CN108126522B - 分离芯片、分离装置及分离液体样本中目标颗粒的方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供一种分离芯片，其包括：样本池，所述样本池包括第一侧面和第二侧面，所述第一侧面与所述第二侧面相对，所述第一侧面设置有第一过滤膜，所述第二侧面设置有第二过滤膜；第一腔室，所述第一腔室与所述样本池通过所述第一过滤膜相连通，所述第一腔室设置有第一开口，所述第一开口用于使所述第一腔室与外界连通；第二腔室，所述第二腔室与所述样本池通过所述第二过滤膜相连通，所述第二腔室设置有第二开口，所述第二开口用于使所述第二腔室与外界连通。本发明还提供一种分离液体样本中目标颗粒的分离装置及方法。

Description

分离芯片、分离装置及分离液体样本中目标颗粒的方法

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体地，涉及一种用于分离液体样本中目标颗粒的分离芯片、分离装置及分离方法。

背景技术

液体活检(liquid biopsy或fluid biopsy)，是一种能够全面、实时地反映肿瘤细胞或组织生物信息的采样和分析方法。液体活检具有非侵入性的优点，通过分离、分析血液或其他体液(尿液、唾液、胸腔积液、脑脊液等)中特定的研究对象对肿瘤进行动态观察，可以指导医护人员对肿瘤进行筛查、诊断、判断预后、选择治疗方案和监测复发等。液体活检中的特定研究对象包括循环肿瘤DNA(circulating tumor DNA,ctDNA)、循环肿瘤细胞(circulating tumor cell,CTC)、微泡(又称外泌体，exosome)等。

现有技术中一般采用离心、免疫捕获或过滤等方法分离、纯化血液或体液中的循环肿瘤细胞和/或外泌体。离心的分离方法对循环肿瘤细胞(或外泌体)的膜结构会造成一定程度的机械损伤，影响后续的分析研究，且离心造作繁琐对液体活检的通量造成限制。免疫捕获的分离方法需要利用抗体，大幅度提高样本处理成本，且免疫捕获后的洗脱条件可能会对循环肿瘤细胞(或外泌体)的活性产生影响。利用过滤膜过滤的分离方法可以有效地分离体液中不同尺寸的组分，具有低成本、高通量的特点，过滤后得到的目标成分能保持很高的生物活性。但是，在实际操作过程中，过滤膜上易于富集生物样本中的部分组分，其中大于膜孔尺寸的组分会堵塞膜孔。膜孔堵塞会使小于膜孔尺寸的组分不能有效地透过过滤膜，影响分离后目标成分的纯度。膜孔堵塞也会造成局部压力过大，甚至导致过滤膜破裂。

发明内容

鉴于以上内容，有必要提供一种可以降低过滤分离过程中发生过滤膜堵孔现象的分离芯片、分离装置及分离方法。

本发明首先提供一种分离芯片，其包括：

样本池，所述样本池包括第一侧面和第二侧面，所述第一侧面与所述第二侧面相对，所述第一侧面设置有第一过滤膜，所述第二侧面设置有第二过滤膜；

第一腔室，所述第一腔室与所述样本池通过所述第一过滤膜相连通，所述第一腔室设置有第一开口，所述第一开口用于使所述第一腔室与外界连通；

第二腔室，所述第二腔室与所述样本池通过所述第二过滤膜相连通，所述第二腔室设置有第二开口，所述第二开口用于使所述第二腔室与外界连通。

进一步地，所述第一过滤膜与所述第二过滤膜分别选自多孔陶瓷材料、多孔塑料材料、多孔金属材料中的一种。

可选地，所述第一过滤膜与所述第二过滤膜的孔径为2-20微米。

可选地，所述第一过滤膜与所述第二过滤膜的孔径为5-200纳米。

进一步地，当所述第一腔室通过所述第一开口受到抽吸作用时，所述第一腔室中产生负压；当所述第二腔室通过所述第二开口受到抽吸作用时，所述第二腔室中产生负压。

可选地，所述样本池、所述第一腔室、所述第二腔室由聚甲基丙烯酸甲酯材料制成。

本发明还提供一种分离装置，其包括：上述分离芯片；真空系统，所述真空系统与所述分离芯片的所述第一开口和所述第二开口分别相连接；变频模块，所述变频模块与所述真空系统电连接，所述第一腔室和所述第二腔室在所述变频模块和所述真空模块的作用下交替产生负压。

可选地，所述真空系统包括第一真空泵和第二真空泵，所述第一真空泵与所述分离芯片的第一开口相连接，所述第二真空泵与所述分离芯片的第二开口相连接，所述变频模块被设置为控制所述第一真空泵和所述第二真空泵交替工作。

进一步地，所述分离装置还包括：液体供应单元，用于向所述分离芯片的所述样本池自动化地提供液体样本；样本收集单元，用于从所述样本池自动化地收集分离后的液体样本。

本发明还提供一种分离液体样本中目标颗粒的方法，其包括如下步骤：

提供上述分离芯片；

向所述样本池提供液体样本；

通过所述第一开口抽吸所述第一腔室使所述第一腔室产生负压；

停止抽吸所述第一腔室；

通过所述第二开口抽吸所述第二腔室使所述第二腔室产生负压；

停止抽吸所述第二腔室。

相较现有技术，本发明所提供的分离芯片通过交替变换第一腔室和第二腔室内的负压，可以控制分离芯片内气液流动的方向，使待分离的液体样本可以更有效地透过滤膜，同时减少过滤分离过程中过滤膜孔被堵现象的发生。本发明所提供的分离装置通过真空系统为分离芯片的第一腔室和第二腔室交替提供负压，并且通过变频模块控制真空系统实现可控、自动化的分离操作。在液体活检过程中可以使用本发明所提供的分离芯片、分离装置及分离方法对循环肿瘤细胞、外泌体等进行快速、高通量的分离提取，减轻实验人员的工作量，降低液体活检的检测成本。

附图说明

图1是本发明所提供的分离芯片的结构示意图。

图2是本发明所提供的分离芯片一实施方式的结构拆解示意图。

图3是本发明所提供的分离装置的功能模块示意图。

图4是本发明所提供的分离装置一实施方式的液路示意图。

图5是使用本发明所提供的分离方法的液体样本在分离前后的吸光度曲线对比图。

主要元件符号说明

如下具体实施方式将结合上述附图进一步说明本发明。

具体实施方式

下面将结合本发明的优选实施方式及实施例对本发明的技术方案进行描述。需要说明的是，当一个单元被描述为“连接”于另一个单元，它可以是直接连接到另一个单元或者可能同时存在居中单元。当一个单元被被描述为“设置于”另一个单元，它可以是直接设置在另一个单元上或者可能同时存在居中单元。除非另有定义，本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本发明的技术领域的技术人员通常理解的含义相同。在本发明的说明书中所使用的元件或设备的名称只是为了描述具体的实施例的目的，不是旨在于限制本发明。

本发明首先提供一种分离芯片，该分离芯片利用过滤膜对液体样本中不同尺寸的颗粒进行分离，以得到特定尺寸的目标颗粒。图1是本发明所提供的分离芯片的结构示意图。如图1所示，分离芯片10包括样本池13、第一腔室15和第二腔室17。

该样本池13包括第一侧面132和第二侧面134，该第一侧面132与该第二侧面134相对。在该第一侧面132上设置有第一过滤膜14，在该第二侧面134设置有第二过滤膜16。该第一腔室15与该样本池13通过该第一过滤膜14相连通。该第一腔室15设置有第一开口152，该第一开口152用于使该第一腔室15与外界连通。该第二腔室17与该样本池13通过该第二过滤膜16相连通，该第二腔室17设置有第二开口172，该第二开口172用于使该第二腔室17与外界连通。可以理解的是，该第一腔室15和该第二腔室17分别位于该样本池13相对的两侧。

使用该分离芯片10时，将液体样本加入样本池13，将该第一开口152和该第二开口172分别与抽气设备相连接。当抽气设备通过该第一开口152使该第一腔室15受到抽吸时，该第一腔室15中产生负压。在该第一腔室15的负压作用下，样本池13中的液体样本中尺寸小于第一过滤膜14的过滤孔径的成分经由第一过滤膜14流入该第一腔室15。当抽气设备通过该第二开口172使该第二腔室17受到抽吸时，该第二腔室17中产生负压。在该第二腔室17的负压作用下，样本池13中的液体样本中尺寸小于第二过滤膜16的过滤孔径的成分经由第二过滤膜16流入该第二腔室17。

反复交替使该第一腔室15和该第二腔室17内产生负压，可以有效地使液体样本反复交替地流过第一过滤膜14和第二过滤膜16，使液体样本中尺寸大于第一过滤膜14和第二过滤膜16孔径的成分留在样本池13中。该分离芯片10的结构设计使吸附于第一过滤膜14和第二过滤膜16表面的成分在反复交替的负压变化中易于从滤膜表面脱落，可以有效地防止滤膜的膜孔被堵塞。

该分离芯片10的样本池13、第一腔室15、第二腔室17的主体部分可以由塑料、玻璃、金属或复合材料制成。在一实施例中，该分离芯片10的样本池13、第一腔室15、第二腔室17的主体部分是由聚甲基丙烯酸甲酯(PMMA)材料制成的。

该第一过滤膜14和该第二过滤膜16可以由相同的膜材料制成，也可以由不同的膜材料制成。该第一过滤膜14和该第二过滤膜16可以具有相同的平均过滤膜孔径和/或孔径分布，也可以具有不同的平均过滤膜孔径和/或孔径分布。该第一过滤膜14(或该第二过滤膜16)可以是由一种膜材料制成的，也可以是由多种膜材料复合而成的。该第一过滤膜14和该第二过滤膜16可以是多孔材料，包括但不仅限于多孔陶瓷材料、多孔塑料材料和多孔金属材料。具体地，该第一过滤膜14和该第二过滤膜16可以分别选自阳极氧化铝膜、醋酸纤维膜、聚乙烯膜、聚丙烯膜和聚苯乙烯膜中的一种或几种。

在一实施方式中，该第一过滤膜14和该第二过滤膜16的孔径在2-20微米之间；较佳地，在5-10微米之间。在一实施例中，该第一过滤膜14和该第二过滤膜16的孔径为8微米，可以用于分离血浆样本中的循环肿瘤细胞。

在另一实施方式中，该第一过滤膜14和该第二过滤膜16的孔径在5-200纳米之间；较佳地，在10-100纳米之间。在一实施例中，该第一过滤膜14和该第二过滤膜16的孔径为20纳米，可以用于分离已通过200纳米过滤膜的血浆样本中的外泌体。

可以理解的是，当该第一过滤膜14和该第二过滤膜16表面未被进一步修饰时，该分离芯片10仅根据滤膜的孔径筛选液体样本中的各种成分，分离后所得的样本中主要包括目标颗粒(如循环肿瘤细胞、外泌体等)，也可能含有其他具有相近或较大尺寸的颗粒。本领域技术人员可以理解，为降低多孔材料对被测液体样本中的蛋白或基因的吸附，该第一过滤膜14和该第二过滤膜16的表面可以是被化学修饰的；为特异性地分离目标微粒，该第一过滤膜14和该第二过滤膜16的表面可以是被特异性生物大分子修饰的，该特异性生物大分子可以是特定的一种或几种抗体、抗原、多肽或碱基序列。需要指出的是，本文中所述的目标颗粒可以是具有生物学意义的细胞或组分，也可以是其他类型的微粒，如合成的脂质体、纳米微球、纳米微粒等。

可以理解的是，该样本池13的体积可以根据实际应用场景设计。对于生物活检的应用场景，该样本池13的体积可以在0.1-10毫升之间，可选地，在0.5-2毫升之间。在一实施例中，该样本池13的体积为1毫升。该样本池13可以包括样本池开口138，用于加入和/或取出液体样本。

在图1所示的实施方式中，该第一腔室15包括与该第一过滤膜14相对的第一侧壁156，该第一开口152被设置于该第一侧壁156上；该第二腔室17包括与所述第二过滤膜16相对的第二侧壁176，该第二开口172被设置于该第二侧壁176上。在本实施方式中，所述分离芯片10具有对称结构。需要说明的是，分离芯片10也可以是不对称结构或其他任何能够实现本发明构思的结构。

图2示出了本发明所提供的分离芯片的一实施例的分解示意图。如图2所示，分离芯片10的第一开口152为开设于第一侧壁156的圆孔，该分离芯片10的第二开口172为开设于第二侧壁176的圆孔。在本实施例中，该第一侧壁156和该第二侧壁176为两片PMMA盖片。第一腔室15由该第一侧壁156的PMMA盖片与另一片PMMA基片加温压合形成。该第一腔室15的PMMA基片上开设有圆孔，该圆孔被第一过滤膜14从该第一腔室15的外侧封住。可以理解地，第二腔室17由该第二侧壁176的PMMA盖片与一片PMMA基片加温压合形成。该第二腔室17的PMMA基片上也开设有圆孔，该圆孔被第二过滤膜16从该第二腔室17的外侧封住。将该第一腔室15的的PMMA盖片、一U型基片、该第二腔室17的PMMA盖板依次贴合在一起形成样本池13。基于以上方法，可以以较低的成本制得符合本发明精神的分离芯片，这种分离芯片具有一个样本池、分别与该样本池通过过滤膜连通的第一腔室和第二腔室、以及设置于分别设置于第一腔室和第二腔室的两个与外界连通的开口，从而可以在分离芯片的两个方向上分别进行抽气，优化过滤分离效果。

在图2所述的实施例中，可选地，该分离芯片10的长度约为30毫米，宽度约为23毫米，厚度约为6毫米。该第一开口152和该第二开口172的圆孔直径约为1毫米。该第一腔室15和该第二腔室17的两片PMMA基片上用于设置过滤膜的圆孔直径约为13毫米。该分离芯片10的样本池体积约为1毫升。

本发明进一步提供了一种分离装置。图3示出了该分离装置的功能模块示意图。该分离装置包括如上文所述的分离芯片10、真空系统20、变频模块30、控制器80和电源模块90。

该真空系统20用于分别使该分离芯片10的第一腔室15和第二腔室17产生负压。该真空系统20可以是两个独立的真空系统，也可以是经过设计的一个真空系统。该真空系统也可以包括微型真空泵或微型抽气泵等设备。可以理解的是，该真空系统20与该分离芯片10之间可以通过气密性较佳的管道连接。

该变频模块30与该真空系统20电连接，该变频模块30还与该电源模块90电连接，从而使该变频模块30可以控制提供给该真空模块的电源电压，从而使第一腔室15和第二腔室17交替产生负压。可以理解的是，该变频模块30可以包括两个变频器，用于分别控制该分离芯片10的第一腔室15和第二腔室17内的负压变化；该变频模块30也可以只包括一个变频器和特定的开关电路，以实现相似的技术效果。

该控制器80与该变频模块30、该电源模块90电连接。该控制器80可以是内嵌在硬件或固件(firmware)上的逻辑关系集合，也可以是用编程语言所编写的一系列存储在存储器或其他固件中的程序。该控制器80可以控制该变频模块30的工作方式，从而使真空系统20自动化地交替抽吸该分离芯片10的第一腔室15和第二腔室17，分离液体样本中目标颗粒。

在本发明所提供的分离装置的一实施方式中，该真空系统20包括第一真空泵210和第二真空泵220，该第一真空泵210与该分离芯片10的第一开口152相连接，该第二真空泵220与该分离芯片10的第二开口172相连接。该变频模块30包括第一变频器和第二变频器，该第一变频器与第一真空泵210电连接，该第二变频器与第二真空泵220电连接。这两个变频器在控制器80的控制下可以使第一真空泵210和第二真空泵220反复交替工作。例如，该第一变频器控制该第一真空泵210运行，通过第一开口152抽气使第一腔室15内产生负压；然后，该第一变频器控制该第一真空泵210停止运行；之后，该第二变频器控制该第二真空泵220运行，通过第二开口172抽气使第二腔室17内产生负压；再之后，该第二变频器控制该第二真空泵220停止运行；反复上述步骤多次之后，控制该真空系统20停止运行，收集分离后的液体样本。

图4示出了该分离装置的液路示意图。本领域技术人员可以理解，该分离装置还可以进一步包括液体供应单元50和液体收集单元60，从而实现液体样本中目标颗粒的自动化分离过程。

该液体供应单元50用于自动化地向分离芯片10的样本池13中注入液体。在图4所示的实施方式中，该液体供应单元50包括待测样本室510、清洗液室530和控制阀550。该控制阀550可以是液路转换器，包括但不仅限于电磁阀、旋转阀。将该控制阀550连通待测样本室510和样本池13，可以将待测样本室510中的液体样本提供至分离芯片10的样本池13用于分离目标颗粒；也可以通过改变该控制阀550的设置，将该控制阀550连通清洗液室530和样本池13，将清洗液室530中的清洗液提供至分离芯片10的样本池13用于清洗分离芯片10。可以理解的是，该液体供应单元50还可以包括一动力部件，如动力泵或抽气泵，为液流提供动力。在某些实施例中，该液体供应单元50也可能不包括动力部件，通过真空系统20的抽吸作用实现进液。

该液体收集单元60用于自动化地从分离芯片10的样本池13收集分离后的液体样本。在一实施例中，该液体收集单元60包括采样针，控制器80控制采样针移动并伸入分离芯片10的样本池13中吸取分离后的液体样本。

进一步地，该分离装置还可以包括第一液体存储室410和第二液体存储室420。该第一液体存储室410被设置于该第一真空泵210与分离芯片10的第一开口152之间，该第一液体存储室410分别与第一真空泵210和分离芯片10的第一腔室15相连通。类似地，该第二液体存储室420被设置于该第二真空泵220与分离芯片10的第二开口172之间，该第二液体存储室420分别与第二真空泵220和分离芯片10的第二腔室17相连通。第一液体存储室410和第二液体存储室420可以作为安全瓶，避免分离芯片10中的液体进入真空泵，也可以作为废液瓶收集每次分离后残余在分离芯片10中的液体或清洗液。

使用本发明所提供的分离装置可以自动化地对液体样本中的目标颗粒进行分离，将样本池中无法通过过滤膜的组分分离出来，同时通过样本池两侧空腔内的负压变化改变样本池中的气液流动方向，减少粘附在过滤膜表面的组分，避免过滤分离过程中过滤膜被堵塞的情况发生。该分离装置成本较低、使用方便，极大地降低了实验人员的工作量。

本发明进一步提供一种分离液体样本中目标颗粒的方法，其包括如下步骤：

步骤S200，提供本发明所述的分离芯片10；

步骤S220，向该分离芯片10的样本池13中提供液体样本；

步骤S230，通过该分离芯片10的第一开口152抽吸第一腔室15，使第一腔室15内产生负压；

步骤S250，停止抽吸第一腔室15；

步骤S270，通过该分离芯片10的第二开口172抽吸第二腔室17使第二腔室17内产生负压；

步骤S290，停止抽吸第二腔室17。

其中，步骤S230-S290可循环多次，以实现更好的分离效果。可以理解的是，上述分离液体样本中目标颗粒的方法可以是手动、半自动化或全自动化实现的。当所述液体样本为清洗液(如缓冲溶液等)时，通过该方法中的步骤S220-S290可以对分离芯片10进行清洗。

下面将结合图4所示的分离装置的实施例对步骤S220-S290进行详述。

在步骤S220中，将液体样本(或清洗液)加入样本池13中。可选地，该步骤可以通过分离装置的液体供应单元50执行，也可以手动通过移液枪或注射器将液体样本加入样本池13。

在步骤S230之前，将分离芯片10的第一开口152、第二开口172分别与真空系统(如两个真空泵)相连。

在步骤S230中，真空系统20通过第一开口152抽吸第一腔室15，使第一腔室15内产生负压。样本池13中的液体样本(如血液样本、体液样本等)中的液体和尺寸小于第一过滤膜14孔径的组分在负压作用下通过第一过滤膜14，进入第一腔室15。在某些情况下，如第一腔室15的体积相对较小，亦或是，第一腔室15内的负压变化过快，液体和尺寸小于第一过滤膜14孔径的组分也可能进一步通过第一开口152流出，进入第一液体存储室410。

在步骤S250中，真空系统20停止抽吸第一腔室15。

在步骤S270中，真空系统20通过第二开口172抽吸第二腔室17，使第二腔室17内产生负压。在步骤S270的执行过程中，粘附在第一过滤膜14表面的组分可以随着气流和/或液流样本池13中，样本池13中的液体样本(如血液样本、体液样本等)中的液体和尺寸小于第二过滤膜16孔径的组分在负压作用下通过第二过滤膜16，进入第二腔室17。在某些情况下，如第二腔室17的体积相对较小，亦或是，第二腔室17内的负压变化过快，液体和尺寸小于第二过滤膜16孔径的组分也可能进一步通过第二开口172流出，进入第二液体存储室420。可以理解地，步骤S250和步骤S270可以依次先后执行，也可以同时执行。

在步骤S290中，真空系统20停止抽吸第二腔室17。

之后，可以多次重复步骤S230-S290反复过滤液体样本。

例如，在步骤S290后再次执行步骤S230，由真空系统20通过第一开口152抽吸第一腔室15，在此过程中，粘附在第二过滤膜16表面的组分可以随着气流和/或液流样本池13中，且样本池13中的液体样本(如血液样本、体液样本等)中的液体和尺寸小于第一过滤膜14孔径的组分在负压作用下通过第一过滤膜14，进入第一腔室15。然后再次执行步骤S250，真空系统20停止抽吸第一腔室15。并执行步骤S270，真空系统20通过第二开口172抽吸第二腔室17。

通过反复执行步骤S230-S290可以使液体样本中小于过滤膜孔径的组分被去除，大于过滤膜孔径的组分被截留在样本池13中。通过第一腔室、第二腔室内负压的交替变化可以改善过滤过程中过滤膜的通透性，降低过滤膜堵孔，提高过滤效果。

可以理解的是，在步骤S220中，也可以将清洗液加入样本池13中，通过反复执行步骤S230-S290对分离芯片10进行清洗。该清洗液中可以是缓冲溶液、也可以是含有特定的生物活性分子(如核酸酶、蛋白酶等)的溶液，用于清除分离芯片10各个表面上吸附的生物成分。

使用本发明所提供的分离芯片及分离方法可以从血液样本中分离外泌体。图5中的曲线a为分离前的血液样本在波长为220-340纳米之间的吸光度曲线，其中，该血液样本为由200纳米孔径的滤膜过滤后所得到的液体样本。图5中的曲线b为分离后的血液样本在波长为220-340纳米之间的吸光度曲线。对比吸光度曲线a与b可知，分离后的样本在波长280纳米附近的吸光度明显降低，说明该分离芯片及分离方法可以有效地对液体样本中的组分进行分离和收集。

上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，以上实施方式仅是用于解释权利要求书。然本发明的保护范围并不局限于说明书。任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明披露的技术范围内，可轻易想到的变化或者替换，都包含在本发明的保护范围之内。

Claims (8)

1.一种分离装置，其特征在于，包括：

分离芯片，所述分离芯片包括：样本池，所述样本池包括第一侧面和第二侧面，所述第一侧面与所述第二侧面相对，所述第一侧面设置有第一过滤膜，所述第二侧面设置有第二过滤膜；

第一腔室，所述第一腔室与所述样本池通过所述第一过滤膜相连通，所述第一腔室设置有第一开口，所述第一开口用于使所述第一腔室与外界连通；

第二腔室，所述第二腔室与所述样本池通过所述第二过滤膜相连通，所述第二腔室设置有第二开口，所述第二开口用于使所述第二腔室与外界连通；

真空系统，所述真空系统与所述分离芯片的所述第一开口和所述第二开口分别相连接；

变频模块，所述变频模块与所述真空系统电连接，所述第一腔室和所述第二腔室在所述变频模块和所述真空系统的作用下交替产生负压。

2.如权利要求1所述的分离装置，其特征在于，所述真空系统包括第一真空泵和第二真空泵，所述第一真空泵与所述分离芯片的第一开口相连接，所述第二真空泵与所述分离芯片的第二开口相连接，所述变频模块被设置为控制所述第一真空泵和所述第二真空泵交替工作。

3.如权利要求1所述的分离装置，其特征在于，进一步包括：

液体供应单元，用于向所述分离芯片的所述样本池自动化地提供液体样本；

样本收集单元，用于从所述样本池自动化地收集分离后的液体样本。

4.如权利要求1所述的分离装置，其特征在于，所述第一过滤膜与所述第二过滤膜分别选自多孔陶瓷材料、多孔塑料材料、多孔金属材料中的一种。

5.如权利要求4所述的分离装置，其特征在于，所述第一过滤膜与所述第二过滤膜的孔径为2-20微米。

6.如权利要求4所述的分离装置，其特征在于，所述第一过滤膜与所述第二过滤膜的孔径为5-200纳米。

7.如权利要求1所述的分离装置，其特征在于，所述样本池、所述第一腔室、所述第二腔室的主体部分由聚甲基丙烯酸甲酯材料制成。

8.一种分离液体样本中目标颗粒的方法，其包括如下步骤：

提供如权利要求1-7中任一项所述的分离装置；

向所述样本池提供液体样本；

通过所述第一开口抽吸所述第一腔室使所述第一腔室产生负压；

停止抽吸所述第一腔室；

通过所述第二开口抽吸所述第二腔室使所述第二腔室产生负压；

停止抽吸所述第二腔室。

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