CN108025023A

CN108025023A - 用于干细胞移植的方法

Info

Publication number: CN108025023A
Application number: CN201680053465.0A
Authority: CN
Inventors: 劳伦斯·S·兰姆; 峯岸伸; 艾曼·萨德
Original assignee: UAB Research Foundation
Current assignee: UAB Research Foundation
Priority date: 2015-08-25
Filing date: 2016-08-25
Publication date: 2018-05-11
Also published as: NZ740901A; EP3340997A4; CA2996522A1; EP3340997B1; JP2022133453A; KR20180041229A; ES2984387T3; AU2016312610A1; JP2018525417A; WO2017035375A1; US20190183930A1; IL257678B2; IL257678A; EP4458953A2; AU2023202946A1; JP7105188B2; AU2016312610B2; EP4458953A3; CN115137752A; US20220265720A1

Abstract

本公开提供造血干细胞移植(hematopoietic stem cell transplantation；HSCT)的方法。确切地说，本发明提供一种HSCT方法，所述方法使用体内T细胞耗竭法与离体γδT细胞扩增和αβT细胞耗竭方法的组合来进行。体内T细胞耗竭法耗尽(体内)会在其它情况下增加GvHD风险的同种异体反应性T细胞。

Description

用于干细胞移植的方法

背景技术

同种异体造血干细胞移植(同种异体HSCT)是许多患有血液学恶性病的患者的潜在治愈性治疗。¹临床上优选的干细胞来源是人类白细胞抗原(human leukocyte antigen；HLA)匹配的同胞供体或HLA匹配的不相关供体。²不利的是，许多患者，尤其少数人种群体的那些患者不具有HLA匹配的同胞或不相关供体。在一些高风险患者中，登记检索也可能不适当地耗时。因此，已经在临床上使用替代性的HSCT移植物来源。这些选项包括使用来自部分HLA匹配(单倍体相合)家庭成员的供体细胞。³

已经展示单倍体相合HSCT在需要同种异体HSCT的患者中实现长期存活和治愈，而不需要HLA匹配供体。³然而，单倍体相合HSCT的成功已经收到多种并发症阻碍。供体与受体之间的HLA差异可能诱导高风险的移植物排斥、移植物抗宿主病(graft versus hostdisease；GvHD)和免疫重建延迟以及后续感染性并发症。⁴使用高强度免疫抑制方案(以预防GvHD)至少在理论上可能消除移植物抗肿瘤(graft versus tumor；GvT)作用，预示疾病复发的风险增加。已经展示同种异体HSCT之后的GvT作用与复发风险降低相关。^5,6因此，所输注供体T细胞可以具有有益作用(植入、免疫重建和GvT)并且还发挥有害(并且有时致命)的GvHD作用。出于这些原因，研究人员已经寻找将提供最优T细胞亚群比率的对细胞疗法进行工程改造的方式，所述方式可以提供足够数目个细胞以维持植入并使GvT作用最优化，同时使可能引起GvHD的同种异体反应性T细胞减到最少。

本发明提供适用于HSCT中的方法和组合物，其使所输注供体T细胞的有益作用(包括(但不限于)植入、免疫重建和GvT)达到最大，同时使有害作用(如(但不限于)GvHD)减到最小。

发明内容

本公开提供一种HSCT方法，所述方法使用在移植经过最低限度操控的外周血液干细胞(peripheral blood stem cell；PBSC)之后的体内T细胞耗竭法与离体γδT细胞富集和/或扩增和/或αβT细胞耗竭方法的组合来进行以提供改进的HSCT方法。

在第一方面中，所述HSCT方法包含：i)在第0天向个体给予包含PBSC的单倍体相合造血干细胞移植物输注液；ii)向所述个体给予提供体内T细胞耗竭的药剂；iii)视情况使γδT细胞群体离体扩增；以及iv)向所述个体给予包含富含γδT细胞并且耗尽αβT细胞的T细胞的第二移植物输注液。

在第二方面中，所述HSCT方法包含：i)在第0天向个体给予经过最低限度操控的包含PBSC的单倍体相合造血干细胞移植物输注液；ii)向所述个体给予提供体内T细胞耗竭的药剂；iii)视情况使γδT细胞群体离体扩增；以及iv)向所述个体给予包含富含γδT细胞并且耗尽αβT细胞的T细胞的第二移植物输注液。

在第三方面中，所述HSCT方法包含：i)在第0天向个体给予包含PBSC的单倍体相合造血干细胞移植物输注液；ii)向所述个体给予提供体内T细胞耗竭的药剂；iii)使γδT细胞群体离体扩增；iv)向所述个体给予包含经过扩增的γδT细胞群体的第二移植物输注液，其中所述经过扩增的γδT细胞群体富含γδT细胞并且耗尽αβT细胞。

在第四方面中，所述HSCT方法包含：i)在第0天向个体给予经过最低限度操控的包含PBSC的单倍体相合造血干细胞移植物输注液；ii)向所述个体给予提供体内T细胞耗竭的药剂；iii)使γδT细胞群体离体扩增；iv)向所述个体给予包含经过扩增的γδT细胞群体的第二移植物输注液，其中所述经过扩增的γδT细胞群体富含γδT细胞并且耗尽αβT细胞。

在第五方面中，所述HSCT方法包含：i)从单倍体相合供体获得PBSC池；ii)将所述PBSC池拆分成提供PBSC产物的第一部分PBSC和经过操控以提供γδT细胞产物的第二部分PBSC，所述γδT细胞产物富含γδT细胞并且耗尽αβT细胞；iii)在第0天向个体给予包含所述PBSC产物的造血干细胞移植物输注液；iv)向所述个体给予提供体内T细胞耗竭的药剂；v)视情况使所述γδT细胞产物中的γδT细胞群体离体扩增以及vi)向所述个体给予包含所述γδT细胞产物的第二移植物输注液。

在第六方面中，所述HSCT方法包含：i)从单倍体相合供体获得PBSC池；ii)将所述PBSC池拆分成经过最低限度操控以提供PBSC产物的第一部分PBSC和经过操控以提供γδT细胞产物的第二部分PBSC，所述γδT细胞产物富含γδT细胞并且耗尽αβT细胞；iii)在第0天向个体给予包含所述PBSC产物的造血干细胞移植物输注液；iv)向所述个体给予提供体内T细胞耗竭的药剂；v)视情况使所述γδT细胞产物中的γδT细胞群体离体扩增以及vi)向所述个体给予包含所述γδT细胞产物的第二移植物输注液。

在第七方面中，所述HSCT方法包含：i)从单倍体相合供体获得PBSC池；ii)将所述PBSC池拆分成提供PBSC产物的第一部分PBSC和经过操控以提供γδT细胞产物的第二部分PBSC，所述γδT细胞产物富含γδT细胞并且耗尽αβT细胞；iii)在第0天向个体给予包含所述PBSC产物的造血干细胞移植物输注液；iv)向所述个体给予提供体内T细胞耗竭的药剂；v)使所述γδT细胞产物中的γδT细胞群体离体扩增以及vi)向所述个体给予包含所述γδT细胞产物的第二移植物输注液。

在第八方面中，所述HSCT方法包含：i)从单倍体相合供体获得PBSC池；ii)将所述PBSC池拆分成经过最低限度操控以提供PBSC产物的第一部分PBSC和经过操控以提供γδT细胞产物的第二部分PBSC，所述γδT细胞产物富含γδT细胞并且耗尽αβT细胞；iii)在第0天向个体给予包含所述PBSC产物的造血干细胞移植物输注液；iv)向所述个体给予提供体内T细胞耗竭的药剂；v)使所述γδT细胞产物中的γδT细胞群体离体扩增以及vi)向所述个体给予包含所述γδT细胞产物的第二移植物输注液。

在上文各方面的某些实施例中，所描述的HSCT方法将使所输注供体T细胞的有益作用(包括(但不限于)植入、免疫重建和GvT)达到最大。在上文各方面的某些实施例中，所描述的HSCT方法将使所输注供体T细胞的有害作用(如(但不限于)GvHD)减到最小。在上文各方面的某些实施例中，实现前述的组合。在上文各方面的某些实施例中，从单倍体相合供体收集PBSC移植物，并且将细胞产物分成经过最低限度操控的HSCT产物和γδT细胞产物，所述经过最低限度操控的HSCT产物将在第0天向个体给予(如在HSCT中作为标准)，所述γδT细胞产物将在第0天之后向个体给予。在某一实施例中，在第0天之后至多25天内向个体给予γδT细胞产物。在某些实施例中，在开始体内T细胞耗竭之后≥3天时向个体给予γδT细胞产物。在某些实施例中，使γδT细胞产物离体扩增以增加所述γδT细胞产物中的γδT细胞数目。在某些实施例中，γδT细胞产物富含γδT细胞。在某些实施例中，γδT细胞产物耗尽αβT细胞。在某些实施例中，使γδT细胞产物离体扩增以增加所述γδT细胞产物中的γδT细胞数目并且耗尽αβT细胞。在某些实施例中，γδT细胞产物富含γδT细胞并且耗尽αβT细胞。

在上文各方面的某些实施例中，本公开的方法可以与HSCT所用于的任何病状结合使用。

在上文各方面的某些实施例中，本公开的方法可以与预处理(preparative)化学疗法方案结合使用；此类预处理化学疗法方案优选地在第0天之前开始。

在上文各方面的某些实施例中，本公开的方法与在第0天之后开始的体内T细胞耗竭方案组合使用。在上文各方面的某些实施例中，体内T细胞耗竭方案是移植后给予环磷酰胺(cyclophosphamide；CY)。

在上文各方面的某些实施例中，本公开的方法可以与GvHD预防方案结合使用；此类GvHD预防方案优选地在第0天之后开始。

在上文各方面的某些实施例中，本公开的方法可以与生长因子治疗结合使用；此类生长因子治疗优选地在第0天之后开始。

附图说明

图1展示使用氟达拉滨(Fludarabine)/白消安(Busulfan)/TBI用于骨髓疾病的预处理方案的一个实施例。

图2展示使用TBI/环磷酰胺的40岁和小于40岁ALL或淋巴瘤患者的预处理方案的一个实施例。

图3展示用于大于40岁ALL或淋巴瘤患者或具有严重共病的任何年龄ALL或淋巴瘤患者的预处理方案的一个实施例。

具体实施方式

定义

如本文所用，术语“最低限度操控”意味着从供体(如单倍体相合供体)分离的PBSC池不是改变所述细胞相关生物学特征的标的方法或程序。如本文所描述从自供体分离的PBSC池中去除一部分PBSC(以便产生γδT细胞产物)的动作或PBSC池制备、加工和/或储存中的其它例行步骤(如(但不限于)密度梯度分离、细胞选择、离心和低温保存)产生仍是“经过最低限度操控的PBSC池”，这是由于取样不富集和/或耗尽特定细胞群体。在一个特定方面中，从供体(如单倍体相合供体)分离的PBSC池不是在向个体给予之前由所述PBSC池富集和/或耗尽特定细胞群体(如(但不限于)γδT细胞)的标的方法或程序。

如本文所用，术语“耗尽”意味着细胞群体中特定细胞类型的数目或浓度已经从初始原始水平减少(例如由于特定操控或程序)到降低的第二水平。所述术语不需要从细胞群体中完全去除特定细胞类型。作为一个实例，如果与原先存在(如存在于从供体获得的PBSC池中)的αβT细胞的数目或浓度相比，向个体给予的组合物中αβT细胞的数目或浓度减少，那么T细胞群体“耗尽”αβT细胞。

如本文所用，术语“富含”意味着细胞群体中特定细胞类型的数目或浓度已经从初始原始水平增加(例如由于特定操控或程序)到更高的第二水平。作为一个实例，如果与原先存在(如存在于从供体获得的PBSC池中)的γδT细胞的数目或浓度相比，向个体给予的组合物中γδT细胞的数目或浓度增加，那么T细胞群体“富含”γδT细胞。

一般描述

大部分(约80％)所输注的供体淋巴细胞是T细胞(其它输注细胞是B细胞和NK细胞)。已经展示T细胞在移植后免疫现象(干细胞植入、GvHD、GVT和免疫重建)中起关键作用，并且B细胞和NK细胞很可能起支持作用(1,7)。大部分(约95％)T细胞携带α-βT细胞受体(αβ-TCR)；称为α-βT细胞(αβT细胞)。小比例的T细胞携带不同T细胞受体γδ-TCR，称为γ-δT细胞(γδT细胞)

已经展示γδT细胞具有抗肿瘤活性。其被视为预防新癌症出现以及经由免疫监视功能保护不受感染的先天性免疫系统的一部分(8)。不同于常见T细胞亚型αβT细胞，γδT细胞杀死恶性细胞不需要抗原识别(9)。因此，已经提出将其用于针对癌症(9)。也已经展示另一种类型的先天性免疫细胞(NK细胞)具有抗肿瘤作用并且在HCT之后促进免疫重建而不增加GvHD风险(10,11)。

已经展示γδT细胞在部分不匹配的移植中具有抗白血病作用，而不增加GvHD风险(12,13)。在回顾性分析中，与恢复时γδT细胞数目正常或减少的那些患者相比，在γδT细胞增加的患者中5年无白血病存活率(LFS)和整体存活率(OS)更高；分别是54％对比19％(P<0.0003)和71％对比20％(P<0.0001)。两组中的GvHD发生率不存在差异(P＝0.96)(14)。Handgretenger等人使用αβT细胞耗竭以在单倍体相合HCT的情况下保存γδT细胞。这些研究展示具有快速免疫重建的快速植入(8,15)。

目前将单倍体相合移植患者集中到I期试验中，其中患者在接受经过最低限度操控的移植物后接受移植后环磷酰胺(CY)。来自同一供体的第二移植物选择性地耗尽αβT细胞，并且在HSCT后第+7天输注。到此时间点，三名无GvHD证据的患者已经入选研究。

不同于识别由抗原呈递细胞(antigen presenting cell；APC)呈递在MHC分子上的特异性加工肽抗原的αβT细胞，γδT细胞似乎直接识别由恶性细胞表达的多种MHC样应激诱导的自身抗原并对其有反应(12-16)。因此，γδT细胞可以通过不需要先前抗原暴露或预致敏的特异性较小的机制来识别恶性细胞，所述功能由其它先天性免疫细胞，如巨噬细胞和NK细胞共享(8)。

动物研究和来自人类同种异体移植研究的间接证据表明γδT细胞可以促进同种异体植入。Blazar(23)在鼠类同种异体移植模型中发现，供体γδT细胞促进T细胞耗尽(T-cell depleted；TCD)供体骨髓的植入。当TCD C.B-17^scid/scid供体骨髓在输注到B6接受者中之前补充有3×10⁶个γδT细胞时，供体嵌合增加大致40％。Drobyski在C57BL/6[H-2^b]-B1-.BR[H-2^k]不匹配小鼠中注意到类似发现(24)，并且稍后展示促进植入所必要的γδT细胞剂量不引起致死性鼠类GvHD(25)。Niepp(26)在大鼠模型中展示类似发现，其中用1×10⁸个αβTCD骨髓使受到致死性照射的(WistarFurth WF-RTIA)大鼠复原。所有动物植入有平均92±4％供体细胞并且无GvHD临床证据。比较接受αβTCD移植物的患者与接受泛TCD移植物的那些患者的研究也展示在移植物中可克隆γδT细胞数目与植入时间更少之间的正相关性(27,28)。

γδT细胞不引发GvHD

鼠类和人类研究皆表明，γδT细胞不是GvHD的主要引发剂，并且实际上可以调节αβT细胞的GvHD活性。Drobyski(25)展示，可以将大剂量的IL-2扩增γδT细胞输注到受到致死性照射的MHC不同的小鼠(C57BL/6[H-2^b]a BIO.BR[H-2k]和C57BL/6[H-2^b]a B6D2F1[H-2^b/d])中而不造成GvHD。Ellison(29)注意到γδT细胞在GvHD反应中活化，但未发现γδT细胞引发GvHD的证据。此工作与稍后Drobyski(25)的研究一致，其展示尽管活化的γδ和原初αβT细胞在一起输注时加重GvHD，但延迟αβT细胞输注两周引起存活率提升。在人类研究中，Schilbach(30)和Lamb(31)发现γδT细胞在体外同种异体混合淋巴细胞培养物中基本上不活化。若干BMT后研究已经展示γδT细胞暂时增加(32-34)但未将这一查找与GvHD相关联，但Tsuji(35)发现γδT细胞可以被聚集到病变中并且由CD4+αβT细胞活化。比较接受αβTCD移植物的患者与接受泛TCD移植物的患者的结果的若干研究皆展示在αβTCD组中的GvHD发生率较低，表明在移植物中输注γδT细胞不使患者的GvHD风险增加(36,37)。然而，γδT细胞是否真的不大可能促使GvHD出现仍未经测试。

来自在对ALL或AML进行BMT后第一年期间出现γδT细胞自发增加的25名患者的六年存活率数据展示，当与具有类似风险的患者相比时，无疾病存活率(DFS)显著提升(对于ALL患者p＝0.009，并且对于AML患者p＝.045)(12,38)。来自研究的发现是在存活患者中Vδ1+γδT细胞的数目增加持续，有时持续若干年。细胞的持续性取决于T细胞耗竭方法，这是由于接受αβT细胞耗尽移植物的患者比接受OKT3(一种泛T细胞单克隆抗体)耗尽移植物的患者更可能出现并维持γδT细胞数目增加(p＝0.05)(38)。

在输注T细胞充足的HCT之后几天内给予CY耗尽供体和宿主两者的同种异体反应性T细胞，因此分别抑制GvHD和移植物排斥(17-21)。假设高剂量CY可以耗尽增殖性同种异体反应性T细胞，剩下非增殖性(无活性)T细胞(21)。约翰·霍普金斯大学(Johns HopkinsUniversity)和弗雷德·哈钦森癌症研究中心(Fred Hutchinson Cancer ResearchCenter)的研究者发现在单倍体相合HCT之后使用移植后环磷酰胺已经展示有前景的结果(22)。这一方法的最不幸结果仍是在1年时51％的高复发率(23)。骨髓移植临床试验网络(Bone Marrow Transplant Clinical Trials Network；BMT-CTN)使用相同单倍体相合HCT方法进行临床试验(CTN 0603)，并且其所报告复发率为45％(24)。因此，尽管在单倍体相合HCT中使用这一方法减少GvHD，但高复发风险(45％-51％)仍是挑战。复发风险增加可能是由于缺少有效的移植物抗肿瘤作用。其在使用非清髓性方案的情况下尤其明显，这是由于在这一设定下，移植物抗白血病(GVL)作用是仅有的抗肿瘤作用。

HSCT方法

本公开提供HSCT方法。在一个实施例中，本公开提供HSCT方法，所述方法使用体内T细胞耗竭法(例如，移植后环磷酰胺)与离体γδT细胞扩增和αβT细胞耗竭方法(使用例如系统)的组合来进行。体内T细胞耗竭(例如，在输注经过最低限度操控的干细胞移植物之后输注CY)耗尽(体内)会在其它情况下增加GvHD风险的同种异体反应性T细胞。离体扩增/活化的γδT细胞产物将选择性地耗尽αβT细胞，但还将包括次要NK细胞群体。

在一个实施例中，HSCT方法包含：i)在第0天向个体给予包含PBSC的单倍体相合造血干细胞移植物输注液；ii)向所述个体给予提供体内T细胞耗竭的药剂；iii)视情况使γδT细胞群体离体扩增；以及iv)向所述个体给予包含富含γδT细胞并且耗尽αβT细胞的T细胞的第二移植物输注液。

在另一个实施例中，HSCT方法包含：i)在第0天向个体给予经过最低限度操控的包含PBSC的单倍体相合造血干细胞移植物输注液；ii)向所述个体给予提供体内T细胞耗竭的药剂；iii)视情况使γδT细胞群体离体扩增；以及iv)向所述个体给予包含富含γδT细胞并且耗尽αβT细胞的T细胞的第二移植物输注液。

在另一个实施例中，HSCT方法包含：i)在第0天向个体给予包含PBSC的单倍体相合造血干细胞移植物输注液；ii)向所述个体给予提供体内T细胞耗竭的药剂；iii)使γδT细胞群体离体扩增；iv)向所述个体给予包含经过扩增的γδT细胞群体的第二移植物输注液，其中所述经过扩增的γδT细胞群体富含γδT细胞并且耗尽αβT细胞。

在另一个实施例中，HSCT方法包含：i)在第0天向个体给予经过最低限度操控的包含PBSC的单倍体相合造血干细胞移植物输注液；ii)向所述个体给予提供体内T细胞耗竭的药剂；iii)使γδT细胞群体离体扩增；iv)向所述个体给予包含经过扩增的γδT细胞群体的第二移植物输注液，其中所述经过扩增的γδT细胞群体富含γδT细胞并且耗尽αβT细胞。

在另一个实施例中，HSCT方法包含：i)从单倍体相合供体获得PBSC池；ii)将所述PBSC池拆分成提供PBSC产物的第一部分PBSC和经过操控以提供γδT细胞产物的第二部分PBSC，所述γδT细胞产物富含γδT细胞并且耗尽αβT细胞；iii)在第0天向个体给予包含所述PBSC产物的造血干细胞移植物输注液；iv)向所述个体给予提供体内T细胞耗竭的药剂；v)视情况使所述γδT细胞产物中的γδT细胞群体离体扩增以及vi)向所述个体给予包含所述γδT细胞产物的第二移植物输注液。

在另一个实施例中，HSCT方法包含：i)从单倍体相合供体获得PBSC池；ii)将所述PBSC池拆分成经过最低限度操控以提供PBSC产物的第一部分PBSC和经过操控以提供γδT细胞产物的第二部分PBSC，所述γδT细胞产物富含γδT细胞并且耗尽αβT细胞；iii)在第0天向个体给予包含所述PBSC产物的造血干细胞移植物输注液；iv)向所述个体给予提供体内T细胞耗竭的药剂；v)视情况使所述γδT细胞产物中的γδT细胞群体离体扩增以及vi)向所述个体给予包含所述γδT细胞产物的第二移植物输注液。

在另一个实施例中，HSCT方法包含：i)从单倍体相合供体获得PBSC池；ii)将所述PBSC池拆分成提供PBSC产物的第一部分PBSC和经过操控以提供γδT细胞产物的第二部分PBSC，所述γδT细胞产物富含γδT细胞并且耗尽αβT细胞；iii)在第0天向个体给予包含所述PBSC产物的造血干细胞移植物输注液；iv)向所述个体给予提供体内T细胞耗竭的药剂；v)使所述γδT细胞产物中的γδT细胞群体离体扩增以及vi)向所述个体给予包含所述γδT细胞产物的第二移植物输注液。

在另一个实施例中，HSCT方法包含：i)从单倍体相合供体获得PBSC池；ii)将所述PBSC池拆分成经过最低限度操控以提供PBSC产物的第一部分PBSC和经过操控以提供γδT细胞产物的第二部分PBSC，所述γδT细胞产物富含γδT细胞并且耗尽αβT细胞；iii)在第0天向个体给予包含所述PBSC产物的造血干细胞移植物输注液；iv)向所述个体给予提供体内T细胞耗竭的药剂；v)使所述γδT细胞产物中的γδT细胞群体离体扩增以及vi)向所述个体给予包含所述γδT细胞产物的第二移植物输注液。

在前述中任一例的一个实施例中，所述方法包含在第0天向个体给予单倍体相合PBSC输注液，后接在第+7到加+25天给予γδT细胞输注液。

在前述中任一例的一个实施例中，所述方法进一步包含在第0天之前给予预处理化学疗法方案。

在前述中任一例的一个实施例中，所述方法进一步包含在第0天之后给予T细胞耗竭方案。

在前述中任一例的一个实施例中，所述方法进一步包含在第0天之后给予GvHD预防方案。

在前述中任一例的一个实施例中，所述方法进一步包含在第0天之后给予生长因子。

在前述中任一例的一个实施例中，所述方法进一步包含以下中的至少两个的组合：(i)在第0天之前给予预处理化学疗法方案；(ii)在第0天之后给予T细胞耗竭方案；(iii)在第0天之后给予GvHD预防方案；以及(iv)在第0天之后给予生长因子。

在前述中任一例的一个实施例中，所述方法进一步包含以下中的至少三个的组合：(i)在第0天之前给予预处理化学疗法方案；(ii)在第0天之后给予T细胞耗竭方案；(iii)在第0天之后给予GvHD预防方案；以及(iv)在第0天之后给予生长因子。

在前述中任一例的一个实施例中，所述方法进一步包含以下中的每一个的组合：(i)在第0天之前给予预处理化学疗法方案；(ii)在第0天之后给予T细胞耗竭方案；(iii)在第0天之后给予GvHD预防方案；以及(iv)在第0天之后给予生长因子。

在前述中任一例的一个实施例中，所描述的HSCT方法将使所输注供体T细胞的有益作用(包括(但不限于)植入、免疫重建和GvT)达到最大。在前述中任一例的另一个实施例中，所描述的HSCT方法将使所输注供体T细胞的有害作用(如(但不限于)GvHD)减到最小。在前述中任一例的又另一个实施例中，通过所述方法来实现前述的组合。

在前述中任一例的一个实施例中，从单倍体相合供体收集PBSC移植物，并且将细胞产物分成受到最低限度操控的HCT产物和γδT细胞产物，所述经过最低限度操控的HCT产物将在移植日给予(如在HSCT中作为标准)，所述γδT细胞产物将在移植之后至多25天内给予，例如在一个实施例中，在移植之后≥3天内给予。使用本公开的方法，在引起GvHD的同种异体反应性T细胞在移植后减少并且免疫抑制快速递减之后追加γδT细胞(经由输注)将降低血液科恶性病在单倍体相合HCT之后复发的风险。

在前述中任一例的一个实施例中，在单倍体相合造血干细胞移植物输注液中输注的PBSC数目如所属领域中已知。待输注细胞数目的选择可以取决于如所属领域中已知的多种因素，如(但不限于)待治疗的疾病或病状和个体的条件。

在前述中任一例的一个实施例中，在第二移植物输注液中输注至多5×10⁸个γδT细胞。在前述中任一例的一个实施例中，在第二移植物输注液中输注1×10⁷个γδT细胞。在前述中任一例的一个实施例中，在第二移植物输注液中输注至多5×10⁶个γδT细胞。在前述中任一例的一个实施例中，在第二移植物输注液中输注至多5×10⁸个γδT细胞/千克。在前述中任一例的一个实施例中，在第二移植物输注液中输注1×10⁷个γδT细胞/千克。在前述中任一例的一个实施例中，在第二移植物输注液中输注至多5×10⁶个γδT细胞/千克。待输注细胞数目的选择可以取决于如所属领域中已知的多种因素，如(但不限于)待治疗的疾病或病状和个体的条件。

在一个实施例中，第二移植物输注液或γδT细胞产物含有≥60％γδT细胞。在一个实施例中，第二移植物输注液或γδT细胞产物含有≥60％γδT细胞和≤5％αβT细胞。在一个实施例中，第二移植物输注液或γδT细胞产物含有≥60％γδT细胞、≤5％αβT细胞和≤25％NK细胞。

在前述中任一例的一个实施例中，本公开的方法可以与HSCT所用的任何病状结合使用。在前述中任一例的另一个实施例中，所述病状係选自以下中的一个：(i)患者患有瘤形成性血液学病症，并且具有根据美国国家综合癌症网络(National ComprehensiveCancer Network；NCCN)或其它标准指南的同种异体移植适应症，所述适应症如下；(a)具有高风险特征的急性成淋巴细胞性白血病[ALL]²⁵或复发性疾病(复发性ALL)；(b)霍奇金²⁶或非霍奇金淋巴瘤²⁷[HL或NHL]：其中缓解持续时间少于1年的复发性疾病、在先前自体移植之后复发或用化学疗法未能实现完全反应(complete response；CR)；和(c)骨髓恶性病(如例如具有中/高风险特征(按NCCN基准)的急性骨髓性白血病[AML]²⁸或复发性疾病，或处于血液学缓解或慢性期的慢性骨髓白血病[CML]²⁹)²⁸；(ii)骨髓病症(如例如具有中/高风险特征的骨髓发育不良综合征[MDS]³⁰或难治性疾病或骨髓增生性病症；在具有高风险特征或为难治性疾病的情况下是原发性或继发性的)³¹以及(iii)其它病状，如(但不限于)星形细胞瘤、非典型畸胎样横纹肌样瘤(Atypical Teratoid Rhaboid Tumor；ATRT)、脑干神经胶质瘤、脉络丛肿瘤、癌瘤和乳头瘤、颅咽管瘤、促结缔组织增生性婴儿星形细胞瘤、生殖细胞肿瘤、成神经管细胞瘤、神经纤维瘤、寡树突神经胶质瘤、视神经胶质瘤、成神经细胞瘤、尤文氏肉瘤(Ewing's Sarcoma)和原始神经外胚层瘤(Primitive Neuroectodermal Tumor；PNET)。

在前述中任一例的一个实施例中，本公开的方法可以与预处理化学疗法方案结合使用。在一个实施例中，预处理化学疗法方案是所属领域中已知的任何方案。在另一个实施例中，预处理化学疗法方案是以下中的一种(其中的每一种皆描述于本文方法部分中)：(i)对于骨髓疾病，可以使用氟达拉滨/白消安/全身照射预处理疗法；(ii)对于不具有严重共病的</＝40岁患者中的ALL或侵袭性NHL或HL，可以使用全身照射/环磷酰胺(TBI/CY)预处理方案；或(iii)对于大于40岁患者或具有严重共病(其预示在使用高强度Cy/TBI的情况下具有高非复发死亡率(non-relapse mortality；NRM))的任何年龄患者中的ALL或淋巴瘤，可以使用氟达拉滨/TBI预处理方案。

在前述中任一例的一个实施例中，本公开的方法与体内T细胞耗竭方案组合使用。在一个实施例中，可以使用所属领域中已知的任何此类方案。在一个实施例中，T细胞耗竭方案是在第+1天与第+10天之间进行环磷酰胺治疗。在一个实施例中，T细胞耗竭方案是以介于30与70mg/kg之间或50mg/kg的量进行环磷酰胺治疗。在一个实施例中，T细胞耗竭方案是在第+3天和第+4天以介于30与70mg/kg之间或50mg/kg的量进行环磷酰胺治疗。

在前述中任一例的一个实施例中，使用GvHD预防方案。在一个实施例中，GvHD预防方案是所属领域中已知的任何方案。在另一个实施例中，GvHD预防方案提供药剂的数目减少和/或待使用的一种或多种药剂的浓度降低，其中所述药剂提供免疫系统抑制。在另一个实施例中，GvHD预防方案是以下中的一种：(i)从第+5天开始到第+35天，将以15mg/kg经口(PO)每日3次给予(霉酚酸吗啉乙酯(mycophenolate mofetil))(最大日剂量为3克)。可以按照医生判断使用静脉内调配物，直到患者确立可靠的PO摄入为止。在第+5天开始，将以每天0.03mg/kg(可以如对药物与并行药剂相互作用而言标准的方式调整给药)IV输注形式给予他克莫司(tacrolimus)，并且在耐受PO摄入时转换为口服。将继续给予他克莫司直到第+100天为止，并且接着在不存在活性GvHD证据的情况下，可以在第+180天前递减到无；(ii)在第+5天开始，将以每天0.03mg/kg(可以如对药物与并行药剂相互作用而言标准的方式调整给药)IV输注形式给予他克莫司，并且在耐受PO摄入时转换为口服他克莫司。将继续给予他克莫司直到第+100天为止，并且接着在不存在活性GvHD证据的情况下，可以在第+180天前递减到无；或(iii)在第+5天开始，将以每天0.03mg/kg(可以如对药物与并行药剂相互作用而言标准的方式调整给药)IV输注形式给予他克莫司，并且在耐受PO摄入时转换为口服他克莫司。将继续给予他克莫司直到第+50天为止，并且接着在不存在活性GvHD证据的情况下，可以在第+100天前递减到无。

在前述中任一例的一个实施例中，本公开的方法可以与生长因子治疗结合使用。在一个实施例中，可以使用任何生长因子治疗方案。在另一个实施例中，生长因子是粒细胞集落刺激因子(granulocyte-colony stimulating factor；G-CSF)。在另一个实施例中，从第+5天到约第+20天或从第+5天到约第+15天给予G-CSF。在另一个实施例中，在移植之后第+5天时以约5mcg/kg给予G-CSF，直到中性粒细胞植入为止。

实例

实例1-αβT细胞耗竭

用于αβT细胞耗竭的方法是所属领域中已知的，并且可以使用所属领域中已知的任何方法。在一个实施例中，使用以下αβT细胞耗竭方法。具有α/βTCR试剂套组和其它相关试剂的装置用于αβT细胞耗竭。α/βTCR试剂是对αβ细胞具有特异性的无菌单克隆抗体试剂。将根据制造商的说明书并如先前所描述进行αβT细胞的耗竭(16)。简单来说，将白血球清除术/离体扩增产物与缀合于磁性颗粒的适当抗体一起培育，并且接着使用装置(美天旎生物技术公司(Miltenyi Biotec))来加工。plus仪器是加工血液样本(细胞产物)的软件控制仪器。管组是具有专用细胞选择柱的单次使用式无菌一次性管组。PBS/EDTA缓冲液是无菌、等渗、磷酸盐缓冲的1mM EDTA生理盐水溶液，用作用于体外制备血细胞的外部洗涤和输送流体。

实例2-离体γδT细胞扩增

用于γδT细胞扩增的方法是所属领域中已知的，并且可以使用所属领域中已知的任何方法。在一个实施例中，经由外周血液抽取或白血球清除术获得外周血液单核细胞(peripheral blood mononuclear cell；PBMC)。以1-2×10⁶/mL的密度将PBMC产物放到培养物中，并且添加2mM(诺华公司(Novartis,Inc.)；唑来膦酸(zoledronicacid))和100u/mL白介素-2(IL-2，德国贝尔吉施格拉德巴赫的美天旎生物技术公司(Miltenyi Biotec,Bergish Gladbach,GERMANY)以及允许单核细胞粘附的适当GMP级基础培养基培养物或生物反应器系统(例如组织培养塑料或生物反应器系统(美天旎生物技术公司))。在培养14天后，采集细胞并且耗尽αβT细胞。

优选地，使用以下αβT细胞耗竭方法。具有α/βTCR试剂套组和其它相关试剂的或装置用于αβT细胞耗竭。α/βTCR试剂是对αβ细胞具有特异性的无菌单克隆抗体试剂。根据制造商的说明书并如先前所描述进行αβT细胞的耗竭(16)。简单来说，将白血球清除术/离体扩增产物与缀合于磁性颗粒的适当抗体一起培育，并且接着使用或装置(美天旎生物技术公司)来加工。plus仪器是加工血液样本(细胞产物)的软件控制仪器。和管组是具有专用细胞选择柱的单次使用式无菌一次性管组。PBS/EDTA缓冲液是无菌、等渗、磷酸盐缓冲的1mM EDTA生理盐水溶液，用作用于体外制备血细胞的外部洗涤和输送流体。

实例3-临床研究

为了入选研究，患者必须满足所有合格基准并且不由排除基准排除。

合格基准

研究的合格基准如下：

(i)患者患有瘤形成性血液学病症，并且具有根据美国国家综合癌症网络(NCCN)或其它标准指南的同种异体移植适应症，所述适应症如下；(a)具有高风险特征的急性成淋巴细胞性白血病[ALL]²⁵或复发性疾病(复发性ALL)；(b)霍奇金²⁶或非霍奇金淋巴瘤²⁷[HL或NHL]：其中缓解持续时间少于1年的复发性疾病、在先前自体移植之后复发或用化学疗法未能实现完全反应(CR)；和(c)骨髓恶性病(具有中/高风险特征(按NCCN基准)的急性骨髓性白血病[AML]²⁸或复发性疾病，或处于血液学缓解或慢性期的慢性骨髓白血病[CML]²⁹)²⁸；

(ii)骨髓病症(具有中/高风险特征的骨髓发育不良综合征[MDS]³⁰或难治性疾病或骨髓增生性病症；在具有高风险特征或为难治性疾病的情况下是原发性或继发性的)³¹；

(iii)没有可获得的合适的HLA匹配供体；

(iv)年龄基准：19到65岁；

(v)器官功能基准：应在研究登记之前35天内进行以下器官功能测试：(a)心脏：通过MUGA或超声心动图，LVEF为50％或更高；(b)肺部：FVC、FEV1和DLCO(经过校正)若是预期值的50％或更高；(c)肾：血清肌酐水平为<2mg/dl或如由科克罗夫特-高尔特公式(Cockcroft-Gault Formula)计算的肌酐清除率(CrCl)估计值必须等于或大于40mL/min/1.73m²；以及肝：血清胆红素≤1.5×正常值上限(ULN)，天冬氨酸酯转氨酶(AST)/丙氨酸转氨酶(ALT)≤2.5×ULN，并且碱性磷酸酶≤2.5×ULN；

(vi)表现状态：卡氏评分(Karnofsky)≥70％；以及

(vii)同意：所有患者必须被告知这一研究的研究性质，并且根据公共机构和联邦指南给出书面知情同意。

排除基准

以下排除基准可适用：(i)对药剂不适应；(ii)未确定适当看护者；(iii)可能妨碍患者进行临床研究的不受控医学或精神病学病症(主治医生判断)；(iv)活性中枢神经系统(CNS)瘤形成牵连；(v)已知对DMSO过敏的患者；(vi)人类免疫缺陷病毒-1(HumanImmunodeficiency Virus-1；HIV1)或HIV2阳性；以及(vii)怀孕或哺乳。

还将遵循以下供体合格基准：(i)HLA分型(分型为高分辨率的A、B、C和DRB1)；(ii)合适的供体，医学上确认供给；以及(iii)合格供体，符合与感染性疾病传播相关的所有供体筛选和测试要求。

研究治疗

预处理化学疗法方案

所公开的方法将用于治疗多种病状。取决于待治疗的病状，将使用以下预处理方案中的一种。

对于骨髓疾病，使用氟达拉滨/白消安/全身照射预处理疗法。这一方案是经过修改的氟达拉滨加白消安预处理方案。当使用清髓性氟达拉滨加白消安方案时，一般目标是实现浓度曲线下面积(area under the concentration curve；AUC)为20,000的白消安总剂量。因为方案添加移植后CY，所以白消安目标将减小到16,000AUC以使方案相关毒性减到最小。在使用白消安时，将按公共机构指南给予癫痫预防药。将给予400cGy TBI(以200cGy×2形式给予)以实现允许植入的恰当免疫抑制。在第+3天和第+4天还将给予50mg/kg移植后CY。患者将按照公共机构指南接受美司钠(MESNA)(一种在涉及环磷酰胺和异环磷酰胺的癌症化学疗法中作为佐剂用于肾保护的有机硫化合物)和水化以用于预防出血性膀胱炎。所述方案进一步描述于下文并说明于图1中。

第-7天白消安60mg IV(具有使AUC为16,000的PK的测试剂量)

第-6天氟达拉滨40mg/m²IV

第-5天白消安PK引导IV给药(使用已确认的PK)，氟达拉滨40mg/m²IV

第-4天氟达拉滨40mg/m²IV

第-3天白消安PK引导IV给药，氟达拉滨40mg/m²IV

第-2天白消安PK引导IV给药

第-1天白消安PK引导给药IV(添加这一内容：与目前方案不同，我将改变下图)。

第0天TBI 200cGy×2份(总剂量400cGy)，接着移植

第+3天CY 50mg/kg IV

第+4天CY 50mg/kg IV

全身照射/环磷酰胺(TBI/CY)预处理方案将用于不具有严重共病的</＝40岁患者中的ALL或侵袭性NHL或HL。用于这些患者的标准清髓性方案是TBI 1,200cGy和CY 60mg/kg×2天。在这一研究中，TBI剂量将保持相同但移植前CY剂量将减少到在第-2天20mg/kg，并且移植后CY剂量将减少到在第+3天和第+4天50mg/kg。因此，CY总剂量在这一方案中不变。患者将按照公共机构指南接受美司钠和水化以用于预防出血性膀胱炎。所述方案进一步描述于下文并说明于图2中。

第-5天TBI 200cGy/份(2份)

第-4天TBI 200cGy/份(2份)

第-3天TBI 200cGy/份(2份)

第-2天CY 20mg/kg IV

第-1天休息

第0天移植

第+3天CY 50mg/kg IV

第+4天CY 50mg/kg IV

氟达拉滨/TBI预处理方案将用于大于40岁患者或具有严重共病(其预示在使用高强度Cy/TBI的情况下具有高非复发死亡率(NRM))的任何年龄患者中的ALL或淋巴瘤。这些患者将接受氟达拉滨40mg/m²×4天加TBI 800cGy而不是常用的1,200cGy。在第+3天和第+4天将给予50mg/kg移植后CY。患者将按照公共机构指南接受美司钠和水化以用于预防出血性膀胱炎。所述方案进一步描述于下文并说明于图3中。

第-6天氟达拉滨40mg/m²IV

第-5天氟达拉滨40mg/m²IV

第-4天氟达拉滨40mg/m²IV

第-3天氟达拉滨40mg/m²IV

第-2天TBI 200cGy/份(2份)

第-1天TBI 200cGy/份(2份)

第0天移植

第+3天CY 50mg/kg IV

第+4天CY 50mg/kg IV

化学疗法剂量调整

化学疗法给药将基于调整后的体重，除非实际体重小于理想体重(ideal bodyweight；IBW)，在所述情况下我们将使用实际体重。体重计算如下：

●理想体重(IBW)：

○男性：IBW＝50+([(以cm为单位的高度×0.39)-60]×2.3)

○女性：IBW＝45.5+([(以cm为单位的高度×0.39)-60]×2.3)

●调整后的体重＝IBW+(实际重量-IBW)×0.4

供体选择、动员和收集

对于接受α/β耗尽供体白细胞输注的患者，筛选合格并适用于根据公共机构程序进行同种异体造血干细胞供给的供体。将在移植之前一天对合适并合格的单倍体相合供体进行外周血液单采血液成分术以用于收集干细胞，其目标为每千克受体重量>5×l0⁶个细胞的CD34+细胞剂量(大于4×l0⁶个细胞/千克)。将去除含有最少1×10⁵个γδT细胞/千克的一部分产物以用于α/βT细胞耗竭，而不使移植产物的CD34剂量降低到低于4×10⁶个CD34+细胞/千克。将对经过操控的部分进行低温保存和储存，直到确认中性粒细胞植入为止。如果所收集干细胞总数小于5×10⁶个细胞/千克和/或无法在不使CD34剂量降低到低于4×10⁶个细胞/千克的情况下获得所需γδT细胞剂量，那么将不拆分用于额外加工并且所述患者将脱离研究。如果参与者在接受产物之前脱离研究，那么其将按照其指定预处理方案接受移植后Cytoxan并且继续跟踪复发情况。

对于接受离体扩增/活化γ/δT细胞的患者，筛选合格并适用于根据公共机构程序进行同种异体造血干细胞供给的供体。将在移植之前8±1天对合适并合格的单倍体相合供体进行外周血液单采血液成分术以用于收集干细胞。这一产物将标识为细胞疗法产物。在这一收集后，供体将接受动员以进行目标为≥4×l0⁶个细胞/千克的CD34+细胞剂量的收集。

细胞制造

对于γδT细胞扩增方案，将在标准生物学安全柜中在分类为ISO 7的空间中根据cGMP/cGMP制造方案来进行制造。将以1.0-2.0×10⁶/ml将供体单采血液成分术产物再悬浮于具有或不具有自体血清、2μM唑来膦酸盐(新泽西州东汉诺威的诺华肿瘤学公司(Novartis Oncology；East Hanover,NJ))+50u/ml GMP级IL-2(美天旎生物技术公司)的商业GMP级T细胞扩增培养基中。将培养物在原始密度下维持14天，并且在培养后第2天、第6天和第10天添加50u/ml IL-2并如由pH和细胞密度所确定而添加完全培养基。在培养开始后第0天、第+7天和第+14天时通过流式细胞测量术测定组成、纯度和存活率。在第+14±3天如所描述使用(加利福尼亚州奥本的美天旎生物技术公司(Miltenyi Biotec,Auburn,CA))或其它合适的生物反应器/细胞分离系统来耗尽αβT细胞。最终存活率测定通过对To Pro碘化物并入或其它细胞存活率染色进行流式细胞测量分析来获得。我们的最终产物放行基准是输注可接受的≥60％γδT细胞、≤5％αβT细胞和≤25％NK细胞。存活率必须确认为≥70％以放行输注用产物。存活率＜70％的产物将需要例外放行。使用针对K562细胞的体外细胞毒性分析来测定细胞产物的效力。

干细胞输注

因为待分开给予的一部分细胞产物经过低温保存，所以研究参与者在输注经过最低限度操控的部分期间将暴露于二甲亚砜(DMSO)。DMSO毒性是低温保存产物给药的可能并发症。副作用和症状一般与组织胺释放相关联。迹象和症状包括咳嗽、潮红、皮疹、胸闷、哮喘、恶心、呕吐和心血管不稳定性。采取标准干细胞输注防护措施以降低对DMSO的反应风险。这些防护措施包括减缓输注速率、抗组织胺预先用药和在给药期间持续监控。

移植后CY治疗

移植后CY(50mg/kg)的输注将在第+3天和第+4天进行。将按照公共机构指南给予美司钠以预防出血性膀胱炎。

γδT细胞输注

γδT细胞输注将在从移植后第+7天到确认中性粒细胞植入后第+3天的任何时间进行。这一时间安排将准许在完全CY清除之后输注γδT细胞输注液。CY的消除半衰期是3-12小时(LexiComp专论)，因此在5个半衰期(＝60小时)之后的预期完全清除将在预计在第+7天输注γδT细胞移植物之前发生。通常预期的植入是大约第+14天到第+18天。将按照用于移植后供体细胞输注的项目标准次序设定来进行产物输注。如果患者在第7天条件不良，如高烧、血压不稳定或严重容量超负荷，那么可以按主治医师的判断而暂停γδT细胞输注的输注2天(直到第9天为止)。另外，如果患者在移植后CY之后出现肾功能不全，那么可以延迟输注直到第9天为止以确保CY在γδT细胞输注之前已经得到清除。

输注将是如下。使用标准3+3I期递增流程，个体将接受1×10⁷个γδT细胞/千克的固定剂量。前三个个体将接受如上文所描述的完整HSCT后免疫抑制方案。将对每一组的第一名患者进行观察持续90天，随后将下一名患者加入方案中。

预防

GvHD预防将由移植后CY(在移植后第+3天和第+4天50mg/kg IV)组成。其它GvHD预防将按需要包括霉酚酸吗啉乙酯(MMF，)和钙调神经磷酸酶抑制剂，如他克莫司。在一个实施例中，本公开的方法允许缩减的GvHD预防方案。

在一个实施例中，GvHD方案如下。从第+5天开始到第+35天，将以15mg/kg PO每日3次给予(最大日剂量为3克)。可以按照医生判断使用静脉内调配物，直到患者确立可靠的PO摄入为止。在第+5天开始，将以每天0.03mg/kg(可以如对药物与并行药剂相互作用而言标准的方式调整给药)IV输注形式给予他克莫司，并且在耐受PO摄入时转换为口服。将继续给予他克莫司直到第+100天为止，并且接着在不存在活性GvHD证据的情况下，可以在第+180天前递减到无。

在另一个实施例中，GvHD方案如下。在第+5天开始，将以每天0.03mg/kg(可以如对药物与并行药剂相互作用而言标准的方式调整给药)IV输注形式给予他克莫司，并且在耐受PO摄入时转换为口服。将继续给予他克莫司直到第+100天为止，并且接着在不存在活性GvHD证据的情况下，可以在第+180天前递减到无。在这一实施例的一个方面中，如果在使用前述段落中的方案的情况下未观察到剂量限制性毒性，那么利用上文方案。

在又另一个实施例中，GvHD方案如下。在第+5天开始，将以每天0.03mg/kg(可以如对药物与并行药剂相互作用而言标准的方式调整给药)IV输注形式给予他克莫司，并且在耐受PO摄入时转换为口服。将继续给予他克莫司直到第+50天为止，并且接着在不存在活性GvHD证据的情况下，可以在第+100天前递减到无。在这一实施例的一个方面中，如果在使用前述段落中的方案的情况下未观察到剂量限制性毒性，那么利用上文方案。

由此，使用本公开的方法，可以有利地鉴别利用最小药剂和/或浓度的GvHD预防方法，并且将其与本公开的方法组合使用。

感染预防将按照公共机构指南使用抗真菌、抗细菌、PCP和抗病毒疗法来进行。在大致第+20天开始，将用每周CMV抗原筛选或PCR监测来跟踪巨细胞病毒抢先疗法，并且继续直到患者停止免疫抑制为止。在大致第+20天开始，将最少每隔一周监测HHV6、EBV和腺病毒PCR，并且继续直到患者停止免疫抑制为止。

下文提供剂量递增的流程

生长因子使用

作为标准护理的一部分，单倍体相合移植患者将在移植之后第+5天开始G-CSF5mcg/kg，直到中性粒细胞植入为止。

观察

将监测以下观察结果。

移植前所需观察：(在移植最终评估的研究登记日之前35天内)

1.病史和物理测验(包括卡氏表现状态评分)。

2.CBC、BUN、肌酐、AST、ALT、总胆红素

3.超声心动图或MUGA

4.肺功能测试：FVC、FEV1、DLCO(相对于血红素进行过校正)。

5.单侧骨髓穿刺液和活组织切片(对于急性白血病患者)、形态和细胞遗传学。

6.在对于疾病状态评定适当时，CT扫描或全身CT/PET扫描。

7.腰椎穿刺将在患有ALL的患者中进行。可以按主治医生的判断给予移植前鞘内治疗。

除上文提到的所需观察以外，推荐同种异体移植接受者在对于移植前检查适当时进行以下观察：感染性疾病标记物(Hep A、Hep B、Hep C、HTLV、HIV、RPR、西尼罗病毒(WestNile Virus)、VZV、CMV、HSV、弓形虫IgG、GM分析)；怀孕筛查；肾和肝脏功能实验室小组；复查大于40岁女性患者的乳房X线照片(mammogram)；复查大于50岁患者的结肠镜检查或其它适当GI筛查；复查大于50岁男性的PSA水平；复查牙齿状态；以及复查和评估非恶性病相关的共病病状。

移植后所需观察和后续规划：

疾病状态-如由疾病类型和位点所指示，适当测试将用于评定移植之后的疾病状态。

对于白血病患者：对于临床上稳定并且在所述时间点不展现疾病进展的所有患者，将在移植后第+30(±7)天、第+100(±14)天、第+180(±21)天和1年(±45天)时收集骨髓穿刺液和活组织切片样本用于形态检查和细胞遗传学。另外，每当怀疑复发时，皆将收集单侧骨髓穿刺液。

对于不具有已知骨髓牵连史的淋巴瘤患者：对于临床上稳定并且在所述时间点不展现疾病进展的所有患者，将在移植后第+100(±14)天、第+180(±21)天和1年(±45天)时进行CT扫描或全身CT/PET扫描。

对于具有骨髓牵连史的淋巴瘤患者：对于临床上稳定并且在所述时间点不展现疾病进展的所有患者，适当时将在移植后第+100(±14)天、第+180(±21)天和1年(±45天)时进行CT扫描或全身CT/PET扫描，和/或将在第+30(±7)天、第+100(±14)天、第+180(±21)天和1年(±45天)时收集骨髓穿刺液和活组织切片样本用于形态检查和细胞遗传学。

出于这一研究的目的，复发由白血病中的形态或细胞遗传学疾病证据界定，或由进展性淋巴瘤的放射性证据(包括PET扫描上氟-脱氧葡萄糖[FDG]亲合病变的再现)界定。

将按照BMT标准和/或如临床上指示进行免疫重建研究。推荐的实验室时间安排是在移植后第+30(±7)天、第+60(±7)天、第+100(±14)天、第+180(±21)天和1年(±45天)时。这一小组将包括测量CD3+、CD4+、CD8+、CD56+、CD19+、Treg(CD4+/CD25+)效应细胞/记忆细胞、和GD T细胞的百分比和绝对计数。

将按照BMT标准进行嵌合研究以评估持续植入。推荐的实验室时间安排是在移植后第+30(±7)天、第+60(±7)天、第+100(±14)天、第+180(±21)天和1年(±45天)时。

患者将一周(±3天)至少一次去诊所直到移植后第+100天为止以进行物理测验评定急性GvHD(使用共同基准³²)。接着，其将一个月(±14天)至少一次去诊所直到移植后1年为止以进行物理测验评定慢性GvHD和复发或进展的迹象和症状。将在每一访问日期进行不良事件和毒性监测。

患者将在移植之后一年时进行心脏功能评估(超声心动图或MUGA扫描)、肺功能测试(FVC、FEV1和DLCO)以及内分泌功能测试(甲状腺功能测试，包括TSH和自由T4，以及随机皮质醇水平)。此后每年重复PFT。

研究时段是从适应开始到移植后第100天。将在移植之后持续至少2年跟踪患者存活率和复发情况。移植后1年随访时间间隔确定为临床上必要的。在移植之后复发的患者将仅跟踪存活率。

化学疗法药物

阿糖胞苷(Cytarabine).阿糖胞苷(1-β-D-阿拉伯糖呋喃糖基胞嘧啶)是式C₉H₁₃N₃O₅抗赘生性药物(M.W.243.22)，其以无菌溶液形式用于静脉内、鞘内或皮下给药。指示与其它批准抗癌药物组合的阿糖胞苷注射剂用于在成人和儿童患者的急性非淋巴细胞性白血病中诱导缓解。还发现其适用于治疗急性非淋巴细胞性白血病、急性成淋巴细胞性白血病、急性骨髓性白血病和慢性髓细胞性白血病急变期。指示阿糖胞苷注射剂(仅无防腐剂制剂)的鞘内给药预防和治疗脑膜白血病。其展现细胞期特异性，主要杀死进行DNA合成的细胞(S期)并且在某些条件下阻断细胞从G1期进展到S期。尽管作用机制没有得到完全理解，但阿糖胞苷似乎经由抑制DNA聚合酶而起作用。

环磷酰胺(Cytoxan，CY).环磷酰胺是合成抗赘生性药物，以化学方式识别作为-[双(2-氯乙基)氨基]四氢-2H-1,3,2-噁嗪磷2-氧化物单水合物。CY的分子式是C₇H₁₅Cl₂N₂O₂P·H₂O，并且分子量为279.1。用于非经肠使用的CY必须通过添加0.9％氯化钠溶液(如果直接注射)或无菌水(如果输注)来制备。在水中构成的情况下，CY是低渗的；因此，其不应直接注射。CY与氯化钠溶液的溶液可以静脉内、肌肉内、腹膜内或胸膜内注射。所构成的环磷酰胺在室温下物理和化学稳定24小时，或在冷藏情况下稳定六天。所制备的溶液不含有任何微生物防腐剂；因此，应监测溶液的无菌性。

氟达拉滨磷酸氟达拉滨(氟达拉滨)是具有化学名称2-氟-9-(5-0-膦酸基-0-D-阿拉伯糖-呋喃糖基)-9H-嘌呤-6-胺(2-氟-阿糖-AMP)。分子式是C₁₀H₁₃FN₅O₇P，并且分子量为365.2。IV氟达拉滨通过向白色固体团块中添加无菌水来制备。在2mL无菌水中复原的情况下，固体团块产生大致浓度为25mg/mL磷酸氟达拉滨的溶液。遵循氟达拉滨进一步制备和给药程序的公共机构指南。复原的IV氟达拉滨不含有抗微生物防腐剂；因此，其应在复原8小时内使用。不与另一种相容性未知的静脉内溶液同时输注。

白消安白消安是双官能性烷基化剂，已知化学上为分子式为CH₃SO₂O(CH₂)₄OSO₂CH₃并且分子量为246g/mol的1,4-丁二醇二甲烷磺酸酯。IV白消安在使用前必须用NS或D5W稀释。稀释剂量应是体积的10倍，以使得白消安的最终浓度是大致0.5mg/mL。输注泵应用于给予经过稀释的白消安溶液。不与另一种相容性未知的静脉内溶液同时输注。警告：快速输注IV白消安尚未进行测试并且不推荐。白消安根据公共机构指南制备和给予。

他克莫司他克莫司是由筑波链霉菌(StretocycesTsukubaensis)产生的大环内酯免疫抑制剂。他克莫司经验式为C₄₄H₆₉NO₁₂-H₂O并且式量为822.05。他克莫司呈白色晶体或结晶粉末。其实际上不溶于水，可自由溶于乙醇，并且极可溶于甲醇和氯仿。他克莫司抑制T淋巴细胞活化，但准确作用机制未知。实验证据表明他克莫司结合于细胞内蛋白质FKBP-12。接着形成他克莫司-FKBP-12、钙、调钙蛋白和钙调神经磷酸酶的复合物，并且抑制钙调神经磷酸酶的磷酸酶活性。这一作用可以防止活化T细胞核因子(NF-AT)的脱磷酸化和易位，所述活化T细胞核因子是被认为引发用于形成淋巴因子(如白介素-2、γ干扰素)的基因转录的核组件。净结果是抑制T淋巴细胞活化(即，免疫抑制)。他克莫司(注射剂)在使用前必须用NS或D5W稀释。以连续输注液形式给予他克莫司。口服制剂将每12小时空腹给予。

霉酚酸吗啉乙酯(磁动势， ). (霉酚酸吗啉乙酯)是霉酚酸(MPA)的2-吗啉基乙酯，一种免疫抑制剂，单磷酸肌苷脱氢酶(IMPDH)抑制剂。霉酚酸吗啉乙酯(MMF)的化学名称是(E)-6-(1,3-二氢-4-羟基-6-甲氧基-7-甲基-3-氧代-5-异苯并呋喃基)-4-甲基-4-己烯酸2-吗啉基乙酯。其经验式为C₂₃H₃₁NO₇并且分子量为433.50。霉酚酸吗啉乙酯是白色到灰白色结晶粉末。其微溶于水(在pH 7.4下43μg/mL)；溶解度在酸性介质中增加(在pH 3.6下4.27mg/mL)。其可自由溶于丙酮，可溶于甲醇，并且微溶于乙醇。在1-辛醇/水(pH 7.4)缓冲溶液的表观分配系数是238。中霉酚酸吗啉乙酯的pKa值对(N-吗啉基)是5.6并且对酚系基团是8.5。霉酚酸吗啉乙酯盐酸盐在D5W中的溶解度为65.8mg/mL。复原溶液的pH是2.4到4.1。口服给药调配物(片剂、胶囊、悬浮液)应空腹给予以避免MPA吸收变化。口服溶液可以经由鼻胃管(内部直径最小8French，1.7mm)给予；口服悬浮液不应与其它药剂混合。延迟释放片剂不应压碎、切割或咀嚼。静脉内溶液应历经至少2小时给予(外周或中央静脉)；不通过快速注射或快速浓注(bolus injection)给予静脉内溶液。

非格司亭是非格司亭(filgrastim)商标名，表示重组甲硫氨酰基人类粒细胞集落刺激因子(r-methHuG-CSF)。是通过重组DNA技术利用大肠杆菌(Escherichia coli，E.coli)产生的具有175个氨基酸的蛋白质。的分子量为18,800道尔顿，并且除在大肠杆菌中表达所必要的N端处额外甲硫氨酸以外，氨基酸序列与天然人类DNA类似。可以IV或皮下输注液形式给予。推荐在骨髓输注之后至少24小时给予，并且剂量修改由中性粒细胞反应决定。必要时，可以在添加有白蛋白(人类)的5％右旋糖中稀释以防止吸附于塑料材料。在任何时间皆不推荐稀释到小于5mcg/mL的最终浓度。不用生理盐水稀释，这是由于产物可能沉淀。当使用小瓶或预填充注射器时，不保留未使用的药物用于稍后给药。弃置所有未使用的部分。

全身照射(TBI).将按放射肿瘤学家建构的标准护理程序给予TBI。对于青春期后患者，剂量/分级不超出2Gy×6的单独TBI很好地处于大多数正常器官的耐受性内，5年内严重后期毒性(器官衰竭或严重功能异常)的风险＜5％。值得注意的例外事项是白内障出现、骨髓抑制以及卵巢和睾丸功能异常的风险。另外，存在较小风险的第二恶性病。最常见的急性作用包括恶心、呕吐、腹泻和腮腺体疼痛肿胀。当TBI在移植设定下与其它疗法结合给予时，存在额外副作用风险，包括食欲不振、口腔干燥、吞咽困难或疼痛、头痛、口腔炎(喉咙/口腔疼痛)、皮肤完整性改变、脱发、肿胀、感染和/或出血风险增加、可能肺衰竭、干咳、疲乏、焦虑、发热、可能肝脏衰竭、肺疤痕化、视力丧失、呼吸急促、不育、胃灼热、膀胱炎、睡眠紊乱、胃肠和生殖泌尿功能改变、神经病变、瘘、内分泌功能改变、心包炎以及第二癌症风险增加。总体而言，当如上文所概述与其它疗法结合给予放射时，最严重毒性的发生率仍是较低的，罕见的严重副作用是可能的。

实例4-临床研究结果

ABD研究的预期结果是急性GvHD的发生率将与接受移植后环磷酰胺而不补充ABD移植物的单倍体相合移植患者无不同。对于EAGD患者也预期这一结果，但另外，我们预测在早期移植后时段(100天)中的感染性并发症发生率较低，并且复发性疾病(1、2和5年)的发生率降低。

参考文献

[1]Copelan EA:造血干细胞移植(Hematopoietic stem-celltransplantation).《新英格兰医学杂志(The New England journal of medicine)》2006,354:1813-26。

[2]Lee SJ,Klein J,Haagenson M,Baxter-Lowe LA,Confer DL,Eapen M,Fernandez-Vina M,Flomenberg N,Horowitz M,Hurley CK,Noreen H,Oudshoorn M,Petersdorf E,Setterholm M,Spellman S,Weisdorf D,Williams TM,Anasetti C:高分辨率供体-受体HLA匹配有助于不相关供体骨髓移植成功(High-resolution donor-recipient HLA matching contributes to the success of unrelated donor marrowtransplantation).《血液(Blood)》2007,110:4576-83。

[3]Alshemmari S,Ameen R,Gaziev J:成人单倍体相合造血干细胞移植(Haploidentical hematopoietic stem-cell transplantation in adults).《骨髓研究(Bone marrow research)》2011,2011:303487。

[4]Aversa F,Terenzi A,Tabilio A,Falzetti F,Carotti A,Ballanti S,Felicini R,Falcinelli F,Velardi A,Ruggeri L,Aloisi T,Saab JP,Santucci A,Perruccio K,Martelli MP,Mecucci C,Reisner Y,Martelli MF:完全单体型不匹配造血干细胞移植：在具有高复发风险的患有急性白血病的患者中的II期研究(Full haplotype-mismatched hematopoietic stem-cell transplantation:a phase II study inpatients with acute leukemia at high risk of relapse).《临床肿瘤学杂志(Journalof clinical oncology)》：美国临床肿瘤学会(American Society of ClinicalOncology)官方杂志2005,23:3447-54。

[5]Gale RP,Horowitz MM:骨髓移植中的移植物抗白血病(Graft-versus-leukemia in bone marrow transplantation).The国际骨髓移植登记咨询委员会(Advisory Committee of the International Bone Marrow Transplant Registry).《骨髓移植(Bone marrow transplantation)》1990,6Suppl 1:94-7。

[6]Horowitz MM,Gale RP,Sondel PM,Goldman JM,Kersey J,Kolb HJ,Rimm AA,Ringden 0,Rozman C,Speck B等人:骨髓移植之后的移植物抗白血病反应(Graft-versus-leukemia reactions after bone marrow transplantation).《血液》1990,75:555-62。

[7]Ferrara JL,Yanik G:急性移植物抗宿主病：病理生理学、风险因素和预防策略(Acute graft versus host disease:pathophysiology,risk factors,andprevention strategies).《血液病和肿瘤学临床进展：H&O(Clinical advances inhematology&oncology:H&O)》2005,3:415-9,28。

[8]Oevermann L,Handgretinger R:单倍体相合移植新策略(New strategiesfor haploidentical transplantation).《儿科研究(Pediatric research)》2012,71:418-26。

[9]Lamb LS,Jr.,Lopez RD:γδT细胞：免疫疗法新前沿？(gammadelta T cells:anew frontier for immunotherapy？)《血液与骨髓移植生物学：美国血液与骨髓移植学会杂志(Biology of blood and marrow transplantation:journal of the AmericanSociety for Blood and Marrow Transplantation)》2005,11:161-8。

[10]Moretta L,Locatelli F,Pende D,Marcenaro E,Mingari MC,Moretta A:杀手Ig样受体在单倍体相合造血干细胞移植中介导的自然杀手细胞同种异体反应性控制(Killer Ig-like receptor-mediated control of natural killer cellalloreactivity in haploidentical hematopoietic stem cell transplantation).《血液》2011,117:764-71。

[11]Palmer JM,Rajasekaran K,Thakar MS,Malarkannan S:造血干细胞移植后的自然杀手细胞临床相关性(Clinical relevance of natural killer cells followinghematopoietic stem cell transplantation).《癌症杂志(Journal of Cancer)》2013,4:25-35。

[12]Lamb LS,Jr.,Henslee-Downey PJ,Parrish RS,Godder K,Thompson J,LeeC,Gee AP:在T细胞耗尽的部分不匹配的白血病相关供体骨髓移植后，无疾病存活者中的TCRγδ+ T细胞出现率增加(Increased frequency of TCR gamma delta+ T cells indisease-free survivors following T cell-depleted,partially mismatched,relateddonor bone marrow transplantation for leukemia).《血液疗法杂志(Journal ofHematotherapy)》1996,5:503-9。

[13]Lamb LS,Jr.,Gee AP,Hazlett LJ,Musk P,Parrish RS,O'Hanlon TP,GeierSS,Folk RS,Harris WO,McPherson K,Lee C,Henslee-Downey PJ:T细胞耗竭法对循环γδT细胞重建的影响和在移植物抗白血病作用中的潜在作用(Influence of T celldepletion method on circulating gammadelta T cell reconstitution andpotential role in the graft-versus-leukemia effect).《细胞疗法(Cytotherapy)》1999,1:7-19。

[14]Godder KT,Henslee-Downey PJ,Mehta J,Park BS,Chiang KY,AbhyankarS,Lamb LS:在部分不匹配相关供体骨髓移植之后恢复并伴随γδT细胞增加的急性白血病患者的长期无疾病存活率(Long term disease-free survival in acute leukemiapatients recovering with increased gammadelta T cells after partiallymismatched related donor bone marrow transplantation).《骨髓移植(Bone MarrowTransplant)》2007,3 9:7 51-7。

[15]Handgretinger R:用于单倍体相合骨髓移植的移植物工程改造新方法(Newapproaches to graft engineering for haploidentical bone marrowtransplantation).《肿瘤学研讨会(Seminars in oncology)》2012,39:664-73。

[16]Smetak M,Kimmel B,Birkmann J,Schaefer-Eckart K,Einsele H,WilhelmM,Kunzmann V:用于供体先天性淋巴细胞输注DILi)的临床规模单步CD4(+)和CDS(+)细胞耗竭(Clinicalscale single-step CD4(+)and CDS(+)cell depletion for donorinnate lymphocyte infusion DILi)).《骨髓移植》2008,41:643-50。

[17]Girardi M,Oppenheim DE,Steele CR,Lewis JM,Glusac E,Filler R,HobbyP,Sutton B,Tigelaar RE,Hayday AC:γδT细胞对皮肤恶性病的调节(Regulation ofcutaneous malignancy by gammadelta T cells).《科学(Science)》2001,294:605-9。

[18]Kaminski MJ,Cruz PD,Jr.,Bergstresser PR,Takashima A:由小鼠树突状表皮T细胞杀死皮肤源性肿瘤细胞(Killing of skin-derived tumor cells by mousedendritic epidermal T-cells).《癌症研究(Cancer Research)》1993,53:4014-9。

[19]Groh V,Rhinehart R,Secrist H,Bauer S,Grabstein KH,Spies T:MICA和MICB的肿瘤源性γδT细胞的宽肿瘤相关表达和识别(Broad tumor-associatedexpression and recognition by tumor-derived gamma delta T cells of MICA andMICB).《美国国家科学院院刊(Proceedings of the National Academy of Sciences ofthe United States of America)》1999,96:6879-84。

[20]Bauer S,Groh V,Wu J,Steinle A,Phillips JH,Lanier LL,Spies T:一种应激诱导型MICA受体NKG2D对NK细胞和T细胞的活化(Activation of NK cells and Tcells by NKG2D,a receptor for stress-inducible MICA)[参见评论].《科学》1999,285:727-9。

[21]Groh V,Steinle A,Bauer S,Spies T:肠上皮γδT细胞对应激诱导的MHC分子的识别(Recognition of stress-induced MHC molecules by intestinal epithelialgammadelta T cells).《科学》1998,279:1737-40。

[22]Boismenu R,Havran WL:γδT细胞固有印象(An innate view of gammadelta T cells).《免疫学当前观点(Curr Opin Immunol)》1997,9:57-63。

[23]Blazar BR,Taylor PA,Bluestone JA,Vallera DA:鼠类γ/δ表达性T细胞经由识别非经典主要组织相容性复合体类别1b抗原影响同种异体植入(Murine gamma/delta-expressing T cells affect alloengraftment via the recognition ofnonclassical major histocompatibility complex class 1b antigens).《血液》1996,87:4463-72。

[24]Drobyski WR,Majewski D:供体γδT淋巴细胞促进跨越小鼠中主要组织相容性屏障的同种异体植入(Donor gamma delta T lymphocytes promote allogeneicengraftment across the major histocompatibility barrier in mice).《血液》1997,89:1100-9。

[25]Drobyski WR,Hessner MJ,Klein JP,Kabler-Babbitt C,Vesole DH,Margolis DA,Keever-Taylor CA:T细胞耗竭加抢救免疫疗法以及供体白细胞输注作为治疗进行HLA一致性同胞骨髓移植的慢性期慢性骨髓性白血病患者的策略(T celldepletion plus salvage immunotherapy with donor leukocyte infusions as astrategy to treat chronic-phase chronic myelogenous leukemia patientsundergoing HLA-identical sibling marrow transplantation).[勘误出现在《血液》2000年2月15日；95(4):1137].《血液》1999,94:434-41。

[26]Neipp M,Exner BG,Maru D,Haber M,Gammie JS,Pham SM,Ildstad ST:使用抗αβTCR单克隆抗体的同种异体骨髓T细胞耗竭：预防移植物抗宿主病而不影响在大鼠中的植入可能性(T-cell depletion of allogeneic bone marrow using anti-alphabetaTCRmonoclonal antibody:prevention of graft-versus-host disease without affectingengraftment potential in rats).《实验血液学(Exp Hematol)》1999,27:860-7。

[27]Kawanishi Y,Passweg J,Drobyski WR,Rawlings P,Cook-Craig A,CasperJ,Pietryga D,Garbrecht F,Camitta B,Horowitz M,Juckett M,Margolis D,FlomenbergN,Keever-Taylor CA:T细胞亚群剂量对T细胞耗尽骨髓移植结果的影响(Effect of Tcell subset dose on outcome of T cell-depleted bone marrow transplantation).《骨髓移植》1997,19:1069-77。

[28]Henslee PJ,Thompson JS,Romond EH,Doukas MA,Metcalfe M,MarshallME,MacDonald JS:HLA和单倍体相合骨髓的T细胞耗竭减少移植物抗宿主病，但其可能削弱移植物抗白血病作用(T cell depletion of HLA and haploidentical marrow reducesgraft-versus-host disease but it may impair a graft-versus leukemia effect).《移植会议记录(Transplantation Proceedings)》1987,19:2701-6。

[29]Ellison CA,MacDonald GC,Rector ES,Gartner JG:鼠类急性移植物抗宿主病病理学中的γδT细胞.γδT细胞在宿主中介导自然杀手样细胞毒性和从供体中消除这些细胞显著降低死亡率的证据(Gamma delta T cells in the pathobiology of murineacute graft-versus-host disease.Evidence that gamma delta T cells mediatenatural killer-like cytotoxicity in the host and that elimination of thesecells from donors significantly reduces mortality).《免疫学杂志(J Immunol)》1995,155:4189-98。

[30]Schilbach KE,Geiselhart A,Wessels JT,Niethammer D,HandgretingerR:人类γδT淋巴细胞发挥针对成神经细胞瘤细胞的天然和IL-2诱导细胞毒性(Humangammadelta T lymphocytes exert natural and IL-2-induced cytotoxicity toneuroblastoma cells).《免疫疗法杂志(J Immunother)》2000,23:536-48。

[31]Lamb LS,Jr.,Musk P,Ye Z,van Rhee F,Geier SS,Tong JJ,King KM,Henslee-Downey PJ:人类γδ(+)T淋巴细胞在不存在同种异体反应的情况下具有体外移植物抗白血病活性(Human gammadelta(+)T lymphocytes have in vitro graft vsleukemia activity in the absence of an allogeneic response).《骨髓移植》2001,27:601-6。

[32]Cela ME,Holladay MS,Rooney CM,Richardson S,Alexander B,Krance RA,Brenner MK,Heslop HE:在来自不匹配家族成员或匹配不相关供体的T淋巴细胞耗尽骨髓移植之后的γδT淋巴细胞再生.《骨髓移植》1996,17:243-7。

[33]Yabe M,Yabe H,Hattori K,Hinohara T,Morimoto T,Kato S,Kusunoki A:T细胞受体γ/δ表达性双阴性(CD4-/CD8-)淋巴细胞在同种异体骨髓移植之后的转变(Transition of T cell receptor gamma/delta expressing double negative(CD4-/CD8-)lymphocytes after allogeneic bone marrow transplantation).《骨髓移植》1994,14:741-6。

[34]Viale M,Ferrini S,Bacigalupo A:同种异体骨髓移植之后的TCRγ/δ阳性淋巴细胞(TCR gamma/delta positive lymphocytes after allogeneic bone marrowtransplantation).《骨髓移植》1992,10:249-53。

[35]Tsuji S,Char D,Bucy RP,Simonsen M,Chen CH,Cooper MD:γδT细胞是由CD4+αβT细胞引发的急性移植物抗宿主反应中的次要参与者(Gamma delta T cells aresecondary participants in acute graft-versus-host reactions initiated by CD4+alpha beta T cells).《欧洲免疫学杂志(European Journal of Immunology)》1996,26:420-7。

[36]Keever-Taylor CA,Bredeson C,Loberiza FR,Casper JT,Lawton C,RizzoD,Burns WH,Margolis DA,Vesole DH,Horowitz M,Zhang MJ,Juckett M,Drobyski WR:对在T细胞耗尽同种异体BMT之后GVHD出现的风险因子分析：HLA差异、ABO不相容性和T细胞耗竭方法的作用(Analysis of risk factors for the development of GVHD after Tcell-depleted allogeneic BMT:effect of HLA disparity,ABO incompatibility,andmethod of T cell depletion).《血液与骨髓移植生物学(Biology of Blood&MarrowTransplantation)》2001,7:620-30。

[37]Mehta J,Singhal S,Gee AP,Chiang KY,Godder K,Rhee Fv F,DeRienzo S,O'Neal W,Lamb L,HensleeDowney PJ:用于急性白血病的来自部分HLA不匹配的家族供体的骨髓移植：单中心201名患者的经验(Bone marrow transplantation from partiallyHLA-mismatched family donors for acute leukemia:single-center experience of201 patients).《骨髓移植》2004,33:389 96。

[38]Lamb LS HLMP等人:T细胞耗竭法对循环gd+ T细胞重建的影响和在移植物抗白血病作用中的潜在作用(Influence of T cell depletion method on circulating gd+ T cell reconstitution and potential role in the graft-versus-leukemiaeffect).《细胞疗法》1999,1:7-19。

[39]Eto M,Mayumi H,Tomita Y,Yoshikai Y,Nishimura Y,Maeda T,Ando T,Nomoto K:供体来源的宿主反应性成熟T细胞的特异性破坏在环磷酰胺诱导的耐受性小鼠中预防移植物抗宿主病(Specific destruction of host-reactive mature T cells ofdonor origin prevents graft-versus-host disease in cyclophosphamide-inducedtolerant mice).《免疫学杂志(Journal of immunology)》1991,146:1402-9。

[40]Strauss G,Osen W,Debatin KM:免疫抑制药物在T细胞中诱导细胞凋亡并调节活化和效应功能(Induction of apoptosis and modulation of activation andeffector function in T cells by immunosuppressive drugs).《临床与实验免疫学(Clinical and experimental immunology)》2002,128:255-66。

[41]Luznik L,Engstrom LW,Iannone R,Fuchs EJ:移植后环磷酰胺促进主要组织相容性复合体一致同种异体骨髓在用低剂量全身照射适应的小鼠中的植入(Posttransplantation cyclophosphamide facilitates engraftment of majorhistocompatibility complex-identical allogeneic marrow in mice conditionedwith lowdose total body irradiation).《血液与骨髓移植生物学：美国血液与骨髓移植学会杂志》2002,8:131-8。

[42]Luznik L,Jalla S,Engstrom LW,Iannone R,Fuchs EJ:主要组织相容性复合体不相容性细胞在用氟达拉滨非清髓性适应、低剂量全身照射和移植后环磷酰胺之后的持久植入(Durable engraftment of major histocompatibility complex-incompatiblecells after nonmyeloablative conditioning with fludarabine,low-dose totalbody irradiation,and posttransplantation cyclophosphamide).《血液》2001,98:3456-64。

[43]Mayumi H,Umesue M,Nomoto K:环磷酰胺诱导的免疫耐受性：概述(Cyclophosphamide-induced immunological tolerance:an overview).《免疫生物学(Immunobiology)》1996,195:129-39。

[44]Burroughs LM,O'Donnell PV,Sandmaier BM,Storer BE,Luznik L,SymonsHJ,Jones RJ,Ambinder RF,Maris MB,Blume KG,Niederwieser DW,Bruno B,Maziarz RT,Pulsipher MA,Petersen FB,Storb R,Fuchs EJ,Maloney DG:HLA匹配的相关、不相关或HLA单倍体相合相关造血细胞移植在非清髓性适应后对于复发性或难治性霍奇金淋巴瘤的结果比较(Comparison of outcomes of HLA-matched related,unrelated,or HLA-haploidentical related hematopoietic cell transplantation followingnonmyeloablative conditioning for relapsed or refractory Hodgkin lymphoma).《血液与骨髓移植生物学：美国血液与骨髓移植学会杂志》2008,14:1279-87。

[45]Luznik L,O'Donnell PV,Symons HJ,Chen AR,Leffell MS,Zahurak M,Gooley TA,Piantadosi S,Kaup M,Ambinder RF,Huff CA,Matsui W,Bolanos-Meade J,Borrello I,Powell JD,Harrington E,Warnock S,Flowers M,Brodsky RA,SandmaierBM,Storb RF,Jones RJ,Fuchs EJ:使用非清髓性适应和高剂量移植后环磷酰胺用于血液学恶性病的HLA单倍体相合骨髓移植(HLA-haploidentical bone marrowtransplantation for hematologic malignancies using nonmyeloablativeconditioning and high-dose,posttransplantation cyclophosphamide).《血液与骨髓移植生物学：美国血液与骨髓移植学会杂志》2008,14:641-50。

[46]Bronstein CG,Fuchs EJ,Carter SL,Karanes C,Costa LJ,Wu J,DevineSM,Wingard JR,Aljitawi OS,Cutler CS,Jagasia MH,Ballen KK,Eapen M,O'DonnellPV,血液、骨髓移植临床试验网络：在降低强度使用之后的替代性供体移植：使用部分HLA不匹配的相关骨髓或不相关双重脐带血移植物的平行2期试验结果(Blood,MarrowTransplant Clinical Trials N:Alternative donor transplantation after reducedintensity conditioning:results of parallel phase 2trials using partially HLA-mismatched related bone marrow or unrelated double umbilical cord bloodgrafts).《血液》2011,118:282-8。

[47]Alvamas JC,Brown PA,Aoun P,Ballen KK,Bellam N,Blum W,Boyer MW,Carraway HE,Coccia PF,Coutre SE,Cultrera J,Damon LE,DeAngelo DJ,Douer D,Frangoul H,Frankfurt 0,Goorha S,Millenson MM,O'Brien S,Petersdorf SH,Rao AV,Terezakis S,Uy G,Wetzler M,Zelenetz AD,Naganuma M,Gregory KM,美国国家综合癌症网络：急性成淋巴细胞性白血病(National Comprehensive Cancer N:Acutelymphoblastic leukemia).《美国国家综合癌症网络杂志(Journal of the NationalComprehensive Cancer Network)：JNCCN》2012,10:858-914。

[48]Hoppe RT,Advani RH,Ai WZ,Ambinder RF,Bello CM,Bierman PJ,Blum KA,Dabaja B,Duron Y,Forero A,Gordon LI,Hemandez-Ilizaliturri FJ,Hochberg EP,Maloney DG,Mansur D,Mauch PM,Metzger M,Moore JO,Morgan D,Moskowitz CH,PoppeM,Pro B,Weiss L,Winter JN,Yahalom J,淋巴瘤NH：霍奇金淋巴瘤.《美国国家综合癌症网络杂志：JNCCN》2011,9:1020-58。

[49]Zelenetz AD,Wierda WG,Abramson JS,Advani RH,Andreadis CB,BartlettN,Bellam N,Byrd JC,Czuczman MS,Fayad LE,Glenn MJ,Gockerman JP,Gordon LI,Harris NL,Hoppe RT,Horwitz SM,Kelsey CR,Kim YH,Krivacic S,LaCasce AS,Nademanee A,Porcu P,Press 0,Pro B,Reddy N,Sokol L,Swinnen L,Tsien C,Vose JM,Yahalom J,Zafar N,Dwyer MA,Naganuma M,美国国家综合癌症网络：非霍奇金氏淋巴瘤(National Comprehensive Cancer N:NonHodgkin's lymphomas),第1.2013版.《美国国家综合癌症网络杂志：JNCCN》2013,11:257-72；第73问。

[50]ODonnell MR,Tallman MS,Abboud CN,Altman JK,Appelbaum FR,Arber DA,Attar E,Borate U,Coutre SE,Damon LE,Lancet J,Maness LJ,Marcucci G,Martin MG,Millenson MM,Moore JO,Ravandi F,Shami PJ,Smith BD,Stone RM,Strickland SA,WangES,Gregory KM,Naganuma M:急性骨髓性白血病(Acute myeloid leukemia),第2.2013版.《美国国家综合癌症网络杂志：JNCCN》2013,11:1047-55。

[51]O'Brien S,Radich JP,Abboud CN,Akhtari M,Altman JK,Berman E,DeAngelo DJ,Deininger M,Devine S,Fathi AT,Gotlib J,Jagasia M,Kropf P,MooreJO,PalleraA,Pinilla-Ibarz J,Reddy VV,Shah NP,Smith BD,Snyder DS,Wetzler M,Gregory K,Sundar H:慢性骨髓性白血病(Chronic Myelogenous Leukemia),第1.2014版.《美国国家综合癌症网络杂志：JNCCN》2013,11:1327-40。

[52]Greenberg PL,Attar E,Bennett JM,Bloomfield CD,Borate U,De CastroCM,Deeg HJ,Frankfurt O,Gaensler K,Garcia-Manero G,Gore SD,Head D,Komrokji R,Maness LJ,Millenson M,O'Donnell MR,Shami PJ,Stein BL,Stone RM,Thompson JE,Westervelt P,Wheeler B,Shead DA,Naganuma M:骨髓发育不良综合征：肿瘤学临床实践指南(Myelodysplastic syndromes:clinical practice guidelines in oncology).《美国国家综合癌症网络杂志：JNCCN》2013,11:838-74。

[53]Tefferi A:原发性骨髓纤维化：关于诊断、风险层别和控制的2013年更新(Primary myelofibrosis:2013update on diagnosis,risk-stratification,andmanagement).《美国血液病杂志(American journal of hematology)》2013,88:141-50。

Claims

1.一种用于同种异体造血干细胞移植(HSCT)的方法，包含以下步骤：

i.在第0天向个体给予经过最低限度操控的包含外周血液干细胞(PBSC)的单倍体相合造血干细胞移植物输注液；

ii.向所述个体给予提供体内T细胞耗竭的药剂；

iii.视情况使γδT细胞群体离体扩增；以及

iv.向所述个体给予包含富含γδT细胞并且耗尽αβT细胞的T细胞的第二移植物输注液。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述第二移植物在PBSC输注后约+7到约+25天时给予。

3.根据权利要求2所述的方法，其中所述第二移植物在PBSC输注后约+7到约+9天时给予。

4.根据权利要求1所述的方法，进一步包含在第0天之前给予所属领域中已知的任何预处理化学疗法方案。

5.根据权利要求4所述的方法，其中所述预处理化学疗法方案选自：对于骨髓疾病，氟达拉滨(Fludarabine)/白消安(Busulfan)/全身照射；对于不具有严重共病的≤40岁患者中的急性成淋巴细胞性白血病(ALL)或侵袭性非霍奇金淋巴瘤(NHL)或霍奇金淋巴瘤(HL)，全身照射/环磷酰胺(TBI/CY)；以及对于大于40岁患者或具有严重共病(其预示在使用高强度TBI/CY的情况下具有高非复发死亡率(NRM))的任何年龄患者中的ALL或淋巴瘤，氟达拉滨/全身照射。

6.根据权利要求1所述的方法，其中体内T细胞耗竭在第0天之后开始并且包含使用所属领域中已知的任何体内T细胞方案。

7.根据权利要求6所述的方法，其中所述体内T细胞耗竭方案选自：相对于在第0天向个体给予经过最低限度操控的包含PBSC的单倍体相合造血干细胞移植物输注液，在第+1天与第+10天之间进行环磷酰胺治疗；以介于30与70mg/kg之间或50mg/kg的量进行环磷酰胺治疗；以及在第+3天和第+4天以介于30与70mg/kg之间或50mg/kg的量进行环磷酰胺治疗。

8.根据权利要求1所述的方法，进一步包含在第0天之后给予移植物抗宿主病(GvHD)预防方案，其中所述GvHD方案是所属领域中已知的任何GvHD方案。

9.根据权利要求8所述的方法，其中所述GvHD预防方案选自：提供免疫抑制剂的数目减少和/或待使用的一种或多种所述药剂的浓度降低；相对于在第0天给予PBSC，从第+5天开始到第+35天，以15mg/kg每天三次口服给予(霉酚酸吗啉乙酯(mycophenolate mofetil))(最大日剂量为3克)，其中能够使用静脉内调配物给药，直到确立可靠的口服摄入为止，进一步包含在第+5天开始，以每天约0.03mg/kg的剂量静脉内输注他克莫司(tacrolimus)，所述剂量针对药物与并行药剂的相互作用加以调节，并且在耐受口服摄入时转换为口服他克莫司，其中将继续给予所述他克莫司直到第+100天为止，并且接着在不存在活性GvHD证据的情况下，能够在第+180天前递减到无；在第+5天开始，以每天约0.03mg/kg的剂量静脉内输注他克莫司，所述剂量针对药物与并行药剂的相互作用加以调节，并且在耐受口服摄入时转换为口服他克莫司，其中将继续给予所述他克莫司直到第+100天为止，并且接着在不存在活性GvHD证据的情况下，能够在第+180天前递减到无；以及在第+5天开始，以每天约0.03mg/kg的剂量静脉内输注他克莫司，所述剂量针对药物与并行药剂的相互作用加以调节，并且在耐受口服摄入时转换为口服他克莫司，其中将继续给予所述他克莫司直到第+50天为止，并且接着在不存在活性GvHD证据的情况下，能够在第+100天前递减到无。

10.根据权利要求1所述的方法，进一步包含在第0天之后给予生长因子，其中所述生长因子治疗方案是所属领域中已知的任何生长因子治疗方案。

11.根据权利要求10所述的方法，其中所述生长因子是粒细胞集落刺激因子(G-CSF)，其给药选自第+5天到约第+20天；和第+5天到约第+15天。

12.根据权利要求11所述的方法，其中所述G-CSF在移植之后第+5天以约5μg/kg给予，直到中性粒细胞植入为止。

13.根据权利要求1到12中任一项所述的方法，其中所述方法进一步包含以下中的任何两个、三个或四个的组合：

i.在第0天之前给予预处理化学疗法方案；

ii.在第0天之后给予T细胞耗竭方案；

iii.在第0天之后给予GvHD预防方案；以及

iv.在第0天之后给予生长因子。

14.根据权利要求1所述的方法，其中所述第二移植物输注液中所输注γδT细胞的数目小于约5×10⁸个γδT细胞/千克、约1×10⁷个γδT细胞/千克或约5×10⁶个γδT细胞/千克。

15.根据权利要求1所述的方法，其中所述第二移植物输注液包含≥60％γδT细胞；≥60％γδT细胞和≤5％αβT细胞；或≥60％γδT细胞、≤5％αβT细胞和≤25％NK细胞。

16.根据权利要求1所述的方法，其中所述HSCT与HSCT所用于的任何病状结合使用。

17.根据权利要求16所述的方法，其中所述病状选自具有同种异体移植适应症的瘤形成性血液学病症；具有高风险特征的急性成淋巴细胞性白血病(ALL)；复发性ALL；霍奇金淋巴瘤(HL)；非霍奇金淋巴瘤(NHL)；其中缓解持续时间少于一年的复发性HL或NHL；在先前自体移植之后复发的HL或NHL；用化学疗法未能实现完全反应(CR)的HL或NHL；骨髓恶性病；具有中/高风险特征的急性骨髓性白血病(AML)；复发性AML；处于血液学缓解或慢性期的慢性骨髓白血病(CML)；骨髓病症；具有中/高风险特征的骨髓发育不良综合征(MDS)；难治性MDS；具有骨髓增生性病症的MDS；具有高风险特征的原发性或继发性MDS；难治性MDS；星形细胞瘤；非典型畸胎样横纹肌样瘤(Atypical Teratoid Rhaboid Tumor；ATRT)；脑干神经胶质瘤；脉络丛肿瘤；癌瘤和乳头瘤；颅咽管瘤；促结缔组织增生性婴儿星形细胞瘤；生殖细胞肿瘤；成神经管细胞瘤；神经纤维瘤；寡树突神经胶质瘤；视神经胶质瘤；成神经细胞瘤；尤文氏肉瘤(Ewing's Sarcoma)和原始神经外胚层瘤(Primitive NeuroectodermalTumor；PNET)。

18.一种用于同种异体造血干细胞移植(HSCT)的方法，包含以下步骤：

v.在第0天向个体给予包含外周血液干细胞(PBSC)的单倍体相合造血干细胞移植物输注液；

vi.向所述个体给予提供体内T细胞耗竭的药剂；

vii.视情况使γδT细胞群体离体扩增；以及

viii.向所述个体给予包含富含γδT细胞并且耗尽αβT细胞的T细胞的第二移植物输注液。

19.根据权利要求18所述的方法，其中所述第二移植物在PBSC输注后约+7到约+25天时给予。

20.根据权利要求19所述的方法，其中所述第二移植物在PBSC输注后约+7到约+9天时给予。

21.根据权利要求18所述的方法，进一步包含在第0天之前给予所属领域中已知的任何预处理化学疗法方案。

22.根据权利要求21所述的方法，其中所述预处理化学疗法方案选自：对于骨髓疾病，氟达拉滨/白消安/全身照射；对于不具有严重共病的≤40岁患者中的急性成淋巴细胞性白血病(ALL)或侵袭性非霍奇金淋巴瘤(NHL)或霍奇金淋巴瘤(HL)，全身照射/环磷酰胺(TBI/CY)；以及对于大于40岁患者或具有严重共病(其预示在使用高强度TBI/CY的情况下具有高非复发死亡率(NRM))的任何年龄患者中的ALL或淋巴瘤，氟达拉滨/全身照射。

23.根据权利要求18所述的方法，其中体内T细胞耗竭在第0天之后开始并且包含使用所属领域中已知的任何体内T细胞方案。

24.根据权利要求23所述的方法，其中所述体内T细胞耗竭方案选自：相对于在第0天向个体给予经过最低限度操控的包含PBSC的单倍体相合造血干细胞移植物输注液，在第+1天与第+10天之间进行环磷酰胺治疗；以介于30与70mg/kg之间或50mg/kg的量进行环磷酰胺治疗；以及在第+3天和第+4天以介于30与70mg/kg之间或50mg/kg的量进行环磷酰胺治疗。

25.根据权利要求18所述的方法，进一步包含在第0天之后给予移植物抗宿主病(GvHD)预防方案，其中所述GvHD方案是所属领域中已知的任何GvHD方案。

26.根据权利要求25所述的方法，其中所述GvHD预防方案选自：提供免疫抑制剂的数目减少和/或待使用的一种或多种所述药剂的浓度降低；相对于在第0天给予PBSC，从第+5天开始到第+35天，以15mg/kg每天三次口服给予(霉酚酸吗啉乙酯)(最大日剂量为3克)，其中能够使用静脉内调配物给药，直到确立可靠的口服摄入为止，进一步包含在第+5天开始，以每天约0.03mg/kg的剂量静脉内输注他克莫司，所述剂量针对药物与并行药剂的相互作用加以调节，并且在耐受口服摄入时转换为口服他克莫司，其中将继续给予所述他克莫司直到第+100天为止，并且接着在不存在活性GvHD证据的情况下，能够在第+180天前递减到无；在第+5天开始，以每天约0.03mg/kg的剂量静脉内输注他克莫司，所述剂量针对药物与并行药剂的相互作用加以调节，并且在耐受口服摄入时转换为口服他克莫司，其中将继续给予所述他克莫司直到第+100天为止，并且接着在不存在活性GvHD证据的情况下，能够在第+180天前递减到无；以及在第+5天开始，以每天约0.03mg/kg的剂量静脉内输注他克莫司，所述剂量针对药物与并行药剂的相互作用加以调节，并且在耐受口服摄入时转换为口服他克莫司，其中将继续给予所述他克莫司直到第+50天为止，并且接着在不存在活性GvHD证据的情况下，能够在第+100天前递减到无。

27.根据权利要求18所述的方法，进一步包含在第0天之后给予生长因子，其中所述生长因子治疗方案是所属领域中已知的任何生长因子治疗方案。

28.根据权利要求27所述的方法，其中所述生长因子是粒细胞集落刺激因子(G-CSF)，其给药选自第+5天到约第+20天；和第+5天到约第+15天。

29.根据权利要求28所述的方法，其中所述G-CSF在移植之后第+5天以约5μg/kg给予，直到中性粒细胞植入为止。

30.根据权利要求18到29中任一项所述的方法，其中所述方法进一步包含以下中的任何两个、三个或四个的组合：

v.在第0天之前给予预处理化学疗法方案；

vi.在第0天之后给予T细胞耗竭方案；

vii.在第0天之后给予GvHD预防方案；以及

viii.在第0天之后给予生长因子。

31.根据权利要求18所述的方法，其中所述第二移植物输注液中所输注γδT细胞的数目小于约5×10⁸个γδT细胞/千克、约1×10⁷个γδT细胞/千克或约5×10⁶个γδT细胞/千克。

32.根据权利要求18所述的方法，其中所述第二移植物输注液包含≥60％γδT细胞；≥60％γδT细胞和≤5％αβT细胞；或≥60％γδT细胞、≤5％αβT细胞和≤25％NK细胞。

33.根据权利要求18所述的方法，其中所述HSCT与HSCT所用于的任何病状结合使用。

34.根据权利要求33所述的方法，其中所述病状选自具有同种异体移植适应症的瘤形成性血液学病症；具有高风险特征的急性成淋巴细胞性白血病(ALL)；复发性ALL；霍奇金淋巴瘤(HL)；非霍奇金淋巴瘤(NHL)；其中缓解持续时间少于一年的复发性HL或NHL；在先前自体移植之后复发的HL或NHL；用化学疗法未能实现完全反应(CR)的HL或NHL；骨髓恶性病；具有中/高风险特征的急性骨髓性白血病(AML)；复发性AML；处于血液学缓解或慢性期的慢性骨髓白血病(CML)；骨髓病症；具有中/高风险特征的骨髓发育不良综合征(MDS)；难治性MDS；具有骨髓增生性病症的MDS；具有高风险特征的原发性或继发性MDS；难治性MDS；星形细胞瘤；非典型畸胎样横纹肌样瘤(ATRT)；脑干神经胶质瘤；脉络丛肿瘤；癌瘤和乳头瘤；颅咽管瘤；促结缔组织增生性婴儿星形细胞瘤；生殖细胞肿瘤；成神经管细胞瘤；神经纤维瘤；寡树突神经胶质瘤；视神经胶质瘤；成神经细胞瘤；尤文氏肉瘤和原始神经外胚层瘤(PNET)。