那里它以美国版权登记号TXU510087登记。ALIGN-2程序可从Genentech公司(South San Francisco,California)公开获得，或者可以从源代码汇编。ALIGN-2程序应当汇编成供在UNIX操作系统，包括数字UNIX V4.0D上使用。所有序列比较参数均由ALIGN-2程序设定且没有变化。在采用ALIGN-2进行氨基酸序列比较的情形中，给定氨基酸序列A对，与，或针对给定氨基酸序列B的％氨基酸序列同一性(或者可表述为给定氨基酸序列A具有或包含对，与，或针对给定氨基酸序列B的某％氨基酸序列同一性)如下计算：

100乘以分数X/Y

其中X是由序列比对程序ALIGN-2在该程序的A和B的比对中评分为相同匹配的氨基酸残基的数目，且其中Y是B中的氨基酸残基的总数。会领会的是，在氨基酸序列A的长度不等于氨基酸序列B的长度的情况中，A对B的％氨基酸序列同一性不会等于B对A的％氨基酸序列同一性。除非另有具体说明，本文中使用的所有％氨基酸序列同一性值是使用ALIGN-2计算机程序如前一段中所述获得的。

术语“氨基酸序列变体”包括其中在亲本抗原结合分子(例如人源化或人抗体)的一个或多个高变区残基中有氨基酸替代的实质性变体。一般地，为进一步研究选择的所得变体相对于亲本抗原结合分子会具有某些生物学特性的改变(例如改善)(升高的亲和力，降低的免疫原性)和/或会实质性保留亲本抗原结合分子的某些生物学特性。一种例示性的替代变体是亲和力成熟抗体，它可以方便地生成，例如使用基于噬菌体展示的亲和力成熟技术，诸如本文中描述的那些。简言之，突变一个或多个HVR残基并在噬菌体上展示变体抗原结合分子并筛选特定生物学活性(例如结合亲和力)。在某些实施方案中，替代，插入，或删除可以在一个或多个HVR内发生，只要此类改变并不实质性降低抗原结合分子结合抗原的能力。例如，可以在HVR中进行并不实质性降低结合亲和力的保守改变(例如本文中提供的保守替代)。用于鉴定抗体中可以靶定进行诱变的残基或区域的一种有用方法称作“丙氨酸扫描诱变”，如Cunningham and Wells(1989)Science,244:1081-1085描述的。在这种方法中，鉴定一个残基或一组靶残基(例如带电荷的残基，诸如Arg，Asp，His，Lys，和Glu)，并用中性或带负电荷的氨基酸(例如丙氨酸或聚丙氨酸)替换，以确定抗体与抗原的相互作用是否受到影响。可以在对初始替代展现功能敏感性的氨基酸位置处引入进一步的替代。或者/另外，可以使用抗原-抗原结合分子复合物的晶体结构来鉴定抗体和抗原之间的接触点。可以靶定或消除此类接触残基和相邻残基作为替代的候选。可以筛选变体以确定它们是否含有期望的特性。

氨基酸序列插入包括长度从一个残基到含有一百个或更多个残基的多肽的氨基和/或羧基末端融合，以及一个或多个氨基酸残基的序列内插入。

“保守替代”在表B中标题“优选替代”下提供，而且在下文中提到氨基酸侧链类别(1)至(6)进一步描述。可以将氨基酸替代引入感兴趣分子，并对产物筛选期望的活性，例如保留/改善的抗原结合，降低的免疫原性，或提高的ADCC或CDC。

表B

原始残基	例示性替代	优选替代
			Ala(A)	Val；Leu；Ile	Val
Arg(R)	Lys；Gln；Asn	Lys
			Asn(N)	Gln；His；Asp；Lys；Arg	Gln
Asp(D)	Glu；Asn	Glu
			Cys(C)	Ser；Ala	Ser
Gln(Q)	Asn；Glu	Asn
			Glu(E)	Asp；Gln	Asp
Gly(G)	Ala	Ala
			His(H)	Asn；Gln；Lys；Arg	Arg
Ile(I)	Leu；Val；Met；Ala；Phe；正亮氨酸	Leu
			Leu(L)	正亮氨酸；Ile；Val；Met；Ala；Phe	Ile
Lys(K)	Arg；Gln；Asn	Arg
			Met(M)	Leu；Phe；Ile	Leu
Phe(F)	Trp；Leu；Val；Ile；Ala；Tyr	Tyr
			Pro(P)	Ala	Ala
Ser(S)	Thr	Thr
			Thr(T)	Val；Ser	Ser
Trp(W)	Tyr；Phe	Tyr
			Tyr(Y)	Trp；Phe；Thr；Ser	Phe
Val(V)	Ile；Leu；Met；Phe；Ala；正亮氨酸	Leu

可以根据常见侧链特性将氨基酸分组：

(1)疏水性的：正亮氨酸，Met，Ala，Val，Leu，Ile；

(2)中性亲水性的：Cys，Ser，Thr，Asn，Gln；

(3)酸性的：Asp，Glu；

(4)碱性的：His，Lys，Arg；

(5)影响链取向的残基：Gly，Pro；

(6)芳香族的：Trp，Tyr，Phe。

非保守替代会需要以这些类之一的成员交换另一类。

在某些实施方案中，改变本文中提供的抗原结合分子以提高或降低抗体糖基化的程度。通过改变氨基酸序列，使得创建或去除一个或多个糖基化位点，可以方便地获得分子的糖基化变体。在抗原结合分子包含Fc区的情况中，可以改变附着于其的碳水化合物。由哺乳动物细胞生成的天然抗体通常包含分支的，双触角的寡糖，其一般通过N连接附着于Fc区的CH2域的Asn297。参见例如Wright et al.,TIBTECH 15:26-32(1997)。寡糖可以包括各种碳水化合物，例如甘露糖，N-乙酰基葡萄糖胺(GlcNAc)，半乳糖，和唾液酸，以及附着于双触角寡糖结构的“干”中的GlcNAc的岩藻糖。在一些实施方案中，可以在抗原结合分子中进行寡糖修饰，从而创建具有某些改良特性的变体。在一个方面，提供了具有缺乏(直接或间接)附着于Fc区的岩藻糖的碳水化合物结构的抗原结合分子的变体。此类岩藻糖基化变体可具有改善的ADCC功能，参见例如美国专利公开文本No.US 2003/0157108(Presta,L.)或US2004/0093621(Kyowa Hakko Kogyo Co.,Ltd)。本发明的抗原结合分子的别的变体包括那些具有两分型寡糖的，例如其中附着于Fc区的双触角寡糖通过GlcNAc两分的。此类变体可以具有降低的岩藻糖基化和/或改善的ADCC功能，参见例如WO 2003/011878(Jean-Mairetet al.)；美国专利No.6,602,684(Umana et al.)；和US 2005/0123546(Umana et al.)。还提供了附着于Fc区的寡糖中有至少一个半乳糖残基的变体。此类抗体变体可以具有改善的CDC功能，而且描述于例如WO 1997/30087(Patel et al.)；WO 1998/58964(Raju,S.)；和WO1999/22764(Raju,S.)。

在某些实施方案中，可能想要创建本发明的抗原结合分子的半胱氨酸改造变体，例如“thioMAb”，其中分子的一个或多个残基用半胱氨酸残基替代。在特定的实施方案中，替代的残基存在于分子的可接近位点。通过用半胱氨酸替代那些残基，由此反应性硫醇基团安置在抗体的可接近位点且可用于将抗体与其它模块(诸如药物模块或接头-药物模块)缀合以创建免疫缀合物。在某些实施方案中，任何一个或多个下面的残基可以用半胱氨酸替代：轻链的V205(Kabat编号方式)；重链的A118(EU编号方式)；和重链Fc区的S400(EU编号方式)。可以如例如美国专利No.7,521,541中所述生成半胱氨酸改造抗原结合分子。

在某些方面，可以进一步修饰本文中提供的抗原结合分子以含有本领域已知且易于获得的另外的非蛋白质模块。适用于抗体衍生化的模块包括但不限于水溶性聚合物。水溶性聚合物的非限制性例子包括但不限于聚乙二醇(PEG)，乙二醇/丙二醇的共聚物，羧甲基纤维素，葡聚糖，聚乙烯醇，聚乙烯吡咯烷酮，聚-1,3-二氧戊环，聚-1,3,6-三口恶烷，乙烯/马来酸酐共聚物，聚氨基酸(或是均聚物或是随机共聚物)，和葡聚糖或聚(n-乙烯基吡咯烷酮)聚乙二醇，丙二醇均聚物，聚氧化丙烯/氧化乙烯共聚物，聚氧乙烯化多元醇(例如甘油)，聚乙烯醇，及其混合物。聚乙二醇丙醛由于它在水中的稳定性而可能具有在制造方面的优势。聚合物可以是任何分子量的，而且可以是分支的或不分支的。附着于抗体的聚合物的数目可以变化，而且如果附着多于一种的聚合物，那么它们可以是相同或不同的分子。一般而言，用于衍生化的聚合物的数目和/或类型可以基于下述考虑事项来确定，包括但不限于要改进的抗体的特定特性或功能，抗体衍生物是否会在限定的条件下在疗法中使用，等。在另一个方面，提供了可通过暴露于辐射而选择性加热的非蛋白质模块和抗体的缀合物。在一个实施方案中，非蛋白质模块是碳纳米管(Kam,N.W.et al.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 102(2005)11600-11605)。辐射可以是任何波长的，而且包括但不限于不损害普通细胞，但将非蛋白质模块加热至杀死抗体-非蛋白质模块附近的细胞的温度的波长。在另一个方面，可以获得本文中提供的抗原结合分子的免疫缀合物。“免疫缀合物”是与一个或多个异源分子，包括但不限于细胞毒剂缀合的抗体。

术语“多核苷酸”指分离的核酸分子或构建物，例如信使RNA(mRNA)，病毒衍生的RNA，或质粒DNA(pDNA)。多核苷酸可以包含常规的磷酸二酯键或非常规的键(例如酰胺键，诸如在肽核酸(PNA)中找到的)。术语“核酸分子”指多核苷酸中存在的任何一个或多个核酸区段，例如DNA或RNA片段。

“分离的”核酸分子或多核苷酸意指已经自其天然环境移出的核酸分子，DNA或RNA。例如，包含在载体中的编码多肽的重组多核苷酸出于本发明的目的认为是分离的。分离的多核苷酸的别的例子包括在异源宿主细胞中维持的重组多核苷酸或溶液中的经过(部分或实质性)纯化的多核苷酸。分离的多核苷酸包括如下的多核苷酸分子，其包含在正常情况下包含该多核苷酸分子的细胞中，但是存在于染色体外或与其天然染色体位置不同的染色体位置。分离的RNA分子包括本发明的体内或体外RNA转录物，以及正和负链形式，和双链形式。依照本发明的分离的多核苷酸或核酸进一步包括合成生成的此类分子。另外，多核苷酸或核酸可以是或可以包括调节元件，诸如启动子，核糖体结合位点，或转录终止子。

具有与本发明的参照核苷酸序列至少例如95％“同一”的核苷酸序列的核酸或多核苷酸意指除了该多核苷酸序列可以包括多至该参照核苷酸序列的每100个核苷酸的5处点突变之外，所述多核苷酸的核苷酸序列与参照序列同一。换言之，为了获得具有与参照核苷酸序列至少95％同一的核苷酸序列的多核苷酸，参照序列中多至5％的核苷酸可以删除或用另一种核苷酸替代，或者可以将多至参照序列中总核苷酸的5％的多个核苷酸插入参照序列。参照序列的这些改变可以发生于参照核苷酸序列的5’或3’末端位置或那些末端位置之间的任何位置，或是个别地散布在参照序列中的残基之间或是以一个或多个连续的组散布在参照序列内。作为一个实际问题，使用已知的计算机程序，诸如上文关于多肽讨论的(例如ALIGN-2)，能常规地确定任何特定多核苷酸序列是否与本发明的核苷酸序列至少80％，85％，90％，95％，96％，97％，98％或99％同一。

术语“表达盒”指重组或合成生成的多核苷酸，其具有允许特定核酸在靶细胞中转录的一系列规定核酸元件。重组表达盒可以掺入质粒，染色体，线粒体DNA，质体DNA，病毒，或核酸片段。典型地，在其它序列以外，表达载体的重组表达盒部分包括要转录的核酸序列和启动子。在某些实施方案中，本发明的表达盒包含编码本发明的双特异性抗原结合分子或其片段的多核苷酸序列。

术语“载体”或“表达载体”与“表达构建物”同义，而且指用于在靶细胞中导入并指导与其可操作联合的特定基因表达的DNA分子。该术语包括作为自身复制型核酸结构的载体以及并入其导入的宿主细胞的基因组中的载体。本发明的表达载体包含表达盒。表达载体容许大量的稳定的mRNA的转录。一旦表达载体在靶细胞内部，那么由细胞转录和/或翻译机制生成由该基因编码的核糖核酸分子或蛋白质。在一个实施方案中，本发明的表达载体包含包含编码本发明的双特异性抗原结合分子或其片段的多核苷酸序列的表达盒。

术语“宿主细胞”，“宿主细胞系”，和“宿主细胞培养物”可互换使用，而且指在其中导入外源核酸的细胞，包括此类细胞的后代。宿主细胞包括“转化子”和“转化细胞”，其包括原代转化细胞和自其衍生的后代，不管传代的次数。后代在核酸内容方面与亲本细胞可以不是完全同一的，而是可以含有突变。本文中包括具有与在原始转化细胞中筛选或选择相同的功能或生物学活性的突变体后代。宿主细胞是可用于生成本发明的抗原结合分子的任何类型的细胞系统。宿主细胞包括培养的细胞，例如培养的哺乳动物细胞，诸如CHO细胞，BHK细胞，NS0细胞，SP2/0细胞，YO骨髓瘤细胞，P3X63小鼠骨髓瘤细胞，PER细胞，PER.C6细胞或杂交瘤细胞，酵母细胞，昆虫细胞，和植物细胞，在此仅列举少数，还有包含在转基因动物，转基因植物或培养的植物或动物组织内的细胞。

药剂的“有效量”指在接受其施用的细胞或组织中导致生理学变化所必需的量。

药剂，例如药物组合物的“治疗有效量”指在剂量和时间段方面所必需的，有效实现期望的治疗或预防结果的量。例如，治疗有效量的药剂消除，降低，延迟，最小化或预防疾病的不利影响。

“个体”或“受试者”为哺乳动物。哺乳动物包括但不限于驯化的动物(例如牛，绵羊，猫，犬，和马)，灵长类动物(例如人和非人灵长类动物诸如猴)，家兔，和啮齿类动物(例如小鼠和大鼠)。特别是，个体或受试者为人。

术语“药物组合物”指处于允许其中含有的活性组分的生物学活性是有效的这样的形式，而且不含对会接受该配制剂施用的受试者具有不可接受的毒性的另外的组分的制剂。

“药学可接受赋形剂”指药物组合物中除了活性组分以外的对受试者无毒的组分。药学可接受赋形剂包括但不限于缓冲剂，稳定剂，或防腐剂。

术语“包装插页”用于指通常包括在治疗性产品的商业包装中的用法说明书，其含有关于关注此类治疗性产品的使用的适应症，用法，剂量，施用，组合疗法，禁忌症和/或警告的信息。

如本文中使用的，“治疗/处理”(及其语法变化)指试图改变所治疗的个体的自然过程的临床干预，而且可以是为了预防或在临床病理过程期间任一实施的。治疗的期望效果包括但不限于预防疾病的发生或复发，症状的缓解，疾病的任何直接或间接病理后果的减轻，预防转移，降低疾病进展速率，疾病状态的改善或减轻，和缓解或改善的预后。在一些实施方案中，本发明的分子用于延迟疾病的发生或减缓疾病的进展。

如本文中使用的，术语“癌症”指增殖性疾病，诸如淋巴瘤，淋巴细胞性白血病，肺癌，非小细胞肺(NSCL)癌，支气管肺泡细胞肺癌，骨癌，胰腺癌，皮肤癌，头或颈癌，皮肤或眼内黑素瘤，子宫癌，卵巢癌，直肠癌，肛门区癌，胃癌，胃的癌，结肠癌，乳腺癌，子宫癌，输卵管癌，子宫内膜癌，宫颈癌，阴道癌，外阴癌，霍奇金氏病，食道癌，小肠癌，内分泌系统的癌症，甲状腺癌，甲状旁腺癌，肾上腺癌，软组织肉瘤，尿道癌，阴茎癌，前列腺癌，膀胱癌，肾或输尿管癌，肾细胞癌，肾盂癌，间皮瘤，肝细胞癌，胆道癌，中枢神经系统(CNS)赘生物，脊索瘤，脑干胶质瘤，多形性成胶质细胞瘤，星形细胞瘤，施旺细胞瘤，室管膜瘤，成神经管细胞瘤，脑膜瘤，鳞状细胞癌，垂体腺瘤和尤因氏肉瘤，包括任何上述癌症的顽固性型式，或一种或多种上述癌症的组合。

本发明的抗体

本发明提供新颖的抗人CD19抗体，其具有特别有利的特性，诸如可生产性，稳定性，结合亲和力，生物学活性，靶向效率和降低的毒性。

在一个方面，本发明提供具有高亲和力的抗人CD19抗体。

(a)包含SEQ ID NO:43的氨基酸序列的CDR-L1，

(b)包含SEQ ID NO:44的氨基酸序列的CDR-L2，

(c)包含SEQ ID NO:45的氨基酸序列的CDR-L3，

(d)包含SEQ ID NO:46的氨基酸序列的CDR-H1，

(e)包含SEQ ID NO:47的氨基酸序列的CDR-H2，和

(f)包含SEQ ID NO:48的氨基酸序列的CDR-H3。

在一个方面，该抗体包含(a)包含SEQ ID NO:43的氨基酸序列的CDR-L1，(b)包含SEQ ID NO:44的氨基酸序列的CDR-L2，(c)包含SEQ ID NO:45的氨基酸序列的CDR-L3，(d)包含SEQ ID NO:46的氨基酸序列的CDR-H1，(e)包含SEQ ID NO:47的氨基酸序列的CDR-H2，和(f)包含SEQ ID NO:48的氨基酸序列的CDR-H3，且以比包含包含SEQ ID NO:113的氨基酸序列的可变重链和包含SEQ ID NO:114的氨基酸序列的可变轻链的抗体要高的亲和力特异性结合人CD19。

在又一个方面，该抗体是单克隆抗体。在另一个方面，该抗体是人，人源化或嵌合抗体。在又一个方面，该抗体是人源化抗体。在另一个方面，该抗体是特异性结合人CD19的抗体片段。

本发明的又一个方面是提供特异性结合CD19的本文中公开的抗体。在又一个方面，本文中公开的抗体特异性结合人CD19。在又一个方面，本文中公开的抗体特异性结合食蟹猴CD19。在还有又一个方面，所公开的抗体具有交叉物种反应性。

在某些方面，本文中公开的抗CD19抗体具有≤1μM，≤100nM，≤10nM，≤1nM，≤0.1nM，≤0.01nM，或≤0.001nM，10^-8M至10^-13M或10^-9M至10^-13M的平衡解离常数(Kd)。在一个特定的方面，本文中公开的抗体以1nM或更小的平衡解离常数(Kd)结合CD19，如通过表面等离振子共振(SPR)测定的。

在本发明的还有又一个方面，提供的是具有≤10^-2/s，≤10^-3/s，≤10^-4/s，≤10^-5/s，≤10^-6/s，≤10^-7/s，或≤10^-8/s，10^-4/s至10^-9/s或10^-5/s至10^-11/s的解离常数(kd)的本文中公开的抗CD19抗体。在一个特定的实施方案中，本文中公开的抗体特异性结合CD19且进一步特征在于10^-4/s或更小的解离常数(kd)，如通过表面等离振子共振(SPR)测定的。

在另一个方面，提供的是一种特异性结合CD19的抗体，其中该抗体包含与包含包含SEQ ID NO:113的氨基酸序列的可变重链和包含SEQ ID NO:114的氨基酸序列的可变轻链的抗体相比要少的脱酰胺位点。在另一个方面，提供的是一种特异性结合CD19的抗体，其中该抗体包含与包含包含SEQ ID NO:113的氨基酸序列的可变重链和包含SEQ ID NO:114的氨基酸序列的可变轻链的抗体相比要少的天冬酰胺残基。

在还有另一个方面，提供的是一种包含变体可变轻链和/或变体可变重链的抗体，其相对于包含包含SEQ ID NO:113的氨基酸序列的可变重链和包含SEQ ID NO:114的氨基酸序列的可变轻链的抗体包含至少一处氨基酸替代，其中至少一个天冬酰胺残基被替代。在多个优选的方面，至少两个，至少三个或至少四个天冬酰胺残基被替代。

在另一个方面，提供的是一种特异性结合人CD19的抗体，其中该抗体选自由下述组成的组：

(i)一种抗体，其包含包含SEQ ID NO:25的氨基酸序列的CDR-L1，包含SEQ ID NO:26的氨基酸序列的CDR-L2，包含SEQ ID NO:27的氨基酸序列的CDR-L3，包含SEQ ID NO:28的氨基酸序列的CDR-H1，包含SEQ ID NO:29的氨基酸序列的CDR-H2，和包含SEQ ID NO:30的氨基酸序列的CDR-H3，

(ii)一种抗体，其包含包含SEQ ID NO:31的氨基酸序列的CDR-L1，包含SEQ IDNO:32的氨基酸序列的CDR-L2，包含SEQ ID NO:33的氨基酸序列的CDR-L3，包含SEQ ID NO:34的氨基酸序列的CDR-H1，包含SEQ ID NO:35的氨基酸序列的CDR-H2，和包含SEQ ID NO:36的氨基酸序列的CDR-H3，

(iii)一种抗体，其包含包含SEQ ID NO:37的氨基酸序列的CDR-L1，包含SEQ IDNO:38的氨基酸序列的CDR-L2，包含SEQ ID NO:39的氨基酸序列的CDR-L3，包含SEQ ID NO:40的氨基酸序列的CDR-H1，包含SEQ ID NO:41的氨基酸序列的CDR-H2，和包含SEQ ID NO:42的氨基酸序列的CDR-H3，

(iv)一种抗体，其包含包含SEQ ID NO:43的氨基酸序列的CDR-L1，包含SEQ IDNO:44的氨基酸序列的CDR-L2，包含SEQ ID NO:45的氨基酸序列的CDR-L3，包含SEQ ID NO:46的氨基酸序列的CDR-H1，包含SEQ ID NO:47的氨基酸序列的CDR-H2，和包含SEQ ID NO:48的氨基酸序列的CDR-H3，

(v)一种抗体，其包含包含SEQ ID NO:49的氨基酸序列的CDR-L1，包含SEQ ID NO:50的氨基酸序列的CDR-L2，包含SEQ ID NO:51的氨基酸序列的CDR-L3，包含SEQ ID NO:52的氨基酸序列的CDR-H1，包含SEQ ID NO:53的氨基酸序列的CDR-H2，和包含SEQ ID NO:54的氨基酸序列的CDR-H3，(vi)一种抗体，其包含包含SEQ ID NO:55的氨基酸序列的CDR-L1，包含SEQ ID NO:56的氨基酸序列的CDR-L2，包含SEQ ID NO:57的氨基酸序列的CDR-L3，包含SEQ ID NO:58的氨基酸序列的CDR-H1，包含SEQ ID NO:59的氨基酸序列的CDR-H2，和包含SEQ ID NO:60的氨基酸序列的CDR-H3，和

(vii)一种抗体，其包含包含SEQ ID NO:61的氨基酸序列的CDR-L1，包含SEQ IDNO:62的氨基酸序列的CDR-L2，包含SEQ ID NO:63的氨基酸序列的CDR-L3，包含SEQ ID NO:64的氨基酸序列的CDR-H1，包含SEQ ID NO:65的氨基酸序列的CDR-H2，和包含SEQ ID NO:66的氨基酸序列的CDR-H3。

在又一个方面，提供的是一种特异性结合CD19的抗体，其中该抗体包含

(i)包含SEQ ID NO:111的氨基酸序列的VH域和包含SEQ ID NO:112的氨基酸序列的VL域，

(ii)包含SEQ ID NO:101的氨基酸序列的VH域和包含SEQ ID NO:102的氨基酸序列的VL域，

(iii)包含SEQ ID NO:103的氨基酸序列的VH域和包含SEQ ID NO:104的氨基酸序列的VL域，

(iv)包含SEQ ID NO:99的氨基酸序列的VH域和包含SEQ ID NO:100的氨基酸序列的VL域，

(v)包含SEQ ID NO:105的氨基酸序列的VH域和包含SEQ ID NO:106的氨基酸序列的VL域，

(vi)包含SEQ ID NO:107的氨基酸序列的VH域和包含SEQ ID NO:108的氨基酸序列的VL域，或

(vii)包含SEQ ID NO:109的氨基酸序列的VH域和包含SEQ ID NO:110的氨基酸序列的VL域。

在另一个方面，本文中之前定义的抗体包含由能够稳定联合的第一和第二亚基构成的Fc域。

在又一个方面，该Fc域是IgG，特别是IgG1 Fc域或IgG4 Fc域。更加特别地，该Fc域是IgG1 Fc域。在一个特定的方面，该Fc域包含促进该Fc域的该第一和第二亚基联合的修饰。

降低Fc受体结合和/或效应器功能的Fc域修饰

本发明的抗原结合分子的Fc域由包含免疫球蛋白分子的重链域的一对多肽链组成。例如，免疫球蛋白G(IgG)分子的Fc域是二聚体，其每个亚基包含IgG重链恒定域CH2和CH3。Fc域的两个亚基能够彼此稳定联合。

Fc域赋予本发明的抗原结合分子以有利的药动学特性，包括有助于靶组织中良好积累的长血清半衰期和有利的组织-血液分布比。然而，与此同时，它可能导致不期望的本发明的抗体对表达Fc受体的细胞而非优选的携带抗原的细胞的靶向。因而，在特定的方面，本发明的抗原结合分子的Fc域展现与天然IgG1 Fc域相比降低的对Fc受体的结合亲和力和/或降低的效应器功能。在一个方面，该Fc并不实质性结合Fc受体和/或并不诱导效应器功能。在一个特定的方面，该Fc受体是Fcγ受体。在一个方面，该Fc受体是人Fc受体。在一个具体的方面，该Fc受体是激活性人Fcγ受体，更具体地是人FcγRIIIa，FcγRI或FcγRIIa，最具体地是人FcγRIIIa。在一个方面，该Fc域并不诱导效应器功能。降低的效应器功能可以包括但不限于下述一项或多项：降低的补体依赖性细胞毒性(CDC)，降低的抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)，降低的抗体依赖性细胞吞噬(ADCP)，降低的细胞因子分泌，降低的免疫复合物介导的抗原呈递细胞对抗原的摄取，降低的对NK细胞的结合，降低的对巨噬细胞的结合，降低的对单核细胞的结合，降低的对多形核细胞的结合，降低的诱导凋亡的直接信号传导，降低的树突细胞成熟，或降低的T细胞引发。

在某些方面，可以在本文中提供的抗体的Fc区中引入一处或多处氨基酸修饰，由此生成Fc区变体。Fc区变体可以包含在一个或多个氨基酸位置处包含氨基酸修饰(例如替代)的人Fc区序列(例如人IgG1，IgG2，IgG3或IgG4 Fc区)。

在一个特定的方面，本发明提供一种抗体，其中Fc域包含一处或多处降低对Fc受体，特别是Fcγ受体的结合的氨基酸替代。

在一个方面，本发明的抗体的Fc域包含一处或多处降低Fc域对Fc受体的结合亲和力和/或效应器功能的氨基酸突变。通常，在Fc域的两个亚基的每一个中存在相同的一处或多处氨基酸突变。特别是，Fc域包含在位置E233，L234，L235，N297，P331和P329(EU编号方式)处的氨基酸替代。特别是，Fc域包含在IgG重链的位置234和235(EU编号方式)和/或329(EU编号方式)处的氨基酸替代。更加特别地，提供的是一种依照本发明的抗体，其包含具有IgG重链中的氨基酸替代L234A，L235A和P329G(“P329GLALA”，EU编号方式)的Fc域。氨基酸替代L234A和L235A指所谓的LALA突变。氨基酸替代组合“P329G LALA”几乎完全消除人IgG1Fc域的Fcγ受体结合且描述于国际专利申请公开文本No.WO 2012/130831 A1，其还描述了制备此类突变体Fc域的方法及用于测定它的特性诸如Fc受体结合或效应器功能的方法。

具有降低的Fc受体结合和/或效应器功能的Fc域还包括那些具有一个或多个Fc域残基238，265，269，270，297，327和329的替代的(美国专利No.6,737,056)。此类Fc突变体包括具有氨基酸位置265，269，270，297和327中的两项或更多项处的替代的Fc突变体，包括所谓的“DANA”Fc突变体，其具有残基265和297变成丙氨酸的替代(美国专利No.7,332,581)。

在另一个方面，Fc域是IgG4 Fc域。IgG4抗体展现与IgG1抗体相比降低的对Fc受体的结合亲和力和降低的效应器功能。在一个更加具体的方面，Fc域是包含位置S228(Kabat编号方式)处的氨基酸替代，特别是氨基酸替代S228P的IgG4 Fc域。在一个更加具体的方面，Fc域是包含氨基酸替代L235E和S228P和P329G(EU编号方式)的IgG4 Fc域。此类IgG4 Fc域突变体和它们的Fcγ受体结合特性也描述于WO 2012/130831。

(a)包含SEQ ID NO:43的氨基酸序列的CDR-L1，

(b)包含SEQ ID NO:44的氨基酸序列的CDR-L2，

(c)包含SEQ ID NO:45的氨基酸序列的CDR-L3，

(d)包含SEQ ID NO:46的氨基酸序列的CDR-H1，

(e)包含SEQ ID NO:47的氨基酸序列的CDR-H2，和

(f)包含SEQ ID NO:48的氨基酸序列的CDR-H3，

且其中该抗体包含具有IgG重链中的氨基酸残基234A，235A和329G(EU编号方式)的Fc域。

可以使用本领域公知的遗传学或化学方法通过氨基酸删除，替代，插入或修饰来制备突变体Fc域。遗传学方法可以包括编码DNA序列的位点特异性诱变，PCR，基因合成，等等。可以通过例如测序来验证正确的核苷酸变化。

可以例如通过ELISA或使用标准仪器诸如BIAcore仪器(GE Healthcare)通过表面等离振子共振(SPR)容易地测定对Fc受体的结合，而且可以例如通过重组表达来获得Fc受体。或者，可以使用已知表达特定Fc受体的细胞系，诸如表达FcγIIIa受体的人NK细胞来评估Fc域或包含Fc域的细胞激活性抗体对Fc受体的结合亲和力。

可以通过本领域已知的方法来测量Fc域或包含Fc域的本发明的抗体的效应器功能。本文中描述了一种适合于测量ADCC的测定法。评估感兴趣分子的ADCC活性的体外测定法的其它例子描述于美国专利No.5,500,362；Hellstrom et al.,Proc Natl Acad SciUSA 83,7059-7063(1986)和Hellstrom et al.,Proc Natl Acad Sci USA 82,1499-1502(1985)；美国专利No.5,821,337；Bruggemann et al.,J Exp Med 166,1351-1361(1987)。或者，可以采用非放射性测定方法(参见例如ACTI^TM用于流式细胞术的非放射性细胞毒性测定法(CellTechnology,Inc.,Mountain View,CA)；和CytoTox

非放射性细胞毒性测定法(Promega,Madison,WI))。对于此类测定法有用的效应细胞包括外周血单个核细胞(PBMC)和天然杀伤(NK)细胞。或者/另外，可以在体内，例如在诸如Clynes et al.,ProcNatl Acad Sci USA 95,652-656(1998)中公开的动物模型中评估感兴趣分子的ADCC活性。

在一些方面，Fc域对补体成分，具体是C1q的结合降低。因而，在其中Fc域改造成具有降低的效应器功能的一些实施方案中，所述降低的效应器功能包括降低的CDC。可以进行C1q结合测定法来确定本发明的双特异性抗体是否能够结合C1q且因此具有CDC活性。参见例如WO 2006/029879和WO 2005/100402中的C1q和C3c结合ELISA。为了评估补体活化，可以进行CDC测定法(参见例如Gazzano-Santoro et al.,J Immunol Methods 202,163(1996)；Cragg et al.,Blood 101,1045-1052(2003)；和Cragg and Glennie,Blood 103,2738-2743(2004))。

多核苷酸

本发明进一步提供了编码本文中描述的抗体或其片段的分离的多核苷酸。

编码本发明的抗体的分离的多核苷酸可以作为编码整个抗原结合分子的一条多核苷酸或作为共表达的多条(例如两条或更多条)多核苷酸来表达。由共表达的多核苷酸编码的多肽可以经由例如二硫键或其它手段联合以形成功能性抗原结合分子。例如，免疫球蛋白的轻链部分可以由与免疫球蛋白的重链部分分开的多核苷酸编码。当共表达时，重链多肽会与轻链多肽联合以形成免疫球蛋白。

在一些方面，分离的多核苷酸编码本文中描述的依照本发明的整个抗体。在其它实施方案中，分离的多核苷酸编码本文中描述的依照本发明的抗体中包含的多肽。

在某些实施方案中，多核苷酸或核酸是DNA。在其它实施方案中，本发明的多核苷酸是RNA，例如以信使RNA(mRNA)的形式。本发明的RNA可以是单链的或双链的。

重组方法

可以例如通过固态肽合成(例如Merrifield固相合成)或重组生成来获得本发明的抗体。对于重组生成，分离一条或多条编码例如上文描述的抗体或其多肽片段的多核苷酸并插入一种或多种载体中用于进一步在宿主细胞中克隆和/或表达。可以使用常规程序容易地分离此类多核苷酸并测序。在本发明的一个方面，提供了一种包含本发明的一条或多条多核苷酸的载体，优选表达载体。可以使用本领域技术人员公知的方法来构建含有抗体(片段)的编码序列连同适宜的转录/翻译控制信号的表达载体。这些方法包括体外重组DNA技术，合成技术和体内重组/遗传重组。参见例如Maniatis et al.,MOLECULARCLONING:A LABORATORY MANUAL,Cold Spring Harbor Laboratory,N.Y.(1989)；和Ausubel et al.,CURRENT PROTOCOLS IN MOLECULAR BIOLOGY,Greene PublishingAssociates and Wiley Interscience,N.Y.(1989)中描述的技术。表达载体可以是部分质粒，病毒，或者可以是核酸片段。表达载体包括其中与启动子和/或其它转录或翻译控制元件可操作联合地克隆编码抗体或其多肽片段的多核苷酸(即编码区)的表达盒。如本文中使用的，“编码区”是核酸中由翻译成氨基酸的密码子组成的部分。虽然“终止密码子”(TAG，TGA或TAA)并不翻译成氨基酸，但是如果存在的话，它可以认为是编码区的一部分，但是任何侧翼序列，例如启动子，核糖体结合位点，转录终止子，内含子，5’和3’非翻译区，等等，不是编码区的一部分。在一个多核苷酸构建物中，例如在一个载体上，或者在分开的多核苷酸构建物中，例如在分开的(不同的)载体上，可以存在两个或更多个编码区。而且，任何载体可以含有一个编码区，或者可以包含两个或更多个编码区，例如，本发明的载体可以编码一种或多种多肽，其以翻译后或共翻译方式经由蛋白水解切割分开成最终的蛋白质。另外，本发明的载体，多核苷酸，或核酸可以编码异源编码区，或是与编码本发明的抗体或其多肽片段或其变体或衍生物的多核苷酸融合或是不融合。异源编码区包括但不限于专门化的元件或基序，诸如分泌信号肽或异源功能域。可操作联合是这样一种方式，当基因产物例如多肽的编码区与一种或多种调节序列联合时，基因产物的表达置于调节序列的影响或控制下。如果启动子功能的诱导导致编码期望基因产物的mRNA的转录，而且如果两个DNA片段之间的连接的性质并不干扰表达调节序列指导基因产物表达的能力或并不干扰DNA模板转录的能力，那么所述两个DNA片段(诸如多肽编码区和与其联合的启动子)是“可操作联合的”。如此，如果启动子能够实现编码多肽的核酸的转录，那么启动子区会是与该核酸可操作联合的。启动子可以是仅在预定细胞中指导实质性DNA转录的细胞特异性启动子。在启动子以外的其它转录控制元件，例如增强子，操纵基因，阻抑物，和转录终止信号，可以与多核苷酸可操作联合以指导细胞特异性转录。

本文中公开了合适的启动子和其它转录控制区。许多转录控制区是本领域技术人员已知的。这些包括但不限于在脊椎动物细胞中发挥功能的转录控制区，诸如但不限于来自巨细胞病毒(例如立即早期启动子，与内含子A联合)，猿病毒40(例如早期启动子)，和逆转录病毒(诸如例如劳斯肉瘤病毒)的启动子和增强子区段。其它转录控制区包括那些自脊椎动物基因诸如肌动蛋白，热休克蛋白，牛生长激素和兔α-珠蛋白衍生的，以及能够在真核细胞中控制基因表达的其它序列。另外的合适的转录控制区包括组织特异性启动子和增强子以及诱导型启动子(例如四环素诱导型启动子)。类似地，许多翻译控制元件是本领域普通技术人员已知的。这些包括但不限于核糖体结合位点，翻译起始和终止密码子，和自病毒系统衍生的元件(特别是内部核糖体进入位点或IRES，也称作CITE序列)。表达盒还可以包括其它特征诸如复制起点，和/或染色体整合元件诸如逆转录病毒长末端重复(LTR)，或腺伴随病毒(AAV)反向末端重复(ITR)。

本发明的多核苷酸和核酸编码区可以与另外的编码分泌或信号肽的编码区联合，所述分泌或信号肽指导由本发明的多核苷酸编码的多肽的分泌。例如，如果想要分泌抗体或其多肽片段，那么编码信号序列的DNA可以置于编码本发明的抗体或其多肽片段的核酸的上游。依照信号假说，由哺乳动物细胞分泌的蛋白质具有信号肽或分泌前导序列，所述信号肽或分泌前导序列在生长中的蛋白质链输出穿过粗面内质网时自成熟蛋白质切割下来。本领域普通技术人员知道，由脊椎动物细胞分泌的多肽一般具有融合至多肽的N端的信号肽，其自翻译的多肽切割下来以产生分泌或“成熟”形式的多肽。在某些实施方案中，使用天然信号肽，例如免疫球蛋白重链或轻链信号肽，或该序列保留指导与其可操作联合的多肽分泌的能力的功能性衍生物。或者，可以使用异源哺乳动物信号肽或其功能性衍生物。例如，野生型前导序列可以用人组织纤溶酶原激活物(TPA)或小鼠β-葡糖醛酸糖苷酶的前导序列替代。

编码可用于推动稍后纯化(例如组氨酸标签)或辅助标记融合蛋白的短蛋白质序列的DNA可以包括在编码本发明的抗体或其多肽片段的多核苷酸的内部或末端。

在本发明的又一个方面，提供了包含本发明的一种或多种多核苷酸的宿主细胞。在某些实施方案中，提供了包含本发明的一种或多种载体的宿主细胞。多核苷酸和载体可以分别单一地或组合地并入本文中关于多核苷酸和载体描述的任何特征。在一个方面，宿主细胞包含(例如已经转化或转染)包含编码本发明的抗体(的一部分)的多核苷酸的载体。如本文中使用的，术语“宿主细胞”指能改造成生成本发明的融合蛋白或其片段的任何种类的细胞系统。适合于复制抗原结合分子和支持抗原结合分子表达的宿主细胞是本领域公知的。可以用特定的表达载体恰当地转染或转导此类细胞，而且可以培养大量的含有载体的细胞用于接种大规模发酵罐以获得足够量的抗原结合分子用于临床应用。合适的宿主细胞包括原核微生物，诸如大肠杆菌，或各种真核细胞，诸如中国仓鼠卵巢细胞(CHO)，昆虫细胞，等等。例如，特别是在不需要糖基化时，可以在细菌中生成多肽。表达后，可以在可溶性级分中自细菌细胞糊分离多肽，并且可以进一步纯化。在原核生物以外，真核微生物诸如丝状真菌或酵母是对于编码多肽的载体而言合适的克隆或表达宿主，包括其糖基化途径已经“人源化”，导致生成具有部分或完全人糖基化样式的多肽的真菌和酵母菌株。参见Gerngross,Nat Biotech 22,1409-1414(2004)，和Li et al.,Nat Biotech 24,210-215(2006)。

适合于表达(糖基化)多肽的宿主细胞也是自多细胞生物体(无脊椎动物和脊椎动物)衍生的。无脊椎动物细胞的例子包括植物和昆虫细胞。已经鉴定了可以与昆虫细胞联合使用，特别是用于转染草地贪夜蛾(Spodoptera frugiperda)细胞的许多杆状病毒株。植物细胞培养物也可以用作宿主。参见例如美国专利No.5,959,177，6,040,498，6,420,548，7,125,978，和6,417,429(描述用于在转基因植物中生成抗体的PLANTIBODIES^TM技术)。脊椎动物细胞也可以用作宿主。例如，适应悬浮生长的哺乳动物细胞系可能是有用的。有用的哺乳动物宿主细胞系的其它例子是经SV40转化的猴肾CV1系(COS-7)；人胚肾细胞系(293或293T细胞，如例如Graham et al.,J Gen Virol 36,59(1977)中描述的)，幼仓鼠肾细胞(BHK)，小鼠Sertoli细胞(TM4细胞，如例如Mather,Biol Reprod 23,243-251(1980)中描述的)，猴肾细胞(CV1)，非洲绿猴肾细胞(VERO-76)，人宫颈癌细胞(HELA)，犬肾细胞(MDCK)，牛鼠肝细胞(BRL 3A)，人肺细胞(W138)，人肝细胞(Hep G2)，小鼠乳腺肿瘤细胞(MMT060562)，TRI细胞(如例如Mather et al.,Annals N.Y.Acad Sci 383,44-68(1982)中描述的)，MRC 5细胞，和FS4细胞。其它有用的哺乳动物宿主细胞系包括中国仓鼠卵巢(CHO)细胞，包括dhfr-CHO细胞(Urlaub et al.,Proc Natl Acad Sci USA 77,4216(1980))；和骨髓瘤细胞系诸如YO，NS0，P3X63和Sp2/0。关于适合于蛋白质生成的某些哺乳动物宿主细胞系的综述，参见例如Yazaki and Wu,Methods in Molecular Biology,Vol.248(B.K.C.Lo,ed.,HumanaPress,Totowa,NJ),pp.255-268(2003)。宿主细胞包括培养的细胞，例如培养的哺乳动物细胞，酵母细胞，昆虫细胞，细菌细胞和植物细胞，在此仅列举少数，还有转基因动物，转基因植物或培养的植物或动物组织内包含的细胞。在一个实施方案中，宿主细胞是真核细胞，优选哺乳动物细胞，诸如中国仓鼠卵巢(CHO)细胞，人胚肾(HEK)细胞或淋巴样细胞(例如Y0，NS0，Sp20细胞)。本领域知道在这些系统中表达外来基因的标准技术。可以改造表达包含免疫球蛋白重或轻链任一的多肽的细胞，使其还表达另一条免疫球蛋白链，使得所表达的产物是具有重和轻链二者的免疫球蛋白。

在一个方面，提供了一种生成本发明的抗体或其多肽片段的方法，其中该方法包括在适于本发明的抗体或其多肽片段表达的条件下培养本文中提供的包含编码本发明的抗体或其多肽片段的多核苷酸的宿主细胞，并自宿主细胞(或宿主细胞培养液)回收本发明的抗体或其多肽片段。

在某些实施方案中，形成抗原结合分子的一部分的能够特异性结合靶细胞抗原的模块(例如Fab片段)至少包含能够结合抗原的免疫球蛋白可变区。可变区能形成天然或非天然发生抗体及其片段的一部分且自其衍生。生成多克隆抗体和单克隆抗体的方法是本领域公知的(参见例如Harlow and Lane,“Antibodies,a laboratory manual”,Cold SpringHarbor Laboratory,1988)。非天然发生抗体可以使用固相肽合成来构建，可以重组生成(例如如美国专利No.4,186,567中描述的)，或者可以通过例如筛选包含可变重链和可变轻链的组合文库来获得(参见授予McCafferty的美国专利No.5,969,108)。

可以在本发明中使用任何动物物种的免疫球蛋白。在本发明中有用的非限制性免疫球蛋白可以是鼠，灵长动物，或人起源的。如果融合蛋白意图用于人类使用，那么可以使用嵌合形式的免疫球蛋白，其中免疫球蛋白的恒定区来自人。还可以依照本领域公知的方法制备人源化或完全人形式的免疫球蛋白(参见例如授予Winter的美国专利No.5,565,332)。人源化可以通过各种方法来实现，包括但不限于(a)将非人(例如供体抗体)CDR嫁接到人(例如受体抗体)框架和恒定区上，有或没有保留至关紧要的框架残基(例如那些对于保留良好的抗原结合亲和力或抗体功能重要的)，(b)仅将非人特异性决定区(SDR或a-CDR；对于抗体-抗原相互作用至关紧要的残基)嫁接到人框架和恒定区上，或(c)移植整个非人可变域，但是通过替换表面残基用人样区段“遮盖”它们。人源化抗体及其生成方法综述于例如Almagro and Fransson,Front Biosci 13,1619-1633(2008)，而且进一步描述于例如Riechmann et al.,Nature 332,323-329(1988)；Queen et al.,Proc Natl Acad Sci USA86,10029-10033(1989)；美国专利No.5,821,337，7,527,791，6,982,321，和7,087,409；Jones et al.,Nature 321,522-525(1986)；Morrison et al.,Proc Natl Acad Sci 81,6851-6855(1984)；Morrison and Oi,Adv Immunol 44,65-92(1988)；Verhoeyen et al.,Science 239,1534-1536(1988)；Padlan,Molec Immun 31(3),169-217(1994)；Kashmiriet al.,Methods 36,25-34(2005)(描述SDR(a-CDR)嫁接)；Padlan,Mol Immunol 28,489-498(1991)(描述“表面重建”)；Dall’Acqua et al.,Methods 36,43-60(2005)(描述“FR改组”)；和Osbourn et al.,Methods 36,61-68(2005)和Klimka et al.,Br JCancer 83,252-260(2000)(描述用于FR改组的“导向选择”办法)。依照本发明的特定免疫球蛋白是人免疫球蛋白。可以使用本领域已知的各种技术来生成人抗体和人可变区。人抗体一般描述于van Dijk and van de Winkel,Curr Opin Pharmacol 5,368-74(2001)和Lonberg,CurrOpin Immunol 20,450-459(2008)中。人可变区能形成通过杂交瘤方法生成的人单克隆抗体的一部分且可以自其衍生(参见例如Monoclonal Antibody Production Techniquesand Applications,pp.51-63(Marcel Dekker,Inc.,New York,1987))。人抗体和人可变区还可以通过对转基因动物施用免疫原来制备，所述转基因动物已经修饰成响应抗原攻击而生成完整人抗体或具有人可变区的完整抗体(参见例如Lonberg,Nat Biotech 23,1117-1125(2005))。也可以通过分离选自人衍生的噬菌体展示文库的Fv克隆可变区序列来生成人抗体和人可变区(参见例如Hoogenboom et al.,in Methods in Molecular Biology178,1-37(O’Brien et al.,ed.,Human Press,Totowa,NJ,2001)；和McCafferty et al.,Nature 348,552-554；Clackson et al.,Nature 352,624-628(1991))。噬菌体通常展示抗体片段，或是作为单链Fv(scFv)片段或是作为Fab片段。

在某些方面，依照例如PCT公开文本WO 2012/020006(参见涉及亲和力成熟的实施例)或美国专利申请公开文本No.2004/0132066中公开的方法，改造抗体以具有增强的结合亲和力。本发明的抗原结合分子结合特定抗原决定簇的能力可以经由酶联免疫吸附测定法(ELISA)或本领域技术人员熟悉的其它技术来测量，例如表面等离振子共振技术(Liljeblad et al.,Glyco J 17,323-329(2000))和传统的结合测定法(Heeley,EndocrRes 28,217-229(2002))。可以使用竞争测定法来鉴定与参照抗体竞争对特定抗原的结合的抗原结合分子。在某些实施方案中，此类竞争性抗原结合分子结合与参照抗原结合分子结合的表位相同的表位(例如线性或构象表位)。用于定位抗原结合分子结合的表位的详细例示性方法提供于Morris(1996)“Epitope Mapping Protocols”,in Methods inMolecular Biology vol.66(Humana Press,Totowa,NJ)。在一种例示性竞争测定法中，将固定化抗原在包含(结合抗原的)第一经标记抗原结合分子和(正在测试它与第一抗原结合分子竞争对抗原的结合的能力的)第二未标记抗原结合分子的溶液中温育。第二抗原结合分子可以存在于杂交瘤上清液中。作为对照，将固定化抗原在包含第一经标记抗原结合分子而非第二未标记抗原结合分子的溶液中温育。在允许第一抗体结合抗原的条件下温育后，去除过量的未结合的抗体，并测量与固定化抗原联合的标记物的量。如果测试样品中与固定化抗原联合的标记物的量相对于对照样品实质性降低，那么这指示第二抗原结合分子与第一抗原结合分子竞争对抗原的结合。参见Harlow and Lane(1988)Antibodies:ALaboratory Manual ch.14(Cold Spring Harbor Laboratory,Cold Spring Harbor,NY)。

可以通过本领域已知的技术诸如高效液体层析术，离子交换层析术，凝胶电泳，亲和层析术，尺寸排阻层析术，等等来纯化如本文中所述制备的本发明的抗体。用于纯化特定蛋白质的实际条件会部分取决于诸如净电荷，疏水性，亲水性，等因素，而且对于本领域技术人员会是显而易见的。对于亲和层析术纯化，可以使用结合抗原结合分子的抗体，配体，受体或抗原。例如，对于本发明的融合蛋白的亲和层析术纯化，可以使用具有蛋白A或蛋白G的基质。可以本质上如实施例中所述顺序使用蛋白A或G亲和层析术和尺寸排阻层析术来分离抗原结合分子。抗原结合分子或其片段的纯度可以通过各种公知的分析方法中的任一种来测定，包括凝胶电泳，高压液体层析术，等等。例如，正如通过还原性和非还原性SDS-PAGE证明的，如实施例中所述表达的抗原结合分子显示是完整的且正确组装的。

测定法

可以通过本领域已知的各种测定法来鉴定，筛选，或通过它们的物理/化学特性和/或生物学活性来表征本文中提供的抗原结合分子。

1.亲和力测定法

还可以通过表面等离振子共振(SPR)，使用标准仪器诸如BIAcore仪器(GEHealthcare)和可以通过诸如重组表达获得的受体或靶蛋白，测定抗原结合分子对靶细胞抗原的亲和力。在实施例4中描述了用于测量结合亲和力的一个具体的说明性和例示性的实施方案。依照一个方面，于25℃使用

T100机器(GE Healthcare)通过表面等离振子共振测量K_D。

2.结合测定法和其它测定法

在一个方面，对本文中报告的抗体测试它的抗原结合活性，例如通过已知方法，诸如ELISA或Western印迹。

3.活性测定法

在一个方面，提供了用于鉴定具有生物学活性的抗人CD19抗体的测定法。生物学活性可以包括例如抑制B细胞增殖或杀伤B细胞。还提供了在体内和/或在体外具有此类生物学活性的抗体。

在某些实施方案中，对本文中报告的抗体测试此类生物学活性。

药物组合物，配制剂和施用路径

在又一个方面，本发明提供包含本文中提供的任何抗体的药物组合物，例如用于任何下述治疗方法。在一个实施方案中，药物组合物包含本文中提供的抗体和至少一种药学可接受赋形剂。在另一个实施方案中，药物组合物包含本文中提供的抗体和至少一种另外的治疗剂，例如下文描述的。

本发明的药物组合物包含溶解或分散在药学可接受赋形剂中的治疗有效量的一种或多种抗体。短语“药用或药学可接受”指在所采用的剂量和浓度一般对接受者无毒的分子实体和组合物，即在恰当地施用于动物，诸如例如人时不产生不利的，过敏的或其它不良的反应。含有至少一种抗体和任选地另外的活性组分的药物组合物的制备会是本领域技术人员根据本公开内容知道的，如由Remington’s Pharmaceutical Sciences,18th Ed.MackPrinting Company,1990例示的，通过援引收入本文。特别地，组合物是冻干配制剂或水溶液。如本文中使用的，“药学可接受赋形剂”包括任何和所有溶剂，缓冲剂，分散介质，包衣，表面活性剂，抗氧化剂，防腐剂(例如抗细菌剂，抗真菌剂)，等渗剂，盐，稳定剂及其组合，正如本领域普通技术人员会知道的。

胃肠外组合物包括那些设计用于通过注射，例如皮下，皮内，病灶内，静脉内，动脉内，肌肉内，鞘内或腹膜内注射来施用的。对于注射，可以在水溶液中，优选在生理学相容缓冲液诸如Hank氏溶液，Ringer氏溶液，或生理盐水缓冲液中配制本发明的抗原结合分子。溶液可以含有配制用剂，诸如悬浮，稳定和/或分散剂。或者，融合蛋白可以处于粉末形式，用于在使用前用合适的媒介(例如无菌无热原水)构建。在需要时，通过在具有多种下文列举的其它组分的适当溶剂中并入所需量的中本发明的融合蛋白来制备无菌可注射溶液。可以例如通过过滤穿过无菌过滤膜而容易地实现无菌性。一般地，通过将各种经过灭菌的活性组分并入无菌媒介来制备分散体，所述无菌媒介含有基础分散介质和/或其它组分。在用于制备无菌可注射溶液，悬浮液或乳状液的无菌粉末的情况中，优选的制备方法是真空干燥或冷冻干燥技术，它们自先前无菌过滤的液体介质产生活性组分加上任何另外的期望组分的粉末。在必要时应该适当缓冲液体介质，而且在注射之前首先用足够的盐水或葡萄糖使得液体稀释剂等张。组合物在制造和储存条件下必须是稳定的，而且针对微生物诸如细菌和真菌的污染作用防腐。会领会的是，内毒素污染应该最低限度地保持于安全水平，例如小于0.5ng/mg蛋白质。合适的药学可接受赋形剂包括但不限于：缓冲剂，诸如磷酸盐，柠檬酸盐，和其它有机酸；抗氧化剂，包括抗坏血酸和甲硫氨酸；防腐剂(诸如氯化十八烷基二甲基苄基铵；氯化六甲双铵；苯扎氯铵；苄索氯铵；酚，丁醇或苄醇；烷基对羟基苯甲酸酯，诸如对羟基苯甲酸甲酯或丙酯；邻苯二酚；间苯二酚；环己醇；3-戊醇；和间甲酚)；低分子量(小于约10个残基)多肽；蛋白质，诸如血清清蛋白，明胶，或免疫球蛋白；亲水性聚合物，诸如聚乙烯吡咯烷酮；氨基酸，诸如甘氨酸，谷氨酰胺，天冬酰胺，组氨酸，精氨酸，或赖氨酸；单糖，二糖，和其它碳水化合物，包括葡萄糖，甘露糖，或糊精；螯合剂，诸如EDTA；糖，诸如蔗糖，甘露醇，海藻糖或山梨糖醇；成盐反荷离子，诸如钠；金属复合物(例如Zn-蛋白质复合物)；和/或非离子型表面活性剂，诸如聚乙二醇(PEG)。水性注射悬浮液可以含有提高悬浮液的粘度的化合物，诸如羧甲基纤维素钠，山梨糖醇，葡聚糖，等等。任选地，悬浮液还可以含有合适的稳定剂或提高化合物的溶解性的药剂以容许制备高度浓缩的溶液。另外，在适宜时活性化合物的悬浮液可以制备为油性注射悬浮液。合适的亲脂性溶剂或媒介包括脂肪油诸如芝麻油，或合成脂肪酸酯诸如油酸乙酯或甘油三酯，或脂质体。

可以将活性组分包埋在例如通过凝聚技术或通过界面聚合制备的微胶囊中，例如分别是羟甲基纤维素或明胶微胶囊和聚(甲基丙烯酸甲酯)微胶囊，在胶体药物投递系统中(例如脂质体，清蛋白微球体，微乳液，纳米颗粒和纳米胶囊)或在粗滴乳状液中。此类技术公开于Remington’sPharmaceutical Sciences(18th Ed.Mack Printing Company,1990)。可以制备持续释放制剂。持续释放制剂的合适例子包括含有多肽的固体疏水性聚合物的半透性基质，所述基质处于成型物品的形式，例如薄膜，或微胶囊。在特定的实施方案中，可以通过在组合物中使用延迟吸收的药剂，诸如例如单硬脂酸铝，明胶或其组合带来延长的可注射组合物的吸收。

本文中的例示性药学可接受赋形剂进一步包括间质药物分散剂诸如可溶性中性活性透明质酸酶糖蛋白(sHASEGP)，例如人可溶性PH-20透明质酸酶糖蛋白，诸如rHuPH20(

Baxter International,Inc.)。美国专利公开文本No.2005/0260186和2006/0104968中描述了某些例示性sHASEGP和使用方法，包括rHuPH20。在一个方面，将sHASEGP与一种或多种另外的糖胺聚糖酶诸如软骨素酶组合。

例示性的冻干抗体配制剂描述于美国专利No.6,267,958。水性抗体配制剂包括那些描述于美国专利No.6,171,586和WO2006/044908的，后一种配制剂包括组氨酸-乙酸盐缓冲液。

在先前描述的组合物以外，融合蛋白还可以配制成贮库制剂。此类长效配制剂可以通过植入(例如皮下或肌肉内)或通过肌肉内注射来施用。如此，例如，融合蛋白可以与合适的聚合或疏水材料(例如作为可接受的油中的乳状液)或离子交换树脂一起，或作为微溶衍生物，例如作为微溶盐配制。

包含本发明的融合蛋白的药物组合物可以借助常规混合，溶解，乳化，包封，封装或冻干工艺来制造。可以使用便于将蛋白质加工成药学上可以使用的制剂的一种或多种生理学可接受载剂，稀释剂，赋形剂或助剂以常规方式配制药物组合物。适当的配制剂取决于所选择的施用路径。

本发明的抗体可以以游离酸或碱，中性或盐形式配制成组合物。药学可接受盐是实质性保留游离酸或碱的生物学活性的盐。这些盐包括酸加成盐，例如那些与蛋白质组合物的游离氨基形成的或与诸如例如盐酸或磷酸等无机酸，或诸如乙酸，草酸，酒石酸或扁桃酸等有机酸形成的。与游离羧基形成的盐也可以是自无机碱，诸如例如氢氧化钠，钾，铵，钙或铁；或诸如异丙胺，三甲胺，组氨酸或普鲁卡因等有机碱衍生的。药用盐在水性和其它质子溶剂中趋于与对应的游离碱形式相比更加可溶。

在所治疗的特定适应症需要时，本文中的组合物还可以含有多于一种的活性组分，优选那些具有互补活性，彼此没有不利影响的。此类活性组分以对预定目的有效的量适当地组合存在。

要体内施用的配制剂一般是无菌的。可以例如通过过滤穿过无菌过滤膜而容易地实现无菌性。

治疗方法和组合物

本文中提供的任何抗人CD19抗体均可以在治疗方法中使用，或是单独地或是组合地，或是作为单特异性抗体或是作为多特异性抗体。

CD19在除了干细胞和浆细胞以外的大多数B细胞上表达(泛B细胞标志物)，而且在除了多发性骨髓瘤以外的大多数人B细胞恶性，诸如淋巴瘤和白血病上频繁表达(肿瘤相关抗原)，例如在非霍奇金淋巴瘤和急性成淋巴细胞性白血病中。

识别不同细胞群体上的两种细胞表面蛋白的双特异性抗体持有将细胞毒性免疫细胞重定向来破坏致病性靶细胞的希望。

在一个方面，提供了一种抗人CD19抗体，其用作药物。在又一些方面，提供了一种抗人CD19抗体，其用于治疗B细胞癌症。在某些实施方案中，提供了一种抗人CD19抗体，其用于治疗方法。在某些实施方案中，本文中提供了一种抗人CD19抗体，其用于治疗具有B细胞癌症的个体的方法，该方法包括对该个体施用有效量的该抗人CD19抗体。在一个此类实施方案中，该方法进一步包括对该个体施用有效量的至少一种另外的治疗剂。在又一些实施方案中，本文中提供了一种抗人CD19抗体，其用于消减B细胞。在某些实施方案中，本文中提供了一种抗人CD19抗体，其用于在个体中消减B细胞的方法，该方法包括对该个体施用有效量的该抗人CD19抗体以消减B细胞。依照任何上述实施方案的“个体”优选是人。在一个实施方案中，该B细胞癌症是B细胞淋巴瘤或B细胞白血病。在一个实施方案中，该B细胞癌症是非霍奇金淋巴瘤或急性成淋巴细胞性白血病。

在又一些方面，提供了一种抗人CD19抗体，其用于癌症免疫疗法。在某些实施方案中，提供了一种抗人CD19抗体，其用于癌症免疫疗法的方法。依照任何上述实施方案的“个体”优选是人。

在又一个方面，本文中提供了抗人CD19抗体在制造或制备药物中的用途。在一个实施方案中，该药物用于治疗B细胞癌症。在又一个实施方案中，该药物用于治疗B细胞癌症的方法，该方法包括对具有B细胞癌症的个体施用有效量的该药物。在一个此类实施方案中，该方法进一步包括对该个体施用有效量的至少一种另外的治疗剂，例如下文描述的。在又一个实施方案中，该药物用于消减B细胞。在又一个实施方案中，该药物用于在个体中消减B细胞的方法，该方法包括对该个体施用有效量的该药物以消减B细胞。依照任何上述实施方案的“个体”可以是人。在一个实施方案中，该B细胞癌症是B细胞淋巴瘤或B细胞白血病。在一个实施方案中，该B细胞癌症是非霍奇金淋巴瘤或急性成淋巴细胞性白血病。

在又一个方面，本文中提供了一种用于治疗B细胞癌症的方法。在一个实施方案中，该方法包括对具有此类B细胞癌症的个体施用有效量的抗人CD19抗体。在一个此类实施方案中，该方法进一步包括对该个体施用有效量的至少一种另外的治疗剂，如下文描述的。依照任何上述实施方案的“个体”可以是人。在一个实施方案中，该B细胞癌症是B细胞淋巴瘤或B细胞白血病。在一个实施方案中，该B细胞癌症是非霍奇金淋巴瘤或急性成淋巴细胞性白血病。

在又一个方面，本文中提供了一种用于在个体中消减B细胞的方法。在一个实施方案中，该方法包括对该个体施用有效量的抗人CD19抗体以消减B细胞。在一个实施方案中，“个体”是人。在一个实施方案中，该B细胞癌症是B细胞淋巴瘤或B细胞白血病。在一个实施方案中，该B细胞癌症是非霍奇金淋巴瘤或急性成淋巴细胞性白血病。

在又一个方面，本文中提供了药物配制剂，其包含本文中报告的任何抗人CD19抗体，例如用于任何上述治疗方法。在一个实施方案中，药物配制剂包含本文中报告的任何抗人CD19抗体和药学可接受载剂。在另一个实施方案中，药物配制剂包含本文中报告的任何抗人CD19抗体和至少一种另外的治疗剂。

本文中报告的抗体可以在疗法中单独或与其它药剂组合使用。例如，本文中报告的抗体可以与至少一种另外的治疗剂共施用。

上文记录的此类组合疗法涵盖组合施用(其中两种或更多种治疗剂包括在同一配制剂或分开的配制剂中)，和分开施用，在该情况中，本文中报告的抗体的施用可以在一种或多种另外的治疗剂的施用之前，同时，和/或之后发生。在一个实施方案中，抗人CD19抗体的施用和另外的治疗剂的施用彼此在约1个月内，或在约1，2或3周内，或在约1，2，3，4，5，或6天内发生。

可以通过任何合适的手段(包括胃肠外，肺内，和鼻内，及若期望用于局部治疗的话，损伤内施用)来施用本文中报告的抗体(和任何另外的治疗剂)。胃肠外输注包括肌肉内，静脉内，动脉内，腹膜内，或皮下施用。部分取决于施用是短暂的还是长期的，剂量给药可以通过任何合适的路径(例如通过注射，诸如静脉内或皮下注射)来进行。本文中涵盖各种剂量给药日程表，包括但不限于单次施用或在多个时间点上的多次施用，推注施用，和脉冲输注。

本文中报告的抗体会以符合优秀医学实践的方式配制，定剂量，和施用。在此背景中考虑的因素包括所治疗的特定病症，所治疗的特定哺乳动物，患者个体的临床状况，病症的起因，药剂投递部位，施用方法，施用日程表，和医学从业人员知道的其它因素。抗体无需但任选与一种或多种目前用于预防或治疗所讨论病症的药剂一起配制。此类其它药剂的有效量取决于配制剂中存在的抗体的量，病症或治疗的类型，和上文讨论的其它因素。这些一般以与本文所述相同的剂量和施用路径使用，或以本文所述剂量的约1-99％使用，或以凭经验/临床上确定为适宜的任何剂量和任何路径使用。

对于预防或治疗疾病，本文中报告的抗体(当单独或与一种或多种其它另外的治疗剂组合使用时)的适宜剂量会取决于要治疗的疾病的类型，抗体的类型，疾病的严重性和过程，施用抗体是为了预防还是治疗目的，先前的疗法，患者的临床史和对抗体的响应，和主治医师的斟酌。抗体以一次或一系列治疗恰当地施用于患者。取决于疾病的类型和严重性，约1μg/kg至15mg/kg(例如0.5mg/kg-10mg/kg)的抗体可以是对患者施用的初始候选剂量，例如无论是通过一次或多次分开的施用，还是通过连续输注。取决于上文提到的因素，一个典型的日剂量的范围可以是约1μg/kg至100mg/kg或更多。对于数天或更长时间的重复施用，取决于状况，治疗一般会持续直至发生期望的疾病症状遏制。抗体的一个例示性剂量会在约0.05mg/kg至约10mg/kg的范围中。如此，可以对患者施用约0.5mg/kg，2.0mg/kg，4.0mg/kg或10mg/kg(或其任意组合)的一个或多个剂量。此类剂量可以间歇施用，例如每周或每三周(例如，使得患者接受约2个至约20个，或例如约6个剂量的抗体)。可以施用较高的初始加载剂量，接着是一个或多个较低的剂量。然而，其它剂量方案可能是有用的。这种疗法的进展容易通过常规技术和测定法来监测。

本文中进一步提供了用于治疗炎性疾病，自身免疫疾病，类风湿性关节炎，狼疮，银屑病，和骨疾病的方法，其包括对诊断为具有此类疾病(且因此需要此类疗法)的患者施用本文中报告的特异性结合人CD19的抗体。该抗体可以单独，在药物组合物中，或与其它药物组合施用，用于治疗炎性疾病，自身免疫疾病，类风湿性关节炎，狼疮，银屑病，或骨疾病。该抗体以药学有效量施用。

本文中进一步提供了本文中报告的抗体用于治疗炎性疾病，自身免疫疾病，类风湿性关节炎，狼疮，银屑病或骨疾病，及用于制造包含本文中报告的抗体的药物组合物的用途。另外，本文中提供了一种用于制造包含本文中报告的抗体的药物组合物的方法。

本文中进一步提供了本文中报告的抗体，其用于治疗炎性疾病，自身免疫疾病，类风湿性关节炎，狼疮，银屑病，或骨疾病。

本文中进一步提供了本文中报告的抗体用于制造用于治疗炎性疾病，自身免疫疾病，类风湿性关节炎，狼疮，银屑病，或骨疾病的药物组合物的用途。该抗体以药学有效量使用。

理解的是，任何上述配制剂或治疗方法可以使用本文中报告的免疫缀合物代替或补充抗人CD19抗体来进行。

其它药剂和治疗

本发明的抗原结合分子可以在疗法中与一种或多种其它药剂组合施用。例如，本发明的抗原结合分子可以与至少一种另外的治疗剂共施用。术语“治疗剂”涵盖可以施用，用于在需要此类治疗的个体中治疗症状或疾病的任何药剂。此类另外的治疗剂可以包含适合于所治疗的特定适应症的任何活性组分，优选那些具有互补活性，彼此没有不利影响的。在某些实施方案中，另外的治疗剂是另一种抗癌剂。

此类其它药剂以对于预定目的有效的量适当地组合存在。此类其它药剂的有效量取决于所使用的抗原结合分子的量，病症或治疗的类型，和上文讨论的其它因素。抗原结合分子一般以与本文所述相同的剂量和施用路径使用，或以本文所述剂量的约1-99％使用，或以凭经验/临床上确定为适宜的任何剂量和任何路径使用。

上文记录的此类组合疗法涵盖组合施用(其中两种或更多种治疗剂包括在同一组合物或分开的组合物中)，和分开施用，在该情况中，本发明的抗原结合分子的施用可以在另外的治疗剂和/或佐剂的施用之前，同时，和/或之后发生。

制品

在本发明的另一个方面，提供了一种制品，其含有对于治疗，预防和/或诊断上文描述的病症有用的材料。制品包含容器和容器上或与容器联合的标签或包装插页。合适的容器包括例如瓶，管形瓶，注射器，IV溶液袋，等。容器可以自多种材料诸如玻璃或塑料形成。容器装有单独或与另一种组合物组合有效治疗，预防和/或诊断状况的组合物，而且可以具有无菌存取口(例如，容器可以是具有皮下注射针可刺穿的塞子的管形瓶或静脉内溶液袋)。组合物中的至少一种活性剂是本发明的抗原结合分子。

标签或包装插页指示使用组合物来治疗所选择的状况。此外，制品可以包含(a)其中装有组合物的第一容器，其中该组合物包含本发明的抗原结合分子；和(b)其中装有组合物的第二容器，其中该组合物包含别的细胞毒性或其它方面治疗性的药剂。本发明的这个实施方案中的制品可以进一步包含包装插页，其指示可以使用组合物来治疗特定状况。

或者/另外，制品可以进一步包含第二(或第三)容器，其包含药学可接受缓冲液，诸如抑菌性注射用水(BWFI)，磷酸盐缓冲盐水，Ringer氏溶液和右旋糖溶液。它可以进一步包括从商业和用户立场看想要的其它材料，包括其它缓冲剂，稀释剂，滤器，针，和注射器。

表C(序列)：

关于人免疫球蛋白轻和重链的核苷酸序列的一般信息见Kabat,E.A.,et al.,Sequences of Proteins of Immunological Interest,5th ed.,Public HealthService,National Institutes of Health,Bethesda,MD(1991)。依照上文定义的依照Kabat的编号系统(Kabat,E.A.,et al.,Sequences of Proteins of ImmunologicalInterest,5th ed.,Public Health Service,National Institutes of Health,Bethesda,MD(1991))对抗体链的氨基酸编号及提述。

实施例

下面是本发明的方法和组合物的实施例。理解的是，鉴于上文提供的一般描述，可以实践各种其它实施方案。

重组DNA技术

使用标准方法操作DNA，如Sambrook et al.,in Molecular cloning:Alaboratory manual；Cold Spring Harbor Laboratory Press,Cold Spring Harbor,NewYork,1989中所述。依照制造商的用法说明书使用分子生物学试剂。关于人免疫球蛋白轻和重链的核苷酸序列的一般信息见Kabat,E.A.et al.,(1991)Sequences of Proteins ofImmunological Interest,Fifth Ed.,NIH Publication No91-3242。

DNA测序

通过双链测序测定DNA序列。

基因合成

期望的基因区段使用适宜的模板通过PCR来生成或由Geneart AG(Regensburg,Germany)自合成的寡核苷酸和PCR产物通过自动化基因合成来合成。在没有确切的基因序列可用的情况中，基于来自最接近的同源物的序列设计寡核苷酸引物，并通过RT-PCR自源自适宜组织的RNA分离基因。将侧翼为单个限制性内切核酸酶切割位点的基因区段克隆入标准克隆/测序载体。自经过转化的细菌纯化质粒DNA，并通过UV光谱术测定浓度。通过DNA测序确认亚克隆的基因片段的DNA序列。设计基因区段，其具有合适的限制性位点以容许亚克隆入相应的表达载体。所有构建体均设计成具有编码前导肽的5’端DNA序列，所述前导肽在真核细胞中将蛋白质靶向分泌。

细胞培养技术

使用Current Protocols in Cell Biology(2000),Bonifacino,J.S.,Dasso,M.,Harford,J.B.,Lippincott-Schwartz,J.and Yamada,K.M.(eds.),John Wiley&Sons,Inc.中描述的标准细胞培养技术。

蛋白质纯化

参考标准方案自经过过滤的细胞培养物上清液纯化蛋白质。简言之，将抗体应用于蛋白A Sepharose柱(GE Healthcare)并用PBS清洗。于pH 2.8实现抗体的洗脱，接着立即中和样品。通过尺寸排阻层析术(Superdex 200,GE Healthcare)在PBS中或在20mM组氨酸，150mM NaCl(pH 6.0)中将聚集的蛋白质与单体抗体分开。合并单体抗体级分，使用例如MILLIPORE Amicon Ultra(30MWCO)离心浓缩器浓缩(在需要时)，于-20℃或-80℃冷冻并储存。提供部分样品用于随后例如通过SDS-PAGE，尺寸排阻层析术(SEC)或质谱术进行蛋白质分析和分析性表征。

SDS-PAGE

依照制造商的用法说明书使用

预制凝胶系统(Invitrogen)。特别地，使用10％或4-12％

Bis-TRIS预制凝胶(pH 6.4)和

MES(还原凝胶，具有

抗氧化剂运行缓冲液添加剂)或MOPS(非还原凝胶)运行缓冲液。

分析性尺寸排阻层析术

通过HPLC层析术实施尺寸排阻层析术(SEC)，用于测定抗体的聚集和寡聚状态。简言之，将经过蛋白A纯化的抗体应用于Agilent HPLC 1100系统上的300mM NaCl，50mMKH₂PO₄/K₂HPO₄(pH 7.5)中的Tosoh TSKgel G3000SW柱或Dionex HPLC系统上的2x PBS中的Superdex 200柱(GE Healthcare)。通过UV吸光度和峰面积积分对洗脱的蛋白质定量。BioRad凝胶过滤标准品151-1901充当标准品。

使用表面等离振子共振(SPR)(BIACORE)测定抗体对相应抗原的结合和结合亲和力

使用BIACORE仪器(GE Healthcare Biosciences AB,Uppsala,Sweden)通过表面等离振子共振调查所生成的抗体对相应抗原的结合。简言之，对于亲和力测量，经由胺偶联在CM5芯片上固定化山羊抗人IgG，JIR109-005-098抗体以呈现针对相应抗原的抗体。在HBS缓冲液(HBS-P(10mM HEPES，150mM NaCl，0.005％Tween 20，pH 7.4)中于25℃(或37℃)测量结合。在溶液中以多种浓度添加抗原(R&D Systems或内部纯化)。通过80秒钟至3分钟的抗原注射来测量结合；通过将芯片表面用HBS缓冲液清洗3-10分钟来测量解离，并使用1:1Langmuir结合模型来估算K_D值。自样品曲线减去阴性对照数据(例如缓冲液曲线)以修正系统内在基线漂移及降低噪声信号。使用相应的Biacore评估软件来分析传感图及计算亲和力数据。

实施例1

用于噬菌体展示计划的抗原-Fc融合物的制备，纯化和表征

为了以单体状态表达和纯化人和食蟹猴CD19外域(表1)，将相应的DNA片段与含有“节”突变的人IgG1 Fc基因区段融合(人：SEQ ID NO:4；食蟹猴：SEQ ID NO:7)，并与“Fc穴”(SEQ ID NO:3)对应物一起转染(Merchant et al.(1998)Nat Biotechnol 16,677-681)。在抗原外域和Fc节链之间引入IgA切割位点(PTPPTP)。在抗原-Fc节链的C末端处引入用于定向生物素化的Avi标签，并出于纯化目的在Fc穴中引入突变H435R和Y436F(JendebergL.et al.,J.Immunological Methods,1997)。含有S354C/T366W突变的抗原-Fc节链(人：SEQ ID NO:6；食蟹猴：SEQ ID NO:8)与含有Y349C/T366S/L368A/Y407V突变的Fc穴链(SEQID NO:5)的组合容许生成包括一个拷贝的CD19外域的异二聚体Fc融合片段。表2列出了抗原-Fc融合构建物的cDNA和氨基酸序列。

表1：抗原外域(ECD)的氨基酸编号及其起源

SEQ ID NO:	构建物	起源	ECD
				1	人CD19 ECD	依照Uniprot#P15391合成的	aa 20-292
2	食蟹猴CD19 ECD	依照内部数据合成的	aa 20-293

表2：单体人和食蟹猴CD19 Fc(kih)融合分子的cDNA和氨基酸序列

为了生成单体抗原/Fc融合分子，使用标准方法，用编码融合蛋白的两种成分(节和穴链)的两种质粒共转染指数式生长中的悬浮CHO细胞。

通过使用蛋白A的亲和层析术，接着是尺寸排阻层析术，自细胞培养物上清液纯化分泌的蛋白质。对于亲和层析术，将上清液加载到用磷酸钠(20mM)，柠檬酸钠(20mM)，0.5M氯化钠缓冲液(pH 7.5)平衡的MabSelect Sure柱(柱体积(CV)＝5-15mL，树脂来自GEHealthcare)上。通过用至少6个柱体积的相同缓冲液清洗，去除未结合的蛋白质。使用线性梯度洗脱结合的蛋白质；步骤1，10个CV的0至60％的洗脱缓冲液(20mM柠檬酸钠，500mM氯化钠缓冲液(pH 2.5))；步骤2，2个CV的60至100％的洗脱缓冲液。对于线性梯度，应用另外2个柱体积的100％的洗脱缓冲液的分步洗脱。

通过添加1/40(v/v)的2M Tris(pH 8.0)来调节所收集的级分的pH。将蛋白质浓缩并过滤，之后加载到用pH 7.4的2mM MOPS，150mM氯化钠，0.02％(w/v)叠氮化钠溶液平衡的HiLoad Superdex 200柱(GE Healthcare)上。

表3汇总了单体人和食蟹猴CD19 Fc(kih)融合蛋白的产率和最终单体含量。

表3：单体人和食蟹猴CD19 Fc(kih)融合蛋白的生化分析

构建物	单体[％](SEC)	产率[mg/l]
			单体人CD19 Fc(kih)融合蛋白	91	0.2
单体食蟹猴CD19Fc(kih)融合蛋白	95	3.56

依照制造商的用法说明书，使用BirA生物素-蛋白质连接酶标准反应试剂盒(Avidity，目录号BirA500)将一部分经过纯化的抗原体外生物素化。就相应的食蟹猴CD19构建物为100％而言，含有人CD19的融合物的生物素化程度为94％。然后将生物素化的蛋白质用于选择，筛选和表征没有脱酰胺热点N27d和N28的亲和力成熟的8B8衍生克隆。

实施例2

亲和力成熟的CD19特异性抗体的选择

位于人源化克隆8B8(WO 2011/147834中描述的)轻链CDR1中的位置27d和28处的天冬酰胺残基的脱酰胺引起生物学活性的显著降低。因此，生成了2个噬菌体展示文库，其中a)位置27d和28处的两个天冬酰胺残基均被消除，和b)另外的重和轻链CDR被随机化，以选择具有改善的亲和力的8B8变体。

2.1没有LCDR1热点的8B8亲和力成熟文库的生成

使用标准方案(Silacci et al.,2005)，通过噬菌体展示进行亲和力成熟的8B8衍生的抗体的生成，所述抗体没有位于LCDR1中的脱酰胺位点N27d和N28。第一步，将人源化亲本克隆8B8的VL和VH DNA序列(SEQ ID NO:9和SEQ ID NO:10)克隆入我们的噬菌粒，然后将其用作随机化的模板。下一步，生成了两个文库，用于通过噬菌体展示选择有利的克隆。为了消除上文提到的热点位置，对于两个文库均使用在位置27d和28处仅容许氨基酸ST Q E的LCDR1随机化引物(SEQ ID NO:11)。成熟文库1在轻和重链二者的CDR1和CDR2中随机化，而成熟文库2在轻链的CDR1和3中及在重链的CDR3中随机化。相应的CDR区中的随机化位置在图1中显示。为了生成在轻和重链二者的CDR1和2中均随机化的成熟文库1，通过“通过交叠延伸的剪接”(SOE)PCR来组装三个片段并克隆入噬菌体载体(图2)。使用下面的引物组合生成文库片段：片段1(LMB3(SEQ ID NO:16)和CD19 L1反向随机(SEQ ID NO:11)，片段2(CD19 L2正向随机(SEQ ID NO:12)和CD19 H1反向随机(SEQ ID NO:13)，和片段3(CD19 H2正向随机(SEQ ID NO:14)和CD19 H3反向恒定(SEQ ID NO:15)(表4)。在装配足够量的全长随机化片段后，连同相同处理的受体噬菌粒载体，用NcoI/NheI进行消化。将3倍摩尔过量的文库插入物与10μg噬菌粒载体一起连接。使用经过纯化的连接体系进行20次转化，得到2x10⁹个转化子。挽救展示8B8亲和力成熟文库的噬菌粒颗粒并通过PEG/NaCl纯化进行纯化以用于选择。

类似地进行在轻链的CDR1和3中和在重链的CDR3中随机化的第二个文库的生成。使用下面的引物组合生成文库片段：片段1(LMB3(SEQ ID NO:16)和CD19 L1反向随机(SEQID NO:11)，片段2(CD19 L1正向恒定(SEQ ID NO:223)和CD19 L3反向随机(SEQ ID NO:224)，和片段3(CD19 L3正向恒定(SEQ ID NO:225)和CD19 H3反向随机(SEQ ID NO:226)(表5)。在装配足够量的全长随机化片段后，连同相同处理的受体噬菌粒载体，用NcoI/KpnI进行消化。将3倍摩尔过量的文库插入物与20μg噬菌粒载体一起连接。使用经过纯化的连接体系进行40次转化，得到2x 10⁹个转化子。挽救展示8B8亲和力成熟文库的噬菌粒颗粒并通过PEG/NaCl纯化进行纯化以用于选择。

表4：用于8B8亲和力成熟和热点去除文库L1_L2/H1_H2的引物

表5：用于8B8亲和力成熟和热点去除文库L1_L3/H3的引物

2.2没有LCDR1热点N27d和N28的亲和力成熟的8B8衍生的克隆的选择

为了选择没有LCDR1热点N27d和N28的亲和力成熟克隆，实施两种通过噬菌体展示的选择办法：

在第一种办法中，使用两个噬菌体展示文库对人CD19-Fc融合蛋白执行选择。依照下面的样式在溶液中实施多轮淘选：1.在总体积1ml中使约10¹²个噬菌粒颗粒结合30nM生物素化的CD19-Fc蛋白0.5小时；2.通过添加5.4x10⁷个链霉亲合素包被的磁珠对生物素化的CD19-Fc蛋白和特异性结合的噬菌体颗粒捕捉10分钟；3.使用5x 1ml PBS/Tween20和5x1ml PBS清洗珠子；4.通过添加1ml 100mM TEA来洗脱噬菌体颗粒10分钟，并通过添加500μl1M Tris/HCl pH 7.4进行中和；5.再感染指数式生长中的大肠杆菌TG1细菌；和6.用辅助噬菌体VCSM13感染及随后PEG/NaCl沉淀噬菌粒颗粒，要用于随后的选择轮次。使用递减的抗原浓度(30x10^-9M，10x10^-9M，和3x10^-9M)进行超过3轮选择。在第2和3轮中，使用中性亲合素板代替链霉亲合素珠实施抗原:噬菌体复合物的捕捉。用5x PBS/Tween20和5x PBS清洗中性亲合素板。在第3轮中，将中性亲合素板在2升PBS中温育过夜进行“解离速率”选择，之后自板洗脱噬菌体。而且，在第2轮中使用食蟹猴CD19-Fc蛋白来富集交叉反应性结合物。

在第二种选择办法中，对在细胞表面上瞬时表达人或食蟹猴CD19 ECD任一的细胞执行噬菌体淘选。为了瞬时转染HEK细胞，生成包含下面的蛋白质区段的DNA序列(5’至3’)的表达质粒：Flag标签，SNAP标签，人或食蟹猴起源任一的CD19 ECD，和血小板衍生生长因子受体(PDGFR)的跨膜区(SEQ ID NO:21和22)。使用抗Flag抗体进行检测，通过流式细胞术确认细胞表面上相应蛋白质(SEQ ID NO:23和24)的表达。在第一选择轮中，两个文库均暴露于表达含有人或食蟹猴CD19 ECD的融合蛋白任一的细胞。对于后续的淘选轮次，相应地交替使用该物种的CD19 ECD。使用用无关膜蛋白瞬时转染的细胞进行预清除。

依照下面的样式实施多轮淘选：1.依照之前描述的标准规程，用表达CD19 ECD或无关跨膜蛋白任一的构建物转染HEK细胞；2.在5％CO₂气氛的温箱中于37℃温育细胞共48小时；3.通过离心(250xg，3分钟)分离细胞，分别在PBS/5％BSA中重悬浮1x10⁷个CD19 ECD阳性细胞和1x10⁷个阴性细胞；4.通过使用温和旋转的管旋转器于4℃将噬菌体文库与1x10⁷个CD19阴性细胞一起温育60分钟，预清除非特异性噬菌体；5.将细胞以250xg离心3分钟并将上清液转移入新鲜管。添加1x10⁷个CD19阳性细胞，并通过在管旋转器上温和旋转于4℃温育60分钟；6.通过以250xg离心1分钟来清洗细胞，吸出上清液，并在1ml PBS中重悬浮(8次)；7.用1ml 100mM TEA洗脱噬菌体，于室温温育5分钟，并用500μl 1M Tris-HCl，pH 7.6中和洗脱液；8.再感染指数式生长中的大肠杆菌TG1细菌；和9.用辅助噬菌体VCSM13感染及随后PEG/NaCl沉淀噬菌粒颗粒，要用于随后的选择轮次。进行超过3轮选择。

对于两种选择办法，如下通过ELISA鉴定特异性结合物：将100μl 30nM生物素化CD19-Fc蛋白/孔包被到中性亲合素板上。添加含有Fab的细菌上清液，并使用抗Flag/HRP二抗通过它们的Flag标签检测结合性Fab。

使用用含有人CD19 ECD的表达质粒(SEQ ID NO:227)瞬时转染的细胞在基于细胞的ELISA中进一步测试对重组人CD19呈ELISA阳性的克隆。这项分析如下实施：转染后48小时，收获HEK细胞并以250xg离心5分钟。然后将细胞在冰冷的PBS BSA 2％中重悬浮至4x10⁶个细胞/ml，并在冰上温育20分钟以封闭非特异性结合位点。将100μl中的4x10⁵个细胞分配到96孔板的每个孔中，并以250xg和4℃离心3分钟。吸走上清液，并用50μl冰冷的PBS/BSA2％稀释50μl含有可溶性Fab片段的细菌上清液，添加到板中，与细胞混合，并于4℃温育1小时。之后，将细胞用冰冷的PBS清洗3次，之后每孔添加100μl含有1:2000稀释的抗Fab-HRP抗体的PBS BSA 2％。温育时间1小时后，再次将细胞用冰冷的PBS清洗3次。为了显色，每孔添加100μl“一步ultra TMB-ELISA”底物。温育时间10分钟后，将上清液转移至每孔装有40μlH₂SO₄ 1M的新的96孔板，于450nm测量吸光度。使用ProteOn XPR36，通过SPR分析，将展现超过背景的显著信号的克隆提交动力学筛选实验。

2.3通过SPR鉴定亲和力成熟的8B8衍生变体

为了进一步表征ELISA阳性克隆，使用ProteOn XPR36机器通过表面等离振子共振测量解离速率，并与亲本人源化克隆8B8比较。

对于这项实验，通过胺偶联(乙酸钠pH 4.5，25μl/min，240秒)在GLM芯片的所有6个通道上固定化7000RU的多克隆抗人Fab抗体(垂直取向)。将每份含有抗体的细菌上清液过滤并用PBS稀释2倍，然后以垂直取向以25μl/min注射360秒以实现100至400个响应单位(RU)的固定化水平。单体CD19-Fc的注射：对于一击动力学测量，将注射方向改成水平取向，沿着分开的通道1-4以50μl/min同时注射经过纯化的单体CD19-Fc的三倍稀释系列(变动的浓度范围介于150和6nM之间)，结合时间180秒，解离时间300秒。在通道5中注射人IgG Fc片段(150nM)作为对单体CD19-Fc的特异性结合的阴性对照。沿着第6通道注射缓冲液(PBST)以提供“在线”空白用于参照。通过10mM甘氨酸pH 1.5和50mM NaOH 30秒以90μl/min(水平取向)的两个脉冲进行再生。通过同时拟合传感图使用ProteOn Manager v3.1软件中的简单一对一Langmuir结合模型计算解离速率常数(k_off)。鉴定出表达具有最慢解离速率常数的Fab的克隆(表6)。值得注意地，由于拟合不当，无法测定克隆5A07和5B08的解离速率常数。不过，选择了这两个克隆，因为所获得的结果提示很慢的解离。对相应噬菌粒的可变域进行测序。重要的是，LCDR1中的两个天冬酰胺残基(位置27d和28)均被丝氨酸或苏氨酸替换，证明两个脱酰胺位点均被去除。比对在图3中显示。最好的克隆的CDR在表7(轻链可变区)和表8(重链可变区)中列出(克隆5H09:(SEQ ID NO:25-30)；克隆7H07:(SEQ ID NO:31-36)；克隆2B03:(SEQ ID NO:37-42)；克隆2B11:(SEQ ID NO:43-48)；克隆5A07:(SEQ IDNO:49-54)；克隆5B08:(SEQ ID NO:55-60)；克隆5D08:(SEQ ID NO:61-66))。

表6：在用细菌上清液的筛选分析中获得的选定克隆的解离常数

克隆	解离常数kd(1/s)
		亲本8B8	3.01E-4
5H09	2.58E-4
		7H07	5.75E-5
2B03	3.24E-5
		2B11	4.37E-6
5A07	n.d.
		5B08	n.d.
5D08	1.95E-4

表7：选定的8B8轻链的CDR序列

表8：选定的8B8重链的CDR序列

实施例3

亲和力成熟的8B8衍生抗体的表征

3.1可变抗体域克隆入表达载体

与人IgG1的恒定重链或恒定轻链任一同框亚克隆选定的抗CD19结合物的重和轻链可变区的DNA序列。在重链中，已经依照国际专利申请公开文本No.WO 2012/130831 A1中描述的方法引入Pro329Gly，Leu234Ala和Leu235Ala突变以消除对Fcγ受体的结合。

抗CD19 IgG的cDNA和氨基酸序列分别在表9和表10中显示。所有抗体编码序列克隆入以嵌合MPSV启动子驱动插入物转录且含有位于CDS的3’端的合成的polyA信号序列的表达载体。另外，该载体含有用于质粒的附加体维持的EBV OriP序列。

表9：P329GLALA人IgG1格式的抗CD19克隆8B8的cDNA和氨基酸序列

表10：P329GLALA人IgG1格式的亲和力成熟抗CD19克隆的cDNA和氨基酸序列

3.2通过SPR测定选定的抗体的亲和力

为了通过SPR精确测定亲和力，使用聚乙烯亚胺通过用哺乳动物表达载体共转染HEK293-EBNA细胞生成选定的抗CD19抗体。依照标准规程以1:1比率(“载体重链”:“载体轻链”)用相应的表达载体转染细胞。转染后7天，测量上清液中的抗体滴度并将所有滴度平衡至10μg/ml。

于25℃使用ProteOn XPR36仪器(Biorad)通过SPR测量亲本抗体8B8以及它的衍生物的亲和力(K_D)。通过胺偶联(乙酸钠pH 4.5，25ul/min，240秒)在GLM芯片的所有6个通道上固定化7000RU的多克隆抗人Fab抗体(垂直取向)。将每份含有抗体的HEK上清液过滤，用PBST(10mM磷酸盐，150mM氯化钠pH 7.4，0.005％Tween 20)稀释至10μg/ml的浓度，然后以垂直取向以25μl/min注射360秒以实现500至800个响应单位(RU)的固定化水平。单体CD19-Fc的注射：对于一击动力学测量，将注射方向改成水平取向，沿着分开的通道1-4以50μl/min同时注射经过纯化的单体CD19-Fc的三倍稀释系列(变动的浓度范围介于150和6nM之间)，结合时间180秒，解离时间300秒。在通道5中注射人IgG Fc片段(150nM)作为对单体CD19-Fc的特异性结合的阴性对照。沿着第6通道注射缓冲液(PBST)以提供“在线”空白用于参照。相应的传感图的总览在图4A至4H中显示。通过10mM甘氨酸pH 1.5和50mM NaOH 30秒90μl/min(垂直取向)的两个脉冲来实施再生。通过同时拟合结合和解离传感图在ProteOnManager v3.1软件中使用简单一对一Langmuir结合模型计算结合速率常数(k_on)和解离速率常数(k_off)。作为比率k_off/k_on计算平衡解离常数(K_D)。动力学和热力学数据的汇总在表11中显示。所有亲和力成熟克隆的解离常数与它们的亲本克隆8B8相比得到改善。

表11：抗CD19 huIgG1和人CD19之间的相互作用的动力学和热力学数据的汇总

克隆	ka(1/Ms)	kd(1/s)	K<sub>D</sub>(M)
				亲本8B8	5.66E+4	1.34E-4	2.36E-9
5H09	7.91E+4	1.50E-5	1.89E-10
				7H07	7.45E+4	5.57E-5	7.47E-10
2B03	6.02E+4	5.00E-5	8.31E-10
				2B11	6.34E+4	3.14E-5	4.95E-10
5A07	6.98E+4	3.07E-5	4.40E-10
				5B08	6.81E+4	5.26E-5	7.72E-10
5D08	8.88E+4	8.44E-5	9.51E-10

实施例4

抗CD19 IgG1 P329G LALA的制备和纯化

使用聚乙烯亚胺通过用哺乳动物表达载体共转染HEK293-EBNA细胞生成选定的抗CD19抗体。以1:1比率(“载体重链”:“载体轻链”)用相应的表达载体转染细胞。

对于500mL摇瓶中的生成，在转染前24小时接种400x 10⁶个HEK293EBNA细胞。在转染前，将细胞以210xg离心5分钟，并用预温热的CD CHO培养基替换上清液。在20mL CD CHO培养基中混合表达载体(200μg总DNA)。添加540μL PEI后，将溶液漩涡震荡15秒并于室温温育10分钟。之后，将细胞与DNA/PEI溶液混合，转移至500mL摇瓶并在具有5％CO₂气氛的温箱中于37℃温育3小时。温育后，添加160mL F17培养基并将细胞培养24小时。转染后1天，添加1mM丙戊酸和7％补料及补充物。培养7天后，通过以210xg离心15分钟来收集上清液。将溶液无菌过滤(0.22μm滤器)，补充叠氮化钠至终浓度0.01％(w/v)，并保持于4℃。

如上文关于抗原-Fc融合物的纯化所述使用蛋白A通过亲和层析术来进行自细胞培养物上清液纯化抗体分子。浓缩并过滤蛋白质，之后加载到用pH 6.0的20mM组氨酸，140mM NaCl溶液平衡的HiLoad Superdex 200柱(GE Healthcare)上。

使用基于氨基酸序列计算的摩尔消光系数，通过于280nm测量OD来测定经过纯化的抗体的蛋白质浓度。使用LabChipGXII(Caliper)通过还原剂(Invitrogen，USA)存在和缺失下的CE-SDS来分析抗体的纯度和分子量。于25℃使用在25mM K₂HPO₄，125mM NaCl，200mM单盐酸L-精氨酸，0.02％(w/v)NaN₃，pH 6.7运行缓冲液中平衡的TSKgel G3000 SW XL分析性尺寸排阻柱(Tosoh)分析抗体样品的聚集体含量(表12)。

表12：抗CD19 P329G LALA IgG1克隆的生化分析

为了制备双特异性构建物，选择克隆2B11，因为它缺乏那三个脱酰胺热点。

实施例5

表达CD19的肿瘤细胞上的结合

为了检查IgG1克隆对表达CD19的细胞的结合，使用自一名具有B细胞非霍奇金淋巴瘤的41岁高加索男性的胸腔积液衍生的WSU-DLCL2细胞(DSMZ No.ACC 575)。将在DPBS(Gibco by Life Technologies，目录号14190 326)中重悬浮的0.1x 10⁶个肿瘤细胞添加至圆底悬浮细胞96孔板(greiner bio-one，cellstar，目录号650185)的每个孔。将细胞用200μL DPBS清洗一次。将细胞在100μL/孔4℃冷的含有1:5000稀释的可固定存活力染料eFluor 660(eBioscience，目录号65-0864-18)的DPBS缓冲液中重悬浮并将板于4℃温育30分钟。将细胞用200μL/孔4℃冷的DPBS缓冲液清洗一次并在50μL/孔4℃冷的含有一系列浓度的CD19结合物的FACS缓冲液(DPBS，供应有2％FBS，5mM EDTA pH8(Amresco，目录号E177)和7.5mM叠氮化钠(Sigma-Aldrich S2002))中重悬浮，接着于4℃温育1小时。充分清洗后，进一步将细胞用50μL/孔4℃冷的含有5μg/mL PE缀合的AffiniPure抗人IgG F(ab’)₂片段特异性山羊F(ab’)₂片段(Jackson ImmunoResearch，目录号109 116098)的FACS缓冲液于4℃染色30分钟。然后将细胞用200μL/孔4℃ FACS缓冲液清洗两次并在50μL/孔含有1％甲醛(Sigma，HT501320-9.5L)的DPBS中固定细胞。将细胞在100μL/孔FACS缓冲液中重悬浮并使用FACS LSR II(BD Biosciences)获取。使用FlowJo V10(FlowJo，LLC)和GraphPad Prism6.04(GraphPad Software，Inc)分析数据。

图5显示CD19 IgG1克隆对表达人CD19的WSU-DLCL2细胞的结合。表13显示测量得到的EC₅₀值。

表13：对表达人FAP的肿瘤细胞的结合

***

序列表

<110> 豪夫迈·罗氏有限公司（F. Hoffmann-La Roche AG）

<120> 抗人CD19抗体

<130> P33118-WO

<150> EP15188262.8

<151> 2015-10-02

<150> EP16167893.3

<151> 2016-05-02

<160> 115

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 273

<212> PRT

<213> 人（Homo sapiens）

<400> 1

Pro Glu Glu Pro Leu Val Val Lys Val Glu Glu Gly Asp Asn Ala Val

1 5 10 15

Leu Gln Cys Leu Lys Gly Thr Ser Asp Gly Pro Thr Gln Gln Leu Thr

20 25 30

Trp Ser Arg Glu Ser Pro Leu Lys Pro Phe Leu Lys Leu Ser Leu Gly

35 40 45

Leu Pro Gly Leu Gly Ile His Met Arg Pro Leu Ala Ile Trp Leu Phe

50 55 60

Ile Phe Asn Val Ser Gln Gln Met Gly Gly Phe Tyr Leu Cys Gln Pro

65 70 75 80

Gly Pro Pro Ser Glu Lys Ala Trp Gln Pro Gly Trp Thr Val Asn Val

85 90 95

Glu Gly Ser Gly Glu Leu Phe Arg Trp Asn Val Ser Asp Leu Gly Gly

100 105 110

Leu Gly Cys Gly Leu Lys Asn Arg Ser Ser Glu Gly Pro Ser Ser Pro

115 120 125

Ser Gly Lys Leu Met Ser Pro Lys Leu Tyr Val Trp Ala Lys Asp Arg

130 135 140

Pro Glu Ile Trp Glu Gly Glu Pro Pro Cys Leu Pro Pro Arg Asp Ser

145 150 155 160

Leu Asn Gln Ser Leu Ser Gln Asp Leu Thr Met Ala Pro Gly Ser Thr

165 170 175

Leu Trp Leu Ser Cys Gly Val Pro Pro Asp Ser Val Ser Arg Gly Pro

180 185 190

Leu Ser Trp Thr His Val His Pro Lys Gly Pro Lys Ser Leu Leu Ser

195 200 205

Leu Glu Leu Lys Asp Asp Arg Pro Ala Arg Asp Met Trp Val Met Glu

210 215 220

Thr Gly Leu Leu Leu Pro Arg Ala Thr Ala Gln Asp Ala Gly Lys Tyr

225 230 235 240

Tyr Cys His Arg Gly Asn Leu Thr Met Ser Phe His Leu Glu Ile Thr

245 250 255

Ala Arg Pro Val Leu Trp His Trp Leu Leu Arg Thr Gly Gly Trp Lys

260 265 270

Val

<210> 2

<211> 274

<212> PRT

<213> 食蟹猴（Cynomolgus）

<400> 2

Pro Gln Glu Pro Leu Val Val Lys Val Glu Glu Gly Asp Asn Ala Val

1 5 10 15

Leu Gln Cys Leu Glu Gly Thr Ser Asp Gly Pro Thr Gln Gln Leu Val

20 25 30

Trp Cys Arg Asp Ser Pro Phe Glu Pro Phe Leu Asn Leu Ser Leu Gly

35 40 45

Leu Pro Gly Met Gly Ile Arg Met Gly Pro Leu Gly Ile Trp Leu Leu

50 55 60

Ile Phe Asn Val Ser Asn Gln Thr Gly Gly Phe Tyr Leu Cys Gln Pro

65 70 75 80

Gly Leu Pro Ser Glu Lys Ala Trp Gln Pro Gly Trp Thr Val Ser Val

85 90 95

Glu Gly Ser Gly Glu Leu Phe Arg Trp Asn Val Ser Asp Leu Gly Gly

100 105 110

Leu Gly Cys Gly Leu Lys Asn Arg Ser Ser Glu Gly Pro Ser Ser Pro

115 120 125

Ser Gly Lys Leu Asn Ser Ser Gln Leu Tyr Val Trp Ala Lys Asp Arg

130 135 140

Pro Glu Met Trp Glu Gly Glu Pro Val Cys Gly Pro Pro Arg Asp Ser

145 150 155 160

Leu Asn Gln Ser Leu Ser Gln Asp Leu Thr Met Ala Pro Gly Ser Thr

165 170 175

Leu Trp Leu Ser Cys Gly Val Pro Pro Asp Ser Val Ser Arg Gly Pro

180 185 190

Leu Ser Trp Thr His Val Arg Pro Lys Gly Pro Lys Ser Ser Leu Leu

195 200 205

Ser Leu Glu Leu Lys Asp Asp Arg Pro Asp Arg Asp Met Trp Val Val

210 215 220

Asp Thr Gly Leu Leu Leu Thr Arg Ala Thr Ala Gln Asp Ala Gly Lys

225 230 235 240

Tyr Tyr Cys His Arg Gly Asn Trp Thr Lys Ser Phe Tyr Leu Glu Ile

245 250 255

Thr Ala Arg Pro Ala Leu Trp His Trp Leu Leu Arg Ile Gly Gly Trp

260 265 270

Lys Val

<210> 3

<211> 681

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> Fc穴链的核苷酸序列

<400> 3

gacaaaactc acacatgccc accgtgccca gcacctgaag ctgcaggggg accgtcagtc 60

ttcctcttcc ccccaaaacc caaggacacc ctcatgatct cccggacccc tgaggtcaca 120

tgcgtggtgg tggacgtgag ccacgaagac cctgaggtca agttcaactg gtacgtggac 180

ggcgtggagg tgcataatgc caagacaaag ccgcgggagg agcagtacaa cagcacgtac 240

cgtgtggtca gcgtcctcac cgtcctgcac caggactggc tgaatggcaa ggagtacaag 300

tgcaaggtct ccaacaaagc cctcggcgcc cccatcgaga aaaccatctc caaagccaaa 360

gggcagcccc gagaaccaca ggtgtgcacc ctgcccccat cccgggatga gctgaccaag 420

aaccaggtca gcctctcgtg cgcagtcaaa ggcttctatc ccagcgacat cgccgtggag 480

tgggagagca atgggcagcc ggagaacaac tacaagacca cgcctcccgt gctggactcc 540

gacggctcct tcttcctcgt gagcaagctc accgtggaca agagcaggtg gcagcagggg 600

aacgtcttct catgctccgt gatgcatgag gctctgcaca accgcttcac gcagaagagc 660

ctctccctgt ctccgggtaa a 681

<210> 4

<211> 1602

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 人CD19抗原Fc节链avi标签的核苷酸序列

<400> 4

cccgaggaac ccctggtcgt gaaggtggaa gagggcgaca atgccgtgct gcagtgcctg 60

aagggcacct ccgatggccc tacccagcag ctgacctggt ccagagagag ccccctgaag 120

cccttcctga agctgtctct gggcctgcct ggcctgggca tccatatgag gcctctggcc 180

atctggctgt tcatcttcaa cgtgtcccag cagatgggcg gcttctacct gtgtcagcct 240

ggccccccat ctgagaaggc ttggcagcct ggctggaccg tgaacgtgga aggatccggc 300

gagctgttcc ggtggaacgt gtccgatctg ggcggcctgg gatgcggcct gaagaacaga 360

tctagcgagg gccccagcag ccccagcggc aaactgatga gccccaagct gtacgtgtgg 420

gccaaggaca gacccgagat ctgggagggc gagcctcctt gcctgccccc标签agacagc 480

ctgaaccaga gcctgagcca ggacctgaca atggcccctg gcagcacact gtggctgagc 540

tgtggcgtgc cacccgactc tgtgtctaga ggccctctga gctggaccca cgtgcaccct 600

aagggcccta agagcctgct gagcctggaa ctgaaggacg acaggcccgc cagagatatg 660

tgggtcatgg aaaccggcct gctgctgcct agagccacag cccaggatgc cggcaagtac 720

tactgccaca gaggcaacct gaccatgagc ttccacctgg aaatcaccgc cagacccgtg 780

ctgtggcact ggctgctgag aacaggcggc tggaaggtcg acgctagcgg tggtagtccg 840

acacctccga cacccggggg tggttctgca gacaaaactc acacatgccc accgtgccca 900

gcacctgaag ccgcaggggg accgtcagtc ttcctcttcc ccccaaaacc caaggacacc 960

ctcatgatct cccggacccc tgaggtcaca tgcgtggtgg tggacgtgag ccacgaagac 1020

cctgaggtca agttcaactg gtacgtggac ggcgtggagg tgcataatgc caagacaaag 1080

ccgcgggagg agcagtacaa cagcacgtac cgtgtggtca gcgtcctcac cgtcctgcac 1140

caggactggc tgaatggcaa ggagtacaag tgcaaggtct ccaacaaagc cctcggagcc 1200

cccatcgaga aaaccatctc caaagccaaa gggcagcccc gagaaccaca ggtgtacacc 1260

ctgcccccat gccgggatga gctgaccaag aaccaggtca gcctgtggtg cctggtcaaa 1320

ggcttctatc ccagcgacat cgccgtggag tgggagagca atgggcagcc ggagaacaac 1380

tacaagacca cgcctcccgt gctggactcc gacggctcct tcttcctcta cagcaagctc 1440

accgtggaca agagcaggtg gcagcagggg aacgtcttct catgctccgt gatgcatgag 1500

gctctgcaca accactacac gcagaagagc ctctccctgt ctccgggtaa atccggaggc 1560

ctgaacgaca tcttcgaggc ccagaagatt gaatggcacg ag 1602

<210> 5

<211> 227

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> Fc穴链

<400> 5

Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly

1 5 10 15

Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met

20 25 30

Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His

35 40 45

Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val

50 55 60

His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr

65 70 75 80

Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly

85 90 95

Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile

100 105 110

Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val

115 120 125

Cys Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser

130 135 140

Leu Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu

145 150 155 160

Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro

165 170 175

Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val

180 185 190

Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met

195 200 205

His Glu Ala Leu His Asn Arg Phe Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser

210 215 220

Pro Gly Lys

225

<210> 6

<211> 534

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人CD19抗原Fc节链avi标签

<400> 6

Pro Glu Glu Pro Leu Val Val Lys Val Glu Glu Gly Asp Asn Ala Val

1 5 10 15

Leu Gln Cys Leu Lys Gly Thr Ser Asp Gly Pro Thr Gln Gln Leu Thr

20 25 30

Trp Ser Arg Glu Ser Pro Leu Lys Pro Phe Leu Lys Leu Ser Leu Gly

35 40 45

Leu Pro Gly Leu Gly Ile His Met Arg Pro Leu Ala Ile Trp Leu Phe

50 55 60

Ile Phe Asn Val Ser Gln Gln Met Gly Gly Phe Tyr Leu Cys Gln Pro

65 70 75 80

Gly Pro Pro Ser Glu Lys Ala Trp Gln Pro Gly Trp Thr Val Asn Val

85 90 95

Glu Gly Ser Gly Glu Leu Phe Arg Trp Asn Val Ser Asp Leu Gly Gly

100 105 110

Leu Gly Cys Gly Leu Lys Asn Arg Ser Ser Glu Gly Pro Ser Ser Pro

115 120 125

Ser Gly Lys Leu Met Ser Pro Lys Leu Tyr Val Trp Ala Lys Asp Arg

130 135 140

Pro Glu Ile Trp Glu Gly Glu Pro Pro Cys Leu Pro Pro Arg Asp Ser

145 150 155 160

Leu Asn Gln Ser Leu Ser Gln Asp Leu Thr Met Ala Pro Gly Ser Thr

165 170 175

Leu Trp Leu Ser Cys Gly Val Pro Pro Asp Ser Val Ser Arg Gly Pro

180 185 190

Leu Ser Trp Thr His Val His Pro Lys Gly Pro Lys Ser Leu Leu Ser

195 200 205

Leu Glu Leu Lys Asp Asp Arg Pro Ala Arg Asp Met Trp Val Met Glu

210 215 220

Thr Gly Leu Leu Leu Pro Arg Ala Thr Ala Gln Asp Ala Gly Lys Tyr

225 230 235 240

Tyr Cys His Arg Gly Asn Leu Thr Met Ser Phe His Leu Glu Ile Thr

245 250 255

Ala Arg Pro Val Leu Trp His Trp Leu Leu Arg Thr Gly Gly Trp Lys

260 265 270

Val Asp Ala Ser Gly Gly Ser Pro Thr Pro Pro Thr Pro Gly Gly Gly

275 280 285

Ser Ala Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala

290 295 300

Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr

305 310 315 320

Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val

325 330 335

Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val

340 345 350

Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser

355 360 365

Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu

370 375 380

Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala

385 390 395 400

Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro

405 410 415

Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Cys Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln

420 425 430

Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala

435 440 445

Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr

450 455 460

Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu

465 470 475 480

Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser

485 490 495

Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser

500 505 510

Leu Ser Pro Gly Lys Ser Gly Gly Leu Asn Asp Ile Phe Glu Ala Gln

515 520 525

Lys Ile Glu Trp His Glu

530

<210> 7

<211> 1605

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 食蟹猴CD19抗原Fc节链avi标签的核苷酸序列

<400> 7

ccccaggaac ccctggtcgt gaaggtggaa gagggcgaca atgccgtgct ccagtgcctg 60

gaaggcacct ccgatggccc tacacagcag ctcgtgtggt gcagagacag ccccttcgag 120

cccttcctga acctgtctct gggcctgcct ggcatgggca tcagaatggg ccctctgggc 180

atctggctgc tgatcttcaa cgtgtccaac cagaccggcg gcttctacct gtgtcagcct 240

ggcctgccaa gcgagaaggc ttggcagcct ggatggaccg tgtccgtgga aggatctggc 300

gagctgttcc ggtggaacgt gtccgatctg ggcggcctgg gatgcggcct gaagaacaga 360

agcagcgagg gccctagcag ccccagcggc aagctgaata gcagccagct gtacgtgtgg 420

gccaaggaca gacccgagat gtgggagggc gagcctgtgt gtggcccccc标签agatagc 480

ctgaaccaga gcctgagcca ggacctgaca atggcccctg gcagcacact gtggctgagc 540

tgtggcgtgc cacccgactc tgtgtccaga ggccctctga gctggacaca cgtgcggcca 600

aagggcccta agagcagcct gctgagcctg gaactgaagg acgaccggcc cgaccgggat 660

atgtgggtgg tggatacagg cctgctgctg accagagcca cagcccagga tgccggcaag 720

tactactgcc acagaggcaa ctggaccaag agcttttacc tggaaatcac cgccagaccc 780

gccctgtggc actggctgct gagaatcgga ggctggaagg tcgacgctag cggtggtagt 840

ccgacacctc cgacacccgg gggtggttct gcagacaaaa ctcacacatg cccaccgtgc 900

ccagcacctg aagccgcagg gggaccgtca gtcttcctct tccccccaaa acccaaggac 960

accctcatga tctcccggac ccctgaggtc acatgcgtgg tggtggacgt gagccacgaa 1020

gaccctgagg tcaagttcaa ctggtacgtg gacggcgtgg aggtgcataa tgccaagaca 1080

aagccgcggg aggagcagta caacagcacg taccgtgtgg tcagcgtcct caccgtcctg 1140

caccaggact ggctgaatgg caaggagtac aagtgcaagg tctccaacaa agccctcgga 1200

gcccccatcg agaaaaccat ctccaaagcc aaagggcagc cccgagaacc acaggtgtac 1260

accctgcccc catgccggga tgagctgacc aagaaccagg tcagcctgtg gtgcctggtc 1320

aaaggcttct atcccagcga catcgccgtg gagtgggaga gcaatgggca gccggagaac 1380

aactacaaga ccacgcctcc cgtgctggac tccgacggct ccttcttcct ctacagcaag 1440

ctcaccgtgg acaagagcag gtggcagcag gggaacgtct tctcatgctc cgtgatgcat 1500

gaggctctgc acaaccacta cacgcagaag agcctctccc tgtctccggg taaatccgga 1560

ggcctgaacg acatcttcga ggcccagaag attgaatggc acgag 1605

<210> 8

<211> 535

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 食蟹猴CD19抗原Fc节链avi标签

<400> 8

Pro Gln Glu Pro Leu Val Val Lys Val Glu Glu Gly Asp Asn Ala Val

1 5 10 15

Leu Gln Cys Leu Glu Gly Thr Ser Asp Gly Pro Thr Gln Gln Leu Val

20 25 30

Trp Cys Arg Asp Ser Pro Phe Glu Pro Phe Leu Asn Leu Ser Leu Gly

35 40 45

Leu Pro Gly Met Gly Ile Arg Met Gly Pro Leu Gly Ile Trp Leu Leu

50 55 60

Ile Phe Asn Val Ser Asn Gln Thr Gly Gly Phe Tyr Leu Cys Gln Pro

65 70 75 80

Gly Leu Pro Ser Glu Lys Ala Trp Gln Pro Gly Trp Thr Val Ser Val

85 90 95

Glu Gly Ser Gly Glu Leu Phe Arg Trp Asn Val Ser Asp Leu Gly Gly

100 105 110

Leu Gly Cys Gly Leu Lys Asn Arg Ser Ser Glu Gly Pro Ser Ser Pro

115 120 125

Ser Gly Lys Leu Asn Ser Ser Gln Leu Tyr Val Trp Ala Lys Asp Arg

130 135 140

Pro Glu Met Trp Glu Gly Glu Pro Val Cys Gly Pro Pro Arg Asp Ser

145 150 155 160

Leu Asn Gln Ser Leu Ser Gln Asp Leu Thr Met Ala Pro Gly Ser Thr

165 170 175

Leu Trp Leu Ser Cys Gly Val Pro Pro Asp Ser Val Ser Arg Gly Pro

180 185 190

Leu Ser Trp Thr His Val Arg Pro Lys Gly Pro Lys Ser Ser Leu Leu

195 200 205

Ser Leu Glu Leu Lys Asp Asp Arg Pro Asp Arg Asp Met Trp Val Val

210 215 220

Asp Thr Gly Leu Leu Leu Thr Arg Ala Thr Ala Gln Asp Ala Gly Lys

225 230 235 240

Tyr Tyr Cys His Arg Gly Asn Trp Thr Lys Ser Phe Tyr Leu Glu Ile

245 250 255

Thr Ala Arg Pro Ala Leu Trp His Trp Leu Leu Arg Ile Gly Gly Trp

260 265 270

Lys Val Asp Ala Ser Gly Gly Ser Pro Thr Pro Pro Thr Pro Gly Gly

275 280 285

Gly Ser Ala Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu

290 295 300

Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp

305 310 315 320

Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp

325 330 335

Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly

340 345 350

Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn

355 360 365

Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp

370 375 380

Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly

385 390 395 400

Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu

405 410 415

Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Cys Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn

420 425 430

Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile

435 440 445

Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr

450 455 460

Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys

465 470 475 480

Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys

485 490 495

Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu

500 505 510

Ser Leu Ser Pro Gly Lys Ser Gly Gly Leu Asn Asp Ile Phe Glu Ala

515 520 525

Gln Lys Ile Glu Trp His Glu

530 535

<210> 9

<211> 363

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> CD19 (8B8) VH亲本克隆DNA的核苷酸序列

<400> 9

caagttcaat tggttcaatc tggtgctgaa gtaaaaaaac cgggcgcttc cgttaaagtg 60

agctgcaaag catctggtta caccttcact gactatatca tgcactgggt tcgtcaggcc 120

ccgggccagg gtctggagtg gatgggctac attaacccat acaacgacgg ttccaaatat 180

accgagaaat tccagggccg cgtcacgatg accagcgaca cttctatctc caccgcgtac 240

atggaactgt ctagactgcg ttctgacgac accgctgttt actattgtgc acgcggtact 300

tactactacg gttccgccct ctttgattac tggggccaag gtaccacggt gaccgtaagc 360

tct 363

<210> 10

<211> 336

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> CD19 (8B8) VL亲本克隆DNA的核苷酸序列

<400> 10

gatattgtta tgactcaaac tccactgtct ctgtccgtga ccccgggtca gccagcgagc 60

atttcttgca aatccagcca atctctggaa aactccaacg gcaacacgta cctgaactgg 120

tatctccaga aaccgggtca gagcccgcag ctgctgatct accgtgtatc taagcgcttc 180

tccggcgttc ctgatcgttt cagcggttct ggatccggca ccgactttac tctgaaaatc 240

agccgtgtgg aagctgaaga cgttggcgtc tactattgtc tgcagttgac ccacgttccg 300

tacaccttcg gtcaaggaac taaactggaa attaaa 336

<210> 11

<211> 94

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 43-45: 40% Y, 6% A/S/T/G/P/D/N/E/Q/V, 49-51: 40% N, 6%

A/S/T/Y/G/P/D/E/Q/V, 55-57: 25% S/T/Q/E, 61-63: 25% S/T/Q/E

<220>

<221> 混杂特征

<222> (43)..(45)

<223> n 是 a, c, g 或 t

<220>

<221> 混杂特征

<222> (49)..(51)

<223> n 是 a, c, g 或 t

<220>

<221> 混杂特征

<222> (55)..(57)

<223> n 是 a, c, g 或 t

<220>

<221> 混杂特征

<222> (61)..(63)

<223> n 是 a, c, g 或 t

<400> 11

cagctgcggg ctctgacccg gtttctggag ataccagttc agnnncgtnn ngccnnngga 60

nnnttccaga gattggctgg atttgcaaga aatg 94

<210> 12

<211> 99

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 40-42: 30% R, 20% E, 5% A/S/T/Y/G/P/D/N/Q/V. 49-51: 30% K, 20% S,

5% A/N/T/Y/G/P/D/E/Q/V, 55-57: 40% F, 5% A/S/T/Y/G/P/D/E/Q/V/I/L,

58-60: 40% S, 6.6% A/T/Y/G/P/D/E/Q/V, 67-69: 50% P, 50% L

<220>

<221> 混杂特征

<222> (40)..(42)

<223> n 是 a, c, g 或 t

<220>

<221> 混杂特征

<222> (49)..(51)

<223> n 是 a, c, g 或 t

<220>

<221> 混杂特征

<222> (55)..(57)

<223> n 是 a, c, g 或 t

<220>

<221> 混杂特征

<222> (58)..(60)

<223> n 是 a, c, g 或 t

<220>

<221> 混杂特征

<222> (67)..(69)

<223> n 是 a, c, g 或 t

<400> 12

ctccagaaac cgggtcagag cccgcagctg ctgatctacn nngtatctnn ncgcnnnnnn 60

ggcgttnnng atcgtttcag cggttctgga tccggcacc 99

<210> 13

<211> 99

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 40-42: 52% H, 4% G/A/S/P/T/N/Y/D/E/Q/V/I, 46-48: 30% I, 15% Y, 5%

G/A/S/T/P/N/H/D/E/Q/V, 49-51: 52% Y, 4% G/A/S/P/T/N/H/D/E/Q/V/I,

52-54: 30% D, 15% G, 5% A/S/P/Y/N/H/D/E/Q/V/I, 55-57: 52% T, 4%

G/A/S/P/Y/N/H/D/E/Q/V/I, 61-63: 52% T, 4% G/A/S/P/Y/N/H/D/E/Q/V/I

<220>

<221> 混杂特征

<222> (40)..(42)

<223> n 是 a, c, g 或 t

<220>

<221> 混杂特征

<222> (46)..(48)

<223> n 是 a, c, g 或 t

<220>

<221> 混杂特征

<222> (49)..(51)

<223> n 是 a, c, g 或 t

<220>

<221> 混杂特征

<222> (52)..(54)

<223> n 是 a, c, g 或 t

<220>

<221> 混杂特征

<222> (55)..(57)

<223> n 是 a, c, g 或 t

<220>

<221> 混杂特征

<222> (61)..(63)

<223> n 是 a, c, g 或 t

<400> 13

catccactcc agaccctggc ccggggcctg acgaacccan nncatnnnnn nnnnnnngaa 60

nnngtaacca gatgctttgc agctcacttt aacggaagc 99

<210> 14

<211> 99

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 34-36: 45% Y, 5% 其它, 40-42: 52% N, 4% 其它, 46-48: 40% Y,

5% 其它, 49-51: 30% N, 15% S, 5% 其它, 52-54: 30% D, 15% G,

5% 其它, 55-57: 52% G, 4% 其它, 61-63: 30% K, 15% N, 4%

其它, 70-72: 30% E, 15% Q, 5% 其它

<220>

<221> 混杂特征

<222> (34)..(36)

<223> n 是 a, c, g 或 t

<220>

<221> 混杂特征

<222> (40)..(42)

<223> n 是 a, c, g 或 t

<220>

<221> 混杂特征

<222> (46)..(48)

<223> n 是 a, c, g 或 t

<220>

<221> 混杂特征

<222> (49)..(51)

<223> n 是 a, c, g 或 t

<220>

<221> 混杂特征

<222> (52)..(54)

<223> n 是 a, c, g 或 t

<220>

<221> 混杂特征

<222> (55)..(57)

<223> n 是 a, c, g 或 t

<220>

<221> 混杂特征

<222> (61)..(63)

<223> n 是 a, c, g 或 t

<220>

<221> 混杂特征

<222> (70)..(72)

<223> n 是 a, c, g 或 t

<400> 14

caggccccgg gccagggtct ggagtggatg ggcnnnattn nnccannnnn nnnnnnntcc 60

nnntataccn nnaaattcca gggccgcgtc acgatgacc 99

<210> 15

<211> 33

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> CD19 H3反向恒定

<400> 15

cgtcaccggt tcggggaagt agtccttgac cag 33

<210> 16

<211> 26

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> LMB3

<400> 16

caggaaacag ctatgaccat gattac 26

<210> 17

<211> 33

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> CD19 L1正向恒定

<400> 17

tggtatctcc agaaaccggg tcagagcccg cag 33

<210> 18

<211> 84

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 34-36: 52% Y, 4% 其它, 37-39: 52% P, 4% 其它, 40-42: 42% V,

10% L, 4% 其它, 43-45: 52% H, 4% 其它, 46-48: 42% T, 10% I,

4% 其它, 49-51: 45% L, 11% G, 4% 其它

<220>

<221> 混杂特征

<222> (34)..(36)

<223> n 是 a, c, g 或 t

<220>

<221> 混杂特征

<222> (37)..(39)

<223> n 是 a, c, g 或 t

<220>

<221> 混杂特征

<222> (40)..(42)

<223> n 是 a, c, g 或 t

<220>

<221> 混杂特征

<222> (43)..(45)

<223> n 是 a, c, g 或 t

<220>

<221> 混杂特征

<222> (46)..(48)

<223> n 是 a, c, g 或 t

<220>

<221> 混杂特征

<222> (49)..(51)

<223> n 是 a, c, g 或 t

<400> 18

tttaatttcc agtttagttc cttgaccgaa ggtnnnnnnn nnnnnnnnnn nctgcagaca 60

atagtagacg ccaacgtctt cagc 84

<210> 19

<211> 35

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> CD19 L3正向恒定

<400> 19

accttcggtc aaggaactaa actggaaatt aaacg 35

<210> 20

<211> 107

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> pos. 59-61: 50% L, 3.8% 其它, 62-64: 50% A, 4.2% 其它, 65-67:

50% S, 4.2% 其它, 68-70: 50% G, 4.2% 其它, 71-73: 50% Y, 4.2%

其它, 74-76: 50% Y, 4.2% 其它, 77-79: 50% Y, 4.2% 其它,

80-82: 50% T, 4.2% 其它, 83-85: 50% G, 4.2% 其它

<220>

<221> 混杂特征

<222> (54)..(58)

<223> n 是 a, c, g, 或 t

<220>

<221> 混杂特征

<222> (59)..(61)

<223> n 是 a, c, g 或 t

<220>

<221> 混杂特征

<222> (62)..(64)

<223> n 是 a, c, g 或 t

<220>

<221> 混杂特征

<222> (65)..(67)

<223> n 是 a, c, g 或 t

<220>

<221> 混杂特征

<222> (68)..(70)

<223> n 是 a, c, g 或 t

<220>

<221> 混杂特征

<222> (71)..(73)

<223> n 是 a, c, g 或 t

<220>

<221> 混杂特征

<222> (74)..(76)

<223> n 是 a, c, g 或 t

<220>

<221> 混杂特征

<222> (77)..(79)

<223> n 是 a, c, g 或 t

<220>

<221> 混杂特征

<222> (80)..(82)

<223> n 是 a, c, g 或 t

<220>

<221> 混杂特征

<222> (83)..(85)

<223> n 是 a, c, g 或 t

<400> 20

ttggtgctag cagagcttac ggtcaccgtg gtaccttggc cccagtaatc aaannnnnnn 60

nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn gcgtgcacaa标签taaacag cggtgtc 107

<210> 21

<211> 1615

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> SNAP标签人CD19 ECD - PDGFR DNA

<400> 21

ggccgccgct agcggcatcg actacaagga cgacgatgac aaggccggca tcgatgccat 60

catggacaaa gactgcgaaa tgaagcgcac caccctggat agccctctgg gcaagctgga 120

actgtctggg tgcgaacagg gcctgcacga gatcaagctg ctgggcaaag gaacatctgc 180

cgccgacgcc gtggaagtgc ctgccccagc cgccgtgctg ggcggaccag agccactgat 240

gcaggccacc gcctggctca acgcctactt tcaccagcct gaggccatcg aggagttccc 300

tgtgccagcc ctgcaccacc cagtgttcca gcaggagagc tttacccgcc aggtgctgtg 360

gaaactgctg aaagtggtga agttcggaga ggtcatcagc taccagcagc tggccgccct 420

ggccggcaat cccgccgcca ccgccgccgt gaaaaccgcc ctgagcggaa atcccgtgcc 480

cattctgatc ccctgccacc gggtggtgtc标签ctctggc gccgtggggg gctacgaggg 540

cgggctcgcc gtgaaagagt ggctgctggc ccacgagggc cacagactgg gcaagcctgg 600

gctgggtgat atccccgagg aacccctggt cgtgaaggtg gaagagggcg acaatgccgt 660

gctgcagtgc ctgaagggca cctccgatgg ccctacccag cagctgacct ggtccagaga 720

gagccccctg aagcccttcc tgaagctgtc tctgggcctg cctggcctgg gcatccatat 780

gaggcctctg gccatctggc tgttcatctt caacgtgtcc cagcagatgg gcggcttcta 840

cctgtgtcag cctggccccc catctgagaa ggcttggcag cctggctgga ccgtgaacgt 900

ggaaggatcc ggcgagctgt tccggtggaa cgtgtccgat ctgggcggcc tgggatgcgg 960

cctgaagaac agatctagcg agggccccag cagccccagc ggcaaactga tgagccccaa 1020

gctgtacgtg tgggccaagg acagacccga gatctgggag ggcgagcctc cttgcctgcc 1080

ccctagagac agcctgaacc agagcctgag ccaggacctg acaatggccc ctggcagcac 1140

actgtggctg agctgtggcg tgccacccga ctctgtgtct agaggccctc tgagctggac 1200

ccacgtgcac cctaagggcc ctaagagcct gctgagcctg gaactgaagg acgacaggcc 1260

cgccagagat atgtgggtca tggaaaccgg cctgctgctg cctagagcca cagcccagga 1320

tgccggcaag tactactgcc acagaggcaa cctgaccatg agcttccacc tggaaatcac 1380

cgccagaccc gtgctgtggc actggctgct gagaacaggc ggctggaagg tcgacgaaca 1440

aaaactcatc tcagaagagg atctgaatgc tgtgggccag gacacgcagg aggtcatcgt 1500

ggtgccacac tccttgccct ttaaggtggt ggtgatctca gccatcctgg ccctggtggt 1560

gctcaccatc atctccctta tcatcctcat catgctttgg cagaagaagc cacgt 1615

<210> 22

<211> 1620

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> SNAP标签食蟹猴CD19 ECD - PDGFR DNA

<400> 22

ccggccgccg ctagcggcat cgactacaag gacgacgatg acaaggccgg catcgatgcc 60

atcatggaca aagactgcga aatgaagcgc accaccctgg atagccctct gggcaagctg 120

gaactgtctg ggtgcgaaca gggcctgcac gagatcaagc tgctgggcaa aggaacatct 180

gccgccgacg ccgtggaagt gcctgcccca gccgccgtgc tgggcggacc agagccactg 240

atgcaggcca ccgcctggct caacgcctac tttcaccagc ctgaggccat cgaggagttc 300

cctgtgccag ccctgcacca cccagtgttc cagcaggaga gctttacccg ccaggtgctg 360

tggaaactgc tgaaagtggt gaagttcgga gaggtcatca gctaccagca gctggccgcc 420

ctggccggca atcccgccgc caccgccgcc gtgaaaaccg ccctgagcgg aaatcccgtg 480

cccattctga tcccctgcca ccgggtggtg tctagctctg gcgccgtggg gggctacgag 540

ggcgggctcg ccgtgaaaga gtggctgctg gcccacgagg gccacagact gggcaagcct 600

gggctgggtg atatccccca ggaacccctg gtcgtgaagg tggaagaggg cgacaatgcc 660

gtgctccagt gtctcgaggg cacctccgat ggccctacac agcagctcgt gtggtgcaga 720

gacagcccct tcgagccctt cctgaacctg tctctgggcc tgcctggcat gggcatcaga 780

atgggccctc tgggcatctg gctgctgatc ttcaacgtgt ccaaccagac cggcggcttc 840

tacctgtgtc agcctggcct gccaagcgag aaggcttggc agcctggatg gaccgtgtcc 900

gtggaaggat ctggcgagct gttccggtgg aacgtgtccg atctgggcgg cctgggatgc 960

ggcctgaaga acagaagcag cgagggccct agcagcccca gcggcaagct gaatagcagc 1020

cagctgtacg tgtgggccaa ggacagaccc gagatgtggg agggcgagcc tgtgtgtggc 1080

ccccctagag atagcctgaa ccagagcctg agccaggacc tgacaatggc ccctggcagc 1140

acactgtggc tgagctgtgg cgtgccaccc gactctgtgt ccagaggccc tctgagctgg 1200

acacacgtgc ggcctaaggg ccctaagagc agcctgctga gcctggaact gaaggacgac 1260

cggcccgacc gggatatgtg ggtggtggat acaggcctgc tgctgaccag agccacagcc 1320

caggatgccg gcaagtacta ctgccacaga ggcaactgga ccaagagctt ttacctggaa 1380

atcaccgcca gacccgccct gtggcactgg ctgctgagaa tcggaggctg gaaggtcgac 1440

gagcagaagc tgatctccga agaggacctg aacgccgtgg gccaggatac ccaggaagtg 1500

atcgtggtgc cccacagcct gcccttcaag gtggtcgtga tcagcgccat tctggccctg 1560

gtggtgctga ccatcatcag cctgatcatc ctgattatgc tgtggcagaa aaagccccgc 1620

<210> 23

<211> 539

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> SNAP标签人CD19 ECD - PDGFR

<400> 23

Pro Ala Ala Ala Ser Gly Ile Asp Tyr Lys Asp Asp Asp Asp Lys Ala

1 5 10 15

Gly Ile Asp Ala Ile Met Asp Lys Asp Cys Glu Met Lys Arg Thr Thr

20 25 30

Leu Asp Ser Pro Leu Gly Lys Leu Glu Leu Ser Gly Cys Glu Gln Gly

35 40 45

Leu His Glu Ile Lys Leu Leu Gly Lys Gly Thr Ser Ala Ala Asp Ala

50 55 60

Val Glu Val Pro Ala Pro Ala Ala Val Leu Gly Gly Pro Glu Pro Leu

65 70 75 80

Met Gln Ala Thr Ala Trp Leu Asn Ala Tyr Phe His Gln Pro Glu Ala

85 90 95

Ile Glu Glu Phe Pro Val Pro Ala Leu His His Pro Val Phe Gln Gln

100 105 110

Glu Ser Phe Thr Arg Gln Val Leu Trp Lys Leu Leu Lys Val Val Lys

115 120 125

Phe Gly Glu Val Ile Ser Tyr Gln Gln Leu Ala Ala Leu Ala Gly Asn

130 135 140

Pro Ala Ala Thr Ala Ala Val Lys Thr Ala Leu Ser Gly Asn Pro Val

145 150 155 160

Pro Ile Leu Ile Pro Cys His Arg Val Val Ser Ser Ser Gly Ala Val

165 170 175

Gly Gly Tyr Glu Gly Gly Leu Ala Val Lys Glu Trp Leu Leu Ala His

180 185 190

Glu Gly His Arg Leu Gly Lys Pro Gly Leu Gly Asp Ile Pro Glu Glu

195 200 205

Pro Leu Val Val Lys Val Glu Glu Gly Asp Asn Ala Val Leu Gln Cys

210 215 220

Leu Lys Gly Thr Ser Asp Gly Pro Thr Gln Gln Leu Thr Trp Ser Arg

225 230 235 240

Glu Ser Pro Leu Lys Pro Phe Leu Lys Leu Ser Leu Gly Leu Pro Gly

245 250 255

Leu Gly Ile His Met Arg Pro Leu Ala Ile Trp Leu Phe Ile Phe Asn

260 265 270

Val Ser Gln Gln Met Gly Gly Phe Tyr Leu Cys Gln Pro Gly Pro Pro

275 280 285

Ser Glu Lys Ala Trp Gln Pro Gly Trp Thr Val Asn Val Glu Gly Ser

290 295 300

Gly Glu Leu Phe Arg Trp Asn Val Ser Asp Leu Gly Gly Leu Gly Cys

305 310 315 320

Gly Leu Lys Asn Arg Ser Ser Glu Gly Pro Ser Ser Pro Ser Gly Lys

325 330 335

Leu Met Ser Pro Lys Leu Tyr Val Trp Ala Lys Asp Arg Pro Glu Ile

340 345 350

Trp Glu Gly Glu Pro Pro Cys Leu Pro Pro Arg Asp Ser Leu Asn Gln

355 360 365

Ser Leu Ser Gln Asp Leu Thr Met Ala Pro Gly Ser Thr Leu Trp Leu

370 375 380

Ser Cys Gly Val Pro Pro Asp Ser Val Ser Arg Gly Pro Leu Ser Trp

385 390 395 400

Thr His Val His Pro Lys Gly Pro Lys Ser Leu Leu Ser Leu Glu Leu

405 410 415

Lys Asp Asp Arg Pro Ala Arg Asp Met Trp Val Met Glu Thr Gly Leu

420 425 430

Leu Leu Pro Arg Ala Thr Ala Gln Asp Ala Gly Lys Tyr Tyr Cys His

435 440 445

Arg Gly Asn Leu Thr Met Ser Phe His Leu Glu Ile Thr Ala Arg Pro

450 455 460

Val Leu Trp His Trp Leu Leu Arg Thr Gly Gly Trp Lys Val Asp Glu

465 470 475 480

Gln Lys Leu Ile Ser Glu Glu Asp Leu Asn Ala Val Gly Gln Asp Thr

485 490 495

Gln Glu Val Ile Val Val Pro His Ser Leu Pro Phe Lys Val Val Val

500 505 510

Ile Ser Ala Ile Leu Ala Leu Val Val Leu Thr Ile Ile Ser Leu Ile

515 520 525

Ile Leu Ile Met Leu Trp Gln Lys Lys Pro Arg

530 535

<210> 24

<211> 540

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> SNAP标签食蟹猴CD19 ECD - PDGFR

<400> 24

Pro Ala Ala Ala Ser Gly Ile Asp Tyr Lys Asp Asp Asp Asp Lys Ala

1 5 10 15

Gly Ile Asp Ala Ile Met Asp Lys Asp Cys Glu Met Lys Arg Thr Thr

20 25 30

Leu Asp Ser Pro Leu Gly Lys Leu Glu Leu Ser Gly Cys Glu Gln Gly

35 40 45

Leu His Glu Ile Lys Leu Leu Gly Lys Gly Thr Ser Ala Ala Asp Ala

50 55 60

Val Glu Val Pro Ala Pro Ala Ala Val Leu Gly Gly Pro Glu Pro Leu

65 70 75 80

Met Gln Ala Thr Ala Trp Leu Asn Ala Tyr Phe His Gln Pro Glu Ala

85 90 95

Ile Glu Glu Phe Pro Val Pro Ala Leu His His Pro Val Phe Gln Gln

100 105 110

Glu Ser Phe Thr Arg Gln Val Leu Trp Lys Leu Leu Lys Val Val Lys

115 120 125

Phe Gly Glu Val Ile Ser Tyr Gln Gln Leu Ala Ala Leu Ala Gly Asn

130 135 140

Pro Ala Ala Thr Ala Ala Val Lys Thr Ala Leu Ser Gly Asn Pro Val

145 150 155 160

Pro Ile Leu Ile Pro Cys His Arg Val Val Ser Ser Ser Gly Ala Val

165 170 175

Gly Gly Tyr Glu Gly Gly Leu Ala Val Lys Glu Trp Leu Leu Ala His

180 185 190

Glu Gly His Arg Leu Gly Lys Pro Gly Leu Gly Asp Ile Pro Gln Glu

195 200 205

Pro Leu Val Val Lys Val Glu Glu Gly Asp Asn Ala Val Leu Gln Cys

210 215 220

Leu Glu Gly Thr Ser Asp Gly Pro Thr Gln Gln Leu Val Trp Cys Arg

225 230 235 240

Asp Ser Pro Phe Glu Pro Phe Leu Asn Leu Ser Leu Gly Leu Pro Gly

245 250 255

Met Gly Ile Arg Met Gly Pro Leu Gly Ile Trp Leu Leu Ile Phe Asn

260 265 270

Val Ser Asn Gln Thr Gly Gly Phe Tyr Leu Cys Gln Pro Gly Leu Pro

275 280 285

Ser Glu Lys Ala Trp Gln Pro Gly Trp Thr Val Ser Val Glu Gly Ser

290 295 300

Gly Glu Leu Phe Arg Trp Asn Val Ser Asp Leu Gly Gly Leu Gly Cys

305 310 315 320

Gly Leu Lys Asn Arg Ser Ser Glu Gly Pro Ser Ser Pro Ser Gly Lys

325 330 335

Leu Asn Ser Ser Gln Leu Tyr Val Trp Ala Lys Asp Arg Pro Glu Met

340 345 350

Trp Glu Gly Glu Pro Val Cys Gly Pro Pro Arg Asp Ser Leu Asn Gln

355 360 365

Ser Leu Ser Gln Asp Leu Thr Met Ala Pro Gly Ser Thr Leu Trp Leu

370 375 380

Ser Cys Gly Val Pro Pro Asp Ser Val Ser Arg Gly Pro Leu Ser Trp

385 390 395 400

Thr His Val Arg Pro Lys Gly Pro Lys Ser Ser Leu Leu Ser Leu Glu

405 410 415

Leu Lys Asp Asp Arg Pro Asp Arg Asp Met Trp Val Val Asp Thr Gly

420 425 430

Leu Leu Leu Thr Arg Ala Thr Ala Gln Asp Ala Gly Lys Tyr Tyr Cys

435 440 445

His Arg Gly Asn Trp Thr Lys Ser Phe Tyr Leu Glu Ile Thr Ala Arg

450 455 460

Pro Ala Leu Trp His Trp Leu Leu Arg Ile Gly Gly Trp Lys Val Asp

465 470 475 480

Glu Gln Lys Leu Ile Ser Glu Glu Asp Leu Asn Ala Val Gly Gln Asp

485 490 495

Thr Gln Glu Val Ile Val Val Pro His Ser Leu Pro Phe Lys Val Val

500 505 510

Val Ile Ser Ala Ile Leu Ala Leu Val Val Leu Thr Ile Ile Ser Leu

515 520 525

Ile Ile Leu Ile Met Leu Trp Gln Lys Lys Pro Arg

530 535 540

<210> 25

<211> 16

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CD19 (8B8-5H09) CDR-L1

<400> 25

Lys Ser Ser Gln Ser Leu Glu Ser Ser Thr Gly Asn Thr Tyr Leu Asn

1 5 10 15

<210> 26

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CD19(8B8-5H09) CDR-L2

<400> 26

Arg Val Ser Lys Arg Phe Ser

1 5

<210> 27

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CD19(8B8-5H09) CDR-L3

<400> 27

Leu Gln Leu Ile Asp Tyr Pro Val Thr

1 5

<210> 28

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CD19(8B8-5H09) CDR-H1

<400> 28

Asp Tyr Ile Met His

1 5

<210> 29

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CD19(8B8-5H09) CDR-H2

<400> 29

Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Ser Lys Tyr Thr Glu Lys Phe Gln

1 5 10 15

Gly

<210> 30

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CDR(8B8-5H09) CDR-H3

<400> 30

Gly Thr Tyr Tyr Tyr Gly Ser Ala Leu Phe Asp Tyr

1 5 10

<210> 31

<211> 16

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CD19(8B8-7H07) CDR-L1

<400> 31

Lys Ser Ser Gln Ser Leu Glu Thr Ser Thr Gly Asn Thr Tyr Leu Asn

1 5 10 15

<210> 32

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CD19 (8B8-7H07) CDR-L2

<400> 32

Arg Val Ser Lys Arg Phe Ser

1 5

<210> 33

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CD19 (8B8-7H07) CDR-L3

<400> 33

Leu Gln Ala Thr His Ile Pro Tyr Thr

1 5

<210> 34

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CD19 (8B8-7H07) CDR-H1

<400> 34

Asp Tyr Ile Met His

1 5

<210> 35

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CD19 (8B8-7H07) CDR-H2

<400> 35

Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Ser Lys Tyr Thr Glu Lys Phe Gln

1 5 10 15

Gly

<210> 36

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CD19 (8B8-7H07) CDR-H3

<400> 36

Gly Thr Tyr Tyr Tyr Gly Ser Glu Leu Phe Asp Tyr

1 5 10

<210> 37

<211> 16

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CD19 (8B8-2B03) CDR-L1

<400> 37

Lys Ser Ser Gln Ser Leu Glu Thr Ser Thr Gly Asn Thr Tyr Leu Asn

1 5 10 15

<210> 38

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CD19 (8B8-2B03) CDR-L2

<400> 38

Arg Val Ser Lys Arg Phe Ser

1 5

<210> 39

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CD19 (8B8-2B03) CDR-L3

<400> 39

Leu Gln Leu Thr His Val Pro Tyr Thr

1 5

<210> 40

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CD19 (8B8-2B03) CDR-H1

<400> 40

Asp Tyr Ile Thr His

1 5

<210> 41

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CD19 (8B8-2B03) CDR-H2

<400> 41

Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Ser Lys Tyr Thr Glu Lys Phe Gln

1 5 10 15

Gly

<210> 42

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CD19 (8B8-2B03) CDR-H3

<400> 42

Gly Thr Tyr Tyr Tyr Gly Pro Asp Leu Phe Asp Tyr

1 5 10

<210> 43

<211> 16

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CD19 (8B8-2B11) CDR-L1

<400> 43

Lys Ser Ser Gln Ser Leu Glu Thr Ser Thr Gly Thr Thr Tyr Leu Asn

1 5 10 15

<210> 44

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CD19 (8B8-2B11) CDR-L2

<400> 44

Arg Val Ser Lys Arg Phe Ser

1 5

<210> 45

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CD19 (8B8-2B11) CDR-L3

<400> 45

Leu Gln Leu Leu Glu Asp Pro Tyr Thr

1 5

<210> 46

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CD19 (8B8-2B11) CDR-H1

<400> 46

Asp Tyr Ile Met His

1 5

<210> 47

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CD19 (8B8-2B11) CDR-H2

<400> 47

Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Ser Lys Tyr Thr Glu Lys Phe Gln

1 5 10 15

Gly

<210> 48

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CD19 (8B8-2B11) CDR-H3

<400> 48

Gly Thr Tyr Tyr Tyr Gly Pro Gln Leu Phe Asp Tyr

1 5 10

<210> 49

<211> 16

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CD19 (8B8-5A07) CDR-L1

<400> 49

Lys Ser Ser Gln Ser Leu Glu Thr Ser Thr Gly Asn Thr Tyr Leu Asn

1 5 10 15

<210> 50

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CD19 (8B8-5A07) CDR-L2

<400> 50

Arg Val Ser Lys Arg Phe Ser

1 5

<210> 51

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CD19 (8B8-5A07) CDR-L3

<400> 51

Leu Gln Pro Gly His Tyr Pro Gly Thr

1 5

<210> 52

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CD19 (8B8-5A07) CDR-H1

<400> 52

Asp Tyr Ile Met His

1 5

<210> 53

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CD19 (8B8-5A07) CDR-H2

<400> 53

Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Ser Lys Tyr Thr Glu Lys Phe Gln

1 5 10 15

Gly

<210> 54

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CD19 (8B8-5A07) CDR-H3

<400> 54

Gly Thr Tyr Tyr Tyr Gly Ser Ala Leu Phe Asp Tyr

1 5 10

<210> 55

<211> 16

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CD19 (8B8-5B08) CDR-L1

<400> 55

Lys Ser Ser Gln Ser Leu Glu Thr Ser Thr Gly Asn Thr Tyr Leu Asn

1 5 10 15

<210> 56

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CD19 (8B8-5B08) CDR-L2

<400> 56

Arg Val Ser Lys Arg Phe Ser

1 5

<210> 57

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CD19 (8B8-5B08) CDR-L3

<400> 57

Leu Gln Leu Asp Ser Tyr Pro Asn Thr

1 5

<210> 58

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CD19 (8B8-5B08) CDR-H1

<400> 58

Asp Tyr Ile Met His

1 5

<210> 59

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CD19 (8B8-5B08) CDR-H2

<400> 59

Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Ser Lys Tyr Thr Glu Lys Phe Gln

1 5 10 15

Gly

<210> 60

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CD19 (8B8-5B08) CDR-H3

<400> 60

Gly Thr Tyr Tyr Tyr Gly Pro Gln Leu Phe Asp Tyr

1 5 10

<210> 61

<211> 16

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CD19 (8B8-5D08) CDR-L1

<400> 61

Lys Ser Ser Gln Ser Leu Glu Thr Ser Thr Gly Asn Thr Tyr Leu Asn

1 5 10 15

<210> 62

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CD19 (8B8-5D08) CDR-L2

<400> 62

Arg Val Ser Lys Arg Phe Ser

1 5

<210> 63

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CD19 (8B8-5D08) CDR-L3

<400> 63

Leu Gln Leu Thr His Glu Pro Tyr Thr

1 5

<210> 64

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CD19 (8B8-5D08) CDR-H1

<400> 64

Asp Tyr Ile Met His

1 5

<210> 65

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CD19 (8B8-5D08) CDR-H2

<400> 65

Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Ser Lys Tyr Thr Glu Lys Phe Gln

1 5 10 15

Gly

<210> 66

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CD19 (8B8-5D08) CDR-H3

<400> 66

Gly Thr Tyr Tyr Tyr Gly Ser Glu Leu Phe Asp Tyr

1 5 10

<210> 67

<211> 657

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> CD19 (8B8)亲本轻链DNA

<400> 67

gatgctgtga tgacccaaac tccactctcc ctgcctgtca gtcttggaga tcaagcctcc 60

atctcttgca ggtctagtca gagccttgaa aacagtaatg gaaacaccta tttgaactgg 120

tacctccaga aaccaggcca gtctccacaa ctcctgatct acagggtttc caaacgattt 180

tctggggtcc标签acaggtt cagtggtagt ggatcaggga cagatttcac actgaaaatc 240

agcagagtgg aggctgagga tttgggagtt tatttctgcc tacaacttac acatgtcccg 300

tacacgttcg gaggggggac caagctggaa ataaaacgta cggtggctgc accatctgtc 360

ttcatcttcc cgccatctga tgagcagttg aaatctggaa ctgcctctgt tgtgtgcctg 420

ctgaataact tctatcccag agaggccaaa gtacagtgga aggtggataa cgccctccaa 480

tcgggtaact cccaggagag tgtcacagag caggacagca aggacagcac ctacagcctc 540

agcagcaccc tgacgctgag caaagcagac tacgagaaac acaaagtcta cgcctgcgaa 600

gtcacccatc agggcctgag ctcgcccgtc acaaagagct tcaacagggg agagtgt 657

<210> 68

<211> 1353

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> CD19 (8B8)亲本重链DNA

<400> 68

gaggtccagc tgcagcagtc tggacctgag ctggtaaagc ctggggcttc agtgaagatg 60

gcctgcaagg cttctggata cacattcact gactatatta tgcactgggt gaagcagaag 120

actgggcagg gccttgagtg gattggatat attaatcctt acaatgatgg ttctaagtac 180

actgagaagt tcaacggcaa ggccacactg acttcagaca aatcttccat cacagcctac 240

atggagctca gcagcctgac ctctgaggac tctgcggtct attactgtgc aagagggacc 300

tattattatg gtagcgccct ctttgactac tggggccaag gcaccactct cacagtctcc 360

tcggctagca ccaagggccc atcggtcttc cccctggcac cctcctccaa gagcacctct 420

gggggcacag cggccctggg ctgcctggtc aaggactact tccccgaacc ggtgacggtg 480

tcgtggaact caggcgccct gaccagcggc gtgcacacct tcccggctgt cctacagtcc 540

tcaggactct actccctcag cagcgtggtg accgtgccct ccagcagctt gggcacccag 600

acctacatct gcaacgtgaa tcacaagccc agcaacacca aggtggacaa gaaagttgag 660

cccaaatctt gtgacaaaac tcacacatgc ccaccgtgcc cagcacctga agctgcaggg 720

ggaccgtcag tcttcctctt ccccccaaaa cccaaggaca ccctcatgat ctcccggacc 780

cctgaggtca catgcgtggt ggtggacgtg agccacgaag accctgaggt caagttcaac 840

tggtacgtgg acggcgtgga ggtgcataat gccaagacaa agccgcggga ggagcagtac 900

aacagcacgt accgtgtggt cagcgtcctc accgtcctgc accaggactg gctgaatggc 960

aaggagtaca agtgcaaggt ctccaacaaa gccctcggcg cccccatcga gaaaaccatc 1020

tccaaagcca aagggcagcc ccgagaacca caggtgtaca ccctgccccc atcccgggat 1080

gagctgacca agaaccaggt cagcctgacc tgcctggtca aaggcttcta tcccagcgac 1140

atcgccgtgg agtgggagag caatgggcag ccggagaaca actacaagac cacgcctccc 1200

gtgctggact ccgacggctc cttcttcctc tacagcaagc tcaccgtgga caagagcagg 1260

tggcagcagg ggaacgtctt ctcatgctcc gtgatgcatg aggctctgca caaccactac 1320

acgcagaaga gcctctccct gtctccgggt aaa 1353

<210> 69

<211> 219

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CD19 (8B8)亲本轻链

<400> 69

Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly

1 5 10 15

Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Glu Asn Ser

20 25 30

Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Asn Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser

35 40 45

Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Arg Val Ser Lys Arg Phe Ser Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile

65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Leu Gln Leu

85 90 95

Thr His Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105 110

Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu

115 120 125

Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe

130 135 140

Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln

145 150 155 160

Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser

165 170 175

Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu

180 185 190

Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser

195 200 205

Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys

210 215

<210> 70

<211> 451

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CD19 (8B8)亲本重链

<400> 70

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr

20 25 30

Ile Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Ser Lys Tyr Thr Glu Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Ser Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Gly Thr Tyr Tyr Tyr Gly Ser Ala Leu Phe Asp Tyr Trp Gly

100 105 110

Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser

115 120 125

Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala

130 135 140

Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val

145 150 155 160

Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala

165 170 175

Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val

180 185 190

Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His

195 200 205

Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys

210 215 220

Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly

225 230 235 240

Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met

245 250 255

Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His

260 265 270

Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val

275 280 285

His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr

290 295 300

Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly

305 310 315 320

Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile

325 330 335

Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val

340 345 350

Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser

355 360 365

Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu

370 375 380

Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro

385 390 395 400

Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val

405 410 415

Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met

420 425 430

His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser

435 440 445

Pro Gly Lys

450

<210> 71

<211> 657

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> CD19 (8B8-2B11)轻链DNA

<400> 71

gatattgtca tgactcaaac tccactgtct ctgtccgtga ccccgggtca gccagcgagc 60

atttcttgca aatccagcca atctctggaa acctccaccg gcaccacgta cctgaactgg 120

tatctccaga aaccgggtca gagcccgcag ctgctgatct accgtgtatc taagcgcttc 180

tccggcgttc ctgatcgttt cagcggttct ggatccggca ccgactttac tctgaaaatc 240

agccgtgtgg aagctgaaga cgttggcgtc tactattgtc tgcagctgct ggaagatcca 300

tacaccttcg gtcaaggaac gaaactggaa attaaacgta cggtggctgc accatctgtc 360

ttcatcttcc cgccatctga tgagcagttg aaatctggaa ctgcctctgt tgtgtgcctg 420

ctgaataact tctatcccag agaggccaaa gtacagtgga aggtggataa cgccctccaa 480

tcgggtaact cccaggagag tgtcacagag caggacagca aggacagcac ctacagcctc 540

agcagcaccc tgacgctgag caaagcagac tacgagaaac acaaagtcta cgcctgcgaa 600

gtcacccatc agggcctgag ctcgcccgtc acaaagagct tcaacagggg agagtgt 657

<210> 72

<211> 1353

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> CD19 (8B8-2B11)重链DNA

<400> 72

caggtgcaat tggttcaatc tggtgctgaa gtaaaaaaac cgggcgcttc cgttaaagtg 60

agctgcaaag catctggtta caccttcact gactatatca tgcactgggt tcgtcaggcc 120

ccgggccagg gtctggagtg gatgggctac attaacccat acaacgacgg ttccaaatat 180

accgagaaat tccagggccg cgtcacgatg accagcgaca cttctatctc caccgcgtac 240

atggaactgt ctagactgcg ttctgacgac accgctgttt actattgtgc acgcggtacc 300

tactactacg gtccacagct gtttgattac tggggccaag gtaccacggt gaccgtaagc 360

tctgctagca ccaagggccc atcggtcttc cccctggcac cctcctccaa gagcacctct 420

gggggcacag cggccctggg ctgcctggtc aaggactact tccccgaacc ggtgacggtg 480

tcgtggaact caggcgccct gaccagcggc gtgcacacct tcccggctgt cctacagtcc 540

tcaggactct actccctcag cagcgtggtg accgtgccct ccagcagctt gggcacccag 600

acctacatct gcaacgtgaa tcacaagccc agcaacacca aggtggacaa gaaagttgag 660

cccaaatctt gtgacaaaac tcacacatgc ccaccgtgcc cagcacctga agctgcaggg 720

ggaccgtcag tcttcctctt ccccccaaaa cccaaggaca ccctcatgat ctcccggacc 780

cctgaggtca catgcgtggt ggtggacgtg agccacgaag accctgaggt caagttcaac 840

tggtacgtgg acggcgtgga ggtgcataat gccaagacaa agccgcggga ggagcagtac 900

aacagcacgt accgtgtggt cagcgtcctc accgtcctgc accaggactg gctgaatggc 960

aaggagtaca agtgcaaggt ctccaacaaa gccctcggcg cccccatcga gaaaaccatc 1020

tccaaagcca aagggcagcc ccgagaacca caggtgtaca ccctgccccc atcccgggat 1080

gagctgacca agaaccaggt cagcctgacc tgcctggtca aaggcttcta tcccagcgac 1140

atcgccgtgg agtgggagag caatgggcag ccggagaaca actacaagac cacgcctccc 1200

gtgctggact ccgacggctc cttcttcctc tacagcaagc tcaccgtgga caagagcagg 1260

tggcagcagg ggaacgtctt ctcatgctcc gtgatgcatg aggctctgca caaccactac 1320

acgcagaaga gcctctccct gtctccgggt aaa 1353

<210> 73

<211> 219

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CD19 (8B8-2B11)轻链

<400> 73

Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly

1 5 10 15

Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Glu Thr Ser

20 25 30

Thr Gly Thr Thr Tyr Leu Asn Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser

35 40 45

Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Arg Val Ser Lys Arg Phe Ser Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile

65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Leu Gln Leu

85 90 95

Leu Glu Asp Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105 110

Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu

115 120 125

Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe

130 135 140

Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln

145 150 155 160

Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser

165 170 175

Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu

180 185 190

Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser

195 200 205

Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys

210 215

<210> 74

<211> 451

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CD19 (8B8-2B11)重链

<400> 74

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr

20 25 30

Ile Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Ser Lys Tyr Thr Glu Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Ser Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Gly Thr Tyr Tyr Tyr Gly Pro Gln Leu Phe Asp Tyr Trp Gly

100 105 110

Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser

115 120 125

Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala

130 135 140

Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val

145 150 155 160

Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala

165 170 175

Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val

180 185 190

Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His

195 200 205

Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys

210 215 220

Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly

225 230 235 240

Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met

245 250 255

Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His

260 265 270

Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val

275 280 285

His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr

290 295 300

Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly

305 310 315 320

Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile

325 330 335

Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val

340 345 350

Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser

355 360 365

Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu

370 375 380

Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro

385 390 395 400

Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val

405 410 415

Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met

420 425 430

His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser

435 440 445

Pro Gly Lys

450

<210> 75

<211> 657

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> CD19 (8B8-7H07)轻链DNA

<400> 75

gatattgtta tgactcaaac tccactgtct ctgtccgtga ccccgggtca gccagcgagc 60

atttcttgca aatccagcca atctctggaa acctccaccg gcaacacgta cctgaactgg 120

tatctccaga aaccgggtca gagcccgcag ctgctgatct accgtgtatc taagcgcttc 180

tccggcgttc ctgatcgttt cagcggttct ggatccggca ccgactttac tctgaaaatc 240

agccgtgtgg aagctgaaga cgttggcgtc tactattgtc tgcaggcaac ccatatccca 300

tacaccttcg gtcaaggaac taaactggaa attaaacgta cggtggctgc accatctgtc 360

ttcatcttcc cgccatctga tgagcagttg aaatctggaa ctgcctctgt tgtgtgcctg 420

ctgaataact tctatcccag agaggccaaa gtacagtgga aggtggataa cgccctccaa 480

tcgggtaact cccaggagag tgtcacagag caggacagca aggacagcac ctacagcctc 540

agcagcaccc tgacgctgag caaagcagac tacgagaaac acaaagtcta cgcctgcgaa 600

gtcacccatc agggcctgag ctcgcccgtc acaaagagct tcaacagggg agagtgt 657

<210> 76

<211> 1353

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> CD19 (8B8-7H07)重链DNA

<400> 76

caggtgcaat tggttcaatc tggtgctgaa gtaaaaaaac cgggcgcttc cgttaaagtg 60

agctgcaaag catctggtta caccttcact gactatatca tgcactgggt tcgtcaggcc 120

ccgggccagg gtctggagtg gatgggctac attaacccat acaacgacgg ttccaaatat 180

accgagaaat tccagggccg cgtcacgatg accagcgaca cttctatctc caccgcgtac 240

atggaactgt ctagactgcg ttctgacgac accgctgttt actattgtgc acgcggtacc 300

tactactacg gttctgaact gtttgattac tggggccaag gtaccacggt gaccgtaagc 360

tctgctagca ccaagggccc atcggtcttc cccctggcac cctcctccaa gagcacctct 420

gggggcacag cggccctggg ctgcctggtc aaggactact tccccgaacc ggtgacggtg 480

tcgtggaact caggcgccct gaccagcggc gtgcacacct tcccggctgt cctacagtcc 540

tcaggactct actccctcag cagcgtggtg accgtgccct ccagcagctt gggcacccag 600

acctacatct gcaacgtgaa tcacaagccc agcaacacca aggtggacaa gaaagttgag 660

cccaaatctt gtgacaaaac tcacacatgc ccaccgtgcc cagcacctga agctgcaggg 720

ggaccgtcag tcttcctctt ccccccaaaa cccaaggaca ccctcatgat ctcccggacc 780

cctgaggtca catgcgtggt ggtggacgtg agccacgaag accctgaggt caagttcaac 840

tggtacgtgg acggcgtgga ggtgcataat gccaagacaa agccgcggga ggagcagtac 900

aacagcacgt accgtgtggt cagcgtcctc accgtcctgc accaggactg gctgaatggc 960

aaggagtaca agtgcaaggt ctccaacaaa gccctcggcg cccccatcga gaaaaccatc 1020

tccaaagcca aagggcagcc ccgagaacca caggtgtaca ccctgccccc atcccgggat 1080

gagctgacca agaaccaggt cagcctgacc tgcctggtca aaggcttcta tcccagcgac 1140

atcgccgtgg agtgggagag caatgggcag ccggagaaca actacaagac cacgcctccc 1200

gtgctggact ccgacggctc cttcttcctc tacagcaagc tcaccgtgga caagagcagg 1260

tggcagcagg ggaacgtctt ctcatgctcc gtgatgcatg aggctctgca caaccactac 1320

acgcagaaga gcctctccct gtctccgggt aaa 1353

<210> 77

<211> 219

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CD19 (8B8-7H07)轻链

<400> 77

Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly

1 5 10 15

Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Glu Thr Ser

20 25 30

Thr Gly Asn Thr Tyr Leu Asn Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser

35 40 45

Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Arg Val Ser Lys Arg Phe Ser Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile

65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Leu Gln Ala

85 90 95

Thr His Ile Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105 110

Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu

115 120 125

Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe

130 135 140

Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln

145 150 155 160

Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser

165 170 175

Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu

180 185 190

Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser

195 200 205

Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys

210 215

<210> 78

<211> 451

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CD19 (8B8-7H07)重链

<400> 78

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr

20 25 30

Ile Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Ser Lys Tyr Thr Glu Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Ser Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Gly Thr Tyr Tyr Tyr Gly Ser Glu Leu Phe Asp Tyr Trp Gly

100 105 110

Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser

115 120 125

Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala

130 135 140

Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val

145 150 155 160

Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala

165 170 175

Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val

180 185 190

Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His

195 200 205

Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys

210 215 220

Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly

225 230 235 240

Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met

245 250 255

Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His

260 265 270

Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val

275 280 285

His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr

290 295 300

Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly

305 310 315 320

Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile

325 330 335

Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val

340 345 350

Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser

355 360 365

Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu

370 375 380

Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro

385 390 395 400

Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val

405 410 415

Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met

420 425 430

His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser

435 440 445

Pro Gly Lys

450

<210> 79

<211> 657

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> CD19 (8B8-2B03)轻链DNA

<220>

<221> 混杂特征

<222> (320)..(321)

<223> n 是 a, c, g, 或 t

<400> 79

gatattgtta tgactcaaac tccactgtct ctgtccgtga ccccgggtca gccagcgagc 60

atttcttgca aatccagcca atctctggaa acctccaccg gcaacacgta cctgaactgg 120

tatctccaga aaccgggtca gagcccgcag ctgctgatct accgtgtatc taagcgcttc 180

tccggcgttc ctgatcgttt cagcggttct ggatccggca ccgactttac tctgaaaatc 240

agccgtgtgg aagctgaaga cgttggcgtc tactattgtc tgcagttgac ccacgttccg 300

tacaccttcg gtcaaggaan naaactggaa attaaacgta cggtggctgc accatctgtc 360

ttcatcttcc cgccatctga tgagcagttg aaatctggaa ctgcctctgt tgtgtgcctg 420

ctgaataact tctatcccag agaggccaaa gtacagtgga aggtggataa cgccctccaa 480

tcgggtaact cccaggagag tgtcacagag caggacagca aggacagcac ctacagcctc 540

agcagcaccc tgacgctgag caaagcagac tacgagaaac acaaagtcta cgcctgcgaa 600

gtcacccatc agggcctgag ctcgcccgtc acaaagagct tcaacagggg agagtgt 657

<210> 80

<211> 1353

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> CD19 (8B8-2B03)重链DNA

<400> 80

caggtgcaat tggttcaatc tggtgctgaa gtaaaaaaac cgggcgcttc cgttaaagtg 60

agctgcaaag catctggtta caccttcact gactatatca cgcactgggt tcgtcaggcc 120

ccgggccagg gtctggagtg gatgggctac attaacccat acaacgacgg ttccaaatat 180

accgagaaat tccagggccg cgtcacgatg accagcgaca cttctatctc caccgcgtac 240

atggaactgt ctagactgcg ttctgacgac accgctgttt actattgtgc acgcggtacc 300

tactactacg gtccagatct gtttgattac tggggccaag gtaccacggt gaccgtaagc 360

tctgctagca ccaagggccc atcggtcttc cccctggcac cctcctccaa gagcacctct 420

gggggcacag cggccctggg ctgcctggtc aaggactact tccccgaacc ggtgacggtg 480

tcgtggaact caggcgccct gaccagcggc gtgcacacct tcccggctgt cctacagtcc 540

tcaggactct actccctcag cagcgtggtg accgtgccct ccagcagctt gggcacccag 600

acctacatct gcaacgtgaa tcacaagccc agcaacacca aggtggacaa gaaagttgag 660

cccaaatctt gtgacaaaac tcacacatgc ccaccgtgcc cagcacctga agctgcaggg 720

ggaccgtcag tcttcctctt ccccccaaaa cccaaggaca ccctcatgat ctcccggacc 780

cctgaggtca catgcgtggt ggtggacgtg agccacgaag accctgaggt caagttcaac 840

tggtacgtgg acggcgtgga ggtgcataat gccaagacaa agccgcggga ggagcagtac 900

aacagcacgt accgtgtggt cagcgtcctc accgtcctgc accaggactg gctgaatggc 960

aaggagtaca agtgcaaggt ctccaacaaa gccctcggcg cccccatcga gaaaaccatc 1020

tccaaagcca aagggcagcc ccgagaacca caggtgtaca ccctgccccc atcccgggat 1080

gagctgacca agaaccaggt cagcctgacc tgcctggtca aaggcttcta tcccagcgac 1140

atcgccgtgg agtgggagag caatgggcag ccggagaaca actacaagac cacgcctccc 1200

gtgctggact ccgacggctc cttcttcctc tacagcaagc tcaccgtgga caagagcagg 1260

tggcagcagg ggaacgtctt ctcatgctcc gtgatgcatg aggctctgca caaccactac 1320

acgcagaaga gcctctccct gtctccgggt aaa 1353

<210> 81

<211> 219

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CD19 (8B8-2B03)轻链

<220>

<221> 混杂特征

<222> (107)..(107)

<223> Xaa可以是任何天然发生氨基酸

<400> 81

Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly

1 5 10 15

Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Glu Thr Ser

20 25 30

Thr Gly Asn Thr Tyr Leu Asn Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser

35 40 45

Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Arg Val Ser Lys Arg Phe Ser Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile

65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Leu Gln Leu

85 90 95

Thr His Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Xaa Lys Leu Glu Ile Lys

100 105 110

Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu

115 120 125

Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe

130 135 140

Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln

145 150 155 160

Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser

165 170 175

Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu

180 185 190

Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser

195 200 205

Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys

210 215

<210> 82

<211> 451

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CD19 (8B8-2B03)重链

<400> 82

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr

20 25 30

Ile Thr His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Ser Lys Tyr Thr Glu Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Ser Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Gly Thr Tyr Tyr Tyr Gly Pro Asp Leu Phe Asp Tyr Trp Gly

100 105 110

Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser

115 120 125

Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala

130 135 140

Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val

145 150 155 160

Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala

165 170 175

Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val

180 185 190

Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His

195 200 205

Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys

210 215 220

Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly

225 230 235 240

Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met

245 250 255

Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His

260 265 270

Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val

275 280 285

His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr

290 295 300

Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly

305 310 315 320

Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile

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Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly

225 230 235 240

Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met

245 250 255

Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His

260 265 270

Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val

275 280 285

His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr

290 295 300

Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly

305 310 315 320

Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile

325 330 335

Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val

340 345 350

Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser

355 360 365

Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu

370 375 380

Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro

385 390 395 400

Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val

405 410 415

Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met

420 425 430

His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser

435 440 445

Pro Gly Lys

450

<210> 95

<211> 657

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> CD19 (8B8-5H09)轻链DNA

<400> 95

gatattgtta tgactcaaac tccactgtct ctgtccgtga ccccgggtca gccagcgagc 60

atttcttgca aatccagcca atctctggaa tcttccaccg gcaacacgta cctgaactgg 120

tatctccaga aaccgggtca gagcccgcag ctgctgatct accgtgtatc taagcgcttc 180

tccggcgttc ctgatcgttt cagcggttct ggatccggca ccgactttac tctgaaaatc 240

agccgtgtgg aagctgaaga cgttggcgtc tactattgtc tgcagctgat cgattaccca 300

gttaccttcg gtcaaggaac taaactggaa attaaacgta cggtggctgc accatctgtc 360

ttcatcttcc cgccatctga tgagcagttg aaatctggaa ctgcctctgt tgtgtgcctg 420

ctgaataact tctatcccag agaggccaaa gtacagtgga aggtggataa cgccctccaa 480

tcgggtaact cccaggagag tgtcacagag caggacagca aggacagcac ctacagcctc 540

agcagcaccc tgacgctgag caaagcagac tacgagaaac acaaagtcta cgcctgcgaa 600

gtcacccatc agggcctgag ctcgcccgtc acaaagagct tcaacagggg agagtgt 657

<210> 96

<211> 1353

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> CD19 (8B8-5H09)重链DNA

<400> 96

caggtgcaat tggttcaatc tggtgctgaa gtaaaaaaac cgggcgcttc cgttaaagtg 60

agctgcaaag catctggtta caccttcact gactatatca tgcactgggt tcgtcaggcc 120

ccgggccagg gtctggagtg gatgggctac attaacccat acaacgacgg ttccaaatat 180

accgagaaat tccagggccg cgtcacgatg accagcgaca cttctatctc caccgcgtac 240

atggaactgt ctagactgcg ttctgacgac accgctgttt actattgtgc acgcggtacc 300

tactactacg gttctgcact gtttgattac tggggccaag gtaccacggt gaccgtaagc 360

tctgctagca ccaagggccc atcggtcttc cccctggcac cctcctccaa gagcacctct 420

gggggcacag cggccctggg ctgcctggtc aaggactact tccccgaacc ggtgacggtg 480

tcgtggaact caggcgccct gaccagcggc gtgcacacct tcccggctgt cctacagtcc 540

tcaggactct actccctcag cagcgtggtg accgtgccct ccagcagctt gggcacccag 600

acctacatct gcaacgtgaa tcacaagccc agcaacacca aggtggacaa gaaagttgag 660

cccaaatctt gtgacaaaac tcacacatgc ccaccgtgcc cagcacctga agctgcaggg 720

ggaccgtcag tcttcctctt ccccccaaaa cccaaggaca ccctcatgat ctcccggacc 780

cctgaggtca catgcgtggt ggtggacgtg agccacgaag accctgaggt caagttcaac 840

tggtacgtgg acggcgtgga ggtgcataat gccaagacaa agccgcggga ggagcagtac 900

aacagcacgt accgtgtggt cagcgtcctc accgtcctgc accaggactg gctgaatggc 960

aaggagtaca agtgcaaggt ctccaacaaa gccctcggcg cccccatcga gaaaaccatc 1020

tccaaagcca aagggcagcc ccgagaacca caggtgtaca ccctgccccc atcccgggat 1080

gagctgacca agaaccaggt cagcctgacc tgcctggtca aaggcttcta tcccagcgac 1140

atcgccgtgg agtgggagag caatgggcag ccggagaaca actacaagac cacgcctccc 1200

gtgctggact ccgacggctc cttcttcctc tacagcaagc tcaccgtgga caagagcagg 1260

tggcagcagg ggaacgtctt ctcatgctcc gtgatgcatg aggctctgca caaccactac 1320

acgcagaaga gcctctccct gtctccgggt aaa 1353

<210> 97

<211> 219

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CD19 (8B8-5H09)轻链

<400> 97

Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly

1 5 10 15

Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Glu Ser Ser

20 25 30

Thr Gly Asn Thr Tyr Leu Asn Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser

35 40 45

Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Arg Val Ser Lys Arg Phe Ser Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile

65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Leu Gln Leu

85 90 95

Ile Asp Tyr Pro Val Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105 110

Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu

115 120 125

Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe

130 135 140

Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln

145 150 155 160

Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser

165 170 175

Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu

180 185 190

Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser

195 200 205

Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys

210 215

<210> 98

<211> 451

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CD19 (8B8-5H09)重链

<400> 98

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr

20 25 30

Ile Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Ser Lys Tyr Thr Glu Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Ser Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Gly Thr Tyr Tyr Tyr Gly Ser Ala Leu Phe Asp Tyr Trp Gly

100 105 110

Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser

115 120 125

Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala

130 135 140

Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val

145 150 155 160

Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala

165 170 175

Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val

180 185 190

Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His

195 200 205

Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys

210 215 220

Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly

225 230 235 240

Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met

245 250 255

Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His

260 265 270

Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val

275 280 285

His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr

290 295 300

Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly

305 310 315 320

Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile

325 330 335

Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val

340 345 350

Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser

355 360 365

Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu

370 375 380

Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro

385 390 395 400

Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val

405 410 415

Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met

420 425 430

His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser

435 440 445

Pro Gly Lys

450

<210> 99

<211> 121

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CD19 (8B8-2B11) VH

<400> 99

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr

20 25 30

Ile Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Ser Lys Tyr Thr Glu Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Ser Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Gly Thr Tyr Tyr Tyr Gly Pro Gln Leu Phe Asp Tyr Trp Gly

100 105 110

Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 100

<211> 112

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CD19 (8B8-2B11) VL

<400> 100

Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly

1 5 10 15

Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Glu Thr Ser

20 25 30

Thr Gly Thr Thr Tyr Leu Asn Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser

35 40 45

Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Arg Val Ser Lys Arg Phe Ser Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile

65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Leu Gln Leu

85 90 95

Leu Glu Asp Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105 110

<210> 101

<211> 121

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CD19 (8B8-7H07) VH

<400> 101

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr

20 25 30

Ile Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Ser Lys Tyr Thr Glu Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Ser Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Gly Thr Tyr Tyr Tyr Gly Ser Glu Leu Phe Asp Tyr Trp Gly

100 105 110

Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 102

<211> 112

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CD19 (8B8-7H07) VL

<400> 102

Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly

1 5 10 15

Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Glu Thr Ser

20 25 30

Thr Gly Asn Thr Tyr Leu Asn Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser

35 40 45

Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Arg Val Ser Lys Arg Phe Ser Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile

65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Leu Gln Ala

85 90 95

Thr His Ile Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105 110

<210> 103

<211> 121

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CD19 (8B8-2B03) VH

<400> 103

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr

20 25 30

Ile Thr His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Ser Lys Tyr Thr Glu Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Ser Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Gly Thr Tyr Tyr Tyr Gly Pro Asp Leu Phe Asp Tyr Trp Gly

100 105 110

Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 104

<211> 112

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CD19 (8B8-2B03) VL

<220>

<221> 混杂特征

<222> (107)..(107)

<223> Xaa可以是任何天然发生氨基酸

<400> 104

Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly

1 5 10 15

Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Glu Thr Ser

20 25 30

Thr Gly Asn Thr Tyr Leu Asn Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser

35 40 45

Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Arg Val Ser Lys Arg Phe Ser Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile

65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Leu Gln Leu

85 90 95

Thr His Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Xaa Lys Leu Glu Ile Lys

100 105 110

<210> 105

<211> 121

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CD19 (8B8-5A07) VH

<400> 105

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr

20 25 30

Ile Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Ser Lys Tyr Thr Glu Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Ser Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Gly Thr Tyr Tyr Tyr Gly Ser Ala Leu Phe Asp Tyr Trp Gly

100 105 110

Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 106

<211> 112

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CD19 (8B8-5A07) VL

<400> 106

Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly

1 5 10 15

Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Glu Thr Ser

20 25 30

Thr Gly Asn Thr Tyr Leu Asn Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser

35 40 45

Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Arg Val Ser Lys Arg Phe Ser Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile

65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Leu Gln Pro

85 90 95

Gly His Tyr Pro Gly Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105 110

<210> 107

<211> 121

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CD19 (8B8-5D08) VH

<400> 107

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr

20 25 30

Ile Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Ser Lys Tyr Thr Glu Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Ser Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Gly Thr Tyr Tyr Tyr Gly Ser Glu Leu Phe Asp Tyr Trp Gly

100 105 110

Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 108

<211> 112

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CD19 (8B8-5D08) VL

<400> 108

Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly

1 5 10 15

Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Glu Thr Ser

20 25 30

Thr Gly Asn Thr Tyr Leu Asn Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser

35 40 45

Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Arg Val Ser Lys Arg Phe Ser Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile

65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Leu Gln Leu

85 90 95

Thr His Glu Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105 110

<210> 109

<211> 121

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CD19 (8B8-5B08) VH

<400> 109

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr

20 25 30

Ile Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Ser Lys Tyr Thr Glu Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Ser Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Gly Thr Tyr Tyr Tyr Gly Pro Gln Leu Phe Asp Tyr Trp Gly

100 105 110

Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 110

<211> 112

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CD19 (8B8-5B08) VL

<400> 110

Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly

1 5 10 15

Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Glu Thr Ser

20 25 30

Thr Gly Asn Thr Tyr Leu Asn Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser

35 40 45

Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Arg Val Ser Lys Arg Phe Ser Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile

65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Leu Gln Leu

85 90 95

Asp Ser Tyr Pro Asn Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105 110

<210> 111

<211> 121

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CD19 (8B8-5H09) VH

<400> 111

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr

20 25 30

Ile Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Ser Lys Tyr Thr Glu Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Ser Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Gly Thr Tyr Tyr Tyr Gly Ser Ala Leu Phe Asp Tyr Trp Gly

100 105 110

Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 112

<211> 112

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CD19 (8B8-5H09) VL

<400> 112

Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly

1 5 10 15

Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Glu Ser Ser

20 25 30

Thr Gly Asn Thr Tyr Leu Asn Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser

35 40 45

Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Arg Val Ser Lys Arg Phe Ser Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile

65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Leu Gln Leu

85 90 95

Ile Asp Tyr Pro Val Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105 110

<210> 113

<211> 121

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CD19 (8B8) VH

<400> 113

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr

20 25 30

Ile Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Ser Lys Tyr Thr Glu Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Ser Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Gly Thr Tyr Tyr Tyr Gly Ser Ala Leu Phe Asp Tyr Trp Gly

100 105 110

Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 114

<211> 112

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CD19 (8B8) VL

<400> 114

Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly

1 5 10 15

Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Glu Asn Ser

20 25 30

Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Asn Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser

35 40 45

Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Arg Val Ser Lys Arg Phe Ser Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile

65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Leu Gln Leu

85 90 95

Thr His Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105 110

<210> 115

<211> 556

<212> PRT

<213> 人（Homo sapiens）

<400> 115

Met Pro Pro Pro Arg Leu Leu Phe Phe Leu Leu Phe Leu Thr Pro Met

1 5 10 15

Glu Val Arg Pro Glu Glu Pro Leu Val Val Lys Val Glu Glu Gly Asp

20 25 30

Asn Ala Val Leu Gln Cys Leu Lys Gly Thr Ser Asp Gly Pro Thr Gln

35 40 45

Gln Leu Thr Trp Ser Arg Glu Ser Pro Leu Lys Pro Phe Leu Lys Leu

50 55 60

Ser Leu Gly Leu Pro Gly Leu Gly Ile His Met Arg Pro Leu Ala Ile

65 70 75 80

Trp Leu Phe Ile Phe Asn Val Ser Gln Gln Met Gly Gly Phe Tyr Leu

85 90 95

Cys Gln Pro Gly Pro Pro Ser Glu Lys Ala Trp Gln Pro Gly Trp Thr

100 105 110

Val Asn Val Glu Gly Ser Gly Glu Leu Phe Arg Trp Asn Val Ser Asp

115 120 125

Leu Gly Gly Leu Gly Cys Gly Leu Lys Asn Arg Ser Ser Glu Gly Pro

130 135 140

Ser Ser Pro Ser Gly Lys Leu Met Ser Pro Lys Leu Tyr Val Trp Ala

145 150 155 160

Lys Asp Arg Pro Glu Ile Trp Glu Gly Glu Pro Pro Cys Leu Pro Pro

165 170 175

Arg Asp Ser Leu Asn Gln Ser Leu Ser Gln Asp Leu Thr Met Ala Pro

180 185 190

Gly Ser Thr Leu Trp Leu Ser Cys Gly Val Pro Pro Asp Ser Val Ser

195 200 205

Arg Gly Pro Leu Ser Trp Thr His Val His Pro Lys Gly Pro Lys Ser

210 215 220

Leu Leu Ser Leu Glu Leu Lys Asp Asp Arg Pro Ala Arg Asp Met Trp

225 230 235 240

Val Met Glu Thr Gly Leu Leu Leu Pro Arg Ala Thr Ala Gln Asp Ala

245 250 255

Gly Lys Tyr Tyr Cys His Arg Gly Asn Leu Thr Met Ser Phe His Leu

260 265 270

Glu Ile Thr Ala Arg Pro Val Leu Trp His Trp Leu Leu Arg Thr Gly

275 280 285

Gly Trp Lys Val Ser Ala Val Thr Leu Ala Tyr Leu Ile Phe Cys Leu

290 295 300

Cys Ser Leu Val Gly Ile Leu His Leu Gln Arg Ala Leu Val Leu Arg

305 310 315 320

Arg Lys Arg Lys Arg Met Thr Asp Pro Thr Arg Arg Phe Phe Lys Val

325 330 335

Thr Pro Pro Pro Gly Ser Gly Pro Gln Asn Gln Tyr Gly Asn Val Leu

340 345 350

Ser Leu Pro Thr Pro Thr Ser Gly Leu Gly Arg Ala Gln Arg Trp Ala

355 360 365

Ala Gly Leu Gly Gly Thr Ala Pro Ser Tyr Gly Asn Pro Ser Ser Asp

370 375 380

Val Gln Ala Asp Gly Ala Leu Gly Ser Arg Ser Pro Pro Gly Val Gly

385 390 395 400

Pro Glu Glu Glu Glu Gly Glu Gly Tyr Glu Glu Pro Asp Ser Glu Glu

405 410 415

Asp Ser Glu Phe Tyr Glu Asn Asp Ser Asn Leu Gly Gln Asp Gln Leu

420 425 430

Ser Gln Asp Gly Ser Gly Tyr Glu Asn Pro Glu Asp Glu Pro Leu Gly

435 440 445

Pro Glu Asp Glu Asp Ser Phe Ser Asn Ala Glu Ser Tyr Glu Asn Glu

450 455 460

Asp Glu Glu Leu Thr Gln Pro Val Ala Arg Thr Met Asp Phe Leu Ser

465 470 475 480

Pro His Gly Ser Ala Trp Asp Pro Ser Arg Glu Ala Thr Ser Leu Gly

485 490 495

Ser Gln Ser Tyr Glu Asp Met Arg Gly Ile Leu Tyr Ala Ala Pro Gln

500 505 510

Leu Arg Ser Ile Arg Gly Gln Pro Gly Pro Asn His Glu Glu Asp Ala

515 520 525

Asp Ser Tyr Glu Asn Met Asp Asn Pro Asp Gly Pro Asp Pro Ala Trp

530 535 540

Gly Gly Gly Gly Arg Met Gly Thr Trp Ser Thr Arg

545 550 555

Claims

1.一种特异性结合人CD19的抗体，其中该抗体包含

(a)如SEQ ID NO:43的氨基酸序列所示的CDR-L1，

(b)如SEQ ID NO:44的氨基酸序列所示的CDR-L2，

(c)如SEQ ID NO:45的氨基酸序列所示的CDR-L3，

(d)如SEQ ID NO:46的氨基酸序列所示的CDR-H1，

(e)如SEQ ID NO:47的氨基酸序列所示的CDR-H2，和

(f)如SEQ ID NO:48的氨基酸序列所示的CDR-H3。

2.依照权利要求1的抗体，其中该抗体是单克隆抗体。

3.依照权利要求1的抗体，其中该抗体是人源化抗体。

4.依照权利要求1的抗体，其中该抗体是特异性结合人CD19的Fab片段。

5.依照权利要求1至4任一项的抗体，其中该抗体包含如SEQ ID NO:99的氨基酸序列所示的VH域和如SEQ ID NO:100的氨基酸序列所示的VL域。

6.依照权利要求1的抗体，其是全长IgG1抗体。

7.依照权利要求6的抗体，其是具有编号方式依照Kabat的EU索引的突变L234A，L235A和P329G的全长IgG1抗体。

8.依照权利要求1的抗体，其中所述抗体是双特异性的且特异性结合人CD19和第二抗原结合模块。

9.一种多核苷酸，其编码依照权利要求1至8任一项的抗体。

10.一种载体，其包含依照权利要求9的多核苷酸。

11.依照权利要求10的载体，其中该载体是表达载体。

12.一种宿主细胞，其包含权利要求9的多核苷酸或权利要求10或11的载体。

13.一种生成依照权利要求1至8任一项的抗体的方法，其包括下述步骤：(i)在适合于该抗体表达的条件下培养依照权利要求12的宿主细胞，并(ii)回收该抗体。

14.一种药物组合物，其包含依照权利要求1至8任一项的抗体和药学可接受载剂。

15.依照权利要求1至8任一项的抗体在制造用于治疗B细胞癌症的药物中的用途。