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CN107743494A - 具有极性重组延伸体的胰岛素 - Google Patents

具有极性重组延伸体的胰岛素 Download PDF

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CN107743494A CN201680031703.8A CN201680031703A CN107743494A CN 107743494 A CN107743494 A CN 107743494A CN 201680031703 A CN201680031703 A CN 201680031703A CN 107743494 A CN107743494 A CN 107743494A
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Abstract

本发明涉及新型胰岛素或胰岛素类似物，其延伸出主要为极性的氨基酸残基的序列，以便提高药物物质的半衰期和稳定性。本发明还提供了包含此类药物物质的药物组合物，并且涉及此类药物物质在治疗或预防与糖尿病有关的医学状况中的用途。

Description

具有极性重组延伸体的胰岛素
技术领域
本发明涉及新型胰岛素或胰岛素类似物，其延伸出主要为极性的氨基酸残基的序列，以便提高药物物质的半衰期和稳定性。本发明还提供了包含此类药物物质的药物组合物，并且涉及此类药物物质在治疗或预防代谢性病症中的用途。
背景技术
一直期盼能提供用于治疗糖尿病的长效、稳定且具有活性的胰岛素，并且已确立的用于获得作用延长的方法包括在没有沉淀的储留物(depot)的情况下，用脂肪(二)酸衍生物进行酰化以引起白蛋白结合，并且形成可溶性多六聚体。PEG化(蛋白质与高分子量多分散性聚乙二醇的缀合)同样是已确立的技术，不过PEG并非生物可降解的，而且在一些情况下，PEG若长期使用会在体内积累。此外，虽然优选均相聚合物，但是大多数长链聚合物仅以多分散形式可得。
因此，具有在其他方面类似于PEG的性质的生物可降解聚合物对于蛋白质药物工程而言是有意义的。该聚合物应该是极性的，以便保持水溶性，并且例如通过增大工程化蛋白质的流体动力学体积而在体内提供更长的治疗作用持续时间。该聚合物必须共价附接至蛋白质/胰岛素上，该蛋白质/胰岛素可以作为化学缀合物或通过在合适的宿主细胞中重组表达(作为融合体)而获得。延伸的蛋白质的主要体内延长作用可归因于由于流体动力学体积大而引起的、在皮下给药后延长的吸收期。
已经提出了针对半衰期延长的生物可降解聚合物的各种解决方案。对此，WO 2008049931描述了显示出合适的体内半衰期的某些肽延伸的胰岛素；DD 257197描述了通过添加聚氨基酸而获得固定的活性胰岛素产物的方法；DD 286509描述了用于制备供直肠应用的胰岛素制剂的方法，该制剂是活性稳定的且活性延长的；Arakawa等人，NatureBiotechnology 1998，16，934-938描述了基于植物的霍乱毒素B亚基-胰岛素融合蛋白，其预防自身免疫性糖尿病的发展；WO 2008 019368 A2描述了某些白蛋白-胰岛素融合蛋白。
然而，根据本发明的胰岛素和胰岛素类似物未曾有记载。
发明内容
尽管现有技术中描述的极性重组延伸体(通常提示使用多个Ser和Thr残基)可在基于细菌的生产系统中起到良好作用，但是这类氨基酸残基在基于酵母的表达系统中易于糖基化，从而降低包含此类延伸体的蛋白质的总产率。此外，由于在蛋白质纯化过程中去除糖基化副产物较为困难且耗费资源，因此出于优化基于酵母的生产工艺的考虑，希望提供备选延伸方案。
此外，已经发现，与其他产物例如含有多个Glu(E)的序列相比，包含极性氨基酸Gln和/或His的本发明的寡聚体延伸产物不易产生高粘度。
最后，本发明的寡聚体延伸的胰岛素或胰岛素类似物可致使具有这样的胰岛素特性，其已显示出可以允许每日一次、乃至每周一次给药的体内持续时间和稳定性。
因此，在其第一个方面，本发明提供了寡聚体延伸的胰岛素或胰岛素类似物，该胰岛素或胰岛素类似物在B链的N-末端处和/或从A链的C-末端延伸出仅由选自His(H)、Gln(Q)、Ala(A)、Asp(D)、Glu(E)、Gly(G)、Pro(P)、Ser(S)和Thr(T)的氨基酸残基组成的延伸体；在该延伸体中：
I)选自由His(H)和Gln(Q)组成的组的氨基酸残基中的一种或两种；该数目的组I的氨基酸残基与以下II组合
II)不超过三倍于该数目的选自由Ala(A)、Asp(D)、Glu(E)、Gly(G)、Pro(P)、Ser(S)和Thr(T)组成的组的氨基酸残基；以得到寡聚体延伸的胰岛素或胰岛素类似物，其具有包含约100个至约800个连续氨基酸残基的延伸体。
在另一方面，本发明提供了包含本发明的寡聚体延伸的胰岛素或胰岛素类似物以及一种或多种佐剂、赋形剂、载体和/或稀释剂的药物组合物。
在进一步的方面，本发明涉及本发明的寡聚体延伸的胰岛素或胰岛素类似物作为药物的用途，并且涉及治疗、预防或减轻包括人在内的活动物体的代谢性疾病、病症或状况的方法，该方法包括向有需要的此类活动物体施用治疗有效量的本发明的寡聚体延伸的胰岛素或胰岛素类似物的步骤。
基于以下详述和实施例，本发明的其他目的对本领域技术人员而言将会变得显而易见。
发明详述
寡聚体延伸的胰岛素或胰岛素类似物
在第一个实施方案中，本发明提供了寡聚体延伸的胰岛素或胰岛素类似物，该胰岛素或胰岛素类似物是包含A链和B链的双链胰岛素分子，并且该胰岛素或胰岛素类似物在B链的N-末端处和/或从A链的C-末端延伸出仅由选自His(H)、Gln(Q)、Ala(A)、Asp(D)、Glu(E)、Gly(G)、Pro(P)、Ser(S)和Thr(T)的氨基酸残基组成的延伸体；在该延伸体中：
I)选自由His(H)和Gln(Q)组成的组(即组I)的(两种)氨基酸残基中的一种或二种；该数目(即一种或二种)的组I的氨基酸残基与以下II组合
II)不超过三倍于该数目(即三种或六种)的选自由Ala(A)、Asp(D)、Glu(E)、Gly(G)、Pro(P)、Ser(S)和Thr(T)组成的组(即组II)的氨基酸残基；
以得到寡聚体延伸的胰岛素或胰岛素类似物，其具有包含约100个至约800个连续氨基酸残基的延伸体。
这意味着根据本发明所选择的氨基酸可以根据需要重复，以便获得所需长度和大小的延伸体。
在另一个实施方案中，本发明提供了寡聚体延伸的胰岛素或胰岛素类似物，该胰岛素或胰岛素类似物是包含A链和B链的双链胰岛素分子，并且该胰岛素或胰岛素类似物在B链的N-末端处和/或从A链的C-末端延伸出仅由选自His(H)、Gln(Q)、Ala(A)、Asp(D)、Glu(E)、Gly(G)、Pro(P)、Ser(S)和Thr(T)的氨基酸残基组成的延伸体；该延伸体由以下各项组成：
I)选自由His(H)和Gln(Q)组成的组(即组I)的(两种)氨基酸残基中的一种或二种；该数目(即一种或两种)的组I的氨基酸残基与以下II组合
II)不超过三倍于该数目(即三种或六种)的选自由Ala(A)、Asp(D)、Glu(E)、Gly(G)、Pro(P)、Ser(S)和Thr(T)组成的组(即组II)的氨基酸残基；
以得到结构基序，其中所述数目表示上述氨基酸残基的化学计量比例，并且该组成可以重复或延伸，以得到寡聚体延伸的胰岛素或胰岛素类似物，其具有包含约100个至约800个连续氨基酸残基的延伸体。
主要出于对最终产物的溶解度和流体动力学大小的考虑，优选极性残基。此外，均为极性氨基酸的Gln和His缺乏与Ser和Thr相关的、特别是与酵母表达系统相关的糖基化问题。最后，与具有其他序列例如含有多个Glu(E)序列的延伸体相比，具有包含一定平衡数量的Gln和/或His的序列的延伸体已经显示出较低的粘度。
因此，在第三个实施方案中，如上所述，本发明的胰岛素或胰岛素类似物的寡聚体延伸体在其结构基序中含有不多于一个Glu(E)。
在第四个实施方案中，本发明的寡聚体延伸的胰岛素或胰岛素类似物是一种产物，其中：
I)选自由His(H)和Gln(Q)组成的组(即组I)的(两种)氨基酸残基之一；与以下II组合
II)不超过三种选自由Ala(A)、Asp(D)、Glu(E)、Gly(G)、Pro(P)、Ser(S)和Thr(T)组成的组(即组II)的氨基酸残基。
在第五个实施方案中，本发明的寡聚体延伸的胰岛素或胰岛素类似物是一种产物，其中：
I)选自由His(H)和Gln(Q)组成的组(即组I)的(两种)氨基酸残基之一；与以下II组合
II)不超过三种选自由Ala(A)、Glu(E)、Gly(G)和Pro(P)组成的组(即组II)的氨基酸残基。
在第六个实施方案中，本发明的寡聚体延伸的胰岛素或胰岛素类似物是一种产物，其中：
I)选自由His(H)和Gln(Q)组成的组(即组I)的(两种)氨基酸残基中的两种；与以下II组合
II)不超过六种选自由Ala(A)、Asp(D)、Glu(E)、Gly(G)、Pro(P)、Ser(S)和Thr(T)组成的组(即组II)的氨基酸残基。
在第七个实施方案中，本发明的寡聚体延伸的胰岛素或胰岛素类似物是一种产物，其中：
I)选自由His(H)和Gln(Q)组成的组(即组I)的(两种)氨基酸残基中的两种；与以下II组合
II)不超过六种选自由Ala(A)、Glu(E)、Gly(G)和Pro(P)组成的组(即组II)的氨基酸残基。
在第八个实施方案中，组I的氨基酸残基中的一种或两种与相同数目的选自组II的氨基酸残基组合。
在第九个实施方案中，组I的氨基酸残基中的一种或两种与1 1/2倍于该数目的选自组II的氨基酸残基组合。
在第十个实施方案中，组I的氨基酸残基中的一种或两种与2倍于该数目的选自组II的氨基酸残基组合。
在第十一个实施方案中，组I的氨基酸残基中的一种或两种与2.5倍于该数目的选自组II的氨基酸残基组合。
在第十二个实施方案中，组I的氨基酸残基中的一种或两种与3倍于该数目的选自组II的氨基酸残基组合。
根据本发明进行的延伸可以应用于任何来源的，特别是重组、牛或猪来源的胰岛素分子，或者应用于手头的任何胰岛素类似物。
在本发明的进一步的实施方案中，根据本发明的寡聚体延伸的产物是寡聚体延伸的人胰岛素。
在第二个实施方案中，本发明的寡聚体延伸的产物是选自下组的寡聚体延伸的胰岛素类似物
A14E，A21G，B16E，B25H，desB30人胰岛素；
A14E，A21G，B16H，B25H，desB27，desB30人胰岛素；
A14E，A21G，B16H，B25H，desB30人胰岛素；
A14E，A21G，B25H，desB30人胰岛素；
A14E，A21G，desB30人胰岛素；
A14E，A21Q，B16E，B25H，desB30人胰岛素；
A14E，A21Q，B16H，B25H，desB27，desB30人胰岛素；
A14E，A21Q，B16H，B25H，desB30人胰岛素；
A14E，A21G，B25H，desB27，desB30人胰岛素；
A14E，A21Q，B25H，desB27，desB30人胰岛素；
A14E，A21Q，B25H，desB30人胰岛素；
A14E，A21Q，desB30人胰岛素；
A14E，B16E，B25H，desB30人胰岛素；
A14E，B16H，B25H，desB27，desB30人胰岛素；
A14E，B16H，B25H，desB30人胰岛素；
A14E，B25H，desB27，desB30人胰岛素；
A14E，B25H，desB30人胰岛素；
A21G，A22A，A23P，A24Q，desB30人胰岛素；
A21G，A22A，A23Q，A24P，desB30人胰岛素；
A21G，A22G人胰岛素；
A21G，A22K，B29R，desB30人胰岛素；
A21G，A22P，A23A，A24Q，desB30人胰岛素；
A21G，A22P，A23Q，A24A，desB30人胰岛素；
A21G，A22Q，A23A，A24P，desB30人胰岛素；
A21G，A22Q，A23P，A24A，desB30人胰岛素；
A21G，A22Q，A23P，desB30人胰岛素；
A21G，B1F，desB30人胰岛素；
A21G，B3K，B29E人胰岛素；
A21G，desB27，desB30人胰岛素；
A21G，B28D人胰岛素；
A21G，B28D，desB30人胰岛素；
A21G，B28K，B29P人胰岛素；
A21G，desB30人胰岛素；
A21Q，A22G人胰岛素；
A21Q，A22K，B29R，desB30人胰岛素；
A21Q，B3K，B29E人胰岛素；
A21Q，desB27，desB30人胰岛素；
A21Q，B28D人胰岛素；
A21Q，B28D，desB30人胰岛素；
A21Q，B28K，B29P人胰岛素；
A21Q，desB30人胰岛素；
A22K，B29R，desB30人胰岛素；
B3K，B29E人胰岛素；
B28D人胰岛素；
B28D，desB30人胰岛素；
B28K，B29P人胰岛素；或
desB30人胰岛素。
在一个实施方案中，所述胰岛素类似物选自
A14E，A21G，B25H，desB30人胰岛素；
A21G，A22A，A23P，A24Q，desB30人胰岛素；
A21G，A22A，A23Q，A24P，desB30人胰岛素；
A21G，A22P，A23A，A24Q，desB30人胰岛素；
A21G，A22P，A23Q，A24A，desB30人胰岛素；
A21G，A22Q，A23A，A24P，desB30人胰岛素；
A21G，A22Q，A23P，A24A，desB30人胰岛素；
A21G，A22Q，A23P，desB30人胰岛素；
A21G，B1F，desB30人胰岛素；
A21G，desB30人胰岛素；和
A21Q，desB30人胰岛素。
在另一个实施方案中，所述胰岛素类似物选自
A14E，A21G，B25H，desB30人胰岛素；
A21G，desB30人胰岛素；和
A21Q，desB30人胰岛素。
在第三个实施方案中，所述胰岛素类似物是A14E，A21G，B25H，desB30人胰岛素。
在第四个实施方案中，所述胰岛素类似物是A21G，A22A，A23P，A24Q，desB30人胰岛素。
在第五个实施方案中，所述胰岛素类似物是A21G，A22A，A23Q，A24P，desB30人胰岛素。
在第六个实施方案中，所述胰岛素类似物是A21G，A22P，A23A，A24Q，desB30人胰岛素。
在第七个实施方案中，所述胰岛素类似物是A21G，A22P，A23Q，A24A，desB30人胰岛素。
在第八个实施方案中，所述胰岛素类似物是A21G，A22Q，A23A，A24P，desB30人胰岛素。
在第九个实施方案中，所述胰岛素类似物是A21G，A22Q，A23P，A24A，desB30人胰岛素。
在第十个实施方案中，所述胰岛素类似物是A21G，A22Q，A23P，desB30人胰岛素。
在第十一个实施方案中，所述胰岛素类似物是A21G，B1F，desB30人胰岛素。
在第十二个实施方案中，所述胰岛素类似物是A21G，desB30人胰岛素。
在第十三个实施方案中，所述胰岛素类似物是A21Q，desB30人胰岛素。
如果延伸开始于Gly(G)残基，那么根据本发明选择的胰岛素类似物可以优选为含A21Gly(G)的类似物或含A21Gln(Q)的类似物。
因此，在一个实施方案中，本发明的寡聚体延伸的产物是包含A21Gly(G)或A21Gln(Q)突变的寡聚体延伸的胰岛素类似物，并且该延伸开始于Gly(G)残基。
而且，在又一个实施方案中，如果胰岛素类似物保持天然的A21N位置，那么寡聚体延伸体的N-末端的第一个氨基酸应该不是Gly(G)残基。
在第三个实施方案中，本发明的寡聚体延伸的胰岛素或胰岛素类似物在B链的N-末端处延伸。
在第四个实施方案中，本发明的寡聚体延伸的胰岛素或胰岛素类似物在A链的C末端处延伸。
在第五个实施方案中，本发明的寡聚体延伸的胰岛素或胰岛素类似物在B链的N-末端处和从A链的C-末端延伸。
在第六个实施方案中，本发明的寡聚体延伸的胰岛素或胰岛素类似物延伸出
A)包含选自组[A、G和H或Q]，或选自组[E、G和H或Q]，或选自组[G、P和H或Q](即组A)的氨基酸残基的连续氨基酸残基；或
B)包含选自组[A、G、P和H或Q]，或选自组[E、G、P和H或Q]，或选自组[G、K、P和H或Q]，或选自组[E、G、H和Q](即组B)的氨基酸残基的连续氨基酸残基；或
C)包含选自组[A、G、P、H和Q]或选自组[E、G、P、H和Q](即组C)的氨基酸残基的连续氨基酸残基；或
D)包含选自组[A、E、G、P、H和Q](即组D)的氨基酸残基的连续氨基酸残基；
和/或组A、B、C和D的任意组合。
在第七个实施方案中，本发明的寡聚体延伸的胰岛素或胰岛素类似物延伸出非重复序列，即随机顺序的序列。
在一个实施方案中，本发明的寡聚体延伸的胰岛素或胰岛素类似物延伸出以随机顺序包含A、D、E、G、H、P、Q、S和T的氨基酸残基序列。
在另一个实施方案中，本发明的寡聚体延伸的胰岛素或胰岛素类似物延伸出以随机顺序包含A、D、E、G、H、P和Q的氨基酸残基序列。
在第三个实施方案中，本发明的寡聚体延伸的胰岛素或胰岛素类似物延伸出以随机顺序包含A、E、G、H、P、Q、S和T的氨基酸残基序列。
在第四个实施方案中，本发明的寡聚体延伸的胰岛素或胰岛素类似物延伸出以大致相等的量但以随机顺序包含A、E、G、H、P和Q的氨基酸残基序列。
在第八个实施方案中，本发明的寡聚体延伸的胰岛素或胰岛素类似物延伸出某些基序的重复，这样的基序可以根据需要重复，以便获得所需长度和大小的延伸体。取决于所讨论的基序，重复的次数可以在约2至约400的范围内。
在一个实施方案中，重复的次数在约5至约250的范围内。
在另一个实施方案中，重复的次数在约10至约200的范围内。
在第三个实施方案中，重复的次数为10、12、13、15、20、25、30、31、33、37、40、44、49、50、56、60、62、65、66、67、69、70、75、80、90、100、125或150。
在第九个实施方案中，组A的氨基酸残基由选自组[A、G和H或Q](即组A1)的连续氨基酸残基来表示。
在一个实施方案中，组A1的氨基酸残基选自组[A、G和H]。
在另一个实施方案中，选自组[A、G和H]的组A1的氨基酸残基由一个或多个以下基序来表示：[GHA]；[HAG]；[AGH]；[GAH]；[AHG]；和[HGA]；及其任意组合。
在第三个实施方案中，组A1的氨基酸残基选自组[A、G和Q]。
在第四个实施方案中，选自组[A、G和Q]的组A1的氨基酸残基由一个或多个以下基序来表示：[GQA]；[QAG]；[AGQ]；[GAQ]；[AQG]；和[QGA]；及其任意组合。
在第五个实施方案中，选自组[A、G和Q]的组A1的氨基酸残基由一个或两个以下基序来表示：[GQA]；和[GAQ]；及其任意组合。
在第六个实施方案中，选自组[A、G和Q]的组A1的氨基酸残基由以下基序来表示：[GQA]；及以任意组合。
在第十个实施方案中，组A的氨基酸残基由选自组[E、G和H或Q](即组A2)的连续氨基酸残基来表示。
在一个实施方案中，组A2的氨基酸残基选自组[E、G和H]。
在另一个实施方案中，选自组[E、G和H]的组A2的氨基酸残基由一个或多个以下基序来表示：[GEH]；[EHG]；[HGE]；[GHE]；[HEG]；和[EGH]；及其任意组合。
在第三个实施方案中，选自组[E、G和H]的组A2的氨基酸残基由以下基序中的一个或两个来表示：[GEH]；和[GHE]；及其任意组合。
在第四个实施方案中，选自组[E、G和H]的组A2的氨基酸残基由以下基序来表示：[GEH]，及以任意组合。
在第五个实施方案中，组A2的氨基酸残基选自组[E、G和Q]。
在第六个实施方案中，选自组[E、G和Q]的组A2的氨基酸残基由一个或多个以下基序来表示：[GEQ]；[EQG]；[QGE]；[GQE]；[QEG]；和[EGQ]；及其任意组合。
在第七个实施方案中，选自组[E、G和Q]的组A2的氨基酸残基由以下基序中的一个或两个来表示：[GEQ]；和[GQE]；及其任意组合。
在第十一个实施方案中，组A的氨基酸残基由选自组[G、P和H或Q](即组A3)的连续氨基酸残基来表示。
在一个实施方案中，组A3的氨基酸残基选自组[G、P和H]。
在另一个实施方案中，选自组[G、P和H]的组A3的氨基酸残基由一个或多个以下基序来表示：[GHPH]；[HPHG]；[PHGH]；和[HGHP]；及其任意组合。
在第三个实施方案中，选自组[G、P和H]的组A3的氨基酸残基由以下基序来表示：[GHPH]。
在第四个实施方案中，组A3的氨基酸残基选自组[G、P和Q]。
在第五个实施方案中，选自组[G、P和Q]的组A3的氨基酸残基由一个或多个以下基序来表示：[GQP]；[QPG]；和[PGQ]；及其任意组合。
在第六个实施方案中，选自组[G、P和Q]的组A3的氨基酸残基由一个或多个以下基序来表示：[GQPQ]；[QPQG]；[PQGQ]；和[QGQP]；及其任意组合。
在第七个实施方案中，组A的氨基酸残基选自一个或多个以下基序：[GAQ]；[GEH]；[GEQ]；[GQA]；[GQE]；和/或[GQP]；及其任意组合。
在第十二个实施方案中，组B的氨基酸残基由选自组[A、G、P和H或Q](即组B1)的连续氨基酸残基来表示。
在一个实施方案中，组B1的氨基酸残基选自组[A、G、P、H]。
在另一个实施方案中，选自组[A、G、P、H]的组B1的氨基酸残基由一个或多个以下基序来表示：[GAPH]；[APHG]；[PHGA]；[HGAP]；[GAHP]；[AHPG]；[HPGA]；[PGAH]；[GPAH]；[PAHG]；[AHGP]；[HGPA]；[GHAP]；[HAPG]；[APGH]；[PGHA]；[GHPA]；[HPAG]；[PAGH]；[AGHP]；[PHAG]；[HAGP]；[AGPH]；和[GPHA]；及其任意组合。
在第三个实施方案中，选自组[A、G、P、H]的组B1的氨基酸残基由以下基序来表示：[GAPH]。
在第四个实施方案中，组B1的氨基酸残基选自组[A、G、P、Q]。
在第五个实施方案中，选自组[A、G、P、Q]的组B1的氨基酸残基由一个或多个以下基序来表示：[GAPQ]；[APQG]；[PQGA]；[QGAP]；[GAQP]；[AQPG]；[QPGA]；[PGAQ]；[GPAQ]；[PAQG]；[AQGP]；[QGPA]；[GQAP]；[QAPG]；[APGQ]；[PGQA]；[GQPA]；[QPAG]；[PAGQ]；[AGQP]；[PQAG]；[QAGP]；[AGPQ]；和[GPQA]；及其任意组合。
在第六个实施方案中，选自组[A、G、P、Q]的组B1的氨基酸残基由一个或多个以下基序来表示：[GAPQ]；[GAQP]；[GPAQ]；[GQAP]；[GQPA]；[PQAG]；和[GPQA]；及其任意组合。
在第十三个实施方案中，组B的氨基酸残基由选自组[E、G、P和H或Q](即组B2)的连续氨基酸残基来表示。
在一个实施方案中，组B2的氨基酸残基选自组[E、G、P、H]。
在另一个实施方案中，选自组[E、G、P、H]的组B2的氨基酸残基由一个或多个以下基序来表示：[GEHP]；[EHPG]；[HPGE]；[PGEH]；[GEPH]；[EPHG]；[PHGE]；[HGEP]；[GHPE]；[HPEG]；[PEGH]；[EGHP]；[GHEP]；[HEPG]；[EPGH]；[PGHE]；[GHHP]；[HHPG]；[HPGH]；[PGHH]；[GPEH]；[PEHG]；[EHGP]；[HGPE]；[GPHE]；[PHEG]；[HEGP]；和[EGPH]；及其任意组合。
在第三个实施方案中，选自组[E、G、P、H]的组B2的氨基酸残基由一个或多个以下基序来表示：[GEHP]；[GEPH]；[GHPE]；[GHEP]；[GHHP]；[GPEH]；和[GPHE]；及其任意组合。
在第四个实施方案中，组B2的氨基酸残基选自组[E、G、P、Q]。
在第五个实施方案中，选自组[E、G、P、Q]的组B2的氨基酸残基由一个或多个以下基序来表示：[GEQP]；[EQPG]；[QPGE]；[PGEQ]；[GEPQ]；[EPQG]；[PQGE]；[QGEP]；[GQPE]；[QPEG]；[PEGQ]；[EGQP]；[GQEP]；[QEPG]；[EPGQ]；[PGQE]；[GQQP]；[QQPG]；[QPGQ]；[PGQQ]；[GPEQ]；[PEQG]；[EQGP]；[QGPE]；[GPQE]；[PQEG]；[QEGP]；和[EGPQ]；及其任意组合。
在第六个实施方案中，选自组[E、G、P、Q]的组B2的氨基酸残基由一个或多个以下基序来表示：[GEQP]；[GEPQ]；[GQPE]；[GQEP]；[GPEQ]；和[GPQE]；及其任意组合。
在第十四个实施方案中，组B的氨基酸残基由选自组[E、G、H和Q](即组B4)的连续氨基酸残基来表示。
在一个实施方案中，组B4的氨基酸残基选自组[E、G、H、Q]。
在另一个实施方案中，选自组[E、G、H、Q]的组B4的氨基酸残基由一个或多个以下基序来表示：[GEQH]；[EQHG]；[QHGE]；[HGEQ]；[GEHQ]；[EHQG]；[HQGE]；[QGEH]；[GHEQ]；[HEQG]；[EQGH]；[QGHE]；[GHQE]；[HQEG]；[QEGH]；[EGHQ]；[GQHP]；[QHPG]；[HPGQ]；[PGQH]；[GQEH]；[QEHG]；[EHGQ]；[HGQE]；[GQHE]；[QHEG]；[HEGQ]；[EGQH]；[GHQP]；[HQPG]；[QPGH]；和[PGHQ]；及其任意组合。
在第三个实施方案中，选自组[E、G、H、Q]的组B4的氨基酸残基由一个或多个以下基序来表示：[GEQH]；[GEHQ]；[GHEQ]；[GHQE]；[GQHP]；[GQEH]；和[GQHE]；及其任意组合。
在第四个实施方案中，组B的氨基酸残基选自一个或多个以下基序：[GAPH]；[GAPQ]；[GAQP]；[GPAQ]；[GQAP]；[GQPA]；[PQAG]；[GPQA]；[GEHP]；[GEPH]；[GHPE]；[GHEP]；[GHHP]；[GPEH]；[GPHE]；[GEQP]；[GEPQ]；[GQPE]；[GQEP]；[GPEQ]；[GPQE]；[GEQH]；[GEHQ]；[GHEQ]；[GHQE]；[GQHP]；[GQEH]；和/或[GQHE]；及其任意组合。
在第十五个实施方案中，组C的氨基酸残基由选自组[A、G、P、H和Q](即组C1)的连续氨基酸残基来表示。
在一个实施方案中，选自组[A、G、P、H和Q]的组C1的氨基酸残基由一个或多个以下基序来表示：[GHAPGHHP]；[HAPGHHPG]；[APGHHPGH]；[PGHHPGHA]；[GHHPGHAP]；[HHPGHAPG]；[HPGHAPGH]；[PGHAPGHH]；[GHAPGQHP]；[HAPGQHPG]；[APGQHPGH]；[PGQHPGHA]；[GQHPGHAP]；[QHPGHAPG]；[HPGHAPGQ]；[PGHAPGQH]；[GQAPGQHP]；[QAPGQHPG]；[APGQHPGQ]；[PGQHPGQA]；[GQHPGQAP]；[QHPGQAPG]；[HPGQAPGQ]；和[PGQAPGQH]；及其任意组合。
在另一个实施方案中，选自组[A、G、P、H和Q]的组C1的氨基酸残基由一个或多个以下基序来表示：
[GQAPGQAPGAPHGAPH]；[HGQAPGQAPGAPHGAP]；
[PHGQAPGQAPGAPHGA]；[APHGQAPGQAPGAPHG]；
[GAPHGQAPGQAPGAPH]；[HGAPHGQAPGQAPGAP]；
[PHGAPHGQAPGQAPGA]；[APHGAPHGQAPGQAPG]；
[GAPHGAPHGQAPGQAP]；[PGAPHGAPHGQAPGQA]；
[APGAPHGAPHGQAPGQ]；[QAPGAPHGAPHGQAPG]；
[GQAPGAPHGAPHGQAP]；[PGQAPGAPHGAPHGQA]；
[APGQAPGAPHGAPHGQ]；[GQAPGAPHGAPHGAPH]；
[QAPGAPHGAPHGAPHG]；[APGAPHGAPHGAPHGQ]；
[PGAPHGAPHGAPHGQA]；[GAPHGAPHGAPHGQAP]；
[APHGAPHGAPHGQAPG]；[PHGAPHGAPHGQAPGA]；
[HGAPHGAPHGQAPGAP]；[GAPHGAPHGQAPGAPH]；
[APHGAPHGQAPGAPHG]；[PHGAPHGQAPGAPHGA]；
[HGAPHGQAPGAPHGAP]；[GAPHGQAPGAPHGAPH]；
[APHGQAPGAPHGAPHG]；[PHGQAPGAPHGAPHGA]；
[HGQAPGAPHGAPHGAP]；和[QAPGQAPGAPHGAPHG]；及其任意组合。
在第三个实施方案中，选自组[A、G、P、H和Q]的组C1的氨基酸残基由一个或多个以下基序来表示：
[GQAPGQAPGQAPGAPH]；[HGQAPGQAPGQAPGAP]；
[PHGQAPGQAPGQAPGA]；[APHGQAPGQAPGQAPG]；
[GAPHGQAPGQAPGQAP]；[PGAPHGQAPGQAPGQA]；
[APGAPHGQAPGQAPGQ]；[QAPGAPHGQAPGQAPG]；
[GQAPGAPHGQAPGQAP]；[PGQAPGAPHGQAPGQA]；
[APGQAPGAPHGQAPGQ]；[QAPGQAPGAPHGQAPG]；
[GQAPGQAPGAPHGQAP]；[PGQAPGQAPGAPHGQA]；
[APGQAPGQAPGAPHGQ]；和[QAPGQAPGQAPGAPHG]；及其任意组合。
在第十六个实施方案中，组C的氨基酸残基由选自组[E、G、P、H和Q](即组C2)的连续氨基酸残基来表示。
在一个实施方案中，选自组[E、G、P、H和Q]的组C2的氨基酸残基由一个或多个以下基序来表示：[GHEPGHHP]；[HEPGHHPG]；
[EPGHHPGH]；[PGHHPGHE]；[GHHPGHEP]；[HHPGHEPG]；
[HPGHEPGH]；[PGHEPGHH]；[GHEPGQHP]；[HEPGQHPG]；
[EPGQHPGH]；[PGQHPGHE]；[GQHPGHEP]；[QHPGHEPG]；
[HPGHEPGQ]；[PGHEPGQH]；[GQEPGQHP]；[QEPGQHPG]；
[EPGQHPGQ]；[PGQHPGQE]；[GQHPGQEP]；[QHPGQEPG]；
[HPGQEPGQ]；和[PGQEPGQH]；及其任意组合。
在另一个实施方案中，选自组[E、G、P、H和Q]的组C的氨基酸残基由一个或多个以下基序来表示：[GHEPGHHP]；[GHEPGQHP]；和[GQEPGQHP]；及其任意组合。
在第三个实施方案中，组C的氨基酸残基选自一个或多个以下基序：
[GHEPGHHP]；[GHEPGQHP]；[GQEPGQHP]；
[GQAPGAPHGAPHGAPH]；[GQAPGQAPGAPHGAPH]；和/或
[GQAPGQAPGQAPGAPH]；及其任意组合。
在第十七个实施方案中，组D的氨基酸残基由选自组[A、E、G、P、H和Q](即组D1)或选自组[A、E、G、H、P、Q](以随机顺序)(即组D2)的连续氨基酸残基来表示。
在一个实施方案中，选自组[A、E、G、P、H和Q]的组D1的氨基酸残基由一个或多个以下基序来表示：
[GEHPGAPHGQEPGQAP]；[EHPGAPHGQEPGQAPG]；
[HPGAPHGQEPGQAPGE]；[PGAPHGQEPGQAPGEH]；
[GAPHGQEPGQAPGEHP]；[APHGQEPGQAPGEHPG]；
[PHGQEPGQAPGEHPGA]；[HGQEPGQAPGEHPGAP]；
[GQEPGQAPGEHPGAPH]；[QEPGQAPGEHPGAPHG]；
[EPGQAPGEHPGAPHGQ]；[PGQAPGEHPGAPHGQE]；
[GQAPGEHPGAPHGQEP]；[QAPGEHPGAPHGQEPG]；
[APGEHPGAPHGQEPGQ]；[PGEHPGAPHGQEPGQA]；
[GQAPGQAPGAPHGAPH]；[QAPGQAPGAPHGAPHG]；
[APGQAPGAPHGAPHGQ]；[PGQAPGAPHGAPHGQA]；
[GQAPGAPHGAPHGQAP]；[QAPGAPHGAPHGQAPG]；
[APGAPHGAPHGQAPGQ]；[PGAPHGAPHGQAPGQA]；
[GAPHGAPHGQAPGQAP]；[APHGAPHGQAPGQAPG]；
[PHGAPHGQAPGQAPGA]；[HGAPHGQAPGQAPGAP]；
[GAPHGQAPGQAPGAPH]；[APHGQAPGQAPGAPHG]；
[PHGQAPGQAPGAPHGA]；[HGQAPGQAPGAPHGAP]；
[GQAPGQAPGQAPGAPH]；[QAPGQAPGQAPGAPHG]；
[APGQAPGQAPGAPHGQ]；[PGQAPGQAPGAPHGQA]；
[GQAPGQAPGAPHGQAP]；[QAPGQAPGAPHGQAPG]；
[APGQAPGAPHGQAPGQ]；[PGQAPGAPHGQAPGQA]；
[GQAPGAPHGQAPGQAP]；[QAPGAPHGQAPGQAPG]；
[APGAPHGQAPGQAPGQ]；[PGAPHGQAPGQAPGQA]；
[GAPHGQAPGQAPGQAP]；[APHGQAPGQAPGQAPG]；
[PHGQAPGQAPGQAPGA]；[HGQAPGQAPGQAPGAP]；
[GQEPGAPHGAPHGAPH]；[QEPGAPHGAPHGAPHG]；
[EPGAPHGAPHGAPHGQ]；[PGAPHGAPHGAPHGQE]；
[GAPHGAPHGAPHGQEP]；[APHGAPHGAPHGQEPG]；
[PHGAPHGAPHGQEPGA]；[HGAPHGAPHGQEPGAP]；
[GAPHGAPHGQEPGAPH]；[APHGAPHGQEPGAPHG]；
[PHGAPHGQEPGAPHGA]；[HGAPHGQEPGAPHGAP]；
[GAPHGQEPGAPHGAPH]；[APHGQEPGAPHGAPHG]；
[PHGQEPGAPHGAPHGA]；[HGQEPGAPHGAPHGAP]；
[GQEPGQEPGAPHGAPH]；[QEPGQEPGAPHGAPHG]；
[EPGQEPGAPHGAPHGQ]；[PGQEPGAPHGAPHGQE]；
[GQEPGAPHGAPHGQEP]；[QEPGAPHGAPHGQEPG]；
[EPGAPHGAPHGQEPGQ]；[PGAPHGAPHGQEPGQE]；
[GAPHGAPHGQEPGQEP]；[APHGAPHGQEPGQEPG]；
[PHGAPHGQEPGQEPGA]；[HGAPHGQEPGQEPGAP]；
[GAPHGQEPGQEPGAPH]；[APHGQEPGQEPGAPHG]；
[PHGQEPGQEPGAPHGA]；[HGQEPGQEPGAPHGAP]；
[GQEPGQEPGQEPGAPH]；[QEPGQEPGQEPGAPHG]；
[EPGQEPGQEPGAPHGQ]；[PGQEPGQEPGAPHGQE]；
[GQEPGQEPGAPHGQEP]；[QEPGQEPGAPHGQEPG]；
[EPGQEPGAPHGQEPGQ]；[PGQEPGAPHGQEPGQE]；
[GQEPGAPHGQEPGQEP]；[QEPGAPHGQEPGQEPG]；
[EPGAPHGQEPGQEPGQ]；[PGAPHGQEPGQEPGQE]；
[GAPHGQEPGQEPGQEP]；[APHGQEPGQEPGQEPG]；
[PHGQEPGQEPGQEPGA]；和[HGQEPGQEPGQEPGAP]；及其任意组合。
在另一个实施方案中，选自组[A、E、G、P、H和Q]的组D1的氨基酸残基由一个或多个以下基序来表示：[GEHPGAPHGQEPGQAP]；[GQAPGAPHGAPHGAPH]；[GQAPGQAPGAPHGAPH]；[GQAPGQAPGQAPGAPH]；[GQEPGAPHGAPHGAPH]；[GQEPGQEPGAPHGAPH]；和[GQEPGQEPGQEPGAPH]；及其任意组合。
在另一个实施方案中，组D的氨基酸残基选自一个或多个以下基序：[GEHPGAPHGQEPGQAP]；[GQEPGAPHGAPHGAPH]；[GQEPGQEPGAPHGAPH]；和[GQEPGQEPGQEPGAPH]；及其任意组合。
在第十八个实施方案中，本发明的寡聚体延伸的胰岛素或胰岛素类似物延伸出：
组A的基序，其选自[GEH]；[GQA]；[GQE]；[GHE]；[GEQ]；[GAQ]；和[GQP]；和/或其任意组合；和/或
组B的基序，其选自[GAPH]；[GAPQ]；[GEHP]；[GEPH]；[GEQH]；[GHEP]；[GHHP]；[PQAG]；[GQAP]；[GQEP]；[GQHP]；[GQPE]；[GEQP]；[GEPQ]；[GPEQ]；[GPQE]；[GQPA]；[GAQP]；[GPAQ]；[GPQA]；[GHPE]；[GPEH]；[GPHE]；[GQEH]；[GQHE]；[GEHQ]；[GHEQ]；和[GHQE]；和/或其任意组合；和/或
组C的基序，其选自[GHEP-GHHP]；[GHEP-GQHP]；和[GQEP-GQHP]；和/或其任意组合；和/或
组D的基序，其选自[GEHP-GAPH-GQEP-GQAP]；[GQAP-GAPH-GAPH-GAPH]；[GQAP-GQAP-GAPH-GAPH]；[GQAP-GQAP-GQAP-GAPH]；[GQEP-GAPH-GAPH-GAPH]；[GQEP-GQEP-GAPH-GAPH]；和[GQEP-GQEP-GQEP-GAPH]；和/或其任意组合；和/或
组A、B、C和D的基序的任意组合；
该基序可以根据需要重复，以便获得所需长度和大小的延伸体。
在第十九个实施方案中，本发明的寡聚体延伸的胰岛素或胰岛素类似物延伸出：
组A的基序，其选自[GAQ]；[GEH]；[GEQ]；[GQA]；[GQE]；和[GQP]；和/或其任意组合；和/或
组B的基序，其选自[GAPH]；[GAPQ]；[GAQP]；[GEHP]；[GEPH]；[GEPQ]；[GEQH]；[GEQP]；[GHEP]；[GHEQ]；[GHPE]；[GHQE]；[GPAQ]；[GPEH]；[GPEQ]；[GPHE]；[GPQA]；[GPQE]；[GQAP]；[GQEH]；[GQEP]；[GQHE]；[GQPA]；和[GQPE]；和/或其任意组合；和/或
组C的基序，其选自[GHEPGQHP]；[GQEPGQHP]；[GQAPGQAPGQAPGAPH]；和[GQAPGQAPGAPHGAPH]；和/或其任意组合；和/或
组D的基序，其选自[GEHPGAPHGQEPGQAP]；[GQEPGQEPGQEPGAPH]；[GQEPGQEPGAPHGAPH]；和[A，E，G，P，H，Q]，和/或其任意组合。
所述胰岛素或胰岛素类似物可以延伸出以上提出的一个或多个氨基酸残基，并且所讨论的重复不必开始于Gly(G)。
所述胰岛素或胰岛素类似物可以延伸出以上提出的一个或多个氨基酸残基，并且所讨论的重复可以开始于来自该重复中的任何氨基酸(例如，具有GAPH重复的延伸的胰岛素类似物可以开始于APH、PH或H，接着是GAPH的重复)。
在第二十个实施方案中，本发明的寡聚体延伸的胰岛素或胰岛素类似物在其延伸体中包含约100个至约800个连续氨基酸残基。
在一个实施方案中，本发明的寡聚体延伸的胰岛素或胰岛素类似物包含至少约100个连续氨基酸残基。
在另一个实施方案中，本发明的寡聚体延伸的胰岛素或胰岛素类似物包含少于约800个连续氨基酸残基。
在第三个实施方案中，本发明的寡聚体延伸的胰岛素或胰岛素类似物包含约100个至约700个连续氨基酸残基。
在第四个实施方案中，本发明的寡聚体延伸的胰岛素或胰岛素类似物包含约100个至约600个连续氨基酸残基。
在第五个实施方案中，本发明的寡聚体延伸的胰岛素或胰岛素类似物包含约100个至约500个连续氨基酸残基。
在第六个实施方案中，本发明的寡聚体延伸的胰岛素或胰岛素类似物包含约100个至约400个连续氨基酸残基。
在第七个实施方案中，本发明的寡聚体延伸的胰岛素或胰岛素类似物包含约100个至约300个连续氨基酸残基。
在第八个实施方案中，本发明的寡聚体延伸的胰岛素或胰岛素类似物包含约150个至约300个连续氨基酸残基。
在第九个实施方案中，本发明的寡聚体延伸的胰岛素或胰岛素类似物包含约150个至约250个连续氨基酸残基。
在第十个实施方案中，本发明的寡聚体延伸的胰岛素或胰岛素类似物包含约175个至约225个连续氨基酸残基。
在第十一个实施方案中，本发明的寡聚体延伸的胰岛素或胰岛素类似物包含约185个至约215个连续氨基酸残基。
在第十二个实施方案中，本发明的寡聚体延伸的胰岛素或胰岛素类似物包含约190个至约210个连续氨基酸残基；并且尤其包含124、148、176、196、198、200、201、208、224、248、276、300、400、500或600个连续氨基酸残基。
在第十三个实施方案中，本发明的寡聚体延伸的胰岛素或胰岛素类似物包含约190个至约210个连续氨基酸残基；并且尤其包含200、201、208个连续氨基酸残基。
在第二十一个实施方案中，本发明的寡聚体延伸的胰岛素或胰岛素类似物是通式I的化合物
Ins-Ext (I)
其中：
“Ins”代表如下表1中所鉴定的人胰岛素类似物；并且
“Ext”表示如下表1中所述的延伸体。
表1
*表示延伸点
**表示延伸体中的氨基酸残基的数目
***按指定的顺序(除非另有说明)
在第二十二个实施方案中，本发明的寡聚体延伸的胰岛素或胰岛素类似物为选自下组的化合物
A21Q(GQEP)50，desB30人胰岛素；
A21Q(GAPQ)50，desB30人胰岛素；
A21Q(GQAP)50，desB30人胰岛素；
A21Q(GEPH)50，desB30人胰岛素；
A21Q(GEHP)50，desB30人胰岛素；
A14E，A21G(GQEP)50，B25H，desB30人胰岛素；
A14E，A21G(GAPQ)50，B25H，desB30人胰岛素；
A14E，A21G(GEPH)50，B25H，desB30人胰岛素；
A14E，A21G(GEHP)50，B25H，desB30人胰岛素；
A14E，A21G(GAPH)50，B25H，desB30人胰岛素；
A21G(GEHPGAPHGQEPGQAP)13，desB30人胰岛素；
A21G(GEH)67，desB30人胰岛素；
A21G(GQA)67，desB30人胰岛素；
A21G(GQE)67，desB30人胰岛素；
A21G(GEQH)50，desB30人胰岛素；
A21G(GQEPGQEPGQEPGAPH)12GQEPGQEP，desB30人胰岛素；
A21G(GQEPGQEPGAPHGAPH)12GQEPGQEP，desB30人胰岛素；
A21G(GQAPGQAPGQAPGAPH)12GQAPGQAP，desB30人胰岛素；
A21G(GQAPGQAPGAPHGAPH)12GQAPGQAP，desB30人胰岛素；
A21G[A，E，G，H，P，Q](随机的200个氨基酸)，desB30人胰岛素；
A21G(GHEPGQHP)25，desB30人胰岛素；
A21G(GQEPGQHP)25，desB30人胰岛素；
A21G(GQPE)50，desB30人胰岛素；
A21G(GEQP)50，desB30人胰岛素；
A21G(GEPQ)50，desB30人胰岛素；
A21G(GPEQ)50，desB30人胰岛素；
A21G(GPQE)50，desB30人胰岛素；
A21G(GQPA)50，desB30人胰岛素；
A21G(GAQP)50，desB30人胰岛素；
A21G(GPAQ)50，desB30人胰岛素；
A21G(GPQA)50，desB30人胰岛素；
A21G(GHEP)50，desB30人胰岛素；
A21G(GHPE)50，desB30人胰岛素；
A21G(GPEH)50，desB30人胰岛素；
A21G(GPHE)50，desB30人胰岛素；
A21G(GQEH)50，desB30人胰岛素；
A21G(GQHE)50，desB30人胰岛素；
A21G(GHEQ)50，desB30人胰岛素；
A21G(GHQE)50，desB30人胰岛素；
A21G(GEQ)67，desB30人胰岛素；
A21G(GAQ)67，desB30人胰岛素；
A21G(GQAP)62，desB30人胰岛素；
A21G(GQAP)75，desB30人胰岛素；
A21G(GQAP)100，desB30人胰岛素；
A21G(GQAP)50，desB30人胰岛素；
A21G(GQAP)125，desB30人胰岛素；
A21G(GQAP)150，desB30人胰岛素；
A14E，A21G(GQAP)50，B25H，desB30人胰岛素；
A14E，A21G(GQAP)75，B25H，desB30人胰岛素；
A14E，A21G(GQAP)150，B25H，desB30人胰岛素；
A21G，B1F(GQAP)50，desB30人胰岛素；
A21G，B1F(GQAP)100，desB30人胰岛素；
A21G，A22A，A23P，A24Q(GAPQ)49，desB30人胰岛素；
A21G，A22A，A23Q，A24P(GAQP)49，desB30人胰岛素；
A21G，A22Q，A23A，A24P(GQAP)49，desB30人胰岛素；
A21G，A22Q，A23P，A24A(GQPA)49，desB30人胰岛素；
A21G，A22P，A23A，A24Q(GPAQ)49，desB30人胰岛素；
A21G，A22P，A23Q，A24A(GPQA)49，desB30人胰岛素；
A21G(GQAP)56，desB30人胰岛素；
A21G(GQAP)69，desB30人胰岛素；
A21G(GQAP)31，desB30人胰岛素；
A21G(GQAP)37，desB30人胰岛素；
A21G(GQAP)44，desB30人胰岛素；
A21G，A22Q，A23P(GQP)66，desB30人胰岛素；
A21G，A22A，A23Q，A24P(GAQP)37，desB30人胰岛素；和
A21G，A22A，A23Q，A24P(GAQP)62，desB30人胰岛素。
本文所述的两个或更多个实施方案的任意组合都被认为在本发明的范围内。
寡聚体延伸的胰岛素类似物的命名
在本发明的语境中，所述寡聚体延伸的胰岛素类似物通过说明氨基酸缺失、置换、插入和延伸相对于人胰岛素来命名，同样也由以上通式I所说明。
以这种方式，例如实施例2的化合物表示人胰岛素的类似物(A21Q*，desB30)，其中位于A链的位置21的天然存在的氨基酸残基已经被谷氨酰胺(Q)所替代，并且其中位于位置B30的天然存在的氨基酸残基已经缺失，并且该类似物已经在星号标记的位置(*)处延伸出由四种氨基酸残基(GAPQ，按指定的顺序)的重复组成的延伸体，以构成由总共200个氨基酸残基组成的延伸体(其也可以被称为(GAPQ)50)。
该类似物也可以被称为A21Q(GAPQ)50，desB30人胰岛素，并且该化合物在图8中示出。
制备方法
本发明的寡聚体延伸的胰岛素或胰岛素类生物可以通过用于制备胰岛素、胰岛素类似物和胰岛素衍生物的常规方法，特别是工作实施例中描述的方法而获得。
简言之，编码胰岛素的DNA与编码重组延伸体的DNA融合。将该DNA转染至酵母中，并且表达并收获延伸的胰岛素。该延伸的胰岛素表达为单链前体蛋白质，该前体蛋白质随后被切割以获得成熟、双链(A链和B链)的延伸胰岛素。
生物活性
在另一方面，本发明提供了用作药物或用于制备药物或药物组合物的新型寡聚体延伸的胰岛素或胰岛素类似物。
在进一步的方面，本发明涉及本发明的寡聚体延伸的胰岛素或胰岛素类似物的医学用途，尤其涉及这类产物在治疗、预防或减轻与糖尿病、1型糖尿病、2型糖尿病、葡萄糖耐量减低、高血糖、血脂异常、肥胖症、代谢综合征(代谢综合征X、胰岛素抵抗综合征)、高血压、认知障碍、动脉粥样硬化、心肌梗死、中风、心血管疾病、冠心病、炎性肠综合征、消化不良或胃溃疡有关的疾病、病症或状况中的用途，该方法包括向有需要的受试者施用治疗有效量的本发明的胰岛素衍生物。
在另一个实施方案中，本发明涉及这类产物在治疗、预防或减轻与糖尿病、1型糖尿病、2型糖尿病或葡萄糖耐量减低有关的疾病、病症或状况中的用途，该方法包括向有需要的受试者施用治疗有效量的本发明的胰岛素衍生物。
在第三个实施方案中，本发明涉及这类产物在治疗、预防或减轻与糖尿病有关，特别是与1型糖尿病或2型糖尿病有关的疾病、病症或状况中的用途。
药物组合物
本发明涉及可用作药物，或可用于制备药物组合物/药物，特别是可用于治疗、预防或减轻代谢性疾病或病症或状况的寡聚体延伸的胰岛素或胰岛素类似物。
因此，在另一方面，本发明提供了新型药物组合物，其包含治疗有效量的根据本发明的寡聚体延伸的胰岛素或胰岛素类似物，任选地伴有一种或多种佐剂、赋形剂、载体和/或稀释剂。
可注射组合物可以通过使用常规技术来制备，该常规技术通常包括视情况溶解并混合所述成分以得到所需的最终产物，根据需要添加等渗剂、防腐剂和/或缓冲液，并且例如根据需要使用酸如盐酸或碱如氢氧化钠水溶液来调节该溶液的pH值。最后，可以用水调节该溶液的体积以得到所需浓度的成分。
在一个实施方案中，溶液或悬浮液通过将本发明的寡聚体延伸的胰岛素或胰岛素类似物在微酸性条件下溶于水性介质中来制备，例如，以约240至约2400μmol/L的范围内的浓度。例如使用氯化钠或甘油将所述水性介质制成等渗的。此外，所述水性介质可以含有缓冲液如乙酸盐或柠檬酸盐，防腐剂如间甲酚或苯酚，以及锌离子，例如每6个胰岛素2至5个Zn++，或每单位胰岛素活性至多约20μg Zn++的浓度。为了避免可能的沉淀，可以将溶液的pH值调节至中性，而非过于接近所讨论的化合物的等电点。最终的胰岛素制剂的pH值取决于锌离子的浓度和本发明化合物的浓度。例如通过过滤除菌将所述胰岛素制剂制成无菌的。
治疗方法
本发明涉及用于治疗用途的药物。更具体地，本发明涉及本发明的寡聚体延伸的胰岛素或胰岛素类似物在治疗或预防与糖尿病有关的医学状况中的用途。
因此，在另一个方面，本发明提供了用于治疗或减轻包括人在内的活动物体的疾病或病症或状况的方法，该疾病、病症或状况可以选自与糖尿病、1型糖尿病、2型糖尿病、葡萄糖耐量减低、高血糖、血脂异常、肥胖症、代谢综合征(代谢综合征X、胰岛素抵抗综合征)、高血压、认知障碍、动脉粥样硬化、心肌梗死、中风、心血管疾病、冠心病、炎性肠综合征、消化不良或胃溃疡有关的疾病、病症或状况，该方法包括向有需要的受试者施用治疗有效量的本发明的寡聚体延伸的胰岛素或胰岛素类似物的步骤。
在另一个实施方案中，本发明提供了用于治疗或减轻包括人在内的活动物体的疾病或病症或状况的方法，该疾病、病症或状况可以选自与糖尿病、1型糖尿病、2型糖尿病、葡萄糖耐量减低、高血糖、血脂异常、肥胖症、代谢综合征(代谢综合征X、胰岛素抵抗综合征)、高血压、认知障碍、动脉粥样硬化、心肌梗死、中风、心血管疾病、冠心病、炎性肠综合征、消化不良或胃溃疡有关的疾病、病症或状况，该方法包括向有需要的受试者施用治疗有效量的本发明的寡聚体延伸的胰岛素或胰岛素类似物。
在第三个实施方案中，本发明提供了用于治疗或减轻包括人在内的活动物体的疾病或病症或状况的方法，该疾病、病症或状况可以选自与糖尿病、1型糖尿病、2型糖尿病、葡萄糖耐量减低、高血糖、血脂异常、肥胖症或代谢综合征(代谢综合征X、胰岛素抵抗综合征)有关的疾病、病症或状况。
在第四个实施方案中，本发明提供了用于治疗或减轻包括人在内的活动物体的疾病或病症或状况的方法，该疾病、病症或状况可以选自与糖尿病有关，特别是与1型糖尿病或2型糖尿病有关的疾病、病症或状况。
附图说明
通过参考附图来进一步阐明本发明的示例性实施方案，在附图中：
图1分别示出了(皮下)施用实施例2和5化合物后的血浆胰岛素浓度(pM)曲线；
图2分别示出了(皮下)施用实施例2和5化合物后的血浆葡萄糖浓度(mM)曲线；
图3示出了通过反相LC/MS所分析的，上清液中含有GEPS重复的类似物的解卷积质谱实例。该化合物的预期分子量为43963.76Da，其为主要质量。另外的质量之一是另外四个162Da，其等于四个己糖部分；
图4示出了使用反相LC色谱法对含有GEPS重复的纯化类似物的UV纯度分析。所见到的主要杂质已经被确定为糖基化产物。由于来自主峰的低分辨率，其在纯化过程中未除去；
图5示出了通过反相LC/MS所分析的，上清液中含有GQEP重复的类似物前体的解卷积质谱实例。该化合物的预期分子量为27602.75Da，其为主要质量。另外的主要质量等于峰值质量的一半，并且是用于解卷积该质谱的算法的伪迹(artefact)；
图6示出了通过反相LC/MS所分析的，上清液中含有GEHP重复的类似物前体的解卷积质谱实例。该化合物的预期分子量为28053.27Da，其为主要质量。另外的主要质量等于峰值质量的一半，并且是用于解卷积该质谱的算法的伪迹；且
图7示出了实施例23化合物(A21G[A，E，G，H，P，Q](随机顺序的200个氨基酸残基)，desB30人胰岛素)的延伸体的氨基酸序列；
图8示出了实施例2化合物的结构(序列)；且
图9示出了实施例2化合物的前体的结构(序列)。
实施例
参照以下实施例进一步说明本发明，这些实施例绝非意在限制所请求保护的本发明的范围。
实施例1-52
表达和纯化方法
表达
根据本发明使用的胰岛素类似物是通过采用公知的技术(例如，如US 6500645中所公开的)在合适的宿主细胞中表达编码所讨论的胰岛素类似物的DNA序列而重组产生的。该胰岛素类似物或者直接表达或者表达为可以在B链上具有另外的N-末端延伸体(为例如EEAEAEAPK的形式)和/或在B链与A链之间具有连接肽(C-肽，为例如DMK的形式)的前体分子。通过合适的蛋白酶，例如水解无色杆菌(Achromobactor lyticus)蛋白酶(ALP)或胰蛋白酶，在体外切掉该N-末端延伸体和C-肽，并将因此分别具有紧挨着B1、B29和A1位置的切割位点。适合根据本发明使用的类型的N-末端延伸体和C-肽在例如US 5395922、EP765395、WO 9828429和WO 2014/195452中公开。
编码根据本发明使用的胰岛素类似物前体的多核苷酸序列通过确立的方法经合成制备，所述方法例如是Beaucage等人(1981)Tetrahedron Letters 22 1859-1869描述的亚磷酰胺法，或Matthes等人(1984)EMBO Journal 3 801-805描述的方法。根据该亚磷酰胺法，在例如自动化DNA合成仪中合成寡核苷酸，纯化，双链化，并连接，以形成合成的DNA构建体。当前优选的制备DNA构建体的方式是通过聚合酶链反应(PCR)来进行。
重组方法通常采用能够在选定的微生物或宿主细胞中复制并携带编码根据本发明使用的胰岛素类似物前体的多核苷酸序列的载体。该重组载体可以是自主复制的载体，即作为染色体外实体存在的载体，其复制独立于染色体复制，例如，质粒、染色体外元件、微型染色体或人工染色体。该载体可以含有用于确保自我复制的任何元件(means)。或者，该载体可以是这样的载体，当其被引入到宿主细胞中时，其被整合到基因组中并与其所整合至的染色体一起复制。此外，可以使用单个载体或质粒，或一起包含待引入至宿主细胞基因组中的总DNA的两个或更多个载体或质粒，或转座子。该载体可以是线性或闭合环状质粒，并将优选地含有允许该载体稳定整合至宿主细胞基因组中或允许该载体在该细胞中独立于基因组而自主复制的元件。
所述重组表达载体可以是能够在酵母中复制的载体。使得载体能够在酵母中复制的序列的实例是酵母质粒2μm复制基因REP 1-3和复制起点。
所述载体可以含有一个或多个选择性标记，该选择性标记允许容易地选择经转化的细胞。选择性标记是这样一种基因，其产物提供杀生物剂或病毒抗性、对重金属的抗性、原养型至营养缺陷型等。细菌选择性标记的实例是来自枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)或地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)的dal基因，或者赋予抗生素抗性如氨苄青霉素抗性、卡那霉素抗性、氯霉素抗性或四环素抗性的标记。用于丝状真菌宿主细胞的选择性标记包括amdS(乙酰胺酶)、argB(鸟氨酸氨甲酰基转移酶)、pyrG(乳清苷-5′-磷酸脱羧酶)和trpC(邻氨基苯甲酸合酶)。用于酵母宿主细胞的合适的标记是ADE2、HIS3、LEU2、LYS2、MET3、TRP1和URA3。用于酵母的非常合适的选择性标记是粟酒裂殖酵母(Schizosaccharomyces pompe)TPI基因(Russell(1985)Gene 40125-130)。
在所述载体中，多核苷酸序列与合适的启动子序列可操作地连接。该启动子可以是在选定的宿主细胞中显示出转录活性的任何核酸序列，包括突变的、截短的和杂合的启动子，并且可以从编码与宿主细胞同源或异源的细胞外或细胞内多肽的基因获得。
在酵母宿主中，有用的启动子的实例是酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)Ma1、TPI、ADH、TDH3或PGK启动子。
编码根据本发明使用的胰岛素肽骨架的多核苷酸序列通常还将与合适的终止子可操作地连接。在酵母中，合适的终止子为TPI终止子(Alber等人(1982)J.Mol.Appl.Genet.1419-434)。
用于将编码根据本发明使用的胰岛素类似物的多核苷酸序列分别与启动子和终止子组合，并将它们插入到含有在选定宿主中复制所需的信息的适当载体中的程序是本领域技术人员公知的。应当理解，载体可以如下构建：首先制备含有编码根据本发明使用的胰岛素骨架的完整DNA序列的DNA构建体，随后将该片段插入到合适的表达载体中，或者顺序插入含有各个元件(如信号肽和前肽(B链的N-末端延伸体)、C-肽、A链和B链)的遗传信息的DNA片段，随后连接。
将包含编码根据本发明使用的胰岛素类似物的多核苷酸序列的载体引入到宿主细胞中，使得该载体保持为染色体组成部分或自我复制的染色体外载体。术语“宿主细胞”包括由于在复制过程中发生的突变而与亲本细胞不相同的亲本细胞的任何后代。
所述宿主细胞尤其可以是酵母细胞。该酵母生物体可以是在培养时向培养基中分泌胰岛素肽骨架或其前体的任何合适的酵母生物体。合适的酵母生物体的实例包括选自酿酒酵母、克鲁弗酵母(Saccharomyces kluyveri)、粟酒裂殖酵母(Schizosaccharomycespombe)、葡萄汁酵母(Sacchoromyces uvarum)、乳酸克鲁维酵母(Kluyveromyces lactis)、多形汉逊酵母(Hansenula polymorpha)、巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)、甲醇毕赤酵母(Pichia methanolica)、克鲁弗毕赤酵母(Pichia kluyveri)、解脂耶氏酵母(Yarrowialipolytica)、假丝酵母属的种(Candida sp.)、产朊假丝酵母(Candida utilis)、可可假丝酵母(Candida cacaoi)、地霉属的种(Geotrichum sp.)和发酵地霉(Geotrichumfermentans)的菌株。
例如，可以通过原生质体形成，随后采用已知方法进行转化，来实现酵母细胞的转化。用于培养细胞的培养基可以是适于使酵母生物体生长的任何常规培养基。
纯化
可以通过常规程序从培养基中回收分泌的胰岛素类似物或其前体，这些程序包括通过离心、通过过滤或通过在离子交换基质或反相吸附基质上捕获或吸附胰岛素类似物或其前体来从培养基中分离酵母细胞，通过过滤或借助于盐例如硫酸铵使上清液的蛋白质组分沉淀，随后通过多种色谱程序例如离子交换色谱法、亲和色谱法等进行纯化。
本发明的胰岛素肽骨架的纯化和消化如下进行：
通过阳离子交换将可能含有B链的N-末端延伸体和在B链与A链之间的修饰C肽的单链胰岛素类似物前体从酵母培养上清液中纯化并浓缩(Kjeldsen等人(1998)Prot.Expr.Pur.14 309-316)
通过用赖氨酸特异性固定化水解无色杆菌(Achromobactor lyticus)蛋白酶(ALP)(Kristensen等人(1997)J.Biol.Chem.20 12978-12983)消化，或利用胰蛋白酶切掉B链的N-末端延伸体(如果存在的话)以及C-肽，使所述单链胰岛素类似物前体熟化成双链胰岛素肽骨架。
胰蛋白酶消化
将来自阳离子交换色谱步骤的、含有胰岛素类似物前体的洗脱物用水稀释至乙醇浓度为15-20％。添加甘氨酸至50mM的浓度，并用NaOH将pH调节至9.0-9.5。以1∶300(w∶w)的比例添加胰蛋白酶，并使消化在4摄氏度下进行。每20分钟通过分析监测该消化，直到消化完成。通过以3∶100(v∶v)的比例添加1M柠檬酸来终止消化。对于一些类似物，可能需要调节胰蛋白酶的准确量。
在采用C18柱的Waters Acquity Ultra-Performance Liquid Chromatography系统上，通过分析型液相色谱法(LC)来分析该消化反应，并通过MALDI-TOF质谱法(MS)(Bruker Daltonics Autoflex II TOF/TOF或UltrafleXtreme)确认分子量。
采用乙腈梯度，在C18柱上通过反相HPLC(Waters 600系统)纯化所述双链胰岛素类似物。随后通过冻干法回收所需的胰岛素类似物。
例如在采用C18柱的Waters Acquity Ultra-Performance LiquidChromatography系统上，通过分析型HPLC来确定产物的纯度，并通过MALDI-TOF MS或LC-MS(Orbitrap、Thermo Scientific或G2S Synapt、Waters A/S)确认分子量。
ALP消化
通过用赖氨酸特异性固定化水解无色杆菌蛋白酶消化(ALP；Kristensen等人(1997)，J.Biol.Chem.20，12978-12983)消化，使所述单链胰岛素前体熟化成双链胰岛素。
将来自阳离子交换色谱步骤的、含有胰岛素前体的洗脱物用水稀释至乙醇浓度为15-20％。添加谷氨酸钠至15mM的浓度，并且用NaOH将pH调节至9.7。以1∶100(v∶v)的比例添加固定化的ALP，并且使消化在室温及温和搅拌下进行过夜。
在采用C4柱的Waters Acquity Ultra-Performance Liquid Chromatography系统上，通过分析型LC来分析该消化反应，并通过基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱法(Bruker Daltonics Autoflex II TOF/TOF)确认分子量。通过用0.2μm过滤器过滤除去固定化的ALP。
采用乙腈梯度，在C18柱上通过反相HPLC(Waters 600系统)纯化所述双链胰岛素分子。通过冻干法回收所需的胰岛素或胰岛素类似物。
在采用C4柱的Waters Acquity Ultra-Performance Liquid Chromatography系统上，通过分析型LC来确定纯度，并通过基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱法确认分子量。
LC-MS测定
利用在耦接至质谱仪(Synapt G2，Waters A/S)的Waters Acquity Ultra-Performance Liquid Chromatography系统上的分析型HPLC，通过质谱法验证上清液中类似物前体的身份。使用MassLynx(Waters A/S)中的MaxEnt1解卷积算法来计算平均分子量。
用于HPLC分析的参数如下：柱：Waters ACQUITY BEH300C4 1.7μm，柱温：40℃，溶剂：A：0.1％FA，B：在MeCN中的0.1％FA。
该测定的结果呈现于以下表3中。
表2
梯度
胰岛素受体亲和力的测定
本发明的胰岛素类似物对人胰岛素受体(IR)的相对结合亲和力通过闪烁迫近测定法(SPA)(根据GlendorfT等人(2008)Biochemistry 474743-4751)中的竞争结合来确定。
简言之，在96孔Optiplates(Perkin-Elmer Life Sciences)中进行人胰岛素标准品和待测胰岛素类似物的系列稀释，随后添加[125I-A14Y]-人胰岛素、抗IR小鼠抗体83-7、溶解的人IR-A(通过麦胚凝集素色谱法从过表达IR-A全受体(holoreceptor)的幼仓鼠肾(BHK)细胞中半纯化的)以及在由100mM HEPES(pH 7.8)、100mM NaCl、10mM MgSO4和0.025％(v/v)吐温20组成的结合缓冲液中的闪烁迫近测定(SPA)珠子(抗小鼠聚乙烯基甲苯SPA珠子，GE Healthcare)。在22℃轻柔摇动下将板温育22-24h，以2000rpm离心2分钟，并在TopCount NXT(Perkin-Elmer Life Sciences)上进行计数。
根据四参数logistic模型( A(1978)Biometrics 34 357-365)分析来自SPA的数据，并且相对于在相同板内测量的人胰岛素标准品的结合亲和力，计算所述类似物的结合亲和力。
该测定的结果呈现于以下表3中。
该实施例证实了本发明的代表性化合物确实靶向人胰岛素受体。
代谢能力测定
为了研究类似物在体外产生反应的能力，根据已知的技术(Moody A.J.等人(1974)Metab.Res.6 12-16和Rodbell M(1964)J.Biol.Chem.239 375-365)，通过脂肪生成来确定所选择的类似物(其中检测它们的代谢能力，rFFC)。
原代大鼠脂肪细胞从附睾脂肪垫中分离，并与3H-葡萄糖一起在含有1％无脂肪HSA和标准品(HI)或配体的缓冲液中温育。标记的葡萄糖以剂量依赖性方式转化为可提取的脂质，得到两种配体的完全剂量响应曲线。根据四参数logistic模型分析数据，并相对于人胰岛素标准品来表示亲和力。结果表示为与标准品相比的配体的相对能力。
表3
胰岛素受体亲和力和质谱LC-MS数据
在天然大小排阻色谱法中的大小测定
通过天然大小排阻色谱法评估不同氨基酸重复对大的流体动力学体积的影响。使用的溶剂为：140mM NaCl，10mM Tris-HCl，5％(v/v)异丙醇，pH 7.3；柱：Waters AcquityUPLC BEH450SEC，4.6X150mm，2.5μM。
该方法在37℃下以0.3ml/min的流速运行，并在280nm的波长下测量。所选择的类似物在200μM溶液中进行分析。为了将洗脱保留时间转化为蛋白质的相应质量(在此称为SEC大小)，使用用于大小计算的标准品：BEH450SEC蛋白质标准品混合物(P/N18600842)
在GraphPad prism中使用该标准品中的各种蛋白质的保留时间和大小进行非线性拟合(Y＝Y0*exp(k*X))。找到常数Y0和k，并且通过在方程中插入主峰的保留时间(X)来计算SEC大小(Y)。
表4
SEC大小
发现人胰岛素在该系统中呈单体和二聚体之间的平衡，所以对于这些构建体可能也是这样。所述SEC大小是预期单体大小的5-10倍以上。所述SEC大小受到氨基酸组成的影响，并且也受到基序中氨基酸顺序的影响。
实施例53
平均停留时间的测定和对血糖的影响
犬平均停留时间
研究了向比格犬单次皮下施用4nmol/kg胰岛素类似物后的药代动力学和药效学谱。
将八只比格犬分成两组，每组四只动物，并且平行地给予实施例2化合物或实施例5化合物。
两种类似物的单次皮下给药均在比格犬中良好耐受，没有低血糖的临床体征。
采集血液样品并通过LOCI技术进行分析。血浆胰岛素浓度曲线在图1和图2中示出。计算的平均停留时间(平均值±SD)在以下表5中示出。
大鼠平均停留时间
研究了向雄性Sprague-Dawley大鼠单次皮下施用20nmol/kg胰岛素类似物后的药代动力学谱。
通过使用针头和注射器，以1ml/kg的剂量体积，向未禁食的大鼠颈部皮下施用20nmol/kg胰岛素。在实验期间大鼠是清醒的，并在给药后第一个8小时期间自由饮水但不给予食物。给药后48小时内定期采集血液样品以供胰岛素分析，同时测量血糖直至给药后8小时。通过LOCI技术分析血液样品。计算的平均停留时间(平均值±SD)在以下表5中示出。
本实施例证实了本发明的代表性化合物不但靶向人胰岛素受体，而且能够有效地降低血糖，如图1和图2所示。
表5
平均停留时间
实施例54
糖基化的测定
延伸的胰岛素类似物以单一质量分布出现在MS中。如果丝氨酸残基存在于延伸序列中，如GEPS重复的实例，则观察到糖基化(参见图3)。该序列中的多个负电荷将糖部分的数目减少至主要包含至多4个糖残基，而负电荷的缺乏则导致多个糖部分的糖基化。
具有GEPS重复延伸体的类似物的糖基化的量位于10％至30％的范围内，这取决于丝氨酸残基的数目，例如延伸序列的长度(参见图4)。由于反相的低分辨率，所以在纯化过程中难以去除该糖基化。
如对于含有G、E、A、H、Q和P的类似物所见，从序列中去除丝氨酸残基导致非糖基化的延伸(参见图5和图6)。
实施例55
粘度的测定
该实施例为一个比较例，其显示了与现有技术的代表性寡聚体延伸的胰岛素类似物(即通式I的化合物A)的粘度相比，本发明的代表性寡聚体延伸的胰岛素类似物(即实施例1-5的化合物)的粘度测定结果，其中，“Ins”代表[A21Q*，desB30]；*表示延伸点；“Ext”代表延伸体”GEPS”；并且在该延伸体中氨基酸残基的数目为200。
通过采用DynaPro pRTM(Wyatt technology，Santa Barbara，CA，USA)的动态光散射(DLS)估算粘度。在DLS中，确定了扩散系数，并且采用该系数可以从Stoke-Einstein方程获得流体动力学半径。Stoke-Einstein方程中包含粘度，并且准确测定流体动力学半径需要正确的粘度。通过使用已知大小的分子(聚苯乙烯标准纳米球珠子；直径平均值：147nm)并确定该标准品在寡聚体延伸的胰岛素溶液中的表观大小(随粘度而变化)，可以在给定条件下计算实际粘度。将珠子的表观半径转化为粘度(cP)：(PS珠子的表观半径[nm]/PS珠子的实际半径[nm])x溶剂粘度(例如25℃下0.893cP)。
该测定的结果呈现于以下表6中，并且附图清楚地显示，当与现有技术的代表性化合物相比时，本发明的代表性化合物具有较低的粘度。
表6
在600μM溶液中的粘度
b)10mM磷酸盐缓冲液，pH 7.4，28mM间甲酚，3个Zn2+/6个胰岛素；
c)10mM磷酸盐缓冲液，pH 7.4，58mM苯酚，3个Zn2+/6个胰岛素；以及
d)20mM NaCl，pH 7.4，1.4％甘油，19mM苯酚，19mM间甲酚，4个Zn2+/6个胰岛素。

Claims (15)

1.寡聚体延伸的胰岛素或胰岛素类似物，该胰岛素或胰岛素类似物是包含A链和B链的双链胰岛素分子，并且该胰岛素或胰岛素类似物在所述B链的N-末端处和/或从所述A链的C-末端延伸出仅由选自His(H)、Gln(Q)、Ala(A)、Asp(D)、Glu(E)、Gly(G)、Pro(P)、Ser(S)和Thr(T)的氨基酸残基组成的延伸体；在该延伸体中：
I)选自由His(H)和Gln(Q)组成的组的(两种)氨基酸残基中的一种或两种；该数目的组I的氨基酸残基与以下II组合
II)不超过三倍于该数目的选自由Ala(A)、Asp(D)、Glu(E)、Gly(G)、Pro(P)、Ser(S)和Thr(T)组成的组的氨基酸残基；以得到寡聚体延伸的胰岛素或胰岛素类似物，其具有包含约100个至约800个连续氨基酸残基的延伸体。
2.根据权利要求1所述的寡聚体延伸的胰岛素或胰岛素类似物，其为选自下组的胰岛素类似物
A14E，A21G，B16E，B25H，desB30人胰岛素；
A14E，A21G，B16H，B25H，desB27，desB30人胰岛素；
A14E，A21G，B16H，B25H，desB30人胰岛素；
A14E，A21G，B25H，desB30人胰岛素；
A14E，A21G，desB30人胰岛素；
A14E，A21Q，B16E，B25H，desB30人胰岛素；
A14E，A21Q，B16H，B25H，desB27，desB30人胰岛素；
A14E，A21Q，B16H，B25H，desB30人胰岛素；
A14E，A21G，B25H，desB27，desB30人胰岛素；
A14E，A21Q，B25H，desB27，desB30人胰岛素；
A14E，A21Q，B25H，desB30人胰岛素；
A14E，A21Q，desB30人胰岛素；
A14E，B16E，B25H，desB30人胰岛素；
A14E，B16H，B25H，desB27，desB30人胰岛素；
A14E，B16H，B25H，desB30人胰岛素；
A14E，B25H，desB27，desB30人胰岛素；
A14E，B25H，desB30人胰岛素；
A21G，A22A，A23P，A24Q，desB30人胰岛素；
A21G，A22A，A23Q，A24P，desB30人胰岛素；
A21G，A22G人胰岛素；
A21G，A22K，B29R，desB30人胰岛素；
A21G，A22P，A23A，A24Q，desB30人胰岛素；
A21G，A22P，A23Q，A24A，desB30人胰岛素；
A21G，A22Q，A23A，A24P，desB30人胰岛素；
A21G，A22Q，A23P，A24A，desB30人胰岛素；
A21G，A22Q，A23P，desB30人胰岛素；
A21G，B1F，desB30人胰岛素；
A21G，B3K，B29E人胰岛素；
A21G，desB27，desB30人胰岛素；
A21G，B28D人胰岛素；
A21G，B28D，desB30人胰岛素；
A21G，B28K，B29P人胰岛素；
A21G，desB30人胰岛素；
A21Q，A22G人胰岛素；
A21Q，A22K，B29R，desB30人胰岛素；
A21Q，B3K，B29E人胰岛素；
A21Q，desB27，desB30人胰岛素；
A21Q，B28D人胰岛素；
A21Q，B28D，desB30人胰岛素；
A21Q，B28K，B29P人胰岛素；
A21Q，desB30人胰岛素；
A22K，B29R，desB30人胰岛素；
B3K，B29E人胰岛素；
B28D人胰岛素；
B28D，desB30人胰岛素；
B28K，B29P人胰岛素；或
desB30人胰岛素。
3.根据权利要求1所述的寡聚体延伸的胰岛素或胰岛素类似物，其在所述B链的N-末端处延伸。
4.根据权利要求1所述的寡聚体延伸的胰岛素或胰岛素类似物，其在所述A链的C-末端处延伸。
5.根据权利要求1所述的寡聚体延伸的胰岛素或胰岛素类似物，其在所述B链的N-末端处并且从所述A链的C-末端延伸。
6.根据权利要求1所述的寡聚体延伸的胰岛素或胰岛素类似物，该胰岛素或胰岛素类似物延伸出非重复序列，即随机顺序的序列。
7.根据权利要求1所述的寡聚体延伸的胰岛素或胰岛素类似物，该胰岛素或胰岛素类似物延伸出
A)包含选自组[A、G和H或Q]，或选自组[E、G和H或Q]，或选自组[G、P和H或Q](组A)的氨基酸残基的连续氨基酸残基；或
B)包含选自组[A、G、P和H或Q]，或选自组[E、G、P和H或Q]，或选自组[G、K、P和H或Q]，或选自组[E、G、H和Q](组B)的氨基酸残基的连续氨基酸残基；或
C)包含选自组[A、G、P、H和Q]、或选自组[E、G、P、H和Q](组C)的氨基酸残基的连续氨基酸残基；或
D)包含选自组[A、E、G、P、H和Q]或选自组[E、G、K、P、H和Q](组D)的氨基酸残基的连续氨基酸残基；
和/或组A、B、C和D的任意组合；
该基序或基序组合可以根据需要重复，以获得所需长度和大小的延伸体。
8.根据权利要求1所述的寡聚体延伸的胰岛素或胰岛素类似物，其中所述胰岛素或胰岛素类似物延伸出
组A的基序，其选自[GAQ]；[GEH]；[GEQ]；[GQA]；[GQE]；和[GQP]；和/或其任意组合；和或
组B的基序，其选自[GAPH]；[GAPQ]；[GAQP]；[GEHP]；[GEPH]；[GEPQ]；[GEQH]；[GEQP]；[GHEP]；[GHEQ]；[GHPE]；[GHQE]；[GPAQ]；[GPEH]；[GPEQ]；[GPHE]；[GPQA]；[GPQE]；[GQAP]；[GQEH]；[GQEP]；[GQHE]；[GQPA]；和[GQPE]；和/或其任意组合；和/或
组C的基序，其选自[GHEPGQHP]；[GQEPGQHP]；[GQAPGQAPGQAPGAPH]；和[GQAPGQAPGAPHGAPH]；和/或其任意组合；和/或
组D的基序，其选自[GEHPGAPHGQEPGQAP]；[GQEPGQEPGQEPGAPH]；[GQEPGQEPGAPHGAPH]；和[A，E，G，P，H，Q]；和/或其任意组合。
9.根据权利要求1所述的寡聚体延伸的胰岛素或胰岛素类似物，该延伸在其延伸体中包含约100个至约800个连续氨基酸残基。
10.根据权利要求1所述的寡聚体延伸的胰岛素或胰岛素类似物，其为通式I的化合物
Ins-Ext(I)
其中：
“Ins”代表选自下组的人胰岛素类似物
A14E，A21G*，B25H，desB30；
A21G*，desB30；
A21G，B1F*，desB30；
A21G，A22A，A23P，A24Q*，desB30；
A21G，A22A，A23Q，A24P*，desB30；
A21G，A22P，A23A，A24Q*，desB30；
A21G，A22P，A23Q，A24A*，desB30；
A21G，A22Q，A23A，A24P*，desB30；
A21G，A22Q，A23P，A24A*，desB30；
A21G，A22Q，A23P*，desB30；和
A21Q*，desB30；并且
“Ext”表示由选自下组的基序组成的延伸体
[GAQ]；[GEH]；[GEQ]；[GQA]；[GQE]；[GQP]；[GAPH]；[GAPQ]；[GAQP]；[GEHP]；[GEPH]；[GEPQ]；[GEQH]；[GEQP]；[GHEP]；[GHEQ]；[GHPE]；[GHQE]；[GPAQ]；[GPEH]；[GPEQ]；[GPHE]；[GPQA]；[GPQE]；[GQAP]；[GQEH]；[GQEP]；[GQHE]；[GQPA]；[GQPE]；[GHEPGQHP]；[GQEPGQHP]；[GQAPGQAPGQAPGAPH]；[GQAPGQAPGAPHGAPH]；[GEHPGAPHGQEPGQAP]；[GQEPGQEPGQEPGAPH]；[GQEPGQEPGAPHGAPH]；和[A，E，G，P，H，Q](随机)，
所述基序重复或延伸，以得到寡聚体延伸的胰岛素或胰岛素类似物，其具有包含约100个至约800个连续氨基酸残基的延伸体。
11.根据权利要求1所述的寡聚体延伸的胰岛素或胰岛素类似物，其为
A21Q(GQEP)50，desB30人胰岛素；
A21Q(GAPQ)50，desB30人胰岛素；
A21Q(GQAP)50，desB30人胰岛素；
A21Q(GEPH)50，desB30人胰岛素；
A21Q(GEHP)50，desB30人胰岛素；
A14E，A21G(GQEP)50，B25H，desB30人胰岛素；
A14E，A21G(GAPQ)50，B25H，desB30人胰岛素；
A14E，A21G(GEPH)50，B25H，desB30人胰岛素；
A14E，A21G(GEHP)50，B25H，desB30人胰岛素；
A14E，A21G(GAPH)50，B25H，desB30人胰岛素；
A21G(GEHPGAPHGQEPGQAP)13，desB30人胰岛素；
A21G(GEH)67，desB30人胰岛素；
A21G(GQA)67，desB30人胰岛素；
A21G(GQE)67，desB30人胰岛素；
A21G(GEQH)50，desB30人胰岛素；
A21G(GQEPGQEPGQEPGAPH)12GQEPGQEP，desB30人胰岛素；
A21G(GQEPGQEPGAPHGAPH)12GQEPGQEP，desB30人胰岛素；
A21G(GQAPGQAPGQAPGAPH)12GQAPGQAP，desB30人胰岛素；
A21G(GQAPGQAPGAPHGAPH)12GQAPGQAP，desB30人胰岛素；
A21G[A，E，G，H，P，Q](随机200个氨基酸)，desB30人胰岛素；
A21G(GHEPGQHP)25，desB30人胰岛素；
A21G(GQEPGQHP)25，desB30人胰岛素；
A21G(GQPE)50，desB30人胰岛素；
A21G(GEQP)50，desB30人胰岛素；
A21G(GEPQ)50，desB30人胰岛素；
A21G(GPEQ)50，desB30人胰岛素；
A21G(GPQE)50，desB30人胰岛素；
A21G(GQPA)50，desB30人胰岛素；
A21G(GAQP)50，desB30人胰岛素；
A21G(GPAQ)50，desB30人胰岛素；
A21G(GPQA)50，desB30人胰岛素；
A21G(GHEP)50，desB30人胰岛素；
A21G(GHPE)50，desB30人胰岛素；
A21G(GPEH)50，desB30人胰岛素；
A21G(GPHE)50，desB30人胰岛素；
A21G(GQEH)50，desB30人胰岛素；
A21G(GQHE)50，desB30人胰岛素；
A21G(GHEQ)50，desB30人胰岛素；
A21G(GHQE)50，desB30人胰岛素；
A21G(GEQ)67，desB30人胰岛素；
A21G(GAQ)67，desB30人胰岛素；
A21G(GQAP)62，desB30人胰岛素；
A21G(GQAP)75，desB30人胰岛素；
A21G(GQAP)100，desB30人胰岛素；
A21G(GQAP)50，desB30人胰岛素；
A21G(GQAP)125，desB30人胰岛素；
A21G(GQAP)150，desB30人胰岛素；
A14E，A21G(GQAP)50，B25H，desB30人胰岛素；
A14E，A21G(GQAP)75，B25H，desB30人胰岛素；
A14E，A21G(GQAP)150，B25H，desB30人胰岛素；
A21G，B1F(GQAP)50，desB30人胰岛素；
A21G，B1F(GQAP)100，desB30人胰岛素；
A21G，A22A，A23P，A24Q(GAPQ)49，desB30人胰岛素；
A21G，A22A，A23Q，A24P(GAQP)49，desB30人胰岛素；
A21G，A22Q，A23A，A24P(GQAP)49，desB30人胰岛素；
A21G，A22Q，A23P，A24A(GQPA)49，desB30人胰岛素；
A21G，A22P，A23A，A24Q(GPAQ)49，desB30人胰岛素；
A21G，A22P，A23Q，A24A(GPQA)49，desB30人胰岛素；
A21G(GQAP)56，desB30人胰岛素；
A21G(GQAP)69，desB30人胰岛素；
A21G(GQAP)31，desB30人胰岛素；
A21G(GQAP)37，desB30人胰岛素；
A21G(GQAP)44，desB30人胰岛素；
A21G，A22Q，A23P(GQP)66，desB30人胰岛素；
A21G，A22A，A23Q，A24P(GAQP)37，desB30人胰岛素；和
A21G，A22A，A23Q，A24P(GAQP)62，desB30人胰岛素。
12.药物组合物，其包含治疗有效量的根据权利要求1-11中任一项所述的寡聚体延伸的胰岛素或胰岛素类似物，或其药学上可接受的盐，以及一种或多种佐剂、赋形剂、载体和/或稀释剂。
13.根据权利要求1-11中任一项所述的寡聚体延伸的胰岛素或胰岛素类似物，其用作药物。
14.根据权利要求1-11中任一项所述的寡聚体延伸的胰岛素或胰岛素类似物在制备药物组合物/药物中的用途。
15.治疗、预防或减轻包括人在内的活动物体的代谢性疾病、病症或状况的方法，该方法包括向有需要的此类活动物体施用治疗有效量的根据权利要求1-11中任一项所述的寡聚体延伸的胰岛素或胰岛素类似物的步骤。
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