CN107759709A - 一种黄精多糖的提取方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供一种黄精多糖的提取方法，包括以下步骤：首先将生黄精切块，加水浸泡后加热，过滤后保留提取液；取滤渣干燥后，粉碎得粉末，将粉末加水，浸泡后加热，过滤后保留提取液，合并提取液；离心，超滤，取上清液进行减压浓缩，得浓缩物；加入有机溶液沉淀，静置，分离得沉淀物；加水洗涤，将水洗涤液进行减压浓缩，再加入有机溶液沉淀，静置，收集沉淀物进行干燥，得成品。将黄精有效成分进行纯化，提高多糖含量及质量。本发明提取方法每个步骤相辅相成，通过简单的工艺，所得产品的有效成分含量高，性能稳定。

Description

一种黄精多糖的提取方法

技术领域

本发明涉及黄精提取技术领域，特别涉及一种黄精多糖的提取方法。

背景技术

多糖是一种具有广泛生物活性的大分子，多糖广泛存在于许多动植物体内，不仅是生物的营养成分，而且还参与多种生命活动，多糖具有增强机体免疫功能，抗肿瘤，抗突变，降血脂，抗衰老，抗菌和抗病毒等生理功能。目前，从中药分离多糖，大多采用了将药物粉碎、脱脂后，用乙醇进行提取，提取液浓缩后再除蛋白、除小分子杂质，浓缩精制冻干后或用有机溶剂沉淀即获得多糖产物。多糖的精制多采用离子交换和凝胶过滤的方法。该现有方法存在下列问题，多糖中含有酚型化合物，因而具有较深的颜色，而该颜色用活性炭无法完全脱色，用氧化剂则存在多糖降解；精制时易受到介质降解产物的污染；提取步骤复杂，提取过程中多糖的纯度不高等。

黄精含有黄精皂苷，糖类，醌类，氨基酸及微量元素，近年来对黄精多糖的研究取得了进展，药理学研究证明，黄精多糖具有免疫激发，增强免疫，延缓衰老，抗病毒等作用。黄精多糖是黄精生物学活性物质的一个非常重要的成分，因糖类参与了生命现象中细胞和机体的各种活动，黄精多糖的研究日益增多，具有开发利用价值。

发明内容

鉴以此，本发明提出一种黄精多糖的提取方法，采用本发明提取方法可获得有效成分含量高、提取率高的作用。

本发明的技术方案是这样实现的：一种黄精多糖的提取方法，包括以下步骤：

(1)将生黄精切块，加水浸泡15～22h后，加热，过滤，保留提取液；

(2)将步骤(1)的滤渣干燥后，粉碎成粉末，将滤渣粉末加入2～4倍重量的石油醚，在65～68℃下回流脱脂3～4h，将溶剂挥干后再加入水，浸泡5～10h后，加压加热，过滤，保留提取液，将滤渣加热提取2～3次，合并得提取液；

(3)将步骤(1)和步骤(2)的提取液合并，离心，取上清液进行超滤，取截留液进行减压浓缩，得浓缩物；

(4)将浓缩物加入乙醇溶液沉淀，搅拌后静置20～40h，分离得沉淀物；

(5)将沉淀物加入重量3～5倍的去离子水洗涤，将水洗涤液进行减压浓缩，再沉淀，搅拌后静置30～35h，收集沉淀物进行干燥，得成品。

进一步地，所述步骤(1)中，在100～110℃下加热2～3h，且在250～300目筛中进行过滤。

进一步地，所述步骤(2)中，在120～130℃下加热1～2h，且在250～300目筛中进行过滤。

进一步地，所述步骤(2)中，浸泡后在压力为120～150Mpa下加压处理20～25min，再加热。

进一步地，所述步骤(3)中，离心转速为2000～3000r/min。

进一步地，所述步骤(3)中，提取液合并后采用分子切割量为50～100KDa的超滤膜在压力为0.10～0.15MPa，温度为25～30℃进行超滤处理，收集截留液。

进一步地，所述步骤(3)中，所述减压为-0.1～0.3Kpa、温度为55～60℃下浓缩至相对密度为1.30～1.40。

进一步地，所述步骤(4)中，将浓缩物依次加入体积分数为75％、80％、85％的乙醇沉淀。

进一步地，所述步骤(5)中，将浓缩物依次用体积分数为70％的丙酮、75％乙醇和85％乙醇洗涤。

进一步地，所述步骤(5)中，在压力为2.0～3.0Mpa、温度为50～70℃下进行真空干燥。

与现有技术相比，本发明的有益效果是：

首先生黄精的细胞内含有较丰富的有效成分，黄精加入水进行浸泡目的是使黄精中亲水性的活性成分在浸泡的过程中被水溶解，再进行加热提取，黄精的有效成分易溶解出，有效成分含量增加，且在提取的过程中逐渐脱除蛋白质；其次再进行药渣的提取，将药渣进行粉碎后脱脂再进行重复提取，加压加热加大了药渣中有效成分溶解，让黄精细胞内的物质释放出，有效成分含量更高；再次通过离心、超滤和浓缩，使多糖与其它有效成分分离，增加多糖含量；最后通过乙醇沉淀-去离子水洗涤-乙醇沉淀等三个步骤纯化多糖的含量，无须通过凝胶过滤和离子交换的步骤，将黄精有效成分进行纯化，提高多糖含量及质量。本发明提取方法每个步骤相辅相成，通过简单的工艺，所得产品的有效成分含量高，性能稳定。

具体实施方式

为了更好理解本发明技术内容，下面提供具体实施例，并对本发明做进一步的说明。

实施例1

一种黄精多糖的提取方法，包括以下步骤：

(1)将生黄精切块，加入蒸馏水浸泡15h后，在100℃下加热2h，在250目筛中过滤后保留提取液。

(2)将步骤(1)的滤渣干燥后，粉碎得粉末，将粉末加入2倍重量的石油醚中，在65℃下回流脱脂3h，溶剂挥干后将粉末加入蒸馏水，浸泡5h后，在压力为120Mpa下加压处理20min，在120℃下加热1h，在250目筛中过滤后保留提取液，将滤渣反复加热提取2次，合并提取液。

(3)将步骤(1)和步骤(2)的提取液合并，离心，离心转速为2000r/min，取上清液采用分子切割量为50～100KDa的超滤膜在压力为0.10～0.15MPa，温度为25～30℃进行超滤处理，收集截留液，取截留液进行减压浓缩，在压力为-0.1Kpa、温度为55℃下浓缩至相对密度为1.30，得浓缩物。

(4)将浓缩物依次加入体积分数为75％、80％、85％的乙醇溶液沉淀，搅拌后静置20～40h，分离得沉淀物。

(5)将沉淀物加入重量3倍的去离子水洗涤，将水洗涤液进行减压浓缩，再依次用体积分数为70％的丙酮、75％乙醇和85％乙醇溶液沉淀，搅拌后静置30h，收集沉淀物在压力为2.0Mpa、温度为50℃下进行真空干燥，得成品。

实施例2

一种黄精多糖的提取方法，包括以下步骤：

(1)将生黄精切块，加入蒸馏水浸泡22h后，在110℃下加热3h，在300目筛中过滤后保留提取液。

(2)将步骤(1)的滤渣干燥后，粉碎得粉末，将粉末加入4倍重量的石油醚中，在68℃下回流脱脂4h，溶剂挥干后将粉末加入蒸馏水，浸泡10h后，在压力为150Mpa下加压处理25min，在130℃下加热2h，在300目筛中过滤后保留提取液，将滤渣反复加热提取3次，合并提取液。

(3)将步骤(1)和步骤(2)的提取液合并，离心，离心转速为3000r/min，取上清液采用分子切割量为50～100KDa的超滤膜在压力为0.10～0.15MPa，温度为25～30℃进行超滤处理，收集截留液，取截留液进行减压浓缩，在压力为0.3Kpa、温度为60℃下浓缩至相对密度为1.40，得浓缩物。

(4)将浓缩物依次加入体积分数为75％、80％、85％的乙醇溶液沉淀，搅拌后静置40h，分离得沉淀物。

(5)将沉淀物加入重量5倍的去离子水洗涤，将水洗涤液进行减压浓缩，再依次用体积分数为70％的丙酮、75％乙醇和85％乙醇溶液沉淀，搅拌后静置35h，收集沉淀物在压力为3.0Mpa、温度为70℃下进行真空干燥，得成品。

实施例3

一种黄精多糖的提取方法，包括以下步骤：

(1)将生黄精切块，加入蒸馏水浸泡18h后，在105℃下加热2.5h，在280目筛中过滤后保留提取液。

(2)将步骤(1)的滤渣干燥后，粉碎得粉末，将粉末加入3倍重量的石油醚中，在66℃下回流脱脂3.5h，溶剂挥干后将粉末加入蒸馏水，浸泡8h后，在压力为135Mpa下加压处理22min，在125℃下加热1.5h，在280目筛中过滤后保留提取液，将滤渣反复加热提取3次，合并提取液。

(3)将步骤(1)和步骤(2)的提取液合并，离心，离心转速为2500r/min，取上清液采用分子切割量为50～100KDa的超滤膜在压力为0.10～0.15MPa，温度为25～30℃进行超滤处理，收集截留液，取截留液进行减压浓缩，在压力为0.1Kpa、温度为58℃下浓缩至相对密度为1.35，得浓缩物。

(4)将浓缩物依次加入体积分数为75％、80％、85％的乙醇溶液沉淀，搅拌后静置30h，分离得沉淀物。

(5)将沉淀物加入重量4倍的去离子水洗涤，将水洗涤液进行减压浓缩，再依次用体积分数为70％的丙酮、75％乙醇和85％乙醇沉淀，搅拌后静置32h，收集沉淀物在压力为2.5Mpa、温度为60℃下进行真空干燥，得成品。

对比例1

该对比例中一种黄精多糖的提取方法，与实施例3的区别在于，步骤(1)包括以下步骤：

(1)将生黄精切块，加入水，在100℃下加热4h，在200目筛中过滤后保留提取液。

其余步骤与实施例3相同，提取多糖。

对比例2

该对比例中一种黄精多糖的提取方法，与实施例3的区别在于，步骤(2)包括以下步骤：

(2)将步骤(1)的滤渣干燥后，粉碎得粉末，将粉末加入蒸馏水，在105℃下加热1.5h，过滤后保留提取液，将滤渣反复加热提取3次，合并提取液。

其余步骤与实施例3相同，提取多糖。

对比例3

该对比例中一种黄精多糖的提取方法，与实施例3的区别在于，步骤(3)包括以下步骤：

(3)将步骤(1)和步骤(2)的提取液合并，离心，离心转速为2500r/min，取上清液进行减压浓缩，在压力为50Kpa、温度为50℃下浓缩至相对密度为1.2，得浓缩物。

其余步骤与实施例3相同，提取多糖。

对比例4

该对比例中一种黄精多糖的提取方法，与实施例3的区别在于，步骤(4)包括以下步骤：

(4)将浓缩物加入体积分数为95％的乙醇溶液沉淀，搅拌后静置30h，分离得沉淀物。

其余步骤与实施例3相同，提取多糖。

对比例5

该对比例中一种黄精多糖的提取方法，与实施例3的区别在于，步骤(5)包括以下步骤：

(5)将沉淀物加入重量2倍的去离子水洗涤，将水洗涤液进行减压浓缩，再加入体积分数为80％的乙醇溶液沉淀，搅拌后静置32h，收集沉淀物在压力为1.5Mpa、温度为60℃下进行真空干燥，得成品。

其余步骤与实施例3相同，提取多糖。

一、利用苯酚硫酸法测定黄精多糖中糖的总量

实验方法：称取葡萄糖100mg，配制成浓度为0.1mg/ml的溶液，取0.2ml，0.4ml，0.6ml，0.8ml，1.0ml，均定容至1ml。以蒸馏水为对照，分别向其中加入5％的苯酚0.6ml，浓硫酸2.6ml，充分振荡摇匀后，冷至室温，490nm处测吸光值。

准确称取适当实施例和对照例多糖样品配成浓度为0.1mg/ml的溶液，按同法处理后，根据多糖样品的吸光值，对照标准曲线计算出黄精多糖样品的总糖含量的重量百分比。测试数据如下表1所示：

由上表可以得知，本发明提供的黄精的提取方法获得的多糖，得率高的同时纯度高。尤其是，浸泡后加热、粉末进行高压处理技术后水提取、减压浓缩步骤、阶梯乙醇溶液沉淀、水洗涤和乙醇沉淀连续纯化等工艺步骤对有效成分含量以及得率影响很大。浸泡是为了使黄精处于溶胀状态，便于下一工序水提取时，有效成分含量增多，但是并非加水浸泡的时间越长越好，在15～22h的时间最好，少于15h，则有效成分的含量减少，多余22h，则会混入其它杂质，使得提取的多糖质量较差，因为第一次提取时黄精的细胞内外有效成分达到了平衡，此时残留附在细胞的有效成分未溶解出，因此将滤渣进行反复提取，大大提高了多糖的提取量，采用加压处理技术，为的是使黄精的细胞壁破碎，让细胞内的物质释放出，能够快速增加黄精含量，质量效果明显提高，纯度更高；离心、超滤和适宜的浓缩压力和温度能够使多糖充分溶解出，纯度高，防止结块；采用水洗涤和乙醇沉淀以及洗涤目的是为了多糖的纯度更高，三个步骤搭配，更好的将多糖进行纯化，将浓缩物依次加入体积分数为75％、80％、85％的乙醇沉淀，且所述沉淀物依次用体积分数为70％的丙酮、75％乙醇和85％乙醇洗涤，二者搭配反复沉淀洗涤更好的将多糖进行纯化。

以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种黄精多糖的提取方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)将生黄精切块，加水浸泡15～22h后，加热，过滤，保留提取液；

(2)将步骤(1)的滤渣干燥后，粉碎成粉末，将滤渣粉末加入2～4倍重量的石油醚，在65～68℃下回流脱脂3～4h，将溶剂挥干后再加入水，浸泡5～10h后，加压加热，过滤，保留提取液，将滤渣加热提取2～3次，合并得提取液；

(3)将步骤(1)和步骤(2)的提取液合并，离心，取上清液进行超滤，取截留液进行减压浓缩，得浓缩物；

(4)将浓缩物加入乙醇溶液沉淀，搅拌后静置20～40h，分离得沉淀物；

(5)将沉淀物加入重量3～5倍的去离子水洗涤，将水洗涤液进行减压浓缩，再沉淀，搅拌后静置30～35h，收集沉淀物进行干燥，得成品。

2.根据权利要求1所述的一种黄精多糖的提取方法，其特征在于，所述步骤(1)中，在100～110℃下加热2～3h，且在250～300目筛中进行过滤。

3.根据权利要求1所述的一种黄精多糖的提取方法，其特征在于，所述步骤(2)中，在120～130℃下加热1～2h，且在250～300目筛中进行过滤。

4.根据权利要求1所述的一种黄精多糖的提取方法，其特征在于，所述步骤(2)中，浸泡后在压力为120～150Mpa下加压处理20～25min，再加热。

5.根据权利要求1所述的一种黄精多糖的提取方法，其特征在于，所述步骤(3)中，离心转速为2000～3000r/min。

6.根据权利要求1所述的一种黄精多糖的提取方法，其特征在于，所述步骤(3)中，提取液合并后采用分子切割量为50～100KDa的超滤膜在压力为0.10～0.15MPa，温度为25～30℃进行超滤处理，收集截留液。

7.根据权利要求1所述的一种黄精多糖的提取方法，其特征在于，所述步骤(3)中，所述减压为-0.1～0.3Kpa、温度为55～60℃下浓缩至相对密度为1.30～1.40。

8.根据权利要求1所述的一种黄精多糖的提取方法，其特征在于，所述步骤(4)中，将浓缩物依次加入体积分数为75％、80％、85％的乙醇沉淀。

9.根据权利要求1所述的一种黄精多糖的提取方法，其特征在于，所述步骤(5)中，将浓缩物依次用体积分数为70％的丙酮、75％乙醇和85％乙醇沉淀。

10.根据权利要求1所述的一种黄精多糖的提取方法，其特征在于，所述步骤(5)中，在压力为2.0～3.0Mpa、温度为50～70℃下进行真空干燥。