CN107698484A

CN107698484A - 一种来那度胺的衍生物的制备方法与应用

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Publication number: CN107698484A
Application number: CN201711113856.XA
Authority: CN
Inventors: 王伟; 王延东; 王宏涛; 陆永章
Original assignee: Guangdong Zonk Drug R & D Ltd
Current assignee: Guangdong Zonk Drug R & D Ltd
Priority date: 2017-11-13
Filing date: 2017-11-13
Publication date: 2018-02-16
Anticipated expiration: 2037-11-13
Also published as: WO2019091046A1; CN107698484B

Abstract

本发明公开了一种来那度胺衍生物及其制备方法与应用。本发明所提供的来那度胺衍生物其结构式如式I所示。本发明提供的式I所示的来那度胺衍生物具有明显的抗炎作用，且无神经毒性，在抗炎药物设计研发领域具有良好的应用前景。同时该化合物还具有明显的抗癌作用，在抗癌药物的研发领域也具有良好的应用前景。

Description

一种来那度胺的衍生物的制备方法与应用

技术领域

本发明属于医药化学领域，具体涉及一种来那度胺的衍生物的制备方法与应用。

背景技术

来那度胺是由美国Celgene生物制药公司开发的抗肿瘤药物，化学结构与沙利度胺相似，具有抗肿瘤、免疫调节和抗血管生成等多重作用。体外试验显示来那度胺可抑制某些细胞株如Namalwa细胞增生。来那度胺可抑制患者多发性骨髓瘤细胞及MM1S细胞的生长。另外，来那度胺还可抑制环氧化酶2(COX-2)的表达，但对COX-1无作用。近期临床研究结果显示，来那度胺除了可以用于治疗MDS和MM外，对骨髓瘤、白血病、转移性肾癌、实体瘤、原发性全身性淀粉洋变性和伴骨髓化生的全身性骨髓纤维化疾病具有一定的疗效。

发明内容

本发明的一个目的是提供一种来那度胺衍生物或其药学上可接受的盐。

本发明所提供的来那度胺衍生物的结构通式如式I所示：

式I中，R1为：H或-C＝OR5,其中，R5为取代或未取代的下述基团：直链或支链的C1-C20的烷基、芳基、杂芳基、环烷基、芳基烷基、杂环基烷基或C1-C8烷基-OR6；R6为取代或未取代的下述基团：C1-C20烷基、芳基烷基或杂环基烷基；

R2为：取代或未取代的直链或支链的C1-C20烷基、取代或未取代的芳基烷基、取代或未取代的杂环基烷基；

R3为：取代或未取代的直链或支链的C1-C20烷基；

R4为：取代或未取代的直链或支链的C1-C20烷基。

其中，每个取代的烷基、芳基、杂芳基、环烷基、芳基烷基和杂环基烷基中的取代基独立地任选自下述基团：卤素、羟基、氨基和硝基。所述卤素是指F，Cl，Br或I。

上述含取代基的基团可以有一个取代基在基团各个可取代的位置进行取代。当所给出的结构式中不只一个位置能被选自具体基团的一个或多个取代基所取代，那么取代基可以相同或不同地在各个位置取代。

进一步的，上述的环烷基可为C3-C20的环烷基，上述的芳基烷基可为C6-C20的芳基烷基，上述的杂环基烷基可为C3-C20的杂环基烷基。

在其中一些实施方案中，

式I中，R1为：H或-C＝OR5,R5为取代或未取代的C1-C20烷基，或，取代或未取代的苯基(C1-C5)烷基；

R2为：取代或未取代的C1-C5烷基、取代或未取代的苯基(C1-C5)烷基，或，取代或未取代的吗啉基(C1-C5)烷基；

R3为：取代或未取代的C1-C5烷基；

R4为：取代或未取代的C1-C5烷基。

在其中一些实施方案中，

式I中，R1为：H或-C＝OR5,R5为C1-C20烷基或苄基；

R2为：C1-C5烷基、苄基或2-吗啉基乙基；

R3为：C1-C5烷基或卤素取代的C1-C5烷基。

R4为：C1-C5烷基或卤素取代的C1-C5烷基。

在其中一些实施方案中，本发明所述的来那度胺衍生物，可以列举为如下所示结构，但不局限于以下结构：

本发明中使用的术语“烷基”是指仅由碳原子和氢原子组成、且不具有不饱和度(例如双键、三键或环)的基团，其涵盖了各种可能的几何异构基团与立体异构基团。该基团通过单键与分子的其余部分相连。作为烷基的非限制性实例，可以列举以下直链或支链的基团：甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基及其另外七种异构体、正己基及其另外十六种异构体、正庚基及其各种异构体、正辛基及其各种异构体、正壬基及其各种异构体、正癸基及其各种异构体。

本发明中使用的术语“环烷基”是指由至少3个碳原子组成的饱和非芳香环系，该环系可以是单环、双环、多环，也可以是稠环、桥环、螺环。作为环烷基的非限制性实例，可以列举以下基团：环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、环辛基、环壬基、环癸基；以及由两个或多个上述单环通过公共边和公共碳原子形成的稠环、桥环或螺环基团。

本发明中使用的术语“芳基”可以单独使用或作为“芳基烷基”的一部分，是指共含有6-14元环的单环，双环，和三环的碳环体系，其中，至少一个环体系是芳香族的，其中每一个环体系包含3-7元环，且只有一个附着点与分子的其余部分相连。术语“芳基”可以和术语“芳香环”交换使用，如芳香环可以包括苯基，萘基和蒽基。

本发明中使用的术语“杂芳基”是指具有一个或多个独立地选自N、O或S的杂原子的5-14元芳香族杂环环系，该环系可以是单环、双环、多环，其中双环和多环可以由单环通过单键连接方式或稠合方式形成。作为杂芳基的非限制性实例，可以列举以下基团：噁唑基、异噁唑基、咪唑基、呋喃基、吲哚基、异吲哚基、吡咯基、三唑基、三嗪基、四唑基、噻吩基、噻唑基、异噻唑基、吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、哒嗪基、苯并呋喃基、苯并噻唑基、苯并噁唑基、苯并咪唑基、苯并噻吩基、苯并吡喃基、咔唑基、喹啉基、异喹啉基、喹唑啉基、噌啉基、萘啶基、蝶啶基、嘌呤基、喹噁啉基、噻二唑基、吲哚嗪基、吖啶基、吩嗪基、酞嗪基、香豆素基、吡唑并吡啶基、吡啶并哒嗪基、吡咯并吡啶基、咪唑并吡啶基、吡唑并哒嗪基；以及由上述杂芳基通过单键连接方式或稠合方式形成的基团。

本发明中使用的术语“芳基烷基”是指一个或多个氢原子被芳基独立取代的烷基，其中所述的芳基和烷基如上文所定义。实例包括苄基、苯基乙基等。

本发明中使用的术语“杂芳基烷基”是指一个或多个氢原子被杂芳基独立取代的烷基，其中所述的杂芳基和烷基如上文所定义。实例包括2-吗啉基乙基等。

本发明化合物也可以以其药学上可接受的盐或溶剂化物的形式使用。式I所示化合物的生理学上可接收的盐包括由药学上可接受的无机酸或有机酸或者无机碱或有机碱形成的常规的盐以及季铵的酸加成盐。合适的酸盐的更具体的例子包括盐酸、氢溴酸、硫酸、磷酸、硝酸、高氯酸、富马酸、乙酸、丙酸、琥珀酸、羟基乙酸、甲酸、乳酸、马来酸、酒石酸、柠檬酸、扑酸、丙二酸、羟基马来酸、苯乙酸、谷氨酸、苯甲酸、水杨酸、富马酸、甲苯磺酸、甲磺酸、萘-2-磺酸、苯磺酸、羟基萘甲酸、氢碘酸、苹果酸、steroic、鞣酸等的盐。合适的碱盐的更具体的例子包括钠、锂、钾、镁、铝、钙、锌、N，N’-二苄基乙二胺、氯代普鲁卡因、胆碱、二乙醇胺、乙二胺、N-甲基葡糖胺和普鲁卡因盐。

本发明的再一个目的是提供上述式I化合物的制备方法。

本发明所提供的R1＝H的式I化合物的制备方法，包括下述步骤：

1)使式Ⅱ所示的化合物与2-氨基苯乙酰胺反应，形成式Ⅲ所示的席夫碱化合物；

其中，式Ⅱ、式Ⅲ中R3、R4的定义同式I中的R3、R4；

2)使式Ⅳ所示的溴乙酸酯与式Ⅲ所示的席夫碱化合物进行催化加成反应，得到式Ⅴ所示的化合物；

其中，式Ⅳ中R2的定义同式I中的R2；式Ⅴ中R2、R3、R4的定义同式I；

3)将式Ⅴ所示的化合物进行氢化还原，得到式Ⅵ所示的氨基化合物；

式Ⅵ中R2、R3、R4的定义同式I；

4)使2-溴甲基-3-硝基苯甲酸甲酯与式Ⅵ所示的氨基化合物进行关环反应，得到Ⅶ所示的化合物；

式Ⅶ中R2、R3、R4的定义同式I；

5)使Ⅶ所示的化合物中的硝基还原，得到R1＝H的式I所示化合物。

其中，步骤1)中所述反应的反应条件为：反应温度为-10度到30度，反应时间为8小时-20小时，所述式Ⅱ所示的化合物与2-氨基苯乙酰胺的摩尔比为1：1.0-1.5；所述反应在溶剂中进行，所述溶剂优选为甲醇。

步骤2)中所述催化加成反应的反应条件为：反应温度为0到-50度，反应时间为2-8小时；所述式Ⅲ所示的席夫碱化合物与式Ⅳ所示的溴乙酸酯的摩尔比为1:1-1.5；所述催化加成反应采用的催化剂选自下述至少一种：二乙基锌和二乙酰丙酮镍，所述催化剂的加入量为0.05-1当量。所述反应在溶剂中进行，所述溶剂优选为二氯甲烷。

步骤3)中所述氢化还原的反应条件为：反应温度20-80度，反应时间3-10小时，反应压力1-10bar氢气压力；所述氢化在溶剂中进行，所述溶剂优选为甲醇或乙醇。

步骤4)中所述关环反应在溶剂中进行，所述溶剂优选为甲苯；所述关环反应的反应条件为：在回流条件下加热3-10小时；所述2-溴甲基-3-硝基苯甲酸甲酯与式Ⅵ所示的氨基化合物的摩尔比为1.0-1.5:1。所述关环反应在碱性条件的作用下进行，所用碱可以为三乙胺、二异丙基乙胺，N-甲基吗啉，吡啶，二甲氨基吡啶或醋酸钠等，优选三乙胺。所述碱与式Ⅵ所示的氨基化合物的摩尔比为1-5：1。

步骤5)中所述硝基还原的反应条件为：应温度20-80度，反应时间3-10小时，反应压力1-10bar氢气压力；所述氢化在溶剂中进行，所述溶剂优选为甲醇或乙醇。

本发明所提供的R1＝-C＝OR5的式I化合物的制备方法，包括下述步骤：

将R1＝H的式I所示化合物中的氨基进行酰基化，得到R1＝-C＝OR5的式I化合物。

本发明另一个目的是提供上述式I化合物的应用。

本发明所提供的式I化合物的应用包括下述方面：1)式I化合物在制备预防和/或治疗炎症的药物中的应用；2)式I化合物在制备预防和/或治疗癌症的药物中的应用；3)式I化合物在制备抑制癌细胞增殖药物中的应用。

所述的炎症包括急性炎症、亚急性炎症和免疫性炎症。

所述的癌症包括本领域中已知的各种癌症(实体癌或非实体癌)，包括但不限于：淋巴癌、骨髓瘤、肝癌、宫颈癌、结肠癌、非小细胞肺癌、乳腺癌、食管癌、白血病。

所述的癌细胞包括淋巴瘤细胞、骨髓瘤细胞、肝癌细胞、宫颈癌细胞、结肠癌细胞、非小细胞肺癌细胞、乳腺癌细胞、食管癌细胞、白血病细胞。

所述淋巴瘤细胞具体可为淋巴瘤细胞P388D1或非霍奇金淋巴瘤细胞Raji

所述骨髓瘤细胞具体可为多发性骨髓瘤细胞ARH77。

以式I所示的来那度胺衍生物为活性成分制备的预防和/或治疗炎症的药物以及预防和/或治疗癌症的药物也属于本发明的保护范围。

所述预防和/或治疗炎症的药物以及预防和/或治疗癌症的药物可通过注射、喷射、滴鼻、滴眼、渗透、吸收、物理或化学介导的方法导入机体如肌肉、皮内、皮下、静脉、粘膜组织；或是被其他物质混合或包裹后导入机体。

需要的时候，在上述药物中还可以加入一种或多种药学上可接受的载体。所述载体包括药学领域常规的稀释剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、湿润剂、崩解剂、吸收促进剂、表面活性剂、吸附载体、润滑剂等。

上述药物可以制成注射液、片剂、粉剂、颗粒剂、胶囊、口服液、膏剂、霜剂等多种形式。上述各种剂型的药物均可以按照药学领域的常规方法制备。

本发明提供的式I所示的来那度胺衍生物具有明显的抗炎作用，且无神经毒性，在抗炎药物设计研发领域具有良好的应用前景。且式I所示的来那度胺衍生物具有明显的抗癌作用，在抗癌药物的研发领域也具有良好的应用前景。

附图说明

图1为实施例1制备的化合物6的反应流程图。

具体实施方式

下面通过具体实施例对本发明的方法进行说明，但本发明并不局限于此，凡在本发明的精神和原则之内所做的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。

下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。

合成部分实施例

实施例1：3-(4-氨基-1-异吲哚啉酮-2-基)-3-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)丙酸甲酯(化合物6)

1.1 步骤1、(E)-2-((3-乙氧基-4-甲氧基苯亚甲基)氨基)-2-苯乙酰胺(化合物2)的制备

将3-乙氧基-4甲氧基苯甲醛(化合物1，31.0g,172mmol)溶解于200mL甲醇中，然后加入2-氨基苯乙酰胺(25.8g，172mmol)，室温搅拌18小时。反应结束后，浓缩反应液，乙醇重结晶得到白色固体(E)-2-((3-乙氧基-4-甲氧基苯亚甲基)氨基)-2-苯乙酰胺(23.6g,44.0％)。¹H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ8.74(s,1H),7.58-6.95(m,8H),5.36(s,1H),4.09(m,2H),3.83(s,3H),1.32(m,3H).ESI-MS m/z:313.4[M+H]⁺.

1.2 步骤2、3-((2-氨基-2-氧-1-苯乙酰氨基)-3-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)丙酸甲酯(化合物3)的制备

将(E)-2-((3-乙氧基-4-甲氧基苯亚甲基)氨基)-2-苯乙酰胺(化合物2，23.6g，75.6mmol)溶解于150mL二氯甲烷中，冷却降温至-30度，分别向反应液加入二乙基锌(121mL，21mmol，1M正己烷溶液)、二乙酰丙酮镍(0.646g，2.52mmol)、溴乙酸乙酯(13.8g，90.7mmol)，恒温搅拌3小时。反应结束后加入冰水淬灭反应，有机相浓缩，残留液柱层析得到透明黄色液体3-((2-氨基-2-氧-1-苯乙酰氨基)-3-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)丙酸甲酯(12.0g，41.3％)。¹H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ7.33-6.83(m,8H),4.85(s,1H),4.54(m,1H),4.09(m,2H),3.83(s,3H),3.68(s,3H),2.75(m,2H),1.33(m,3H).ESI-MS m/z:387.4[M+H]⁺.

1.3 步骤3、3-氨基-3-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)丙酸甲酯(化合物4)的制备

将3-((2-氨基-2-氧-1-苯乙酰氨基)-3-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)丙酸甲酯(化合物3，12.0g，31.0mmol)溶解于80mL甲醇中，加入10％钯碳(1.90g，H₂0w/w＝50％),混合液在9bar氢气环境高压搅拌16小时。反应液过滤，母液减压浓缩。残留油状物重结晶得到浅黄色固体3-氨基-3-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)丙酸甲酯(5.00g，64.1％)。¹H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ6.96-6.83(m,3H),4.54(m,1H),4.09(m,2H),3.83(s,3H),3.68(s,3H),2.88(m,2H),1.32(m,3H).ESI-MS m/z:276.3[M+Na]⁺.

1.4 步骤4、3-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)-3-(4-硝基-1-异吲哚啉酮-2-基)丙酸甲酯(化合物5)的制备

将3-氨基-3-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)丙酸甲酯(化合物4，5.00g，19.7mmol)溶解于80mL甲苯中，分别加入三乙胺(2.00g，19.7mmol)、2-溴甲基-3-硝基苯甲酸甲酯(4.83g，17.8mmol)，混合液在110度中回流5小时。反应液减压浓缩，残留物柱层析得到黄色固体3-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)-3-(4-硝基-1-异吲哚啉酮-2-基)丙酸甲酯(4.00g，49.0％)。¹H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ8.33-6.83(m,6H),5.54(m,1H),4.22(s,2H),4.09(m,2H),3.83(s,3H),3.68(s,3H),2.92(m,2H),1.32(m,3H).ESI-MS m/z:415.3[M+H]⁺.

1.5 步骤5、3-(4-氨基-1-异吲哚啉酮-2-基)-3-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)丙酸甲酯(化合物6)的制备

将3-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)-3-(4-硝基-1-异吲哚啉酮-2-基)丙酸甲酯(化合物5，4.00g，9.66mmol)溶解于80mL四氢呋喃中，加入10％钯碳(1.0g，H₂0w/w＝50％)，反应液在9bar氢气环境下高压搅拌16小时。反应液过滤，母液减压浓缩，残留液重结晶得到白色固体3-(4-氨基-1-异吲哚啉酮-2-基)-3-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)丙酸甲酯(2.20g，59.2％)。¹H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ7.27-6.72(m,6H),6.27(s,2H),5.54(m,1H),4.22(S,2H),4.09(m,2H),3.83(s,3H),3.68(s,3H),2.92(m,2H),1.32(m,3H).ESI-MS m/z:385.3[M+H]⁺.

实施例2：3-(4-乙酰氨基-1-异吲哚啉酮-2-基)-3-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)丙酸甲酯(化合物7)

将3-(4-氨基-1-异吲哚啉酮-2-基)-3-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)丙酸甲酯(1.0g，2.6mmol)溶解于10mL四氢呋喃中，分别向反应中加入二环己基碳二亚胺(0.54g，2.6mmol)、4-二甲氨基吡啶(0.32g，2.6mmol)、乙酸(0.16g，2.6mmol)，室温搅拌10小时。过滤反应液，减压浓缩，柱层析得到白色固体3-(4-乙酰氨基-1-异吲哚啉酮-2-基)-3-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)丙酸甲酯(0.97g，88.2％)。¹H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ7.65-6.74(m,6H),5.51(m,1H),4.22(S,2H),4.09(m,2H),3.83(s,3H),3.68(s,3H),2.92(m,2H),2.04(s,2H),1.32(m,3H).ESI-MS m/z:449.5[M+Na]⁺.

实施例3：3-(1-氧-4-戊酰氨异吲哚啉酮-2-基)-3-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)丙酸甲酯(化合物8)

方法同实施例2，原料为3-(4-氨基-1-异吲哚啉酮-2-基)-3-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)丙酸甲酯和戊酸，得到白色固体粉末，收率：92.5％。¹H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ7.65-6.74(m,6H),5.51(m,1H),4.22(S,2H),4.09(m,2H),3.83(s,3H),3.68(s,3H),2.92(m,2H),2.39(m,2H),1.63(m,2H),1.32(m,2H),0.90(m,3H).ESI-MS m/z:469.5[M+H]⁺.

实施例4：3-(4-癸酰氨基-1-异吲哚啉酮-2-基)-3-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)丙酸甲酯(化合物9)

方法同实施例2，原料为3-(4-氨基-1-异吲哚啉酮-2-基)-3-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)丙酸甲酯和癸酸，得到白色固体粉末，收率：85.6％。¹H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ7.65-6.74(m,6H),5.51(m,1H),4.22(S,2H),4.09(m,2H),3.83(s,3H),3.68(s,3H),2.92(m,2H),2.39(m,2H),1.63-1.29(m,14H),0.88(m,3H).ESI-MS m/z:539.5[M+H]⁺.

实施例5：3-(4-硬酯酰氨基-1-异吲哚啉酮-2-基)-3-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)丙酸甲酯(化合物10)

方法同实施例2，原料为3-(4-氨基-1-异吲哚啉酮-2-基)-3-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)丙酸甲酯和十八烷基酸，得到白色固体粉末，收率：80.6％。¹H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ7.65-6.74(m,6H),5.51(m,1H),4.22(S,2H),4.09(m,2H),3.83(s,3H),3.68(s,3H),2.92(m,2H),2.39(m,2H),1.63-1.26(m,30H),0.88(m,3H).ESI-MS m/z:673.7[M+Na]⁺.

实施例6：3-(4-苯乙酰氨基-1-异吲哚啉酮-2-基)-3-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)丙酸甲酯(化合物11)

方法同实施例2，原料为3-(4-氨基-1-异吲哚啉酮-2-基)-3-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)丙酸甲酯和苯乙酸，得到白色固体粉末，收率：80.6％。¹H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ7.65-6.74(m,11H),5.51(m,1H),4.22(s,2H),4.09(m,2H),3.90(s,2H),3.83(s,3H),3.68(s,3H),2.92(m,2H),1.32(m,3H).ESI-MS m/z:503.5[M+H]⁺.

实施例7：3-(4-氨基-1-异吲哚啉酮-2-基)-3-(3-(2,2,2-三氟乙氧基)-4-甲氧基苯基)丙酸甲酯(化合物12)

方法同实施例1，只需将其步骤1.1中的原料3-乙氧基-4甲氧基苯甲醛替换为4-甲氧基-3-(2,2,2-三氟乙氧基)苯甲醛，得到白色固体粉末，总收率：4.25％。¹H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ7.27-6.74(m,6H),6.27(s,2H),5.51(m,1H),4.46(s,2H),3.83(s,3H),3.68(s,3H),2.92(m,2H).ESI-MS m/z:439.5[M+H]⁺.

实施例8：3-(4-氨基-1-异吲哚啉酮-2-基)-3-(3-乙氧基-4-丙氧基苯基)丙酸甲酯(化合物14)

方法同实施例1，只需将其步骤1.1中的原料3-乙氧基-4-甲氧基苯甲醛替换为3-乙氧基-4-丙氧基苯甲醛，得到白色固体粉末，总收率：5.13％。¹H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ7.27-6.74(m,6H),6.27(s,2H),5.51(m,1H),4.42(s,2H),4.09(m,4H),3.68(s,3H),2.92(m,2H),1.74(m,2H),1.32(m,3H),0.90(m,3H).ESI-MS m/z:413.5[M+H]⁺.

实施例9：3-(4-氨基-1-氧代异吲哚啉-2-基)-3-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)丙酸苄酯(化合物19)

方法同实施例1，只需将其步骤1.2中的原料溴乙酸乙酯替换为溴乙酸苄酯，得到白色固体粉末，总收率：5.33％。1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ7.47-6.74(m,11H),6.27(s,2H),5.51(m,1H),5.20(s,2H),4.22(s,2H),4.09(m,2H),3.83(s,3H),2.92(m,2H),1.32(m,3H).ESI-MS m/z:483.5[M+Na]+.

实施例10：3-(4-氨基-1-氧代异吲哚啉-2-基)-3-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)丙酸-2-吗啉乙酯(化合物20)

方法同实施例1，只需将其步骤1.2中的原料溴乙酸乙酯替换为溴乙酸-2-吗啉乙酯，得到白色固体粉末，总收率：3.82％。1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ7.27-6.74(m,6H),6.27(s,2H),5.51(m,1H),4.35(m,2H),4.22(s,2H),4.09(m,2H),3.83(s,3H),3.65(m,4H),2.97(m,2H),2.67(m,2H),2.36(m,4H),1.32(m,3H).ESI-MS m/z:506.5[M+Na]+.

依照上述实施例，本领域技术人员可对反应原料进行合理的选择，从而合成出本发明权利要求保护的其它类似结构的化合物。

对比例1：3-(5-氨基-1-异吲哚啉酮-2-基)-3-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)丙酸甲酯(化合物15)

方法同实施例1，只需将其步骤1.4中的原料2-溴甲基-3-硝基苯甲酸甲酯替换为4-硝基-2-溴甲基苯甲酸甲酯，得到白色固体粉末，总收率：4.68％。¹H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ7.66-6.35(m,6H),6.27(s,2H),5.51(m,1H),4.42(s,2H),4.09(m,2H),3.83(s,3H),3.68(s,3H),2.92(m,2H),1.32(m,3H).ESI-MS m/z:407.5[M+Na]⁺.

对比例2：3-(4-氨基-1，3-二氧代异吲哚啉2-基)-3-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)丙酸甲酯(化合物16)

其制备方法可参照已知的类似化合物的方法进行制备。

药效部分实施例

实施例11：抗炎作用效果试验

选取130只昆明种小鼠，SPF级，雄性，15-17g。检疫3天，检疫结束后按体重随机分成13组，每组10只，即：模型组、实施例化合物实验组分为10组、对比例化合物实验组分为2组。实验时于各鼠右耳廓涂二甲苯(0.03mL/只)致耳廓肿胀，以左耳作对照，涂二甲苯30min后尾静脉给予相应的药物，给药10mg/kg体重，模型组给予等容积的生理盐水。给药后1小时脱颈椎处死小鼠，用直径8mm的打孔器将双耳同部位等面积切下，用精密电子天平称重，右耳片重减去左耳片重的重量之差即为肿胀度。

表1 对二甲苯致昆明种小鼠耳肿胀的影响

与模型组比较：*p<0.05，**p<0.01。

实施例12：神经毒性比较

取健康无孕NIH小鼠130只，体重18～22g，雌雄各半。试验时按性别、体重将小鼠随机分为3组，每组l0只，雌雄各半。试验当天化合物分为12组(10mg/kg)，阴性对照组灌胃给予等体积氯化钠注射液，给药后立即观察小鼠毒性反应情况，记录小鼠给药后的反应和持续时间；给药后连续观察14d。分别对于阴性对照组、化合物组的小鼠给药后的行为表现进行了各方面的记录，结果见表2。

化合物15和化合物16有神经毒性，其中化合物16神经毒性较大；而实施例1-10的化合物没有发现有神经毒性。

实施例13、抗肿瘤效果试验

选择小鼠淋巴瘤细胞P388D1、非霍奇金淋巴瘤细胞Raji、多发性骨髓瘤细胞ARH77肿瘤细胞测定实施例化合物的IC₅₀。

药物及试剂配制：RPMI1640培养基一袋加水一升，补加2克碳酸氢钠，10万单位青霉素和100mg链霉素，调节pH值至7.4，用0.22μm除菌滤膜过滤除菌。95ml培养基加灭活新生牛血清5ml即为完全培养液。胰蛋白酶用D-hanks缓冲液配成0.25％溶液，过滤除菌后4℃保存备用。

准确称实施例各化合物和来那度胺各100mg，加到灭菌的1.5ml离心管中，加入DMSO 1ml，配成100mg/ml原液，-20℃冷冻保存。临用前融化后取适量以完全培养液稀释成相应浓度应用。

细胞培养及传代：所有细胞均贴壁培养于含10ml完全培养液细胞培养瓶中，于37℃、5％CO₂、饱合湿度下培养。细胞长满瓶底后用灭菌D-hanks液洗两次，加0.25％胰蛋白酶消化细胞2分钟，倒掉胰蛋白酶，待轻摇细胞能完全脱落后，加完全培养液30ml后，用移液管吹散细胞，分装于3个新的细胞培养瓶中，继续培养。

药物处理：取刚刚长满的细胞一瓶，胰蛋白酶消化后收集细胞，用移液管吹打均匀，取两滴细胞悬液台盼蓝染色，于显微镜下计数活细胞数目，用完全培养液调整细胞数目至1×10⁵个细胞/毫升。于96孔细胞培养板中每孔加入100μl细胞悬液，将培养板置于CO₂培养箱中培养12小时，取出培养板后于每孔中补加100μl含不同浓度实验药物的完全培养液，每个浓度设4个平行孔，另设4孔细胞加入不含药完全培养液作阴性对照孔，4孔细胞加入含长春新碱的完全培养液作阳性对照，长春新碱终浓度为5μg/ml。加完药后培养板于微孔板振荡器上振荡混匀，置于CO₂培养箱中继续培养48小时。取出培养板，每孔加入10μl 5mg/ml的MTT液，振荡混匀，继续培养4小时，弃去原培养液，于每孔加入DMSO 150μl，充分振荡以溶解蓝紫色结晶，于Bio-Rad 550酶标仪上测定各孔的光吸收，测定波长570nm，参考波长630nm。

根据各孔OD值计算药物对细胞增殖的抑制率：

根据药物浓度的对数对应的抑制率作直线回归，得到直线方程，计算抑制率在50％时对应的药物浓度即为实验药物对肿瘤细胞的半抑制浓度(IC₅₀)。

化合物对不同肿瘤细胞株的半抑制浓度(IC₅₀，μg/ml)

实施例化合物6-14、19对于上述肿瘤细胞P388D1和Raji的抑制作用优于化合物15、16和来那度胺，对于ARH77肿瘤细胞实施例6-14优于15和16，与来那度胺相近。

Claims

1.式I所示的化合物或其药学上可接受的盐：

式I中，R1为：H或-C＝OR5,其中，R5为取代或未取代的下述基团：C1-C20的烷基、芳基、杂芳基、环烷基、芳基烷基、杂环基烷基或C1-C8烷基-OR6；R6为取代或未取代的下述基团：C1-C20烷基、芳基烷基或杂环基烷基；

R2为：取代或未取代的C1-C20烷基、取代或未取代的芳基烷基、取代或未取代的杂环基烷基；

R3为：取代或未取代的C1-C20烷基；

R4为：取代或未取代的C1-C20烷基。

其中，每个取代的烷基、芳基、杂芳基、环烷基、芳基烷基和杂环基烷基中的取代基独立地任选自下述基团：卤素、羟基、氨基和硝基；所述卤素是指F，Cl，Br或I；所述烷基为直链或支链的烷基。

2.根据权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐，其特征在于：所述环烷基为C3-C20的环烷基，所述芳基烷基为C6-C20的芳基烷基，所述杂环基烷基为C3-C20的杂环基烷基。

3.根据权利要求1或2所述的化合物或其药学上可接受的盐，其特征在于：

所述式I中，R1为：H或-C＝OR5,R5为取代或未取代的C1-C20烷基，或，取代或未取代的苯基(C1-C5)烷基；

R3为：取代或未取代的C1-C5烷基；

R4为：取代或未取代的C1-C5烷基。

4.根据权利要求1-3中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其特征在于：所述式I中，R1为：H或-C＝OR5,R5为C1-C20烷基或苄基；

R2为：C1-C5烷基、苄基或2-吗啉基乙基；

R3为：C1-C5烷基或卤素取代的C1-C5烷基

R4为：C1-C5烷基或卤素取代的C1-C5烷基。

5.根据权利要求1-4中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其特征在于：所述式I所示的化合物包括下述任一所示化合物：

6.权利要求1所述的R1＝H的式I所示化合物的制备方法，包括下述步骤：

其中，式Ⅱ、式Ⅲ中R3、R4的定义同式I中的R3、R4；

式Ⅵ中R2、R3、R4的定义同式I；

式Ⅶ中R2、R3、R4的定义同式I；

7.权利要求1所述的R1＝-C＝OR5的式I所示化合物的制备方法，包括下述步骤：

8.权利要求1-5中任一项所述的式I所示化合物或其药学上可接受的盐在制备下述药物中的应用：1)预防和/或治疗炎症的药物；2)预防和/或治疗癌症的药物；3)抑制癌细胞增殖的药物。

9.一种药物，其活性成分为权利要求1-5任一项所述的式I所示化合物或其药学上可接受的盐；所述药物为：1)预防和/或治疗炎症的药物；2)预防和/或治疗癌症的药物；3)抑制癌细胞增殖的药物。

10.根据权利要求8所述的应用或权利要求9所述的药物，其特征在于：所述炎症包括急性炎症、亚急性炎症和免疫性炎症；

所述癌症包括实体癌或非实体癌，更具体的包括淋巴癌、骨髓瘤、肝癌、宫颈癌、结肠癌、非小细胞肺癌、乳腺癌、食管癌和白血病；

所述癌细胞包括：淋巴瘤细胞、骨髓瘤细胞、肝癌细胞、宫颈癌细胞、结肠癌细胞、非小细胞肺癌细胞、乳腺癌细胞、食管癌细胞、白血病细胞。