CN107485615A - 粗壮女贞苷c及其组合物在制备治疗高脂血症及减肥药物中的用途 - Google Patents

Abstract

本发明公开了粗壮女贞苷C的制备方法和应用。本发明首先公开了粗壮女贞苷C的结构(图1)。本发明进一步公开了制备粗壮女贞苷C的方法，包括从粗壮女贞等植物，经提取分离纯化得到或化学合成得到。并通过大量的动物实验证明，粗壮女贞苷C及其组合物能够有效降低高脂血症模型动物血和肝脏中的脂质含量，能够应用于制备治疗高脂血症、减肥的药物和保健品。

Description

粗壮女贞苷C及其组合物在制备治疗高脂血症及减肥药物中 的用途

技术领域

本发明涉及粗壮女贞苷C{(2E)-3，7-二甲基-2，6-辛二烯-1-yl3-O-(6-脱氧α-L-吡喃甘露糖基)-4-O-[(2E)-3-(4-羟基苯基)-2-丙烯酰基]-β-D-吡喃葡糖苷；(2E)-3，7-Dimethyl-2，6-octadien-1-yl3-O-(6-deoxy-α-L- mannopyranosyl)-4-O-[(2E)-3-(4-hydroxyphenyl)-2-propenoyl]-β-D-glucop yranoside}的一种新的药理用途，尤其涉及粗壮女贞苷C在制备治疗高脂血症及减肥药物中的用途，属于粗壮女贞苷C的药理用途领域。

背景技术

随着经济的迅猛发展和人们生活方式的改变，心脑血管疾病已成为人们身体健康的头号杀手。据世界卫生组织(WHO)最新公布的统计数据显示， 2015年在全球5640万死亡人数中，心脑血管疾病导致的死亡人数达到了 1500万，约占27％。心脑血管疾病已连续15年成为全球居民的首位死亡原因。而动脉粥样硬化(atherosclerosis，AS)是导致心脑血管疾病的主要原因。因此有效控制AS成为预防心脑血管疾病的关键环节。高脂血症、高血压、吸烟、糖尿病、炎症等都是动脉粥样硬化的致病因素，其中高脂血症是最重要的脂类危险因素。可见降低血脂、改善血脂异常的临床治疗成为降低心脑血管病发生率和死亡率的至关重要的措施。

随着人们生活水平的提高，高脂血症的发病率在我国迅速增长。根据《中国居民营养与慢性病状况报告(2015年)》显示，我国成人血脂异常总体患病率高达40.40％，其中高甘油三酯血症的患病率为13.1％，高胆固醇血症为4.9％，低高密度脂蛋白血症为33.9％。表明高甘油三酯血症在我国成人血脂异常患病人群中占据相当大的比例，高甘油三酯血症患病人数是高胆固醇血症的将近3倍。

目前临床上降低甘油三酯的药物主要有：贝特类、烟酸类和高纯度鱼油制剂。这几类药物作用机理清楚，疗效确实，降脂效果明显，但都存在不可避免的毒副作用，限制了这三类药物的长期应用。此外，高脂血症人群中老年人占相当的比例，他们肝肾功能衰退，对药物潜在的毒副作用敏感性提高，增加了毒副作用产生的风险。而高脂血症又是一个需要长期服用药物来控制病情发展的疾病，因此目前依然非常需要积极地研究和探索新型的降血脂药物，尤其从天然产物中寻找和发现有价值的物质是世界各国学者一直关注的重点。

中国是中药资源大国，一直以来中药的降血脂研究是国内研究的热点。研究者们对大黄、山楂、姜黄、黄连、三七、银杏叶、党参、何首乌等进行了多年的大量研究，发现了姜黄素、小檗碱、金丝桃苷、大蒜素等一些降脂作用较强的活性成分，也形成了一些中成药如降脂通络软胶囊、降脂灵、血脂康、绞股蓝胶囊和脂必妥等(初欣欣，季宇彬，高南南，杨润梅.抗高甘油三酯血症中药的研究进展.中药药理与临床.2014，30(1)：142-146)。但目前中药抗高甘油三酯血症的研究大多还存在药物作用机制研究不够深入，作用靶点不明确，尤其是药物复杂体系整体调节机体的复杂机制链揭示不够清楚等问题。

基于以上研究现状，我们对具有减肥降脂传统功效的粗壮女贞(Ligustrumrobustum(Roxb.)Blume)进行了系列的研究。粗壮女贞是我国西南地区苦丁茶的主要基源植物之一。唐朝《本草拾遗》(720年)记载苦丁茶“久食令人瘦，去人脂”，表明苦丁茶的减肥降脂功效源远流长。粗壮女贞的化学成分研究表明，粗壮女贞中含有苯丙素类、黄酮类、萜类、酚酸类、甾醇、氨基酸和多糖等成分(贺震旦，彭勇，肖培根.苦丁茶研究与开发.科学出版社；2010)。课题组前期从粗壮女贞老叶中利用现代先进的提取技术制备了以阿克苷为主要成分的水溶性苯丙素苷类成分，对其进行了大量降脂减肥的相关研究。近期又提取分离出了降脂疗效更强、起效剂量更低的以粗壮女贞苷C为代表的脂溶性苯丙素单萜苷类成分。

迄今为止，尚无粗壮女贞苷C能够治疗高脂血症和减肥的药理作用的报道。

发明内容

本发明的目的之一是提供一种制备所述粗壮女贞苷C的方法；

本发明的目的之二是将所述的粗壮女贞苷C及其组合物应用于制备抗高脂血症或减肥的药物、保健品或食品。

本发明所述的上述目的通过以下技术方案来实现的：

粗壮女贞苷C的制备：女贞属植物粗壮女贞(Ligustrum robustum(Roxb.) Bl.)、丽叶女贞(Ligustrum henryi Hemsl)、总梗女贞(Ligustrum pricei Hayata)及光萼小蜡(Ligustrum sinense var.myrianthum)、女贞(Ligustrum lucidum Ait.)等老叶用水或不同浓度的乙醇提取，减压回收得浸膏；浸膏用 10-20倍去离子水混悬分配1-3次除去水溶性成分，脂溶性成分60℃水浴挥干得浸膏；浸膏采用硅藻土、硅胶进行分段，按极性由小到大，用石油醚、乙酸乙酯、乙醇洗脱，根据薄层检测确定粗壮女贞含量高的馏分。对粗壮女贞含量高的留份再用硅胶，反相大孔树脂进行纯化，富集到粗壮女贞苷C粗品。经结晶得到粗壮女贞苷C。

粗壮女贞苷C的降脂减肥作用评价：本发明通过大量的实验发现，粗壮女贞苷C能够有效降低高脂血症模型动物血、肝脏中胆固醇和甘油三酯含量，特别对甘油三酯的作用最显著，并能降低模型动物体重，从而可将粗壮女贞苷C 制备成治疗高脂血症和减肥的药物。

本发明所要解决的另一个技术问题是提供一种治疗高脂血症和减肥的药物组合物，该药物组合物由有效量的粗壮女贞苷C与药学上可接受的载体、赋型剂或稀释剂配合而成。根据不同的给药方法，本发明药物组合物可以含有 0.1％-99％重量，优选10-60％重量的粗壮女贞苷C。

其中，可以向粗壮女贞苷C中加入制备不同剂型时所需的各种辅料和药学上可接受的载体、赋形剂或稀释剂后，以常规的中药制剂方法制备成任何一种适宜的临床制剂，例如可以是注射剂(粉针、冻干粉针、水针、输液等)、口服制剂(片剂、口服液、颗粒剂、胶囊剂、软胶囊或滴丸)等；其中，所述的辅料可以是抗氧络合剂、填充剂、骨架材料等；所述的药学上可接受的载体是木糖醇、甘露醇、乳糖、果糖、葡聚糖、葡萄糖、聚乙烯吡咯烷酮、低分子右旋糖酐、氯化钠、葡萄糖酸钙或磷酸钙中的一种或几种。

附图说明

图1粗壮女贞苷C的化学结构

图2粗壮女贞苷C的核磁共振碳谱

图3粗壮女贞苷C的核磁共振氢谱

具体实施方式

下面结合具体实施例来进一步描述本发明，本领域技术人员应该理解的是，在不偏离本发明的精神和范围下可以对本发明技术方案的细节和形式进行修改或替换，但这些修改和替换均落入本发明的保护范围内。

实验例1

粗壮女贞苷C的制备

粗壮女贞老叶80％乙醇提取，减压回收得浸膏；浸膏用10倍去离子水混悬分配除去水溶性成分，脂溶性成分60℃水浴挥干得浸膏；浸膏乙醇溶解硅藻土拌样，先用石油醚洗脱，出去低极性杂质，再用乙酸乙酯洗脱，减压回收乙酸乙酯得到浸膏；该浸膏采用硅胶吸附，二氯甲烷∶甲醇(10∶1)洗脱得到粗壮女贞苷C粗品，反复结晶得到粗壮女贞苷C纯品，HPLC纯度检测达98％。

实验例2

粗壮女贞苷C抗高脂血症活性评价研究

一、实验材料

动物、饲料及饲养条件

金黄地鼠7-8周龄，体重90-100g，60只，购自北京维通利华实验动物技术有限公司，生产许可证：SCXK(京)2012-0001。金黄地鼠常规饲料和高脂饲料(0.2％胆固醇，15％猪油，84.8％基础饲料)，均由北京华阜康生物科技股份有限公司提供，生产许可证：SCXK(京)2014-0008。金黄地鼠在 SPF级环境中饲养，温度20-25℃，湿度40％-70％，10只/笼，定量给予常规饲料或高脂饲料，自由饮水。

药物及试剂

粗壮女贞苷C：由实施方案例1制备得到，HPLC纯度检查达98％。

非诺贝特(力平之)，200mg/粒，法国利博福尼制药公司生产，产品批号：23378。批准文号：进口药品注册证号H20100602。生产日期：201507，有效期至：201806。给药前用蒸馏水配置。

血清总胆固醇(total cholesterol，TC)批号161481，有效期至 20180912；甘油三酯(triglyceride，TG)批号160901，有效期至20181009；低密度脂蛋白胆固醇(low densitylipoprotein-cholesterol，LDL-C)批号160871，有效期至20170803；高密度脂蛋白胆固醇(high density lipoprotein-cholesterol，HDL-C)批号160761，有效期至20170802，以上测定试剂盒均来源于中生北控生物科技股份有限公司。

二、实验方法

金黄地鼠适应性饲养三天后，称量金黄地鼠造模前的体重情况，根据其体重随机分成6组，分别为正常对照组，高脂模型组，阳性药非诺贝特组(100 mg/kg)、粗壮女贞苷C高(300mg/kg)、中(150mg/kg)、低(75mg/kg)剂量组，每组10只。除正常对照组外，其余各组金黄地鼠饲喂高脂饲料，建立金黄地鼠高脂血症模型。

造模一周后，眼眶静脉丛取血，检测各组金黄地鼠血脂(TC，TG，LDL-C， HDL-C)，确定金黄地鼠高脂血症模型成功建立，并按血脂测定结果进行组间调整，使各造模组血脂水平无明显差异。各给药组金黄地鼠按剂量灌胃给药(ig. 1ml/100g)，正常对照组、高脂模型组灌胃等量蒸馏水，每日给药一次，连续给药三周。试验期间每日记录金黄地鼠的进食量，每周称重。末次给药后禁食不禁水12小时，眼眶静脉丛取血，3500r/min离心，分离血清，检测血脂四项指标。脱颈椎处死动物后剖取肝脏，液氮速冻，冷冻保存用于肝脏脂质含量测定。

三、实验结果

3.1一般观察

实验期间，给药前模型组及各给药组体重均高于正常组，差异有显著性意义；给药三周后，与模型组比较，阳性药组和粗壮女贞苷C高剂量组体重明显下降，差异有显著性意义，其余给药组与模型组比较无明显差异。

3.2粗壮女贞苷C对高脂血症金黄地鼠血脂水平的影响

在造模一周后，模型组及各给药组与正常对照组比较，血清中TC、TG、LDL-C 和HDL-C均明显升高，差异有显著性意义，模型组及各给药组无组间差异，见表1。造模后一周再连续给药三周，与模型组相比，阳性药非诺贝特、粗壮女贞苷C高、中剂量均能明显降低血中TC、TG和LDL-C含量，粗壮女贞苷C低剂量能明显降低血中TG含量，差异有显著性意义(表2)。

表1 造模一周后给药前各组金黄地鼠血脂情况(X±SD，mmol/L)

与正常组比较，*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001

表2 粗壮女贞苷C对高脂血症金黄地鼠血脂水平的影响(X±SD，mmol/L)

与正常组比较，***P＜0.001；与模型组比较，^▲P＜0.05，^▲▲P＜0.01，^▲▲▲P＜0.001

3.3粗壮女贞苷C对高脂血症金黄地鼠肝脂水平的影响

给药三周后，阳性药非诺贝特和粗壮女贞苷C高、中、低剂量对肝脏TC含量有明显下降作用，同时粗壮女贞苷C三个剂量对肝脏TG也有明显降低作用，差异有非常显著性意义(表3)。

表3 粗壮女贞苷C对高脂血症金黄地鼠肝脂水平的影响(X±SD，mg/g)

与正常组比较，***P＜0.001；与模型组比较，^▲P＜0.05，^▲▲▲P＜0.001。

Claims (6)

1.粗壮女贞苷C及其组合物在制备治疗高脂血症和减肥药物、保健品或食品中的用途。

2.按照权利要求1所述的用途，其特征在于：粗壮女贞苷C的化学名称为(2E)-3，7-二甲基-2，6-辛二烯-1-yl3-O-(6-脱氧α-L-吡喃甘露糖基)-4-O-[(2E)-3-(4-羟基苯基)-2-丙烯酰基]-β-D-吡喃葡糖苷{(2E)-3，7-Dimethyl-2，6-octadien-1-yl3-O-(6-deoxy-α-L-mannopyranosyl)-4-O-[(2E)-3-(4-hydroxyphenyl)-2-propenoyl]-β-D-glucopyranoside}。

3.按照权利要求1所述的用途，其特征在于：粗壮女贞苷C可从木樨科粗壮女贞(Ligustrum robustum(Roxb.)Blume)中或者其他含有粗壮女贞苷C的植物中提取分离得到；也可以通过化学合成的方式合成。

4.根据权利1所述的一种治疗高脂血症和减肥的药物组合物，其特征在于：所述药物为由治疗上有效量的粗壮女贞苷C与药学上可接受的载体组成，可以为粗壮女贞苷C加工成的胶囊(软胶囊)、颗粒剂(干悬混剂)、片剂(分散片、泡腾片、咀嚼片、口崩片)、溶液剂(糖浆)、丸剂(浓缩丸、滴丸、微丸)，或者注射剂型等。

5.权利要求1-4所述的是化合物粗壮女贞苷C及其组合物的降脂减肥活性，以及在制备临床治疗高脂血症和减肥药物中的应用。

6.权利要求1-4所述的是化合物粗壮女贞苷C及其组合物在制备辅助治疗高脂血症和减肥的保健品、食品中的应用。