CN107345235A - Th2细胞和细胞因子IL‑4作为脑卒中标志物的应用 - Google Patents
Th2细胞和细胞因子IL‑4作为脑卒中标志物的应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN107345235A CN107345235A CN201710544434.1A CN201710544434A CN107345235A CN 107345235 A CN107345235 A CN 107345235A CN 201710544434 A CN201710544434 A CN 201710544434A CN 107345235 A CN107345235 A CN 107345235A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- stroke
- cells
- cytokine
- patients
- prognosis
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 208000006011 Stroke Diseases 0.000 title claims abstract description 78
- 210000004241 Th2 cell Anatomy 0.000 title claims abstract description 54
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 title claims description 13
- 206010008190 Cerebrovascular accident Diseases 0.000 title claims description 11
- 230000002490 cerebral effect Effects 0.000 title claims description 11
- 108090000978 Interleukin-4 Proteins 0.000 claims abstract description 53
- 238000004393 prognosis Methods 0.000 claims abstract description 28
- 102000004388 Interleukin-4 Human genes 0.000 claims description 50
- 238000009007 Diagnostic Kit Methods 0.000 claims description 16
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 claims description 11
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 claims description 11
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 claims description 5
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims description 3
- 206010008092 Cerebral artery thrombosis Diseases 0.000 claims 3
- 208000032382 Ischaemic stroke Diseases 0.000 abstract description 27
- 238000011160 research Methods 0.000 abstract description 16
- 239000003550 marker Substances 0.000 abstract description 14
- 230000002596 correlated effect Effects 0.000 abstract description 13
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 abstract description 9
- 238000011282 treatment Methods 0.000 abstract description 8
- 239000000090 biomarker Substances 0.000 abstract description 7
- 238000000034 method Methods 0.000 abstract description 7
- 229940079593 drug Drugs 0.000 abstract description 6
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 6
- 230000008506 pathogenesis Effects 0.000 abstract description 5
- 230000008569 process Effects 0.000 abstract description 3
- 238000012216 screening Methods 0.000 abstract description 3
- 206010061216 Infarction Diseases 0.000 description 22
- 230000007574 infarction Effects 0.000 description 22
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 12
- 206010008118 cerebral infarction Diseases 0.000 description 9
- 238000002595 magnetic resonance imaging Methods 0.000 description 8
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 8
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 7
- 208000012902 Nervous system disease Diseases 0.000 description 7
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 description 7
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 7
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 6
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 6
- 238000010219 correlation analysis Methods 0.000 description 6
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 6
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 6
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 5
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 5
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 5
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 5
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 5
- 208000026106 cerebrovascular disease Diseases 0.000 description 4
- 230000036541 health Effects 0.000 description 4
- 238000008157 ELISA kit Methods 0.000 description 3
- 229920001917 Ficoll Polymers 0.000 description 3
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 3
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 3
- 239000000047 product Substances 0.000 description 3
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 3
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 2
- 206010050496 Reversible ischaemic neurological deficit Diseases 0.000 description 2
- 238000013176 antiplatelet therapy Methods 0.000 description 2
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 2
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 2
- 238000002597 diffusion-weighted imaging Methods 0.000 description 2
- 230000002526 effect on cardiovascular system Effects 0.000 description 2
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 2
- 230000002008 hemorrhagic effect Effects 0.000 description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 230000007659 motor function Effects 0.000 description 2
- 230000008823 permeabilization Effects 0.000 description 2
- 238000007789 sealing Methods 0.000 description 2
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- BSYNRYMUTXBXSQ-UHFFFAOYSA-N Aspirin Chemical compound CC(=O)OC1=CC=CC=C1C(O)=O BSYNRYMUTXBXSQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 description 1
- 239000005552 B01AC04 - Clopidogrel Substances 0.000 description 1
- 239000005528 B01AC05 - Ticlopidine Substances 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 206010065559 Cerebral arteriosclerosis Diseases 0.000 description 1
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 1
- 208000002330 Congenital Heart Defects Diseases 0.000 description 1
- 206010061818 Disease progression Diseases 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N Heparin Chemical compound OC1C(NC(=O)C)C(O)OC(COS(O)(=O)=O)C1OC1C(OS(O)(=O)=O)C(O)C(OC2C(C(OS(O)(=O)=O)C(OC3C(C(O)C(O)C(O3)C(O)=O)OS(O)(=O)=O)C(CO)O2)NS(O)(=O)=O)C(C(O)=O)O1 HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101001002709 Homo sapiens Interleukin-4 Proteins 0.000 description 1
- 206010020772 Hypertension Diseases 0.000 description 1
- 206010020850 Hyperthyroidism Diseases 0.000 description 1
- 201000008450 Intracranial aneurysm Diseases 0.000 description 1
- 208000028389 Nerve injury Diseases 0.000 description 1
- 208000008589 Obesity Diseases 0.000 description 1
- 206010030113 Oedema Diseases 0.000 description 1
- 208000032851 Subarachnoid Hemorrhage Diseases 0.000 description 1
- 208000008116 Traumatic Cerebral Hemorrhage Diseases 0.000 description 1
- 230000005856 abnormality Effects 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 229960001138 acetylsalicylic acid Drugs 0.000 description 1
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 1
- 238000000540 analysis of variance Methods 0.000 description 1
- 101150008083 ant gene Proteins 0.000 description 1
- 239000003146 anticoagulant agent Substances 0.000 description 1
- 229940127219 anticoagulant drug Drugs 0.000 description 1
- 206010003119 arrhythmia Diseases 0.000 description 1
- 230000006793 arrhythmia Effects 0.000 description 1
- 238000010170 biological method Methods 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 1
- 229960003009 clopidogrel Drugs 0.000 description 1
- GKTWGGQPFAXNFI-HNNXBMFYSA-N clopidogrel Chemical compound C1([C@H](N2CC=3C=CSC=3CC2)C(=O)OC)=CC=CC=C1Cl GKTWGGQPFAXNFI-HNNXBMFYSA-N 0.000 description 1
- 208000028831 congenital heart disease Diseases 0.000 description 1
- 208000029078 coronary artery disease Diseases 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 230000013872 defecation Effects 0.000 description 1
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 1
- 230000005750 disease progression Effects 0.000 description 1
- 230000035622 drinking Effects 0.000 description 1
- 238000012362 drug development process Methods 0.000 description 1
- 230000007937 eating Effects 0.000 description 1
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 description 1
- 210000003414 extremity Anatomy 0.000 description 1
- 230000004424 eye movement Effects 0.000 description 1
- 210000001097 facial muscle Anatomy 0.000 description 1
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 1
- 230000003370 grooming effect Effects 0.000 description 1
- 229960002897 heparin Drugs 0.000 description 1
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 description 1
- 208000021760 high fever Diseases 0.000 description 1
- 102000055229 human IL4 Human genes 0.000 description 1
- 208000015210 hypertensive heart disease Diseases 0.000 description 1
- 208000003532 hypothyroidism Diseases 0.000 description 1
- 230000002989 hypothyroidism Effects 0.000 description 1
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 description 1
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 1
- 201000005851 intracranial arteriosclerosis Diseases 0.000 description 1
- 210000003141 lower extremity Anatomy 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 230000008764 nerve damage Effects 0.000 description 1
- 230000000926 neurological effect Effects 0.000 description 1
- 235000020824 obesity Nutrition 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 208000020861 perceptual disease Diseases 0.000 description 1
- 239000012466 permeate Substances 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 230000000750 progressive effect Effects 0.000 description 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- 230000037152 sensory function Effects 0.000 description 1
- 230000000391 smoking effect Effects 0.000 description 1
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 1
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 1
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 1
- 239000012089 stop solution Substances 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 238000012353 t test Methods 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 229960005001 ticlopidine Drugs 0.000 description 1
- PHWBOXQYWZNQIN-UHFFFAOYSA-N ticlopidine Chemical compound ClC1=CC=CC=C1CN1CC(C=CS2)=C2CC1 PHWBOXQYWZNQIN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001052 transient effect Effects 0.000 description 1
- 230000008733 trauma Effects 0.000 description 1
- 210000001364 upper extremity Anatomy 0.000 description 1
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 1
- 230000000007 visual effect Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/5005—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells
- G01N33/5091—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing the pathological state of an organism
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
- G01N33/6863—Cytokines, i.e. immune system proteins modifying a biological response such as cell growth proliferation or differentiation, e.g. TNF, CNF, GM-CSF, lymphotoxin, MIF or their receptors
- G01N33/6869—Interleukin
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
- G01N2800/28—Neurological disorders
- G01N2800/2871—Cerebrovascular disorders, e.g. stroke, cerebral infarct, cerebral haemorrhage, transient ischemic event
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Immunology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pathology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Physiology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
本发明公开了Th2细胞和细胞因子IL‑4作为脑卒中标志物的应用，涉及生物技术领域。本发明研究结果表明Th2细胞百分比及其细胞因子IL‑4与脑卒中尤其是缺血性脑卒中具有明显的相关性，Th2细胞及其细胞因子IL‑4可以作为脑卒中诊断和预后指示的生物标志物，是一种全新的脑卒中标志物，这为脑卒中诊断和预后提供了一种新的思路和手段，有利于加快脑卒中的发病机制研究进程，也为快速筛选出治疗脑卒中的药物提供帮助。
Description
技术领域
本发明涉及生物技术领域，具体而言，涉及Th2细胞和细胞因子IL-4作为脑卒中标志物的应用。
背景技术
脑卒中(Stroke)是当今世界危害人类生命健康的最主要疾病之一，其中缺血性脑卒中(Ischemic Stroke，IS)是最常见的形式。缺血性脑卒中又可分为4种亚型，包括短暂性缺血性脑卒中(Transient Ischaemic Attack，TIA)、可逆性缺血性神经功能障碍(Reversibleischemic Neurological Deficit，RIND)、进展性卒中(Stroke InProgression，SIP)、完全性卒中(Complete Stroke，CS)。
目前缺血性脑卒中发病越来越年轻化，最近的流行病学研究发现，缺血性脑卒中中年患者的百分比约43％，然而在贫穷国家百分比高达51％，发达国家为34％，这可能是由于贫穷国家存在较高的心血管危险因素。缺血性脑卒中年轻患者的发病逐年上涨，可能与吸烟、饮酒、肥胖、高血压的增加有关。因此，弄清缺血性脑卒中的发病机制、寻找有效的治疗手段至关重要。
生物标志物是指通过化学或生物方法检测血液或尿液来预测生理或病理状态与疾病危险程度的一类指示剂。生物标志物是药物研发过程中的有效工具，它提供了药物性能及疾病进程的相关信息，反映了具体的药物治疗效果。
目前，用于诊断和预测患者缺血性脑卒中预后的方法或手段主要依赖的是美国国立卫生研究院卒中量表(the National Institutes of Health Stroke Scale，NIHSS)、Barthel指数以及梗死面积的检测来进行。缺乏可简单快速地易于检测的可用于反应缺血性脑卒中病情的生物标志物，这为弄清缺血性脑卒中的发病机制、寻找有效的治疗手段以及药物带来诸多不便。
发明内容
本发明的目的在于提供Th2细胞作为脑卒中标志物的应用。
本发明的另一目的在于提供细胞因子IL-4作为脑卒中标志物的应用。
本发明的另一目的在于提供细胞因子IL-4抗体的应用。
本发明是这样实现的：
Th2细胞作为标志物在制备脑卒中诊断试剂盒中的应用。
Th2细胞作为标志物在制备预测脑卒中患者预后的试剂盒中的应用。
细胞因子IL-4作为标志物在制备脑卒中诊断试剂盒或预测脑卒中患者预后的试剂盒中的应用。
细胞因子IL-4抗体在制备脑卒中诊断试剂盒或预测脑卒中患者预后的试剂盒中的应用。
本发明具有以下有益效果：
本发明首次相对比较全面地独立地研究了临床病人外周血中Th2细胞及其细胞因子与缺血性脑卒中的关系，结果显示，外周血Th2细胞百分比及其细胞因子IL-4均与NIHSS评分呈反比，与Barthel指数呈正相关，与脑卒中病人大脑梗死面积呈反比，以上结果表明Th2细胞百分比及其细胞因子IL-4与脑卒中尤其是缺血性脑卒中具有明显的相关性，Th2细胞及其细胞因子IL-4可以作为脑卒中诊断和预后指示的生物标志物，是一种全新的脑卒中标志物；基于此，可将Th2细胞或细胞因子IL-4作为标志物应用于制备脑卒中诊断试剂盒或者在制备预测脑卒中患者预后的试剂盒中等领域，这为脑卒中诊断和预后提供了一种新的思路和手段，有利于加快脑卒中的发病机制研究进程，也为快速筛选出治疗脑卒中的药物提供帮助。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，应当理解，以下附图仅示出了本发明的某些实施例，因此不应被看作是对范围的限定，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关的附图。
图1为本发明实施例1提供的不同组病人外周血中的Th2细胞百分比含量的流式细胞检测结果图；
图2为本发明实施例1提供的Th2细胞百分比与NIHSS评分、Barthel指数、梗死面积的相关性分析结果；
图3为本发明实施例2提供的IL-4水平与NIHSS评分、Barthel指数、梗死面积的相关性分析结果。
具体实施方式
为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。
下面对本发明实施例的提供的Th2细胞和细胞因子IL-4作为脑卒中标志物的应用进行具体说明。
本发明的研究选取湖北省襄阳市中心医院神经内科2017年3月6日至2017年4月6日接收诊治的53例缺血性脑卒中病人为研究对象，其中男36例，女17例，年龄43岁～82岁(61.7±11.4岁)；应用流式细胞仪检测各研究对象外周血中Th2细胞百分比；ELISA法检测Th2细胞因子IL-4的浓度；使用NIHSS评分评估缺血性脑卒中患者入院后24小时内的神经功能损伤；Barthel指数被用来评估缺血性脑卒中患者日常生活自理能力；利用MRI或CT计算了各研究对象大脑梗死面积；应用spass软件分析各研究对象Th2细胞百分比及其细胞因子水平与NIHSS评分、Barthel指数及大脑梗死面积的相关性。
结果显示：外周血Th2细胞百分比及其细胞因子IL-4均与NIHSS评分(评分分值越高，说明神经功能损伤越严重)呈负相关，与Barthel指数(分值越高，生活自理能力越高)呈正相关，与脑卒中病人大脑梗死面积(梗死面积越大，病情越严重，预后越差)呈负相关。
以上结果表明Th2细胞百分比及其细胞因子IL-4与脑卒中尤其是缺血性脑卒中具有明显的相关性，Th2细胞百分比及其细胞因子IL-4可以作为脑卒中诊断和预后指示的生物标志物，是一种全新的脑卒中标志物，二者具有广泛的应用前景。
基于此，一方面，本发明提供了Th2细胞作为标志物在制备脑卒中诊断试剂盒中的应用。
进一步地，在本发明的一些实施方案中，所述Th2细胞为外周血中的Th2细胞。
进一步地，在本发明的一些实施方案中，所述脑卒中为缺血性脑卒中。
另一方面，本发明提供了Th2细胞作为标志物在制备预测脑卒中患者预后的试剂盒中的应用。
进一步地，在本发明的一些实施方案中，所述Th2细胞为外周血的Th2细胞。
进一步地，在本发明的一些实施方案中，所述脑卒中为缺血性脑卒中。
再一方面，本发明提供了细胞因子IL-4作为标志物在制备脑卒中诊断试剂盒或预测脑卒中患者预后的试剂盒中的应用。
进一步地，在本发明的一些实施方案中，所述脑卒中为缺血性脑卒中。
进一步地，在本发明的一些实施方案中，所述细胞因子IL-4为患者血清中的细胞因子IL-4。
还有一方面，本发明提供了细胞因子IL-4抗体在制备脑卒中诊断试剂盒或预测脑卒中患者预后的试剂盒中的应用。
进一步地，在本发明的一些实施方案中，上述脑卒中诊断试剂盒或预测脑卒中患者预后的试剂盒为ELISA试剂盒，其含有用于检测细胞因子IL-4的细胞因子IL-4抗体。
还有一方面，本发明提供了CD4+抗体在制备脑卒中诊断试剂盒或预测脑卒中患者预后的试剂盒中的应用。
进一步地，在本发明的一些实施方案中，上述脑卒中诊断试剂盒或预测脑卒中患者预后的试剂盒为ELISA试剂盒，其含有用于检测Th2细胞的CD4+抗体。
容易理解，在基于本发明的研究结果的基础上，任何可以特异性或非特异性结合细胞因子IL-4的抗体，均可以用于制备脑卒中诊断试剂盒或预测脑卒中患者预后的试剂盒，该试剂盒通过酶联免疫吸附法测定来自个体的样品中的细胞因子IL-4的水平，根据细胞因子IL-4的水平对个体脑卒中的病情进行诊断或预后判断。
以下结合实施例对本发明的特征和性能作进一步的详细描述。
实施例
1.1 研究对象
选取湖北省襄阳市中心医院神经内科2017年3月6日至2017年4月6日接收诊治的53例缺血性脑卒中病人为研究对象，其中男36例，女17例，年龄43岁至82岁(61.7±11.4岁)。根据1995年全国第四届脑血管疾病会议和2007年《中国脑血管病防治指南》的IS诊断标准，经CT或MRI检查确诊。该研究获襄阳市中心医院道德伦理委员会批准，并且依据国家卫生研究所机构审查委员会条例实施，所有参与该研究的病人均签署知情同意书。
美国国立卫生研究院卒中量表(the National Institutes of Health StrokeScale,NIHSS)被用来评估缺血性脑卒中病人入院后24小时内的神经功能损伤。NIHSS评分包括15个向度：意识程度、回答问题能力、遵从指令的能力、眼球运动、视野、面部肌力、上肢运动功能、下肢运动功能、肢体协调、感觉功能、语言、构音，感觉忽视。各个向度计分为3个到5个等级，评分范围为0～42分，分数越高表示神经受损越严重。所有病人依据NIHSS评分划分为3组：第一组，NIHSS≤5(男14例，女3例，年龄60.2±13.1岁)；第二组，5＜NIHSS＜15(男15例，女10例，年龄61.8±11.5岁)；第三组，15≤NIHSS(男7例，女4例，63.9±8.4岁)
Barthel指数：被用来评估缺血性脑卒中患者日常生活自理能力，检测项目包括大小便、进食、修饰、转移、活动、穿衣、上下楼等。评分值为：轻度依赖，大于60分，可独立完成部分日常活动，但需要部分帮助；中度依赖，60～41分，需要较多帮助才能完成日常生活活动；重度依赖，≤40分，绝大多数日常生活活动都无法完成或需他人照顾。
排除标准：严格地排除外伤性脑出血、动脉瘤或动脉硬化、蛛网膜下腔出血、自身免疫性疾病、糖尿病、手术、创伤或采血2周内任何形式的高烧(T＞36.8℃)、急慢性感染性疾病史；冠心病、先天性心脏病、高血压性心脏病、心律失常等心脑血管疾病；甲状腺功能低下或亢进、血液系统疾病、神经异常疾病等。
研究期间，部分病人接受阿司匹林抗血小板治疗，另一部分病人接受噻氯匹啶或者氯吡格雷抗血小板治疗治疗，少部分病情轻微病人没有接受任何治疗。三组病人的基本情况如表1。
表1 三组病人的基本情况
1.2 材料
Lymphocyte separation medium(淋巴细胞分离液)由Mpbio公司生产；RPMI-1640培养基购买于Antgene公司；Cell stimulation cocktai(细胞刺激剂)购买于eBioscience公司；HuCD4PE-Cy5RPA-T4、Hu IL-4PE 8D4-8和Cytofix/Cytoperm(细胞固定/通透试剂盒)购买于BD PMG公司；Human IL-4 ELISA试剂盒购买于NeoBioscience公司；PhosphateBuffered Saline(PBS-20X)由CST公司生产；离心管、EP管、流式管由Falcon公司生产；枪头由GPL公司生产；流式细胞仪产自Beckman Coulter公司。
1.3 PBMC的收集
每一个病人在接收入院后，清晨空腹状态下采集3ml外周血(Peripheral Blood；PB)到肝素抗凝管中，轻轻摇匀，血样采集应在症状出现后24小时内。在室温条件下加入等体积的PBS稀释，轻轻摇匀。取15ml离心管，吸取等体积的Ficoll(淋巴细胞分离液)于离心管中，管倾斜45°，将稀释后的PB在Ficoll液面上方约1cm处沿管壁缓慢加至Ficoll液上面。将处理好的血液放入4℃，2000r/min离心机中，离心30min后从管底到液面分四层，依次是红细胞层、分层液层、外周血单核细胞层(Peripheral Blood Mononuclear Cell，PBMC)、血浆层。先吸取2ml血浆至EP管中，放入-80℃冰箱，以备后续ELISA分析。将移液管直接插入云雾层(PBMC层)，轻轻吸取云雾层，放入新的离心管中。
1.4 统计学分析
计量资料以均数±标准差(X±S)表示；组间细胞因子浓度以及细胞百分比的差异采用t检验加以评估。p＜0.05说明差异有显著统计学意义；组间显著地统计学差异用方差分析评估。
1.5 Th2细胞百分比与与NIHSS评分、Barthel指数及梗死面积的相关性
1.5.1 细胞染色及流式细胞检测Th2细胞百分比
加入至少PBMC体积3倍的PBS于离心管中，4℃、2000r/min离心5min，弃上清，加入1mlRPMI-1640培养基(含10％胎牛血清)，吹打混匀。再加入2ul细胞刺激剂于培养基中，将该培养基放入37℃、5％CO2培养箱中培养。刺激培养4h之后，4℃、2000r/min离心5min，弃上清，再加每100ul体系10ul的CD4+抗体，4℃避光染色半小时，每10分钟轻弹一次。将充分反应后的体系用PBS洗涤，弃上清，Cytofix Buffer固定。半小时后，加入2mlPBS，4℃、2000r/min离心5min，清洗2遍，弃上清，Permeabilization Buffer打孔。半小时后，加入2ml PBS，4℃、2000r/min离心5min，弃上清。再加每100ul体系10ul的IL-4抗体染色，4℃避光染色半小时，每10分钟轻弹一次。PBS清洗后加250ul的PBS重悬。放入流式细胞仪中检测Th2细胞百分比。
结果如图1所示(图中：A为各组病人代表性的流式细胞图，阳性细胞的百分比在各组图中均有显示；B为三组病人的Th2细胞表达的比较结果，其中，***p<0.0001,*p<0.01)，由第一组到第三组，总体观察发现Th2细胞百分比逐渐减少。
1.5.2 梗死面积的检测
所有观察对象均在入院后24h至48h内接受CT或者MRI影像学检查，为了确保准确性，选取核磁共振弥散加权成像来测量梗死面积。当无法获得磁共振弥散加权成像时，采用增强CT来替代。人为地在每张CT或MRI上画出梗死水肿区域，并且这些区域都用cm2表示。如果梗死区域出现出血改变，那么出血区域就包含到梗死带中。
1.5.3 Th2细胞百分比与NIHSS评分、Barthel指数及梗死面积的相关性分析
对各个患者进行NIHSS评分，评估患者的神经功能损伤(评分分值越高说明神经功能损伤越严重)，并分析Th2细胞百分比与其的相关性，结果如图2所示(图中：A为Th2百分比与NIHSS评分的相关性；B为Th2百分比与Barthel指数的相关性，C为Th2细胞百分比与梗死面积的相关性分析)。
图2的结果显示：NIHSS评分随着Th2百分比的增加而减小，说明Th2细胞百分比与NIHSS评分呈负相关(图2-A，r＝-0.599,p<0.0001)；
Barthel指数(分值越高生活自理能力越高)随着Th2百分比的增加而增加，说明Th2细胞百分比与Barthel指数呈正相关(图2-B，r＝0.646,p<0.0001)；
缺血性脑卒中病人大脑梗死面积在一定程度上反映着病情的严重程度以及预后，使用CT或MRI对脑卒中病人大脑梗死面积进行了测量，图2显示，梗死面积随着Th2细胞百分比的增加而缩小，说明Th2细胞百分比与梗死面积呈负相关性(图2-C，r＝-0.593,p<0.0001)，即Th2细胞百分比越高，患者梗死面积越低。
实施例2
IL-4水平与NIHSS评分、Barthel指数及梗死面积的相关性
2.1 ELISA法检测Th2细胞因子
酶联免疫吸附测定(Enzyme Linked Immunosorbent Assay,ELISA)被用来检测血清中Th2细胞因子IL-4的水平。采用IL-4ELISA试剂盒，依照说明书稀释一支标准品，在标准孔中加入50ul标准品，待测孔中加40ul样品稀释液及10ul待测血清。封板膜封板后37℃温育，30min后弃液体，甩干，每孔加满洗涤液，30s后弃去，重复5次，拍干。除空白孔外，每孔加酶标试剂50ul，再如上温育、洗涤。每孔先加显色剂A50ul，再加显色剂B50ul，轻轻震荡混匀，37℃避光显色。15min后每孔加终止液。空白调零后，在450nm波长下依次测量各孔吸光度，并计算细胞因子IL-4浓度。
2.2 NIHSS评分、Barthel指数及梗死面积的计算同实施例1
2.3 IL-4水平与NIHSS评分、Barthel指数及梗死面积的相关性分析，结果见图3(图中：A为IL-4水平与NIHSS评分的相关性；B为IL-4水平与Barthel指数的相关性，C为IL-4水平与梗死面积的相关性分析)。
图3的结果显示：NIHSS评分随着IL-4水平的增加而减小，说明IL-4水平与NIHSS评分呈负相关(图3-A，r＝-0.622,p<0.0001)；
Barthel指数随着IL-4水平的增加而增加，说明IL-4水平与Barthel指数呈正相关(图3-B，r＝0.611,p<0.0001)；
梗死面积随着IL-4水平的增加而缩小，说明IL-4水平与梗死面积呈负相关性(图3-C，r＝-0.599,p<0.0001)。
综上，本发明系统检测了各研究对象外周血单核细胞中Th2细胞百分比，由于NIHSS评分是反映病人入院后24小时内的神经功能损伤程度的常用指标，而Barthel指数是反映患者日常生活自理能力的常用指标，本发明又评估了各研究对象NIHSS评分及Barthel指数，并且分析了Th2细胞与二者的相关性。IL-4是Th2细胞主要的细胞因子，因此检测了各研究对象外周血血清中IL-4的水平，并且分析了IL-4水平与NIHSS评分及Barthel指数的相关性，从细胞因子水平进一步验证Th2细胞对脑卒中的保护作用。脑卒中病人大脑梗死面积能直接反应病情严重程度，故本研究利用MRI或CT计算了各研究对象大脑梗死面积，分别分析了Th2细胞、IL-4水平与其相关性。结果显示，Th2细胞百分比及其细胞因子IL-4均与NIHSS评分(评分分值越高，说明神经功能损伤越严重)呈反比，与Barthel指数(分值越高，生活自理能力越高)呈正相关，与脑卒中病人大脑梗死面积(梗死面积越大，病情越严重，预后越差)呈反比。
这就表明，Th2细胞百分比及其细胞因子IL-4与脑卒中尤其是缺血性脑卒中具有明显的相关性，Th2细胞百分比及其细胞因子IL-4可以作为脑卒中诊断和预后指示的生物标志物，是一种全新的脑卒中标志物；基于此，可将Th2细胞或细胞因子IL-4作为标志物应用于制备脑卒中诊断试剂盒或者在制备预测脑卒中患者预后的试剂盒中等领域，以及细胞因子IL-4抗体和CD4+抗体也可用于脑卒中诊断试剂盒或预测脑卒中患者预后的试剂盒等领域，这为脑卒中诊断和预后提供了一种新的思路和手段，有利于加快脑卒中的发病机制研究进程，也为快速筛选出治疗脑卒中的药物提供帮助。
以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (10)
1.Th2细胞作为标志物在制备脑卒中诊断试剂盒中的应用。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述Th2细胞为外周血中的Th2细胞。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述脑卒中为缺血性脑卒中。
4.Th2细胞作为标志物在制备预测脑卒中患者预后的试剂盒中的应用。
5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述Th2细胞为外周血的Th2细胞。
6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述脑卒中为缺血性脑卒中。
7.细胞因子IL-4作为标志物在制备脑卒中诊断试剂盒或预测脑卒中患者预后的试剂盒中的应用。
8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述脑卒中为缺血性脑卒中。
9.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述细胞因子IL-4为患者血清中的细胞因子IL-4。
10.细胞因子IL-4抗体在制备脑卒中诊断试剂盒或预测脑卒中患者预后的试剂盒中的应用。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201710544434.1A CN107345235A (zh) | 2017-07-05 | 2017-07-05 | Th2细胞和细胞因子IL‑4作为脑卒中标志物的应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201710544434.1A CN107345235A (zh) | 2017-07-05 | 2017-07-05 | Th2细胞和细胞因子IL‑4作为脑卒中标志物的应用 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN107345235A true CN107345235A (zh) | 2017-11-14 |
Family
ID=60256964
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201710544434.1A Pending CN107345235A (zh) | 2017-07-05 | 2017-07-05 | Th2细胞和细胞因子IL‑4作为脑卒中标志物的应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN107345235A (zh) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN109061139A (zh) * | 2018-06-19 | 2018-12-21 | 温州医科大学附属第医院 | 血清炎性生物标志物在防治急性缺血性脑梗死中的应用 |
-
2017
- 2017-07-05 CN CN201710544434.1A patent/CN107345235A/zh active Pending
Non-Patent Citations (4)
| Title |
|---|
| S. MAROUSI ET AL.: "Functional polymorphisms of interleukin 4 and interleukin 10 may predict evolution and functional outcome of an ischaemic stroke", 《EUROPEAN JOURNAL OF NEUROLOGY》 * |
| Y.-Q. TONG ET AL.3: "Association of variable number of tandem repeat polymorphism in the IL-4 gene with ischemic stroke in the Chinese Uyghur population", 《GENETICS AND MOLECULAR RESEARCH》 * |
| 孙颖等: "老年缺血性卒中合并急性肺损伤患者血清Th1/Th2细胞因子表达分析", 《细胞与分子免疫学杂志》 * |
| 黄廷富等: "人尿激肽原酶治疗非心源性缺血性脑卒中的疗效及其对免疫功能的影响", 《现代免疫学》 * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN109061139A (zh) * | 2018-06-19 | 2018-12-21 | 温州医科大学附属第医院 | 血清炎性生物标志物在防治急性缺血性脑梗死中的应用 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Ephraim et al. | High risk of coagulopathy among Type-2 Diabetes Mellitus clients at a municipal hospital in Ghana | |
| Llitjos et al. | Enhancing sepsis biomarker development: key considerations from public and private perspectives | |
| EP2856171A1 (en) | Methods for diagnosing osteoarthritis | |
| Singh et al. | Role of IL-1β, IL-6 and TNF-α cytokines and TNF-α promoter variability in Plasmodium vivax infection during pregnancy in endemic population of Jharkhand, India | |
| CN106257287B (zh) | 生长分化因子15评估高血压患者首发脑卒中的新应用 | |
| RU2583939C1 (ru) | Способ лабораторной диагностики стадии фиброза печени при хроническом вирусном гепатите с | |
| CN107345235A (zh) | Th2细胞和细胞因子IL‑4作为脑卒中标志物的应用 | |
| Zaki et al. | Evaluation of serum level of calprotectin in patients with psoriasis and its relation to the clinical severity of the disease | |
| Rijken et al. | Blood integrin-and cytokine-producing T cells are associated with stage and genetic risk score in age-related macular degeneration | |
| CN103210312A (zh) | 通过软骨酸性蛋白1 检测脑梗塞的方法 | |
| CN113832222A (zh) | 生物标志物在制备用于诊断流产的试剂盒中的用途 | |
| RU2362997C2 (ru) | Способ выявления нарушения функции фагоцитов при развитии рецидивирующих инфекционных процессов | |
| Sweilam et al. | Study the role of serum cartilage oligomericmatrix protein (COMP) in the diagnosis of rheumatoid arthritis patients | |
| RU2803276C1 (ru) | Способ прогнозирования когнитивных нарушений у пациентов с сотрясением головного мозга и ушибом головного мозга лёгкой степени тяжести | |
| RU2768598C1 (ru) | Способ оценки эффективности химиотерапии рака печени | |
| Alsharkawy et al. | Serum YKL-40 as a Potential Diagnostic and Prognostic Biomarker in Asthma: Correlations with Exacerbation, Inflammatory Markers, and Disease Severity | |
| JP6436777B2 (ja) | 精神関連疾患の検査方法および検査キット | |
| RU2750353C1 (ru) | Способ прогнозирования пищевой аллергии к белку коровьего молока у детей | |
| RU2460460C1 (ru) | Способ определения принадлежности студента к группе риска экзаменационного дистресса | |
| RU2388412C1 (ru) | Способ оценки степени тяжести трофологической недостаточности у больных хронической обструктивной болезнью легких | |
| RU2438133C1 (ru) | Способ прогнозирования эффективности лечения рассеянного склероза глюкокортикоидами | |
| RU2284753C1 (ru) | Способ прогнозирования терапевтически резистентной депрессии в отдаленном периоде легкой черепно-мозговой травмы | |
| Al-Omary et al. | Lymphocyte Apoptosis in Third Trimester of Pregnancy. | |
| WO2025142555A1 (ja) | 食物アレルギーの評価又は予知方法 | |
| CN115639370A (zh) | 抗mda5抗体在划分系统性红斑狼疮患者临床亚型中的应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20171114 |
|
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |