CN106866773A - 一组具有抗癌活性吡唑基甾体衍生物的制备方法及应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一组具有抗癌活性吡唑基甾体衍生物的制备方法及应用，属于药物合成技术领域，先将异孕烯醇酮1，5，16‑双烯孕酮与苯肼乙酸的催化下生成苯腙2和8，然后在三氯氧磷的催化下发生关环反应得到具有吡唑环的化合物3和9，然后水解得到去甲酰基的化合物4和10，在硼氢化钠的还原下到6。中间产物4和10在三乙酰氧基硼氢化钠的催化下和胺类发生胺化还原反应得到5a‑e和11a‑e。本发明的路线新颖而且产率高易于分离是制备此类化合物的最优路线。
Description
技术领域
本发明属于药物合成技术领域，涉及一组具有抗癌活性吡唑基甾体衍生物的制备方法及应用。
背景技术
一直以来癌症是人类健康的最大威胁，虽然现在的预防及治疗手段有所发展但是每年死于癌症的病人仍在增加。现有药物的治疗方法已经不能满足病症治疗的需要，迫切需要筛选出新型的抗癌药来应对多变的病症。基于甾体类药物的毒性低，利用率高，不易产生耐药性等优点，越来越多的甾体类药物被开发出来。
发明内容
本发明的目的在于提供一组具有抗癌活性吡唑基甾体衍生物的制备方法及应用。
其具体技术方案为：
一组具有抗癌活性吡唑基甾体衍生物，化学结构式为：
一种本发明所述具有抗癌活性吡唑基甾体衍生物的制备方法，包括以下步骤：
(1)将6.32g孕烯醇酮溶解于有150mL冰醋酸的250mL茄型烧瓶中，搅拌待完全溶解，然后分批加入苯肼，搅拌超声至溶解，量取3.46mL三乙胺常温下慢慢滴入反应体系中，半小时后滴毕，常温搅拌6h待有固体析出，抽滤，并用冰醋酸洗涤，烘干得目标化合物2和87.8g，此产物无需分离可直接用于下一步反应；
(2)首先制备visemier试剂：取充分干燥的圆底烧瓶，向内加入20mL干燥过的DMF溶液，搅拌下向内慢慢滴加三氯氧磷溶液4.65mL，50mmol，半小时后滴毕，整个期间温度需保持在0℃。混合液继续搅拌反应20min待用。将底物甾体苯腙10mmol溶解于30mL无水DMF中，0℃下，将此慢慢滴入所准备的visemier试剂中，此过程需30min，滴毕后继续搅拌24h，检测反应至完全。此时将反应体系倒入饱和的碳酸氢钠溶液中，搅拌至有固体析出，抽滤得到目标产物的粗品然后溶解于二氯甲烷中萃取三次，所得有机相合并干燥，过滤、柱分，石油醚∶乙酸乙酯＝4∶1，得到目标化合物3和9纯品3g；
(3)取吡唑基孕烯醇5mmol，溶于20mL四氢呋喃和20mL甲醇的混合溶液中，然后加入碳酸钾5.5mmol，759mg，超声搅拌至完全溶解，加热回流2h，检测反应至完全，进而用旋转蒸发仪除去溶剂，利用乙酸乙酯萃取三次，合并有机相，柱分得到目标化合物4和104.8mmol；
(4)取去甲酰化的吡唑基孕烯醇0.5mmol溶于10mL四氢呋喃和10mL甲醇的混合溶液中，然后分批加入硼氢化钠38mg，1mmol，室温反应1h后，检测反应完毕用冰醋酸淬灭，然后用乙酸乙酯萃取三次，合并有机，相柱分，石油醚∶乙酸乙酯＝1∶1，得目标产物60.48mmol；
(5)取25mL的干燥圆底烧瓶，将1mmol去甲酰化的吡唑基孕烯醇溶于除水的1，2-二氯乙烷15mL中，搅拌下加入苯胺衍生物1.1mmol，而后分批加入三乙酰基硼氢化钠， 常温搅拌8h，检测反应，待反应完全后加入饱和的碳酸氢钠溶液淬灭，然后用二氯甲烷萃取三次，合并有机相，柱分，二氯甲烷∶甲醇＝10∶1，得到胺化还原产物5a-e和11a-e 0.75mmol。
本发明所述具有抗癌活性吡唑基甾体衍生物在制备治疗人肺腺癌、子宫颈癌、人乳腺癌药物过程中的应用。
与现有技术相比，本发明的有益效果为：
1本发明的三种吡唑基甾体衍生物是全新的化合物，其制备方法也是在合成此类化合物中首次成功应用。
2本发明的三种衍生物对三种肿瘤细胞(A549(人肺腺癌细胞)、Hela(子宫颈癌细胞系)、MCF7(人乳腺癌细胞))以及293T细胞的增殖都具有良好的抑制活性，其IG50介于0.53uM-7.51uM之间。
3本发明的路线新颖而且产率高易于分离是制备此类化合物的最优路线。
附图说明
图1是吡唑基甾体衍生物的制备路线a，其中，(a)Phenylhydrazine，AcOH，rt；(b)POCl3，DMF，0℃；(c)K2CO3，THF/H2O，rt；(d)R-NH2，DCE，NaBH(AcO)3，rt；(e)MeOH/THF，NaBH4，rt；
图2是吡唑基甾体衍生物的制备路线b，其中，(f)Phenylhydrazine，AcOH，rt；(g)POCl3，DMF，0℃～40℃；(h)K2CO3，THF/H2O，rt；(i)R-NH2，DCE，NaBH(AcO)3，rt。
具体实施方式
下面结合附图和具体实施例对本发明的技术方案作进一步详细地说明。
先将异孕烯醇酮1，5，16-双烯孕酮与苯肼乙酸的催化下生成苯腙2和8，然后在三氯氧 磷的催化下发生关环反应得到具有吡唑环的化合物3和9，然后水解得到去甲酰基的化合物4和10，在硼氢化钠的还原下到6。中间产物4和10在三乙酰氧基硼氢化钠的催化下和胺类发生胺化还原反应得到5a-e和11a-e，5a-e和11a-e具体见表1。
表1
实施例1
化学合成制备式(I)的吡唑基甾体衍生物
(1)将6.32g(20mmol)孕烯醇酮溶解于有150mL冰醋酸的250mL茄型烧瓶中，搅拌待完全溶解，然后分批加入苯肼(22mmol)，搅拌超声至溶解，量取3.46mL(25mmol)三乙胺常温下慢慢滴入反应体系中，半小时后滴毕，常温搅拌6h待有固体析出，抽滤，并 用冰醋酸洗涤，烘干得目标化合物2和8约7.8g，此产物无需分离可直接用于下一步反应。
(2)首先制备visemier试剂：取充分干燥的圆底烧瓶，向内加入20mL干燥过的DMF溶液，搅拌下向内慢慢滴加三氯氧磷溶液(4.65mL，50mmol)，半小时后滴毕，整个期间温度需保持在0℃。混合液继续搅拌反应20min待用。将底物甾体苯腙(10mmol)溶解于30mL无水DMF中，0℃下，将此慢慢滴入所准备的visemier试剂中，此过程需30min，滴毕后继续搅拌24h，检测反应至完全。此时将反应体系倒入饱和的碳酸氢钠溶液中，搅拌至有固体析出，抽滤得到目标产物的粗品然后溶解于二氯甲烷中萃取三次，所得有机相合并干燥，过滤、柱分(石油醚∶乙酸乙酯＝4∶1)得到目标化合物3和9纯品约3g。
(3)取吡唑基孕烯醇5mmol，溶于20mL四氢呋喃和20mL甲醇的混合溶液中，然后加入碳酸钾(5.5mmol，759mg)，超声搅拌至完全溶解。加热回流2h，检测反应至完全，进而用旋转蒸发仪除去溶剂，利用乙酸乙酯萃取三次，合并有机相，柱分得到目标化合物4和10约4.8mmol。
(4)取去甲酰化的吡唑基孕烯醇0.5mmol溶于10mL四氢呋喃和10mL甲醇的混合溶液中，然后分批加入硼氢化钠(38mg，1mmol)，室温反应1h后，检测反应完毕用冰醋酸淬灭，然后用乙酸乙酯萃取三次，合并有机，相柱分(石油醚∶乙酸乙酯＝1∶1)得目标产物6约0.48mmol。
(5)取25mL的干燥圆底烧瓶，将1mmol去甲酰化的吡唑基孕烯醇溶于除水的1，2-二氯乙烷15mL中，搅拌下加入苯胺衍生物1.1mmol，而后分批加入三乙酰基硼氢化钠，常温搅拌8h，检测反应，待反应完全后加入饱和的碳酸氢钠溶液淬灭，然后用二氯甲烷萃取三次，合并有机相，柱分(二氯甲烷∶甲醇＝10∶1)得到胺化还原产物5a-e和11a-e约0.75mmol。
实施例2
化合的结构鉴定，所合成的三个化合物其结构通过1H-NMR、13C-NMR、高分辨质谱(HRMS)确认。
1H-NMR、13C-NMR以及HRMS数据如下：
17β-(1-phenyl-4-((methylamino)methyl)-3-pyrazolyl)androst-3β-ol(5a)
5a，white solid，Yield：88％，mp 204-206℃；1H-NMR(CDCl3&CD3OD，500MHz)：δ(ppm)8.09(s，1H)，7.67(d，2H，J＝8.5Hz)，7.43(t，2H，J＝7.0Hz)，7.26(t，1H，J＝7.5Hz)，3.90-3.80(m，2H)，3.58-3.53(m，1H)，2.74(t，1H，J＝9.5Hz)，2.53(s，3H，CH3)，2.47-2.40(m，1H)，2.01-1.93(m，1H)，1.78-1.70(m，4H)，1.56-1.54(m，3H)，1.40-1.10(m，12H)，1.00-0.93(m，2H)，0.81(s，3H，CH3)，0.73-0.67(m，1H)，0.64(s，3H，CH3)；13C-NMR(CDCl3&CD3OD，125MHz)：δ(ppm)152.48，140.02，129.29，129.29，127.45，126.18，118.91，118.91，115.61，70.81，56.33，54.53，48.39，44.91，44.79，44.33，38.56，37.74，37.02，35.99，35.53，33.17，32.07，31.04，28.65，26.66，24.43，21.07(CH3)，13.33(CH3)，12.22(CH3)；HRMS(ESI)m/z calcd for C30H44N3O+(M+H)+462.34789，found 462.34738.
17β-(1-phenyl-4-((ethylamino)methyl)-3-pyrazolyl)androst-3β-ol(5b)
5b，white solid，Yield：80％，mp 246-248℃；1H-NMR(DMSO-d，500MHz)：δ(ppm)8.66(s，1H)，7.72-7.70(m，2H)，7.50(t，2H，J＝7.0，8.5Hz)，7.30(t，1H，J＝7.5Hz)，4.43(s，br，1H)，4.01-3.92(m，2H)，2.98(dq，2H，J＝2.0，7.5Hz)，2.92(t，1H，J＝9.5Hz)，2.40-2.33(m，1H)，1.96-1.91(m，1H)，1.70-1.60(m，4H)，1.53-1.41(m，3H)，1.37-1.06(m，12H)，1.24(t，3H，J＝7.5Hz)，0.96-0.88(m，2H)，0.74(s，3H，CH3)，0.71-0.65(m，1H)，0.55(s，3H，CH3)；13C-NMR(DMSO-d，125MHz)：δ(ppm)152.71，139.98，130.13，130.13，129.58，126.65，118.52，118.52，114.09，69.79，56.18，54.58，47.58，44.98，44.67，42.06，40.32，38.67，37.95，37.21，36.08，35.69，32.32，31.86，28.88，26.62，24.57，21.16，13.85(CH3)，12.65(CH3)，11.57(CH3)；HRMS(ESI)m/z calcd for C31H46N3O+(M+H)+476.36354，found476.36313.
17β-(1-phenyl-4-((propylamino)methyl)-3-pyrazolyl)androst-3β-ol(5c)
5c，light brown solid，Yield：76％，mp 160-162℃；1H-NMR(DMSO-d，500MHz)：δ(ppm)8.28(s，1H)，7.74-7.73(m，2H)，7.45(t，2H，J＝7.5，8.0Hz)，7.30(t，1H，J＝7.5Hz)，3.90(s，br，1H)，3.63-3.61(m，2H)，3.38-3.32(m，1H)，2.81(t，1H，J＝10.0Hz)，2.56(t，2H，J＝7.5Hz)，2.37-2.30(m，1H)，1.68-1.58(m，4H)，1.55-1.32(m，5H)，1.28-1.04(m，10H)，0.94-0.90(m，2H)，0.87(t，3H，J＝7.5Hz)，0.74(s，3H，CH3)，0.70-0.65(m，1H)，0.58(s，3H，CH3)；13C-NMR(DMSO-d，125MHz)：δ(ppm)151.54，139.74，129.32，129.32，126.64，125.25，120.35，117.52，117.52，69.23，55.67，53.94，50.41，47.59，44.37，44.07，42.47，38.10，37.83，36.61，35.50，35.10，31.70，31.29，28.32，26.23，24.05，21.87，21.45，13.34(CH3)，12.06(CH3)，11.62(CH3)；HRMS(ESI)m/z calcd for C32H48N3O+(M+H)+490.37919，found490.37924.
17β-(1-phenyl-4-((isopropylamino)methyl)-3-pyrazolyl)androst-3β-ol(5d)
5d，white solid，Yield：83％，mp 216-218℃；1H-NMR(CDCl3&CD3OD，500MHz)：δ(ppm)7.94(s，1H)，7.67-7.65(m，2H)，7.41(t，2H，J＝7.0，8.5Hz)，7.23(t，1H，J＝7.5Hz)，3.70(m，2H)，3.57-3.53(m，1H)，2.92-2.97(m，1H)，2.72(t，1H，J＝10.0Hz)，2.47-2.39(m，1H)，2.00-1.94(m，1H)，1.80-1.69(m，4H)，1.60-1.54(m，3H)，1.45-1.32(m，3H)，1.35-1.28(m，6H)，1.15(d，6H，J＝6.5Hz，2CH3)，1.12-0.86(m，4H)，0.81(s，3H，CH3)，0.74-0.69(m，1H)，0.66(s，3H，CH3)；13C-NMR(CDCl3&CD3OD，125MHz)：δ(ppm)152.13，140.34，129.29，129.29，126.40，125.83，119.70，118.84，118.84，70.99，56.42，54.59，48.66，44.99，44.80，40.62，38.74，37.92，37.10，36.06，35.61，32.15，31.21，29.69，28.74，26.83，24.54，22.12(CH3)，21.99(CH3)，21.16，13.49(CH3)，12.33(CH3)；HRMS(ESI)m/z calcd forC32H48N3O+(M+H)+490.37919，found 490.37918.
17β-(1-phenyl-4-((butylamino)methyl)-3-pyrazolyl)androst-3β-ol(5e)
5e，white solid，Yield：83％，mp 138-140℃；1H-NMR(DMSO-d&CDCl3，500MHz)：δ(ppm)8.35(s，1H)，7.73(d，2H，J＝8.0Hz)，7.46(t，2H，J＝7.5，8.5Hz)，7.24(t，1H，J＝7.5Hz)，3.73(m，2H)，3.37-3.33(m，1H)，2.84(t，1H，J＝9.5Hz)，2.70(t，2H，J＝7.5Hz)，2.38-2.32(m，1H)，1.69-1.62(m，4H)，1.51-1.47(m，4H)，1.34-1.11(m，12H)，1.08-0.88(m，6H)，0.88(t，3H，J＝7.5Hz)，0.75(s，3H，CH3)，0.70-0.66(m，1H)，0.58(s，3H，CH3)；13C-NMR(DMSO-d&CDCl3，125MHz)：δ(ppm)151.78，139.71，129.40，129.40，127.30，125.52，118.38，117.72，117.72，69.30，55.74，54.04，47.71，47.48，44.45，44.14，41.98，38.13，37.77，36.69，35.56，35.16，31.77，31.32，29.94，28.38，26.24，24.08，21.17，20.65，13.73(CH3)，13.36(CH3)，12.12(CH3)；HRMS(ESI)m/z calcd for C33H50N3O+(M+H)+504.39484，found504.39404.
17β-(1-phenyl-4-((methylamino)methyl)-3-pyrazolyl)androst-5，16-dienes-3β-ol(11a)
11a，white solid，Yield：80％，mp 108-110℃；1H-NMR(CDCl3&CD3OD，500MHz)：δ(ppm)8.23(s，1H)，7.74-7.72(m，2H)，7.45(t，2H，J＝7.5Hz，8.5Hz)，7.28(t，1H，J＝7.5Hz)，5.93-5.92(m，1H)，5.40-5.39(m，1H)，4.00(m，2H)，3.52-3.46(m，1H)，3.36(s，1H)，2.58(s，3H)，2.41-2.25(m，4H)，2.17-2.06(m，1H)，1.88-1.75(m，3H)，1.72-1.64(m，2H)，1.58-1.26(m，5H)，1.15-0.87(m，9H)，1.15(s，3H，CH3)，1.08(s，3H，CH3)；13C-NMR(CDCl3&CD3OD，125MHz)：δ(ppm)148.34，147.13，141.57，139.99，129.87，129.59，129.59，127.72，126.56，121.39，118.72，118.72，114.74，71.49，57.02，50.88，48.56，43.84，42.12，37.41，36.96，35.47，33.04，32.59，31.82，31.41，30.67，21.15(CH3)，19.43(CH3)，16.35(CH3)；HRMS(ESI)m/z calcd for C30H40N3O+(M+H)+458.31659，found 458.31656.
17β-(1-phenyl-4-((ethylamino)methyl)-3-pyrazolyl)androst-5，16-dienes-3β-ol(11b)
11b，white solid，Yield：79％，mp 106-108℃；1H-NMR(CDCl3&CD3OD，500MHz)：δ(ppm)7.86(s，1H)，7.62-7.60(m，2H)，7.36-7.32(m，2H)，7.16(t，1H，J＝7.5Hz)，5.84(s，1H)，5.30(s，1H)，3.73-3.67(m，3H)，3.42-3.38(m，1H)，2.67-2.62(m，2H)，2.43-2.40(m，2H)，2.27-2.14(m，3H)，2.05-1.97(m，2H)，1.79-1.67(m，3H)，1.63-1.58(m，3H)，1.47-1.34(m，3H)，1.12-0.80(m，11H)，1.07(t，3H，CH3，，J＝7.5Hz)，1.04(s，3H，CH3)，1.00(s，3H，CH3)； 13C-NMR(CDCl3&CD3OD，125MHz)：δ(ppm)147.78，147.67，141.51，140.22，129.43，129.43，128.95，126.11，125.97，121.38，120.18，118.46，118.46，71.43，56.95，50.84，48.40，43.86，43.51，42.09，37.36，36.90，35.59，32.45，31.79，31.37，30.63，21.14，19.38(CH3)，16.29(CH3)，14.56(CH3)；HRMS(ESI)m/z calcd for C31H42N3O+(M+H)+472.33224，found 472.33211.
177-(1-phenyl-4-((propylamino)methyl)-3-pyrazolyl)androst-5，16-diennes-3β-ol(11c)
11c，white solid，Yield：62％，mp 130-132℃；1H-NMR(CDCl3&CD3OD，500MHz)：δ(ppm)8.06(s，1H)，7.72-7.70(m，2H)，7.43(t，2H，J＝7.5Hz，8.5Hz)，7.25(t，1H，J＝7.5Hz)，5.93-5.92(m，1H)，5.39(d，1H，J＝5.0Hz)，3.90-3.83(m，2H)，3.52-3.47(m，2H)，2.69(t，2H，J＝7.5Hz)，2.48-2.46(m，1H)，2.34-2.22(m，3H)，2.15-2.06(m，2H)，1.87-1.75(m，3H)，1.68-1.40(m，9H)，1.14-1.04(m，8H)，1.14(s，3H，CH3)，1.08(s，3H，CH3)，0.95(t，3H，J＝7.5Hz)； 13C-NMR(CDCl3&CD3OD，125MHz)：δ(ppm)147.96，147.51，141.51，140.13，129.46，129.46，129.23，127.70，126.12，121.39，118.53，118.53，118.33，71.49，56.98，50.84，50.47，48.43，43.35，42.14，37.35，36.90，35.53，32.49，31.79，31.43，30.62，21.92，21.12，19.41(CH3)，16.33(CH3)，11.59(CH3)；HRMS(ESI)m/z calcd for C32H44N3O+(M+H)+486.34789，found 486.34793.
17β-(1-phenyl-4-((isopropylamino)methyl)-3-pyrazolyl)androst-5，16-dienes-3β-ol(11d)
77d，white solid，Yield：73％，mp 202-204℃；1H-NMR(CDCl3&CD3OD，500MHz)：δ(ppm)8.57(s，1H)，7.76-7.74(m，2H)，7.43(t，2H，J＝7.5Hz，8.5Hz)，7.27(t，1H，J＝7.5Hz)，5.89-5.88(m，1H)，5.39(d，1H，J＝5.0Hz)，4.13-4.06(m，2H)，3.52-3.46(m，1H)，3.36(s，1H)，3.27-3.22(m，1H)，2.36-2.25(m，4H)，2.17-2.05(m，2H)，1.86-1.75(m，3H)，1.71-1.62(m，3H)，1.56-1.49(m，3H)，1.37(d，3H，J＝6.5Hz)，1.34(d，3H，J＝6.5Hz)，1.15-1.03(m，8H)，1.15(s，3H，CH3)，1.07(s，3H，CH3)；13C-NMR(CDCl3&CD3OD，125MHz)：δ(ppm)147.96，146.53，141.06，139.38，129.72，129.07，129.07，128.19，126.14，120.87，118.30，118.30，112.51，71.04，56.64，50.36，48.60，48.05，41.67，38.41，36.90，36.45，34.82，32.10，31.31，30.96，30.15，20.60，19.25，18.96(CH3)，18.83(CH3)，15.91(CH3)；HRMS(ESI)m/z calcd for C32H44N3O+(M+H)+486.34789，found 486.34750.
177-(1-phenyl-4-((butylamino)methyl)-3-pyrazolyl)androst-5，16-dienes-3β-ol(11e)
11e，glasslike solid，Yield：89％，mp 100-102℃；1H-NMR(CDCl3&CD3OD，500MHz)：δ(ppm)7.95(s，1H)，7.71-7.69(m，2H)，7.43(t，2H，J＝7.5Hz，8.5Hz)，7.24(t，1H，J＝7.5Hz)，5.93-5.94(m，1H)，5.40(d，1H，J＝5.0Hz)，3.82-3.74(m，2H)，3.50-3.48(m，1H)，3.37(s，1H)，2.67(t，2H，7.5Hz)，2.51-2.49(m，1H)，2.35-2.26(m，3H)，2.14-2.07(m，2H)，1.89-1.80(m，3H)，1.72-1.67(m，3H)，1.52-1.26(m，8H)，1.15-1.05(m，8H)，1.14(s，3H，CH3)，1.05(s，3H，CH3)，0.94(t，3H，J＝7.5Hz)；13C-NMR(CDCl3&CD3OD，125MHz)：δ(ppm)147.82，147.70，141.50，140.23，129.44，129.44，128.96，126.19，125.97，121.41，120.11，118.48，118.48，71.49，56.97，50.85，49.07，48.40，44.08，42.11，37.35，36.90，35.59，32.46，31.80，31.60，31.40，30.63，21.14，20.52，19.40(CH3)，16.32(CH3)，13.95(CH3)；HRMS(ESI)m/z calcd for C33H46N3O+(M+H)+500.36354，found 500.36353.
实施例3
本发明式(I)的吡唑基甾体衍生物的抗肿瘤细胞增殖活性
采用RSB法测定本发明式(I)的吡唑基甾体衍生物对A549(人肺腺癌细胞)、Hela(子宫颈癌细胞系)、MCF7(人肝癌细胞)、293T细胞系四种细胞的增殖抑制活性。
具体方法：准确称量待测化合物1-3mg，以DMSO为溶剂，配制成浓度为10mMol/L的溶液，室温下静置半小时待样品完全溶解后保存待用。取处于对数生长期的A549、Hela、293T、MCF7细胞，清洗并用胰酶消化后制成细胞悬液，细胞计数并稀释至适当浓度，将细胞悬液均匀的加入96孔板中，每孔100ul，每组设置三个重复，同时设置阴性对照和阳性对照孔。取一定量的事先配置好的待测化合物加入到96孔板中，化合物从50uM起，3倍梯度稀释，共9个梯度，然后将处理好的细胞置于5％二氧化碳浓度，37℃培养箱中培养72h。培养时间过后，终止培养，移去上清液，每个孔加入冷的10％TCA100ul，4℃条件下固定2h，用二次蒸馏水反复冲洗5次，50℃烘箱中烘干约半小时。待其干燥后，加入冰醋酸配制的SRB溶液100ul，室温染色半小时后用1％冰醋酸冲洗5次以除去非特异性结合的染料，此步需要操作迅速以防止已经与蛋白特异性结合的染料分解。50℃烘箱烘干半小时，加150ul Tris溶液溶解拍打混匀，酶标仪A540nm测定吸光度，计算其抑制率，用EXCEl计算其IC50，结果见表2。
表2部分化合物抗细胞增殖活性IC50(μmol/L)
表2的结果说明吡唑基甾体衍生物对A549(人肺腺癌细胞)、Hela(子宫颈癌细胞系)、MCF7(人乳腺癌细胞)、293T细胞四种肿瘤细胞有很好的细胞毒性。
以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，本发明的保护范围不限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明披露的技术范围内，可显而易见地得到的技术方案的简单变化或等效替换均落入本发明的保护范围内。
Claims (3)
1.一组具有抗癌活性吡唑基甾体衍生物，其特征在于，化学结构式为：
2.一种权利要求1所述具有抗癌活性吡唑基甾体衍生物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)将6.32g孕烯醇酮溶解于有150mL冰醋酸的250mL茄型烧瓶中，搅拌待完全溶解，然后分批加入苯肼，搅拌超声至溶解，量取3.46mL三乙胺常温下慢慢滴入反应体系中，半小时后滴毕，常温搅拌6h待有固体析出，抽滤，并用冰醋酸洗涤，烘干得目标化合物2和8各7.8g，此产物无需分离直接用于下一步反应；
(2)首先制备visemier试剂：取充分干燥的圆底烧瓶，向内加入20mL干燥过的DMF溶液，搅拌下向内慢慢滴加三氯氧磷溶液4.65mL，50mmol，半小时后滴毕，整个期间温度需保持在0℃；混合液继续搅拌反应20min待用；将底物甾体苯腙10mmol溶解于30mL无水DMF中，0℃下，将此慢慢滴入所准备的visemier试剂中，此过程需30min，滴毕后继续搅拌24h，检测反应至完全；此时将反应体系倒入饱和的碳酸氢钠溶液中，搅拌至有固体析出，抽滤得到目标产物的粗品然后溶解于二氯甲烷中萃取三次，所得有机相合并干燥，过滤、柱分，石油醚：乙酸乙酯＝4:1，得到目标化合物3和9纯品3g；
(3)取吡唑基孕烯醇5mmol，溶于20mL四氢呋喃和20mL甲醇的混合溶液中，然后加入碳酸钾5.5mmol，759mg，超声搅拌至完全溶解，加热回流2h，检测反应至完全，进而用旋转蒸发仪除去溶剂，利用乙酸乙酯萃取三次，合并有机相，柱分得到目标化合物4和10 4.8mmol；
(4)取去甲酰化的吡唑基孕烯醇0.5mmol溶于10mL四氢呋喃和10mL甲醇的混合溶液中，然后分批加入硼氢化钠38mg，1mmol，室温反应1h后，检测反应完毕用冰醋酸淬灭，然后用乙酸乙酯萃取三次，合并有机，相柱分，石油醚：乙酸乙酯＝1:1，得目标产物6 0.48mmol；
(5)取25mL的干燥圆底烧瓶，将1mmol去甲酰化的吡唑基孕烯醇溶于除水的1,2-二氯乙烷15mL中，搅拌下加入苯胺衍生物1.1mmol，而后分批加入三乙酰基硼氢化钠，常温搅拌8h，检测反应，待反应完全后加入饱和的碳酸氢钠溶液淬灭，然后用二氯甲烷萃取三次，合并有机相，柱分，二氯甲烷：甲醇＝10:1，得到胺化还原产物5a-e和11a-e 0.75mmol。
3.权利要求1所述具有抗癌活性吡唑基甾体衍生物在制备治疗人肺腺癌、子宫颈癌、人乳腺癌药物过程中的应用。
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| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201710077139.XA Pending CN106866773A (zh) | 2017-02-14 | 2017-02-14 | 一组具有抗癌活性吡唑基甾体衍生物的制备方法及应用 |
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| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN106866773A (zh) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN112375123A (zh) * | 2020-12-10 | 2021-02-19 | 西北农林科技大学 | 噁唑基甾体衍生物及其合成方法与应用 |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1133596A (zh) * | 1993-10-27 | 1996-10-16 | 默里尔药物公司 | 用作甾族化合物c17-20裂解酶抑制剂的δ16不饱和c17杂环甾族化合物 |
| CN102167718A (zh) * | 2011-03-03 | 2011-08-31 | 武汉大学 | 16-唑取代-3胺取代-5α雄甾烷衍生物及其制备方法和应用 |
| CN104910236A (zh) * | 2015-06-26 | 2015-09-16 | 西北农林科技大学农药研究所 | 吡唑基甾体衍生物及其制备方法、用途 |
-
2017
- 2017-02-14 CN CN201710077139.XA patent/CN106866773A/zh active Pending
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1133596A (zh) * | 1993-10-27 | 1996-10-16 | 默里尔药物公司 | 用作甾族化合物c17-20裂解酶抑制剂的δ16不饱和c17杂环甾族化合物 |
| CN102167718A (zh) * | 2011-03-03 | 2011-08-31 | 武汉大学 | 16-唑取代-3胺取代-5α雄甾烷衍生物及其制备方法和应用 |
| CN104910236A (zh) * | 2015-06-26 | 2015-09-16 | 西北农林科技大学农药研究所 | 吡唑基甾体衍生物及其制备方法、用途 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| KOVACS, DORA: "《Synthesis of novel 17-(40-formyl)pyrazolylandrosta-5,16-dienes and their derivatives as potent 17a-hydroxylase/C17,20-lyase inhibitors or antiproliferative agents depending on the sub -stitution pattern of the heteroring》", 《EUROPEAN JOURNAL OF MEDICINAL CHEMISTRY》 * |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN112375123A (zh) * | 2020-12-10 | 2021-02-19 | 西北农林科技大学 | 噁唑基甾体衍生物及其合成方法与应用 |
| CN112375123B (zh) * | 2020-12-10 | 2022-11-01 | 西北农林科技大学 | 噁唑基甾体衍生物及其合成方法与应用 |
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