CN107847615B

CN107847615B - 用于治疗cln2疾病的tpp1调配物及方法

Info

Publication number: CN107847615B
Application number: CN201680025984.6A
Authority: CN
Inventors: T·W·莱斯特; S·莫沙希; A·O·奥克哈马菲; C·A·奥尼尔
Original assignee: Biomarin Pharmaceutical Inc
Current assignee: Biomarin Pharmaceutical Inc
Priority date: 2015-05-08
Filing date: 2016-05-05
Publication date: 2022-01-25
Anticipated expiration: 2036-05-05
Also published as: US20190216905A1; EP3294345B1; US10279015B2; CN114225018A; ZA201707373B; IL273913A; KR20180004158A; US11229687B2; RU2017142727A; HRP20171905B1; HRP20171905A2; JP7421520B2; JP2021175760A; PT3294345T; AU2016262434B2; WO2016182862A1; IL255307A0; EP3294345A4; HK1250479A1; CN107847615A

Abstract

公开了用于鞘内、脑室内或眼内给药的包括重组人类三肽基肽酶‑1(rhTPP1)的调配物，及包括所述调配物的试剂盒。还公开使用rhTPP1预防及治疗神经元蜡样脂褐质沉积症(CLN2)疾病的症状的方法。所述调配物及方法有效使CLN2疾病进展停止且能够用于治疗患有CLN2或具有CLN2家族史的个体。

Description

用于治疗CLN2疾病的TPP1调配物及方法

相关申请的交叉引用

依据35U.S.C.§119(e)在此主张2016年2月26日提交的美国临时专利申请第62/300,171号及2015年5月8日提交的美国临时专利申请第62/158,789号的权益，且各申请案的公开内容以全文引用的方式并入本文中。

序列表

本申请含有呈计算机可读形式的序列表(49443_SeqListing.txt；8,137位元；2016年4月11日建立)，作为本发明的另一部分，其以全文引用的方式并入。

技术领域

本发明涉及包括重组人类三肽基肽酶-1的调配物及其用于治疗神经元蜡样脂褐质沉积症疾病及相关生理症状的用途。

背景技术

神经元蜡样脂褐质沉积症(CLN2)疾病是一种特征为由TPP1基因突变所引起的溶酶体酶三肽基肽酶-1(TPP1)不足的罕见遗传疾病。CLN2疾病作为一种常染色体隐性病症遗传，其中每100,000出生婴儿估计0.5的发病率。在缺乏TPP1下，通常由所述酶代谢的溶酶体存储物质在许多器官中累积，且在中枢神经系统中累积引起CLN2疾病典型的神经退化症状。CLN2疾病的未经治疗疾病进展已良好表征，且如来自北美洲及欧洲的独立患者群体的自然史数据所证实，所述疾病的自然史非常一致且可预测。

CLN2疾病具有显著‘经典’晚期婴儿表型。患有CLN2疾病的儿童通常发育正常，直到约3岁，此时显现第一症状。最常见地，CLN2患者将具有第一次无缘无故的抽搐且获得正常语言里程碑开始滞后。到3岁，所有患者均展现所述疾病的一或多种征象，包含例如抽搐、痴呆、运动丧失、运动障碍、失明、笨拙、共济失调及认知衰退。从临床症状发作起，疾病过程快速且具侵袭性，一般在2到4年内引起语言、认知、步态、精细运动、延髓功能及视力完全丧失，致使患者不能移动、失声及失明。患者保持在植物状态直到死亡，死亡通常发生在6与12岁之间。

已通过专门临床医师研发两种定量评级量表，评估CLN2疾病的严重程度且用于自然史研究中：(1)汉堡量表(Hamburg scale)(Steinfeld等人,《美国医学遗传学杂志(Am JMed Genet.)》2002；112(4):347-54)；及(2)威尔康奈尔医学院(Weill Cornell MedicalCollege，WCMC)量表(Worgall等人,《神经病学(Neurology.)》2007；69(6):521-35)。两种量表的结构及评估方法类似。两种量表测量CLN2患者中先前获得的重要神经病学里程碑的丧失，其中疾病评级量表中丧失的各单位表示渐进衰退中的基本里程碑。

未经治疗的患CLN2儿童中疾病过程的分析展示在疾病发作后其可预见地在3年内丧失所有语言及步态，平均每年丧失2.1个里程碑事件(即在疾病评级量表中丧失2.1分)。语言衰退通常先于步态，使得第一年的特征是可理解的言语丧失且进展到共济失调步态，第二年的特征是步行及可理解的语言丧失，且第三年的特征是任何运动或沟通丧失。

正研发重组人类三肽基肽酶-1(rhTPP1)作为可能用于CLN2疾病的治疗。rhTPP1蛋白质在细胞培养物中作为酶原(前酶)产生，其不具有酶活性。前酶在酸性pH值下(且通过溶酶体蛋白酶)在吸收到溶酶体后自体活化。成熟天然TPP1蛋白质是一种溶酶体丝氨酸蛋白酶，且是特征为高度保守的Ser-Glu-Asp(SED)催化三联体的丝多素(sedolisin)(丝氨酸-羧基肽酶)家族的唯一已知的哺乳动物成员。rhTPP1上的催化三联体由S456、E253及D341形成。酶的主要活性是作为具有广泛受质特异性的三肽基表肽酶。酶对其受质的活性引起三肽从蛋白质受质的N端连续释放(Oyama等人,《生物化学杂志(J Biochem.)》2005；138(2):127-34)。还已报导pH值优选地是3的二级、显著较弱的内蛋白质裂解活性(Lin等人,《生物化学杂志(J Biol Chem.)》2001；276(3):2249-55)。

唯一市售用于CLN2的治疗是对症治疗及支持治疗；目前尚无治疗选择批准用于减缓或停止CLN2的无情进展，更不必说逆转所述疾病的有害作用(Mole,S.E.及Williams,R.E.,2010,GeneReviews；Chang等人,《神经元蜡样脂褐质沉积症(巴藤病)(The NeuronalCeroid Lipofuscinoses(Batten Disease))》；2011,牛津大学出版社(Oxford UnivPress))。保存这些儿童运动、语言及/或视力的能力对患者及父母/护理人员来说均具有临床上有意义的益处。因此，需要新的CLN2的治疗，其降低或预防与所述疾病相关的生理功能退化。

发明内容

本发明涉及包括重组人类三肽基肽酶-1(rhTPP1)的调配物、试剂盒、方法及医学用途，且用于治疗神经元蜡样脂褐质沉积症(CLN2)疾病及治疗或预防一或多种与所述疾病发作相关的生理症状。在一个方面中，本发明提供一种包括rhTPP1的调配物，其用于脑室内、鞘内或眼内给药。任选地，rhTPP1包括SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2的氨基酸序列或其片段，例如在调配物中的浓度是约30mg/mL。调配物可具有约6.5的pH值。调配物可进一步包括以下任一个：约0.01mg/mL到约1mg/mL的浓度的氯化钾、约0.01mg/mL到约1mg/mL的浓度的氯化镁六水合物、约0.01mg/mL到约1mg/mL的浓度的氯化钙二水合物、约0.01mg/mL到约1mg/mL的浓度的磷酸氢二钠七水合物、约0.01mg/mL到约1mg/mL的浓度的磷酸二氢钠单水合物、约1mg/mL到约20mg/mL的浓度的氯化钠；或上述任一个或所有的组合。任选地，调配物不含防腐剂及/或在约5℃下稳定例如至少约6个月。在一个实施例中，调配物包括约30mg/mL的浓度的rhTPP1、约0.11mg/mL的浓度的磷酸氢二钠七水合物、约0.08mg/mL的浓度的磷酸二氢钠、约8.77mg/mL的浓度的氯化钠、约0.22mg/mL的浓度的氯化钾、约0.16mg/mL的浓度的氯化镁及约0.21mg/mL的浓度的氯化钙二水合物。

在另一个方面中，本发明提供一种治疗CLN2疾病或一或多种与CLN2疾病相关的症状的方法，包含向有需要的个体给药约10mL包括约300mg剂量的rhTPP1的组合物，其中所述组合物在约4小时的时间内给药所述个体。本发明还提供一种用于治疗个体的CLN2疾病或一或多种与CLN2疾病相关的症状的包括rhTPP1的组合物，包括约10mL包括约300mg剂量的rhTPP1的组合物，其中所述剂量在约4小时时间内给药所述个体。本发明还提供rhTPP1用于制造供治疗CLN2疾病或一或多种与CLN2疾病相关的症状的药剂的用途，其中所述药剂包括约10mL包括约300mg剂量的rhTPP1的组合物，其中所述剂量在约4小时时间内给药个体。在一个方面中，包括rhTPP1的组合物经由导管给药个体。给药组合物之后任选地通过给药多达约5mL的量，优选约3mL的量，更优选约2mL的量的冲洗溶液冲洗导管。本发明还提供一种预防或延迟CLN2疾病的一或多种症状发作的方法，包含向有需要的个体给药约10mL包括约300mg剂量的rhTPP1的组合物，任选地其中个体具有CNL2疾病家族史且其中所述组合物在约4小时的时间内给药所述个体。在一个方面中，包括rhTPP1的组合物经由导管给药个体。给药组合物之后任选地通过给药多达约5mL的量，优选约3mL的量，更优选约2mL的量的冲洗溶液冲洗导管。组合物可鞘内、脑室内及/或眼内给药，且任选地每隔一周给药。任选地，组合物脑室内或鞘内给药，且在即将给药包括rhTPP1的组合物时不从个体移除脑脊髓液下给药。在另一个实施例中，组合物可以等容方式给药，即从患者移除界定体积的CSF，所述体积与此后鞘内给药的组合物体积近似相等。

在一个方面中，本发明提供一种治疗CLN2疾病或一或多种与所述疾病相关的症状的方法，包含以有效维持个体中生理功能或减缓或减少生理功能退化的剂量及/或频率向有需要的个体给药rhTPP1，其中所述生理功能是语言功能、运动功能、视力或进食功能。本发明还提供一种用于治疗个体的CLN2疾病或一或多种与所述疾病相关的症状的包括rhTPP1的组合物，包括有效维持个体中生理功能或减缓或减少生理功能退化的剂量的rhTPP1，其中所述生理功能是语言功能、运动功能、视力或进食功能。本发明还提供rhTPP1用于制造供治疗CLN2疾病或一或多种与所述疾病相关的症状的药剂的用途，其中所述药剂包括有效维持个体中生理功能或减缓或减少生理功能退化的剂量的rhTPP1，其中所述生理功能是语言功能、运动功能、视力或进食功能。

在另一个方面中，本发明提供一种治疗个体的CLN2疾病或个体中一或多种与所述疾病相关的症状的方法，包含以有效改善个体中生理功能的剂量及/或频率向有需要的个体给药rhTPP1，其中所述生理功能是语言功能、运动功能、视力或进食功能。本发明还提供一种用于治疗个体的CLN2疾病或一或多种与所述疾病相关的症状的包括rhTPP1的组合物，包括有效改善个体中生理功能的剂量的rhTPP1，其中所述生理功能是语言功能、运动功能、视力或进食功能。本发明还提供rhTPP1用于制造供治疗CLN2疾病或一或多种与所述疾病相关的症状的药剂的用途，其中所述药剂包括有效改善个体中生理功能的剂量的rhTPP1，其中所述生理功能是语言功能、运动功能、视力或进食功能。在另一个方面中，本发明提供一种治疗个体的CLN2疾病或个体中一或多种与所述疾病相关的症状的方法，包含以有效预防或治疗所述疾病的神经病学症状的剂量及/或频率向有需要的疾病给药rhTPP1，其中所述神经病学症状是脑量下降、脑中灰质减少、抽搐或颅脑脊髓液增加。本发明还提供一种用于治疗个体的CLN2疾病或一或多种与所述疾病相关的症状的包括rhTPP1的组合物，包括有效预防或治疗所述疾病的神经病学症状的剂量的rhTPP1，其中所述神经病学症状是脑量下降、脑中灰质减少、抽搐或颅脑脊髓液增加。本发明还提供rhTPP1用于制造供治疗CLN2疾病或一或多种与所述疾病相关的症状的药剂的用途，其中所述药剂包括有效预防或治疗所述疾病的神经病学症状的剂量的rhTPP1，其中所述神经病学症状是脑量下降、脑中灰质减少、抽搐或颅脑脊髓液增加。任选地，个体具有CLN2疾病家族史。

在另一个方面中，本发明提供一种预防或减少个体中CLN2相关的运动/步态退化的方法，包含向所述个体给药治疗有效剂量的rhTPP1。本发明还提供一种包括治疗有效剂量的rhTPP1的组合物，用于预防或减少个体中CLN2相关的运动/步态退化。本发明还提供治疗有效剂量的rhTPP1的用途，用于制造供预防或减少个体中CLN2相关的运动/步态退化的药剂。在一个方面中，所述方法包含给药有效预防或减少如使用步态的WCMC疾病评级量表或运动的汉堡疾病评级量表所测量，与治疗前或治疗期间确定的先前评级比较，个体临床疾病评级中衰退的剂量的rhTPP1。

在另一个方面中，本发明提供一种预防或减少个体中CLN2相关的语言退化的方法，包含向所述个体给药治疗有效剂量的rhTPP1。本发明还提供一种包括治疗有效剂量的rhTPP1的组合物，用于预防或减少个体中CLN2相关的语言退化。本发明还提供治疗有效剂量的rhTPP1的用途，用于制造供预防或减少个体中CLN2相关的语言退化的药剂。在一个方面中，所述方法包含给药有效预防或减少如例如使用语言的WCMC或汉堡疾病评级量表所测量，与治疗前或治疗期间确定的先前评级比较，个体临床疾病评级中衰退的剂量的rhTPP1。

在另一个方面中，本发明提供一种预防或减少个体中CLN2相关的视力退化的方法，包含向所述个体给药治疗有效剂量的rhTPP1。本发明还提供一种包括治疗有效剂量的rhTPP1的组合物，其用于预防或减少个体中CLN2相关的视力退化。本发明还提供治疗有效剂量的rhTPP1的用途，用于制造供预防或减少个体中CLN2相关的视力退化的药剂。在一个方面中，所述方法包含给药有效预防或减少如例如使用视觉功能的汉堡疾病评级量表所测量，与治疗前或治疗期间确定的先前评级比较，个体临床疾病评级中衰退的剂量的rhTPP1。

在另一个方面中，本发明提供一种预防或减少个体中CLN2相关的脑量退化的方法，包含向所述个体给药治疗有效剂量的rhTPP1。本发明还提供一种包括治疗有效剂量的rhTPP1的组合物，用于预防或减少个体中CLN2相关的脑量退化。本发明还提供治疗有效剂量的rhTPP1的用途，用于制造供预防或减少个体中CLN2相关的脑量退化的药剂。在一个方面中，所述方法包含给药有效预防或减少与治疗前或治疗期间确定的先前体积比较，脑量下降及/或灰质体积下降的剂量的rhTPP1。

在一个方面中，本发明提供一种试剂盒，包括含有本文所述的rhTPP1及冲洗溶液的调配物。冲洗溶液可构成任何本发明调配物，其中rhTPP1省去。举例来说，冲洗溶液可包括约0.11mg/mL的浓度的磷酸氢二钠七水合物、约0.08mg/mL的浓度的磷酸二氢钠单水合物、约8.77mg/mL的浓度的氯化钠、约0.22mg/mL的浓度的氯化钾、约0.16mg/mL的浓度的氯化镁六水合物及约0.21mg/mL的浓度的氯化钙二水合物。任选地，试剂盒进一步包括用于植入的储集器及导管。任选地，试剂盒可包括一或多个选自由以下组成的组的元件：延伸管线、管线内滤器、端口针头、至少一个(任选地两个)注射器、至少一个(任选地两个)注射器针头及其组合。

以上概述不意图界定本发明的每个方面，且本发明的其它特征及优点将从以下详细描述，包含图式变得显而易见。本发明意图叙述为统一文献，且应了解涵盖本文所述的特征的所有组合，即使在本发明的相同句子、段落或章节中未一起发现所述特征组合。另外，本发明包含范围无论如何都比上文特定提及的变化狭窄的本发明的所有实施例作为另一方面。除非上下文明确要求更限制的含义，关于本发明的方面描述或主张的“一种(a/an)”，应了解这些术语意味着“一或多个”。关于描述为装置内一或多个的元件，应了解涵盖所述装置内的所有组合。如果本发明的方面称作“包括”特征，那么还涵盖“由所述特征组成”或“基本上由所述特征组成”的实施例。所属领域的技术人员从本申请案的整体，将显而易见本发明的其它特征及变化，且所有这类特征意图是本发明的方面。

附图说明

图1描绘缺乏相关信号肽的rhTPP1酶原的氨基酸序列。酶的前区段是开始176个氨基酸残基，且成熟酶是从位置177开始的368个氨基酸长。

图2描绘在自然史研究中患有CLN2疾病的未经治疗的个体的临床进展且显示随患者年龄而变的0至6汉堡运动及语言综合评分。除平均值及95％信赖区间之外，展示中位、四分位及10％/90％分布。

图3A到3F描绘在治疗持续时间期间产生的24名患者的临床评估且展示0至6汉堡运动及语言综合评分。空心圆形表示在第一次输注300mg rhTPP1时或之前获得的CLN2评分，而闭合圆形表示在第一次输注300mg rhTPP1的后获得的CLN2评分。展示总分(圆形)与运动/步态(正方形)及语言(三角形)对总分的影响。分析第1天为第一次输注日期。

图4A到4I描绘依据0至6汉堡运动及语言总分量表，通过疾病评级评分(用字首“HAM”表示)，比较来自9名经rhTPP1治疗的患者与与治疗个体相配的未经治疗的自然史患者的CLN2评分变化。各图中用实线展示治疗患者的结果，与用虚线展示的匹配的未经治疗的自然史患者的结果比较。

图5描绘在患者匹配的治疗持续时间期间，与研究个体(正方形)比较，匹配的未经治疗的自然史患者(圆形)从基线的临床变化的分布。

图6A到6I描绘依据0至9汉堡运动/语言/视力总分量表，通过疾病评级评分，用rhTPP1治疗的9名患者到未经治疗的匹配自然史患者的CLN2评分变化。各图中用实线展示治疗患者的结果，与用虚线展示的匹配的未经治疗的自然史患者的结果比较。

图7描绘在治疗持续时间内测量的所有24名患者的脑脊髓液的体积(顶图)及比例(底图)。每一线表示一名患者。

图8A到8L描绘24名经治疗的患者的脑体积。白质的体积(顶图)及比例(底图)显示为整个脑量(点划线)与CSF及灰质(虚线)之间的差异，且灰质的体积及比例显示为CSF及灰质(虚线)与CSF(实线)之间的差异。

图9A及9B描绘用rhTPP1治疗的患者及未经治疗的自然史患者的CLN2评分平均变化。图9A描绘用300mg rhTPP1治疗48周的23名患者(虚线)及41名个体的未经治疗的自然史组(实线)的CLN2评分。图9B描绘用300mg rhTPP1治疗48周的23名患者的CLN2评分从基线的变化。

图10A到10L描绘在治疗持续时间内产生的24名患者的临床评估，且展示0至12组合的汉堡(左图)运动(正方形)、语言(三角形)、抽搐(十字)及视力总和评分(菱形)及0至12组合的WCMC(右图)步态(正方形)、语言(三角形)、肌阵挛(十字)及进食(菱形)总和评分。空心圆形表示在第一次输注300mg rhTPP1时或之前获得的总CLN2评分，而闭合圆形表示在第一次输注300mg rhTPP1之后获得的总CLN2评分。

具体实施方式

以下定义可用于帮助熟练开业医师了解本发明。除非本文中另外定义，否则用于本发明的科学及技术术语应具有普通技术人员通常所了解的含义。在提供值的范围下，应了解在所述范围的上下限之间以及所述范围中任何其它所述或插入值之间的每个插入值均涵盖在本发明内，除非上下文另外清楚地规定，否则精确到下限单位的十分的一。这些较小范围的上下限可独立地包含在较小范围中，服从所述范围中任何特定排除的限制。

术语“家族史”是指有例如兄弟、父母、祖父母、曾祖父或曾祖母等血亲亲戚经诊断患有CLN2疾病的个体。

在一个方面中，术语“片段”是指包括SEQ ID NO:1及图1中阐述的rhTPP1前酶氨基酸序列一部分的重组蛋白质。举例来说，片段可含有SEQ ID NO:1中阐述的氨基酸序列的至少约60％、至少约70％、至少约80％、至少约90％或至少约95％。在另一个方面中，片段可包括SEQ ID NO:2中阐述的全长(368个氨基酸长；SEQ ID NO:1的氨基酸177-544)成熟TPP1酶氨基酸序列、其一部分及/或通过氨基酸残基S456、E253及D341形成的催化三联体。片段保留催化活性。举例来说，片段展现三肽基表肽酶活性及/或展现引起三肽自蛋白质受质的N端连续释放的催化活性。在某些方面中，rhTPP1前酶的“片段”包括SEQ ID NO:1的至少500个连续氨基酸、SEQ ID NO:1的至少450个连续氨基酸、SEQ ID NO:1的至少400个连续氨基酸、SEQ ID NO:1的至少368个氨基酸、SEQ ID NO:1的至少350氨基酸或SEQ ID NO:1的至少300个连续氨基酸。在其它方面中，rhTPP1前酶的“片段”包括SEQ ID NO:2的至少350个连续氨基酸、SEQ ID NO:2的至少325个连续氨基酸、SEQ ID NO:2的至少300个连续氨基酸、SEQID NO:2的至少275个氨基酸、SEQ ID NO:2的至少250氨基酸或SEQ ID NO:2的至少200个连续氨基酸。

术语“脑室内”是指将组合物例如经由注射、输注或植入给药脑室系统(例如脑室)。

术语“眼内”是指将组合物例如经由注射、输注或植入给药眼部区域(例如眼球中)或局部/眼睛给药(例如使用乳膏、软膏、凝胶或液滴)。

术语“鞘内”是指将组合物例如经由注射、输注或植入给药腰部(例如脊髓的蛛网膜下腔)。

术语“治疗有效”是指由于本发明的治疗方法而出现的任何治疗益处。举例来说，此类作用可以是适当目标群组织或器官中显现的有益作用，其中此类有益生理作用与在缺乏酶替代治疗下测量的生理参数相比。此类治疗作用可以是CLN2疾病的一或多种临床或亚临床显现的任何减少或消除。举例来说，治疗有效治疗改善、逆转、延迟、预防或减少一或多种生理功能退化及/或如本文所述的CLN2的神经病学症状。

术语“稳定”或“稳定化”是指在存储时随着时间推移其中蛋白质组分基本上保留其物理、功能及/或化学稳定性的含有蛋白质的调配物。稳定性可在选定温度下测量选定时间段。优选地，调配物在室温(约30℃)下或在约40℃下稳定至少1个月，及/或在约2℃到约8℃下稳定至少1年且优选地至少2年。举例来说，在存储期间蛋白质降解或聚集程度可用作蛋白质稳定性的指标。因此，“稳定”调配物可以是在存储后少于约20％、更优选地少于约10％且最优选地少于约5％的蛋白质组分以降解或聚集形式存在于调配物中的调配物。“稳定”调配物基本上保留新制备调配物的相同功能或治疗特征。用于测量蛋白质稳定性的各种分析技术可用于所属领域中且例如评述于《肽及蛋白质药物递送(Peptide and ProteinDrug Delivery)》,247-301,Vincent Lee编辑,Marcel Dekker,Inc.,纽约,N.Y.,Pubs.(1991)及Jones,《高等药物递送综述(A.Adv.Drug Delivery Rev.)》10:29-90(1993)中。

当提及预防或减少个体中CLN2疾病的一或多种症状或生理后果时使用时术语“预防”或“减少”或其语法同等物意味着经治疗的CLN2个体中所述一或多个症状的衰退速率比未经治疗的CLN2个体中观测到慢。关于此，未经治疗的CLN2可以是随后用本发明的组合物治疗的相同个体，或可以是如从本文公开的自然史研究结果观测到的相关症状的平均衰退速率。

在禁止在人体上实施的方法获取专利的管辖下，将rhTPP1或其调配物“给药”人类个体的含义是指rhTPP1或其调配物的医学用途，例如rhTPP1或其调配物用于治疗本文所述的CLN2疾病或rhTPP1用于制造供治疗如本文所述的CLN2疾病的药剂。预期与界定可取得专利的主题的法律或法规一致的最广泛合理解释。在禁止在人体上实施的方法取得专利的管辖下，将rhTPP1或其调配物“给药”包含在人体上实施的方法以及上述活性。

本发明提供包括rhTPP1的调配物及试剂盒，及使用其治疗CLN2疾病的方法。rhTPP1的给药允许蛋白质通过不依赖于阳离子的6磷酸甘露糖受体(CI-MPR)进行细胞吸收在整个中枢神经系统中且定位到细胞中的溶酶体。酶吸收到溶酶体中且随后活化促进患病组织中存储物质的分解代谢增加，减少溶酶体存储物质的逐渐累积，且阻止疾病衰退。本发明的调配物及方法提供胜过目前批准的治疗的治疗益处。

调配物

本发明提供包括rhTPP1的调配物，其用于脑室内、鞘内或眼内给药。在一个方面中，rhTPP1包括SEQ ID NO:1或其片段。适用于本文所述的调配物及方法中的RhTPP1蛋白质及获得rhTPP1蛋白质的方法描述于以全文引用的方式并入本文中的美国专利第6,302,685号及第8,277,800号中。

在一个方面中，rhTPP1包括SEQ ID NO:1的氨基酸序列(图1中所示的氨基酸序列的氨基酸1-544)或其具有催化活性的片段。在另一个方面中，rhTPP1包括SEQ ID NO:2的氨基酸序列(图1中所示的氨基酸序列的氨基酸177-544)或其具有催化活性的片段。在又一方面中，rhTPP1具有可检测酶活性或在活体内加工成具有可检测酶活性的酶形式(亦即“功能性”)且与SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2具有至少约70％序列一致性。举例来说，功能rhTPP1与SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2是至少约70％一致、至少约75％一致、至少约80％一致、至少约85％一致、至少约90％一致、至少约95％一致或至少约97％一致。在一个方面中，调配物是包括约1mg/mL到约100mg/mL，例如约10mg/mL到约50mg/mL、约25mg/mL到约40mg/mL或约30mg/mL到约60mg/mL的浓度的rhTPP1的液体调配物。在各方面中，调配物包括约1mg/mL到约100mg/mL、约5mg/mL到约80mg/mL、约10mg/mL到约50mg/mL、约20mg/mL到约40mg/mL、约25mg/mL到约35mg/mL，更特定地说，约1mg/mL、约10mg/ml、约20mg/mL、约30mg/mL、约40mg/mL、约50mg/mL、约60mg/mL、约70mg/mL、约80mg/mL、约90mg/mL或约100mg/mL的浓度的rhTPP1。在一个方面中，调配物具有约5.5到约7.5或约6.0到约7.0，例如约5.5、约6.0、约6.5、约7.0或约7.5的pH值。

在一个方面中，本发明的包括rhTPP1的调配物进一步包括一或多种维持脑脊髓液(CSF)或眼睛流体中关键电解质的含量的赋形剂。举例来说，在一个方面中，除rhTPP1或其片段之外，调配物进一步包括约0.01mg/mL到约1mg/mL，例如约0.1mg/mL到约0.5mg/mL，约0.2mg/mL到约0.8mg/mL，约0.2mg/mL到约0.4mg/mL，约0.15mg/mL到约0.25mg/mL或约0.05mg/mL到约0.3mg/mL的浓度的氯化钾。在另一个方面中，调配物进一步包括约0.01mg/mL到约1mg/mL，例如约0.1mg/mL到约0.5mg/mL，约0.1mg/mL到约0.8mg/mL，约0.1mg/mL到约0.3mg/mL，约0.15mg/mL到约0.25mg/mL或约0.05mg/mL到约0.3mg/mL的浓度的氯化镁六水合物。在另一个方面中，调配物进一步包括约0.01mg/mL到约1mg/mL，例如约0.1mg/mL到约0.5mg/mL，约0.2mg/mL到约0.8mg/mL，约0.15mg/mL到约0.25mg/mL，约0.1mg/mL到约0.3mg/mL或约0.05mg/mL到约0.3mg/mL的浓度的氯化钙二水合物。在又一方面中，调配物包括上述所有或任一个的组合。

在另一个方面中，包括rhTPP1的调配物进一步包括一或多种缓冲剂。举例来说，在各个方面中，调配物进一步包括约0.01mg/mL到约1mg/mL，例如约0.1mg/mL到约0.5mg/mL，约0.05mg/mL到约0.4mg/mL或约0.1mg/mL到约0.3mg/mL的浓度的磷酸氢二钠七水合物；及/或约0.01mg/mL到约1mg/mL，例如约0.01mg/mL到约0.2mg/mL的浓度、约0.05mg/mL到约0.3mg/mL或约0.08mg/mL到约0.4mg/mL的浓度的磷酸二氢钠单水合物。

在另一个方面中，调配物进一步包括约1mg/mL到约20mg/mL，例如约1mg/mL到约10mg/mL、约5mg/mL到约15mg/mL或约8mg/mL到约20mg/mL的浓度的等张剂，例如氯化钠。所属领域中已知的其它缓冲剂及等张剂是适合的且可通常用于本发明的调配物中。

在一个方面中，包括约30mg/mL的rhTPP1的调配物进一步包括约0.11mg/mL的浓度的磷酸氢二钠七水合物、约0.08mg/mL的浓度的磷酸二氢钠单水合物、约8.77mg/mL的浓度的氯化钠、约0.22mg/mL的浓度的氯化钾、约0.16mg/mL的浓度的氯化镁六水合物、约0.21mg/mL的浓度的氯化钙二水合物及稀释剂，例如注射用水。

本发明的rhTPP1调配物是稳定的且可长时间存储而品质、效能或纯度不会有不可接受的改变。在一个方面中，调配物在约5℃(例如2℃到8℃)的温度下稳定至少1个月，例如至少1个月、至少3个月、至少6个月、至少12个月、至少18个月、至少24个月或更多个月。在另一个方面中，调配物在小于或等于约-20℃的温度下稳定至少6个月，例如至少6个月、至少12个月、至少18个月、至少24个月、至少36个月或更多个月。在另一个方面中，调配物在小于或等于约-40℃的温度下稳定至少6个月，例如至少6个月、至少12个月、至少18个月、至少24个月、至少36个月或更多个月。在另一个方面中，调配物在小于或等于约-60℃的温度下稳定至少6个月，例如至少6个月、至少12个月、至少18个月、至少24个月、至少36个月或更多个月。

在一个方面中，本发明的调配物无防腐剂及/或无稳定剂，且因此不含有硫柳汞、苯汞化物盐、氯己定、苯酚、苯甲酸、山梨酸、对羟基苯甲酸酯、醇类或非经肠或眼部调配物中通常发现的其它防腐剂。

在另一个方面中，本发明的调配物可包括一或多种防腐剂、稳定剂或赋形剂。关于此，所属领域中已知许多适用于鞘内或ICV递送的含蛋白质的调配物的熟知且常用的防腐剂、稳定剂及赋形剂。更特定地说，用于鞘内或ICV递送的含酶调配物的此类添加剂的实例描述于以引用的方式并入本文中的WO2013/096899中。

方法

本发明提供治疗CLN2疾病的方法，所述方法包含向有需要的个体给药治疗有效量的本文所述的包括rhTPP1的调配物。本发明还提供一种用于治疗本文所述的CLN2疾病的包括rhTPP1的组合物，及rhTPP1用于制造供治疗本文所述的CLN2疾病的药剂的用途。在一个方面中，CLN2疾病的严重程度及进展以及患者中给药rhTPP1的治疗益处可使用汉堡或WCMC临床疾病评级量表测量。汉堡与WCMC量表由四个疾病相关领域组成，其在评级中依据0至3分的子量表评分，使得3分是正常，2分是异常但具功能，1分是异常且功能障碍显著，且0分无功能剩余。四个领域中的两个步态/运动及语言在两个量表之间共用，且具有高固有内容正确性。各量表总体上捕捉作为疾病进展与疾病管理的函数存在的变化。步态、语言及视力量表捕捉疾病进展。抽搐频率、运动障碍及进食视护理判定而定，尤其抗惊厥药物及饲管管理。临床进展常常使用总体语言及步态子量表评估，使得6分的评级表示基于年龄正常且0分为完全丧失功能。表1描绘WCMC及汉堡CLN2疾病量表。

表1

在各方面中，本发明提供一种治疗CLN2疾病或CLN2疾病的一或多种临床症状的方法，包含向有需要的个体给药包括治疗有效量的rhTPP1的组合物；rhTPP1用于制造供治疗个体的CLN2疾病的药剂的用途，或用于治疗个体的CLN2疾病的rhTPP1。

本发明还提供预防CLN2疾病的一或多种临床症状的方法，包含向有需要的个体给药本文所述的包括rhTPP1的调配物，任选地其中所述个体具有CLN2疾病家族史。在各方面中，本发明提供一种预防CLN2疾病的一或多种临床症状的方法，包含向有需要的个体给药包括治疗有效量的rhTPP1的组合物；rhTPP1用于制造供预防个体的CLN2疾病的一或多种临床症状的药剂的用途，或用于预防个体的CLN2疾病的一或多种临床症状的rhTPP1，任选地其中所述个体具有CLN2疾病家族史。

本发明进一步提供治疗CLN2疾病的方法，包含向有需要的个体给药有效维持个体中生理功能或减缓或减少生理功能退化的剂量的rhTPP1，其中所述生理功能是语言功能、运动功能、视力或进食功能。本发明还提供rhTPP1用于制造供维持患有CLN2的个体中生理功能或减缓或减少生理功能退化的药剂的用途；及用于维持患有CLN2疾病的个体中生理功能或减缓或减少生理功能退化的rhTPP1；其中所述生理功能是语言功能、运动功能、视力或进食功能。

在一个方面中，治疗患有CLN2疾病或具有CLN2疾病家族史的个体的方法包含向个体给药有效维持语言功能或减缓或减少语言功能退化的剂量的rhTPP1。在一个方面中，语言功能退化是如使用WCMC或汉堡疾病评级量表测量，与治疗前或治疗期间确定的先前评级比较，减少至少一分。在WCMC与汉堡量表中，3分的评级表明语言正常；2分表明(可辨认地)语言异常；1分表明语言几乎不可理解/很难理解；且0分表明费解或无语言。在一个方面中，rhTPP1的剂量有效维持个体的语言评级在与治疗前或治疗期间确定的先前评级相同的水平上，例如3分、2分或1分。在另一个方面中，rhTPP1的剂量有效减缓或减少个体中CLN2相关的语言功能退化，这可通过与考虑疾病天然进展所预期比较，较长时间维持语言评级在相同水平上或语言功能评级下降较小来证明。

在另一个方面中，治疗患有CLN2或具有CLN2家族史的方法包含向个体给药有效维持运动功能或减缓或减少运动功能退化的剂量的rhTPP1。在一个方面中，运动功能退化是如使用WCMC或汉堡疾病评级量表测量，与治疗前或治疗期间确定的先前评级比较，减少至少一分。WCMC量表中步态或者汉堡量表中运动的临床评级量表均可用于评估运动功能。在WCMC与汉堡量表中，3分的评级表明行走正常；2分表明行走异常但独立，例如频繁倒下或明显笨拙；1分表明行走异常，需要帮助，例如不独立行走或仅仅爬行；且0分表明个体无法步行/不能移动，例如大都卧床不起。在一个方面中，rhTPP1的剂量有效维持个体的运动功能评级在与治疗前或治疗期间确定的先前评级相同的水平上，例如3分、2分或1分。在另一个方面中，rhTPP1的剂量有效减缓或减少个体中CLN2相关的运动功能退化，这可通过与考虑疾病天然进展所预期比较，较长时间维持运动评级在相同水平上或运动功能评级下降较小来证明。

在又一个方面中，治疗患有CLN2或具有CLN2家族史的方法包含向个体给药有效维持视力或减缓或减少视力退化的剂量的rhTPP1。在一个方面中，视力退化是如使用汉堡疾病评级量表测量，与治疗前或治疗期间确定的先前评级比较，减少至少一分。根据汉堡量表，3分的评级表明个体认识到所需物件且抓住其；2分表明抓住物件不协调；1分表明个体对光有反应，且0分表明个体对视觉刺激无反应。在一个方面中，rhTPP1的剂量有效维持个体的视力评级在与治疗治疗前或治疗期间确定的先前评级相同的水平上，例如3分、2分或1分。在另一个方面中，rhTPP1的剂量有效减缓或减少个体中CLN2相关的视力退化，这可通过与考虑疾病天然进展所预期比较，较长时间维持视力评级在相同水平上或视力评级下降较小来证明。

在另一个方面中，治疗患有CLN2或具有CLN2家族史的方法包含向个体给药有效维持进食功能或减缓或减少进食功能退化的剂量的rhTPP1。在一个方面中，进食功能退化是如使用WCMC评级量表测量，与治疗前或治疗期间确定的先前评级比较，减少至少一分。根据WCMC量表，3分的评级表明吞咽功能无异常；2分表明吞咽功能轻度异常；1分表明吞咽功能中度异常，且0分表明个体依赖于进食管。在所述方面中，rhTPP1的剂量有效维持个体的进食功能评级在与治疗前或治疗期间确定的先前评级相同的水平上，例如3分、2分或1分。在另一个方面中，rhTPP1的剂量有效减缓或减少个体中CLN2相关的进食功能退化，这可通过与考虑疾病天然进展所预期比较，较长时间维持进食评级在相同水平上或进食功能评级下降较小来证明。

本发明进一步提供治疗CLN2疾病的方法，其包含向有需要的个体给药有效改善生理功能的剂量的rhTPP1，其中所述生理功能是语言功能、运动功能、视力或进食功能。本发明还提供rhTPP1用于制造供改善患有CLN2的个体中生理功能的药剂的用途；及用于改善患有CLN2的个体中生理功能的rhTPP1；其中所述生理功能是语言功能、运动功能、视力或进食功能。考虑疾病的逐渐退化性，尤其需要语言功能、运动功能、视力及/或进食功能的改善，表明个体已重获丧失的功能，而用当前治疗选择难以实现。

在一个方面中，治疗患有CLN2疾病的个体的方法包含向个体给药有效改善语言功能的剂量的rhTPP1。在一个方面中，语言功能改善是如使用WCMC或汉堡疾病评级量表测量，与治疗前或治疗期间确定的先前评级比较，增加至少一分。举例来说，个体可从1分或2分的评级改善到3分的评级，表明语言恢复正常，或从1分的评级改善到2分的评级。

在另一个方面中，治疗患有CLN2疾病的个体的方法包含向个体给药有效改善运动功能的剂量的rhTPP1。在一个方面中，运动功能改善是如使用WCMC或汉堡疾病评级量表测量，与治疗前或治疗期间确定的先前评级比较，增加至少一分。举例来说，个体可从1分或2分的评级改善到3分的评级，表明行走恢复正常，或从1分的评级改善到2分的评级。

在一个方面中，治疗患有CLN2疾病的个体的方法包含向个体给药有效改善视力的剂量的rhTPP1。在一个方面中，视力改善是如使用WCMC或汉堡疾病评级量表测量，与治疗前或治疗期间确定的先前评级比较，增加至少一分。举例来说，个体可从1分或2分的评级改善到3分的评级，或从1分的评级改善到2分的评级。

在另一个方面中，治疗患有CLN2疾病的个体的方法包含向个体给药有效改善进食功能的剂量的rhTPP1。在一个方面中，进食功能改善是如使用WCMC疾病评级量表测量，与治疗前或治疗期间确定的先前评级比较，增加至少一分。举例来说，个体可从1分或2分的评级改善到3分的评级，表明吞咽恢复正常，或从1分的评级改善到2分或3分的评级。

本发明进一步提供治疗CLN2疾病的方法，包含向有需要的个体给药有效预防或治疗所述疾病的神经病学症状的剂量的rhTPP1，其中所述神经病学症状是抽搐、脑量下降、脑中灰质减少或颅脑脊髓液(CSF)增加。本发明还提供rhTPP1用于制造供预防或治疗患有CLN2或具有CLN2家族史的个体中神经病学症状的用途，及用于预防或治疗患有CLN2或具有CLN2家族史的个体中神经病学症状的rhTPP1，其中所述神经病学症状是抽搐、脑量下降、脑中灰质减少或颅脑脊髓液增加。

在一个方面中，治疗患有CLN2或具有CLN2家族史的方法包含向个体给药有效维持抽搐次数的剂量的rhTPP1。在一个方面中，剂量有效减少每个月所述个体经历的抽搐次数。在另一个方面中，如使用汉堡疾病评级量表测量，与治疗前或治疗期间确定的先前评级比较，剂量有效增加抽搐评级至少一分。根据汉堡量表，3分的评级表明3个月内无抽搐；2分表明3个月内1到2次抽搐；1分表明每月1次抽搐；且0分为每月超过1次抽搐。在一个方面中，rhTPP1的剂量有效维持个体的抽搐评级在与治疗前或治疗期间确定的先前评级相同的水平上，例如3分、2分或1分。在另一个方面中，rhTPP1的剂量有效维持或减少个体中抽搐次数，这可通过与考虑疾病天然进展所预期比较，较长时间维持每月抽搐次数在相同水平上或抽搐评级下降较小来证明。

在另一个方面中，治疗患有CLN2或具有CLN2家族史的方法包含向个体给药有效维持脑量或减缓或减少脑量下降的剂量的rhTPP1。脑萎缩随疾病进展而增加，引起脑量丧失及体积及颅内CSF相对比例相关增加。脑量可使用所属领域中已知的方法测量，包含成像技术，例如磁共振成像(MRI)、计算机断层摄影法(CT/CAT)、正电子发射断层摄影法(PET)、单光子发射计算机化断层摄影法(SPECT)、脑电流描记器(EEG)、磁脑电描记法(MEG)及近红外分光术(NIRS)。在一个方面中，rhTPP1的剂量有效减缓或减少个体中CLN2相关的脑量下降，这可通过与考虑疾病天然进展所预期比较，较长时间维持脑量或脑量下降较小来证明。

在另一个方面中，治疗患有CLN2或具有CLN2家族史的方法包含向个体给药有效维持脑中灰质或减缓或减少脑中灰质下降的剂量的rhTPP1。因脑萎缩而引起的灰质丧失在疾病进展时出现，导致作为脑量百分比的灰质下降。脑中灰质的量可使用所属领域中已知的方法评估，用于成像技术，例如MRI、CT/CAT、PET、SPECT、EEG、MEG及NIRS。在一个方面中，rhTPP1的剂量有效减缓或减少个体中灰质下降，这可通过与考虑疾病天然进展所预期比较，较长时间维持灰质体积或作为脑量百分比的灰质下降较小来证明。

在另一个方面中，治疗患有CLN2或具有CLN2家族史的方法包含向个体给药有效维持颅CSF体积或减缓颅CSF体积增加的剂量的rhTPP1。由于大脑萎缩，颅CSF在全部CSF的体积及比例上增加。颅CSF的量及比例可使用所属领域中已知的方法，例如成像技术，例如MRI及CT/CAT评估。在一个方面中，rhTPP1的剂量有效减缓或减少个体中颅CSF增加，这可通过与考虑疾病天然进展所预期比较，较长时间维持颅CSF体积或作为全部CSF的百分比的颅CSF增加较小来证明。

上述方法、使用组合物及用途可进一步包括单独及组合的任一以下特征。

在一个方面中，本发明的方法、使用组合物或用途包含在至少约1小时、例如至少约1小时、至少约2小时、至少约3小时、至少约4小时、至少约5小时、至少约6小时或更多时期内向个体连续或不断地给药包含rhTPP1的调配物、组合物或剂量。在另一个方面中，本发明的方法或用途包含向有需要的个体给药包括约20mg到约500mg、约30mg到约500mg、约50mg到约500mg、约100mg到约500mg、约200mg到约400mg、约250mg到约350mg或约275mg到约325mg rhTPP1，例如约20mg、约30mg、约50mg、约100mg、约200mg、约300mg、约400mg或约500mg rhTPP1的调配物、组合物或剂量。在一个方面中，本发明的方法或用途包含给药具有每剂或每次给药事件约20mL或更少、约15mL或更少、约10mL或更少、约7.5mL或更少或约5mL或更少，例如约20mL、约15mL、约10mL、约9mL、约8mL、约7mL、约6mL、约5mL、约4mL、约3mL、约2mL、约1mL或约0.5mL的体积的调配物、组合物或剂量。

在各方面中，本发明的方法、使用组合物或用途包含以小于或等于每小时约2.5mL调配物、组合物或剂量、小于或等于每小时约75mg rhTPP1或小于或等于每小时每2.5mL调配物或组合物约75mg rhTPP1的速率向个体给药包括rhTPP1的调配物、组合物或剂量。调配物、组合物或剂量任选地在至少约4小时时间内连续或不断地给药。

在一个方面中，本发明的方法、使用组合物或用途包含每周或更不频繁，例如每周、每隔一周或每月给药包括rhTPP1的调配物、组合物或剂量。更特定地说，本发明的方法、使用组合物或用途包含每7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、14天、15天、16天、17天、18天、19天、20天、21天、22天、23天、24天、25天、26天、27天、28天、29天、30天或31天给药包括rhTPP1的调配物、组合物或剂量一次。在一个方面中，调配物、组合物或剂量脑室内给药。在另一个方面中，调配物、组合物或剂量鞘内给药。在又一个方面中，调配物、组合物或剂量眼内给药。在一个方面中，调配物、组合物或剂量脑室内或鞘内以及眼内给药。归因于其中脑室递送允许流入第三及第四脑室的CSF流的生理学，脑室内递送允许穿透到脑的深灰结构，例如丘脑、纹状体及中脑，而且还沿着从脑室到蛛网膜下腔的轻微压力梯度，穿过大脑半球的神经纤维网。以全文引用的方式并入本文中的美国专利第7,442,372号中描述治疗溶酶体存储病症的重组酶的鞘内及脑室内给药。

本发明的rhTPP1的调配物、组合物或剂量可以单一快速注射或一系列注射(例如到脑、腰部或眼睛中)给药，或作为连续或持续输注，例如使用输注泵或其它植入装置给药。在一个方面中，使用输注系统给药rhTPP1的调配物、组合物或剂量，所述输注系统包括桶、管线内滤器(例如约0.2μm)、储集器(例如鞘内或脑室内)及导管。时常，当组合物鞘内或脑室内给药时，为了防止由人工增加脑内或鞘内压力引起不良副作用，在组合物给药前首先从个体移除可与待给药的组合物体积相当的CSF体积。如实例3中所描述，然而，本文中证明本发明的rhTPP1的调配物、组合物或剂量可在即将给药rhTPP1的调配物、组合物或剂量时不从个体移除任何体积CSF下给药。

在一个方面中，本发明的方法或用途包括每隔一周向患有CLN2的个体在约4小时时间内脑室内给药约10mL包括约300mg rhTPP1的调配物、组合物或剂量。

本发明的调配物及组合物可直接给药有需要的个体(即非等体积)或可在从个体移除界定体积CSF之后给药，其中界定体积大致与随后给药的组合物体积相同(即等容)。

在一个方面中，本发明的方法、使用组合物或用途进一步包含在给药rhTPP1后向个体给药冲洗溶液。冲洗溶液经由与rhTPP1相同的途径且使用相同递送系统(例如输注系统)给药，以移除任何留在递送系统中的rhTPP1且确保个体接收完全预期剂量的rhTPP1。在一个方面中，冲洗溶液以约0.5mL与约5mL之间，例如约0.5mL、约1mL、约2mL、约3mL或约5mL的量给药(例如使用先前用于给药包括rhTPP1的组合物的相同导管)个体。在一个方面中，冲洗溶液包括与包括rhTPP1的调配物或组合物相同的组分，但无rhTPP1。在一个方面中，冲洗溶液包括约0.11mg/mL的浓度的磷酸氢二钠七水合物、约0.08mg/mL的浓度的磷酸二氢钠单水合物、约8.77mg/mL的浓度的氯化钠、约0.22mg/mL的浓度的氯化钾、约0.16mg/mL的浓度的氯化镁六水合物、约0.21mg/mL的浓度的氯化钙二水合物及稀释剂，例如注射用水。

试剂盒

本发明进一步提供包括本文所述的rhTPP1的调配物的试剂盒，所述调配物呈适于给药患者的剂量及形式。在一个方面中，试剂盒包括约30mg/mL的rhTPP1、约0.11mg/mL的浓度的磷酸氢二钠七水合物、约0.08mg/mL的浓度的磷酸二氢钠单水合物、约8.77mg/mL的浓度的氯化钠、约0.22mg/mL的浓度的氯化钾、约0.16mg/mL的浓度的氯化镁六水合物、约0.21mg/mL的浓度的氯化钙二水合物及稀释剂，例如注射用水。在一个方面中，除治疗调配物之外，试剂盒进一步包括用于本发明的治疗组合物脑室内、鞘内及/或眼内给药的说明书。在另一个方面中，试剂盒进一步包括如本文所述的冲洗溶液。在又一个方面中，试剂盒进一步包含用于给药调配物的系统，所述系统包含以下组件中的任一个或所有：桶、管线内滤器、用于植入的储集器及导管。在一个方面中，试剂盒可包括预载本发明的治疗调配物的导管、储集器或其它装置。举例来说，特别涵盖预载于医药学上可接受的调配物中的约100mg rhTPP1、约200mg rhTPP1、约300mg rhTPP1、约400mg rhTPP1或约500mg rhTPP1的导管。或者，试剂盒可包括可再装的导管、储集器或其它装置及用于再装这类装置的适当量的酶。

在某些实施例中，本发明的试剂盒可包括以下组件中的一或多个：延伸管线(例如产品号536040,史密斯医疗(Smiths Medical),Dublin OH)、管线内滤器(例如产品号FS116,史密斯医疗)、端口针头(例如产品号21-2737-24,史密斯医疗)、注射器或两个或超过两个注射器(例如产品号309604,Becton Dickinson,新泽西州富兰克林湖(FranklinLakes,NJ))或注射器针头或两个或超过两个注射器针头(例如产品号305196,BectonDickinson)。

通过参考以下实例，将更易理解本发明，所述实例通过说明提供且不意图限制。

实例

以下实例描述用于脑室内(ICV)给药的包括rhTPP1的调配物且向人类患者给药调配物的结果与匹配的未经治疗的自然史患者比较。

实例1

用于脑室内给药的rhTPP1的调配物

RhTPP1在基因工程改造的CHO宿主细胞系中产生且通过标准层析法来纯化，如以全文引用的方式并入本文中的美国专利第6,302,685号及Sleat等人1997,《科学(Science)》277:1802-1805中所描述。rhTPP1在酸性pH值下在吸收到溶酶体后产生为非活性前酶。rhTPP1的前酶形式具有大致59kDa的计算的同位素平均分子量。成熟酶具有大致46kDa的表观分子量。rhTPP1前酶的氨基酸序列阐述于SEQ ID NO:1且展示于图1中。酶的前区段是开始176个氨基酸残基，且成熟酶是从位置177开始的368个氨基酸长且阐述于SEQID NO:2中。

用于实例中的rhTPP1调配物是用于ICV输注的无菌溶液。其是透明且无色至浅黄色液体，含有以30mg/mL的浓度调配的rhTPP1蛋白质。调配物包装在由1型透明硅酸硼玻璃小瓶组成的容器闭合系统中，所述小瓶用含氟聚合物涂布的丁基橡胶塞闭合且用铝封盖上。调配物存储在-40℃±10℃的温度下且冷冻供应。调配物的目标pH值是pH 6.5。

用于实例中的rhTPP1调配物的组合物提供于表2中。

表2

rhTPP1调配物经小心设计以模拟人类CSF的特征，例如关键电解质的浓度类似于活体内在人类CSF中发现的浓度且调配物不含任何常规防腐剂或稳定剂作为赋形剂。在给药rhTPP1调配物后未报导或观测到先前可能未预测到的显著安全问题，即严重不良反应。

根据ICH准则且根据方案，稳定性研究在长期(≤-60℃)及加速条件(5±3℃)下进行，以监测时间-温度稳定性。稳定性样品存储在小规模瓶子中，所述瓶子由与大规模包装相同的材料构成。在支援性及临床批次上收集的稳定性数据证明rhTPP1调配物在≤-60℃下稳定至少36个月且在5±3℃下稳定至少6个月，考虑到所述调配物缺乏中医药产品中通常发现的防腐剂及稳定剂，这令人吃惊。表3展示稳定性测试的结果。

表3

实例2

自然史研究

在一组41名未经治疗的CLN2患者中分析CLN2自然史疾病进展的定量评定。汉堡临床量表用于评估患病的年龄适当的神经病学及功能领域。

未经治疗的自然史CLN2个体中临床衰退的定量描述展示于图2中。自然史分析证明年龄与疾病严重程度的透明且可预测的关系。在运动及语言症状发作之后，基本上存在快速线性衰退，其中平均儿童每年丧失约2个里程碑事件(每年衰退2.1分的线性速率)。存在基本上可预测的过程，然而，存在一些‘迟发作’情况，其构成组中少于20％群体。这些患者往具有迟发作的症状及更长时间的轻度疾病，但接着快速及主动衰退，通常比传统形式迟2到3年。

来自汉堡组的定量临床进展通过将来自WCMC的独立(患者及评级人员)组(n＝49)的临床评级叠加来评估。虽然独立CLN2组的临床描述类似，但这是另一患者组中疾病进展中强定量关系的首次证实。两组CLN2患者均具有大多数传统延迟婴儿发作及进展，且较少比例的儿童具有‘迟发作’表型，通常在5岁具有早期病侯而非3岁。使用运动(步态)及语言功能的量表可再现地捕捉CLN2患者的神经病学衰退。基于上述分析，确定所述天然研究个体组为适当非治疗的对照群体，且此未经治疗的自然史群体中CLN2疾病症状的平均衰退速率可用作罹患CLN2疾病的个体中由给药本发明组合物所引起的症状的任何预防或衰退速率减少的有效且信息性比较物件。

实例3

CLN2患者中阶段1/阶段2开放标记剂量扩大研究

所述研究为开放标记治疗临床试验，评估经由ICV导管每隔一周以300mg的剂量(10mL总体积)递送到患有CLN2疾病的儿童的本发明的rhTPP1调配物的安全性、耐受性及功效。研究经设计以评估安全性及耐受性，以低剂量(30mg及100mg)开始，但当独立数据监测委员会注意到较低剂量安全时所有患者升高到高预期治疗剂量(300mg)。所有入选患者的研究持续时间是每隔一周以300mg的稳定预期治疗剂量ICV治疗48周。主要研究目标是评估通过植入的ICV储集器及套管给药患有CLN2疾病的个体的本发明的rhTPP1调配物的安全性及耐受性且在12个月治疗后，使用CLN2疾病特定的评级量表评分，评估与自然史数据相比的有效性。次要研究目标是在12个月治疗后，与CLN2疾病自然史数据相比，评估治疗对脑萎缩的测量的影响。

主要纳入标准是CLN2诊断及至少3岁的入选年龄。在筛选时基线疾病评级评分小于3的患者(使用汉堡0至6总运动/语言量表)从研究中剔除。小于3岁的患者很可能因年龄而非治疗不进展，如进展曲线上的水平线描绘。在筛选时评分为2或更小的患者归因于疾病阶段，而更不线性、更可变且可能认为其更难治。因此，治疗组仅仅通过年龄及评分界定以包含早期及高度可预测的衰退。

入选时平均年龄是4.0岁，女孩略多余男孩，主要是白种人。筛选及基线时临床CLN2评分展示于下表4中，其显示各研究组的汉堡运动/语言评分及筛选与基线时总分。

表4

总之，治疗前CLN2评分偏向更晚期疾病。假设疾病快速进展且确定困难，预计偏向较低评分。此外，在筛选时及至基线评估(即将放置ICV储集器时)的时期内(至多两周)评分存在一些衰退。来自筛选组的评分为3的四名患者在基线滑动一分，且筛选组中评分为4的两名患者在基线丧失一分至3。以6进入的两名患者(即大体上正常)是患病儿童的兄弟姐妹。个体群体的分布、人口分布及特征概述于以下表5中。

表5

^a入选患者1287-1007具有单一剂量且因无法符合研究程序而同意退出

^b与自然史群体分布类似

^*常见基因型：c.622C>T及c.509-1G>C

所有入选患者每隔一周接收300mg ICV的稳定给药。组1每隔一周暴露于30mg ICV≥1个月，接着上升到每隔一周100mg ICV，≥4周，而组2以每隔一周100mg ICV开始，≥4周。组1与组2上升到每隔一周300mg ICV，且包含组3的所有随后患者开始以每隔一周300mgICV的稳定剂量方案给药且持续≥48周。300mg剂量在10mL中给药，在约4小时时间内经由ICV导管输注。即将开始输注时，不移除例如等于给药的rhTPP1调配物的量的CSF体积，这是非典型的，但意外地不引起任何副作用。在给药300mg剂量后，立即将约2mL的量的冲洗溶液经由相同ICV导管给药个体。冲洗溶液与表2中调配物一致，但不含rhTPP1。每个给药事件300mg酶的推注剂量显著高于先前鞘内或ICV给药的酶替换疗法，因而先前无法预测给药此类高剂量药物后观测到的安全性及功效型态。更特定地说，先前可能未预测给药300mgrhTPP1推注剂量而无相关严重、难管理的不良事件。

结果

治疗对步态及语言的临床评估的作用：用于临床严重程度的定量评价的主要评估工具是汉堡与WCMC疾病评级量表所共有的步态及语言子量表的0至6点总数。此量表捕捉用作主要功效分析的比较项的匹配的未经治疗的自然史患者中可预测、快速及渐进性临床衰退。

治疗持续时间超过42周的23名患者的步态/语言疾病评级评分展示于图3A到3F中。23名患者中，3名患者(1244-1001、1244-1002及1244-1003)来自组1(C1)，3名患者(1244-1004、1244-1006及1287-1005)来自组2(C2)，3名患者(1244-1008、1244-1009、1244-1010)来自组3(C3)，且14名患者(0119-1020、0146-1021、0146-1022、0146-1023、1244-1011、1244-1012、1244-1017、1244-1024、1323-1013、1323-1014、1323-1015、1323-1016、1323-1018及1323-1019)来自仅仅300mg稳定给药(SBO)组。如所预期，语言不足通常比步态不足更晚。入选评分并非随机分布；12名患者具有显著的疾病进展，组合入选评分是3分，且2个患者具有6分的组合入选评分。假设快速进展及疾病确定，儿童时常呈现明显衰退或如具有明显衰退人员的兄弟姐妹。

用本发明的rhTPP1调配物(上表2中所示)治疗后，CLN2步态/语言疾病评级评分稳定化，如图3A到3F中所示。23名患者中的十一名在治疗时期内衰退逆转。四名患者在治疗时期初期具有单一单元衰退，但此后衰退逆转。在筛选与基线之间两名患者(1244-1008及1323-1013)从3分下降一个单位到2分，但在治疗时不经历评级的任何其它损失。基于所述结果，在所有患者中，无论组(开始剂量)或入选评分如何，均存在明显治疗益处。在大量患者中，存在逆转的评级下降。举例来说，患者1287-1005(图3B)在治疗第一个月具有2个单位的评级减少，此表示步态与语言的功能丧失。然而，此患者在治疗第60天重获一个单位，且后来无净变化，直到分析第440天。重获的评分为获取语言，强调单个单位变化的临床重要性。

在入选时评分为6的2名患者均未丧失评级单位。入选评分为3的12名患者中的七名衰退逆转，且2名在初始衰退单个单位后稳定。因此，治疗益处在具有显著不足及疾病进展的患者中明显。

如CLN2自然史研究中证明，未经治疗的自然史群体中中位元衰退速率估计为每年2.1个单位。因此，处理组中的所有患者与未经治疗的自然史群体比较具有改善的评级。

为了建立疾病过程中治疗与匹配的未经治疗的自然史患者之间的更清晰的关系，通过基线CLN2评分、年龄及基因型的参数，使各研究患者与未经治疗的自然史患者匹配。虽然无清晰的子群或因素预示CLN2疾病中进展，但这些参数最常用于界定疾病严重程度。个别治疗患者与在基线时具有类似步态/语言评级评分的自然史组的各成员相比，如图4A到4I中所示。研究中的患者通过基线CLN2评分如下匹配：对于具有既定基线评分的既定研究患者，鉴别具有所述相同CLN2评分的报导一或多个CLN2评估的所有自然史患者。如果研究患者的基线CLN2评分是2、3、4或5，那么各自然史患者的CLN2对时间的型态在时间上向左或向右移，使得其覆盖研究患者的基线评分。如果自然史患者具有多项与研究患者的基线CLN2评分相等的评估，那么所述多项评估的中间时间点用于定时移位。如果研究患者的基线CLN2评分是6分，那么自然史患者的上次6分评分用于定时移位。使用其它匹配准则进行灵敏度分析，且来自这些分析的结果与评分匹配的分析一致。

图4A到4I展示用本发明的rhTPP1调配物治疗的个体相对于匹配的未经治疗的自然史患者绘图的结果。经治疗的个体及未经治疗的自然史患者通过疾病评级评分，使用0至6个单位步态及语言子量表以总数来匹配。在治疗一年时期内比较各评级。接收rhTPP1的个体与匹配的未经治疗的自然史患者组比较，存在治疗益处。个体1244-1001(图4A)在治疗120天后具有从3个单位到2个单位的评级下降，但后来重获一个单位且无净变化。个体1244-1002(图4B)具有从3个单位到4个单位的评级增加，从4个单位到2个单位的减少，及从2个单位到3个单位的增加，使得在研究结束时与第1天比较，疾病评级总体上维持。个体1244-1003(图4C)及1244-1010(图4I)在整个研究期间维持6个单位的评级，即运动及语言功能正常。个体1244-1004(图4D)及1244-1009(图4H)在整个研究中维持3个单位的评级。个体1244-1006(图4E)最初具有从3个单位到2个单位的评级下降，但后来重获一个单位，无净变化，接着再次从3个单位下降到2个单位。个体1244-1008(图4G)最初具有从3个单位到2个单位的评级下降，后来无净变化。

与所有治疗的个体相比，大部分其匹配的未经治疗的自然史患者到比较期结束，均具有从3个单位到0个单位的未逆转评级下降，表明进展到完全缺乏组合的步态及语言的功能。匹配分析证明对维持疾病评级评分以及具有初始评级下降但随后稳定化的所述患者的治疗益处。

最复杂反应(个体1287-1005)展示于图4F中。虽然在研究第一个月此患者从基线评分3迅速下降2个单位，到研究评分1，但患者能够重获一个单位且在2分的评分稳定化。通过与评分匹配的未经治疗的自然史患者相比，阐明此过程的解释。在18名评分匹配的未经治疗的自然史患者中的15名中，临床进展更坏，且在仅仅2个评分匹配的未经治疗的自然史患者中相同(单个未经治疗的自然史匹配是不可估计的)。未经治疗的患者中临床过程总是恶化，丧失的里程碑之间的时间时常较短。丧失的功能从未再次确立且随后稳定化。因此，与最复杂治疗型态匹配也表明清晰的治疗益处。

图5显示在患者匹配的治疗持续时间期间，与研究个体比较，匹配的未经治疗的自然史患者自基线的临床变化的分布。如上所述，9名患者中的7名(>75％)的基线疾病评级量表无变化。对于治疗期中的那7名患者，所有匹配的未经治疗的自然史患者具有至少单个单位衰退，但更常见为多个单位衰退或2个单位到4个单位。举例来说，患者1244-1001具有1个丧失单分的匹配，3个丧失2分的匹配及14个丧失所有3个可用语言/步态疾病评级点的匹配。因此，在相同时段中，治疗的患者无变化，但18名匹配的未经治疗的自然史患者中的14名(>75％)丧失所有步态及语言功能。3分的基线入选评分下存在基底作用，其中许多匹配的未经治疗的自然史患者丧失所有可用评级单位，然而，入选评分是6分的2名患者(患者1244-1003及1244-1010)重要地展示这些匹配还主动退化，一些在治疗时期中具有4及5分衰退。这观测为实质治疗作用的清楚临床证明；大部分治疗的儿童在未经治疗的自然史匹配在同一时期内主动丧失语言及独立步态，许多完全丧失功能的背景下保留入选临床评级。剩余2名丧失单分的治疗患者(个体1287-1005及1287-1006)在治疗期仍然比大多数匹配临床评级更好。总体上，评分匹配的未经治疗的自然史患者中，97％具有比治疗个体更差的评级。

使用多个匹配准则(例如基线、及基因型)，几乎100％比较展示与匹配的未经治疗的自然史患者比较，处理效果有利。与自然史患者相比，所有治疗患者中跨越匹配准则的平均治疗差异在1.9分到2.1分范围内，视利用的匹配准则而定。

图9A展示治疗≥48周的患者(n＝21；虚线)及自然史组(n＝41；实线)的运动-语言评级的平均变化。治疗患者的疾病评级的平均衰退是0.43(标准差0.839)，其中48周内中位衰退为0.00个单位。相比之下，自然史组的疾病评级的平均衰退是2.09(标准差0.966)，其中48周内中位衰退为1.87个单位。总体上，治疗患者的预期临床衰退的79％显著保留(p<0.0001)。图9B展示在首次300mg剂量(基线)前最后一次测量至≥48周的最后一次300mg剂量，患者(n＝23)的运动-语言评分变化。总体上，65％(23名中的15名)患者在治疗期间改善或无临床疾病进展，且与来自自然史研究的未经治疗的个体比较，在治疗期间87％(23名中的20名)患者效能较好(即评分变化为-1或更大)。这些分析一律支持以下结论：与迅速且可预见地衰退的未经治疗的自然史组的匹配成员相比，治疗患者中存在CLN2评分的显著及临床上有意义的稳定化。

治疗对视力的临床评估的作用：在未经治疗的CLN2患者中，视力丧失比语言及步态衰退迟，然而，一旦出现症状，则所述过程可预见地快速且进展到失明。因此，保护视力是一个重要治疗结果。视力丧失可依据0至3点子量表捕捉，方式类似于其它子量表，其中3为正常且0为功能上失明。在治疗期期间大部分治疗患者在视力子量表领域中丧失逆转。当通过评分、年龄及基因型，使用步态、语言及视力子量表的复合量表(0至9个单位)将治疗患者与未经治疗的自然史个体匹配时，很明显未经治疗的匹配的自然史患者与治疗组相比丧失额外点。

图6A到6I展示用本发明rhTPP1调配物治疗的九名个体相对于匹配的未经治疗的自然史患者绘图的结果，患者通过疾病评级评分，使用0至9个单位步态、语言及视力子量表作为总数进行匹配。个体1244-1001(图6A)具有从6分到5分的一个单位的评级下降，但不久后，重获一分到评分6，随后无净变化。个体1244-1002(图6B)具有从5分到6分的评级增加，接着从6分下降到4分，接着从4分增加到5分，使得在研究结束时与第1天比较，疾病评级总体维持。个体1244-1003(图6C)及1244-1010(图6I)在整个研究中维持9分的评级，表明步态、语言功能及视力正常；个体1244-1004(图6D)及1244-1009(图6H)在整个研究中维持6分的评级，且个体1244-1008(图6G)在整个研究中维持5分的评级。个体1244-1006(图6E)具有从6分到5分的一个单位的初始评级下降，接着进一步下降到4分，但重获一个单位到5分的评级，此后无净变化。个体1287-1005(图6F)具有从6分到4分的评级下降，接着从4分增加到5分且下降到4分，但再次重获一个单位到最终5分的评级。

视力子量表的加入在九名治疗患者中在治疗时期内未引起变化。然而，评分匹配的未经治疗的自然史患者对视力丧失至总分的影响显著。多名未经治疗的自然史匹配与治疗患者比较相差超过3分，显示在研究期期间视力衰退对总分的影响。因此视力子量表的加入增加治疗患者与匹配的未经治疗的自然史患者之间的差异。因为匹配的未经治疗的自然史患者中疾病评级单位的丧失逆转，所以观测到rhTPP1与阻止疾病进展及稳定化功能有关的处理效果可从运动/步态及语言延伸到包含视力的临床领域。

治疗对整个疾病评估的作用：在研究过程中，还使用含有完整汉堡或WCMC评分的组合12分量表，评估患者。12分量表上的评分是患者(1)运动/步态、(2)语言、(3)抽搐/肌阵挛及(4)视力/进食的个别评分的总和。图10A到10L显示使用0至12单位组合汉堡(左图)及WCMC量表(右图)，用本发明rhTPP1调配物治疗的个体的结果。23名患者中的十六名在至少一个量表上衰退逆转，且8名在治疗期结束时在至少一个量表上与基线比较评分增加，证实在接收rhTPP1的患者中总体治疗益处。

治疗对脑量的作用：MRI用以评估治疗患者中的次要终点。疾病过程特征为萎缩、细胞丧失及信号异常。这些参数个别或作为综合评分与患者年龄及疾病评级评分相关。因此，普遍同意疾病进展与萎缩的MRI指数相关，且多个MRI参数已显示在CLN2疾病中与年龄及疾病严重程度相关(Dyke等人,《美国神经放射学杂志(AJNR AmJNeuroradiol.)》2013；34(4):884-9)；Paniagua等人,《临床神经放射学(ClinNeuroradiol.)》2013；23(3):189-96)。支援这些结论的成像数据库是基于显著数目的患者的横截面相关性，然而，无MRI成像的患者内纵向获取。因此，无法同等与类似衍生的自然史数据库匹配纵向研究衍生的MRI分析。

为了分析治疗患者，MRI获取参数跨越研究位点的硬件平台标准化。数据局部获取，编辑鉴别信息，且传输到中心成像核心实验室。影像随机化，使得独立放射学家不知道患者或时间与基线的关系。脑量变化从随机化的独立中心读数重建。对数据进行分析以跨越治疗群体，与基线比较，纵向比较研究。图7展示治疗患者中MRI测量的脑量的概述。脑萎缩引起颅内CSF的体积及比例更大。萎缩这些测量的增加与CLN2患者中年龄及严重程度相关。治疗患者的CSF体积及比例的纵向曲线表明如果CSF参数的测量存在变化，那么也似乎很少。所有患者均具有呈现恒定且与评级评估稳定化一致的MRI容量分析。

图8A到8L展示治疗患者中脑量的纵向MRI评估。CLN2患者中主动神经退化特征为显著灰质丧失及CSF补偿性增加。然而，在评估期中，存在很稳定脑量且无证据表明治疗患者中的神经退化性过程。对于各治疗患者，图8A到8L中顶图和底图每一个中展示为CSF及灰质曲线(虚线)与CSF曲线(实线)之间的差异的灰质体积在整个研究中稳定。在首次300mg输注之前的最后一次测量(基线)，与治疗≥48周的最后一次观测比较，皮层灰质体积作为总脑量百分比的变化展示于下表6中。

表6

皮层体积的纵向变化在正常4岁-12岁儿童中为每年-1％，但对于未经治疗的CLN2患者，每年-12.5％。在rhTPP1治疗期间，CSF、灰质及白质的体积保持相对恒定，减弱疾病相关的皮层体积丧失的89％。

不良事件：一名患者因不符合方案而退出研究。剩余23名患者保留在研究且容许经由ICV途径用rhTPP1药物产物治疗。不存在因安全性相关原因引起的死亡、治疗相关的退出或研究中断。与装置植入的最低影响一致，所有患者在手术一周内给药。总共325个输注中，仅仅5个(1.5％)由于任何原因而中断，这些中仅仅2个(0.6％)因不良事件相关的原因中断。在研究中观测到的最频繁非CLN2疾病相关不良事件是发热、超敏反应及上呼吸道感染(分别在25％整个个体中)。一般来说，这些事件是轻度的、自限性且医学上管理。研究人员界定的超敏反应事件与少数外周呈现有关且用退热剂、抗组胺及/或类固醇的组合医学上管理。实验数据证明外周实验室中缺乏临床上相关的变化。CSF中，一些患者具有轻度、暂态脑脊液细胞增多，CSF葡萄糖或蛋白质无变化。总之，安全性参数的评估证明在所有患者中容许本发明的rhTPP1调配物经由ICV输注治疗。

结论

临床研究证明治疗暴露超过36周的每名患者具有显著临床益处，特征为CLN2疾病进展完全抑制，这构成最大治疗益处，因为对于中度进展且主动退化的患者，在所述时间范围中未预期功能增加。

当基于包含基线疾病评级、年龄及基因型的多个参数将患者与自然史数据库的成员匹配时，此发现甚至更引人注目。此匹配揭露在治疗个体在rhTPP1药品治疗时经历疾病进展停止的相同时段期间，匹配的未经治疗的自然史患者经历功能实质丧失。因此，所有治疗患者展示与匹配的未经治疗的自然史患者中主动疾病进展比较，疾病进展停止。基于可用自然史数据，未经治疗的自然史群体中中位元衰退速率估计为每年2.1分，其中各单位衰退表示生理功能的显著里程碑丧失。对于大部分进入研究的患者，2个单位的维持转变为持续独立步行及有意义的沟通。

总体上，结果证明本发明的rhTPP1调配物及治疗方法具有可接受的安全性/耐受性型态。无个体因不良事件而中断研究或治疗。一名个体在一次治疗剂量后因不符合方案而退出研究。PK及免疫原性的分析公开高CNS递送，且CSF中未形成抗体。

上述实例证明包括本文所述的rhTPP1的调配物及方法有效预防或治疗CLN2疾病及/或一或多种CLN2临床症状。在临床过程特征为快速、无情及不可逆的神经退化性疾病进展的疾病中，停止疾病进展，特别是在每个治疗患者中，是实质及意外的临床益处。

本说明书中所引用的所有公开、专利及专利申请均以引用的方式并入本文中，其程度如同特别且个别地指示各个别公开、专利或专利申请以引用的方式并入一般。虽然为求清楚了解，上述发明已相当详细地通过说明及实例描述，但普通技术人员显而易见根据本发明的教示，某些变化及修改可在不脱离所附权利要求书的精神或范围下进行。

序列表

<110> 生物马林药物股份有限公司(BIOMARIN PHARMACEUTICAL INC.)

莱斯特(Lester)等

<120> 用于治疗CLN2疾病的TPP1调配物及方法

<130> 30610/49443/PC

<160> 2

<170> PatentIn 3.5版

<210> 1

<211> 544

<212> PRT

<213> 智人

<400> 1

Ser Tyr Ser Pro Glu Pro Asp Gln Arg Arg Thr Leu Pro Pro Gly Trp

1 5 10 15

Val Ser Leu Gly Arg Ala Asp Pro Glu Glu Glu Leu Ser Leu Thr Phe

20 25 30

Ala Leu Arg Gln Gln Asn Val Glu Arg Leu Ser Glu Leu Val Gln Ala

35 40 45

Val Ser Asp Pro Ser Ser Pro Gln Tyr Gly Lys Tyr Leu Thr Leu Glu

50 55 60

Asn Val Ala Asp Leu Val Arg Pro Ser Pro Leu Thr Leu His Thr Val

65 70 75 80

Gln Lys Trp Leu Leu Ala Ala Gly Ala Gln Lys Cys His Ser Val Ile

85 90 95

Thr Gln Asp Phe Leu Thr Cys Trp Leu Ser Ile Arg Gln Ala Glu Leu

100 105 110

Leu Leu Pro Gly Ala Glu Phe His His Tyr Val Gly Gly Pro Thr Glu

115 120 125

Thr His Val Val Arg Ser Pro His Pro Tyr Gln Leu Pro Gln Ala Leu

130 135 140

Ala Pro His Val Asp Phe Val Gly Gly Leu His Arg Phe Pro Pro Thr

145 150 155 160

Ser Ser Leu Arg Gln Arg Pro Glu Pro Gln Val Thr Gly Thr Val Gly

165 170 175

Leu His Leu Gly Val Thr Pro Ser Val Ile Arg Lys Arg Tyr Asn Leu

180 185 190

Thr Ser Gln Asp Val Gly Ser Gly Thr Ser Asn Asn Ser Gln Ala Cys

195 200 205

Ala Gln Phe Leu Glu Gln Tyr Phe His Asp Ser Asp Leu Ala Gln Phe

210 215 220

Met Arg Leu Phe Gly Gly Asn Phe Ala His Gln Ala Ser Val Ala Arg

225 230 235 240

Val Val Gly Gln Gln Gly Arg Gly Arg Ala Gly Ile Glu Ala Ser Leu

245 250 255

Asp Val Gln Tyr Leu Met Ser Ala Gly Ala Asn Ile Ser Thr Trp Val

260 265 270

Tyr Ser Ser Pro Gly Arg His Glu Gly Gln Glu Pro Phe Leu Gln Trp

275 280 285

Leu Met Leu Leu Ser Asn Glu Ser Ala Leu Pro His Val His Thr Val

290 295 300

Ser Tyr Gly Asp Asp Glu Asp Ser Leu Ser Ser Ala Tyr Ile Gln Arg

305 310 315 320

Val Asn Thr Glu Leu Met Lys Ala Ala Ala Arg Gly Leu Thr Leu Leu

325 330 335

Phe Ala Ser Gly Asp Ser Gly Ala Gly Cys Trp Ser Val Ser Gly Arg

340 345 350

His Gln Phe Arg Pro Thr Phe Pro Ala Ser Ser Pro Tyr Val Thr Thr

355 360 365

Val Gly Gly Thr Ser Phe Gln Glu Pro Phe Leu Ile Thr Asn Glu Ile

370 375 380

Val Asp Tyr Ile Ser Gly Gly Gly Phe Ser Asn Val Phe Pro Arg Pro

385 390 395 400

Ser Tyr Gln Glu Glu Ala Val Thr Lys Phe Leu Ser Ser Ser Pro His

405 410 415

Leu Pro Pro Ser Ser Tyr Phe Asn Ala Ser Gly Arg Ala Tyr Pro Asp

420 425 430

Val Ala Ala Leu Ser Asp Gly Tyr Trp Val Val Ser Asn Arg Val Pro

435 440 445

Ile Pro Trp Val Ser Gly Thr Ser Ala Ser Thr Pro Val Phe Gly Gly

450 455 460

Ile Leu Ser Leu Ile Asn Glu His Arg Ile Leu Ser Gly Arg Pro Pro

465 470 475 480

Leu Gly Phe Leu Asn Pro Arg Leu Tyr Gln Gln His Gly Ala Gly Leu

485 490 495

Phe Asp Val Thr Arg Gly Cys His Glu Ser Cys Leu Asp Glu Glu Val

500 505 510

Glu Gly Gln Gly Phe Cys Ser Gly Pro Gly Trp Asp Pro Val Thr Gly

515 520 525

Trp Gly Thr Pro Asn Phe Pro Ala Leu Leu Lys Thr Leu Leu Asn Pro

530 535 540

<210> 2

<211> 368

<212> PRT

<213> 智人

<400> 2

Leu His Leu Gly Val Thr Pro Ser Val Ile Arg Lys Arg Tyr Asn Leu

1 5 10 15

Thr Ser Gln Asp Val Gly Ser Gly Thr Ser Asn Asn Ser Gln Ala Cys

20 25 30

Ala Gln Phe Leu Glu Gln Tyr Phe His Asp Ser Asp Leu Ala Gln Phe

35 40 45

Met Arg Leu Phe Gly Gly Asn Phe Ala His Gln Ala Ser Val Ala Arg

50 55 60

Val Val Gly Gln Gln Gly Arg Gly Arg Ala Gly Ile Glu Ala Ser Leu

65 70 75 80

Asp Val Gln Tyr Leu Met Ser Ala Gly Ala Asn Ile Ser Thr Trp Val

85 90 95

Tyr Ser Ser Pro Gly Arg His Glu Gly Gln Glu Pro Phe Leu Gln Trp

100 105 110

Leu Met Leu Leu Ser Asn Glu Ser Ala Leu Pro His Val His Thr Val

115 120 125

Ser Tyr Gly Asp Asp Glu Asp Ser Leu Ser Ser Ala Tyr Ile Gln Arg

130 135 140

Val Asn Thr Glu Leu Met Lys Ala Ala Ala Arg Gly Leu Thr Leu Leu

145 150 155 160

Phe Ala Ser Gly Asp Ser Gly Ala Gly Cys Trp Ser Val Ser Gly Arg

165 170 175

His Gln Phe Arg Pro Thr Phe Pro Ala Ser Ser Pro Tyr Val Thr Thr

180 185 190

Val Gly Gly Thr Ser Phe Gln Glu Pro Phe Leu Ile Thr Asn Glu Ile

195 200 205

Val Asp Tyr Ile Ser Gly Gly Gly Phe Ser Asn Val Phe Pro Arg Pro

210 215 220

Ser Tyr Gln Glu Glu Ala Val Thr Lys Phe Leu Ser Ser Ser Pro His

225 230 235 240

Leu Pro Pro Ser Ser Tyr Phe Asn Ala Ser Gly Arg Ala Tyr Pro Asp

245 250 255

Val Ala Ala Leu Ser Asp Gly Tyr Trp Val Val Ser Asn Arg Val Pro

260 265 270

Ile Pro Trp Val Ser Gly Thr Ser Ala Ser Thr Pro Val Phe Gly Gly

275 280 285

Ile Leu Ser Leu Ile Asn Glu His Arg Ile Leu Ser Gly Arg Pro Pro

290 295 300

Leu Gly Phe Leu Asn Pro Arg Leu Tyr Gln Gln His Gly Ala Gly Leu

305 310 315 320

Phe Asp Val Thr Arg Gly Cys His Glu Ser Cys Leu Asp Glu Glu Val

325 330 335

Glu Gly Gln Gly Phe Cys Ser Gly Pro Gly Trp Asp Pro Val Thr Gly

340 345 350

Trp Gly Thr Pro Asn Phe Pro Ala Leu Leu Lys Thr Leu Leu Asn Pro

355 360 365

Claims

1.一种调配物，包括重组人类三肽基肽酶-1(rhTPP1)，用于脑室内、鞘内或眼内给药，所述rhTPP1包括SEQ ID NO:1的氨基酸序列或其片段，所述调配物包括25mg/mL到35mg/mL的浓度的rhTPP1，还包括0.01mg/mL到0.5mg/mL的浓度的氯化钾、0.01mg/mL到0.5mg/mL的浓度的氯化镁六水合物及0.01mg/mL到0.5mg/mL的浓度的氯化钙二水合物，所述调配物具有6.5的pH值。

2.根据权利要求1所述的调配物，进一步包括0.01mg/mL到1mg/mL的浓度的磷酸氢二钠七水合物、0.01mg/mL到1mg/mL的浓度的磷酸二氢钠单水合物及1mg/mL到20mg/mL的浓度的氯化钠。

3.根据权利要求1所述的调配物，包括约0.11mg/mL的浓度的磷酸氢二钠七水合物、约0.08mg/mL的浓度的磷酸二氢钠单水合物、约8.77mg/mL的浓度的氯化钠、约0.22mg/mL的浓度的氯化钾、约0.16mg/mL的浓度的氯化镁六水合物及约0.21mg/mL的浓度的氯化钙二水合物。

4.根据权利要求1到3中任一项所述的调配物，其中所述调配物不含防腐剂。

5.根据权利要求1到3中任一项所述的调配物，其中所述调配物在约5℃下稳定至少6个月。

6.根据权利要求4所述的调配物，其中所述调配物在约5℃下稳定至少6个月。

7.一种组合物，包括根据权利要求1到6中任一项所述的调配物，用于治疗神经元蜡样脂褐质沉积症(CLN2)疾病。

8.权利要求1到6中任一项所述的调配物的用途，用于制造供治疗神经元蜡样脂褐质沉积症(CLN2)疾病的药剂。

9.如权利要求8所述的用途，还包含有效剂量的重组人类三肽基肽酶-1(rhTPP1)，所述有效剂量是约300mg。

10.如权利要求9所述的用途，所述有效剂量在约4小时的时间内给药所述个体。

11.如权利要求9所述的用途，所述有效剂量以小于或等于75毫克/小时的速率给药所述个体。

12.一种包括重组人类三肽基肽酶-1(rhTPP1)的组合物，用于治疗个体的神经元蜡样脂褐质沉积症(CLN2)疾病，所述组合物包括有效维持所述个体中生理功能或减缓或减少生理功能退化的250mg至300mg剂量的重组人类三肽基肽酶-1(rhTPP1)，其中所述生理功能是语言功能、运动功能、视力或进食功能；其中所述rhTPP1包括SEQ ID NO:1的氨基酸序列或其片段，所述组合物包括25mg/mL到35mg/mL的浓度的rhTPP1，还包括0.01mg/mL到0.5mg/mL的浓度的氯化钾、0.01mg/mL到0.5mg/mL的浓度的氯化镁六水合物及0.01mg/mL到0.5mg/mL的浓度的氯化钙二水合物，所述组合物具有6.5的pH值。

13.根据权利要求12所述的组合物，还包含0.01mg/mL到1mg/mL的浓度的磷酸氢二钠七水合物、0.01mg/mL到1mg/mL的浓度的磷酸二氢钠单水合物及1mg/mL到20mg/mL的浓度的氯化钠。

14.根据权利要求12所述的组合物，包含约0.11mg/mL的浓度的磷酸氢二钠七水合物、约0.08mg/mL的浓度的磷酸二氢钠单水合物、约8.77mg/mL的浓度的氯化钠、约0.22mg/mL的浓度的氯化钾、约0.16mg/mL的浓度的氯化镁六水合物及约0.21mg/mL的浓度的氯化钙二水合物。

15.根据权利要求12 到14中任一项所述的组合物，所述组合物在约5℃下稳定至少6个月。