CN107383147A - 一种β‑谷甾醇与依帕司他偶联物及其制备方法和用途 - Google Patents

Abstract

本发明属于天然药物领域，公开了一种β‑谷甾醇与依帕司他偶联物及其制备方法和用途。该偶联物是由β‑谷甾醇与依帕司他偶联而成，结构如式(Ⅰ)。制备包括步骤：将β‑谷甾醇与依帕司他溶解在无水二氯甲烷中，在吡啶和4‑二甲氨基吡啶的催化下，室温反应过夜，过滤，过硅胶色谱柱，旋蒸，干燥，即可获得目标化合物。通过体外MTT检测实验，发现其对肿瘤细胞株具有很好的抑制效果，比β‑谷甾醇的IC₅₀值强3‑6倍，但对正常肝细胞L‑O2低毒。该化合物以两个药物分子偶联成前药的方式治疗癌症，克服β‑谷甾醇抗癌性不足和协同靶向抑制癌细胞醛糖还原酶靶标的问题，达到通过增强细胞凋亡的途径清除癌细胞的效果。

Description

一种β-谷甾醇与依帕司他偶联物及其制备方法和用途

技术领域

本发明属于天然药物领域，特别涉及一种β-谷甾醇与依帕司他偶联物及其制备方法和用途。

背景技术

癌症是严重危害人类健康的一大顽症，现已成为仅次于心血管病的第二大杀手，所以寻找安全、有效、低毒的抗肿瘤药物和研究其作用机理，具有重要意义。

β-谷甾醇(β-sitosterol，BST)是动植物细胞膜的主要组成成分，当前有200余种植物甾醇被鉴定出来，其中最丰富、常见的是β-谷甾醇、菜籽甾醇、豆甾醇。大约有百余种植物已经报道含有β-谷甾醇。β-谷甾醇表现出广泛的药理活性，主要有：抗菌、抗炎、抗癌症(乳腺癌、直肠癌、前列腺癌、纤维瘤、宫颈癌)、抗氧化、免疫调节、抗高血脂、抗动脉硬化、抗溃疡、镇痛、抑制血小板聚集等。长期(60天)皮下给予大鼠β-谷甾醇，其肝肾组织功能未见异常，除了血脂有明显降低外，其他血清指标都在正常值参考范围(Nutr Cancer.2015；67(8):1214-20.；Steroids.2015；100:27-35.；Bioorg Med Chem Lett.2015；25(21):4976-9.；Eur J Pharmacol.2015；760:154-62.)。然而，天然的BST抗肿瘤活性相对较弱，为了进一步提高BST的抗肿瘤活性，人们对其进行结构修饰与改造，获得了一些活性较高的BST衍生物已经成为热点课题。

依帕司他为醛糖还原酶抑制药，以可逆地抑制与糖尿病性并发症的发病机制相关的多元醇代谢中葡萄糖转化为山梨醇的醛糖还原酶而发挥作用。最近研究表明，依帕司他可选择性靶向抑制癌细胞的醛糖还原酶(J Exp Med.2017Mar 7.pii:jem.20160903.)，这为以BST偶联靶向肿瘤特异抑制剂前药、提高BST的抗癌效应的研究策略实施治疗恶性肿瘤提供了全新的可能。

发明内容

为了克服现有技术中存在的缺点和不足，本发明的首要目的在于提供一种β-谷甾醇与依帕司他偶联物；该偶联物是由β-谷甾醇与依帕司他偶联而成。

本发明的另一目的在于提供一种上述β-谷甾醇与依帕司他偶联物的制备方法。

本发明的再一目的在于提供上述β-谷甾醇与依帕司他偶联物的用途。

本发明的目的通过下述技术方案实现：

一种β-谷甾醇与依帕司他偶联物，该偶联物是由β-谷甾醇与依帕司他偶联而成，具有如下式(Ⅰ)所示的结构式：

所述β-谷甾醇与依帕司他通过酯键偶联。

上述的一种β-谷甾醇与依帕司他偶联物的制备方法，包括以下操作步骤：将β-谷甾醇与依帕司他溶解在无水二氯甲烷中，在吡啶和4-二甲氨基吡啶的催化下，室温反应过夜，过滤，过硅胶色谱柱，旋蒸，干燥，即可获得目标化合物。

所述室温为25-30℃。

所述吡啶和4-二甲氨基吡啶的摩尔比为(1～4):2。

所述硅胶色谱柱所用的洗脱溶剂为乙酸乙酯和石油醚，溶剂体积比为(3～15):8。

上述的一种β-谷甾醇与依帕司他偶联物及其药学上可接受的盐在制备抗肿瘤药物中的用途。

上述的一种β-谷甾醇与依帕司他偶联物及其药学上可接受的盐在制备抗炎药物或美容品中的用途。

一种药物组合物，其中含有治疗有效量的上述的β-谷甾醇与依帕司他偶联物或其药学上可接受的盐及载体。

上述的一种药物组合物在制备抗肿瘤药物、抗炎药物或美容品中的用途。

本发明与现有技术相比具有如下突出的优点及有益效果：

本发明合成了一种抗肿瘤药物β-谷甾醇与抗氧化药物依帕司他偶联的化合物，通过体外MTT检测实验，发现其对肿瘤细胞株(MCF-7、BC-3和HepG2细胞)具有很好的抑制效果，比β-谷甾醇的IC₅₀值强3-6倍，但对正常肝细胞L-O2低毒。该化合物以两个药物分子偶联成前药的方式治疗癌症，克服β-谷甾醇活性弱，依帕司他的抗氧化和糖代谢抑制协同增强其抗癌药物活性的问题，达到通过增强细胞凋亡的途径清除癌细胞的效果。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明作进一步详细的描述，但本发明的实施方式不限于此。

实施例1：

将β-谷甾醇(1.2mmole)和依帕司他(1.2eq)溶解在无水二氯甲烷(30ml)中，在吡啶(0.5g)和4-二甲氨基吡啶(0.5g)的催化下，室温25-30℃下反应过夜，过滤，过硅胶色谱柱(所用的洗脱溶剂为体积比(3～15):8的乙酸乙酯和石油醚)，旋蒸，干燥，即可获得白色固体目标化合物。经液相色谱质谱和核磁共振技术分析，所新制备的白色固体目标化合物为具有式(Ⅰ)所示结构的偶联物：

实施例2

目标化合物的体外抗肿瘤效应评价。本实施例采用乳腺癌MCF-7、淋巴瘤BC-3和肝癌HepG2细胞对其进行药效评价，同时LO2肝脏细胞对其进行毒性检测。

取对数生长期的细胞，根据细胞的大小接种4～40×10³个于96孔板上，待生长24小时后，弃上清，然后按以下分组给药：肿瘤细胞设不加药组和加药组(浓度1～150μM对肿瘤细胞，浓度5～250μM对LO2细胞),β-谷甾醇偶联依帕司他BST-EPA(即实施例1所得目标化合物)，β-谷甾醇BST，依帕司他EPA和两者等摩尔混合物BST+EPA。每组设4～6个复孔，培养24小时，弃上清，加入100μl含0.5mg/ml的MTT(四氮唑盐)无血清培养液培养4h，加入100μlDMSO(二甲亚砜)，放置于微型振荡仪上振荡10min，再置于酶标仪上570nm处检测OD值。正常人细胞系LO2做对照。每次实验均重复3次。

结果显示，随着药物浓度增加，与相应不加药对照组比较，细胞增殖活性分别下降，说明化合物呈浓度依赖性抑制肿瘤细胞细胞增殖。而对正常肝细胞系LO2细胞的增殖活性未有变化，显示出该化合物对正常细胞具有低毒特性(表1)。

表1不同细胞的IC₅₀值(24h)及不同化合物IC₅₀比值

上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种β-谷甾醇与依帕司他偶联物，其特征在于：该偶联物是由β-谷甾醇与依帕司他偶联而成，具有如下式(Ⅰ)所示的结构式：

2.根据权利要求1所述的一种β-谷甾醇与依帕司他偶联物，其特征在于：所述β-谷甾醇与依帕司他通过酯键偶联。

3.根据权利要求1所述的一种β-谷甾醇与依帕司他偶联物的制备方法，其特征在于：包括以下操作步骤：将β-谷甾醇与依帕司他溶解在无水二氯甲烷中，在吡啶和4-二甲氨基吡啶的催化下，室温反应过夜，过滤，过硅胶色谱柱，旋蒸，干燥，即可获得目标化合物。

4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于：所述室温为25-30℃。

5.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于：所述吡啶和4-二甲氨基吡啶的摩尔比为(1～4):2。

6.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于：所述硅胶色谱柱所用的洗脱溶剂为乙酸乙酯和石油醚，溶剂体积比为(3～15):8。

7.根据权利要求1所述的一种β-谷甾醇与依帕司他偶联物及其药学上可接受的盐在制备抗肿瘤药物中的用途。

8.根据权利要求1所述的一种β-谷甾醇与依帕司他偶联物及其药学上可接受的盐在制备抗炎药物或美容品中的用途。

9.一种药物组合物，其中含有治疗有效量的权利要求1所述的β-谷甾醇与依帕司他偶联物或其药学上可接受的盐及载体。

10.根据权利要求9所述的一种药物组合物在制备抗肿瘤药物、抗炎药物或美容品中的用途。